FI101938B - Polypeptidijohdannaisia - Google Patents
Polypeptidijohdannaisia Download PDFInfo
- Publication number
- FI101938B FI101938B FI911319A FI911319A FI101938B FI 101938 B FI101938 B FI 101938B FI 911319 A FI911319 A FI 911319A FI 911319 A FI911319 A FI 911319A FI 101938 B FI101938 B FI 101938B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- peptide
- lys
- group
- ala
- phe
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/6425—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a receptor, e.g. CD4, a cell surface antigen, i.e. not a peptide ligand targeting the antigen, or a cell surface determinant, i.e. a part of the surface of a cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Description
101938
POLYPEPTIDIJOHDANNAISIA
Keksintö koskee polypeptidejä, menetelmää niiden valmistamiseksi, niiden käyttöä diagnostisina aineina ja niitä sisältäviä kittejä.
5 Kuluneina vuosina useissa kasvaimissa on osoitettu olevan vaihtelevanlaisia reseptoreita. Niitä varten olevilla diagnostisilla aineilla ei ole usein selvästi määriteltyä rakennetta. Siten radiojodatut proteiinit ja monoklonaaliset vasta-aineet, jotka ovat 10 reagoineet kelatoivien aineiden kanssa, on substituoi-tu satunnaisesti. Näin ollen tarvitaan uusi kemiallinen edistysaskel, joka mahdollistaa määriteltyjen rakenteiden käytön diagnostisina aineina tai radionukli-dien kuljettajina kasvaimiin.
15 Esillä oleva keksintö tuo esiin uusia leimat tuja peptidejä, jotka ovat hyödyllisiä terapeuttisissa sekä in vivo diagnostisissa sovellutuksissa.
Keksintö tuo siten esiin biologisesti aktiivisen peptidin, joka voi olla jokin seuraavasta ryh-20 mästä: kasvutekijät, peptidihormonit, kuten myöhemmin esitetyt, interferonit ja sytokiinit, kuten IL-1, IL-4 tai IL-S, sekä näiden analogit tai johdannaiset, ja jossa peptidissä on ainakin yksi kelatoiva ryhmä, joka puolestaan on liittynyt mainitun peptidin aminoryhmään 25 ja kykenee kompleksoimaan detektoitavan elementin, tälläisen aminoryhmän ollessa ilman merkittävää sitou-tumisaffiniteettia kohdereseptoreihin.
Näistä yhdisteistä käytetään tämän jälkeen nimitystä keksinnön mukaiset ligandit. Ne sisältävät 3 0 ainakin yhden kelatoivan ryhmän, joka kykenee reagoi-. maan detektoitavan elementin, esim. radionuklidin, radiovarjoelementin (radioopaque element) tai paramag-neettisen ionin, kanssa kompleksin muodostamiseksi, ja edelleen kykenevät sitoutumaan kasvaimien tai etäis-35 pesäkkeiden ilmentämiin tai yli-ilmentämiin reseptoreihin. Kelatoiva ryhmä on liittynyt sellaiseen pepti- 101938 2 din aminoryhmään, joka ei ole tekemisissä reseptorisi-toutumisen kanssa. Tällainen aminoryhmä, johon kela-toiva ryhmä on liittynyt, ei häiritse tai estä merkittävästi peptidin sitoutumista reseptoriin. Edullisesti 5 mainittu aminoryhmä ei ole liittynyt suoraan aromaattiseen tähteeseen.
Termillä "reseptorit" tarkoitetaan tässä yh-tydessä myös proto-onkogeenejä, kuten HER-2/neu proto-onkogeenejä (tunnetaan myös nimellä c-erb B2) tai EGFR 10 (tunnetaan myös nimellä c-erb Bl) , joita yli-ilmentyy esim. rinta- tai munasarjasyöpäkasvaimien tapauksessa.
Keksinnön mukaisesti kelatoiva ryhmä voi olla liittynyt joko suoraan peptidin aminoryhmään tai epäsuorasti kaksiarvoisen siltaryhmän välityksellä.
15 Termillä "biologisesti aktiiviset peptidit" tarkoitetaan tässä yhteydessä luonnon peptidejä, jotka on eristetty luonnosta, peptidejä, jotka on saatu fer-mentoimalla soluja, esim. valmistettu geenitekniikan avulla, tai on saatu syntetisoimalla, sekä niiden joh-20 dannaisia tai analogeja.
Johdannaisilla ja analogeilla tarkoitetaan erityisesti luonnon peptidejä, joista puuttuu yksi tai useampi aminohappo ja/tai yksi tai useampi aminohappo on korvattu yhdellä tai useammalla aminohapporadikaa-25 lilla ja/tai joissa yksi tai useampi funktionaalinen ryhmä on korvattu yhdellä tai useammalla muulla funktionaalisella ryhmällä ja/tai joissa yksi tai useampi ryhmä on korvattu yhdellä tai useammalla muulla isos-teerisellä ruhmällä. Yleisesti, termillä tarkoitetaan 30 kaikkia biologisesti aktiivisen peptidin johdannaisia, joilla on kvalitatiivisesti samanlainen vaikutus kuin modifioimattomalla peptidillä. Ne voivat olla esim. tehokkaampia kuin luonnossa tavattava peptidi. Termillä tarkoitetaan myös luonnossa tavattavien peptidien 35 antagonisteja.
Biologisesti aktiivinen peptidi koostuu edullisesti kolmesta tai useammasta aminohaposta ollen 101938 3 yhtenä ketjuna tai useana, toisiinsa liittyneenä ketjuna· Termin "biologisesti aktiivinen peptidi" ei katsota sisältävän vasta-aine- tai immunoglobuliinimole-kyylejä.
5 Kasvutekijäpeptideistä mainittakoon sopivina esimerkkeinä epidermaalinen kasvutekijä (EGF), bombe-siini sekä niiden analogit ja johdannaiset.
Hormonaalisista peptideistä mainittakoon sopivina esimerkkeinä LHRH sekä tämän analogit ja joh-10 dannaiset.
Lisä- tai vaihtoehtoisena sovellutuksena keksinnössä tuodaan esiin: a. Epidermaalinen kasvutekijä (EGF:n alkuperä voi vaihdella, esim. hiiren EGF, rotan EGF, ihmisen EGF); 15 b. LHRH, LHRH agonistit tai LHRH antagonistit; c. Bombesiini tai bombesiiniantagonistit; sekä niiden johdannaiset ja analogit; jokaisen kohtien (a)-(c) mukaisten peptidien sisältäessä ainakin yhden, tämän aminoryhmään liittyneen ke-20 latoivan ryhmän, joka aminoryhmä ei ota merkittävästi osaa reseptorisitoutumiseen, ja joka kelatoiva ryhmä kykenee kompleksoimaan detektoitavan elementin.
