FI74006C - Foerfarande foer framstaellning av antivirala substituerade 9(1-0- eller 3-0-monosubstituerad- eller 1,3-di-0-substituerad propoximetyl)guaniiner. - Google Patents

Description

1 74006

Menetelmä antiviraalisten substituoitujen 9(1-0- tai 3-0 monosubstituoitu- tai 1,3-di-0-substituoitupropoksimetyyli)-guaniinien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av antivirala substituerade 9(1-0- eller 3-0-monosubstituerad-eller 1,3-di-0-substituerad propoximetyl)guaniiner Tämän keksinnön kohteena on menetelmä antiviraalisten substituoitu jen 9(1-0- tai 3-0 monosubstituoitu- tai 1,3-di-0-substi-tuoitupropoksimetyyli)-guaniinien valmistamiseksi, joiden kaava I on •'Vv il)

HJ^ N

ch2ochch2or1 CH20r2 jossa R1 on vety, -C(Y)OR7 tai -C(0)NHR7, jossa R7 on 1-12 hiiliatominen alkyyli, 2-12 hiiliatominen alkenyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli, fenyyli tai bentsyyli; r2 on -C(Y)OR7 tai -C(0)NHR7, jossa R7 tarkoittaa samaa kuin edellä; Y on happi tai rikki.

Virusinfektiot ovat levinneet laajalle ja ne aiheuttava hyvin erilaisia oireita. Kehon puolustusmekanismi voittaa helposti eräät virusinfektiot, mutta kun tämä puolustusmekanismi on heikentynyt, nämä infektiot voivat johtaa pysyvään vaurioon, esim. sokeuteen ja jopa kuolemaan. Eräs tällainen virusryhmä, joka voi aiheuttaa vakavia infektioita, on herpesvirusten ryhmä.

2 74006 Lääkkeet, joilla tällä hetkellä hoidetaan virusinfektioita, ovat monissa tapauksissa tehottomia tai vaikkakin ne olisivat tehokkaita, niitä tarvitaan suuria ja/tai jatkuvia annostuksia, jotka aiheuttavat vakavia sivuvaikutuksia ja/tai toksisuutta. Sen vuoksi tarvitaan tehokasta virusten vastaista ainetta, joka on tehokas aikaisemmilla annostuksilla kuin tällä hetkellä saatavissa olevat lääkkeet, mikä vähentäisi mahdollisten sivuvaikutusten ja toksisuuden mahdollisuutta.

US-patentissa nro 4 199 574 on tuote esiin seuraavan yleiskaavan mukaiset yhdisteet R1 * c (a) CHXCHCH-IΓ jossa X on rikki tai happi, R1 on vety, halogeeni, hydroksi, alkoksi, atsidi, tio, alkyylitio, amino, alkyyliamino tai dialkyyliamino; on vety, halogeeni, alkyylitio, asyyliamino, amino tai atsidi; R^ on vety, suoraketjuinen tai haaraketjuinen tai syklinen alkyyli, hydroksialkyyli, bentsyylioksialkyyli tai fenyyli; R4 on vety, hydroksi tai alkyyli; R5 on vety, hydroksi, amino, alkyyli, hydroksialkyyli, bentsyylioksi, bentsoyylioksi, bentsoyylioksimetyyli, sulfamoyylioksi, fosfaatti, karboksipropiamyylioksi, suoraketjuinen tai syklinen asyylioksi, jossa on 1-8 hiiliatomia, esim. kaavan NHCO-Z mukainen asetoksi tai substituoitu karbamoyyliryhmä, jossa 3 74006 kaavassa Z on alkyyli, aryyli tai aralkyyli, valinnaisesti substituoituna yhdellä tai useammalla sulfamoyylillä, aminolla, karbamoyylillä tai halogeenilla; R^ on vety tai alkyyli, edellyttäen että kun X on happi ja R2, R2, R4 ja R6 tarkoittavat vetyä, Rl ei ole amino tai metyyliamino, kun R^ on vety tai hydroksi, ja niiden suolat.

Edellisen kaavan mukaisten yhdisteiden ryhmällä ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä happoadditio-suoloilla ilmoitetaan olevan antiviraalinen aktiivisuus.

Kts. myös Tetrahedron Letters, 21, 327 - 30 (1980) ja US-patentti n:o 4 294 831.

Nyttemmin on havaittu, että substituoidut 9-(1-0- tai 3-0-monosubstituoitu tai 1,3-di-0-substituoitu-l,3-dihydroksi-2-propokeimetyyli)puriinit ovat erityisen aktiivisia virusten vastaisia aineita.

Käsillä olevan keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että (a) seuraavan kaavan mukainen yhdiste

CH-OCHCH OH

έΗ20Η saatetaan reagoimaan kaavan (R70C(0))20, jossa 74006 4 R7 on edellä määritelty, mukaisen dikarbonaatin kanssa; tai

(b) kaavan XV

O

HN^vV'\ LI) (xv>

CH,OCHCH,OW

CH2OWa mukainen yhdiste, jonka kaavassa W on vety tai 1-karbonyyli-imidatsoli ja Wa on 1-karbonyyli-imidatsoli, saatetaan reagoimaan R7OH:n tai R7NH2*n, jossa R7 on edellä määritelty, kanssa; tai (c) yhdiste, jonka kaava on (XVI) Λ*Χ> <XV1)

YHN^ N

CH20CHCH20Z

’ 2

CH2OR

jossa kaavassa Y on trityylisuojaryhmä ja Z on trityylisuoja-ryhmä tai R*, saatetaan reagoimaan jääetikan kanssa, ja R2 on edellä määritelty ja näin saatu kaavan I mukainen yhdiste mahdollisesti muunnetaan happoadditiosuolaksi.

Kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R1 on vety, sisältävät asymetrisen hiiliatomin. Nämä yhdisteet voidaan siten valmistaa 5 74006 joko optisesti aktiivisessa muodossa tai raseemisena seoksena. Ellei toisin ole mainittu ovat kaikki tässä yhteydessä kuvatut kaavan I mukaiset yhdisteet raseemisessa muodossa. Käsillä olevan keksinnön alue ei kuitenkaan rajoitu raseemiseen muotoon vaan käsittää myös kaavan (I) mukaisten yhdisteiden yksittäiset optiset isomeerit.

Kaavan I määritelmä käsittää tautomeerisen hydroksimuodon, mutta ketomuotoa käytetään yksinkertaisuuden vuoksi merkitsemään kumpaakin tautomeerista muotoa.

Kaavan I mukaisella kohdeyhdisteellä ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on tehokas antiviraalinen aktiivisuus annettaessa lämminverisille ja kylmäverisille eläimille, erityisesti nisäkkäille, linnuille ja kaloille, mutta erityisesti ihmisille. Tämän keksinnön mukaisella yhdisteellä on esim. erinomainen aktiivisuus Herpes Simplex-viruksia I ja II ja lähisukuisia viruksia kuten sytomegalovirusta, Epstein-Barr-virusta ja varicella Zoster virusta vastaan.

