FI84355C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 5 -(3-eller 4-kinuklidinyl) tiometylsubstituerade pristinomycin ia eller virginamysin s-derivat. - Google Patents

Description

1 84355

Menetelmä terapeuttiset! käyttökelpoisten 56-(3-tai 4-kinuklidinyyli)tiometyylisubstituoitujen pristinamysiini IA- tai virginiamysiini S-johdannaisten valmistamiseksi 5 EP-patenttijulkaisussa 133 097 kuvataan synergis- tiinejä, jotka on substituoitu asemasta 56 ja joiden etuna on niiden liukoisuus.

Pristinamysiini ja virginamysiini, joiden kaava on -L. n ^—/ \_y « r"γ ^ > 20 jossa Y on vetyatomni (virginiamysiini S) tai dimetyyli-aminoryhmä (pristinamysiini IA), ovat tunnettuja esim. julkaisusta J. Preud'homme et ai., Bull. Soc. Chim. Gr., 2, 585 - 91 (1968).

25 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien synergis- tiinijohdannaisten valmistamiseksi, joiden yleinen kaava on 30 0 r f1' - ^ 6 “ 2 84355 sekä niiden suolojen, valmistamiseksi.

Yleisessä kaavassa (I) symboli Y esittää vetyatomia tai dimetyyliaminoryhmää ja symboli R esittää 3- tai 4-kinuklidinyyliryhmää.

5 On selvää, että yleisen kaavan (I) mukaiset yhdis teet ovat isomeerisissä muodoissa ja että nämä isomeerit ja niiden seokset ovat osa tätä keksintöä.

A) Keksinnön mukaisesti yleisen kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa Y ja R on määritelty kuten edellä, 10 voidaan valmistaa saattamalla yleisen kaavan mukainen tioli: R SH (II) 15 jossa R on määritelty kuten edellä, reagoimaan yleisen kaavan mukaisen yhdisteen kanssa: ΗΓ 0 11111 „ £ ό jossa Υ on sama kuin edellä.

Tavallisesti reaktio suoritetaan orgaanisessa 30 liuottimessa, kuten alkoholissa, esimerkiksi metanolissa, ketonissa (esimerkiksi asetonissa) tai klooratussa liuottimessa, kuten kloroformissa tai näiden liuottimien seoksessa lämpötilassa, joka on -78°C ja reaktioseoksen kiehumispisteen välillä, mieluiten noin 20°C.

35 Kun symboli R esittää 3-kinuklidinyyliryhmää, on selvää, että (R) tai (S) konfiguraatiossa olevalla tio- 3 84355 lilla saadaan vastaavassa konfiguraatiossa oleva yleisen kaavan (I) mukainen synergistiini.

Yleisen kaavan (II) mukaista tiolia, jossa R on 3-kinuklidinyyliryhmä, voidaan valmistaa käyttämällä läh-5 töaineena yleisen kaavan mukaista tioloesteriä: R-S-COR' (IV) jossa R on määritelty, kuten edellä ia Rf esittää 1-4 10 hiiliatomia sisältävää alkyyli ryhmää, mieluiten met- :i-.. -ryhmää ja mitä tahansa tunnettua menetelmää tiolin valmistamiseksi tioloesteristä muuhun molekyylin osaan kajoamatta. Käytetään etenkin alkoholyysiä emäksisessä liuoksessa, esimerkiksi alkoholissa, kuten metanolissa 15 natriummetylaatin tai natriumhydroksidin läsnäollessa lämpötilassa, joka on 20°C:n ja reaktioseoksen kiehu..is-lämpötilan välillä.

Kaavan (IV) mukaista tioliesteriä voidaan valmistaa analogisesti R.P. Volanten kuvaamalle menetelmälle, 20 Tet. Let. 22, (33), 3119 (1981) käyttämällä lähtöaineina yleisen kaavan mukaista alkoholia: R OH (V) 25 jossa R on määritelty, kuten edellä ja yleisen kaavan mukaista tiokarboksyylihappoa: R'CO SH (VI) 30 jossa R' on määritelty edellä, käsittelemällä trimetyyli-fosfiinin ja dialkyyliatsodikarboksylaatin seosta esimerkiksi di-isopropyyliatsodikarboksylaatilla.

Reaktio suoritetaan analogisissa olosuhteissa yllä kuvatulle menetelmälle.

35 On selvää, että yleisen kaavan (V) mukaisella (R)- tai (S)-muodossa olevalla alkoholilla päästään vastaavas- 4 84355 ti yleisen kaavan (IV) mukaiseen, (R) - tai (S)-konfigu-raatiossa olevaan tioliesteriin.

Yleisen kaavan (V) mukaista (R)- tai (S)-konfigu-raatiossa olevaa alkoholia voidaan valmistaa B. Ring-5 dahlin et ai. kuvaamalla menetelmällä, Acta Pharm. Suec., 16, 281 (1979).

Yleisen kaavan (II) mukaista tiolia, jossa R on 4-kinuklidinyyliryhmä, voidaan valmistaa A. Grobin kuvaamalla menetelmällä, Helv. Chim. Acta, 57, 2339 (1974).

10 Yleisen kaavan (III) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa EP-patenttijulkaisussa 133 098 kuvatun menetelmän mukaisesti.

Kun yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat isomeerien seoksena, on mahdollista erottaa nämä kaksi 15 toisistaan millä tahansa menetelmällä, joka ei vaikuta muuhun molekyyliin; esimerkiksi korkean erotuskyvyn nes-tekromatografiällä.

Uusia yleisen kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan puhdistaa tunnetuilla tavanomaisilla menetelmillä, 20 kuten kiteyttämällä, kromatografisesti tai peräkkäisillä uutoilia emäksisessä ja happamassa liuoksessa. Asiantuntijalle, joka tietää synergistiinien herkkyyden alkali-selle liuokselle, on selvää, että "mäksinen liuos" tarkoittaa juuri ja juuri riittävän emäksistä vapauttamaan 25 yhdisteen happoadditiosuolasta eli liuosta, jonka pH ei ylitä 7,5 - 8.

Uudet yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa happoadditiosuoloikseen hapon avulla orgaanisessa liuottimessa, kuten alkoholissa, ketonissa, es-30 terissä tai klooratussa liuottimessa. Suola saostuu mah dollisesti suoritetun liuoksen konsentroinnin jälkeen; se erotetaan suodattamalla tai dekantoimalla. Happoadditio-suoloja voidaan myös valmistaa vesiliuoksina lisäämällä vesiliuoksessa olevaa vastaavaa happoa yleisen kaavan (I) 35 mukaiseen yhdisteeseen.

5 84355

On tunnettua, että fermentaatiolls valmistetut synergistiinit sisältävät lääkäreiden paljon tutkimia yhdisteitä, joita käytetään monien Gram-positiivisten (Staphylococcus-, Streptococcus-sukujen, pneumokokkien, 5 enterokokkien) ja Gram-negatiivisten (Haemophilus-suvun, genokokkien, meningokokkien) bakteerien aiheuttamien tautien hoitoon. Joka tapauksessa nämä yhdisteet ovat sikäli hankalia, että ne eivät liukene vesiliuoksiin eikä niitä voida siten antaa kuin suun kautta, yleensä kapseleina, 10 päällystettyinä tabletteina tai tabletteina. Tämän iiskeneinä ttomuuden huomioon ottaen on mahdotonta käyttää tunnettuja synergistiineja, kun potilas ei pysty niele-mään; näin on yleensä laita pediatriassa ja elvytyksessä, silloin kun näiden yhdisteiden vaikutuskirjolla olisi 15 merkittävä käyttötarkoitus useissa olosuhteissa, esimer kiksi verenmyrkytyksissä, joissa potilas on tajuton.

Keksinnön mukaiset uudet yhdisteet ovat huomattavasti edullisempia, koska ne liukenevat veteen suoloina terapeuttisesti käytettävinä annoksina ja niissä on säi-20 lynyt synergistiinien yleinen vaikutuskirjo. Ne vaikuttavat erityisesti Staphylococcus aureus Smith -lajeihin in vitro konsentraatioissa 1-126 pg/ml ja in vivo annoksilla 5-50 mg/kg subkutaanisesti hiirellä.

Lisäksi ne ovat erityisen mielenkiintoisia vähäi-25 sen toksisuutensa takia.

Niiden LD50-arvo on yleensä yli 150 mg/kg hiirillä subkutaanisesti.

Tämän Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on lisäksi synergistinen vaikutus, kun niitä sekoitetaan pristamy-30 siini IIA:han tai yleisen kaavan X mukaiseen pristinamy-siinin IIB liukoiseen johdannaiseen: 35 6 84355 o ^ (VJ J} CH^ o o CH* S**0 5 ch .L jL I n. j ch3 ,,Λ^> 11--<b 10 jossa Rj esittää 1)1-5 hiiliatomia käsittävää tioalkyyliryhmää, joka on substituoitu i) yhdellä tai kahdella alkyyliamino- tai dialkyy-liliaminoryhmällä, jonka alkyyliosat, jotka sisältävät 15 1-5 hiiliatomia voivat mahdollisesti muodostaa yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ovat sitoutuneet, tyydyttyneen heterorenkaan, joka on 1-pyrrolidinyyli-, piperidi-no, 1-atsetidinyyli-, atsepinyyli-, morfolino, tiomorfo-lino tai 1-piperatsinyyli (joka on mahdollisesti substi-20 tuoitu 1-5 hiiliatomia sisältävällä alkyyliryhmällä) tai ii) 2- tai 3-pyrrolidinyyli-, 2-, 3- tai 4-piperi-dyyli-, 2- tai 3-atsetidinyyli- tai 2-, 3- tai 4-atsepi-nyyliryhmällä, 25 2) yleisen kaavan mukaista yhdistettä:

Het-S- (VIII) jossa Het esittää 3-pyrrolidinyyli-, 3- tai 4-piperidyy-30 li-, 3-atsetidinyyli- tai 3- tai 4-atsepinyyliryhmää, joka on mahdollisesti substituoitu 1-5 hiiliatomia sisältävällä alkyyliryhmällä, 3) dialkyyliaminoryhmää, jonka 1-5 hiiliatomia sisältävät alkyyliryhmät voivat muodostaa yhdessä sen 35 typpiatomin kanssa, johon ovat sitoutuneet, heterosykli- 7 84355 sen renkaan, joka on 1-pyrrolidinyyli, piperidino, 1-at-setidinyyli-, 1-atsepinyyli-, morflino, tiomorfolino ja 1-piperatsinyyli (mahdollisesti substituoitu 1-5 hiili-atomia sisältävällä alkyyliryhmällä), 5 4) yleisen kaavan mukaista ryhmää: R2 - S - (IX) (0)n 10 jossa R2 esittää i) joko typpeä sisältävää 4-7 hiiliatomin ketjun muodostavaa heterorengasta, joka sisältää mahdollisesti yhden tai useamman heteroatomin, joka on typpi, happi tai rikki sulfoksidina tai sulfonina ja joka on mahdollisesti 15 substituoitu alkyyliryhmällä, ii) tai 2-4 hiiliatomia sisältävää alkyyli^nt-jua, joka on substituoitu 1-2 radikaalilla, jotka ovat fenyyli, sykloalkyyliamiini tai N-alkyyli-N-sykloalkyyli-aminoryhmä, jossa on 3 - 6 hiiliatomin ketju, alkyyliami- 20 no, dialkyyliamino tai dialkyylikarbamyylioksi (kahden viimeksi mainitun ryhmän alkyyliosat voivat mahdollisesti muodostaa sen typpiatomin kanssa, johon ovat sitoutuneet, tyydyttyneen tai tyydyttymättömän 4-7 hiiliatomin ketjun sisältävän heterorenkaan, joka sisältää mahdollisesti 25 toisen heteroatomin, joka on typpi, happi tai rikki sulfoksidina tai sulfonina ja joka on mahdollisesti substituoitu alkyyliryhmällä) tai joka on substituoitu yhdellä tai useammalla typpeä sisältävällä 4-7 hiiliatomin muodostamalla ketjulla, joka sisältää mahdollisesti yhden 30 tai kaksi muuta heteroatomia, jotka ovat typpi, happi tai rikki sulfoksidina tai sulfonina, ja joka on mahdollisesti substituoitu alkyyliryhmällä, mainitut heterorenkaat ovat kiinnittyneet niitä sitovaan ketjuun hiiliatomin välityksellä, jolloin ainakin yksi substituenteista, jotka 35 ovat kiinnittyneet yllä mainittuun alkyyliketjuun, on 8 84355 typpeä sisältävä substituentti, joka voi muodostaa suoloja, tai lii) [l-metyylipyrrolidin-2-yylj]-(S)-[metyyli]-ryhmä ja symboli n on 1 tai 2 edellyttäen, että edellä 5 mainitut alkyyliosat ja ryhmät ovat suoraketjuisia tai haaroittuneita ja sisältävät ilman eri mainintaa 1-10 hiiliatomia.