Keksinnön spesifisinä tai vaihtoehtoisina sovellutuksina tuodaan edelleen esiin: 25 A. Peptidi, joka on jonkin edellä määriteltyjen kohti- : en (a)-(c) mukainen peptidi tai sen johdannainen tai analogi, jokaisen kohtien (a)-(c) peptideistä sisältäessä ainakin yhden, mainitun peptidin aminoryhmään liittyneen kelatoivan ryhmän, joka aminoryhmä ei ota 30 merkittävästi osaa reseptorisitoutumiseen, ja joka kelatoiva ryhmä kykenee kompleksoimaan detektoitavan elementin.
Edullisia peptidejä ovat erityisesti EGF, LHRH, LHRH agonistit, LHRH antagonistit ja bombesiini-35 antagonistit.
Keksinnön mukaisessa ligandissa oleva(t) kelatoiva (t) ryhmä(t) on liittynyt/ovat liittyneet kova- 101938 4 lenttisesti peptidin aminoryhmään. Keksinnön mukaisessa ligandissa oleva(t) kelatoiva(t) ryhmä(t) on/ovat edullisesti sitoutunut/sitoutuneet suoraan tai epäsuorasti amidisidoksella peptidin aminoryhmään.
5 Keksinnön mukaiset ligandit sisältävät edul lisesti yhden kelatoivan ryhmän.
Kelatoiva ryhmä voi keksinnön mukaisesti olla sitoutuneena joko peptidin sivuketjuaminoryhmään, kuten lysiinin if-aminoryhmään, ja/tai peptidin terminaa-10 liseen N-aminoryhmään (merkitään tässä yhteydessä "Na-aminoryhmä"), ehdolla, että tällainen aminoryhmä, joka on joko sivuketjussa tai N“-sitoutunut, ei häiritse tai huononna merkittävästi peptidin sitoutumisaffini-teettia kohdereseptoreihin.
15 Seuraavat edellä luetelluista peptideistä sisältävät edullisesti N“-aminoryhmässä olevan kelatoivan ryhmän: EGF, LHRH, bombesiini sekä niiden analogit ja johdannaiset. Peptidejä, jotka sisältävät ainakin yhden, sivuketjun aminoryhmään liittyneen ke-20 latoivan ryhmän, voivat olla edullisesti: EGF, joka sisältää ainakin yhden lysiinin sen aminohapposekvenssissä, kuten hEGF, LHRH, LHRH agonistit, LHRH antagonistit, bombesiini antagonistit, ja niiden analogit ja johdannaiset.
25 Eräs peptidiryhmä koostuu sellaisista pepti- • deistä, joissa on yksi lysiini. Eräs toinen peptidi ryhmä koostuu sellaisista peptideistä, joissa on useampia kuin yksi lysiiniryhmä. Eräs kolmas peptidiryhmä koostuu sellaisista peptideistä, jotka ovat ilman ly-30 siiniä.
Edullisesti, kun peptidi sisältää terminaalisen aminoryhmän, joka on substituoitu tai suojattu esim. asyylillä, niin substituutio- tai suojaryhmä poistetaan sopivasti ennen kelatoivan ryhmän tai sil-35 taryhmän liittämistä.
Sopivia kelatoivia ryhmiä ovat fysiologisesti hyväksyttävät kelatoivat ryhmät, jotka kykenevät komp- 5 101938 leksoimaan detektoitavan elementin. Edullisesti kela-toivalla ryhmällä on oleellisen hydrofiilistä luonnetta. Esimerkkeinä kelatoivista ryhmistä mainittakoon polyaminopolykarboksyyliryhmät/ esim. sellaiset ryh-5 mät, jotka on johdettu ei-syklisistä ligandeista, ku ten dietyleenitriamiinipentaetikkahaposta (DTPA), N-hydroksietyyli-Ν,Ν',N'-etyleenidiamiinitrietikka-haposta (HEDTA), etyleeniglykoli-O,O'-bis(2-amino-etyyli)-N,N, N',N'-tetraetikkahaposta (EGTA), N,N'- 10 bis(hydroksibentsyyli)etyleenidiamiini-Ν,Ν'-dietikka- haposta (HBED) ja trietyleenitetramiiniheksaetikkaha-posta (TTHA), sellaiset, jotka on johdettu substituoi-duista EDTA:ista tai DTPArista, sellaiset, jotka on johdettu makrosyklisistä ligandeista, esim. 1,4,7,10-15 tetra-atsasyklododekaani-Ν,Ν',N'', N' ' '-tetraetikkahaposta (DOTA), 1,4,8, ll-tetra-atsasyklotetra- dekaani-Ν,Ν',N'',N'''-tetraetikkahaposta (TETA), C-funktionalisoiduista tetra-atsasyklododekaanitetra-etikkahapoista, tetra-atsasyklotetradekaanitetra- 20 etikkahapoista, triatsasyklododekaanitrietikkahapoista ja triatsasyklononaanitrietikkahapoista, esim. kela-toivat ryhmät, jotka on johdettu kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisista yhdisteistä, 25 “ rv’1· C 7" 30 >iu\ 1 101938 6 'ia\ n /Rio
IT
C-Ji, "ll *10 10 -S/-V1» C>-
15 I
R10 joissa Rio on -CH2COOH tai sen funktionaalinen johdannainen, esim. esteri; ja 20 Rn on -Alk-Xi tai -(CH2),-Χχ , jossa n ja m ovat toisistaan riippumatta 0, 1, 2 tai 3; Alk on Cnnalkyleeni; Xi on -NCS tai NH2, joka on valinnaisesti substituoitu suojaryhmällä ja A-rengas on substituoitu tai substituoimaton, 25 Aryyli on edullisesti fenyyli. Aryylialkyyli on edullisesti bentsyyli.
Alkyleeni voi olla suoraketjuinen tai haaroittunut, edullisesti suoraketjuinen.
Kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisissa yhdisteissä 30 Rh on edullisesti Alk-NCS tai _(CH2)n NCS.
