FI85024C

FI85024C - Reningsprocess foer antibiotderivat.

Info

Publication number: FI85024C
Application number: FI864738A
Authority: FI
Inventors: Murray Arthur Kaplan; Joseph Ballard Bogardus; Michael Winston Lovell
Original assignee: Squibb Bristol Myers Co
Priority date: 1985-11-25
Filing date: 1986-11-20
Publication date: 1992-02-25
Also published as: DK563586D0; YU46182B; YU46215B; ES2002919A6; AR242582A1; AT392643B; KR870004990A; HUT42896A; GR862787B; DK563586A; PT83798B; YU121087A; NO167460C; LU86685A1; SU1493110A3; FI85024B; CS262442B2; DD261163A5; FI864738A0; NO167460B

Description

1 85024

Antibioottijohdannaisen puhdistusprosessi Tämä keksintö koskee kefeemiyhdisteiden, joilla on 7-asemassa heterosyklinen rengas (luokka 544, alaluokka 5 25) ja jotka ovat kefalosporiiniantibiootin, 7-[D-2-ami- no-2- ( 4-hydroksifenyyli )asetamido] -3- [ ( Z ) -1-propenyy-li]kef-3-eemi-4-karboksyylihapon (BMY-28100), johdannaisia, puhdistusprosessia.

Tässä selitysosassa ja vaatimuksissa käytetään seulo raavia termejä: antibiootti: (z) (BMY-28100) // \\ HO—(' ')-CH-C=0 c

^^7 Ah2 άΗη-S > CH

15 |/3

X— N —CH=CH

Q/ co2h (E)-isomeeri: , v (E) 20 (BMY-28167)

Ho^hH_ro '—' nh2 nh—-r N.

o/ CH, 25 C02H ' antibiootin natriumsuola: natrium-7-[D-2-amino-2-(4-hydroksifenyyli)asetamido]-3-[(Z)-l-propenyyli)kef-3-eemi-4-karboksylaatti 30 (E)-isomeerin natriumsuola: natrium-7-[D-2-amino-2-(4-hydroksifenyyli)asetamido]-3-[(E)-1-propenyyli)kef-3-eemi-4-karboksylaatti antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen: 35 2 85024 ,ΗΓΤ^ 1 ^

R κ ^-Ν CH=CH

C02Na 10 jossa R ja R1 ovat ketonin alkyyli-, alisyklisiä, aryyli-tai aryylialkyyliryhmiä, joilla on kaava 0 RCR1, tai ne ovat liittyneet yhteen ja muodostavat syklisen ketonin, jonka molekyylipaino on alle 200.

15 (E)-isomeerin natriumsuolan imidatsolidinonijoh dannainen: (E) ·°ΌτΥ _^\_1 ' ^ 1 CH, C02Na 3 25 jossa R ja R1 ovat samat kuin edellä.

Edellä kuvattuja imidatsolidinonijohdannaisia voidaan kutsua asetonideiksi, jos R ja R1 ovat metyyliryhmiä.

Antibioottia BMY-28100 ja sen (E)-isomeeriä BMY-28167 on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 520 022 (patent- 30 ti myönnetty 28. toukokuuta 1985 Hoshi et ai:lie). Näitä aineita valmistetaan synteettisesti menetelmillä, joihin kuuluu 3-(1-propenyyli)-ryhmän muodostaminen saattamalla asetaldehydi reagoimaan fosforanyylivälituotteiden kanssa, joita valmistetaan käyttäen lähtöaineina 3-halogeenimetyy- 35 likefalosporiineja. Tämä synteesityyppi tunnetaan Wittig- 3 85024 reaktiona ja tässä tapauksessa sen avulla saadaan seos, joka sisältää cis- ja trans-isomeerejä propenyyli-kaksois-sidoksen suhteen. Cis-isomeeri tarkoittaa (Z)-isomeeriä ja trans-isomeeri (E)-isomeeriä. (Z)-isomeeri on haluttu tuo-5 te, koska sillä on parempi gram-negatiivinen antibakteeri-nen aktiivisuus kuin (E)-isomeerillä. Farmaseuttisessa käytössä on toivottavaa käyttää (Z)-isomeeriä, joka on oleellisesti vapaa (E)-isomeeristä, jotta saavutettaisiin paras mahdollinen antibioottinen vaikutus. Termi "oleelli-10 sesti vapaa" tarkoittaa alle 2 paino-% (E)-isomeeriä.

Ongelmana on siis eristää BMY-28100 koostumuksista, jotka sisältävät sitä ja sen (E)-isomeeriä seoksena. Menetelmät 8 ja 9, jotka on esitetty sarakkeissa 20 ja 21 Hoshi et ai:n patenttijulkaisussa, kuvaavat suuren erotus-15 kyvyn nestekromatografiamenetelmää (HPLC) antibiootin eristämiseksi oleellisesti vapaana (E)-isomeeristä koostumuksesta, joka sisältää antibioottia ja (E)-isomeeriä seoksena. Suuren erotuskyvyn nestekromatografia ei ole sopiva menetelmä tämän kaltaisen antibiootin kliinisten ja 20 kaupallisten määrien suuri mittakaavaiseen tuotantoon.

