FI91023C - Sensori - Google Patents

Description

91023 i

Sensori

Tama keksintO koskee entsyymielektrodityyppista sensoria (anturia), joka kasittaa parannetun kalvon, seka 5 analyyttistå menetelmaa sensorin kayttamiseksi.

Entsyymielektrodeja kaytetaan kasvavassa maarassa laaketieteellisissa ja muissa laboratorioissa erityisesti sellaisten materiaalien, kuten glukoosin ja urean maarit-tamiseen verinSytteisså ja muissa fysiologisissa nesteis-10 sa. Tailaisia elektrodeja selostetaan monissa julkaisuis-sa, varsinkin Clark'in ja Lyons'in artikkelissa (Annals of the New York Academy of Science, 102, 29 - 45, 1962) seka vastaavasti Clark'in ja Newman'in nimiin myOnnetyissa US-patenteissa nro 3 539 455 ja 3 979 274. Entsyymielektrode-15 ja kaytetaan yleensa materiaalien maaritykseen, jotka itse eivat ole sahkOkemiallisesti aktiivisia, mutta jotka sopi-vien entsyymien lasnaollessa osallistuvat reaktioihin, jotka tuottavat lajeja, jotka voidaan helposti todeta elektrodien avulla. Entsyymielektrodeissa entsyymit si-20 jaitsevat usein polymeerisen materiaalin sisassa hyvin ia-helia alla olevaa elektrodia.

Huomattava maara tutkimuksia on suoritettu tarkoi-tuksella parantaa entsyymielektrodeissa kaytettavaksi tar-koitettujen kalvojen ominaisuuksia ja monia kalvoja on 25 esitetty tahan tarkoitukseen. Eras esimerkki kalvotyypis-ta, jota usein kaytetaan, on Newman'in US-patentissa 3 979 274 esittama laminoitu kalvo. Tama kalvo kasittaa ensimmaisen eli sisemman kerroksen oleellisesti homogee-nista ainetta, esimerkiksi selluloosa-asetaattia, joka 30 kykenee estamaan pienimolekyylipainoisten materiaalien lapikulun, jotka todennSkOisesti hairitsevat entsyymisig-naalia, aivan vieressS olevan kerroksen itse entsyymia (joko yhdessa muiden sellaisten aineiden kanssa, joita voidaan sekoittaa sen kanssa, tai ilman naita), seka toi-35 sen kerroksen (tassa tapauksessa ulomman kerroksen) huo- 2 koista kantajakalvoa, joka kykenee eståmaån solumaisten ja kolloidisten osasten låpikulun.

Glukoosin mååritys voidaan ottaa esimerkiksi ent-syymielektrodin avulla suoritetusta materiaalin måårityk-5 sestå. Glukoosioksidaasientsyymin låsnåollessa tapahtuu seuraava reaktio: glukoosi- glukoosi +09 -—-> glukonihappo +H909.

10 oksidaasi z * Tåsså reaktiossa syntynyt vetyperoksidi kulkee sellaisen kalvon, kuten esim. US-patentissa 3 979 274 esitetyn kal-von, ensimmåisen kerroksen låpi ja voidaan måårittåå elek-15 trodia kåyttåmållå. Koska syntynyt vetyperoksidi on riip-puvainen nåytteesså låsnå olevasta glukoosista, voidaan glukoosin konsentraatio måårittåå kåyttåmållå sopivasti kalibroitua sensoria.

Tåhån påivåån mennesså ovat monet vaikeudet rajoit-20 taneet entsyymielektrodien hyvåksikåyttOå ja supistaneet niiden kåyttttasteikkoa, esim. vårinåytteiden rutiiniana-lyyseisså. Merkittåvåå nåiden vaikeuksien joukossa on elektrodien vasteen rajoitettu lineaarisuus analysoitavien aineiden, kuten glukoosin tai laktaatin osalta, jotka ovat 25 substraatteja entsyymin katalysoimille reaktioille. Vaste on lineaarinen vain analysoitavien aineiden alhaisten kon-sentraatioiden rajoitetulla alueella ja sen vuoksi mååri-tettåvien materiaalien konsentraatioiden tulee olla alhai-set ja yleenså tåytyy kåyttåå laimennettuja nåytteitå nåy-30 te-erisså, jotka on tarkoitettu analysoitaviksi kåyttåmål-lå entsyymielektrodeja. Aina ei ole mahdollista valmistaa laimeita nåytteitå rutiinianalyysejå vårten laboratorion ulkopuolella ja se saattaisi olla mahdotonta tehokkaan tarkkailun kannalta.

