FI116620B - Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset - Google Patents

Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset Download PDF

Info

Publication number
FI116620B
FI116620B FI963045A FI963045A FI116620B FI 116620 B FI116620 B FI 116620B FI 963045 A FI963045 A FI 963045A FI 963045 A FI963045 A FI 963045A FI 116620 B FI116620 B FI 116620B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
group
formula
alkyl
chain
carbon atoms
Prior art date
Application number
FI963045A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI963045A0 (fi
FI963045A (fi
Inventor
Andrew Stuart Janoff
Yong Wei
Eric Mayhew
Imran Ahmad
Original Assignee
Transave Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Transave Inc filed Critical Transave Inc
Publication of FI963045A0 publication Critical patent/FI963045A0/fi
Publication of FI963045A publication Critical patent/FI963045A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI116620B publication Critical patent/FI116620B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2984—Microcapsule with fluid core [includes liposome]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

116620
Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset 5 Keksinnön ala Tämä keksintö kohdistuu farmaseuttisesti aktiivisiin sfingoli-pidikoostumuksiin, ja farmaseuttisesti aktiivisia sfingolipi-diyhdisteitä sisältäviin liposomeihin, joita voidaan käyttää syöpää sairastavien eläinten hoitoon.
10
Monisoluisten organismien solukuolema voi olla satunnainen vaste ulkoiseen vammaan tai se voi olla ohjelmoitu vaste sisäiseen tai ulkoiseen ärsykkeeseen. Kuoliota tai satunnaista solukuolemaa tavataan useimmiten silloin, kun solut kuolevat 15 organismin äkillisen tai vakavan vamman, esim. fysikaalisen tai kemiallisen vamman, jatkuvan liikälämpöisyyden tai iske-mian tuloksena (ks. esim., J. Cohen, Immunol. Today. 14(3):126 (1993)); J. Marx, Science 259: 750 (1993)). Plasmakalvon vaurio voi aiheuttaa sen, että solut menettävät kykynsä 20 säädellä osmoottista painettaan, mistä voi johtua solujen hajoaminen. Siitä johtuva solun sisällön vuotaminen voi aiheuttaa lisäksi ympäröivien solujen vaurioita ja voi herättää • * ·.· · tulehdusvasteen solujätteiden poispuhdistumiselle.
• · * t • · I « 25 Sen sijaan apoptoosi kuvaa ohjelmoitua tapahtumasarjaa, joka • · * johtaa solukuolemaan f ragmentoi tumalla kalvoon sitoutuneiksi • · . .·, partikkeleiksi; sitten muut solut fagosytoivat nämä partikke- • · · * « · .j·, lit (katso esim. Stedman's Medical Dictionary (Illustrated), • o » supra). Solut joutuvat apoptoosiin tavallisesti määritetyissä . . 30 olosuhteissa, kuten itse-reaktiivisten T-solujen eliminaatio, ;· · puoliintumisiältään lyhytikäisten solujen kuolema (esim. neut- **·* rofiilit) , solujen, joista on poistunut kasvutekijä, involuu- V; tio, morfogeneettisten solujen kuolema alkionkehityksen aikana ja soluvälitteisen sytotoksisuuden solukohteiden kuolemat 35 (katso esim. J. Cohen, supra).
! * | » »
Apoptoosiin joutuvat solut voivat hajota apoptoottisiksi kappaleiksi, jotka ovat solufragmentteja, jotka säilyttävät kai- 116620 2 vonsa ja kykenevät säätämään osmoottisia paineitaan. Toisin kuin kuoliosoluissa niiden solusisällöt eivät vuoda ja näin ollen tulehdusvasteen heräämistä ei esiinny. Apoptoottisissa soluissa on tavalliset hajonneet plasmakalvot ja tiivistyneet 5 hajonneet ytimet. Näiden solujen ydinkromatiini on fragmentoi-tunut satunnaisesti nukleosomien välissä apoptoosin aikaisen endonuk1eaasiaktivoitumisen tuloksena.
Vaikka transkriptio lakkaa apoptoottisissa soluissa, solukuo-10 lemaa esiintyy nopeammin kuin mitä odotettaisiin pelkästään transkription lakkaamisesta. Tämä osoittaa, että soluprosessit osallistuvat myös transkription päättymisen lisäksi apoptoo-siin. Itse geenin ilmentymistä voidaan tarvita apoptoosiin liittyvien morfologisten muutosten esiintymiseen (katso esim., 15 J. Cohen, supra). Vaihtoehtoisesti transkription päättymisen inhibointi voi indusoida itse apoptoosin. Lisäksi proteiini-synteesin inhibointi ei näytä aiheuttavan millään tavalla joidenkin solujen apoptoosia. bcl-2-onkogeenin ilmentyminen voi inhiboida muutoin erilaisten ärsykkeiden aiheuttamaa apoptoo-20 siä ja siten ne voivat osallistua syövän kehittymiseen. Näin ollen bcl-2:n ilmentymisen inhibointia voidaan tarvita apop- toosin indusoimiseen (katso esim. J. Marx, supra, J. Cohen, ··' ·' supra; G. Williams ja C. Smith, Cell 74:777 (1993): M. Bari- naga, Science 259: 762 (5. helmikuuta, 1993)). C-myc-proteii- • * » 2 5 nin tiedetään stimuloivan solun proli f eräät iota; se voi kui-
· I
j ‘ tenkin stimuloida myös apoptoosia muiden proliferatiivisten ; ärsykkeiden puuttuessa. p53, jonka on ajateltu vaimentavan kasvainkasvua, voi myös stimuloida apoptoosia. C-fas, kasvain- kuolitekijän (TNF) kanssa homologinen kalvoja läpäisevä pro- •t (*t 30 teiini, voi myös indusoida apoptoosia, kuten voi itse TNF.
• · > * · » t • * »
• I
TNF on monokiiniproteiini, jota monosyytit ja makrofagit val- mistavat. On olemassa kaksi tunnettua rakenteellisesti ja funktionaalisesti samankaltaista TNF-proteiinia, TNF-alfa ja 35 THF-beeta, jotka kumpikin sitoutuvat samoihin solunpintaresep-toreihin. TNF:n sitoutuminen näihin reseptoreihin johtaa moninkertaisten signaalin siirtoreittien aktivoitumiseen mukaan lukien sfingomyelinaasin aktivoituminen (katso esim. M. Raines 116620 3 et ai., J. Biol. Chem. 268 (20):14572,- L. Obeid et ai.,
Science 259:1756 (12. maaliskuuta, 1993); H. Morishige et ai., Biochim. Biophys. Acta. 1151:59 (1993); J. Vilcek ja T. Lee, J. Biol. Chem. 266(12):1713 (1991); Dbaibo et ai., J. Biol.- 5 Chem. 268(24):17762 (1993); R. Kolesnik, Trends Cell. Biol.
2:232 (1992); J. Fishbein et ai., J. Bioll. Chem. 268 (13):9255 (1993)) .
Keksinnön tekijät ovat havainneet, että seramidikonsentraation 10 lisäykset voivat stimuloida apoptoosia. Seramidit ovat sfingo-lipidien luokka, joka käsittävät sfingoidi-, esim. sfingosii-ni-, perustan rasvahappojohdannaiset (katso esim. Stedman's Medical Dictionary (Illustrated), 24. painos (J.V. Basmaijan et ai., toim.) , Williams ja Wilkins, Baltimore (1982), s. 15 99)). Erilaisille seramideille ovat tunnusomaisia erilaiset rasvahapot, jotka ovat kytkeytyneet sfingoidiperustaan. Esimerkiksi steariinihappoa voi olla kytkeytyneenä sfingosiinin amidiryhmään synnyttäen seramidin CH3(CH2)12CH=CH-CHOH-CH (CH2OH) -NH-CO- (CH2) 16CH3. Sf ingoidiperustaan voi olla kytkey-20 tyneenä myös lyhyempi- tai pidempiketjuisia rasvahappoja.
Keksijät ovat myös havainneet, että tiettyjen kemiallisten ryhmien kiinnittäminen sfingolipideihin ja seramideihin täl-: laisten yhdisteiden muodostamiseksi voi inhiboida seramidien biokonversion sfingomyeliineiksi ja voi siten johtaa seramidi-: ,* 25 konsentraatioiden apoptoosia stimuloivaan lisääntymiseen.
» · ; e. Seramideja löydetään kaikista eukaryoottisista solukalvoista ja niiden tiedetään osallistuvan erilaisiin kriittisiin solu-prosesseihin. Lisäksi tietyillä sfingolipidiyhdisteillä on . . 30 havaittu olevan merkitystä estettäessä soluproliferaatiota 0.
Kuitenkaan mikään näistä viitteistä ei opeta keksijöiden kemiallisia yhdisteitä eikä liposomeja tai niiden käyttöä : : : stimuloitaessa solukuolemaa.
* · 35 Keksinnön yhteenveto * Saadaan aikaan sfingolipidiyhdiste, jonka kaava on R^Y^CHZ1- -CH(NY2Y3)-CH2-Z2 , jossa 4 116620 R1 on suoraketjuinen alkyyli-, alkenyyli- tai alkinyyliryhmä, jossa on 8-19 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa, Y1 on -CH=CH-, -C=C- tai -CH(OH)CH(OH)-, 5 Z1 on OH tai fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, Z2 on fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, jolla 10 on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, X1 on C (O) H, C02H, CH3, C(CH3)3, Si(CH3)3, SiCH3 (C (CH3) 3) 2,
Si (C (CH3) 3) 3, Si (P04) 2C (CH3) 3, f enyyliryhmä, alkyylillä substi-tuoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, 15 alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, aminoryhmä, fluori, kloori tai ryhmä, jonka kaava on C(R3R4)OH, ja kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, X2 on valittu ryhmästä, joka koostuu CH2-:sta, C (CH3) 2-: sta, 20 Si (P04) 2- : sta, Si (CH,) 2- : sta, SiCH3P04-: sta, C(0)-:sta, ja S (O) 2- : sta, • » • · · • · . 3 X on valittu ryhmästä, joka koostuu -C (O) H: sta, -C02H:sta, ·;;; -CH3:sta, -C (CH3) 3: sta, -Si (CH,),: sta, -SiCH3 (C (CH,) 3) 2: sta, *···* 25 -Si (C (CH3) 3) 3: sta, -Si (P04) 2C (CH3) 3: sta, fenyyliryhmästä, alkyy- » · · .* Iillä substituoidusta f enyyliryhmästä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliket jussa, alkyyliket justa, jossa on 1-6 hiiltä, ami-: noryhmästä, kloorista, fluorista, tai ryhmästä, jonka kaava on C(R3R4)OH, jossa kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliket ju, > 30 jossa on 1-6 hiiltä, fenyyliryhmä tai alkyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliket jussa, Y2 on H, fenyyliryhmä, alkyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliket jussa, tai alkyyliket ju, jossa 35 on 1-6 hiiltä, Y3 on H tai ryhmä, jonka kaava on -C(0)R2 tai -S(0)2R2, 5 116620 R2 on suoraketjuinen alkyyli-, alkenyyli- tai alkinyyliryhmä, jossa on 1-23 hiiliatomia ketjussa, edellyttäen että kun Z2 on amino, R2 on alifaattinen ketju, 5 jossa on 1-9 tai 19-23 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa.
R1 on edullisesti alkyyliryhmä, edullisemmin CH3(CH2)12-, Y1 on -CH=CH-, Y2 on H, Y3 on -C(0)R2 ja R2 on alkyyliketju.
10 Fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä on edullisesti -0C(0)CH3, -0C(0)CH2CH2CH3, -0C(0)CH(CH3)CH3 tai -OSi (CH3) 2C (CH3) 3, edullisemmin -OSi (CH3) 2C (CH3) 3. Fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboivien ryhmien kaava voi olla myös -X1 tai -OX1, jossa X1 on C(0)H, C02H, CH3, C(CH3)3, Si(CH3)3, 15 SiCH3 (C (CH3) 3) 2, Si (C(CH3)3)3, Si (P04) 2C (CH3) 3, f enyyliryhmä, al- kyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, ami-no-osuus, fluori, kloori tai ryhmä, jonka kaava on C(R3R4)OH, ja kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliketju, jossa on 1-6 20 hiiltä.