Muut tavalliset fysikaaliset menetelmät, joiden avulla voidaan erottaa olefiinien kaksoisidoksen geometrisiä isomeerejä, esim. jakokiteytys ja selektiiviset absorptiome-netelmät, eivät ole osoittautuneet käyttökelpoisiksi anti-25 bioottia BMY-28100 sisältäviä seoksia käsiteltäessä.

Tyypiltään tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja imidatsoiidinonijohdannaisia on aiemmin valmistettu käyttäen kefalosporiini- ja penisilliiniantibiootteja, joilla on a-amino-a-fenyyliasetamidosubstituentti 7-asemassa [Ks. 30 esim. US-patenttijulkaisu 3 198 804 ja G. A. Hardcastle et al:n julkaisu J. Org. Chem. 31, s. 897 (1966), joissa käsitellään ampisilliinijohdannaisia, jotka toimivat esi-lääkkeinä ja joita annetaan terapeuttisiin tarkoituksiin]. Antibiootti sinänsä vapautuu elimistössä. US-patenttijul-35 kaisussa 3 994 884 Weir käsitellään vastaavia kefalospo- 4 85024 riinijohdannaisia, joilla on vinyyliryhmä 3-asemassa, ja GB-patenttijulkaisussa 1 503 310 käsitellään vastaavia kefatritsiinijohdannaisia. Samoin US-patenttijulkaisussa 4 026 688 (M. Kaplan et ai.) käsitellään kefatritsiinin 5 oksatsolidiinijohdannaisia, jotka ovat muodostuneet erilaisten aromaattisten aldehydien kanssa. Tällaisilla johdannaisilla ei kuitenkaan ole ollut mitään tekemistä geometrista isomeriaa kaksoissidoksen suhteen omaavien kefa-losporiinien seosten erottamisen kanssa.

10 Aldehydien Wittig-reaktiossa syntyneiden cis- ja trans-olefiinien suhteiden määrittämistä ovat tutkineet H.

0. House et ai. [julkaisu Journal of Organic Chemistry 29, ss. 3327 - 3333 (1964)] tutkimalla liuottimien ja erilaisten lisäaineiden vaikutuksia reaktion kulkuun.

15 Tämä keksintö koskee menetelmää 3-[(Z)-l-propenyy- 1i]kefalospori ini-imidatsolidinonikarboksyylihappoj ohdan-naisen, jolla on seuraava kaava, sen farmaseuttisesti siedettävän metalli- tai amiinisuolan, sekä mainitun hapon tai mainitun suolan farmaseuttisesti siedettävän nesteen 20 kanssa muodostaman kiteisen solvaatin valmistamiseksi: _f HN N--f η 25 -CH=CHCH3

R R1 0 I

co2h 30 Edellä olevassa kaavassa R ja R1 ovat orgaanisia alkyyli-, alisyklisiä, aryyli- tai aryylialkyyli-ketoryh- 0 ti miä, joilla on kaava RCR , ja joiden molekyylipaino on alle 200. R ja R1 voivat olla samanlaisia tai erilaisia. Ne 35 ovat toisistaan riippumatta alkyyli-, alisyklinen, aryyli- 5 85024 tai aryylialkyyliryhmä. Ne voivat yhdessä muodostaa ali-syklisen ketonin, kuten sykloheksanonin, sykloheksenonin tai syklopentanonin. Edullisia ovat ne yhdisteet, joissa vähintään yksi ryhmistä R ja R1 on alkyyli, jossa on kor-5 keintaan 4 hiiliatomia, tai joissa ne muodostavat yhdessä 6-renkaan. Edullisimpia ovat ne yhdisteet, joissa kumpikin ryhmä R ja R1 on metyyliryhmä.

Näillä yhdisteillä on erityistä merkitystä välituotteina puhdistusprosessissa valmistettaessa antibioo-10 tin cis- tai (Z)-konfiguraatiota, joka on oleellisesti vapaa (E)-isomeeristään. Antibioottituotannon valmistusprosesseissa saadaan yleensä seoksia, jotka sisältävät sekä (Z)- että (E)-isomeerejä, kun taas farmaseuttisiin tarkoituksiin haluttaisiin (Z)-isomeeriä. On havaittu, 15 että antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannai-set eivät käytännöllisesti katsoen liukene erilaisiin orgaanisiin liuottimiin, kun taas vastaavat (E)-isomeerin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannaiset liukenevat. Tämä tarjoaa mahdollisuuden erottaa haluttu (Z)-konfigu-20 raation omaava antibiootti edellä kuvatun johdannaisen kiteisenä natriumsuolana, josta itse antibiootti voidaan regeneroida tai vapauttaa.