Yleisen kaavan (VII) mukaiset pristinamvsiini IIB:n johdannaiset voivat esiintyä isomeeri sinä muotoina. 10 On selvää, että isomeeriset muodot sekä niiden seokset voivat olla edullisesti sekoitettuina yleisen kaavan I mukaisiin yhdisteisiin.

Yleisen kaavan (VII) mukaisessa määritelmässä kohdassa 4), 15 - kun R2 esittää heterosyklyyliryhmää, tämä ryhmä voi olla esimerkiksi joku seuraavista: 3-atsetidinyy.li, 3-pyrrolidinyyli, 3- tai 4-piperidyyli, 3- tai 4-atsepi-nyyli, - kun R2 esittää heterosyklyylialkyyliryhmää, he-20 terosyklyyliryhmä voidaan valita esimerkiksi edellä mainituista ryhmistä tai se voi olla 2-atsetidinyyli-, 2-pyrrolidinyyli-, 2-piperidyyli-, 2-atsepinyyli-, piper-atsinyyli-, 4-alkyylipiperatsinyyli-, kinolyyli-, isoki-nolyyli- tai imidatsolyyliryhmä, 25 - kun R2 sisältää dialkyyliamino- tai dialkyyli- karbamyyIloksiryhmän, jonka alkyyliosat muodostavat sen typpiatomin kanssa, johon ovat sitoutuneet, hetero-renkaan, viimeksi mainittu voi olla esimerkiksi jckin seuraavista: 1-atsetidinyyli, 1-pyrrolidinyyli, piperidi-30 no, 1-atsepinyyli, morfolino, tiomorfolino sulfoksidina tai sulfonina, 1-piperatsinyyli, 4-alkyyli-l-piperatsi-nyyli, N-alkyyli-l-homopiperatsinyyli, 1-imidatsolyyli.

Yleisen kaavan (VII) mukaiset yhdisteet, joissa R, on määritelty, kuten edellä kohdissa 1), 2) ja 3), ovat 35 EP-patenttijulkaisun 135 410 kohteena ja niitä voidaan 9 84355 valmistaa käyttämällä lähtöaineena pristinamysiini HA:ta tässä patenttijulkaisussa kuvatulla menetelmällä.

Yleisen kaavan (VII) mukaisia yhdisteitä, joissa R-l on määritelty kuten edellä kohdassa 4), voidaan val-5 mistaa hapettamalla pristinamysiini IIB:n johdannaista, sen suolaa tai yleisen kaavan mukaista suojattua johdannaista: υ !|

io NH

CH3 J CH-, k. ,0 ,JW' 15 CH3 I2X' ^--° jossa R2 on määritelty kuten edellä, edellyttäen, että mikäli R2 sisältää rikkiä sisältävän heterorenkaan, rik-kiatomi voi olla rikkinä, sulfoksidina tai sulfonina.

20 Reaktio suoritetaan yleensä hapettimen avulla, jo ka on mahdollisesti valmistettu in situ vesiliuoksessa tai orgaanisessa liuottimessa, mieluiten klooratussa liuottimessa (esim. metyleenikloridi, 1,2-dikloorietaa-ni, kloroformi) tai alkoholissa (esim. metanolissa, t-bu-25 tanolissa) tai näiden liuottimien seoksessa. Reaktio suoritetaan mahdollisesti typpiatmosfäärissä.

Sopivien hapettimien joukosta, joiden avulla voidaan valmistaa yleisen kaavan (VII) mukaista yhdistettä, jossa n - 1, voidaan mainita orgaaniset perhapot: perkar-30 boksyylihapot tai persulfonihapot (esimerkiksi peretikka-happo, pertrifluorietikkahappo, permuurahaishappo, per-bentsoehappo, m-klooriperbentsoehappo, p-nitroperbentsoe-happo, permaleiinihappo, monoperftaalihappo, perkamferi-happo tai p-tolueenipersulfonihappo) tai epäorgaaniset 35 perhapot (esim. perjodihappo tai perrikkihappo).

ίο 84 355

Kun halutaan saada yleisen kaavan (VIJ) mukainen yhdiste, jossa n = 2, tehdään reaktio edullisesti selee-nidioksidin läsnäollessa tai hapetetulla vedellä yleisen kaavan (X) mukaiselle yhdisteelle tai perhapon läsnäol-5 lessa, kuten edellä mainitut hapot, etenkin pertrifluori-etikkahapon tai m-klooriperbentsoehapon läsnäollessa.

Kun valmistetaan yleisen kaavan (X) mukaisen pris-tinamysiini II„:n johdannaista suolanaan, käytetään orgaanisten tai epäorgaanisten happojen kanssa muodostuvia 10 happoadditiosuolo ja, mieluiten tri f1uorietikkahapon, vii nihapon, etikkahapon, bentsoehapon tai kloorivetyhapon kanssa muodostuvia suoloja.

Kun yleisen kaavan (I) mukaista yhdistettä käytetään suolanaan tai suojattuna johdannaisena, reaktio suo-15 ritetaan edullisesti -40°C:n ja 50°C:n välisessä lämpötilassa.

Kun halutaan valmistaa yleisen kaavan (VII) mukaista yhdistettä, jossa r = 1, on myös edullista käyttää lähtöaineena yleisen kaavan (X) mukaisen pristinamysiini 20 II„:n johdannaista emäksisen bikarbonaatin läsnäollessa (esim. natriumbikarbonaatin') -60°C:n !a -40°C:n välillä olevassa lämpötilassa.

Kun R2 sisältää alkyyliamino- tai sykloalkyyliami-nosubstituentin, on myös mahdollista valmistaa yleisen 25 kaavan (I) mukainen suojattu johdannainen, joka voidaan suojata millä tahansa amiineita suojaavalla ryhmällä, jonka liittäminen ja irrottaminen ei vaikuta muuhun molekyyliin; käytetään edullisesti trifluoriasetyyliryh-mää, joka voidaan poistaa reaktion jälkeen käsittelemällä 30 alkalisella bikarbonaatilla (natrium- tai kaliumbikarbo-naatilla) vesiliuoksessa.

Yleisen kaavan (X) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa saattamalla yleisen kaavan mukainen tioli; 35 R2-SH (XI) 11 84355 jossa R2 on määritelty kuten edellä, reagoimaan priStina-mysiini IIA:n kanssa analogisesti menete' ;.· ille, jota on kuvattu EP-patenttijulkaisussa 135 410.

Yleisen kaavan (VII) mukaisia yhdisteitä, joissa n 5 on 2, voidaan myös valmistaa hapettamalla yleisen kaavan (VII) mukainen yhdiste, jossa n on 1.

Reaktio suoritetaan edellä kuvatulle menetelmälle analogisesti, jolloin saadaan yleisen kaavan (VII) mukainen yhdiste, jossa n = 2 käyttämällä lähtöaineena yi :’i ·- - 10 kaavan (X) mukaisen prisfcimimysiinj IIs:n johdannais o

Yleisen kaavan (XI) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa samalla tavalla tai analogisesti menetelmille, joita on kuvattu jäljempänä olevissa esimerkeissä ja etenkin seuraavien julkaisujen mukaisesti: 15 G.G. Urguart et ai., Org. Synth., 21, 36 (1941) A.I. Vogel, J. Chem. Soc., 1822 (1948) J.H. Chapman ja L.N. Owen, J. Chem. Soc., 579 (1950) H.R. Snyder et ai., J. Am. Chem. Soc., 69, 2672 (1947) D.D. Reynolds et ai., J. Org. Chem., 26, 5125 (1961) 20 J.W. Haeffele et ai., Proc. Sei. Toilet Goods Assoc., 32, 52 (1959) H. Barrer et ai., J. Org. Chem., 27, 641 (1962) J.H. Biel et ai., J. Amer. Chem. Soc., 77, 2250 (1955).

Tarvittaessa kaavan (VII) mukaisen yhdisteen iso-25 meerit voidaan erottaa kromatografialla tai korkean erotuskyvyn nestekromatografiällä.

Tämän keksinnön mukaiset synergistiinijohdannaiset vaikuttavat synergistisesti pristinamysiini IIA:n anti-bakteerisen vaikutuksen suhteen Staphylococcus aureus 30 Smith:illä in vivo 0,1 - 10 pg/cm3 annoksilla subkutaani-sesti, kun yhdisteet on sekoitettu suhteissa 10 - 90 % -90 - 10 %.

Terapeuttiseen käyttöön voidaan näitä uusia keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää sellaisenaan eli emäk-35 senä, mutta vesiliuoksissa näiden keksinnön mukaisten yh- 12 84 355 disteiden pääasiallisena etuna on niiden käyttö farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina eli suoloina, jotka eivät ole toksisia käytettävinä annoksina, yhdessä pris-tinamysiini IIA:n kanssa tai yleisen kaavan (VII) mukai-5 sen pristinamysiini IIB:n liukoisen johdannaisen kanssa, joka on itse liuotettuna joko farmaseuttisesti hyväksyttävänä suolana tai tarvittaessa emäksenä, kun liukoisuus on riittävä, jotta saatu liuos sisältäisi yhdistettä sellaisen määrän, joka olisi ainakin terapeuttisesti vaikutit) tavan annoksen suuruinen.

Farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina voidaan mainita happoadditiosuolat epäorgaanisten happojen kanssa, kuten hydrokloridit, hydrobromidit, sulfaatit, nitraatit, fosfaatit tai orgaanisten happojen kanssa, kuten 15 asetaatit, propionaatit, sukkinaatit, malaatit, fumaraa- tit, metaanisulfonaatit, p-tolueenisulfonaatit, isetio-naatit, sitraatit, adipaatit, laktobionaatit tai näiden yhdisteiden substituutiojohdannaiset.

Seuraavat esimerkit osoittavat, kuinka keksintö 20 voidaan toteuttaa käytännössä. Yhdisteiden NMR-spektrit, joita kuvataan näissä esimerkeissä ja vertailuesimerkeis-sä, ilmaisevat ne yleiset piirteet, jotka ovat yhteisiä kaikille yleisen kaavan (I) tai (VII) mukaisille yhdisteille ja ne erityisominaisuudet, jotka ovat ominaisia 25 kunkin yhdisteen substituentin funktiolle.

Seuraavissa esimerkeissä on mainittu vain eri ryhmistä johtuvat erityispiirteet. Kaikki protonit on merkitty yleisessä kaavassa (XII) olevan numeroinnin mukaan ja J.O. Anteunis et ai. suosituksen mukaisesti [Eur. J.

30 Biochim., 58, 259 (1975)].

35 Γ> A r- r-

13 OHO^D

3Ύ > ch3 /- ^ J^CKfik ° 0JZn^K^ch^-« 5 2SHHN nCHj 5 “ γ sir - 0^ ^,ΝΗ 1NH 0

"i h II I

ίο ^

N

!'H. ll^l· :'i >’H5

Yleisen kaavan (VII) mukaisten yhdisteiden kaikki 15 protonit on merkitty seuraavan kaavan numeroinnin mukaisesti : - „ Λ-^fV-

CrV. ..>··' ., , c:-· ' -< c.. U 1 i 28 * Κπΐ' CH, sk^>24 J-019 v J 23

Ellei exxtyisesti toisin mainita, spektrit on mitattu MHz,:n taajuuaexla deuterokxoroiormissa; kemialliset siirtymät on ilmaistu ppm:inä suhteessa tetrametyy-30 lisilaanin signaaliin. Jatkossa käytettävät lyhennykset ovat seuraavat: s = singletti d = dubletti t = tripletti db int = multipletti i4 84355 m = massiivinen dd = dubletin dubletti dt = tripletin dubletti ddd = dubletin dubletin dubletti 5 dddd = dubletin dubletin dubletin dubletti

On selvää, että eri isomeerit on luokiteltu mielivaltaisesti NMRrssä havaittujen kemiallisten siirtymien mukaisesti.

Isomeereiksi A3 ja isomeeriksi A, kutsutaan niitä 10 yleisen kaavan (XIII) mukaisia yhdisteitä, joissa R, on R,S( O )n-ryhmä, jossa n = 1, isomeereillä on seuraavat ominaispiirteet: noin 1,7 (s, -CH3 asemassa 33); noin 3,8 (s, /CH2 asemassa 17); <5 (d, H27) isomeeri A2 tai <5 (d, H27) isomeeri A3; noin 5,50 (d suuri H13); noin 6,20 (d, 15 Hu); noin 6,6 ONH asemassa 8); >8 (s, H20).

Isomeeriksi Bt ja isomeeriksi B2 kutsutaan yleisen kaavan (XIII) mukaisia yhdisteitä, joissa Rj on R2S(0)n-ryhmä, jossa n = 1, isomeereillä on seuraavat ominaispiirteet: noin 1,5 (s, -CH3 asemassa 33); noin 3,7 ja 3,9 20 (2d, )CH2 asemassa 17); noin 4,8 (mt, H13); <5 (d, H27) isomeeri B2 tai >5 (d, H27) isomeeri B7; noin 5,70 (AB rajalla, H1X ja H10); noin 7,7 (N,>NH asemassa 8); noin 7,8 (s, H20).

