FI102065B - Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivisia 2-amino-4-morfolino-6-p ropyyli-1,3,5-triatsiineja - Google Patents

Description

102065

Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivisia 2-amino-4-morfo-lino-6-propyyli-l,3,5-triatsiineja - Förfarande för fram-ställning av terapeutiskt aktiva 2-amino-4-morfolino-6-propyl- 1,3,5-triaziner

Esillä olevan keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l, 3,5-triatsiinia, sekä sen optisesti aktiivista isomeeriä ja rasee-misia seoksia, joiden kaava on ^11 N (1) YT *2 ch2ch2ch3 j ossa on vetyatomi, alkyyli-, fenyylialkyyli- tai asetyyliryhmä, R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyyli-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksialkyyli-, (hydroksisykloalkyy-li)alkyyli-, alkanoyylioksialkyyli-, bentsoyylioksialkyyli-, fenyyliasetyylioksialkyyli- tai aminokarbonyylioksialkyyli-ryhmä, COR3-ryhmä, jossa R3 on alkyyli-, fenyyli-, halogeeni-fenyyli-, alkyylifenyyli-, alkoksifenyyli-, fenyylialkyyli- tai fenoksiryhmä, tai CONR4R5-ryhmä, jossa R4 ja R5 ovat vetyatomi tai alkyyliryhmä, tai R3 ja R2 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substituoitu pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmä, jotka alkyyli-, alkoksi- ja alkanoyylioksi-ryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli- ja pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia, sillä ehdolla, että kun R^ on asetyyliryhmä, niin R2 on asetok-sialkyyliryhmä, tai sen toksitonta, farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa.

2 102065 2-Amino-1,3,5-triatsiinit, jotka on substituoitu 4-asemassa aminoryhmällä, alkyyli-, alkenyyli-, sykloalkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmällä, tai typpeä sisältävällä heterosyklisellä ryhmällä, ja β-asemassa alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmil-lä, ovat jo tunnettuja japanilaisesta patenttihakemuksesta 69688/74. Erityisesti siinä on kuvattu 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinin valmistus. Tämän patenttihakemuksen mukaan näillä yhdisteillä on ominaisuutena lisätä kortikoidin ja erityisesti glukokortikoidin eritystä.

K. WAKABAYASHI KO et ai. (Yuki Gosei Kagaku Kyokai Shi, 28. (1970), 252 - 260; Chem. Abstr. 72, (1970), 100653v) ovat sitäpaitsi syntetisoineet 2-alkyyli-4,6-bis(alkyyliamino)- 1.3.5- triatsiineja, joissa ryhmä 2-asemassa sisältää 1-17 hiiliatomia ja voi myös tarkoittaa trikloorimetyyli-, tribro-mimetyyli- tai 2-kloorietyyliryhmää, kun taas ryhmät 4- ja 6-asemassa ovat samanlaisia ja voivat substituoitua hydroksyy-liryhmällä, tai olla typpeä sisältävä heterosyklinen ryhmä, kuten piperidino- tai morfolinoryhmä. Edustava yhdiste tästä joukosta on 2-metyyli-4,6-dimorfolino-1,3, 5-triatsiini. Näitä yhdisteitä on tutkittu niiden herbisidisen aktiivisuuden vuoksi ja sen vuoksi, että niillä on ominaisuus vaikuttaa ehkäisevästi reaktioon, jossa ammoniakki muuttuu nitraatiksi. Kuitenkaan farmakologisia ominaisuuksia ei ole mainittu.

Olemme nyt löytäneet uusia 2-amino-4-morfolino-6-propyyli- 1.3.5- triatsiineja, joilla on arvokkaita farmaseuttisia ominaisuuksia ja erityisesti ominaisuus tehostaa keskeisiä ja perifeerisiä kolinergisiä vaikutuksia, joita aiheuttaa kolinomeettinen aine kuten, esimerkiksi, oksotremoriini, vaikka näillä yhdisteillä ei ole omaa kolinergistä vaikutusta. Sitäpaitsi on myös saatu selville, että näillä yhdisteillä on suotuisa ominaisuus vähentää niitä vaikutuksia, joita on saatu kolinergisestä hypofunktiosta indusoituna kolinergisellä vastavaikuttajalla, kuten esimerkiksi skopol-amiinilla. Kolinerginen järjestelmä sisältyy laajasti 3 102065

ilmiöön, joka liittyy muistamiseen ja oppimiseen. Siten esimerkiksi, antikolinergisen aineen, kuten skopolamiinin, antaminen nuorille subjekteille lisää muistin vajavuuksia, jotka vastaavat vanhemmilla subjekteilla havaittuja. Päinvastaisesti, kolinergi-set aineet, kuten fysostigmiini, kykenevät vastustamaan antiko-linergisten aineiden antamisesta johtuvaa amnesia. (S.D. GLICK et ai., Behavioral Biology, 2, (1972), 245 - 254,- U. SCHINDLER

et ai., Drug Develop. Res. 4, (1984), 567 - 576). Lisäksi on hyvin tunnettua, että yksi niistä ominaisuuksista, jotka useimmiten liitetään dementiaan on nimenomaan kolinergisen järjestelmän rappeutuminen. (Cellular ja molecular basis of cholinergic function, ed. M.J. DOWDALL & J.N. HAWTORNE, 1987, chapter 99: art. by A. NORDBERG et ai.). Tämän takia näitä yhdisteitä voidaan käyttää käsiteltäessä kognitiivisia ja käyttäytymisen häiriötiloja, jotka liittyvät ikääntymiseen ja dementia syndroomiin. Erityisesti niitä on käytetty käsiteltäessä Alzheimerin tautiin liittyviä puutteita, seniiliä dementiaa, Alzheimerin tyyppiä, ja mihin tahansa kehittyvään kognitiiviseen patologiaan liittyviä puutteita. (C.G. GOTTFRIES, Psychofarmacology, 86. (1985), 245 - 252; C.G. GOTTFRIES, Neurobiology of Ageing, 1, 261 - 271) .

Esimerkkejä kaavan I ryhmistä voidaan mainita:

Hydroksialkyyliryhmä voi olla 2-hydroksietyyli-, 3-hydroksipro-pyyli-, 2-hydroksipropyyli-, 2-hydroksibutyyli-, 1-(hydroksime-tyyli)propyyli-, 2,3-dihydroksipropyyli- ja 2-hydroksi-l,1-bis-(hydroksimetyyli)-etyyliryhmät ja vastaavat;

Fenyyli-hydroksialkyyliryhmä voi olla 2-hydroksi-l-(hydroksime-tyyli)-2-fenyylietyyliryhmä ja vastaavat; (Hydroksi-sykloalkyyli)alkyyliryhmä voi olla (1-hydroksisyklo-heksyyli)metyyli)ryhmä ja vastaavat; 102065 4

Alkanoyylioksialkyyliryhmä voi olla 2-(asetoksi)etyyli- ja 2-(isobutyryylioksi)etyyliryhmä ja vastaavat;

Suositus tämän keksinnön mukaan saadut yhdisteet ovat yleiskaavan I mukaiset 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triat-siinit, joissa % on vetyatomi tai alkyyliryhmä, R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyyli-, dialkyyliamino- tai alkanoyylioksialkyyliryhmä tai COR3-ryhmä, jossa R3 on fenyyliryhmä, joka on substituoimaton tai substitu-oitu halogeeniatomilla tai alkyyli- tai alkoksiryhmillä, jotka alkyyli-, alkoksi- ja alkanoyylioksiryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja niiden toksittomat farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditisuolat.

Erityisen suosittuja ovat - 2-[(4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]- etanoli, - 2-(hydroksiamino)-4-morfolino-6-propyyli-l,3-5-triatsiini, - 2-[(2-metoksietyyli)amino]-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triat-siini, - (S)-3-[(4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-2-propanoli, - (R)-3-[(4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-2-propanoli, - 2-(2,2-dimetyylihydratsino)-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-tri-atsiini, - N-(4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)-bentsamidi hydrokloridi, - N-metyyli-N-(4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)-bentsamidi hydrokloridi, - 2-[[2-(asetoksi)etyyli]amino]-morfolino-6-propyyli-l,3,5-tri-atsiini.

Tällä keksinnöllä saadaan myös toksittomia, farmaseuttisesti hyväksyttäviä, kaavan I mukaisia 2-amino-4-morfolino-6-propyyli- 5 102065 1,3,5-triatsiinien happoadditiosuoloja. Esimerkkeinä farmaseuttisesti hyväksyttävistä hapoista mainittakoon mineraalihapot, kuten suolahappo, bromivetyhappo, rikkihappo, typpihappo ja fos-forihappo ja orgaaniset hapot, kuten etikkahappo, sitruunahappo, viinihappo, bentsoehappo, salisyylihappo ja maleiinihappo.

Kun molekyyli sisältää asymmetrisen hiiliatomin, kaavan I mukaiset yhdisteet voivat olla joko raseemisena seoksena tai jonkin enantiomeerin muodossa. Nämä eri muodot kuuluvat myös keksintöön.

Keksinnön mukaan 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsii-neja voidaan valmistaa jollain seuraavista menetelmistä: (a) Kun kaavassa I, Rx on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyy-li-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksialkyyli- tai (hydroksisyk-loalkyyli)alkyyliryhmä, tai R! ja R2, yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substi-tuoitu pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmä, jotka alkyyli- ja alkoksiryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli- ja pyrrolidiino- ja piperidiinoryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia kaavan (II) mukainen 2-kloori-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-tri-atsiini

\ .N .N. /01 (II

σςοΗ,σς 6 102065 saatetaan reagoimaan kaavan HNR1R2 mukaisen amiinin kanssa, jossa ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä.

(b) Kun kaavassa I, Rx on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyy-li-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksialkyyli- tai (hydroksisyk-loalkyyli) alkyyliryhmä, tai Ri ja R2, yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substituoitu pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmä, jotka alkyyli-ja alkoksiryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli-ja pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia, 2-amino-4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsiini

«L

Il a*

N^N

.. jossa

Rl ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan morfoliinin kanssa, jolla on kaava

Z - NO (V

W

jossa Z on vetyatomi tai metyyliryhmä.

