FI80475C - Foerfarande foer framstaellning av ett tumoerhaemmande antibioticum, sandramycin. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ett tumoerhaemmande antibioticum, sandramycin. Download PDFInfo
- Publication number
- FI80475C FI80475C FI852082A FI852082A FI80475C FI 80475 C FI80475 C FI 80475C FI 852082 A FI852082 A FI 852082A FI 852082 A FI852082 A FI 852082A FI 80475 C FI80475 C FI 80475C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- sandramycin
- medium
- strain
- chloroform
- residue
- Prior art date
Links
- WXIVYIYCEBUEHL-RTQGILJWSA-N sandramycin Chemical compound C([C@H](C(=O)N1CCCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@H](C(OC1)=O)C(C)C)NC(=O)C=2C(=CC3=CC=CC=C3N=2)O)OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)CNC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)[C@@H]1NC(=O)C1=NC2=CC=CC=C2C=C1O WXIVYIYCEBUEHL-RTQGILJWSA-N 0.000 title claims description 57
- 108700026174 sandramycin Proteins 0.000 title claims description 53
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 25
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 5
- 241001495390 Nocardioides sp. Species 0.000 claims description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 17
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 15
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000187580 Nocardioides Species 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 7
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]butane-1,4-diol;(2r,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O.C1=C(O)C(OC)=CC(C[C@@H](CO)[C@H](CO)CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 6
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 235000004426 flaxseed Nutrition 0.000 description 6
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical group [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007613 bennett's agar Substances 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- -1 malt extract Substances 0.000 description 3
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WTRAGVLPOKIUTD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-6-methoxyquinoline-2-carboxylic acid Chemical compound N1=C(C(O)=O)C(O)=CC2=CC(OC)=CC=C21 WTRAGVLPOKIUTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187362 Actinomadura Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N L-sorbitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N beta-L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-KLVWXMOXSA-N 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- IQQDNMHUOLMLNJ-UHFFFAOYSA-N quinolin-3-ol Chemical group C1=CC=CC2=CC(O)=CN=C21 IQQDNMHUOLMLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BBBFYZOJHSYQMW-LGDQNDJISA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O BBBFYZOJHSYQMW-LGDQNDJISA-N 0.000 description 1
- UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound OCC(O)CO.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UQZSVIGPZAULMV-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- QYAPHLRPFNSDNH-MRFRVZCGSA-N (4s,4as,5as,6s,12ar)-7-chloro-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]4(O)C(=O)C3=C(O)C2=C1O QYAPHLRPFNSDNH-MRFRVZCGSA-N 0.000 description 1
- JQIZHNLEFQMDCQ-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydropyridazine Chemical group C1CC=CNN1 JQIZHNLEFQMDCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHKZBVQIMVUGIH-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyquinoline-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2C=C(O)C(C(=O)O)=NC2=C1 WHKZBVQIMVUGIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBROMFQTLRZTGO-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-1,4,5,6-tetrahydropyridazine-6-carboxylic acid Chemical compound OC1CC=NNC1C(O)=O HBROMFQTLRZTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000207439 Myra Species 0.000 description 1
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187606 Nocardioides albus Species 0.000 description 1
- 241000203619 Nocardiopsis dassonvillei Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000187558 Saccharopolyspora hirsuta Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-MBMOQRBOSA-N alpha-D-arabinopyranose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-MBMOQRBOSA-N 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003819 low-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- POBNOKAZPBNXAU-UHFFFAOYSA-J magnesium manganese(2+) disulfate Chemical compound [Mg+2].[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O POBNOKAZPBNXAU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- TWETVNCREUJUBY-UHFFFAOYSA-N methanol;dihydrate Chemical compound O.O.OC TWETVNCREUJUBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIUXUFNYAYAMOE-UHFFFAOYSA-N methylsilane Chemical compound [SiH3]C UIUXUFNYAYAMOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000007324 rich organic medium Substances 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 230000002623 sporogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/19—Antibiotic
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hematology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 80475
Menetelmä kasvaimenvastaisen antibiootin, sandramysiinin valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmää uuden syklisen depsi-5 peptidin, kasvaimenvastaisen antibiootin, valmistamiseksi, jota tässä yhteydessä nimitetään sandramysiiniksi, uuden mikro-organismin, Nocardioides-lajin kannan C 49 009,
ATCC 39419 käymisen avulla. Sandramysiinillä on kaava I
lrt CH. CH
10 \3 ^ 3
CfS ch 9* I ?3 ^ ^ OH I I 1
γχ/ CO-NHCH -CO-N-CH -CO-N— CH
I i 2 2 * X, co CONH-CH-CO-N j i
I I J O I
CH I
15 O O f"2 1 l N-CO-CH-NHOC^N^/TS*.
?° T Y]
CH-N-CO-CH -N-CO-CH NH-CO
Il ^ | ^
CH CH
CH 3 3 20 CH3 ^CH3 US-patentissa n:o 4 360 458, joka on julkaistu marraskuun 23. päivänä 1982, Koshiyama et al.:n nimissä, on tuotu ilmi kasvaimenvastainen, bakteerien vastainen kompleksi, 25 joka on merkitty BBM-928:ksi, sekä sen valmistaminen käymisen kautta, uuden Actinomycetes-kannan avulla, joka on merkitty kannaksi G-455-101 (ATCC 31491), joka myöhemmin on määritetty Actinomadura-suvun uudeksi lajiksi ja merkitty Actinomadura luzonensis nov. sp.:ksi £kts. J. Antibio-30 ties, 33(10) (1980), ss. 1098 - 11027.
BBM-928-komponenttien valmistus, eristys, karakterisointi sekä kasvaimenvastainen aktiivisuus on esitetty julkaisussa J. Antibiotics, 33(10), (1980), ss. 1087 - 1097, BBKA-928, B:n, C:n sekä D:n (nyt nimetty vastaavasti 35 lutsopeptiini-A:ksi, -B:ksi, -C:ksi sekä -D:ksi), jotka ovat BBM-928-kompleksin pääkomponenti, rakenteet on julkaistu US-patentissa n:o 4 451 456, joka on ilmestynyt toukokuun 29. päivänä 1984 Koshiyama et al.:n nimissä, ja niillä on seuraavat rakennekaavat: 2 83475 ro x o o \} o o
o X I
«n ac _j| S
3= O N ,
u H I X O XX
^U-U-U-O-U-U α| Λ M
U I l f- X
-2'i V *§- = § V ==-2= I v
m X 0“'S
g_2 Mi „„ s
° == o 2 XX CM
' <* « r-. (_> O X
g CC «n OCOOXM
V g v V o N V 1 ' u U r* g _ * 7 ce cj ro
5 9 2-5 < CQ O Q
ά )—V x" /) 5 2 Z-Z o H s s *
2 C_> «o -H
S M i-5 » S, oi S-5-o-S-S.o'S 8.
• | '(j O
S .1 O m N
V 1 x = 3
X O H
O O
M: \n /) o ro
X
O
il 3 80475
Lutsopeptiineillä A, B, C ja D on rakennepiirteitä, joihin kuuluvat 3-hydroksi-6-metoksikinaldiinihappo kromo-forina sekä 4-hydroksi-2,3,4,5-tetrahydropyridatsiini-3-karboksyylihappo, jossa kolmen komponentin välinen rakenne-5 ero on peräisin yksinomaan tetrahydropyridatsiini-osissa sijaitsevien hydroksyyliryhmien asetyloinnin määrästä.
Kyseessä oleva keksintö liittyy uuteen sykliseen kasvai-menvastaiseen antibioottiin, jota tässä yhteydessä nimitetään sandramysiiniksi, sadramysiinin valmistusmenetelmään, 10 eristämiseen ja puhdistukseen oleellisesti puhtaassa muodossa.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että sandramysiiniä tuottavaa Nocardioides sp. nov.:n kantaa C 49 009, jolla on ATCC 39419:n identifiointiominaisuu-15 det, viljellään pinnanalaisissa, aerobisissa olosuhteissa elatusaineessa, joka sisältää assimiloituvia hiilen ja typen lähteitä, kunnes huomattava määrä sandramysiiniä on tuotettu ja kerääntynyt elatusaineeseen, minkä jälkeen sand-ramysiini eristetään elatusaineesta.
20 Sandramysiiniä valmistava mikro-organismi on Nocar dioides sp. kanta C 49 009, joka on eristetty maanäyttees-tä, joka on koottu Meksikossa. Tämä kanta on talletettu American Type Culture Collection'iin, Rockville, Maryland, talletusnumerolla ATCC 39419.
4 80475
Mikro-organismi
Seuraavana esitetään yleinen kuvaus kasvaimenvastais-ta antibioottia, sandramysiiniä, tuottavasta mikro-organismista.