Isomeeriksi A kutsutaan yleisen kaavan (XIII) mu-25 kaista yhdistettä, jossa R3 on muu kuin R2S(O)n-isomeeri, jonka NMR-ominaispiirteet ovat samat kuin edellä yleisen kaavan (XIII) mukaisilla isomeereillä A3 ja A2, jossa R3 on ryhmä R2S(0)n edellyttäen, että asemassa 27 olevalle H:lie on ominaista: noin 4,7 (d, J < 1 Hz).

30 Isomeeriksi B kutsutaan yleisen kaavan (XII) mu kaista yhdistettä, jossa R3 on muu kuin R2S(0)n-, isomeerin NMR:n ominaispiirteet ovat samat kuin yleisen kaavan XIII mukaisille isomeereille B3 ja B2 edellä ilmoitetut arvot edellyttäen, että asemassa 27 olevalle H:lie saa-35 daan: noin 4,6 (d, J > 2,5 Hz).

is 84355 Jäljempänä seuraavissa esimerkeissä kutsutaan "flash"-kromatografiäksi puhdistustekniikkaa, jolle on ominaista, että se suoritetaan keskinkertaisessa paineessa (50 kPa) käyttämällä 40 - 53 pm rakeista silikageeliä, 5 W.C. Still'in, M. Kahn'in ja A. Mitra'n mukaisesti [J. Org. Chem., 43, 2923 (1978)].

Seuraavissa esimerkeissä, ellei erikseen mainita, kaikki yhdisteet voidaan liuottaa ainakin 2-%:iseksi vesiliuokseksi hydrokloridina.

10 Esimerkki 1

Liuokseen, jossa on 4,4 g 56-metyleenipristinamy-siini IA:ta seoksessa, jossa on 40 cm3 metanolia ja 20 cm3 kloroformia, lisätään 2,8 g 3-merkaptokinuklidiiniä, sitten saatua liuosta sekoitetaan 44 tuntia noin 20°C:n läm-15 pötilassa. Sitten reaktioseos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu jäännös suspendoidaan 100 cm3:iin etyylieetteriä, sitten se erotetaan suodattamalla. Näin saatu kiinteä aine pestään kolme kertaa 10 cm3:llä etyylieetteriä ja puhdistetaan 20 sitten "flash"-kromatografiällä [eluantti: metyleeniklo-ridimetanoli (90/10 tilavuuksina)] ja kerätään 100 cni: n suuruisia fraktioita. Fraktiot 11 - 35 yhdistetään ja konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Jäännöstä sekoitetaan 120 cm3:ssä etyylieette-25 riä. Saatu jäännös erotetaan suodattamalla, puhdistetaan uudelleen "flash"-kromatografiällä [eluantti:metyleeni-kioridi-metanoli (85-15 tilavuuksina)]. Fraktiot 3-7 yhdistetään, konsentroidaan sitten kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Jäännöstä sekoitetaan 50 30 cm3:ssä etyylieetteriä ja näin saatu kiinteä aine erotetaan suodattamalla, pestään kolme kertaa 5 cm3:llä etyylieetteriä, kuivataan sitten alennetussa paineessa (27 kPa) 20“C:ssa. Näin saadaan 1,7 g 3-kinukiidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini IA:ta vaaleankeltaisena kiin-35 teänä aineena, joka sulaa noin 200°C:ssa.

i6 84355 NMR-spektri: neljän isomeerin seos 2,88 ja 2,89 (2s, 4 -N(CH3)2), 3,21 ja 3,22 (2s, 4 -C.H3), 6,51 ja 6,53 (2d, 2 -NH-), 6,57 ja 6,58 (2d, 4fc), 7,82 ja 7,85 (mt, l'H6 kahden pääasiallisen isomeerin H6), 7,95 (mt, 1 'H6 5 kahden pienimmän isomeerin H6), 8,78 ja 8,81 (2d, 6 -NH--kahden pääasiallisen isomeerin 6-NH), 8,98 ja 9,0 (2d, 6 -NH- kahden pienimmän isomeerin 6-NH).

3-kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini IA:n 5-%:ista vesiliuosta saadaan seuraavasti: 10 yhdistettä 100 mg O,IN kloorivetyhappoa 0,98 cm3 tislattua vettä ad. 2 cm3 3-merkaptokinuklidiiniä voidaan valmistaa seuraavasti : 15 Liuokseen, jossa on 14,5 g 3-tioasetyylikinukli- diinia 150 cm3:ssä metanolia, lisätään 0,5 g natriummety-laattia. Sitten reaktioseosta kuumennetaan pystyjäähdyt-täjän alla yksi tunti. Lisätään uudestaan 0,5 g natrium-metylaattia, kuumennetaan sitten pystyjäähdyttäjän alla 20 kaksi tuntia. Reaktioseos konsentroidaan kuiviin alenne tussa paineessa (2,7 kPa) 40°C:ssa. Saatuun jäännökseen lisätään 40 cm3 tislattua vettä, sitten noin 1 cm3 etik-kahappoa, jolloin pH:ksi saadaan noin 8. Saatu jäännös uutetaan kolme kertaa 30 cm3:llä metyleenikloridia. Yh-25 distetyt orgaaniset faasit kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan, konsentroidaan sitten kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu ruskea öljy tislataan alennetussa paineessa (920 Pa), 94°C:ssa tislautuva fraktio otetaan talteen. Näin saadaan 2,8 g 3-merkaptokinuk-30 lidiinia.

3-tioasetyylikinuklidiinia voidaan valmistaa seu-raavalla tavalla:

Liuokseen, jota on pidetty 5°C:ssa typen alla ja jossa on 42 g trifenyylifosfiinia 300 cm3:ssä tetrahydro-35 furaania, lisätään tipoittain 30 minuutin aikana 31,6 cm3 di-isopropyyliatsodikarboksylaattia. Saatua suspensiota i7 84 355 sekoitetaan sitten 30 minuuttia 5°C:ssa. Tähän 5°C:ssa pidettyyn suspensioon lisätään 30 minuutin aikana liuos, jossa on 10,2 g 3-hydroksikinuklidiiniä ja 11,4 cm3 tio-lietikkahappoa 600 cm3:ssä tetrahydrofuraania. Reaktio-5 seosta sekoitetaan sitten 20 tuntia noin 20°C:n lämpötilassa. Sitten se konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 40°C:ssa. Saatu öljy liuotetaan 400 cm3:iin etyylieetteriä, pestään sitten kolme kertaa 160 cm3:llä kloori vetyhappoa. Yhdiste tv t vesi faasit oesv.ä»1:i 10 100 cmJ:llä etyylieetteriä, neutraloidaan sitten noin pii 7:ään lisäämällä natriumbikarbonaattia. Saadun liuoksen pH säädetään sitten 9:ään lisäämällä joitakin tippoja 10N natriumhydroksidin vesiliuosta. Uutetaan kolme kertaa 200 cm3:llä metyleenikloridia. Yhdistetyt orgaaniset faasit 15 kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ia konsentroidaan alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Näin saadaan 14,7 g 3-tioasetyylikinuklidiniä ruskeana öljynä [Rf = 0,33; eluantti: metyleenikloridi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)].

20 Esimerkki 2

Tekemällä samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineena 6,15 g 56-metyleenipristina-mysiini IA:ta ja 1,1 g 3(S)-merkaptokinuklidiinia ja kahden "flash"-kromatografiän jälkeen keräämällä 50 cm3:n 25 suuruiset fraktiot fl. "flash"-kromatografia: eluantti: metyleenikloridi-metanoli (90-10) tilavuuksina, fraktiot 12 - 36 konsentroidaan kuiviin; 2. "flash"-kromatografia: eluantti: metyleenikloridi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina), konsentroidaan kuiviin fraktiot 3 - 20], saadaan 2,6 30 g 3(S)-kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini IA:ta vaaleankeltaisena jauheena. Tätä yhdistettä voidaan saada kiteisenä seuravalla tavalla: 2,6 g 3(S)kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamy-siini IA:ta liuotetaan 20 cm3: iin metanolia. Näin saadaan 35 keltainen liuos. Kiteinen sakka ilmestyy ymppäyskiteen lisäämisen jälkeen raaputtamalla, suodattamisen ja alen- ie 84355 netussa paineessa (27 Pa) 30°C:ssa suoritetun kuiuvauksen jälkeen. Näin saadaan 1,2 g 3( S )kinulidinyyl. i -56-tiome-tyylipristinamysiini IA:ta valkoisina kiteinä, jotka sulavat noin 200°C:ssa (yhdiste, joka on kiteytetty metano-5 lista).

NMR-spekt.ri: yksi isomeeri ( jälkiä isomeeristä 56-hiilen tasossa), 0,62 (dd, J = 15 ja 6, 1H, 56,) / CH , 1 Γ ~ Π 1" r τ' 1 · ; f · w ί ·- ir, ·· - ·· - ~ * ! ! / I j ' r f ’ > '·^ f ·- J·· ·-’ f'

10 i “>I

γΛ 1H, 5/3^), 2,5 - 2,75 (mt, 5^, |N :n lii ja -Cl^S-rn H,,C / v*.

15 1H), 2,9 - 3,?0 (mt, -S-ΠΙ'' . i;i S i :n 11!, 3, JO

*i 3,3 0 (mt, f^C^j :n 4,9 8 (dd, J = 14 ja 7,5, 1H, "A1/

20 J

5^, 5,30 (mt, 2H, 5a ja 4a), 7 90 (dd, 1H, I’Hr), 3(S)kinulkidinyy1i-56-tiometyyli-pristinamysiini IA:ta voidaan myös kiteyttää seuraavalla tavalla:

Liuotetaan If.:ta 87 cm3:iin asetonia, joka on pys-25 tyjäähdyttäjän alla. Saatu liuos suodatetaan, sitten saa tu liukenematon aine huuhdellaan 10 cm3:llä asetonia. Kolmen tunnin kuluttua 20°C:ssa saadut kiteet suodatetaan ia kuivataan. 14,8 a:n uudelleenkiteyttämisen jälkeen 75 cmJ:stä asetonia samoissa olosuhteissa saadaan suodatta-30 misen ja alennetussa paineessa (90 Pa) 20°C:ssa suoritetun kuivauksen jälkeen 12,2 g valkoisia kiteitä, jotka sulavat 185 - 190°C:ssa.

3-merkaptokinuklidiini(S):ää voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 35 Liuokseen, jossa on 29 g 3(S)tioasetyylikinukli- diiniä 30 cm3:ssä metanolia ja jota on pidetty noin i9 8 4 3 b 5 25°C:ssa, lisätään hitaasti 30 cm3 ION nat iumhydroksidin vesiliuosta. Reaktioseosta sekoitetaan ka- si tuntia noin 20°C lämpötilassa. Reaktioseoksen pH säädetään sitten noin 9:ään lisäämällä noin 10 cm3 etikkahappoa. Saatu 5 seos uutetaan kolme kertaa 100 cm3:llä metyleenikloridia. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivataan natriumsulfaatin päällä, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu jäännös puhdistetaan tislaamalla alennetussa paineessa (970 Pa). Näin ssadaan 10 3(S)merkaptokinuklidiiniä valkoisina kiteinä, jotka sula vat 46'C:ssa ja tislautuvat 95°C:ssa 970 Pa:n paineessa (a30 = -118°C, C = 1,1, metanoli).

3(S )tioasetyylikinuklidiiniä voidaan valmistaa samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta käyttämällä läh-15 töaineena 104,8 g trifenyylifosfiinia, 80,8 di-isopropyy- li-atsodikarboksylaattia ja 25,7 g 3(R)hydroksikinukii-diiniä. Näin saadaan 30 g 3(S)-tioasetyylikinuklidiiniä keltaisena öljynä. [Rf = 0,2; eluantti: metyleenikloridi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)]. [R.P. Volanten mukaan, 20 Tet. Let., 22 (33), 3119 (1981)] 3-asemassa oleva hiili (R)-konfiguraatiossa muutetaan (S)-konfiguraatioon reaktion kuluessa.

3(R)hydroksikinuklidiiniä valmistetaan Ring-dahl'in, B. Resul’in ja R. Dahlbom'in kuvaamalla menetel-25 mällä. Acta Pharm. Suec. 16, 281 (1979).

Esimerkki 3

Tekemällä kuten esimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 6,15 g 56-metyleenipristinamysiini I*:ta ja 1 g 3(R)merkaptonuklidiniä ja "flash"-kromatografial-30 la suoritetun puhdistuksen jälkeen ottamalla talteen 40 cm3;n suuruiset fraktiot [eluantti: metyleenikloridimeta-noli (85 - 15 tilavuuksina)] ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 20 - 30, saadaan 2 g 3(R)-kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini IÄ:ta vaaleanruskeana jauheena, 35 joka sulaa noin 200°C:ssa.

