RU1838312C

RU1838312C - Способ получени N-/4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил/-ацетамидов или -бензамидов или их нетоксичных фармацевтически приемлемых кислых солей

Info

Publication number: RU1838312C
Application number: SU904830673A
Authority: RU
Inventors: Коссман Эрин; Гобер Жан; Буаден Ролан; Матье Жак
Original assignee: Юцб С.А.
Priority date: 1988-08-16
Filing date: 1990-08-20
Publication date: 1993-08-30
Also published as: PL161591B1; HK95693A; LTIP829A; AU3991789A; US4956367A; LT3601B; EP0356413B1; NO179206B; ATE72241T1; JPH02108675A; SG27893G; UA11064A; NZ230290A; MY105008A; NO893279D0; PT91438A; NO893279L; IE61205B1; KR900003165A; FI102065B

Abstract

Сущность изобретени : продукт - N-(4- морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)- ацетамид или бензамид ф-лы 1, где RI - Н, Ci-Gj-алкил; RZ - С1-С4-алкил, фенил, бен- зилрадикал. Реагент 1: 2-амино-4-морфоли- но-6-пропил-1,3,5-триазин. Реагент 2: Hal-COR2. Услови реакции: эквимол рное соотношение реагентов. Соединени оказывают стимулирующее воздействие на холи- нергическую систему. 6 табл. Ф-ла 1 0-tfrb Cr CHjCH-j (Л С

Description

Изобретение относитс к синтезу новых биологически активных соединений, обладающих фармакологической активностью.

В частности, изобретение относитс к способу получени новых М-(4-морфолино- 6-пропил-1,3,5-триаэин-2-ил)-ацетамидов или бензамидов общей формулы I

1

Опт

-/

, v«

Н

СНрСМН;

в которой«,12 П2ЬП3

RI представл ет собой атом водорода или С1-С4-алкил;

R2 представл ет собой С1-С4-алкил, фенил или бензил радикал, или их нетоксичных и фармацевтически приемлемых солей, которые оказывают стимулирующее воздействие на холинергическую систему.

Известны близкие по структуре производные 2-амино-1,3,5-триазинов, в частности, 2-амино-4-морфолино-6-пропил- 1,3,5-триазин, но они обладают свойством увеличивать выделение кортикостероидов.

Цель изобретени - получение новых производных 1,3,5-триазина, обладающих иным спектром биологических свойств, чем известные структурные аналоги.

Поставленна цель достигаетс описываемым способом получени М-(4-морфоли- но-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамидов или бензамидов общей формулы I, заключающемс в том, что провод т взаимодействие в эквимол рном количестве 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триа эина общей формулы П

00

Сд

3.

(

l

H

1

СНгСН2ЙН3

где Ri имеет значение/указанное выше, с соединением общей формулы (111) HalCORa, в которой R2 имеет вышеуказанное значение и Hal вл етс атомом галогена, предпочтительно атомом хлора.

Эта реакци обычно проводитс в органическом растворителе, таком, как, например , дихлорметан, дихлорэтан или пиридин, при температуре, наход щейс в пределах между температурой окружающей среды и температурой кипени растворител , а также в присутствии акцептора кислоты, такого , как третичное органическое основание (например, триэтиламин, или пиридин, или минеральное основание).

Полученные таким образом М-(4-морфо- лино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)-ацетам иды и бензимиды могут в случае необходимости быть превращены в соли с кислотами известным способом. В качестве примеров 25 фармацевтически пригодных кислот можно назвать неорганические кислоты: сол на , . бромистоводородна , серна , азотна , фосфорна и т.д., и органические кислоты, как: уксусна , лимонна , винна , бензойна , са- 30 лицилова , малеинова и т.д.

Исходные 2-амино-4-морфолино-6-про- пил-1,3,5-триазины формулы II могут быть получены путем взаимодействи 2-амино-4- хлоро-6-пропил-1,3,5-триазина формулы IV 35 с морфолином, согласно уравнению:

ClvNvN r

./J у н+нчГ9 - №

. 40 ен2С№гСНз

в этих формулах R1 представл ют атом водорода или радикал алкила, имеющего от 1 до 4 атомов углерода. Эту реакцию провод т

Смешивают 87 г (1 моль) морфолина и 8,6 г (0,05 моль) 2-амино-4-хлор-б-пропил- 1,3,5-триазина. Температура смеси поднимаетс сама по себе до 54°С. Затем нагревают с рефлексом в течение 5 ч. Реакционную смесь выпаривают при пониженном давлении и полученный осадок вновь раствор ют в этилацетате. Раствор промывают 3 раза водой, затем сушат на сульфате натри . Раствор удал ют при пониженном давлении и остаток перекристаллизовыва- ют в гексане. Получают 9,1 г 2-амино-4-мор- фолино-6-пропил-1,3,5-триазина. Выход: 82%. Температура плавлени : 127-128°С.