Morfologia 5 Kanta no C49 009 muodostaa sekä substraattia että ilmahuovastoa (0,4 pm leveydeltään), ja substraatti-huovasto on pitkää, hyvin haaroittunutta ja jakautunut lyhyiksi säikeiksi ja sauvoiksi yhden viikon kuluttua. Kannalla no C49 009 on taipumus menettää kykynsä muodos-10 taa ilmahuovastoa pidennetyn kasvatuksen aikana. Ilma-huovaston hyyfit haarautuvat niukasti. Mikroskooppiset tarkastelut ilmaisevat, että ilmahyyfit ovat enemmän tai vähemmän siksak-muotoisia alussa ja niistä kehittyy pitkiä, suoria artrosporin kaltaisten sylinterimäisten 15 segmenttien (0,5 x 1 - 3 pm) ketjuja, joita myöhemmin erottavat läpinäkyvät hyyfit. Itiöiden kaltaisten segmenttien pinta on pehmeä. Kanta no C49 009 on gramposi-tiivinen eikä se ole happokiinteä. Itiöpesäkettä, liikkuvia itiöitä ja sklerotiumia ei havaita.
20 Solunseinämän koostumus ja koko solun sokeri- komponentit
Kannan no C49 009 solunseinämä sisältää diamino-pimeliinihappoa sekä glysiiniä, solunseinämän tunnusomaisia aminohappokomponentteja B. Beckerin et al.:n julkaisussa 25 Appi. Microbiol., 13, 236-243 (1965) sekä T. Yamaguchin julkaisussa J.Bacteriol., 89 441-453 (1965) kuvaamien menetelmien mukaisesti. Kokonaisten solujen hydrolysaatti ilmaisee glukoosin, mannoosin sekä riboosin läsnäoloa, mutta siitä puuttuvat kaikki diagnostiset sokerit M.P.
30 Lechevalier et ai., julkaisussa Biol. Actinomycetes
Related organisms, 11, 78-92 (1976) esittämän menetelmän mukaisesti määritettyinä. Edellä mainittu solunseinämä-koostumus sekä kokonaisten solujen sokerikomponentit ilmaisevat, että kannalla no CA49 009 on aktinomykeetti-lajien 35 solunseinämätyyppi I.
Il 5 80 475
Viljely- ja fysiologiset ominaisuudet Kanta no C49 009 on ehdottomasti aerobinen akti-nomykeetti, ja se kasvaa hyvin mitä erilaisimmissa elatusaineissa. Ilmahuovastoa muodostuu runsaasti ja 5 kohtuullisesti ISP elatusaineilla numerot 3,5 ja 7 sekä Czapekin sakkaroosi-nitraatti-agarilla, mutta niukasti ravitsemuksellisesti rikkaalla orgaanisella elatusai-neella, kuten esimerkiksi ISP-elatusaineen numeroilla 2 ja 6, tai Bennettin agarilla. Ilmahuovaston väri on 10 valkoinen. Melanoidia eikä muuta selvästi erotettavaa pigmenttiä muodostuu kaikissa tutkituissa, deskriptiivisissä elatusaineissa. Vegetatiivisen huovaston käänteis-sivun väri on ainoastaan kellahtava. Se kasvaa optimaalisesti 28°C:ssa, kohtuullisesti 15°C:ssa ja 15 37°C:ssa, mutta mitään kasvua ei ilmene 5°C:ssa eikä 45°C:ssa. Gelatiini ja tärkkelys hajoavat. Tyrosinaasi-reaktio on negatiivinen. Kasvu estyy, kun läsnä on 7 % NaCl:a tai 0,01 % lysotsyymiä. Kannan no C49 009 viljelyjä fysiologiset ominaisuudet on esitetty vastaavasti 20 taulukossa 1 ja 2. Kanta no C49 009 käyttää kasvuun hyväksi useimpia sokereita, ja hiililähteiden hyväksikäyttö on esitetty taulukossa 3.
6 80475
Taulukko 1
Kannan no C49 QQ9 viljelyominaisuudet1
Tryptoni-hiivauute-lihaliemi: G: kohtalainen; villakarvainen, (ISP no 1) ja keltaisia kerrostumia D: ei mitään
Sakkaroosi-nitraatti-agar G: runsas (Czapekin agar) R: kellahtavanvalkoisesta (92)2 tum- manharmahtavanke 1 ta is e e n (91) A: kohtalainen, valkoinen (263) D: kohtalainen keltainen (87)
Glukoosi-asparagiini-agar G: heikko R: kellahtavanvalkoisesta (92) vaalean keltaiseen (89) A: heikko, valkoinen (263) D: ei mitään
Glyseroli-asparagiini-agar G: kohtalainen (ISP no 5) R: vaaleankeltaisesta (86) kohta- laisenkeltäiseen (87) A: kohtalainen, valkoinen (263) D: ei mitään
Epäorgaaniset suolat-tärk- G: kohtalainen kelys-agar R: vaaleankeltaisesta (89) kohtalaisen- (ISP no 4) keltaiseen (87) A: heikko, valkoinen (263) D: ei mitään
Tyrosiini-agar (ISP no 7) G: runsas R: vaaleankeltaisesta (89) tunmankel-taiseen (88) A: kohtalainen, valkoinen (263) D: ei mitään
Ravinto-agar G: kohtalainen R: vaaleankeltainen (89) A: kohtalainen, valkoinen (263) D; ei mitään
II
2
Taulukko(j atkuu) 7 80475
Hiivauute-mallasuute-agar G: runsas (ISP no 2) R: vaaleankeltaisesta (89) kohtalaisenkel-taiseen (87) A: heikko, valkoinen (263) D: ei mitään
Kaurajauho-agar (ISP no 3) G: kohtalainen R: kellahtavanvalkoisesta (92) kohtalaisenkeltaiseen (87) A: kohtalainen, valkoinen (263) D: ei mitään
Bennettin agar G: kohtalainen R: vaaleankeltaisesta (89) tummankeltaiseen (88) A: niukasta heikkoon, valkoinen (263) D: ei mitään
Peptoni-hiivauute-rauta- G: heikko agar (ISP no 6) R: kalpeanoranssinkeltaisesta (73) vaaleanoranssinkeltai-seen (70) A: niukka, valkoinen (263) D: ei mitään 1 2 3 havaittu sen jälkeen, kun on inkuboitu 28°C:ssa 3 viikon ajan 2
Lyhennykset: G = kasvu; R = käänteispuolen väri; A = ilmahuovasto; D = diffundoituva pigmentti 3
Suluissa mainittu väri ja numero noudattavat väristandardia, joka on esitetty kirjassa "Kelly, K. L. ja D. B. Judd: ISCC-NBS color-name charts illustrated with Centroid Colors. U.S: Dept, of Comm. Cir. 553, Washington, D.C:, marraskuu, 1975".