NMR-spektri: 0,58 (dd, J = 15 ja 5,5, 1H, 562), 20 84355

H

-S .C

\X / pu 1,5 - 2,2 (m, T f 2 ), 2,30 (in, lH, 56), 2,35 (d, kv 5 j = 15, 1H, 5/^), 2,50 (dd, -CH2S-:n lH) , 2,60 (dd, 1H, ”S /T\

5i2), 2,78 (m, I / :n 1H), 2,90 - 3,10 (m, CH0S:n 1H

“2CsV

N-

10 V-^N -s-ch^V

ia I :n 1H), 3,i5 (m, lH, j\ ), 3,48 (m, CH K' / X M / 2 XN / 'Vs 15 I ) ·η ^-^), 4,95 (dd, 1H, 56^), 5,28 (m, 2H, 5¾. ja

n* V

4a), 7,87 (m, 1H x 0,85, 1. isomeerin l'H6), 7,93 (m, 1H x 0,15. 2. isomeerin l'H6).

3(R)kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini 20 IA:ta voidaan kiteyttää uudelleen seuraavalla tavalla: 56-t3(R)-kinuklidinyylitiometyyli]pristinamysiini IA:ta 75 cm3:iin metanolia. Tähän liuokseen lisätään 4 cm3 tislattua vettä, sitten seoksen annetaan kiteytytä 4°C:s-sa. Saadut kiteet suodatetana, huuhdotaan sitten neljä 25 kertaa 10 cm3:llä metanoli-vesiseoksella (95-5 tilavuuksina). Alennetussa paineessa (90 Pa) 42°C:ssa suoritetun kuivauksen jälkeen saadaan 10,22 g valkoisia kiteitä, jotka sulavat noin 190°C:ssa.

3(R)merkaptokinuklidiiniä voidaan valmistaa samal-30 la tavalla kuin esimerkissä 2, mutta käyttämällä lähtöaineina 32,5 g 3(R)tioasetyylikinuklidiiniä ja 35 cm3 10N natriumhydroksidin vesiliuosta, jolloin saadaan 11,5 g 3(R)-merkaptokinuklidiiniä valkoisina kiteinä, jotka sulavat 45°C:ssa ja tislautuvat 90°C:ssa 830 Pa:n paineessa 35 (a30 = +121°, C = 1,1, metanoii ).

21 84 355 3(R)tioasetyylikinuklidiiniä voida·.m valmistaa samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta k /ttämällä 104,8 g trifenyylifosfiinia, 80,8 g di-isopropyyliatsodikarbok-sylaattia ja 25,7 g 3(S)hydroksikinuklidiiniä. Näin saa-5 daan 33,8 g 3(R)tioasetyylikinuklidiiniä vaaleanruskeana öljynä [Rf - 0,4; eluantti: metyleenikloridi-metanoli (80 - 20 tilavuuksina)].

3(S)hydroksikinuklidiiniä valmistetaan B. Ring-dahl'in et ai. menetelmän mukaisesti. Acta Pharm. Suec, 10 16, 281 (1979).

Esimerkki _4

Tekemällä kuten esimerkissä 1, mutta käyttämällä 3,5 g 56-mety.leenipristinamysiini IÄ:ta ja 0,6 g 4-mer-kaptokinuklidiiniä, kuiviin konsentroinnin jälkeen saa-15 daan kiinteä aine, jota sekoitetaan etyylieetterir^?

Suodattamisen jälkeen eristetään 3,6 g vaaleanruskea! kiinteää ainetta, joka puhdistetaan "flash"-kromatogra-fiällä keräämällä 50 cm3 fraktioita [eluantti: metyleeni-kloridimetanoli (85 - 15 tilavuuksina)]. Fraktioiden 19 -20 35 kuiviin konsentroinnin, etyvlieetteripesun, suodatuk sen ja kiinteän aineen kuivauksen jälkeen alennetussa paineessa (2,7 kPa) 20aC:ssa saadaan 1,2 g 4-kinukljdi-nyyli-5-tiometyylipristinamysiini I. himmeänvalkoisena jauheena, joka sulaa noin 200^:333.

25 NMR-spektrit (kaksi isomeeriä 56-hiilen suhteen noin 85 - 15 suhteissa): 0,62 (dd, J = 15 ja 5,5, 1H, / ‘2—Λ 5/^2i , 1,8/ (t, 6H, _S-/^ /'"‘N ) , 2,20 (m, 1H, 56),

30 V„=V

2,28 (m, 1H, -CH.,-S-), 2,35 (d, J = 15, 1H, 5^), 7,47 /-CH2 35 (dd, lii, 5ίΊ), 3,10 (t, bH, -S-^ ch„^-n ) , 3,22 Md, V ' / \-CH,, 22 84355 1H, -CH2-S-), 5,01 (dd, 1H, 5^), 5,29 (d suuri, J = 5,5, 5a), 7,86 (m, 0,85H, pääasiallisen isomeerin 1Ή6), 7,92 (m, 0,15H, toisen isomeerin l'H6).

4-merkaptokinuklidinyyliä voidaan valmistaa A.

5 Grob'in kuvaamalla menetelmällä, Helv. Chim.Acta, 57, 2389 (1974).

Esimerkki 5

Tehdään samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 1,2 g 56-metyleenivirginiamysii-10 ni S 20 cm3:ssä metanolia ja 0,21 g 3(R)merkaptokinukli-diiniä. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen keräämällä 10 cm3:n fraktioita [eluantti: mety-leenikloridi-metanoli (80 - 20 tilavuuksina)] fraktioon 35 asti, konsentroimalla kuiviin fraktiot 47 - 55 ja kui-15 vaarnalla alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 0,6 g 3(R)kinulidinyyli-56-tiometyylivirginiamysiini A himmeänvalkoisena jauheena, joka sulaa noin 185°C:ssa.

NMR-spektri (kaksi isomeeriä 56 hiilen suhteen noin 80 - 20 suhteissa) 0,4 (dd, J = 15 ja 5,5, 1H, 5fi2),

20 H

\X/ XCH /C

1,5 - 2,2 (m, 5H, ] ^ 2 , 56), 2 (m, 1H, '3 / ) ), \// /1 N N / \ / / 25 2,34 (d, J * 15, 1H, 5/1^) , 2,52 (dd, -CH2S-:n 1H) , 2,63 (dd, 1H, 5E2), 2,78 (dd, 1H, 2,85 " 3,15 (m'

30 ’sv^K “s—fA

CH2-S-:n ja h ^ / | :n 1H) , 3,48 (m, 1H, j ), 4,94 (dd, 1H, 5^, 5,27 (d suuri, J = 5, 1H, 5a), 7,82 (dd, J = 4 ja 1, 1. isomeerin l’H6), 7,9 (dd, J = 4 ja 1, 35 2. isomeerin l’H6).

23 84 355

Esimerkki 6

Tehdään samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineena 1,1 g 56-metyleenivirginiamysii-ni S 20 cm3:ssä metanolia ja 0,19 g 3(S)merkaptokinukli-5 diiniä. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen keräämällä 10 cm3:n fraktioita [eluantti: mety-leenikloridi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)], konsentroimalla fraktiot 19 - 22 ja kuivaamalla alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan Q,b g 3(s)KinukiieL· - 10 nyyli-56-tiometyylivirginiamysiini A vaalenakeltaiaeua jauheena, joka sulaa noin 190°C:ssa.

NMR-spektri (kaksi isomeeriä 55-hiilen suhteen, joita on noin 85 - 15 suhteissa): 0,39 - 2,3 (m, 5H,

15 "sy/v -\A

™2 ' · 2-U (m, 1H, [/ J ), 2,34 (d, J = 15' 1H, 5/jy, 2,52 (dd, -CH2-S-:n 1H) , 2,64 (dd, 1H, 20 ~s .

2,66 (dd, f / I :n 1H) , 2,90 - 3,2 (m, 6H, -CH0S-:n 1H

H„C \ 2 L. x / N7 25 ,, -Vh ... -\/n H ( ^ · 1 ' · ’ · ' | j | “· -ili> = W :2\// 30 (dd, 1H, 5ft), 5,27 (d suuri, 1H, 5a), 7,80 (dd, J = 4 ja 1, 1H x 0,85, 1. isomeerin l’H6), 7,90 (dd, J = 4 ja 1, 1H x 0,15, 2. isomeerin l’H6).

Esimerkki 7

Tekemällä samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mut- 35 ta käyttämällä lähtöaineina 1,62 3(S)-merkaptokinuklidii-niä ja sekoittamalla -20°C:ssa 20 tuntia saadaan alenne- 24 84355 tussa paineessa (2,7 kPa) suoritetun kuiviin konsentroin-nin jälkeen 30°C:ssa 11,4 g vaaleanruskeaa "marenkia", jota sekoitetaan 100 cm3:ssä dietyylieetteriä, suodatetaan ja huuhdellaan kolme kertaa 20 cm3:llä samaa liuo-5 tinta. Tämä yhdiste voidaan kiteyttää asetonista, kuten esimerkissä 2 kuvattiin, jolloin saadaan 6,6 g 3(S)kinuk-lidinyyli-56-tiometyylipristinamysiini IA:ta valkoisina kiteinä, jotka sulavat 198 - 200°C:ssa ja jonka ominaisuudet ovat samat kuin esimerkissä 3 saadulla yhdisteellä 10 ja jolla on 3 % vähäisempää isomeeriä HPLCrllä määritettynä.

Esimerkki 8

Liuokseen, jossa on 1 g 5-metyleenipristinamysiini IA:ta 20 cm3:ssä asetonia, lisätään -20°C:ssa yhden tunnin 15 aikana 0,18 g 3(S)merkaptokinuklidiiniä liuotettuna 5 cm3:iin asetonia. 18 tunnin sekoittamisen jälkeen -20°C:ssa kiinteää ainetta huuhdellaan kolme kertaa 2 cm3:llä asetonia. Ilmassa tapahtuneen kuivauksen jälkeen saadaan 0,6 g 3(S)kinuklidinyyli-56-tiometyylipristinamy-20 siini IA:ta valkoisina kiteinä, jotka sulavat noin 190°C:ssa ja jonka ominaisuudet ovat samoja kuin esimerkissä 2 saaduilla yhdisteillä ja jotka sisältävät 3 % vähäisempää 56-isomeeriä HPLCrllä määritettynä.

Esimerkki 9 25 Liuokseen, jossa on 1,22 g 56-metyleenipristinamy- siini IA:ta 15 cm3:ssä asetonia, lisätään -78°C:ssa 0,16 g 3(S)merkaptokinuklidiiniä 5 cm3:iin asetonia liuotettuna, sitten saatua liuosta sekoitetaan typen alla 24 tuntia -78°C:ssa. Sitten reaktioseos konsentroidaan kuiviin 30 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 1,4 g kermanvalkeaa kiinteää ainetta, joka sisältää 5 % vähäisempää isomeeriä HPLCrllä määritettynä ja jonka ominaisuudet ovat samat kuin esimerkissä 2 saadulla yhdisteellä.

25 8 4 3 55

Vert a iluesime r kk1 1 3,59 g:aan 2-di-isopropyyliaminoetyy.li-26-tiopris-t inamysi.ini IIB:tä (isomeeri A) 40 cm3:iin dikloorime-taania liuotettuna lisätään 0°C:ssa typpiatmosfäärissä 5 0,4 cm4 trifluorietikkahappoa, sitten 1,06 g 85 % Kota- klooriperbentsoehappoa pitämällä lämpötila 0°C:ssa. 20 tunnin sekoituksen jälkeen 25°C:ssa reaktioseos lisätään kyllästettyyn natriumbikarbonaatin vesiliuokseen. Qrgaa ninen faasi dekantoidaan, sitten vesi faasi pestään kolme 10 kertaa 100 cmJ: l.lä :ne tyleenikloridia . Orgaaniset faasix yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä, konsentroidaan sitten kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 4,2 g keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistetaan "flash"-kromatografiällä 15 [eluantti: kloroformi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina>* keräämällä 20 cm3:n fraktioita. Fraktiot 22 - 28 yhdintetään ja konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan vaalean keltainen kiinteä aine, joka sekoitetaan 10 cm3:iin etyylieetteriä. Saatu 20 kiinteä aine erotetaan suodattamalla, jolloin saadaan 0,62 g 2-di-isopropyyliaminoetyyli-26-sulfinyylipristina-mysiini IIp:tä (isomeeri A2:ta) keltaisena jauheena, joka sulaa noin 155°C:ssa.

NMR-spektri: 0,90 - 1,35 [mt, -CH, asemassa 32, 25 CH3 / 31, 30, ^N(Cflv ),] 1.76 (s. -CH, asemassa 33), 2,75 -CH, CH- 3,15 (mt, CH2 asemassa 15, -H4 ja -|>-CH2-CH2N ^ ), 30 0 CH- 3,81 (s, CHZ asemassa 17), 4,76 (d, -H27), 5,51 (d, -h13), 6,21 (d, -Hu), 6,48 (m, NH asemassa 8), 8,13 (s, -H20).

