FI84064B - FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV FARMAKOLOGISKT VAERDEFULLA SILIBININDERIVAT. - Google Patents
FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV FARMAKOLOGISKT VAERDEFULLA SILIBININDERIVAT. Download PDFInfo
- Publication number
- FI84064B FI84064B FI854535A FI854535A FI84064B FI 84064 B FI84064 B FI 84064B FI 854535 A FI854535 A FI 854535A FI 854535 A FI854535 A FI 854535A FI 84064 B FI84064 B FI 84064B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- silibinin
- ethanol
- ethyl acetate
- animals
- parts
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
- C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
- C07D407/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/02—Antidotes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/06—Antiarrhythmics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Silicon Compounds (AREA)
Description
8406484064
Menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokkaita silibinii-nijohdoksia - Förfarande för framställning av farmakolo-giskt värdefulla si 1ibininderivat.The process for the preparation of pharmacologically valuable silibinin derivatives - Förfarande för framställning av Pharmacakologiskisk värdefulla si 1ibininderivat.
5 Keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa farmakologisesti arvokkaita si 1ibiniinijohdoksia, joiden kaava I on \v/CH2_0-C0_CH2'~CH2~C00M1The invention relates to a process for the preparation of pharmacologically valuable siibinin derivatives of the formula I: / v / CH2_0-C0_CH2 '~ CH2 ~ C00M1
Wr^r - OH O CO-CH2-CH2-COOM2 jossa 20 Mj ja M2 on toisistaan riippumatta vetyatomi tai alkalime-tal1 iätomi.Wr ^ r - OH O CO-CH2-CH2-COOM2 wherein 20 Mj and M2 are independently a hydrogen atom or an alkali metal atom.
Marianohdake - Silybum marianum (L.) Gaertn. (Carduus marianus L.) - on jo muinaisajoista lähtien ollut tunnettu 25 lääkekasvi. R.Munster eristi yhden komponentin, silybiinin tämän kasvin hedelmissä esiintyvistä f 1avolignaaneista, vrt. väitöskirja R.Munster, Munchen 1966. A.Pelter ja R.Hänsel ovat selvittäneet tämän yhdisteen kemiallisen rakenteen, vrt. Tetrahedron Letters. London, nide 25, sivut 3Ό 2911 - 2916 (1968).Marianohdake - Silybum marianum (L.) Gaertn. (Carduus marianus L.) - has been a well-known 25 medicinal plants since ancient times. R.Munster isolated one component, silybin, from f 1avolignans present in the fruit of this plant, cf. dissertation R.Munster, Munich 1966. A.Pelter and R.Hänsel have investigated the chemical structure of this compound, cf. Tetrahedron Letters. London, Volume 25, Pages 3Ό 2911-2916 (1968).
Silybiini, josta aikaisemmin käytettiin myös nimeä sily-mariini I, on tunnetusti arvokas maksalääke, vrt.Silybin, formerly also known as sily-marine I, is known to be a valuable liver drug, cf.
DE-AS 17 67 666. Esimerkiksi patenttijulkaisussa 35 DE-AS 19 23 082 on kuvattu silybiinin (silymariini I) teknillinen valmistusmenetelmä.DE-AS 17 67 666. For example, 35 DE-AS 19 23 082 describes a technical process for the preparation of silybin (silymarin I).
H.Wagner, P.Diesel ja M.Seitz, Arzneimittelforschung, nide 24 (4), sivut 466 - 471, olettivat jo 1974 silybiinille 40 kaksi rakenneisomeeriä, nimittäin silybiini ja isosilybii- 2 84064 ni. A.Arnone, L.Merlini ja A.Zanarotti, Journal Chemical Society Chem.comm., 1979, nide 16, sivut 696/97 tarkensivat ja vahvistivat kokeellisesti tämän olettamuksen. Tunnettu silybiini muodostuu siten kahdesta eri yhdisteestä, nimit-5 täin seuraavien rakennekaavojen A ja B mukaisista yhdisteistä: ch9ohAs early as 1974, H. Wagner, P. Diesel, and M. Seitz, Arzneimittelforschung, Volume 24 (4), pages 466-471, assumed two structural isomers for silybin 40, namely silybin and isosilybin-2 84064 ni. A. Arnone, L. Merlini, and A. Zanarotti, Journal Chemical Society Chem.comm., 1979, Volume 16, pages 696/97 refined and experimentally confirmed this assumption. The known silybin thus consists of two different compounds, namely compounds of the following structural formulas A and B: ch9oh
15 OH O15 OH O
(A) Silibiniini 20 ffV^YX^OCH3 . '25 Nr''· ch2oh(A) Silibinin 20 ffV ^ YX ^ OCH3. '25 Nr '' · ch2oh
.;:' OH O.;: 'OH O
:30 (B) Isosilybiini Näistä rakennekaavoista nähdään, että näillä yhdisteillä on kysymys asemaisomeereistä. Kaavan (A) mukainen yhdiste on 35 nykyään INN-nimistössä silibiniini. Tätä nimitystä käytetään kaavan (A) mukaisesta yhdisteestä tämän jälkeen esillä olevassa hakemuksessa.: 30 (B) Isosilybin It can be seen from these structural formulas that these compounds are positional isomers. The compound of formula (A) is currently silibinin in the INN nomenclature. This term is used for a compound of formula (A) hereinafter in the present application.
Silybiinin terapeuttisen käytön vaikeutena on, että sily 40 biini ei käytännöllisesti katsoen liukene veteen, joten ei 84064 3 voida valmistaa silybiinipitoisia injektioliuoksia tai preparaatteja, jotka vaativat tietyn vesiliukoisuuden.A difficulty with the therapeutic use of silybin is that sily 40 bin is virtually insoluble in water, so 84064 3 cannot be prepared into silybin-containing injectable solutions or formulations that require a certain amount of water solubility.
DE-PS 19 63 318 kuvaa tosin si 1ybiinijohdoksia, joilla on tietty liukoisuus veteen, mutta tällöin on kuitenkin kysy-5 mys meripihkahapon puoliestereiden erittäin monimutkaisesta seoksesta. Tämä seos on monimutkainen sen vuoksi, että silybiinissä on viisi esteröityvää hydroksyyliryhmää ja lisäksi si 1ybiniini 11ä on molemmat edellä mainitut asema-isomeerit, ja esteröintiin käytetty meripihkahappo on 10 dikarboksyylihappo, joka voi muodostaa sekä mono- että diesterin. Farmaseuttiseen tarkoitukseen ei ole mahdollista käyttää tuotetta, joka muodostuu ei-todettavasta määrästä mitä erilaisimpia, selvittämättömiä yhdisteitä.DE-PS 19 63 318 describes siybin derivatives with a certain solubility in water, but it is also a question of a very complex mixture of succinic acid half-esters. This mixture is complicated because silybin has five esterifiable hydroxyl groups and, in addition, silybin 11 has both of the aforementioned positional isomers, and the succinic acid used for esterification is a dicarboxylic acid that can form both mono- and diesters. For pharmaceutical purposes, it is not possible to use a product consisting of an undetectable amount of a wide variety of unresolved compounds.
15 Julkaisussa DE-PS 19 63 318 kuvataan meripihkahapon puo-liesterin erittäin monimutkaisia seoksia, mm. erilaisten si 1ibiinidihemisukkinaattien natriumsuolojen seoksia. Selitys tälle on seuraava: si 1ibiniini-perusrunko sisältää kolme fenolista ja kaksi alkoholista hydroksyyliryhmää 20 (ennen kutsuttu silybiiniksi). Puhtaan si 1ibiniini-C-2',-3-divetysukkinaatin dinatriumsuolan valmistamiseksi (joka monoyhdiste ensimmäisen kerran ja oikealla substituoinni11 a on esitetty esillä olevan keksinnön tuloksena) on keksinnön mukaan ensin esteröity kaikki silibiniinin hydroksyyliryh-'25 mät. Tämän jälkeen on aromaattisesti sidottujen hydroksyy-liryhmien (fenolisten hydroksyyliryhmien) esterit hydrolysoitu. Näin saavutetaan kaksi asiaa: a) Täydellinen esteröinti dikarboksyylihappoyhdisteel1ä ja keksinnön mukaisissa reaktio-olosuhteissa, saadaan aina 30 aikaan dikarboksyylihappoyhdisteen monosubstituointi tai monoesteröinti.DE-PS 19 63 318 describes highly complex mixtures of succinic acid half-esters, e.g. mixtures of sodium salts of various siibine dihemisuccinates. The explanation for this is as follows: The libinin backbone contains three phenolic and two alcoholic hydroxyl groups (previously called silybin). To prepare the disodium salt of pure siibinin C-2 ', - 3-dihydrogen succinate (which mono-compound is shown for the first time and the right substitution as a result of the present invention), all hydroxyl groups of silibinin are first esterified according to the invention. The esters of the aromatic-linked hydroxyl groups (phenolic hydroxyl groups) are then hydrolyzed. Thus, two things are achieved: a) Complete esterification with the dicarboxylic acid compound and under the reaction conditions according to the invention, monosubstitution or monoesterification of the dicarboxylic acid compound is always achieved.