Alk on edullisesti Cnsalkyleeni, edullisemmin Ci-4alkyleeni, n on edullisesti 1 tai 2. A-rengas on edullisesti substituoimaton.
35 Erityisen edullisia kelatoivia ryhmiä on joh dettu seuraavista: - DTPA, DOTA; tai 101938 7 substituoitu EDTA tai DTPA, esim. N'-p-isotiosyanaattobentsyylidietyleenitriamiini-Ν,Ν,Ν'',N'1-tetraetikkahappo, Ν'-p-isotiosyanaatto-fenetyylidietyleenitriamiini-Ν,Ν,Ν'',N''-tetraetikka-5 happo, N-{2 [bis(karboksimetyyli)amino]etyyli}-Ν'-{2-[bis(karboksimetyyli)amino]-2-(p-isotiosyanaatto-bentsyyli)etyyli}-glysiini tai -(p-isotiosyanaatto-fenetyyli)-homologi; tai - substituoitu DOTA, esim. kaavan Ia mukainen yhdiste, 10 tai kaavojen Ib tai Ie mukaiset yhdisteet, erityisesti sellaiset, joissa Rn on - (CH2) i_g-NCS, p-isotio-syanaattobentsyyli tai p-isotiosyanaattofenetyyli; tai - kaavan Va mukainen yhdiste: 15
NCS
2 0 j 2 1 or 2 (Va) CH- CH, I 12 H3C^c/HN V"3 25 H3c/ NCH-N IjKfT \ch3
OH OH
30
Luonnollisesti, kun keksinnön mukaisessa li-gandissa oleva kelatoiva ryhmä sisältää visinaalisia karboksyylihapporyhmiä, ne voivat olla tässä kelatoi-vassa ryhmässä myös anhydridi-funktionaalisina ryhmi- 3 5 nä.
Keksinnön mukaisesti, kun kelatoiva ryhmä on liittynyt epäsuorasti peptidin aminoryhmään divalent- 101938 8 tisen siltaryhmän tai välike-ryhmän välityksellä, se voi olla liitetty esim. kaavan (ax) mukaisen ryhmän välityksellä, -Z-R-CO- (ax) 5 jossa R on Cx_xx alkyleeni, hydroksisubstituoitu C2.n alkyleeni, C2.lxalkenyleeni, -CH, sykloheksyleeni,
Rs substituoitu sykloheksyleeni tai kaavan (a2) mukainen 10 radikaali, 15 jossa n ja m ovat kuten edellä on määritelty ja rengas A on substituoitu tai substituoimaton; R5 on luonnon tai synteettisen α-aminohapon C(a)-hiileen liittyneen tähteen mukainen tähde; 20 Z on divalenttiryhmä, joka on johdettu funktionaalisesta osuudesta, joka kykynee reagoimaan kovalentti-sesti kelatoivan aineen kanssa.
R on edullisesti C1.4alkyleeni, -CH(RS)- tai kaavan (a2) mukainen radikaali, jossa A-rengas on 25 substituoimaton.
'· Kaavan (oc2) mukaisessa radikaalissasubstitu- entti -(CH2)m- sijaitsee edullisesti meta- tai para-asemassa, edullisemmin para-asemassa.
Z voi olla esim. ryhmä, joka pystyy muodosta-30 maan eetteri-, esteri- tai amidisidoksen kelatoivan ryhmän kanssa. Z on edullisesti -CO- tai -NH-, edullisemmin -NH- .
Kun Z on -CO-, niin kaavan (ax) mukainen di-valenttinen siltaryhmä voi olla dikarboksyylihaposta 35 johdettu divalenttinen radikaali.
Esimerkkimerkityksistä Rs:lle mainittakoon vety, C1.11alkyyli, bentsyyli, substituoitu bentsyyli, 101938 9 jossa fenyylirengas on substituoitu hydroksilla, halogeenilla, Cj^alkyylillä tai C1.3alkoksilla, sekä -CH2-naftyyli.
Keksinnön mukaisten ligandien eräänä edulli-5 sena ryhmänä ovat yhdisteet, joilla on kaava X, A-Zx-B (X) jossa A on kelatoiva ryhmä, esim. kelatoiva ryhmä, 10 joka on johdettu reaktiivisen karboksi- tai aminoryh-män tai niiden funktionaalisen johdannaisen sisältävästä kelatoivasta aineesta; Z1 on suora sidos tai divalenttinen siltaryhmä; ja B on biologisesti aktiivinen peptidi, edullisesti edellä määritelty, jonkin 15 ryhmistä (a)-(c) mukainen peptidi tai sen analogi tai johdannainen, A-Z1-yksikkö on liittynyt B:n aminoryhmään, jolla ei ole merkittävää sitoutumisaffiniteettia kohderesepto-reihin.
20 Edullisia kaavan X mukaisia yhdisteitä ovat sellaiset, joissa: A on kelatoiva ryhmä, joka on johdettu N'-p-isotiosyanaattobentsyylidietyleenitriamiini-Ν,Ν,Ν' ',N'1-tetraetikkahaposta, N' -p-isotiosyanaatto-25 fenetyylidietyleenitriamiini-Ν,Ν,Ν'',N'1-tetraetikkahaposta, N-{2-[bis(karboksimetyyli)amino]etyyli}-N'-{2-[bis(karboksimetyyli)amino]-2-(p-isotiosyanaatto-bentsyyli)-etyyli}-glysiinistä, DOTA:sta, C-funktiona-lisoiduista tetra-atsasyklododekaani-tetraetikka- 30 hapoista, C-funktionalisoiduista tetra-atsasyklo-tetradekaani-tetraetikkahapoista, C-funktionalisoiduista triatsasyklododekaanitrietikkahapoista, C-funktionalisoiduista triatsasyklononaanitrietikkaha-poista, edullisesti kaavojen Ia, Ib tai Ie mukaisista 35 yhdisteistä, erityisesti kaavojen Ia, Ib tai Ie mukaisista yhdisteistä, joissa Ru on - (CH2) 1.s-NCS, p- 101938 10 isotiosyanaattobentsyyli tai p-isotiosyanaattofene-tyyli; tai
Zx on suora sidos tai kaavan ax mukainen ryhmä, jolloin -CO-ryhmä on liittynyt peptidin aminoryhmään ja Z on -5 NH-; tai B on EGF, LHRH, LHRH agonisti, LHRH antagonisti, bom-besiini tai bombesiiniantagonisti.
