FI87573B - Foerfarande foer framstaellning av gangliosidlika foereningar - Google Patents

Description

f t f- <— 1 1 '· -

Menetelmä gangliosldien kaltaisten yhdisteiden valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää gangliosldien kaltais-5 ten yhdisteiden valmistamiseksi, jotka omaavat Hanganat-ziu-Deicher-antigeeniaktiivisuutta (käytetään tästä eteenpäin nimitystä "H-D-antigeeni").

Keksintö koskee myös keramidien kaltaisia yhdisteitä, jotka ovat välituotteita edellä esitetyssä mene-10 telmässä, sekä menetelmiä niiden valmistamiseksi.

Nisäkkäiden soluissa glykolipidit ovat glykosidi-sia siltoja keramideiksi kutsuttujen lipidirakenteiden, joissa rasvahapot ovat amidisidoksen välityksellä liittyneet pitkäketjuisiin aminoalkoholeihin, joita kutsutaan 15 sfingosiineiksi, ja sokerien, kuten glukoosin, galaktoo-sin, N-asetyyliglukosamiinin, fukoosin ja siaalihapon välillä, erilaisina yhdistelminä, ja ne kuuuluvat niin kutsuttujen sfingo-glykolipidien kategoriaan. Näistä glyko-lipideistä niitä, jotka sisältävät siaalihappoa, kutsu-20 taan erityisesti gangliosideiksi.

H-D-antigeenit ovat antigeenejä, jotka löydettiin erikseen Hanganatzium ja Deicherin toimesta 1920-luvulla potilaista, joihin oli injektoitu hevosen antiseerumeja - - heidän sairauksiensa parantamiseksi, ja ne tunnetaan an- . 25 tigeeneinä, jotka reagoivat injektoitujen infektoitunei-den seerumeiden kanssa, samoin kuin eläinten, kuten lampaiden, hevosten, sikojen, kanien ja marsujen veren punasolujen kanssa. H-D-antigeenejä on viime aikoina myös uutettu gangliosideina hevosten veren punasoluista ja puh-30 distettu yksinkertaisina molekyyleinä. Lisäksi on osoitettu, että gangliosidit, joilla on H-D-antigeeniaktiivi-suutta, ovat hevosen veren punasolujen glykolipidien pää-komponentteja, joita kutsutaan "hematosideiksi".

Oletetaan, että H-D-antigeenien kemiallinen raken-35 ne on Gd Neu( 2-3) Gal( 1-4) Glc-Cer.

O H r π π 2 / 3 / $

Edelleen viime aikoina H-D-antigeenejä on usein löydetty sairastuneiden potilaiden seerumista riippumatta siitä, onko vieraslajisia antiseerumeja annosteltu vai ei- On myös havaittu, että nämä antigeenit ilmestyvät 5 syöpäisten lymfosyyttisolujen pinnalle ihmisillä ja koti-eläinsiipikarj alla.

Koska näyttää todennäköiseltä, että H-D-antigeenejä voitaisiin käyttää merkkiaineina, ei vain syövän aikaiseksi toteamiseksi, vaan myös syövän immunoterapiassa, 10 oletetaan, että niitä tullaan käyttämään syövän ehkäisyssä ja hoidossa.

Useimmat tällaisista gangliosidien kaltaisista yhdisteistä ovat yleensä uloimmassa molekyylikerroksessa solumembraanin kahdesta molekyylikerroksesta, ja tuorei-15 den tutkimustulosten perusteella niillä ajatellaan olevan tärkeä merkitys informaation erottelussa, vastaanotossa ja vasteessa soluissa ja solujen erilaistumisessa, uudis-kasvussa, pahanlaatuisessa muutoksessa ja käyttäytymisessä.

20 Kuitenkin siaalihappoa sisältävien oligosakkaridi- ketjujen eristäminen ja puhdistaminen elävästä kehosta on hyvin vaikeaa. Siksi on tullut tarpeelliseksi ja välttämättömäksi, että nämä siaalihappoa sisältävät oligosakkaridit pitäisi syntetisoida tarkasti, jotta voitaisiin . 25 selvittää niiden tarkan biologisen informaation ja molekyylirakenteiden välinen korrelaatio.

Keksijät ovat aikaisemmin kehittäneet menetelmän glykolipidien tällaisen keramidiosan syntetisoimiseksi stereoselektiivisellä tavalla hyvällä saannolla (JP-pa-30 tentti hakemusnumero 190 745/1985).

Kun edellä kuvattu keramidi (I) on alistettu gly-kosylaatiolle sokeriketjun kanssa, se on tavallisesti muutettu bentsoyloiduksi yhdisteeksi (IV) alla kuvatulla menetelmällä (vrt. myös kaavio sivulla 4).

35 Yhdistettä (I) käsitellään trifenyylimetyyliklori- dilla pyridiinissä, jolloin saadaan trifenyylimetyloitu l ( . f ; r~ r 7 3 h / o / 5 yhdiste (II), jota sitten käsitellään bentsoyylikloridil-la ja dimetyyliaminopyridiinillä, jotta saataisiin trife-nyylimetyyli-bentsoyloitu yhdiste (III). Tätä yhdistettä käsitellään paratolueenisulfonihapolla trifenyylimetyyli-5 ryhmän erottamiseksi ja keramidin bentsoyloidun yhdisteen (IV) aikaansaamiseksi. Tässä reaktiosarjassa bentsoyloin-ti voidaan suorittaa ilman yhdisteiden (II) ja (III) eristämistä [(I) - (IV)].

Kuitenkin käytettäessä edellä kuvattua bentsoyloi-10 tua yhdistettä (IV) glykosylaatiolla on alla kuvattuja haittavaikutuksia:

Bentsoyloidulla yhdisteellä (IV) on pieni liukoisuus liuottimiin, kuten metyleenikloridiin, bentseeniin tai nitrometaaniin, joita yleensä käytetään glykosylaati-15 oissa, ja siten glykosylaatio voidaan suorittaa vain käyttäen pieniä pitoisuuksia, ja glykosylaatiossa saatu tuotteen saanto on riittämätön (noin 30 - 35 %).

Keksijät ovat suorittaneet intensiivisiä tutkimuksia tarkoituksenaan ratkaista edellä kuvatut ongelmat.

20 Tuloksena he yllättäen havaitsivat, että bentsoyyliryhmän korvaaminen edellä esitetyssä yhdisteessä (IV) eri tyyppisillä silyyleillä saa aikaan huomattavia vaikutuksia, kuten yhdisteen (IV) liukoisuuden kasvun liuottimiin, vieläpä edellä kuvatun glykosylaation olosuhteissa, ja 25 näin he ovat määrittäneet, että reaktio voitaisiin, esimerkiksi, suorittaa käyttäen suuria pitoisuuksia (suurempia kuin noin 50 %), samoin kuin voitaisiin saada suuri kasvu tuotteen saannossa. Nämä havainnot johtivat tämän keksinnön aikaansaamiseen.

4 87573

•H

C

•H

-H

Ti

•H

U

Σ>1

Oj -m

Sh O P 2

En G H 5 ° -H O ti, ™ e fM r?

tri (ö K

u -h u t ΓΜ , iH (N Τ'

« / >1 Pi / C

O / >1 o / g1

U / . -P U / S

tn_/ J oi te_/ i5 z —/ u ε z·^ £ N -H K. 7^7 k e m m xi > --° h -----> j----° "

/ N

/ } . f—I .fd

« * I

>1 S-l

•H

i~4 se >1 O >1 d) -p A, te p •H ? ^

^ ^ e EH U

CJ ^ <0 I CN P

s E | 4 S

ex '7: . ^ o tj> ra i-----! 0):(0 1 !

Sh -P I - t" te -P O J*

o 3 :nj ! <“> K

a" ί ·§ ! a S

oT 3 αί * | «f1 ? u O / -H O / §_/ s Ö |_/

K ~ \ PQ e- I

Γ ° ~ ° S

/ / R

\ \ *3 / > ! ! X"1 1-1

M Ph pH

ei ,_____________ 5 o 7 :77

' ) / o f -J

Tämän keksinnön tarkoitus on tuoda esiin menetelmä uusien intermediääristen gangliosidien kaltaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jotka liittyvät edellä kuvattuihin erilaisiin lääkeopillisiin aihepiireihin.

5 Toinen tämän keksinnön tarkoitus on tuoda esiin keramidien kaltaisia yhdisteitä, jotka ovat välituotteita edellä mainittujen gangliosidien kaltaisten yhdisteiden synteesissä.

Keksintö koskee menetelmää gangliosidien kaltais-10 ten yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava

HO OH

^ -j COOM OH OH o 15 ff' o

OH HO ^OH OH OH

jossa M on alkalimetalli, jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava 20 • · / T COOCHj j—| o

AtOO^COMN—^-7· J V ° ^ D

25 jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja R5 on tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli, asety-loidaan, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava 30

*Λ_T C00CH3 f S

r~r^hn c*h* joka sitten hydrolysoidaan.

35 6 b 7 S 7 l

Keksintö koskee myös edellä esitetyssä menetelmässä käyttökelpoista yhdistettä, jolla on kaava _T cooch3 I o 5 'Τ'° OSiR3RHQf jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja R5 on 10 tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli.

Keksintö koskee edelleen menetelmää yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava

A—J C°°CH3 H O

15 ΊΓ'ΓΓΤ'Ρ1/ rX^« «.OCIVOHK-^/ h-s 0 .....

OSiQiWs jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja Rs on 20 tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli, jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava o

II

2 5 c*i jossa Rz on trityyli, saatetaan reagoimaan yhdisteen 30 kanssa, jolla on kaava J C00CH3 ......Γ~Ί 35 Ττ^Ι rC"° *3

AcOCH-COHN 5

^ NH

c r - — n 7 8 / ϋ i 1'

Keksintö koskee lisäksi yhdistettä, jolla on kaava o

II

5 <¥> cn*» jossa R2 on vety tai trityyli.