b) Aromaattisesti sidottujen hydroksyyliryhmien esterien erityishydrolyysi yksinkertaisella ja keksinnöllisellä menetelmällä johtaa puhtaan monoyhdisteen muodostumi- 35 seen, ennen kaikkea silibiniinin kahden alkoholisen hydroksyyliryhmän kohdalla, diesterin muodostumiseen.b) Specific hydrolysis of esters of aromatically linked hydroxyl groups by a simple and inventive method leads to the formation of a pure mono-compound, in particular for the two alcoholic hydroxyl groups of silibinin, to a diester.
Hakemuksessa kuvatut monoyhdisteet (si 1ibiniinin-diesterei-tä, joissa silibiniinin kaksi alkoholista hydroksyyliryhmää 4Ö on monosubstituoitu dikarboksyylihappoyhdisteel1ä esterinä) 4 84064 on ensimmäisen kerran kuvattu esillä olevassa hakemuksessamme. Samanaikaisesti on myöskin näiden uusien yhdisteiden edulliset farmakologiset ominaisuudet esitetty.The mono-compounds described in the application (siibinin diesters in which the two alcoholic hydroxyl groups 440 of silibinin are monosubstituted with a dicarboxylic acid compound as an ester) 4,84064 are first described in our present application. At the same time, the advantageous pharmacological properties of these new compounds have also been reported.
5 Keksinnön tavoitteena on siten valmistaa farmaseuttisiin tarkoituksiin sopivia vesiliukoisia si 1ibiniinijohdoksia, jotka on tarkalleen karakterisoitu yksilöllisinä kemiallisina yhdisteinä.It is therefore an object of the invention to provide water-soluble sibinin derivatives suitable for pharmaceutical purposes, which have been precisely characterized as individual chemical compounds.
10 Keksinnölle on tunnusomaista se, että 1 paino-osa kaavan (A) mukaista silibiniiniäThe invention is characterized in that 1 part by weight of the silibinin of the formula (A)
n CH OHn CH OH
··
I 11 OHI 11 OH
OH OOH O
20 (A) Silibiniini liuotetaan 1-2 paino-osaan pyridiiniä ja saatetaan rea-25 goimaan samalla, kun sekoitetaan 1-3 paino-osan kanssa dikarboksyy1ihappoanhydridiä, jonka kaava on o=c-ch2-ch2-c=o \ /(A) Silibinin is dissolved in 1-2 parts by weight of pyridine and reacted while mixing with 1-3 parts by weight of dicarboxylic anhydride of the formula o = c-ch2-ch2-c = o \ /
OO
minkä jälkeen lisätään etanolia, kunnes muodostuu homogeeninen seos, minkä jälkeen lisätään hitaasti vettä samal-35 la voimakkaasti sekoittaen, jolloin aromaattisesti sitoutuneiden OH-ryhmien läsnäolevat esterit hydrolysoituvat, heti tämän hydrolyysin tapahduttua täydellisesti lisätään etyyliasetaattia, pestään etyyliasetaatilla kyllästetyllä happamalla vedellä, etyyliasetaattifaasi haihdutetaan, 40 liuotetaan etanoliin ja muunnetaan mahdollisesti alkoholi- 5 84064 pitoisen aikaiihydroksidi1iuoksen avulla vapaan karbok-syy1ihappoesterin suolaksi.then ethanol is added until a homogeneous mixture is formed, followed by slow addition of water with vigorous stirring to hydrolyze the esters of aromatically bound OH groups present, immediately after this hydrolysis complete addition of ethyl acetate, washing with ethyl acetate saturated acidic water, ethyl acetate, ethyl acetate is dissolved in ethanol and optionally converted into the free carboxylic acid ester salt by means of an alcoholic solution containing 5,84064 alcohol.
Reaktio dikarboksyylihappoanhydridin kanssa tapahtuu par-5 haiten 40-50oC:ssa. Etyyliasetaatilla kyllästetyn happaman pesuveden pH pidetään edullisesti arvossa noin 1,5 - 2,4.The reaction with the dicarboxylic anhydride takes place par-5 at 40-50 ° C. The pH of the acidic wash water saturated with ethyl acetate is preferably maintained at about 1.5 to 2.4.
Parhaana pidettyjä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ovat ne yhdisteet, joissa ja M2 on kulloinkin toisistaan riippu-10 matta ai kaiimetal1iatomi. Ryhmillä ja M2 on kulloinkin parhaiten sama merkitys.Preferred compounds of formula (I) are those in which and M2 are in each case independently of one another a metal atom. The groups and M2 have the best meaning in each case.
Erityisen hyvänä pidetty on silibiniini-C-2',3-divetysuk-kinaatti-dinatriumsuola.Silibinin C-2 ', 3-dihydrogen succinate disodium salt is particularly preferred.
1515
Keksinnön mukaisissa yhdisteissä ovat bentseeniytimeen sitoutumattomat silibiniinin OH-ryhmät esteröity kokonaan meripihkahapol1 a.In the compounds of the invention, the OH groups of silibinin which are not bound to the benzene nucleus are completely esterified with succinic acid.
20 Näillä yhdisteillä, erityisesti si 1ibiniini-C-2’,3-dive- tysukkinaatti-dinatriumsuolai la, on yllättäen selvä farmakologinen vaikutus hoidettaessa palovammoja. Kuvatusta derivatisoinnista huolimatta niillä on lisäksi tunnetun silybiinin täysi farmakologinen tehokkuus maksalääkkeenä.These compounds, in particular siibinin C-2 ', 3-dihydrogen succinate disodium salt, surprisingly have a clear pharmacological effect in the treatment of burns. In addition, despite the derivatization described, they have the full pharmacological efficacy of the known silybin as a hepatic drug.
25 Ne sopivat erityisen hyvin maksakirroosin ja myrkkymetabo-listen maksavaurioiden hoitoon. Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat yllättäen osoittautuneet myös erittäin tehokkaiksi sienimyrkytysten, erityisesti kärpässienien (Amanita phalloides) aiheuttamien erittäin vaarallisten myrkytysten 30 hoidossa. Niillä voidaan yllättäen hoitaa hyvin myös halo-genoitujen orgaanisten liuottimien, kuten hii1itetraklori -din, triklooriety1eenin, kloroformin, jne. aiheuttamia myrkytyksiä. Ehkäisevässä käytössä keksinnön mukaiset yhdisteet estävät edellä kuvattuja vaurioita.25 They are particularly well suited for the treatment of cirrhosis of the liver and toxic metabolic liver damage. Surprisingly, the compounds according to the invention have also proved to be very effective in the treatment of fungal poisonings, in particular very dangerous poisonings caused by fly agarics (Amanita phalloides). Surprisingly, they can also be used to treat poisonings caused by halogenated organic solvents such as carbon tetrachloride, trichlorethylene, chloroform, etc. In prophylactic use, the compounds of the invention prevent the damage described above.
3535
Kokeet si 1ibiniini-C-2',3-divetysukkinaatti-dinatrium-suolalla (Si 1i-suc-na).Experiments with Si-libinin-C-2 ', 3-dihydrogen succinate disodium salt (as Si 1i-suc).
