FI93781B - Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä - Google Patents

Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä Download PDF

Info

Publication number
FI93781B
FI93781B FI931198A FI931198A FI93781B FI 93781 B FI93781 B FI 93781B FI 931198 A FI931198 A FI 931198A FI 931198 A FI931198 A FI 931198A FI 93781 B FI93781 B FI 93781B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
microparticles
different
fluorescence
substances
labeled
Prior art date
Application number
FI931198A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI93781C (fi
FI931198A (fi
FI931198A0 (fi
Inventor
Antti Juhana Iitiae
Timo Nils-Erik Loevgren
Kim Sverker Immanue Pettersson
Original Assignee
Wallac Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wallac Oy filed Critical Wallac Oy
Priority to FI931198A priority Critical patent/FI93781C/fi
Publication of FI931198A0 publication Critical patent/FI931198A0/fi
Priority to ES94850024T priority patent/ES2139728T3/es
Priority to EP19940850024 priority patent/EP0617286B1/en
Priority to DE1994622210 priority patent/DE69422210T2/de
Priority to JP4704294A priority patent/JPH06317593A/ja
Publication of FI931198A publication Critical patent/FI931198A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI93781B publication Critical patent/FI93781B/fi
Publication of FI93781C publication Critical patent/FI93781C/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

93781
BIOSPESIFINEN MULTIPARAMETRINEN MÄÄRITYSMENETELMÄ - BIOSPE-CIFIK MULTIPARAMETRISK BESTÄMNINGSMETOD
Keksinnön kohteena on biospesifinen määritysmenetelmä, jossa pystytään määrittämään useita analyyttejä yhtäaikaisesti samasta näytteestä.
Mikropartikkeleita voidaan hyödyntää kiinteänä kantajana 5 erilaisissa bioaffiniteettimäärityksissä. Tällaisissa määrityksissä on usein hyödyllistä tai välttämätöntä pystyä suorittamaan monia määritysreaktioita yhtäaikaisesti, jolloin vältetään rinnakkaisten työvaiheiden toistaminen. Eräs ajatus moniparametrianalyysin suorittamiseksi on 10 hyödyntää mikropartikkeleita kiinteänä kantajana (Soini E., US 5,028,545). Tällaisessa systeemissä partikkeleihin kiinnitetään spesifisiä koettimia, jonka jälkeen eri spesi-fiteetin omaavat partikkelit voidaan sekoittaa keskenään. Seosta voidaan siten käyttää kiinteänä kantajana bio-15 affiniteettimäärityksiä suoritettaessa. Reaktion jälkeen mittausta suoritettaessa on tärkeätä kyetä erottelemaan mahdollisimman monta, eri spesifiteetin omaavaa partikkeli-ryhmää toisistaan. Erottelussa voidaan hyödyntää mm. partikkelien kokoa (McHugh t.m.et ai. J.Immunol. Methods 1986; 20 95: 57 - 61.), värillisiä partikkeleita (Streefkerk JG,
Kors N, Boden D. Protides Biol Fluids 1976; 24: 811 - 4) tai erilaisilla fluoresoivilla aineilla merkittyjä partikkeleita (Dean K.J. et ai. Clin. Chem. 1983; 29: 1051 - 6).
Bioaffiniteettireaktioissa kaksi biologista molekyyliä 25 kykenevät sitoutumaan toisiinsa suurella tarkkuudella myös muiden molekyylien läsnäollessa. Tällaisia sitoutujapareja ovat esimerkiksi vasta-aineet ja niiden antigeenit, yksi-nauhaiset DNA-molekyylit ja niiden vastinsekvenssit, reseptorit ja reseptoriin spesifisesti sitoutuvat molekyylit ja 30 niin edelleen. Näitä kaikkia reaktioita voidaan kutsua yhteisellä nimellä bioaffiniteettireaktioiksi.
Bioaffiniteettireaktioita käytetään hyväksi monenlaisissa käytännön sovelluksissa ja tutkimukseen liittyvissä määri- 93781 2 tykeissä. Tunnettu biomolekyyli, joka voi olla biologisesta materiaalista puhdistettu (esimerkiksi vasta-aine) tai synteettisesti valmistettu (esim. oligonukleotidi DNA) voidaan leimata siten, että se kyetään havaitsemaan bio-5 affiniteettireaktion suorittamisen jälkeen. Tällä hetkellä tärkeimpiin bioaffiniteettireaktioiden sovellusalueisiin kuuluvat menetelmät ovat immunomääritykset ja nukleiini-happohybridisaatiomääritykset, joilla määritetään erilaisia komponentteja esim. verestä. Reseptoreja biologisena kom-10 ponenttina hyödyntävillä määrityksillä on tärkeä osa etsittäessä uusia lääkeaineita.
Verestä tai sen komponenteista tapahtuvat määritykset voidaan jakaa ryhmiin, joilla on merkitystä tietyn sairauden tai lääketieteellisen toimenpiteen kannalta. Multi-15 parametrimäärityksessä näihin ryhmiin, niin kutsuttuihin paneeleihin, kuuluvat analyytit voitaisiin määrittää yhtäaikaisesti samasta näytteestä. Tämä mahdollistaisi testauksen kustannusten vähenemisen, joka lisäisi suoritettavien testien määrää ja johtaisi täten varmempiin taudinmäärityk-20 siin. Moniparametrianalyysit myös vähentäisivät huomattavasti testin suorittamiseksi tarvittavaa työmäärää ja näin ollen johtaisivat nopeampiin ja luotettavampiin tuloksiin.
Luonnollisia kohteita DNA:ta biologisena komponenttina • hyödyntäville määrityksille ovat virukset sekä perinnölli- 25 set sairaudet, jotka aiheutuvat solun DNA-muutoksista.