. . Keksinnön mukaisella yhdisteellä on edullisesti kaava ;,V CH3(CH2)12-CH=CH-CH2Z1-CH(NHY3) -CH2-Z2 . Y3 on silloin ryhmä, jonka • i t ·;;; kaava on -C(0)R2, edullisemmin -C (O) (CH2) 4CH3. Z2 on edulli- *·..·* 25 sesti -OSi(CH3)2(CH3)3, -OSi (P04) 2C (CH3) 3, -C(0)CH3 tai : V oc(0)ch2ch2ch3.
* • ♦ * » I I • * » • #i · Saadaan aikaan myös farmaseuttinen koostumus, joka käsittää tämän keksinnön mukaista yhdistettä ja farmaseuttisesti hyväk- ; j’: 30 syttävää kantoainetta; koostumus voi käsittää myös muuta * « * · bioaktiivista ainetta. Hakemuksessa kuvataan menetelmä bioak- lii tiivisen aineen antamiseksi eläimelle, edullisesti ihmiselle, ’*’** joka menetelmä käsittää tämän yhdisteen antamisen eläimelle; I · '...· menetelmä voi käsittää muun bioaktiivisen aineen antamisen 35 eläimelle.
» · · I ·
Eläin voi olla syöpää sairastava, jolloin menetelmä käsittää määrän koostumusta antamisen, joka käsittää syövän vastaisesti
• I
6 116620 tehokkaan määrän yhdistettä. Tyypillisesti syövän vastaisesti tehokas määrä yhdistettä on vähintään noin 0,1 mg yhdistettä eläimen ruumiin painokiloa kohti. Tavallisesti syövän vastainen tehokas määrä on noin 1 mg - noin 50 mg kiloa kohti.
5 Hoidettavat syövät käsittävät rajoituksetta aivo-, rinta-, keuhko-, munasarja- paksusuoli-, vatsa- tai eturauhassyövän ja ne voivat olla sarkoomia, karsinoomia, neuroblastoomia tai glioomia. Lääkeresistenttejä syöpiä voidaan myös hoitaa.
10 Saadaan aikaan liposomi, jossa on kaksoiskerros, joka koostuu lipidistä ja yhdisteestä, jolla on kaava R1-Y1-CHZ1-CH(NY2Y3) - CH2-Z2, jossa R1, Y1, Y2, Z1 ja Z2 ovat kuten on määritelty edellä, Y3 on H tai ryhmä, jolla on kaava -R2, -C(0)R2 tai -S(0)2R2, jossa R2 on kuten on määritelty edellä, ja jossa 15 kaksoiskerros käsittää vähintään noin 5 mooli-% yhdistettä. Y3 on edullisesti R2, joka on edullisesti -(CH2)3CH3, -(CH2)5CH3, - (CH2) 7CH3 tai - (CH2) 9CH3 ja edullisemmin R2 on -(CH2)5CH3 tai -C(0)R2, joka on edullisesti C (O) (CH2) 4CH3. Edullisesti tämän keksinnön mukaisessa liposomissa vähintään yksi Z1 ja Z2 on 20 fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, kuten -0C(0)CH3, -0C(0)CH2CH2CH3, -0C(0)CH(CH3)CH3 tai -OSi (CH3) 2C (CH3) 3.
. t. Edullisemmin fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä » * · "V on OSi (CH3) 2C (CH3) 3. Edullisimmin liposomi käsittää yhdisteen, ·;;; jonka kaava on CH3 (CH2) ^-C^CH-CH^-CH (NHY3) -CH2-Z2.
*·.·*’ 25 .* Liposomikaksoiskerros käsittää edullisesti vähintään noin 10 » mooliprosenttia yhdistettä. Kaksoiskerros voi käsittää vitani ί miinia D3; tällaiset kaksoiskerrokset käsittävät edullisesti noin 1 mooliprosenttia vitamiinia D3. Kaksoiskerros voi myös ; 30 käsittää pääryhmämodifioidun lipidin. Liposomi voi käsittää * * » » .**·. muuta bioaktiivista ainetta ja se voidaan dehydratoida.
* i *·’·* Saadaan aikaan myös farmaseuttinen koostumus, joka käsittää tämän keksinnön mukaisen liposomin ja farmaseuttisesti hy-35 väksyttävää kantoainetta. Hakemuksessa kuvataan menetelmä yhdisteen antamiseksi eläimelle, joka menetelmä käsittää koostumuksen antamisen eläimelle. Menetelmää voidaan käyttää syöpää sairastavan eläimen hoitamiseen, jolloin annos koostumusta 116620 7 annetaan eläimelle ja jolloin annos käsittää syövän vastaisen määrän liposomia. Tyypillisesti annos käsittää vähintään noin 1 mg liposomia eläimen ruumiin painokiloa kohti. Tavallisesti annos käsittää noin 1 mg per kg - noin 1000 mg per kg.
5
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa .
Kuvioiden lyhyt selostus 10 Kuvio 1. Seramidimetabolismi. Cer: seramidit; SM:
Kuvio 2. Fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboivan ryhmän käsittävät seramidit. A. Tyypin III Cer-l-TBDMS; C2 Cer-l-TBDMS; C6 Cer-l-TBDMS; C2 Cer-l-TBDPS; B: 3-TBDMS
C6-Cer; 1-TBDMS C6-Cer; 1,3 DiTBDMS C6-Cer (YWI51.a); 1-TBDMS, 15 3-asetaatti C6-Cer; 1-TBDMS, 3-butyraatti, C6-Cer. C: 1-ase- taatti-3-oni C6-Cer; 4,5-dioliC6-Cer. D: N-C4-sfingosiini: n-heksyylisfingosiini; n-C8-sfingosiini; N-C10-sfingosiini.
Kuvio 3. Erilaisten liposomaalisten seramiini/sfingomyelii-20 niformulaatioiden vaikutus HL60-solujen kasvuun. Elinkykyisten solujen määrä (per ml x 10000, y-akseli) määritettiin lipi-. , diannoksilla 100 pm ja 200 pm (z-akseli). X-akseli: verrokki,
» » I
munan fosfatidyylikoliini/kolesteroli (EPC/Chol), EPC/Chol/- t i t ;;; C2-seramidi (C2), EPC/Chol/vitamiini D3 (D3), EPC/Chol/D3/C2.
25 EPC/Chol/C6-seramidi (C6) , EPC/Chol/D3/C6, SM/Chol ja : SM/Chol/D3-liposomit.
• · · « · · « » »
i ) I
V : Kuvio 4. Erilaisten liposomaalisten seramiini/sfingomyelii- niformulaatioiden vaikutus P388-solujen kasvuun. Elinkykyisten | 30 solujen määrä (per ml x 10000, y-akseli) määritettiin lipi- I t | | diannoksilla 50 pm, 100 pm ja 200 pm (z-akseli). X-akseli:
t t I
verrokki, munan fosfatidyylikoliini/kolesteroli (EPC/Chol), ’ |* EPC/Chol/C2-seramidi (C2), EPC/Chol/vitamiini D3 (D3), EPC/Chol/D3/C2 . EPC/Chol/C6-seramidi (C6) , EPC/Chol/D3/C6, * 35 sf ingomyeliini (SM)/Chol ja SM/Chol/D3-liposomit.
*
Kuvio 5. Erilaisten liposomaalisten seramiini/sfingomyelii-niformulaatioiden vaikutus U937-solujen kasvuun. Elinkykyisten ! · » · 1 116620 8 solujen määrä (per ml x 10000, y-akseli) määritettiin lipi-diannoksilla 50 pm, 100 pm ja 200 pm (z-akseli) . X-akseli: verrokki, munan fosfatidyylikoliini/kolesteroli (EPC/Chol), EPC/Chol/C2-seramidi (C2), EPC/Chol/vitamiini D3 (D3), 5 EPC/Chol/D3/C2, EPC/Chol/C6-seramidi (C6), EPC/Chol/D3/C6, sfingomyeliini (SM)/Chol ja SM/Chol/D3-liposomit.
Kuvio 6. Erilaisten liposomaalisten seramiini/sfingomyelii-niformulaatioiden vaikutus RPMI-7666-solujen kasvuun. Elinky-10 kyisten solujen määrä (per ml x 10000, y-akseli) määritettiin lipidiannoksella 200 pm (z-akseli). X-akseli: verrokki, munan fosfatidyylikoliini/kolesteroli (EPC/Chol), EPC/Chol/C2-sera-midi (C2), EPC/Chol/vitamiini D3 (D3), EPC/Chol/D3/C2, EPC/Chol/C6-seramidi (C6), EPC/Chol/D3/C6, sfingomyeliini 15 (SM)/Chol ja SM/Chol/D3-liposomit.
Kuvio 7. Erilaisten liposomaalisten seramiini/sfingomyeliini f ormulaatioiden vaikutus normaaleihin (RPMI-) ja syöpä-(U-937)-solujen kasvuun. Elinkykyisten solujen määrä kussakin 20 viljelmässä määritettiin ja annetaan prosenttina suhteessa verrokkiin (y-akseli).
*;· Kuvio 8. Liposomaalisten seramidien terapeuttinen vaikutus hiiriin. X-akseli: päiviä liposomi/verrokin antamisen jälkeen: 25 y-akseli; henkiinjäämisprosentti hoitoryhmässä. Rengas neliös- • · . sä: verrokkihiiret, joille annettiin HEPESillä puskuroitua • · · suolaliuosta; umpinaiset neliöt: lipo s omaa linen vitamiini D3 ; • · · avotimantti: liposomaalinen C2-seramidi; umpitimantti: liposo-maalinen C6-seramidi.
30
Kuvio 9. A549-solujen in vitro -herkkyys C6-seramidijohdan-naisille. A: yhden tunnin altistus; B: neljän tunnin altistus; • · C: kahdeksan tunnin altistuas; D: 24 tunnin altistus; E: 48 « a tunnin altistus; X-akseli (seramidijohdannainen) konsentraatio * * · 35 (mikromoolinen) ; y-akseli: solukasvuprosentti. "X": N-C8-sfin- ’ · gosiini; timantti: 1-asetaatti, C6-seramidi; neliö: 1-buty- raatti, C6-seramidi; kolmio: 1-isobutyraatti, C6-seramidi.
116620 9
Kuvio 10. A549-solujen in vitro -herkkyys 1-asetaatille, C6-seramidille eripituisina altistusaikoina. X-akseli lääke-konsentraatio (mikromoolinen); y-akseli: kasvuprosentti. Ti mantti: yksi tunti; neliö: neljä tuntia; kolmio: 8 tuntia; X: 5 24 tuntia, tähti 48 tuntia.
Kuvio 11. A549-solujen in vitro -herkkyys 1-butyraatille, C6-seramidille eripituisina altistusaikoina. X-akseli lää-kekonsentraatio (mikromoolinen); y-akseli: kasvuprosentti.
10 Timantti: yksi tunti; neliö: neljä tuntia; kolmio: 8 tuntia; X: 24 tuntia, tähti 48 tuntia.
Kuvio 12. A549-solujen in vitro -herkkyys 1-isobutyraatille, C6-seramidille eripituisina altistusaikoina. X-akseli lääke-15 konsentraatio (mikromoolinen); y-akseli: kasvuprosentti. Ti mantti: yksi tunti; neliö: neljä tuntia; kolmio: 8 tuntia; X: 24 tuntia, tähti 48 tuntia.
Kuvio 13. A549-solujen in vitro -herkkyys N-C8-sfingosiinille 20 eripituisina altistusaikoina. X-akseli lääkekonsentraatio (mikromoolinen); y-akseli: kasvuprosentti. Timantti: yksi • · | j | tunti; neliö: neljä tuntia; kolmio: 8 tuntia; X: 24 tuntia, '·· tähti 48 tuntia.
* · « » • · « · 25 Kuvio 14. N-heksyylisfingosiinin terapeuttinen teho P-388/ADR-
• I
, ,·, (adriamysiiniresistenttejä) kasvaimellisissa hiirissä. X-akse- • · · *!! li: päiviä hoidon jälkeen; y-akseli: hoitoryhmän elonjääneiden • * · prosentti. "+": verokki (hoitamaton); neliöt: yksi annos 20 mg . , n-heksyylisfingosiinia ruumiin painokiloa kohti; ympyrät: 3 * · · · 30 20 mg/kg annosta.
* » ;V: Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Saadaan aikaan sf ingolipidiyhdiste, jonka kaava on R^Y1- /’ -CHZ1-CH(NY2Y3) -CH2-Z2 , jossa :-V 35 * * R1 on suoraketjuinen alkyyli-, alkenyyli- tai alkinyyliryhmä, jossa on 8-19 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa, 116620 10 Y1 on -CH=CH-, -C=C- tai -CH(OH)CH(OH)-, Z1 on OH tai fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, 5 Z2 on fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, X1 on C (O) H, C02H, CH3, C(CH3)3, Si(CH3)3, SiCH3 (C (CH3) 3) 2, 10 Si (C (CH3) 3) 3, Si (POJ2C(CH3)3, fenyyliryhmä, alkyylillä substi-tuoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, aminoryhmä, fluori, kloori tai ryhmä, jonka kaava on C(R3R4)OH, ja kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, 15 X2 on valittu ryhmästä, joka koostuu CH2-:sta, C (CH3) 2-: sta, Si (P04) 2- : sta, Si (CH3) 2-: sta, SiCH3P04- : sta, C(0)-:sta, ja S(O)2- : sta, 20 X3 on valittu ryhmästä, joka koostuu -C(0)H:sta, -C02H:sta, -CH3: sta, -C (CH3) 3: sta, -Si (CH3) 3: sta, -SiCH3 (C (CH3) 3) 2: sta, ·,· · -Si (C (CH3) 3) 3: sta, -Si (P04) 2C (CH3) 3: sta, f enyy li ryhmästä, alkyy- ;· Iillä substituoidusta f enyyliryhmästä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketjusta, jossa on 1-6 hiiltä, ami-I'.’. 25 noryhmästä, kloorista, fluorista, tai ryhmästä, jonka kaava on . .·. C(R3R4)OH, jossa kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliket ju, #·;·# jossa on 1-6 hiiltä, fenyyliryhmä tai alkyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, 116620 11 edellyttäen että kun Z2 on amino, R2 on alifaattinen ketju, jossa on 1-9 tai 19-23 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa.