35 KeksinnOn kohteena on entsyymi-elektrodityyppinen sensori analysoitavan aineen måårittåmiseksi, joka analy- il 91023 3 soitava aine on muutettavissa entsyymin lfisnåollessa sel-laiseksi lajiksi, joka voidaan todeta sensorin avulla, joka sensor! kasittaa elektrodin ja nesteita ja liuenneita aineita lapaisevan kalvon sovitettuna elektrodin ja analy-5 soitavaa ainetta slsaitavan naytteen vaiiin, mainitun kalvon kasittaessa yhta tal useampia entsyymeja sisaltavan kerroksen seka ainekerroksen, joka on sijoitettu entsyymia sisaltavan kerroksen ja naytteen vaiiin. Sensoreille on tunnusomaista, etta mainittu ainekerros sisaltaa alueen, 10 jonka lapi analysoitava aine pystyy kulkemaan ja joka on muodostettu huokoisesta materiaalista, jonka lapaisevyys on rajoitettu ja jonka huokoisuus on alueella 0,001 - 0,5 % ja jonka keskimaarainen huokoshalkaisija ei ole suurempi kuin 0,025 pm.

15 KeksinnOn kohteena on lisaksi menetelma naytteessa olevan analysoitavan aineen maarittamiseksi saattamalla nayte kosketukseen kalvon ulomman kerroksen kanssa, joka kalvo on nesteita ja liuenneita aineita lapaiseva ja si-saitaa yhta tai useampia entsyymeja, joiden lasnaollessa 20 analysoitava aine on muutettavissa sellaiseksi lajiksi, joka on kalvon sisaitavan sensorin avulla todettavissa, seka yksi tai useampia ainekerroksia, ja mittaamalla sensorin vaste kyseiseen lajiin. Menetelmaile on tunnusomais-ta, etta kalvon entsyymin ja naytteen vaiissa oleva kerros 25 sisaitaa alueen, jonka 13pi analysoitava aine pystyy kulkemaan, muodostettuna lapaisykyvyltaan rajoitetusta huokoisesta aineesta, jonka huokoisuus on alueella 0,001 -0,5 % ja jonka keskimaarainen huokoshalkaisija ei ole suurempi kuin 0,025 pm.

30 Huokoisesta materiaalista muodostettu alue aikaan- saa sen, etta sen sisaitavaiia kerroksella on rajoitettu lapaisykyky. Taman kerroksen tehokas alue on edullisesti kokonaan tai paaosaltaan muodostettu materiaalista, jonka huokoisuus on 0,001 - 0,5 %.

35 KeksinnOn mukaisessa sensorissa oleva kalvo koostuu yksinkertaisimmassa muodossaan entsyymia sisaltavasta ker- 4 roksesta ja kerroksesta, jonka låpåisykyky on rajoitettu. Lapaisykyvyltaan rajoitettu kerros on ulompana kerroksena tåsså kalvon yksinkertaisimmassa muodossa ja se on suoraan kosketuksessa nåytteen kanssa keksinndn mukaisessa mene-5 telmåsså analysoitavan aineen maarittamiseksi.

On kuitenkin edullista, etta kalvo on sita laminoi-tua kalvotyyppiå, josta US-patentissa esitetty kalvo on esimerkki. Tållainen kalvo kasittaa ensimmaisen eli sisemman ainekerroksen sovitettuna entsyymia sisaitavan kerrok-10 sen ja elektrodin vaiiin, entsyymia sisaitavan kerroksen ja toisen ainekerroksen entsyymia sisaitavan kerroksen toisella puolella, joka toinen kerros on se kerros, jonka låpåisykyky on rajoitettu.