Fraktiot 35 - 45 yhdistetään ja konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°:ssa, jolloin 35 saadaan vaaleankeltainen kiinteä aine, jota sekoitetaan 15 cmJ:ssä etyylieeteriä. Saatu kiinteä aine erotetaan 26 84355 suodattamalla, jolloin saadaan 1,07 g 2-di-isopropyyli-aminoetyyli-26-sulfinyylipristinamysiini IIB (isomeeri A1 80 %, isomeeri A2 20 %) vaaleankeltaisena jauheena, joka sulaa noin 145°C:ssa.

5 NMR-spektri (isomeeri A:): 1,72 (s, -CH3 asemassa 33), 2,70 - 3,15 (mt, iCH2 asemassa 15, -H4, -S-CH2-CH2-N-CH ) 3,81 (s, ^CH2 asemassa 17), 5,26 (d,

Ψ I

0 CH

/n -H27), 5,46 (d, -H13), 6,15 (d, -Hu), 8,11 (s, -H20).

10 2-di-isopropyyliaminoetyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 52 g:aan pristinamysiini IIA:ta, joka on liuotettu seokseen, jossa on 260 cm3 dikloorimetaania ja 520 cm3 metanolia, lisätään tipoittain typpiatmosfäärissä 15 -30°C:ssa 16 g 2-di-isopropyyliaminoetandiolia 30 cm3:iin dikloorimetaania liuotettuna. Liuosta sekoitetaan 20 tuntia -20°C:ssa, konsentroidaan sitten alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatua jäännöstä sekoitetaan kaksi kertaa 1 000 cm3:n kanssa etyylieetteriä, erotetaan suo-20 dattamalla, kiteytetään sitten 100 cm3:stä asetonitrii- liä. Kiteet erotetaan suodattamalla, kuivataan sitten alennetussa paineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 33,6 g 2-di-isopropyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A) valkoisina kiteinä, jotka sulavat 25 122°C: ssa.

NMR-spektri: 1 - 1,15 (mt, isopropyyli-CH3), 1,72 (s, -CH3 asemassa 33), 1,80 - 2,20 (mt, -H25, -H29),

CHC

2,50 - 3 (mt, -SCH2CH2-N^ ) 3,40 (d suuri, -H25), 4,74 30 CH< (s suuri, -H27), 6,32 (m, -NHe), 8,15 (s, -H20).

2-di-isopropyyliaminoetantiolia voidaan valmistaa menetelmällä, jonka ovat kuvanneet D.D. Reynolds, D.L. Fields ja D.L. Johnson; J. Org. Chem. 26, 5125 (1961).

27 84 355

Vertailuesimerkki 2

Liuokseen, jossa on 10 g 2-di-isopropyyliamino-etyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä liuotettuna 300 cm3:iin kloroformia, lisätään 1,22 g natriumbikarbonaat-5 tia. Liuos jäähdytetään -50°C:seen ja siihen lisätään tipoittaan 2,98 g 98-%:ista metaklooriperbentsoehappoa liuotettuna 100 cm3:iin kloroformia. Seosta sekoitetaan kaksi tuntia 15 minuuttia -50°C:ssa, sitten lisätään Kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta., 15 minuutin 10 sekoituksen jälkeen 25°C:ssa seos dekantoidaan, sitten vesifaasi pestään kolme kertaa 200 cm5:Ilo dikloorimetaa-nia. Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesium-sulfaatin päällä, suodatetaan, konsentroidaan sitten alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 15 10,62 g vaaleahkoa marengin näköistä ainetta. Tämä liuo tetaan 400 cm3:iin etyyliasetaattia, käsitellään sitten 140 cm3:llä O,IN kloorivetyhapon vesiliuosta. Vesiliuoksen pH säädetään sitten 4,2:een 400 cm3:llä puskuria, jonka pH on 4,2. Vesifaasi dekantoidaan, orgaaninen faasi 20 pestään sitten 400 cm3:llä puskuria, jonka pH on 4,2. Ve-sifaasit yhdistetään ja pestään kaksi kertaa 150 cnr:ilä etyyliasetaattia. Vesifaasin dekantoinnin jälkeen pH säädetään 7 - 8:aan lisäämällä natriumbikarbonaattia, sitten se pestään kolme kertaa 300 cm3:llä dikloorimetaania. Or-25 gaaniset faasit yhdistetään, pestään sitten kaksi kertaa 200 cm3:llä puskuria, jonka pH on 7,5. Vesifaasi pestään sitten 50 cmJ:ilä dikloorimetaania, sitten orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alennetussa pai-30 neessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 8,04 g vaaleankeltaista kiinteää ainetta, jota sekoitetaan 100 cm3:ssä etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla, kuivataan sitten alennetussa paineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 7,5 g 2-di-isopropyyliaminoetyylisulfinyyli-26-35 pristamysiini IIB:tä (isomeeri A?:ta) keltaisena jauhee- 28 8 4 355 na, joka sulaa noin 158°C:ssa, jonka NMR ominaispiirteet ovat samat kuin vertailuesimerkissä 1.

Vertailuesimerkki 3

Tekemällä samalla tavoin kuin esimerkissä 1, mutta 5 käyttämällä lähtöaineina 6,3 tuntia 2-dietyyliaminopro-pyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä, 0,72 g trifluorietik-kahappoa, 1,91 g metaklooriperbentsoehappoa ja "flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistamisen jälkeen [eluantti: kioroformi-ir.etanoli (90 - 10 tiLavuuksina)] 10 kerätään 60 cm3:n fraktioita ja fraktiot 7-9 konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:s-sa, jolloin saadaan 0,99 g 2-dietyyliaminopropyyli-26-sulfinyylipristinamysiini IIB:tä keltaisena jauheena, joka sulaa noin 150cC:ssa.

15 NMR-spektri: 1,03 - 1,20 (mt, -CH2-CH( CH3 )N( CH2CH3 )2 ja CK3 asemassa 32), 1,76 (s, -CH3 asemassa 33), 3,62 (s, iCH2- asemassa 17), 4,79 (m, -H27), 5,53 (d, -H13), 6,20 (d, -Hn), 6,42 (m, ^NH asemassa 8), 8,13 (s, -H20).

Fraktioiden 23 - 35 kuiviin konsentroinnin jälkeen 20 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 0,64 g 2-dietyyliaminoprOpyyli-20-sul£inyylipristinamysiini IIB:tä (isomeeriä A3), kellertävän vaaleanruskeana jauheena, joka sulaa noin 160 - 170°C:ssa.

NMR-spektri: 1,14 (mt, -N( CH2CH3 )2), 1,24 (d suu-25 ri, CH3-CH-N\ ), 1,73 (s, -CH3 asemassa 33), 3,81 (AB rajalla, CH2 asemassa 17), 5,28 (d, -H27 ), 5, 43 (d, -H13), 6,15 (d, -Hn), 6,88 (m, JiNH asemassa 8), 8,10 (s, -H20).

2-dietyyliaminopropyyli-26-tiopristamysiiniä voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 30 Tekemällä samalla tavalla kuin esimerkissä 1 EP- patenttijulkaisussa nro 135 410, mutta käyttämällä lähtöaineina 3,15 g pristinamysiini IIA:ta ja 1,8 g 2-dietyy-liaminopropantiolia ja ’'flash"-kromatografiällä suoritetun kromatografiän jälkeen [eluantti: metyleenikloridi-35 metanoli (90 - 10 tilavuuksina)) keräämällä 20 cm: n suuruisia fraktioita ja konsentroimalla fraktiot 3-5 kui- 29 8 4 3 5 5 viin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C: ssa, saadaan 1,4 g 2-dietyyliaminopropyyli-26-tioprist;namysiini IIB:tä keltaisena jauheena, joka sulaa noin 160°C:ssa.

NMR-spektri: 1 (in, 9H: -H32 + -N(CH2CH3 )2), 2,50 (ra, 5 6H: -S-CH2-CH-N(CH2CH3)2), 3,30 (m, 1H: -H;6), 4,70 (d, 1H: -H27), 8,12 (s, 1H: -H20).

2-dietyyliaminopropantiolia voidaan valmistaa seu-raavalla tavalla:

Liuokseen, jossa on 29,5 a l-S-isotioureido-2-öi 10 etyyliaminopropaanin nydrokloridia 150 emissä tislattua vettä, lisätään 25 cm3 10N natriumhydroksidin vesiliuosta. Seoksen lämpötila pidetään 100°C:ssa tunnin ajan, jäähdytetään 20°C:seen, pH säädetään 9:ään lisäämällä 8 cm3 12N kloorivetyhappoa, uutetaan sitten kolme kertaa 15 100 cm3:llä etyylieetteriä. Eetterifaasit yhdistetään kuivataan kaliumkarbonaatin päällä, suodatetaan ja konsentroidaan sitten alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Seos puhdistetaan tislaamalla. Näin saadaan 5,8 g 2-dietyyliamino-l-propantiolia värittömänä nesteenä.

20 [Kp. (2,7 kPa) = 78°C] .

l-S-isotioureido-2-dietyyliaminoDropaania voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, jossa on 41 g l-kloori-2-dietyyliamino-propaania 200 cm3:ssä dimetyyliformamidia, lisätään 16,7 25 g tioureaa. Seosta pidetään 100°C:ssa 30 minuuttia, jäähdytetään sitten 20°C:seen. Muodostunut valkoinen sakka otetaan talteen suodattamalla, pestään kolme kertaa 20 cmJ:llä dimetyyliformamidia, sitten kolme kertaa 20 cm3:llä etyylieetteriä. Näin saadaan 29,6 g 1-S-tiourei-30 do-2-dietyyliaminopropaania Valkosina kiteinä, jotka sulavat 247 - 249°C:ssa.

l-kloori-2-dietyyliaminopropaania voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 100 cm3:iin tionyylikloridia lisätään 15 minuutin 35 aikana 45,2 g 2-dietyyliaminopropanolin hydrokloridia, sitten kuumennetaan 80°C:ssa. Kahden tunnin sekoituksen 3o 8 4 3 55 jälkeen tionyylikloridin ylimäärä tislataan ja jäännös liuotetaan 200 cm3: iin etyylieetteriä. l-kioori-2-dietyy-liaminopropaanin hydrokloridi kiteytyy. Suodattamisen jälkeen saadaan 48,2 g valkoisia kiteitä, jotka sulavat 5 112°C:ssa.

2-dietyyliaminopropanolin hydrokloridia voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, jota on pidetty typpiatmosfäärissä ja jossa on 10,6 g litium- ja aluminiumhydiidiä 1 litrassa 10 eetteriä, lisätään hitaasti 20LC:ssa liuos, jossa on 66 g 2-dietyyliaminoetyylipropionaattia 330 emissä etyylieetteriä. Reaktiolämpötila pidetään 35°C:ssa viisi tuntia, sitten se lasketaan 0JC:seen. Sitten lisätään tipoittain 0°C:ssa 12,4 cm3 vettä, 9,1 cm3 5N natriumhydroksidin ve-15 siliuosta, sitten 41,3 cm3 vettä, sekoitetaan 30 minuut tia, sitten seos suodatetaan sintterin läpi, pestään etyylieetterillä. Eetterifaasi kuivataan kaliumkarbonaatin päällä, suodatetaan, konsentroidaan sitten kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Näin saadaan 20 43,8 g keltaista nestettä, joka liuotetaan 200 cm3:iin asetonia, sitten lisätään 78 cm3 4,5N kaasumaisen kloori-vetyhapon liuosta etyylieetterissä. 2-dietyyliaminopropa-nolin hydrokloridi kiteytyy. Suodattamisen jälkeen saa-laan 45,2 g valkoisia kiteitä, jotka sulavat 97 -25 100°C:ssa.

2-dietyyliaminoetyylipropionaattia voidaan valmistaa Braun'in et ai. mukaisesti, Beilstein 61, 1425 (1928).

Vertailuesimerkki 4 30 Tehdään, kuten vertailuesimerkissä 2, mutta käyt tämällä lähtöaineena 4 g 2-dietyyliaminopropyyli-26-tio-pristinamysiini IIB:tä isomeeri A:ta), 1,16 g 98 % meta-klooriperbentsoehappoa ja 1 g kiinteää natriumbikarbonaattia. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen 35 jälkeen [eluantti: kloroformi-metanoli (93 - 7 tilavuuk sina)] ja fraktioiden 21 - 48 kuiviin konsentroinnin jäi- 3i 8 4 ό 5 5 keen, joka suoritettiin alennetussa paineessa 30°C:ssa, saadaan 2,69 g 2-dietyyliaminopropyyli-26-sulfinyylipris-tinaraysiini IIB:tä (isomeeri A2) keltaisena jauheena, jolla on samat ominaisuudet kuin vertailuesimerkissä 3 5 saadulla yhdisteellä.