Хлоргидрат: температура плавлени : 210-211°С (изопропиловый сприт - эфир).

Анализ дл CioHnNsO, HCI в %

расчетный; С 46,24 Н 6,94 N 26,97 CI 13,68

фактический: 46,21 6,90 26,78 13,61

Используемый в качестве исходного продукта 2-амино-4-хлоро-6-пропил-1,3,5- триазин на этом этапе получен согласно известному способу (1).

(метиламино)-4-морфолино-6-проп ил-1,3,5-триазин (хлоргидрат)

К раствору, содержащему 5,6 г (0,03 моль) 2-хлор-4-(метиламино)-6-пропил- 1,3,5-триазина в 50 мл диоксана, добавл ют раствор, содержащий 8,7 г (0,1 моль)морф- лоина в 50 мл диоксана. Смесь нагревают с оттоком в течение 5 ч, Затем охлаждают, фильтруют хлоргидрат морфолмна, который образовалс . Растворитель удал ют при пониженном давлении и осадок поглощают хлороформом. Промывают водой и сушат

при повышенной температуре, обычно при 45 органическую фазу на сульфате натри . Выпаривают растворитель, а осадок перекри- сталлизовывэют из этилацетата, Получают 5,3 г 2-(метиламино)-4-морфолино-6-лро- пил-1,3,5-триазина.

Выход: 74%. Температура плавлени : 131-133°С.

Полученный продукт раствор ют в изо- пропиловом спирте при высокой температуре . К этому раствору добавл ют эквивалентное количество раствора сол ной кислоты в этиловом эфире. Хлоргидрат кристаллизуетс охлаждением. Фильтруют, промывают этиловым эфиром и сушат.

Выход: 75%. Температура плавлени : 177-178°С.

температуре кипени примен емого растворител , в присутствии основани . Растворителем , в котором осуществл ют эту реакцию, вл етс либо амин сам по себе, примен емый в избытке, либо инертный органический растворитель, предпочтительно диоксан, и в этом последнем случае используемым основанием вл етс неорганическое или органическое основание, отличное от амина, используемого в реакции, например , триэтиламин,

Что касаетс 2-амино-4-хлор-6-пропил- 1,3,5-триазинов формулы IV, используемых в качестве исходных продуктов, то они могут быть получены известными подход щими

50

55

1838312

0

5

0

5 0

5

0

способами, путем взаимодействи 2,4-дих- лор-6-пропил-1,3,5-триазин с соответствующим амином.

Пример 1. Получение исходных 2- амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триази нов формулы II

1,2 Амино-4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триазин(хлоргидрат).

Анализ дл CioHnNsO, HCI в %

расчетный; С 46,24 Н 6,94 N 26,97 CI 13,68

фактический: 46,21 6,90 26,78 13,61

5 органическую фазу на сульфате натри . Выпаривают растворитель, а осадок перекри- сталлизовывэют из этилацетата, Получают 5,3 г 2-(метиламино)-4-морфолино-6-лро- пил-1,3,5-триазина.

45

50

55

Анализ: дл CnHigNsO HCI в %: расчетный: С 48.26 Н 7,31 N 25,59

CI 12, 97.

фактический: 48,38 7,40 25,58 12,64 Пример 2. Получение М-(4-морфолино-6-пропил-1 ,3,5-триазин-2-ил)ацетамидов

и бензамидов формулы I.

1. М-(4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триа- зин-2-ил)ацетамид (соединение 1).