Sekä eläinlääketieteessä että ihmislääketieteessä virustenvas-taisesti käytettävät farmaseuttiset seokset, jotka sisältävät kohdeyhdistettä, valmistetaan käyttämällä alalla yleisesti tunnettuja menetelmiä ja apuaineita. Tällaisten menetelmien ja ainesosien yleisesti tunnustettu oppikirja on E.W. Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences (Mark Pubi. Co., 15 painos, 1975).

Keksinnön mukainen yhdiste voidaan antaa parenteraalisesti (esim. injisoimalla intravenöösisti, subkutaanisti, intraperi-toneaalisesti tai intramuskulaarisesti), oraalisesti, tooppi-sesti, rektaanisesti tai intranasaalisesti.

Yhdisteitä annetaan oraalisesti tai parenteraalisesti vapaana 6 74006 emäksenä laskettuna annostasoilla noin 0,1 - 300 mg/kg, parhaiten 1,0 - 30 mg/nisäkkään painokilo. Ihmisillä niitä käytetään yksikköannostusmuodossa,. joka annetaan 1-5 kertaa päivässä, määrän ollessa 1-500 mg/yksikköannos. Oraalisessa antamistavassa hienojakoiset jauheet tai rakeet voivat sisältää laimennusaineita, disperkointiaineita ja/tai pinta-aktiivisia aineita ja ne voivat olla nesteannoksessa, vedessä tai siirapissa; kapseleissa tai pusseissa kuivassa tilassa tai vedettömänä liuoksena tai suspensiona, jolloin mukana voi olla suspendointlaineita; tableteissa, jolloin mukana voi olla sideaineita ja voiteluaineita; suspensiossa vedessä tai siirapissa; tai aerosolissa. Haluttaessa tai tarvittaessa mukana voi olla makuaineita, säilytysaineita, sus-pendointiaineita, sakeutusaineita tai emulgointiaineita. Parhaina pidetään tabletteja ja rakeita, jotka voivat olla päällystettyjä. Kaavan (I) mukaisen yhdisteen määrä formulaatiossa voi vaihdella välillä 0,1 paino-% (p—%) 99 paino-% tai enemmän laskettuna koko formulaatiosta, ja apuaineen määrä on noin 1-99,9 paino-%. Yhdistettä on parhaiten mukana 10-95 paino-%.

Parenteraalisessa antamistavassa tai annettaessa tippoina, kuten silmäinfektioita hoidettaessa, yhdisteet voivat olla vesipitoisessa liuoksessa konsentraatiossa noin 0,1-10 %, mieluummin noin 0,1-7 %. Liuos voi sisältää antioksidantteja, puskureita ja muita sopivia lisäaineita.

Silmän tai muiden ulkoisten kudosten, esim. suun ja ihon, infektioita varten annetaan seokset vaihtoehtoisesti ja parhaiten paikallisesti potilaan kehon infektoituneeseen osaan voiteena, kermana, aerosolina tai jauheena, parhaiten voiteena tai kermana. Yhdisteet voivat olla voiteessa, esim. vesiliukoisen voidepohjan kanssa, tai kermassa esim. öljy-vedessä tyyppisen kermapohjan kanssa, konsentraatiossa noin 0,01-10 %, parhaiten 0,1-7 %, kaikkein parhaiten noin 3,0 % (paino/tilavuus). Virusinfektioita voidaan lisäksi hoitaa käyttämällä lääkkeen hitaasti vapauttavaa järjestelmää kuten on kuvattu US patentissa 4 217 898.

Aerosolina annettaessa aktiivinen ainesosa annetaan parhaiten hienojakoisessa muodossa yhdessä pinta-aktiivisen aineen ja pon- 74006 neaineen kanssa. Aktiivisia ainesosia on tyypillisesti 0,01-20 paino-%, parhaiten 0,04-1,0 %.

Pinta-aktiivisten aineiden täytyy luonnollisesti olla toksittomia ja parhaiten ponneaineeseen liukenevia. Tyypillisiä tällaisia aineita ovat 6-22 hiiliatomia sisältävien rasvahappojen kuten kapronihapon, oktaanihapon, lauriinihapon, palmitiinihapon, stea-riinihapon, linolihapon, linoleenihapon, oleosteariinihapon ja öljyhapon esterit tai osittaisesterit alifaattisen moniarvoisen alkoholin tai sen syklisen anhydridin kanssa, joita ovat esim. etyleeniglykoli, glyseroli, erytritoli, arabitoli, mannitoli, sorbitoli, sorbitolista peräisin olevat heksitolianhydridit (sor-bitaaniesterit, joita myydään kauppanimellä "Spans"), ja näiden estereiden polypksietyleeni- ja polyoksipropyleenijohdokset. Voidaan myös käyttää sekaestereitä kuten sekaglyseridejä tai luon-nonglyseridejä. Parhaana pidettyjä pinta-aktiivisia aineita ovat oleaatit tai sorbitaani, esim. ne joita myydään kauppanimillä "Arlacel C" (Sorbitaaniseskvioleaatti), "Span 80" (sorbitaani mono-oleaatti) ja "Span 85" (sorbitaani trioleaatti). Pinta-aktiivinen aine voi muodostaa seoksesta 0,1-20 paino-%, parhaiten 0,25-5 %.

Loput seoksesta on tavallisesti ponneainetta. Nesteytetyt ponneaineet ovat tyypillisesti kaasuja ympäristön olosuhteissa ja tiivistyneitä paineen alaisina. Sopivia nesteytettyjä ponneaineita ovat alemmat alkaanit, jotka sisältävät enintään 5 hiiliatomia, kuten butaani ja propaani; ja parhaiten fluoratut tai fluorikloo-ratut alkaanit, kuten kauppanimellä "Freon" myydyt ponneaineet. Myös edellä mainittujen aineiden seoksia voidaan käyttää.

Aerosolia valmistettaessa täytetään sopivalla venttiilillä varustettu säiliö kyseeseen tulevalla ponneaineella, joka sisältää hienojakoisen aktiivisen ainesosan ja pinta-aktiivisen aineen. Ainesosat pidetään siten, korotetussa paineessa, kunnes ne vapautetaan venttiiliä käyttämällä.

Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet tai niitä sisältävät seokset ovat myös hyödyllisiä hoidettaessa ihmisten lisäksi muita nisäk- 74006 8 käitä, lintuja, esim. kananpoikia ja kalkkunoita ja lämminverisiä eläimiä, esim. kaloja. Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä ja niitä sisältävillä seoksilla on esim. sama virustenvastainen aktiivisuus seuraavia viruksia vastaan, joita ei esiinny ihmisillä (viruksista on käytetty englanninkielistä nimitystä):

Sciruid herpesvirus 1 Cavlid herpesvirus 1 Lagomorph herpesvirus 1 Phasianid herpesvirus 1

Phasianid herpesvirus 2 (Marek'in tauti)

Turkey herpesvirus 1 Anatid herpesvirus 1 Catfish herpesvirus 1 Equid herpesvirus 3 Bovid herpesvirus 1 Bovid herpesvirus 2 Bovid.herpesvirus 3 Bovid herpesvirus 4 Pig herpesvirus 1 Pig herpesvirus 2 Murid herpesvirus 1 Cebid herpesvirus 1 Cebid herpesvirus 2 Tupaiid herpesvirus 1 Canine herpesvirus 1 Feline herpesvirus 1 Equid herpesvirus 1 Equid herpesvirus 2

Lintujen virustaudit kuten Marek'in tauti ja vastaavat estetään ja/tai hoidetaan tämän keksinnön mukaisilla yhdistelmillä eläinlääketieteessä yleisesti tunnetuilla menetelmillä kuten injisoi-malla linnut yhdistettä sisältävällä seoksella tai lisäämällä tämän keksinnön mukaista yhdistettä rehuun tai juomaveteen.

Suljetussa alueessa kuten lammikossa, akvaariossa tai- säilytys-astiassa olevat kalat voidaan myös käsitellä virusinfektioita vastaan kuten herpesmäisiä viruksia, esim. CCV- virus (channel catfish), herpes- virusta (salomones), Nerka- virusta ja vas- 9 74006 taa lisäämällä yhdistettä suoraan lammikon, akvaarion tai säilytystenkin veteen tai lisäämällä yhdisteitä rehuun.

Tässä yhteydessä esitettyjen yhdisteiden ja seosten täsmällinen annostusmäärä riippuu kunkin yksittäisen hoidettavan kohteen tarpeista, hoidon tyypistä ja luonnollisesti hoitavan henkilön arvioinnista .

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kaavan (X) mukaisista yhdisteistä (infra) ja kaavan (XIV) mukaisista yhdisteistä, joissa A on vety (infra). Nämä yhdisteet valmistetaan reaktiokaa-violla. Kaavan (V) mukainen välituote, jota käytetään reaktiokaa-viossa Ib, valmistetaan reaktiokaaviolla Ia.

Reaktiokaatio Ia O _ CH_^CHCH0Cl -> CH OCH2KC) 2 2 | z * N—1 v.

di) ch2oh > iH2ocH2-(c;) (III) ch2och2-^g) ch2och2-/o> CH_OCH_Cl -> CH2OCH20irCH3 ch_och_—(O ) ! 9 , (IV) ^H2OCH2“\^y (V) 10 74006

Reaktiokaavio Ib

0 O

ί II V/ —> ? i il ηνΛ^'Ί;' ch.cn^^n^^'' 2 H 3 H b-CH, (VI) (VII) l6 3 ! + (v) o *

o : li S

CH3fcNX .—.

H CH_OCHCH_0-CH«—(O ) (VIII) CH2OCH2-/rn i o 9'\ Il 7

CH

J H CH OCHCH.OH

(ix) ^ I ^

K ’ CH2OH

V

9 h^V\ H2N "N"' |

CH-OCHCHJOH

(!t) iH2OH

........................... .......... ψ...................~....................... ’ 74006

Reaktiokaaviossa Ia valmistetaan kaavan III mukainen yhdiste lisäämällä tipottain epikloorihydridiä II valinnaisesti substi-tuoidun bentsyylialkoholin alkalimetallisuolan, parhaiten natriumsuolan, liuokseen liuottimessa, kuten dimetyyliform-amidissa, dimetyyliasetamidissa, heksametyylifosforiamidissa, dimetyylisulfoksissa, sulfalaatissa, tetrahydrofuraanissa ja dioksaanissa, lämpötilassa noin 0-100°C, parhaiten noin 15 - 40°C:ssa. Reaktioseosta sekoitetaan noin 10 - 24 tuntia, parhaiten noin 12 - 18 tuntia lämpötilassa noin 0 - 100°C, parhaiten noin 20 - 50°C.

Kaavan III mukainen yhdiste kloorimetyloidaan kaavan IV mukaiseksi yhdisteeksi kuplittamalla kuivaa kloorivetykaasua yhdisteen ja paraformaldehydin liuokseen halogenoidussa hiili-vetyliuottimessa kuten dikloorietaanissa, kloroformissa, dikloorimetaanissa tai 1,1,2-trikloorietaanissa, kun liuos on jäähdytetty lämpötilaan noin 0 - 25°C, parhaiten noin 0°C:ssa. Kloorivetykaasua lisätään 30 minuutin - 30 tunnin aikana, parhaiten 1-2 tunnin aikana, kunnes paraformaldehydi liukenee. Liuos pidetään lämpötilassa noin 0-10°C noin 12 - 48 tuntia, parhaiten noin 10 - 5°Csssa noin 16 - 24 tuntia.

Kaavan V mukainen yhdiste valmistetaan saattamalla alkalimetal-liasetaatti kuten natriumasetaatti reagoimaan kaavan IV mukai-: : : sen yhdisteen, joka on liuotettu liuottimen kuten dimetyyli- formamidi, tetrahydrofuraani, dimetyyliasetamidi, heksametyyli-fosforiamidi, dimetyylisulfoksidi, sulfalaani ja dioksaani, kanssa lämpötilassa noin 0 - 45°C, parhaiten noin 0 - 25°C. Liuosta sekoitetaan noin 5- noin 24 tuntia, parhaiten noin 10 - 18 tuntia lämpötilassa noin 10 - 30°C, parhatein noin 15 - 25°C. Reaktiokaaviossa Ib valmistetaan kaavan VII mukainen yhdiste kuumentamalla quaniinia VI sellaisenaan olevan etikka- » ♦ · happoanhydridin kanssa refluksoiden noin 10 - 24 tuntia, parhaiten noin 12-18 tuntia.

12 74006

Kaavan VII mukainen N2,9-diasetyyliquaniini saatetaan reagoimaan kaavan V mukaisen yhdisteen kanssa kaavan VIII mukaiseksi yhdisteeksi sellaisenaan tai liuottimessa kuten dioksaanissa, sulfolaanissa ja vastaavassa, kun mukana on katalyyttinen määrä happoa kun bis(p-nitrofenyyli)fosfaattia, tolueenisulfonihap-poa, tolueenisulfonihappoa, metyylifosfonihappoa tai dikloori-etikkahappoa, parhaiten bis(p-nitrofenyyli)fosfaattia, lämpötilassa noin 75 - 200°C, parhaiten noin 110 - 180°C. Reaktio suoritetaan yleensä käyttämällä 0,8 - 1,2 moolia kaavan V mukaista yhdistettä yhtä moolia kohti kaavan VII mukaista yhdistettä.