8 80475
Taulukko 2
Kannan no C49 009 fysiologiset ominaisuudet Käytetty menetelmä Vaste tai elatusaine
Kasvun läm- Maksimaalinen kas- Bennettin agar pötila-alue vu 28 C:ssa. Koh tuullinen kasvu l£°C:ssa. Ei kasvua 5°C:ssa ja 45°C:ssa
Gelatiinin Liuennut 1 % mallasuutetta, 0,4 % liukeneminen hiivauutetta, 0,4 % glukoosia, 20 % gelatiinia Tärkkelyksen Hydrolysoitunut Tärkkelys-agar-malja hydrolyysi
Reaktiot Koaguloitunut Difcon kuorittu maito kuoritussa maidossa
Melanoidi- Negatiivinen Tyrosiini-agar, pigmentin peptoni-hiivauute-rauta- muodostuminen agar ja tryptoni-hii- vauutelihaliemi
Tyrosinaasi- Negatiivinen Arain menetelmä1 reaktio
Nitraatin Negatiivinen Czapekin sakkaroosi- pelkistyminen nitraattilihaliemi
Nitraatin Negatiivinen 0,5 % hiivauutetta, pelkistyminen 1 % glukoosia, 0,5 % KNO-.:a, 0,1 %
CaC03:a 0 pH:n sietokyky Kasvu jäi 5,0:sta Hiivauute-mallasuute-agar jäi 10,5:een. Ei kasvua pH 4,5:ssä
Taulukko (jatkuu 9 80475 Käytetty menetelmä - Vaste tai elatusaine
NaClrn sietokyky Kasvu 5%:isella Peruselatusaine: 1 % hiiva- tai alhaisemmalla uutetta, 2 % liukoista tärk-NaClrlla. Ei kas- kelystä, 1,5 % agaria vua 7-%:lla NaClrlla
Lysotsyymin Herkkä, mutta osit- Tryptikaasi-soija-liha- sietokyky tain resistentti liani sekä l,5-%:inen agar (kasvu joitakin pesäkkeitä 0,01-%:isella lysotsyy-millä) * Arai, T ja Y. Mikami, "Chrorogenicity of Streptcmyces", Appi. Microbiol, 23, 402-406 (1972) 10 80475
Taulukko 3
Kannan C49 009 kyky käyttää hiilihydraattia
Glyseroli + D(-)-Arabionoosi + L(+)-Arabinoosi D-Ksyloosi + D-Riboosi + L-Ramnoosi + D-Glukoosi + D-G-alaktoosi + D-Fruktoosi + D-Mannoosi + L(-)-Sorboosi
Sakkaroosi +
Laktoosi +
Sellobioosi +
Melibioosi +
Trehaloosi +
Raffinoosi + D(+)-Meletsinoosi +
Liukoinen tärkkelys +
Selluloosa
Dulsitoli
Inositoli + D-Mannitoli + D-Sorbitoli
Salisiini
Havaittu 3 viikon mittaisen iiikuboinnin jälkeen 28°C:ssa. Peruselatusaine: Pridham-Gottliebin epäorgaaninen elatusaine Lyhennykset: +: positiivinen hyväksikäyttö, - negatiivinen hyväksikäyttö
II
11 80475
Taksonomia
Kannalle no C49 009 on ominaista sen gram-positiivinen reaktio, ei happokiinteä luonne, substraat-tihuovaston rikkoutuneisuus, valkoisen ilmahuovaston muodostuminen, artrosporien kaltainen jakaantuminen ilmahuo-5 vaston kokonaisissa osissa sekä selvän pigmentin muodos- tamiskyvyn puuttuminen. Näiden ominaisuuksien, sekä LL-dia-minopimeliinihapon ja glysiinin läsnäolon, mutta diagnostisen sokerin solunseinämästä puuttumisen perusteella sijoitetaan kanta no C49 009 sukuun Nocardioides /H.Prauser, 10 Intl.J. Syst. Bateriol., 26,58-65 (1975)./. Kanta no C49,009 erotetaan ilmahuovastoa muodostavasta nocardio-muoto aktinomykeeteistä, Nocardiopsis dassonvillei, Saccharopolyspora hirsuta sekä Nocardia-suvun kaikki heterologiset lajit mukaanluettuina, solunseinämän 15 diagnostisen aminohapon tai sokerin sekä diagnostisten fysiologisten ominaisuuksien perusteella, joita R. E.
Gordon et ai ., ovat kuvanneet julkaisussa J. Gen. Microbiol., 109, 69-78 (1978), ja kuten on esitetty taulukossa 4. Kanta no C49 009 erotetaan edelleen Strepto -20 myces-suvusta sporogeenisen nocadiae-tyyppisen morfologiansa perusteella; esimerkiksi kannan no C49 009 substraat-tihyyfi pilkkoutuu lyhyiksi säikeiksi tai sauvoiksi.
Kannan no C49 009 artrosporen kaltaiset segmentit voidaan erottaa Streptomyces-lajeilla esiintyvistä itiöistä 25 muodostumiskohdan, hyyfin tupessa vallitsevan järjestäytymisen sekä selvästi erotettavan itiönseinämän poissaolon suhteen.
Taulukko 4 12 80475
Kannan C49 009:n diagnostiset, fysiologiset ominaisuudet
Happokiinteys
Hajoaminen:
Adeniinin
Kaseiinin +
Hypoksantiinin
Tyrosiinin +
Urean
Ksantiinin
Vastustuskyky:
Lysotsyymiä kohtaan
Rifampisiinia kohtaan +
Hydrolyysi:
Eskuliinin +
Hippuraatin + Tärkkelyksen +
Hapon muodostuminen: D(-)-Arabinoosista + L(+)-Arabinoosista Erytritolista
Glukoosista +
Inositolista +
Laktoosista + D-Meletsitoosista +
Melibioosista +
Metyyli-ot-glukosidista
Raffinoosista + il 13 80475
Hyväksikäyttö:
Bentsoaatti
Sitraatti +
Mukaatti 5 Sukkinaatti +
Tartraatti
Nitriittiä nitraatista Hengissä pysyminen 50°C:ssa, 8 tuntia - 10
Lyhennykset: +: positiivinen ominaisuus, negatiivinen ominaisuus
Herkkyysprofiili sarjalle taksonomisen ryhmän suhteen spesifisiä faaseja erottaa Nocardioides-suvun 15 kannat läheisistä suvuista, kuten esimerkiksi Streptomyces tai Nocardia /katso H. Prauser: Hostaphage relationships in nocardioform organisms, kirjassa "the Biology of the Nocardiae", toimittaja M. Goodfellow et aiv Lontoo, New York ja San Francisco, Academic Press (1976).7. Kannan 20 C49 009 herkkyyttä näitä aktinofaageja kohtaan ei tutkittu, koska faageja ei ollut käytettävissä. Viljely- ja fysiologisten ominaisuuksien perusteella Nocardioides-suvun 17 kantaa, jotka eristettiin maanäytteistä, jotka koottiin maailman eri alueilta, luokiteltiin yhdeksi ainoaksi lajiksi 25 Nocardioides albus. Kanta no C49 009 eroaa Nocardioides al-bus-la jista L-arabinoosin ja inositolin hyväksikäytön suhteen, mutta se on mainitun lajin kaltainen kaikkien viljelyjä fysiologisten ominaisuuksien suhteen. Täten kanta no C49 009 luokiteltiin varauksin Nocardioides-suvun lajik-30 si.
On selvää, että kyseessä oleva keksintö ei rajoitu tietyn kannan no C49 009 tai yllä esitettyä kuvausta täysin vastaavien organismien käyttöön. Tarkoituksena on erityisesti sisällyttää kaikki muut mainitun organismin sandra-35 mysiiniä valmistavat kannat tai mutantit, jotka voidaan 14 80475 saada aikaan kuvatusta organismista tunnetuin menetelmin, kuten esimerkiksi X-säteilyn, ultraviolettisäteilyn, sinappikaasukäsittelyn, faasialtistuksen yms. avulla.
5 Antibiootin valmistus
Sandramysiiniä valmistetaan viljelemällä Nocardioides-lajin kantaa no C94 009 (ATCC 39419) tai sen mutanttia tavanomaisessa ravintoelatusaineessa. Organismi kasvatetaan elatusaineessa, joka sisältää tun-10 nettuja ravintolähteitä, esimerkiksi assimiloituvia hiilen- ja typenlähteitä sekä valinnaisia epäorgaanisia suoloja ja muita tunnettuja kasvutekijöitä. Antibiootin suurten määrien valmistamiseen käytetään mieluummin pinnanalaisia, aerobisia olosuhteita, vaikka valmistukseen 15 voidaan käyttää myös rajoitettuja määriä pintaviljelmiä ja pulloja.
Elatusaineen tulisi sisältää yhtä tai useampaa assimiloituvaa hiilenlähdettä, kuten esimerkiksi glyserolia, glukoosia, sakkaroosia, mannoosia, fruktoosia, 20 maissitärkkelystä, maltoosia, mannitolia, melassia ym., joko puhdistettuna tai raa'assa muodossa. Elatusaineen tulisi myös sisältää yhtä tai ueampaa assimiloituvaa typen lähdettä, kuten esimerkiksi soijapapujauhoa, kalajauhoa, mallasuutetta, hiivauutetta, peptonia, 25 gluteenijauhoa, pellavansiemenalkio. jauhoa, soijajauhoa, pellavansimenjauhoa, puuvillansiemenjauhoa, kaseiinia, hydrolysoituja proteiiniaineita, nitraatteja, ammonium-suoloja, ureaa yms. Elatusaineeseen voidaan lisätä myös epäorgaanisia ravintosuoloja, kuten esimerkiksi 30 natriumkloridia, kaliumfosfaattia, magnesiumsulfaattia, kalsiumkarbonaattia sekä pieniä määriä raskasmetalleja, kuten esimerkiksi kuparia, sinkkiä, mangaania, rautaa yms.
Käymislämpötilan tulisi olla alueella 15 - 37°C 35 ja mieluummin alueella 25 - 30°C. Käymiselatusaineen il 15 80475 pH:n tulisi olla noin 5-10, ja edullinen alue on noin 6-8,5. Tavallisesti sandramysiinin optimituotanto saadaan noin 2-9 päivässä, lämpötilasta riippuen. Kun suoritetaan säiliökäymistä, on toivottavaa valmistaa vegeta-5 tiivinen ymppi elatusaineeseen siirrostamalla elatusaine vinopintaviljelmän tai maaviljelmän tai mikro-organismin lyofilisoidun viljelmän avulla. Sen jälkeen kun tällä tavalla on saatu aktiivinen ymppi, se siirretään aseptisesti käymissäiliön elatusaineeseen.
