FI77667B

FI77667B - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt anvaendbara n6-(1- och 2-bensocykloalkyl)-adenosiner.

Info

Publication number: FI77667B
Application number: FI844750A
Authority: FI
Inventors: Bharat Trivedi; Harriet Hamilton; Walter Moos
Original assignee: Warner Lambert Co
Priority date: 1983-12-05
Filing date: 1984-12-03
Publication date: 1988-12-30
Also published as: NO159384B; JPS60136592A; PH21367A; EP0144235A2; GR81144B; NO844830L; AU562690B2; FI844750L; US4501735A; NZ210428A; OA07883A; ZA849337B; DK573484A; FI77667C; EP0144235A3; FI844750A0; PT79613A; ES538238A0; IL73700A; DK573484D0

Description

77667

Menetelmä farmakologisesti käyttökelpoisten N®-(1- ja 2-bent-sosykloalkyyli)-adenosiinien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av farmakologiskt användbara N6-(l- och 2-ben-socykloalkyDadenosiner Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat ade-nosiinianalogeja, joilla on muutamia samoja aktiivisuuksia kuin adenosiinilla, mutta huomattavasti pidempi vaikutusaika. Näiden yhdisteiden eräs muista, aikaisemmin kuvatuista adeno-siinianalogeista erottava piirre on havainto, että N®-1- tai -2-bentsosykloalkyyli-adenosiineilla on erittäin toivotut keskushermostolliset ja kardiovaskulaariset aktiivisuudet, kuten antipsykoottinen, sedatiivinen, antihypertensiivinen ja antianginaalinen aktiivisuus.

US-patentti 3,590,029 esittelee N®-(2-indanyyli)-2-aminoade-nosiinin, jolla on sydän- (cardiac) ja verenkierto- (circulatory) -aktiivisuus. US-patentti 3,922,261 esittelee N^-(l,2,3,4-tetrahydronaftyyli-2-)adenosiinin, joka on käyttökelpoinen alennettaessa vapaiden rasvahappojen ja triglyse-ridien konsentraatiota seerumissa ja parannettaessa sepel-valtimoverenkiertoa. UK-patentti 2,077,726 esittelee N^-ade-nosiinijohdannaisia antihypertensiivisina aineina. Eurooppalainen patenttijulkaisu EP 62,921 esittelee N^-adenosiini-johdannaisia, jotka alentavat verenpainetta.

Tämä keksintö koskee menetelmää farmakologisesti käyttökelpoisten N^-dja 2-bentsosykloalkyyli)adenosiinien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) 2 77667 Ä> HO-V0'' 111 y

HO OH

jossa Rilliä on kaava *’ N-R3 (Ia) / [ (Ib) jossa X on vety, alempialkyyli, karboksialempialkyyli tai fenyyli; Y on vety, alempialkyyli tai hydroksi; Z ja Z' ovat toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempialkyyli, hydroksi tai alempialkoksi; R3 on vety tai alempialkyyli; ja R2 on vety, halogeeni tai NH2? sillä edellytyksellä, että kun Ri:llä on kaava (Ib)

X

CtfH** v v R2 on vety tai halogeeni; sen diastereomeerien tai niiden seosten, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditio-suolan valmistamiseksi.

Kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä termi "alempialkyyli" tarkoittaa suoraa tai haarautunutta alkyyliryhmää, jossa on 1-6 hiiliatomia, kuten esimerkiksi metyyliä, etyyliä, propyyliä, isopropyyliä, butyyliä, sek.-butyyliä, isobutyyliä, tert.-butyyliä, amyyliä, isoamyyliä, neopentyyliä, heksyyliä ja vastaavia.

11 3 77667

Halogeeni tarkoittaa erityisesti fluoria, klooria tai bromia.

Alempialkoksi on 1-6 hiiliatomia sisältävä 0-alkyyli ja tarkoittaa samaa kuin "alempialkyyli" edellä.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia sekä vapaina emäksinä että happoadditiosuoloina. Molemmat muodot kuuluvat keksinnön piiriin. Käytännössä suolamuodon käyttö vastaa täysin emäsmuodon käyttöä. Sopivia farmaseuttisesti hyväksyttäviä, keksinnön mukaisia suoloja ovat sellaiset, jotka johdetaan mineraalihapoista, kuten kloorivetyhaposta ja rikkihaposta; ja orgaanisista hapoista, kuten etaanisul-fonihaposta, bentseenisulfonihaposta, p-tolueenisulfoniha-posta, ja vastaavista, jolloin saadaan vastaavasti hydroklo-ridi, sulfonaatti, etaanisulfonaatti, bentseenisulfonaatti, p-tolueenisulfonaatti ja vastaavat.

Mainittujen emäksisten yhdisteiden happoadditiosuolat valmistetaan joko liuottamalla vapaa emäs vesipitoiseen tai vesipitoiseen alkoholiseen liuokseen tai muihin sopiviin liuottimiin, jotka sisältävät sopivan hapon ja suola eristetään haihduttamalla liuotin, tai saattamalla vapaa emäs ja happo reagoimaan orgaanisessa liuottimessa, jolloin suola erottuu suoraan tai se voidaan saada konsentroimalla liuos.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat sisältää yhden tai useamman asymmetrisen hiiliatomin N^-sivuketjussa. Keksintö koskee yksittäisiä diastereomeereja ja niiden seoksia. Yksittäiset diastereomeerit voidaan valmistaa tai eristää sinänsä tunnetuilla menetelmillä.

Keksinnön eräs edullinen suoritusmuoto on menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa Reillä on kaava (Ia); X, Y, Z ja Z' ovat vety, R2 on vety, kloori tai amino ja R3 on vety.

4 77667

Erityinen suoritusmuoto käsittää menetelmän N^-(l-indanyyli)-adenosiinin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi.

Keksinnön edullinen, toinen yleinen suoritusmuoto on menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa R^: llä on kaava (Ib); X, Y, Z, Z' ja R3 ovat vety, ja R2 on vety tai kloori.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden, joissa R^sllä on kaava (Ib), erityinen suoritusmuoto on N6-(2-indanyyliJadenosiini tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan tarkoituksenmukaisesti syntetisoida siten, että saatetaan kaavan (II) mukainen 6-halogeenipuriiniribosidi

Hai

.JUO

2 (II)

H0“VN

vr

HO OH

jossa Hai on kloori tai bromi, reagoimaan indanyyliamiinin kanssa, jonka kaava on tai z— Z< NHRj (Ilia) J <IIIb) inertin tai aproottisen liuottimen läsnäollessa, 25-150 °C: ssa, 1-48 tunnin ajan, ja haluttaessa, muutetaan vapaa emäs sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi, tai eristetään farmaseuttisesti hyväksyttävänä happoadditio-

II

5 77667 suolana, ja haluttaessa, muutetaan mainittu suola vapaaksi emäkseksi. Inertti liuotin on esim. alkoholi ja aproottinen liuotin on esim. dimetyyliformamidi. Reaktioseokseen on hyödyllistä lisätä emästä, kuten trietyyliamiinia, tri-n-butyy-liamiinia tai kaliumkarbonaattia reaktion sivutuotteena muodostuvan halogeenivedyn neutralisoimiseksi.

Kaavojen (II), (lila) ja (Illb) mukaiset yhdisteet ovat tunnettuja tai, niiden ollessa uusia, niitä voidaan valmistaa alalla tunnetuilla menetelmillä.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden on havaittu omaavan erilaisia affiniteetteja adenosiinireseptoreilla (merkitty selvyyden vuoksi Αχ ja Ä2~reseptoreina).

Nämä yhdisteet ovat aktiivisia eläinkokessa, jotka kuvaavat neuroleptista aktiivisuutta hoidettaessa useimpia psykooseja, kuten skitsofreniaa. Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on myös sedatiiviset/hyptoniset ominaisuudet ja siten ne ovat käyttökelpoisia unihäiriöiden hoidossa.