Palovammoissa esiintyvät oireet johtuvat erityisesti lämmön .40 aiheuttaman kudosnekroosin tuotteiden aiheuttamasta intok- 6 84064 sikaatiosta. Monella erilaisella tavalla on osoitettu, että tähän ovat syynä autointoksikatiiviset prosessit vaikeiden ihon palovammojen jälkeen. Erityisen vakuuttavia ovat palaneen ja palamattomat ihon ristisiirrosteet terveisiin 5 tai palaneisiin isäntäeläimiin, jolloin on osoittautunut, että palaneen ihon ei-palamattomat vastaanottajat menehtyvät, kun taas mitään vahingollisia vaikutuksia ei voida havaita terveen ihon palaneilla vastaanottajilla, kts.The symptoms of burns are due in particular to the intoxication caused by the products of tissue necrosis caused by heat .40. It has been shown in many different ways that this is due to autointoxic processes after severe skin burns. Particularly convincing are the transplants of burnt and non-burnt skin into healthy 5 or burnt host animals, where it has been shown that non-burnt recipients of burnt skin die, while no deleterious effects can be observed in burnt recipients of healthy skin, cf.
K.H. Shmidt et .ai., Neuere Aspekte zur Autointoxikation 10 nach schweren Verbrennungen; Die Verbrennungskrankheit (F.W. Ahnefeld et ai., toim. L), Springer, Berlin 1982, sivut 45-52.K. H. Shmidt et al., Neuere Aspekte zur Autointoxikation 10 nach schweren Verbrennungen; Die Verbrennungskrankheit (F.W. Ahnefeld et al., Ed. L), Springer, Berlin 1982, pp. 45-52.
Ihon palovammoissa vapautuu tai muodostuu uudelleen lukui-15 siä kemiallisia yhdisteitä. Näiden lukuisuudesta huolimatta on onnistuttu selvittää eräiden näiden yhdisteiden rakenne.Numerous chemical compounds are released or re-formed in skin burns. Despite their multiplicity, it has been possible to elucidate the structure of some of these compounds.
Mm. on voitu osoittaa, että ihon palovammoissa muodostuvilla yhdisteillä on samankaltaisuutta sellaisten yhdisteiden 20 kanssa, joita syntyy lipidien peroksidaatiossa. Analogioita on olemassa myös näiden yhdisteiden toksisten vaikutusten välillä. Erityisen vaikuttava on toksisesti vaikuttavien tyydytettyjen ja tyydyttämättömien ketjunpituudeltaan erilaisten aldehydien muodostuminen lipidien peroksidaation .'.25 (Benedetti et ai., Identification of 4-hydroxynonenal as a cytotoxic product originating from the peroxidation of liver microsomal lipids, Biochim.Biophys.Acta 620, 281-296, 1980) ja lämmön aiheuttamien kudosvaurioiden (K.H. Schmidt et ai., Studies on the structure and biological effects of •30 pyrotoxins purified from burned skin, World J. Surg. 3, 361-365, 1979) seurauksena. Sen vuoksi oletetaan, että palovammat johtavat solurakenteiden oksidatiiviseen vaurioitumiseen .Among other things, it has been shown that compounds formed in skin burns have similarities to compounds formed by lipid peroxidation. There are also analogies between the toxic effects of these compounds. Particularly impressive is the formation of toxic and saturated unsaturated aldehydes of different chain lengths by peroxidation of lipids. '(Benedetti et al., Identification of 4-hydroxynonenal as a cytotoxic product originating from the peroxidation of liver microsomal Lipids, Biochim. -296, 1980) and heat-induced tissue damage (KH Schmidt et al., Studies on the structure and Biological effects of • 30 pyrotoxins purified from burned skin, World J. Surg. 3, 361-365, 1979). Therefore, it is hypothesized that burns lead to oxidative damage to cellular structures.
35 Sen vuoksi tutkittiin autointoksikaatiosta johtuvia mem-braani1ipidien auto-oksidatiivisia muutoksia vaikeiden palovammojen jälkeen. Erityisesti tutkittiin muutoksia membraani1ipidien rasvahappokoostumuksessa. Edelleen tutkittiin, paljonko keksinnön mukaiset si 1ibiinijohdokset 7 84064 vaikuttavat muutoksiin membraani1ipidien rasvahappokoostu- muksessa.Therefore, the auto-oxidative changes of membrane lipids due to autointoxification after severe burns were studied. In particular, changes in the fatty acid composition of membrane lipids were studied. It was further investigated to what extent the siibin derivatives 7,84064 according to the invention affect changes in the fatty acid composition of membrane lipids.
Muutokset membraani1ipidien rasvahappokoostumnksessa vai-5 keiden palovammojen jälkeenChanges in the fatty acid composition of membrane lipids after severe burns
Wistar-koirasrottia, joiden keskimääräinen paino oli 360 g, pidettiin kolmen ryhmissä antamalla vettä ja kuivaravintoa vapaasti. Kokeen alkuun asti huoneen lämpötila oli 22oC.Wistar male rats weighing an average of 360 g were housed in groups of three by giving water and dry food freely. Until the beginning of the experiment, the room temperature was 22oC.
10 Kokeen aloittamisen jälkeen eläimiä pidettiin 30oC:ssa.After the start of the experiment, the animals were kept at 30 ° C.
Ihon palovammat aiheutettiin kupari 1eimasimel1 a, jonka pinta-ala oli 20 cm^, vakiopaineel1 a ja 250oc lämpötilassa. Syvemmällä olevien elinten vaurioituminen lämmön vaikutuk-15 sesta estettiin siten, että ihoa siveltiin ilman avulla jäähdytetyllä ontolla spaattelilla. Tällä eläinmallilla voitiin aiheuttaa erittäin täsmällisiä palamissaumoja, jotka antoivat vakiona pysyviä eloonjääntiaikoja.Skin burns were caused by a copper stamp with a surface area of 20 cm 2, a constant pressure and a temperature of 250 ° C. Damage to the deeper organs by heat was prevented by brushing the skin with an air-cooled hollow spatula. With this animal model, highly accurate burn seams could be induced, giving constant survival times.
20 Ennen kokeen alkua eläimet narkotisoitiin 50 mg/kg nembu-taalilla. Polton jälkeen injisoitiin shokin profylaksia-hoitoa varten 20 ml Ringer-1aktaatti1iuosta i.p.Prior to the start of the experiment, the animals were anesthetized with 50 mg / kg nembutal. After burning, 20 ml of Ringer-1-lactate solution was injected i.p. for shock prophylaxis.
Muodostettiin 5 koeryhmää: 25 a) Normaaliryhmä : Täysin vahingoittumattomat eläimet b) Kontrolliryhmä I: Vain si 1ibiniini-käsittely 6 päivän aikana antamalla 75,5 mg Sili-suc-na-yhdistettä.5 experimental groups were formed: a) Normal group: Completely intact animals b) Control group I: Treatment with siibinin alone for 6 days by administration of 75.5 mg of Sili-suc-na.
30 c) Kontrolliryhmä II: Vaiekäsitellyt eläimet d) Ryhmä, jossa poltettuja eläimiä: 25 %, 250oC, 20 s, 0,5 at e) Testiryhmä: Eläimet, joille annettiin 75,5 mg30 c) Control group II: Phase-treated animals d) Group with burnt animals: 25%, 250oC, 20 s, 0.5 at e) Test group: Animals given 75.5 mg
Sili-suc-na i.p. 6 päivän aikana alkaen 35 polttamista edeltävänä päivänä.Sili-suc-na i.p. Within 6 days from 35 the day before incineration.
Mikrosomien eristämistä varten narkoosissa olevista eläimistä laskettiin veri koeajan jälkeen. Tämän jälkeen maksat poistettiin, punnittiin ja siirrettiin heti jääkylmään 40 eristys 1luokseen (0,25 mm sakkaroosi, 1 mM EDTA 10 mMol 8 84064To isolate microsomes, blood was counted from anesthetized animals after the experimental period. The livers were then removed, weighed and immediately transferred to ice-cold 40 isolation solution (0.25 mm sucrose, 1 mM EDTA 10 mMol 8 84064
Tris . HCl, pH 7,2). Maksat leikattiin ja homogenisoitiin mediumiin. Mikrosomijae pelletoitiin differentiaalisentri-fugoimalla. Mikrosomit suspentoiti in uudelleen ja sentrifu-goitiin uudelleen. Tämän jälkeen valmistettiin suspensio, 5 jossa 1 ml suspensiota vastasi 1 g maksakudosta.Three. HCl, pH 7.2). The livers were dissected and homogenized in medium. The microsome fraction was pelleted by differential centrifugation. The microsomes were resuspended and recentrifuged. A suspension was then prepared in which 1 ml of the suspension corresponded to 1 g of liver tissue.