Varsinkin perinnöllisten sairauksien kohdalla DNA-muutokset ovat varsin moninaisia ja perinnöllisiä sairauksia määritettäessä olisikin välttämätöntä pystyä toteamaan monia DNA-muutoksia samasta näytteestä yhtäaikaisesti. Tästä 30 olisi hyötyä varsinkin etsittäessä näiden DNA-muutosten kantajia laajoissa, kokonaisia populaatioita kattavissa tutkimuksissa.
Analysoitavan DNA:n alhaisen määrän takia joudutaan tutkittava geenialue usein monistamaan näytteestä ennen sen tai ·. 35 siinä olevien mutaatioiden todentamista. Useita geeni- il 3 93781 alueita voidaan monistaa yhtaikaisesti samassa reaktiossa. Multiparametrimääritysmenetelmä soveltuu hyvin tällaisiin monia tutkittavia geenialueita sisältävien reaktioseosten tutkimiseen.
5 Multiparametrimäärityksen suorittamisessa voidaan hyödyntää merkkiaineita, joiden lähettämä signaali voidaan erottaa toisistaan bioaffiniteettireaktion suorittamisen jälkeen esimerkiksi aallonpituuden tai signaalin sammumiseen kuluvan ajan perusteella. Näissä määrityksissä on käytetty 10 pääasiassa eri radioisotooppeja (Morgan CR., Proc Soc Exp Biol Med 1966; 123: 230 - 3; Wians FH, Dev J, Powell MM, Heald JI., Clin Chem 1986; 32: 887 - 90), entsyymileimoja (Dean KJ, Thompson SG, Burg JF, Buckler RT., Clin Chem 1983; 29: 1051 - 6; Bates DI, Bailey WR., kansainvälinen 15 patenttihakemus W089/06802) sekä lyhytikäistä fluoresenssia lähettäviä leimoja. Ongelmana näissä merkkiaineissa on kuitenkin usein mitattavien signaalien aallonpituuksien päällekkäisyys (isotoopit, fluoresoivat aineet), viritys ja emissioaallonpituuksien lähekkäisyys (fluoresoivat aineet), 20 erilaiset optimiolosuhteet (entsyymileimat) tai materiaalien taustafluoresenssi (lyhytikäistä fluoresenssia lähettävät leimat). Näissä systeemeissä onkin parhaimmillaan kyetty yhtäaikaisesti määrittämään ainoastaan kahta mitattavaa ainetta.
25 Aikaerotteista fluoresenssia leimateknologiana hyödyntävissä systeemeissä käytetään hyväksi harvinaisten maa-metallien lähettämää pitkäikäistä fluoresenssia (kuvio 1; Soini E., and Lövgren Timo., CRC Critical Reviews in Analytical Chemistry 1987; 18(2): 105 - 154). Metalli komplek-30 soidaan orgaaniseen molekyyliin, joka kykenee absorboimaan energiaa kompleksia viritettäessä. Toisaalta tämän ligandin tulee kyetä myös luovuttamaan kyseinen viritysenergia kompleksoimalleen metallille. Soveliaimmiksi maametalleiksi aikaerotteisissa leimoissa ovat osoittautuneet Eu, Sm, Tb 35 ja Dy. Näiden harvinaisten metallien elektronien energiatasot ovat soveliaimmat viritysnergian vastaanottamiselle 4 93781 ja toisaalta pitkäikäistä fluoresenssia vähentävät ener-giansiirtymät ovat näiden maametallien komplekseilla vähäisiä. Näiden maametallien viritystilojen purkautuessa syntyy fluoresenssia, joka koostuu monesta eri aallonpituuden 5 omaavasta kapean aallonpituusalueen kattavasta komponentista. Toiset elektroninsiirtymät ovat kuitenkin, viritys-tilojen purkautuessa, selvästi toisia suositumpia ja täten tietyn aallonpituuden omaavat komponentit muodostavatkin valtaosan havaittavasta fluoresenssista. Mitattaessa yhtälö aikaisesti näillä aikaerotteisilla leimoilla varustettuja komponentteja bioaffiniteettimäärityksissä voidaankin näiden vähäisempien komponenttien vaikutus mittaustuloksiin helposti poistaa laskennallisin menetelmin. Aikaerotteisia leimoja hyödyntävissä multiparametrimäärityksissä onkin 15 kyetty yhtäaikaisesti määrittämään jopa neljää eri biomole-kyyliä tarvittavilla herkkyyksillä (Xu Y.Y., Pettersson K., Blomberg K., Hemmilä I., Mikola H. and Lövgren T., Clin. Chem. 38/10, 2038 - 2043 (1992).