16 80 475
Sandramysiinin eristäminen
Kun käyminen on täydellinen, sandramysiini kerätään elatusaineesta ja eristetään oleellisesti puhtaassa muodossa monivaiheisen, seuraavassa kaaviossa esitetyn menetelmän mukaisesti.
Koko käymisliemi (1) uuttaminen etyyliasetaatilla (2) sekoitus piimään kanssa, suodatus (3) jakeiden erottaminen ja haihduttaminen r i käytetty vesi r_aaka_antibioottiuute (1) uuttaminen vettä sisältävällä metanolilla sekä Skellysolve Erillä ja jakeiden erottaminen I ~ f
Skellysolve B -jae vesi-metanoli- (1:9) jae (1) laimentaminen vedellä vesi-metanoli-(1:3)jae (1) uuttaminen hiilitetra-kloridillä ja haihdutus jäännös A vesi-metanoli-(1:3)jae (1) laimentaminen vedellä ti 17 80475 vesi^metanoli ("7:13) jae (1) uuttaminen kloroformilla ja haihduttaminen
I I
jäännös b -- vesi-metanoli- (7:13) jae; heitetään pois (1) jäännösten A ja B pylväskroma-tografia käyttämällä piimaa-kan-taja-ainetta (2) tolueeni-jae, haihdutettu Ψ jäännös c piihappogeelikromatografia (2) lineaarinen gradienttieluutio Ψ sandramysiini (1) uudelleenkiteyttäminen Ψ puhdistettu sandramysiini ie 80475
Juoksukaaviota tarkemmin tarkasteltaessa, koko elatusaine, joka on saatu Nocardioides-lajin, kannan C49 009 käymisestä, uutetaan ensin veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuottimena, edullisesti etyyliasetaatilla, 5 Suodatuksen apuaine, kuten esimerkiksi Dicalite (Grafco Inc.;n, Torrance, Ca., kauppanimi piimaalle) lisätään edullisesti uuteseokseen ja sitten seos suodatetaan liukenemattomien aineiden poistamiseksi. Suodattamisen jälkeen orgaaninen ja erotetaan uuteseoksen suodoksesta 10 ja väkevöidään haihduttamalla, jotta saadaan mainitun antibiootin raakauute. Raakauute jaetaan alifaattisen hiilivetyliuottimen, kuten esimerkiksi Skellysolve B ·η (Skelly Oil Co.:n kauppanimi isomeerisille heksaaneille) sekä noin 10-%risen veden metanoliliuoksen välillä.
15 Vettä sisältävä metanolijae laimennetaan uudella vesimäärällä, ja syntyvä, noin 25 % vettä metanolissa sisältävä liuos uutetaan orgaanisella liuottimena, kuten esimerkiksi hiilitetrakloridilla. Vettä sisältävä metanolijae laimennetaan edelleen vedellä ja syntyvä, noin 20 35 % vettä metanolissa sisältävä liuos uutetaan orgaani sella liuottimella, kuten esimerkiksi kloroformilla. Hiilitetrakloridiuutteet yhdistetään ja haihdutetaan tyhjössä, jotta saadaan jäännös A. Kloroformiuutteet yhdistetään ja haihdutetaan tyhjössä, jotta saadaan 25 jäännös B. Jäännökset A ja B voidaan yhdistää ja kromatografoida pylväässä^ joka sisältää piimaata, kuten esimerkiksi Dicalitear, käyttämällä orgaanisia liuottimia, joilla on korkea polarisuus. Sopivat jakeet, jotka sisältävät antibiootin, yhdistetään ja haihdute-30 taan tyhjössä, jotta saadaan jäännös C. Lisäpuhdistus voidaan saada aikaan jäännöksen piihappogeeli-alhainen paine-nestegromatografiän avulla tai jäännösten D,D’, E ja E' nestekromatografiän avulla, jossa käytetään keskimääräistä painetta, alla esimerkissä 3, vaiheessa C, 35 kuvatulla tavalla, käyttämällä eluenttina kloroformin
II
19 80475 lineaarista gradienttia 5-%:iseksi metanoliksi kloro-formiliuoksessa. Sopivat jakeet haihdutetaan kuiviksi, jotta saadaan sandramysiini; uudelleenkiteyttäminen sopivasta liuotinjärjestelmästä antaa puhtaan kiteisen 5 sandramysiinin.
Sandramysiinin rakenne
Sandramysiini on syklinen depsipeptidi, kasvaimen-vastainen antibiootti, joka sisältää 3-hydroksikinoliini-ytimen kromoforina sekä pipekoliinihappo-osan. Spektri-10 ja kemiallisen analyysin perusteellasandramysiinille on määrätty seuraava rakennekaava CH3 ^CK3
CM, „„ CM
I 3 cht I
^ OM I I 3 I
f' Tl CO-NIICM -CO-N-CM -CO-N—CH
UL λ K co K o ? ° O Γ2
CO ky N-CO-CH-NHOCyN
CH-N-CO-CM2-N-CO-CM2NM-CO
I CM, CH, 20 CH 3 3 CM ^CH, j 3
Sandramysiini on valkoinen, kiteinen kiinteä aine, jonka sulamispiste on 208-212°C, molekyylikaava on CggH^gO^gN^ ja mplekyylipaino on 1221, 3312. Se koostuu ^ alkuaineista hiili, vety, typpi ja happi. Alkuaine- analyysin antamat tulokset ovat seuraavat:
Laskettu C60H76°16N12* 8H20:lle: c 52»78; H 6,79; N 12,31; 0 (erona) 28,12 30 Määritetty; C 52,58? H 6,27; N 12,29; 0 (ero na) 28,86.
Suuren erotuskyvyn massaspektri määritettiin sandramysiinille Kratos MS-50 spektrometrin sekä FAB-ioni-saation avulla. Havaittu massa on seuraava: 20 80475
Laskettu (M+H)+-ionille: 1221,5579 Määritetty (M+H)+-ionille 1221,5571.
Sandramysiinin infrapuna-absorptiospektrillä, kun sandramysiini on tabletoitu KBr:ssä, on tunnusomaiset 5 kaistat seuraavilla taajuuksilla, jotka esitetään käänteisarvo-senttimetreinä : 3500 , 3340, 2970, 2940, 2880, 1748, 1660, 1640, 1598, 1520, 1468, 1445, 1420, 1336, 1290, 1265, 1235, 1172, 1138, 1092, 1055, 1018, 10 922, 885, 855 ja 838.
in nm (a) CH3OH : 356(8,1), 296(7,5), 229(62,8), 217(63,7) 15 CH30H-HC1 : 356(8,3), 306(8,1), 228(58,4), 210(62,3) CH3OH-NaOH : 395(9,2), 301(7,2), 246(59,8).
Protonin magneettinen resonanssispektri deuteroituun kloroformiin liuotetulle sandramysiinille määritettiin 20 Brukerin spektrometrillä malli WM-360, toimien 360 MHZ :11a sekä käyttämällä tetrametyylisilaania sisäisenä standardina. Havaitut kemialliset siirtymät ( S-arvot), kytkentävakiot (J-arvot Hz:na) sekä kaavaa koskevat kuvaukset ovat seuraavat: 25 11,75(s, 2H, Ar-OH), 9,58(d, J=6,39, 2H, ser KH), 8,55(bs, 2H, gly NH) , 7,82<bs, 2H, Ar-H8), 7,72(m, 2H, Ar-H5), 7,63(s, 2H,
Ar-H4), 7,52(m, 4H, Ar-H6 ja Ar-H7), 5,60(m, 2H, oH pip.:n), 5,56(d, J=17,58, 2H sar aCH), 5,28(m, 2H, ser oCH), 5,01(d, J-12,79, 2H, ser 8CH),. 4,88(d, J»12,79, 2H, vai aCH), 4,45(bä,
30 J*12,79, 4H, ser 6CH ja gly aCH), 4,07(bd, J=15,99, 4H, eH
pip.:n ja gly:n <XCH), 3, 76 (bd, J=12,79, 2H, εΗ 3,58(d, J=17,58, 2H, sar CH) , 3,14(s, 6H, N-CH-j) , 2,96(s, 6H, N-CH3> , 2,06 (m, 2H, vai 6CH) , 1,82 (bs, 4H, BCHPip.'.n), l,68(bm, 4H, yCH pip,:n), 1,57 (bm, 4H, 6CHpip:n), 0,94(d, J=6.37, 6H, val-CH3), 0,80(d, J=6,37, 6H, val-CH3).