Jaijempana tasså selityksessa sisaitaa keksinniin 15 mukainen sensori, jota selostetaan, sita tyyppia olevan laminoidun kalvon, josta US-patentissa 3 979 274 kuvattu kalvo on esimerkkina, ja kalvossa on ensimmainen ja toinen kerros, jolloin se kerros, joka sisaitaa huokoista mate-riaalia, jonka låpåisykyky on rajoitettu, on toisena ker-20 roksena.

On ymmarrettava, etta keksinndn mukaisessa senso-rissa olevat kalvot voivat sisaitaa enemman kuin kaksi ainekerrosta entsyymia sisaitavan kerroksen lisaksi. Esi-merkiksi toinen kerros, so. lapaisykyvyltaan rajoitettu 25 kerros, ei vaittamatta ole kalvon uloin kerros. Siina voi olla lisaksi ainekerros tai ainekerroksia, so. kolmas, neljas jne, kerros toisen kerroksen eli lapaisykyvyltaan rajoitetun kerroksen ja naytteen vaiissa. Usein kuitenkin toinen kerros on ulompi kerros ja sen ulompi pinta on kos-30 ketuksessa naytteen kanssa.

Yleensa toisessa kerroksessa kaytetty, lapaisykyvyltaan rajoitettu huokoinen aine on polymeerista mate-riaalia, mutta muitakin sopivia aineita voidaan kayttaå. Niinpa toinen kerros voidaan muodostaa lasista tai metal-35 lista, joissa on laser-sateilia leikattuja huokosia.

I! 91023 5

Prosentuaalinen huokoisuus on huokospinta-alan x ja huokostiheyden tulo kerrottuna sadalla. Esimerkkeja huo-kosten nimelliskoosta ja huokosten nimellistiheydesta ai-neille, joilla on sopivat alhaiset huokoisuudet, ovat seu-5 raavat:

Huokosen nimellis- Huokosten nimellis- Laskettu huokoi- koko (pm)_tlheys (huokosia/cm2) suus %:na_ 0,01 6 x 108 0,047 0,01 1 x 10® 0,008 10 Muita materiaalin parametreja, jolta voidaan kåsitellå materiaalin saamiseksi, jolla on sopivasti rajoitettu 13-pSisykyky, toista, huokoista materiaalia olevaa kerrosta vårten on huokosten mutkittelvuus. Toisen kerroksen pak-suus vaikuttaa myOs 13p3isykykyyn.

15 KeksinnOn mukaisessa sensorissa toimii kalvon toi- nen kerros diffuusiovallina ja estSS suurimolekyylipai-noisten yhdisteiden lapikulun tal estaa niiden lapikulkua ja antaa kalvolle riittavasti lujuutta, niin etta se kyke-nee sailyttamaan muotonsa ja sailyttamaan soplvan koske-20 tuksen elektrodin kanssa. Soplvia huokoisia materiaaleja toista kerrosta vårten ovat huokoiset polykarbonaatit, polyuretaanit seka modifioitu selluloosa, erityisesti sel-luloosanitraatti, selluloosa-asetaatti ja regeneroitu selluloosa.

25 Sopivat materiaalit kasittavat myOs materiaaleja, joiden "leikkeiden" molekyylipaino on 20 000 tai pienempi. Nopean elektrodivasteen takaamiseksi on toisen kerroksen paksuus edullisesti pienempi kuin 20 pm, erityisesti va-lilia 1 - 10 pm. Erityisen sopivilla materiaaleilla toista 30 kerrosta vårten on keskimaarainen huokoshalkaisija vaiilia 0,015 pm - 0,025 pm.

KeksinnOn mukaisessa sensorissa voi olla irtokalvo tai se voi olla kertakayttOsensori siihen liittyvine kal-voineen. Sensoreihin sopivien elektrodien muodostuksessa 35 kaytettyja materiaaleja ovat inertit metallit ja/tai hii-li.