Esillä olevaa keksintöä kuvataan yksityiskohtai-10 sesti seuraavassa viitaten jäljempänä esitettyihin val-mistuskaavioihin I - V, joissa kemiallisissa kaavoissa T tarkoittaa 0C0CH3 ja T tarkoittaa OCH2C6H5.

1) Yhdisteen (1) valmistaminen

Yhdiste (1) valmistetaan seuraavan menetelmän mu-15 kaisesti: 0U

OH

COOH Ia) HO / / ' ; 20 HOCHzCONH-^OH^ vedetön metanoli OH Dowex 50-X(UH+)

J~ ---/^COOCHa (AO

25 HO / / HOCHzCONH-^OH^ .... .

vedetön pyriduni vedetön etikkahappo OAc

AcQs^-W * 0Ac . f ----A^COOCHa O)

AcO / /

AcOCHtCONH-^OAT ^

Tunnettu yhdiste (A) valmistetaan menetelmällä, 35 joka esitetään viitteessä Monats Chem. 97 (1966), 654 (viittaa vertailuesimerkkeihin 1 ja 2).

8 B 7 5 7 3 2) Yhdisteen (2) valmistaminen

Edellä esitetty yhdiste (1) lisätään ensin liuotti-meen, kuten asetyylikloridiin, ja vetykloridikaasua lisätään liuottimeen, jota samalla jäähdytetään jäällä. 24 tun-5 nin sekoituksen jälkeen näin saatu liuos väkevöidään alipaineessa ja jäännökseen lisätään liuotinta^esimerkiksi tolueenia. Saadulle liuokselle suoritetaan atseotrooppinen tislaus yhdisteen (2) valmistamiseksi.

3) Yhdisteiden (3) ja (4) valmistaminen 10 Yhdisteet (3) ja (4) valmistetaan antamalla edellä esitetyn yhdisteen (2) reagoida yhdisteen (B) kanssa alla esitetyissä reaktio-olosuhteissa.

Esimerkkejä katalysaattoreista ovat HgBr2, Hg(CN)2, AgClO^, AgCO^, AgOTf (jossa Tf tarkoittaa trifluorimetaani-15 sulfonihappoa, josta tästä eteenpäin käytetään samaa lyhennettä) ja hopeasilikaatti. Edullisesti katalysaattorina käytetään AgOTf tai seosta, jossa on HgBr^ ja Hg(CN)2 suhteessa, joka on välillä 1:3 - 1:1. Lisäksi liuottimena voidaan käyttää CH2C12, bentseeniä, tolueenia, kloroformia, 20 CH^CN, 0Η^Ν02 tai tetrahydrofuraania. Liuottimena on edullista käyttää CH2C12 tai tetrahydrofuraania.

Reaktio voidaan suorittaa lämpötilassa, joka on välillä -25°C - 90°C jäähdyttäen jäällä, mutta edullisesti huoneen lämpötilassa.

25 Reaktio suoritetaan käyttäen sekoitusta noin 30 mi nuutista 24 tuntiin. Edullisesti reaktioseosta sekoitetaan noin 24 tuntia.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella l ava Lla, kut en py 1 väskroinnlogi a f Laa käyttäen.

·': 30 4) Yhdisteiden (5) ja (6) valmistaminen

Yhdisteet (5) ja (6) saadaan asetyloimalla edellä esitetyt yhdisteet (3) ja (4), vastaavasti, alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Tässä reaktiossa voidaan käyttää reagenssina CH^COCl 35 tai Ac20, mutta Ac20 on edullinen.

9 87573

Liuottimena voidaan käyttää pyridiiniä, TEA, dikloo-rimetaania, dikloorietaania tai THF, ja on edullista lisätä reaktioseokseen katalyyttinen määrä pyridiiniin liuotettua dimetyyliaminopyridiiniä.

5 Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 100°C, mutta edullisesti se on noin 60°C.

Reaktio voidaan suorittaa sekoittaen 30 minuutista 24 tuntiin, edullisesti sekoittaen 24 tuntia.

5) Yhdisteiden (7) ja (8) valmistaminen 10 Yhdisteet (7) ja (8) saadaan antamalla edellä esi tettyjen yhdisteiden (5) ja (6), vastaavasti, reagoida alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Vctykehässä suoritettavassa reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina Pd-C, Pd(OH)2 tai Pt02 · Katalysaatto-15 rina voidaan käyttää myös pelkistintä, kuten HCOOH-MeOH, mutta edullisesti käytetään 10 % Pd-C.

Liuottimena voidaan käyttää metanolia, metanolin ja veden seosta, metanolin ja AcOH:n seosta tai AcOH, mutta edullisesti käytetään metanolia.

20 Reaktiolämpötila on jäähauteen lämpötilan ja noin 60°C:n välillä, mutta edullisesti se on huoneen lämpötila.

Reaktioaika on välillä noin 1-24 tuntia, mutta edullisesti se on 24 tuntia. Reaktio on edullista suorittaa sekoitusta käyttäen.

25 Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan suodattamalla.

6) Yhdisteiden (9) ja (10) valmistaminen

Yhdisteet (9) ja (10) saadaan asetyloimalla edellä esitetyt yhdisteet (7) ja (8), vastaavasti, alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

30 Tässä reaktiossa voidaan käyttää reagenssina CH^COCl tai Ac20, mutta Ac20 on edullinen.

Liuottimena voidaan käyttää pyridiiniä, TEA, di-kloorimetaania, dikloorietaania, DMF tai THF, kuitenkin on edullista lisätä reaktioliuokseen katalyyttinen määrä 35 pyridiiniin liuotettua dimetyyliaminopyridiiniä.

10 8 7 5 7 Z

Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 80°C, mutta se on edullisesti noin 60°C.

Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin 24 tuntiin, mutta se on edullisesti noin 24 tuntia. Reaktio-5 liuosta on edullista sekoittaa.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

7) Yhdisteiden (11) ja (12) valmistaminen

Yhdisteet (11) ja (12) saadaan deasetyloimalla edel-10 lä esitetyt yhdisteet (9) ja (10), vastaavasti, alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Tässä reaktiossa voidaan käyttää reagenssina nh2nh2acoh.

Liuottimena voidaan käyttää DMF:a.

15 Reaktiolämpötila on huoneen lämpötilan ja noin 80°C:n välillä, mutta se on edullisesti noin 60°C.

Reaktioaika voi vaihdella noin 5 minuutista noin yhteen tuntiin, mutta se on edullisesti 30 minuuttia. Reak-tioliuosta on edullista sekoittaa.

20 Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

8) Yhdisteiden (13) ja (14) valmistaminen

Yhdisteet (13) ja (14) saadaan antamalla edellä esitettyjen yhdisteiden (11) ja (12), vastaavasti, reagoida 25 Cl^CCNin kanssa alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina yhdisteitä CC13CN-DBU, CCl ^CN-NaH, CCl3CN-K2CC>3 tai CCl3CN-BuLi, mutta edullisesti käytetään CC13CN-DBU.

Liuottimena voidaan käyttää dikloorietaania, bentsee-30 niä, tolueenia, dikloorimetaania tai kloroformia, mutta edullisesti käytetään dikloorimetaania.

Reaktiolämpötila on noin -25°C:n ja 50°C:n välillä, mutta se on edullisesti noin 0°C.

Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin 35 12 tuntiin, mutta se on edullisesti noin 4 tuntia. Reaktio- liuosta on edullista sekoittaa.

11 87573 Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

9) Yhdisteiden (15) ja (16) valmistaminen

Yhdisteet (15) ja (16) saadaan antamalla edellä esi-5 tettyjen yhdisteiden (13) ja (14), vastaavasti, reagoida yhdisteen (C) kanssa alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina BF^ Et20, TMS-trifluorimetaanisulfonaattia, TiCl^, AlCl^ tai SnCl^, mutta edullisesti käytetään BF^ Et20.

10 Liuottimena voidaan käyttää CH2Cl2, C2H^Cl2, THF, bentseeniä, tolueenia, CH^CN, CH2NC>2 tai eetteriä, mutta edullisesti käytetään CH2C12·

Reaktiolämpötila on välillä noin -25°C - 60UC, mutta se on edullisesti jää-metanolihauteessa saavutettava lämpö- 15 tila.

Reaktioaika voi vaihdella noin yhdestä tunnista noin 24 tuntiin, mutta se on edullisesti noin 24 tuntia. Reaktio-liuosta on edullista sekoittaa.

10) Yhdisteiden (17) ja (18) valmistaminen 20 Yhdisteet (17) ja (18) saadaan antamalla edellä esi tettyjen yhdisteiden (15) ja (16), vastaavasti, reagoida alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina Bu^NF tai HF, mutta on edullista käyttää Bu^NF.

25 Liuottimena voidaan käyttää THF, CH^CN, CH^NC^,

EtoAc, CH2C12, CHCl^f DMF, eetteriä, bentseeniä tai tolueenia, mutta on edullista käyttää THF:a.

Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 50°C, mutta edullisesti se on huoneen lämpötila.

30 Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin 48 tuntiin, ja reaktio on edullista suorittaa sekoittaen noin 48 tuntia.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

i2 87573 11) Asetylointi yhdisteiden (17) ja (18) valmistamiseksi

Yhdisteet (17) ja (18) saadaan antamalla edellä esitettyjen yhdisteiden (15) ja (16), vastaavasti reagoida alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

5 Tässä reaktiossa voidaan käyttää reagenssina CH^COCl tai AC2O, mutta AC2O on edullinen.

Liuottimena voidaan käyttää pyridiiniä, TEA tai dimetyyliaminopyridiiniä, mutta on edullista lisätä reak-tioliuokseen katalyyttinen määrä pyridiiniin liuotettua 10 dimetyyliaminopyridiiniä.

Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 80°C, mutta edullisesti se on noin 60°C.

Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin 24 tuntiin, mutta reaktio on edullista suorittaa sekoit-15 taen noin kuusi tuntia.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

12) Yhdisteiden (19) ja (20) valmistaminen

Yhdisteet (19) ja (20) saadaan deasetyloimalla edellä 20 esitetyt yhdisteet (17) ja (18), vastaavasti, alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

Tässä reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina NaH-MeOH, f^CC^-MeOH, TEA-MeOH, KOH-MeOH tai NaOH-MeOH,

' : : mutta edullisesti käytetään NaOCH^ ja edullisemmin 0,1 N

25 NaOCH3-

Liuottimena voidaan käyttää metanolia, etanolia, :";"· propanolia, THF tai dioksaania, mutta on edullista käyttää metanolia.

.·. ; Reaktiolämpötila välillä noin -10°C - 50°C, mutta 30 edullisesti se on huoneen lämpötila.

Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin . . 24 tuntiin, mutta reaktio on edullista suorittaa sekoit- ; taen noin kuusi tuntia.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella - - 35 tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen sen jälkeen, kun se on neutraloitu.

13 87573 13) Hydrolysointi yhdisteiden (19) ja (20) valmistamiseksi Yhdisteet (19) ja (20) saadaan hydrolysoimalla edellä esitetyt yhdisteet (17) ja (18), vastaavasti, alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

5 Reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina NaOH, KOH tai LiOH, mutta on edullista käyttää NaOH.

Liuottimena voidaan käyttää MeOH-THF, MeOH-dioksaa-ni-etanoli-THF, etanoli-dioksaania, propanoli-dioksaania tai propanoli-THF ja on edullista käyttää MeOH-THF.

10 Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 50°C, mutta edullisesti se on huoneen lämpötila.

Reaktioaika voi vaihdella noin 30 minuutista noin 24 tuntiin, mutta se on edullisesti noin 24 tuntia. Reak-tioliuosta on edullista sekoittaa.

15 Lähtöraaka-aine keramidien kaltaisille yhdisteille, jotka ovat välituotteita tämän keksinnön mukaisille gangliosidien kaltaisille yhdisteille, on edellä esitetty yhdiste (23). Keramidien kaltaiset yhdisteet voidaan saada seuraavassa esitettyjen vaiheiden mukaisesti.

20 1) Yhdisteen (1) valmistaminen, jolla on seuraava kaava o HN C a sH 41 25 TrO Cl 3Hai 0SiRoR.Rc 3 4 5 (jossa R^, R4 ja R,. kukin ovat niin kuin edellä on määritelty) 30 Yhdisteet (23), (25) ja (27) saadaan yhdisteestä (22) alla annetuissa reaktio-olosuhteissa.

'_· Reaktiossa voidaan käyttää reagenssina Ph2+BuSiCl,

Ph2(CMe2Ph)SiCl tai Me2(CMePH)SiCl. Kukin reaktio suoritetaan edullisesti kloorin ja esim. imidatsolin läsnä . ’. 35 ollessa.

i4 87 573

Liuottimena voidaan käyttää dimetyyliformamidia (DMF), tetrahydrofuraania (THF), kloroformia, pyridiiniä tai kollidiinia, mutta on edullista käyttää DMF.

Reaktiolämpötila on välillä noin 0°c - 100°C, mutta 5 edullisesti se on huoneen lämpötilan ja 40°C:n välillä.

Reaktioaika on välillä noin yhdestä tunnista kahteen päivään, ja se on edullisesti yhdestä kahteen päivää. Reak-tioliuosta on edullista sekoittaa.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella 10 tavalla,kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

2) Yhdisteiden (24), (26) ja (28) valmistaminen, joilla on seuraava kaava c

SS

HO C13 H 2 7 OS1R1R2R3 20 (jossa R^, R2 ja R3 ovat kuten edellä on määritelty)

Kussakin reaktiossa voidaan käyttää katalysaattorina tolueenisulfonihappoa (lyhennetään tästä lähtien TsOH), CF^COOH, CH^COOH (lyhennetään tästä lähtien AcOH), HCOOH tai HC1, mutta on edullista käyttää TsOH.

25 Liuottimena voidaan käyttää MeOH-CH2Cl2f MeOH- : C2H4C12, CHCl3-MeOH, AcOH-MeOH, THF-MeOH, dioksaani-MeOH,

AcOH:n vesiliuosta, THF:n vesiliuosta tai dioksaanin vesi-liuosta, mutta edullisesti käytetään MeOH-Ci^C^· ; Reaktiolämpötila on välillä noin 0°C - 80°C, mutta 30 se on edullisesti huoneen lämpötila.

Reaktioaika voi olla noin 30 minuutista yhteen päivään, mutta se on edullisesti 1-6 tuntia. Reaktioliuosta on edullista sekoittaa.

Näin saatu reaktiotuote puhdistetaan tavanomaisella 35 tavalla, kuten pylväskromatografiaa käyttäen.

I5 87573· Γ~7 = ^ _ <u u o f Ϊ o

K

n ®

U

o

. O ^ CJ

“^S 5 o / <u h 3L__y j I ftV· * s T" i ' a

Sf o <e o (0 <

X

: · I

<=»j

CJ

* ... « ' . u n o K u : u

OK O V

υ u ~i~7 s I * ν' u o u < ie ; 87 573 /-Χ

S

o^C° °Γ7 - / f o = \i

f § S

^7, ? / V -

* I

0 0-0 o y-f r. o-^_ f ^ s $.

X I

S <" *" \ A° i 1 ,1 7 f' 3 ^ vT") s 1 \~* 5 * H i "f? i

: :": / ΐ £ ä / S

- - / — >i a; ns -3. r—- \ /1,__ 3 a > a S? \ Λ ' «A-2 s' ~~· k

: '' ^7 / ® ν' \ R

/ 3 X / - - : : A \ r. S ' s ' \\i o >,/ υ s \ -h υ § 3 : : U-X ξ ; 71 -“- ) A Rn - - u o υ < 17 87573 «n u >

\ V

L·. ! i o j cl j s M ^ « ® CQ / \ i r)! ιΠ * 3 Hs ΐΊηΙ : : y° s s s f—Λ

-|i M

o \ — < O o o 9 <0 u C -u “t7 f : »-γίΑ ) S«J g" -h » (d 9 Ό *IJ( ° •H <u a: 9 M Ό -H *>·

>i (D-W

α > φ is 87573 r-

f*' (N

*· X

X m

Cn rH

<n cj U \

—/ G

° s > o = <\ S z °\J / .

r~ <n (n / Γ" K ui

» S Λ / \ O -H

X en CL, p--—\ Ό n rH 3 \ Λ tN u OQ \ \ >1 U -P \ O l" V t ° * Λ P- B* °=^\ \—o / * sT 2

2muii< t__ — nU

c° SA /§ I °=\ S

G7 fir. i «".....> = f-f i · ‘ v-f ; = fr i i r ϊ s ^!srn * i-r! S \ £ K 8 *7 Lx % • o o _ k / ό : 8~f^ la f ‘ / tn * 3 £ί3 f—Λ s ss \—r-^\ z >1 "S +· 9 / \ /(N °tN \ --\

O' * f~~V--—\ X

esi ΓΗ o 1 i 1—»_I X

- · -P ·»> υ \ ' 9 ω„-< \ 8n S SI , r 3

p~ O

<N y X < s -

S /υ *? H

s .

M / O -p s··-/ s -2 >·§ s ·· / >1 \

X

O

19 o '/ ι; ; 7 υ / j / 6 r- r- r- f" ™ ^ * as s * 2 rvj m n cn m r Γ1 -N ~ (NrH cn ^ S3 cnU £ UU £ -U O U \ % d \ is S="x" / \ s

/ J ~u % o=/ S

°=\ < a 2 \ V—s a \ /-o .S gm,„/ s Ό \ >1 / >1 / / o

EC

O

)-i

Eh /N ^ v ^ V£5 U - ™ “ * $ 2 *JW " “

° ^ ^ 1 -O

s a £ „ s.

w <N £ S £ Ξ ς: *„ λ s - > J* SB ~ ft 35 2 ft £ ™ £ 0 ^rHfNO) SUa «=^K P ^ S*

h J'1 u ~ fa a u \ suo / .r* S

1 -( LII -< λ.....; f 3 ) / \ < / α o /

> ο ·Η )-ι O

μ « Eh EC

^ \ 2 \ ft

\ fc <N

-yp \S <u JT \Q s

o \ H

* \ CN „ u \ 0) f" 00 V £ J'* - cn

•H \ |B ro CU

•5 υ \ 5 UH «” 5 3 έί V ,υ X § 3 ΐ J } * Λ g a °=A \ .¾ u o f.

\ V^_ ,7J cm cn r- «n V \ 35 55 t— <m

"* s Swim < ° \ U U *r EC

®ro ^ \ \ 35 m x: ΓΟΉ-^ , \ ΟΊι-Hft ™ U Ή / \ <N <J ™ J > \ h V } i § ΐ } /"H2 * \ £ £ ac"“"\ o / Ό /

O £, O

EC ^ EC

/' r? r7 20 υ / S / ?

Gangliosidien kaltaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä merkkiaineina syövän aikaiseksi toteamiseksi ja syövän immu-noterapiassa.

Lisäksi keramidien kaltaisia yhdisteitä käytetään edul-5 lisesti keramidiosien syntetisoimisessa, kun syntetisoidaan glykolipidejä ja edellä esitettyjä gangliosidien kaltaisia yhdisteitä, jotka ovat hyödyllisiä tuumorin merkkiaineina.

Tätä keksintöä kuvataan seuraavassa yksityiskohtaisesti vertailuesimerkkien ja esimerkkien avulla.