Nämä aineet voidaan valmistaa farmaseuttisesti hyväksyttävänä metalli- tai amiinisuolana. Ne eristetään '25 yleensä kiteisinä solvaatteina, joissa kide sisältää tietyn määrän nestettä, josta se on kiteytetty. Solvaatilla tarkoitetaan kiteistä yhdistettä, joka sisältää kidehilassa tietyn määrän liuotinta ja jonka kiderakenne voidaan määrittää röntgendiffraktiospektrometrian avulla pul-30 verimenetelmää käyttäen. Ne ovat huoneen lämpötilassa pysyviä kiinteitä aineita.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistetulla edullisella yhdisteellä on edellä oleva kaava, jossa molemmat ryhmät R ja R1 ovat metyyliryhmiä, ja aine eristetään nat-35 riumsuolamonohydraattina, joka on kiteinen kiinteä aine.

6 85024

Edellä mainittuja yhdisteitä valmistetaan antibiootista BMY-28100 saattamalla se reagoimaan alkalimetalli-suolan kanssa ketonin läsnäollessa, kuten edellä on esitetty. Tuotteet eristetään alkalimetallisuolana. Farma-5 seuttisesti hyväksyttäviä metalli- ja amiinisuoloja voidaan käyttää kuivina farmaseuttisina koostumuksina niiden kiinteän tilan stabiilisuuden vuoksi. Vesiliukoiset suolat ovat erityisen sopivia valmistettaessa parenteraali-sia antomuotoja. Ne muuttuvat elimistössä hydrolyysin vai-10 kutuksesta tai entsymaattisesti antibiootiksi BMY-28100. Hydrolyysi tapahtuu happamissa olosuhteissa, esim. pH-alueella 3-7, joka vallitsee erilaisissa nisäkkäiden kudoksissa ja elimissä. Vahvojen happojen vesiliuokset (pH < 1) muuttavat metalli- tai amiinisuolat tämän kek-15 sinnön mukaiseksi veteen liukenemattomaksi oksatsolidino-nituotteiden happamaksi muodoksi.

Liitteenä olevassa kuvassa on esitetty tämän keksinnön esimerkin 1 mukaisesti valmistetun tuotteen IR-ab-sorptiospektri. Kiteisestä näytteestä valmistettiin mit-20 tauksia varten pilleri käyttäen kantaja-aineena kiteistä kaliumbromidia.

Tämän keksinnön mukaista menetelmää voidaan käyttää antibiootin BMY-28100 koostumuksiin, jotka sisältävät 2 - noin 65 paino-% (E)-isomeeriä. Koostumuksia, jotka : 25 sisältävät 2 % tai vähemmän (E)-isomeeriä, pidetään oleel lisesti vapaina (E)-isomeeristä farmaseuttisia tarkoituksia varten. (E)-isomeeristä oleellisesti vapaiden antibiootin BMY-28100 koostumuksien valmistus on yksi tämän keksinnön kohteista.

30 Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä (1) muo dostetaan koostumus, joka sisältää antibioottia, joka on 7-[D-2-amino-2-( 4-hydroksifenyyli )asetamido] -3- [ (Z )-l-pro-penyyli]kef-3-eemi-4-karboksyylihappo, sekä sen (E)-iso-meeriä ja natriumsuolaa muodostavaa reagenssia alkyyli-, 35 alisyklisen, aryyli- tai aryylialkyyliketonin läsnäolles- 7 85024 sa, jonka ketonin molekyylipaino on alle 200, reaktio-olosuhteissa, jolloin antibiootin natriumsuolan imidatsolidi-nonijohdannainen ja (E)-isomeerin natriumsuo- lan imidat-solidinonijohdannainen muodostuvat, (2) liete- tään vai-5 heessa (1) muodostuneet imidatsolidinonijohdannaiset liuottimeen, johon mainittu (E)-isomeerin natrium- suolan imidatsoiidinonijohdannainen liukenee ja mainittu antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen ei oleellisesti liukene, jolloin muodostuu mainitun anti-10 bioottijohdannaisen suspensio mainitun (E)-isomeerijoh dannaisen liuoksessa, ja (3) erotetaan mainittu liukenematon antibioottijohdannainen mainitusta suspensiosta oleellisesti vapaana (E)-isomeerijohdannaisesta. Antibiootti BMY-28100, joka sisältää 2 - noin 65 paino-% 15 (E)-isomeeriä, joutuu ensin kosketuksiin natriumsuolaa 0

H

muodostavan reagenssin kanssa kaavan RCR1 mukaisen ketonin läsnäollessa. Natriumsuolaa muodostavana reagenssina on edullista käyttää antibioottia tai sen (E)-isomeeria hei-20 komman hapon natriumsuolaa. Tämä suoritetaan edullisesti liuoksessa ja on toivottavaa valita ensimmäiseen vaiheeseen liuottimet ja suolaa muodostavat reagenssit, joita saadaan liuoksen muodostuessa alussa tai reaktion kuluessa. Kun imidatsolidinonijohdannaiset ovat muodostuneet, 25 antibiootin natriumsuolan imidatsolidinoni johdannainen saostuu pienemmän liukoisuutensa vuoksi verrattuna (E)-isomeerin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannaisen liu koisuuteen. Reaktion päätyttyä antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen erotetaan suodattamalla tai . 30 sentrifugoimalla. Saatua tuotetta voidaan käyttää sellaisenaan farmaseuttisiin tarkoituksiin tai se voidaan muuttaa itse antibiootiksi, joka on oleellisesti vapaa (E)-isomeeristä.