R1 on edullisesti alkyyliryhmä, edullisemmin CH3(CH2)12-, Y1 on 5 -CH=CH-, Y2 on H, Y3 on -C(0)R2 ja R2 on alkyyliketju, edullisemmin alkyyliketju, jossa on 6-8 hiiltä. R1 ja R2 käsittävät edullisimmin yhdessä noin 15 - noin 25 hiiltä, jolloin R1 käsittää edullisesti 13 hiiltä ja R2 käsittää edullisesti 6-8 hiiltä. Aikomatta rajoittua teoriaan uskotaan, että lipidin 10 kokonainen hiiliketjun pituus on merkittävä tekijä määritettäessä kyvyn kykyä insertoida itsensä biologisiin kalvoihin.
Aikomatta rajoittua millään tavalla teoriaan uskotaan, että sfingosiinit ja seramidit voivat toimia signaalin siirtäjinä 15 tai toisina viestinviejinä soluissa, so. että solunsisäiset tasot lisääntyvät vasteena ulkoiseen ärsykkeeseen ja että tämä lisäys johtaa parantuneeseen proteiinikinaasiin ja fosfaat-tiaktiivisuuksiin (katso esim. M. Raines et ai., supra; R. Kolesnik et ai., supra: G. Daibo et ai., supra; ja Fishbein et 20 ai., supra). Aktivoituneet proteiinikinaasit ja fosfataasit voivat aktivoida soluprosesseja, jotka johtavat solukuolemaan. : Näin ollen voi olla terapeuttisesti toivottavaa lisätä sfin- gosiinien ja seramidien solunsisäisiä konsentraatioita syöpä- : soluissa.
Γν 25 ; Sfingosiinit ja seramidit muodostetaan eläinsoluissa yhdis- tämällä palmitoyyli CoA (CH3 (CH2) 14-CO-S-CoA) ja seriini dehyd- • · * rosfingaanin (CH3 (CH2) 14CoCH (NH3) -CH2OH:n ja C02:n saamiseksi . . (katso esim. L. Stryer, Biochemistry (2. painos), W.H. Freeman • · * ‘il.* 30 ja Co. New York, s. 461-462)) . Dehydrosfingaani muutetaan • * dihydrosf ingosiiniksi (CH3 (CH2) 14-CH (OH) -CH (NH3) -CH2OH) , joka muu-:V: tetaan sitten sf ingosiiniksi (CH3 (CH2) 12CH=CH-CH (OH) -CH (NH3) - -CH20H) . Sitten sfingosiinin amidiryhmään kytketään rasvahappo Λ seramidin (CH3 (CH2) 12CH=CH-CHOH-CH (CH2OH) -NH-CO-R, jossa R on * ·’ 35 rasvahappoket ju) saamiseksi. Fosf oryylikoliiniryhmä (P04CH2CH2- -N(CH3)3) voidaan kiinnittää seramidiin sen hydroksyyliryhmässä sfingomyeliinin (CH3 (CH2) 12CH=CH-CHOH-CH (CH2P04CH2CH2-N (CH3) 3) - -NH-CO-R) valmistamiseksi. Sfingomyelinaasi voi katalysoida 116620 12 fosforyylikoliinin hydrolyyttisen poistumisen sfingomyeliinistä synnyttäen seramidin (katso esim. kuvio 1) . Seramidin käänteishydrolyysi voi synnyttää sfingomyeliinin.
5 Tämä "käänteishydrolyysi"vaiheen esto tai inhibointi, so. seramidin muuttaminen vastaavaksi sfingomyeliiniksi, voi johtaa lisääntyneisiin solunsisäisiin seramiditasoihin. "Fosforyyli-koliinin kiinnittymistä inhiboivat ryhmät" eivät ole tavallisesti ryhmiä, joita on havaittu kiinnittyneinä sfingosiineihin 10 tai seramideihin eläinsoluissa tai niiden biosynteettisiin prekursoreihin. Tällaiset ryhmät ovat pikemminkin kiinnittyneinä synteettisesti sfingosiineihin ja seramideihin sfin-gomyeliinien niistä muodostumisen estämiseksi.
15 Tämän keksinnön mukaiset koostumukset, jotka käsittävät fosfo-ryylikoliinin kiinnittymistä inhiboivia ryhmiä ja eripituisia alkyyli-, alkenyyli- ja alkynyyliketjuja, syntetoidaan lukuisia reittejä, jotka on alan ammattimiesten hyvin tuntemia ja helposti toteutettavissa opettaen siten tätä keksintöä (katso 20 esim. jäljempänä "rf" viittaa yhteen seuraavista viitteistä: 1: J. Am. Chem. Soc. , 94: 6190 (1972); 2: J. Org. Chem. 59: : 668 (1994); 3: Angew. Chem., Inti. Ed. (English), 17: 569 (1978); 4: Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry (5.
: : painos), s. 769-780); 5: J. Org. Chem. .40: 574 (2975); 6: J.
:*·*: 25 Org. Chem. 59: 182 (1994); 7; J. Org. Chem. 25: 2098 (1960); ; 8: Synthesis (1985), s. 253-268; 9: J. Chem. Soc. (1953): s.
2548; 10: J. Am. Chem. Soc. 90: 4462, 4464 (1968); 11: • · ·
Oxidations in Organic Chemistry (Am. Chem. Soc, Washington, . . D.C. (1990), s. 60-64; 12: J. Med. Chem. 30 1326 (1987); 13: » * · ' 30 Synth. Commun. 9.: 757 (1979); 14: The Chemistry of AMides (J.
• * ·;*’ Wiley & Sons, New York (2970)), s. 795-801; 15: J. Med. Chem.
:Y: 37: 2896 (1994); 4; J. Med. Chem. 30: 1326 (1987); 16: Rec.
Chem. Prog. 29.: 85 (1968) ja 17: Phospholipids Handbook (Marcell Dekker, Inc., New York (1993), s. 97). Ammattimiehet
I I I
» I · ' 35 voivat käyttää esimerkiksi sfingosiinia tai seramidia lähtö- materiaalinaan. Eripituisia alkyyli-, alkenyyli- tai alkynyy-liketjuja voidaan kiinnittää siihen tai poistaa siitä tunnetuilla keinoilla. Konversiota inhiboivia ryhmiä voidaan myös 116620 13 kiinnittää sfingosiineihin ja seramideihin tunnetuilla keinoilla. Ne käsittävät mutteivät rajoitu niihin hapetus/pel-kistys-, substituutio-, kondensaatio- ja alkylointireaktiot sekä muut yleisesti hyväksytyt kemiallisten ryhmien yhdis-5 teistä kiinnittämis- ja poistamiskeinot sekä yhdisteiden konvertoimiset yhdestä toiseksi. Tällaisia reaktioita muodostetaan tavallisesti käyttämällä yleisesti hyväksyttyjä liuottimia ja ne suoritetaan helposti määritettävissä olosuhteissa.
• · · * · » » I » » 116620 14 r g I Ο Λ = \ )«* ; . =Λ2 <*- δ-Ο > -I 5 > * / *“Τ r
> ^ S
“4 t f § 8 ^ t H) t v I 4 \ s -
.§ \ 1 1 / P
> \' I i 4λ N f ,s Τ' 'ΛΗ
v x V* * >·* „ / X
i f
K \ \ -H S \ <E
i* - \ . I *" ν’ = S
Lr: T~‘ / / < ^ mi 1 :::i. X L·/ i \ J 1 \ 7= t lv Z ) * / i f I s -* s :.!> } ,® -L ^ 1 - S-ϊ s-)"1 fr.· ΛΛ*, T - riX0 } :...: ~v \ « ,*. « r- / * < • i » t: . ** V *·
• * * ^ «c ' ^ CN
« * » ** « »* r“ <x> * » f 116620 15
Spesifisiä yhdisteitä voidaan syntetisoida seuraavasti. Sera-midin silyylieetterin synteesi: Seosta, jossa on seramidia ja t-butyylidimetyylisilyylikloridia (1 ekvivalentti) ja imidat-solia (2 ekvivalenttia) DMF:ssä, sekoitettiin N2:n alaisena 5 huoneenlämpötilassa yön ajan. Liuotin poistettiin N2-virran alaisena ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, pestiin (H20) , kuivattiin (MGSOJ ja konsentroitiin kuivaksi. Jäännös puhdistettiin piidioksidigeelillä (AcOet: heksaani = 1:3). 1-esteri-seramidin synteesi: Seosta, jossa oli seramidia ja Ac20:ta (1 10 ekvivalentti) ja katalyyttinen määrä dimetyyliaminopyridiiniä kuivassa CH2C12:ssa, sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti ja reaktio tarkistettiin TLC:llä (AcOEt: heksaani = 2:3,5).
Seramidin C3-OH:n hapettaminen ketoniksi: 1-OAc-seramidi liuotettiin asetoniin ja jäähdytettiin jääkylvyllä. Joiden 15 reagenssia lisättiin tipoittain hitaasti, kunnes oranssi väri pysyi. Reaktio tukahdutettiin isopropanolilla ja NaHC03:a lisättiin ja sekoitettiin 5 minuuttia. Liuos oli suodos ja se konsentroitiin kuivaksi. Raakatuote puhdistettiin valmistavalla TLC:llä (AcOEt: heksaani = 1:2,5). Seramidin pelkistäminen 20 sfingosiinianalogeiksi. Jääkylmään sekoitettuun seramidin liuokseen vedettömässä THF:ssä lisättiin LiAlH4 ja seosta · sekoitettiin huoneenlämpötilassa N,:n alaisena 24 tuntia.
* * * · «
Reaktioseokset tukahdutettiin jäällä jäähdyttäen lisäämällä kyllästettyä NaHC03:n vesiliuosta. Saatu liete suodatettiin ja « | · • 25 pestiin THF:llä. Liuos konsentroitiin ja jäännös vietiin : : : CH2Cl2:een, pestiin H20:lla, kuivattiin (MgS04) ja konsent- roitiin kuivaksi. Jäännös puhdistettiin valmistavalla TLC:llä (piidioksidigeeli) CH2C12 : MeOH : TEA = 8:1:0,08. 4,5-dioli-: seramidin synteesi: Seramidin liuokseen seoksessa, jossa oli 30 Me2CO, tislattua H20 ja t-BuOH, lisättiin N-metyylimorfoliini- N-oksidia (NMO, 1,2 ekvivalenttia) ja 0s04 (katalyyttinen V,; määrä) THF: ssä. Reaktioseosta sekoitettiin 45 °C:ssa 6 tuntia j ' ja se tukahdutettiin kiinteällä NaHC03:lla ja seosta sekoitet- . tiin 15 minuuttia. Suspensio suodatettiin ja suodos liuotet- . 35 tiin THF:ään. Liuos pestiin suolavedellä. Orgaaninen liuos erotettiin, kuivattiin ja konsentroitiin kuivaksi. Jäännös puhdistettiin valmistavalla PLC:llä (THF).
116620 16
Sopivat fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboivat ryhmät voidaan identifioida lukuisilla välineillä, joita alan ammattimies käyttää helposti ja jotka tämä keksintö motivoi tällaisten ryhmien identifioimiseksi. Esimerkiksi alan ammatti-5 mies voi valita rajoituksetta kemiallisen osuuden ja kiinnittää sen sfingosiiniin tai seramidiin edellä kuvatusti. Alan ammattimies voi sitten helposti määrittää suhteellisen määrän, jossa tällainen yhdiste joutuu hydrolyysiin, ja määrän, jossa sfingomyeliiniä muodostuu yhdisteestä. Hydrolyysin määrä ovat 10 itsessään helposti alan ammattimiehen määritettävissä rajoituksetta esimerkiksi kiinnittämällä radioaktiivinen osuus sfingosiiniin tai seramidiin ja seuraamalla sitten osuuden hydrolyyttisen pilkkoutumisen määrää kromatografiällä. Sfingo-myeliinin muodostumismäärät ovat myös helposti määritettävissä 15 esimerkiksi ja rajoituksetta yhdistämällä radioaktiiviseen fosforyylikoliiniin kiinnittymistä inhiboivan ryhmän sisältävä yhdiste entsyymijärjestelmässä, joka kykenee kiinnittämään fosforyylikoliinin yhdisteeseen ja käyttämällä sitten kromatograf iaa määrän arvioimiseksi, jossa fosforyylikoliinia lisä-20 tään. Edullisia fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboivia . . ryhmiä ovat ne, jotka inhiboivat eniten hydrolyysiä ja fosfo- • » · ryylikoliinin kiinnittymistä.