Lisäksi kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä anti-hypertensiivisinä aineina hoidettaessa korkeata verenpainetta. Ne myös lisäävät sepelvaltimoverenkiertoa ja ovat siten hyödyllisiä hoidettaessa sydämen ja sydänlihaksen verettö-myyttä (ischemia).

6 77667

Antipsykoottinen arviointi

Keksinnön mukaisten yhdisteiden antipsykoottinen aktiivisuus todettiin seuraavassa esitetyllä "Mouse Activity and Screen Test" - menetelmällä (MAST).

5 Eläimet

Yhdeksän paastoamatonta Swiss-Webster uroshiirtä, paino 20 - 30 g, jaetaan tasan kolmeen ryhmään jokaisen lääkeannoksen testaamiseksi. Toisin sanoen jokaisen annostason arvot saatiin kolmella erillisellä ryhmällä, joissa 10 jokaisessa oli kolme hiirtä.

Lääkkeet

Ainakin kolme annostasoa (10, 30 ja 100 mg/kg) testataan jokaisella lääkkeellä. Käsittelyt suoritetaan intraperi-toneaalisesti tunti ennen testiä. Kaikki annokset laske-15 taan perusyhdisteenä ja annetaan 10 ml/kg:n määrinä.

Yhdisteet liuotetaan tai suspendoidaan 0,2-% Methoceliin.

Kontrollieläimille annetaan injektiona Methocel'iä.

Testaus

Kaksiosainen testausmenetelmä aloitetaan tunnin kuluttua 20 injektiosta. Ensin suoritetaan verkkotesti (screen test) (katso Pharmac. Biochem. Behav. 6^ 351-353, 1977). Lyhyesti tämä testi käsittää hiirten asettamisen yksittäisille lankaverkoille, joita sen jälkeen käännetään 180 astetta 60 sekunnin tarkkailujakson alussa. Käänne-25 tyltä verkolta pudonneiden hiirien lukumäärä lasketaan.

Verkkotestiä seuraa välittömästi testin loppuosa, joka aloitetaan asettamalla jokainen kolmen hiiren ryhmä

II

7 77667 yhteen aktofotometriin (Life Sciences/ 22, 1067-1076, 1978). Aktofotometri muodostuu lieriömäisestä kammiosta, jonka sisällä on toinen sylinteri, joka sisältää valaistuksen kammion kehälle asennettua kuutta valokennoa 5 varten. Kuusi valonsäteen katkaisua vastaa yhtä sykäystä. Liikkumisaktiivisuus rekisteröidään tietokoneella 10 minuutin välein 60 minuutin ajan.

Tulokset

Verkkotestistä saadut tulokset on esitetty verkolta 10 pudonneiden hiirien prosenttimääränä. Lääkkeellä käsiteltyjen hiirien liikkumisaktiivisuudesta saatuja tuloksia verrataan kantaja-aineella käsiteltyjen eläinten aktiivisuuteen ja tulokset on ilmoitettu spontaanisen liikkumisen prosentuaalisena estona. Kaikki prosentti-15 arvot, jotka on esitetty liikkumisen estolle, perustuvat tuloksiin, jotka saatiin tunnin aikana. Yhdisteet on identifioitu esimerkkien numeroilla.

Esimerkki Annos Hiiren liikkumis- Verkkotestin , . aktiivisuuden epäonnistu- ** ** esto minen 1 10 59 % 11 % 30 88 % 0 % 100 53 % 22 % 2 10 54 % 0 % 30 84 % 33 % 100 99 % 78 % 8 77667

Antihypertensiivinen arviointi Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttökelpoisuus antihypertensiivisina aineina osoitetaan niiden tehokkuutena tavanomaisissa farmakologisissa testimenetelmissä, 5 esimerkiksi, niiden aikaansaamana huomattavana vähennyk senä keskimääräisessä valtimoverenpaineessa tajuissaan olevalla rotalla. Tämä testimenetelmä on kuvattu seuraavissa kappaleissa.

Menetelmä aorttaverenpaineen ja sydämen lyöntinopeuden 10 mittaamiseksi suoraan tajuissaan olevilta rotilta

Sykkivän verenpaineen jatkuva mittaaminen vapaina, tajuissaan olevilta rotilta, joille oli kirurgisesti asennettu polyetyleenikanyylit, suoritettiin tietokoneen avulla, käyttäen hyväksi tietokoneavusteista tiedonkeruukaaviota 15 (computer assisted data capture scheme CADCS). Menetelmän peruselementit ovat kanylointimenetelmä ja CADCS.

Menetelmä

Kanylointimenetelmä; Rotat nukutettiin telatsolilla (1:1 tiletamiini-HCl ja tsolatsepam-HCl); 20 - 40 mg/kg 20 i.m. ja laskeva aortta paljastettiin keskiviivaviillolla. Kanyylit, jotka oli valmistettu polyetyleeniletkuista, asetettiin aorttaan munuaisvaltimoiden alapuolella olevan punktioreiän kautta. Punktioreikä tehtiin 23 G kertakäyttöneulalla siten, että osa aortasta oli puristettu 25 kiinni punktiokohdan ylä- ja alapuolelta. Kanyylit, jotka muodostuivat PE100 (0,86 mm sisähalk.) rungosta ja PE50 (0,58 mm sisähalk.) kärjestä, yhdistettiin troakaa-reen, vietiin lannelihaksen läpi ja johdettiin subku-taanisesti selän keskilinjaa pitkin ja ulos korvien 30 välistä. Kanyylit kiinnitettiin lannelihakseen ja lapa-

II

9 77667 luiden väliin ( 3-0 vihreä punottu ommel). Keskiviivan viilto suljettiin kahdessa vaiheessa (ensin lihas, sen jälkeen iho) käyttäen yhtäjaksoista over-and-over-ommelta (4-0 pitkäaikainen). Sen jälkeen, jokaiselle 5 rotalle annettiin subkutaanisesti 30 000 yksikköä penisilliiniä (Penicillin G, steriili prokaiinisuspensio).

Rotat varustettiin valjas-jousi-nivel-laitteella, joka oli suunniteltu suojaamaan kanyyliä ja salli rotan suhteelisen vapaan liikkumisen. Valjaat valmistettiin 10 nylon-tarranauhasta, joka liimattiin metallilevyyn, johon jousilangat (18-8 ruostumatonta terästä) kiinnitettiin messinkinivelin. Jokainen polyetyleenikanyyli pujotettiin jousen läpi ja yhdistettiin nivelellä paineen-mittauslaitteeseen (Model P23Gb; Statham Instruments; 15 Hato Rey, Puerto Rico) ja infuusiopumppuun (Sage malli 234-7; Orion Research, Cambridge, MA) PE100-letkun avulla. Testin kuluessa jokainen rotta sai jatkuvana, hitaana infuusiona heparinoitua, fysiologista suolaliuosta (noin 400 1 tai 40 yksikköä hepariinia 24 tunnin kuluessa) 20 hyytymien muodostumisen estämiseksi. Aortan verenpaineen (systolinen miinus diastolinen) ollessa pienempi kuin 25 mmHg kanyyliä huuhdeltiin ylimääräisiä kertoja heparinoidulla suolaliuoksella.

CADCS: Jokaisen 32 rotan sykkivä verenpaine ja sydämen 25 lyöntinopeus rekisteröitiin joka minuutti kahdella laboratoriossa olevalla mikrotietokoneella, jotka olivat suoraan yhteydessä tiedonkeskitintietokoneeseen. Tiedot tallennettiin ensin tiedonkeskitinlevylle, jonka jälkeen ne siirrettiin magneettinauhalle päätietokoneen analy-30 soitavaksi ja raportoitavaksi. Koko ohjelma käsitti paineenmittauslaitteesta saadun primäärisignaalin moduloimisen, systolisen, diastolisen ja keskimääräisen verenpaineen ja sydämen lyöntinopeuden yhden-minuutin 10 77667 arvojen primäärisen tiedoston kehittämisen laboratoriossa olevalla mikrotietokoneella ja päätietokoneella suoritetun tietojen varastoinnin, analysoinnin ja raportoinnin.