6

Jos anturiin sisåltyy US-patentissa 3 979 274 esi-tettyå tyyppiå oleva laminoitu kalvo, niin ensimmåinen kerros, joka on tarkoitettu sijoitettavaksi entsyymiker-roksen ja elektrodin vaiiin, muodostetaan sopivasti poly-5 metyyli-metakrylaatista, polyuretaanista, selluloosa-ase-taatista tai muusta huokoisesta materiaalista, joka ra-joittaa sahkdisesti aktiivisten, hairitsevSsti vaikutta-vien yhdisteiden, kuten askorbiinihapon ja tyrosiinin 13-pikulkua tai estaa sen. Ensimmaisen kerroksen paksuus on 10 sopivasti vaiilia 0,2 pm - 1,0 pm.

Keksinndn mukaisessa sensorissa oleva entsyymi voi-daan sijoittaa kalvoon milia sopivalla tavalla tahansa. Laminoidussa kalvossa se on edullisesti huokoisen materi-aalin ensimmaisen ja toisen kerroksen vaiissa ja muodos-15 taa niiden vålisen sidoksen. Tassa sijainnissa, ja myds-kin yleensa, entsyymi on tehty edullisesti liikkumattomak-si sekoittamalla aineen kanssa, joka aikaansaa ristikyt-keytymisen. Eras hyvin sopiva aine tahan tarkoitukseen on glutaarialdehydi; proteiineja, kuten albumiinia ja muita 20 materiaaleja voidaan myds sisailyttaa. Sensorista saatu-jen nopeiden stabiilien lukemien saamisen helpottamiseksi on edullista, etta entsyymia sisaitavå kerros on ohut, so. ei paksumpi kuin 5 pm.

Keksinntin mukaisessa sensorissa kaytettava entsyy-25 mi riippuu analysoitavasta aineesta, jonka konsentraatio on maaritettava. Jos analysoitava aine on glukoosi, niin taildin entsyymi on esimerkiksi glukoosioksidaasi. Muita entsyymeja, joita voi olla lasna, ovat urikaasi ja lak-taattioksidaasi vastaavasti virtsahapon ja maitohapon maa-30 rittamiseksi. Entsyymijarjestelmia, jotka kasittavat kaksi tai useampia entsyymeja, voi myds olla lasna.

Keksinndn mukaisessa sensorissa glukoosin maaritta-mista silmaiiapitaen kaytettavaiaminoitu kalvo voidaan valmistaa menetelmaiia, joka kasittaa seuraavat vaiheet: 35 1. 1 mg glukoosioksidaasia liuotetaan 50 pl:aan (100 mg/ml) albumiinia, li 91023 7 2. 3/μ1 12,5-% glutaarialdehydiliuosta sekoitetaan mikro-skoopin objektilasilla 3 μ1:η kanssa entsyymi/albumiini-seosta, 3. 1 μΐ edellisessa vaiheessa valmistettua seosta pannaan 5 1 cm2:n suurulsen polykarbonaattikalvon toiselle puolelle, jonka kalvon huokolsuus ei ole suurempl kuln 5 % ja jonka huokosten keskimaarainen halkaisija on alle 0,03 pm.

4. Entsyymikerroksen toinen pinta peitetaan vaiittOmasti ohuella selluloosa-asetaattikalvolla ja saatua lamlnoltua 10 kalvoa purlstetaan 3 minuutin ajan objektilasien vaiissa. Objektilasien poistamisen jaikeen voidaan edelia esitetyn vaihesarjan avulla valmistettu laminoitu kalvo asettaa platinaelektrodille keksinnOn mukaisen sensorln muodosta-miseksi, jolloin selluloosa-asetaattikalvo on lahinna 15 elektrodia ja muodostaa ensimmaisen kerroksen.