Vaihtoehtoisen mahdollisuuden multiparametrimäärityksen 20 periaatteeksi tarjoaa erilaisten kiinteiden kantajien käyttäminen spesifisten koettimien erottelemiseksi bioaf f initeettimäärityksessä . Kiinteä kantaja voidaan jakaa alueisiin, joissa kussakin on tietyn spesifiteetin omaava koetin, määrityksessä voidaan hyödyntää yhtäaikaisesti ·. 25 erilaisia kiinteitä kantajia tai kiinteä kanta voidaan jakaa eri luokkiin jonkin merkkiaineen perusteella (Soini E, US 5,028,545). Viimeisessä tapauksessa kussakin erillisessä luokassa kiinteää kantajaa on kiinnittyneenä eri spesifiteetin omaava koetin. Tämän vaihtoehdon käyttäminen 30 multiparametrimäärityksessä on houkuttelevaa, koska se tarjoaa mahdollisuuden valmistaa kukin multiparametri-systeemin komponentti erikseen, jonka jälkeen ne voidaan yhdistää. Tämä on tärkeää tuotannolliset näkökohdat huomioitaessa . 1
Keksinnön kohteena on biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä, jossa käytetään eri luokkiin jaettuja 5 93781 mikropartikkeleita. Eri luokat edustavat eri analyytteja, ja eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit on leimattu fluoresoivalla aineella (1) ja eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit on päällystetty eri analyyttejä sitovilla bioaf-5 finiteettikomponenteilla A. Menetelmässä sekoitetaan eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit ja lisätään analysoitava näyte seokseen, ja lisätään seokseen fluoresoivalla aineella (2) leimatut bioaffiniteettikomponentit B joko heti tai analyyttimolekyylin ja bioaffiniteettikomponentti A:n 10 välisen reaktion jälkeen. Aktivoidaan fluoresoivat aineet (1, 2) ja kvantitoidaan fluoresenssiemissiot mikropartikke-liluokan tunnistamiseksi ja eri analyyttimäärien mittaamiseksi mittaamalla fluoresenssiemissio erikseen jokaisesta mikropartikkelista. Tunnusomaista on, että mikropartikke-15 lit ja bioaffiniteettikomponentit B on leimattu erilaisilla pitkäikäistä fluoresenssia aiheuttavilla aineilla (1, 2).
Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä suoritetaan joko yksivaiheisena, jolloin kaikki reaktioon osallistuvat komponentit ovat samanaikaisesti läsnä, tai kaksivai-20 heisena, jolloin leimatun bioaffiniteettikomponentti B:n lisäys tehdään bioaffiniteettikomponentti A:n ja analyyttimolekyylin välisen reaktion jo tapahduttua.
Erään edullisen suoritusmuodon mukaan käytetään aika-erot-? 25 teista fluoresenssiä eli pitkäikäistä fluoresenssia aiheut tavaa ainetta sekä mikropartikkeliluokan tunnistajana että bioaffiniteettikomponentti B:n leimana.
Keksinnössä hyödynnetään aika-erotteista fluoresenssia (Soini E., and Lövgren Timo. CRC Critical Reviews in Analy-30 tical Chemistry 1987; 18 (2): 105 - 154.) partikkelien tai muunlaisen kiinteän kantajan merkitsemisessä. Aika-erotteista fluoresenssia käytettäessä päästään eroon lyhytkestoisesta taustafluoresenssista, joka aiheutuu erilaisten systeemissä käytettävien komponenttien luonnollisesta 35 fluoresenssista. Näin ollen, merkittäessä partikkelit eri pitoisuuksilla aikaerotteista leimaa, kyetään jo erittäin 6 93781 matala pitoisuus merkkiainetta havaitsemaan. Herkkyys ja aikaerotteisen fluoresenssi-mittauksen hyvä lineaarisuus mahdollistavat aikaerotteisen leiman mittaamisen erittäin laajalla konsentraatioalueella. Kuviossa 2 nähdään euro-5 piumin annosvastekäyrä, jossa standardit (EuCl3) oli tehty fluoresenssia korostavassa liuoksessa ja fluoresenssi mitattu 1 sekunnin ajan käyttäen aika-erotteista fluoro-metria (1230 Fluorometer, LKB-Wallac, Turku, Finland).
Laaja konsentraatioalue taasen mahdollistaa kiinteän kanta-10 jän erottelussa monen eri ryhmän erottamisen toisistaan. Aikaerotteista fluoresenssia käytettäessä kyetään myös käyttämään eri aallonpituuksilla valoa emittoivia leimoja (M. Saarma, L. Järvekulg, I. Hemmilä, H. Siitari & R. Sinijärv, Journal of Virological Methods 23: 47 - 54, 1989; 15 Xu Y.Y., Pettersson K., Blomberg K., Hemmilä I., Mikola H. and Lövgren T., Clin. Chem. 38/10, 2038 - 2043 (1992) ja Iitiä A., Liukkonen L. and Siitari H., Molecular and Cellular Probes 1992; 6, 505-512). Keksinnössä hyödynnetään myös näiden eri aallonpituuksia emittoivien leimojen kon-20 sentraatioiden kombinaatioita partikkeleiden tai muunlaisen kiinteän kantajan merkitsemisessä.
Käytettäessä mikropartikkelia kiinteänä kantajana multi-parametrimäärityksen eri analyyttien erottelussa tarvitaan varsinaisen analyytin havaitsemiseen ainoastaan yksi tai : 25 joitakin leimoja. Käytettäessä leimateknologiana aikaerotteista fluoresenssia, jonka avulla kyetään erottamaan useita leimoja toisistaan, vapauttaa luokitettavan kiinteän kantajan käyttö yhden tai useamman leimoista käytettäväksi kiinteän kantajan luokkien erotteluun. Kuviossa 3 nähdään 30 Eu+3, Tb+3, Sm+3 ja Dy+3 PTA-kelatoidun seoksen emission aallonpituus-, viive- ja intensiteettiprofiili.
Kiinteän kantajan jako luokkiin voidaan suorittaa joko eri aallonpituudella fluoresoivien aikaerotteisten leimojen perusteella, erilaisten aikaerotteisen leiman pitoisuuksien ...35 perusteella, aikaerotteisen ja lyhytikäisen fluoresoivien • ’ leimojen yhtäaikaisen käytön perusteella tai jollakin
II
7 93781 näiden yhdistelmällä. Esimerkiksi käyttämällä kahta, eri aallonpituudella fluoresoivaa, aikaerotteista leimaa, kymmenessä eri pitoisuudessa kiinteän kantajan luokkien erottelussa, voidaan sata erilaista kiinteän kantajan 5 luokkaa erottaa toisistaan.