7 102065

Menetelmät (a) ja (b) edellä toteutetaan korotetussa lämpötilassa, yleensä käytetyn liuottimen kiehumispisteessä ja emäksen läsnäollessa. Liuotin, jossa nämä reaktiot suoritetaan on joko amiini itse, ylimääräisesti käytettynä, tai inertti orgaaninen liuotin, parhaiten dioksaani, ja jälkimmäisessä tapauksessa emäksenä on epäorgaaninen tai orgaaninen emäs, muu kuin reaktiossa käytetty amiini, esimerkiksi trietyyliamiini.

Lähtöyhdisteenä käytetty 2-kloori-4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini (II) on jo tunnettu (T. TSUJIKAWA et ai., Yakugaku Zasshi, (1975), 512-520).

Kaavan IV mukaiset lähtöyhdisteet valmistetaan tavanomaisilla menetelmillä saattamalla reagoimaan 2,4-dikloori-6-propyyli- 1,3,5-triatsiini kavan HNRXR2 (III) mukaisen amiinin kanssa, jossa Rx ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä.

(c) Kun kaavassa I, on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on COR3-ryhmä, jossa R3 on alkyyli-, fenyyli-, halo-geenifenyyli-, alkyylifenyyli-, alkoksifenyyli-, fenyylialkyyli-tai fenoksiryhmä, jotka alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini, jolla on kaava k/N\^N\/N\H (VI> T il CHjCHjCH, 8 102065 jossa tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan ekvimo-laarisissa suhteissa kaavan HalCOR3 (VII) mukaisen R3-karbonyy-lihalogenidin kanssa, jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä ja Hai on halogeeniatomi.

Tämä reaktio on sinänsä tunnettu ja yleensä suoritetaan orgaanisessa liuottimessa kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, dikloo-rietaanissa tai pyridiinissä, lämpötilassa välillä huoneen lämpötila ja liuottimen kiehumispiste ja happoakseptorin läsnäollessa, kuten tertiäärinen orgaaninen emäs (esim. trietyyliamiini tai pyridiini) tai epäorgaaninen emäs.

Kaavan IV mukaiset lähtöyhdisteet voidaan valmistaa edellä kuvatun menetelmän (a) tai (b) mukaisesti.

(d) Kun kaavassa I, R± on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on alkanoyylioksialkyyli-, bentsoyylioksialkyyli- tai fenyyliasetyylioksialkyyliryhmä, jotka alkyyli- ja alkanoyyli-ryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, (4-morfolino-6-propyyli- 1,3,5-triatsin-2-yyli)-aminoalkanoli, jolla on kaava j*i

v. N N .N

^alk-OH (VIII) ch2ch2ch3 jossa

Rx tarkoittaa samaa kuin edellä ja alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä, saatetaan reagoimaan ekvimolaarisissa suhteissa kaavan HalCORg (IX) mukaisen Rg-karbonyylihalogenidin kanssa, 9 102065 jossa Rg on 1-4 hiiliatominen alkyyliryhmä, fenyyli tai bent-syyli ja Hai on halogeeniatomi.

Tämä reaktio on tunnettu sinällään ja yleensä suoritetaan orgaanisessa liuottimessa kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, dikloorietaanissa tai pyridiinissä, lämpötilassa välillä 0°C ja 25°C ja happoakseptorin läsnäollessa, kuten orgaaninen tertiääri-nen emäs (esim. trietyyliamiini tai pyridiini) tai epäorgaaninen emäs.

Kaavan VII mukaiset lähtöyhdisteet voidaan valmistaa edellä kuvatun menetelmän (a) tai (b) mukaisesti.

(e) Kun kaavassa I, Rx on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on CONR4R5 ryhmä, jossa R4 ja R5 ovat vetyatomi tai alkyyliryhmä, jotka alkyyliradikaalit sisältävät 1-4 hiiliatomia, kaavan (X) mukainen fenyyli (4-morfolino-6-propyyli-l,3-5-triatsin-2-yyli)karbamaatti

Wy^°°o n^n ch2ch2ch3 *' jossa

Rx tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan HNR4R5 (XI) mukaisen typpiyhdisteen kanssa, jossa R4 ja Rs tarkoittavat samaa kuin edellä.

Reaktio suoritetaan yleensä inertissä liuottimessa kuten dikloorimetaanissa, lämpötilassa välillä -45°C ja +25°C. Kaavan X mu- 10 102065 kaiset lähtöyhdisteet voidaan valmistaa edellä mainitun menetelmän (c) mukaisesti saattamalla reagoimaan kaavan VI mukainen 2-amino-4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini, jossa Rx tarkoittaa samaa kuin edellä, kaavan VII mukaisen R3-karbonyylihalogeni-din kanssa, jossa R3 on fenoksiryhmä ja Hai on halogeeniatomi, parhaiten klooriatomi.

(f) Kun kaavassa I, R! on vetyatomi, alkyyli- tai fenyylialkyyli-ryhmä ja R2 on aminokarbonyylioksialkyyliryhmä, jotka alkyyliryh-mät sisältävät 1-4 hiiliatomia saatetaan ammoniakki reagoimaan 2-morfolino-4-(fenoksikarbonyylioksialkyyliamino)-6-propyyli- 1,3,5-triatsiinin kanssa, jolla on kaava

Ri coo —/

k N

(XII) ch2ch2ch3 jossa R-L tarkoittaa samaa kuin edellä ja alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä.

Reaktio suoritetaan yleensä inertissä liuottimessa, kuten di-kloorimetaanissa, lämpötilassa välillä -35°C ja -45°C. Lähtöyh-“ disteet kaavassa XII voidaan valmistaa edellä mainitun menetelmän (d) mukaisesti saattamalla kaavan VIII mukainen (4-morfolii-no-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)aminoalkanoli reagoimaan kaavan XIII mukaisen fenyylihalogeeniformaatin kanssa seuraavan kaavion mukaisesti: 102065 / \_/Rl _J/~\ \_/ Il I Xalk-OH \-/ CH2CH2CH3 (XIII) (VIII) Tässä Rx tarkoittaa samaa kuin edellä, alk on C!-C4 alkyleeniryh-mä ja Hai on halogeeniatomi, parhaiten klooriatomi.

(g) Kun kaavassa I, R1 on asetyyliryhmä ja R2 on asetoksialkyyli-ryhmä, jotka alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, vähintään kaksi moolia asetyylihalogenidia saatetaan reagoimaan yhden moolin (4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)aminoalka-nolin kanssa, jolla on kaava O^ j1

\ .N

| ^ ^ alk-OH (XIV) ch2ch2ch3 jossa alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä.

\ Tämä reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa, kuten dikloori-metaanissa, lämpötilan ollessa huoneen lämpötilan ja liuottimen kiehumispisteen välillä ja emäksen kuten trimetyyliamiinin läsnäollessa .

Kaavan XIV mukaiset lähtöyhdisteet voidaan valmistaa edellä kuvatun menetelmän (a) tai (b) mukaiset!.

12 102065

Toksittomat farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat voidaan valmistaa kaavan I mukaisista 2-amino-4-morfoliino-6-propyyli-1,3,5-triatsiineista menetelmillä, jotka on tunnettu sinällään.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä

Esimerkki 1. Valmistus menetelmän (a) mukaisesti.

2-[(4-Morfoliino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanoli (yhdiste 1).

145,5 g (0,6 moolia) 2-kloori-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia liuotetaan 600 ml:n dioksaania. Liuos, jossa on 444 g (7,28 moolia) 2-aminoetanolia 600 mlrssa dioksaania lisätään tipoittain tähän liuokseen noin 80 minuutin ajan tehokkaasti sekoittaen. Reaktioseosta kuumennetaan tämän jälkeen refluksoiden 7 tuntia. Se jäähdytetään, 2-aminoetanolihydrokloridi, joka on muodostunut erotetaan dekantoimalla ja dioksaani poistetaan alipaineessa. Saatu jäännös liuotetaan 5 litrassa dietyylieetteriä. Liuos pestään vedellä ja pesuvesi uutetaan jälleen dikloorimetaani11 a. Orgaaniset faasit yhdistetään ja kuivataan magnesium-sulfaatilla. Liuotin poistetaan alipaineessa. Saatu kiinteä jäännös uudel1eenkiteytetään 50:50 (v/v) etyyliasetaatti-petroleumeetterin seoksesta. Saadaan 139,8 g 2-[(4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini-2-yyli)amino]-etanoi ia.

Saanto: 88%. sp.: 95-99°C.

Analyysi CrsHirNsOs %:na

Laskettu: C 53,91 H 7,92 N 26,20

Saatu: 54,30 8,10 26,13 2-((4-Morfoiiino-6-propyy1i-1,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanoli voi esiintyä kahdessa erilaisessa kidemuodossa, 13 102065 riippuen siitä onko tuote uudel1eenkiteytetty metanolista (sp.: 97-99°C) vai tolueenista (sp.: 89-90°C).

Kaavan I mukaiset yhdisteet on lueteltu taulukossa I ja ne on valmistettu samalla tavoin.