Paineenmittauslaitteet oli liitetty analogiasignaalien 5 konditiointimoduleihin. Modulit kehittivät säädetyn magnetointijännitteen paineenmittauslaitetta varten, tarvittavan vahvistuksen mikroprosessorien liittämiseksi, ja aktiivisen alipäästösuodattimen kompensoimaan paine-aallonmuotoa, jonka taipuisa, nesteen täyttämä, kapea 10 kanyyli vääristi. Vääristymä oli 22 - 26 Hz ja tämän avulla saatiin luotettava sekä systolisen että diastolisen verenpaineen arvo.

Mikrotietokoneet (yksi kumpaakin 16 rotan ryhmää varten) yhdistettiin syöttökomponentteihin moduliliitäntäyksi-15 köiden avulla, paineaallon muotosignaalin analogi-digi- taalimuuttajan ja annos- ja tapahtuma-merkkikytkimien digitaalisyöttöjen avulla. Mikrotietokone ohjasi tulosten peräkkäistä keräämistä moduliliitäntäyksiköistä sisäisen synkronisen tosiaikakellon/ajoitingeneraattorin avulla.

20 Käyttäen ajoitingeneraattoria referenssinä, verenpaineen arvot ja merkkikytkimen asento jokaisella 32 asemalla määritettiin joka kymmenes millisekunti. Mikrotietokone käsitteli jokaisen verenpainenäytteen sellaisena kuin se vastaanotettiin sydämen lyöntinopeuden ja keskimääräisen, 25 systolisen ja diastolisen verenpaineen "juoksevien keskimääräisten" arvojen muodostamiseksi.

Testattaessa edellä esitetyllä menetelmällä esimerkkien 1 ja 2 yhdisteet, saatiin seuraavat muutokset keskimääräisessä valtimoverenpaineessa (mean arterial blood 30 pressure MAP) ja sydämen lyöntinopeudessa (heart rate, HR) .

II

11 77667

Esimerkki 1 mg/kg tunti 1 3 5 7 9 3 MAP 25% 15% 18% 9% 13% HR 30%+ 11%+ 6%+ 7%+ 9%t 10 MAP 29% 23% 24% 19% 2% HR 39%+ 42%+ 44%ψ 25%+ 13%+

Esimerkki 2 10 MAP 26% 17% 18% 15% 18% HR 12%+ 1%+ 4%Ψ 8%+ 1%t 30 MAP 33% 21% 18% 14% 19% HR 18%+ 10%+ 5%+ 4%+ 8«+

Sepelvaltimon veren virtaus Menetelmä

Urosrotat (400 - 600 g) käsitellään etukäteen Na-heparii-nilla 2000 yksikköä ja nukutetaan Na-pentobarbitaalilla 5 (50 mg/kg), joka annetaan intraperitoneaalisesti. Heti nukutuksen jälkeen rotan sydän nopeasti leikataan, nousevaan aorttaan asetetaan aortan läpi kulkeva kanyyli ja kiinnitetään suonen seinään. Sepelvaltimolta läpi-huuhdotaan aluksi nopeudella 15 ml/min kahden - kolmen 10 minuutin ajan, jonka jälkeen niitä läpihuuhdotaan vakio-paineella, joka on 70 mmHg ja lämpötila on 37°C. Elektrokardiogrammi (EKG) rekisteröidään käyttäen kahta platinaelektrodia, jotka asetetaan vasemman kammion pohjalle ja kärkeen. Toisen eläimen sydän leikataan, 15 kanyloidaan ja läpihuuhdotaan edellä esitetyllä tavalla. Molemmat sydämet testataan rinnakkain. Standardi fysiologinen suolaliuos (PSS) on modifioitu Krebs-Henseleit-bikarbonaattipuskuri, jolla on seuraava koostumus, mmolaariset konsentraatiot; NaCl, 127; NaHCO^, 25; 12 77667 dekstroosi, 5,5; Na pyruvaatti, 2,0; KCl, 4,7; MgSO^, 1,1; KH2P04, 1,2; CaCl2*2H20, 2,5; CaNa2EDTA, 0,05.

Ennen testimenetelmän aloittamista, pidetään 30 minuutin stabilointijakso.

5 Mikroprosessorin kontrolloima sepelvaltimon läpivirtaus (coronary perfusion) ja lääkkeen luovutusjärjestelmä

Mikroprosessori-kontrolli-systeemi on apumekanismi, jonka avulla sepelvaltimon läpivirtauspaine (coronary perfusion pressure, CPP) ja lääkekonsentraatio pysyvät vakiona 10 riippumatta muutoksista sepelvaltimon virtauksessa. Tasoa, jolla CPP ja lääkekonsentraatio pidetään, voidaan muuttaa käskyillä, jotka annetaan mikroprosessorin näppäimistön avulla. Annos-vastaus-käyrät saadaan läpihuuhtomalla konsentroitu lääkeliuos (concentrated drug, DC) nopeuk-15 silla, jotka ovat verrannollisia kokonaissepelvaltimo- virtaukseen (total coronary flow, CF^). Lääkekonsentraa-tioita lisätään DC-infuusion nopeuden tasasuhteisilla lisäyksillä CFT:hen verrattuna, mikroprosessorin näppäimistön avulla. Verrannolliset virtausnopeudet DC:DF^,-20 suhteelle ovat noin 0,0002:1 annos-vastaus-käyrän alapäässä ja 0,02:1 annos-vastaus-käyrän yläpäässä. Annos-vastaus-käyrät, jotka sisältävät ainakin kaksi log-annos-ta, saadaan valmistamalla kaksi DC-liuosta, joiden konsentraatiot eroavat 1:100. Seuraamalla kahden log-25 annoksen ensimmäistä annosaluetta valitaan DC, sopiva pumppausnopeus säädetään ja annos-vastaus-käyrä jatkuu toisen kahden log-annoksen ajan. Standardi-annos-vastaus-käyrä saadaan lisäämällä puoli log-annosta alkaen alaraja-annoksesta ja päätyen annokseen, joka tuottaa lähes 30 maksimaalisen vastauksen aktiivisuudessa. Standardi —9 —6 . . vertailuyhdisteet testataan annosalueella 10 - 10 M.

li 13 77667

Mittaukset

Mitataan sydämen lyöntinopeus (heart rate, HR) ja sepel-valtimovirtaus (coronary flow, CF). Yksiköt ovat: HR, lyöntiä/minuutti (bpm) ja CF millilitra/minuutti (ml/min). 5 HR lasketaan piirturilla rekisteröidystä EKG:stä ja CF

lasketaan rekisteröimällä pumppujen 1 ja 2 analogiaulos-tulot. Ulostulot pumpusta # 1 = CFT ja ulostulo pumpusta 4 2 = CF sydämelle B (CFg), CF sydämelle A (CFÄ) lasketaan (CFT - CFb = CFÄ).

10 Käyttäen edellä esitettyä tekniikkaa, esimerkkien 1 ja 2 yhdisteen vaikutukset ovat seuraavat:

Esimerkki 1 Esimerkki 2

Annos (molaarinen) CF HR CF HR

1 x 10"8 3% -3% 2% -1% 3 x 10"8 9% -9% 7% -5% 1 x 10“7 18% -19% 16% -11% 3 x 10"7 29% -25% 24% -21% 1 x 10"6 35% -52% 29% -36% 3 x 10"6 35% -67% 30% -56% u 77667