10 Vertailuesimerkki 1 Cyhdisteen (A1) valmistaminen yhdisteestä (A)7

Metyyli-5-N-glykolyyli-3,5-dideoksi-g-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosonaatin valmistaminen 75 ml vedetöntä metanolia ja 1,12 g Dowex 50W-X8 (H+):a lisättiin 1,12 g:aan (3,4431 mmol) N-glykolyylineuramiinihap-poa (NGNA), ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Koska NGNAra jäi ja reaktio ei kulkenut loppuun, reaktioliuokseen lisättiin vielä 150 ml vedetöntä metanolia ja 2 g Dowex 50W-X8 (H+):a, ja kun seosta sekoitettiin 20 huoneen lämpötilassa neljä tuntia, NGNA liukeni oleellisesti. Reaktioliuos suodatettiin ja hartsi pestiin metanolilla.

• · Suodos ja pesuliuos yhdistettiin ja saatu seos tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin 1,08 g värittömiä, amorfisia kiteitä (saanto 92 %).

25 Kiteet uudelleenkiteytettiin metanolista.

(Yhdisteen (A') fysikaalisia ominaisuuksia)

Sulamispiste 170-173°C

IRvKBr cm-1 : 3400 (-OH, -NH) , max 1745 (-COOCH3), 30 1645 (-CONH-), 1550 (-CONH-, amidi II) ^ U—lSjMpPP^ 400 MHz <™S0-d6 ♦ D20. TMS) 21 8 7 573 1,721 (1H, t, J3ax 3eg=12,7 Hz, J3ax 4 = 11 7 H2' H3ax^ 2,050 (1H, dd, J3ax 3eq®12,7 Hz, J3eq 4"4,9 Hz, H, ) 5 3eq' 3,217 (1H, dd, J? g = 9,3 Hz, Jg ?=1,0 Hz, H-7) 3,312 (1H, dd, Jg g'=lly2 Hz, Jg g'=6,8 Hz, -H-9') 10 3 ;502 UH, ddd, J? g = 9,3 Hz, Jg g*=6, 4 Hz, Jg g = 2,5 Hz, H-8) 3,518-3,671 (2H, m, H-9, H-5) 3,714 (3H, s, -COOCHg) 15 3,845-3,932 (3H, m, HOCHj-CONH-, H-6)

H

3,865 ( 1H, d, J=16, 1 Hz, HOCH-CO-)

H

20 3,911 (1H, d, J=16,1 Hz, HOCH-CO-) 4,034 ( 1H, ddd, J3aj£ 4 = 11,7 Hz, J4 5=10y7 Hz, J3eq 4=4 9 Hz' H'4> 7,813 (1H, d, J=8,8 Hz, -CONH-) 2 5

Alkuaineanalyysi C_H_.NO 7/10H_O

12 21 -jo 2 molekyylipaino 351,92 (339,31)

Laskettu arvo: C 40,96 H 6,42 N 3,98

Mitattu arvo: C 40,89 H 6,27 N 3,88 30 Vertailuesimerkki 2 [yhdisteen (1) valmistaminen

; yhdisteestä (A1 )J

Metyyli-5-N-asetoksiasetyyli-2,4,7,8-penta-O-asetyyli-a-6-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosonaatin valmistaminen ja puhdistaminen 35 1,05 g (3,0945 mmol) metyyli-5-N-glykolyyli-,3,5- dideoksi-8-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosaattia liuotettiin 15 ml:aan vedetöntä pyridiiniä ja sitten lisättiin 10 ml 22 87573 vedetöntä etikkahappoa liuoksen aikaan saamiseksi ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 42 tuntia. Reaktioliuos tislattiin alipaineessa ja sitten jäännökseen lisättiin tolueenia. Saadulle seokselle suoritettiin 5 atseotrooppinen tislaus (5 kertaa) , kunnes vedettömän etik-kahapon hajua ei enää muodostunut, jolloin saatiin 1,846 g amorfisia kiteitä. Kolonni täytettiin 185 g:lla silikagee-liä, joka oli aikaisemmin suspendoitu kloroformiin, ja 1,846 g amorfisia kiteitä liuotettiin kloroformiin ja sen 10 jälkeen lisättiin kolonniin. Kehitys suoritettiin käyttäen kehitysliuoksena kloroformin ja metanolin seosta (50:1) siten, että fraktiot kerättiin talteen. Eluaattia kerättiin noin 15 ml kerrallaan ja kukin fraktioliuoksista analysoitiin ohutkerroskromatografiällä niin, että vain ne fraktio-15 liuokset, joissa oli haluttua yhdistettä, otettiin talteen. Liuotin tislattiin pois ja jäännös liuotettiin veteen ja lyofilisoitiin ja sitten kuivattiin alipaineessa (P2O,-) , jolloin saatiin 445 mg a-ainetta, 518 mg (3-ainetta ja 688 mg αβ-seosta kokonaismäärän ollessa 1 ,651 g (teoreettinen saan-20 to 1,83 g; saanto 90,2 %).

. (α-aineen fysikaalisia ominaisuuksia) ! ] Sulamispiste 74-78°C.

: Alkuaineanalyysi C24H33N016 2/5H2° ::: molekyylipaino 598,74 (591,54) 25 Laskettu arvo: C 48,14 H 5,69 N 2,34

Mitattu arvo: C 48,12 H 5,57 N 2,38 IR \PKBr cm-1 : 3420 (-NH) , 1750 (-COOCH3) ,

max J

1690 (-C0NH-) 1540 (-C0NH-, amidi II) 30 iH-NMRPP111 (CDCI3, TMS) 400 MHz 23 97573 1h-NMR400 Mh!CDC13· ™S> 2,024 (3H, s, -OCOCH3) 2,039 (3H, s, -OCOCH3) 5 2,109 (3H, s, -OCOCH3) 2,111 (3H, s, -OCOCH3) 2,130 (3H, s, -OCOCH3) 2,182 (3H, s, -OCOCH3) 10 2>078 (H3ax} 2,571 (1H, dd, J=13,0 Hz, J=4,8 Hz, <*~H3eq) 3,768 (3H, s, -COOCH3) 4,163 (1H, dd, J=12,3 Hz, J = 6,0 Hz, H-9') 15 4,175 (1H, ddd, J=10,6 Hz, J=10,4 Hz, J=10,0 Hz, H-5 )

H

4,320 (1H, d, J=15,2 Hz, -CH-) -V: 20 4,370 (1H, dd, J=12,3 Hz, J=2,5 Hz, H-9)

- H

: .·. I

4,588 (1H, d, J=15,2 Hz, -CH-) 4, 787 ( 1H, dd, J=10,6 Hz, J = 2,3 Hz, H-6) 25 5,076 (1H, ddd, J=ll,8 Hz, J=10,4 Hz, J=4,8 Hz, H-4 ) 5,204 (1H, ddd, J=6,4 Hz, J=6,0 Hz, J=2,5 Hz, H-8) 5,334 (1H, dd, J=6,4 Hz, J=2,3 Hz, H-7) : ’ 3 0 6,,197 (1H, d, J = 10,0 Hz, -CONH-) 24 87 573 (β-aineen fysikaalisia ominaisuuksia)

Sulamispiste: 80 - 86°C

Alkuaineanalyysi C24H33N016 7/10H2O

molekyylipaino 604,15 (591,54)

Laskettu arvo: C 47,71 H 5,74 N 2,32

Mitattu arvo: C 46,66 H 5,43 N 2,35 5

IR ^ KBr cm-l . 3400 (_NH), 1750 (-COOCHo), max J

1700 (-CONH-) 1530 (-C0NH-, amidi II) 1h-nmrPP0"MHz(cdci3, TMS) 2,023 (3H, s, -0C0CH.) 2,043 (3H, s, -OCOCH3) 2,072 (3H, s, -OCOCH3) 2,145 (3H, s, -OCOCH3) 15 2,168 (3H, s. -OCOCH3) 2,201 (3H, s, -OCOCH3) 2,102 (1H, dd, J=13,4 Hz, J=ll,4 Hz,/3-H3ax) 2, 558 (1H, dd, 1 = 13,4 Hz, J=4,7 Hz, /3-H3eq)

3,799 (3H, s, -COOCH-J

20 r V 4,103 (1H, ddd, J=10,8 Hz, J=10,2 Hz, J = 9, 5 Hz, ‘•'f H-5) “V 4,125 (1H, dd, J=12,3 Hz, J=6,7 Hz, H-9') : - 25 4,188 (1H, dd, J = 10,8 Hz, J = 2,2 Hz, H-6) 4,302 ( 1H, d, J=15,3 Hz, -CH-) 4,490 (1H, dd, J=12,3 Hz, J=2,5 Hz, H-9) 30

• H

: I

4^614 (1H, d, J=15,3 Hz, -CH-) 5,080 (1H, ddd, J=5,l Hz, J=6,7 Hz, J=2,5 Hz, H-8 ) 25 87573 5,316 (1H, dd, J = 5,l Hz, J=2,2 Hz, H-7) 5, 332 ( 1H, ddd, J=ll,4 Hz, J=10,2 Hz, J = 4, 7 Hz, H-4) 5 5,981 (1H, d, J=9j 5 Hz, -CONH-)

Vertailuesimerkki 3 [.yhdisteen (2) valmistaminen yhdisteestä (1)3

Lisättiin 50 ml asetyylikloridia 340 mg:aan (0,54 mmol) yhdistettä (1) ja HCl-kaasua lisättiin seokseen, jota sit-^ ten sekoitettiin yön yli. Sen jälkeen lisättiin tolueenia reaktioliuokseen, joka sitten tislattiin (atseotrooppinen tislaus).