TAULUKKO I

2-R-4-Morfoliino-6-oroovyli-l,3,5-triatsiinit

Yhdiste R Substituentti Moolia Saanto so. (°C) Analvysi (1) (%) lask.(¾) saat.(%) 2 NEOH 1,1 (2) 51.5 93-94 C 55.63 55.70 H 8.20 3.19 N 32.24 32.19 3 NHC32CH2C320H 2 86.6 95-96 C 55.51 55.02 3 8.18 8.25 N 24.91 24.42 4 NH-(C32)3-C320H 2 74.6 79-30 C 56.95 56.95 3 8.47 8.51 N 23.73 23.42 5 NHC3„-C3-CH, 3 90.0 104-105 C 55.52 55.50 * I 3 OH H 3.19 3.00 N 24.91 23.43 5 NEC3 -C3-C 3. 1 (3) 22.0 55-57 C 56.95 56.75 2 | 2 j OH 5 3.47 3.37 N 23.73 23.50 7 NH-CH-CH OH 2 75.4 90-91 C 56.95 56.92 ' μ H 8.47 8.40 C2H5 Λ N 23.73 23.60 14 102065 TAULUKKO I (jatkuu)

Yhdiste P Substituentti Moolia Saanto sn(°C) Analyysi (1) (%) lask.(%) saat.(%) 8 NH-C(CH3)2-CH20H 2 32.2 85-86 C 56.95 57.87 H 8.47 8.12 N 23.73 24.24 9 N(CH )-CH CH OH 2 62.6 32-33 C 55.51 55.48 J Jm H 8.19 8.30 N 24.91 24.86 10 NHCH.CH-OCH, 2 42.7 44-45 C 55.52 55.60 2 2 3 H 8.19 8.20 N 24.91 24.99 11 NHCH2CH0HCH20H 2 68.7 119-120 C 52.52 52.69 H 7.74 7.76 N 23.57 23.60 12 NH-C(CH20H)3 2 61.0 110-111 C 51.37 50.94 H 7.64 7.53 N 21.41 21.16 13 NH-C(CH20H)2-CH, 2 48.0 121-122 C 54.02 54.13 H 8.04 8.00 N 22.5 22.2 14 NiCH.C.H-)C,H.OH 2 50 57-58 C 63.86 64.60 2 6 5 2 4 H 7.56 7.76 N 19.6 19.3 15 NHCH(CH OH)-C3QHC,HC 2 63 107-108 C 61.13 62.00 Z 6 5 H 7.24 7.45 N 18.77 18.92 15 102065 TAULUKKO I (jatkuu)

Yhdiste R Sufcstituentti Maolia Saanto sn. (°C) Analwsi (1) (¾) lask. (%) saat. H) 16(4) NHCH2CH0HCH3 2 38 97-98 C 55.52 56.30' H 8.19 ö.4 2 N 24.91 24.70 17(5) NHCH2CHOHCH3 2 49 94-95 C 55.52 55.64 H 8.19 8.13 N 24.91 24.73 18 NHCH J \ 2 63 75-76 C 60.90 59.83 j\_/ H 8.66 8.73 OH N 20.99 20.48 19(6) \ y 2 47 134-136 C 52.40 52.48 N —-CH20H H 7.57 7.40 H 20.38 19.83 20 HHN(CH ) 2 63.6 105-106 C 54.14 54.39 H 8.97 8.81 N 31.58 31.65 (1) amiinin moolimäärä per lähtöyhdisteen mooli (2) kun en läsnä kaksi moolia trietyyliamiinia (3) kun en läsnä yksi mooli trietyyliamiinia (4) enancicmeeri, jolla en 5 konfiguraatio ίο]33 = +15,3 (C= 1, metanoli) (5) er.antiomeeri, jolla on H konfiguraatio :a]35 = -1S,1 (C = 1, metanoli) (5) hydrokloridi 2-Kloori-4-morfoiiino-6-propyy1i-1,3,5-triatsiini käytettynä lähtöaineena tässä esimerkissä mainittujen yhdisteiden synteesissä on valmistettu menetelmällä, joka on kuvattu 16 102065 T. TSUJIKAWA et ai., (Yakugaku Zasshi, 95.,(1975),512-520) lähtien 2,4-dikloori-6-propyyli-l,3,5-triatsiinista.

Tämä viimeinen yhdiste on valmistettu R. HIRT et ai. (Helv.

Chim.Acta,33., (1950) , 1365-69) menetelmän mukaan.

Esimerkki 2. Menetelmän (b) mukainen valmistus.

a) Lähtöaineen 2-[(4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolin valmistus.

24,4 g (0,4 mooli) 2-aminoetanolia liuotettu 100 ml:n dioksaania, lisätään tipoittain liuokseen, jossa on 38,4 g (0,2 moolia) 2,4-dikloori-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia 100 ml:ssa dioksaania huoneenlämpötilassa. Lisäyksen jälkeen sekoitusta jatketaan yön yli. 2-Aminoetanolihydrokloridi suodatetaan ja suodos haihdutetaan alipaineessa. Saatu jäännös uudel1eenkiteytetään etyyliasetaatti-heksaanin seoksesta 50:50 ’ (v/v). Saadaan 41,5 g 2-[(4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolia.

Saanto: 96%. sp.: 87-88°C.

Analyysi CeHi3ClN40 %:na

Laskettu: C 44,34 H 6,00 N 25,88 Cl 16,40 Saatu: 44,42 6,17 25,69 16,52 b) 2-[(4-Morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolin valmistus.

Muunnos 1.

10,83 g (0,05 moolia) 2-[(4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsin-\ 2-yyli)amino]etanolia ja 8,7 g (0,10 moolia) morfoliinia sekoitetaan 150 ml:an dioksaania. Seoksen lämpötila kohoaa itsestään 41°C:sen. Sen jälkeen se kuumennetaan refluksoiden 30 minuuttia ja jäähdytetään. Saatu morfoiiinihydrokloridi suodatetaan. Suodos haihdutetaan ja jäännös uudel1eenkiteytetään etyyliasetaatti-heksaanin seoksesta 50:50 17 102065 (v/v). Saadaan: 11,8 g 2-[(4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolia. saanto: 88.4%. sp.: 93-94°C.

Metanolista uudel1eenkiteytetyn tuotteen sulamispiste on 97-98°C ja tuote on samanlainen kuin esimerkissä 1 valmistettu yhdiste 1.

Muunnos 2.

10,83 g (0,05 moolia) 2-[(4-kloori-6-propyy1i-1,3,5-triatsin-2-yyli-amino]etanolia ja 15,15 g (0,15 moolia) N-metyylimorfoliinia sekoitetaan 100 ml;an dioksaania. Seosta kuumennetaan refluksoiden 20 tuntia; sen jälkeen se jäähdytetään ja dioksaani poistetaan alipaineessa. Jäännös liuotetaan 200 ml:ssa etyyliasetaattia. Liuos pestään kahdesti 50 ml :11a vettä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöitetään. Tuote kiteytyy haihduttamisen aikana. 9,23 g 2-[(4-morfoliino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolia on samanlainen kuin edellä saatu tuote.

Esimerkki 3. Menetelmän (c) mukainen valmistus a) Lähtöaineen 2-amino-4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistus : 1. 2-Amino-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiini (hydrokloridi).

Tämä tuote on kuvattu S. MURÄI et ai. japanilaisessa patenttihakemuksessa 69,688/74 (Chem.Abstr. 8_L, (1974) , 136188x) . Se voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 87 g (1 mooli) morfoliinia ja 8,6 g (0,05 moolia) 2-amino-4-kloori-6-propyy1i-1,3,5-triatsiinia sekoitetaan. Seoksen lämpötila kohoaa itsestään 54°C:een. Seosta kuumennetaan sen jälkeen refluksoiden 5 tuntia.

Reaktioseos haihdutetaan alipaineessa ja saatu jäännös liuotetaan uudelleen etyyliasetaatissa. Liuos pestään kolme 18 102065 kertaa vedellä ja sitten kuivataan natriumsulfaati11 a. Liuotin poistetaan alipaineessa ja jäännös uudel1eenkiteytetään heksaanista. Saadaan 9,1 g 2-amino-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia.

Saanto: 82% sp.: 127-128°C.

Hydrokloridi: sp.: 210-211°C (isopropyyli alkoholi-eetteri). Analyysi C10H17N5O.HCI %:na

Laskettu: C 46,24 H 6,94 N 26,97 Cl~ 13,68

Saatu: 46,21 6,90 26,78 13,61 2-Amino-4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsiinia käytetään lähtöyhdisteenä tässä reaktiossa, joka on valmistettu S. MURAI et ai. (Japanilainen patenttihakemus 69,688/74) menetelmän mukaan.

2. 2-(Metyyliamino)-4-morfoiiino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini (hydrokloridi).

Liuos, jossa on 8,7 g (0,1 moolia) morfoliinia 50 ml:ssa dioksaania lisätään liuokseen, jossa on 5,6 g (0,03 moolia) 2-kloori-4-(metyyliamino)-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia 50 ml:ssa dioksaania. Seosta kuumennetaan refluksoiden 5 tuntia. Sen jälkeen se jäähdytetään ja muodostunut morfoiiinihydrokloridi suodatetaan pois. Liuotin poistetaan alipaineessa ja jäännös otetaan kloroformiin. Seos pestään vedellä ja orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutetaan ja jäännös uudel1eenkiteytetään etyyliasetaatista. Saadaan 5,3 g 2-(metyy1iamino)-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia. Saanto: 74%. sp.: 131-133°C.

Saatu tuote liuotetaan kuumassa isopropyylialkoholissa. Ekvivalentti määrä etyylieetterissä liuotettua suolahappoa lisätään liuokseen. Hydrokloridi kiteytyy jäähdyttämisen aikana. Kiteet suodatetaan, pestään dietyylieetterillä ja kuivataan.

Saanto: 75%. sp.: 177-178°C.

19 102065

Analyysi C11H19N5O.HCI %:na

Laskettu: C 48,26 H 7,31 N 25,59 Cl~ 12,97 Saatu: 48,38 7,40 25,57 12,64 2-Kloori-4-(metyyliamino)-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia käytetään 1ähtöyhdisteenä tässä reaktiossa, joka on valmistettu T. TSUJIKAWA et ai., (Yakugaku Zasshi ,95., (1975) ( 512-520) menetelmän mukaan.

b) 2-Amino-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinien valmistus.

1. N-(4-Morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)-asetamidi (yhdiste 21).

4 g (0,05 moolia) asetyy1 ikioridia lisätään tipoittain liuokseen, jossa on 11,2 g (0,05 moolia) 2-amino-4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia 100 ml:ssa vedetöntä pyridiiniä huoneenlämpötilassa. Seosta sekoitetaan 6 tuntia ja sen jälkeen annetaan seistä 48 tuntia. Pyridiinihydrokloridi suodatetaan ja suodos haihdutetaan alipaineessa. Saatu jäännös otetaan kerran tolueeniin ja seos haihdutetaan jälleen. Jäännös otetaan sitten dikloorimetaaniin ja liuos pestään vedellä ja kuivataan natriumsulfaatti11 a. Liuottimen haihtumisen jälkeen saatu jäännös puhdistetaan kromatografoimalla silikalla.

(eluointiaine: 90:10 (v/v) dikloorimetaani-etanoli) ja tuote uudelleenkiteytetään lopuksi etyyliasetaatista. Saadaan 5,75 g N-(4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)-asetamidia. Saanto: 42.4%. sp.: 14!-142°C. (yhdiste 21a).