Hyvin monta toisistaan erotettavissa olevaa kiintokantaja-luokkaa saadaan samaan multiparametrimääritykseen käyttämällä mikropartikkeleita, jotka sisältävät fluoresoivia lantanidikelaatteja. Eri fluoresoivat aineet voivat olla 10 kytkettyjä eri mikropartikkeleihin tai samoihin mikropar-tikkeleihin. On edullista leimata samat mikropartikkelit monilla erilaisilla fluoresoivilla aineilla, koska hyödyntämällä näiden eri fluoresoivien kelaattien kombinaatioita ja/tai niiden pitoisuuksien kombinaatioita saadaan tällä 15 tavoin hyvin monta kombinaatiomahdollisuutta. Kiintokanta jaluokat tunnistetaan mittaamalla aika-erotteista fluoresenssia käyttäen yksittäisten mikropartikkeleiden sisältämän lantanidikelaatin/kelaattien fluoresenssi-intensiteetti. Tunnistamisen jälkeen määritetään partikkelilla 20 suoritetun yleisesti tunnetun spesifisen bioaffiniteetti-reaktion tulos käyttäen leimatun bioaffiniteettikomponentin määrittämiseen tunnistetulta mikropartikkelilta fluoresoivaa lantanidikelaattileimaa, jolloin kuitenkin käytetään eri lantanidia kuin tunnistusmittauksessa. Multipara-25 metrimäärityksissä käytetään kiintokantajina partikkeita, joiden halkaisija on < 1 mm.
Mikropartikkelien luokitukseen käytettävä leima tai käytettävät leimat voidaan liittää mikropartikkeleihin niiden valmistusprosessin yhteydessä esimerkiksi käyttäen kopoly-30 merisaatiota. Vaihtoehtoisesti voidaan leima/leimat kemiallisesti liittää valmiiden mikropartikkeleiden pintaan.
Keksintö kuvataan tarkemmin seuraavin ei-rajoittavin esimerkein .
8 93781
Esimerkki 1
Verinäytteen tyrotropiinin (TSH), tytoksiinin (T3), vapaan tyroksiinin (vapaa T4) ja tyroglobuliinin (TG) pitoisuuksien samanaikainen määrittäminen 5 Tyypillisesti multiparametrimääritystä voisi käyttää ihmisen kilpirauhasen toiminnan määrittämiseksi, jolloin samanaikaisesti mitataan esim. verinäytteestä tyrotropiinin (TSH), tytoksiinin (T3), vapaan tyroksiinin (vapaa T4) ja tyroglobuliinin (TG) pitoisuudet. Kyseisessä esimerkki-10 tapauksessa käytetään neljää kooltaan ja ominaisuuksiltaan identtistä partikkeliluokkaa, jotka on leimattu partikkeli-luokkien tunnistamiseksi eri terbiumkelaattipitoisuuksilla (1 x Tb, TSH-määritys; 5 x Tb, T3-määritys; 10 x Tb, vapaa T4-määritys; ja 15 15 x Tb, TG-määritys). Tuotantovaiheessa partikkeliluokat pidetään erillisinä, kunnes niiden on todettu toimivan kyseisissä määrityksissä, jolloin ne sekoitetaan multiparametrimääritystä varten. Määrityksistä TSH ja TG ovat non-kompetitiivisia ja T3 sekä vapaa T4 ovat kompetitiivisia. 1 20 x Tb-partikkelit on pinnoitettu monoklonaalisella TSH-spesifisellä vasta-aineella, 5 x Tb-partikkelit on pinnoitettu anti-T3-vasta-aineella, 10 x Tb-partikkelit on pinnoitettu antiT4-vasta-aineella ja 15 x Tb-partikkelit on pinnoitettu monoklonaalisella TG-25 spesifisellä vasta-aineella. Multiparametrimäärityksessä käytetään seuraavia fluoresoivalla Eu-kelaatilla leimattuja bioaffiniteettikomponentteja: Eu-leimattu monoklonaalinen TSH-spesifinen vasta-aine, Eu-leimattu T3-johdannainen, Eu-leimattu T4-analogi sekä Eu-leimattu monoklonaalinen TG-30 spesifinen vasta-aine. Multiparametrimäärityksessä partik-keliluokkaseos, näyte ja Eu-kelaatilla leimatut komponentit reagoivat samanaikaisesti, jolloin määritys on yksivaiheinen. Inkubaatiovaiheen jälkeen partikkeliluokat tunnistetaan niiden Tb-kelaattipitoisuuden perusteella ja yksit-35 täisten tunnistettujen partikkeleiden Eu-pitoisuus mitataan. Sekä tunnistus- että mittausvaiheessa käytetään aika- 9 93781 erotteista fluoresenssia. Mitatuista Eu-pitoisuuksista lasketaan kunkin mitattavan analyytin (TSH, T3, vapaa T4 ja TG) pitoisuus. Aika-erotteisessa fluoresenssimittauksessa käytetään joko virtaussytomeria, aika-erotteista mikro-5 skooppia tai aika-erotteista mikrofluorometriä tai muita aika-erotteiseen teknologiaan perustuvia mittalaitteita (US 5,028,545; Xu Y.Y. et ai., Clin. Chem. 38/10, 2038 - 2043 (1992); Seveus L et ai., Cytometry 13: 329 - 338 (1992)).