KeksinnOn mukaisen menetelman kayttaminen tuottaa etuna sen konsentraatioalueen suurenemisen, jolla alueel-la diagrammi, joka esittaa konsentraatiota sensorin vas-tauksen funktiona, on lineaarinen. Tavanomaisia menetel-20 mia kaytettaessa lineaarisuus ulottui yleensa vain enin-taan suunnilleen glukoosin konsentraatioon 3 mmol litraa kohti. KeksinnOn mukaista menetelmaa kayttaen lineaarisuus suurenee ja alue ulottuu glukoosin konsentraatioihin, jot-ka ovat 50 mmol litraa kohti ja vieiakin korkeampia. Kor-25 keammilla konsentraatioilla tama saavutetaan rajoittamalla substraatin tunkeutumista entsyymikerrokseen ja menetta-maiia taman vuoksi jonkin verran herkkyytta. TailOin alue peittaa ne glukoosin konsentraatiot, joita voidaan odottaa olevan verinaytteissa tehden sen vuoksi veren glukoosipi-30 toisuuksien maarittamisen helpommaksi. Tama on huomattava etu tilanteissa, joissa taytyy tehda vakituisesti suuri joukko maarityksia ja mahdollisimman vahaiselia naytteiden kasittelylia. Lineaarisuus laajenee myOs lisattaessa kalvon toiseen kerrokseen vaiiainetta, joka kasittaa organo-35 silaania, jossa on reaktiivisia ryhmia, kuten hakijan vi-reilia olevassa Eurooppa-patehttihakemuksessa EPO nro 8 8633907.9 on esitetty. TamS kasittely voidaan kohdistaa esillS olevan keksinndn mukaisessa sensorissa olevan kal-von toiseen kerrokseen yhdistelmåvaikutuksen ja edelleen parantuneen lineaarisuuden aikaansaamiseksi.

5 KeksintOå valaistaan oheisten piirustusten kuvion 1 avulla.

Kuviossa 1 viitenumero 1 tarkoittaa kalvon toista kerrosta, joka on muodostettu polykarbonaattikalvosta, jonka huokoisuus on 0,42 %, 2 tarkoittaa kerrosta, joka 10 sisSlt&a glukoosioksidaasientsyymia liuotettuna albumii-niin ja sekoitettuna glutaarialdehydin kanssa, 3 tarkoittaa selluloosa-asetaatista muodostettua ensimmaista kerrosta, 4 tarkoittaa platinasta valmistettua koe-elektrodia ja 5 tarkoittaa hopeista vertailuelektrodia. 1, 2 ja 3 15 muodostavat yhdessS laminoidun kalvon. Platinainen koe-elektrodi 4 toimii anodina, kun taas hopeinen vertailu-elektrodi 5 toimii katodina. Kalvon pitaa paikoillaan elektrodilla pleksilasirengas, joka puristaa alaspflin ulompaa kerrosta 1 sen ulkoreunoja vastaan kohdissa 6.

20 Kuviossa 1 esitetyn sensorin kayttoa valaistaan seuraavien esimerkkien avulla:

Esimerkki 1

Vesiliuos, joka sisaisi 30 mg/ml glukoosioksidaasientsyymia (E.C.1.1.3.4) ja 200 mg/ml albumiinia, sekoitet-25 tiin yhtasuuren tilavuuden kanssa liuosta, joka sisaisi 50 pg/ml glutaarialdehydiS. 1 cm2:n suuruinen pala "NUCLEPO-RE"-polykarbonaattikalvoa (keskimåårainen huokoshalkaisi-ja = 0,05 pm) altistettiin 5 pl:lle liuosseosta tarkoituk-sella kyliastaa kalvo entsyymilia. Tåssa tapauksessa kalvo 30 toimii entsyymin kantajana ja silia ei ole mitaan vaiku-tusta anturista saadun vasteen lineaarisuuteen.

Entsyymilia kyliastetty kalvo pantiin sensorin koe-ja vertailuelektrodien paaile (jotka oli etukateen kostu-tettu 0,067 M fosfaattipuskurilla, joka sisaisi 50 mmol 35 litraa kohti natriumkloridia, pH-arvo 7,4, elektrolyytti-sen yhteyden takaamiseksi koe- ja vertailuelektrodien va-

II

91023 9 lillS). Toisena kerroksena oleva tutkittava kalvo pantiin entsyymilia kyliastetyn kalvon paaile. Elektrodirungon ruuviasennusosa pantiin sen jaikeen paikoilleen ja kiris-tettiin kohdistamalla heikkoa jannitysta muodostettuun 5 laminoituun kalvoon. Sen jaikeen kalvoa testattiin. Koska ylempi kalvo (testattava kalvo toisena kerroksena) voi-daan korvata muilla kalvoilla, oli mahdollista kayttaa samaa tuettua entsyymikerrosta useille erilaisille toisil-le kerroksille).