35 2i 8G475
Hiili-13:n magneettinen resonanssispektri deuteroituun kloroformiin liuotetulle sandramysiinille määritettiin Joelin spektrometrillä malli FX9 OQ, siten että toimittiin 22,5 MHz :11a ja käyttämällä tetra-5 metyylisilaania sisäisenä standardina. Havaitut kemialliset siirtymät (miljoonasosa-arvot), joissa kukin kemiallinen siirtymä merkitsee kahta hiiliatomia, sekä merkintä ovat seuraavat:
Kemiallinen Spektrin tulkinta 10 No. siirtymä (miljoonasosaa) (ppm) 1 171,73 karbonyyli 2 168,54 3 168,37 15 4 f5 166,91, 166, 91 6 165,39 η 15 3,04 3-hydroksikinoliini c-3 8 140,64 C-2 9 133,87 C-8a 20 10 131,22 C-4a H 128,61 C-8 12 i27t 64 C-7 13 126,23 C-5 14 125,58 C-6 25 15 119t45 C-4
16 61,43 N-metyylivaliini aCH
17 27,90 8CH
18 I® r 58 yCH3 19 17t 82 YCH3 30 20 29 r 42 NCh3 21 49,79 glysiini oCH2
22 41»02 sarkosiini aCH
23 34,08 N-CH3 24 51,74 seriini oCH 1 25 61,11 6CH2 22 8Q475
Taulukko (jatkuu)
Kemiallinen Spektrin tulkinta
Ho siirtymä (miljoonasosaa) (ppm)
26 48,49 pipekoliinihappo GtCH
27 27,90 /3-CH2 5 28 19,34 T“CH2 29 24,11 ^_CH2 30 43,07 £-CH2 10 Sandramysiinin avainpiirteet, jotka erottavat sen lutsopeptiineistä A, B ja C, vastaavasti ovat 3-hydroksi-kinaldiinihappo- sekä pipekoliinihapporyhmät 3-hydroksi- 6-metoksikinaldiinihappo-sekä 4-substituoidun tetra-hydropyridatsiini-3-karboksyylihapporyhmien sijasta.
15 Sandramysiinin biologinen aktiivisuus
Sandramysiinin bakteerinvastaiset aktiivisuudet määritettiin kaksinkertaisen agar-laimennusarjamenetelmän perusteella. Tulokset esitetään taulukossa 5 lutsopep-tiini A:n ja ekinomysiinin aktiivisuuksiin verrattuina.
20 Kuten taulukosta 5 on nähtävissä, sandramysiini inhiboi voimakkaasti gram-positiivisia organismeja, kuten esimerkiksi Bacillus subtilista sekä Staphylococcus aureusta samoin kuin Streptococcus faecalista.
23 80475
Taulukko 5
Sandramysiinin mikrobienvastainen aktiivisuus
Pienin inhiboiva konsentraatio (MIC) (pg/ml)
Koeorganismi Sandra- Lutso- Ekino- mysiini peptiini mysiini B. subtilis (Rec. +) A22508-2 0,024 0,195 0,049 B. subtilis (Rec.-) A22509-2-2 0,012 0,049 <0,003 S. aureus 209P-A9497 0,012 0,098 0,012 S. aureus (ekinomysiinille resistentti) A9628 0, 098 0, 098 0,78
Strep, faecalis A9611 0,024 0,195 0,012 E. coli A15119 12,5 12,5 12,5 E. coli (aktinonysiinille herkkä) A2178 0 (AS-19) 12,5 12,5 6,25 24 80475
Sandramysiiniä tutkittiin myös siirrostettavaa hiiren kasvainta P-388 -leukemiaa kohtaan, ja tulokset on esitetty taulukossa 6. Käytetty metodiikka noudatti yleisesti the National Cancer Institute'n /Cancer 5 Chemoterapy Rep. osa 3, 3, 1-103 (1972)7 sopimusta. Olennaiset koetta koskevat yksityiskohdat esitetään taulukon 6 alapuolella. Tutkittiin kahta erilaista annos-aluetta: yksi ainoa annos päivänä 1 ja päivittäin t 5 päivän ajan. Molemmilla aikatauluilla optimiannos 10 näyttää olevan 0,2 mg/kg/ruiske.
Taulukko 6
Sandramysiinin vaikutus P-388-leukemiaan
Vaikutus AW3 Elossa 15 Yhdiste Käsittely- Annos, IP MST MST g olevat aikataulu mg/kg/ruiske päiviä % T/C päivänä 4 päivä-
Sandra- nä--5 - mysiini d.l d.l 3,2 toksinen toksinen -2,8 0/6 1i6 H»5 128 -1,3 6/6 20 °»8 10,0 111 -1,6 6/6 °;4 H;0 122 -0,7 6/6 °r2 14;5 161 -1,4 6/6 °;Χ H>0 122 -0,9 6/6 0,05 10,0 111 -0,6 6/6 25 Sandra- °'025 9»5 106 "0,2 6/6 mysiini d. 1-^5 1,6 toksinen toksinen -1,7 2/6 M 6»0 67 -1,4 5/6 M H,0 122 -1,3 6/6 °;2 12;0 133 -1,7 5/6 : 30 0, 1 11,5 128 -0,8 6/6 °r°5 8,5 94 -1,8 6/6 0,025 10,0 Hl -1,4 5/5 0,0125 10,5 117 -0,9 6/6
Kontrolli suola- 9,0 - 0,2 10/10 35 liuos li 25 80475 g
Kasvaimen siirrostus: 10 ascites—solua siirrostettu vatsaontelonsisäisesti.
Isäntä: naaraspuolisia CDF^-hiiriä Arvio: MST =keskimääräinen elinaika 5 Vaikutus: % T/C = (MST käsitelty/MST kontrolli) x 100
Kriteerit: % T/C = 125 katsottu merkittäväksi kasvaimen-vastaiseksi aktiivisuudeksi AWC: painon keskimäärinen muutos (käsitelty kontrolli) grammoina (päivänä 4) 10
Kuten on osoitettu yllä esitetyin mikrobienvastaisin ja hiirellä kasvaimenvastaisin tuloksin, sandramysiini on käyttökelpoinen myös kasvaimenvastaisena aineena inhiboitaessa nisäkkäiden pahanlaatuisia kasvaimia, 15 kuten esimerkiksi P-388-leukemiaa.
Kyseessä olevan keksinnön piiriin kuuluvat farmaseuttiset koostumukset, jotka sisältävät tehokkaan, mikrobienvastaisen tai kasvainta inhiboivan määrän sandramysiiniä inerttiin, farmaseuttisesti hyväksyttä-20 vään kantaja-aineeseen tai laimennusaineeseen yhdistettynä. Sellaiset koostumukset saattavat myös sisältää muita aktiivisia, mikrobien- tai kasvaimienvastaisia aineita, ja ne saatetaan valmistaa missä tahansa farmaseuttisessa muodossa, joka soveltuu annosteltavaksi haluttua tietä 25 käyttäen. Sellaisia koostumuksia koskeviin esimerkkeihin kuuluvat kiinteät koostumukset suun kautta suoritettavaa annostelua varten, kuten esimerkiksi tabletit, kapselit, pillerit, jauheet sekä rakeet, nestemäiset koostumukset suun kautta suoritettavaa annostelua varten, kuten esi-30 merkiksi liuokset, suspensiot, siirapit tai eliksiirit sekä parenteraaliseen annosteluun soveltuvat valmisteet, kuten esimerkiksi steriilit liuokset, suspensiot tai emulsiot. Niitä saatetaan valmistaa myös steriilien kiinteiden koostumusten muodossa, jotka voidaan liuottaa 35 fysiologiseen keittosuolaliuokseen tai johonkin muuhun steriiliin ruiskutettavaan alustaan välittömästi ennen käyttöä.
26 8 0 4 7 5
Mikrobienvastaisena aineena käytettäessä sandra-mysiiniä tai sen farmaseuttista koostumusta annetaan siten, että aktiivisen aineen konsentraatio on suurempi kuin pienin tiettyä käsiteltävää organismia inhiboiva 5 konsentraatio. Kasvaimenvastaista käyttöä varten sandra-mysiinin optimiannokset ja annosohjelmat tiettyä nisäkäs-isäntää varten ovat helposti tutkimustyöhön perehtyneiden varmistettavissa. On tietenkin täysin ymmärrettävä, että käytetty, tosiasiallinen sandramysiinin annos vaihtelee 10 tietyn, formuloiden koostumuksen, annostelutavan sekä hoidettavan tilan, isännän ja sairauden mukaisesti.