Esimerkkeinä LHRH antagonisteista mainittakoon yhdisteet, joilla on kaava VII, 10 R33 - A1 - B1 - C, - Dx - E, - F, - G, - H, - Ix - K, -NH2 (VII) jossa R33 on vety, C1.7asyyli tai karbamoyyli; 15 Ax on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, CF3:lla, C1.3-alkyylillä ja/tai C^alkoksilla, a- tai β-naftyyli-D-alaniini, D-Trp, joka on substituoitu valinnaisesti 5- tai 6-asemassa halogeenilla tai C^-alkoksilla ja/tai 1-20 asemassa formyylillä tai asetyylillä, D- tai L-Pro, D-tai L-3,4-dehydroproliini, D- tai L-Ser, D- tai L-Thr, D- tai L-Ala, D-pyroglutamiini, 3-(9-antryyli)-D,L- alanyyli, 3 -(2 - fluorenyyli)-D,L-alanyyli tai 3-(Het)-D,L-alanyyli, jossa Het on heterosyklinen aryyliradi-25 kaali, joka on “ V tai A3 35 11 101938 jossa A2 ja A3 on riippumattomasti valittu ryhmästä, johon kuuluu vety, C1.4alkyyli, kloori ja bromi; 5 A4 on O,S tai N;
Bx on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, N02:lla, Ci_3-alkyylillä tai Ci_3-alkoksilla, D-a-metyyliPhe, jonka 4-asema on valinnaisesti substituoitu kloorilla, 2,2- 10 difenyyliglysiini tai 3-(2-naftyyli)-D-alaniini;
Ci on D-Trp, jonka 5- tai 6-asema on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, N02:lla tai Cx_3alkoksilla ja/tai 1-asema formyylillä tai asetyylillä, 3-(2- tai 1-(naftyyli))-D-alaniini, 3-D-pyridyylialaniini, D-15 Tyr, D-Phe, joka on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, Ci_3alkyylillä ja/tai Ci_3alkoksilla, D-3-Pz-Ala, D-Tin-Glu tai D-Nic-Lys;
Di on L-Ser;
Ei on Tyr, Phe, jonka fenyylirengas on valinnaisesti 2 0 substituoitu halogeenillä, C^alkyylillä ja/tai Ci_3alkoksilla, Orn, Lys, Lys-Nic, MPic-Lys, Lys-Pic, Mpic-Lys, DMG-Lys, Pmc-Lys, Pzc-Lys, His, Dpo, Arg, ΙΟ -pyridyyli) -Ala, Trp, N-(3-pyridyyli)-asetyyli-Lys tai Glu(pMeo-fenyyli) Cit, HOBLys tai PzACAla, 25 Fi on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, N02:lla, Ci_3alkyylillä tai Ci_3alkoksilla, D-Trp, jonka 5- tai 6-asema on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, N02:lla ja/tai Ci_3alkoksilla ja/tai 1-asema formyylillä tai asetyy-30 Iillä, 3-(2-naftyyli)-L-alanyyli, D-Tyr, D-Orn, D-Lys, D-Lys-Nic, D-MNic-Lys, D-MPic-Lys, D-Pmc-Lys, D-Pzc-• Lys, D-Bz-lys, D-ILys, AnGlu, D-NACAla, D-PzACAla, D-
PmACAla, D-3-(3-pyridyyli)-Ala, D-His (subst. H tai bentsyyli) D-Arg, D-homo-Arg(Et2) , D-Cit, D-HCi, D-35 Lys-Pic, D-Cit (Ci_3alkyyli) , D-HCi (C^alkyyli) , D-Glu(AA) tai a-amino-(o-ureido-C2_4-alkaanihappo, 101938 12
Gx on Leu, Nle, Nval, N-a-metyyliLeu, Trp, Phe, Met, Tyr, Vai, Ile, allolle, Abu tai Ala;
Hx on Arg, IOrn, ILys tai Cyp-Lys; I3 on Pro, hydroksiproliini, 3,4-dehydroproliini, Pip; 5 ja Kj on D-Ala, D-Leu, Gly, D-Ser tai Sar; vapaassa tai suolan muodossa.
Kaavassa VII kelatoiva(t) ryhmä(t) voi/voivat olla liittyneenä 1-aseman terminaaliseen Na-aminoryhmään, kun R33 on vety ja/tai Ej^ssä ja/tai 10 Fx:ssä ja/tai Hj^ssä oleviin vapaisiin aminoryhmiin. LHRH antagonistisarjan keksinnön mukaiset ligandit ovat edullisesti kaavan VII mukaisia yhdisteitä, joissa kelatoiva ryhmä on liittynyt asemassa 1 tai 6 tai 8 olevaan aminoryhmään, erityisesti asemassa 6 tai 8 15 olevaan aminoryhmään.
Esimerkkeinä LHRH agonisteista ovat yhdisteet, joilla on kaava VIII, pGlu-His-A5-Ser-B2-C2-D2-Arg-Pro-E2 (VIII) 20 jossa As on Trp, Phe tai 3-(1-naftyyli)Ala; B2 on Tyr,
Phe D-Trp tai 3-(pentafluorifenyyli)Ala; C2 on amino-happoyksikkö, jolla on kaava, 25 -NH-CH-CO- ^3 4 nh2 jossa R34 on -(CH2)pl-, - (CH2) p.-CO-, - (CH2) p,,-R3S- tai - 30 (CH2)p,,,-Y6-(CH2) p>.. -, jolloin p' on 1-5, p1' on 0 tai 1-3, kukin p' ' ' on toisistaan riippumatta 1-3; R35 on fenyyli tai sykloheksyyli; ja Y6 on 0, S, -SO- tai S02; D2 on Leu, Ile, Nle, MeLeu; ja E2 on Gly-NH2, -NH-R31 tai -NH-NH-CO-NH-R32, jossa R31 on vety, alempi alkyy-35 li, sykloalkyyli tai fluori-alempi alkyyli; ja R32 on vety tai alempi alkyyli; vapaassa muodossa tai suolan muodossa.
101938 13 Tähteellä C2 on edullisesti D-konfiguraatio. Kelatoiva ryhmä on edullisesti liittynyt C2:ssa olevaan vapaaseen aminoryhmään.