Valmistettaessa farmaseuttisia koostumuksia tässä keksinnössä kuvatuista yhdisteistä, inertit farmaseuttisesti hyväksyttävät kantajat voivat olla joko kiinteitä tai nestemäisiä. Kiinteitä valmistemuotoja ovat jauheet, 5 tabletit, hajoavat granulaatit, kapselit, tärkkelyskap-selit ja suppositoriot. Kiinteä kantaja voi olla yksi tai useampi aine, jotka voivat toimia myös laimennusaineina, makuaineina, liuottavina aineina, voiteluaineina, sus-pendoivina aineina, sideaineina tai tablettia hajottavina 10 aineina; se voi myöskin olla kapseloiva aine. Jauheissa kantaja on hienoksi jaettu kiinteä aine, joka on seoksessa hienoksi jaetun aktiiviyhdisteen kanssa. Tabletissa aktiiviaine sekoitetaan tarvittavat, sitovat ominaisuudet omaavan kantajan kanssa sopivissa suhteissa ja puristetaan 15 halutun muotoiseksi ja kokoiseksi. Jauheet ja tabletit sisältävät mieluimmin 5-10-prosentista jopa 70-prosenttiin aktiiviainetta. Sopivia kiinteitä kantajia ovat magnesium-karbonaatti, magnesiumstearaatti, talkki, sokeri, laktoosi, pektiini, dekstriini, tärkkelys, gelatiini, 20 tragantti, metyyliselluloosa, natriumkarboksimetyyli- selluloosa, alhaalla sulava vaha, kaakaovoi ja vastaavat. Termi "valmistus" tarkoittaa myös aktiiviaineen valmistamista yhdessä kantajana toimivan kapseloivan aineen kanssa, jolloin saadaan kapseli, jossa aktiiviyhdiste : : 25 (yhdessä tai ilman muita kantajia) on kantajan ympäröi mänä, joka siten on liittyneenä siihen. Sama seikka koskee myös tärkkelyskapseleita. Tabletteja, jauheita, tärkkelyskapseleita ja kapseleita voidaan käyttää kiinteinä annosmuotoina oraalisessa annostuksessa.

Il is 77667

Valmistettaessa suppositorioita alhaalla sulava vaha, kuten rasvahappoglyseridien seos tai kaakaovoi, sulatetaan ensin ja aktiiviaine dispergoidaan siihen homogeenisesti hämmentämällä. Sen jälkeen sula, homogeeninen 5 seos kaadetaan sopivan kokoisiin muotteihin, annetaan jäähtyä, jolloin ne kiinteytyvät.

Nestemäisiä valmisteita ovat liuokset, suspensiot ja emulsiot. Esimerkkinä voidaan mainita vesi- tai vesi-propyleeniglykoliliuokset parenteraaliseen injektioon.

10 Nestemäiset valmisteet voidaan valmistaa myös vesipitoisen polyetyleeniglykoliliuoksen liuokseen. Vesipitoiset liuokset, jotka soveltuvat oraaliseen käyttöön, voidaan valmistaa liuottamalla aktiiviaine veteen ja lisäämällä haluttaessa sopivia väri-, maku-, stabilointiaineita,ja 15 paksuntavia aineita. Vesipitoisia suspensioita, jotka ovat sopivia oraaliseen käyttöön, voidaan tehdä disper-goimalla hienoksi jaettu aktiiviaine veteen viskoosisen aineen, t.s. luonnon tai synteettisten kumien, hartsien, metyyliselluloosan, natriumkarboksimetyyliselluloosan 20 ja muiden, hyvin tunnettujen suspendoivien aineiden kanssa.

Kiinteitä valmisteita ovat myös sellaiset, jotka muutetaan juuri ennen käyttöä nestemäisiksi valmisteiksi joko oraalista tai parenteraalista annostusta varten. Tällaisia 25 nestemäisiä muotoja ovat liuokset, suspensiot ja emulsiot. Nämä erityiset kiinteät valmisteet valmistetaan mieluimmin yksikköannosmuotoon ja siten saadaan käyttöön yksittäinen, nestemäinen annosyksikkö. Vaihtoehtoisesti tarvittava kiinteä aine voidaan saada siten, että sen 30 jälkeen kun on muodostettu nestemäinen muoto, useita yksittäisiä nestemäisiä annoksia voidaan saada mittaamalla tietyt tilavuudet nestemäistä valmistetta esimerkiksi ruiskulla, teelusikalla tai jollain muulla tila- 16 77667 vuusmitalla. Valmistettaessa useita nestemäisiä annoksia, on edullista pitää käyttämätön osa mainituista neste-annoksista alhaisessa lämpötilassa (t.s. jääkaapissa), jotta vältetään mahdollinen hajaantuminen. Kiinteät 5 valmisteet, jotka on tarkoitus muuttaa nestemäiseen muotoon, voivat sisältää aktiiviaineen lisäksi maku-, väri-, stabilointiaineita, puskureita, keinotekoisia ja luonnollisia makeutusaineita, hajottavia, paksuntavia, liuottavia-aineita ja vastaavia. Neste, jota käytetään 10 nestemäisen valmisteen valmistamiseen, voi olla vesi, isotoninen vesi, etanoli, glyseriini, propyleeniglykoli ja näiden seokset. Luonnollisesti käytetty neste valitaan huomioonottaen annostustapa, esimerkiksi nestemäiset valmisteet, jotka sisältävät suuret määrät 15 etanolia, eivät ole sopivia parenteraaliseen käyttöön.

Mieluimmin farmaseuttinen valmiste on yksikköannosmuodos-sa. Tällaisessa muodossa, valmiste on alajaettu yksikkö-annoksiin, jotka sisältävät sopivat määrät aktiivi-ainetta. Yksikköannosmuoto voi olla pakattu valmiste, 20 pakkauksen sisältäessä valmisteen erilliset määrät, esimerkiksi pakatut tabletit, kapselit ja jauheet pien-pulloissa tai ampulleissa. Yksikköannosmuoto voi olla myös kapseli, tärkkelyskapseli tai itse tabletti tai se voi olla sopiva määrä mitä tahansa näistä, pakatussa 25 muodossa.

Aktiiviaineen määrä valmisteen yksikköannoksessa voi vaihdella tai sitä voidaan säätää 1 mg:sta 500 mg:aan, mieluimmin 5 mg:sta 100 mg:aan, aina annostuksen ja aktiiviaineen tehokkuuden mukaan. Nämä koostumukset 30 voivat, haluttaessa, sisältää myös muita yhteen sopivia, terapeuttisia aineita.

Terapeuttisessa käytössä, kuten edellä on esitetty,

II

17 77667 70 kg painavan imettäväisen annos on 0,1 - 150 mg/kehon kg päivää kohti tai mieluimmin 1 - 50 mg/kehon kg päivää kohti. Annokset voivat kuitenkin vaihdella riippuen potilaan vaatimuksista, hoidettavana olevan tilan vaka-5 vuudesta ja käytetystä yhdisteestä.

Sopivan annoksen määräämisen tietyssä tilanteessa voi suorittaa alan ammattimies. Yleensä hoito aloitetaan pienemmillä annoksilla, jotka ovat vähemmän kuin yhdisteen optimiannos. Sen jälkeen annosta lisätään 10 vähän kerrallaan, kunnes saavutetaan optimivaikutus käytetyissä olosuhteissa. Selvyyden vuoksi koko päivittäinen annos voidaan, haluttaessa, jakaa ja annostaa annoksissa päivän kuluessa.

Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen keksintöä.

15 Esimerkki 1: N**-(2-indanyyli)adenosiini

Kaksi grammaa 6-klooripuriiniribosidia, 1,48 g 2-amino-indaani-hydrokloridia ja 1,74 g trietyyliamiinia keitetään palautusjäähdyttäen etanolissa typpiatmosfäärissä 20 20 tuntia. Jäähdytettäessä kiinteä aine kiteytyy. Reaktio- seos laimennetaan 70 ml:11a etanolia, suodatetaan ja pestään etanolilla. Näin saatu kiinteä aine suspendoi-daan noin 25-30 ml:aan metanolia, suodatetaan ja pestään metanolilla ja kuivataan, jolloin saadaan 1,95 g 25 (73 %) N^-(2-indanvyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 166-168°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C19H21N5°4: C, 59,52; H, 5,52; N, 18,26;

Saatu: C, 59,26; H, 5,61; N, 18,19.