Bentsyylisuojaryhmät poistetaan kaavan VIII mukaisesta yhdisteestä hydraamalla katalyyttisesti niin, että muodostuu kaavan IX mukainen yhdiste. Katalyytti kuten palladium/hiili lietteessä listään vesipitoisen metanolin tapaiseen liuottimeen liuotetun kaavan VIII mukaisen yhdisteen liuokseen. Vetyä lisätään liuokseen paineesa 1,05 - 14 kp/cm2, parhaiten paineessa 2,1 - 5,6 kp/cm2.

Kaavan X mukainen yhdiste valmistetaan deasetyloimalla kaavan IX mukainen yhdiste alkoholiin kuten metanoliin liuotetulla emäksellä kuten ammoniakilla. Kaavan IX mukaisen yhdisteen liuosta ja emästä sekoitetaan noin 5-36 tuntia, parhaiten noin 10 - 24 tuntia lämpötilassa noin 10 - 30°C, parhaiten lämpötilassa noin 15 - 25°C.

Kaavan X mukainen yhdiste voidaan esteröidä diasetaatiksi XI saattamalla kaavan X mukainen yhdiste reagoimaan ylimäärän kanssa etikkahappoanhydridiä, joko sellaisenaan tai liuottimessa kuten dimetyyliformamidissa, dimetyyliasetamidissa ja vastaavassa, huoneen lämpötilassa 2-3 päivän aikana.

Kaavan I mukaiset yhdisteet, jossa R1 ja/tai R2 on -C(Y)OR7, 13 74006 voidaan valmistaa muodostamalla kaavan XV (supra) mukainen välituote, jossa W on vety tai 1-karbonyyli-imidatsoli ja Wa on 1-karbonyyli-imidatsoli tai jossa W on vety tai 1-tio-karbonyyli-imidatsoli ja Wa on 1-tiokarbonyyli-imidatsoli ja saattamalla välituote reagoimaan yhdisteen R?OH:n kanssa, jossa R? tarkoittaa samaa kuin edellä. Kun Y on happi, kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on vety, ja 1,1'-karbonyyli-imidatsoli saatetaan reagoimaan moolisuhteessa 1 : 10, parhaiten 1 : 3,5, sekoittaen liuottimessa kuten N,N-dimetyyliform-amidissa, Ν,Ν-dimetyyliasetamidissa, N-metylipyrrolidiinissa, heksaanissa, asetonitriilissä, tetrahydrofuraanissa, tolu-eenissa ja vastaavassa, huoneen lämpötilassa - 70oC, parhaiten 45 - 65oC, 9-24 tuntia, parhaiten 15 - 20 tuntia. Liuottimen poistamisen jälkeen välituote, joka voi olla kaavan XV mukainen mono- ja di-karbonyyli-imidatsolin seos, saatetaan reagoimaan sopivan alkoholin tai amiinin kanssa, valinnaisesti kun mukana on katalyyttiä kuten 4-dimetyyliaminopyridiiniä, kuumentaen 50 - 200°C:ssa, parhaiten 75 - 125°Csssa 12 - 48 tuntia, parhaiten 18 - 36 tuntia. Kaavan I mukaiset yhdisteet eristetään alalla yleisesti tunnetuilla menetelmillä kuten kromatograa-fisesti. Kromatografiän avulla voidaan myös erottaa kaavan I mukainen monokarbonaatti kaavan I mukaisesta dikarbonaatista. Kun Y on rikki, edellisessä menetelmässä korvataan l,l'-karbo-nyylidi-imidatsoli 1,11-tiokarbonyylidi-imidatsolilla.

1,1'-karbonyylidi-imidatsolia on saatavissa mm. Aldrich ;· · Chemical Co. yhtiöstä. Reaktiossa käytettyjä alkoholeja ja amiineja on saatavissa, tai jos niitä ei ole saatavissa, ne voidaan valmistaa alalla yleisesti tunnetuilla menetelmillä. Esimerkiksi alkoholit voidaan valmistaa pelkistämällä vastaava aldehydi tai amiinit voidaan valmistaa pelkistämällä vastaava nitroyhdiste tai saattamalla ammoniakki reagoimaan sopivan hiilivetyhalogenidin kanssa.

14 74006

Vaihtoehtoisessa menetelmässä, jossa valmistetaan sellaisia kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R1 ja/tai R2 on -C(0)OR7, saatetaan kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on vety, reagoimaan yhdisteen (R7OC(0))20 kanssa. Liuottimessa kuten dimetyyliformamidissa ja vastaavassa olevia reaktiokomponent-teja sekoitetaan katalyytin kuten 4-dimetyyliaminopyridiinin läsnäollessa huoneen lämpötilassa - 50°C:ssa, parhaiten huoneen lämpötilassa 1-5 päivää, parhaiten 1,5-4 päivää.

Kaavan I mukaiset yhdisteet eristetään tavanomaisin menetelmin kuten kromatograafisesti.

Toisessa sellaisten kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmässä, jossa Rl ja/tai R2 on -C(0)0R7, käsitellään ensin kaikilla ryhmän R7 merkityksillä kaavan XI mukainen yhdiste, jossa A on asetyyli, ja r3 ja/tai R® on amino, trityylisuoja-aineella kuten trifenyylimetyylikloridilla (trityylikloridi), 4-metoksifenyylidifenyylimetyylikloridillä (mono-metoksitrityylikloridi ) ja vastaavalla. Trityylisuoja-aineita on helposti saatavissa mm. Aldrich Chemical Co. yhtiöstä. Reaktiokompo-nentteja kuumennetaan liuottimessa kuten dimetyyliformamidissa, pyridiinissä ja vastaavassa, yhdessä katalyytin, esim.

4-dimetyyliaminopyridiinin kanssa, 40 - 70°C:ssa, parhaiten 45 - 60°C:ssa, 8-24 tuntia, parhaiten 12 - 18 tuntia. Amino-suojattu yhdiste eristetään tavanomaisin keinoin kuten kiteyttämällä ja asetaattiryhmät hydrolysoidaan emäksellä kuten alkalimetallihydroksidilla, esim. natriumhydroksidilla ja kaliumhydroksidilla, tai ammoniumhydroksidilla. Dihydroksi-yhdiste ja katalyytti kuten 4-dimetyyliaminopyridiini pyridiinissä lisätään tipottain sopivaan hydrokarbyylioksikarbonyyli-kloridiin joko sellaisenaan tai liuottimessa kuten metyleeni-kloridissa, dikloorietaanissa tai vastaavassa. Reaktiokompo-nenttia sekoitetaan huoneen lämpötilassa 10 - 24 tuntia, parhaiten 12 - 18 tuntia. Tuote eristetään alalla yleisesti tunnetuilla menetelmillä kuten kromatograafisesti. Aminoryhmän 15 74006 suojaryhmät poistetaan käsittelemällä orgaanisella hapolla kuten jääetikalla, trifluorietikkahapolla, bentseenisulfoni-hapolla ja vastaavalla, kuumentaen huoneen lämpötilassa -100°C:ssa, parhaiten 40 - 80°C:ssa 1-12 tuntia, parhaiten 1-5 tuntia. Tuote eristetään kromatograafisesti tai kiteyttämällä .