Esimerkkeinä bombesiiniantagonisteista mai-5 nittakoon yhdisteet, jotka on kuvattu EP patenttijulkaisuissa 339 193 A ja 315 367 A, jotka on liitetty tämän hakemuksen viitteiksi, erityisesti yhdisteet, joilla on kaava IXa, 10 Rje - A« - Bj - Cj - D3 - Ej - P3 - Gj - Hj - Ij - Q (IXa) 123456789 10 jossa R3e on vety, Cj^alkyyli, C2.6alkanoyyli, C4-6sykloalkoksikarbonyyli tai C^alkoksikarbonyyli; 15 A6 on suora sidos tai Gly, Arg, Lys, Phe, Asp, Nai,
Pro, β-Ala tai Glp; B3 on suora sidos tai Gly, Pro tai Asn; C3 on suora sidos tai Lys tai D-Nal; D3 on suora sidos tai His, MeHis, EtHis, PrHis, Gin, 2 0 Glu (OMe)-Glp, Leu, MeLeu, Lys, Pal, Phe, Pro, Arg,
Trp tai Thr; E3 on Trp, Vai, Nai, Leu, Lys, Pal; F3 on Ala, MeAla, Aib, Gly, Pro, Leu, Phe, Ser, Vai,
Nai, Thr, Arg tai Glu; 25 G3 on Vai, Aib, Leu, Ile, Thr, Phe tai Ser; '· H3 on Gly, Sar, Ala, Ser, Aib, Pro, Lys, Asp, Arg,
Vai, Ac3c, Acsc tai Acsc; I3 on His, MeHis, Aib, Vai, Leu, MeLeu, Ala, Ile, Met,
Pro, Phe, Gin, Lys, Pal, Ser, Thr, Glu, Asp, Trp tai 30 Nai; ja Q on K3-R37, jossa K3 on Leu, MeLeu, Ile, Melle, Aib,
Pro, Vai, MeVal, Phe, Ape, MeApe, Met, Ser, Gin, Glu tai Trp ja R37 on C1.3alkyyliamino, (dialkyyli) amino tai C^alkoksi tai Q on C^galkoksi, C1.10alkyyliamino 35 tai C1.10 (dialkyyli) amino; ja yhdisteet, joilla on kaava IXb, 101938 14 Ä7 - B4 - Gin - Trp - Ala - Vai - tf - X« - - Tu (IXb) 123 4 5 6 789 10 jossa A7 on vety, Boc, Lys, Arg; 5 B4 on suora sidos tai Asn, Thr, Glp; W on Gly tai Ala; X6 on suora sidos, His(R38), Phe, Ser tai Ala; Y6 on suora sidos, Leu tai Phe; T], on amino, NH(CH2)4CH3, bentsyyliamino, Met-R39, Leu-10 R39, Ile-R39, Ile-R39 tai Nle-R39; R38 on vety tai bent syyli; ja R39 on amino, hydroksi, metoksi tai -NHNH2; vapaassa tai suolan muodossa.
Bombesiiniantagonistisarjan keksinnön mukai-15 set ligandit ovat edullisesti yhdisteitä, joilla on kaava IXa tai IXb, ja ne sisältävät kelatoivan ryhmän liittyneenä vapaaseen aminoryhmään/vapaisiin aminoryh-miin, joka on/jotka ovat 1-asemassa ja/tai 2-asemassa ja/tai 4-asemassa ja/tai 5-asemassa ja/tai 6-asemassa 20 ja/tai 7-asemassa ja/tai 8-asemassa, edullisemmin vain yhden kelatoivan ryhmän liittyneenä edellä kuvatun mukaisesti.
Keksinnön mukaiset ligandit voivat olla esim. vapaassa tai suolan muodossa. Suoloihin kuuluu hap-25 poadditiosuolat esim. orgaanisten happojen, polymeeristen happojen tai epäorgaanisten happojen kanssa, kuten hydrokloridit ja asetaatit, ja suolamuodot, jotka on saatavissa kelatoivassa ryhmässä olevien karbok-syyli- tai sulfonihapporyhmien kanssa, kuten alkalime-30 tallisuolat, esim. natrium- tai kaliumsuolat, tai substituoidut tai substituoitumattomat ammoniumsuolat.
Esillä oleva keksintö tuo myös esiin menetelmän keksinnön mukaisten ligandien valmistamiseksi, jolloin 35 a) peptidistä, joka sisältää kelatoivan ryhmän, poistetaan ainakin yksi siinä oleva suojaryhmä, tai 15 101938 b) kaksi peptidifragmenttia, joista kumpikin sisältää ainakin yhden aminohapon suojatussa tai suojaamattomassa muodossa ja joista toinen sisältää kelatoivan ryhmän, liitetään yhteen amidisidoksella, joka on sel- 5 lainen, jolla saadaan haluttu aminohapposekvenssi, jonka jälkeen toteutetaan valinnaisesti menetelmän vaihe a), tai c) kelatoiva aine ja haluttu peptidi suojatussa tai suojaamattomassa muodossa liitetään yhteen siten, että 10 kelatoiva ryhmä sitoutuu peptidin haluttuun aminoryh-mään, jonka jälkeen toteutetaan valinnaisesti vaihe a), tai d) suojaamattomasta tai suojatusta peptidistä, joka sisältää kelatoivan ryhmän, poistetaan funktionaalinen 15 ryhmä tai se konvertoidaan toiseksi funktionaaliseksi ryhmäksi siten, että saadaan toinen suojaamaton tai suojattu peptidi, joka sisältää kelatoivan ryhmän, ja jälkimmäisessä tapauksessa toteutetaan menetelmän vaihe a) , 20 ja otetaan näin saatu ligandi talteen vapaassa tai suolan muodossa.
Edellä esitetyt reaktiot voidaan toteuttaa analogisesti tunnettujen menetelmien kanssa, esim. kuten on kuvattu myöhemmin esitettävissä esimerkeissä, 25 erityisesti menetelmä a) . Kun kelatoiva ryhmä liitetään eetteri-, esteri- tai amidisidoksella, niin liittäminen voidaan suorittaa analogisesti vastaavien eetterin, esterin tai amidin muodostuksessa käytettyjen menetelmien kanssa. Näissä reaktioissa voidaan pepti- 30 deille sopivia tai halutuille kelatoiville ryhmille sopivia suojaryhmiä käyttää haluttaessa sellaisille : funktionaalisille ryhmille, jotka eivät osallistu re aktioon. Termiin "suojaryhmä" luetaan mukaan polymee- rihartsi, jossa on funktionaalisia ryhmiä.