(Fysikaalisia ominaisuuksia) 15 Olo1 “56,6° C = 0,79 CHCl3 300 mg (97%)

Rf = 0,46 (tolueeni : etyyliasetaatti =1:2)

NMR: 400 MHz, CDC13, & (ppm), TMS

S 2,039, 2,062, 2,095, 2,123, 2,210 (s, OCOCHj, x5) 20 2,796 (1H, dd, J=4,6, 13,9 Hz, H-3eq) V 3, 888 (3H, s, -OCH3) 4,074 (1H, dd. J=5,9, 12,5 Hz, H-9) 4,213 (td, J=10,2, 10,5 Hz, H-5) 25 4,312 (d, J=15,3, -CH2OCO) 4,414 (1H, t, J*2,9, H-6) 4,443 (1H, dd, J=2,7, 5,4 Hz, H-9) 3Q 4,629 (1H, d, J=15,3 Hz, -CH2OCO-) 5,182 (td, J=2,4, 10,0 Hz, H-8) 5,431 (1H, dd, J=2,2, 6,8 Hz, H-7) 5,469 (1H, m, H-4) 35 6, 068 (d, J = 10,0 Hz, NH) 26 87 573

Vertailuesimerkki 4 [yhdisteiden (3) ja (4) valmistaminen yhdisteestä (2jj A) 1,4 g (1,6 mmol) yhdistettä (B), 1,125 g (4,5 mmol) Hg(CN>2, 540 mg (1,5 mmol) HgBr2 ja 2 ml dikloo-5 rietaania lisättiin 1,5 g:aan aktivoituja molekyyliseuloja 4A, ja saatua seosta sekoitettiin tunnin ajan. Sitten lisättiin 500 mg (0,8 mmol) yhdistettä (2), joka oli liuotettu 4 ml:aan dikloorietaania jää-MeOH-hauteessa, reaktioseok-seen, jota sitten sekoitettiin yön yli. Sen jälkeen, kun 10 reaktioliuosta oli sekoitettu 70°C:ssa päivän ajan, se suodatettiin käyttäen piimaata ja suodokseen lisättiin etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros pestiin NalICO^:n vesiliuoksella, vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^illa ja sen jälkeen tislattiin. Jäännös puhdis-15 tettiin pylväskromatografisesti (C-300, 80 g; tolueeni : etyyliasetaatti = 2 : 1 ja sen jälkeen 1 : 2), jolloin saatiin 195,8 g yhdistettä (3) (saanto 17,3 %) ja 81 mg yhdistettä (4) saanto 7,2 %).

B) 3 g (3,4 mmol) yhdistettä (B), 750 mg (3 mmol) 20 Hg(CN)2# 1,08 g (3 mmol) HgBr2 ja 5 ml dikloorietaania lisättiin 3 g:aan aktivoituja molekyyliseuloja 4A ja saatua seosta sekoitettiin tunnin ajan. Sitten lisättiin 1 g (1,6 mmol) yhdistettä (2), joka oli liuotettu 7 ml:aan dikloorietaania jää-MeOH-hauteessa, seokseen, jota sitten sekoitet-25 tiin yön yli. Sen jälkeen, kun reaktioliuosta oli sekoitettu 70°C:ssa päivän ajan, se suodatettiin käyttäen piimaata ja suodokseen lisättiin etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros pestiin NaHCO^in vesiliuoksella, vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla ja sen jälkeen • ' 30 tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300, 200 g; tolueeni : etyyliasetaatti = 2 : 1 ja sen jälkeen 1:2), jolloin saatiin 408 mg yhdistettä (3) (saanto 18,1 %) ja 165 mg yhdistettä (4) (saanto 7,3 %).

C) 755 mg (1 mmol) yhdistettä (B), joka oli liuotet-35 tu 2,5 rahaan TIlLha, ja 144 nig (0,55 mmol) AgOTf lisättiin 27 87573 1 g:aan aktivoituja molekyyliseuloja 4A, ja seosta sekoitettiin lämpötilassa -10°C 30 minuuttia. Sitten lisättiin 300 mg (527 mol) yhdistettä (2), joka oli liuotettu 2,5 ml:aan THF:a, seokseen, jota sitten sekoitettiin huoneen 5 lämpötilassa yön yli. Sen jälkeen, kun reaktioliuosta oli sekoitettu 70°C:ssa päivän ajan, se suodatettiin käyttäen piimaata ja suodokseen lisättiin etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros pestiin NaHCO^n vesiliuoksella, vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla 10 ja sen jälkeen tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskro-matografisesti (C-300, 50 g; tolueeni : etyyliasetaatti = 2 : 1 ja sen jälkeen 1:2), jolloin saatiin 23,8 mg yhdistettä (3) saanto 3,5 %) ja 26,7 mg yhdistettä (4) saanto 3,9 %).

15 (Fysikaalisia ominaisuuksia)

Yhdiste (3)

Rf = 0,574 (tolueeni : etyyliasetaatti =1:2) K]D23 -3,57° (C = 1,10, CHC13)

Alkuaineanalyysi 20 Teoreettinen arvo C 64,53 H 6,20 N 0,99

Mitattu arvo C 64,48 H 6,13 NO,72 NMR: 400 MHz ppm (TMS) 1,913, 1,966, 2,044, 2,103, 2,183 (s, OCOCH3 X 5) 2,555 (1H, dd, J=4,6, 13,4 Hz, H-3c) 25 3,618 (S, OCH3) 5,259 (1H, td, J=2,4, 8,7 Hz, H-8c) 'V: 5,297 (1H, t, J=2,4 Hz) 5,333 (1H, ddd, J=4,6, 10,9, 10,9 Hz, H-4c) 5,585 (1H, d, J=10,2, NH) 30 7,21-7,37 (30H, m, bentsyyliryhmä x 6) 13C NMR CDCI3 ppm 99,69 (C—2c), 102,29 (C-la), 102,40 (C-lb)

Yhdiste (4)

Rf = 0,479 (tolueeni : etyyliasetaatti =1:2) jr> [ck] d23 -7,12° (C = 1,25, CIICI3) 28 87573

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 64,53 H 6,20 N 0,99

Mitattu arvo C 64,15 H 6,26 N 1,02 NMR: 400 MHz ppm (TMS) 5 1,883, 1,984, 2,001, 2,100, 2,189 (s, OCOCH3 X 5) 2,521 (1H, dd, J=4,6, 13,1 Hz, H-3ceq) 3,774 (1H, m, -OCH3) 4,20 (1H, m, H-4c) 5,261 (1H, dd, J=l,7, 8,0 Hz, H-7) 10 5,416 (1H, m, H-8) 5,808 (1H, d, J=9,7, NH) 7,20-7,40 (30H, m, bentsyyliryhmä x 6) 13C NMR 22,5 MHz CDCI3 ppm 99,69 (C-2c), 103,75 (C-la), 103,91 (C-lb) H» 15 Vertailuesimerkki 5 (yhdisteen (5) valmistaminen yhdisteestä (3)^ 5 ml pyridiiniä ja 5 ml vedetöntä etikkahappoa lisättiin 144 mg:aan (101,8 pmol) yhdistettä (3) ja seosta sekoitettiin lämpötilassa 60°C yön yli. Reaktioliuos kui-20 vattiin sellaisenaan.

148 mg (99,8%) ^ Rf = 0,397 (tolueeni : etyyliasetaatti =1:1) [c*]D24 "13,30° (C = 1,0, CHCI3) • · Alkuaineanalyysi 25 Teoreettinen arvo C 64,32 H 6,16 NO,96

Mitattu arvo C 64,66 H 6,17 N 1,09 iH NMR 400 MHz ppm CDCI3 (TMS) 1,819, 1,962, 2,034, 2,106, 2,143, 2,169 (s, OCOCH3 X 6) 30 2,571 (1H, dd, J=4,6, 13,1 Hz, H-3ceq) 3,444 (3H, s, OCH3) 4,095 (1H, td, J=10,5, 10,5 Hz) : 5,101 (1H, m, H-4c) 5,378 (1H, d, J=3,2 Hz, H-4b) 35 7,23-7,38 (30H, m, bentsoyyliryhmä x 6) 13C NMR ppm CDCI3 99,25 (C-2c), 101,86 (C-la), 102,34 (C-lb) 29 87573

Vertailuesimerkki 6 [yhdisteen (7) valmistaminen yhdisteestä (5 390 mg (267,7 pmol) yhdistettä (5) liuotettiin 50 ml:aan metanolia, metanoliliuokseen lisättiin 200 mg 5 10 % Pd-C200 ja saadulle seokselle suoritettiin katalyyt tinen pelkistys huoneen lämpötilassa yön aikana. Reaktio-liuos suodatettiin käyttäen piimaata ja sen jälkeen se kuivattiin 232 mg (94,7%) 10 Rf = 0,632 (BuOH : EtOH : H20 = 2:1:1) [</] D24 +20,32' (C = 1,08, metanoli)

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 47,22 H 5,83 N 1,53

Mitattu arvo C 47,25 H 5,77 N 1,78 15 Vertailuesimerkki 7 ^yhdisteen (9) valmistaminen yhdisteestä (7)3 8 ml pyridiiniä ja 8 ml vedetöntä etikkahappoa lisättiin 220 mg:aan (240,2 pmol) yhdistettä (7) ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme päivää. Reaktioliuos 20 tislattiin, ja jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300 , 20 g tolueeni : etyyliasetaatti = 1 : 5) .

247 mg (88%)

Rf = 0,833 (CHCI3 : MeOH =10 : 0,5) [oOd24 +12/43° (c = l-'0' chc13) 25 Alkuaineanalyysi ; ·· Teoreettinen arvo C 49,63 H 5,61 N 1,20 V; Mitattu arvo C 49,94 H 5,61 N 1,20

Vertailuesimerkki 8 ^yhdisteen (11) valmistaminen yhdisteestä (9)3 30 220 mg (188 pmol) yhdistettä (9) liuotettiin 2 ml:aan DMF:a, saatuun liuokseen lisättiin 24 mg (240 pmol) H2NNH2 AcOH ja saatua seosta sekoitettiin 60°C:n lämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioliuokseen lisättiin etyyliasetaattia, ja orgaaninen kerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolave-35 dellä, kuivattiin vedettömällä MqSO^lla ja sen jälkeen tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300, 20 g; asetoni : CCl^ 1:2).