Suoritettaessa edellä olevaa valmistusta on edul-35 lista käyttää suolaa muodostavana reagenssina natrium-2- β 85024 etyyliheksanoaattia, mutta voidaan käyttää myös muita rea-gensseja, kuten natriumasetaattia tai muiden karboksyyli-happojen natriumsuoloja. Liuottimena käytetään edullisesti inerttiä orgaanista liuotinta, esim. alkanoli- tai esteri-5 liuosta yhdessä ketonin kanssa, joka toimii imidatsolidi-nonia muodostavana reagenssina. Myös pientä määrää vettä voidaan käyttää liuottamisen nopeuttamiseksi. Edullisia liuottimia ovat metanolin ja asetonin seokset. BMY-28100:n ja BMY-28167:n asetonidit liukenevat erittäin hy-10 vin metanoliin, mutta ovat käytännöllisesti katsoen liukenemattomia asetoniin. Niinpä näiden kahden liuottimen seoksia käytetään saamaan aikaan haluttu liukoisuusero. Sopivia ovat metanolin ja asetonin seokset, jotka sisältävät 20 - 50 tilavuus-% metanolia. Antibiootin natriumsuo-15 lan 2,2-dimetyyli-imidatsolidinonijohdannainen ei liukene metanoli-asetoniseokseen huoneen lä.mpötilassa tai sitä alemmissa lämpötiloissa, kun taas (E)-isomeerin natrium-suolan 2,2-dimetyyli-imidatsolidinonijohdannainen liukenee. Tämä liukoisuusero on perustana erotettaessa näitä 20 muuten hyvin samanlaisia aineita.

Edellä esitetty prosessi voi tapahtua huoneen lämpötilassa, mutta on edullista käyttää jonkin verran kohotettua lämpötilaa, koska silloin reagoivien aineiden liukoisuudet kasvavat ja reaktionopeus kasvaa. Optimilämpö-25 tila voidaan määrittää pienellä määrällä kokeita, joissa tutkitaan antibiootin stabiilisuutta ja häviöitä, jotka johtuvat sen hajoamisesta kohotettaessa lämpötilaa, sekä saadun tuotteen kidemuotoa. Käytettäessä tämän keksinnön edullisen menetelmämuodon mukaisesti metanolia ja asetonia 30 on edullista käyttää lämpötilaa 35 - 55 °C. Tuote kiteytyy helpommin käsiteltävässä muodossa, jos lämpötila on 40 - 55 eC.

Jos käytetään alkyyli-, aryyli- tai aryylialkyyli-ketoneja, jotka eivät ole sopivia liuottimia antibiootille 35 ja sen (E)-isomeerille, ketonia voidaan käyttää liuotettu- 9 85024 na orgaaniseen liuottimeen suunnilleen kemiallisesti ekvivalentti määrä verrattuna antibiootin ja sen (E)-isomeerin määrään. Tässä tapauksessa valitaan liuotin, johon tätä ketonia käytettäessä saatu antibiootin natriumsuolan imi-5 datsolidinonijohdannainen ei liukene, kun taas (E)-isomee-rin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen liukenee. Ketonien, suolaa muodostavien reagenssien ja liuottimien yhdistelmien kokeilun tähän päämäärään pääsemiseksi voi suorittaa alaa hallitseva laboratoriokemisti.

10 Menetelmää voidaan käyttää antibiootin BMY-28100 koostumuksiin, joissa on antibiootin tai sen (E)-isomeerin solvatoituneita muotoja. Esimerkiksi edellä mainitussa US-patenttijulkaisussa 4 520 022 esitetyllä menetelmällä saadaan kiteistä monohydraattia, joka sopii käsiteltäväksi 15 tämän keksinnön mukaisesti. Toinen sopiva muoto on dime-tyyliformamidisolvaatti, jota saadaan menetelmällä, joka on esitetty rinnakkaishakemuksessa 759 805, joka on jätetty 29. heinäkuuta 1985 ja joka on mainitaan tässä viitteenä.