f t t • · » · « · · ’···' Fosf oryylikoliinin kiinnittymistä inhiboivien ryhmien kaava * · · ί .· 25 voi olla -X2X3 tai -0-X2X3, jossa X2 on valittu ryhmästä, joka ·,,·.· koostuu CH2-:sta, C (CH3) 2-: sta, Si (P04) 2- : sta, Si (CH3) 2-: sta, V ·* SiCH3P04-: sta, C(0)-:sta, ja S(0)2-:sta, ja jossa X3 on valittu ryhmästä, joka koostuu -C (O)H: sta, -C02H:sta, -CH3:sta, : -C (CH3) 3: sta, -Si (CH3) 3: sta, -SiCH3 (C (CH,) 3) 2: sta, ' i i 30 -Si (C (CH3) 3) 3: sta, -Si (P04) 2C (CH3) 3: sta, f enyy li ryhmästä, ,alkyylillä substituoidusta fenyyliryhmästä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketjusta, jossa on 1-6 hiiltä, amino-osuudesta, kloorista, fluorista, tai ryhmästä, jonka ;V: kaava on C(R3R4)OH, kukin R3 ja R1 on itsenäisesti alkyyliketju, 35 jossa on 1-6 hiiltä, fenyyliryhmä tai alkyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa. Fosforyyli-koliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä on edullisesti -0C(0)CH3, -0C(0)CH2CH2CH3, -0C(0)CH(CH3)CH3 tai -OSi (CH3)2C(CH3)3, 116620 17 edullisemmin -OSi (CH3) 2C (CH3) 3. Fosf oryylikoliinin kiinnittymistä inhiboivien ryhmien kaava voi olla myös -X1 tai -OX1, jossa X1 on C (O) H, C02H, CH3, C(CH3)3, Si(CH3)3, SiCH3 (C (CH3) 3) 2,
Si (C (CH3) 3) 3, Si (P04) 2C (CH3) 3, fenyyliryhmä, alkyylillä substi-5 tuoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, amino-osuus, fluori, kloori tai ryhmä, jonka kaava on C(R3R4)OH, ja kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä. Näin ollen fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboivat ryhmät käsittävät 10 kemiallisten osuuksien kiinnittämisen sfingosiineihin tai seramideihin eetteri-, silyylieetteri-, asetaali- ja sulfon-amidikytkennöillä.
Keksinnön mukaisella yhdisteellä on edullisesti kaava 15 CH3(CH2)12-CH=CH-CH2Z1-CH(NHY3)-CH2-Z2 . Y3 on silloin edullisesti ryhmä, jonka kaava on -C(0)R2, edullisemmin -C (O) (CH2) 4CH3. Z2 on edullisesti -OSi (CH3) 2 (CH3) 3, -OSi (P04) 2C (CH3) 3, -C(0)CH3 tai 0C(0)CH2CH2CH3.
20 Saadaan aikaan myös farmaseuttinen koostumus, joka käsittää , , tämän keksinnön mukaista yhdistettä ja farmaseuttisesti hyväk- » · • · syttävää kantoainetta; koostumus voi käsittää myös muuta t - · ·;;; bioaktiivista ainetta. "Farmaseuttisesti hyväksyttävät kanto- • t ’··>' aineet" tässä käytettynä on yleensä tarkoitettu käytettäviksi M · : V 25 lipidien ja liposomien mukaan lukien liposomaaliset bioaktii-visten aineiden formulaatiot kanssa eläimille mukaan lukien : ihmisille. Farmaseuttisesti hyväksyttävät kantoaineet formu loidaan yleensä alan ammattimiesten tuntemien lukuisten teki-joiden mukaan rajoituksetta: erityinen käytetty liposomaalinen ,·*. 30 aktiivinen aine, sen konsentraatio, stabiilius ja aiottu • »
» « I
biosaatavuus; sairaus tai tauti tai tila, jota käsitellään ♦ * * liposomikoostumuksella: kohde, sen ikä, koko ja yleinen kunto; ja koostumuksen aiottu antoreitti: esim. nasaalinen, oraali- nen, oftalminen, tooppinen, transdermaalinen, vaginaalinen, : 35 subkutaaninen, rinnansisäinen, intraperitoneaalinen, suonen sisäinen tai lihaksen sisäinen (katso esim. Näirn (1985)). Tyypilliset farmaseuttisesti hyväksyttävät kantoaineet, joita käytetään parenteraalisessa bioaktiivisen aineen annossa, 116620 18 käsittävät esimerkiksi D5W:n, vesiliuoksen, joka sisältää 5 tilavuus-% dekstroosia ja fysikaalista suolaliuosta. Farmaseuttisesti hyväksyttävät kantoaineet voivat sisältää lisä-aineosia, kuten esimerkiksi niitä, jotka parantavat aktiivis-5 ten aineiden stabiiliutta, kuten säilöntäaineita ja hapettumisen estoaineita.
Hakemuksessa kuvataan lisäksi menetelmä bioaktiivisen aineen antamiseksi eläimelle, edullisesti ihmiselle, joka menetelmä 10 käsittää tämän yhdisteen antamisen eläimelle; menetelmä voi käsittää muun bioaktiivisen aineen antamisen eläimelle. Antaminen, joka voi olla mikä tahansa yleisesti farmaseuttisten tuotteiden eläimille antamiseen sopiva, on tavallisesti suonensisäinen antaminen.
15
Eläin voi sairastaa syöpää, jolloin menetelmä käsittää koostu- musmäärän antamisen, joka käsittää syövän vastaisen tehokkaan määrän yhdistettä. Hoidettavat syövät käsittävät rajoituksetta aivo-, rinta-, keuhko-, munasarja-, paksusuoli-, vatsa- tai 20 eturauhassyövän ja ne voivat olla sarkoomia, karsinoomia, , , neuroblastoomia tai glioomia. Lääkeresistenttejä syöpiä * * ’ * voidaan myös hoitaa.
* » j i · *·.' "Syövän vastaiset tehokkaat määrät" tämän keksinnön mukaisia t t * : .· 25 yhdisteitä ovat tavallisesti määriä, jotka ovat tehokkaita inhiboimaan, parantamaan, vähentämään tai estämään minkä : I ; tahansa syövän asettumista, kasvua tai tunkeutumista eläimiin, joille yhdisteitä on annettu. Syövän vastaiset tehokkaat f määrät valitaan tavallisesti lukuisten tekijöiden mukaan, ,*·, 30 esim. kohteen iän, koon ja yleistilan, hoidettavan syövän ja t »
t t I
aiotun antoreitin mukaan, ja ne määritetään lukuisilla kei- i * * ’·'** noilla, esimerkiksi annosaluekokeilla, jotka ovat alan ammat- timiesten hyvin tuntemia ja helposti toteutettavissa tämän keksinnön opetusten mukaan. Tyypillisesti syövän vastainen j 35 tehokas määrä yhdistettä on vähintään 0,1 mg yhdistettä eläi-> men painokiloa kohti. Yleensä syövän vastainen tehokas määrä on noin 1 mg - noin 50 mg per kilo.
116620 19
Saadaan aikaan liposomi, jossa on kaksoiskerros, joka koostuu lipidistä ja yhdisteestä, jolla on kaava R1-Y1-CHZ1-CH(NY2Y3) -CH2-Z2, jossa R1, Y1, Y2, Z1 ja Z2 ovat kuten on määritelty edellä, Y3 on H tai ryhmä, jolla on kaava -R2, -C(0)R2 tai 5 -S(0)2R2, jossa R2 on kuten on määritelty edellä, ja jossa kaksoiskerros käsittää vähintään noin 5 mooli-% yhdistettä.
Liposomit ovat itsekokoontuvia rakenteita, jotka käsittävät yhden tai useamman lipidikaksoiskerroksen, joita kutakin 10 ympäröi vesiosasto ja jotka käsittävät kaksi vastapäätä toisiaan olevaa amfipaattisten lipidimolekyylien yksöiskerrosta. Ne käsittävät polaarisen (hydrofiilisen) pääryhmäalueen, joka on kovalenttisesti kytkeytynyt yhteen tai kahteen ei-polaariseen (hydrofobiseen) asyyliketjuun. Hydrofobisten asyyliketjujen ja 15 vesiväliaineen välisen energian suhteen ei-suotuisten kosketuksien uskotaan yleisesti indusoivan lipidimolekyylien uudel-leenjärjestymistä siten, että polaariset pääryhmät orientoituvat kohti vesiväliainetta, kun taas asyyliketjut orientoituvat uudelleen kohti kaksoiskerroksen sisäosaa. Muodostuu energi-20 sesti vakaa rakenne, jossa asyyliketjut suojataan tehokkaasti tulemasta kosketuksiin vesiväliaineen kanssa.
; Liposomeja voidaan valmistaa useilla erilaisilla menetelmillä "V (katso esimerkiksi Deamer ja Uster (1983)). Nämä menetelmät j” 25 käsittävät rajoituksetta Banghamin menetelmät monilamellisten [ * · · * liposomien (MLVt) valmistamiseksi, Lenkin, Fountainin ja • · « ·' * (Huilisin menetelmät MLVeiden valmistamiseksi oleellisesti yhtäläisenä lamellien välisenä liuos jakaumana (katso esimer-'’X: kiksi US-patentit 4 522 803, 4 588 578, 5 030 453, 5 169 637 30 ja 4 975 282), ja Paphadjopoulos et al:n käänteisfaasihaihdu- • tusmenetelmä (US-patentti 4 235 871) oligolamellaaristen lipo- somien valmistamiseksi, Yksilamellisia rakkuloita voidaan valmistaa MLVeistä sellaisilla menetelmillä kuin sonikointi (ks.
» · ''·* Paphadj opoulos et ai. (1968)) tai suulakepuristaminen (US-pa- 35 tentti 5 008 050 ja US-patentti 5 049 421). Tämän keksinnön mukainen eetterilipidiliposomi voidaan valmistaa millä tahansa edellä mainittujen julkaisujen mukaisella menetelmällä, jotka sisällytetään tähän viitteeksi.
116620 20
Erilaisia metodologioita, kuten sonikointia, homogenointia, ranskalaisprässipuristusta, jauhamista ja suulakpuristamista, voidaan käyttää liposomien koon pienentämiseen, so. lipsomien, joiden koko on pienempi kuin suurten, valmistamiseen. Tangen-5 tiaalista virtaussuodatusta (katso W080/008846) voidaan myös käyttää liposomien koon säätämiseen, so. liposomien valmistamiseksi, joiden koko on vähemmän heterogeeninen ja enemmän homogeeninen määritettynä kokojakaumalla. Tämän keksinnön mukainen liposomi voi olla yksilamellinen tai monilamellinen 10 ja edullisesti sen halkaisija on alle noin 200 nm, edullisemmin yli noin 50 nm - alle noin 200 nm.
Liposomikaksoiskerrokset voivat käsittää erilaisia amfipaatti-sia lipidejä mukaan lukien sellaisia, jotka ovat tyydyttyneitä 15 tai tyydyttymättömiä ja joissa on tyypillisesti asyyliketjuja, joissa on 10-24 hiiltä. Sopivat polaariset ryhmät sisältävät rajoituksetta fosforyylikoliinin, fosforyylietanoliamiinin, fosforyyliseriinin, fosforyyliglyserolin ja fosforyyli-inosi-tolin. Sopivat asyyliketjut käsittävät rajoituksetta lauraat-20 ti-, myristaatti-, palmitaatti-, stearaatti- ja oleaattiketjuja. Näin ollen sopivat liposomeja muodostavat lipidit käsittävät rajoituksetta kananmunan fosfatidyylikoliinin, distearo-• yylifosfatidyylikoliinin, dimyristoyylifosfatidyylikoliinin, «j· dipalmitoyylifasfatidyylietanoliamiinin, dipalmitoyylifosfat- .··*. 25 idyyliglyserolin ja muita. Liposomikaksoiskerrokset voivat käsittää lisäksi steroleja, kuten kolesterolia. Sterolit saavat tavallisesti aikaan lipidikaksoiskerrosten juoksevuuden » · il; lisäten tyypillisesti kaksoiskerroksen hiilivetyketjujen ‘ juoksevuutta alle geelistä nesteeksi -siirtymislämpötilan (Tm) 30 ja vähentäen juoksevuuden alle Tm:n (ks. esim. Lewis ja : McElhaney (1982) ja Darnell et ai. (1986)). Näin ollen stero- lien vuorovaikutukset ympäröivien hiilivetyket jujen kanssa inhiboivat tavallisesti näiden ketjujen vaeltamista kaksois-··, kerroksesta.
35 V.* Liposomikaksoiskerros käsittää edullisesti vähintään noin 10 mooliprosenttia yhdistettä. Jos Y3 on R2 se on edullisesti -(CH2)3CH3, -(CH2)5CH3, -(CH2)7CH3 tai (CH2)9CH3 ja edullisemmin 116620 21 (CH2)5CH3. Kun Y3 on -C(0)R2, niin se on edullisesti -C (O) (CH2) 4CH3. Liposomi käsittää edullisesti yhdisteen, jonka kaava on CH3 (CH2) ^-C^CH-CH^-CHINHY3) -CH2-Z2, edullisemmin yhdiste käsittää vähintään yhden fosforyylikoliinin kiinnit-5 tyrnistä inhiboivan ryhmän, kuten -0C(0)CH3, -OC (O) CH2CH2CH3, -OC (O) CH (CH3) CH3 tai -OSi (CH3) 2C (CH3) 3. Edullisimmin fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä on -OSi (CH3) 2C (CH3) 3 (T-BDMS).