18 77667

Esimerkki 2: N^-(1-indanyyli)adenosiini

Neljä grammaa 6-klooripuriiniribosidia, 2,32 g 1-amino-indaania ja 2,11 g trietyyliamiinia keitetään palautus-5 jäähdyttäen 100 ml:ssa absoluuttista etanolia typpi- atmosfäärissä 20 tuntia. Haihtuvat komponentit haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan 20 ml:aan 2-propanolia ja laimennetaan 200 ml:11a vettä. Kirkas vesipitoinen liuos dekantoidaan ja jäännöksenä saatu öljymäinen aine 10 pestään kylmällä vedellä. Haihduttamalla etanolin kanssa useita kertoja saadaan kiinteä aine. Kiteyttämällä CHCl^/2-propanolin (10:1) ja heksaanin seoksesta saadaan •5 g 3.0 g (56,2 %) N -(1-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 120-122°C (vaahto).

15 Analyysi: laskettu kaavalle C')gH2iN5°4i C, 59,52; H, 5,52? N, 18,26;

Saatu: C, 59,37; H, 5,48; N, 18,00.

Esimerkki 3: N^-(1-indanyyli)-2-aminoadenosiini 20 Seosta, jossa on 2,0 g 6-kloori-2-aminopuriiniribosidia, 1.1 g 1-aminoindaania ja 1,0 g trietyyliamiinia, keitetään palautusjäähdyttäen 50 ml:ssa etanolia typpiatmos-fäärissä 20 tuntia. Liuotin haihdutetaan ja jäännös käsitellään 100 ml:11a kylmää vettä. Näin saatu kiinteä 25 aine suodatetaan, kuivataan ja puhdistetaan pikakroma-tografisesti (flash chromatography) piihappogeelillä. Tuote eluoidaan 5-prosenttisella metanoli-kloroformilla. Puhtaiden fraktioiden liuotin haihdutetaan, jonka jälkeen kiteytetään kloroformi-heksaanista ja saaadaan g 30 1,9 g (72 %) N -(1-indanyyli)-2-aminoadenosiinia, jonka 19 77667 sulamispiste on 143-146°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C„· 0,3Η„Ο: 192264 2 C, 56,51; H, 5,64; N, 20,80

Saatu: C, 56,90; H, 6,06; N, 20,38.

5 Esimerkki 4: (S)(+)-1-aminoindaani ja (R)(-)-1-aminoindaani (S)(+)-1-aminoindaani ja (R)(-)-1-aminoindaani saadaan erottamalla (±)-1-aminoindaani käyttäen N-asetyyli-leusiinia.^ 10 N**- fl- (S) -indanyyli^adenosiini 20 tunnin ajan 0,92 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,45 g (S)(+)-1-aminoindaania ja 0,38 g trietyyliamiinia 25 ml:ssa absoluuttista etanolia keitetään palautus-jäähdyttäen typpiatmosfäärissä. Liuotin haihdutetaan 15 kuiviin ja jäännös käsitellään 50 ml:11a kylmää vettä.

Kirkas vesipitoinen liuos dekantoidaan orgaanisen materiaalin päältä. Se liuotetaan etanoliin ja haihdutetaan kuiviin ja jäännös puhdistetaan käyttäen pikakromato-grafiaa piihappogeelillä. Yhdiste eluoidaan 5-prosentti-20 sella MeOH-CHCl3:lla. Puhtaista fraktioista haihdutetaan liuotin, saadaan kiinteä aine, joka kiteytetään CHCl3”MeOH:n ja heksaanin seoksesta, saadaan 0,73 g (59,5 % teoreettisesta määrästä) N®(1(S)-indanyyli]adeno-siinia, jonka sulamispiste on 125-127°C.

25 Analyysi: laskettu kaavalle C.j· 0,25 CHCl^ C = 55,94; H = 5,18; N = 16,74 Saatu: C = 55,57; H = 5,30; N = 16,61.

(^ V. Ghislandi ja D. Vereesi, Bull. Chim. Farm.

115, 489-500, 1976).

20 77667 N^~ f1 — (R)-indanyyliladenosiini 20 tunnin ajan 1,83 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,95 g (R)(-)-1-aminoindaania ja 0,862 g trietyyliamiinia keitetään palautusjäähdyttäen 50 ml:ssa absoluuttista etanolia 5 typpiatmosfäärissä. Liuotin haihdutetaan kuiviin ja jäännös käsitellään 50 ml:11a kylmää vettä. Kiinteä aine suodatetaan, liuotetaan ylimäärään etanolia ja haihtuvat komponentit haihdutetaan alennetussa paineessa veden poistamiseksi. Käsittelemällä jäännös etanolilla, 10 saadaan kiinteä aine. Se suodatetaan ja kuivataan. Lisä-erä samaa ainetta saadaan emäliuoksesta, saadaan 1,46 g (60 % teoreettisesta määrästä) (1-(R)-indanyyli]adeno- siinia, jonka sulamispiste on 185-187°C.

Analyysi: laskettu kaavalle ^19^21^5^4 15 C = 59,52; H = 5,52; N = 18,26

Saatu: C = 59,00; H = 5,50; N = 18,05.

Esimerkki 5: 6 N -(5-metoksi-1-indanyyli)adenosiini

Seosta, jossa on 2,4 g 6-klooripuriiniribosidia, 1,6 g 20 5-metoksi-1-aminoindaania ja 1,27 g trietyyliamiinia, kuumennetaan palautusjäähdyttäen 80 ml:ssa etanolia 20 tuntia typpiatmosfäärissä. Haihtuvat komponentit haihdutetaan alennetussa paineessa ja jäännös käsitellään kylmällä vedellä. Saostunut kiinteä aine pestään vedellä, 25 liuotetaan etanoliin ja liuotin haihdutetaan. Jäännös kiteytetään MeOH-kloroformi-heksaani-seoksesta, suodatetaan ja kuivataan, saadaan 2,4 g (69 %) N^-(5-metoksi-1-indanyyli)adenosiinia.

Analyysi: laskettu kaavalle ^20^23^^5^5 * H2° 30 C = 57,35; H = 5,67; N = 16,72

Saatu: C = 56,99; H = 5,68; N = 16,35.

II

21 77667

Esimerkki 6: N^-f5,6,7-trimetoksl-1-indanyyliladenosiini

Seosta, jossa on 3,5 g 6-klooripuriiniribosidia, 3,5 g amiinia ja 1,85 g trietyyliamiinia, keitetään palautus-5 jäähdyttäen 90 ml:ssa absoluuttista etanolia, typpi-atmosfäärissä 24 tunnin ajan. Liuotin haihdutetaan ja jäännös käsitellään kylmällä vedellä. Vesi dekantoidaan pois, jäännös liuotetaan etanoliin. Liuos haihdutetaan kuiviin. Saatu, kiinteä aine kiteytetään uudestaan 10 kloroformi-heksaanista, saadaan 1,25 g (22 %) toivottua tuotetta, jonka sulamispiste on 107-110°C.

Massaspektri (m/e): 473 (M+), 206, 191 1H NMR (DMSO-dG): 6 3,5 (S, 3H); 3,6 (S, 3H), 3,7 (S, 3H), 6,7 (S, 1H), 15 8,2 (S, 1H), 8,3 (S, 1H).

Esimerkki 7: N^-f5,6-dimetoksi-1-indanyyli]adenosiini

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan pääasiallisesti kuten esimerkissä 3 on esitetty, korvaamalla 1-amino-20 indaani 5,6-dimetoksi-1-indanyyliamiinilla, saadaan 1,65 g (20 %) N^-(5,6-dimetoksi-1-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 113-116°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C21H25N5^6 C = 56,88; H = 5,68; N = 15,79 25 Saatu: C = 56,49; H = 5,81; N = 15,87.

- Esimerkki 8: N^-f 5,6-dimetoksi-2-indanyyli)adenosiini

Seosta, jossa on 1,9 g 6-klooripuriiniribosidia, 1,9 g 22 77667 5/6-dimetoksi-2-indanyyliamiinia ja 2,0 g trietyyli-amiinia, keitetään palautusjäähdyttäen 50 mlrssa absoluuttista etanolia typpiatmosfäärissä 24 tunnin ajan.