35 Kun edellä esitetyissä menetelmävaiheissa b) ja c) halutaan valmistaa peptidi, jossa kelatoiva ryhmä on liittyneenä peptidin aminoryhmään divalenttisen 101938 16 silta- tai välike-ryhmän välityksellä, niin siltaryhmä voi olla vastaavissa aminohapoissa, peptidifragmenteissa tai peptideissä, joita käytetään lähtöaineena, tai se voi olla liitettynä kelatoivaan ryhmään. Maini-5 tut aminohapot, peptidifragmentit tai peptidit voidaan valmistaa antamalla vastaavien aminohappojen tai peptidien, joista puuttuu silta- tai välike-ryhmä, reagoida vastaavien silta- tai välike-ryhmän muodostavan yhdisteen, kuten hapon, jolla on kaava HO-CO-R-COOH, 10 H2N-R-COOH tai sen reaktiivisen happojohdannaisen, esim. aktiivisen esterin, kanssa tunnettujen menetelmien mukaisesti. Esimerkkeinä aktiivisista esteriryh-mistä tai karboksi-aktivoivista ryhmistä mainittakoon 4-nitrofenyyli, pentakloorifenyyli, pentafluorifenyy-15 li, sukkini-imidyyli ja 1-hydroksi-bentsotriatsolyyli.
Vaihtoehtoisesti kelatoiva aine voi ensin reagoida silta- tai välike-ryhmän muodostavan yhdisteen kanssa silta- tai välike-ryhmän liittämiseksi siihen, jonka jälkeen suoritetaan reaktio peptidin, 20 peptidifragmentin tai aminohapon kanssa tunnetujen menetelmien mukaisesti. Kun eräässä edullisessa keksinnön mukaisessa sovellutuksessa kelatoiva ryhmä johdetaan polyaminopolykarboksyyliyhdisteestä, niin kela-toivan aineen, esim. EDTA- tai DTPA-dianhydridin, an-25 netaan reagoida silta- tai välike-ryhmän muodostavan yhdisteen, esim. H2N-R-COOH tai sen reaktiivinen happo johdannainen, kuten sen alkyyliesteri, kanssa silta-ryhmällä modifioidun kelatoivan aineen saamiseksi.
Tämä yhdiste voidaan sitten aktivoida, esim. konver-30 toida vastaavaksi hydratsidiksi antamalla modifioidun kelatoivan aineen reagoida esim. hydratsiinihydraatin kanssa. Tämän jälkeen hydratsidi-kelatoiva aine voi reagoida aminohapon, peptidifragmentin tai peptidin kanssa tunnettujen menetelmien mukaisesti, esim. atsi-35 dikytkennän kautta konversion vastaavaksi atsidiksi jälkeen.
17 101938
Kun keksinnön mukaisessa eräässä uudessa sovellutuksessa karboksyylifunktion, esim. -COOH tai sen anhydridi, sisältävä kelatoiva aine halutaan liittää suoraan peptidin aminoryhmään (divalenttisen silta-5 tai välike-ryhmän puuttuessa), niin kelatoiva aine voidaan aktivoida, esim. konvertoida vastaavaksi hyd-ratsidiksi antamalla sen reagoida esim. hydratsiini-hydraatin kanssa. Hydratsidi-kelatoiva aine voi sitten reagoida aminohapon, peptidifragmentin tai peptidin 10 kanssa tunnettujen menetelmien mukaisesti, esim. atsi-dikytkennän kautta konversion vastaavaksi atsidiksi jälkeen.
Haluttaessa liittää kelatoiva ryhmä peptidin tai peptidifragmentin, jota käytetään lähtöaineena ja 15 joka sisältää yhden tai useamman sivuketjuaminoryhmän, terminaaliseen N-aminoryhmään, niin tämä/nämä sivuket-juaminoryhmä(t) suojataan sopivasti suojaryhmällä esim. peptidikemian tavan mukaisesti.
Haluttaessa liittää kelatoiva ryhmä peptidin 20 tai peptidifragmentin, jota käytetään lähtöaineena ja joka sisältää vapaan terminaalisen aminoryhmän, sivuket juaminoryhmään, niin terminaalinen aminoryhmä voidaan suojata suojaryhmällä.
Haluttaessa liittää kelatoiva ryhmä peptidin 25 tai peptidifragmentin, jota käytetään lähtöaineena, terminaaliaminoryhmään, joka on substituoitu tai suojattu, esim. substituoitu asyylillä, niin substituutio- tai suojaryhmä voidaan sopivasti poistaa ennen kelatoivan ryhmän kytkemistä.
3 0 Menetelmävaiheessa b) tai c) käytetty kela toiva aine voi olla tunnettu tai se voidaan valmistaa analogisesti tunnettujen menetelmien kanssa.
Keksinnön mukaiset ligandit voidaan puhdistaa konventionaaliseen tapaan, esim. kromatografisesti.
35 Keksinnön mukaiset ligandit sisältävät edullisesti vähemmän kuin 5 p-% kelatoivista ryhmistä vapaita peptidejä.
101938 18
Keksintö tuo edelleen esiin uutena sovellutuksena edellä määriteltyjä keksinnön mukaisia ligan-deja, jotka ovat muodostaneet kompleksin detektoitavan elementin kanssa (käytetään tässä yhteydessä myöhemmin 5 nimitystä keksinnön mukaiset kelaatit) ollen vapaassa muodossa tai suolan muodossa, niiden valmistusmenetelmän ja käytön in vivo diagnostisessa ja terapeuttisessa käsittelyssä.
Keksinnön mukaiset kelaatit sisältävät ku-10 kin keksinnön mukaisen ligandin, joka on erityisesti ryhmien (a)-(c) mukainen, kompleksoituneena detektoitavan elementin kanssa.
Spesifisissä tai vaihtoehtoisissa sovellutuksissa esillä oleva keksintö tuo esiin myös ligandien 15 ryhmiä, jotka on määritelty edellä kohdissa (A) , kompleksoituna detektoitavan elementin kanssa.
Detektoitavalla elementillä tarkoitetaan mitä tahansa elementtiä, edullisesti metalli-ionia, jolla on terapeuttiseen tai in vivo diagnostisiin menetel-20 miin hyödyllinen ominaisuus, esim. detektoitava sätei-lyemissio tai vaikutus NMR relaksaatioon.
Sopiviin detektoitaviin metalli-ioneihin kuuluu esim. raskaat alkuaineet tai harvinaiset maametal-li-ionit, kuten on käytetty CAT skannauksessa 25 (Computer axial tomography, tietokone-aksiaalinen tomografia) , paramagneettiset ionit, esim. Cd3+, Fe3+,
Mn2+ ja Cr2+, fluoresoivat ionit, esim. Eu3+, ja radio-nuklidit, esim. γ-emittoivat radionuklidit, β- emittoivat radionuklidit, α-emittoivat radionuklidit, 6 6 62 30 positroni-emittoivat radionuklidit, esim. Ga, Cu, 52Fe ja 62Zn, sekä Auger-elektroni-emittoivat radionu-: kiidit.
Sopiviin γ-emittoiviin radionuklideihin kuuluu diagnostisiin menetelmiin soveltuvat nuklidit. γ-35 emittoivien radionuklidien puoliintumisaika on edullisesti 1 h - 40 päivää, edullisesti 5 h - 4 päivää, edullisemmin 12 h - 3 päivää. Esimerkkeinä mainitta- 19 101938 koon radionuklidit, jotka on johdettu galliumista, indiumista, teknetiumista, ytterbiumista, reniumista ja talliumista, esim. 67Ga, 111In< 99mTc, 169Yb ja 186
Re. γ-radionuklidi valitaan edullisesti riippuen 5 valitun keksinnön mukaisen ligandin metaboliasta tai käytetystä peptidistä. Keksinnön mukainen ligandi ke-latoidaan edullisemmin γ-radionuklidi11a, jonka puoliintumisaika vastaa tai on pidempi kuin kasvaimessa olevan peptidin puoliintumisaika.
10 Muita kuvaukseen käytettäväksi sopivia radio- nuklideja ovat positroni-emittoivat radionuklidit, esim. edellä kuvatun mukaiset.
Sopiviin β-emittoiviin radionuklideihin kuu luu terapeuttisiin sovellutuksiin hyödylliset radionu-15 kiidit, kuten sellaiset, jotka on johdettu Y:sta, 67Cu:sta, 186Re:sta, 188Re:sta, 169Er:sta, 121Sn:sta, 127Te:sta, 143Pr:sta, 198Au:sta, 109Pd:sta, 165Dy:sta, 32P:sta, 142Pr:sta tai Ag:sta. β-radionuklidien puoliintumisaika on edullisesti 1 h - 14.3 päivää, edul-20 lisesti 2.3-100 h. β-emittoiva radionuklidi valitaan puoliintumisajaltaan edullisesti vastaamaan tai olemaan pidempi kuin kasvaimessa olevan peptidin puoliintumisaika .
Sopiviin α-emittoiviin radionuklideihin kuu-25 luu terapeuttisissa sovellutuksissa käytettävät radio- ' 1 li o nuklidit, esim. At, Bi.
Muita terapeuttiseen käsittelyyn sopivia ra-dionuklideja ovat Auger-elektroni-emittoivat radionuklidit, esim. 125I, 123I, 77Br.
30 Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan valmistaa antamalla ligandin reagoida vastaavan detektoitavan elementin kanssa tuottaen yhdisteen, esim. metallisuo-lan, edullisesti vesiliukoisen suolan. Reaktio voidaan toteuttaa analogisesti tunnettujen menetelmien kanssa, 35 esim. kuten julkaisuissa, Perrin, Organic Ligand, Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press (1982); Krejcarit ja Tucker, Biophys. Biochem. Res. Com. 77: 101938 20 581 (1977) ja Wagner ja Welch, J. Nucl. Med. 20.: 428 (1979) on esitetty.
Kelaatti voidaan sopivasti muodostaa antamalla ligandin reagoida detektoitavan elementin kanssa 5 tuottaen yhdisteen pH arvossa, jossa keksinnön mukainen ligandi on kemiallisesti stabiili.
Detektoitava metalli-ioni voidaan saattaa liuokseen myös kompleksina välituotekelatoivan aineen kanssa, esim. kelatoiva aine muodostaa kelaattikomp-10 leksin, joka muuttaa metalli-ionin liukoiseksi, mutta on termodynaamisesti vähemmän stabiili kuin kelaatti. Esimerkkinä tällaisesta välituotekelatoivasta aineesta mainittakoon 4,5-dihydroksi-l,3-bentseenidisulfoni-happo (Tiron). Tällaisessa menetelmässä detektoitava 15 metalli-ioni vaihtaa ligandin.
Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan myös valmistaa liittämällä kovalenttisesti yhteen detektoita-van aineen kanssa kompleksoitunut kelatoiva aine ja suojatussa tai suojaamattomassa muodossa oleva pepti-20 di, ja poistamalla haluttaessa ainakin yksi läsnä oleva suojaryhmä. Sama reaktio voidaan suorittaa käyttäen kelatoivaa ainetta, joka on kompleksoitunut metalli-ionin kanssa, jonka jälkeen saadussa kompleksoidussa peptidissä oleva metalli-ioni voidaan korvata halutul-25 la detektoitavalla elementillä.
Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan myös valmistaa liittämällä yhteen detektoitavan elementin kanssa kompleksoitu kelatoiva aine ja peptidifragment-ti, joka sisältää ainakin yhden aminohapon suojatussa 30 tai suojaamattomassa muodossa, ja sitten jatkamalla peptidisynteesiä vaihe vaiheelta, kunnes saadaan lopullinen peptidisekvenssi, sekä poistamalla haluttaessa ainakin yksi mahdollinen läsnä oleva suojaryhmä. Detektoitavan elementin sijasta kelatoiva aine voidaan 35 kompleksoida ei-detektoitavan metallin kanssa ja tämä metalli voidaan sitten korvata saadussa kompleksoidussa peptidissä detektoitavalla elementillä.
21 101938
Kelatoitava ryhmä voidaan liittää keksinnön mukaisesti silta- tai välike-ryhmän, kuten edellä määritellyn kaavan (αχ) mukaisen radikaalin, välityksellä; tällöin menetelmävaiheissa keksinnön mukaisten 5 kelaattien valmistamiseksi ymmärretään, että joko peptidi tai peptidifragmentti tai kelatoiva aine voi sisältää ko. silta- tai välike-ryhmän.
Edellä esitetyt reaktiot voidaan suorittaa analogisesti tunnettujen menetelmien kanssa. Riippuen 10 kyseessä olevasta kelatoivasta ryhmästä leimaustehok-kuus voi yltää 100 %, jolloin puhdistusta ei tarvita. Radionuklideja, kuten teknetium-99m, voidaan käyttää hapettuneessa muodossa, esim. Tc-99m perteknetaattina, joka voidaan kompleksoida pelkistävissä olosuhteissa.