Hydrokloridi: sp.: 145-146°C (isopropyylialkcholi-eetteri). (yhdiste 21b)

Analyysi Ci2Hi9Ns02.HCl %:na

Laskettu: C 47,76 H 6,63 N 23,22 Cl" 11,77 Saatu: 47,78 6,73 22,80 11,62 20 102065 2. N-(4-Morfoiiino-6-propyyi i-1,3,5-triatsin-2-yyli)-bentsamidi (hydrokloridi) (yhdiste 22).

Liuos, jossa on 7,7 g (0,055 moolia) bentsoyy1 ikioridia 50 ml :ssa dikloorietaania ja liuos, jossa on 5,5 g (0,055 moolia) trietyyliamiinia 50 ml:ssa dikloorietaania lisätään vuorotellen liuokseen, jossa on 11,2 g (0,05 moolia) 2-amino-4-morfoiiino-6-propyyli-l,3,5-tratsiinia 200 ml:ssa dikloorietaania huoneenlämpötilassa. Seosta kuumennetaan refluksoider. 6 tuntia ja jäähdytetään huoneenlämpötilassa. Se pestään vuorotellen vedellä, vesipitoisella natriumbikarbonaatti 1iuoksel1 a ja sitten vedellä jälleen kerran. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutetaan aiipaineessa. Saatu jäännös kromatografoidaan silikalla (eluointiaine: 95:5 (v/v) dikloorimetaani-etanoli) ja lopuksi uudel1eenkiteytetään 50:50 (v/v) dietyylieetteriheksaanin seoksesta. Tuote muodostaa hydrokloridia dietyylieetterissä. Siten saadaan 12,1 g N-(4-morfoliino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)-bentsamidihydrokloridia.

Saanto: 66.5%. sp.: 197-198C.

Analyysi C17H21N3O2.HCl %:na

Laskettu: C 56,12 H 6,05 :i 19,26 Cl~ 9,77

Saatu: 56,30 6,50 19,16 9,54

Taulukossa II tiivistetyt yhdisteet valmistetaan kuten on esitetty, joko esimerkin 3 b) 1. mukaisella menetelmällä tai esimerkin 3b) 2. mukaisella menetelmällä TAULUKKO :: 2~?.-4~Morfoliino-6-oroovvli~l, 3 , 5-triatsiinit ' Yhdiste R Substituentti .Menetelmä Saanto sp (°C) Analwsi (¾) lask.(%) saat.(%) 23 NHCOCH C,H. 3b.1 51.3 110-113 C 63.34 63.13 2 o 5 H 6.74 6.35 N 20.52 20.55

Yhdiste R Substituentti Menetelmä Saanto so.(°C) Analyysi (%) lask. (%) saat. (%) 21 TAULUKKO II (jatkuu) 102065 24 NHC0C3(CH ) 3 1 3b.1 34.3 141 C 57.34 56.34 · H 7.85 7.34 N 23.89 23.70 25a N(CH3)C0CH3 3b.1 34.3 60-61 C 55.91 56.02 H 7.53 7.57 N 25.09 25.05 25b N(CH3)C0CH3 3b.1 75.5 104-105 C 49.44 48.78 (1) 3 6.97 7.01 N 22.19 22.43 26 N(CH3)COCH(CH3)2 3b.1 38.5 36-37 C 58.62 58.78 H 8.16 8.33 ! N 22.80 22.62 27(1) N(CH3)C0C6H5 3b.2 46.5 122 C 57.22 56.78 H 6.36 6.40 N 18.54 18.28 23 NE-C3CC,3, 3b.2 24.3 154-155 C 59.43 59.50 0 5 3 6.12 6.32 N 20.41 20.31 29(1) NH-CO-C.3,-oCl 3b.2 66 205-206 C 51.27 51.19 o 4 ‘ H 5.31 5.34 N 17.58 17.49 30 N(C33)C0C6H4-pCl 3b.2 72 96-97 C 57.52 58.07 H 5.90 6.17 N 18.63 18.65

Yhdiste R Substituentti ffenetelinä Saanto sn. ( C) .

--- —— lask.(%) saat.(%) TAULUKKO II (jatkuu) 102065 22 31(1) NHCOC6H4-pOCH3 3b.2 33 199 C 54.89 54.83 H 6.14 6.17 N 17.78 17.80 32(1) N(CH,)C0C„H,-p0C3, 3b.2 56 120 C 55.94 53.40 3 6 4 3 H 6.42 6.48 N 17.17 17.22 33(1) MECOC H -pCH 3b.2 53 138 C 57.21 57.45 H 6.40 6.42 N 18.53 18.73 34(1) N(03,)COC.H.-pCH, 3b.2 74 99 C 53.23 58.08 3643 S 6.69 6.73 N 17.87 18.11 35 N(CH )C0C H - 3b.2 70 73 C 59,8A 60,12 363 H 6.78 7.09 (3,4-di-OCH ) N 17.44 17.45 r 58.23 58.4“ 36 NSC0C.H,-(3,4- 3b.2 45 232 03 H 6.69 6.65 di-Ca.) 3 N 17.37 17.72

Esimerkki 4. Menetelmän (d) mukainen valmistus 1. 2-[[2-As et oksi)etyyli]amino]-4-mor£oiiino-6-?ropyyli-i,3,5-triatsiini (yhdiste 37).

4,3 g (0,055 moolia) asetyy1 ikioridia liuotettu 50 ml:an dikloorimetaania ja 5,5 g (0,055 moolia) trietyyliamiinia liuotettu 50 ml:n dikloorimetaania, lisätään samanaikaisesti 23 102065 välillä 0°C ja 5°C liuokseen, jossa on 13,4 g (C,05 moolia), 2-c (4-morf Ollina-6-propyyli-l, 3,5-triatsin-2-yyl Danina ]-etanolia (yhdiste 1 valmistettu esimerkissä 1) 200 ml:ssa dikloorimetaania. Maiden kahden reagenssin lisäys on säädetty sellaisella tavalla että happokloridi on aina reaktioseoksessa ylimääräisenä ottaen huomioon trietyylianiinin. Seosta sekoitetaan yksi tunti 5°C:ssa ja sitten 12 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos pestään vuorotellen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä. Se kuivataan natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutetaan alipaineessa.

Jäännös kiteytyy tolueeni-heksaanin 1:2 seoksessa. Saatu tuote puhdistetaan ensin kromatcgrafisesti silikalla (elucintiaine: 95:5 (v/v) dikloorimetaani-etanoli) ja lopuksi uudel1eenkiteytetään tolueeni-heksaanin 1:1 seoksesta. Saadaan 9,3 g 2-[[2-(asetoksi)etyyli]amino]-4-morfoliinc-6-propyyli- 1,3,5-triatsiinia.

Saanto: 60%. sp.: 94-95°C. j

Analyysi C14H2SN5C3 %:na

Laskettu: C 54,37 H 7,44 N 22,65

Saatu: 54,98 7,69 22,62

Taulukon III yhdisteet ovat valmistettu samalla tavein.

^nrTT.rrygo III

2-R-4-mcrfcl iino-o-isrcpyvl χ. — 1,3 , o — triatsiini-

Yhdiste R Subs ti tuen tti Saanto (%) so. (°c) Analwsi lask.(¾) saat.(%) ) Q-C2CH(CH )„ 59.3 54-55 C 55.97 55.35 ώ Z 3 i.

H 3.01 3.04 ·' N 20.77 20.74 39 SE(Ca )20-CCCg3. 57.4 93-99 C 61.46 51.52 H 5.74 5.75 N 13.37 13.91 TAULUKKO III (jatkuu)

Yhdiste R Subs ti tuen tti Saanto (¾) sr>. (°C) Analyysi lask.(%) saat.(%) 24 102065 40 NH(CH,),0-C0C3,C,H. 63.4 * 63-64 C 62.34 62.45

Z 6 6 D J

H 7.01 7.07 N 13.13 13.15

Esimerkki 5. Menetelmän (e) mukainen valmistus Ν,Ν-dimetyyli-N'-(4-morfoiiino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)-urea (yhdiste 41).

Kaasumainen virta dimetyyliamiinia lähetetään läpi liuoksen, jossa on 5 g (0,0145 moolia) fenyyli (4-morfoliino-6-propyyli- l,3,5-triatsin-2-yyli)karbamaattia (yhdiste 28 valmistettu esimerkissä 3) 100 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania kolmen tunnin ajan lämpötilassa 20°C. Seoksen annetaan sen jälkeen , seistä 12 tuntia. Se pestään vuorotellen laimealla natriumhyd- roksidiliuoksella ja vedellä. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutetaan alipaineessa. Saatu jäännös kiteytyy 50:50 (v/v) etyyliasetaatti-heksaanin seoksessa. Saadaan 1,7 g N,N-dimetyyli-N’-(4-morfoiiino-6- propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)-ureaa.

Saanto: 39.9%. s?.: 110-111°C.

Analyysi CiaHaaKsCa %:na Laskettu: C 53,06 H 7,48 N 28,57

Saatu: 53,20 7,69 23,67

Esimerkki 6. Menetelmän (f) mukainen valmistus 2-([2-[(aminokarbonyyli)oksi]etyyli]amino]-4-morfoliinc-6-' pro?yyli-l,3,5-triatsiini (yhdiste 42).

19,4 g (0,05 moolia) 2-morfoiiino-4-[[2-[(fenoksikarbonyy1i)-oksi]etyyli]amino]-6-propyy1i-i,3,5-triatsiinia, liuotettu 100 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania, lisätään yhteen litraan 25 102065 nestemäistä ammoniakkia. Sekoittamista jatketaan 7 tuntia lämpötilassa välillä -35°C ja -45°C. Ammoniakki on sitten haihdutettu ja orgaaninen faasi pestään vuorotellen natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä. Se kuivataan natriumsulfaati1 la ja liuotin haihdutetaan alipaineessa. Saatu jäännös kiteytyy 50:50 (v/v) etyy1iasetaatti-heksaanin seoksessa. Saadaan 15,1 g 2-[[2-[(aminokarbonyyli)oksi]etyyli]-amino]-4-morfoiiino-6-propyy1i-1,3,5-triatsiinia.