Edellä kuvatun yhdisteen XI aminoryhmä (ryhmät) voidaan myös suojata saattamalla yhdisteet reagoimaan N,N-dimetyyliform-amidin asetaalin, jota on saatavissa esim. Aldrich Chemical Co. yhtiöstä, kanssa ja sen jälkeen menetelmällä edellä tarkastellulla tavalla.

Hydrokarbyylioksikarbonyylikloridit ovat helposti saatavissa tai jos ne eivät ole helposti saatavissa, ne voidaan valmistaa saattamalla fosgeeni reagoimaan sopivan alkoholin kanssa alalla yleisesti tunnetuissa reaktio-olosuhteissa. Kaavan I mukaiset monokarbonaalit voidaan valmistaa saattamalla kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on vety, trityylisuojaryhmän kanssa, kuten edellä on määritelty supra. Suojaryhmä reagoi mahdollisesti läsnäolevan aminotypen ja yhden hydroksiryhmän kanssa. Suojaamaton hydroksiryhmä saatetaan reagoimaan edellä kuvatulla tavalla hydrokarbyylioksikarbonyylikloridin kanssa. Suoja-ryhmät poistetaan edellä kuvatulla tavalla.

Seuraavan yksityiskohtaisen kuvauksen perusteella ammattimies voi helpommin ymmärtää keksintöä ja toteuttaa sen. Sitä ei tule pitää keksinnön alaa rajoittavana vaan pelkästään keksintöä havainnollistavana.

Valmistusesimerkki I

1,3-Di-O-bentsyyliglyserolin valmistaminen Natriumhydridiä [100 g (50 % dispersio mineraaliöljyssä) 74006 16 2,08 moolia] pestiin kaksi kertaa yhdellä litralla heksaania ja kuivattiin sen jälkeen typen alla. Lisättiin kuivaa dimetyyliformamidia (1,5 1). Sen jälkeen lisättiin sellaisella nopeudella bentsyylialkoholia (400 ml), että lämpötila pysyi alle 50°C. Lisääminen kesti kaksi tuntia. Tämän jälkeen lisättiin tipottain epikloorihydriniä (92,5 g, 1 moolia) 0,5 tunnin aikana samalla jäähdyttäen jäissä niin, että lämpötila pysyi alle 40°C. Sen jälkeen liuosta sekoitettiin 16 tuntia 21°C:ssa ja tämän jälkeen 2,5 tuntia 50°C:ssa. Dimetyyliformamidi poistettiin haihduttamalla alipaineessa. Öljymäinen jäännös liuotettiin 2,5 1 dietyylieetteriä. Orgaaninen liuos pestiin kahdella litralla vettä, kahdella litralla 2 %:sta suolahappoa, kahdella litralla 1 %:sta natriumbikarbonaattia ja väkevöitiin ruskeaksi öljyksi. Tislaamalla saatiin 147,8 g 1,3-di-O-bent-syyliglyserolia (kp. 170-180°C/l torri).

Valmistusesimerkki II

1,3-Di-0-bentsyyli-2-0-kloorimetyyliglyserolin valmistaminen

Kuivaa kloorivetykaasua kuplitettiin 1,5 tuntia valmistusesi-merkistä I saadun 1,3-di-0-bentsyyliglyserolin (15 g, 55 milli-moolia) ja paraformaldehydin (3,3 g, 110 millimoolia) liuokseen 175 ml:ssa 1,2-dikloorietaania 0°C:ssa. Sen jälkeen liuosta pidettiin suljetussa pullossa 21 tuntia 4°Csssa. Tämän jälkeen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla lämmittäen 21°C:een, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 17,5 g 1,3-di-O-bentsyyli-2-O-kloorimetyyliglyserolia.

Valmistusesimerkki III

2-O-Asetoksimetyyli-l,3-di-O-bentsyyliglyserolin valmistaminen Kuivausputken alla olevaan 1,3-di-0-bentsyyli-2-0-kloorimetyy- 17 74006 liglyserolin (17,5 g, 55 millimoolia), joka oli saatu valmistusesimerkistä II, liuokseen 400 mlrssa dimetyyliformamidia lisättiin 0°Csssa natriumasetaattia (6 g). Sen jälkeen liuos lämmitettiin 21°C:een ja sekoitettiin magneetin avulla 15 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla alipaineessa ja öljymäinen jäännös liuotettiin 0,45 kiloon dietyylieetteriä. Eetteriliuos pestiin kerran 750 ml:11a vettä, 2 x 250 ml:11a vettä ja kerran 250 ml:lla suolaliuosta, kuivattiin natrium-sulfaatilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 19 g 2-O-asetoksi-metyyli-1,3-di-O-bentsyyliglyserolia öljynä.

Valmistusesimerkki IV

,9-Diasetyyliquaniinin valmistaminen

Yhdistettiin keskenään quaniinia (20 g, 0,132 moolia) ja 300 ml etikkahappoanhydridiä ja seosta refluksoitiin 16 tuntia. Seos jäähdytettiin ja ylimääräinen etikkahappoanhydridi poistettiin haihduttamalla alipaineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen dimetyylisulfoksidista, jolloin saatiin 25,6 g N^,9-diasetyyli-quaniinia.

Valmistusesimerkki V

A. N2-asetyyli-9-(l,3-dibentsyylioksi-2-propoksimetyyli)-quaniinin valmistaminen_

Valmistusesimerkistä IV saatua N2,9-diasetyyliquaniinia (15,61 g, 66 millimoolia), valmistusesimerkistä III saatua 2,0-asetoksimetyyli-l,3-di-O-bentsyyliglyserolia (19 g, 55 millimoolia) ja bis(p-nitrofenyyli)-fosfaattia (0,5 g) sekoitettiin yhdessä 150 ml:n kanssa dietyylieetteriä. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä kuumennettiin 1,5 tuntia typpivirran alla 175°C öljyhauteessa. Pylväskromato- 74006 18 grafoimalla ja eluoimalla 1 : 9 metanoli/metyleenikloridillä ja tämän jälkeen kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatista saatiin 4,76 g N2-asetyyli-9-(1,3-dibentsyylioksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia, sp. 145 - 146°C.

B. N2-Asetyyli-9-(l,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinin valmistaminen_

Liuokseen, joka sisälsi N2-asetyyli-9-(l,3-dibentsyylioksi-2-propoksimetyyli)quaniinia (4,62 g, 9,67 millimoolia) 150 mlrssa metanolia ja 40 ml vettä, lisättiin 20 % palladiumhydroksidi/ -hiiltä lietteenä 10 ml:ssa vettä. Seos hydrattiin Parrin hydrauslaitteessa 4,2 kg/cm2 vetypaineesa 38 tunnin aikana, minkä jälkeen suodatettiin selitin läpi ja väkevöitiin valkoiseksi kiinteäksi aineeksi. Kiteyttämällä uudelleen metanoli/etyyliasetaatista saatiin 1,4 g N2-asetyyli-9-(l,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinia, sp. 205 - 208°C.

Emäliuos pelkistettiin edelleen 10 % palladium/hiilellä (1 g) seoksessa, joka sisälsi 150 ml metanolia ja 50 ml vettä, 47 tunnin aikana 4,2 kp/cm2 paineessa. N2-asetyyli-9-(l,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinin kokonaissaanto oli 2,11 g.

C. 9-(1,3-Dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinin valmistaminen N2-asetyyli-9-(1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinia (721,9 mg, 2,4 millimoolia) ja 50 ml metanolipitoista ammoniakkiliuosta (metanoli kyllästetty ammoniakilla 0°C:ssa) sekoitettiin 17 tuntia 21°C:ssa. Liuos väkevöitiin valkoiseksi kiinteäksi aineeksi ja jäännös kiteyttiin uudelleen vedestä tai metanolista, jolloin saatiin 582,3 mg 9-(1,3-dihydroksi- 2-propoksimetyyli)quaniinia, sp. 250°C (hajoaa).

19 74006

Esimerkki 1 9-[l,3-Di(metoksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli3quaniini

Liuosta, joka sisälsi 1,509 g 9-(1,3-dihydroksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia ja 3,0 g 1,1'-karbonyyli-imidatsolia 150 mlrssa kuivaa dimetyyliformamidia, sekoitettiin kuivaus-putken alla 16 tuntia 55°C:ssa. Muodostui valkoista sakkaa. Dimetyyliformamidi poistettiin alipaineessa ja jäännös käsiteltiin 200 ml:lla metanolia refluksoimalla 2 tuntia kuivaus-putken alla. Sen jälkeen liuos jäähdytettiin 0°C:een ja suodatettiin. Jäännös kiteytettiin uudelleen metanolista, jolloin saatiin 1,576 g 9-[l,3-di(metoksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyylijquaniinia, sp. 204 - 206°C.

Esimerkki 2 9-[l,3-Di(syklopentyylioksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]-quaniini_

Liuosta, joka sisälsi 0,50 g 9-(l,3-dihydroksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia ja 1,6 g 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia 75 mlsssa kuivaa dimetyyliformamidia, sekoitettiin kuivaus-putken alla 17 tuntia 55°C:ssa. Dimetyyliformamidia poistettiin alipaineessa. Jäännös käsiteltiin 20 ml:11a syklo-pentanolia ja 50 mg:11a 4-dimetyyliaminöpyridiiniä ja kuumennettiin 19 100°C:ssa. Liuos väkevöitiin ja jäännös kromatogra-foitiin silikageelillä eluoimalla metanoli/metyleenikloridi-gradientilla 1/9 - 1/5, jolloin saatiin 495 mg 9-[l,3-di(syklo-pentyylioksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]guaniinia ensimmäisessä vyöhykkeessä. Kiteyttämällä uudelleen metanolista saatiin 0,37 g tuotetta, sp. 211,5 - 214°C.

Samalla tavoin valmistettiin myös 9-[l,3-di(n-oktyylioksi- 74006 20 karbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]quaniini Esimerkki 3 9-[l,3-Di(t-butoksikarbonyyljoksi)-2-propoksimetyyli3quaniini

Liuosta, joka sisälsi 212 mg 9-(1,3-dihydroksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia ja 56 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä 5 ml di-t-butyylidikarbonaattia ja 10 ml N,N'-dimetyyliformamidia, sekoitettiin suljetussa pullossa 72 tuntia. Tämän jälkeen liuos väkevöitiin ja jäännös kromatografoitiin (1/7 metanoli/mety-leenikloridi), jolloin saatiin 35,8 mg 9-[l,3-di(t-butoksi-karbonyylioksi)-2-propoksimetyyli/quaniinia metanolista uudelleenkiteyttämisen jälkeen, sp. 192 - 193°C.

Esimerkki 4 9-(1,3-bentByylioksikarbonyylioksi-2-propoksimetyyli)quaniini

Seosta, joka sisälsi 3,00 g (1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)-quaniinia, 300 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 100 ml etikka-happoanhydridiä, sekoitettiin voimakkaasti 3 päivää huoneen lämpötilassa. Etikkahappoanhydridi poistettiin haihduttamalla alipaineessa ja jäännös kiteytettiin uudelleen metanolista, jolloin saatiin 3,62 g 9-(1,3-diasetyylioksi-2-propoksi-metyyli)-quaniinia, sp. 237 - 239°C.

Liuosta, joka sisälsi 3,3 g 9-(l,3-diasetoksi-2-propoksi-metyyli)-quaniinia, 7,0 g 4-metoksifenyylidifenyylimetyyli-kloridia, 7,0 ml trietyyliamiinia ja 300 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä 50 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, kuumennettiin magneettisesti sekoittaen 15 tuntia 50°C:ssa. Lisättiin meta-nolia (5 ml). Sen jälkeen liuos väkevöitiin alipaineessa ruskeaksi öljyksi, joka kromatografoitiin silikageelillä 74006 eluoiden 1 : 12 metanolismetyleenikloridilla, jolloin saatiin öljyä. Öljy kiteytettiin etyyliasetaatti : heksaanista, jolloin saatiin 5,42 g N2-(5-metoksifenyylifenyylimetyyli)-9-(1,3-diasetoksi-2-propoksimetyyliJquaniinia, sp. 139 - 141°C.

4,0 g N2-(4-metoksifenyylidifenyylimetyyli)-9-(l,3-diasetoksi- 2-propoksimetyyli)quaniinia seoksessa, joka sisälsi 100 ml metanolia ja 20 ml väkevää ammoniumhydroksidia, sekoitettiin magneettisesti 22°C:ssa 16 tunnin ajan ja en jälkeen 2,5 tuntia 50°C:ssa. Tämän jälkeen lisättiin vielä 10 ml ammonium-hydrok-sidia ja liuosta sekoitettiin jälleen 2,5 tuntia 50°C:ssa.

Tämän jälkeen liuos väkevöitiin alipaineessa ja jäljelle jäänyt kiinteä aine kiteytettiin uudelleen metanoli : etyyliasetaatista, jolloin saatiin 3,5 g N2-(4-metoksifenyylidi-fenyylimetyyli)-9-(1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinia, sp. 148 - 151 °C.

N2-(4-metoksifenyylidifenyylimetyyli-9-(1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)quaniinin (0,25 g) liuokseen pyridiinissä (15 ml) huoneen lämpötilassa lisättiin bentsyylioksikarbonyyli-kloridia (0,34 g) 5 mlrssa dikloorimetaania. 16 tunnin kuluttua liuos haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (15 % metanolia metyleenikloridissa). Jae A otettiin talteen ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 150 mg N2-(4-metoksi-fenyylidifenyylimetyyli)-9-[l,3-di(bentsyylioksikarbonyyli-oksi)-2-propoksimetyyli]quaniinia, joka kiteytettiin uudelleen metanolista, sp. 151 - 155°C. Jae B otettiin talteen ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 60 mg N2-(4-metoksifenyylidi-fenyylimetyyli)-9-(l-hydroksi-3-bentsyylioksikarbonyylioksi- 2-propoksimetyyli)quaniinia, joka kiteytettiin uudelleen metanolista, sp. 193 - 198°C.

4-metoksifenyylidifenyylimetyyliryhmä poistetaan käsittelemällä orgaanisella hapolla kuten jääetikalla, jolloin saadaan 74006 22 vastaavasti 9-[l,3-di(bentsyylioksikarbonyylioksi)-2-propoksi-metyyli]quaniinia ja 9-(l-hydroksi-3-bentsyylioksikarbonyyli-oks i-2-propoks imetyyli)quaniinia.

Esimerkki 5 9-(l-Hydroksi-3-metoksikarbonyylioksi-2-propoksimetyyli)- quaniini_ 1

Liuosta, joka sisälsi 84,5 mg 9-(1,3-dihydroksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia ja 65 mg 1',1'-karbonyylidi-imidatsolia 5 mlrssa N,N-dimetyyliformamidia, kuumennettiin 21 tuntia 45°C:ssa. Dimetyyliformamidi poistettiin alipaineessa ja jäännös kiehutettiin metanolin kanssa. Liuos väkevöitiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä eluoiden metanoli/ -metyleenikloridi-gradientilla 1/7 - 1/4. Ensimmäiseksi eluoitunut yhdiste kiteytettiin uudelleen metanolista, jolloin saatiin 18,7 mg 9-(l-hydroksi-3-metoksikarbonyylioksi-2-propoksimetyyli/quaniinia. 9-(l-hydroksi-3-metoksikarbonyyli-oksi-2-propoksimetyyli)quaniini, joka euloitui toisena, kiteytettiin uudelleen metanolista, jolloin saatiin 26 mg tuotetta, sp. 189 - 190°C.

Esimerkki 6 9-[1,3-Di(etyyliaminokarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]-quaniini_

Seosta, joka sisälsi 0,500 g 9-(l,3-hydroksi-2-propoksi-metyyli)quaniinia, 1,588 g 1,1’-karbonyylidi-imidatsolia ja 50 ml N,N-dimetyyliformamidia, sekoitettiin voimakkaasti 3,5 tuntia 100°C:ssa. Sen jälkeen lisättiin 15 ml 33 %:sta vesipitoista etyyliamiinia. Kahden tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin alipaineessa ja sen jälkeen kromatografoitiin 74006 silikageelillä eluoiden 1/9 metanoli/metyleenikloridilla, jolloin saatiin 9-[l,3-di(etyyliaminokarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]quaniinia. Tämä kiteytettiin uudelleen, jolloin saatiin 0,33 g tuotetta, sp. 198 - 200°C.

Esimerkki 7 9-(1,3-Di(metoksitiokarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli Jguaniini

Liuosta, joka sisälsi 9-(1,3-dihydroksi-2-propoksimetyyli)-quaniinia (50 mg) ja 1,1-tiokarbonyylidi-imidatsolia (175 mg) 6 ml:ssa dimetyyliformamidia, kuumennettiin 16 tuntia 50°C:ssa. Dimetyyliformamidia haihdutettiin alipaineessa ja jäännös käsiteltiin metanolilla ja katalyyttisellä määrällä 5-dimetyy-liaminopyridiiniä huoneen lämpötilassa 24 tunnin aikana. Liuos väkevöitiin ja jäännös kromatografoitiin (1:5 metanoli-metyleenikloridi), jolloin saatiin 10 mg 9-[l,3-di(metoksitio-karbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]quaniinia, sp. 148 - 150°C.

Esimerkki 8

Seuraava esimerkki havainnollistaa kaavan I mukaista aktiivista yhdistettä kuten 9-[l,3-di(metoksikarbonyylioksi)-2-propoksi-metyylijquaniinia sisältävien tyypillisten farmaseuttisten formulaatioiden valmistamista.

A. Tooppinen formulaatio

Aktiivinen yhdiste 0,2 - 2 g

Span 60 2 g

Tween 60 2 g

Mineraaliöljy 5 g

Vaseliini 10 g 74006 24

Metyyliparabeeni 0,15 g

Propyyliparabeeni 0,05 g BHA (butyloitu hydroksi anisoli) 0,01 g

Vesi qs 100 ml

Vettä lukuunottamatta yhdistetään kaikki edellä mainitut ainesosat ja kuumennetaan 60°C:ssa sekoittaen. 60°C:ssa lisätään sen jälkeen niin paljon vettä voimakkaasti sekoittaen, että saadaan 100 g kermaformulaatiota, joka sen jälkeen jäähdytetään huoneen lämpötilaan. Seuraava formulaatio on hyödyllinen intra-peritoneaalisessa (IP), subkutaanissa (SC) ja intramuskulaari-sessa (IM) injisoinnissa.

B. IP, SC ja IM-formulaatio

Aktiivinen yhdiste 0,5 g

Tween 80 0,8 g

Bentsyylialkoholi 0,9 g 0,9 % suolaliuos qs 100 ml

Aktiivinen yhdiste atomisoidaan hienojakoiseksi ja lisätään sekoittaen Tween 80seen ja bentsyylialkoholiin. Sen jälkeen lisätään sekoittaen niin paljon 0,9 %:sta suolaliuosta, että saadaan 100 ml IP-, SC- tai IM-suspensiota, joka suodatettiin 0,2 mikronin membraanisuodattimen läpi ja pakataan steriileissä olosuhteissa.

C. Tablettiformulaatio

Paino-osia

Aktiivinen yhdiste 200

Magnesiumstearaatti 3 Tärkkelys 30

Laktoosi 116 PVP(polyvinyylipyrrolidoni) 3 25..