Esimerkki 2 10 Useampien mutaatioiden samanaikainen osoittaminen
Multiparametrimääritystä voidaan käyttää perinnöllisen sairauden osoittamiseen, jolloin geenitasolla useita sairauteen liittyviä mutaatioita osoitetaan samanaikaisesti. Esimerkiksi Duchenne lihasdystrofiän (DMD) osoittamiseksi 15 täytyy geenissä tarkkaan identifioida yhdeksän eri deletio-mahdollisuutta, jotka kaikki liittyvät kyseiseen sairauteen. Multiparametrimääritys toteutetaan seuraavasti: tutkimuksen kohteena oleva geenialue monistetaan esimerkiksi PCR-menetelmällä (PCR = polymerase chain reaction eli 20 polymeraasiketjureaktio), jonka jälkeen käytetään yhdeksän kooltaan ja ominaisuuksiltaan identtistä partikkeliluokkaa, jotka ovat tunnistettavissa toinen toisistaan sisältämänsä fluoresoivan Tb-kelaatin pitoisuuksina (lx, 2x, 4x, 8x, 16x, 32x, 64x, 128x, 256xTb). Tuotantovaiheessa jokaisen 25 partikkeliluokan pintaan immobilisoidaan nukleiinihappo-koetin (bioaffiniteettikomponentti), joka spesifisesti tunnistaa yhden mainituista yhdeksästä deletioista. Multiparametrimääritystä varten valmistetaan partikkeliluokista seos, joka sisältää kaikki yhdeksän partikkeliluokkaa, 30 joilla DMD:n aiheuttamat mutaatiot voidaan osoittaa. Itse määrityksessä tarvitaan kyseinen partikkeliseos, näyte sekä yhdeksän eri nukleiinihappokoetinta, jotka kaikki on leimattu fluoresoivalla Eu-kelaatilla. Inkubaatiovaiheen jälkeen yksittäisten partikkeleiden luokka todetaan niiden 35 Tb-fluoresenssi-intensiteetin perusteella ja yksittäisten 10 93781 partikkeleiden Eu-pitoisuus mitataan.
Multiparametrimäärityksessä on täten kaikki tunnetut DMD:en liittyvät yhdeksän mutaatiota todennettavissa. Aika-erot-teiset fluoresenssimittaukset tehdään joko virtaussytomet-5 rillä, aika-erotteisella fluoresenssimikroskoopilla tai mikrofluorometrillä (US 5,028,545; Xu Y.Y. et ai., Clin. Chem. 38/10, 2038 - 2043 (1992); Seveus L et ai., Cytometry 13: 329 - 338 (1992)) .
Alan ammattimiehelle on selvää, että keksinnön erilaiset 10 sovellutusmuodot voivat vaihdella jäljempänä esitettävien patenttivaatimusten puitteissa.

Claims (7)

  1. 93781 PATENTTIVAATIMUKS ET
  2. 1. Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä, jossa käytetään eri luokkiin jaettuja mikropartikkeleita, jolloin eri luokat edustavat eri analyytteja, jossa eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit on leimattu fluoresoivalla ai- 5 neella (1) ja jossa eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit on päällystetty eri analyyttejä sitovilla bioaffiniteetti-komponenteilla A, jossa - sekoitetaan eri luokkiin kuuluvat mikropartikkelit ja lisätään analysoitava näyte seokseen, ja lisätään seokseen 10 fluoresoivalla aineella (2) leimatut bioaffiniteettikom-ponentit B joko heti tai analyyttimolekyylin ja bioaf f initeettikomponentti A:n välisen reaktion jälkeen, - aktivoidaan fluoresoivat aineet (1, 2) ja kvantitoidaan 15 fluoresenssiemissiot mikropartikkeliluokan tunnistamiseksi ja eri analyyttimäärien mittaamiseksi mittaamalla fluo-resenssiemissio erikseen jokaisesta mikropartikkelista tunnettu siitä, että - mikropartikkelit ja bioaffiniteettikomponentit B on 20 leimattu erilaisilla pitkäikäistä fluoresenssia aiheuttavilla aineilla (1, 2).
  3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että fluoresoiva aine (1) on korvattu kahdella tai useammalla pitkäikäistä fluoresenssia 25 aiheuttavilla aineilla (la, Ib...) mikropartikkelin luokan määrittämiseksi siten, että eri aineet (la, Ib...) esiintyvät samassa mikropartikkelissa tai eri mikropartikkeleissa. 1 Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä 30 tunnettu siitä, että ainakin yksi pitkäikäistä fluoresenssia aiheuttavista aineista (1, la, Ib...) esiintyy useammissa pitoisuuksissa mikropartikkeleissa. 93781
  4. 4. Patenttivaatimuksen 1, 2 tai 3 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että mikropartikkelit on lisäksi leimattu lyhytikäistä fluoresenssia aiheuttavalla aineella (3), joka voi esiintyä samoissa mikropartikkeleissa, jotka 5 on leimattu yhdellä tai useammalla pitkäikäistä fluoresenssia aiheuttavalla aineella (1, la, Ib...) tai eri mikropartikkeleissa .
  5. 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että lyhytikäistä fluoresenssia 10 aiheuttavaa ainetta käytetään eri pitoisuuksia.
  6. 6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että pitkäikäistä fluoresenssia aiheuttavat aineet (1, 2) ovat Eu-, Tb-, Sm- tai Dy-kelaat- 15 teja.
  7. 7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että mikropartikkeleiden halkaisija on alle 1 mm. il 93781
FI931198A 1993-03-18 1993-03-18 Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä FI93781C (fi)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI931198A FI93781C (fi) 1993-03-18 1993-03-18 Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä
ES94850024T ES2139728T3 (es) 1993-03-18 1994-02-16 Soporte bioespecifico en fase solida.