Saanto: 97.4%. sp.: 139-140°C.

Analyysi Ci3H22Ne03 %:na Laskettu: C 50,32 H 7,09

Saatu: 50,39 7,15 2-Morfoliino-4-[[2-[(fenoksikarbonyyli)oksi]etyyli]amino]-6-propyyli-1,3,5-triatsiinia käytetään lähtöaineena tässä esimerkissä, joka on valmistettu esimerkki 4 menetelmän mukaan lähtien 2-[(4-morfoliino-6-propyyli-1,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolista ja fenyylikloroformaatista.

Saanto: 85%. sp.: 83-84°C.

Analyysi Ci9H25Ns04 %:na Laskettu: C 58,91 H 6,46 N 18,0

Saatu: 58,99 6,60 18,1

Esimerkki 7. Menetelmän (g) mukainen valmistus N-[2-(Asetoksi)etyyli]-N-(4-morfoiiino-6-propyy1i-1,3,5- triatsin-2-yyli)-asetamidi (yhdiste 43).

Liuos, jossa on 11,8 g (0,15 moolia) asetyylikioridia 50 ml:ssa dikloorietaania ja liuos, jossa on 15 g (0,15 moolia) trietyyliamiinia 50 ml:ssa dikloorietaania lisätään suspensioon, jossa on 13,4 g (0,05 moolia) 2-[(4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolia (yhdiste 1 valmistettu esimerkissä 1) 250 ml:ssa dikloorietaania ja pidetään noin 20°C:n lämpötilassa. Tämä lisäys suoritetaan seuraavalla tavalla: puolet happpokloridista lisätään ensin ja ,, 102065 seoksen annetaan reagoida 15 minuuttia, ja puolet trietyyliamiinista lisätään sitten; loput happokloridista lisätään, seoksen annetaan reagoida edelleen 15 minuuttia ja kuumeta 55°C:een asti, ja lopuksi loput trietyyliamiinista lisätään. Saatu seos kuumennetaan refluksoiden 7 tuntia. Sen jälkeen sen annetaan seisoa yön yli huoneenlämpötilassa. Se pestään vuorotellen vesipitoisella liuoksella natriumbikarbonaattia ja vedellä. Se kuivataan natriumsulfaatilla ja suodatetaan Noritin läsnäollessa. Liuoksen alipaineessa haihtummisen jälkeen saatu jäännös puhdistetaan kromatografisesti silikalla (eluointiaine: 95:5 (v/v) dikloorimetaani-etanoli). Saatu tuote kiteytyy heksaanissa kylmässä. Saadaan 6,35 g N-[2-(asetoksi)etyyli]-N-(4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)-asetamidia.

Saanto: 36.2%. sp.: 49-50°C.

Analyysi C16H25N5O4 %:na Laskettu: C 54,70 H 7,12 N 19,94

Saatu: 55,22 7,22 20,0

Kuten on edellä kuvattu, kaavan I mukaisilla 2-amino-4-morfoliino-6-propyyli-l,3,5-triatsiineilla ja niiden toksittomilla farmaseuttisesti hyväksyttävävi1lä happoadditiosuoloilla on ominaisuus korjata kolienergiseen järjestelmään kohdistuvia hypofunktionaalisiä vaikutuksia. Tämä suotuisa ominaisuus on demonstroitu sarjoilla farmakologisia tutkimuksia jolloin on osoitettu, että keksintöön liittyvillä yhdisteillä on tiettyjä samanlaisia vaikutuksia kuin sellaisilla hyvin tunnetuilla kolinergisillä yhdisteillä, kuten oksotremoriinilla, arekoliinilla tai fysostigmiini1 la, tai muutoin vastustava vaikutus koiinergisiin antagonisteihin kuten skopolamiiniin.

Kyseisen keksinnön yhdisteet alistettiin farmakologisiin testeihin, tulokset siitä ilmoitetaan alla.

27 102065 1. Oksotremoriinin koliergisten vaikutusten tehostaminen Tämän testin tarkoitus (R.C. RATBUN et ai.,

Psychofarmacologia,4,(1963),114-125) on demonstroida niin, että keksintöön liittyvät yhdisteet tehostavat keskeisiä ja periferaalisia kolinergisiä vaikutuksia, joita pieni annos oksotremoriinia hiirelle annettuna aiheuttaa.

Periferaalisen kolinergisen aktivoinnin aste mitataan syljenerityksen määrästä seuraavalla järjestelmällä:

Arvo 0: sylkeä ei erity enemmän kuin normaalilta hiireltä;

Arvo 1: vähän sylkeä on löydettävissä hampaiden ympäriltä;

Arvo 2: sylki muodostaa kapean nauhan suun ympärille;

Arvo 4: sylki kastelee leuan alapuolisen pinnan;

Arvo 6: sylki vuotaa suusta, esimerkiksi etujaloille.

Väliarvoja ei ole otettu, ja sylki on pyyhitty pois jokaisen kokeen jälkeen.

Keskeinen kolinerginen aktivointi mitataan vapinan määrästä seuraavalla järjestelmällä:

Arvo 0: ei vapinaa;

Arvo 1: hieman ja jaksottaista satunnaista vapinaa:

Arvo 2: kohtuullista ja vähäistä vapinaa usein toistuvana:

Arvo 4: korostuvaa vapinaa, mutta välillä jaksottain rauhallista:

Arvo 6: hyvin voimakasta vapinaa ja lähes jatkuvaa vapinaa.

'. Naaraspuoliset NMRI hiiret (20 - 25 g) ovat jaettu neljään ryhmään, joissa on viisi eläintä, niin että on yksi kontrolliryhmä ja kolme käsittelyryhmää. Yhdistettä, jota testataan valvotaan intraperitoneaalisesti (kolmessa käsitellyssä ryhmässä) 20 minuuttia ennen oksotremoriinin antamista. Annos vaihtelee jokaisessa käsitellyssä ryhmässä. Oksotremoriini jaetaan intraperitoneaalisesti käsittelyryhmille ja kontrolliryhmälle. Annos on 0,05 mg/kg liuotettuna 10 ml/kg fysiologista suolaliuosta. Tämä annos vastaa suunnilleen sitä minimiannosta oksotremoriinia, joka aiheuttaa vapinaa ja syljeneritystä. Oksitremoriinin antamisen jälkeen, eläimet 28 102065 sijoitetaan yksittäisesti pieniin häkkeihin ja niitä tarkkaillaan säännöllisin 5 minuutin väliajoin kunnes kolinergiset vaikutukseta ovat kadonneet kokonaan. Kullekin ryhmälle summataan yksittäiset tulokset; tämä tekee mahdolliseksi muodostaa käyrän, joka näyttää tulosten summan ' ajan funktiona, mikä on tyypillistä kullekin ryhmälle.

Käyrien alapuolella olevien alueiden keskiarvoja verrataan kontrolliryhmän käyrän alapuolisen alueen keskiarvoon, ja suoritetaan tilastollinen analyysi Mann-Whitney menetelmällä. Tästä vertailusta saadaan "minimiaktiiviannos" . Tämä "minimiaktiiviannos" on se yhdisteen minimiannos, joka tarvitaan tehostamaan vielä tutkittavan oksotremoriinin syljeneritys- tai vapinaefektit, jotka vielä havaitaan tai toisin sanoen minimiannos suuremmalle alueelle kuin käyrän alapuoliselle alueelle, joka on saatu kontrolliryhmälle.

Tässä kokeessa saadut tulokset näyttävät että keksintöön liittyvät yhdisteet tehostavat oksotremoriinin syljeneritysvaikutuksen minimiannoksella 7,7 - 107 mg/kg ja tehostaa vapinavaikutuksen minimiannoksella 8 - 112 mg/kg. Sitäpaitsi, minimiaktiivimääriin ei liity omia koiienergisiä vaikutuksia ja ovat paljon kauempana kuolettavista määristä, jotka ovat ratkaisevia Irwinin testissä. Lisäksi, tämä testi näyttää että tietyillä keksinnönmukaisi1 la yhdisteillä, kun niihin käytetään minimiaktiiviannosta, on vaikutuksia, jotka kestävät kauemmin kuin metyyli 1,2,5,6-tetrahydro-l-metyyli-3-pyridiinikarboksylaatti (arekoliini) hyvin tunnettu kolinerginen yhdiste. Keksinnön yhdisteet näyttävät siten mahdollisuuden oksotremoriinin syljenerityksen ja vapinan vaikutuksia 20 minuuttia sen jälkeen kun minimiaktiiviannos on annettu, kun taas samoissa olosuhteissa arekoliini ei anna mahdol1isuutta.

29 102065 2. Skopolamiinin indusoiman hyperaktiivisuuden ehkäiseminen. Eläin, joka sijoitetaan uuteen ympäristöön ilmaisee voimakasta tutkivaa aktiivisuutta ympäristöä kohtaan. Tämä progressiivinen pelkistys ja sitten tutkivan aktiivisuuden katoaminen, toisin sanoen tottuminen uuteen ympäristöön, voidaan käsittää keskeiseksi osaksi oppimista. Tämä tutkivan aktiivisuuden vähitellen tapahtuva vaimennus ja sitten katoaminen, toisin sanoen tottuminen uuteen ympäristöön, voidaan käsittää oppimisen perusmuodoksi. Tämä keskeinen oppimisen muoto on herkkä lääkkeiden vaikutukselle, huumeiden jotka helpottavat tai vaikeuttavat oppimista. (A. PLATEL et ai.,

Psychofarmacology,78., (1982) ,346-352). Siten, esimerkiksi, skopolamiini, yhdiste joka aiheuttaa muistin epäjärjestystä, aiheuttaa tutkivaa hyperaktiivisuutta rotille, jotka on sijoitettu uuteen ympäristöön; tämä ilmiö liittyy tämän yhdisteen keskeiseen antikolienergiseen aktiivisuuteen. (W.J. STEWART et ai., Psychofarmacologia.44,(1975),291-295). Päinvastoin, kolinerginen agonisti kuten fysostigmiini vastustaa tutkivaa hyperaktiivisuutta jota skopolamiini indusoi.