Monet tekijät, jotka muuntavat lääkkeen vaikutusta, on otettava huomioon! ikä,sukupuoli, paino, ruokavalio, annos-teluaika, annostelutapa, erittymisnopeus, potilaan tila, 15 lääkeyhdistelmät, reaktioherkkyys sekä sairauden ankaruus mukaanluettuina.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
(£)
Skellysolve on kaupallisesti saatavissa 20 oleva petroli-liuotin (Skelly Oil Co.), joka koostuu isomeerisistä heksaaneista, ja jonka kiehumispiste o (R) on 60 - 69 C. Sicalite^ on piimää, jonka on valmistanut Grefco, In., Torrance, California. Ellei muuten ole mainittu, kaikki lämpötilat seuraavissa esimerkeissä ovat 25 Celsius-asteita.
Esimerkki 1
Sandramysiinin käyminen A. Ravistelupullossa suoritettu käyminen
Nocardioides-lajin kantaa no C49 009, ATCC 39419, 30 pidettiin yllä ja se siirrostettiin viljelyn käytetyissä koeputkissa agar-vinopinnoille, jotka käsittivät hiiva-mallasuute-agaria. Tämä elatusaine sisältää glukoosia 4,0 g, hiivauutetta 4,0 g mallasuutetta 10,0 g sekä agaria 20,0 g ja se täytetään yhdeksi litraksi ionitto-35 maila vedellä. Kunkin siirrostuksen yhteydessä agar-vino- il 27 80475 pintavi ljelmää inkuboitiin seitsemän päivän ajan 27°C:ssa. Ympin valmistamiseksi tuotantovaihetta varten, huovaston kasvu vinopintaviljelmältä siirrettiin 500 ml:n vetoiseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisälsi 100 ml steriiliä 5 elatusainetta, jossa oli 30,0 g glukoosia, 10,0 g soijajauhoa, 10,0 g pellavansiemenalkiojauhetta sekä 3,0 g CaCO^ia täytettynä yhdeksi litraksi ionittomalla vedellä. Tätä vegetatiivista viljelmää inkuboitiin 27°C:ssa 48 tunnin ajan Gyrotory-kerrosravistelijassa (Malli G53, 10 New Brunswick Scientific Co., Inc.) säädettynä nopeudelle 210 kierrosta/min, kehän läpimitan ollessa 5,1 cm.
Neljä millilitraa vegetatiivista viljelmää siirrettiin 500 ml:n vetoiseen Erlenmeyer-pulloon, joka sisälsi 100 ml steriiliä tuotantoelatusainetta, jossa oli 20,0 g 15 sakkaroosia, 10,0 g soijajauhoa, 10,0 g pellavansiemen-jauhoa sekä 5,0 g CaCO^ra täytettynä yhdeksi litraksi ionittomalla vedellä. Tuotantoviljelmää inkuboitiin 27°C:ssa ravistelijassa, jota käytettiin vegetatiiviselle viljelmälle, säädettynä nopeudelle 250 kierrosta/min.
20 96 tunnin kuluttua tuotantoviljelmä koottiin sandramysiinin eristämistä varten.
B. Bench-top-käyminen
Sandramysiinin valmistamiseksi bench-top-fer-menttorissa 400 ml esimerkissä 1 kuvattua vegetatiivista 25 viljelmää siirrettiin fermenttoriin (Microgen malli SF-116, New Brunswick Scientific Co., Inc.), jossa oli 10 litraa tuotantoelatusainetta, joka sisälsi 40 g maissi-tärkkelystä, 20 g pellavansiemenjauhoa, 1 g (NH4)2SO^:a sekä 5 g Ca CO^sa litraa kohti ionitonta vettä. Lämpötila 30 pidettiin 27°C:ssa, ravistelunopeus oli 300 kierrosta/min ja ilmavirtauksen nopeus oli 8 litraa/min. Sandramysiini eristettiin viljelmästä 202 tunnin kuluttua.
C. Säiliökäyminen
Sandramysiinin koetehdasvalmistusta varten siir-35 rettiin 2 litraa vegetatiivista viljelmää (valmistettu esimerkin IA yleisen menetelmän mukaisesti) fermentto- 28 8 0 4 7 5 riin, joka sisälsi 30 litraa tuotantoelatusainetta, jossa oli 40 g maissitärkkelystä, 20 g pellavansiemenjauhoa, 1 g (NH^^SO^sa sekä 5 g CaCO^sa litrassa ionitonta vettä. Inkubointilämpötila oli 26,5°C, ilmanvirtaus-5 nopeus oli 80 litraa/min, ravistelunopeus oli 375 kierrosta/min. Vastapaine oli 1 atm.. 183 tunnin kuluttua säiliökäyminen koottiin sandramysiinin eristämistä varten.
Esimerkki 2 10 Sandramysiinin eristäminen ja puhdistaminen
Vaihe A: Uuttaminen
Raakakäymisen koko elatusaineliemi (λ^8 litraa) siirrettiin 20 litran vetoiseen, polyetyleenistä valmistettuun säiliöön (yläosan läpimitta 48 cm, pohjan 15 läpimitta 44 cm, korkeus 55 cm), joka oli varustettu pohjassa sijaitsevalla säätöhanalla. Lisättiin yhtä suuri tilavuus etyyliasetaattia. Seosta sekoitettiin ilman liikkeelle panemalla sekoittajalla hyvää sekoitus- nopeutta käyttäen 30 minuutin ajan. Lisättiin noin (1¾ 20 6 litraa (2 kg) Dicalitea^ja sekoitettiin. Suodos suoda tettiin DicalitJ^täytteellä, joka oli no 12 Buchner-suppilossa. Suodos koottiin 19 litran vetoisessa liuos-pullossa, joka oli varustettu tyhjönpoistajalla. Huokoinen pohja pestiin 2 litralla etyyliasetaattia.
25 Suodos siirrettiin 20 litran vetoiseen erotussuppiloon, ja jakeiden annettiin erottua. Etyyliasetaatti-uute poistettiin ja väkevöitiin noin yhdeksi litraksi labo-ratoriokokoa olevassa pyöröhaihduttajassa, joka oli varustettu jatkuvalla syötöllä. Väkevöite haihdutettiin 30 edelleen, jotta saatiin 1,94 g raakaa uutetta.
Vaihe B; Raakauutteen neste-neste-jakaantuminen Raakauute, joka oli saatu vaiheesta A (1,94 g) , liuotettiin seokseen, jossa oli 200 ml metanolia ja 200 ml Skellysolve ΕΠ Kaksijakeinen liuos siirrettiin 35 yhden litran vetoiseen erotussuppiloon ja laimennettiin ti 29 80 475 22 ml:11a vettä. Seosta ravisteltiin ja syntyvien ja-keiden annettiin erottua. Vettä sisältävä metanoli (alempi jae) siirrettiin toiseen yhden litran vetoiseen erotussuppiloon, ja sitä uutettiin kaksi tai useampia 5 kertoja 200 ml:n suuruisilla erillä Skellysolve ^:tä. Skellysolve & oli aiemmin kyllästetty yhtä suurella tilavuudella 10-%:ista veden metanoliliuosta. Vettä sisältävä metanolijae laimennettiin 44 ml:11a vettä ja sitä uutettiin kolme kertaa 200 ml:n erillä hiilitetra-10 kloridia. Hiilitetrakloridi oli edeltäkäsin kyllästetty yhtä suurella tilavuudella 25~%:ista veden metanoliliuosta. Vettä sisältävä metanolijae laimennettiin 41 ml:11a vettä ja sitä uutettiin kolme kertaa 200 ml:n erillä kloroformia. Kloroformi oli ennalta 15 kyllästetty yhtä suurella tilavuudella 35-%:ista veden metanoliliuosta. Hiilitetrakloridiuutteet yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviksi tyhjössä pyöröhaihduttajalla, jotta saatiin 595 mg jäännöstä A. Kloroformiuutteet yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviksi tyhjössä pyörö-20 haihduttajassa, jotta saatiin 458 mg jäännöstä B.
Vaihe C: Jäännösten A ja B hienoksi hiertäminen Jäännös A (547 mg) sekä jäännös B (389 mg), jotka oli saatu vaiheesta B, yhdistettiin ja ne liuotettiin 30 ml:aan seosta, jossa oli 2 osaa kloroformia ja 1 osa d) 25 metanolia. Liuokseen lisättiin Dicalitea^(L7,4 g), ja sitten muodostettiin liete lisäämällä 200 ml Skellysolve lP^:tä. Liuottimet haihdutettiin tyhjössä pyörö-haihduttimella. Jäännökseksi saatu jauhe lietettiin 500 ml:aan tolueenia, pakattiin ,,flash"-kromatografia-30 pylvääseen (4,1 cm sisäläpimitta x 45,7 cm). Dicalit^ pakattiin täytteeksi paineen alaisen (^“39,273 kBa) virtauksen avulla. Kun pakkausliuotin saavutti täytteen pinnan, virtaus pysäytettiin ja pylväästä poistettiin paine. Pintaan lisättiin kerros Ottswa-hiekkaa (^2cm).