EP19940850024 EP0617286B1 (en) 1993-03-18 1994-02-16 Biospecific solid phase carrier
DE1994622210 DE69422210T2 (de) 1993-03-18 1994-02-16 Biospezifischer Festphasenträger
JP4704294A JPH06317593A (ja) 1993-03-18 1994-03-17 生体特異的固相担体を使用する検定法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI931198 1993-03-18
FI931198A FI93781C (fi) 1993-03-18 1993-03-18 Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI931198A0 FI931198A0 (fi) 1993-03-18
FI931198A FI931198A (fi) 1994-09-19
FI93781B true FI93781B (fi) 1995-02-15
FI93781C FI93781C (fi) 1995-05-26

Family

ID=8537581

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI931198A FI93781C (fi) 1993-03-18 1993-03-18 Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0617286B1 (fi)
JP (1) JPH06317593A (fi)
DE (1) DE69422210T2 (fi)
ES (1) ES2139728T3 (fi)
FI (1) FI93781C (fi)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU5479599A (en) * 1998-08-11 2000-03-06 Caliper Technologies Corporation Methods and systems for sequencing dna by distinguishing the decay times of fluorescent probes
US6716394B2 (en) 1998-08-11 2004-04-06 Caliper Technologies Corp. DNA sequencing using multiple fluorescent labels being distinguishable by their decay times
JP4536986B2 (ja) * 1999-11-09 2010-09-01 レイセオン カンパニー 腫瘍からの同時多数マーカー放射（ｃａｓｍｍｅｎ）に基づいた細胞解析を行う装置
WO2001075443A2 (en) * 2000-03-31 2001-10-11 Glaxo Group Limited Method and reagents for investigating functional molecular interactions
DE60141090D1 (de) 2000-10-30 2010-03-04 Gen Hospital Corp Optische systeme zur gewebeanalyse
US9295391B1 (en) 2000-11-10 2016-03-29 The General Hospital Corporation Spectrally encoded miniature endoscopic imaging probe
AT503309B1 (de) 2001-05-01 2011-08-15 Gen Hospital Corp Vorrichtung zur bestimmung von atherosklerotischem belag durch messung von optischen gewebeeigenschaften
US7355716B2 (en) 2002-01-24 2008-04-08 The General Hospital Corporation Apparatus and method for ranging and noise reduction of low coherence interferometry LCI and optical coherence tomography OCT signals by parallel detection of spectral bands
US8054468B2 (en) 2003-01-24 2011-11-08 The General Hospital Corporation Apparatus and method for ranging and noise reduction of low coherence interferometry LCI and optical coherence tomography OCT signals by parallel detection of spectral bands
US7567349B2 (en) 2003-03-31 2009-07-28 The General Hospital Corporation Speckle reduction in optical coherence tomography by path length encoded angular compounding
EP2030562A3 (en) 2003-06-06 2009-03-25 The General Hospital Corporation Process and apparatus for a wavelength tuning source
CN103181753B (zh) 2003-10-27 2016-12-28 通用医疗公司 用于使用频域干涉测量法进行光学成像的方法和设备
EP1754016B1 (en) 2004-05-29 2016-05-18 The General Hospital Corporation Process, system and software arrangement for a chromatic dispersion compensation using reflective layers in optical coherence tomography (oct) imaging
EP1771755B1 (en) 2004-07-02 2016-09-21 The General Hospital Corporation Endoscopic imaging probe comprising dual clad fibre
WO2006017837A2 (en) 2004-08-06 2006-02-16 The General Hospital Corporation Process, system and software arrangement for determining at least one location in a sample using an optical coherence tomography
EP2272421A1 (en) 2004-08-24 2011-01-12 The General Hospital Corporation Method and apparatus for imaging of vessel segments
WO2006024014A2 (en) 2004-08-24 2006-03-02 The General Hospital Corporation Process, system and software arrangement for measuring a mechanical strain and elastic properties of a sample
US7365859B2 (en) 2004-09-10 2008-04-29 The General Hospital Corporation System and method for optical coherence imaging
KR101257100B1 (ko) 2004-09-29 2013-04-22 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 광 간섭 영상화 시스템 및 방법
WO2006058049A1 (en) 2004-11-24 2006-06-01 The General Hospital Corporation Common-path interferometer for endoscopic oct
US8922781B2 (en) 2004-11-29 2014-12-30 The General Hospital Corporation Arrangements, devices, endoscopes, catheters and methods for performing optical imaging by simultaneously illuminating and detecting multiple points on a sample
ATE451669T1 (de) 2005-04-28 2009-12-15 Gen Hospital Corp Bewertung von bildmerkmalen einer anatomischen struktur in optischen kohärenztomographiebildern
JP5547402B2 (ja) 2005-08-09 2014-07-16 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 光コヒーレンストモグラフィにおいて偏光に基づく直交復調を実行する装置、方法及び記憶媒体
US20070121196A1 (en) 2005-09-29 2007-05-31 The General Hospital Corporation Method and apparatus for method for viewing and analyzing of one or more biological samples with progressively increasing resolutions
JP5203951B2 (ja) 2005-10-14 2013-06-05 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション スペクトル及び周波数符号化蛍光画像形成
EP1971848B1 (en) 2006-01-10 2019-12-04 The General Hospital Corporation Systems and methods for generating data based on one or more spectrally-encoded endoscopy techniques
US8145018B2 (en) 2006-01-19 2012-03-27 The General Hospital Corporation Apparatus for obtaining information for a structure using spectrally-encoded endoscopy techniques and methods for producing one or more optical arrangements
CN104257348A (zh) 2006-01-19 2015-01-07 通用医疗公司 通过上皮内腔器官束扫描对上皮内腔器官进行光学成像的方法和系统
GB0601183D0 (en) * 2006-01-20 2006-03-01 Perkinelmer Ltd Improvements in and relating to imaging