Kokeessa, joka on kuvattu alla, keksinnön mukaiset yhdisteet annetaan joko fysiologisessa suolaliuoksessa tai sopivassa väliteaineessa (yleensä sitraattipuskuri pH 5), riippuen niiden liukoisuudesta.

Tämä testi paljastaa keksinnön mukaisten yhdisteiden aktiivisuuden vertailukelpoisuuden fysostigmiini1 la tehtyjen testien kanssa. Se perustuu alkuperäiseen tekniikkaan, kuvannut A. PLATEL (loc.cit.) toisaalta ja toisaalta se on menetelmä mittaamisen automaattiseksi tallentamiseksi, kuvannut H.J. TAUGER et ai. (J.Neuroscience Metods,10,(1984),237-245).

Tässä testissä on käytetty naaraspuolisia Sprague-Dawley SPF (erityisen Patogen vapaa; 160 - 200 g) rottia. Viikon aikana ennen koetta eläimet pidettiin normaalioloissa 15 eläimen 30 102065 ,ί 1 ryhmissä normaaleissa ristikkohäkeissä, ja ruoka ja juoma olivat vapaasti saatavilla. Kokeen alussa rotat on jaettu 4 samanlaiseen ryhmään, joissa on 10 eläintä ja saavat sopeutua tähän tilanteeseen yhden tunnin ajan. Kukin eläinryhmä alistetaan sitten ennalta määrättyyn käsitelyyn: - ryhmä 1 saa kaksi samanaikaista intraperitoneaalista ruisketta fysiologista suolaliuosta tai väliteainetta; - ryhmä 2 saa yhden intraperitoneaalisen ruiskeen fysiologista suolaliuosta tai väliteainetta ja yhden intraperitoneaalisen ruiskeen 0,5 mg/kg skopolamiinia liuoksena; - ryhmä 3 saa yhden intraperitoneaalisen ruiskeen yhdistettä, jota testataan liuoksena sopivassa väliteaineessa ja yhden intraperitoneaalisen ruiskeen fysiologista suolaliuosta tai väliteainetta; - ryhmä 4 saa yhden intraperitoneaalisen ruiskeen testattavaa yhdistettä ja yhden intraperitoneaalisen ruiskeen 0,5 mg/kg skopolamiinia.

30 minuuttia käsittely jälkeen, neljä eläinryhmää testataan samanaikaisesti. Lopuksi, kukin ryhmä laitetaan neliönmuotoiseen kammioon (100 x 100 cm), jossa on ristikko lattia ja pystysuuntainen seinä, korkeus 50 cm. Jokainen huone sisältää 16 aluetta sisältäen 4 aluetta nurkissa, 4 aluetta keskellä ja 8 periferaalista aluetta. Lisäksi, jokaisessa kammiossa on 2 riviä infrapunavaloja järjestetty 2 cm lattian yläpuolelle eläinten vaakasuorien liikkeiden merkitsemiseksi ja 2 muuta lokeroa infrapunavaloja järjestetty korkeudelle 10 cm lattiasta ylös pystysuuntaisten liikkeiden merkitsemiseksi.

Infrapuna lokerot ovat yhteydessä mikroprosessoreihin, jotka tekevät mahdolliseksi määrätä etäisyyksien keskiarvon eläinryhmässä (cm) ja myös keskiarvon determinaation järjestysten luvut, sekä vaakasuorien liikkeiden jakaantumisen vaihtelevissä keski- ja ympäröivissä alueissa ja kulmissa, ilmaistuna sinä aikana, jona keskiarvo on näissä erilaisissa alueissa. Jokainen testattava yhdiste tutkitaan ainakin kolmena 31 102065

'' .M

erilaisena määränä, joista minimiaktiiviannos, joka sisältää hyperaktiivisuutta intraperitionaalin antamisesta indusoituneena 0,5 mg/kg skopolamiinia on varmaa. Vain skopolamiinilla käsitellyn ryhmän 2 saadut arvot verrataan ryhmässä 4 skopolamiini1 la ja testattavalla yhdistellä saatuihin arvoihin, ja saadut arvot ryhmässä 4 verrataan ryhmään 3, johon on testattu vain testattavaa yhdistettä.

Kontrolliryhmä 1 palvelee ryhmän 2 annetun skopolamiinin vaikutuksen kontrolloijana. Saadut erot arvioidaan tilastollisesti kaikissa tapauksissa Mann-Whitney menetelmällä.

Saadut tulokset osoittavat että keksinnön yhdisteillä on hyvä inhibitorinen aktiivisuus skopolamiinin hyperaktivisoimana.

Minimiaktiivimäärät, jotka on päätetty näille yhdisteile ovat välillä 1 ja 89 mg/kg. Kuitenkin, päinvastoin kuin fysostigmiinissä, joka ei ole aktiivinen kun sitä annetaan enemmän kuin 15 minuuttia ennen kuin mittaukset on tehty, « keksinnön mukaisilla yhdisteillä on vielä inhibitorista aktiivisuutta kun ne annetaan 30 minuuttia ennen kuin mittaukset on tehty. Niiden aktiivisuus kestää täten pidempään kuin fysostigmiinin.

3. Skopolamiinin elektroenkefaiogrammisten vaikutusten estäminen. (EEG).

Skopolamiinin antaminen ihmisille tai eläimille saa aikaan muistin epäjärjestystä, joka on verrattavissa niihin, joita esiintyy normaalin tai patalogisen vanhenemisen yhteydessä.

Potilaille, jotka kärsivät seniilistä dementiasta, eräästä Alzheimerin tyyppistä, parannus muistin epäjärjestykseen on ratkaistavissa antamalla fysostigmiiniä, yhdistettä joka • sisältää asetyylikolinesterasea.

Skopolamiini, jota annetaan intraperitoneaalisesti rotille 0,5 mg/kg annoksena, indusoi EEG spektriin muunnelmia, jotka ilmaisevat itsensä 8 Hz taajuusalueen intentisiteetin kasvulla, 32 102065 pelkistys taajuusalueiden 20,8 - 40 Hz intentisiteetillä ja kaiken intentisiteetin kasvulla EEG spektrissä. Fysostigmiini vastustaa näitä muunnelmia.

Tämän testin tarkoitus on näyttää elektroenkefalo-grammin kvantitatiivisen analyyttisen menetelmän keskiarvolla, että keksinnön yhdisteillä on ominaisuus neutraloida niitä vaikutuksia, joita skopolamiini käyttää EEG spektrissä (P. ETEVENON, L'Electroencefalografie sur ordinateur. Analyse kvantitatiivinen et statistique. Copedit, Paris, 1978). Naaraspuolisia albino Sprague-Dawley SPF rottia (160 - 200 g) käytetään tässä testissä. Kun eläimet ovat 3 kk vanhoja, 5 kuorielektrodia istutetaan pysyvästi, aseptisesti ja yleisen anesteetin mukaan: yksi inertti elektroidi, yksi vasen ja yksi oikea edessä oleva, ja yksi vasen ja yksi oikea takaraivo-elektrodi (P. ETEVENON. loc.cit.).

Testi suoritetaan kun eläimet ovat noin 15 kk vanhoja. Sillä välillä eläimet pidetään yksittäisissä häkeissä. Niille annetaan vesi ja ruoka ad libitum ja ne pakotetaan säännölliseen päivittäiseen jaksoon sisältäen pimeän ajan välillä klo 6 illalla klo 6 aamulla. Samanaikaisesti eläimet ovat progressiivisesti sopeutuneet äänieristettyihin häkkeihin, joissa ne myöhemmin hoitavat elektroenkefaiogrammmien äänitystä, sekä näennäislääkkeen intraperitoneaalisen antamisen kokeelliset olosuhteet, Tuotteet annetaan välittömästi ennen kuin EEG äänitetään. Rotat jaetaan 8 eläimen ryhmiin ja 16 esimerkkiä EEG spectrasta äänitetään yli 5 sekunttia (kaksi EEG spectraa/eläin). Saatu spectra on sitten analysoitu tietokoneella (nopea Fourier transform), joka mahdollistaa 16 suoritetun mittauksen keskiarvon jotka on näytetty toteen kullekin ryhmälle ja kaikelle EEG:n spektrin intensititeeti11 e ja tämän intensiteetin jakaantumiselle (%) erilaisissa taajuuksissa, jotka päätetään kullekin eläimelle.

102065 Tämä operaatio (spectran äänittäminen) toistetaan 9 kertaa (kokonainen kesto: 121 minuuttia).

Tutkitun yhdisteen vaikutus päätellään saatujen tulosten tilastollisesta vertailusta, jotka on saatu kun eri eläinryhmille on annettu skopolamiinia ja näennäislääkettä.

Taulukko lv alla näyttää, että joidenkin keksinnön mukaisten yhdisteiden, jotka on annettu intraperitoneaalisesti annoksella mg/kg, pelkistyksen prosenttimäärä on nousussa taajuuden intensiteetillä 6,4 - 9,6 Hz (keskiarvo 3 Hz), minkä aiheuttaa skopolamiinin intraperitoneaalinen antaminen 0,5 mg/kg.

TAULUKKO IV

Skopolamiinin taajuusalueeseen aiheuttamien vaikutusten ehkäisy 6.4 - 9,6 Hz EEGtssä

Yhdiste Annos (irrr/kg) Ehkäisy (¾) 1 5.3 52 7 29.5 50 9 8.8 53.3 20 2.7 66.7 21a 2.7 100 22 3.6 65.7 25a 0.38 46.7 25 3.1 55.5 27 12 93.3 37 9.9 53.3 43 11.2 77·3 fvsostigmiini 0.4 76.3

Tulokset näyttävät, että keksinnön yhdisteet, kuten f yscstigmuni, ehkäisevät vaikutuksia, jotka skopol amiini saa liikkeelle el ektroer.kef ai ogrammissa . On nähtävissä, että tämä inhibiitio saavuttaa ja ylittää jopa 50% suhteellisen matalilla

/ , M

ui 4..

10206- 34 määrillä kaukana toksisista annoksista, mikä ei tapahdu fysostigmiinin kohdalla.