10 Solunvälisiä seramiditasoja voidaan lisätä antamalla vitamiinia D3 joko erikseen tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden ja liposomien antamisesta tai edullisemmin liposomien antamisen yhteydessä. Haluamatta mitenkään rajoittua teoriaan uskotaan, että vitamiini D3 voi stimuloida sfingomyelinaasin 15 muuttumista seramideiksi. Tyypillisesti kaksoiskerros voi sisältää vitamiinia D3: tällaiset kaksoiskerrokset käsittävät edullisesti noin 1 mooliprosenttia vitamiinia D3. Kaksoiskerros voi myös käsittää pääryhmämodifioidun lipidin.
20 Liposomi voi sisältää muuta bioaktiivista ainetta. "Bioaktiivinen aine" on mikä tahansa yhdiste tai koostumus, jota voidaan antaa eläimille, edullisesti ihmisille. Tällaisilla • aineilla voi olla biologista aktiivisuutta eläimissä: aineita • * · · voidaan myös käyttää diagnostisesti eläimiin. Bioaktiiviset • · · · ,···, 25 aineet käsittävät terapeuttiset ja varjoaineet. Bioaktiiviset
• I
aineet, joita voidaan liittää liposomeihin, käsittävät, mutteivät rajoitu niihin, viruksia tappavat aineet, kuten asyklo- • · · virin, zidovudiinin ja interferonit, bakteereita tappavat '·* * aineet, kuten aminoglykosidit, kefalosporiinit ja tetrasyk- 30 liinit, sieniä tappavat aineet, kuten polyeeniantibiootit, ; imidatsolit ja triatsolit, antimetaboliitit, kuten foolihappo, · ja puriini- ja pyrimidiinianalogit, antineoplastiset aineet, kuten antrasykliiniantibiootit ja kasvialkaloidit, sterolit, , ! kuten kolesteri, hiilihydraatit, esim. sokerit ja tärkkelyk- 35 set, aminohapot, peptidit, proteiinit, kuten solureseptoripro- :,V teiinit, immunoglobuliinit, entsyymit, hormonit, hermovälittä- jät ja glykoproteiinit, värit, radioaktiiviset merkkiaineet, kuten radioisotoopit ja radioisotooppimerkityt yhdisteet, 116620 22 röntgensäteitä läpäisemättömät yhdisteet, fluoresoivat yhdisteet, mustuaista laajentavat aineet, keuhkoputkia laajentavat aineet, paikalliset puudutusaineet ja niiden kaltaiset. Li-posomaaliset bioaktiiviset aineformulaatiot voivat parantaa 5 bioaktiivisen aineen terapeuttista indeksiä, esimerkiksi puskuroimalla aineen toksisuuden. Liposomit voivat myös vähentää määrää, jossa bioaktiivinen aine poistuu eläimen verenkierrosta. Näin ollen bioaktiivisten aineiden liposomiformuloinnilla voidaan tarkoittaa sitä, että ainetta tarvitsee 10 antaa vähemmän halutun vaikutuksen saamiseksi. Muut tämän keksinnön mukaisessa liposomissa edulliset bioaktiiviset aineet käsittävät mikrobeja tappavat, tulehduksia estävät ja antineoplastiset aineet tai terapeuttiset lipidit, esimerkiksi seramidit. Edullisimmin muu bioaktiivinen aine on antineoplas-15 tinen aine.
Liposomeihin voidaan panostaa yhtä tai useampaa bioaktiivista ainetta liuottamalla lipidiin tai vesifaasiin, jota käytetään liposomien valmistamiseen. Vaihtoehtoisesti ionisoituvia 20 bioaktiivisia aineita voidaan panostaa liposomeihin muodostamalla ensin liposomit, vakiinnuttamalla elektrokemiallinen potentiaali, esim. pH-gradientilla, uloimman liposomikaksois-j kerroksen läpi ja lisäämällä sitten ionisoituva aine vesiväli- .·. aineeseen liposomin ulkopuolelle (ks. Bally et ai., US-pa- 25 tentti 5 077 056 ja W089/01102).
• * I
• · * * Tämän keksinnön mukainen liposomi voi käsittää pääryhmämo- • · · difioidun lipidin. "Pääryhmämodifioifut lipidit" ovat lipi-*·' * dejä, jotka, kun ne sisällytetään liposomien lipidikaksois- 30 kerroksiin, voivat inhiboida liposomien poistumista eläinten ·,· · verenkiertojärjestelmistä, joihin niitä on annettu. Liposomit : .* poistuvat eläimen ruumiista sen retikuloendoteelijärjestelmän ·’·, (RES) kautta, joka koostuu paikallaan olevista ja kierrossa olevista makrofageista. RES-poistumisen välttäminen voi mah-;* 35 dollistaa sen, että liposomit jäävät kiertoon pidemmäksi > ·,· aikaa, mikä tarkoittaa, että haluttujen seerumitasojen saavut- tamiseksi on annettava vähemmän lääkettä. Parantuneet veren- kiertoajat voivat myös mahdollistaa liposomien kohdistamisen 116620 23 RES:ä sisältämättömiin kudoksiin. Seerumiproteiinit voivat päällystää liposomipinnat, kun niitä annetaan eläimille, so. lipomit voivat olla opsonoituja. RES-poistumisen määrät voivat liittyä opsonisoinnin määrään ja tasoon; näin ollen poistumis-5 ta voidaan inhiboida modifioimalla liposomien ulkopintaa siten, että seerumiproteiinien sitoutuminen estetään yleisesti. Tämä voidaan suorittaa minimoimalla tai suojaamalla negatiiviset pintavaraukset, jotka voivat edistää proteiinien sitoutumista, tai asettamalla muulla tavalla eteerinen este 10 seerumiproteiinien sitoutumiselle.
Tehokas pintamodifiointi, so. liposomien ulkopintojen muutokset, jotka johtavat opsonisoinnin ja RES-oton inhibitioon, voidaan suorittaa sisällyttämällä liposomikaksoiskerroksiin 15 pääryhmämodifioituja lipidejä. Tässä käytettynä "pääryhmämodi- fioidut lipidit" ovat amfipaattisia lipidejä, joiden polaariset pääryhmät on johdettu kiinnittämällä niihin kemiallinen osuus, esim polyetyleeniglykoli, polyalkyylieetteri, ganglio-sidi, orgaaninen dikarboksyylihappo tai niiden kaltainen, joka 20 voi inhiboida seerumin proteiinien sitoutumista liposomeihin siten, että eläinten verenkiertojärjestelmässä olevien rakkuloiden framakokineettinen käyttäytyminen muuttuu (katso esim.
i Blume et ai., Biochim. biophys. Acta. 1149:180 (1993), Gabizon • « · · ·>► et ai., Pharm. Res. 10(5):703 (1993(, Park et ai. Biochim.
• · « » 25 Biphys. Acta. 1108:257 (1992), Woodle et ai., US-patentti 5 013 556, Allen et ai., US-patentit 4 837 028 ja 4 920 016, • · | US-hakemus 142 691, jätetty 25. lokakuuta, 1993, joiden sisäl- • » · lykset sisällytetään tähän viitteeksi.
30 Liposomiin sisällytetyn pääryhmämodifioidun lipidin määrä : riippuu alan ammattimiehen hyvin tuntemista tekijöistä tai hänen määrityksestään. Nämä käsittävät, mutteivät rajoitu \ niihin, lipidin tyypin ja pääryhmämodifikaation tyypin, li- posomin tyypin ja koon ja liposomiformuloinnin aiotun tera-35 peuttisen käytön. Pääryhmämodifioidun lipidin konsentraatio lipidikerroksessa on vähintään noin viisi mooliprosenttia, • edullisesti noin 10 mooliprosenttia.
116620 24 Tämän keksinnön mukainen liposomi voidaan dehydratoida, varastoida ja rekonstruoida sitten siten, että liposomeissa pysyy niiden sisäisten sisältöjen olennainen osa. Liposomidehydraa-tio edellyttää tavallisesti hydrofiilisen kuivaussuoja-aineen 5 käyttöä (ks. US-patentit 4 229 360 ja 4 880 635). Tämän hyd-rofiilisen yhdisteen uskotaan yleisesti estävän lipidien uudelleenjärjestymistä liposomissa siten, että koko ja sisällöt pysyvät kuivausmenetelmän aikana ja uudelleenhydrauksen aikana siten, että liposomit voidaan rekonstituoida. Tällais-10 ten kuivaussuoja-aineiden sopivat laadut ovat sellaisia, että ne ovat vahvoja vetysidosakseptoreita ja niissä on stereoke-miallisia piirteitä, jotka säilyttävät liposomin kaksoisker-roksen komponenttien molekyylien väliset tilat. Sakkaridisoke-rit, edullisesti mono- ja disakkaridit, ovat sopivia liposomi-15 en kuivaussuoja-aineita. Vaihtoehtoisesti kuivaussuoja-aine voidaan jättää pois, jos liposomivalmistetta ei jäädytetä ennen dehydrausta ja riittävästi vettä jää valmisteeseen dehydrauksen jälkeen.
20 Saadaan aikaan myös farmaseuttinen koostumus, joka käsittää tämän keksinnön mukaisen liposomin ja farmaseuttisesti hyväksyttävää kantoainetta. Hakemuksessa kuvataan lisäksi mene- • » • t| | telmä yhdisteen antamiseksi eläimelle, joka menetelmä käsittää *:* koostumuksen antamisen eläimelle. Menetelmää voidaan käyttää
Mt t 25 syöpää sairastavan eläimen hoitamiseen, jolloin annos koostu- I t t musta annetaan ja annos käsittää syövän vastaisen tehokkaan » · ,.·, määrän liposomia. Tavallisesti annos käsittää noin 1 mg/kg - » * · t·;·, noin 1000 mg/kg.
i » i , , 30 Esimerkit • t » • ]' Esimerkki 1 ' ‘ Liposomi valmiste
Liposomit valmistettiin komponenteista ja komponenttien moo-lisuhteina, jotka on esitetty taulukossa 1 (katso jäljempänä) 35 liuotinhaihdutusmenetelmällä. Esimerkiksi PC/Chol/C2-seramidi- liposomit valmistettiin liuottamalla 1,8242 mg naudan fosfati-dyylikoliinia (BPC), 0,4639 mg kolesterolia (Chol) ja 0,1366 mg C2-seramidia (C2) kloroformi/metanoliliuotin seok- 116620 25 seen (2:1, tilavuus/tilavuus). Sitten liuotin haihdutettiin kuivatun lipidin saamiseksi ja kuiva lipidi rehydratoitiin HEPS-puskuroidulla suolaliuoksella (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7,4). Vitamiinia D3 sisältäviin yhdisteisiin lisättiin 5 0,0154 mg vitamiinia D3 lipidiseokseen. C6-seramidia sisältä vissä valmisteissa C2-seramidi korvattiin C6-seramidilla. Sfingomyeliiniä (SM) sisältävissä yhdisteissä käytettiin 2,0470 mg SM, 0,4639 mg kolesterolia ja 0,0154 mg vitamiinia D3. Lisäksi PC/Chol- ja PC/Chol/D3-valmisteet valmistettiin 10 käyttäen 2,1280 mg BPC, 0,4639 mg kolesterolia ja 0,0154 mg vitamiinia D3.
Taulukko 1 Liposomivalmiste 15 Komponentit Moolisuhde PC : Choi:C2 6:3:1 PC : Choi:C2:D3 6:3:1:0,1 PC : Choi:C6 6:3:1 PC : Choi:C6:D3 6:3:1:0,1 20 SM.-Chol 7:3 SM:Chol:D3 7:3:0,1 PC: Chol 7:3 ·;· PC: Choi: D3 7:3:1:0.1 • · t > • * · • « • · 25 PC: fosfatidyylikoliini * · , ,·, Chol: kolesteroli ',!! C2: C2-seramidi i · · ‘ · ♦ ' D3: vitamiini D3 C6: C6-seramidi * · •C · 30 SM: sfingomyeliini L Esimerkki 2
Erilaisten liposomaalisten seramidi/sfingomyeliiniformuloin-tien vaikutus HL-60-solujen kasvuun 35 2 x 105 HL-60-solua inkuboitiin kananmunan fosfatidyyliko- liini/kolesteroli- (EPC/Chol), EPC/Chol/C2-seramidi- (C2), EPC/Chol/vitamiini D3- (d3), EPC/Chol/D3/C2:n, EPC/Chol/C6- seramidi- (C6), EPC/Chol/D3/C6-, sfingomyleiini(SM)/Chol- ja 116620 26 SM/Chol/D3-liposomien kanssa sekä puskurin (ei liposomeja: verrokki) ja kananmunan fosfatidyylikoliini/kolesteroli-(EPC/Chol)-liposomien kanssa. Inkubointi suoritettiin 37 °C:ssa seerumittomassa väliaineessa, jota oli täydennetty 5 5 mg/1 insuliinilla ja 5 mg/1 transferriinilla 24 tuntia.