JP5680829B2 (ja) 2006-02-01 2015-03-04 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 複数の電磁放射をサンプルに照射する装置
JP5524487B2 (ja) 2006-02-01 2014-06-18 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション コンフォーマルレーザ治療手順を用いてサンプルの少なくとも一部分に電磁放射を放射する方法及びシステム。
EP3143926B1 (en) 2006-02-08 2020-07-01 The General Hospital Corporation Methods, arrangements and systems for obtaining information associated with an anatomical sample using optical microscopy
EP2309221A1 (en) 2006-02-24 2011-04-13 The General Hospital Corporation Methods and systems for performing angle-resolved fourier-domain optical coherence tomography
WO2007118129A1 (en) 2006-04-05 2007-10-18 The General Hospital Corporation Methods, arrangements and systems for polarization-sensitive optical frequency domain imaging of a sample
WO2007133961A2 (en) 2006-05-10 2007-11-22 The General Hospital Corporation Processes, arrangements and systems for providing frequency domain imaging of a sample
US7782464B2 (en) 2006-05-12 2010-08-24 The General Hospital Corporation Processes, arrangements and systems for providing a fiber layer thickness map based on optical coherence tomography images
US7920271B2 (en) 2006-08-25 2011-04-05 The General Hospital Corporation Apparatus and methods for enhancing optical coherence tomography imaging using volumetric filtering techniques
WO2008049118A2 (en) 2006-10-19 2008-04-24 The General Hospital Corporation Apparatus and method for obtaining and providing imaging information associated with at least one portion of a sample and effecting such portion(s)
US20080206804A1 (en) * 2007-01-19 2008-08-28 The General Hospital Corporation Arrangements and methods for multidimensional multiplexed luminescence imaging and diagnosis
EP2104968A1 (en) 2007-01-19 2009-09-30 The General Hospital Corporation Rotating disk reflection for fast wavelength scanning of dispersed broadband light
US9176319B2 (en) 2007-03-23 2015-11-03 The General Hospital Corporation Methods, arrangements and apparatus for utilizing a wavelength-swept laser using angular scanning and dispersion procedures
WO2008121844A1 (en) 2007-03-30 2008-10-09 The General Hospital Corporation System and method providing intracoronary laser speckle imaging for the detection of vulnerable plaque
US8045177B2 (en) 2007-04-17 2011-10-25 The General Hospital Corporation Apparatus and methods for measuring vibrations using spectrally-encoded endoscopy
US8115919B2 (en) 2007-05-04 2012-02-14 The General Hospital Corporation Methods, arrangements and systems for obtaining information associated with a sample using optical microscopy
WO2009018456A2 (en) 2007-07-31 2009-02-05 The General Hospital Corporation Systems and methods for providing beam scan patterns for high speed doppler optical frequency domain imaging
JP5536650B2 (ja) 2007-08-31 2014-07-02 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 自己干渉蛍光顕微鏡検査のためのシステムと方法、及び、それに関連するコンピュータがアクセス可能な媒体
WO2009059034A1 (en) 2007-10-30 2009-05-07 The General Hospital Corporation System and method for cladding mode detection
US7898656B2 (en) 2008-04-30 2011-03-01 The General Hospital Corporation Apparatus and method for cross axis parallel spectroscopy
EP2274572A4 (en) 2008-05-07 2013-08-28 Gen Hospital Corp SYSTEM, METHOD AND COMPUTER MEDIUM FOR MONITORING THE MOVEMENT OF VESSELS DURING A THREE-DIMENSIONAL MICROSCOPY EXAMINATION OF CORONARY ARTERIES
WO2009155536A2 (en) 2008-06-20 2009-12-23 The General Hospital Corporation Fused fiber optic coupler arrangement and method for use thereof
EP2309923B1 (en) 2008-07-14 2020-11-25 The General Hospital Corporation Apparatus and methods for color endoscopy
US8937724B2 (en) 2008-12-10 2015-01-20 The General Hospital Corporation Systems and methods for extending imaging depth range of optical coherence tomography through optical sub-sampling
JP2012515576A (ja) 2009-01-20 2012-07-12 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 内視鏡生検装置、システム、及び方法
WO2010085775A2 (en) 2009-01-26 2010-07-29 The General Hospital Corporation System, method and computer-accessible medium for providing wide-field superresolution microscopy
WO2010105197A2 (en) 2009-03-12 2010-09-16 The General Hospital Corporation Non-contact optical system, computer-accessible medium and method for measuring at least one mechanical property of tissue using coherent speckle techniques(s)
EP2453791B1 (en) 2009-07-14 2023-09-06 The General Hospital Corporation Apparatus for measuring flow and pressure within a vessel
WO2011109835A2 (en) 2010-03-05 2011-09-09 The General Hospital Corporation Systems, methods and computer-accessible medium which provide microscopic images of at least one anatomical structure at a particular resolution
US9069130B2 (en) 2010-05-03 2015-06-30 The General Hospital Corporation Apparatus, method and system for generating optical radiation from biological gain media
EP2575597B1 (en) 2010-05-25 2022-05-04 The General Hospital Corporation Apparatus for providing optical imaging of structures and compositions
US9795301B2 (en) 2010-05-25 2017-10-24 The General Hospital Corporation Apparatus, systems, methods and computer-accessible medium for spectral analysis of optical coherence tomography images
JP6066901B2 (ja) 2010-06-03 2017-01-25 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション １つまたは複数の管腔器官内または管腔器官にある構造を撮像するための装置およびデバイスのための方法
