FI87071C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara kinolinkarboxylsyraderivater - Google Patents

Description

1 S7C71

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kinoliinikar-boksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee yhdisteitä, joilla on melko 5 korkea antimikrobinen aktiivisuus ja erinomainen farma-kokinetiikka.

Intensiivisiä tutkimuksia on tehty tähän asti an-timikrobisista yhdisteistä. Erilaisia pyridonikarboksyy-lihappojohdannaisia esitetään mikrobienvastaisina yhdis-10 teinä japanilaisten Kokai-julkaisujen nro 67269/1984 (US SN 416406) ja 214773/1985 (US SN 581157) patenttivaatimuksissa. Niissä esitetään, että yhdisteet, joiden yleinen kaava on 15 Υγ^γΑν/ε°2Η R" 20 jossa X' on N, CH, tai C-F, Y' esittää fluoria ja R11 ; esittää etyyliä, 2-fluorietyyliä tai syklopropyyliä, ovat edullisia. Emäksinen substituentti Z', jolla on suuri : ! : vaikutus mikrobinvastaisiin ja fysikaalis-kemiallisiin -· * - 25 ominaisuuksiin, esittää pyrrolidiiniryhmää, jolla on kaa-va: JD- JD1' r>- r 30 111,1 RI1NH tai ΝΗ,-ϋΗΓ- kuten on esitetty esimerkissä 11, JP-Kokai-julkaisussa ·.

nro 67279/1984 (yhdisteen koodinumero: CI-984) ja JP- julkaisun nro 214773/1985 esimerkissä 43-47. ; 35 Mikrobienvastaisten aineiden todelliseen tehoon " · vaikuttavat kuitenkin, ei vain aineen mikrobinvastainen 2 87C71 aktiivisuus, vaan myös aineen farmakokinetiikka. Toisin sanoen erinomaisena mikrobinvastaisena aineena on edullisinta käyttää yhdisteitä, joilla on sekä voimakas mikro-bienvastainen aktiivisuus että hyvä farmakokinetiikka. On 5 hyvin tunnettua, että käyttäytyminen ihmisen kehossa, so. imeytyminen suoliston alueella, ja stabiilisuus metaboli-selle vaikutukselle, riippuvat yhdisteen fysikaalis-ke-miallisista ominaisuuksista, erityisesti vesiliukoisuudesta. Jos nimittäin yhdisteen vesiliukoisuus on erittäin 10 alhainen, esimerkiksi ei yli 100 pg/ml, yhdisteen liuke-nemisnopeus intestinaalisella alueella tulee nopeutta rajoittavaksi, siten, että absorptio on huono, ja yhdiste metaboloituu helposti absorboituessaan intestinaalisen alueen läpi.

15 Yhdisteellä CI-934 on hyvä vesiliukoisuus ja hyvä mikrobienvastainen aktiivisuus gram-positiivisia mikro-organismeja vastaan, mutta haittana on se, että sen aktiivisuus gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan on hieman heikko. Toisaalta yo. JP-julkaisun 214773/1985 20 esimerkeissä 44 ja 46 kuvatuilla yhdisteillä, joissa ki-noliinirungon N-l-asemassa oleva etyyli on vaihdettu syklopropyyliin, on voimakasta antimikrobista aktiivi suutta gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan, mutta : sen erittäin alhaisesta vesiliukoisuudesta voidaan pää- .···, /'.25 teliä, että sen farmakokinetiikka on huono.

Läheistä tekniikan tasoa edustavat myös Fl-patenttihakemukset 833151 ja 850631 ja vastaavat EP-julkaisut \V 106 489 ja 153 163. Näissä julkaisuissa ei kuitenkaan ole spesifisesti kuvattu sellaisia yhdisteitä, joissa pyrro-30 lidiinin 3-asemaan kiinnittyneen aminometyyliryhmän me- tyyliosan hiiliatomiin olisi kiinnittynyt alkyyliryhmiä, ·. kuten esillä olevan keksinnön mukaisissa yhdisteissä, ; vaan kyseisten julkaisujen mukaisissa yhdisteissä tähän hiiliatomiin on kiinnittynyt kaksi vetyatomia. Lisäksi 35 keksinnön mukaisilla yhdisteillä on paremmat terapeutti- 3 87071 set ominaisuudet, ts. parempi mikrobien vastainen aktiivisuus ja lisäksi parempi vesiliukoisuus, alhaisempi akuutti toksisuus ja parempi imeytyminen oraalisessa annossa kuin mainituilla tunnetuilla yhdisteillä.

5 Tällaisissa olosuhteissa tämän keksinnön tekijät tekivät erilaisia tutkimuksia, ja havaitsivat, että hyvä vesiliukoisuus voidaan saavuttaa valitsemalla ylläolevan kaavan mukaisia yhdisteitä, joissa Z' esittää ryhmää, jonka kaava on: 10 -s.

J- R'NH-C —-' /\

Ra R3 15 jossa ainakin toinen R2:sta ja R3:sta merkitsee alempaa alkyyliryhmää, ja Ru, X' ja Y' merkitsevät kukin spesifistä ryhmää yllämainituista pyridonikarboksyylihappojohdannaisista (erittäin suuri määrä yhdisteitä), ja tällä 20 tavalla voidaan saada yhdisteitä, joilla on erityisen korkea absorboituvuus intestinaalisen alueen läpi ja stabiilisuus metabolista vaikutusta vastaan.

Keksinnön pääasiallinen tavoite on antaa käytettä- -väksi uusia yhdisteitä, joilla on erinomaiset mikrobien-. . 25 vastaiset aktiivisuudet, ei vain gram-negatiivisia ja ” ; -positiivisia mikro-organismeja, vaan myös anaerobeja mikro-organismeja vastaan, sekä korkea absorboituvuus in- V : testinaalisen alueen läpi ja stabiilisuus metabolista vaikutusta vastaan.

30 Keksinnön kohteena on menetelmä mikrobien vastais- ten, kaavan (I) mukaisten 3-[amino(alkyloitu)metyyli]pyr- .**·. rolidinyylisubstituoitujen 4-oksokinoliini-3-karboksyyli- ·. happojen ja niiden suolojen valmistamiseksi, ·- 35 4 67071 0 v*Wdoh (I) R‘-NHV JL/ T I ( ’ >C R R< R* R3 10 jossa R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä, R2 on metyyli-tai etyyliryhmä, R3 on vetyatomi tai metyyliryhmä, ja R1 voi muodostaa yhdessä R2:n tai R3:n kanssa 2-pyrrolidi-nyyliryhmän, jolla on kaava

X

HN

20 ja R2 ja R3 voivat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostaa syklopropyyliryhmän, R4 on etyyli- tai syklopropyyliryhmä, ja Rb on vety-, fluori-tai klooriatomi.

Esimerkkejä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suo- 25 loista ovat suolat epäorgaanisten happojen ja orgaanisten happojen, kuten kloorivetyhapon, rikkihapon ja metaani-sulfonihapon kanssa, tai alkalimetallien ja maa-alkalime-tallien, kuten natriumin ja kalsiumin kanssa. Edelleen yhdisteet voivat olla hydraattiensa muodossa. Stereoiso- 30 meerit ja optiset isomeerit (L-, D- ja raseemiset yhdisteet) sisällytetään keksinnön mukaisiin yhdisteisiin.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä syntetisoidaan siten, että annetaan yhdisteen, jolla on kaava (II), 35 5 87071 0

fN/^JL/C00H

5 N. 1 (II) R5 R« jossa R5 on vety-, fluori- tai klooriatomi, ja Y on halo-10 geeni, reagoida pyrrolidiinijohdannaisen kanssa, jolla on kaava (III)

^NH

R‘-NHX / 15 (III)

Ra R3 jossa R1, R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä.

20 Tämä reaktio suoritetaan edullisesti noin 20-150 °C lämpötilassa inertissä liuottimessa, kuten ase-tonitriilissä, tetrahydrofuraanissa, etanolissa, kloro-formissa, dimetyylisulfoksidissa, dimetyyliformamidissa, : : ’ pyridiinissä, pikoliinissa tai vedessä. ··· 25 Ylläolevan yleisen kaavan (III) mukainen pyrroli- diinijohdannainen syntetisoidaan esimerkiksi menetelmällä, jossa tunnettua l-bentsyyli-4-karboksi-2-pyrrolidonia ' käsitellään tionyylikloridilla happokloridin muodostami-seksi, jonka annetaan sitten reagoida Meldrumin hapon 30 kanssa, ja saatava tuote dekarboksyloidaan sen 4-asetyy-lijohdannaisen muodostamiseksi. Asetyyllryhmän ketoniosa muutetaan oksiimiksi hydroksyyliamiinilla, ja tuote pel-kistetään litiumalumiinihydridillä, jolloin saadaan 3—(1— aminoetyyli)-l-bentsyylipyrrolidiinia. Tämän tuotteen an-35 netaan reagoida 2-[tert.-butyylioksikarbonyylioksi-imi- 6 87071 no]-2-fenyyli-asetonitriilin kanssa (Boc-ON), jolloin muodostuu vastaava tert.-butoksikarbonyyliyhdiste (tämän jälkeen Boc), joka sitten pelkistetään palladium/hiilel-lä, ja debentsyloidaan, jolloin muodostuu 3-(1-tert.-bu-5 toksikarbonyyliamino)etyylipyrrolidiinia. Kun yllä saatu

Boc-yhdiste pelkistetään litiumalumiinihydridillä ja sitten palladium/hiilellä ja debentsyloidaan, saadaan 3-(l-metyyliamino)-etyylipyrrolidiinia.

Yllämainitussa menetelmässä kaavan (I) mukaisten 10 yhdisteiden valmistamiseksi, yleisen kaavan (III) mukaisen pyrrolidiinijohdannaisen aminoryhmä voidaan suojata ryhmällä, joka tekee yhdisteen oleellisen inertiksi reaktio-olosuhteisiin. Esimerkkeihin suojaryhmistä kuuluvat asyyliryhmät, kuten formyyli, asetyyli ja trifluoriase-15 tyyliryhmät; alkoksikarbonyyliryhmät, joissa on 2-6 hiiliatomia, kuten etoksikarbonyyli- ja tert-butoksikarbo-nyyliryhmät; aryylioksikarbonyyliryhmät, kuten bentsyyli-oksikarbonyyli-, p-metoksibentsyylioksikarbonyyli- ja fe-noksikarbonyyliryhmät; silyyliryhmät, kuten trimetyylisi-20 lyyliryhmä; sekä trityyli-, tetrahydropyranyyli-, vinyy-lioksikarbonyyli-, o-nitrofenyylisulfenyyli-, difenyyli-. . . fosfinyyli-, p-tolueenisulfonyyli- ja bentsyyliryhmät. ·“· Nämä suojaryhmät voidaan poistaa reaktion jälkeen, jos se . on tarpeellista, tunnetulla menetelmällä, kuten hydrolyy-25 sillä hapon tai emäksen kanssa.

Tämän keksinnön mukaisesti vähintään toinen R2:sta · ja R3:sta yleisen kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä on - : : alempi alkyyliryhmä, jolloin yhdisteiden voimakas anti- \ mikrobinen aktiivisuus voidaan ylläpitää ja samanaikai-30 sesti niiden vesiliukoisuutta voidaan kasvattaa. Tulokse- · na saadaan yhdisteitä, joilla on erityisen korkea absorboi tuvuus intestinaalisen alueen läpi ja stabiilisuus me- / tabolista vaikutusta vastaan, ja jotka ovat ylivoimaisia yhdisteeseen CI-934 nähden mikrobienvastaisessa aktiivi-35 suudessa gram-negatiivisia mikro-organismeja vastaan.

7 87071

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä voidaan ennustaa olevan hyvät farmakokineettiset ominaisuudet ja alhainen toksisuus siten, että yhdisteiden odotetaan olevan arvokkaita farmaseuttisina tuotteina.

5 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää laa jalti mikrobienvastaisina aineina annettavaksi esimerkiksi ihmisille tai muille nisäkkäille oraalisesti, parente-raalisesti tai paikallisesti. Tätä keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla rajoittamattomilla esimerkeillä.

10 Esimerkkejä

Karboksyylihappojohdannaiset (M-l)-(M-3), joita käytetään lähtöaineina seuraavissa esimerkeissä, ovat seuraavia: (M-l): l-syklopropyyli-6,7,8-trifluori-1,4-dihydro-4-ok-15 sokinoliini-3-karboksyylihappo 3 L^XvComi 20 H ' 'A o (M-2): l-etyyli-6,7,8-trif luori-1,4-dihydro-4-oksokino-liini-3-karboksyylihappo .1.

25 ‘ 0 '*>:

fy^v\/C00H :;V

30 \ jj P CaHs

Yhdisteet (M-l) ja (M-2) ovat tunnettuja. ];

Seuraavissa viite-esimerkeissä 1-23 esitetään me-35 netelmiä pyrrolidiinijohdannaisten valmistamiseksi, jotka 8 87071 saatetaan reagoimaan yllämainittujen lähtöyhdisteiden kanssa.

Viite-esimerkki 1 l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(1-tert-butoksikarbo-5 nyyliaminoetyyli)pyrrolidiinin (P-2) synteesi: CHa CHa r-r^NHCOjCtCHo). I-I^^NHCOjCaHj).

->

iO

H I

COaCHaCcHs ( P - 1 ) ( P - 2 ) 1,5 g 3-(tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)pyrro-15 lidiinia (P-l), jota saatiin vertailevassa esimerkissä 25, ja 1,0 g trietyyliamiinia liuotettiin 40 ml:aan tet-rahydrofuraania. 1,7 g bentsyylioksikarbonyylikloridia lisättiin tipoittain liuokseen jäähdyttäen jäällä, ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 h.