Fetaalista vasikan seerumia lisättiin sitten viljelyväliai-neeseen lopulliseen konsentraatioon 10 %; sitten soluja inkuboitiin edelleen 24 tuntia, minkä jälkeen elinkykyisten solujen määrä kussakin viljelmässä laskettiin käyttämällä 10 trypaanisinivärjäystä ja hemosytometriä. Elinkykyisten solujen määrä määritettiin lipidiannoksissa 110 pm ja 200 pm ja se on annettu kuvioissa (jäljempänä) elinkykyisten solujen lukumääränä viljelyväliainemillilitraa kohti kertaa 10000. Tulokset on annettu kuviossa 3 ja taulukossa 2 (katso jäljempänä). 15
Esimerkki 3
Erilaisten liposomaalisten seramidi/sfingomyeliiniformu-lointien vaikutus CHO/K1-solujen kasvuun 2 x 105 CHO/Kl-solua inkuboitiin erilaisten seramidi/sfingo-20 myleiiniliposomiformulointien kanssa, jotka on osoitettu edellä (katso esimerkki 2) sekä ilman liposomeja (verrokki) ja • :1: kananmunan fosfatidyylikoliini/kolesteroli- (EPC/Chol)-lipo- *·· somien kanssa edellä kuvatuissa olosuhteissa. Elinkykyisten solujen määrä määritettiin. Tulokset on annettu taulukossa 2.
• · :v. 25 » · » ♦ · » 1 · > » · • · • » t · · • · 116620 27
Taulukko 2
Erilaisten syöpälinjojen eloonjäänti (ilman seerumia)
Eloonjäämisprosentti (tryptaanisinisulkemistesti)
Formuloinnit RPMI-7666 U-937 P-388 HL-60 CHO/kl BPC/CH0L/VD3 129,7 113,4 136, 87 138 _ 107,1 130 103___
Verrokki__100_ 100 100 100 100 BOC/CHOL/VD3/C6 103, 63,5, 49,6, 37 73 __90__55_26___ vapaa keramidi__79__82,6 55,4 __-_ vapaa C6-m-silyyli- 85,6 80,6 esteri______ BPC/-CHOL/-D3/C2_[93,7_[49 46 1 47 90_ 5
Bioaktiivinen lipidiannos = 20 μπί; *: kasvun inhibointi mitattuna standardilla tymidiinisisällyttämistestillä.
Taulukko 3 10 Vapaan ja liposomaalisen seramidin vaikutus erilaisiin syö-pälinjoihin (seerumin kanssa) : Eloon jäämisprosentti (trypaanisini testillä) : Formuloinnit _ RPMI-7 666 U-937 P-388_ • · » — - ---- — - ——
Verrokki 100 100 100 > « — “,n 1 ^^~ : BPC/CHOL/VD3/C-6 93,8 84,3 55,0 _ 82 (thy)* 75,1 (thy)* 84,7 (thy) *
Vapaa C6-seramidi 89,2__97__84,5_ 15 Bioaktiivinen lipidiannos = 20 uM;*: kasvun inhibitio mitattuna standardilla tymidiinisisällyttämistestillä.
* « * i · i : Esimerkki 7
Liposomaalisten seramidien terapeuttinen vaikutus hiirissä > » 20 CDFl-hiiriin injektoitiin intraperitoneaalisesti 2,5 x 106 P388-solua. Sitten kullekin kymmenen hiirtä käsittävälle ryh- VI»»· 116620 28 mälle annettiin intraperitoneaalisesti joko HEPES-puskuroitua suolaliuosverrokkia (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7,4) tai li-posomaalista vitamiinia D3, liposomeja, jotka sisälsivät C2-seramidia, tai liposomeja, jotka sisälsivät C6-seramidia, val-5 mistettuna esimerkissä 1 kuvattujen menetelmien mukaisesti (katso edellä) lipidiannoksena 1,5 mg lipidiä hiiren ruumiin painokiloa kohti, antamisen tapahduttua 24 tuntia p388-solujen antamisesta. Eloonjäänti arvioitiin erilaisina aikoina liposo-mi/verrokkiantamisen jälkeen. Tulokset on esitetty kuviossa 8.
10
Esimerkki 8 in vitro -sytotoksisuustutkimukset Nämä tutkimukset suoritettiin käyttämällä sulforodamiini B -testiä (katso Monks et ai., J. Natl. Cancer Inst. (US) 83:757 15 (1987)). Yhdisteet liuotettiin etanoliin. Näiden tutkimusten tulokset on esitetty seuraavissa taulukoissa ja ne on ilmaistu GI50-arvoina, se tarkoittaa lääkkeen konsentraatiota (mikromo-laarinen), joka tarvitaan kasvun inhiboimiseen 50 prosentissa soluista.
• · · • · · > · *
I · I
• · • · · » * * * > · I · » » · 116620 29
Taulukko 4
Ihmisen ja hiiren solulinjojen in vitro -lääkeherkkyys seramidijohdnnaisiin 72 tunnin altistus (GI50 (uM) + SD) 5 ______
Seramidi ja C6-seramidi 1-asetaatti 1,3-diasetaat- 1-butyraatti l-isobutyraat- iohdannaiset___C6-seramidi__ti C6-seramidi C6-seramidi__ti C6-seramidi A549__12,0+4,8__12,7+7,6 6,1+1,1__6,2+0,4__7,9+3,5_ MCF7__24,2+8, 5__ND__15,5+0,2__17,9+10,0__ND_ MCF7/ADR__36,025+0,88 ND__42,89+3,6__37,80+8,06__37,80+4,67 RPMI 7666__8,5+3,5__9,0+2,0__ND__ND__ND_ U937__7,0+1,7__11,3+1,0__ND__ND__ND_ LEWI S -keuhko 9,6+4,4__8,5+0,4__4,9+0,5__6,4+2,4__ND_ ND = ei tehty; * vain yksi koe Taulukko 5 10 Ihmisen ja hiiren solulinjojen in vitro -lääkeherkkyys seramidijohdnnaisiin 72 tunnin altistus (GI50(uM) + SD)
Seramidi ja C6-seramidi 1-TBDMS C6- 3-TBDMS C6- 1,3-Di TBDMS l-TBDMS-3- johdannaiset___seramidi__seramidi__C6-seramidi__butyraatti_ A549__12,0+4,8__>200*__>200*__>200*__C6-Cer_ • _j ; RPMI 7666__8,5+3,5__>200*__>200*__>200*__>200*_ ’I* U937 7,0+1,7 >200* >200* 134,5+28,8 >200* • · · * " ™ 11 ' ----- ; : C3H10T1/2__14,2+2,5___>200*__ND__>200*_ • · · ·*·*: LEWIS-keuhko 9,6+4,4 >200* >200* >200* >161,2* . >200* » I · — - —' - — ------ I I a ND = ei tehty; * vain yksi koe ; 15 • · < » * » * » J * * , # « • 1 » 116620 30
Taulukko 6
Ihmisen ja hiiren solulinjojen in vitro -lääkeherkkyys seramidi johdnnaisiin 72 tunnin altistus (GI50 (uM) + SD) 5 _____ _
Seramidi ja C6-seramidi Sfingosiini N-heksyyli- l-asetaatti-3- 4,5-dioli johdannaiset____sfingosiini__oni__C6- seramidi A549__12,0+4,8__20,2+0,8*__4,9+0,1__C6-Cer__25,1+0,3*_ MCF7__24,2+8,5__20,4+0,4*__4,8+0,1__14,4+0,1*__20,7+0,1*_ MCF7/ADR__36,03+0,88__19,8+0,0*__5,57+1,7__6,7+0,1«__28,3+1,1*_ CAKI 1__6,04+0,23__39,7+0,8*__6,84+3,62__14,7+0,1*__ND_ OVCAR 3__15,15+1,77__44,6+0,9*__4,99+0,05*__ND__38,2+2,3*_ HT 29__4,0+0,2__19,3+0,1*__5,2+0,1*__15,3+0,1*__14,6+0,4_ SKMEL 28__13,3+2,51__15,6+1,0*__4,94+0,66*__13,9+0,2*__ND_ P388__6,24+0,3__ND__2,59+0,3* ND__ND_ P388/ADR__12,6+1,7__ND__2,61+1,7*__nd__ND_ LEWIS-keuhko 9,6+4,4 12,2+0,1 4,9+0,1 ND 15,2+/0,1 ____I 14,5+0,1__ ND = ei tehty; * vain yksi koe
Taulukko 7 : 10 Valikoitujen sfingosiinijohdannaisten in vitro -lääkeherkkyys erilaisissa kasvainsolulinjapaneeleissa 72 tunnin lääke-: altistus • · · • · · • · - • * Solulinja N-C4-sfingo- N-C6-sfingo- N-C8-sfingo- N-C8-sfingo- NC-10- Cer-C6 . .siini siini siini siini sfingosiini • · · 1 — ‘ — - " A549__4,90+0,10 4,90+0,06 4,91+0,01 HCl-suola 4,99+0,08 8,08+0,06 MCF7__4,88+0,03 4,74+0,09 4,88+0,11 4,97+0,19 5,13+0,01 12,70+0,14 . . MCF7/ADR 9,60+0,47 4,69+0,10 4,88+0,04 4,90+0,02 6,19+0,43 26,1+0,85 * I · —“ “ “ — — ' • · ’!.* OVCAR 3 14,05+0,35 4,99+0,05 5,41+0,13 4,82+0,18 12,50+0,85 15,15+1,77 *;* CAKI 1 6,88+0,52 4,28+0,04 4,64+0,07 5,23+0,01 6,18+0,01 5,88+0,10 V,· SKMEL 28 6,13+1,0__4,94+0,06 4,96+0,03 4,47+0,01 13,000,00 11,55+0,07 I ( I HT 29__6,49+0,11 5,03+0,06 5,72+0,24 4,95+0,02 14,50+0,14 4,67+0,19 LEWIS- 5,08+0,13 4,61+0,04 5,05+0,02 5,78+0,00 6,71+1,04 5,81+0,31 . keuhko______4,82+0,18___
15 GI50 (uM) + SD
116620 31
Taulukko 8 A549:n ja CF 7/ADR:n in vitro -herkkyys seramidijohdnnaisiin erilaisina altistusaikoina 72 tunnin lääkkeen jälkeinen 5 lisäysinkubaatio ___A549_____MCF7/ADR___ Lääkkeelle 1-ase- 1-buty- 1-iso- N-C8- 1-ase- 1-buty- 1-iso- N-C8- altistus- taatti- raatti- buty- sfingo- taatti- raatti- buty- sfingo- aika c6-sera- C6-sera- raatti- siini C6-ker C6-sera- raatti- siini __midi__midi__C5____midi__C6__ 1 tunti__92,9+1,3 >100 >100__31,2+5,0 >100__>100 >100__34,3+4,2 4 tuntia__44,1+1,3 52,9+2,5 >100__12,8+1,0 59,5+1,4 79,1+5,3 >100__14,2+1,2 8 tuntia 35,3+2,5 36,5+0,8 40,2+2,5 6,7+0,2 42,7+1,2 44,0+1,1 52,3+1,6 8,9+0,2 24 tuntia 7,2+0,2 8,6+0,6 8,4+0,7 5,0+0,1 19,5+0,8 20,8+1,8 22,7+1,1 4,8+0,1 48 tuntia 4,35+0,1 4,7+0,1 5,2+0,3 4,8+0,1 15,6+0,9 17,2+0,1 18,7+0,5 4,62+0,1 72 tuntia 5,1+0,1 5,5+0,2 5,6+0,3 5,0+0,3 16,7+1,7 18,5+0,4 19,6+1,0 5,0+0,1 jatkuvasti ________
Esimerkki 10 10 In vivo tutkimukset Nämä tutkimukset suoritettiin käyttämällä P-388-adriamysii-l · niresistenttejä leukemiasoluja. Hiiriin injektoitiin i.p.
*;· 100000 solua ja niitä käsiteltiin päivinä 1, 3 ja 5 injek- toinnin jälkeen n-heksyylisfingosiinilla. Tulokset on esitet-15 ty kuviossa 5. Tulokset on esitetty kuviossa 14.
• * • « · • » ·
Esimerkki 11 • * ·
Yhdisteiden synteesi
Silyylieetteriseramidin synteesi: Seosta, jossa oli seramidia » · ;·· * 20 ja t-butyylimetyylisilyylikloridia (1 ekvivalentti) ja imi- 1 · · I · datsolia (2 ekvivalenttia) DMF:ssä sekoitettiin N2:n alaisena V: huoneenlämptötilassa yön ajan. Liuotin poistettiin N2-virran alaisena ja jäännös liuotettiin CH2Cl2:een, pestiin (H20) , kuivattiin (MgSOJ ja konsentroitiin kuivaksi. Jäännös puh-25 distettiin piidioksidigeelillä (AcOEt: heksaani =1:3).
1-esteriseramidin synteesi: Seosta, jossa oli seramidia ja
Ac20:ta (1 ekvivalentti) ja katalyyttinen määrä dimetyyliami- 116620 32 nopyridiiniä kuivassa CHC12:ssa sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti ja reaktio tarkistettiin TLC:llä (AcOEt). Seos konsentroitiin. Raakatuote puhdistettiin piidioksidigeelillä (AcOEt: heksaani = 1:3,5).
5
Seramidin CH3-OH:n hapettaminen ketoniksi: 1-OAc-seramidi liuotettiin asetoniin ja jäähdytettiin jääkylvyllä. Jonen reagenttia lisättiin hitaasti tipoittain, kunnes oranssi väri pysyi. Reaktio tukahdutettiin isopropanolilla ja NaHC03:a 10 lisättiin ja sekoitettiin 5 minuuttia. Liuos oli suodos ja se konsentroitiin kuivaksi. Raakatuote puhdistettiin valmista valla TLC:llä (AcOEt: heksaani = 1:2,5).
Seramidin pelkistäminen sfingosiinianalogeiksi: Jääkylmään 15 sekoitettuun liuokseen, jossa oli seramidia vedettömässä THF:ssä, lisättiin LiAlH4:a ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa Ny. n alaisena 24 tuntia. Reaktioseokset tukahdutettiin jäällä jäähdyttäen lisäämällä kyllästettyä NaHCo3:n vesiliuosta. Saatu liete suodatettiin ja pestiin THF:llä. 20 Liuos konsentroitiin ja jäännös vietiin CH2Cl2:een, pestiin H20:lla, kuivattiin (MgSOj ja konsentroitiin kuivaksi. Jään-l I : nös puhdistettiin valmistavalla TLC:llä (piidioksidigeeli) ·;· CH2C12: MeOH : TEA = 8:1:0,08.
* * * · • · * · · ;·.·. 25 1,4-dioliseramidin synteesi: Seokseen, jossa oli seramidia • · . .·. seoksessa, jossa oli Me2CO, tislattua H20:ta ja t-BuOH, lisät- • » · tiin N-metyylimorf Oliini-N-oksidia (NMO, 1,2 ekvivalenttia) ja 0s04 (katalyyttinen määrä) THF:ssä. Reaktioseosta sekoitettiin 45 C-asteessa 6 tuntia ja se tukahdutettiin kiinteäl- * * * ·'*·' ·’ 30 lä NaHCO, :11a ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Suspensio suodatettiin ja suodos liuotettiin THF:ään. Liuos pestiin suolavedellä. Orgaaninen liuos erotettiin, kuivattiin ja ·, konsentroitiin kuivaksi. Jäännös puhdistettiin valmistavalla ‘y TLC:llä (THF).
··’ 35