10 Tassa esimerkissa toisena kerroksena testatut kal- vot olivat seuraavanlaiset: (1) "NUCLEPORE"-polykarbonaattilisakalvo, jonka keskimaa-rainen huokoshalkaisija on 0,05 pm, (2) "NUCLEPORE”-polykarbonaattikalvo, jonka keskimaarainen 15 huokoshalkaisija on 0,015 pm; ja (3) Toiminimen Schleicher and Schull valmistaa regeneroi-tua selluloosaa olevaa kalvoa (RC52), jonka keskimaarainen huokoshalkaisija on 0,01 pm.

Kaytettaessa kalvoa (1) oli sensorin lineaarisuus 20 7 mmol litraa kohti. Kalvoilla (2) ja (3) saadut tulokset on esitetty vastaavasti oheisten piirustusten kuviossa 2 ja 3, joissa diagrammit esittavat pA-suureina ilmoitettuja virrantiheyksia (ordinaatat) mmolzeissa litraa kohti il-moitetun glukoosikonsentraation (abskissat) funktiona.

25 Nama tulokset osoittavat, etté kayttamaiia kalvoja (2) ja (3) toisena kerroksena, sensori osoittaa paljon suurempaa lineaarisuutta - suurempaa kuin 20 mmol litraa kohti ker-rokselle (2) ja ainakin 50 mmol litraa kohti kerrokselle (3). Vasteaika (98 %) kerrokselle (2) oli 30 - 60 sekuntia 30 ja kerrokselle (3) 20 minuuttia. Vasteaika (90 %) kerrokselle (3) oli 7 minuuttia.

Esimerkki 2

Esimerkki 1 toistettiin kayttamaiia laktaattioksi-daasientsyymia (E.C.1.1.3.2). Toisena kerroksena testatut 35 kalvot olivat sellaiset kuin esimerkissa 1 kohdissa (1) ja 10 (2) on esitetty, jolloin niiden keskimååråiset huokoshal-kaisijat olivat vastaavasti 0,05 μηι ja 0,015 μπι.

Kalvoa (1) kåytettåesså sensorln lineaarisuus oli 0,2 mmol litraa kohti. Kalvolla (2) saatu tulos on esi-5 tetty oheisten piirustusten kuviossa 4, joka esittaa μΑ-suureena ilmoitetun virrantiheyden (ordinaatta) diagrammia mmol:eissa litraa kohti ilmoitetun glukoosin konsentraa-tion (abskissa) funktiona. Jaileen lineaarisuus, kaytta-maiia pienempihuokoista kalvoa toisena kerroksena, on suu-10 rempi kuin kaytettaessa suurempihuokoista kalvoa. Tassa tapauksessa saavutetaan lineaarisuus vahintaan arvolla 4 mmol litraa kohti kalvolla (2), jolloin vasteaika on 1 -2 minuuttia.

Esimerkki 3 15 Esimerkin 1 menetelmaa kdytettiin testattaessa toi sena kerroksena toiminimen Schleicher and Schull valmista-maa, regeneroitua selluloosaa olevaa kalvoa (RC52), jonka nimellinen huokoskoko oli vaiilia 0,005 - 0,010 pm. Tulos on esitetty kuviossa 5, joka esittaa suureena μΑ ilmoite-20 tun virrantiheyden (ordinaatta) diagrammia mmol:ssa litraa kohti (abskissa) ilmoitetun glukoosikonsentraation funktiona. Tama osoittaa, etta sensorin vaste on lineaarinen huomattavan konsentraatioalueen yli.