Lipidit määritettiin J. Folch'in menetelmällä (A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues, J.biol.Chem. 226, 497-508 (1957)), 10 Bligh’in ja Dyer'in muunnelma (A rapid method of total lipid extraction and purification, Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959)).Lipids were determined by the method of J. Folch (A simple method for the isolation and purification of total Lipids from animal tissues, J. Biol. Chem. 226, 497-508 (1957)), 10 Bligh and Dyer variant ( A rapid method of total lipid extraction and purification, Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959).
Uutetut mikrosomi1ipidit saippuoitiin natriumhydroksidi11a. 15 Vapaat rasvahapot esteröitiin lisäämällä BF3-metanolia.The extracted microsomal lipids were saponified with sodium hydroxide. The free fatty acids were esterified by the addition of BF3-methanol.
Metanolin haihduttamisen ja hydrofii1isten sivutuotteiden poistamisen jälkeen määritettiin rasvahappoesterit kvantitatiivisesti .After evaporation of the methanol and removal of the hydrophilic by-products, the fatty acid esters were quantified.
20 Palamattomissa eläinryhmissä ei voitu todeta mitään mainittavia muutoksia rasvahappokuviossa. Narkoosi ja vähäiset leikkaustoimenpiteet eivät siten aiheuta mikrosomaalisten lipidien muutosta. Tästä syystä yhdistettiin myöhemmissä vertailuissa normaaliryhmä ja kontrolliryhmä yhdeksi kont-: .25 rol 1 i ryhmäksi .20 In the non-combustible groups of animals, no significant changes in the fatty acid pattern could be observed. Thus, anesthesia and minor surgical procedures do not cause a change in microsomal lipids. Therefore, in subsequent comparisons, the normal group and the control group were combined into one control group.
Palamattomien ja palaneiden eläinten vertailu niiden mikrosomaal isten rasvahappokuvioiden suhteen osoitti tyydytty-mättömien rasvahappojen selvän siirtymisen tyydyttyneiksi.Comparison of unburned and burned animals with respect to their microsomal fatty acid patterns showed a clear migration of unsaturated fatty acids into saturated ones.
::30:: 30
Kuvio 1 esittää rasvahappojakautumaa mikrosomaalisissä maksalipideissä ja ihon lämpövaurion aiheuttamia muutoksia. Palmitiinihapon (C16) osuus rasvahappojen kokonaismäärästä nousee palamisen jälkeen 35 25,1- %:sta 34,4 %:iin. Steariinihapon (C18) osuus palaneilla eläimillä on 46,3 % verrattuna kontrol-lieläimillä saatuun 13,2 % määrään. Ö1jyhapossa (C18-:l) on osoitettavissa pienempi, ei-merkittävä lasku. Linolihapon (C18:2) laski palamisen jälkeen 9 84064 noin 1/3 alkuarvosta. Palamisen jälkeen arakidoni-happoa (C20:4) oli vain 31 % 1ähtöpitoisuudesta.Figure 1 shows the distribution of fatty acids in microsomal liver lipids and the changes caused by thermal damage to the skin. The proportion of palmitic acid (C16) in the total amount of fatty acids after combustion increases from 35.1% to 34.4%. The proportion of stearic acid (C18) in burned animals is 46.3% compared to 13.2% in control animals. In oleic acid (C18-: 1) a smaller, insignificant decrease can be shown. After combustion, linoleic acid (C18: 2) decreased by 9 84064 to about 1/3 of the initial value. After combustion, arachidonic acid (C20: 4) was only 31% of the initial concentration.
Seuraava taulukko 1 osoittaa Si 1i-suc-na-yhdisteen vaiku-5 tuksen palaneiden ja palamattomien eläinten rasvahappojen määriin.The following Table 1 shows the effect of Si 1i-suc-na on the amounts of fatty acids in burned and non-burned animals.
TAULUKKO 1 10 Rotan maksan mikrosomaalisten lipidien rasvahappokuvio Sili-suc-na-hoidon jälkeen palaneilla ia palamattomilla eläimi11ä _C16_C18_C18 :1 C18 : 2 C20:4 15 PALAMATTOMAT 29,8% 37,2% 8,9% 9,6% 16,2% (kontrol1i- ryhmä I >_±6.2_±12,3_±1.1_±3,3_±4,9 PALANEET 25,4% 37,5% 7,8% 11,4% 18,0% 20 _±6.0_±8,6_±1,0_±5,3_±9,1TABLE 1 10 Fatty acid pattern of rat liver microsomal lipids in burnt and non-combustible animals after Sili-suc-na treatment _C16_C18_C18: 1 C18: 2 C20: 4 15 NON-COMBUSTIBLE 29.8% 37.2% 8.9% 9.6% 16.2 % (control group I> _ ± 6.2_ ± 12.3_ ± 1.1_ ± 3.3_ ± 4.9 BURNED 25.4% 37.5% 7.8% 11.4% 18.0% 20 _ ± 8,6_ 6.0_ ± ± ± 1,0_ 5,3_ ± 9.1
Keksinnön mukainen käsittely si 1ibiniinijohdoksella ei osoita aiheuttavan mitään oleellisia muutoksia palamattomilla kontrollieläimillä verrattuna käsittelemättömiin : '25 eläimiin. Palaneilla eläimillä hoito kumoaa täydellisesti tyydyttymättömien rasvahappojen häviämisen.Treatment with a siibinin derivative according to the invention does not show any significant changes in non-combustible control animals compared to untreated: '25 animals. In burned animals, treatment completely reverses the loss of unsaturated fatty acids.
Yhteenvetona voidaan todeta seuraavaa: Palovammat aiheuttavat muutoksia mikrosomaalisten lipidien rasvahappokuviossa. 20 Tämän oletetaan johtuvan membraanien oksidatiivisesta vaurioitumisesta. Tämä näkyy erityisesti monityydyttymättömien rasvahappojen voimakkaana vähenemisenä.In summary, burns cause changes in the fatty acid pattern of microsomal lipids. 20 This is thought to be due to oxidative damage to the membranes. This is particularly evident in the strong reduction in polyunsaturated fatty acids.
Keksinnön mukaisesti käytetyt si 1ibiniinijohdokset kykene-35 vät inhiboimaan oksidatiiviset solun vaurioitumiset. Ne sopivat sen vuoksi erityisesti estämään oksidatiiviset vaurioitumismekanismit vaikeiden palovammojen jälkeen.The siibinin derivatives used according to the invention are capable of inhibiting oxidative cell damage. They are therefore particularly suitable for inhibiting oxidative damage mechanisms after severe burns.
Edellä jo kuvattiin, että autotoksisten reaktioiden usko-; 40 taan vaikeiden palovammojen jälkeen johtavan erityisesti oksidatiivisiin solun vaurioihin. Sen vuoksi tutkittiin, 10 84064 mikä vaikutus on standardisoidulla lämmön aiheuttamalla traumalla rottien pernasta ja periteriaverestä saatujen T-1ymfosyyttien PHA-indusoituun blastogeneesiin. Lisäksi tutkittiin, kuinka keksinnön mukaisesti käytetyt sili-5 biinijohdokset vaikuttavat tällaisiin lymfosyyttisiin toimintahäiriöihin vaikeiden palovammojen jälkeen.It has already been described above that the belief in autotoxic reactions; 40 severe burns, leading in particular to oxidative cell damage. Therefore, the effect of standardized heat-induced trauma on PHA-induced blastogenesis of T-1 lymphocytes from rat spleen and periteria blood was investigated. In addition, the effect of the silyl-5 bin derivatives used according to the invention on such lymphocytic dysfunction after severe burns was investigated.
Standardisoidun lämmön aiheuttaman trauman vaikutus pernasta ia peri f erisestä verestä saatujen T-1 vmf osyvtt-i 10 PHA-indusoituun blastogeneesiinEffect of standardized heat trauma on PHA-induced blastogenesis of T-1 vmf from spleen and inherited blood
Wistar-rottien selkänahka poltettiin edellä kuvatulla tavalla kupari 1eimasimel1 a. Kontrolliryhmänä käytettiin vaiepoltettuja eläimiä, joille suoritettiin kaikki leik-15 kauskäsittelyt ilman polttamisia. 2, 4, 7 ja 9 päivän kuluttua veri ja perna poistettiin eetterinarkoosissa olevilta poltetuilta eläimiltä tai kontrol1ieläimi1tä.The dorsal skin of Wistar rats was burned as described above with a copper stamp. As a control group, phase-burned animals were used, which underwent all seasonal treatments without burns. After 2, 4, 7 and 9 days, blood and spleen were removed from burned animals under ether anesthesia or control animals.