4. Multiple-koe passiivinen välttely.

Kyseisen keksinnön yhdisteet on tutkittu tarkoituksena näyttää toisaalta niiden ominaisuus edistää oppimista, ilmaistuna tarvittavien kokeiden määrän pelkistyksenä, jotta saavutettaisiin ennakoiva kriteeri, ja toisaalta niiden ominaisuus vastustaa amnesiaa, jota aiheuttaa skopolamiinin antaminen. Lopuksi, multiple-kokeen passiivisen välttelyn menetelmää on käytetty. Tämä menetelmä on hyvin tunnettu niiden vaikutusten arvioimisessa, joita tuote käyttää muistissa ja oppimisessa (A. FINE et ai., Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82,.(1985), 5227-5230) .

Testi suoritetaan naaraspuolisilla Sprague-Dawley rotilla (160-200 g), joita on pidetty normaaleissa häkeissä kokeen keston ajan. Käytössä ollut laite on läpinäkyvä neliönmuotoinen häkki, 35 cm sivuilta ja 25 cm korkea, sovitettu ristikko lattialle, jonka voi sähköistää. Eristävä kumimatto (10 x 17 cm) sijoitetaan lattialle häkin yhteen nurkkaan.

Kun arvioidaan, voiko yhdiste edistää oppimista, suoritetaan seuraava koe.

Kukin eläin sijoitetaan kumimatolle, ja se aika, joka eläimeltä menee kun se päättää lähteä asemastaan tutkimaan häkkiä, otetaan muistiin. 20 sekunnin tutkimisen jälkeen eläin saa sähköshokin (3 sekunnin ajan) tassuihin, mikä aiheuttaa lievän 1ennähdysreaktion. Rotta poistetaan välittömästi laitteesta ja sijoitetaan sen alkuperäiseen häkiin. Tämä koe toistetaan kunnes eläin pysyy kumimatolla ainakin 180 sekunttia välttääkseen sähköiskun. Oppiminen ilmaistaan niiden kokeiden keskiarvolla, jotka tarvitaan jotta saavutettaisiin se 180 sekunttia jotka rotta pysyy matolla.

35 102065

Kumimatolla pysymisen aika, 180 sekunttia, käsitetään maksimi suorituskyvyksi, jonka voi olettaa eläimen välttävän sähköiskua. Rotat, jotka pysyvät matolla tämän ajan ovat saavuttaneet välttämisrefleksin ja ne sijoitetaan alkuperäisiin häkkeihin ilman sähköshokkia.

Kun arvioidaan, onko yhdisteellä mahdollisuus edistää muistin säilyttämistä ajan kuluessa, suoritetaan seuraava koe. Kukin eläin laitetaan 4 testiin aikoina 0, 4, 24 ja 28 tuntia.

Ensimmäisessä testissä (aika 0), eläin sijoitetaan kumimatolle ja se aika, joka kuluu kun se päättää lähteä asemastaan tutkimaan häkkiä, merkitään muistiin. 20 sekunnin jälkeen tutkimisen alkamisesta rotta saa sähköshokin (3 sekunnin ajan) tassuihin, aiheuttaen 1ennähtämisreaktion. Rotta poistetaan välittömästi laitteesta ja laitetaan sen alkuperäiseen häkkiin.

Kolmen seuraavan testin aikana (ajat: 4, 24 ja 28 tuntia), eläin laitetaan kumimatolle ja se aika jona rotta lähtee 1 asemastaan, merkitään muistiin. Kun eläimen neljä tassua on verkolla, se saa sähköshokin ja poistetaan välittömästi laitteesta.

Kokeen aluksi rotat on jaettu 4 samanlaiseen ryhmään, joissa on 15 eläintä. 30 minuuttia ennen kutakin testiä, kukin eläinryhmä laitetaan ennalta määrättyyn käsittelyyn: : - ryhmä 1 saa intraperitoneaalisen ruiskeen fysiologista suolaliuosta; - ryhmä 2 saa intraperitonealisen ruiskeen yhdistettä, jota testataan; - ryhmä 3 saa intraperitoneaalisen ruiskeen 0,5 mg skopolamiinia ja - ryhmä 4 saa intraperitoneaalisen ruiskeen 0,5 mg skopolamiinia ja intraperitoneaalisen ruiskeen yhdistettä, jota testataan, samanaikaisesti.

35 102065

Ryhmiä 1 ja 2 käytetään ensimmäisessä kokeessa ja ryhmiä 3 ja 4 toisessa kokeessa.

Testissä saadut tulokset keksinnön yhdisteillä ovat taulukossa V. Tämä taulukko näyttää yhdisteen numeron testissä (pylväs l) ja annos, jota annettiin intraperitoneaalisesti, ilmaistuna mg/kg (pylväs 2).

Pylväät 3 ja 4 näyttävät tulokset, jotka on saatu kokeessa jossa arvioidaan oppimista. Luvut näyttävät niiden kokeiden määrien keskiarvon, jotka tarvittiin kontrol1ieläimel1 e (ryhmä 1) tai käsitellylle eläimelle (ryhmä 2) yhdisteellä, jotta eläin oppi pysymään kumimatolla 180 sekuntia välttyäkseen sähköshokilta. Tulokset analysoi Student testi.

Pylväät 5-12 näyttävät saadut tulokset kokeessa, jota käytettiin arvioitaessa muistin pysyvyyttä. Pylväissä 5-8, luvut esittävät keskiarvojaksoja matolla pysymisessä, jotka on havaittu luotettavasti aikoina 0, 4, 24 ja 28 tuntia ryhmän 3 eläimille, käsitelty vain skopolamiinilla, ja pylväissä 9-12 vastaavat luvut ryhmän 4 eläimille, käsitelty samanaikaisesti skopolamiinilla ja tutkittavalla yhdisteellä (annoksella, joka näkyy toisessa pylväässä.

: Yhdisteen suotuisa vaikutus amnesian vastustamisessa skopolamiinin indusoimana näkyy sen ajan pitenemisellä, jona eläin pysyy matolla jokaisessa tutkimuksessa. Havaitut erot analysoitiin tilastollisesti Mann-Whitney menetelmällä.

37 102065 CO............

ΠίΝΝΟΊΝΙΝΝίΙΊΙίΙΟΙΊ ouiiDcacooca.yn^-vDin * fH ιΗ .Ή

2 |fnmr^»-cf«»®®f'»‘0<-»»>fM

*"“· N HNNHN<N«?H«fNyD

QJ >Ci Ι^ίΝ^Ο ίΟίΓϊΓ'οβΟίΠΉνΓΓΝίΐΠ i 4 — SioDi'iO'rvn^-Oi^'OOcoeo 3 —............

n >, .ϊ-Γ^Γ'.υ-ίΐηοοββ-β-ιηΓ'·

> Q VO W ΙΠ VD O- O M f( H

> B

^ ' ’ r'.cnf'iinr^^ervraovcoO' t _ .............

W— CMrHf''VlflCMfaCMrHvHCM.Hr-i

> ϋ H

a a —* >- -j w |ιηθΓ^4η4πσ»®<ηΗβΓΝ.η L0 >« .. ........· · · * . -s ΝΐΝβ·ίΐη·?ΛΛΝΛ^ΐΠΝΗ 3 “ I cm «n ^ m n — csiricanvDiHrar^coinoav - ')r>j n n N Οι O r- Ή -e- r~ vo > ~. ._ pj cm ro -j -a o O c ^ e _a rauan«r>mr»i-(00>inrv^· w >·» ............

Sr u »nf-icosreMOi*H»aetMia<H

~ H. H

< N

:_; OCMO^COH^r^HOiOOr» r· ·········*#· C3

CM

n:ra (η n r*·. **> f*i r*· <*i «no £ O £ ΐΠΐΠ©©ιΛιΛ©©*Η«*>«*><*> ϋ - ............

Ξ u ^HCN4rsiCN»Hf-lf-»C>JHH*HCM

—* u £ :r

E

^ C '— r^r*»r**rvrnoor^O <*> © t e cNjvocMcoaiVDtN3orsio*nvo ·* «·»·······»· c nnnnhhnncmnnn j- c m cx o ^ in^c^^^ctn^OiOO ot “ , fnmr^H^oo^Doo^^OvH^ - DC «·«,··*····· <E ΐΠΟιβΟΝΝίΠΟ^Οί^Ο w CJ CSi

««J

c a ec _i "

Cfj _, _, ^

® ® fT

·"* * •ξ »nrsic>icNcNC>jn«c“ w j- (Π >- ^ l—i 38 102065 Tästä taulukosta näkyy, että: - keksinnön yhdisteet edistävät välttämisrefleksien oppimista: Tarvittavien kokeiden keskiarvo, jotta saavutettaisiin ennalta määrätty kriteeri (maksimi jakso matolle jäämisessä 180 sekunt-tia) on alempi käsitellyillä eläimillä (pylväs 4) kuin kontrol-lieläimillä (pylväs 3); - Skopolamiinin amneesivaikutus on hyvin painotettu: on nähtävissä, että matolle jäämisen aika eläimillä ryhmässä 3 (pylväät 5 - 8) on selvästi lyhyempi kuin 180 sekunttia, jonka kontrolliryhmä toteutti keskimääräisten koemäärien jälkeen (pylväs 3); ja näissä olosuhteissa, keksinnön yhdisteiden suotuisa vaikutus skopolamiinin amnesian vaikutuksen vastustamisessa on hyvin selvä: eläimillä ryhmässä 4, käsitelty samanaikaisesti skopol-amiinilla ja keksinnön yhdisteellä, on huomattavasti pidemmät jaksot matolla pysymisessä kuin eläimillä ryhmässä 3, käsitelty skopolamiinilla (vertaa tulokset pylväs 5 pylväisiin 9, 6 ja 10, jne.)· - fysostigmiini saa aikaan suotuisan vaikutuksen amnesiaa vastaan, jonka aiheuttaa skopolamiini, samanlainen kuin keksinnön yhdisteet, mutta jolla on sivuvaikutuksia ja joka on hyvin lähellä toksista annosta, mistä ei ole keksinnön yhdisteissä kysymys.

5. Myrkyllisyys.

Keksinnön yhdisteiden myrkyllisyys on määritelty naaraspuolisilla NMRI hiirillä Irwinin testin mukaan (S. IRWIN. Psychofarmacologia,13,(1968).222-257) .