20 Farmaseuttisesti siedettäviä metalli- ja amiini- suoloja ovat sellaiset suolat, jotka ovat pysyviä vallitsevissa olosuhteissa ja joiden kationi ei merkittävästi vaikuta suolan toksisuuteen tai biologiseen aktiivisuuteen. Sopivia metallisuoloja ovat natrium-, kalium-, kal-25 sium-, sinkki- ja magnesiumsuolat. Natrium- ja kaliumsuo-lat ovat erittäin vesiliukoisia ja edullisia. Amiinisuo-loja, joita valmistetaan esimerkiksi bentsyylipenisillii-nien yhteydessä kä.ytetyistä amiineista ja jotka voivat muodostaa pysyviä suoloja happaman karboksyyliryhmän kans-30 sa, ovat trialkyyliamiinit, esim. trietyyliamiini, pro- kaiini, dibentsyyliamiini, N-bentsyyli-8-fenetyyliamiini, 1-efenamiini, N,N'-dibentsyylietyleenidiamiini, dehydro-abietyyliamiini, N-etyylipiperidiini, bentsyyliamiini ja disykloheksyyliamiini. Jotkin näistä suoloista ovat veteen 35 liukenemattomia.

10 85024

Natrium-7- [2,2-dimetyyli-4- ( 4-hydroksifenyyli )-5-okso-l-imidatsolidinyyli]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi- 4-karboksylaatin käyttökelpoisuus nestemäisenä annosmuoto-na käytettäväksi parenteraaliseen injektioon osoitettiin 5 valmistamalla vesiliuos, joka sisälsi sitä 250 mg/ml, ja mittaamalla antibiootin konsentraatio liuoksessa huoneen lämpötilassa usean tunnin varastoinnin jälkeen. Havaittiin, että liuos, jonka pH oli 7,2, menetti 10 % tehostaan noin 2 tunnissa. Tämä on erittäin hyvä stabiilisuus ver- 10 rattuna antibiootin pelkkään natriumsuolaan, jonka pH oli 8,2 ja joka menetti 10 % tehostaan 30 minuutissa. Vaikka 10 %:n tehonmeneteys sallitaan, välittömästi valmistetulta antibioottiliuokselta vaaditaan riittävä nk. käyttökelpoi-suusaika, joka on vähintään 2 tuntia.

15 Tämän aineen kiinteän tilan stabiilisuus osoitet tiin säilyttämällä sitä sisältäviä näytteitä eri lämpötiloissa eripituisia ajanjaksoja ja mittaamalla näytteen puhtaus tietyin välein. Tulokset on koottu seuraavaan taulukkoon: 20

Kiinteän tilan stabiilisuus

Aika_Lämpötila (°C)_Jäännös % 4 viikkoa 37 100 25 4 viikkoa 45 102 4 viikkoa 56 98,6 1 viikko 70 94,0 1 vuorokausi 100 80,0 30 Tämän menetelmän lisäetuna on se, että antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannaisen hydrolyysillä saadun antibiootin värilliset epäpuhtaudet ovat vähentyneet.

35 n 85024

Esimerkki 1

Asetonin avulla saadut imidatsolidinonijohdannaiset

Kiinteää koostumusta, joka sisälsi 83 % antibiootin BMY-28100 kiteistä monohydraattia ja 17 % sen (E)iso-5 meeriä (BMY-28167), punnittiin 102 g, sekoitettiin 2 litraan asetonia ja seosta lämmitettiin samalla sekoittaen lämpötilaan 40 eC . Seokseen lisättiin samalla koko ajan sekoittaen 83,1 g (0,5 mol) natrium-2-etyyliheksanoaattia jauheena ja sen jälkeen 1,2 litraa metanolia. Kirkas liuos 10 muodostui 5 minuutissa, kun sekoitusta jatkettiin lämpötilassa 40 °C. 15 min:n kuluttua antibiootin asetonin kans sa muodostaman imidatsolidinonijohdannaisen natriumsuola, natrium-7- [2,2-dimetyyli-4- ( 4-hydroksifenyyli )-5-okso-l-imidatsolinyyli]-3-[1(Z)-propenyyli]kef-3eemi-4-karboksy-15 laatti, alkoi kiteytyä. Tunnin kuluttua seos muuttui erittäin sakeaksi, jolloin lisättiin 1 litra metanoli-asetoni-seosta (1:1; til./til.) sekoituksen helpottamiseksi. Kun sekoitusta oli jatkettu vielä 1 tunti lämpötilassa 40 °C, seos jäähdytettiin lämpötilaan 15 - 20 °C samalla sekoit-20 taen ja liukenematon tuote erotettiin alipainesuodatuksen avulla. Kostea suodatuskakku lietettiin seokseen, joka sisälsi 2 litraa asetonia ja 0,5 litraa metanolia, ja sekoitettiin 1 tunti lämpötilassa 20 °C. Tuote erotettiin suodattamalla, pestiin suodattimessa 0,2 litralla metano-25 li-asetoniseosta (2:8; til./til.) ja sen jälkeen asetonilla ja siirrettiin vakuumieksikkaattoriin ja kuivattiin. Toinen erä saatiin konsentroimalla suodos 0,5 litraksi ja sekoittamalla se 0,5 litraan asetonia. Tämä aine erotettiin suodattamalla, lietettiin uudelleen 1 litraan meta-30 noli-asetoniseosta (1:5; til./til.), koottiin ja kuivattiin, jolloin saatiin vielä 22,1 g tuotetta, joka vastasi laadultaan ensimmäistä erää. Kokonaissaanto 86,1 g (93 %).