Hepariinikäsitelty veri päällystettiin lymfosyyttien eris-20 tämiseksi Ficol1-Hypaque-1iuoksel1 a (tiheys 1,077). Sen jälkeen sentrifugoitiin ja saatujen lymfosyyttien elävyys testattiin Trypan-Blau-väri11ä. Pernan lymfosyyttien eristämiseksi elin hienonnettiin, johdettiin seulan läpi ja mukana kulkeutuneet erytrosyytit poistettiin Gay’n mukai-' ' 25 sesti Lyse-1 iuoksel 1 a .Heparinized blood was coated with Ficol1-Hypaque-1 solution (density 1.077) to isolate lymphocytes. The resulting lymphocytes were then centrifuged and tested for Trypan-Blau staining. To isolate spleen lymphocytes, the organ was minced, passed through a sieve, and entrained erythrocytes were removed according to Gay's Lyse-1 solution.
j Sen jälkeen soluseosta inkuboitiin 30 minuuttia astiassa, kun mukana oli 5 % lämmöllä inaktivoitua vasikansikiöseeru-mia, jotta pienennettäisiin yksitumaisten solujen määrää 3Ό suspensiossa kiinnittämällä astia seinämään (5 %). Viljelyä varten solut laitettiin "f 1at-bottom"-mikrotiitteri1evyi1“ le. Sen jälkeen lisättiin 20 % vasikansikiöseerumia. Tällä tavoin määritettiin spontaani blastogeneesi mittaamalla tymidiinin-(2Ci/mM) liittyminen solujen DNAran.j The cell mixture was then incubated for 30 minutes in a vessel in the presence of 5% heat-inactivated fetal calf serum to reduce the number of mononuclear cells in the 3Ό suspension by fixing the vessel to the wall (5%). For culture, cells were plated on a "1-bottom" microtiter plate. 20% fetal calf serum was then added. In this way, spontaneous blastogenesis was determined by measuring thymidine (2Ci / mM) incorporation into cellular DNA.
3535
Esikokeissa oli selvitetty, että optimaalinen mitogeenin stimuloituminen tapahtuu 5 pg/ml PHA-konsentraatiossa (mitogeeni-fythemagglutiniini). Sei 1 uiaarisen testi järjestelmän näissä optimointikokeissa todettiin edelleen, että •40 DNA:n uussynteesi aktivoituu maksimaalisesti 72 tunnin 11 84064 jälkeen. Edelleen todettiin, että vasikansikiöseerumin optimaalinen konsentraatio on 20 % suuremman stimuloitumi-sen aikaansaamiseksi.Preliminary experiments showed that optimal mitogen stimulation occurs at a concentration of 5 pg / ml PHA (mitogen-phytemagglutinin). In these optimization experiments of the Sei 1 uiaar test system, it was further found that • 40 DNA resynthesis is activated after a maximum of 72 hours at 11,84064. It was further found that the optimal concentration of fetal calf serum is 20% to provide greater stimulation.
5 Edellä jo kuvattiin, että spontaani blastogeneesi määritettiin mittaamalla 3H-tymidiinin liittyminen solujen DNA:an. Soluista poistettiin tumat 18 tunnin kuluttua 3H-tymidiinin lisäämisen jälkeen, jolloin 18 tunnin nollapiste osui yhteen maksimaalisen stimuloitumisen ajankohdan kanssa.5 It has already been described above that spontaneous blastogenesis was determined by measuring the incorporation of 3 H-thymidine into cellular DNA. Nuclei were removed from the cells 18 hours after the addition of 3 H-thymidine, with the 18-hour zero point coinciding with the time of maximal stimulation.
1010
Keksinnön mukaisesti käyttökelpoisten si 1ibiinijohdosten vaikutuksen tutkimista varten käsiteltiin yksi rottaryhmä si 1ibiniinijohdoksel1 a. Tätä varten injisoitiin intraperi-toneaalisesti 75,5 mg Si 1i-suc-na-yhdistettä kerran päiväs-15 sä. Tämä hoito suoritettiin palamispäivästä alkaen elimen poistopäivään asti (enintään 9. päivään asti).To study the effect of the siibin derivatives useful in the invention, one group of rats was treated with the siibinin derivative. To this end, 75.5 mg of the Si-suc-na compound was injected intraperitoneally once a day. This treatment was performed from the day of burn until the day of organ removal (up to day 9).
Kontrol1ieläimillä ja palamattomilla eläimillä ja Sili-suc-na-käsitel 1yi11ä eläimillä saatujen tulosten arvioimista 20 varten laskettiin stimulaatioindeksi. Tämä luku on stimuloidun näytteen keskiarvon ja kontrol1inäytteen keskiarvon osamäärä. Tällä tavoin saadusta jokaisen koe-eläimen stimu-1aatioindeksistä laskettiin keskimääräinen stimulaatioindeksi eläinryhmää kohti. Saadut tulokset on ilmaistu tämän :.:25 indeksin SI avulla.To evaluate the results obtained in control and non-combustible animals and in animals treated with Sili-suc-na, a stimulation index was calculated. This number is the quotient of the mean of the stimulated sample and the mean of the control sample. From the stimulation index of each experimental animal thus obtained, the average stimulation index per group of animals was calculated. The results obtained are expressed by the SI:.
Kuvio 2 esittää käytetyn Si 1i-suc-na-yhdisteen vaikutusta lymfosyyttien blastogeneesiin. Palaneilla eläimillä silibiniini selvästi suurensi solujen alentunutta -.’30 stimul oitavuutta .Figure 2 shows the effect of the Si 1i-suc-na compound used on lymphocyte blastogenesis. In burned animals, silibinin clearly increased the decreased cellularity.
Jo toisena päivänä Si 1i-suc-na-käsitel 1yi11ä eläimillä osoittautui veren lymfosyyttien reaktiivisuus PHA:ta vastaan noin 10 kertaa korkeammaksi. Neljäntenä jä1kitraumaat-35 tisena päivänä oli stimulaatioindeksin arvo 8 käsiteltyjen eläinten veren lymfosyyteillä, kun taas vastaava arvo käsittelemättömillä eläimillä oli 1,5.Already on the second day of Si 1i-suc-na treatment, the reactivity of blood lymphocytes against PHA was found to be about 10-fold higher. On the fourth day of trauma, the stimulation index value was 8 for the blood lymphocytes of the treated animals, while the corresponding value for the untreated animals was 1.5.
Palaneiden, käsittelemättömien eläinten stimulaatioindeksit ; -40 pernasoluilla ovat kaikki selvästi alle 1. Silibiniinin 12 84064 antaminen johtaa merkittävään paranemiseen kaikkina tutkittuina päivinä, jolloin maksimi saavutetaan 7. jälkitrau-maattisena päivänä.Stimulation indices of burnt, untreated animals; -40 spleen cells are all well below 1. Administration of silibinin 12,84064 results in significant improvement on all days studied, with the maximum being reached on day 7 post-traumatic.
5 Lisäksi suoritettiin vielä vertailukokeita, jotka osoittivat, että Sili-suc-na ei yksinään terveillä eläimillä aiheuttanut mitään merkittäviä muutoksia pernasta ja peri-ferisestä verestä saatujen T-lymfosyyttien PHA-indusoidun blastogeneesin stimuloitavuudesta.5 In addition, comparative experiments were performed which showed that Sili-suc alone did not cause any significant changes in the stimulation of PHA-induced blastogenesis of T lymphocytes from spleen and peripheral blood in healthy animals.
1010
Keksinnön mukaisesti käytetty silibiniini stimuloi siten merkittävällä tavalla palaneiden eläinten lymfosyyttien blastogeneesiä.The silibinin used according to the invention thus significantly stimulates the blastogenesis of lymphocytes from burned animals.
15 Edelleen todettiin, että si 1ibiniinjohdoksi 11 a käsitellyillä eläimillä oli yleinen katabolia vähäisempää, koska lämpötrauman jälkeen eläimet nopeasti lisäsivät jälleen kasvua.It was further found that the animals treated with the siibinin derivative 11a had a lower overall catabolism because, after the heat trauma, the animals rapidly increased their growth again.