30 87573 144 mg (68%)

Rf = 0,58 (asetoni : CC14 =1:1) [σ(]023 +17,40° (C = 0,52, CHC13)

Alkuaineanalyysi 5 Teoreettinen arvo C 49,07 H 5,64 N 1,24

Mitattu arvo C 48,88 H 5,67 N 1,44

Vertailuesimerkki 9 ^yhdisteen (13) valmistaminen yhdisteestä (11)3 140 mg (124 umol) yhdistettä (11) liuotettiin yhteen 10 ml:aan dikloorimetaania, saatuun liuokseen lisättiin 358 jal (3,57 mmol) Cl^CCN ja 18 μΐ (0,126 mmol) DBU lämpötilassa 0°C, ja saatua seosta sekoitettiin sellaisenaan neljä tuntia. Reaktioliuos puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300, 18 g; asetoni : CC1^ =1 : 2).

15 120 mg (76 %)

Rf = 0,367 (asetoni : CC14 =1:2) [<*]D24 +26,98° (C = 0,825, CHCI3)

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 45,35 H 5,07 N 2,20 20 Mitattu arvo C 45,61 H 5,04 N 2,30 1H NMR CDCI3 PPm ™s 1^ 982, 2,017, 2 ,043, 2,061. 2,062, 2,069, 2, 083, 25 2,117, 2,152, 2,185, 2,304 (s, OCOCH-j x 11) 1 777 (1H, t, J=12,2 Hz, H-3cax) 2,436 (1H, dd, J=4,6, 13,4 Hz, H-3ceq) 3,840 (s, OCH3) 30 4,349 (1H, d, J=15,6 Hz, AcOCH^CO-) 4,601 (1H, d, J=15,3 Hz, AcOCHj—CO-) 5,043 (1H, m, H-4c) 5^ 297 ( 1H, d, J = 2,9 Hz, H-4b) 31 87573 5,533 (1H, t, J=9,7 Hz, H-3a) 6,313 (1H, d, J=10, 2 Hz, NH) 6,474 (1H, d, J=3,6 Hz, H-la ) 5 13C NMR CDC13 ppm 93,19 (C-la), 99,63 (C-2c), 101jl5 (C-lb)

Vertailuesimerkki 10 ^yhdisteen (15) valmistaminen yhdisteestä (13)^, 100 mg (78,6 pmol) yhdistettä (13) ja 70 mg 10 (78,8 μιηοΐ) yhdistettä (C) , joka oli liuotettu 3 ml:aan dikloorimetaania, lisättiin 1,5 g:aan aktivoituja molekyyli-seuloja AW-300, saatuun seokseen lisättiin jää-MeOH-hau-teessa 15 μΐ (124 pmol) BF^ Et2° 3a saatua seosta sekoitettiin sellaisenaan yön yli. Reaktioseos suodatettiin käyt-15 täen piimaata, tislattiin ja sitten se puhdistettiin pylväs-kromatografisesti (C-300, 25 g; tolueeni : etyyliasetaatti = 1:1).

90,6 mg (58%)

Rf = 0,229 (tolueeni : etyyliasetaatti = l : l) 20 [<<]D24 "11,86* (C = 0,42, CHC13)

XH NMR CDCI3 ppm TMS

0,881 (6H, t, J=7,0 Hz, -CH2CH3) 0,997 (9H, S, -CH3 X 3) 1,251 (S, -CH2-) 25 1,960, 1,981, 2,032, 2,042, 2,052, 2,060, 2,070, 2,088, 2,150, 2,181, 2,302, (s, OCOCH3 X 11) 2,434 (1H, dd, J=4,6, 13,4 Hz, H-4ceq) 3,841 (3H, s, OCH3) 4,350 (1H, d, J=15,3 Hz) 30 4,598 (1H, d, J=15,3 Hz, -OCH2CONH) 5,041 (1H, m, H-4c) 5,291 (1H, d, J=2,5 Hz) 7,31-7,40 (6H, m, aromaattinen protoni) 7,61-7,76 (4H, m, aromaattinen protoni) 32 87573

Vertailuesimerkki 11 [yhdisteen (17) valmistaminen yhdisteestä (15),3 20 mg (10 μιηοΐ) yhdistettä (15) liuotettiin yhteen ml:aan THF:a, saatuun liuokseen lisättiin 11,2 μΐ (11 umol) 5 BU^NF ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan. 39,7 Jag (39 pmol) BU^NF lisättiin saatuun seokseen, jota sen jälkeen sekoitettiin kaksi päivää. Reak-tioliuos tislattiin ja jäännökseen lisättiin yksi ml pyri-diiniä ja yksi ml vedetöntä etikkahappoa ja saatua seosta 10 sekoitettiin 60°C:n lämpötilassa kuusi tuntia. Reaktioliuos tislattiin ja puhdistettiin pylväskromatografisesti (0300, 3 g; CHC13 : MeOH - 10 : 0,2).

17 mg (94%)

Rf = 0,70 (CHC13 : MeOH = 10 : 0,25) 15 [*]D27 -5,33* (C = 0,90, CHCI3)

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo (IH2O) C 59,45 H 8,21 N 1,54

Mitattu arvo C 59,05 H 7,95 N 1,72 1H NMR CDC13 ppm TMS 4 00 Mil/ on 0,880 {6H, t, J = 6,5 Hz, -CH2CH3 x 2) ;.V 1,252 (s, -CH2 x 32) /; 1,771 (1H, t, J=12,2 Hz, H-3cex) 1,981, 2,004, 2y040, 2 042, 2.053, 2 060, 2,066, 25 * / 9 9 2,086, 2,150, 2,159, 2,222, 2,295 (s, OCOCH3 x * Γ: 12) 2,438 (1H, dd, J=4, 6, 12,1 Hz, H-3ceq) 30 3,840 (3H, s, 0¾) 4,349 (1H, d, J=15,6 Hz, -OCH^ CONH)

Esimerkki 1 ["yhdisteen (19) valmistaminen yhdisteestä (17)7 16 mg (8,3 umol) yhdistettä (17) liuotettiin 1,5 mitään r metanolia, saatuun liuokseen lisättiin yksi ml 0,1 M NaOCH3 35 ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kuusi 33 87573 tuntia. Reaktioliuos kuivattiin, jäännökseen lisättiin yksi ml MeOH, yksi ml THF ja 0,5 ml H20 ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseos neutraloitiin Amberlite IRC-50:llä, se suodatettiin ja sen 5 jälkeen puhdistettiin Sephadex LH-20:llä (eluoitiin seoksella CHC13 : MeOH : H20 =5:3: 0,46).

10,8 mg (94%)

Rf = 0,25 (BuOH : EtOH : H20 =2:1:1) (c<]d26 -7,60 (C = 0,50, CHC13 : MeOH =1:1) 1° NMR 400 MHz d6-DMSO-D20 (98:2) TMS ppm 0. 854 (6H, t, J=6,5 Hz, -CH2£H x 2) 1,240 (64H, s, -CH2- x 32) 15 2,041 (2H, t, J=7,0 Hz, H-2cer) 1, 934 (2H, m, H-6cer) 3,057 (1H, t, J=8,0 Hz, H-2a) 4,176 (1H, d, J=7, 57 Hz, H-la) 20 4,193 (1H, d, J = 6,1 Hz, H-lb) 5,372 (1H, dd, J=6/8, 15,3 Hz, H-4cer) 5, 557 (1H, t, J=15, 3, 6,6 Hz, H-5cer)

Vertailuesimerkki 13 ^yhdisteen (6) valmistaminen yhdis-!!" 25 teestä (4)3 5 ml pyridiiniä ja 5 ml vedetöntä etikkahappoa lisättiin 81 mg:aan (57,2 pnol) yhdistettä (4) ja saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 60°C yön yli. Reaktioliuos kuivattiin sellaisenaan.

30 84 mg (100%)

Rf = 0,269 (tolueeni : etyyliasetaatti = 1 : lj [^1d24 -13,13* (C = 0,515, CHCI3) 34 8 7 573

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 64,32 H 6,16 N 0,96

Mitattu arvo C 64,02 H 6,00 N 1,08 NMR 400 MHz ppm CDC13 TMS 5 1,749, 1,971, 1,997, 2,000, 2,123, 2,185 (s, OCOCH3 X 6) 1,851 (1H, t, J=12,4 Hz, H-3cax) 2,616 (1H, dd, J=4,6, 12,7 Hz, H-3ceq) 4,103 (1H, q, J=10,5 Hz, H-5c) 10 5,049 (1H, d, J=2,9 Hz, H-4b) 5,598 (1H, m H-8C) 5,779 (1H, d, J=10,2 Hz, NH) 7,17-7,39 (30H, m, bentsyyliryhmä x 6) 15 Vertailuesimerkki 14 fyhdi steen (8) valmistaminen yhdisteestä (6)7 232 mg (159,2 pmol) yhdistettä (6) liuotettiin 50 ml:aan metanolia, saatuun liuokseen lisättiin 150 mg 10 % Pd-C:ä ja saadulle seokselle suoritettiin katalyyt-20 tinen pelkistys huoneen lämpötilassa yön aikana. Reaktio-: : : liuos suodatettiin käyttäen piimaata ja sen jälkeen se kuivattiin.

j 141 mg (97,2%)

Rf = 0,632 (BuOH : EtOH : H20 -2:1:1} 25 [c/]D24 +24,52° (C = 0,50, metanoli)

Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 46,30 H 5,94 N 1,50 . . (kun sisältää 1H20)

Mitattu arvo C 46,53 H 5,82 N 1,86

30 Vertailuesimerkki 15 £yhd isteen (10) valmistaminen yhdis-; teestä (8)J

8 ml pyridiiniä ja 8 ml vedetöntä etikkahappoa lisättiin 130 mg:aan (141,9 ymol) yhdistettä (8), ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme päivää. Reaktio-liuos tislattiin ja sen jälkeen puhdistettiin pylväskroma-tografisesti (C-300, 20 g; tolueeni : etyyliasetaatti =1 : 5).