35 12 85024

Analyyttiset tiedot A. Rakenne ^ C21H22N305SNa*H20 , hNJ^CH5 Molekyylipaino: h!A i 451,49 h^yh' °or

H M H

Tuote saadaan kiteisenä hydraattina.

10 Alkuainetietoja:

Laskettu % C 55,85 Saatu % C 55,50 % H 4,91 % H 5,00 % N 9,31 % N 8,89 % S 7,10 % S 6,83 15 % KF(H20) -- % KF(H20) % sulf. % sulf.

tuhkaa 5,09 tuhkaa (Na) 4,77 IR-absorptiospektri on esitetty liitteenä olevassa 20 kuvassa. UV-spektrissä havaitaan seuraava absorptio: Λ max = 222 nm (E = 14423)

Ydinmagneettisen resonanssin (NMR) kemialliset siirtymät (vertailuarvona trimetyylisilyylipropaanisulfo-nihapon arvo 0 ppm D20:ssa veden eliminoituessa) 25 7,35 dupletti 2H (aromaattinen) H1 6,95 dupletti 2H (aromaattinen) H1 6,0 dupletti 1H (vinyyli) H7 5,75 multipletti 1H (vinyyli) H8 30 5,25 singletti 2 singlettiäj H2,H4,H5

4,78 singletti 3H J

3,47 duplettien 2H CH26 dupletti 1,65 dupletti 3H CH39 35 1,50 singletti 6H 2(CH33) i3 85024

Edellä olevassa menetelmässä asetonin voivat korvata muut ketonit, esim. sykloheksanoni, metyylietyylike-toni, syklopentanoni, metyylivinyyliketoni ja metyyli-iso-butyyliketöni.

5 Esimerkki 2

Imidatsolidinonijohdannaisen hydrolyysi antibiootiksi 30 g esimerkin 1 mukaisesti valmistettua imidatso-lidinonijohdannaista lisättiin kuivana jauheena 175 ml:aan 10 vettä, joka oli lämmitetty lämpötilaan 40 °C ja joka oli reaktioastiassa, jossa oli sekoitin, lämpömittari, tipu-tussuppilo ja pH-elektrodi. Reaktioseoksen pH-arvo kohosi asetonijohdannaisen liuetessa, ja se pidettiin alueella 5,8-6,0 lisäämällä pisaroittain 1 M vetykloridihappoa 15 (HC1). Toinen 30 g:n annos imidatsolidinonijohdannaista lisättiin 15 min kuluttua, ja pH pidettiin koko ajan alueella 5,8 - 6,0. Viimeinen annos (26 g) imidatsolidinonijohdannaista lisättiin noin 15 min kuluttua toisen annoksen lisäämisestä samoin kuin edellä. Seoksen pH-arvoa 20 tarkkailtiin 4,5 tunnin ajan ja se pidettiin koko ajan alueella 5,8 - 6,0 lisäämällä 1 M vetykloridihappoa. Sen jälkeen seos jäähdytettiin lämpötilaan n. 0 °C ja säädettiin pH arvoon 4,1 lisäämällä 1 M vetykloridihappoa. Tuote erotettiin 20 min kuluttua suodattamalla, suodatuskakku 25 pestiin 100 ml:11a jääkylmää vettä ja suodatuskakku kuivattiin vakuumissa. Saanto 62,4 g (83,6 %). Tämä aine sisälsi PMR:n mukaan 1,5 paino-% (E)-isomeeria ja HPLC:n mukaan 94,9 paino-% toivottua antibiootin (Z)-isomeeriä ja 1,78 paino-% (E)-isomeeriä.

30 Seuraava menettely on sopiva esimerkin 1 raaka-ai neen ja esimerkin 2 tuotteen komponenttien (Z) ja (E) suhteiden (BMY-28100/BMY-28167) määrittämiseksi HPLC:llä.