20 Sienimyrkytykset: Kärpässienien aiheuttamat myrkytykset lasketaan vaikeimpiin, joita esiintyy lääketieteessä. Vaikka kaikissa sieni-myrkytyksistä vain 10 - 30 % on vihreän kärpässienen aihe-: :25 uttamia, tämän sienen myrkytys on lääketieteellisesti mitä mielenkiintoisinta sen vaarallisuuden vuoksi. Vanhemmissa julkaisuissa on kuolleisuudeksi annettu 30 - 50 %. Nykyai-kaisen intensiivislääketieteen ansiosta on FLOERSHEIM el ai. keräämän tutkimuksen perusteella tämä luku pienentynyt : ;3O keskimäärin 22,4 %:iin 205 potilaalla.20 Fungal Poisonings: Poisoning caused by fly fungi is considered to be the most severe that occurs in medicine. Although only 10 to 30% of all fungal poisonings are caused by the green fly fungus, the poisoning of this fungus is medically the most interesting because of its danger. In older publications, the mortality rate is 30-50%. Thanks to modern intensive care, FLOERSHEIM el ai. based on a study collected by.
Kärpässienen myrkky, amanitiini, voi olla tappava aikuiselle ihmiselle jo 7 mg annoksena. Tämä myrkkymäärä on noin 50 g:ssa tuoretta näytettä.The fly agaric venom, amanitine, can be lethal to an adult as high as 7 mg. This amount of poison is about 50 g in a fresh sample.
3535
Menestyksellisen eläinkoesarjän jälkeen käytettiin Sili-suc-na- tehoainetta kärpässienimyrkytysten hoidossa. 20 :T; potilasta, joilla oli kärpässienimyrkytys, hoidettiin tavanomaisten hoitotoimenpiteiden lisäksi vielä Sili-suc-:.:40 na-yhdisteel 1 ä. Näistä 28 potilaasta kuoli vain yksi, joka 13 84064 oli ottanut suuremman määrän myrkkysientä itsemurhatarkoi-tuksessa. Tämän tulos on osoitus valtavasta terapeuttisesta tämän alan edistysaskeleesta.Following a successful series of animal experiments, the active ingredient Sili-suc was used to treat fly agaric poisoning. 20: T; Patients with fly agaric poisoning were treated with Sili-suc -:.: 40 na in addition to standard treatment procedures. Of these 28 patients, only one died who had taken a larger number of poisonous fungi for suicidal purposes. The result of this is a testament to the tremendous therapeutic progress in this field.
5 Isosi 1ybiiniä sisältämättömän silibiniinin valmistus:5 Preparation of isosi 1ybin-free silibinin:
Suspensiota, joka sisältää 500 g patenttijulkaisun DE-AS 19 23 082 (pystyrivi 8, rivit 14-19) mukaisesti valmistettua tuotetta, jonka si 1ymariinipitoisuus on noin 70 % ja 10 si 1ybiini/si1idianiini/si1ikristiini-isomeerisuhde 3:1:1, jolloin silybiini sisältää noin 1/3 isosi1ybiiniä, ja 2 kg metanolia * 2,53 1, kuumennetaan kiehuttaen 15 minuuttia samalla sekoittaen. Näin saadusta liuoksesta voi tämän ajan kuluttua jo saostua hieman silibiiniä Tämän jälkeen poiste-15 taan tyhjössä 0,75 - 1,25 (a 0,96 - 1,58 1) metanolia ja jäännöksen annetaan seistä 10 - 28 päivää huoneen lämpötilassa. Saostunut silibiini suodatetaan ja pestään kaksi kertaa 50 ml :11a kylmää metanolia. Kuivataan 40oC:ssa tyhjössä, minkä jälkeen eristetty puhdistamaton silibiini 20 puhdistetaan seuraavalla tavalla: 60 g puhdistamatonta silibiniiniä liuotetaan kuumentaen 3 litraan teknillistä etikkahappoesteriä; tämän jälkeen lisätään 20 g aktiivihiiltä ja sekoitetaan vielä 2 tuntia 25 refluksoiden. Tämän jälkeen suodatetaan kirkkaaksi ja liuos haihdutetaan 50oC:ssa alipaineessa noin 250 ml:ksi. Kon-sentraattia sekoitetaan 15 minuuttia käyttämällä Ultra-Turrax-1 aitetta ja samalla sekoittaen lisätään 25 ml metanolia. Sen jälkeen seoksen annetaan seistä yön yli huo-30 neen lämpötilassa. Ennen tällöin saostuvan silibiinin suodattamista sekoitetaan vielä 5 minuuttia myös Ultra-Turrax-1aitteen avulla. Eroon suodatettu sakka pestään kaksi kertaa 50 ml :11a etikkahappoesteriä ja kuivataan tyhjökuivauskaapissa yön yli 40oC:ssa. Tämän jälkeen tuote 35 jauhetaan ja kuivataan samoissa olosuhteissa 48 tuntia.A suspension containing 500 g of a product prepared according to DE-AS 19 23 082 (vertical row 8, rows 14-19) with a siymarin content of about 70% and a 10: 1/1: 1 ratio of 1: 1: 1 silybin contains about 1/3 of isocybin, and 2 kg of methanol * 2.53 l, is heated at reflux for 15 minutes with stirring. After this time, some silibin may already precipitate out of the solution thus obtained. 0.75 to 1.25 (a 0.96 to 1.58 l) of methanol are then removed in vacuo and the residue is left to stand for 10 to 28 days at room temperature. The precipitated silibin is filtered off and washed twice with 50 ml of cold methanol. After drying at 40 ° C under vacuum, the isolated crude silibin 20 is purified as follows: 60 g of crude silibinin are dissolved by heating in 3 liters of technical acetic acid ester; then 20 g of activated carbon are added and the mixture is stirred for a further 2 hours at reflux. It is then filtered to clear and the solution is evaporated at 50 ° C under reduced pressure to about 250 ml. The concentrate is stirred for 15 minutes using an Ultra-Turrax-1 pad and 25 ml of methanol are added with stirring. The mixture is then allowed to stand overnight at room temperature. Before filtering off the precipitated silibin, the Ultra-Turrax-1a is also stirred for a further 5 minutes. The precipitate filtered off is washed twice with 50 ml of acetic acid ester and dried in a vacuum oven overnight at 40 ° C. The product 35 is then ground and dried under the same conditions for 48 hours.
Esimerkki 1Example 1
Silibiniini-C-21,3-divetvsukkinaatin valmistus .40 i4 84064Preparation of silibinin C-21,3-dihydrogen succinate.40 14 84064
^-0-. CH0-0-CO-CH,-CH,-COOH^ -0-. CH0-0-CO-CH, -CH, -COOH
V^UQC 7 ! ^O^ner”· I π °v OH O \ ^-711V ^ UQC 7! ^ O ^ ner ”· I π ° v OH O \ ^ -711
CO-CH2-CH2-COOHCO-CH 2 CH 2 COOH
10 50 g si 1ibiniiniä liuotetaan 45oC:ssa 70 ml : aan pyridiiniä, lisätään 50 g meripihkahappoanhydridiä, sekoitetaan noin 8 tuntia 45oC:ssa, lisätään 30 ml etanolia ja sekoitetaan, kunnes muodostuu homogeeninen seos. Sen jälkeen lisätään 15 voimakkaasti sekoittaen 60 ml vettä noin 30 minuutin kuluessa fenyyliestereiden saippuoimiseksi. Noin 1 tunnin sekoittamisen jälkeen 30oC:ssa ovat fenyyliesterit hydrolysoituneet kvantitatiivisesti. Hydrolyysin täydellisyys tutkitaan HPLC:n avulla. Hydrolyysi lopetetaan siten, että 20 saatuun reaktioseokseen lisätään nopeasti 1,7 1 etikkahap-poetyyliesteriä.Dissolve 50 g of siibinin at 45 ° C in 70 ml of pyridine, add 50 g of succinic anhydride, stir for about 8 hours at 45 ° C, add 30 ml of ethanol and mix until a homogeneous mixture is formed. 60 ml of water are then added with vigorous stirring over a period of about 30 minutes to saponify the phenyl esters. After stirring for about 1 hour at 30 ° C, the phenyl esters have been quantitatively hydrolyzed. The completeness of the hydrolysis is examined by HPLC. The hydrolysis is stopped by rapidly adding 1.7 l of acetic acid ethyl ester to the reaction mixture obtained.