Claims (16)

116620 33
1. Sfingolipidiyhdiste, tunnettu siitä, että sen kaava on R'-Y'-CHZ'-CHiNY^3) -CH2-Z\ jossa 5 R1 on suoraketjuinen alkyyli-, alkenyyli- tai alkinyyliryhmä, jossa on 8-19 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa, Y1 on -CH=CH-, -C=C- tai -CH(OH)CH(OH)-, 10 Z1 on OH tai fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, Z2 on fosforyylikoliinin kiinnittymistä inhiboiva ryhmä, 15 jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X% X1 on C (0) H, C02H, CH3, C(CH3)3, Si(CH3)3, SiCH3 (C (CH3) 3) 2, Si (C (CH3) 3) 3, Si (P04) 2C (CH3) 3, fenyyliryhmä, alkyylillä substi-tuoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, 20 alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä, aminoryhmä, fluori, kloori tai ryhmä, jonka kaava on C(R3R4)OH, ja kukin R3 ja R4 on ,* · itsenäisesti alkyyliket ju, jossa on 1-6 hiiltä, • k · » « * :”*· X2 on valittu ryhmästä, joka koostuu CH2-:sta, C (CH3) 2-: sta, j 25 Si (POJ 2- : sta, Si (CH3) 2-: sta, SiCH3P04-: sta, C(0)-:sta, ja , S (0): sta, » * · * « * » > i · X3 on valittu ryhmästä, joka koostuu -C(0)H:sta, -C02H:sta, -CH3: sta, -C (CH3) 3: sta, -Si (CH,) 3: sta, -SiCH3 (C (CH3) 3) 2: sta,
30 -Si (C (CH3) 3) 3: sta, -Si (P04) 2C (CH3) 3: sta, fenyyliryhmästä, alkyy-y' Iillä substituoidusta fenyyliryhmästä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, alkyyliketjusta, jossa on 1-6 hiiltä, ami-noryhmästä, kloorista, fluorista, tai ryhmästä, jonka kaava on C (R3R4) OH, jossa kukin R3 ja R4 on itsenäisesti alkyyliket-35 ju, jossa on 1-6 hiiltä, fenyyliryhmä tai alkyylillä subs-tituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, 116620 34 Y2 on H, fenyyliryhmä, alkyylillä substituoitu fenyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiltä alkyyliketjussa, tai alkyyliketju, jossa on 1-6 hiiltä,
5 Y3 on H tai ryhmä, jonka kaava on -C(0)R2 tai -S(0)2R2, R2 on suoraketjuinen alkyyli-, alkenyyli- tai alkinyyliryhmä, jossa on 1-23 hiiliatomia ketjussa, 10 edellyttäen että kun Z2 on amino, R2 on alifaattinen ketju, jossa on 1-9 tai 19-23 hiiliatomia alifaattisessa ketjussa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että R1 on CH3(CH2)12-, Y1 on CH=CH-, Y2 on H, Y3 on -C(0)R2 ja R2 15 on alkyyliketju.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että ryhmä, jolla on kaava -X1, -OX1, -X2X3 tai -0-X2X3, on -OSi (CH3) 2C (CH3) 3. 20
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, .·’· että sillä on kaava CH3 (CH2) 12-CH=CH-CH2Z1-CH (NHY3) -CH2-Z2, jossa ;;· Y3 on C(0)R2. i · • t * j*.'. 25 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, ! että Y3 on -C(O) (CH2)4CH3 ja että Z2 on -OSi (CH3)2C (CH3) 3, -OSi (POJ 2C (CH3) 3, -C(0)CH3 tai -OC (O) CH2CH2CH3. • · ·
6. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu siitä, että se käsit- * · ;;t: 30 tää patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä ja farmaseut- tisesti hyväksyttävän kantaja-aineen. I. * i ·
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen koostumus, tunnettu siitä, • ' että se lisäksi käsittää bioaktiivista ainetta. j 35
8. Liposomi, tunnettu siitä, että siinä on kaksoiskerros, joka koostuu lipidistä ja yhdisteestä, jolla on kaava R^Y1- 116620 35 -CHZ1-CH(NY2Y3) -CH2-Z2, jossa R1, Y1, Y2, Z1 ja Z2 ovat kuten on määritelty patenttivaatimuksessa 1; Y3 on H tai ryhmä, jolla on kaava -R2, -C(0)R2 tai -S(0)2R2, 5 jossa R2 on kuten on määritelty patenttivaatimuksessa 1; jolloin kaksoiskerros käsittää vähintään viisi moolipro-senttia yhdistettä.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen liposomi, tunnettu siitä, että Y3 on ryhmä, jolla on kaava R2, jolloin R2 valitaan ryhmästä, johon kuuluu -(CH2)3CH3, -(CH2)5CH3, -(CH2)7CH3 ja -(CH2)9CH3, tai Y3 on ryhmä, jolla on kaava -(C0)R2.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen liposomi, tunnettu siitä, että Y3 on -C(0) (CH2)4CH3.
11. Patenttivaatimuksen 8 mukainen liposomi, tunnettu siitä, että ainakin Z1 tai Z2 on -0C(0)CH3, -OC (O) CH2CH2CH3, 20 -0C(0)CH(CH3)CH3 tai -OSi (CH3) 2C (CH3) 3. i · 12. Patenttivaatimuksen 8 mukainen liposomi, tunnettu siitä, ':· että kaksoiskerros käsittää vähintään 10 mooliprosenttia yhdistettä. 25
13. Patenttivaatimuksen 8 mukainen liposomi, tunnettu siitä, <> että kaksoiskerros käsittää D,-vitamiinia. ; · 3 * t , 14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen liposomi, tunnettu sii- t 4>: 30 tä, että kaksoiskerros käsittää noin 1 mooliprosenttia vita- t miinia D3.
15. Patenttivaatimuksen 8 mukainen liposomi, tunnettu siitä, että kaksoiskerros käsittää fosfatidyylietanoliamiinin lii-35 tettynä yksikköön, joka valitaan ryhmästä, joka sisältää po- » » lyetyleeniglykolit, polyalkyylieetterin, gangliosidit ja di-karboksyylihapot. 116620 36
16. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu siitä, että se käsittää minkä tahansa patenttivaatimuksen 8-15 mukaisen liposo-min ja farmaseuttisesti hyväksyttävän kantaja-aineen.
5 Patentkrav
FI963045A 1994-02-02 1996-08-01 Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset FI116620B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19029594A 1994-02-02 1994-02-02
US19029594 1994-02-02
US9501490 1995-02-02
PCT/US1995/001490 WO1995021175A1 (en) 1994-02-02 1995-02-02 Pharmaceutically active compounds and liposomes, and methods of use therof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI963045A0 FI963045A0 (fi) 1996-08-01
FI963045A FI963045A (fi) 1996-08-01
FI116620B true FI116620B (fi) 2006-01-13