2-dietyyliaminopropyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeriä A) voidaan valmistaa tekemällä, kuten vertailuesimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 15 g pristinamysiini IIs:ta ia 4.62 g 2-dietvyliaminopronan-10 tiolia. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen [eluantti: kloroformi-metanoli <90 - 10 tilavuuksina)] ja konsentroimalla fraktiot 27 - 52 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa keräämällä 40 cm3:n fraktioita, saadaan 12 g keltaista kiinteää ainetta, jota se-15 koitetaan 60 cm3:ssä etyylieetteriä, suodatetaan, sitten kuivataan. Näin saadaan 8,2 g 2-dietyyliaminopropyyrr-^6-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A:ta) vaaleankeltaisena jauheena, joka sulaa 122°C:ssa.

NMR-spektri: 1 - 1,15 (mt, etyyli-CH3 + 20 CH3-CH-N(C2H5)2), 1,70 (s, -CH3 asemassa 33), 2,35 - 2,60 , CH2-CH3 (mt, -N^ ), 2,50 - 3,10 (mt, -SCHzCHO, 2,75 (mt, CH2-CH3 -H4), 2,89 ja 3,05 (2dd, >CH2~ asemassa 15), 2,92 ja 25 3,08 (2dd, ^CH2 asemassa 15), 3,30 (mt, -H25), 3,37 (mt, -H,.), 3 80 (s, CH. asemassa 17), 4,69 (d. -H-,) . 4.71 < ri -H„), 5.45 (d, -H,,). 6.13 (d, -H,,). 6,14 (d. -H,,).

6,4 - 6.60 (mt, 2>nh asemassa 8). 6,51 (dd, -H^), 6,53 (dd, -H5), 8,09 (s, -H20).

30 Vertailuesimerkki 5

Tehdään samalla tavalla kuin vertailuesimerkissä 2, mutta käyttämällä lähtöaineina 4,58 1-dietyyliaminc-2-propyyli-26-tiopristinamysiini ll3:tä (isomeerejä A), 1,29 g 98 % metaklooriperbentsoehappoa ia 1,14 % kiinteää 35 natriumbikarbonaattia. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen [eluantti: kloroformi-metanoli 32 84 355 (97-3 tilavuuksina)] keräämällä 20 cm3 fraktioita ja konsentroimalla kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa vastaavasti fraktiot 59 - 77 ja 79 - 97 saadaan fraktioista 79 - 97 1,47 g l-dietyyliamino-2-propyyli-26-5 sulfinyylipristinamysiini IIB (ensimmäinen isomeeri) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa 132°C:ssa.

NMR-spektri: 1,02 (t, etyyli-CH3), 1,34 (d, CH,-<pH-CH2N(C2H5)2), 1,72 (s, -CH3 asemassa 33), 2,5 - 2,7 CH2- y 10 (mt, -CH2-N^ ), 2,77 (mt, -H<), 2,87 ja 3,09 (2dd, CH2- -CH2 asemassa 15), 2,97 (mt, -S-CH·^), 3,72 (mt, -H26), 0 3,80 (s, iCH asemassa 17), 4,92 (mt, -H27), 5,43 (d, 15 -H13), 6,15 (d, -Hn), 6,72 (dd, —NH asemassa 8), 8,06 (s, -H20) ja fraktioista 59 - 77 1,07 g l-dietyyliamino-2-propyyli-26-sulfinyylipristinamysiini IXB:tä (toinen isomeeri) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa noin 20 128°C: ssa.

NMR-spektri: 1,72 (s, CH3 asemassa 33), 3,4 (mt, -Η2Λ), 3,79 (s, CH2 asemassa 17), 4,74 (mt, -H27), 5,48 (d, -H13), 6,18 (d, -Hu), 6,80 (mt, iNH asemassa 8), 8,09 (s, "^20 ) · 25 l-dietyyliamino-2-propyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeriä A) voidaan valmistaa tekemällä samalla tavoin kuin esimerkissä 1, mutta käyttämällä iäntöaineina 13 g pristinaroysiini IIA:ta ja 4 g i-dietyyliamino-2-pro-pantiolia. ''Flash”-kromatografiällä suoritetun puhdistuk-30 sen jälkeen [eluantti: kloroformi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)] ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 46 - 55 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa ja keräämällä 50 cm3:n fraktioita saadaan 8 g vaaleankeltaista kiinteää ainetta, joka kiteytetään 30 cmJ:stä asetonitriiliä. Suo-35 dattamisen ja kuivauksen jälkeen saadaan 5,91 g 1-dietyy-liamino-2-propyyli-26-tiopristinamysiini IlB:tä (isomee- 33 84355 rejä A) valkoisina kiteinä, jotka sulavat l36°C:ssa.

NMR-spektri: 0,9 - 1,10 (mt, -N(CH,CH3 )2;, 1,33 - 1,37 (2d, CH3-CH-CH2NC), 1,7 (s, -CH3 asemassa 33), 2,4 - CH,-

X

5 2,65 (mt, -CH2N ), 2,76 (mt, -H4), 3 (mt, -S-CHtl), ch2- 2,9 ja 3,1 (2dd, J>CH2 asemassa 15), 3,52 (mt, -h26>, 3,31 (s, >CH2- asemassa 17), 4,78 (mt, -H27), 5,46 (d, -H13), 6,14 (a, -H31j, 6,40 (mi, äh asemassa ö), 8,03 ja o,x0 10 (2s, -H20).

l-dietyyliamino-2-piopantiolia voidaan valmistaa seuraavalla tavalla, jota ovat kuvanneet R.T. Wraff; J. Chem. Soc. (C), 2087 (1969).

Vertailuesimerkki 6 15 Tehdään samalla tavalla kuin vertailuesimerkissä 2, mutta käyttämällä lähtöaineina 1,7 g 2( R)dimetyyJj.uir.i-no-2-butyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A:ta), 0,50 g natriumbikarbonaattia, 0,45 g 98-%:ista metaklooriperbentsoehappoa. "Flash"-kromatografiällä suo-20 ritetun puhdistuksen jälkeen [eluantti: etyyliasetaatti- metanoli (85 - 16 tilavuuksina)j ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 35 - 58 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 1,1 g valkoista kiinteää ainetta, jota sekoitetaan 30 cm3:iin etyylieetteriä. Suodattamisen ja 25 kuivauksen jälkeen saadaan 0,95 g 2(R)dimetyyliamino-2-butyyli-26sulfinyylipriscinamysiini IIB;tä (isomeeriä a2 ) valkoisena kiinteänä aineena, joka sulaa noin i26°C:ssa.

NMR-spektri: i (mt, -N-CH-CH2CH3), 1,45 - 1,75 (mt, —N-CH-CH2CH3), 1,78 (s, -CH3 asemassa 33), 2,50 -30 3,05 (mt, -S-CH2-CHt: ja -H4), 2,93 ja 3,14 (2dd, CH2 i asemassa 15), 3,31 (mt, -H26), 3,84 (s,-CH2 asemassa 17), 4,84 (d, -H27), 5,51 (d, -H13), 6,19 (d, -Hu), 6,30 (dd, -NH asemassa 8), 8,15 (s, -H20).

35 2(R)dimetyyliamino-2-butyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä voidaan valmistaa tekemällä samalla tavalla kuin 34 84355 vertailuesimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 8 g pristinamysiini IIA:ta ja 2,3 g 2(R)dimetyyliamino-2-bu-tantiolia. "Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen [eluantti: dikloorimetaani-metanoli (90 - 10 5 tilavuuksina)] ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 36 -55 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 3 g 2(R)dimetyyliamino-2-butyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A:ta) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa noin 120°C:ssa.

10 Kiteyttämällä 0,9 g tätä yhdistettä 5 cm3:stä ase- tonitriiliä saadaan erottamisen ja suodattamisen jälkeen 0,2 g 2(R)-dimetyyliamino-2-butyyli-26-tioprostinamysii-ni IIB:tä (isomeeri A:ta) valkoisina kiteinä, jotka sulavat 122°C:ssa.

15 NMR-spektri: 1 (mt, iN-<pH-CH2CH3), 1,4 - 1,7 (mt, ~N-CH-CH2CH3) f 1,72 (s, -CH3 asemassa 33), 2,30 (s, -N(CH3)2), 2,5 - 2,85 (mt, -S-CH2-CHc; ja -H,), 2,93 ja 3,10 (2dd, —CH2 asemassa 15), 3,34 (d suuri, -H26), 3,83 (s, — CH2 asemassa 17), 4,76 (s suuri, -H27), 5,48 (d, 20 -H13), 6,14 (d, -H31), 6,26 (dd, asemassa 8), 8,13 (s, -h20).

2(R)dimetyyliamino-2-butantiolia voidaan valmistaa samalla tavalla kuin jäljempänä vertailuesimerkissä 7 käyttämällä lähtöaineina 52,4 g trifenyylifosfiinia, 40 25 cm3 di-isopropyyliatsodikarboksylaattia, 12 g 2(R)dime-tyyliaminobutanolia ja 15,2 cm3 tiolietikkahappoa (tässä tapauksessa välituotteena esiintyvä tioesteri hydrolysoidaan suoraan silikageelikromatografiän jälkeen).

"Flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistamisen 30 jälkeen [eluantti: dikloorimetaani: 1 000 cm3, sitten dikloorimetaani-metanoli (85 - 15 tilavuuksina): 4 000 cm3] keräämällä 100 cm3:n fraktioita ja konsentroimalla kuiviin alennetussa paineessa fraktiot 42 - 60 saadaan 14 g keltaista öljyä, joka puhdistetaan tislaamalla. Näin saa-35 daan 2,4 g 2(R)dimetyyliaminobutantiolia värittömänä nesteenä [kp. (4 kPa) = 70-75°C].

35 84 355 2(R)-dimetyyliamino-l-butantiolia voidaan valmistaa samalla tavalla kuin M. Wenghoeffer et ai. ovat kuvanneet, J. Heterosyckl. Chem. 7 (6), 1407 (1970).

Vertallueslmerkki 7 5 Tekemällä kuten vertailuesimerkissä 2, mutta käyt tämällä lähtöaineina 2,67 g 2(2S)dimetyyliamino-3-fenyy-lipropyyli-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A:ta) 0,7 g natriumbikarbonaattia ja 0,7 g 98-%:ista metakioo-riperbentsoehappoa, ”flash"-kromatografiällä suoritetun 10 puhdistuksen jälkeen [eluantti: kloroformi-metanoli (yo 10 tilavuuksin)] keräämällä 20 cm1 fraktioita ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 19 - 23 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 1,3 g vaaleankeltaista kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 50 cm3:iin dietyylieette-15 riä ja joka erotetaan suodattamalla, jolloin saadaan 1,18 g 2(2S)dimetyyliamino-3-fenyylipropyyli-26-sulfinyyIi-pristinamysiini IIB:tä vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa noin 150°C:ssa.

NMR-spektri (400 MHz, CDC13): 1,73 (s, -CH3 ase-20 H

y massa 33), 2,4-2,6 (mt, -S-CH2-Cs ), 2,8 - 3,1b ψ f n o ch2-

H

/ (mt, -S-CH2-C' ), 2,44 (s, -N(CH3)2), 2,77 (mt, i i \ 25 O CH2- -H4), 2,89 ja 3,1 (2dd, — CH, asemassa 15), 3,18 (mt, -H26), 3,82 (s, ^CH2- asemassa 17), 4,68 (d, -H,?), 5,51 (d, -H,,), 6,19 (d, -Hin), 6,50 (dd, NH asemassa 8), 7,li (d, -H fenyylin orto-asemassa), 7,23 (t, -H fenyylin pa-30 ra-asemassa, 7,31 (t, -H fenyylin meta-asemassa), 8,13 (s, -H20).

2(2S)dimetyyliamino-2-fenyylipropyyli-26-sulfinyy lipristinamysiini IIB:n (isomeerin A2) l-%:inen vesiliuos valmistetaan seuraavasti: 36 8 4 355 yhdistettä 30 mg O,IN kloorivetyhappoa 0,45 cm3 tislattua vettä 3 cm3 2(2S)dimetyyliamino-3-fenyylipropyyli-26-tiopris-5 tinamysiini IIB (isomeeri A) voidaan valmistaa samalla

tavalla kuin esimerkissä 1 lähtöainetta valmistettaessa, mutta käyttämällä lähtöaineena 7,13 g pristinamysiini IIA:ta ja 2,65 g 2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropantiolia ja "flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jäl-10 keen [eluantti: etyyliasetaatti-metanoli (80 - 20 tilavuuksina)] keräämällä 60 cm3:n fraktioita ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 33 - 43 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 4,6 g vaaleankeltaista kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 50 cm3:iin etyylieetteriä, suoda-15 tetaan ja sitten kuivataan alennetussa paineessa (90 kPa) 45°C:ssa. Näin saadaan 3,6 g 2(2S)dimetyyliamino-3-fenyy-lipropan-26-tiopristinamysiini IIB:tä (isomeeri A:ta) vaaleankeltaisena jauheena, joka sulaa noin 110°C:ssa. NMR-spektri: 1,69 (s, -CH3 asemassa 33), 2,38 20 H

(S, -N(CH3)?), 2,35 - 3,05 (mt, -SCH2-C ^ ), 2,73

I N

N CH,- /\ 2 (mt, -H4), 2,89 ja 3,10 (2dd, -CH2 asemassa 15), 3,26 (d suuri, -H26), 3,81 (s, ^CH2 asemassa 17), 4,68 (s suuri, 25 -H27), 5,47 (d, -Hj3 ), 6,12 (d, -Hu), 6,27 (mf, NH ase massa 8), 7,18 (d, -H fenyylin orto-aseraassa), 7,21 (t, -H fenyylin para-asemassa), 7,30 (t, -H fenyylin mta-ase-massa), 8,11 (s, -H20).