Käyttöolosuhteet: (Kolonni: Lichrosorb C-18, luett. n:o 35 218604) i4 85024

Liikkuva faasi: Pumppu A: 97,5 osaa 0,1 M NH4H2P04, pH 4,4. 2,5 osaa asetonitrii- liä

Pumppu B: asetonitriiliä 5 Gradientti: 100 % ainetta A - 75 % ainetta A/25 % ainetta B 25 min:ssa, kolonnin tasapainotus 10 min

Laimennin: 25 % asetonitriiliä/vettä

Injektiotilavuus: 10 μΐ 10 Virtaus: 1,0 ml/min

Detektori: UV aallonpituudella 230 nm Näytteen kons.: BMY-koostumus 2 mg/ml

Viipymäajat: BMY-28100 - 11 min BMY-28167 = 13 min 15 BMY-28100- asetonidi - 17 min BMY-28167- asetonidi = 19 min 20 Esimerkki 3

Antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannaisen muuttaminen natriumvetysulfiitin avulla 125 mg esimerkin 1 mukaista tuotetta liuotettiin 1 ml:an vettä lämpötilassa 45 - 50 eC. Tähän liuokseen li-25 sättiin 62,5 mg (noin 2,5 molekyyliekvivalenttia) natrium-vetysulfiittia 20 min:n aikana samalla sekoittaen. Tässä vaiheessa on tarkoituksenmukaista lisätä BMY-28100-mono-hydraatin siemenkiteitä mikäli niitä on saatavissa, mutta se ei ole välttämätöntä. Kuumennusta ja sekoitusta jatket-30 tiin vielä puoli tuntia. Seos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan, sekoitettiin vielä puoli tuntia ja sen jälkeen erotettiin tuote. Saanto on noin 60 % BMY-28100-monohyd-raattia, joka sisältää 1,8 % (E)-isomeeriä.

35 15 85024

Esimerkki 4

Asetoni-imidatsolidinonijohdannainen BMY-28100-di- metyyliformamidisolvaatista Materiaalit: 4,62 g (0,0092 mol) BMY-28100.1,5 DMF 5 3,32 g (0,02 mol) natrium-2-etyyli- heksanoaattia 100 ml asetonia 40 ml metanolia 0,18 ml (0,1 mol) vettä 10 Lietettä, joka sisälsi yhdistettä BMY-28100.1,5 DMF raeta-nolin ja asetonin seoksessa, sekoitettiin huoneen lämpötilassa, samalla kun siihen lisättiin natrium-2-etyyliheksa-noaattia ja sen jälkeen vettä. Seoksen lämpötila kohotettiin 40 °C:seen samalla sekoittaen. Kirkas liuos muodos-15 tui noin 5 minuutissa. N. 10 min sen jälkeen saostuma alkoi muodostua. Seos pidettiin lämpötilassa 40 °C 2,5 tuntia ja sekoitusta jatkettiin koko ajan ja sen jälkeen jäähdytettiin lämpötilaan noin 18 “C ja tuote erotettiin. Tuote on käytännöllisesti katsoen samanlaista kuin esimer-20 kissä 1.

Esimerkki 5

Kapsellannostelumuoto

Seuraavat ainekset sekoitetaan kuivina ja sen jäl-. . keen pakataan koviin gelatiinikapseleihin, jotka täyte- 25 tään painoon 0,345 g: 302.5 g natrium-7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hydroksife- nyyli)-5-okso-l-imidatsolinyyli]-3-[(Z)-l propenyyli]kef-3-eemi-4-karaboksylaatti hydraattia (Esimerkki 1) 30 2,0 g magnesiumstearaattia 30,0 g mikrokiteistä selluloosaa (Avicel PH 102) 10.5 g tärkkelystä

Annos riittää 1000 kapseliin, jotka ovat sopivia oraaliseen antomuotoon.

35 ie 8 5024

Esimerkki 6

Injektioliuos

Esimerkki 6 sopii aseptiseksi menetelmäksi, jonka avulla voidaan valmistaa steriiliä kiteistä natrium-5 7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hydroksifenyyli)-5-okso-l-imidatso- linyyli]-3-[(Z )-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksylaat-tia. Tämän liukoisuus veteen on useita satoja milligrammoja millilitraa kohti, ja siten sopivat annosmäärät liukenevat helposti tavallisiin vettä sisältäviin injektio-10 liuottimiin, esim. veteen, glukoosiliuokseen, normaaliin suolaliuokseen jne. Esimerkiksi 302,3 mg steriiliä kiteistä ainetta voidaan laittaa pieniin lääkepulloihin, jotka suljetaan steriileillä kumikorkeilla ja sen jälkeen alu-miinisulkimilla. Käytön yhteydessä 2 - 3 ml injektioliuo-15 tinta, esim. steriiliä vettä, injektoidaan pulloon ja sen jälkeen injektioliuos imetään ruiskuun ja annetaan paren-teraalisena injektiona. Natrium-7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hyd-roksifenyyli)-5-okso-l-imidatsolinyyli]—3[(Z)-1-propenyy-li]kef-3-eemi-4-karboksylaatin määrä vastaa molekyyliekvi-20 valenttia (250 mg) antibioottia BMY-28100.