Liuos laimennetaan etanolilla ja sakka suodatetaan ja 5 kuivataan, saadaan 2,15 g (73 %) N^-(5,6-dimetoksi-2-indanyylijadenosiinia, jonka sulamispiste on > 240°C.

Analyysi: laskettu kaavalle Ο,,.,Η-.-Ν-Ο., “ 21 25 5 6 C = 56,88; H = 5,68; N = 15,79 Saatu: C = 56,08? H = 6,08; N = 15,50 10 Esimerkki 9: N^-f5,6-metyleenidioksi-1-indanyyliladenosiini

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan pääasiallisesti kuten esimerkissä 8 on esitetty, korvaamalla 5,6-dimetok-si-2-indanyyliamiini 5,6-metyleenidioksi-1-indanyyli-15 amiinilla, saadaan 1,16 g (40 %) N®-(5,6-metyleenidioksi-1-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 211-213°C. Analyysi: laskettu kaavalle C20H21N5°6 * 0Ί5 H2° C = 56,20; H = 4,95; N = 16,38

Saatu: C = 55,84; H = 4,99? N = 16,28 20 Esimerkki 10: N^-f3-karboksimetyyli-1-indanyyli)adenosiini

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan pääasiallisesti kuten esimerkissä 3 on esitetty, korvaamalla 1-amino-indaani 3-karboksimetyyli-1-indanyyliamiinilla, saadaan 25 0,6 g (39 %) N®(3-karboksimetyyli-1-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 82-84°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C21H23N^Og*0,25 Η2Ο·0,25 EtOH C = 56,44; H = 5,50; N = 15,30

Saatu: C = 56,70; H = 5,45? N = 15,06

II

23 77667

Esimerkki 11: 6 N - f5-kloori-1-indanyyllladenosiini

Reaktioseosta, jossa on 2,37 g 6-klooripuriiniribosidia, 1.8 g 5-kloori-1-indanyyliamiinia ja 2,09 g trietyyli- 5 amiinia, keitetään palautusjäähdyttäen 60 mlsssa etanolia typpiatmosfäärissä 24 tuntia. Haihtuvat komponentit poistetaan alennetussa paineessa ja jäännös käsitellään kylmällä vedellä. Saatu kiinteä aine suodatetaan ja kuivataan, saadaan 3,0 g (87 %) N^-(5-kloori-1-indanyy-10 li)adenosiinia, jonka sulamispiste on 148-150°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C-|9H20N5°4C^ C = 54,61; H = 4,82; N = 16,76; Cl = 8,48

Saatu: C = 54,29; H = 4,86; N = 15,90; Cl = 8,68

Esimerkki 12: 15 N6-(6-metyyli-1-indanyyliladenosiini

Liuokseen, jossa on 4,3 g 6-metyyli-1-aminoindaania ja 5,0 g trietyyliamiinia 250 ml:ssa etanolia, lisätään 4,3 g 6-klooripuriiniribosidia. Reaktioseosta keitetään palautusjäähdyttäen yön yli. Jäähdytetään, haihtuvat 20 komponentit poistetaan tyhjössä. Jäännös puhdistetaan keskipainenestekromatografisesti (Lobar-kolonni, pii-happogeeli, käyttäen 10-% metanoli-kloroformia).

Puhtaista fraktioista haihdutetaan liuottimet, saadaan 2.8 g (47 %) N^-(6-metyyli-1-indanyyli)adenosiinia.

25 Analyysi: laskettu kaavalle C9nH9«N,.0. · 0,7 H_0 C = 58,33; H = 5,97; N = 17,00 Saatu: C = 58,10; H = 5,90; N = 16,96

Esimerkki 13: 24 77667 N^-fcis-2-metyyli-1-indanyyli)adenosiini

Reaktioseosta, jossa on 1,15 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,8 g cis-2-metyyli-1-aminoindaania ja 0,8 g trietyyli-5 amiinia 150 ml:ssa etanolia, keitetään palautusjäähdyttäen yön yli. Haihtuvat komponentit poistetaan alennetussa paineessa ja jäännös puhdistetaan Prep. 500 A kromato-grammilla (1 esipakattu piihappogeeli-pylväs; eluointi-nopeus 200 ml/min; liuotinsysteemi 10 % metanoli -C^C^)· 10 Haihduttamalla liuottimet puhtaista fraktioista saadaan g 0,95 g (59 %) N -fcis-2-metyyli-1-indanyyli]adenosiinia.

Analyysi: laskettu kaavalle ^20H23N5°4 * H2° C = 60,16; H = 5,86; N = 17,54 Saatu: C = 59,99; H = 5,81; N = 17,56 15 Esimerkki 14: N^-f3-fenyyli-1-indanyyli)adenosiini

Reaktioseosta, jossa on 1,0 g 6-klooripuriiniribosidia, 1,28 g 3-fenyyli-1-aminoindaania ja 0,5 ml trietyyli-amiinia, keitetään palautusjäähdyttäen neljä päivää 50 20 ml:ssa etanolia typpiatmosfäärissä. Kiinteä aine saadaan jäähdyttämällä reaktioseos jääkaapissa. Suodatetaan, kiteytetään uudestaan etanolista, jonka jälkeen suodatetaan, saadaan 0,13 g (8 %) N6-(3-fenyyli-1-indanyyli)-adenosiinia.

25 Analyysi: laskettu kaavalle ^5^25^5 *°4*^'^ HC1»0,6 HjO C = 62,39; H = 5,55; N = 14,55; Cl = 2,27 Saatu: C = 62,75; H = 5,25; N = 14,27; Cl = 2,36

II

Esimerkki 15; 25 7 7 6 6 7 N6-fcis-1-hydroksi-2-indanyyli)adenosiini

Seosta, jossa on 1,47 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,95 g (cis)-1-hydroksi-2-indanyyliamiinia ja 4 ml trietyyli-5 amiinia 25 mltssa etanolia, keitetään palautusjäähdyttäen 24 tuntia. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa ja jäännös otetaan talteen kloroformiin. Orgaaninen uute pestään vedellä ja konsentroidaan. Saatu kiinteä aine kiteytetään isopropanolista, saadaan 0,57 g N**- fcis-1-10 hydroksi-2-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 93-95°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C.j^Ι^Ν,-Ο,. »0,5 I^O ·0,5 C^HgO C = 56,16; H = 5,98; N =15,97

Saatu: C = 56,04; H = 5,64; N = 15,64 15 Esimerkki 16: N^-ftrans-1-hydroksi-2-indanyyli)adenosiini

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan esimerkissä 15 esitetyllä tavalla korvaamalla cis-1-hydroksi-2-indanyyli-amiini trans-1-hydroksl-2-indanyyliamiinilla, yhdisteen 20 sulamispiste on 190-195°C.

Analyysi: laskettu kaavalle ^ϊ^Ν^Ο^· 1,5 Η2Ο·0,5 CgHgO C = 53,94; H = 8,18; N = 15,34

Saatu: C = 54,02; H = 5,95; N = 15,68

Esimerkki 17: 25 N**- f cis-2-hydroksi-1-indanyylil adenosiini

Seosta, jossa on 0,73 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,38 g cis-2-hydroksi-1-indanyyliamiinia ja 0,5 g trietyyli- 26 77667 amiinia etanolissa, keitetään palautusjäähdyttäen kuusi tuntia typpiatmosfäärissä. Jäähdyttämisen jälkeen liuos suodatetaan ja haihtuvat komponentit poistetaan suodok-sesta. Jäännös puhdistetaan MPLC:llä piihappogeelillä 5 käyttäen asetonia. Haihduttamalla liuotin puhtaista g fraktioista saadaan 0,15 g (R^ = 0,37 asetoni) N - fcis-2-hydroksi-1-indanyyli)adenosiinia, jonka sulamispiste on 75-77°C.