35 Sitten pylväs eluoitiin paineen alaisen typen virtauksen 30 80475 avulla seuraavaa eluenttisarjaa käyttäen: tolueeni (500 ml), dietyylieetteri (500 ml); metyleenikloridi (500 ml); kloroformi (500 ml); etyyliasetaatti (500 ml); asetonitriili (500 ml); tetrahydrofuraani (500 ml) 5 sekä metanoli (500 ml). Tolueenieluaatti sekä pakkaus-suodokset yhdistettiin 1 litra) ja haihdutettiin kuiviksi tyhjössä pyöröhaihduttajalla, jotta saatiin 0,699 g jäännöstä C.
Vaihe D: Jäännöksen C pylväskromatografia 10 Glenco-pylväs, jonka sisäläpimitta oli 2,0 cm ja pituus oli 30 cm, pakattiin liettäen 37 g:11a Woelmin piihappogeeliä (0,060-0,200 mm, 70-230 mesh), joka oli kloroformissa. Jäännös C (0,699 g) vaiheesta C liuotettiin 5 ml:aan kloroformia ja pantiin pylvään päähän.
15 Näytteen annettiin suodattua pakattuun täytteeseen.
Tyhjä paikka pylvään huipun ja piihappogeelin välillä täytettiin standardi Ottawa-hiekalla. Pylväs yhdistettiin Glencc-gradienttieluutio-laitteeseen, ja eluutio aloitettiin 2 litralla lineaarista kloroformin gradienttia 20 5-%:seksi metanoliksi kloroformissa, ja kerättiin 20 x 100 ml:n jakeita. Kukin jae haihdutettiin kuivaksi tyhjössä pyöröhaihduttajaa käyttäen. Jäännös liuotettiin 3 ml:aan seosta, jossa oli 2 osaa kloroformia ja 1 osa metanolia. Erät (2 ^μΐ) kutakin jaetta pantiin 25 täplinä Analtech-piihappogeeli-GHLF-ohutlevykromato-grafia(TLC)-levyille. Levyjä eluoitiin 5-%:isella metanolilla, joka oli valmistettu kloroformiin, ja niitä tarkasteltiin ultraviolettivalossa 254 nm:llä sekä 366 nm:llä. Jae 6 arvioitiin homogeeniseksi. Jakeesta 6 30 saatu kiteinen jae uudelleenkiteytettiin kloroformi-metanolista, jotta saatiin 188 mg puhdasta sandramy-siiniä, sp. 208-212°C.
Analyysi. Laskettu C^gH^O^N^ · 81^0: lie: C 52,78; H 6 79; N 12,31 ^ Määritetty: C 52,58; H 6,29; N 12,29 li 3i 80 475
Esimerkki 3
Isommassa mittakaavassa suoritettu sandramysiinin eristäminen ja puhdistus
Vaihe A: Raa'an uutteen uuttaminen ja neste-5 jakautuminen
Kun toistettiin esimerkissä 2, vaiheissa A ja B kuvatut, yleiset eristämismenetelmät, saatiin 1,12 g jäännöstä A sekä 3,03 g jäännöstä B koko käymisliemestä 8 litraa) .
10 Vaihe B: Jäännösten A ja B hiertäminen Jäännös A (1,12 g), joka oli saatu vaiheessa A, liuotettiin noin 300 ml:aan seosta, jossa oli 2 osaa klorofor^a ja 1 osa metanolia. Liuokseen lisättiin Dicalitea (20 g). Liuotin haihdutettiin kuivaksi tyh-15 jössä, pyöröhaihduttajassa. Jäännös lietettiin 300 mlraan tolueenia ja haihdutettiin jälleen kuivaksi. Tämä toistettiin toisen kerran. Syntyvä jäännös lietettiin 300 ml:aan Skellysolve eVtä ja haihdutettiin kuivaksi pyöröhaihduttajassa. Tämä toistettiin toisen kerran.
20 Dicalite-jäännös lietettiin 300 ml:aan Skellysolve (S) B^tä ja pakattiin "flash"-kromatografia-pylvääseen, jonka koko oli 4,1 cm (sisäläpimitta) x 45,7 cm, Dicalite1^ pakattiin täytteeksi paineen alaisen (N2~5,7 39,273 kPa) virtauksen avulla. Täytteen päälle pakattiin kerros 25 Ottawa-hiekkaa (/^ 2 cm). Eluutio aloitettiin paineen alaisen typen virtauksen avulla käyttämällä seuraavaa eluenttisarjaa: Skellysolve ^(500 ml); tolueeni (500 ml); dietyylieetteri (500 ml); metyleenikloridi (500 ml); kloroformi (500 ml); etyyliasetaatti (500 ml); 30 asetonitriili (500 ml); tetrahydrofuraani (500 ml) sekä metanoli (500 ml). Tolueeni-eluaatti haihdutettiin kuivaksi tyhjössä pyöröhaihduttajassa, jotta saatiin 912,7 mg jäännöstä D.
Yllä esitetty yleinen menetelmä toistettiin, 35 paitsi että siinä käytetty jäännös A korvattiin 32 80475 3,03 g:11a jäännöstä B, ja tällöin valmistettiin tolu-eenieluaatista 766,7 mg jäännöstä E.
Edellä esimerkissä 3, vaiheissa A ja B kuvatut yleiset menetelmät toistettiin, paitsi että siinä 5 saadut ja käytetyt jäännökset A ja B korvattiin vastaavasti 1,5 g:lla ja 1,97 g:lla jäännöksiä A' ja B' ja tällöin saatiin tolueenieluaatista vastaavasti 993,9 mg jäännöstä D' ja 693 mg jäännöstä E'.
Vaihe C: Jäännösten D ja E pylväskromatografia 10 Glenco-pylväs, sisähalkaisija 2,0 cm ja pituus 30 cm, pakattiin liettäen 40 g:11a Vtfoelm-piihappogeeliä (0,063-0,200 mm, 70-230 mesh), joka oli kloroformissa. Pylväs kytkettiin HPLC-järjestelmään, jossa käytettiin keskimääräistä painetta ja joka tasapainotettiin kloro-15 formilla. Jäännökset D, D' E sekä E' vaiheesta B yhdistettiin (arviolta 3,366 g) ja liuotettiin 6 ml:aan kloroformia. Liuos vedettiin 15 ml:n vetoiseen näyte-kierukkaan. Sama kierukka kytkettiin HPLC-järjestelmään, jossa käytettiin keskimääräistä painetta, ja näyte 20 pumpattiin pylvääseen 200 ml:an kanssa kloroformia.
Eluointi aloitettiin käyttäen 2 litraa kloroformin lineaarista gradienttia 5-%:iseksi metanoliksi, joka oli kloroformissa, ja koottiin 17 x 117 ml:n suuruiset jakeet. Kustakin jakeesta otetut erät (6 pii 25 määritettiin TCL:n avulla käyttämällä eluenttina 5-%:ista metanolia kloroformissa, ja tarkastelu suoritettiin 366 nm:n valossa. Jakeet 5 ja 6 koottiin ja haihdutettiin kuiviksi, jotta saatiin 2,166 g jäännöstä F. Jakeet 7-12 koottiin ja väkevöitiin kuiviksi tyhjössä pyöröhaih-30 duttajaa käyttäen. Jäännös (953 mg) liuotettiin 6 ml:aan kloroformia ja kromatografoitiin uudelleen kuten edellä, käyttäen 2 litraa kloroformin lineaarista gradienttia 1,5-%:seksi metanoliksi kloroformissa ja keräämällä 20 x 100 ml:n suuruiset jakeet. Jakeet 9-20 koottiin ja 35 haihdutettiin kuiviksi pyöröhaihduttajassa, jotta saatiin
II
33 80475 860 mg jäännöstä G.
Jäännökset F ja G yhdistettiin ja uudelleen-kiteytettiin kloroformi-metanolista, jotta saatiin 1,985 g puhdasta sandramysiiniä, joka on identtinen 5 esimerkissä 2 eristetyn tuotteen kanssa.