20 Liuotin tislattiin pois ja vettä lisättiin jään nökseen. Kun oli uutettu etyyliasetaatilla, orgaaninen kerros pestiin 10 % sitruunahappoliuoksella, kylläisellä : natriumvetykarbonaattiliuoksella ja kylläisellä natrium-kloridin vesiliuoksella peräkkäin ja kuivattiin. Liuotin ; _ 25 tislattiin pois ja jäännökselle suoritettiin pylväskroma- ···[ tografia 60 g:lla silikageeliä, jolloin saatiin 1,9 g ' haluttua yhdistettä (p-2) värittömänä viskoosina öljynä kloroformi/metanoli (10:1) eluaatista.

NMR (CDcl3): 1,13, 1,6 (kukin 1,5H, d, J=7 Hz, noin 1:1) i 30 1,44 (9H, s), 1,6-2,3 (3H, m), 2,9-3,8 (5H, m), 4,38 (1H, d, J=9 Hz), 5,12 (2H, s), 7,36 (5H, s).

Viite-esimerkki 2

Stereoisomeerien P-2A ja P-2B erottaminen 1-bents- ; yylioksikarbonyyli-3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyy-35 li)pyrrolidiinista (P-2) korkean erotuskyvyn nestekroma-tografiällä (HPLC): yhdisteen (P-2) erotusolosuhteet HPLC:11a: 9 87071

Kolonni: Nucleosil 50-5, 20 φ x 250 mm Liuotin: etyyliasetaatti/n-heksaani (3:1)

Virtausnopeus: 5,3 ml/min

Retentioaika: 31,0 min (P-2A), 32,2 min (P-2B) 5 Isomeeri (P-2A): IR : 3330. 2970. 1680-1700. 1520 Massa m/e : 349 (M + + 1) NMR(CDa 3) : 1, 13 (3H, d. J=7Hz).

10 1, 44(9H, s). 1,7-2, 3 (3H. m).

2,9-3, 9(5H. m).

4, 36 (1 H. d. J=9Hz), 5,12(2H. s), 7,36(5H. s)

Isomeeri (P-2B): IR : 3330. 2960. 1680-1670. 1520 Massa m/e : 348 (M*) NMR(C0C43) : 1. 16 (3H, d, J=7Hz), 20 1, 43 (9H. s). 1,6-2, 4(3H. m).

W 2; 9-3,9(5H. m). ' 4f 44 (1H, d. J=9Hz),.

5.12(2H, s). 7, 36 (5H, s) "’? 25 * - · *

Viite-esimerkki 3 : :’- : (i) 3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)-pyrro- · - ' · lidiinin stereoisomeerin (P-3A) synteesi: NXC0.C(CHa)> NHCOiC(CHa) i

30 Λ I

_/ \ Qll Kata! vyttinen -ζ >0Ηα -——> pelkistys ·' ...

1 H

35 COaCHaCeHs (P-2A) (P—3A) ; : : 10 87071 64Q mg l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(1-tert-butok-sikarbonyyliaminoetyyli)-pyrrolidiini-isomeeriä (P-2A) ja 300 mg 5 % Pd-C (50 % märkä) lisättiin 20 ml:aan etanolia ja katalyyttinen pelkistys suoritettiin huoneen lämpö-5 tilassa, 3 atm paineessa 3 tunnin ajan. Sitten katalyytti suodatettiin pois ja etanoli tislattiin pois, jolloin saatiin 390 mg haluttua yhdistettä (P-3A) värittömänä, viskoosina öljynä.

IR: 1700 (olkapää), 1690 10 NUR(C0a3) : 1,14(3M, d, MHz) 1, 44 (9H. s) 1,5-2, 3 (3H. ra) 2, 4-3, 3 (4H, m) 15 3, 4-3, 9 (1H, m) 4, 56 (1H, d. J=9Hz), (ii) 3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)-pyrro-lidiinin stereoisomeerin (P-3B) synteesi 2Q Isomeeri (P-3B) saatiin värittömänä, viskoosina öljynä isomeeristä P-2B samalla tavalla kuin viite-esi-! ; merkissä 3-i.

IR: 1700 (olkapää), 1685 NMR(CDC4o) : 1,17(3H, d, MHz) 25 1, 43 (9 H. s) 1.7- 2. 5 (3H. m) 2.7- 3. 4 (4H. n) 3, 4-3. 8 (1H. n) 4,83 (1H, d. MHz)

Viite-esimerkki 4 (i) 3- (1-metyyliaminoetyyli) pyrrolidiinin stereo- :"· · isomeerin (P-4B) synteesi 35 11 87071 HHBoc NUCUi -CH, LiA £ H< -ί//^0Η3 -—> 5

H H

( P - 3 B ) ( P - 4 B ) 346 g isomeeriä (P-3B) liuotettiin 20 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraania. 500 mg litiumalumiinihydridiä 10 (LiAlH4) lisättiin liuokseen, ja seosta refluksoitiin 1,5 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen lisättiin peräkkäin 0,5 ml vettä, 0,5 ml 15 % NaOH ja 1,5 ml vettä seokseen ja saatua seosta sekoitettiin vielä 30 min. Liukenematon aine suodatettiin pois ja suodos konsentroitiin, jolloin saatiin 180 mg haluttua yhdistettä (P-4B) vaaleankeltaisena öljynä.

NMR (CDC13): 1,06 (3H, d, J=6Hz), 2,39 (3H,s).

(ii) 3-(1-metyyliaminoetyyli)pyrrolidiinin stereo- isomeerin (P-4A) synteesi 20 Isomeeri (P-4A) saatiin öljyn muodossa isomeeristä (P-3A) samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 4-i.

NMR (CDC13): 1,02 (3H, d, J=6Hz), 2,39 (3H, s).

Viite-esimerkki 5 3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminopropyyli)pyrroli-25 diinin (P-5) synteesi NHBoc

,/>- c II

ClHl (P-5) 3°

H

Sama menetelmä kuin viite-esimerkeissä 24 ja 25 toistettiin, paitsi että etyylimalonaatti korvattiin etyy-· limetyylimalonaatilla toivotun yhdisteen (P-5) saamisek-55 si värittömänä, vahamaisena, jalostamattomana kiinteänä aineena.

12 8707 1 NMR (CDC13): 0,92 (3H, t, J=8Hz), 1,42 (OH, s). Viite-esimerkki 6 2-bentsoyyliamino-2-metyylipropionialdehydin (P-6) synteesi

ft CONH CHaOH -——> ft CONHCHO

\_f X kuivaCHaCÄa .\ _/ CH, CH, CH, CH, 10 ( P - 6 ) 32,3 g pyridiumkloorikromaattia (PCC) lisättiin 200 ml:aan dehydratoitua metyleenikloridia. 50 ml liuosta, jossa oli 19,3 g tunnettua yhdistettä alkoholimuodossa, dehydratoidussa metyleenikloridissa, lisättiin tipoittain 15 sekoittaen, noin 1 tunnin aikana, ja sitten sekoitusta jatkettiin vielä 20 h. Sitten siihen lisättiin 200 ml vedetöntä eetteriä ja seosta sekoitettiin 30 min. Näin muodostunut sakka poistettiin dekantoimalla, ja saadusta liuoksesta poistettiin väri kuljettamalla se Florisil-kolon-20 nin läpi (15 cm). Liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin silikageelikolonni-kromatografiällä, jolloin saatiin 11 g haluttua aldehydiä (P-6) kloroformi/metanoli . (10:1) eluaatista.

: f NMR (CDC13): 1,56 (3H, s), 6,8 (1H, bs), 7,2-8,1 (5H,m), \ ‘ 25 9,4 (1H, s) .

: Viite-esimerkki 7

Cis- tai trans-etyyli-4-bentsoyyliamino-4-metyyli-pentenoaatin synteesi 4,0 g yllämainittua aldehydiä (P-6) liuotettiin 30 60 ml:aan dehydratoitua metyleenikloridia. 20 ml liuosta, jossa oli 8,0 g karboetoksimetyleenitrifenyylifosforaania /f(CgHcj) 3P=COOC2H^7 dehydratoidussa metyleenikloridissa, lisättiin tipoittain liuokseen, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 6 h. Sitten liuotin tislattiin pois ja 35 jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 600 g:11a 13 87071 silikageeliä. Eluution jälkeen bentseeni/etyyliasetaatti-seoksella (2:1) saatiin 0,7 g haluttua yhdistettä (P-7) cis-muodossa ja 4,5 g trans-muodossa, kumpikin värittömänä pulverina.

5 Trans: NMR(CDcä3) = 1, 34 (3H, t, J=7Hz) 1, 6 (6H, s) 4,24(2H. q. J=7Hz) 6, 2 (1H. bs) 10 5t9(lH. d. J=16,2Hz) 7f 10 (1H, d, J=16,2Hz) 7,2-7,9(5H. m) 15 cis:JMR(CDa3) : 1, 20 (3H, t, J=7Hz) 1, 72 (6H. s) 4,02(2H. q. J=7Hz) 5,78(1H. d. J=12,6Hz) 20 6p 36 (1H. d. J=12,6Hz) 7, 25~7ff 95 (5H, m) ' Viite-esimerkki 8

Etyyli-4-bentsoyyliamino-4-metyyli-3-nitrometyy-25 lipentanoaatin (P-8) synteesi f~\ /~\ Γ’ C VcDHHv ä^COOCjHs-Γ y COHHvT^/COOCjHj 30 ( P - 7 ) ( P - 8 ) 2,0 g trans-olefiinia (P-7) ja 11,5 ml tetrametyy-liguanidiinia lisättiin 110 mlraan nitrometaania, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Sitten 35 liuotin tislattiin pois ja jäännös liuotettiin klorofor- .. .

14 87071 miin. Saatu liuos pestiin 0,5N vetykloridihapolla ja sitten kylläisellä natriumkloridin vesiliuoksella, ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla.

Kloroformi tislattiin pois ja saadulle Öljymäi-5 selle jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 250 g:11a silikageeliä. Tämän eluution kloroformi/etanoli-seoksella (20:1) jälkeen saatiin 2,4 g haluttua nitro-metaani-adduktia (P-8) värittömänä pulverina.

NMR (C0C4 3) · L 25 (3H, t, J=7Hz) 10 1, 48 ia lf 56 (kukin 3H, s) 2,4-2,8 (2H. ra) 4,10 (2H. q. J=7Hz) 15 ' 4,4-5,0(211. ra) 6, 35 (1H. bs)

Tj 2-7, 9 (5H, m)

Yllämainittua yhdistettä voidaan saada myös cis-20 olefiinista samalla menetelmällä kuin on kuvattu yllä. Viite-esimerkki 9 4-(1-bentsoyyliamino-l-metyyli)etyyli-2-okso-pyrrolidiinin (P-9) synteesi _··_ 25 / NOa _

f/ ^ Ha/Raney Ni fi ^ ''M

CDNHyk^^COOCaHs--► ^C0NHyk^-; ' ch/\h3 ch/Xch3 30 · ^ (p-8) (p-n 810 mg yllämainittua nitroyhdistettä (P-8) liuo-tettiin 40 ml:aan vedetöntä etanolia. Raney-nikkeliä li- ; sättiin liuokseen, ja katalyyttinen pelkistys suoritet-35 tiin ympäristön lämpötilassa, ilmakehän paineessa 3 päi- 15 87071 vän ajan. Katalyytti suodatettiin pois ja pestiin etanolilla kolmesti. Pesuliuokset lisättiin suodokseen. Jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 60 g:11a silika-geeliä, jolloin saatiin 50 mg pyrrolidoniyhdistettä (P-9) 5 pulverin muodossa kloroformi/metanoli-eluaatista (10:1).

NMR(CDCi3) : 1, 46(6H, s), 2, 1~2, 6(2H, m) 2r8~3.8(3H, m). 5,96(1H. bs) 6,16(1 H, bs). 7, 2~8; 0(5H. m) 10 Viite-esimerkki 10 3-(1-bentsyyliamino-l-metyyli)etyylipyrrolidiinin (P-10) synteesi 0 15 Λ«h LlA *—> / ch2nh »h \=/ m \=/

Ch/ CH3 CH, CH3 ( p — g > ( p - l o)

2Q

800 mg litiumalumiinihydridiä lisättiin 20 ml:aan vedetöntä tetrahydrofuraania, joka sisälsi 780 mg yllämainittua amidiyhdistettä (P-9) . Seosta refluksoitiin ·· 80°C:ssa 6 tuntia. Kun reaktio oli mennyt loppuun, lisät- 25 tiin peräkkäin 0,8 ml vettä, 0,8 ml 15 % NaOH ja 2,4 ml vettä, ja seosta sekoitettiin 30 min. Liukenematon aine : · · poistettiin suodattamalla ja pestiin tetrahydrofuraanilla · useita kertoja. Pesuliuokset lisättiin suodokseen ja seos konsentroitiin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin .

30 pylväskromatografia 60 g: 11a silikageeliä. Kehityksen jäi-·:·, keen n-butanoli/etikkahappo/vesi/etyyliasetaatti-seoksella" (1:1:1:1) eluaatti kerättiin ja liuotin tislattiin pois. Saatu jäännös liuotettiin kloroformiin, pestiin kylläisel-. lä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja kylläisellä ' · 25 natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä i6 87071 natriumsulfaatilla. Kloroformi tislattiin pois, jolloin saatiin 340 mg haluttua yhdistettä (P-10).

NMR(CDC4 3) : 1Ä12 (6H. s), 1, 8 (2H. m) 5 2, 3 (1H. m), 2; 9 (4H, tn) 3,72(2H, s), 7,28(5H, tn) • 7, 25-7,3 (2H. m)

Viite-esimerkki 10-1 3-(1-metyyli-l-metyyliamino)etyylipyrrolidiinin (P-10-1) synteesi 0 . L i A i II 4

BOCNH NH -CHaNH NH

" ' Y Y

CHa CHa CHa CHa (P — 9 — 1 ) (P-10-1) 20 Haluttu yhdiste (P-10-1) saatiin samalla tavalla kuin viite-esimerkissä 10 paitsi että käytettiin lähtöainetta (P-9-1), jolla oli BOC bentsoyylin tilalla ami-. - dissa (P-9).