35 87573 151 mg (95%)

Rf = 0,743 (CHC13 : MeOH = 10 : 0,5) [eOD24 +11,17“ (C = 0,60, CHCI3)

Alkuaineanalyysi 5 Teoreettinen arvo C 49,36 H 5,61 N 1,20

Mitattu arvo C 49,21 H 5,63 N 1,54

Vertailuesimerkki 16 ^yhdisteen (12) valmistaminen yhdisteestä (10)3 10 140 mg (120 μπιοί) yhdistettä (10) liuotettiin 2 ml:aan DMF:a, saatuun liuokseen lisättiin 15 mg (pmol) H^Nl·^

AcOH ja saatua seosta sekoitettiin 60°C:n lämpötilassa 25 minuuttia. Reaktioliuokseen lisättiin etyyliasetaattia ja orgaaninen kerros pestiin vedellä ja kylläisellä suola-15 vedellä, kuivattiin vedettömällä MgS0^:lla ja sen jälkeen tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300, 20 g; asetoni : CCl^ =1 : 2).

133 mg (98%)

Rf = 0,549 (asetoni : CCI4 =1:1) 20 [<X]D23 +14,26“ (C = 0,70, CHCI3)

Alkuaineanalyysi : : : Teoreettinen arvo C 49,07 H 5,64 N 1,24 : Mitattu arvo C 48,79 H 5,70 N 1,70

Vertailuesimgrkki 17 £yhdisteen (14) valmistaminen yhdis-25 teestä (12)3 - - 116 mg (103 pmol) yhdistettä (12) liuotettiin yhteen ml:aan dikloorimetaania, saatuun liuokseen lisättiin 358 pl (3,53 mmol) Cl^CCN ja 15 pl (0,11 mmol) DBU ja saatua seosta sekoitettiin sellaisenaan neljä tuntia. Reaktioliuos puh-30 distettiin pylväskromatografisesti (C-300, 20 g; asetoni : ; : : CC14 = 1:1).

121 mg (92%)

Rf = 0,278 (asetoni : CCI4 =1:2) (o()D24 +34,0“ (C = 0,25, CHCI3) 35 Alkuaineanalyysi

Teoreettinen arvo C 44,40 H 5,20 N 1,16 (kun sisältää 1,51^0)

Mitattu arvo C 44,14 H 4,80 N 2,52 87573 NMR 400 MHz CDC13 ppm TMS 1,992, 2 ,012, 2,054, 2 ,073, 2, 075, 2,084, 2,100, 2,180, 2,186 (s, OCOCH3 χ 11) 5 1,683 (1H, t, J=12, 4 Hz, H-3cax) 2,604 (1H, dd, J=4.6, 12,7 Hz, H-3ceq) 3,869 (3H, s, OCH3) 4,274 (1H, d, J=15,1 Hz, -0C0CH20-) 10 4,571 (1H, d, J=15,3 Hz, -0C0CH20-) 4,513 (1H, dd, J=3,4, 10,0 Hz, H-2a) 4,664 (1H, d, J=8,0 Hz, H-lb) 4,899 (1H, d, J=2,6 Hz, H-4b) 1 5 4,975 (1H, m, H-4c) 4,962 (1H, dd, J=7,8, 10,0 Hz, H-2b) 5,081 (1H, dd, J = 3, 9, 10,2 Hz, H-3b) 2Q 5,373 (1H, dd, J=2,6, 9,2 Hz, H-7c) 5,500 (1H, m, H-8c) 5,553 (1H, t, J=9,7 Hz, H-3m) : 5,779 (1H, d, J=10,0 Hz, -CONH-) ‘.I' 25 6 ,492 (1H, d, J=3,6 Hz, H-la) !·.·. 8^649 ( 1H, s, =NH)

Vertailuesimerkki 18 £yhdisteen (16) valmistaminen yhdis-. ·. : teestä (14)J

80 mg (62,9 pmol) yhdistettä (14) ja 70 mg ·.· · 30 (78,8 pmol) yhdistettä (C), joka oli liuotettu 3 ml:aan dikloorietaania, lisättiin 1,5 g:aan aktivoituja molekyyli-seuloja AW-300 , saatuun seokseen lisättiin 30 minuuttin ku-. . · luttua jää-MeOH-hauteessa 15 1 (124 pmol) BF3 Et20 ja .·. : 35 saatua seosta sekoitettiin sellaisenaan yön yli. Reaktio- seos suodatettiin käyttäen piimaata ja sen jälkeen tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (C-300, 25 g; tolueeni : etyyliasetaatti =1 : 1).

i 37 87573 65,4 mg (52%)

Rf = 0,131 (tolueeni : etyyliasetaatti =1:1) [oGd24 “11.43° (C = 0,35, CHCI3)

Alkuaineanalyysi 5 Teoreettinen arvo C 62,54 H 8,23 N 1,40

Mitattu arvo C 62,49 H 8,15 N 1,59

NMR 400 MHz CDCI3 ppm TMS

0,878 (3H, t, J=5,8 Hz, -CH2CH2) 10 0,881 (3H, t, J=5,6 Hz, -CH2CH2) 0,993 (9H,s, +butyy1iryhmä) 1,251 (64H, S, -CH2- X 32)) 1,961, 1,992, 2,013, 2,043, 2,073, 2,075, 2,083, 2,095, 2,175, 2,183, 2,245, (s, OCOCH3 X 11) 15 2,601 (1H, dd, J=4,6, 12,9 Hz, H-3eq) 3,867 (3H, S, OCH3) 4,275 (1H, d, J=15,3 Hz, -OCH2COCH3) 4,570 (1H, d, J=15,3 Hz, -OCH2COCH3) 4,428 (1H, d, J=8,0 Hz, H-la) 20 4,640 (1H, d, J=8,0 Hz, H-lb) 4,950 (1H, m, H-4c) 5,500 (1H, m, H-8c) if; 5,773 (1H, d, J=10,0 Hz, NH) 7,30-7,42 (6H, m, bentseenirengas) 25 7,60-7,70 (4H, m, bentseenirengas)

Vertailuesimerkki 19 /[yhdisteen (18) valmistaminen yhdisteestä (16)1 24 mg (12 umol) yhdistettä (16) liuotettiin kahteen 30 ml THF:a, saatuun liuokseen lisättiin 60 1 (59 pmol)

Bu4NF ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioliuos kuivattiin, jäännökseen lisättiin yksi ml pyridiiniä ja yksi ml vedetöntä etikkahappoa ja saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 40°C yön yli.

35 Reaktioliuos tislattiin ja puhdistettiin pylväskromatogra-fisesti (C-300, 10 g; CHC13 : MeOH = 10 : 0,2).

14 mg (64 %) 38 87 573

Rf = 0,48 (CHC13 : MeOH = 10 : 0,25) [oOd26 -9'°° (C = °'70' CHC13)

NMR 400 MHZ CDCI3 ppm TMS

0,880 (6H, t, J=7,0 Hz, -CH-,CH., x 2) 5 1,252 (64H, s, -CH2~) 1^682 ( 1H, t, 1 = 12^4 Hz, H-3cax) 1,991, 2,006, 2,037, 2, 041, 2, 076, 2, 081, 2,090, 10 2)108» 2 1179, 2,184, 2,239 (s, OCOCH3 x 12) 2,599 (1H, dd, J=4,6, 12,6 Hz) 3,866 (3H, s, OCH3) 4,274 (1H, d, J=15,3 Hz, -OCH^CO-) 15 4,425 (1H, d, J=8,0 Hz, H-la) 4,570 ( 1H, d, J=15j 3 Hz, -OCH2CO-) 4)660 (1H, d, J=8;0 Hz, H-lb) 5,520 (1H, m, H-8c) 20 Esimerkki 2 ^yhdisteen (20) valmistaminen yhdisteestä (18)3 • · ‘ 12 mg (6,6 pmol) yhdistettä (18) liuotettiin kahteen ml:aan metanolia, saatuun liuokseen lisättiin yksi ml \ ·'. 0,1 M NaOCH3 ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpö tilassa yön yli. Reaktioliuos tislattiin, jäännökseen li-25 sättiin yksi ml MeOH, yksi ml THF ja 0,5 ml H20 ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktio-liuos neutraloitiin Amberlite IRC-50:llä, se suodatettiin ja sen jälkeen puhdistettiin Sephadex LH-20:lla (eluoitiin - ' seoksella CHC13 : MeOH : H20 = 5:3: 0,46) .

30 8,5 mg (97%)

Rf = 0,25 (BuOH : EtOH : H20 =2:1:1) [p(]D26 -0,94 (C = 0,425, CHCI3 : MeOH =1:1) NMR 400 MHz d6-DMSO-D20 (98:2) TMS ppm 39 67573 0. 852 (6H, t, J=6, 3 Hz, -CH2CH3 x 2) 1, 232 (64H, s, -CH2~) 1,930 (2H, m, H-6cer) 2)026 (2H, t, J = 7, 3 Hz, H-2cer) 5 2,757 (1H, dd, J=5,l, 11,9 Hz, H-3ceq) 3,041 (1H, t, J=8, 5 Hz, H-2a) 4,159 (1H, d, J=7,8 Hz, H-la) 4,200 (1H, d, J=7,8 Hz, H-lb) 10 5,343 (1H, dd, J=7,3 Hz, H-4cer) 5,534 (1H, td, J=14,9, 6,8 Hz, H-5cer)

Vertailuesimerkki 20 /.yhdisteen (22) valmistaminen yhdisteestä (21)3 15 1,360 g (2,09 mmol) yhdistettä (21) liuotettiin 30 ml:aan pyridiiniä, saatuun liuokseen lisättiin 722,8 mg (2,77 mmol) TrClra ja saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 50°C yön yli. Reaktioliuos tislattiin, jäännöksen liuottamiseksi siihen lisättiin kloroformia ja kloroformi-‘ : 20 kerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivat- tiin vedettömällä MgS04:lla ja tislattiin. Jäännös puhdis-: tettiin pylväskromatografisesti (Wakogel C-300, 85 g; tolueeni : etyyliasetaatti = 5 : 1 ; sisältää Et^N) , jolloin saatiin 909 mg yhdistettä (22) (45 %) .