Claims (4)
- 34 80475 Menetelmä kaavan I mukaisen kasvaimenvastaisen antibiootin, sandramysiinin valmistamiseksi, 5 CH, CH, S3 / 3 CH. CH I 3 CH-, I /v. .OH I | 3 I fr CO-NHCH -CO-N-CH -CO-N— CH IMI I 2 2 I N "XONH-CH-CO-N
- 10 CH ° x ? O Γ2 CO l^^N-CO-ÖH-NHOC^N^^. CH-N-CO-CH2-N-CO-CH2NH-CO I CH CH
- 15 CH 3 CH3 ^ch3 tunnettu siitä, että sandramysiiniä tuottavaa Nocardioides sp. nov.:n kantaa C 49 009, jolla on ATCC 20 39419:n identifiointiominaisuudet viljellään pinnanalai sissa, aerobisissa olosuhteissa elatusaineessa, joka sisältää assimiloituvia hiilen ja typen lähteitä, kunnes huomattava määrä sandramysiiniä on tuotettu ja kerääntynyt elatusaineeseen, minkä jälkeen sandramysiini eriste-25 tään elatusaineesta. 35 80475 Förfarande för framställning av ett tumörhämmande antibiotikum, sandramycin, med formeln I 5 CH, CH. N3 / 3 CH r» CH OH J 3 |H3 I |Τ ''Of CO-NHCH-CO-N-CH-CO-N — CH L JJ A i 2 2 i
- 10 N ^CONH-CH-CO-N'η ™2 O _ ? ? O r» CO N-CO-CH-NHOC^N CH-N-CO-CH -N-CO-CH NH-CO Il 2 | 2 HU 15 lH C»3 -3 ^ \ CH3 CH3 kännetecknat därav, att man odlar sandramycin-20 producerande Nocardioides sp. nov. stamraen C 49 009 med ATCC 39419:s identificationsegenskaper under aeroba för-hällanden under vätskeytan i ett näringsmedium, som inne-häller assimilerbara koi- och kvävekällor tills en betydan-de del sandramycin producerats och ackumulerats i närings-25 mediet, varefter man isolerar sandramycinet ur närings-mediet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62164184 | 1984-06-18 | ||
| US06/621,641 US4582639A (en) | 1984-06-18 | 1984-06-18 | Antitumor antibiotic compound |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI852082A0 FI852082A0 (fi) | 1985-05-24 |
| FI852082L FI852082L (fi) | 1985-12-19 |
| FI80475B FI80475B (fi) | 1990-02-28 |
| FI80475C true FI80475C (fi) | 1990-06-11 |
Family
ID=24491001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI852082A FI80475C (fi) | 1984-06-18 | 1985-05-24 | Foerfarande foer framstaellning av ett tumoerhaemmande antibioticum, sandramycin. |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4582639A (fi) |
| JP (1) | JPS6122099A (fi) |
| KR (1) | KR930003107B1 (fi) |
| AT (1) | AT395860B (fi) |
| AU (1) | AU584075B2 (fi) |
| BE (1) | BE902670A (fi) |
| CA (1) | CA1230568A (fi) |
| CH (1) | CH668974A5 (fi) |
| DE (1) | DE3521436A1 (fi) |
| DK (1) | DK272985A (fi) |
| ES (1) | ES8609485A1 (fi) |
| FI (1) | FI80475C (fi) |
| FR (1) | FR2568892B1 (fi) |
| GB (1) | GB2160529B (fi) |
| GR (1) | GR851452B (fi) |
| IE (1) | IE58629B1 (fi) |
| IT (1) | IT1191622B (fi) |
| LU (1) | LU85953A1 (fi) |
| MY (1) | MY100478A (fi) |
| NL (1) | NL8501708A (fi) |
| PT (1) | PT80656B (fi) |
| SE (1) | SE464524B (fi) |
| ZA (1) | ZA852370B (fi) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4902781A (en) * | 1987-11-24 | 1990-02-20 | Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel tripetide derivatives |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| US5516676A (en) * | 1993-06-15 | 1996-05-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Preparation of C-13 hydroxyl-bearing taxanes using nocardioides or a hydrolase isolated therefrom |
| US5523219A (en) * | 1993-06-15 | 1996-06-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Enzymatic hydrolysis method for the preparation of C-10 hydroxyl-bearing taxanes and enzymatic esterification method for the preparation of C-10 acyloxy-bearing |
| US5643871A (en) * | 1993-11-23 | 1997-07-01 | Bristol-Meyers Squibb Company | Antitumor antibiotics |
| US5444043A (en) * | 1994-02-18 | 1995-08-22 | The Regents Of The University Of California | Cyclic heptapeptide anti-inflammatory agent |
| GB2294265A (en) * | 1994-10-20 | 1996-04-24 | Merck & Co Inc | Cyclic depsipeptides obtained from Actinomycete sp. |
| WO1998043663A1 (en) * | 1997-03-28 | 1998-10-08 | The Scripps Research Institute | Sandramycin analogs |
| US6001815A (en) * | 1997-12-25 | 1999-12-14 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Depsipeptides containing N-substituted glycine residue |
| KR100575681B1 (ko) | 2004-05-18 | 2006-05-03 | 엘지전자 주식회사 | 와인 냉장고의 진동절연 지지장치 |
| EP1924245A2 (en) * | 2005-08-19 | 2008-05-28 | Government of the United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Topical formulations of histone deacetylase inhibitors and methods of using the same |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4360458A (en) * | 1979-04-02 | 1982-11-23 | Bristol-Myers Company | Antitumor antibacterial agents |
| US4451456A (en) * | 1979-04-02 | 1984-05-29 | Bristol-Myers Company | Antitumor antibacterial agents |
-
1984
- 1984-06-18 US US06/621,641 patent/US4582639A/en not_active Expired - Fee Related
-
1985
- 1985-03-28 AU AU40480/85A patent/AU584075B2/en not_active Ceased
- 1985-03-28 ZA ZA852370A patent/ZA852370B/xx unknown
- 1985-04-26 CA CA000480249A patent/CA1230568A/en not_active Expired
- 1985-05-24 FI FI852082A patent/FI80475C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-05-29 JP JP60116338A patent/JPS6122099A/ja active Granted
- 1985-05-30 CH CH2290/85A patent/CH668974A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-06-13 NL NL8501708A patent/NL8501708A/nl not_active Application Discontinuation
- 1985-06-14 AT AT0178285A patent/AT395860B/de not_active IP Right Cessation
- 1985-06-14 DE DE19853521436 patent/DE3521436A1/de active Granted
- 1985-06-14 GR GR851452A patent/GR851452B/el unknown
- 1985-06-14 IT IT21156/85A patent/IT1191622B/it active
- 1985-06-17 BE BE0/215198A patent/BE902670A/fr not_active IP Right Cessation
- 1985-06-17 IE IE150485A patent/IE58629B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-06-17 LU LU85953A patent/LU85953A1/fr unknown
- 1985-06-17 KR KR1019850004273A patent/KR930003107B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-06-17 GB GB08515256A patent/GB2160529B/en not_active Expired
- 1985-06-17 FR FR858509170A patent/FR2568892B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-17 ES ES544289A patent/ES8609485A1/es not_active Expired
- 1985-06-17 SE SE8502996A patent/SE464524B/sv not_active IP Right Cessation
- 1985-06-17 DK DK272985A patent/DK272985A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-06-18 PT PT80656A patent/PT80656B/pt not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-09-29 MY MYPI87002199A patent/MY100478A/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI77264C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av rebeccamycin med antitumoer effekt. | |
| US4518589A (en) | BBM-2478 Antibiotic complex | |
| FI80475C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett tumoerhaemmande antibioticum, sandramycin. | |
| US4524145A (en) | 4'-Deschlororebeccamycin pharmaceutical composition and method of use | |
| EP0388956A2 (en) | Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use | |
| US4567143A (en) | Process for preparing 4'-deschlororebeccamycin | |
| US4792522A (en) | Rigolettone antitumor complex | |
| US4599310A (en) | Process for producing antitumor antibiotic compound | |
| US4301248A (en) | Fermentation process for making rachelmycin | |
| US4572895A (en) | Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417 | |
| US4647693A (en) | Antibiotics DO-248-A and B and process for preparing the same | |
| AU682543B2 (en) | Antitumor antibiotics | |
| US4883758A (en) | Biologically pure culture of the microorganism Streptomycas tropolofaciens used for producing 3,7-dihydroxytropolone and antitumor use | |
| US5002959A (en) | BU-4146T antibiotic | |
| US4833079A (en) | Process for producing 3,7-dihydroxytropolone and antitumor use thereof | |
| US4956374A (en) | Polysubstituted thiazolylpyridine carboxyamide antifungal antibiotic | |
| CA2020878C (en) | Antitumor antibiotic bu-3285t | |
| EP0501399A1 (en) | Physiologically active kanglemycin C, process for preparing the same and use thereof | |
| US5811440A (en) | Antitumor antibiotic BMS-199687 | |
| US5037836A (en) | BU-4146T antibiotic | |
| EP0431323A1 (en) | Antitumor antibiotic BU-3983T |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY |