FI66120C - Foerfarande foer stabilisering av 4-metyl-5-(2'-kloretyl)-tiazol - Google Patents

Description

|g| M <”> S? 66120 C (45) Patentti nyonnotty 10 09 1984 gta Patent ceddelat KSSS^ 3 3 A 61 K 31Λ25, ^7/00 (51) KvJk./hbCL // C 07 D 277/22 SUOMI-FINLAND pi) 79132¾ (22) Hywrt^NI-Ametatae*, 24.0^.79 ' ' (23) CNrtgfciaJi 2*.04.79 (41) Ta»rt HUmU—BMvtt ofcNdli 26 10 79

Htanttl· Ja raklatarlhalUtm /4Λ νβκΜΜμμμ i· kMLMhataa m. —

Htwt· och mhUntynliw Ai—i— «S·55^>Γρ·μιβ·>»< 31.05.8¾ (33)(33)(31) Hn*«r «ai* »ulrt >>*«»« 25.0¾.78

Itävalta-österrike(AT) A 2961/78 (71) Pharmaceutical Licences Company Ltd., 7, Chemin de Trembley, 1197 Prangins, Vaud, Sveitsi-Schweiz(CH) (72) Horst Pelsch, Fieberbrunn, Gerhard Hantich, Kitzbuhel,

Itävalta-österrike(AT) (7¾) Oy Kolster Ab (5¾) ^metyyl i-5"(2'-kloorietyy1 ?)-tiatsol in stabilointimenetelmä -Förfarande för stabi 1 isering av ^metyl ~5*(2'-kloretyl) -t iazol Tämä keksintö koskee 4-metyyli-5-(2'-kloorietyyli)-tiatsolin stabilointimenetelmää, jossa tämä yhdiste sekoitetaan myrkyttömään kantaja-aineeseen, joka käsittää vähintään yhden glyseridin, mieluimmin öljyn.

On tunnettua, että seuraavan kaavan mukaisella 4-metyyli-5-(2'-kloorietyyli)-tiatsolilla

CH-- C - N

Il II

Cl - CH0- CH„- C CH

V

(josta seuraavassa käytetään lyhennystä CMT) on rauhoittava ja kou-ristuslääkevaikutus. Mutta CMT-emäs on kemialliselta rakenteeltaan pysymätön. °n jo ai kai senttiin todettu (AT-patentti 266 126), että erityi- 2 66120 sesti pitemmän säilytyksen aikana ja korkeammissa lämpötiloissa tapahtuu hajoamisreaktioita, nimittäin HCl:n lohkeamista. Muodostuvilla hajoamistuotteilla ei ole enää samoja farmakologisia vaikutuksia kuin CMT-emäksellä.

Toinen haittapuoli liittyy siihen seikkaan, että CMT:tä käytetään tavallisesti, erityisesti infuusio- ja injektioliuoksissa, etaanidisulfonaatin muodossa. Suun kautta annettaessa on tällöin kuitenkin haittana epämiellyttävä maku ja haju, jotka johtuvat pienistä määristä vapaata emästä, ja joita toistaiseksi on tuskin onnistuttu täysin peittämään.

Näiden haittapuolien välttämiseksi on aikaisemmin (AT-patentti 266 126) ehdotettu CMT:n sekoittamista ei-polaariseen myrkyttömään kantaja-aineeseen, joka muodostuu yhdestä tai useammasta eläin- tai kasviöljystä tai -rasvasta, erityisen mielellään maapähkinäöljystä, tai yhdestä tai useammasta korkeammasta rasvahaposta, joilla tällöin tarkoitetaan 14-22 hiiliatomia sisältäviä yhdisteitä. Täten voidaan hidastaa CMT-emäksen hajoamista, niin että saatuja valmisteita voidaan säilyttää jonkin aikaa. Epämiellyttävä rikkimäinen haju ja kitkerä maku jäävät kuitenkin edelleen valmisteisiin.

Lisäksi ovat hakijan tutkimukset osoittaneet, että jo mainitun HCl:n lohkeamisen lisäksi muunkinlaiset reaktiot aiheuttavat CMT-emäksen hajoamista. Jos nimittäin vasta tislattua CMT-emästä säilytetään joitakin päiviä kohotetussa lämpötilassa ja sitten ruskeana sakkana erottuneita hajoamistuotteita pestään bentseenillä ja tutkitaan, havaitaan, että kokonaiskloridimäärä on huomattavasti suurempi kuin vapaan kloridin ja absorboituneen CMT-emäksen ja CMT-HCl:n kloridin muodostama summa. Kloridiylimäärän täytyy sitten olla sitoutunut CMT-emäksen hajoamistuotteisiin.

Keksinnön tavoitteena on ollut parantaa alalla aikaisemmin kuvatun kaltaista menetelmää lisäämällä emäksen pysyvyyttä siinä määrin, että saadaan valmisteita, joita voidaan säilyttää huoneen lämpötilassa vähintään neljä vuotta, ja jotka lisäksi pysyvät mauttomina ja hajuttomina. Keksinnössä tämä tehtävä ratkaistaan pääasiallisesti käyttämällä kantaja-aineena vähintään yhtä puoliksi tai kokonaan synteettistä triglyseridiä, joka perustuu tyydytettyihin, molekyylikooltaan keskisuuriin rasvahappoihin (so. rasvahappoihin, joiden ketjunpituus on väliltä cg-cj2^ * 66120

Nimittäin, kuten jo on mainittu, on osoittautunut, että HCl:n lohkeamisen lisäksi CMT-emäksen ja kantaja-aineen seos on altis it-sehapetusreaktioille, jos kantaja-aine sisältää reaktiokykyisiä ryhmiä, kuten esim. vapaita happoja tai alkoholikomponentteja tai ole-fiinikaksoissidoksia, joita kaikkia esiintyy kasvi- ja eläinöljyis-sä tai -rasvoissa. HCl:n lohkeamisen lisäksi tapahtuu CMT-emäksen hajoamista radikaalireaktiomekanismeilla, jotka perustuvat itseha-petusreaktioihin. Tätä HCl:n lohkeamisen lisäksi tapahtuvaa hajoamista esiintyy sitä enemmän, mitä alttiimpi käytetty kantaja-aine on itsehapetusreaktiolle. Tästä syystä sisältyy keksintöön sellaisen fysiologisesti vaarattoman kantaja-aineen valinta, joka HCl:n lohkeamisen suhteen stabiloivan vaikutuksen lisäksi sietää ilman happea eikä siten aiheuta CMT-emäksen hajoamista itsehapetusreak-tioiden vaikutuksesta. Kantaja-aineet, jotka sisältävät eläin- tai kasviöljyjä tai -rasvoja, eivät siten tule kysymykseen, koska ne ovat sisältämiensä tyydyttämättömien rasvahappojen johdosta erityisen itsehapetusalttiita. Jälkeenpäin suoritettujen toimenpiteiden, esim. hydrauksen, avulla voidaan kaksoissidosten lukumäärää tosin vähentää, mutta ei siinä määrin, että itsehapetuskyky ratkaisevasti vähenisi.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetyt triglyseridit sekä niiden seokset ovat fysiologisesti vaarattomia, koska ne hajoavat rasvahappokierrossa. Tällaisia triglyseridejä tai triglyseridiseoksia, jotka perustuvat tyydytettyihin, ketjunpituudeltaan keskikokoisiin rasvahappoihin ^C8_C12^' vo^aan helposti valmistaa synteettisesti esteröimällä glyseriini rasvahapoilla, esim. tyydytetyillä keskipituisilla n-alkaanihapoilla, joiden hiiliatomien lukumäärä on parillinen (tyydytetyillä keskipitkillä kasveille tai eläimille ominaisilla rasvahapoilla). Käytettävät rasvahapot voidaan valmistaa synteettisesti tai saippuoimalla luonnon rasvoja tai öljyjä, hydraamalla ja puhdistamalla. Sellaiset triglyseridit tai triglyseridiseokset eivät enää sisällä kaksoissidoksia (jodiluku pienempi kuin 1) ja ovat hyvin pysyviä. Glyseriinin käyttö alkoholikomponenttina ja tyydytettyjen keskipitkien n-alkaanihappojen, joiden hiiliatomien lukumäärä on parillinen, käyttö happokomponentteina perustuu hyvän fysiologisen siedettävyyden välttämättömyyteen.

Eräässä keksinnön mukaisen menetelmän parhaana pidetyssä suoritusmuodossa käytetään kantaja-aineena kaksoissidoksetonta 4 66120 triglyseridiseosta, joka perustuu tyydytettyihin keskipitkiin, ket-junpituudeltaan väliltä Cg-C12 oleviin rasvahappoihin, erityisesti parillisen hiiliatomien lukumäärän omaaviin, ja jonka jodiluku on pienempi kuin 1, ja joka on mieluimmin niukasti raskasmetalli-ioneja sisältävää neutraaliöljyä. Sellaiset triglyseridiseokset ovat hyvin pysyviä. Sinänsä tunnettujen triglyseridiseosten, jotka perustuvat tyydytettyihin ketjunpituudeltaan väliltä Cg-C^ °leviin kasvirasvahap-poihin, Cg-ketjunpituuksien määrä on korkeintaan 3 %, mikä voidaan jättää huomioon ottamatta. Niiden jodiluku on alle 1, ja raskasmetalliako alle 0,001 %. Happoluku on alle 0,1. Nämä arvot ovat erityisen edullisia pyrittäessä välttämään itsehapetusta. Hakijan kokeet ovat lisäksi osoittaneet, että mainittua itsehapetusta ei voida vähentää tai poistaa pelkällä kantaja-aineen oikealla valinnalla, vaan siten, että lisäksi keksinnön mukaisesti 4-metyyli-5-(2'-kloorietyyli)-ti-atsolin sekoittaminen kantaja-aineeseen tapahtuu ilman hapen ollessa poissuljettuna, mieluimmin inertissä kaasuilmakehässä, erityisen mielellään typpi-ilmakehässä. Mieluimmin menetellään tällöin keksinnön mukaisesti siten, että saatu seos pidetään edelleen inertissä kaasu-ilmakehässä, erityisen mielellään typpi-ilmakehässä, kunnes sillä on täytetty pehmeägelatiinikapselit ilmakuplattomasti. Mahdollisesti voidaan kuitenkin käyttää myös muita inerttejä kaasuja, kuten kryptonia, argonia tai neonia, mutta typpi on kuitenkin hintasyistä sopivin.

Inertin kaasun käyttö estää tai vähentää hajoamisreaktioi- ta, joita ilman hapen läsnäolo aiheuttaa tahi kiihdyttää. Kuten jo on mainittu, kiihdyttävät tällaisia itsehapetusreaktioita etupäässä reaktiokykyisten ryhmien (esim. olefiinikaksoissidosten, vapaiden happojen) läsnäolo tai raskasmetalli-ionit. Koska nyt toisaalta kantaja-aine on valittu siten, että se on tällaisten reaktioiden suhteen mahdollisimman neutraali (erityisesti jodiluku pienempi kuin 1, happoluku pienempi kuin 0,1, raskasmetalli-ionijäänteitä vähemmän kuin 0,001 %), ja toisaalta hapen pääsy on estetty sekä sekoituksen että myös sen jälkeen seoksen säilytyksen ja täytön aikana, ovat mainitunlaiset itsehapetusreaktiot vähentyneet siinä määrin, että saatua seosta voidaan säilyttää useita vuosia. Pehmeägelatii-nikapselien täyttö ilmakuplattomasti CMT-emäksen ja kantaja-aineen seoksella voidaan suorittaa helposti esimerkiksi leikkausmenetelmällä. Haurauden välttämiseksi on tarkoituksenmukaista, että pehmeäge- 5 66120 latiinikapselit sisältävät pehmennysaineitä, kuten sorbitolia tai glyseriiniä. Erityisen sopiva gelatiinikapselin tiheys, myös hajun läpäisevyyden kannalta, saatiin aikaan käyttämällä glyseriinipitoi-suutta 10-20 paino-% ja sorbitolipitoisuutta 10-20 paino-%.

Keksinnön kannalta erityisen sopivista triglyseridiseoksista ovat erikoisen sopivia sellaiset, joiden rasvahappokoostumus on seuraavanlainen:

Kapronihappo (Cg) 3 % maks. 3 % maks. 3 % maks.

Kapryylihappo (Cg) 65-80 % 50-65 % 65-80 %

Kapriinihappo (C^q) 15-30 % 30-45 % 15-30 %

Lauriinihappo (C^) 3 % maks. 5 % maks. 3 % maks.

Linolihappo (C-^g) -

Patentinhakijan kokeet ovat osoittaneet, että kantaja-aineena voidaan näiden yhdisteiden lisäksi käyttää myös glyseriinitrikapri-naattia tai glyseriinitrilauraattia.

Jos halutaan erityisiä farmaseuttisia tarkoituksia varten aikaansaada vaikuttaja-aineen ohjattu vapautuminen suolistossa, on tarkoituksenmukaista päällystää kapseli mahanestettä kestävällä, suoleen liukenevalla päällysteellä, joka on valmistettu polymetak-ryylihappojohdannaisesta tai selluloosajohdannaisesta, erityisen mielellään hydroksipropyylimetyyliselluloosaftalaatista ja dibutyy-liftalaatista.

CMT-emäksen ja kantaja-aineen sekoitussuhde voi keksinnön mukaan vaihdella laajojen rajojen sisällä. Yleensä rajoittaa kantaja-aineen vähimmäispitoisuutta vaadittu stabilointivaikutus. Kantaja-aineen vähimmäispitoisuus seoksessa on noin 20 paino-%. Jos tämä raja alitetaan ei stabilointivaikutus ole enää riittävä. Kantaja-aineen enimmäismäärää ei yleensä ole rajoitettu, paitsi suun kautta annettavien kapselien ollessa kysymyksessä. Tässä tapauksessa seoksen kantaja-ainepitoisuuden ollessa yli 80 % tulee kapselin kokonaistilavuus niin suureksi, että on kyseenalaista, voiko antaminen tapahtua suun kautta.

Kerta-annokseksi gelatiinikapseliin sijoitettava CMT-emäksen ja kantaja-aineen seoksen määrä riippuu kulloinkin käyttötapauksesta. Yleensä voidaan määriä 300 - 1 000 mg pitää sopivampina.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä vielä lähemmin.

6 66120

Esimerkki 1 10 litran jaloteräksiseen sekoituskattilaan, johon on mahdollista saada aikaan vakuumi, sijoitetaan 4,0 kg neutraaliöljyä Miglyol 812 (tyydyttyneistä, ketjunpituudeltaan keskipitkistä kasvirasvaha-poista saatujen triglyseridien seos), ja sen jälkeen, kun ilma on poistettu aikaansaamalla tyhjiö (10 min., 133 Pa) johdetaan sisään teknisesti puhdasta typpeä. Typpi johdetaan tällöin jakelijan avulla suoraan neutraaliöljyyn. Pitäen edelleen yllä typpivirtaa, lisätään nyt sekoittaen 4,0 kg juuri tislattua hapetonta CMT-emästä, jonka kloridi-pitoisuus on noin 0,01 %, keskeytyksettä hitaasti, nimittäin 200 ml/ min. Kun on sekoitettu vielä 10 minuuttia, siirretään seos jaloeteräk-sisiin kuljetusastioihin. Tämän jälkeen seoksella täytetään ilmakup-lattomasti mahanesteeseen liukenevat pehmeägelatiinikapselit. Täyttömäärä kapselia kohti on 500 mg seosta.

Esimerkki 2 5 litran lasiseen sekoitusastiaan, johon voidaan aikaansaada tyhjiö (pyörökolvi) sijoitetaan 1,5 kg trikapriinia (glyseriini-trikaprinaattia), ja sen jälkeen, kun ilma on poistettu aikaansaamalla tyhjiö (10 min., 133 Pa ), johdetaan sisään teknisesti puhdasta argonia. Argon johdetaan tällöin jakelijan avulla suoraan tri-kapriiniliuokseen. Pitäen edelleen yllä argonvirtaa lisätään nyt jatkuvasti tiputtaen, sekoittaen 1,0 kg juuri tislattua hapetonta CMT-emästä, jonka kloridipitoisuus on noin 0,01 %, 10 minuutin kuluessa, ja seos siirretään sitten argonilla kaasutettuun 3 litran lasipulloon. Tämän jälkeen täytetään seoksella ilmakuplattomasti mahanestettä kestävät, suoleen liukenevat pehmeägelatiinikapselit, joista jokainen tulee näin sisältämään 600 mg seosta.

Esimerkki 3 10 litran jaloteräksiseen sekoituskattilaan, johon on mahdollista aikaansaada tyhjiö, sijoitetaan 4,0 kg trikapryliinia (glyse-riini-trikaprylaattia) ja käsittelyä jatketaan esimerkin 1 mukaisesti .

Esimerkki 4 10 litran jaloteräksiseen sekoituskattilaan, johon on mahdollista aikaansaada tyhjiö, sijoitetaan 2,0 kg trilauriinia (glyse-riinitrilauraattia) ja 2,0 kg trikapriinia (glyseriini-trikaprinaat-tia) ja käsittelyä jatketaan esimerkin 1 mukaisesti.

7 66120

Esimerkki 5 5 litran lasiseen sekoitusastiaan, johon on mahdollista saada aikaan tyhjiö, (pyörökolviin) sijoitetaan 1,5 kg neutraaliöljyä, joka on tyydytettyihin rasvahappoihin perustuva triglyseridiseos, ja käsittelyä jatketaan esimerkin 2 mukaisesti.

Lisäksi hakija on tehnyt kokeita osoittaakseen, että HCl:n lohkeamisen lisäksi muutkin reaktiot voivat aiheuttaa CMT-emäksen hajoamista.

HCl:n lohkeamisen mekanismi on esitetty seuraavassa reaktio-kaaviossa:

CHU — C-N CH,.—C-N

3 II II _.> 3 II II

Cl—0Ho— CH~—C CH 7 CH2 = CH—C CH + HC1 2 2 \s/

Jos CMT-emäksen hajoaminen johtuu ainoastaan HCl:n lohkea-misesta, ei saa esiintyä reaktiotuotteita, jotka sisältävät sitoutunutta kloridia.

Juuri tislattua Clomethiazol-emästä pidettiin seitsemän päivää 70°C:ssa, erottunutta ruskeaa saostumaa (hajoamistuotteita) pestiin bentseenillä ja tutkittiin. Saostuman kokonaiskloridin ja vapaan kloridin määritysten, kaasukromatografian avulla suoritetun absorboituneen CMT-emäksen + CMT-HCl:n määrityksen ja 1H-NMR-spekt-roskopian avulla suoritettujen tutkimusten avulla saatiin seuraava tulos: Määritetty kokonaiskloridin määrä on 17 % suurempi kuin summa, joka muodostuu vapaan kloridin ja absorboituneen CMT-emäksen ja CMT-HCl:n kloridin määristä. Tämän 17 %:n suuruisen kloridiyli-määrän täytyy siten olla sitoutunut CMT-emäksen hajoamistuotteisiin. Tutkittaessa saostumaa ^H-NMR-spektroskopian avulla vahvisti yllä olevaa tulosta alifaattisista protoneista aiheutuvien lisäsignaalien esiintyminen, joiden aiheuttajaprotonien ei voida ajatella kuuluvan HCl:n lohjetessa muodostuviin mahdollisiin hajoamistuottei-siin.

Valmistettiin kaksi CMT-emäksen ja neutraaliöljyn seosta.

8 66120

Seos I: 83,5 paino-% CMT-emästä, 16,5 paino-% neutraaliöljyä.

Seos II: 31,2 paino-% CMT-emästä, 68,8 paino-% neutraaliöljyä.

Koejärjestely 1: Seoksia I ja II kuumennettiin lasikolvissa 70°C:ssa typpi-ilmakehässä 100 ja 170 tuntia ja CMT-emäk-sen hajonneisuus määritettiin.

CMT-emäksen hajoaminen prosentteina 100 tuntia 170 tuntia

Seos I 3,5 4,9

Seos II <£.0,5% <£.0,5 %

Koejärjestely 2: Seoksia I ja II kuumennettiin lasikolvissa ilman läsnäollessa 70°C:ssa 170 tuntia ja CMT-emäksen hajonneisuus määritettiin.

CMT-emäksen hajoaminen prosentteina 170 tunnin kuluttua

Seos I 14,1 %

Seos II 3,7 %

Verrattaessa näitä kahta koejärjestelyä voidaan havaita, että neutraaliöljyn lisääminen tyydytettyihin rasvahappoihin perustuvan triglyseridiseoksen muodossa vähentää CMT-emäksen hajoamista. Neutraaliöljypitoisuuden suuretessa tämä stabilointivaikutus vahvistuu.

Sulkemalla pois ilman happi voidaan huomattavasti lisätä sta-bilointivaikutusta. Tämä osoittaa, että ilman happi osallistuu oleellisena CMT-emäksen hajotukseen, ja itsehapetusmekanismit alkavat tällöin vaikuttaa. Jos HCl:n lohkeaminen olisi ainoa tapahtuva hajoamisreaktio, täytyisi ilman läsnäollessa ja typpi-ilmakehässä saatujen arvojen olla yhdenmukaisia.

Koejärjestelyssä 1 saatujen erinomaisten tulosten johdosta täytettiin pehmeägelatiinikapseleita (koostumus: 67 paino-% gelatiinia, 19 paino-% glyseriiniä, 14 paino-% sorbitolia) 330 mg:11a seosta (192 mg CMT-emästä, 138 mg neutraaliöljyä) typpikaasulla huuhdellen, ja niitä säilytettiin 16 kuukauden ajan 20°C:ssa, 30°C:ssa, 40°C:ssa ja 50°C:ssa. Tämän jälkeen määritettiin CMT-emäksen hajonneisuus.

CMT-emäksen hajonneisuus laskettiin kaikissa tapauksissa kaasukromatografian avulla määritetyn vielä hajoamattoman emäksen mää- 9 66120 rän perusteella. Tällä määritystavalla on vapaan kloridin määritykseen perustuvaan menetelmään verrattuna se etu, että huomioiduksi tulevat myös mahdolliset hajoamisreaktiot, joissa kloridi jää sitoutuneeksi hajoamistuotteeseen. Suoritettaessa vertailevia hajonnei-suuden määrityksiä vapaan kloridin määrän perusteella havaittiin, että kaasukromatografian avulla määritetyt hajonneisuusarvot olivat hiukan korkeampia.

Tulos: Lämpötila CMT-emäksen hajoaminen prosentteina 20°C 3,1 % 30°C 8,3 % 40°C 9,6 % 50°C 22,9 %

Saatuja arvoja käyttäen tehtiin kemiallisen reaktiokinetiikan lakien perusteella, käyttäen apuna alaa koskevaa kirjallisuutta, säilyvyydenennustuslaskelma. Huoneen lämpötilassa voidaan säi-lyvyyden olettaa olevan neljä vuotta. Kaikki kapselit olivat lämpökäsittelyn jälkeen täysin hajua läpäisemättömiä.

Farmaseuttisten tuotteiden kemiallinen pysyvyys on tärkein kriteerio hoitoturvallisuuden ja taloudellisen lääkkeiden valmistuksen sekä niiden myynnin kannalta, ja on siten rekisteröintiviran-omaisten perusvaatimus. Todistettavissa oleva säilyvyyden pidenty-neisyys parantaa siten oleellisesti lääkeaineen arvoa.

Claims (4)

10 66120 1. 4-metyyli-5-(2'-kloorietyyli)-tiatsolin stabilointimene- telmä, jossa mainittu yhdiste sekoitetaan myrkyttömän kantaja-aineen kanssa, joka sisältää vähintään yhden glyseridin, mieluummin öljyn, tunnettu siitä, että kantaja-aineena käytetään vähintään yhtä puolittain tai kokonaan synteettistä, tyydytettyjen, ketjun-pituudeltaan väliltä cg"C^2 olevien rasvahappojen triglyseridiä tai triglyseridiseosta, jonka jodiluku on mieluimmin pienempi kuin 1, ja jota on 20 - 80 paino-% seoksesta, ja että sekoittaminen suoritetaan ilman hapen ollessa poissuljettuna, mieluimmin inertissä kaasuatmosfäärissä, edullisimmin typpiatmosfäärissä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että käytetään triglyseridejä, jotka ovat muodostuneet parillisen hiiliatomien lukumäärän omaavista rasvahapoista, mieluimmin niukasti raskasmetalli-ioneja sisältävää neutraaliöljyä.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kantaja-aineena käytetään glyseriinitrikap-rinaattia ja/tai glyserolitrilauraattia.

4. Jonkin patenttivaatimuksista 1, 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ilman happi pidetään poissuljettuna tai vastaavasti inerttiä kaasuatmosfääriä, edullisesti typpiatmosf ääriä, pidetään yllä, kunnes seos on pantu pehmeägelatiini-kapseleihin.