WO2012058381A2 (en) 2010-10-27 2012-05-03 The General Hospital Corporation Apparatus, systems and methods for measuring blood pressure within at least one vessel
JP2014523536A (ja) 2011-07-19 2014-09-11 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 光コヒーレンストモグラフィーにおいて偏波モード分散補償を提供するためのシステム、方法、装置およびコンピュータアクセス可能な媒体
EP3835718B1 (en) 2011-08-25 2023-07-26 The General Hospital Corporation Apparatus for providing micro-optical coherence tomography inside a respiratory system
JP2015502562A (ja) 2011-10-18 2015-01-22 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 再循環光学遅延を生成および／または提供するための装置および方法
US9629528B2 (en) 2012-03-30 2017-04-25 The General Hospital Corporation Imaging system, method and distal attachment for multidirectional field of view endoscopy
WO2013177154A1 (en) 2012-05-21 2013-11-28 The General Hospital Corporation Apparatus, device and method for capsule microscopy
JP6560126B2 (ja) 2013-01-28 2019-08-14 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 光周波数ドメインイメージングに重ね合わせされる拡散分光法を提供するための装置および方法
WO2014120791A1 (en) 2013-01-29 2014-08-07 The General Hospital Corporation Apparatus, systems and methods for providing information regarding the aortic valve
WO2014121082A1 (en) 2013-02-01 2014-08-07 The General Hospital Corporation Objective lens arrangement for confocal endomicroscopy
JP6378311B2 (ja) 2013-03-15 2018-08-22 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 物体を特徴付ける方法とシステム
WO2014186353A1 (en) 2013-05-13 2014-11-20 The General Hospital Corporation Detecting self-interefering fluorescence phase and amplitude
EP3021735A4 (en) 2013-07-19 2017-04-19 The General Hospital Corporation Determining eye motion by imaging retina. with feedback
WO2015009932A1 (en) 2013-07-19 2015-01-22 The General Hospital Corporation Imaging apparatus and method which utilizes multidirectional field of view endoscopy
US9668652B2 (en) 2013-07-26 2017-06-06 The General Hospital Corporation System, apparatus and method for utilizing optical dispersion for fourier-domain optical coherence tomography
WO2015105870A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 The General Hospital Corporation Method and apparatus for microscopic imaging
US10736494B2 (en) 2014-01-31 2020-08-11 The General Hospital Corporation System and method for facilitating manual and/or automatic volumetric imaging with real-time tension or force feedback using a tethered imaging device
WO2015153982A1 (en) 2014-04-04 2015-10-08 The General Hospital Corporation Apparatus and method for controlling propagation and/or transmission of electromagnetic radiation in flexible waveguide(s)
ES2907287T3 (es) 2014-07-25 2022-04-22 Massachusetts Gen Hospital Aparato para imagenología y diagnóstico in vivo
US11614445B2 (en) 2016-06-09 2023-03-28 Radiometer Turku Oy Background blockers for binding assays

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE454781B (sv) * 1986-10-17 1988-05-30 Wallac Oy Hybridiseringsforfarande for detektion av polynukleotidsekvens
SE458968B (sv) * 1987-06-16 1989-05-22 Wallac Oy Biospecifikt analysfoerfarande foer flera analyter i vilket ingaar partikelraekning och maerkning med fluorescerande maerksubstanser
CA2098617A1 (en) * 1990-12-28 1992-06-29 Omar S. Khalil Simultaneous determination of multiple analytes using a time-resolved heterogeneous chemiluminescence assay

Also Published As

Publication number Publication date
EP0617286B1 (en) 1999-12-22
DE69422210D1 (de) 2000-01-27
EP0617286A2 (en) 1994-09-28
FI93781C (fi) 1995-05-26
FI931198A (fi) 1994-09-19
FI931198A0 (fi) 1993-03-18
JPH06317593A (ja) 1994-11-15
DE69422210T2 (de) 2000-04-20
EP0617286A3 (en) 1995-07-26
ES2139728T3 (es) 2000-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI93781B (fi) Biospesifinen multiparametrinen määritysmenetelmä
EP0121442B1 (en) Fluorescent multiparameter particle analysis
US5656207A (en) Detecting or quantifying multiple analytes using labelling techniques
US4713348A (en) Fluorescent multiparameter particle analysis
AU695012B2 (en) Immunoassay for determination of cells
JP3021038B2 (ja) 標識技術を用いた複数分析物の検出または定量
US8956823B2 (en) Anti-antibody reagent
SE454115B (sv) Homogenfasanalys med lantanidkelat som merksubstans
JPS5942454A (ja) 液体中のハプテン又は抗原を分析するための均一系免疫分析方法及び試薬
JPH0754324B2 (ja) 液体試料中の抗原および／または抗体を測定するための試験用剤
EP0471792A4 (en) Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities
EP1448990B1 (en) Particle-based ligand assay with extended dynamic range
JP2007519933A (ja) 動的表面生成及び画像化を使用する、生物学的及び化学的物質の検出のためのシステム、方法、及び試薬
JP2005510706A5 (fi)
CN112505322A (zh) 阿尔茨海默病标志物p-Tau217检测试剂盒及其制造方法
WO2000051814A1 (en) Simultaneous analysis of an analyte and an interfering substance using flow cytometry
CA2422856C (en) Methods and kits for decreasing interferences of assay samples containing plasma or serum in specific binding assays by using a large polycation
Soini Biospecific assays with time-resolved fluorescence detection
US6423549B1 (en) Phycoerythrin labeled thyronine analogues and assays using labeled analogues
EP1994407A1 (en) Method for determination of concentration, charge or unit size of a substance
JPS6281566A (ja) 微粒子の螢光強度測定による定量方法
CN1209615C (zh) 测定生物活性物质的目视荧光免疫分析法
Soini Biospecific assays with time-resolved
CN117849330A (zh) 一种免疫荧光检测方法、试剂及其应用
CN117871871A (zh) 一种基于亚微米磁力化学发光法检测人岩藻糖基化蛋白lcn2的方法及检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application