^H-NMR (DMSO-dG): 5 2,9-3,15 (m, 3H), 3,6 (m, 2H), 10 6,0 (d, 1H), 6,95-7,5 (m, 4H), 8,3 (s, 1 H), ja 8,9 (s, 1H)

Esimerkki 18; N^-ftrans-2-hydroksi-1-indanyyli)adenosiini

Reaktioseosta, jossa on 1,08 g 6-klooripuriiniribosidia, 15 0,56 g trans-2-hydroksi-1-indanyyliamiinia ja 2 ml tri- etyyliamiinia, keitetään palautusjäähdyttäen etanolissa 21 tuntia. Haihtuvat komponentit poistetaan alennetussa paineessa ja jäännös otetaan talteen kloroformiin. Orgaaninen liuos pestään vedellä, kuivataan MgSO^:llä, 20 suodatetaan ja konsentroidaan. Saatu kiinteä aine kiteytetään uudestaan kloroformi:metanolista, 4:1, saadaan 0,43 g N^-(trans-2-hydroksi-1-indanyyli)adenosiinia.

1H-NMR (DMSO-dG): δ 2,8-2,9 (dd, 2H), 3,1-3,2 (dd, 2H), 5,95 (d, 1H), 7,0-7,2 (m, 4H), 25 8,4 (s, 1H)

Esimerkki 19: (+)-5-metoksi-1-aminoindaani«HCl ja (-)-5-metoksi-1-aminoindaani «HC1

Otsikossa mainitut yhdisteet saadaan hajottamalla (±)-5- 27 77667 metoksi-1-aminoindaani käyttäen (R)-N-asetyyli-3,4-dimetoksi-fenyylialaniinia seuraavalla tavalla: 12,2 g (±)-5-metoksi-1-aminoindaani*HCl:ä liuotetaan 10-% K0H:hon ja uutetaan eetterillä (2 x 150 ml). Orgaaninen 5 uute pestään vedellä, kuivataan MgSO^:llä, suodatetaan ja liuotin haihdutetaan, saadaan (+)-5-metoksi-1-inda-nyyliamiini.

Amiini liuotetaan 25 ml:aan absoluuttista metanolia ja lisätään kuumaan liuokseen, jossa on (R)-N-asetyyli-3,4-10 dimetoksi-fenyylialaniinia 150 ml:ssa metanolia. Jäähdyttämällä saatu kiteinen suola (6,0 g) suodatetaan, pestään metanolilla ja kuivataan, sulamispiste on 192— 195°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C23H30N2°6 15 C = 64,17; H = 7,02; N = 6,50

Saatu: C = 64,21; H = 7,05; N = 6,68

Emäliuos konsentroidaan puoleen tilavuuteen ja pidetään jääkaapissa 24 tuntia. Kiteinen suola laimennetaan kylmällä metanolilla, suodatetaan ja kuivataan, saadaan 20 yhdiste, jonka sulamispiste on 186-189°C.

Konsentroimalla edelleen emäliuosta, suodattamalla ja haihduttamalla liuotin suodoksesta, saadaan suola, jonka sulamispiste on 167-172°C.

Tämä suola hydrolysoidaan käyttäen 10-% NaOH:ta. Uutetaan 25 kloroformilla, pestään vedellä, kuivataan MgSO^:llä, suodatetaan ja haihdutetaan, jonka jälkeen saadaan amiini (isomeeri - A). Osa tästä amiinista muutetaan hydro-kloridisuolakseen, jonka sulamispiste on 220-222°C. Analyysi: laskettu kaavalle C^qH^NO’HCI 30 C = 60,48; H = 6,59; N = 7,04; Cl = 17,84

Saatu: C =60,62; H = 7,22; N = 6,82; Cl = 17,68 (aQ) = +3,02 (c = 1,08 % MeOH) 28 7 7 6 6 7

Suola/ joka saadaan ensimmäisestä kiteytyksestä/ hydrolysoidaan samalla tavalla, amiinin (isomeeri - B) saamiseksi. Osa tästä amiinista muutetaan hydrokloridi-suolakseen, jonka sulamispiste on 204-207°C.

5 Analyysi: laskettu kaavalle C^H^NO'HCl C = 60,46; H = 6,59; N = 7,04; Cl = 17,84 Saatu: C = 60,70; H = 7,58; N = 6,92; Cl = 17,80 (a ) = -6,5° (c = 1,1 % MeOH) N^- (5-metoksi-1-lndanyyll)adenosilni (diastereoisomeeri A) 10 Reaktioseosta, jossa on 0,9 g 6-klooripuriiniribosidia, 0,67 g 5-metoksi-1-indanyyliamiinia (isomeeri - A) ja 0,48 g trietyyliamiinia 25 ml:ssa etanolia, keitetään palautusjäähdyttäen 20 tuntia typpiatmosfäärissä. Haihtuvat komponentit haihdutetaan ja jäännös käsitellään 15 kylmällä vedellä. Saostunut kiinteä aine suodatetaan ja kuivataan. Se käsitellään metanolilla ja saatu kiinteä aine suodatetaan, pestään metanolilla ja kuivataan, saadaan 0,55 g (42,6 %) diastereoisomeeria A, jonka sulamispiste on 170-173°C.

20 Analyysi: laskettu kaavalle C20H23N5°5 *0,5 CH^OH C = 57,33; H = 5,86; N = 16,30

Saatu: C = 56,98; H = 5,48; N = 16,77 (a ) = -6,73 (c = 1,01 % DMF) N^-(5-metoksi-l-indanyyli)adenosiini (diastereoisomeeri B) 25 Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan pääasiallisesti samalla tavalla kuin on esitetty diastereoisomeerille A, korvaamalla amiini (isomeeri A) amiinilla (isomeeri B), yhdisteen sulamispiste on 152-155°C.

Analyysi: laskettu kaavalle ^20II23N5°5 30 C = 58,10; H = 5,60; N = 16,93

Saatu: C = 57,62; H = 5,64; N = 16,77 (a ) = -140,2° (c = 1,18 % DMF)

II

29 7 7 6 6 7 5-metoksi-1-indanyyliamiini valmistetaan seuraavalla tavalla: 5-metoksi-l-lndaani-oksiimi

Reaktioseosta, jossa on 20,0 g metoksi-1-indanonia, 5 25,65 g hydroksyyliamiinihydrokloridia, 30,25 g natrium- asetaattia 200 ml:ssa etanolia ja 225 mlrssa vettä, keitetään palautusjäähdyttäen 1,5 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen haihtuvat komponentit haihdutetaan, saostunut kiinteä aine suodatetaan, pestään vedellä ja kuivataan, 10 saadaan 15,9 g (72,7 %) 5-metoksi-1-indaani-oksiimia.

Analyysi: laskettu kaavalle C^H^NO^ Mol.p. = 177,19 C = 67,78; H = 6,25; N = 7,90 Saatu: C = 67,94? H = 6,05; N = 7,78 5-metoksi-1-aminoindaani 15 10 g 5-metoksi-1-indaani-oksiimia pelkistetään katalyytti- sesti 100 ml:ssa metanolia 1 g:11a 10-% Rh/C:tä huoneen lämpötilassa. Katalysaattori suodatetaan, pestään metanolilla ja haihtuvat komponentit haihdutetaan suo-doksesta. Jäännös käsitellään 6N HCl:llä ja uutetaan 20 kloroformilla. Vesipitoinen kerros tehdään emäksiseksi lisäämällä kiinteää KOH:ta. Vesipitoinen kerros uutetaan kloroformilla. Orgaaninen uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan MgSO^:llä, suodatetaan ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, saadaan 25 1,75 g 5-metoksi-1-aminoindaania.

Massaspektri (M/E): 162, 147 NMR (CDC13) : <$ 2,4-3,0 (m, 4H) , 3,8 (s, 3H) , 4,3 (t, 1H).

5,6,7-trimetoksi-1-aminoindaani valmistetaan seuraavalla 30 tavalla: 30 77667 5.6.7- trimetoksi-1-indanoni

Seosta, jossa on 15,0 g 3-(3,4,5-trimetoksifenyyli)-propionihappoa ja 150 g PPA:ta, hämmennetään 65°C:ssa tunti. Paksu liuos kaadetaan 400 ml:aan jäävettä.