При температуре окружающей среды к раствору 11,2 г(0,05моль)2-амино-4-морфо- лино-6-пропил-1,3,5-триазина в 100 мл безводного пиридина по капле добавл ют 4 г (0,05 моль) ацетилхлорида. Смесь перемешивают в течение 6 ч, затем оставл ют в покое в течение 48 ч, фильтруют хлоргидрат пиридина и выпаривают фильтрат при пониженном давлении. Полученный осадок обрабатывают один раз толуолом, который вновь выпаривают. Затем осадок поглощают дихлорметаном, промывают раствор водой и сушат над сульфатом натри . Полученный осадок после выпаривани растворител очищают хроматографией на кремневом ангидриде (элюент:90:10 (об/об) дихлорметан-этанол) и продукт окончательно перекристаллизовывают в этилацетате. Получают 5,75 г Ы-(4-морфолино-6-пропилI ,3,5-триазин-2-ил)ацетамида.

Выход: 43,4%. Температура плавлени ; 141-142°С (соединение 1а).

Хлоргидрат: температура плавлени ; 145 146°С (изопропиловый спирттэфир) (соединение 1Ь).

Анализ дл C HigNsOa HCI в %:

расчетный: С 47,76 Н 6,63 N 23,22 CI

II,77

фактический: 47,78 6,73 22,80 11,62

2. М-(4-морфолино-6-пропил-1,3,5-тира- зин-2-ил)-бензамид (хлоргидрат) (соединение 2).

К раствору 11,2 г (0,05 моль) 2-амино-4- морфолино-6-пропил-1-3,5-триазина в 200 мл дихлорэтана добавл ют при температуре окружающей среды, последовательно, раствор 7,7 г (0,055 моль) бензоилхлорида в 50 мл дихлорэтана и раствор 5,5 г (0,055 моль) триэтиламина в 50 мл дихлорэтана. Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 6 ч, затем охлаждают до ком- натной температуры, промывают последовательно водой, водным раствором бикарбоната натри , затем еще раз водой. Органическую фазу сушат на сульфате натри и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный осадок хроматографируют на кремневом ангидриде (элюент: 95:5 (об/об) дихлорметанэта- нол),затем окончательно

перекристаллизовывают из смеси 50:50 (об/об) эфир-гексан. Продукт образует в эфире хлоргидрат. Таким образом, получают 12,1 г хлоргидрата М-(4-морфолино-6- пропил-1,3.5-триазин-2-ил)-бензамида.

Выход: 66,5%. Температура плавлени : 197-198°С.

Анализ Ci7H2iNs02 HCI в %

расчетный: С 56,12 Н 6,05 N 19,26 CI 9,77 0 фактический:56,30 6,50 19,16 9,54

Соединени , объединенные в табл.1, получены, как указано, согласно методике примера 2.1, либо согласно методике выше приведенного примера 2.2. 5Как было указано выше, М-(4-морфоли- но-6-пропи -1,3,5-триазин-2-ил}-ацетамиды и -бензамиды формулы I и их соли обладают свойством коррекции эффектов гипофункции холинэнергической системы. Это основ- 0 ное свойство демонстрируетс серией фармакологических опытов, на основании которых показано, что соединени , полученные согласно изобретению, оказывают определенный эффект. Подобный эффект 5 холинергических соединений, хорошо известных , таких, как оксотреморин, ареколин или физостигмин 2 или же продиводейст- вуют эффекту, вызванному холинергиче- ским антагонистом, таким, как скополамин. 0 Соединени , полученные согласно изобретению , были подвергнуты фармакологическим опытам, результаты которых приведены дальше.

1. Стимулирование холинергических эф- 5 фектов оксотреморина.

Цель данного теста состоит в том, чтобы показать, что соединени , полученные согласно изобретению, стимулируют центральныеи периферические 0 холинергические эффекты, вызванные введением мыши малой дозы оксотреморина.

Степень периферической холинергиче- ской активации замерена с помощью эффекта слюноотделени , определенного по 5 следующей системе значений:

значение 0: слюноотделение не превышает слюноотделение у нормальной мыши;

значение 1: немного слюны находитс вокруг зубов;

0 значение 2: слюна образует узкую полоску вокруг рта;

значение 4: слюна смачивает кожу под подбородком;

значение 6: слюна вытекает изо рта на 5 передние конечности.

Промежуточные значени не примен ютс и слюну берут после каждого наблюдени .

Степень центральной холинергической активации замерена с помощью тремогенного эффекта, определенного по следующей шкале значений:

0: нет дрожаний;

1: случайные легкие и периодические дрожани ;. .