Testattavan yhdisteen määrien kehitys: annetaan vähitellen kolmen hiiren ryhmille kunnes kuolettava annos on saavutettu (annos joka aiheuttaa kahden eläimen kuoleman kolmesta 48 tunnin kuluessa).

39 102065

Taulukko VI alla antaa havaitun kuolettavan annoksen keksinnön yhdisteistä. Taulukko osoittaa, että keksinnön yhdisteillä on hyvin alhainen myrkyllisyys, päinvastoin kuin f ysostigmiir.il lä .

TAULUKKO VI

Yhdiste kuolettava annos Yhdiste kuolettava (ro/ta) _ annos (mgAg) 1 802 23 > 1024 2 713 24 380 3 844 25a 833 4 886 25b 947 5 563 26 922 6 886 27 1133 7 886 23 > 1030 8 886 29 393 9 844 30 1125 10 844 31 511 11 892 32 1222 12 982 33 1132 ^3 934 34 1174 14 > 1073 35 401 15 1121 36 1174 15 844 37 923 17 844 38 > 1012 13 1007 39 > 1114 19 1031 40 1157 20 799 41 294 21a 996 42 > 931 21b 905 43 351 22 1091 fvsosticmiini 0.32 6. Posclogia ja antaminen.

Farmaseuttisia seoksia, joissa ovat keksinnönmukaiset yhdisteet voidaan antaa oraalisesti, parenteraalisesti tai rektaalisesti.

40 102065

Farmaseuttiset seokset, joita voidaan käyttää oraalisesti voivat olla kiinteitä tai nestemäisiä, esimerkiksi tablettien muodossa (päällystetty tai ei-päällystetty), pillereinä, lääkerakeina, gelatiinikapseleina, liuoksina, siirappeina, ja vastaavina. Seoksia, joita voidaan käyttää parenteraalisesti antaen ovat farmaseuttisia muotoja tunnettuja tästä käyttötavasta, esimerkiksi vesipitoinen tai öljymäinen liuos, suspensiot tai emulsiot. Rektaalisessa antamisessa seokset, jotka sisältävät keksinnön yhdisteitä ovat yleensä supporitoorisessa muodossa. Farmaseuttiset muodot, kuten injisoitavat liuokset, injisoitavat suspensiot, tabletit, tipat, lääkepuikot ja vastaavat valmistetaan menetelmillä, joita farmaseutit käyttävät nykyään. Farmaseuttiset muodot sisältävät myös seoksia, jotka voivat vapauttaa aktiivisen tuotteet progressiivisella tavalla. Keksinnön yhdisteet on sekoitettu kiinteään tai nesteeseen, toksittomaan farmaseuttisesi hyväksyttävään kantoai-neeseen, ja valinnaisesti dispersiiviseen aineeseen, disinter-gratiseen aineeseen, stabilisoivaan aineeseen ja vastaavaan. Makeuttavat aineet, väriaineet ja vastaavat voidaan myös lisätä ja se on sopivaa. Prosenttimäärä aktiivista yhdistettä farmaseuttisissa seoksissa voi vaihdella laajasti potilaan mukaan ja antamisen muodossa, erityisesti antamisen säännöllisyyden mukaan.

Päivittäinen annos voi vaihdella laajasti, esimerkiksi 0,1 -2 g aktiivista yhdistettä, riippuen antamisen muodosta. Siten, esimerkiksi, päivittäin annos voi olla 0,25 - 0,75 g, parhaiten 0,5 g, yksi - kolme kertaa päivässä, jos yhdiste annetaan tabletin muodossa.

. : Formulaatio tableteille on annettu alla esimerkkinä seoksesta jossa on yhdiste, jonka kaava on I, ja joka voidaan antaa oraalisesti.

41 102065 yhdiste 1 250 mg metyyliselluloosa (Methocel K4M) 250 mg kuiva laktoosi 154 mg aerosoli 5 mg vedetön sitruunahappo 60 mg talkki 11 mg magnesiumstearaatti 20 mg

Claims (3)

42 1 0 2 0 6 5

1. Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinia, sekä sen optisesti aktiivista isomeeriä ja raseemisia seoksia, joiden kaava on ΓΊ i' <x> N ch2ch2ch3 jossa on vetyatomi, alkyyli-, fenyylialkyyli- tai asetyyliryhmä, R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyyli-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksialkyyli-, (hydroksisykloalkyy-li)alkyyli-, alkanoyylioksialkyyli-, bentsoyylioksialkyyli-, fenyyliasetyylioksialkyyli- tai aminokarbonyylioksialkyyli-ryhmä, COR3-ryhmä, jossa R3 on alkyyli-, fenyyli-, halogeeni-fenyyli-, alkyylifenyyli-, alkoksifenyyli-, fenyylialkyyli- tai fenoksiryhmä, tai CONR4R5-ryhmä, jossa R4 ja R5 ovat vetyatomi tai alkyyliryhmä, tai R^ ja R2 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substituoitu pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmä, jotka alkyyli-, alkoksi- ja alkanoyylioksi-ryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli- ja pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia, : sillä ehdolla, että kun R^ on asetyyliryhmä, niin R2 on aset- oksialkyyliryhmä, tai sen toksitonta, farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa, tunnettu siitä, että a) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5- triatsiinin valmistamiseksi, jossa R^ on vetyatomi, alkyyli- 43 102065 tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksi-alkyyli-, alkoksialkyyli-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksi-alkyyli- tai (hydroksisykloalkyyli)alkyyliryhmä, tai ja R2, yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substituoitu pyrrolidiino- tai piperi-diinoryhmä, jotka alkyyli- ja alkoksiryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli- ja pyrrolidiino- ja piperidiino-ryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia kaavan (II) mukainen 2-kloori-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini O (II> ch2ch2ch3 saatetaan reagoimaan kaavan HNR1R2 mukaisen amiinin kanssa, jossa R]_ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai b) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa Rj^ on vetyatomi, alkyyli-tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on hydroksyyliryhmä, hydroksialkyyli-, alkoksialkyyli-, dialkyyliamino-, fenyyli-hydroksialkyyli- tai (hydroksisykloalkyyli)alkyyliryhmä, tai R^ ja R2, yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, on hydroksialkyyliryhmällä substituoitu pyrrolidiino- tai piperidiinoryhmä, jotka alkyyli- ja alkoksiryhmät sisältävät : 1-4 hiiliatomia, ja sykloalkyyli- ja pyrrolidiino- tai •i piperidiinoryhmät sisältävät 4-6 hiiliatomia, 2-amino-4-kloori-6-propyyli-l,3,5-triatsiini, 44 1 0 2 0 6 5 *1 C1\ .N. N ΊΓ \l ^R2 I (IV) ch2ch2ch3 j ossa R3 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan morfoliinin kanssa, jolla on kaava z - \? (V) j ossa Z on vetyatomi tai metyyliryhmä, tai c) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa R]_ on vetyatomi, alkyyli-tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on COR3-ryhmä, jossa R3 on alkyyli-, fenyyli-, halogeenifenyyli-, alkyylifenyyli-, alkoksifenyyli-, fenyylialkyyli- tai fenoksiryhmä, jotka alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiini, jolla on kaava Ri L /-N\ (VI!) YT N^N ch2ch2ch3 45 102065 jossa Rl tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan ekvimo-laarisissa suhteissa kaavan HalCOR3 (VII) mukaisen R3-kar-bonyylihalogenidin kanssa, jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä ja Hai on halogeeniatomi, tai d) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa R^ on vetyatomi, alkyyli-tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on alkanoyylioksialkyyli-, bentsoyylioksialkyyli- tai fenyyliasetyylioksialkyyliryhmä, jotka alkyyli- ja alkanoyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, (4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)-aminoal-kanoli, jolla on kaava O^i »i ^alk-OH (VIII) ch2ch2ch3 jossa Rl tarkoittaa samaa kuin edellä ja alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä, saatetaan reagoimaan ekvimolaarisissa suhteissa kaavan HalCORg (IX) mukaisen R6-karbonyylihalogenidin kanssa, jossa R6 on 1 - 4 hiiliatominen alkyyliryhmä, fenyyli tai bentsyyli ja Hai on halogeeniatomi, tai e) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa Ri on vetyatomi, alkyyli-tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on CONR4R5 ryhmä, jossa R4 ja R5 ovat vetyatomi tai alkyyliryhmä, jotka alkyyliradikaalit sisältävät 1-4 hiiliatomia, kaavan (X) mukainen fenyyli (4-morfolino-6-propyyli-l,3-5-triatsin-2-yyli)karbamaatti 46 102065 O f1 /=\ - N^/N ch2ch2ch3 jossa R;l tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan HNR4R5 (XI) mukaisen typpiyhdisteen kanssa, jossa R4 ja R5 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai f) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa R^ on vetyatomi, alkyyli-tai fenyylialkyyliryhmä ja R2 on aminokarbonyylioksialkyyliryh-mä, jotka alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia saatetaan ammoniakki reagoimaan 2-morfolino-4-(fenoksikarbonyylioksial-kyyliamino)-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin kanssa, jolla on kaava Wv'—-O N - (Xu) ch2ch2ch3 j ossa . R-l tarkoittaa samaa kuin edellä ja alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä, tai g) kaavan I mukaisen 2-amino-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinin valmistamiseksi, jossa R^ on asetyyliryhmä ja R2 on asetoksialkyyliryhmä, jotka alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia, vähintään kaksi moolia asetyylihalogenidia saatetaan 102065 47 reagoimaan yhden moolin (4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)aminoalkanolin kanssa, jolla on kaava H L N ,N. j ^ ^alk-OH (XIV) ch2ch2ch3 jossa alk on 1 - 4 hiiliatominen alkyleeniryhmä, tai näin saadut kaavan I mukaiset 2-amino-4-morfolino-6-propyyli- 1,3,5-triatsiinit mahdollisesti muunnetaan myrkyttömiksi farmaseuttisesti siedettäviksi happoadditiosuoloiksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2 — [ (4 — morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsin-2-yyli)amino]-etanolia tai sen toksitonta farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä valmistaa 2-(hyd-roksiamino)-4-morfolino-6-propyyli-l,3,5-triatsiinia tai sen toksitonta farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, tunnettu siitä, että käytetään vastaavia lähtöaineita. 1 « « 102065