5 Saostuva kiinteä aine suodatetaan, pestään kylmällä vedellä, jonka jälkeen 10-% natriumbikarbonaatilla ja vedellä. Kiinteä aine pestään etanolilla ja kuivataan, saadaan 9,3 g toivottua ketonia, jonka sulamispiste on 104-106°C.

10 Analyysi: laskettu kaavalle C^2H14^4 C = 64,85; H = 6,35 Saatu: C = 64,72; H = 6,32 5.6.7- trimetoksi-1-indaanjoksiimi

Seosta, jossa on 8,8 g 5,6,7-trimetoksi-1-indanonia, 15 11,03 g hydroksyyliamiinihydrokloridia ja 8,9 g kalium- hydroksidia 200 ml:ssa 70-% etanolia, hämmennetään keittäen seosta palautusjäähdyttäen neljä tuntia. Reaktioseokseen lisätään kylmää vettä ja saostuva kiinteä aine suodatetaan ja kuivataan, saadaan 8,0 g (84 %) 20 toivottua oksiimia, jonka sulamispiste on 233-235°C.

5.6.7- trimetoksi-1-aminoindaani 4 g oksiimia pelkistetään katalyyttisesti 10-%:11a Rh/C:tä metanoli:THF-seoksessa (1:1, 100 ml) saadaan 4,0 g toivottua amiinia. Amiinia käytetään sellaisenaan 25 valmistettaessa vastaavaa nukleosidia.

5,6-dimetoksi-1-aminoindaani valmistetaan seuraavalla tavalla:

II

31 77667 5.6- dimetoksi-1-indanoni

Seosta, jossa on 20 g 3(3,4-dimetoksi-fenyyli)propioni-happoa ja 200 g PPA:ta hämmennetään 65°C:ssa 30 minuuttia. Paksu liuos kaadetaan jääveteen. Ketoni uutetaan etyyli-5 asetaattiin (3 x 20 ml). Orgaaninen kerros pestään kylmällä vedellä, sen jälkeen 10-% natriumbikarbonaatilla ja vedellä. Liuos kuivataan MgS04:llä. Liuotin poistetaan tyhjössä, saadaan 15,0 g toivottua ketonia, jonka sulamispiste on 110-111°C.

10 Analyysi: laskettu kaavalle C = 68,74? H = 6,29 Saatu: C = 68,86; H = 6,59 5.6- dimetoksi-1-indaanioksiimi

Seos, jossa on 13,72 g hydroksyyliamiinihydrokloridia ja 15 16,2 g natriumasetaattia 120 ml:ssa vettä, lisätään liuokseen, jossa on 13,18 g 5,6-dimetoksi-1-indanonia 108 ml:ssa absoluuttista etanolia. Seosta hämmennetään palautusjäähdyttäen tunti. Reaktioseos jäähdytetään huoneen lämpötilaan ja saostuva kiinteä aine suodatetaan 20 ja kuivataan, saadaan 12,58 g (88 %) toivottua oksiimia, jonka sulamispiste on 196-199°C.

Analyysi: laskettu kaavalle C^H^NO^ C = 63,76; H = 6,32; N = 6,76 Saatu: C = 63,79; H = 6,21; N = 6,95 25 5,6-dimetoksi-1-indanyyliamiini 6 g oksiimia pelkistetään katalyyttisesti 1,0 g :11a Ra/Ni:tä 90 ml:ssa metanolia ja 10 ml:ssa NH^OH:ta, saadaan otsikossa mainittu yhdiste.

32 77667 5,6-dimetoksi-2-aminoindaani

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan menetelmällä, jonka ovat esittäneet Joseph G. Cannon et ai. J. Med.

Chem., 27, 189 (1984).

5 3-karboksimetyyli-1-aminolndaani

Otsikossa mainittu yhdiste valmistetaan menetelmällä, jonka ovat esittäneet Michael Mokotoff et ai. julkaisussa J. Heterocycle Chem., 794, 733 (1970) ja siinä esitetyissä viitteissä.

10 Trans-2-hydroksi-1-aminoindaani valmistetaan seuraavalla tavalla:

Trans-1-hydroksi-2-broini-indaani (J.A.C.S., 62^, 3476 (1940)) lisätään vesipitoiseen KOH-liuokseen (1,0 ekvivalenttia) ja hämmennetään 4 tuntia huoneen lämpö-15 tilassa. Vesipitoinen liuos uutetaan kloroformilla, kuivataan MgSO^llä, suodatetaan ja haihdutetaan, jolloin saadaan välituotteena epoksidi. Sitä puolestaan käsitellään konsentroidulla ammoniumhydroksidilla etanolissa 0°C:ssa neljä päivää. Muodostunut trans-2-hydroksi-20 1-aminoindaani eristetään hydrokloridina, jonka sulamis piste on 260-265°C (haj.).

2-substituoidun 1-aminoindaanin synteesit: katso F. S. Kipping et ai. J. Chem. Soc. trans 2, 83, 913-918 (1903). Lisäksi, J. Org. Chem., 32, 549 (1967) .

25 Loput N^-sivuketjuamiinit valmistetaan edellä esitettyjen menetelmien mukaisesti ja/tai kirjallisuudesta tunnettujen menetelmien mukaisesti, lähtemällä vastaavista indanoni-johdannaisista.

Il

Claims

33 7 7 6 6 7

1. Menetelmä farmakologisesti käyttökelpoisten N6-(l-ja 2-bentsosykloalkyyli)adenosiinien valmistamiseksi, joilla on kaava (I) Ä> HO-1>On H HO OH jossa Ritilä on kaava •-£*3* “* -ζΧ^τ* *’ N-R, (Ia) / I (Ib) | j s * y jossa X on vety, alempialkyyli, karboksialempialkyyli tai fenyyli; Y on vety, alempialkyyli tai hydroksi; Z ja Z' ovat toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempialkyyli, hydroksi tai alempialkoksi; R3 on vety tai alempialkyyli; ja R2 on vety, halogeeni tai NH21 sillä edellytyksellä, että kun Ritilä on kaava (Ib) X R2 on vety tai halogeeni; sen diastereomeerien tai niiden seosten, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditio-suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että saatetaan 6-halogeenipuriiniribosidi, jonka kaava on 34 7 7 6 6 7 Ä 2 (II) H HO OH jossa Hai on kloori tai bromi, reagoimaan indanyyliamiinin kanssa, jonka kaava on tSl τ'% NHRj (IHa) | (Illb) inertin tai aproottisen liuottimen läsnäollessa, 25-150 eC: ssa, 1-48 tunnin ajan, ja haluttaessa, muutetaan vapaa emäs sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi, tai eristetään farmaseuttisesti hyväksyttävänä happoadditio-suolana, ja haluttaessa, muutetaan mainittu suola vapaaksi emäkseksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jonka kaava on ,Λ> HO-y/Ov (I) Vt Ho OH jossa Ritilä on kaava II 35 77667 ra Z-l·- Il CH-Y (Ia) ** I 3 jossa X on vety, alempialkyyli, karboksialempialkyyli tai fenyyli; Y on vety, alempialkyyli tai hydroksi; Z ja Z' ovat toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempialkyyli, hydroksi tai alempialkoksi; R3 on vety tai alempialkyyli; ja R2 on vety, halogeeni tai NH2; sen diastereomeereja tai niiden seoksia tai jokin sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoad-ditiosuola.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N®-(1-indanyyli)adeno-siini.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N^-[1-(S)-indanyyli]-adenosiini.

5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N^-[l-(R)-indanyyli]-adenosiini.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jonka kaava on Λ (I) Ό h6 oh jossa Ritilä on kaava 36 7 7 6 6 7 t *-&jO~T*3 (Ib) z1 * jossa X on vety, alempialkyyli, karboksialempialkyyli tai fenyyli; Y on vety, alempialkyyli tai hydroksi; Z ja Z' ovat toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempialkyyli, hydroksi tai alempialkoksi; R3 on vety tai alempialkyyli; ja R2 on vety tai halogeeni; sen diastereomeereja tai niiden seoksia tai jokin sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoaddi-tiosuola.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N^-(2-indanyyli)adeno-siini.