2: умеренные дрожани , легкие и часто повтор ющиес ;

3: рко выраженные дрожани , но прерываемые периодами поко ;

6: очень сильное, почти посто нное дрожание .

Мыши - самцы породы MPI (20-25 г) разделены на четыре группы по п ть животных , а именно: одна контрольна группа и три группы, подвергавшиес обработке.

Тестируемое соединение введено внут- рибрюшинным путем (трем указанным группам ) за 20 мин перед введением оксотреморина, в различных дозах дл каждой из трех обрабатываемых групп. Осотре- морин введен в количестве 0,05 мг/кг внутрибрюшинным путем обрабатываемым группам и контрольной группе, в растворе 10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза примерно соответствует минимальной дозе оксотреморина, вызывающей дрожани и слюноотделение.

После введени оксотреморина животные были помещены индивидуально в маленькие клетки и наблюдались в равные промежутки времени, равные 5 мин, до полного исчезновени холинергических эффектов .

Дл каждой из групп индивидуальные значени , определенные дл каждого периода наблюдени , суммировались; что позволило построить кривую, представл ющую сумму значений (баллов) в зависимости от времени, характеризующую каждую группу.

Средние значени поверхности под кривыми, полученными дл каждой из групп, подвергшихс обработке, сравнивали со средним значением площади под кривой , соответствующей контрольной группе и вились объектом статистического анализа по методу Манна-Витна . На основе этого сравнени можно определить минимальную активную дозу. Эта минимальна активна доза вл етс минимальной дозой соединени , необходимого дл наблюдени стимулировани эффекта слюноотделени или дрожани оксотремори- ном, или другими Словакии, чтобы получить большую площадь, чем площадь под кривой , полученной дл контрольной группы.

Результаты, полученные в этом испытании с соединени ми, полученными в соответствии с изобретением, привод тс в табл.2. 8 этой таблице дл каждого соединени , исследованного в опыте 1 (столбец 1),

привод т минимальную дозу (выраженную в мг/кг), введенную внутрибрюшиным путем, котора необходима дл наблюдени потен- циализации эффекта, вызывающего слюноотделени (столбец 2) или эффекта дрожани под действием оксотреморинэ (столбец 3).

Табл.2 показывает, что соединени со- тласно изобретению стимулируют эффект

слюноотделени и эффект дрожани при минимальной дозе от 8,4 до 37,8 мг/кг, Кроме того,, минимальные активные дозы не имеют собственную холинергическую активность и очень далеки от смертельных

доз, определ емых по тесту Ирвина.

С другой стороны, этот тест показал, что некоторые мз этих введенных соединений в минимальной активной дозе имеют более

длительное действие, чем метиловый эфир 1,2,5,6-тетрагидро-1-метил-3-пиридинкарб оловой кислоты (ареколин), известное холи- нергическое соединение. Таким образом, соединени , полученные согласно изобретению , демонстрируют стимулирование эффектов , вызывающих слюноотделение и дрожание, вызванных оксотреморином через 20 мин после введени минимальной активной дозы, тогда как в тех же услови х

ареколин не вызывает никакого стимулировани .

2.1/1нгибирование гиперактивности, вызванной скополамином.

Животное, помещенное первый раз в

новую окружающую среду, демонстрирует усиленную активность по исследованию этой новой среды. Постепенное уменьшение и затем исчезновение этой познавательной активности, другими словами,

привыкание к новому месту, можно считать элементарной формой обучени . Эта элементарна форма обучени чувствительна к действию медикаментов, облегчающих или замедл ющих обучение. Так, например, скополамин , соединение, вызывающие мнези- ческие расстройства, приводит к чрезмерной познавательной активности у крысы, помещенной в новую окружающую среду: это вление св зано с центральной

антихолинергической активностью этого соединени . Наоборот, холинергический аго- нист, такой, физостигмин, противодействует гиперактивности, вызванной скоползмином.

В тесте, описанном ниже, соединени , в зависимости от их растворимости, введены либо в физиологической сыворотке, либо в соответствующем носителе (обычно буферный раствор цитрата с рН 5).

Этот тест позвол ет установить дл соединений , полученных согласно изобретению , активность, сравнимую с активностью физостигмина.

Тест основываетс на оригинальной ме- тодике, описанной A. PLATE (см. выше) с одной стороны, и, с другой стороны, на способе автоматизации регистрации измерений .

В этом тесте используют самцов крыс Spraguc-Dawley SPF (Specific Pathogeu Tree 160-200 г). В течение недели перед экспериментом , этих животных содержат в нормальных услови х, группами по 15 животных в стандартных огражденных ре- теткой клетках, со свободным доступом к пище и питью.

В начале эксперимента крыс дел т на 4 однородные группы по 10 животных и приучают в течение часа к месту проведени эксперимента. Затем, каждую группу животных подвергают определенной обработке:

-группа 1 получает две одновременные внутрибрюшинные инъекции физиологической сыворотки или используемого носите- л ;

- группа 2 получает внутрибрюшинную инъекцию физиологической сыворотки или используемого носител и внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг/кг скополамина в рас- творе;

- группа 3 получают внтрибрюшинную инъекцию тестируемого соединени , растворенного в соответствующем носителе и внутрибрюшинную инъекцию физиологиче- ской сыворотки или используемого носител ;

- группа 4 получают внутрибрюшинную иньекцию тестируемого соединени и внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг/кг скопола- мина.

Через 30 мин после такой обработки одновременно тестируют четыре группы животных. Дл этого каждую группу поме- щают в квадратную камеру (100 х 100 см) с решетчатым полом и вертикальной стенкой высотой 50 см. Кажда из этих камер содержит 16 зон, включа 4 угловые зоны, 4 центральные зоны и 8 периферийных зон. Кроме того, кажда камера снабжена 2 р - дами инфракрасных элементов, располо женных на высоте 2 см от пола, чтобы регистрировать горизонтальные перемещени животных, и 2 другими р дами инфракрасных элементов, расположенных на высоте 10 см от пола, чтобы регистрировать вертикальные перемещени . Эти инфракрасные элементы соединены с микропроцессором , который позвол ет определить среднее значение пройденных рассто ний

(см) одной группой животных, среднее число выпр млений, осуществленных животными, а также распределение горизонтальных перемещений в различных центральных, периферийных и угловых зонах, выраженных средним временем пребывани в этих различных зонах.

Каждое тестируемое соединение излучаетс , по крайней мере, в трех различных дозах, на основании которых определ ют минимальную активную дозу, котора тормозит гиперактивность, вызванную внутри- брюшинным введением 0,5 мг/кг скополамина. Затем сравнивают значени , полученные в группе 2, обработанной только скополамином, со значени ми, полученными в группе 4, обработанной одновременно и скополамином и тестируемым соединением, либо значени , полученные в группе 4 со значени ми, полученными в группе 3, обработанной только тестируемым соединением. Группа контрол 1 вл етс контрольной группой дл действи скополаминз, введенного группе 2. Наблюдаемые разницы во всех случа х оценены статистически методом Манна-Витне .

В таблице 3 даютс результаты, полученные в этом испытании с соединенными, приготовленными в соответствии с изобретением .

Результаты, полученные в этом тесте, показывают, что соединени согласно изобретению обладают действием, ингибирую- щим гиперактивность, вызванную скополамином. Минимальные активные дозы , определенные дл этих соединений, со- ставл ют от 1 до 9,2 мг/кг. Но в противоположность физостигмину. который вл етс неактивным, будучи введен более, чем за 15 мин до начала измерений, соединени , полученные согласно изобретению, обладают ингибирующим действием и в том случае, если они были введены за 30 мин до начала измерений. Их активность таким образом вл етс более длительной, нежели физостигмина.

3. Ингибировани эффекта скополамина на электроэнцефалограмме - ЭЭГ.

Введение человеку или животному скополамина вызывает мнезические расстройства , сравнимые с теми, которые возникают в ходе нормального или патологического старени . У пациентов, страдающих старческим слабоумием типа Альцгеймера, было получено улучшение мнезических расстройств путем введени физистигмина, со- единени , которое ингибирует ацетил-холинэстеразу.

Скополамин, введенные внутрибрю- шинным путем крысам, в количестве 0,5

мг/кг, вызывает изменени спектра ЭЭГ, которые выражаютс в повышении мощности полосы в 8 Гц, снижении мощности полос от 20,8 до 40 Гц, также как в повышении общей мощности спектра ЭЭГ. Физйстиг- мин противодействует этим изменени м.

Целью данного теста вл етс демонстраци с помощью метода количественного анализа электроэнцефалограммы, что соединени , полученные согласно изобретению , обладают свойством нейтрализовать действи , которые скополамин оказывает на спектр ЭЭГ.

В этом тесте используют самцов белых крыс Spraguc Dawley SPF(oT 160 до 200 г).

Когда животные достигают возраста 3 мес, им вживл ют накрепко асептически и под общим наркозом 5 корковых электродов: один инертный электрод, один левый фронтальный и один правый фронтальный электрод, один левый затылочный электрод и один правый затылочный.

Тест провод т, когда животные достигают возраста около 15 мес,

В интервале животных содержат в отдельных клетках, они получают по желанию пищу и питье и подвергаютс регул рному суточному циклу, включающему период темноты между 18 часами вечера и 6 часами утра, В то же врем , животные быстро привыкают к клеткам звуконепроницаемой кабины , которую они впоследствии будут занимать дл сн ти электроэнцефалограмм , также как к экспериментальным усло- ви м, путем введени плацебо внутрибрюшинным путем. Продукты ввод т непосредственно перед сн тием ЭЭГ.

Крыс дел т на группы по 8 животных и снимают 16 образцов спектра ЭЭГ в течение 5 ч (два спектра ЭЭГ на животного). Полученные спектры затем анализируютс ЭВМ (быстродействующа преобразованна функци Фурье), что позвол ет определить дл каждой группы среднюю величину 16 осуществленных измерений и вычислить дл каждого животного общую мощность спектра ЭЭГ, также как распределение этой мощности (в %) по различным полосам частот .

Эта операци (регистраци спектров) повтор етс 9 раз (обща длительность: 121 мин).

Действие изучаемого соединени определ етс на основе статистического сравнени результатов, полученных дл разных групп животных, которым были введены соответственно тестируемое соединение, ско- гтоламин и плацебо.

В табл.4 дл некоторых соединений, полученных согласно изобретению и введенных внутрибрюшинным путем в указанной дозе в мг/кг, процент снижени увеличени мощности полос 6,4 до 9,6 Гц (средн 8 Гц), повышение, вызванное внутрибрю- шинным введением скополамина в количестве 0,5 мг/кг.

Результаты показывают, что соединени , полученные согласно изобретению, также как физостигмин, мнгибируют дейст0 ви , которые скополамин оказывает на элек- троэнцефалограмму. Показано, что это ингибирование достигает и даже превышает 50% при относительно малых дозах, очень удаленных от токсичных доз, что не

5 вл етс характерным дл физостигмина.

4. Пассивное уклонение с многочисленными испытани ми.

Соединени , полученные согласно изобретению , были изучены с целью показать,

0 с одной стороны, их свойство способствовать обучению, выраженное в уменьшении числа опытов, необходимых дл достижени определенного заранее критери , и, с другой стороны, их свойство противодейство5 вать амнезии, вызванной введением скополамина.

Дл этого был использован метод пассивного уклонени с многочисленными опытами . Этот метод хорошо изменен дл

0 оценки действий, которые оказывает препарат на пам ть и обучение,

Тест осуществлен на самцах крыс Spraguc-Dawley (160-200 г) которые во врем эксперимента содержатс в стандартных

5 клетках.

Используемое устройство вл етс прозрачной квадратной клеткой, шириной 35 см и высотой 25 см, оборудованной электрифицированным решетчатым полом. Резиновый

0 изол ционный коврик(10x17 см) размещен на полу в одном из углов клетки.

Чтобы определить, пригодно ли соединение дл улучшени обучени , провод т следующий опыт.

5 Каждое животное помещают на резиновый коврик и отмечают врем , которое требуетс животному, чтобы решитьс покинуть это место дл изучени клетки. После 20 с исследовани , животное получает

0 электрический шок (длительность 3 с) в лапки , вызывающий реакцию бегства. Крысу сразу извлекают из устройства и возвращаетс в прежнюю клетку. Этот опыт повтор ют до тех пор, пока животное не останетс

5 по крайней мере 180 с на резиновом коврике , чтобы избежать электрического шока. Обучение выражено средним числом испытаний , необходимых дл достижени времени пребывани на коврике, равном 180 секундам.

Врем пребывани на резиновом коврике , равное 180 сек, считают максимальным результатом, требуемым животному дл понимани , чтобы избежать электрического шока; Крысы, которые наход тс это врем на коврике, получают рефлекс уклонени и возвращаютс в свои клетки без получени электрического шока.

Чтобы определить, может ли соединение способствовать мнезическому удержа- нию в течение времени, провод т следующий эксперимент. Каждое животное подвергают четырем опытам во врем 0,4, 24 и 28 ч, При первом опыте (врем 0) животное помещают на резиновый коврик и отмечают врем , которое требуетс животному, чтобы решитьс покинуть это место дл исследовани клетки. Через 20 с после исследовани , крыса получает электрический шок (длительность 3 с) в лапки, вызывающий реакцию бегства. Крысу тут же извлекают из устройства и возвращают в исходную клетку. В ходе трех последующих опытов (врем 4, 24 и 28 ч), животное снова помещают на резиновый коврик и отмечают врем , через которое оно покидает это место . Как только четыре лапки животного касаютс решетки, животное получает электрический шок и жив отное немедленно удал ют из устройства.

В начале эксперимента, крыс дел т на 4 однородные группы, по 15 животных. За тридцать минут перед каждым опытом, каждую группу подвергают определенной обработке:

- группа 1 получает внутрибрюшинную инъекцию физиологической сыворотки;

- группа 2 получает внутрибрюшинную инъекцию тестируемого соединени ;

- группа 3 получает внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг скополамина и

- группа 4 получает внутрибрюшинную инъекцию 0,5 мг скополамина и одновременно внутрибрюшинную инъекцию тестируемого соединени .

Группы 1 и 2 использованы в первом эксперименте, а группы 3 и 4 - во втором эксперименте.

Результаты, полученные в этом тесте с соединением согласно изобретению, сведены в табл.4. В этой таблице указано соединение , которое подвергалось опыту (колонка 1) и доза, введенна внутрибрю- шинным путем, выраженна в мг/кг (колонка 2). В колонках 3 и 4 приведены полученные результаты, касающиес опыта дл оценки обучени . Цифры указывают среднее число попыток, необходимых животному , контрольному (группа 1) или обработанному (группа 2) соединением, чтобы пон ть , что надо находитьс на резиновом коврике 180 с, чтобы избежать электрического шока.

Результаты были проанализированы с помощью критери Стьюдента.

В колонках 5-12 приведены результаты, полученные в эксперименте по оценке мне- зического запоминани . В колонах 5-8 циф0 ры обозначают средние значени времени пребывани , замеренные во врем 0,4, 24 и 28 ч соответственно, дл животных группы 3, обработанных только скополэмином; а в колонках 9-12 наход тс цифры, соответст5 вующие животным группам 4, обработанным одновременно скополамином и исследуемым соединением (доза указана во второй колонке).

Благопри тное вли ние соединени ,

0 оказываемое против амнезии, вызванной скополамином, показано увеличением времени пребывани на коврике, при каждом наблюдении. Наблюдаемые разницы статистически проанализированы (обработаны)

5 методом Манна-Витне . Из этой таблицы следует, что

. - соединени , полученные согласно изобретению, способствуют обучению рефлекса уклонени : среднее число попыток,

0 необходимых дл достижени заранее определенного критери (максимальное врем пребывани на коврике составл ет 180 с) увеличиваетс медленнее дл обработанных животных (колонка 4), чем дл контроль5 ных животных (колонка 3);

- рко выражен амнезический эффект скополамина: видно, что значени времени пребывани животных группы 3 (колонки 5- 8) значительно меньше 180 с, необходимых

0 дл контрольных животных, после среднего числа попыток (колонка 3); и в этих услови х, благопри тное вли ние соединений, полученных согласно изобретению, на противодействие амнезическому действию

5 скополамина, вл етс четко выраженным: животные группы 4, обработанные одновременно скополамином и соединением, полученным согласно изобретению, имеют при каждом наблюдении врем пребывани

0 значительно выше, нежели животные группы 3, обработанные только скополамином (сравнить результаты колонки 5 с результатами колонки 9, 6 и 10 и т.д.);

- физостигмин оказывает благопри т- 5 ное противодействие амнестическому эффекту скополамина, подобное действию соединений, полученных согласно изобретению , но в количестве, оказывающем побочные действи и очень близком к токсичной дозе, что не вл етс подход щим случаем дл соединений, полученных согласно изобретению.

5. Токсичность.

Токсичность соединений, полученных согласно изобретению, определена у самца мыши NMR с помощью теста Ирвина (S. irwin, Phychopharmacologla, 13, 1968), 222- 257).

Увеличивающиес дозы тестируемого соединени были введены внутрибрюшин- ным путем группам из трех мышей до тех пор, пока не была достигнута смертельна доза (доза, вызывающа смерть, в течение 48 часов двух животных из трех).

В приведенной ниже таблице 6, приведена смертельна найденна доза дл соединений , полученных согласно изобретению. Из этой таблицы следует, что соединени вл ютс малотоксичными, в противоположность физостигмину,

6, Дозировка и введение.

Фармацевтические составы, заключающие в себе соединени , полученные согласно изобретению, могут быть введены оральным, парентеральным или ректальным путем. Фармацевтические составы, используемые дл орального введени , могут быть твердыми или жидкими, например, в виде таблеток (в оболочке или без нее), пилюль , драже, желатиновых капсул, растворов , сиропов и т.д. Составы, используемые дл парэнтерального введени , также наход тс в известных фармацевтических формах дл данного типа введени , например, растворы, суспензии или водные или масл ные эмульсии.

Дл введени ректальным путем, вещества , содержащие соединени , полученные согласно изобретению, обычно примен ютс в виде свечей.

Фармацевтические формы, такие как впрыскиваемые растворы, суспензии, таблетки , капли, свечи и т.д. получают согласно широко известным дл фармацевтов способам , фармацевтические формы могут также содержать соединени , которые позвол ют постепенно выделить активный продукт. Соединени , полученные согласно изобретению , смешивают с твердым или жидким, нетоксичным, фармацевтически приемлемым носителем, а в случае необходимости с диспергирующим веществом, размельчающим (расщепл ющим) веществом, стабилизирующим веществом и т.д. При необходимости можно добавить подслащивающие вещества, красители и т.д. Процентное содержание активного продукта в фармацевтических составах может измен тьс в широких пределах, в зависимости от пациента и способа введени , в частности, в за- 5 висимости от частоты введени .

Что касаетс ежедневной дозировки, то она может измен тьс в пределах от единичных доз, например, от 0,1 до 2 г активно- то продукта, в зависимости от способа 0 введени . Так, например, она может составл ть от 0,25 до 0,75 г предпочтительно 0,5 г от одного до трех раз в день, когда соединение принимают в виде таблеток.

В качестве примера, не ограничиваю- 5 щего композиции, содержащей соединение формулы I, котора может быть введена оральным путем, можно привести следующий состав дл таблеток:

Соединение 2250 мг 0 Метилцеллюлоза

(Methocel К4М)200 мг Суха лактоза 154мг Аэрозиль 5 мг Безводна лимонна 5 кислота 60 мг Тальк 11 мг Стеарат магни 20 мг

Claims

Формула изобретени 0 Способ получени Ы-(4-морфолцно-6- пропил-1,3,5-триазин-2-ил)ацетамидов или бензамидов общей формулы

. &Л-.

2

СНгСН,СНз

Vjii unvunj

где RI - водород или С1-С4-алкил;

R2 - С1 С4-алкил, фенил или бензил, или их нетоксичных фармацевтически при- 0 емлемых кислых солей, отличающий с тем, что 2-амино-4-морфолино-6-про- пил-1,3,5-триазин общей формулы I-Ч J Mx-Hf

5Х- z

СНгСНгС5Н3

где Ri имеет указанные значени , подвергают взаимодействию с эквимол р0 ным количеством соединени общей формулы

HatCORa,

где R2 имеет указанные значени ; Hal - галоген,

5 и в случае необходимости, полученный целевой продукт превращают в нетоксичную фармацевтически приемлемую кислую соль.

Таблица 1

2-Р-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазины

(I) хлоргидрат.

Потенциализаци холинергических эффектов оксотреморина

Таблица 2

19

Ингибирование гиперактивности, вызванное скополамином

Таблица 4

Ингибирование эффекта скополамина на полосе от 6,4 до 9,6 Гц ЭЭГ

1838312

20 ТаблицаЗ

Таблица 5

Т а б л и ц а 6