Viite-esimerkki 11 ]’ 25 3- (l-amino-1-’inetyyli) etyylipyrrolidiinin (vesi- liuos) (P—11) synteesi :

i 7- CHjNH (H Hs/Pd-c H:N 1H

\=/ ~~-* : Y-

30 A A

CHj CHa CHj CH 3 (P-10) ( P - 1 1 ) 200 my yllämainittua amiinia (P-10), 200 mg palla-35 dium-mustaa ja 3 ml IN vetykloridihappoa lisättiin 20 ml:aan 17 87071 metanolia, ja katalyyttinen pelkistys suoritettiin huoneen lämpötilassa, ilmakehän paineessa 18 tunnin ajan.

Kun reaktio oli mennyt loppuun, lisättiin 2 ml IN vety-kloridihappoa reaktioseokseen ja katalyytti suodatettiin 5 pois. Suodos tislattiin pois, jolloin saatiin aiotun yhdisteen (P-ll) vetykloridia. Siihen lisättiin 3 ml vettä ja 2 ml 50 % NaOH, ja seos tislattiin alipaineessa (hauteen lämpötila: noin 100°C), ja tislattu amiinin (P-ll) vesiliuos kerättiin käyttämällä asetoni/kuivajää-jäähdy-10 tinta. 3 ml vettä lisättiin tislausjäännökseen, ja toistettiin sama menetelmä kuin yllä kahdesti, jolloin saatiin amiinin (P-ll) vesiliuos, joka käytettiin seuraa-vassa reaktiovaiheessa sellaisenaan.

Rf-arvo: 0,20 (n-butanoli-etikkahappo-vesi-etyyliasetaat-15 ti (1:1:1:1))

Viite-esimerkki 12

Etyyli-l-tert-butoksikarbonyyliaminosyklopropaani-karboksylaatin (P-12) synteesi 20 k/ C00C2H5 DPPA, B t a N C00C3Hs COOH t-BuOH, δ' NHBoc (P-12) 25 5,0 g tunnettua monoetyyli-1,1-dyklopropaanidikarb- oksylaattia, 4,5 ml trietyyliamiinia ja 6,9 ml difenyyli-fosforiatsidaattia (DPPA) lisättiin 80 ml:aan tert-butyy-lialkoholia, ja seosta refluksoitiin 90-100°C:ssa 4 tuntia. Kun liuotin oli tislattu, jäännös liuotettiin etyy-30 liasetaattiin ja pestiin 5 % sitruunahapolla, kylläisellä natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja kylläisellä natrium- ·. kloridin vesiliuoksella ja kuivattiin sitten. Liuotin tislattiin pois, jolloin saatiin 5,7 g haluttua yhdistettä (P-12) vaaleankeltaisena öljynä).

35 NMR (CDC13): 1,2 (7H, m), 1,44 (9H, s), 4,12 (2H, q, J=7Hz), 5,04 (1H, bs).

is 87071

Viite-esimerkki 13 1-tert-butoksikarbonyyliaminosyklopropaanikarbo-aldehydin (P-13) synteesi

5 k / COOCaHs _^ K / CHO

NHBoc ^ NHBoc ( P — 1 2 ) (P-13) 10 7,1 g esteriyhdistettä (P-12) liuotettiin 200 ml: aan vedetöntä n-heksaania. 46 ml di-isobutyylialumiini-hydridiä (IM liuos n-heksaanissa) lisättiin tipoittain liuokseen jäähdyttäen -65°C:een argonkehässä, ja seosta sekoitettiin -60....-70°C lämpötilassa 4 h. Lämpötila ko-15 hotettiin huoneen lämpötilaan ja tuotetta uutettiin riittävästi kylläisellä natriumvetysulfiittiliuoksella. Näin muodostunut sakka suodatettiin pois, ja vesikerroksen pH säädettiin 9:ään 10 % NaOHilia jäähdyttäen jäällä.

Kun oli uutettu eetterillä useita kertoja, eetterikerros 2Q pestiin kylläisellä natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Eetteri tislattiin pois, jolloin saatiin 2,6 g haluttua aldehydiä (P-13) värittömänä kiinteänä aineena.

NMR (CDC13) & ppm: 1,36 (4H, m), 1,48 (9H, s), 5,20 (1H, .

25 bs) , 9,20 (1H, s) .

· Viite-esimerkki 14

Etyyli-3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminosyklopropyy-li) akrylaatin (P-14) synteesi 30 [V™ : K/^COOCaH.

^ NHBoc ^ NHBoc (P-13) (P-14) 1,12 g 1ähtöaine-aldehydiä liuotettiin 22 ml:aan 35 vedetöntä metyleenikloridia. 2,24 g karbetoksimetyleeni- i9 87071 trifenyylifosforaania lisättiin liuokseen argonkehässä ja seosta refluksoitiin 60°C:ssa yön yli. Liuotin tislattiin pois, ja jäännökselle suoritettiin pylväskroma-tografia 120 g:lla silikageeliä, jolloin saatiin halut-5 tua yhdistettä (P—14) pääasiassa trans-muodossa eluaatis-ta, joka saatiin bentseeni/etyyliasetaatti-seoksella (2:1). Tuote oli valkean pulverin muodossa.

NMR(CDa3): 1,30(3H, t, J=7Hz), 1,40(9H, s), 10 1, 0~1. 3 (4H, ra), 4r 20 (2H, q, J=7Hz), 5, 0(1H. bs), 5,80(lH,d. J=18Hz).

6, 28 (1H. d, J=18Hz)

Viite-esimerkki 15 15 Etyyli-3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminosyklo- propyyli)-4-nitrobutyraatin synteesi (P-15) s NOa K COOCaHs BocNH [ ΓΧ -- \Ky COOCaHs

20 NIIBoc X

( P - 1 4 ) ^ (P-15) Lähtöaine-olefiiniyhdiste (P-14) liuotettiin 60 ml:aan nitrometaania. Liuokseen lisättiin 4,5 ml 1,1,3,3-25 tetrametyyliguanidiinia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, ja jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 100 g:11a silikageeliä, jolloin saatiin 960 mg haluttua yhdistettä (P-15) värittömän öljyn muodossa. - 30 KMH (CD a a): 0, 85-0. 95(4H, m), 1, 30 (3H, t. J=7Hz), 1,47 (9H. s). 2,25(111. m).

2,6 (2H, m). 4,16 (2H. q. J=7Hz), 4, 6 (2H, m). 5, 0 (1 H. bs) 20 87071

Viite-esimerkki 16 4-(1-tert-butoksikarbonyyliaminosyklopropyyli)pyr- rolidin-2-onin (P-16) synteesi 5 /’ ' 1 1Q ( P - 1 5 ) (P-16) 960 mg nitroyhdistettä (P-15) liuotettiin 50 ml: aan vedetöntä etanolia. Liuokseen lisättiin Raney-nikkeliä, ja katalyyttinen pelkistys suoritettiin huoneen lämpötilassa. Katalyytti poistettiin ja etanoli tislattiin pois.

15 Jäännös lämmitettiin 150°C:seen 5 min ajan ja sitten sille suoritettiin pylväskromatografia 80 g:11a silikageeliä, jolloin saatiin 320 g suljetturenkaista yhdistettä (P-16) kloroformi/metanoli (10:1)-eluaatista. Tuote oli värittömän pulverin muodossa.

20 NMR(CDcia): 0f7~0,8(4H, in), 1,38(9H, s).

2, 3(3H, in), 3, 4(2H, m).

5,0(1H. bs), 5; 8 (1H, bs).

‘ ·; Viite-esimerkki 17 ‘ - -: 25 4-(1-aminosyklopropyyli)pyrrolidin-2-oni-trifluo- - : . riasetaatin (P-17) synteesi 0 o

BocNH f NH -> HaN f NH · CFaCOOH

Γ. ; (P-16) ( P - 1 7 ) 1,2 ml I rl 1.1 uoriotikkuhappou ja 0,(> ml anisoli.i 35 lisättiin 230 mg:aan BOC-yhdistettä (P-16) jäähdyttäen 21 8 7 G 71 jäillä, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 h. Sitten lisättiin eetteriä reaktioseokseen, ja näin muodostunut sakka kerättiin suodattamalla. Perusteellisen eetteri-pesun jälkeen saatiin 200 mg amiini-trifluoriasetaattia 5 (P-17), joka on mainittu yllä.

Viite-esimerkki 18 3-(1-aminosyklopropyyli)pyrrolidiinin) (P-18) valmistus o

10 H,N [ NH · CFjCOOH -» Η,Ν ί NH

Σ' 15 ( P - 1 7 ) (P-18) 8 ml tetrahydrofuraania lisättiin 260 mg:aan tri-fluoriasetaattia (P-17). Sitten seokseen lisättiin 0,5 ml trietyyliamiinia jäähdyttäen jäillä, yhdisteen (P-17) liuottamiseksi siihen 300 mg litiumalumiinihydridiä li-20 sättiin liuokseen, ja seosta refluksoitiin yön yli. 0,3 ml vettä, 0,3 ml 15 % IJaOH ja 0,9 ml vettä lisättiin siihen peräkkäin jäähdyttäen jäällä, ja seosta sekoitettiin 30 min. Liukenematon aine suodatettiin pois, ja sitten suo-dokseen lisättiin 3 ml IN vetykloridihappoa. Liuotin tis-25 lättiin pois alipaineessa. Jäännökseen lisättiin 3 ml vet-" tä ja sitten 3 ml 50 % NaOH jäähdyttäen jäällä, jolloin . saatiin emäksinen seos, joka tislattiin alipaineessa (öljy-', hauteen lämpötila: noin 100°C) ja näin tislattu diamiinin (P-18) vesiliuos jäähdytettiin ja kerättiin kuivajää/ase-3Q toni-hauteessa.

Näin saatua yhdisteen (P-18) vesiliuosta käytettiin', seuraavassa reaktiovaiheessa sellaisenaan.

TLC RF-arvo: 0,14 (n-butanoli-etikkahappo-vesi-etyyliasetaatti (1:1:1:1:)).

35 Yhdisteiden (P—19) — (P — 23) synteesin reaktiotie on ' .

souraava: 22 87 071 +-> cu (4

CD

CJ

f T_^ \ O CS3 x O ,

203 I

/ ^

---- V_H

H-« A

CO n a C_) C_)

II

o_ * n

JZ

-\ a \ o ^ 5 — co _/ ° /

\ O CM ( I

=m I \ CU

/ ^ _/ öt \= I .«t * =K ' y z I < —\» *- -- . ι ·~ ::: l—/ Ϊ - ‘ ... Η-» · co = A « cp O <* I C_)v CD - .

g ^ Ä « I ~

I CM

=C \ u CM

CD ' O I ...

\ 2= CO I ·

r} , S K

z=c a / *s

-' SS

23 87 071

Viite-esimerkki 19 (S)-l-tert-butoksikarbonyylipyrrolidiini-2-meta- nolin (P-19) synteesi 4,04 g (S)-pyrrolidiinimetanolia ja 9,84 Boc-ON 5 liuotettiin 100 ml taan 75 % vesipitoista dioksaania, ja liuosta sekoitettiin 1 h. Sitten reaktioneste konsentroitiin, uutettiin kloroformilla, pestiin 0,5N NaOH:lla ja kylläisellä natriumkloridin vesiliuoksella, ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois.

10 Jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 100 g:11a silikageeliä ja se eluoitiin 2 % metanoli/kloroformi-seok-sella, jolloin saatiin 8,04 g väritöntä öljyä (P-19).

Viite-esimerkki 20 (S)-l-tert-butoksikarbonyylipyrrolidiini-2-karbok-15 sialdehydin (P-20) synteesi 10 ml liuosta, jossa oli 8,04 g alkoholia (P-19), jota saatiin yllä, dikloorimetaanissa, lisättiin 10,0 ml: aan dikloorimetaania, jossa oli 12,9 g pyridiniurnk 1 oori-kromaattia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2Q 2 h. Sitten reaktioseokseen lisättiin 100 ml eetteriä, ja seos dekantoitiin. Jäännös pestiin 200 ml:lla kloroformia. ·* Pesuliuos lisättiin orgaaniseen kerrokseen, ja seos kul-jetettiin Florisil-kolonnin läpi kromiyhdisteiden poistamiseksi. Liuotin tislattiin pois, ja jäännös puhdis-: 25 tettiin pylväskromatografialla 50 g:lla silikageeliä ja ’ - kloroformia, jolloin saatiin 4,76 g (60 %) aldehydiä (P-29) keltaisena öljynä).

NUR (CDCi i): 1, 46 OH. s), 1, 70-2, 20 (4H. m).

30 3, 3-3, 6 (2H, m). 3, S 4, 3(1H, m), 9,4-9, 6 (1H. bs)

Viite-esimerkki 21

Etyyli-trans-3-(l-tert-butoksikarbonyyli-2-pyrro-35 lidinyyli)akrylaatin (P-21) synteesi 24 8 7 O 7 Ί 4,76 g aldehydiä (P-20), jota saatiin yllä, ja 8,32 g karbetoksimetyleenitrifenyylifosforaania lisättiin 100 ml:aan dikloorimetaania, ja seosta lämmitettiin ref-luksoiden kolme päivää. Liuotin tislattiin pois, ja jään-5 nökselle suoritettiin pylväskromatografia 150 g:11a sili-kageeliä, ja eluoitiin sitten bentseeni/etyyliasetaatti-seoksella (6:1), jolloin saatiin 3,83 g haluttua yhdistettä (P-21) värittömänä öljynä.

HMIUCOci,): 1,28 (3». t. J=7 3Hz).

10 1,44(9». s). 1,6-2,2(4H. m), 3, 3-3, 55(2H, m), 4,19(2». q. J=7,3»z).

15 4,3-4, 6(1». m).

5,81(1». d. d, J=15Hz).

6, 83 (1H. d. d, J=15, 6Hz)

Viite-esimerkki 22 20 Etyyli-3-(l-tert-butoksikarbonyyli-2-pyrrolidi- nyyli)-4-nitrobutyraatin (P-22) synteesi 3,83 g esteriä (P-21), jota saatiin yllä, 3,28 g 1,1,3,3-tetrametyyliguanidiinia ja 20 ml nitrometaania sekoitettiin yhteen, ja seosta sekoitettiin huoneen läm- 25 pötilassa 24 h. Nitrometaani tislattiin pois ja jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 75 g:11a silika-geeliä, ja eluoitiin bentseeni/etyyliasetaattiseoksella (5:1), jolloin saatiin 4,5 g yhdistettä (P-22) värittömänä öljynä. . .

30 Viite-esimerkki 23 4-(l-tert-butoksikarbonyyli-2-pyrrolidinyyli)-pyrrolidin-2-onin (P-23) synteesi 3,30 g nitroyhdistettä (P-22) ja 1,5 ml Raney-nik- keliä lisättiin 50 mlraan etanolia, ja katalyyttistä pel- .·.

35 kistysta suoritettiin vuorokauden ajan. Katalyytti suo- : ‘ : 25 87071 datettiin pois, ja suodos konsentroitiin alipaineessa.

50 ml bentseeniä lisättiin jäännökseen, ja seosta refluk-soitiin kokonainen päivä ja yö. Sitten bentseeni tislattiin pois alipaineessa, ja jäännökselle suoritettiin pyl-5 väskromatografia 50 g:11a silikageeliä, ja eluoitiin kloroformi /me tanoli-seokse 11a (95:5), jolloin saatiin 2,13 g haluttua suljettu-renkaista yhdistettä (P-23) värittöminä kiteinä.

Sp. 140-143°C.

10 MUHCDCij): 1, 36 (9H. s).

1,5-2,2UH. a).

2,0-2, 4(1H. m), 2, 9-3, 6UH. m).

15 3, 70-3, 96 (1H. e)

Viite-esimerkki 24 (1) 4-asetyyli-l-bentsyyli-2-pyrrolidoni 10 ml tionyylikloridia ja 30 ml dioksaania li- 20 sättiin 4,4 g:aan l-bentsyyli-4-karboksi-2-pyrrolidonia.

Seosta sekoitettiin lämmittämällä 90-100°C lämpötilaan, .···. 30 min, ja sitten liuotin ja ylimääräinen tionyyliklo- -:-ridi tislattiin pois alipaineessa, jolloin saatiin happo-kloridi jäännös. ·..

‘ · 25 2,5 g magnesiumkloridia ja 3,5 g etyylimalonaattia “· · lisättiin 40 ml:aan vedetöntä eetteriä, ja seosta refluk- .

: soitiin 1,5 g, liuoksen saamiseksi. Happokloridin eetteri-- - liuos, joka valmistettiin yllä, lisättiin tipoittain tähän liuokseen sekoittaen ja jäällä jäähdyttäen. Kun lisäys.

30 oli mennyt loppuun, seosta refluksoitiin 1 h. Ylimäärä laimeaa rikkihappoliuosta lisättiin jäällä jäähdyttäen liuoksen saamiseksi heikosti happamaksi. Se uutettiin eetterillä ja kuivattiin.

Liuotin tislattiin pois. 10 ml el i kkalinppon, 45 ml - - · 3^ vettä ja 1 ml konsentroitua rikkihappoa lisättiin jäännök— - - 26 07071 seen, ja seosta refluksoitiin 5 h. Liuotin tislattiin pois alipaineessa. Jäännös liuotettiin kloroformiin ja pestiin 10 % vetykloridihapolla ja sitten kylläisellä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja kuivattiin. Liuotin 5 tislattiin pois, jolloin saatiin 3,3 g haluttua yhdistettä öljyn muodossa.

NMR(CDCi3) ffppm: 2,2(3H. s) 10 2, 66 (2H, d, J=7. 2Hz) 3,0-3. 6 (3H, m) 4f 32. 4, 52 (kukind, cr = 14 hz, M-q) 7,29(5H,s) 15 (2) l-bentsyyli-4-(1-hydroksi-iminoetyyli)-2-pyrrolidoni 15 ml pyridiiniä lisättiin seokseen, jossa oli 3,3 g yllaolevalla menetelmällä (1) saatua yhdistettä ja 2,5 g 20 hydrcksyyliamiini-hydrokloridia, ja seosta lämmitettiin 90°C:ssa 5 h. Vettä lisättiin reaktioseokseen, ja sitten se tehtiin happamaksi vetykloridihapolla ja uutettiin di- --' - · kloorimetaanilla. Dikloorimetaani tislattiin pois, ja saa- .

dulle jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 30 g: 25 11a silikageeliä. Kun oli eluoitu metanoli/kloroformi-seok-·/ sella (1:20), saatiin 2,6 g haluttua yhdistettä pulverimuo- ·. dossa.

NMR (CDci α) δ ppm: 30 1,8(30. s) 2, 62 (2H. d. J=7, 2Hz) 2, 9~3, 6 (3H. m) 4, 44 (2H, s) ; 35 7,28 (5H. s) : 27 87071

Viite-esimerkki 25 (1) 3-(1-aminoetyyli)-1-bentsyylipyrrolidiini 30 ml vedetöntä tetrahydrofuraania (THF) lisättiin 650 mg:aan l-bentsyyli-4-(1-hydroksi-iminoetyyli)-2- 5 pyrroiidonia, ja 500 mg:aan litiumalumiinihydridiä, ja saatua seosta refluksoitiin 20 h. Litiumalumiinihydridin hajoamisen jälkeen sakka suodatettiin ja pestiin läpikotaisin THF:11a. Pesuliuos lisättiin suodokseen. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, jolloin saatiin 587 mg ha-10 luttua yhdistettä vaaleankeltaisena öljynä.

NMR (CDCl^) k ppm: 0,1^1,1 (3H, 2 dublettiparia, noin 1:1, J = 7 Hz), 3,55 (2H, s), 7,25 (5H, s).

(2) 3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)-1- bentsyylipyrrolidiini 15 580 mg ylläolevassa vaiheessa (1) saatua yhdistet tä ja 730 mg Boc-ON liuotettiin dehydratoituun THF:iin ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 h. Kun lähtöaineet olivat täysin kadonneet, THF tislattiin pois. Siihen lisättiin etyyliasetaattia ja seos pestiin 0,2N 20 NaOH:lla kahdesti ja sitten kerran kylläisellä natrium-kloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois, ja jäännökselle Γ suoritettiin pylväskromatografia 30 g:11a silikageeliä.

Kun oli eluoitu 2 % metanoli/kloroformi-seoksella, saa- : 25 tiin 634 g haluttua yhdistettä öljyn muodossa.

NMR (CDCl^) ppm: 1,0 ^ 1,2 (3H, 2 dublettiparia, · J = 7 Hz), 1,45 (9H, s), 3,6 (2H, AB-tyypin kvartetti), 7,3 (5H, s).

(3) 3—/1 —(metyyliamino)etyyli7~l“bentsyylipyrro- 30 lidiini 642 mg ylläolevassa vaiheessa (2) saatua yhdistet- . tä ja 250 mg litiumalumiinihydridiä lisättiin 10 ml:aan dehydratoitua THF, ja seosta refluksoitiin 2 h. Jäähdytyksen jälkeen lisättiin 0,25 ml vettä, 0,25 ml 15 % 35 NaOH:n vesiliuosta ja 0,75 ml vettä, peräkkäin, ja liuke- 28 8 7 O 7 Ί neraaton aine suodatettiin pois. YHF:n pesuliuos (10 ml) lisättiin emäliuokseen ja liuotin tislattiin pois. Saatiin 448 mg haluttua yhdistettä värittömän öljyn muodossa. NMR (CDCl^) ri ppm: 0,9 ^ 1,1 (2H, 2 dublettiparia, 5 J = 7 Hz), 2,35 (3H, s), 3,55 (2H, s), 7,20 (5H, s).

(4) 3-/1-(metyyliamino)etyyli7~pyrrolidiini 20 ml etanolia ja 500 mg 5 % Pd-C (50 % märkä) lisättiin 448 g:aan yhdistettä, joka saatiin ylläolevassa vaiheessa (3), ja pelkistys suoritettiin 40-50°C:ssa 4,3 10 atm paineessa. Seitsemän tunnin kuluttua katalyytti suodatettiin pois, ja suodos konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin 240 mg haluttua yhdistettä vaaleankeltaisena öljynä.

NMR (CDCl^) & ppm: 0,95^1,15 (2H, 2 dublettiparia, J = 7 15 Hz), 2,39 (3H, s).

(5) 3-/1-(tert-butoksikarbonyyliamino)etyyli/-pyr-rolidiini 30 ml etanolia lisättiin seokseen, jossa oli 2,35 g ylläolevassa vaiheessa (2) saatua yhdistettä, ja 1,1 g 5 % 20 Pd-C (50 % märkä) ja pelkistys suoritettiin noin 50°C:ssa, 4,3 atm paineessa, 4,5 tunnin ajan. Katalyytti poistet- .”·. / ^ tiin, ja sitten etanoli tislattiin pois, jolloin saatiin 1,5 g haluttua yhdistettä värittömän, viskoosin nesteen ;· muodossa.

- 25 NMR (CDC13) £ ppm: 1,42 (9H, s), 1,12, 1,15 (kukin 1,5H, d, J = 7Hz) . .

Viite-esimerkki 26 .. .

(12) 4-(1-aminopropyyli)-1-bentsyyli-pyrrolidin- 2-oni . .

noh : : 30 , ^2 :..

,-Ni

MeOH

CH2C6H5 (11) (12) 35 Valmistettiin oksiimiyhdiste (11) samalla menetel- : : 29 8 7 0 71 mällä kuin on esitetty viite-esimerkissä 25, paitsi että käytettiin etyylimetyylimalonaattia etyylimalonaatin tilalla. 3,0 g oksiimiyhdistettä liuotettiin 30 ml:aan me-tanolia, minkä jälkeen siihen lisättiin 4 ml Raney-nikke-5 liä reaktion suorittamiseksi huoneen lämpötilassa 24 tuntia. Katalyytti suodatettiin pois, ja liuotin tislattiin pois. Tuloksena saatiin 2,8 g (100 %) amiiniyhdistettä (12) vaaleankeltaisena öljynä.

NMR (CDCI3) δ ppm: 10 0,91 (3H, t, J = 7 Hz) lfl - 1,5 (2H, m), lr9 - 2,7 (4H, m) 2,9 - 3,4 (2H, m), 4,46 (2H, AB-q, J = 16 Hz) 15 7,28 (5H, s) (13) l-bentsyyli-4-(1-tert-butyylioksikarbonyyli-aminopropyyli)-pyrrolidin-2-oni ja HPLC-erotus (yhdisteet 14-A ja 14-B) 3,0 g amiiniyhdistettä (12) liuotettiin 20 ml:aan 20 tetrahydrofuraania, minkä jälkeen siihen lisättiin 3,3 g

Boc-yhdistettä, ja sen jälkeen sekoitettiin seosta huo- ..." neen lämpötilassa kokonainen päivä ja yö. Liuotin tislat-'· tiin pois, ja jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia. .***. .·. : Sitten jäännös pestiin 10 % sitruunahapolla, 0,5N NaOH- .. : 25 liuoksella ja kylläisellä NaCl-liuoksella ja kuivattiin. Jäännökselle, so viskoosi öljy, suoritettiin korkean erotuskyvyn nestekromatografia (HPLC) steeristen isomeerien (14-A) ja (14-B) erottamiseksi.

Erotusolosuhteet: 00 Kolonni: Nucleosil 50-5 (20 φ x 250 mm) .

Liuotin: etyyliasetaatti-tetrahydrofuraani (9:2 V/V) :.

Virtausnopeus: 6,6 ml/min ·;·

Retentioaika: isomeeri (14-A): 34 minuuttia isomeeri (14-B): 37 minuuttia ; 05 Isomeeri (14-A) 1,4 g (33 %), sp 123-124°C.

87071 30

Alkuaineanalyysi yhdisteelle cigH28N203:

Laskettu: C 68,65, H 8,49, N 8,43 % Löydetty: C 68,84, H 8,51, N 8,37 % NMR (CDC13) b ppm: 5 0f90 (3H, t, J = 7,5 Hz) lfl - 1,6 (2H, m), 1,40 (9H, s) 2,1 - 2,6 (3H, m) f 2f9 - 3,7 (3H, m) 4?1 - 4,4 (1H, m), 4,43 (2H, AB-q, J = 16 Hz) 7,28 (5H, s)

Isomeeri (14-B) 1,4 g (33 %),sp 114-117°C Alkuaineanalyysi yhdisteelle Laskettu: C 68,65, H 8,49, N 8,43 % 15 Löydetty: C 68,88, H 8,49, N 8,49 % NMR (CDC13) £ ppm: 0,90 (3H, t, J = 7,5 Hz) 1,0 - 1,6 (2H, m), 1,40 (9H, s) 20 2,0 - 2,6 (3H, m) 2,9 - 3,6 (3H, m) 4,22 (2H, AB-q, J = 16 Hz) 4,3 - 4,5 (1H, m), 7,28 (5H, s) 25 Isomeeri (15-B) : 4-(1-aminopropyyli)-1-bentsyylipyrro-lidin-2-oni 5 ml trifluorietikkahappoa ja 1 ml anisolia lisät-: . tiin 1,3 g:aan Boc-yhdistettä (14-B), ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuos konsent-30 roitiin alipaineessa, minkä jälkeen vettä lisättiin jäännökseen, ja jäännös pestiin, säädettiin alkaaliseksi .* . NaOH:lla, uutettiin kloroformilla ja kuivattiin. 800 mg (88 %) amiiniyhdistettä (isomeeri 15-B) saatiin värittömänä öljynä.

35 31 87071 NMR (CDC13) ppm: 0,92 (3H, t, J = 7,5 Hz) 1,1 - 1,5 (2H, m), lr9 - 2,7 (4H, m) 5 2,9 - 3,5 (2H, m) 4,45 (2H, AB-q, J = 16 Hz), 7,28 (5H, s)

Isomeeriä (15A) voidaan myös saada samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu yllä.

Isomeeri (16-B): 3-(1-aminopropyyli)-1-bentsyyli-10 pyrrolidiini 800 mg amiiniyhdistettä (15-B) liuotettiin 30 ml: aan tetrahydrofuraania, minkä jälkeen siihen lisättiin 700 mg litiumalumiinihydridiä, ja seosta refluksoitiin lämmöllä 4 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen lisättiin 0,7 ml 15 vettä, 0,7 ml 15 % NaOH-liuosta ja 2,1 ml vettä, pelkistys-liuokseen tässä järjestyksessä, minkä jälkeen reaktio-seosta sekoitettiin 30 minuuttia, liukenematon aine poistettiin siitä suodattamalla, ja suodos konsentroitiin. Tuloksena saatiin 750 mg (100 %) bentsyylipyrrolidiini-20 yhdistettä (isomeeri 16-B) värittömänä viskoosina öljynä). NMR (CDC13) ^ ppm: ; 0,92 (3H, t, J = 8 Hz) , 1,0-1,7 (7H, m), 1,7-2,9 (3H, m) , 3,60 (2H, s), 7,30 (5H, s).

Isomeeriä 16-A voidaan saada myös samanlaisella 25 menetelmällä kuin kuvattiin yllä.

Isomeeri 17-B: l-bentsyyli-3-(1-tert-butoksi- ; ;'· karbonyyliaminopropyyli)pyrrolidiini ‘.

750 mg bentsyylipyrrolidiiniyhdistettä (isomeeri 16-B) liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraania, minkä jäi-. . 30 keen liuokseen lisättiin 830 mg Boc-ON-yhdistettä, ja λ.

seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti. Kun liuotin oli tislattu pois, lisättiin jäännökseen etyy- : '·" liasetaattia, ja jäännös pestiin 0,2N NaOH-liuoksella, vedellä ja kuivattiin. Saatu öljyinen tuote puhdistettiin : :.: 35 silikageelikromatografisesti (Si02 20 g). Tuloksena saa- : 32 87071 tiin 930 mg (85 %) Boc-amiiniyhdistettä (isomeeri 17-B) värittömänä öljynä fraktiosta, joka eluoitiin bentseeni-etyyliasetaatti-seoksella (1:1 V/V).

NMR (CDC13 S ppm: 5 0,90 (3H, t, J = 8 Hz) 1,1 - 1,8 (4H, ra), 1,44 (9H, s) 1,8 - 2j7 (5H, ra) 3fl - 3,5 (1H, m), 3,58 (2H, AB-q, J = 14 Hz) 10 5,1 - 5,4 (1H, m), 7,30 (5H, s)

Isomeeriä (17-A) voidaan myös saada 77 % saantona samanlaisella menetelmällä kuin kuvattiin yllä.

Isomeeri (18-B): 3-(1-tert-butoksikarbonyyliamino-propyyli) pyrrolidiini 15 490 mg bentsyylipyridiiniyhdistettä liuotettiin 30 ml:aan etanolia, minkä jälkeen siihen lisättiin 1,0 g 5 % Pd-C (50 % märkä) ja seokselle suoritettiin katalyyttinen pelkistys 8 tunnin aikana 40-50°C lämpötilassa, 4 atm paineessa. Kun katalyytti oli suodatettu pois, liu-20 otin tislattiin pois. Tuloksena saatiin 350 mg (100 %) väritöntä viskoosia öljyä (isomeeri 18-B), joka sisälsi pienen määrän kiteitä. '·' NMR (CDC13) S ppm: \ 0,94 (t, J = 7 Hz), 1,44 (s), 1,6-2,2 (m), 2,8-3,8 (m), 25 4,5-4,8 (m) . \

Isomeeriä (18-A) voidaan myös saada samanlaisella " menetelmällä kuin kuvattiin yllä.

Esimerkki 1 7-/3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)-1-pyrro- : 30 lidinyyli/-l-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-di- hydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo (isomee-ri A:l-A-1) syntetisoitiin seuraavalla menetelmällä:; ; : 35 33 8 7 071

SC

CZD

o ^ -0<i o- = /~\ rc 2= n

CD

CD

CD

n o / . sc c_) <

CO

^ I

=2 a.

3 ^ ·· CJ « «sc · · ·

... CD C_J

U y "V v I_/ :.;

CD

CD

“ö-o · I

Ö*

CsS tx.

34 8 7 0 71 530 mg 1-syklopropyylitrifluorikarboksyylihappo-johdannaisia (kaava M-l), 390 mg 3-(1-tert-butok-sikarbonyyliamino-etyyli)-pyrrolidiinin isomeeriä (P-3A) ja 190 mg trietyyliamiinia lisättiin 25 ml:aan asetonitrii- 5 liä, ja seosta refluksoitiin 1 h. Liuotin tislattiin pois, ja jäännökseen lisättiin vettä. Liukenematon aine suodatettiin pois ja tuote pestiin asetonitriilillä ja eetterillä peräkkäin ja kuivattiin, jolloin saatiin 548 g haluttua yhdistettä (1-A-l). Sp. 195-198°C.

10 IR : 1725, 1620 NMR : lr 22 (d, J=7Hz) lt 1~1T 3 (m) 1, 46 (9H, s) 15 lt 5-2, 4(3H, ra) 3,,4-4, 2 (6H, ra) 4, 3~4, 6(1H. ra) on 7,80 (1H, dd, J=14Hz, 2Hz) 8t73 (1H, s) . . Alkuaineanalyysi yhdisteelle C24H29F2N3°5: .

Laskettu: C 60,37, H 6,12, N 8,80 % .

Löydetty: C 60,10, H 6,06, N 8,76 % 25 7-^3-(1-aminoetyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l-syklo- propyyli-6,8-dif luori-1,4-dihydro-4-oksokino-liini-3-karboksyylihappo (isomeeri A: l-A-2) tämän J · : keksinnön yhdiste 30 35 87071 as

CD

CD y-,

CO

CD ==/ < V-<‘ “ /"\ H- as

Cl =

>L

SC

CD

CD

C-J

0=ζν-<] ? ·:::· / V rH ^ <( X-CS. ^ “V^\ SC * · as - ·

M

CD

CJ

CJ . .

n o sc . .

C-) 36 87071 12 ml trifluorietikkahappoa ja 4,5 ml anisolia lisättiin 520 mg:aan karboksyylihappoa (1-A-l), joka saatiin esimerkissä 1-1, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 min. Liuotin tislattiin pois, vettä lisät-5 tiin jäännökseen ja seos pestiin eetterillä. Vesipitoisen kerroksen pH säädettiin 8,5:ksi kylläisellä natriumvety-karbonaattiliuoksella ja neutraloitiin sitten pH 7,0-7,2: een konsentroidulla vetykloridihapolla. Vesipitoinen kerros uutettiin läpikotaisin kloroformilla ja kuivattiin.

10 Kloroformi tislattiin pois ja saatu kiinteä aine uudelleen-kiteytettiin konsentroidusta vesipitoisesta ammoniakki/eta-noli-seoksesta, jolloin saatiin 300 mg haluttua karboksyylihappoa (l-A-2).

Sd 193 - 200 eC

15 ‘ ' IR : 1615 1580 (olkapää), i460 NMR(NaOO) : l,Q5(d. J=6Hz) 0,9-1, 3 (m) 20 1,4-1, 7 (1H, m) 1,8-2, 3 (2H, m) . ; 2,74(111, kvintetti) : 3, 2-3. 9(5H. ra) ·;;· 25 7, 53 (1 H,. dd. J=15Hz. 2Hz) 8, 46(1H, s) \;>

Alkuaineanalyysi yhdisteelle ^2^2^2^^3^^2°1 _ - Laskettu: C 57,06, H 5,92, N 10,51 % 30 Löydetty: C 57,35, H 5,81, N 10,42 % ; ·

Esimerkki 2 7-/3-(1-tert-butoksikarbonyyliaminoetyyli)-1-pyrro-lidinyyli7-l-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-di-hydro-4-oksokinoni-3-karboksyylihappo (isomeeri B: 35 1-B-l) syntetisoitiin seuraavasti: : - : 37 87071 ss

CD

CD

/ ? Ö- ' ~ /“Λ

S

η= as η

CD

C_3 C_> n *—s n Λ 3S ' C_)

OQ

co ^ i

= CU

C_J w C_5 n

M EC

CD C_> s_/ \ seas · I_/ :;·

SS

CD

CD

C_) -OKI i

Oa

Cc, Cc_ 38 87071 500 mg 1-syklopropyylitrifluorikarboksyylihappo-johdannaista (kaava M-l), 350 mg 3-(1-tert-butoksi-karbonyyliaminoetyyli)pyrrolidiinin isomeeriä (P-3B) ja 180 mg trietyyliamiinia lisättiin 20 ml:aan asetonitrii-5 liä, ja seosta refluksoitiin yksi tunti. Liuotin tislattiin pois, ja sitten jäännökseen lisättiin vettä. Liukenematon aine suodatettiin pois. Kun oli pesty asetonitriilil-lä ja sitten eetterillä ja kuivattu, saatiin 428 mg haluttua yhdistettä (1-B-l). Sp. 2Q1-20^C.

10 IR : 1720 , 1620 NMR .<5 ppm : l;25(d, J=7Hz) 1. 1-1. 4 (m)

i I

1, 45 (9H. s) 15 1,5-2,4(36. m) 3, 5-4, 2(6H, in) 4,3-4, 6 (1H, br.d) 7,80 (1H, dd. J=14Hz, 2Hz) 20 8, 72 (1H, s) C: : : ' Alkuaineanalyysi yhdisteelle ^2402^2^0^' 1/41^0: : Laskettu: C 59,80, H 6,17, N 8,72 % : : Löydetty: C 59,82, H 5,81, N 8,41 % ; 25 7-/3-(1-aminoetyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l-syklo- ·.·. propyyli-6,8-dif luori-1,4-dihydro-4-oksokinolii- ; ni-3-karboksyylihappo (isomeeri B: l-B-2) 39 87071

CD

CD x-N

-£>< · O' = /-\ n as

A

τ~ 'Ή CD Ή CD O C_) (/) 0 ->-4

Cr. £ u § =c.

CD

CD

~fcr-<| * :! Q·^ “ -- - <1, ; as

=E

u o CO . - 40 87071 10 ml trifluorietikkahappoa ja 1 ml anisolia lisättiin 410 mg:aan karboksyylihappoa (1-B-l), jota saatiin esimerkissä 2-1, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 min. Liuotin tislattiin pois, ja vettä li-5 sättiin jäännökseen. Eetteripesun jälkeen vesikerroksen pH säädettiin 8,5:ksi kylläisellä natriumvetykarbonaatti-liuoksella, neutralisoitiin sitten pH 7,0-7,2:een konsentroidulla vetykloridihapolla, ja uutettiin kloroformilla.

Kun oli kuivattu vedettömällä natriumsulfaatilla, kloro-10 formi tislattiin pois, ja jäljellä oleva kiinteä aine uudelleenkiteytettiin konsentroidusta ammoniakki-vesi/eta-noli-seoksesta, jolloin saatiin 251 g haluttua yhdistettä (l-B-2). Sp. 213-215°C.

IR : 1615, 1580, 1460 15 NMR(NaOD) : 1,11((1. J=6Hz) 1,3**1# 7 (1H, m) 1,9-2, 2 (2H. m) 2q 2, 79 (1H, «vintetti ,J =6Hz) 3,3~4f0(5H, m) 7, ¢7 (1H. dd. J= 15Hz, 2Hz) 8, 47 (1H. s) 25 Alkuaineanalyysi yhdisteelle ci9H21F2N3°3* 1/4H20: ’

Laskettu: C 59,76, H 5,67, N 11,00 % ’ Löydetty: C 59,79, H 5,90, N 11,02 %

Esimerkki 3 7-^3-(1-aminoetyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l-etyyli-30 6,8-dif luori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karb- oksyylihappo (isomeeri A: 2-A) : 41 8 7071 3=

CD

CD

C_> >=\ =5 - □=< ==-^ < ö-ä ~ =5 < =

CO

Du S Ή / \ ° ( / - \ " * >—5 \ X =5 .-:-.

3= CD

=z= C_J

U o O Cr.

CO C_> • 3=

CD

CD ---

CJ

= 7 CD 5E C_> 1 Π- !

Cr.tr, 42 « « « « 87071

Isomeeri (2-Α) syntetisoitiin samalla tavalla kuin kuvattiin isomeerin (2-B) synteesissä, esimerkissä 4. Sp. 212-215°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle ci8H2iF2N3°3*1/4^0: ^ Laskettu: C 58,45, H 5,86, N 11,36 % Löydetty: C 58,40, H 5,71, N 11,41 % NMR (NaOD): 1,04 (3H, d, J=7 Hz), 1,36 (3H, t, J=7 Hz), 1,3-1,6 (1H, m), 1,8-2,2 (2H, m).

Esimerkki 4 7-/3-(1-aminoetyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l-etyyli- 6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karb-oksyylihappo (isomeeri B: 2-B) 43 ___ 87071

SB

CD

CD

S

Pr ; — =5 CQ a =

CO

Oh =b id O 1

\_/ S

as es • as c_) u o --.: o EX.

CQ c_> Ή »«H · · * *

CD

CD

CD

\ 3? CO

/ ' « I ...

C3=< as—c_j I

& 5 $

Cx. CL·.

44 b 7 O 7 Ί 160 mg 1-etyylitrifluorikarboksyylihappojohdannaista (kaava M-2) , 166 mg 3-(1-tert-butoksikar-bonyyliaminoetyyli)-pyrrolidiinia (P-3B) ja 150 mg tri-etyyliamiinia lisättiin 10 ml:aan asetonitriiliä, ja seos-5 ta lämmitettiin hauteen lämpötilassa 100-110°C sekoittaen 3 h. Jäähdytyksen jälkeen liuotin tislattiin pois alipaineessa. Jäännös pestiin vedellä, etanolilla ja eetterillä peräkkäin ja sitten kuivattiin. 0,5 ml anisolia ja 5 ml trifluorietikkahappoa lisättiin kiinteään ainee-10 seen, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 30 min. Sitten liuotin tislattiin pois alipaineessa. Vettä lisättiin jäännökseen, ja seos pestiin kahdesti kloroformilla. Vesikerros tehtiin emäksiseksi kylläisellä natrium-vetykarbonaattiliuoksella, neutraloitiin konsentroidulla 15 vetykloridihapolla, uutettiin kloroformilla kolmesti ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, ja saatu jäännös uudelleenki-teytettiin konsentroidusta ammoniakki-vesi/etanoliseok-sesta, jolloin saatiin 105 mg haluttua yhdistettä (2-B) 20 hienoina kiteinä. Sp. 212-217°C (hajoaa).