Esimerkki 7

Peräpuikkoannostelumuoto

Annos, joka on sopiva käytettäväksi 100 peräpuikon valmistamiseen rektaalista antomuotoa varten, valmiste-25 taan seuraavista aineista: 154,8 g kovaa, murenevaa, vähähydroksidista ja rasvaista peräpuikkomassaa, esim. Witepsol H-15 (Dynamit-Nobel) 30,23 g natrium-7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hydroksife-30 nyyli)-5-okso-l-imidatsolinyyli]-3-[(Z)-l propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksylaattimono- hydraattia

Rasvainen perusmassa sulatetaan lämpötilassa 50 -60 °C ja sen jälkeen jäähdytetään juuri sulamispisteen 35 yläpuolelle (35 °C) jonkin verran sekoittaen. Imidatsoli- i7 85024 nyylijohdannaista levitetään sulan massan pinnalle, kunnes koko määrä on hajaantunut 15 minuutin aikana. Sekoitusta jatketaan 1 tunti ja sen jälkeen seos levitetään esikuu[ mennettuihin peräpuikkomuotteihin. Muotin sisältöineen 5 annetaan sen jälkeen jäähtyä lämpötilaan 22 - 26 °C ja peräpuikot poistetaan ja pakataan. Jokainen peräpuikko sisältää annoksen, joka vastaa 250 mg:aa antibioottia BMY-28100.

Claims

1. Puhdistusprosessi, tunnettu siitä, että (1) muodostetaan koostumus, joka sisältää antibioottia, 5 joka on 7-[D-2-amino-2-(4-hydroksifenyyli)asetamido]-3- [(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksyylihappo, sekä sen (E)-isomeeriä ja natriumsuolaa muodostavaa reagenssia alkyyli-, alisyklisen, aryyli- tai aryylialkyyliketonin läsnäollessa, jonka ketonin molekyylipaino on alle 200, 10 reaktio-olosuhteissa, jolloin antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen ja (E)-isomeerin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen muodostuvat, (2) liete-tään vaiheessa (1) muodostuneet imidatsolidinonijohdan-naiset liuottimeen, johon mainittu (E)-isomeerin natrium-15 suolan imidatsolidinonijohdannainen liukenee ja mainittu antibiootin natriumsuolan imidatsolidinonijohdannainen ei oleellisesti liukene, jolloin muodostuu mainitun antibiootti johdannaisen suspensio mainitun (E)-isomeerijoh-dannaisen liuoksessa, ja (3) erotetaan mainittu liukene-20 maton antibioottijohdannainen mainitusta suspensiosta oleellisesti vapaana (E)-isomeerijohdannaisesta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (1) mainittu ketoni on asetoni.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (1) mainittu natriumsuolaa muodostava reagenssi on natrium-2-etyyliheksa-noaatti ja mainittu koostumuksen muodostaminen tapahtuu nestemäisessä väliaineessa.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu nestemäinen väliaine sisältää inerttiä orgaanista nestettä, alkyyli-, ali-syklistä, aryyli- tai aryylialkyyliketonia, jonka molekyylipaino on alle 200, tai niiden seosta, jossa vaiheen 35 (1) aikana syntyy liuos. 19 85024

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään metanolia ja asetonia.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että mainittu koostumuksen muodostaminen tapahtuu lämpötilassa 35-55 °C.

7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu koostumuksen muodostaminen tapahtuu lämpötilassa 40-55 °C.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ketoni vaiheessa (1) on asetoni ja liuotin vaiheessa (2) sisältää asetonia.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotin vaiheessa (2) on me- 15 tanolin ja asetonin seos.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu vaiheessa (3) saatu antibioottijohdannainen on muutettu mainituksi antibiootiksi.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu vaiheessa (3) saatu antibioottijohdannainen on natrium-7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hydroksifenyyli)-5-okso-l-imidatsolidinyyli]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksylaatti tai sen kiteinen 2. hydraatti.

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että natrium-7-[2,2-dimetyyli-4- (4-hydroksifenyyli)-5-okso-l-imidatsolidinyyli]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksylaatti saatetaan koske- 30 tukseen veden kanssa pH-arvon ollessa 5,8-6,0 ja lämpöti-____ lan 40-50 °C ja saadaan 7-[D-2-amino-2(4-hydroksifenyyli )-asetamido]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karbok-syylihappoa tai sen kiteistä hydraattia.

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 85024 tunnettu siitä, että natrium-7-[2,2-dimetyyli-4-(4-hydroksifenyyli)-5-okso-l-imidatsolidinyyli]—3—[(Z)-l— propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksylaatti saatetaan kosketukseen natriumvetysulfiitin vesiliuoksen kanssa ja saa-5 daan 7-[D-2-amino-2-(4-hydroksifenyyli)asetamido]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-eemi-4-karboksyylihappoa tai sen kiteistä hydraattia.

14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vaiheessa (1) käsiteltävä 10 antibioottikoostumus sisältää mainitun 7-[D-2-amino-2-(4-hydroksifenyyli)asetamido]-3-[(Z)-l-propenyyli]kef-3-ee-mi-4-karboksyylihapon ja sen (E)-isomeerin kiteistä solvaattia.

15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että mainittu solvaatti on hyd- raatti.

16. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu solvaatti on dime-tyyliformamidisolvaatti. 21 85024