Esimerkki 4 25 Esimerkin 1 menetelmaa kaytettiin testattaessa toi sena kerroksena toiminimen Schleicher and Schull valmista-maa selluloosa-asetaattikalvoa (AC62), jonka nimellinen huokoskoko on vaiilia 0,005 - 0,01 pm. Tulos on esitetty kuviossa 6, joka esittaa μΑ-suureena ilmoitetun virranti-30 heyden (ordinaatta) diagrammia mmol:ssa ilmoitetun glukoosikonsentraation (abskissa) funktiona. Tama osoittaa, etta vaste on lineaarinen huomattavan konsentraatioalueen yli.

II

Claims (8)

91023 11

1. Entsyymi-elektrodityyppinen sensori analysoi-tavan aineen måårittåmiseksi, joka analysoitava alne on 5 muutettavlssa entsyymin lasnSollessa sellaiseksi lajiksi, joka voldaan todeta sensorln avulla, joka sensori kasittaa elektrodln ja nesteita ja liuenneita aineita lSpSisevån kalvon sovitettuna elektrodln ja analysoitavaa alnetta sisaitavan nSytteen vaiiin, mainitun kalvon kasittaessa 10 yhta tai useampla entsyymeja sisaitavan kerroksen seka alnekerroksen, joka on sijoitettu entsyymia sisaltavan kerroksen ja naytteen vaiiin, tunnettu siita, etta mainittu ainekerros sisaitaa alueen, jonka lapi analysoitava alne pystyy kulkemaan ja joka on muodostettu huokoi-15 sesta materiaalista, jonka lapaisevyys on rajoitettu ja jonka huokoisuus on alueella 0,001 - 0,5 % ja jonka keski-maarainen huokoshalkaisija el ole suurempi kuin 0,025 pm.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen sensori, tunnettu siita, etta se sisaitaa laminoidun kalvon, joka 20 kasittaa entsyymia sisaitavan kerroksen sijoitettuna en-simmaisen alnekerroksen ja toisen alnekerroksen vaiiin, ensimmaisen kerroksen ollessa entsyymia sisaitavan kerroksen ja elektrodin vaiissa sensorissa.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen sensori, t u n-25 n e t t u siita, etta kalvon ensimmainen kerros on muodostettu polymetyylimetakrylaatista, selluloosa-asetaatis-ta tai polyuretaanista.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen sensori, tunnettu siita, etta lapaisykyvyltaan rajoi- 30 tettu huokoinen aine on muodostettu polykarbonaatista tai modifioidusta selluloosasta.

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen sensori, tunnettu siita, etta lapaisykyvyltaan rajoitettu huokoinen aine muodostaa sita sisaitavan kerrok- 35 sen koko tehokkaan alueen. 12

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen sensor!, tunnettu siita, etta lapaisykyvyltaan ra-joitetun huokoisen aineen huokosten keskimaarainen halkai-sija on alueella 0,01 - 0,025 pm.

7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen sen sor!, tunnettu siita, etta lapaisykyvyltaan ra-joitetun huokoisen aineen huokoisuus on alueella 0,005 -0,025 %.

8. Menetelma naytteessa olevan analysoitavan ai-10 neen maarittamiseksi saattamalla nayte kosketukseen kal-von ulomman kerroksen kanssa, joka kalvo on nesteita ja liuenneita aineita låpaiseva ja sisaitaa yhta tai useampia entsyymeja, joiden lasnaollessa analysoitava aine on muu-tettavissa sellaiseksi lajiksi, joka on kalvon sisaitavan 15 sensorin avulla todettavissa, sekå yksi tai useampia aine-kerroksia, ja mittaamalla sensorin vaste kyseiseen lajiin, tunnettu siita, etta kalvon entsyymin ja naytteen vaiissa oleva kerros sisaitaa alueen, jonka låpi analysoitava aine pystyy kulkemaan, muodostettuna lapaisykyvyltaan 20 rajoitetusta huokoisesta aineesta, jonka huokoisuus on alueella 0,001 - 0,5 % ja jonka keskimaarainen huokoshal-kaisija ei ole suurempi kuin 0,025 pm. II 91023 13