. .·. Alkuaineanalyysi yhdisteelle ci8H21F2N3°3* 3/4H20: ·***.

‘ Laskettu: C 57,06, H 5,99, N 11,09 % Löydetty: C 57,38, H 6,06, N 11,05 % '· : \ NMR (NaOD) : ·*' 25 1,11(3». d. J=7Hz) ":·=

1,10 (3H. t. J=7Hz) V

1,4-1, 7 (1H. «) 1,9-2,2(2H. m) 30 2, 80(1». q. J=7Hz) 3, 4-3,9 (4H. m) 4, 35(2». m) 7, 63 (1H. dd, J=16Hz. 2Bz) 35 1 : : : 8,32(1«. s) 87071

Esimerkki 5 l-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-7-/2-(1-metyyliaminoetyyli)-l-pyrrolidinyyli/-4-oksokino-liini-3-karboksyylihappo (isomeeri A: 3-A) 5 Tämä yhdiste syntetisoitiin samalla tavalla kuin on kuvattu isomeerin (3-B) synteesissä, esimerkissä 6.

Sp. 193-197°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C20H2 3F2N3°3’1//4H2O:

Laskettu: C 60,67, H 5,98, N 10,61 % 10 Löydetty: C 60,83, H 5,78, N 10,61 % NMR(NaQQ) : 1,Q1(3H. d. J=7Hz) 0,9-1, 3 (4H, tn) 1T 4-1, 7 (1H. m) is 2,0-2,2 (2H. tn) 2f 30 (3H, s) 2,4-2,6(lH, m) 3,2-3, 9 (5H. tn) 20 7T 53 (1H, dd. J=15Hz, 2Hz)

8,46(13. s) O

Esimerkki 6 l-syklopropyyli-6,8-dif luori-1,4-dihydro-7-/3- (1- "... 25 metyyliaminoetyyli-l-pyrrolidinyyli7-4-oksokino- : liini-3-karboksyylihappo (isomeeri B: 3-B) . .·.

46 87071 ns

CD

CD

—Ö~<] «o ο - /“\ S-

^ EC

CQ £ xr <-» a.

32 ns as O . . · 3= - - c_> CX. Ci.

1 :; 47 o 7 o '7 ] O / O / j 200 mg yhdistettä M-l lisättiin 3 ml:aan dimetyy-lisulfoksidia. Ulkoinen lämpötila kohotettiin 110-120°C: seen ja sitten siihen lisättiin 200 mg 3-(1-metyyliamino)-etyylipyrrolidiinia (P-4B) ja reaktiota suoritettiin vie-5 lä 2 h ajan. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, ja jäännös pestiin pienellä määrällä vettä, etanolia ja eetteriä peräkkäin, ja uudelleenkiteytettiin konsentroidusta vesipitoisesta ammoniakki/etanoli-seoksesta, jolloin saatiin 90 mg haluttua yhdistettä (3-B). Sp. 220-230°C (hajoaa).

10 Alkuaineanalyysi yhdisteelle ^1/21^0:

Laskettu:C59,99, H 6,04, N 10,49 % Löydetty: C 59,74, H 5,79, N 10,45 % NMR(NaOD) : lf 08 (3H. d, J=7Hz) 15 0, 9-1, 3 (4H, o) 1,4-1, 7 (1H, u) 1, 9-2, 3 (2H. m) 2, 30(3H. s) 20 2, 4-2. 7 (1H. b) 3, 3-4, 0(5H. a) 7, 55 (1H, dd. J=14Hz. 2Hz) 8,46(111, s) 25 ··. : • · · « « ·

* · ·· I

• · * 30 V/ 87071 48

Esimerkki 7 7-/3-(1-aminopropyyli)-l-pyrrolidinyyli/-l-syklo-propyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini- 3-karboksyylihappo 5 Ylimäärä raakaa 3-(1-tert-butoksikarbonyyliamino- propyyli)pyrrolidiinia (P-5) ja 100 mg trifluorikarboksyy-lihappoa (M-l) lisättiin 5 ml:aan dimetyylisulfoksidia, ja seosta sekoitettiin lämmittäen hauteen lämpötilassa 110-120°C 30 min. Liuotin tislattiin pois alipaineessa, 10 minkä jälkeen jäännökseen lisättiin eetteriä, ja seosta sekoitettiin ja dekantoitiin sakan saamiseksi. 2 ml tri-fluorietikkahappoa ja 1 ml anisolia lisättiin sakkaan, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 min. Liuotin tislattiin pois alipaineessa. Näin saadulle jäännökselle 15 suoritettiin pylväskromatografia 5 g:11a silikageeliä.

Kun oli eluoitu kloroformi/metanoli/vesi-seoksen (7:3:1) alemmalla kerroksella, eluaatti uudelleenkiteytettiin eta-noli/väkevä ammoniakin vesiliuos-seoksesta, jolloin saatiin 37 mg haluttua yhdistettä vaaleankeltaisina kiteinä.

20 Sp. 177-179°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle 020^3^^2^^^^2°1 Laskettu: C 60,67, H 5,98, N 10,61 % V: Löydetty: C 60,33, H 5,70, N 10,68 % 25 NMR(DMSO-de) :0,92(3H. t, J=7Hz) 1,25 <4H, m) 1,1-1,3(111. m) //.

1,3-1,75(2«. d - tn) 2, K2H. m) 3, 5-3, 95 UH. m) i 30 4, 1 (1H, tn) 8,76 (1H. d-d, J=2Hz, 14Hz) :V: 8, 66 (1H. s) 35 49 87071

Esimerkki 8 7-/3-(1-aminopropyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l-etyyli- 6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karb-oksyylihappo .. rXX>" 10 [ C2H5 C2H5 54 mg haluttua yhdistettä vaaleankeltaisten, neu-lanmuotoisten mikrokiteiden muodossa, saatiin 100 g:sta 15 yhdistettä M-2 samalla tavoin kuin on kuvattu esimerkissä 7. Sp. 2Q0-2Q2°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle CigH23N3F2°3:

Laskettu: C 60,15, H 6,11, N 11,08 % Löydetty: C 60,02, H 6,10, N 11,06 % 20 NMR(DMSO-d6) :0,97 (3H. t. J=7Hz) 1,43(3H. t. J=7Hz) .···.

lf 55 (1H, tn) 1. 70 (2H. m) jT: ; 25 2; 15 ja 2r 45 (kukin 1H, m) 3, 17 (1H, o) 3.57-4. 0(4H. tn) 4f 58 (2H, q. J=7Hz) : 7, 82 (1H. d*d, J=2Hz, 14Hz) K: 30 8; 91 (1 Hv s)

Esimerkki 9 *·’·' 7-/5-(1-amino-l-metyyli)-etyyli-]-pyrro]idinyyli7~ ' l-syklopropyyli-b, 8-dif luori-1,4-dihydro-4-okso- Γ.: kinoliini-3-karboksyylihappo : ; '· 35 * 50 87071 is* /“\ Μ<! _ . == 't_>

'' t L M

τ-t = CL, rs /" \ % s • =E \t_> ...

n • ; S3 - · as : :

CD

O - - u :*.

—ö~<l ΐ ' VT 5

Cc. tx_ ; 51 87071 4,5 ml vesiliuosta, joka sisälsi 100 mg (0,35 mmol) yhdistettä M-l ja vähintään moolisuhteessa 2 yhdisteeseen M-l nähden amiinia (P-ll), lisättiin 10 mlraan dimetyyli-sulfoksidia, ja seosta sekoitettiin lämmittäen hauteen läm-5 pötilassa 150°C 40 min. Jäähdytyksen jälkeen saostetut kiteet kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä, etanolilla ja eetterillä peräkkäin. Kiteitä käsiteltiin aktiivi-hiilellä ja ne uudelleenkiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 50 mg haluttua yhdistettä kiteisenä pulverina.

10 Sp. 227-230°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C20H23F2N3°3*

Laskettu: C 59,99; B 6,04; N 10,50 Löydetty: C 60,02; H 5,98; N 10,47 15 NMR(NaOO) : 0, 84~lf 32(8H, m) 1, 5~2„ 08 (2H, 01) 2f 20 (1H, ra) 3, 34-4. 04 (5H. ra) 20 7,57 0η. d. J=14Hz) 8,47 011. s)

Esimerkki 10 ' 7-/3-(1-amino-l-metyyli)-etyyli-l-pyrrolidinyyli7- -* ' 25 l-etyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini- ..

3-karboksyylihappo g

yW°°H

30 f F . t.«.

CIO CH, 187 mg haluttua karboksyylihappoa saatiin 173 mg: 35 sta yhdistettä M-2 samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 9.

87071

Sp. 235-240°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C19H23F2N303*H20:

Laskettu: C 57*42; H 6,34; N 10,57 5 Löydetty: C 57,38; H 6,07; N 10,47 NMR(NaOD) : 1,12(6H, s) 1, 40 (3H, t, J=8Hz) 10 1,70 ja 1 96 (kukin 1H, m) 3,5 ja 3,76 (kukin 2H, m) 4f34(2H, in) 7, 64 (1 H, d, J=14Hz) 15 8, 32(1H, s) 53 87071

Esimerkki 11 l-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-7-/3-(1-metyyli-l-metyyliamino)-etyyli-l-pyrrolidinyyli/- 4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo se C3 C3 (_> o·*· “ /“\ - s<! - A g ' * s u a.

S

- /“\

Sd ^

35 'U

s: n ΖΣΖ

CJ

SS

es o

CJ

==^=N__/ ~ C3==/ 2:—»-4 Q- s

Ct. Cc.

54 87071 90 mg yhdistettä M-l ja 60 mg 3-(1-metyyli-l-metyyliamino)-etyylipyrrolidiinia (P-10-1) lisättiin 5 ml:aan dimetyylisulfoksidia, ja reaktio suoritettiin hauteen lämpötilassa 70°C 30 min ajan. Sitten liuotin tis-5 lättiin pois alipaineessa, ja jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 10 g:11a silikageeliä. Kun oli kehitetty kloroformi/metanoli/vesi-seoksen (7:3:1) alemmalla kerroksella, tuote uudelleenkiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 55 mg haluttua yhdistettä. Sp. 216-218°C 10 (hajaantuu).

Alkuaineanalyysi yhdisteelle * 1/28^0:

Laskettu: C 60^86; B 6,32; H 10,14 Löydetty: C 60,65; H 5,99; N 10,07 15 NMR(NaOD) s 1^ 0-1, 2 (4H. m) 1, 08 (6H. s) 2,24(3H. s) 3, 60 (1H. m) 20 7, 63 (1H. d. d, J=14Hz ja 2Hz) 8, 48 (1H. s)

Esimerkki 12 ' - 7-/3-(1-aminosyklopropyyli)-l-pyrrolidinyyli7~l- syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokino- _ 25, liini-3-karboksyylihappo 55 87071 ΠΞ

CD

CD

VC

/·\ =s / i «

00 = fH

cv as h< (1 3= as

CD

CD ...

C_> -ζ><7

)-( S

y>“· ~

Cx. Cx- 56 87071 9 ml vesiliuosta, joka sisälsi 130 mg (0,46 mmol) lähtöyhdistettä M-l ja vähintään moolisuhteessa kaksi yhdisteeseen M-l nähden 3-(1-aminosyklopropyyli)-pyrro-lidiiniä (P-18), lisättiin 20ml:aan dimetyylisulfoksidia, 5 ja seosta sekoitettiin lämmittäen hauteen lämpötilassa 130-150°C 30 min. Kun lähtöaineiden katoaminen oli varmaa, liuotin tislattiin pois alipaineessa, ja jäännökselle suoritettiin pylväskromatografia 20 g:11a silikageeliä. Kun tuote oli kehitetty kloroformi/vesi/metanoli-seoksen (8:3:1) 1Q alemmalla kerroksella, tuote uudelleenkiteytettiin metano-li/kloroformi/eetteri-seoksesta, jolloin saatiin 52 mg haluttua tuotetta. Sp 227-230°C.

NMR: 0,92-1,18 (4H x 2, m), 1,5 & 2,1 (kuten 1H, m), 2, 52 (1 H, m) 3f 1-4. 0 (2H x 2. in) 3T4(1H, tn) 7T 50 (1H, d. J=14Hz) 20 8T 44 (1 H. s)

Alkuaineanalyysi yhdisteelle ^0^21^^3^3*3/2H20:

Laskettu: C 57,68, H 5,81, N 10,09 % Löydetty: C 57,31, H 5,66, N 10,39 % \ ’ .:.; Esimerkki 13 25 7-^3-(1-aminosyklopropyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l- ··. * etyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini- 3-karboksyylihappo ) 30 9ΥΎ^ίαΜ m2^ " c«h» ; 35 30 mg haluttua karboksyylihappoa saatiin 88 mg: 3ta.

57 87071 yhdistettä M-2 samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 12. Sp. 186-197°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle 0^^2^^202"^0: 5 Laskettu: c 57^71, H 5r86; N 10,63 Löydetty: c 57,90; H 5,81; N 10,49 NHR(NaQO) : 0, 92-1,18 (4H, oi) lr 43 (3H. t, J=7Hz) 10 1; 60 ja 2} 15(2H, .m) 2, 60 (1H, m) 3r4~3;9(4H. in) 4.4(2H, m)

15 T

7, 75 (1H, d, J=14Hz) 8, 33 (1H. s) 20 Esimerkki 14 l-syklopropyyli-6,8-dif luori-1,4-dihydro-7-/^3- (2S)-pyrrolidinyyli)-l-pyrrolidinyyli7-4-oksokino- liini-3-karboksyylihappo .'!! 25

; O

*\ ]l co°H

35 58 87G71 508 mg Boc-yhdistettä (P-23), 10 ml trifluorietik-kahappoa (TFA) ja 1 ml anisolia sekoitettiin yhteen, ja seosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 1 h. TFA tislattiin pois alipaineessa, ja sitten jäännökseen lisättiin 5 eetteriä. Dekantoinnin jälkeen saatuun sakkaan lisättiin 20 ml tetrahydrofuraania, so 3-(2S)-pyrrolidinyylipyrroli-din-2-oni-trifluoriasetaatti (P-24-1). 500 mg litiumalumiini-hydridiä lisättiin jäähdyttäen jäällä, ja seosta lämmitettiin refluksoiden 2 h. 2 ml vettä lisättiin tipoittain 10 jäähdyttäen jäällä, ja liukenematon aine suodatettiin pois. Suodos konsentroitiin kuiviin, jolloin saatiin väritöntä öljyä, so 3- ( 2 S) -pyrrolidinyylipyrrolidiinia (P-24-2) . Imi dimetyylisulfoksidia ja 100 mg 6,7,8-trifluorikarboksyyli- happoa (Ml) lisättiin raakaan yhdisteeseen (P-24-2), ja seos-15 ta pidettiin 120°C lämpötilassa sekoittaen 10 min. Liuotin tislattiin pois alipaineessa. Jäännökseen lisättiin etanolia ja 50 mg näin muodostuneita keltaisia kiteitä kerättiin suodattamalla, liuotettiin etanoliin ja ammoniakin vesiliuokseen, käsiteltiin aktiivihiilellä ja uudel-20 leenkiteytettiin, jolloin saatiin 18 mg haluttua yhdistet tä värittöminä kiteinä. Sp. 284-287°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C21H23N3°2F2 ^^2^ ·“*.

Laskettu: c 61,16; H 5;87; N 10,19 Löydetty: C 61,37; H 5,63; N 10,17 .···.

NMR(NaOD) : 0, 90-1, 40 (4H. m) 2, 6~3, 0 (1H, m) .λ 7,54(111. d, J=14Hz) 8, 46 (1H, s) 30 1 .·.·.

muita 1,40 - 2,10 (6H, m), · ·* 3, 30-3, 90 (6H. m) 35 59 87071

Esimerkki ic;

Isomeeri P-27): l-etyyli-6,8-difluori-7-£3-(1-amino-propyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l,4-dihydro-4-oksokino-liini-3-karboksyylihappo 5 0

NHBoc F JL COOH /V | || |T

r—a- +Xju —» "^0W

C2H5 F C2H5 B F C2H5 10 (18-B) + (M-2) -> (P-28) 200 mg yhdistettä M-2 suspendoitiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli 20 ml asetonitriiliä ja 160 mg tri-15 etyyliamiinia, minkä jälkeen siihen lisättiin 190 mg pyr-rolidiiniyhdistettä 18-B, ja seosta refluksoitiin 3 tuntia. Kun liuotin oli tislattu pois, vettä lisättiin jäännökseen, ja liukenematon aine kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä, asetonitriilillä ja eetterillä tässä jär-2o jestyksessä, ja kuivattiin. Näin saadut värittömät kiteet lisättiin seosliuokseen, jossa oli 5 ml trifluorietikka-happoa ja 0,5 ml anisolia, ja liuosta sekoitettiin huo- ... neen lämpötilassa 30 minuuttia.

Konsentroinnin jälkeen saatuun jäännökseen lisät-25 tiin vettä. Seos pestiin kloroformilla ja pH säädettiin ^ 10-11:een IN natriumhydroksidilla. Kun pH oli säädetty '\J 7,06:ksi 10 % sitruunahapolla, liuos uutettiin kolmesti . .·. kloroformilla. Uute konsentroitiin noin 3 ml:ksi ja sii- . hen lisättiin eetteriä. Tuloksena saatiin 127 mg (45 %) 30 isomeeriä (P-27) värittömien kiteiden muodossa. Sp. 211-215°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle 0^^Η22Γ2Ν^02*I/2H2O:

Laskettu: C 58,75, H 6,23, N 10,82 · .· Löydetty: C 58,37, H 5,87, N 10,68 ..

35 60 87071 NMR (NaOD) & ppm: 0,94 (3H, t, J=6 Hz), 1,43 (3H, t, H=6 Hz), 1,2-1,9 (3H, m) , 1,9-2,3 (2H, m) , 2,5-2,7 (1H, m), 3,4-3,9 (4H, m) , 4,2-4,5 (2H, m), 7,70 (1H, dd, J= 15 Hz), 8,32 (1H, s).

5

Esimerkki 16

Isomeeri (P-28): l-syklopropyyli-6,8-difluori-7-/3-(1-aminopropyyli)-l-pyrrolidinyyli7-l, 4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo 10 o o °

C00H

Hon. X/N ΙΤ'Γ F A är P A

15 <»-” ; (P-28I

160 mg isomeeriä (P-28) saatiin samanlaisella menetelmällä kuin on esitetty esimerkissä 15, paitsi että käytettiin 250 mg yhdistettä M-l yhdisteen M-2 20 tilalla ja käytettiin 150 mg trietyyliamiinia ja 250 mg pyrrolidiiniyhdistettä (18-B). Sp. 205-208°C. Alkuaineanalyysi yhdisteelle C20H23F2N3°3"1/41^0:

Laskettu: c 60,67, H 5,98, N 10r61 25 Löydetty: C 60,34, H 5,75, N 10,58 *·] * NMR (NaOD) ^ ppm: *···] 0,94 (3H, t, J = 6 Hz), 1,0-1,25 (4H, m) 1,25-1,8 (3H, m) \ 1,9-2,3 (2H, m) 2,55-2,7 (1H, m), 3,3-4,1 (5H, m) 7,64 ·:’ (1H, dd, J = 15 Hz) 8,48 (1H, s) 30

Esimerkki 17

Isomeeri P-29 saatiin samanlaisella menetelmällä kuiv.: on esitetty esimerkissä 1, paitsi että käytettiin yhdis- : tettä M-2, trietyyliamiinia ja pyrrolidiiniyhdistettä (P-3B) .

35 61 87071 o

C 00 H

H2Nv/C/t'>N

5 C2H5 ^

Sp. 166-168°C.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C20H23F2N3°3‘ ^2H20: !0 Laskettu: C 57,41, H 6,26, N 10,04 Löydetty: C 57,56, H 6,06, N 10,10 NMR (NaOD) & ppm: 0,93 (3H, t, J = 6 Hz) 1,0-1,2 (4H, m), 1,2-1,4 (1H, m), 1,4-1,7 (2H, m), 1,9-2,3 15 (2H, m) 1,9-2,65 (1H, m), 3,3-4,0 (5H, m), 7,60 (1H, dd, J = 15 Hz, 2 Hz), 8,46 (1H, s).

Tämän keksinnön yhdisteiden mikrobinvastainen aktiivisuus määritettiin standardimenetelmällä, jonka on suunnitellut Japan Society of Chemotherapy ja pienimmät in-20 hiboivat konsentraatiot (MIC) (minimum inhibitory concentrations) (/ug/ml) määritettiin yhdisteistä. Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa. Käytetyt vertailuyhdis-teet olivat seuraavia: .···.

A: Yhdiste esimerkissä 44 JA-pat. nro 214773/1985; 25 : l-syklopropyyli-6,8-difluori-(3-etyyliaminometyyli-1- : # : pyrrolidinyyli)-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyy- ··. lihappo.

B: Yhdiste esimerkissä 46 JA-pat. nro 214773/1985; * · « l-syklopropyyli-6,8-difluori- (3-metyyliaminometyyli-1- · "·* pyrrolidinyyli)-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyy-lihappo.

C: l-etyyli-7-£3- (etyyliamino)metyyli7-l-pyrrolidinyyli- 6,8-difluori-l,4-dihydro-4-okso-3-kinoliinikarboksyylihap-i*. : po esimerkissä 11, JA-pat. nro 67279/1984. ·***· 35 ; .

62 87071

» I I I I ^ I I I

inminininoinoomininin (N) Ο Ο Ο Ο ΟΝΟΠγΙΟΟΟΟ SCNOO o o O O O o O o o o o i VII VII Vll VII Vll VII vll VII VII Vll

$ T

to <u W +5

B

in inmoooooooooo ooo 1-1 OOMHCMr-CM r-CMHHHH.

·*» ·*· *·► ♦**, ·**. ·- ·-«, t-w #*- ,

.J OOO'OOOOOOOOOO

X -- vll vn

M <N

1 + as ιηι/>ο<Λοοοσ\νοαοοσ>α>σι oocMr)c<t^<ninr*iHmr-«n U ·* K ·** ^ ·«. *w *—· #»· >-* #-* k OOOOOOOHOOOOO Vll Vll m o in in m o o vo o m m o o

Or-iooocNmm<NooHi-( CQ ·* ^ 1—- ^ — *- -r- OOOOOOOHOOOOO Vll Vll V11 Vll vll Vll m m o in ο σι o co σ> m in o o

ooHOHmoir-nooHH

S ^ V *— *— —- «h. «b ·— OO O O O O O O O O 0 -0 o '" vll Vll Vll vll Vll _ in <n : : : Λ r* o· ·· <n H cm σ>

0*0 H O H

CO COOCOCOOQ o o n ro ίο (N rr h m vo o mr-oHoHmn vo to υ m io pti cm cm h m I 9-1 (O H M ·. Q >. *£ · N n 01 - >k h Q di h l*C Id ΛΗΉΟΙΜ *·.-- □ -»οι αι to to η ο ή co to : 33--1 W ·Η O O O * -H CM Ό O --1 MU—IH to c fi I0Ä -H C H ‘ ' Z αι m -H V Μ .Η .H 0« - ε o « : · c ιΟΛ ο σι cn ϋ o oj w 00 ' •*XD»flWi3pflB4J30)O0l hh 3 -π ε a» ai ai «j u m cu <m . . 0"m>8 fl «J o 8 3 Λ V * fl) Φ * «·· •••ui···* mm-· • X! l-ι M ai to to to to · · 4J 4J ; WWOcPiCQfUPtC^pitOtnoito· 87071 63 --------------

O

intnininooooootninmm

.¾ ΟΟΟΟΉΓΝί—tr^CNOOOO

·— ^ *·» *--

Ti-POOOOOOOOOOOOO

<U to vii vii vii vii vii vii vii vii 1¾ as,______________ 10 mmoo ooi ocooinooo

C OOrHCNCNCICMr^-CNOr-IOJCN

•H >*. k. rs. »V. ·>*- *N. «« #» #v.

Ö^OOOOOOOOOOOOO

2 ^ vii VII VII

5 4 ______________ m· inininoooococninininin H OOOCNr-ΙΓΊιΗΓ'-ΟΟΟΟΟ Π <ii ^ *^v 1*^ Ka ^ *«- V«> b·* *-- Ή n ooooooooooooo

m 0) VII VII VII VII Vll VII VII

•3'd as______________ Γ0 r; ιηιηοοοσιονοοοιηοσι o\.. •3 o o cm cm d cn cm in t-*o. cm <nco; * ‘ ^ 0{ *s ,' -ti O O, OOOOOr-tOOOOQ.. jjj VII VII vii ; : CO £ .·. : w >1 <*> m cn .: . . n·'.

cr\ »—I d cn .

'S· ο 1-4 ο λ : m ooomoooQ ο o cn cn io d «β· m m vo o. · inr^OrHoiHroM vo cn t) · invofa d cm ft m I f« ' Π3 »H M - p X CJ < CM M tO * *> . H 10 (¾ ** - C'nJ flj M-HOl 01 v >.

o ·» ·· to φ to to Ho-Hton- a -H tO Ή Ο Ο Ο -H d Ό MVi-HHtOciCieÄ ·Η c r-t · · a Φ U ·Η 0) *H *H -H pa ·. g a) 03 :

CiOjQOD>D>UOtOV40ilT

^xcnioit^pie-psoiou* ** Φ H M nj U Wi ο* «Η ΦΌ flft 3·Η g φ φ φ <0 H-H Oa«H' o«w>g (dieogaou .

U · id φ · ' • · · It · » · · It u .

• _CMU<i)cnioinio · · jj ^j· WWPaPaalPaaaPLjAatncnIw C/>' · ------------1-LTv^ 64 8 7 0 71 o

!—I

ιπιηο<ηο>νοο>νο(ηιποοο H ooesroromroincooHHH

^ ^ ^ K

un O O O O O H O rH O O O O O m ^ VII VII · VII

•3 ^ aa________ ov £ uotninoococSeooininintn J OOOrHr—Ι Γ'ΓΊΓ^γΗοΟΟΟ ,V Q) »- » *~·*-»-·»·«·— M -Po O O O OO O O O o o o o

W M VII VII VII VII Vll Vll VII

tn S w > 00 d Lnmooovocnvocrvinoinuo H ooHescsmroincooHoo ΤΊ ·*- *— ·-* ' *^· K. K, ·>. «m in m O o O O O H O H O O o o o

jjj ^ Vll Vll vll Vll \4I

as Γ' c inminoincoocnoininino H O O O H O f* CS Γ0 H O O O H."-.

- - Q) ·“ «s» »>w e* v* e-, »*s ·» ·*

H -P OOOOOOOOOOOO O

g M vii vii vii vii vii vii vii .

11 — _________--‘i " . ro ... ir> ro- , ; _ s· 2 d w o · _ "3* 2 „ H o h. . .

ro oo o ro co o Q o . : i 2 ^ h ro vo ts h m vo o'" ‘^C'OHOHroH vo ro u'-· · invofa os es h m i t·: * ’ ,2 £ H * Q » U < es ro 03 ·» «· m nj o, ..

^fiHlflHfHOIIIl » i.