25 (Yhdisteen (22) fysikaalisia ominaisuuksia)

Rf = 0,435 (tolueeni : etyyliasetaatti =5:1) [p<]D23 +2,24° (C = 0,75, EtOAc)

Esimerkki 3 Tyhdisteen (23) valmistaminen yhdisteestä (22)3 - 30 15 ml DMF:a, 370 mg (1,36 mmol) Ph2tBuSiCl:a ja 183 mg (2,688 mmol) imidatsolia lisättiin 800 mg:aan (896,4 pmol) yhdistettä (22) ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioliuokseen lisättiin eetteriä ja eetterikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suola-35 vedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^zlla ja tislattiin.

40 87573 Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (Wakogel C-300, 80 g; heksaani : etyyliasetaatti = 10 : 1, sisältää Et^N)/ jolloin saatiin 1,006 g yhdistettä (23)(99 %). ^Yhdisteen (23) fysikaalisia ominaisuuksiaj 5 Rf « 0 ,57 (heksaani : etyyliasetaatti =5:1) [oQd25 +8,38' (C = 1,60, EtOAc)

NMR 400 MHz CDC13 ppm TMS

0,880 (6H, t, J=5,8 Hz, -CH2CH3 X 2) 0,949 (9H, s, t-butyyliryhmä) 10 1,253 (62H, s, -CH2-) 1,472 (2H, m, H-31) 1,749 (2H, td, J=4,7, 6,3 Hz, H-6) 1,884 (2H, t, J=7,2 Hz, H-21) 3,146 (1H, dd, J=5,3, 9,2 Hz, H-l) 15 3,298 (1H, dd, J=5,8, 9,2 Hz, H-l) 4,270 (1H, m, H-2) 4,386 (1H, t, J=4,8 Hz, H-3) 5,278 (1H, d, J=13,6 Hz, -NH) 7,192-7,605 (24H, m, bentseenirengas) 20 Esimerkki 4 ^yhdisteen (24) valmistaminen yhdisteestä (23)1 1,0 g (883,4 pmol) yhdistettä (23) liuotettiin seok-• seen, jossa oli 20 dikloorietaania ja yksi ml metanolia, /· saatuun liuokseen lisättiin 67 mg (352,2 μπιοί) TsOH:a ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan. 25 Reaktioliuos neutraloitiin lisäämällä siihen kylläisiä

NaHCO-j-liuosta ja reaktioliuokseen lisättiin kloroformia. Kloroformikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^lla ja tislattiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (Wakogel 30 C-300, 25 g; heksaani. : etyyliasetaatti 5:1), jolloin saatiin 650 mg yhdistettä (24) (83 %).

(Yhdisteen (24) fysikaalisia ominaisuuksia)

Rf = 0,113 (heksaani : etyyliasetaatti =5:1) K]D25 13,79' (C = 0,425, EtOAc)

35 NMR 400 MHz CDC13 ppm TMS

41 87573 0,879 (6H, t, J=6,5 Hz, -CH2CH3 x 2) 1,066 (9H, s, t-butyyliryhmä) 1,252 (62H, s, -CH2-) 1,574 (2H, m, H-31) 5 1,869 (2H, m, H-6) 1,962 (2H, m, H-2) 3,621 (1H, ddd, J=2,9, 7,2, 11,0 Hz, H-l) 3,831 (1H, m, H-2) 3,887 (1H, ddd, J=2,6, 4,4, 11,1 Hz, H-l) 10 4,335 (1H, t, J=3,6 Hz, H-3) 5,370 (1H, dd, J=15,2, 5,5 Hz, H-4) 5,406 (1H, dt, J=15,2, 5,6, H-5) 7/34-7,66 (10H, m, bentseenirengas) 15 Esimerkki 5 /[yhdisteen (25) valmistaminen yhdisteestä (22)7 10 ml DMF:a lisättiin 280 mgraan (313,7 μπιοί) yhdistettä (22), saatuun seokseen lisättiin 82,4 mg (387 μπιοί)

Me(CMe2Ph)SiCl:a ja 54 mg imidatsolia ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioliuokseen 20 lisättiin eetteriä ja vettä niin, että eetterillä uuttaminen voitiin suorittaa, ja eetterikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgS04:lla *.r.: ja tislattiin, jolloin saatiin 480 mg yhdistettä (25) .

' ^Yhdisteen (25) fysikaalisia ominaisuuksia^ -'· 25 Rf = 0,532 (heksaani : etyyliasetaatti = 5:1)

Esimerkki 6 /yhdisteen (26) valmistaminen yhdisteestä (25)J 480 mg yhdistettä (25) liuotettiin seokseen, jossa oli 10 ml CH2Cl2 ja yksi ml CH^OH, saatuun liuokseen lisättiin 60 mg TsOH:a ja saatua seosta sekoitettiin huoneen 30 lämpötilassa kuusi tuntia. Natriumvetykarbonaattia lisättiin reaktioseokseen, jota sen jälkeen uutettiin CHCl^jlla.

- Kloroformikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedel- : lä, kuivattiin vedettömällä MgSC>4:lla ja tislattiin. Jään nöstä dekantoitiin eetterillä ja eetteriliuotin tislattiin 35 pois. Jäännös puhdistettiin silikageelikolonnissa (C-300, 35 g; heksaani : etyyliasetaatti =5 : 1), jolloin saatiin 61 mg yhdistettä (26) (20,5 %).

42 87 573 (Yhdisteen (26) fysikaalisia ominaisuuksia)

Rf = 0,08 (heksaani : etyyliasetaatti =5:1) mD26 -4,367' (C = 0,60, CHC13)

Esimerkki 7 {yhdisteen (27) valmistaminen yhdisteestä (22)1 5 280 mg (313,7 μπιοί) yhdistettä (22) liuotettiin 10 ml:aan DMF:a saatuun liuokseen lisättiin 130 mg (387 μπιοί) Pl·^ (CMe2Ph)SiCl:ä ja 54 mg imidatsolia, ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli ja sen jälkeen lämpötilassa 40°C yön yli. Reaktioliuosta uutettiin eette-10 rillä ja eetterikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla ja tislattiin. Jäännös puhdistettiin käyttäen silikageelikolonnia (C-300, 20 g; heksaani : etyylisasetaatti =5 : 1), jolloin saatiin 410 mg yhdistettä (27).

15 /yhdisteen (27) fysikaalisia ominaisuuksia^ = 0,534 (heksaani : etyyliasetaatti =5:1) Esimerkki 8 Cyhdisteen (28) valmistaminen yhdisteestä (27)1 (I) 410 mg yhdistettä (27) liuotettiin seokseen, jossa oli 10 ml CH2CI2 ja yksi ml CH^OH, saatuun liuokseen lisättiin 20 30 mg TsOH:a ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpö-. . tilassa tunnin ajan. Natriumvetykarbonaattia lisättiin reak- ; ; tioseokseen, jota sen jälkeen uutettiin CHCl^lla. Orgaani- nen kerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kui-: vattiin vedettömällä MgS0^:lla ja sen jälkeen tislattiin.

...·' 25 Jäännöstä dekantoitiin eetterillä, ja eetteriliuotin tis lattiin pois. Jäännös puhdistettiin silikageelikolonnissa : : (C-300, 20 g; heksaani : etyyliasetaatti = 5 : 1), jolloin saatiin 130 mg yhdistettä (28) (43,6 % yhdisteestä (22)).

/yhdisteen (28) fysikaalisia ominaisuuksia^ 30 Rf = 0,128 (heksaani : etyyliasetaatti =5:1) [<X]D26 -11,11' (C = 1,08, CHCI3) 43 87573 (II) 4 ml eetteriä ja 6 ml muurahaishappoa lisättiin 60 mg:aan yhdistettä (27), ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin natriumvetykarbonaatin vesiliuosta niin, että uuttami-5 nen voitiin suorittaa. Eetterikerros pestiin vedellä ja kylläisellä suolavedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^illa ja tislattiin. Jäännös puhdistettiin silikageelikolonnissa (C-300, 20 g; heksaani : etyyliasetaatti =5 : 2), jolloin saatiin 10 mg yhdistettä (28) (20 %).

Claims (5)

44 8 7 57 3

1. Menetelmä gangliosidien kaltaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava 5 HO OH N_J “7 COOM OH _nM «H/ rA^, HOCH^COHN—O HO— IQ OH HO ^OH 0H OH jossa M on alkalimetalli, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava 15 Λ_X COOCHj I σ AC o μΑζ\Α°^Λ-Ί^^<;Ά' ^ OSiX&Rs 20 jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja R5 on tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli, asety-loidaan, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava V 25 _T cooch3 9 (rr^«-A~»m c>,«« .... 3 Koe».«rAr^ jhr-Ί'

30 OAc IA joka sitten hydrolysoidaan. *;· 2. Yhdiste, jolla on kaava : : : 35 45 87573 /C COOCH3 p| 0 ην^15η„ 5 «OCM.COjK> OSiR^Qs jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja R5 on tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli.

2. PjC >*>. / li jossa R2 on trityyli, saatetaan reagoimaan yhdisteen 30 kanssa, jolla on kaava cooch3 rT'TiX» c.t, Ac0CH2C0HN — v J N H 46 87 573

3. Menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava Λ J coocMj H 0 YT^f'TTli γλ^*· 15 /τ" n AcOCHjCOMM —*^-ί· I V 0 I OSiQ3QHQs jossa R3 ja R4 ovat kumpikin metyyli tai fenyyli ja R5 on 20 tertiaarinen butyyli tai dimetyylifenyylimetyyli, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava - · - o ' H

4. Yhdiste, jolla on kaava o II

5 C/3 Hj2* ÖSiPi&uRs jossa R2 on vety tai trityyli, R3 ja R4 ovat kumpikin me-10 tyyli tai fenyyli ja R5 on tertiaarinen butyyli tai dime-tyy1i fenyy1imetyy1i. 47 87 573