2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropantiolia voidaan 30 valmistaa seuraavasti: 20 g:aan 2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropantioli-asetaattia (raakatuotteena) liuotettuna 50 cm3:iin meta-nolia lisätään typpiatmosfäärissä 0,2 g natriummetylaat-tia ja kuumennetaan pystyjäähdyttäjän alla kaksi tuntia. 35 Sitten seos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan neste, joka puhdiste- 37 84 355 taan tislaamalla. Näin saadaan 2,4 g 2(S)dimetyyliamino- 3-fenyylipropantiolia värittömänä nesteenä [kp. (14 kPa) = 95°C], jota käytetään sellaisenaan seuraavassa reaktiossa.

5 2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropantioliasetaattia voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Lisätään 0°C:ssa typpiatmosfäärissä 41,97 g trife-nyylifosfiinia ja 310 cm3 tetrahydrofuraania, sitten lisätään tipoittain 31,5 cmJ di-isopropvyliatsodikarboksv-10 laattia ja annetaan sekoittua tunnin ajan O'Orssa. Saatuun valkoiseen suspensioon lisätään tipoittain seos, jossa on 15 g 2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropanolia ja 11,44 cm3 tiolietikkahappoa liuotettuna 160 cm3:iin tetrahydrof uraania . Tunnin sekoituksen jälkeen 0°C:ssa, sit-15 ten yhden tunnin 30 minuutin kuluttua 25°C:ssa seos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu öljy lisätään 190 cm3:iin metanolia, saostuva valkoinen kiinteä aine poistetaan suodattamalla ja suodos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa 20 (2,7 kPa) 30°C:ssa. Sitten jäännöstä sekoitetaan 200 cm3:n kanssa isopropyylioksidia, saostuva valkoinen kiinteä aine poistetaan taas suodattamalla ja suodos konsentroidaan, jolloin saadaan 45 g keltaista öljyä, joka puhdistetaan "flash"-kromatografiällä [eluantti: dikloorime-25 taani-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)] ja kerätään 100 cm3:n fraktioita. Fraktioiden 37 - 55 konsentroinnin jälkeen alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 10,4 g 2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropantioliasetaattia oranssinkeltaisena öljynä (joka sisältää trifenyylifos-30 fiinioksidia).

2(S)dimetyyliamino-3-fenyylipropanolia voidaan valmistaa samalla tavalla kuin T. Hayashi et ai. ovat kuvanneet, J. Org. Chem., 48, 2195 (1983).

Vertailueslmerkit 8-26 35 Tekemällä kuten vertailuesimerkissä 2, valmiste taan seuraavia yhdisteitä: 38 84355

Vertailuesi- R 1) Isomeeri merkki n 2) Sulamispiste 5 ------------------4-------------------------------------------------------

8 -(CHJ- N (C„H_} „ 1 O Isomeeri A

" 2 252 2) Sp.v 172°C

1) Isomeeri a., 70 %

Isomeeri a“ 15 % 9 -{CH ) N(CH ) 1 Isomeeri B 7 %

Z Z J Z Isomeeri b; 8 I

iU 2) Sp. V 150°C" .n -(CH ) N-C^H 1) Isomeeri A? 1U Z I “ 2) Sp. ro 145°C“ ___________________________™3_________________________________________ 15 O Isomeeri A- 45 % 11 -(CH,,)- N(CH ) 1 Isomeeri B? 35 %

Isomeeri B“ 15 % 2) Sp. 165°C1 1) Isomeeri 60 % ^ Isomeeri A^ 25 % 12 -(CH-,)n-N 1 Isomeeri B 15 % ZU " “ \_ 2) Sp. rO 175°C1 1) Isomeeri A^ 75 % ^_ Isomeeri 5 % 13 -(CH )0-N 1 Isomeeri B 10 % \_ Isomeeri B? 10 % 2) Sp. r\J 145°0~ ^_ I) Isomeeri A-, 30 % 14 - (CH-,) 0 -N 1 Isomeeri At" 10 ?<;

' " “ \ 2) Sp. 162°C

^__ 1) Isomeeri A, 50 ^ 15 -(CH ) -M \ 1 Isomeeri A^ 50 % |

30 “ 2 \-/ 2) Sp. rv 1 = 2°CZ

^ ..N 1) Isomeeri A

j 16 -'c:Vz-\ j 1 J2) Sp. sv 170°cz 39 84355

Vertailuesi- ^ 1,. Isomeeri merkki. n 2) Sulamispiste 5 __ I) Isomeeri A, 17 -(CHj -N C> 1 2) 5ρ.^126°0Ζ 2 2 \_/ 1) 4someeri a 70 % 18 - (CH„ ) 0 NH G H 1 Isomeeri b“ 15 % e, jL. T y T , . , . :.. I : ; I !2) Sn.^y 14 Q ° n *“ i ; -i ‘ ":·· 19 -(CH0)„ MH C H 1 Isomeeri B* 15 %

“ 2 4 y 2) Sp.^v 170°CA

1) Isomeeri B 65 % 20 -(CH„)„ NH C H 1 Isomeeri 35 % 15 z. 2 4 y 2) Sp. 140°0“ 21 -(CH )n MH C H 1 I) Isomeeri A 80 %

2 Λ 1 2) Sp.rj 128°C

1) Isomeeri A- 50 % 20 isomeeri A 15 % 22 -(CH„)„ NH C1AH„, 1 Isomeeri B, 20 % ; ; - J j isomeeii ro .. 2) Sd . v 12*4 e2 ^-- 1) Isomeeri A 90 %

23 -- (CH_)-NH- / \ 1 2) Sp.rxjl66°C

: 2. 2 \ / - : 25 _______________!________________,ΓΙΙΖί_____________________________,_______ ' j" __ ; 1) Isomeeri A, ?4 | -'CH ) -N-/ \ I 1 2) Sn. l?6°r/ I I 2 - i ^ i I | t----------------μ------------3-----------------i_-------1---------------------- ! χ- i) Isomeeri A_ - 30 25 ! -(CH_) OCON N-CH„ 1 2) Sp. -^135°^

i \_/ J

} ^_______ Π Isomeeri

i 42 - j I I

- - ! I ; 40 84355

Vertailuesimerkki 27

Tekemällä kuten vertailuesimerkissä 1, . ,.tta käyt- •uaii- lähtöaineina. 7,8 g 1 (S)metyyli-2-pyrro '.idinyyli-26-trometyylipristinamysimi Il^tä (isomeeri A), 0,919 cm ~ r i f luo l ietihkahappon , 2,1 g metuklooriperbortsothuppoa 3 ja keräämällä 60 cm :n fraktioita "flash"-kromatografiällä .'-aoritaian puhdistuksen jälkeen Meluan tl ι: k;.. ·„ i·.· i .... - fenoli (90 - 10 tilavuuksinaja konsentroimalla fraktiot ·> “ tj dl'Juii'j cUooo. O-J -"-A \<‘/ i - / - - - · .... j , j> Ι^.ι,,Ια.ι i. f J '-j 1 (o| ^ IJ. ‘ ' j ilO-llux-i) ^ ,!.i \-J y X } <. a.

iidUl.UtaySll.U iigj td jiJOuli J: iU X. äi ta . 1 vU 1 - J. X 3 v: uu jääneenä, joka sulaa noin 140 C:ssa.

NMR-spektri: 1,76 (s, -CH^ asemassa 33), 2,48 (s, NClij) , 1,70 - 2,60 (mt, -U2y ja ^.CII2 asemassa 25 ja 13 ! /NX,

j l|“2 )> 2,75 - 3,25 (mt, -S-c^-ch') . 3,82 (s, ^CH2 CH — CH2 O

20 asemassa 17), 4,81 (d, -H27) , 5,52 (d, -H^) , 6,20 (d, N.

i v f ^ - V *lU , »'j - i ΰΐ -Z> -3 -4. ό } , \j f -L -* i U> f "*^20^ *

Fraktioiden 46 - 59 kuiviin konsentroinnin jälkeen i Billie uus sa pannee s s a (2,7 kx:a) 30 C : ssa saadaan i, 1 g vo J aie Lyyli-2-pyr rolidinyy li -2 6-πια tyy Hauli: inyylipr 1st ina-25 mysiini limitä (isomeeriä A^) vaaleankeltaisena jauheena, θλ·ΐ Suldd noin i**o"Cissa.

r4 ιί*ι\ S jj-/ K v— ^ j. · g s ^ ^ o f ·—r ii ^ et o if U* ti o o c*. J ^ ^ x ^ i ^ !

/ ^CH

30 2,50 (mt, j | 2 , -H29), 2,41 (s, ^N-CH3), 2,65 - ch2~-ch2

Ui '· ·*!·.- . e ä · - a C.^ .·'·:{ t ** ViuL, aatiiuaöou X S , 'il <λ bomu o o ex -r , φ " ^ ' 3 , o £ v a, et j a x x u ^ ^ v ii 2 ua o o»iia s o a x < ) f «j f ^ ^ v v*, ^ ,1/ (u, — ä 11 / r O , i 1 (S, - ti 2q) * 41 84355 l-metyyli-2-pyrrolidinyyli-26-tiometvylipristinamy-siini IID:tä voidaan valmistaa .seuraavalla ‘avalla:

LJ

Tekemällä kuten EP-patenttijulkaisun esimerkissä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 10,5 g pristinamysiini 5 Ilotta ja 3,14 g 1(S)metyyli-2-pyrrolidinyylimetandiolia ja "flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen /eluantti: kloroformi-me tanoli (90 - 10 tilaviinko: \-na)7 ja konsentroimalla kuiviin fraktiot 20 - 35 alennetussa paineessa (? ? kPa) 30°C: ssa ^ n. 3 r i n. · LO · 1 f > ; , ; , .' ^ - · . j.k. ’ . ' ' KMR-soektr :i.: 1,70 (s, —CU , a s emä s s a 37? . 2 ,

J

N-CH^) / 1,70 - 2,50 (mt, -H2g, CL^ asemansa 25 ja N\ 15 ^ J-2 ) , 2,6 - 3,20 (mt, -S-CH2-CH^ ) , 3,82 (s, ^CH2 CH„- CH, asemassa 17), 4,73 (d, -Η2?) , 5,45 (d, -H^), 6,15 (d, -H^) , 6,41 (dd, ^NH asemassa 8), 8,11 (s, -H2q) .

20 25 g:aan S-[\ (S)metyyli-2-pyrrolidinyylimetyylij- isotiourc.n lumin hydrokloridia r a a k a t u o f t o e n a 1 luotot tunu 3 3 ; 100 cm : nn tislattua vettä, lisätään 100 cm 4N natrium- hydroksidin vesiliuosta, sitten seosta sekoitetaan 90° C:ssa typpiatmosfäärissä kahden tunnin ajan. Reaktioseos 25 jäähdytetään 0°C:seen, siihen lisätään 25 cm^ 12N kloori- ] - vetvhapon vesiliuosta, uutetaan istten kaksi kertaa 200 3* • ni : . 1 . i ,e iy lo> - iklc::! 7 La , ' : . v ·: ·, ,, itcuoSii paineessa 30 C:ssu. näin saatana >.r g 1 ['') me tyy-30 li-2-pyrrolidinyylimetantiolia vaaleankeltaisena öljynä, joka käytetään seuraavassa reaktiovaiheessa ilman enempää puhdistusta.

P.£ - 0,15; sil ikä geeli kr oma to g ra f i a levy; cl .-anti i : klorofor^i-metano (90 - 10 tilavuuksina), 35 11,9 g: aan 1 (S) metyyli - 2-py r ro 1 idli.yy i ikxor c,me taa- 3 ma liuotettuna 50 c:ii : iin etanolia lisätään 10, ? g 42 84 355 tioureaa, sitten sekoitetaan pystyjäähdyttäjän alla 48 tuntia. Seos konsentroidan alennetussa paineessa (2,7 kPa) 40°C:ssa. Jäännös liuotetaan 100 emaliin kuumaa etanolia, suodatetaan sitten aktivoidun puuhiilen läpi. Suodoksen 5 alennetussa paineessa suoritetun (2,7 kPa) 40°C:ssa kuiviin konsentroinnin jälkeen saadaan 25 g vaaleankeltaista öljyä, jossa on 1(S)metyyli-2-pyrrolidinyylimetyyli-iso-tiouroniumin dihydrokloridia ja ylimäärä tioureaa.