J2 “* * 03 <11 03 U| H O H 03 01 · S5*H (OH o O O * H es Ό φ h! " * H UI -H H (0 β C ro Ä H C H- Z Φ H Φ h h H Οι **β Φ m · 5 2.·2 ° σ*σ»ο o «ο k* en o--- ^xcnniyaonjjjaejoo' *2 2 ^ y 2 y ** Di h φό >1 ti·. .

rtä H e e 2 2 <» 5 V4H Oi « · · o *w > s <o <o y g a p« O · «J φ · r "· · •**U·· ·· ja ,* • x: m m φ co tn w tn · · *j a. .

h w Pe Pi to Oi Oi Oi Oi CO CO CO Of : .

_ _ * 4 I '1

» « I

65 87071 1—f ιηιηοοοσ*οοοσ\ιηοοο

.q OOrHCSrHmcsr-mOrHrH.rH

[yj φ »— K. ·~· »-J

M-POOOOOOOOOOOOO

aj tn vii vii vii h "ä JQ £ W >1 ΓΟ

rH

q ιηιηο<ησ>νοσΐοοσ>ιησοσι •H oocsrominror'-rooescsm ^ Q| ^ ►v r- ^ r- ·— K r. r- r~ w

qtlOOOOOr-IOOOOOOO

g qj vll vll vll

II

CM

rH

mtnooomocnoininino

H OOHCslCNCOCSfO CNOOOCN

Π m *— ·*- ·>— »-. ·» k. »* f"

M-P OOOOOOOOOOOOO

ω tn vu vii vii vii vii •h «Q £ W >1 I—1 * " rH * * * ininoo(Tim<nvocMoooo.,.

C o o n es en h m in en es es rH r—i ; ; ; - · 'H . r- »·. ·*. ·~ ·“- ·-— «u*. ·— »» v · 'öiioooooenoiH ooooo· | tn v» vll .··.

; jjt______________”'i en in m - · · r» tj< σ» H es ΟΊ .

s< o r-π o i—i ; . ; en co o m oo o Q o ··

o eneneoeS'j'M invoO

inr^OrHOrHmM meno invoh es es rH in l £-t <0 rH M Q OC .'.*.

esm tn ». ·. h nj a< v ...

*· c λ ία m -h σ\ m ·. ·.

- - w <u w w h o -h tn w .*:*.

B -H M -rl o O o *> -h rs ό O -rl ·.

Hl-l-HrHtnCCflJ3 -H c rH .

Z o u -h <u -h -h -ri o< - E a) ia ; ·. ; C «0J3 O en Di O o w »H D> o · · »•XDiioi-iosiaHJDiuoa)··· •h o) «h u as u u o< rH <u ό >1 «j .* : : <-HrH D -rl g <D fl) a> «J is -rl 04 4-1 · o «w > g itJUJOgDOi .*.*.

O · (0 Q) · •••M*··· U II ' '

•-Cui-itiiintntncn · . 4J

H CO Oi Ai CO Ai Ai Ai A4CO CO COCO*.’* 66 87071 f'·

I—I

G mmmooenooointnoo

‘Π. o O O f—I ιΗ Π CS <N CN O O CS CS

£ r~ ·«. ·— ·— ** *^ ►. i· »— ·—«->·«.

Qjy,0 O O O O O o o o o o o o

g -ri Vll VII VH vll VII

•H Ό a-g.

«5

t-H

c mtninotn. ooointntnintn

3 OOOrHOCSf—IcSOOOOO

U Q) ·— - »·*. *S» r>. K ly W4JOOOOOOOOOOOOO g » VII VII Vll VII VII VI Vll Vll V»

•H 'D

as_____________ , in * * * «—I .. * S tn tn tn o o σ\ o σ> o m in in m,.. O O O «H r-4 ro CM ro CM o o o o...

.' . ' φ ·- *- ·** a^. ·«·. a_ ·—» r*- ^

O O O O O O O O O O O Ö I

: ; : j= .g V» vt vh vi vi vii vi · j 3¾ -· . ————— —— —— —— —— —— - " ....... " 11 1 —*— - -" ' l ' tn ' m en .

_ i" «* - H es <S\ .

_ ° r-l O H

ro cd o en co o p o o o m vo rs -s* m tn vo ΰ · ^r^?'HOrHr1H vo m o »£1 VO es CS rH iniE-l ® ^ H ; Q o < . -C njidM-Hovoi ». ^ ‘

Jb^^MOtOö) f-l o *H 10 U) ' ® ** W ·η o O O * *h es Ό o -m'.' S^TI'^wgcio.c -h e r4.- * 9J Vl-H φ ·Η -H Ή Q« «.g <U qj .

52*-QOCJ»cr»oowwoio\ •xcrinjviaanjjjaQjoe»· ^ 2 M u Λ <H <U Ό >1 <» · · r* E ω <u <u flu-H Λ*: 0‘w>6 id «J O g 3 Oi U · id <l> . .,·.· •••ui···· V4tj* •jCJMUiOWoitQoj . . 4J -p" W 01 Oi Oi 01 Oi Oi Oi Oi 01 01 oi W;'; 1 1 1 "* * I..I I I l .-_l I I .

67 87071

Seuraavasta taulukosta ilmenevät esimerkkien 4, 6 ja 9 mukaisten yhdisteiden mikrobien vastaiset aktiivisuudet verrattuna edellä mainittujen tunnettujen yhdisteiden A ja C aktiivisuuksiin. Tuloksista ilmenee selväs-5 ti, että keksinnön mukaiset yhdisteet kokonaisuudessaan ovat tehokkaampia mikrobien vastaisia aineita kuin tunnetut vertailuyhdisteet.

Mikrobienvastaiset aktiivisuudet alhaisella konsentraatiolla (/j.g/ml)

Ui [c] [4] [6] { 9] 15 E. coli, NIHJ 0.013 0.05 0.008 0.013 0.013

Sh. flexneri. 2a55Q3 0.025 0.05 0.008 0.013 0.013

Pr. vulgaris, 3187 0.025 0.20 0.013 0.025 0.025

Pr. nirabUis, IF03849 0.10 0.78 0.05 0.10 0.10

Ser. marcescens. 13001 0.10 0.39 0.05 0.05 0.10

Ps. aeruginosa, 2063 0.39 3.13 0.10 0.19 0.39 20 Ps. aeruginosa. 2128 0.20 1.58 0.10 0.10 0.19

Ps. cepacia, IID1340 0.39 6.25 1.56 l.SS 1.66

Ps. laltophilla, IID1275 0.20 1.56 0.10 0.10 0.19-'- S. aureus, 209P 0.025 0.10 0.006 0.013 0.006': : S. epidernldls, 50900 0.03 0.39 0.025 0.05 0.025/ 25 Str. pyogenes, 6-36 0.10 0.39 0.013 0.02$ 0.025···:

Str. faecalis, ATCC 19433 0.10 0.39 0.05 0.05 0.10'*·.! 68 87071

Vesiliukoisuus ja akuutti toksisuus

Keksinnön mukaisten ja vertailuyhdisteiden vesiliukoisuus ja akuutti toksisuus mitattiin. Saadut tulokset on esitetty alla. Vesiliukoisuus mitattiin seuraavalla 5 menetelmällä.

(i) Standardiliuoksen valmistus

Noin 400^ug mitattavaa näytettä punnittiin tarkasti (paino (W) määritettiin^ug: oina) , ja 0,1 N NaOH-liuosta lisättiin siihen, niin että koko tilavuudeksi saatiin 50 ml. Mää-10 rätyn liuosmäärän UV-absorbanssi mitattiin, ja mitattu ab-sorbanssi määritettiin An:ksi.

(ii) Mitattavan liuoksen valmistus

Tislattua vettä lisättiin mitattavaan näytteeseen (hieno pulveri) niin paljon, että näyte ei täysin liuennut, 15 vaan suspendoitui, ja sitten suspensiota sekoitettiin huoneen lämpötilassa (23-26°C) 30 minuuttia. Näytteen liukenematon osa poistettiin suodattamalla, minkä jälkeen otettiin 3 ml näyte suodosta (näytteen kylläinen vesiliuos. 3 ml 0,2N NaOH-liuosta lisättiin suodosnäytteeseen kokonaistilavuu-20 den saamiseksi 6 ml:ksi (so, suodos laimennettiin 50 % kon-sentraatioon). 1 ml:aan saatua liuosta lisättiin edelleen Q,1N NaOH kokonaistilavuuden saattamiseksi 25 ml:aan (2 % konsentraatio). Tässä yhteydessä laimennusastetta muuteltiin silloin tällöin riippuen UV-absorbanssin asteesta.

25 Tietyn liuosmäärän UV-absorbanssi mitattiin ja saatu absorbanssi määritettiin Ä2:ksi. Kun laimennusluku on N, vesiliukoisuus saadaan seuraavasta yhtälöstä: S = ^ J Ä2______ x N (^ug/ml · H20) 30 50 ' 69 87071 Tämän keksinnön Vertailuyhdiste yhdiste______________ ______________ _________

Esimerkin 6 Esim. 9 Yhdiste A Yhdiste B Yhd. C

_______yhdiste_yhdiste__

Vesiliukoi- 5 suus (^ug/ml) 710 200 40 80 400

Akuutti toksisuus hiirelle x) 1/5 0/5 3/5 2/5 0/5 x) 200 mg/kg; i.v. (kuolemat/kokonaislukumäärä)

Kuten ylläolevista tuloksista käy ilmi, tämän kek-10 sinnön mikrobinvastaisilla aineilla on suuri vesiliukoisuus sekä alhainen toksisuus.

Koska ei vain N-syklopropyylijohdannainen (esimerkki 2, isomeeri B), vaan myös N^-etyylijohdannainen (esimerkki 4), jotka ovat 3-(2-aminoetyyli)-pyrrolidiinijohdannaisia, 15 osoittaa erittäin voimakasta mikrobinvastaista aktiivisuutta gram-negatiivisia ja gram-positiivisia mikro-organismeja vastaan, voidaan ennustaa, että näiden analogilla on luonnollisesti voimakas mikrobinvastainen aktiivisuus, ja analogin odotetaan myös olevan hyödyllinen farmaseutti-20 sena yhdisteenä.

Absorptio oraalisen annostuksen jälkeen

Keksinnön mukaisia yhdisteitä ja vertailuyhdis- ·”' tettä annettiin oraalisesti rotille (yksi ryhmä: 5 rottaa) annostuksena 20 mg/kg yhdisteiden oraalisen absorption mit- " 25 taamiseksi. Yhdisteen konsentraatio rotan veressä mitattiin 15 minuutin, 30 minuutin, 1,2,3,4 ja 6 tunnin kuluttua an- · nostuksen jälkeen.

Seerumin puoliintumisajät (T 1/2) laskettiin 0,693/Ke^: na, jossa K ^ on eliminaation nopeusvakio määritettynä see-30 rumin konsentraatio-aikatietojen luonnollisen logaritmin lineaarisena regerssioanalyysinä. Pinta-ala seerumin kon-sentraatioaika-käyrän alla nollasta 6 tuntiin (AUC0_gH) laskettiin trapetsoidimenetelmällä. Saadut tulokset olivat seuraavanlaiset: 35 7o 87071

Tämän keksinnön Cmax Tl/2(min.) AUC0-6H

yhdiste (yg/ml.lH) (yg.h/ml)

Esimerkin 6 yhdiste 2,21 12QT6 6,31

Esimerkin 9 yhdiste 2,10 135,9 6,43

Vertaileva yhdiste B 1,37 93,0 3,61

Kuten ylläolevista tiedoista käy ilmi, keksinnön mukaiset yhdisteet ovat ylivoimaisia vertailuesimerkkiin nähden oraalisen absorption suhteen.

Claims (8)

71 87071

1. Menetelmä mikrobien vastaisten, kaavan (I) mukaisten 3-[amino(alkyloitu)metyyli]pyrrolidinyylisubsti-5 tuoitujen 4-oksokinoliini-3-karboksyylihappojen ja niiden suolojen valmistamiseksi, 0 ^fj' (1} R‘-NHv J—/ | | R5 V V R3 15 jossa R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä, R2 on metyyli-tai etyyliryhmä, R3 on vetyatomi tai metyyliryhmä, ja R1 voi muodostaa yhdessä R2:n tai R3:n kanssa 2-pyrrolidi-nyyliryhmän, jolla on kaava 20 v HÖ 25 ja R2 ja R3 voivat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostaa syklopropyyliryhmän, R4 on etyyli- tai syklopropyyliryhmä, ja R5 on vety-, fluori-tai klooriatomi, tunnettu siitä, että annetaan yhdisteen, jolla on kaava (II), 30 0 Ϊ 35 R5 R« 72 87071 jossa R5 on vety-, fluori- tai klooriatorni, ja Y on halogeeni, reagoida pyrrolidiinijohdannaisen kanssa, jolla on kaava (III) (III, R1 Ra 10 jossa R1, R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 1-syklopropyy-li-6,8-dihydro-7-[3-(1-metyyliaminoetyyli)-l-pyrrolidi- 15 nyyli]-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3-(1-amino-1-metyyli)-etyyli-l-pyrrolidinyyli]-l-syklopropyyli-6,8-difluori-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3-(1-amino-etyyli ) -1-pyrrolidinyyli] -l-syklopropyyli-6,8-difluori- 1.4- dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • 25 tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3-(1-amino- propyyli )-l-pyrrolidinyyli] -l-syklopropyyli-6, 8-difluori- 1.4- dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihapon diastereo- : meeri.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3-(1-amino- · ·. etyyli)-1-pyrrolidinyyli]-l-etyyli-6,8-difluori-1,4-di-hydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo (isomeeri B 2-B).

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3—(1-amino- 73 87071 propyyli)-l-pyrrolidinyyli]-l-etyyli-6,8-difluori-1,4-di-hydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihapon diastereomeeri.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 7-[3—(1-amino-5 1-metyyli)-etyyli-l-pyrrolidinyyli]-l-etyyli-6,8-difluo-ri-1,4-dihydro-4-oksokinoliini-3-karboksyylihappo. 74

8. O 71