Family

ID=22700754

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI963045A FI116620B (fi) 1994-02-02 1996-08-01 Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset

Country Status (14)

Country Link
US (3) US5631394A (fi)
EP (2) EP0742789B1 (fi)
JP (1) JPH09508900A (fi)
AT (1) ATE195944T1 (fi)
AU (1) AU691886B2 (fi)
CA (1) CA2182485A1 (fi)
DE (1) DE69518627T2 (fi)
DK (1) DK0742789T3 (fi)
ES (1) ES2149350T3 (fi)
FI (1) FI116620B (fi)
GR (1) GR3034521T3 (fi)
NO (1) NO314405B1 (fi)
PT (1) PT742789E (fi)
WO (1) WO1995021175A1 (fi)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6255336B1 (en) 1995-09-20 2001-07-03 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
WO1997010817A1 (en) * 1995-09-20 1997-03-27 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
EP0892638B1 (en) * 1996-04-04 2002-11-13 Cilag AG Liposome-based topical vitamin d formulation
US6274309B1 (en) * 1996-07-26 2001-08-14 Richard Kolesnick Method for the modulation of acid-sphingomyelinase-related apoptosis
CN1055640C (zh) * 1996-11-29 2000-08-23 沃维汉 人降钙素基因相关肽脂质体组合物及其制法
US6982142B2 (en) 1997-12-01 2006-01-03 John Wayne Cancer Institute Methods for screening therapeutically effective agents
AU3740000A (en) * 1999-03-25 2000-10-16 Center For Molecular Medicine And Immunology Sphingomyelin containing preparation for the enhancement of tumor therapy
US7683044B2 (en) * 1999-03-25 2010-03-23 Center For Molecular Medicine And Immunology Sphingomyelin therapy of autoimmune disease
US7820718B1 (en) * 1999-04-07 2010-10-26 Roger Williams Hospital Combinations of ceramide and chemotherapeutic agents for inducing cell death and uses thereof in treating cancer
TW502133B (en) 1999-06-10 2002-09-11 Wako Pure Chem Ind Ltd Resist composition, agent and method for reducing substrate dependence thereof
US6682545B1 (en) * 1999-10-06 2004-01-27 The Penn State Research Foundation System and device for preventing restenosis in body vessels
WO2001038295A1 (fr) * 1999-11-24 2001-05-31 Taisho Pharmaceutical Co.,Ltd. Derives de sphingosine
US6410597B1 (en) * 2000-02-25 2002-06-25 Virginia Commonwealth University Hydroxyalkyl amide analogs of ceramide
US6858383B2 (en) * 2000-12-22 2005-02-22 Medlyte, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of cardiovascular diseases and disorders, and for identifying agents therapeutic therefor
CA2453978C (en) 2001-07-16 2011-10-11 Genzyme Corporation Synthesis of udp-glucose: n-acylsphingosine glucosyltransferase inhibitors
EP1287815A1 (en) * 2001-08-31 2003-03-05 Cosmoferm B.V. Use of a sphingoid base for inhibiting ceramidase activity
US6916802B2 (en) * 2002-04-29 2005-07-12 Genzyme Corporation Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US20060217560A1 (en) * 2002-04-29 2006-09-28 Shayman James A Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US20070031480A1 (en) * 2003-03-07 2007-02-08 Lawrence Mayer Enhanced delivery of sphingolipids
WO2004087097A2 (en) * 2003-03-31 2004-10-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Stable liposomes or micelles comprising a sphinolipid and a peg-lipopolymer
BRPI0409663A (pt) 2003-04-25 2006-04-18 Penn State Res Found método e sistema para o envio sistêmico de compostos bioativos derivados de lipìdeo de detenção de crescimento
US7906122B2 (en) 2003-06-18 2011-03-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jersusalem Sphingoid polyalkylamine conjugates for Hepatitis B virus vaccination
WO2004110496A1 (en) * 2003-06-18 2004-12-23 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Sphingoid polyalkylamine conjugates for vaccination
US7794713B2 (en) 2004-04-07 2010-09-14 Lpath, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases
CA2586761A1 (en) 2004-11-10 2006-05-18 Genzyme Corporation Methods of treating diabetes mellitus
JP2008520560A (ja) * 2004-11-15 2008-06-19 イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム 組合せ治療
JP4791082B2 (ja) * 2005-05-30 2011-10-12 株式会社クラレ リポソームおよびそれを含む皮膚外用剤
WO2007044748A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 University Of Pittsburgh Sphingomyelin liposomes for the treatment of hyperactive bladder disorders
ES2546181T3 (es) 2006-05-09 2015-09-21 Genzyme Corporation Métodos de tratar la enfermedad del hígado graso mediante inhibición de la síntesis de glucoesfingolípidos
US9217749B2 (en) 2006-05-31 2015-12-22 Lpath, Inc. Immune-derived moieties reactive against lysophosphatidic acid
US7862812B2 (en) 2006-05-31 2011-01-04 Lpath, Inc. Methods for decreasing immune response and treating immune conditions
US9274130B2 (en) 2006-05-31 2016-03-01 Lpath, Inc. Prevention and treatment of pain using antibodies to lysophosphatidic acid
US9274129B2 (en) 2006-05-31 2016-03-01 Lpath, Inc. Methods and reagents for detecting bioactive lipids
US8796429B2 (en) 2006-05-31 2014-08-05 Lpath, Inc. Bioactive lipid derivatives, and methods of making and using same
AU2007329759B2 (en) 2006-10-27 2013-05-30 Lpath, Inc. Compositions and methods for binding sphingosine-1-phosphate
AU2007313822A1 (en) 2006-10-27 2008-05-08 Lpath, Inc. Compositions and methods for treating ocular diseases and conditions
EP2594565B1 (en) 2007-05-31 2018-10-24 Genzyme Corporation 2-acylaminopropanol-type glucosylceramide synthase inhibitors
KR20160085917A (ko) 2007-10-05 2016-07-18 젠자임 코포레이션 세라마이드 유도체로 다낭성 신장질환을 치료하는 방법
WO2009132082A2 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Immunogenic compositions containing ceramide and methods of use thereof
WO2010014554A1 (en) 2008-07-28 2010-02-04 Genzyme Corporation Glucosylceramide synthase inhibition for the treatment of collapsing glomerulopathy and other glomerular disease
CN102271678B (zh) 2008-10-03 2017-06-30 简詹姆公司 2‑酰胺基丙醇型葡糖神经酰胺合成酶抑制剂
PL3599237T3 (pl) 2009-11-27 2021-09-27 Genzyme Corporation Kompozycja farmaceutyczna inhibitora syntazy glukozyloceramidowej eliglustatu do leczenia choroby Gauchera obejmującego dostosowanie indywidualnej dawki terapeutycznej do metabolizmu P450 pacjenta
WO2013024843A1 (ja) * 2011-08-15 2013-02-21 国立大学法人 千葉大学 セラミド誘導体およびこれを用いたゴルジ体標識化蛍光プローブ
KR102423002B1 (ko) * 2021-02-17 2022-07-21 주식회사 엘씨에스바이오텍 신규 세라마이드, 그의 제조방법 및 그의 용도

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522803A (en) * 1983-02-04 1985-06-11 The Liposome Company, Inc. Stable plurilamellar vesicles, their preparation and use
US5030453A (en) * 1983-03-24 1991-07-09 The Liposome Company, Inc. Stable plurilamellar vesicles
US4588578A (en) * 1983-08-08 1986-05-13 The Liposome Company, Inc. Lipid vesicles prepared in a monophase
US5169637A (en) * 1983-03-24 1992-12-08 The Liposome Company, Inc. Stable plurilamellar vesicles
US4721612A (en) * 1984-04-12 1988-01-26 The Liposome Company, Inc. Steroidal liposomes
US5008050A (en) * 1984-06-20 1991-04-16 The Liposome Company, Inc. Extrusion technique for producing unilamellar vesicles
US5077056A (en) * 1984-08-08 1991-12-31 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
US4975282A (en) * 1985-06-26 1990-12-04 The Liposome Company, Inc. Multilamellar liposomes having improved trapping efficiencies
US5059421A (en) * 1985-07-26 1991-10-22 The Liposome Company, Inc. Preparation of targeted liposome systems of a defined size distribution
JP2588729B2 (ja) * 1987-10-05 1997-03-12 塩野義製薬株式会社 スフィンゴシン誘導体
FR2637598B1 (fr) * 1988-10-06 1991-10-11 Agronomique Inst Nat Rech Nouveaux sphingophospholipides a inositol, leur obtention, et leur application comme inducteurs de resistance a diverses maladies cryptogamiques chez les vegetaux
US5100662A (en) * 1989-08-23 1992-03-31 The Liposome Company, Inc. Steroidal liposomes exhibiting enhanced stability
DE4021082C2 (de) * 1990-07-03 1995-08-17 Hans Dr Lautenschlaeger Hautbehandlungsmittel mit hohen Lipidgehalten unter Verwendung eines Bilayer enthaltenden Systems, Salzen organischer Säuren, Alkohol und Stabilisator
AU653363B2 (en) * 1990-08-13 1994-09-29 Duke University Methods for inducing cell differentiation using ceramides
GB9022921D0 (en) * 1990-10-22 1990-12-05 Unilever Plc Cosmetic composition
GB9100816D0 (en) * 1991-01-15 1991-02-27 Unilever Plc Cosmetic composition
DE4201461A1 (de) * 1992-01-21 1993-07-22 Mueller Schulte Detlef Dr Mittel fuer die selektive tumortherapie auf der basis ferromagnetischer partikel - verfahren zu ihrer herstellung und verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
CA2182485A1 (en) 1995-08-10
AU1871295A (en) 1995-08-21
WO1995021175A1 (en) 1995-08-10
ATE195944T1 (de) 2000-09-15
DK0742789T3 (da) 2000-11-13
EP1008342A3 (en) 2004-12-29
NO314405B1 (no) 2003-03-17
EP0742789A1 (en) 1996-11-20
FI963045A0 (fi) 1996-08-01
FI963045A (fi) 1996-08-01
GR3034521T3 (en) 2000-12-29
EP0742789B1 (en) 2000-08-30
ES2149350T3 (es) 2000-11-01
EP1008342A2 (en) 2000-06-14
US5677337A (en) 1997-10-14
AU691886B2 (en) 1998-05-28
NO963224D0 (no) 1996-08-01
US5631394A (en) 1997-05-20
JPH09508900A (ja) 1997-09-09
US5681589A (en) 1997-10-28
DE69518627D1 (de) 2000-10-05
PT742789E (pt) 2000-12-29
DE69518627T2 (de) 2001-01-11
NO963224L (no) 1996-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI116620B (fi) Farmaseuttisesti aktiiviset sfingolipidiyhdisteet ja liposomit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset koostumukset
US5683715A (en) Taxane-containing phosphatidylcholine liposomes
US5580899A (en) Hydrophobic taxane derivatives
US6007839A (en) Preparation of pharmaceutical compositions containing etherlipid-containing multiple lipid liposomes
EP0785773B1 (en) Ether lipid liposomes and their therapeutic use
EP1426044B1 (en) Use of esters of L-carnitine or alkanoyl L-carnitines as cationic lipids for the intracellular delivery of pharmacologically active compounds
CZ71198A3 (cs) Taxanové hydrofobní deriváty podporující hydrolýzu
US5942246A (en) Etherlipid containing multiple lipid liposomes
AU3153301A (en) Lipid-based drug delivery systems
US6017557A (en) Carriers containing an etherlipid/complementarily shape lipid combination and therapeutic uses thereof
CA2402864A1 (en) D and l etherlipid stereoisomers and liposomes
JP2009530318A (ja) 加水分解時に分子内環化反応を行うホスホリパーゼａ２分解性脂質を含む脂質ベース薬剤送達系
US5965159A (en) Etherlipid-containing multiple lipid liposomes

Legal Events

Date Code Title Description
PC Transfer of assignment of patent

Owner name: TRANSAVE, INC.

Free format text: TRANSAVE, INC.

FG Patent granted

Ref document number: 116620

Country of ref document: FI

MA Patent expired