Ylimääräinen meripihkahappo ja pyridiini erotetaan siten, että etikkahappoetyy1iesteri11ä laimennettu reaktioliuos 25 uutetaan vastavirtaan kaksi kertaa 5 litralla vettä, joka on kyllästetty etikkahappoetyy1iesteri1lä ja jonka pH on 1,85 (säädetty laimealla vesipitoisella suolahapolla). Tällöin pumpataan etikkahappoetyyliesteri11ä kyllästettyä, happamaksi tehtyä pesuvettä kierrättäen vasten laimeaa 30 reaktioliuosta ja pidetään sen jälkeen laimeaa suolahappoa lisäämällä pH niin kauan arvossa 1,85, kun tämä pH-arvo pysyy vakiona etikkahappoetyyliesterikierron jälkeen.Excess succinic acid and pyridine are separated by extracting the reaction solution 25 diluted with acetic acid ethyl ester twice countercurrently with 5 liters of water saturated with acetic acid ethyl ester and having a pH of 1.85 (adjusted with dilute aqueous hydrochloric acid). In this case, the acetic acid ethyl ester is pumped by circulating the acidified wash water against the dilute reaction solution and then the dilute hydrochloric acid is maintained by adding the pH to 1.85 as long as this pH remains constant after the acetic acid ethyl ester cycle.
Sen jälkeen ylimääräinen suolahappo pestään pois uuttamalla 35 etikkahappoetyy1iesterifaasi kaksi kertaa vastavirtaan 3,4 litralla vettä, joka on kyllästetty etikkahappoetyy-liesterillä. Heti, kun pesuveden pH-arvo on suurempi kuin 4,5, erotetaan orgaaninen faasi kvantitatiivisesti, haihdutetaan 40 - 50oC:ssa tyhjössä 1/12 osaan 1ähtöti1avuudesta ' 40 (noin 0,2 1) ja laimennetaan 125 ml:11 a etanolia.The excess hydrochloric acid is then washed off by extracting the acetic acid ethyl ester phase twice countercurrently with 3.4 liters of water saturated with acetic acid ethyl ester. As soon as the pH of the washings is greater than 4.5, the organic phase is separated quantitatively, evaporated at 40-50 ° C under vacuum to 1/12 part of the starting volume of '40 (about 0.2 l) and diluted with 125 ml of ethanol.
84064 1584064 15
Otsikkoyhdiste saadaan seostamalla etanoli/vedestä ja kuivaamalla tyhjössä 50oC:ssa 15 tunnin ajan.The title compound is obtained by mixing ethanol / water and drying in vacuo at 50 ° C for 15 hours.
Analyysinäytteen valmistamista varten saostetaan otsikkoyh-5 diste kolme kertaa uudelleen etanoli/vedestä ja kuivataan sen jälkeen 15 tuntia 50oC:ssa tyhjössä.To prepare the test sample, the title compound is reprecipitated three times from ethanol / water and then dried for 15 hours at 50 ° C under vacuum.
FD-massaspektrissä on molekyy1ipiikki odotetun moolimassan 682 kohdalla.The FD mass spectrum has a molecular peak at the expected molecular weight of 682.
10 IR-spektrissä on CO-valenssitaajuuden alueella kaksi päällekkäistä piikkiä, jolloin toinen johtuu, kuten sili-biniini11äkin, pyronirenkaan karbonyylifunktiosta aallonpituudella 1635 cm~l. Toinen piikki on aallonpituudella 15 1730 cm~l ja on peräisin kummastakin esterikarbonyylifunk- ti osta.The IR spectrum has two overlapping peaks in the CO valence frequency range, the other being due to the carbonyl function of the pyrone ring at 1635 cm-1, as is the case of silin-binin. The second peak is at a wavelength of 15 1730 cm-1 and is derived from both ester carbonyl functions.
^H-NMR-spektri vahvistaa kaksinkertaisen esteröitymisen tapahtuneen. Integroimalla saatu aromaattisten protonien 20 suhde meripihkahapporyhmän metyyliprotoneihin on 8:8 (ppm-alue 5,9 - 7,1). Näiden metyleeniprotonien (ppm 2,6) suhde metoksiryhmän metyyliprotoneihin (ppm 3,8) on 8:3 ja sopii siten tämän kanssa yhteen.The 1 H-NMR spectrum confirms that double esterification has taken place. The ratio of aromatic protons 20 obtained by integration to the methyl protons of the succinic acid group is 8: 8 (ppm range 5.9 to 7.1). The ratio of these methylene protons (ppm 2.6) to the methoxy group methyl protons (ppm 3.8) is 8: 3 and is thus compatible with this.
:-'25 Myös kemialliset siirtymät ^C-tutkimuksissa osoittavat, että esteröityminen on tapahtunut kumpaankin alkoholi-OH-ryhmään, sillä kemialliset siirtymät muuttuvat voimakkaimmin hiilessä Cu ja viereisissä hiiliatomeissa C±2 “ c14 sekä C2 - C4.: - '25 The chemical shifts in ^ C studies also show that esterification has taken place in both alcohol-OH groups, as the chemical shifts are most strongly altered in the carbon Cu and adjacent carbon atoms C ± 2 “c14 and C2 - C4.
;.3o; .3o
Ai ukaineanal yysi 11 e C33H30O15 (682,60)Ai ukaineanal yysi 11 e C33H30O15 (682.60)
C H HC H H
Laskettu: 58,07 4,43 37,50 35 Saatu: 58,05 4,57 37,31Calculated: 58.07 4.43 37.50 35 Found: 58.05 4.57 37.31
Esimerkki 2Example 2
Silibiniini-C-21,3-divetysukkinaatti-dinatriumsuola valmis-• ;40 tus ie 84064 CH2-0-C0-CH2-CH2-C0NaPreparation of silibinin C-21,3-dihydrogen succinate disodium salt •; 40 tus ie 84064 CH2-O-C0-CH2-CH2-CO3Na
OHOH
OH 0 CO-CH2_CH2_CONa 10OH 0 CO-CH2_CH2_CONa 10
Esimerkin 1 mukaisesti saatu etanoliliuos tiputetaan sekoittaen ja ulkoapäin -5 - 9oC:ssa jäähdyttäen tämän liuoksen kuiva-ainepitoisuuden määrittämisen avulla saatuun 15 määrään 6-prosenttista etanolipitoista natriumhydroksidia, suspensiota sekoitetaan vielä tunti huoneen lämpötilassa, saostunut beigenvärinen kiinteä aine erotetaan imulla, suspentoidaan se kaksi kertaa 5-10 minuutin aikana Tur-rax-sekoittimen avulla 150 ml:aan etanolia ja erotetaan 20 uudelleen imulla. Jäljelle jääneen etikkahappoetyyliesterin poistamista varten suspentoidaan tämän jälkeen tuote 14 tunniksi huoneen lämpötilassa 280 ml Taan etanolia, erotetaan uudelleen imulla, pestään 70 ml :11a etanolia ja kuivataan 15 tuntia 40 - 45oC:ssa tyhjökuivauskaapissa. Tämän 25 jälkeen esikuivattu tuote jauhetaan, seulotaan raekokoon alle 0,2 mm ja kuivataan vielä 48 tuntia 40 - 45oC:ssa : tyhjössä. Näin saadaan 52 g otsikkoyhdistettä (saanto 69 %).The ethanol solution obtained according to Example 1 is added dropwise with stirring and cooling externally at -5 to 9 ° C to 15% of 6% ethanolic sodium hydroxide obtained by determining the dry matter content of this solution, the suspension is stirred for a further hour at room temperature, the precipitated beige solid is filtered off twice. In 5-10 minutes, use a Tur-Rax mixer to 150 ml of ethanol and re-separate by suction. To remove the residual ethyl acetate, the product is then suspended for 14 hours at room temperature in 280 ml of ethanol, filtered off with suction, washed with 70 ml of ethanol and dried for 15 hours at 40-45 ° C in a vacuum oven. The pre-dried product is then ground, sieved to a grain size of less than 0.2 mm and dried for a further 48 hours at 40-45 ° C: vacuum. 52 g of the title compound are thus obtained (yield 69%).
'?0 Otsikkoyhdisteel 1 ä ei ole mitään terävää sulamispistettä.The title compound 1 has no sharp melting point.
Se alkaa sintrautua noin 80oC:ssa ja sulaa noin 100oC:ssa muodostamalla rakkuloita.It begins to sinter at about 80oC and melts at about 100oC to form vesicles.