= 0,1; silikageelikromatografialevy: eluantti: 10 kloroformi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina).

1(S)metyyli-2-pyrrolidinyylikloorimetaania voidaan valmistaa menetelmällä, jonka ovat kuvanneet T. Hayashi et ai., J. Org. Chem., 48, 2195 (1983).

Vertailuesimerkki 28 15 Tekemällä samalla tavalla kuin vertailuesimerkis- sä 1, mutta käyttämällä lähtöaineina 2,6 g l-metyyli-4- 3 pipendinyyli-26-tiopristinamysiini Il^rtä, 0,3 cm tri-fluorietikkahappoa, 0,8 g metaklooriperbentsoehappoa ja ,,flash"-kromatografialla suoritetun puhdistuksen jälkeen 20 ^eluantti: kloroformi-metanoli (90 - 10 tilavuuksina)^ 3 ja keräämällä 40 cm :n fraktioita sekä konsentroimalla kuiviin fraktiot 20 - 35 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,33 g l-metyyli-4-piperidinyyli-26-sulfinyylipristinamysiini IIB:tä (isomeeri A2) keltaise-25 na jauheena, joka sulaa 170uC:ssa.

NMR-spektri: 1,76 (s, -CH^ asemassa 33), 2,2 - /Cy2"Cy2x 3,00 (mt, -CH N- ) , 2,32 (s, ^N-CH3), 3,82 (s, 30 'cHj-CHj'' CH2 asemassa 17), 4,85 (d, -H2?), 5,50 (d, -H13), 6,19 (d, -H^) , 6,37 (dd, asemassa 8), 8,15 (s, -H2q) .

l-metyyli-4-piperidinyyli-26-tiopristinamysiini 35 II_:tä voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

D

43 84355

Tekemällä samalla tavalla kuin EP-patenttijulkaisussa 135 410, mutta käyttämällä lähtöaineina 3,15 g pristi-namysiini IIA:ta ja 1,6 g 1-metyyli-4-piperIdintiolia ja lisäämällä 0,6 g trietyyliamiinia reaktioseokseen ja 5 "flash"-kromatografiällä suoritetun puhdistuksen jälkeen

Zeluantti: metyleenikloridi-metanoli (92-8 tilavuuksina)./ ja alennetussa paineessa (2,7 kPa) suoritetun, fraktioiden 4-20 kuiviin konsentroinnin jälkeen 30°C:ssa saadaan 0,9 g 1-metyyli.-4-piperidinyyli-26-tioprist5namv- 10 isiini II,: tri keltaisena lauhaan , jak” -i]~i ~'.:n ign° ύ C:saa.

en—s NMR-spektri: 2,10 (m, 4H: -s_<^ N- ) , 2,25 (s, c*2-y 15 y-\ 3H: -3-/ N-CH, ), 2,80 (m, 4H: -S—/ ), 3,55 (m, 3 V_CH/ 1H: -H26), 4,62 (m, 1H: -H2?), 7,70 (m, 1H: -Hg), 8,10 (s, 20 1H: -H20).

2-metyyli-4-piperidintiolia voidaan valmistaa H.

; Barrer'in ja R.E. Lyle'in kuvaamalla menetelmällä, J. Org.

Chem. 27, 641 (1962).

Vertailuesimerkki 29 25 Liuokseen, jossa on 7,8 g 2-dietyyliaminoetyyli- 26-tiopristinamysiini Il^rtä 60 cm :ssä metanolia, lisätään 0°»': ssa typpiatmesf ä"r isää 0,92 cm3 tr’ fluoria tikka-happoa . 15 minuutit k·· luttua 0°0 * asa, lämpötila nostata?.:··. I5°C:seen, sitten lisätään 1,37 g selaniumdioksidia. Kun 30 seleniumdioksidi on liuennut, lisätään hitaasti yli 25°C:n lämpötilassa 7 cm 30-%:isesti hapetettua vesiliuos ta. Tunnin sekoituksen jälkeen 25°C:ssa reaktioseos jääh-dytetään 10°C:seen, siihen lisätään 50 cm3 kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta, uutetaan sitten neljä - 3 35 kertaa 59 cm :llä metyleenikloridia. Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä, suoda- 44 84355 tetaan, konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu keltainen kiinteä aine puhdistetaan "flash"-kromatografiällä /eluantti: kloroformi-me- 3 tanoli (90 - 10 tilavuuksina)./ ja kerätään 40 cm :n frak-5 tioita. Alennetussa paineessa (2,7 kPa) tapahtuneen, fraktioiden 31 - 38 kuiviin konsentroinnin jälkeen 30°C:ssa saadaan kiinteä keltainen aine, joka puhdistetaan "flash"-kromatografialla /"eluantti: etyyliasetaatti-metanoli (80 -20 tilavuuksina)./ ja kerätään 40 cm^:n fraktioita. Frak-10 tioiden 27 - 33 alennetussa paineessa tapahtuneen konsentroinnin jälkeen saadaan valkoista kiinteää ainetta, 3 joka sekoitetaan 50 cm :iin etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla, kuivataan sitten alennetussa paineessa (90 Pa) 30°C:ssa. Näin saadaan 0,5 g 2-dietyyliaminoetyyli-26-15 sulfonyylipristinamysiini II0:tä (isomeeri A:ta) valkoi-sena kiinteänä aineena, joka sulaa noin 150°C:ssa.

NMR-spektri: 0,97 (d, -CH^ asemassa 30 ja 31 etyy- ^CH2' lm -CH-) , 1,75 (s, -CH^ asemassa 33), 2,62 (q, -N ), 20 ^CH2- 3,00 - 3,40 (mt, -SC^CI^CI^N ), 3,82 (s, ^.Ct^ asemassa 17), 5,34 (d, -H13), 5,43 (d, -H13), 6,16 (d, -H11), 6,54 (dd, ^NH asemassa 8), 8,10 (s, -H2Q) .

Vertailuesimerkki 30 25 Tekemällä kuten vertailuesimerkissä 29, mutta käyt tämällä lähtöaineina 6,86 g 2-di-isopropyyliaminoetyyli- 3 26-tiopristinamysiini IID:tä (isomeeri A:ta), 0,77 cm B 3 tnfluorietikkahappoa, 1,15 g seleniumdioksidia, 6,33 cm 30-%:ista hapetettua vettä. "Flash"-kromatografiällä ta-30 pahtuneen puhdistamisen jälkeen /eluantti: etyyliasetaat- 3 ti-metano (80 - 20 tilavuuksina)^ ja keräämällä 40 cm :n fraktioita sekä konsentroimalla fraktiot 28 - 31 alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 0,7 g kiinteää keltaista ainetta, joka puhdistetaan uudelleen "flash"-kro-35 matografiällä /eluantti: etyyliasetaatti-metanoli (85 -15 tilavuuksina)^ ja kerätään 30 cm^:n fraktioita. Frak- 45 84355 tioiden 26 - 33 alennetussa paineessa tapahtuneen kon-sentroinnin jälkeen saadaan keltainen kiinteä aine, joka sekoitetaan 30 cm3:iin etyyliasetaattia, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alennetussa paineessa (90 Pa) 5 30°C:ssa. Näin saadaan 0,6 g 2-di-isopropyyliaminoetyyli- 26-sulfonyylipristinamysiini IIE:tä (isomeeri A:ta) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa noi 140°C:s-sa.

NMR-spektri: 1,06 (d, isopropyylin -CH3), 1,7b (s, 10 -CH3 aemassa 33), 2,79 (mt, -H4), 2,92 ja 3,10 (2dd, CH2 asemassa 15), 2,7 - 3,30 (mt, -S-CH2CH2N( CH )2), 3,52

O O

(d suuri, -H26), 3,82 (s, CH2 asemasa 17), 5,27 (d, loppu, -H27), 5,47 (d, -H13), 6,17 (d, -Hn), 6,42 (mt, NH 15 asemassa 8), 8,12 (s, -H20).

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä käytetään lääkkeinä, jotka ovat muodostuneet jostakin yleisen kaavan (I) mukaisesta yhdisteestä vapaana tai additiosuolana farmaseuttisesti hyväksyttävän hapon 20 kanssa; puhtaana tai sekoitettuna pristinamysiini IIÄ:han tai mieluiten yleisen kaavan (VII) mukaiseen pristinamysiini IIB:n liukoiseen johdannaiseen, valmiste voi lisäksi sisältää farmaseuttisesti yhteen sopivia yhdisteitä, jotka voivat olla inerttejä tai fysiologisesti vai-25 kutiavia. Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää parenteraalisesti, suun kautta, peräsuolen kautta tai ulkoisesti annostellen.

Farmakologiset vertailukokeet

Bakteerin kasvua ehkäisevä aktiiviteetti in vitro 30 Maljoihin, jotka sisälsivät kulloinkin 20 cm3 so pivaa viljelyväliainetta (Muller-Hinton agar) lisättiin 1/10 tilavuudesta tutkittavan aineen geometrisesti kasvavaa laimennusta (suhde = 2). Maljat siirrostettiin moni-pistesiirrostajalla, mikä antoi 104 pesäkkeen muodosta-35 mien yksiköiden täplän mikro-organismia trypsiinisoijavä-liaineessa inkuboituna 18 tunnin ajan 37°C:ssa ja laimen- 46 8 4 3 5 5 nettuna samalla väliaineella. Siirrostuksen jälkeen maljoja inkuboitiin 24 tunnin ajan 37°C:ssa. Minimiestovä-kevyys (CMI) on alhaisin väkevyys, jossa mikro-organismin kehitys estyy.

5 Intraperitoneaalisia tulehduksia estävä aktivi teetti hiirellä.

Hiirille annettiin intrapertoneaalisesti 0,5 cm3:n ruiske tuktittavan mikro-organismin sopivasti sekoitettua 18 tunnin vanhaa viljelmää Brain Herat Infusion"-väliai-10 neessa (Difco) sopivasti laimennettuna 5 %:lla sian mu- siinia. Tämä siirroste tappoi kontrollieläimet 24-48 tunnissa. Tutkittavaa ainetta annettiin ihonalaisesti kahdesti 5 tunnin väliajoin, jolloin ensimmäinen annos annettiin yhden tunnin jälkeen mikro-organismin siirrosteen 15 ruiskuttamisen jälkeen. Käytettiin 50 cm3/kg yksikköan- noksin. 50 %:n parantava annos (CD50) on tutkittavan aineen annos, joka pitää hengissä puolet koe-eläimistä tut-kimusajanjakson ajan (8 vrk.).

Kummankin kokeen tulokset on esitetty seuraavassa 20 taulukossa.

Aktiviteetti in vitro Aktiviteetti in vivo Esimerkin S. aureus Smith S. aureus Smith nro CMI (pg/cm3) DC50 mg/kg s.c.

yksin yhdessä yksin yhdessä 25 pristinamy- pristinamy- siini IIA:n siini IIA:n ___kanssa___kanssa_ 1 2 0,25 5 10 2 1 0,12 6,5 11 30 3 1 0,25 19 12 4 0,5 0,12 48 29 5 1 0,06 120 12 6 1 0,06 34 30

Claims (1)

1. 47 84355 Patenttivaatimus Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 56-(3- tai 4-kinuklidinyyli)tiometyylisubstituoitujen 5 pristinamysiini IA- tai virginiamysiini S-johdannaisten valmistamiseksi, joiden yleinen kaava on (I) 0 'f"3 /=. 10 6 .....·· °Y'nhh f(X 0 [i) 15 kX jossa Y on vetyatomi tai dimetyyliaminoryhmä ja R on 3-tai 4-kinuklidinyyliryhmä, tunnettu siitä, että yleisen kaavan mukainen tioli 20 R-SH jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka yleinen kaava on (III) 25 CH3 ^ t~Y 1 il HN - ° 30 (III) x* ό · 35 jossa Y tarkoittaa samaa kuin edellä, sitten näin saatu <9 84355 Förfarande för framställning av terapeutiskt an-vändbara 56-(3- eller 4-kinuklidinyl)tiometylsubstituera-5 de pristinamycin IÄ- eller virginamycin S-derivat med den allmänna formeln (I) 10 o ς , Μϊ^·· S'· ^ väri Y är en väteatom eller en dimetylaminogrupp och R är en 3- eller 4-kinuklidinylgrupp, kännetecknat därav, att en tiol med den allmänna formeln 20 R-SH väri R har ovan angivna betydelse, omsätts med en före-ning med den allmänna formeln (III) 25 CH3 .=^ hN‘^”'(?h^2CH3 ' (III) 30 NH 0 X o 35 väri Y har ovan angivna betydelse, sedan isoleras den sä- 50 84 355 lunda erhällna föreningen, och eventuellt separeras till sinä isomerer och vid behov omvandlas tili ett farmaceu-tiskt godtagbart sait. 5