74006

Edellä mainitut ainesosat yhdistetään ja rakeistetaan käyttämällä liuottimena metanolia. Sen jälkeen formulaatio kuivataan ja muodostetaan tableteiksi (sisältävät 200 mg aktiivista yhdistettä) sopivalla tabletointikoneella.

Esimerkki 9

Keksinnön mukaisten yhdisteiden poikkeuksellinen antiviraalinen aktiivisuus on osoitettu seuraavilla määritysmenetelmillä:

Infektointia varten valmistetaan HEp-2 soluviljelmissä herpes-simplexvirus 2, kanta G. Virusta adsorboidaan 1 tunti, solujen päälle laitetaan uutta kasvualustaa ja inkuboidaan 35°C:ssa, kunnes kaikki solut ovat infektoituneet. Solususpensio jäädytetään -70°C:ssa, sulatetaan ja solujäämät poistetaan sentri-fugoimalla. Supernatanttineste jaetaan tasaosiin ja säilytetään käyttöön asti pakastettuna -70°C:ssa. Supernatanttinesteen 1q6.7 laimennoksesta saadaan 50 %:eesti soluviljelmää infek-toiva annos (CCID50) HEp-2 soluissa ja 10^*7 laimennos aiheuttaa hiirillä 50 %:sesti tappavan reaktion (LCsq)· 20 naaraspuolisen Swiss Webster-hiiren (15 - 17 g) ryhmät altistetaan intraperitoneaalista tietä käyttämällä 0,2 ml EMEMstä, joka sisältää viruksia 10 LCso/hiiri. Mallin oikea toiminta varmistetaan käyttämällä viruslenssikontrollina hiiriä, jotka on altistettu 10°♦5 verran suuremmalla tai pienemmällä virusmäärällä kuin 10 LD50 altistus.

Hoito testattavilla yhdisteillä aloitetaan 6 tuntia alistamisen jälkeen. 20 hiiren ryhmiin jaetuille hiirille annetaan yhdisteitä sopivassa suolaliuos-väliteaineessa s.c. 5 mg/kg, 10 mg/kg ja 20 mg/kg. Yhtä 20 hiiren ryhmää käytetään vertailu-ryhmänä ja sille annetaan vain väliteainetta s.c. Käsittely toistetaan 24, 28, 72 ja 96 tuntia altistamisen jälkeen.

74006 26 Tämän keksinnön mukaisen yhdisteen, jossa R1 ja R3 ovat kumpikin metoksikarbonyyli, R3 on NH2, ja R4 on vety ja R5 ja R^ muodostavat yhdessä ketoryhmän, osoitetaan merkittävästi lisäävän eloonjääneiden lukumäärää sekä keskimääräistä eloon-jääntiaikaa konsentraatioissa 5 mg/kg tai yli, verrattuna suolaliuosta saaneeseen vertailuryhmään.

Keskimääräinen eloon-

Annos (mg/kg)_Eloonjääneitä/yht._jääntiaika (päiviä) 20 9/20 10,9 10 18/20 12 5 9/20 12,7 vertailu 9/20 7,5

Claims (8)

1. 27 74006
2. 1. Menetelmä antiviraalisten substituoitujen 9(1-0- tai 3-0 monosubstituoitu- tai 1,3-di-0-substituoitupropoksimetyyli)-guaniinien valmistamiseksi, joiden kaava I on H^Y\ 11/ H2N^N^N (!) CH-OCHCH^OR1 Z \ z CH2OR2 jossa Rl on vety, -c(Y)0R^ tai -C(0)NHR^, jossa on 1-12 hiiliatominen alkyyli, 2-12 hiiliatominen alkenyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli, fenyyli tai bentsyyli; R1 on -C(Y)0R^ tai -C(0)NHR?, jossa R^ tarkoittaa samaa kuin edellä? Y on happi tai rikki; tunnettu siitä, että (a) seuraavan kaavan mukainen yhdiste ύθ H2N I CH_0CHCHo0H 2 | 2 CH2OH saatetaan reagoimaan kaavan (R70C(0))20, jossa r? on edellä määritelty, mukaisen dikarbonaatin kanssa; tai 74006 28 (b) kaavan XV O LI> <xv> CH-OCHCH-OW CH2OWa mukainen yhdiste, jonka kaavassa W on vety, 1-karbonyyli-imidatsoli tai 1-tiokarbonyyli-imidat-soli ja Wa on 1-karbonyyliimidatsoli tai 1-tiokarbonyyli-imdatsoli, saatetaan reagoimaan R?OH:n tai jossa R7 on edellä määritelty, kanssa; tai (c) yhdiste, jonka kaava on (XVI) O JL . N HN | (XVI) YHN w CH2OCHCH2OZ ch2or2 jossa kaavassa Y on trityylisuojaryhmä ja Z on trityylisuoja-ryhmä tai R*, saatetaan reagoimaan jääetikan kanssa, ja R2 on edellä määritelty ja näin saatu kaavan I mukainen yhdiste mahdollisesti muunnetaan happoadditiosuolaksi.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetun yhdisteen kaavassa I R1 ja R2 ovat -C(0)Or7, jossa R? tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1. 1 Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistettu kaavan I mukainen yhdiste on 29 74006 9-[l,3-di(metoksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]guaniini, 9-[l,3-di-t-butoksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]guaniini, 9-[l,3-di-(n-oktyylioksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli]-guaniini, 9-[l,3-di-(syklopentyylioksikarbonyylioksi)-2-propoksimetyylijguaniini, tai 9-[l,3-di-(bentsyylioksikarbo-nyylioksi)-2-propoksimetyyli]guaniini.
4. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetun yhdisteen kaavassa I R1 on vety ja R2 on -C(0)0r7, jossa R? tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksen 1.
5. 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistettu kaavan I mukainen yhdiste on 9-(l- hydroksi-3-metoksikarbonyy1ioksi-2-propoksimetyy1i)guaniini, 9-(l-hydroksi-3-n-butoksikarbonyylioksi-2-propoksimetyyli)-guaniini, 9-(l-hydroksi-3-oktyylioksikarbonyylioksi-2-propoksi-metyyli)guaniini, 9-(l-hydroksi-3-syklopentyylikarbonyylioksi-2-propoksimetyyli)guaniini, tai 9-(l-hydroksi-3-(bentsyylioksi-karbonyylioksi-2-propoksimetyyli)guaniini.
6. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetun yhdisteen kaavassa I R1 ja R2 ovat -C(S)Or7, jolloin R? tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.
7. 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetun yhdisteen kaavassa I R^· ja R2 ovat -C(0)NHr7, jolloin R? tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.
8. 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetun yhdisteen kaavassa I R^ ja R2 ovat - *. toisistaan riippumatta etyyliaminokarbonyyliä, jolloin yhdiste 9-(1,3-di(etyyliaminokarbonyylioksi)-2-propoksimetyyli)guaniini. 30 Patentkrav 74006