UV-spektri metanolissa: max = 288 nm, = 1,73 10^.UV spectrum in methanol: max = 288 nm, = 1.73 10 ^.
3535
Otsikkoyhdisteen moolipaino on 726,56. Yhdiste on hieman beigenvärinen, mikrokiteinen jauhe, jolla ei ole mitään erityistä hajua ja suolamainen maku. Se liukenee helposti veteen, liukenee vaikeasti etanoliin eikä käytännöllisesti • 40 katsoen liukene asetoniin, eetteriin ja kloroformiin.The molecular weight of the title compound is 726.56. The compound is a slightly beige, microcrystalline powder with no particular odor and salty taste. It is readily soluble in water, sparingly soluble in ethanol and practically insoluble in acetone, ether and chloroform.
Claims (4)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3442639 | 1984-11-22 | ||
DE19843442639 DE3442639A1 (en) | 1984-11-22 | 1984-11-22 | FLAVOLIGNANE DERIVATIVES, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THESE COMPOUNDS |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI854535A0 FI854535A0 (en) | 1985-11-18 |
FI854535A FI854535A (en) | 1986-05-23 |
FI84064B true FI84064B (en) | 1991-06-28 |
FI84064C FI84064C (en) | 1991-10-10 |
Family
ID=6250903
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI854535A FI84064C (en) | 1984-11-22 | 1985-11-18 | Process for the preparation of pharmacologically valuable silibinins ivat |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61143377A (en) |
KR (1) | KR870001020B1 (en) |
AR (1) | AR240931A1 (en) |
AT (1) | AT393268B (en) |
BE (1) | BE903693A (en) |
CA (1) | CA1337124C (en) |
CH (1) | CH659473A5 (en) |
CS (1) | CS273610B2 (en) |
DD (1) | DD259191A1 (en) |
DE (1) | DE3442639A1 (en) |
DK (1) | DK164865C (en) |
EG (1) | EG19424A (en) |
ES (1) | ES8609311A1 (en) |
FI (1) | FI84064C (en) |
FR (1) | FR2573427B1 (en) |
GB (1) | GB2167414B (en) |
HU (1) | HU195503B (en) |
IE (1) | IE58791B1 (en) |
IT (1) | IT1190426B (en) |
LU (1) | LU86163A1 (en) |
MX (1) | MX168415B (en) |
NL (1) | NL192387C (en) |
NO (1) | NO160205C (en) |
PL (1) | PL146890B1 (en) |
PT (1) | PT81532B (en) |
SE (1) | SE465676B (en) |
SU (1) | SU1436875A3 (en) |
YU (1) | YU43689B (en) |
ZA (1) | ZA858951B (en) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8716918D0 (en) * | 1987-07-17 | 1987-08-26 | Inverni Della Beffa Spa | Soluble derivatives of silybin |
US5262439A (en) * | 1992-04-30 | 1993-11-16 | The Regents Of The University Of California | Soluble analogs of probucol |
CA2601028C (en) * | 2005-03-11 | 2014-05-27 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medecine | Flavonoid compounds and uses thereof |
MX2010005107A (en) | 2007-11-15 | 2010-05-27 | Madaus Gmbh | Silibinin component for the treatment of hepatitis. |
RU2482844C2 (en) * | 2007-11-15 | 2013-05-27 | Мадаус Гмбх | Silibilin component for treating hepatitis |
PT2430017T (en) * | 2009-05-14 | 2016-10-12 | Madaus Gmbh | A method for preparing amorphous silibinin |
CA2877338C (en) | 2012-07-05 | 2022-10-11 | Nutramax Laboratories, Inc. | Compositions comprising sulforaphane or a sulforaphane precursor and a mushroom extract or powder |
CN103193768B (en) * | 2013-02-22 | 2016-03-30 | 西安安健药业有限公司 | The silybin bis-bias succinate isomer for the treatment of hepatopathy |
CN103172622B (en) * | 2013-02-22 | 2015-11-04 | 西安安健药业有限公司 | The active isomer of silybin bis-bias succinate |
CN103113359B (en) * | 2013-02-22 | 2016-01-06 | 西安安健药业有限公司 | Silybin bis-bias succinate and pharmaceutical salts thereof |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1963318A1 (en) * | 1969-12-17 | 1971-06-24 | Schwabe Willmar Gmbh & Co | Silybin esters with hepotoprotactant acti- - vity |
-
1984
- 1984-11-22 DE DE19843442639 patent/DE3442639A1/en active Granted
-
1985
- 1985-11-11 IE IE280885A patent/IE58791B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-13 LU LU86163A patent/LU86163A1/en unknown
- 1985-11-14 YU YU1786/85A patent/YU43689B/en unknown
- 1985-11-14 AR AR302267A patent/AR240931A1/en active
- 1985-11-15 GB GB08528226A patent/GB2167414B/en not_active Expired
- 1985-11-18 NL NL8503171A patent/NL192387C/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-18 FI FI854535A patent/FI84064C/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-19 CH CH4935/85A patent/CH659473A5/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-19 AT AT3371/85A patent/AT393268B/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-20 SE SE8505487A patent/SE465676B/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-20 CA CA000495804A patent/CA1337124C/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-20 CS CS837885A patent/CS273610B2/en unknown
- 1985-11-20 DD DD85283042A patent/DD259191A1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-21 SU SU853985401A patent/SU1436875A3/en active
- 1985-11-21 HU HU854448A patent/HU195503B/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-21 DK DK537785A patent/DK164865C/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-21 EG EG74085A patent/EG19424A/en active
- 1985-11-21 ES ES549116A patent/ES8609311A1/en not_active Expired
- 1985-11-21 IT IT22932/85A patent/IT1190426B/en active
- 1985-11-21 PT PT81532A patent/PT81532B/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-21 ZA ZA858951A patent/ZA858951B/en unknown
- 1985-11-21 NO NO854655A patent/NO160205C/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-21 PL PL1985256374A patent/PL146890B1/en unknown
- 1985-11-22 JP JP60261629A patent/JPS61143377A/en active Granted
- 1985-11-22 KR KR1019850008733A patent/KR870001020B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-22 BE BE2/60850A patent/BE903693A/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-22 FR FR858517321A patent/FR2573427B1/en not_active Expired
- 1985-11-22 MX MX009022A patent/MX168415B/en unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4764508A (en) | Complexes of flavanolignans with phospholipids, preparation thereof and associated pharmaceutical compositions | |
EP0275224B1 (en) | Phospholipidic complexes of vitis vinifera extracts, process for their preparation and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them | |
EP1516866B1 (en) | Natural compounds and derivatives thereof for the prevention and treatment of cardiovascular, hepatic and renal diseases and for cosmetic applications | |
FI84064B (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV FARMAKOLOGISKT VAERDEFULLA SILIBININDERIVAT. | |
US3988446A (en) | Glycerides with anti-inflammatory properties | |
FI84065B (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ISOSILYBINFRI SILIBININ. | |
US8092845B2 (en) | Anti-inflammatory extract and agent and method for the production thereof | |
US5202313A (en) | Bilobalide derivatives, their applications and formulations containing them | |
SK194892A3 (en) | Method of production of diacetylreine | |
KR20010052637A (en) | Hyperforin derivatives, the use thereof and formulations containing them | |
GB2261434A (en) | New radical scavenging and antipoperoxidant flavanolignans their preparation and formulations for therapeutic use | |
SI8511786A8 (en) | Process for preparation of derivatives of sylibinine | |
WO1981003489A1 (en) | Process for separating medicinal ingredient from corbicula by extraction and composition containing same | |
CH665642A5 (en) | DERIVATIVES OF AMINOMETHYL-6 FURO- (3,4-C) -PYRIDINE, THEIR PREPARATION AND THERAPEUTIC COMPOSITIONS CONTAINING THEM. | |
JP4465432B2 (en) | Novel diterpene compounds | |
Yusupova et al. | New Source Of Synthesis Of Physiologically Active Substonces | |
FR2650999A1 (en) | 1- (2-ETHOXYETHYL) -4-PHENYL-4-PROPIONYLOXYPIPERIDINE HYDROCHLORIDE | |
BE877014A (en) | NEW PHOSPHOLIPIDIC DERIVATIVES WITH ANTI-LIPEMIC AND ANTI-ARTERIOSCLEROTIC ACTIVITY. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed |
Owner name: MADAUS AKTIENGESELLSCHAFT |