15 Edellä esitetyt reaktiot suoritetaan edulli sesti olosuhteissa, joissa vältetään merkkiaineen kontaminaatio. Edullisesti käytetään tislattua deionisoi-tua vettä, ultrapuhtaita reagenssejä, kelatointi-laatuista radioaktiivisuutta jne. minimoimaan vaiku-20 tusta merkkiaineisiin.
Keksinnön mukaiset kelaatit voivat olla esim. vapaassa tai suolan muodossa. Suoloihin kuuluu hap-poadditiosuolat esim. orgaanisten happojen, polymeeri-happojen tai epäorgaanisten happojen kanssa, kuten 25 hydrokloridit ja asetaatit, ja suolamuodot, jotka saadaan molekyylissä olevien, kelaatin muodostukseen osallistumattomien karboksyylihappojen kanssa, esim. alkalimetallisuolat, kuten natrium- tai kalium-, tai substituoidut tai substituoimattomat ammoniumsuolat.
30 Erityisen edullisia keksinnön mukaisia ke- laatteja ovat: • - Kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on kaavan Va mukaisesta yhdisteestä johdettu kelatoiva ryhmä ja jotka kaavan X mukaiset yhdisteet on kompleksoitu ra-35 dioaktiivisen Tc:n, esim. 99mTc, kanssa; - Kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on kaavan Ia,
Ib tai Ie mukaisesta yhdisteestä, jossa puolestaan Rn 101938 22 on - (CH2) i.g-NCS, p-isotiosyanaattobentsyyli tai p-isotiosyanaattofenetyyli, johdettu kelatoiva ryhmä ja jotka kaavan X mukaiset yhdisteet on kompleksoitu ra-dioaktiivisen yttriumin, esim. Y, kanssa; 5 - Kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on N'-p- isotiosyanaattobentsyylidietyleenitriamiini-Ν,Ν,Ν'',N'1 -tetraetikkahaposta tai N1-p-isotiosya- naattofenetyylidietyleenitriamiini-N,N,N1 1,N'1-tetraetikkahaposta johdettu kelatoiva ryhmä ja jotka kaavan 10 X mukaiset yhdisteet on kompleksoitu europiumin kanssa; - Kaavan X mukaiset yhdisteet, joissa A on N-{2- bis(karboksimetyyli)amino]etyyli}-N'-(2-[bis(karboksi-metyyli)amino]-2-(p-isotiosyanaattobentsyyli)-etyyli}-15 glysiinistä johdettu kelatoiva ryhmä ja jotka yhdisteet on kompleksoitu radioaktiivisen indiumin tai yttriumin, esim. 90Y tai ulIn, kanssa.
Keksinnön mukaisilla kelaateilla ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on farma-20 seuttista aktiivisuutta ja ovat siten hyödyllisiä riippuen detektoitavasta metallista joko kuvausainee-na, esim. reseptori-positiivisten kasvaimien ja etäispesäkkeiden osoittamisessa, kun ne on kompleksoitu paramagneettisen, γ-emittoivan metalli-ionin tai po-25 sitroni-emittoivan radionuklidin kanssa, tai radiolää-keaineina resptori-positiivisten kasvaimien ja etäispesäkkeiden in vivo hoidossa, kun ne on kompleksoitu a- tai β-radionuklidin tai Auger-elektroni-emittoivan radionuklidin kanssa, kuten on osoitettu standardiko-30 keillä, esim. esittämällä biojakautuminen esimerkissä 12 esitetyn mukaisesti annettaessa i.v. n. 1-5 Hg/kg \ ligandia, joka on leimattu käyttäen 0.5-2 mCi 111In.
Keksinnön mukaiset kelaatit omaavat myös affiniteettia kasvaimien tai etäispesäkkeiden ilmentämiin tai yli-35 ilmentämiin reseptorihin, kuten on osoitettu standar-di-in vitro sitoutumismäärityksillä, esim. esimerkissä 101938 23 11 esitetyn mukaisesti, kun kelaatteja lisätään edul-lisesti n. 10 -10 M konsentraatioina.
Keksintö tuo edelleen esiin erilaisina spesifisinä tai vaihtoehtoisina sovellutuksina: 5 1. Menetelmän in vivo kuvaamiseksi, esim. kasvaimien ja etäispesäkkeiden in vivo detektoimiseksi kohteessa, jolloin a) kohteelle annetaan keksinnön mukaista ke-laattia ja b) rekisteröidään kudosten, kuten kasvaimien tai etäispesäkkeiden, joihin mainittu kelaatti on 10 kohdistunut, sijainti.
Tämä menetelmä on erittäin hyödyllinen kasvaimien, jotka ilmentävät tai yli-ilmentävät reseptoreita, in vivo määrityksessä, ja erityisen merkittävä tuumorigeenisten solujen tapauksessa. Keksinnön mukai-15 sessa in vivo määritysmenetelmässä käytettäviä kek sinnön mukaisia kelaatteja ovat kelaatit, jotka on kompleksoitu esim. edellä esitettyjen γ-emittoivan radionuklidin, positroni-emittoivan radionuklidin tai paramagneettisen metalli-ionin, kanssa.
20 Menetelmässä (1) kuvausaineina käytettävät keksinnön mukaiset kelaatit annetaan parenteraalises-ti, edullisesti laskimonsisäisesti, esim. injektoitavien liuosten tai suspensioiden muodossa, edullisesti yhtenä injektiona. Sopiva annos luonnollisesti vaihte-25 lee riippuen esim. käytettävästä ligandista ja detek-toitavan elementin tyypistä, kuten radionuklidista. Sopiva injektoitava annos on sellaisella välillä, jolla kyetään aikaansaamaan kuva tekniikan tasossa tunnetuilla fotoskannausmenetelmillä. Käytettäessä radio-30 leimattua keksinnön mukaista kelaattia, se annetaan sopivasti annoksena, jolla on 0.1-50 mCi, edullisesti ·. 0.1-30 mCi, edullisemmin 0.1-20 mCi, radioaktiivisuus.
Eläimille indikoitu annosväli voi olla 0.1-10 H9/kg ligandia, joka on leimattu 0.1-2 mCi γ-35 emittoivalla radionuklidillä, esim. 111In:lla. Suuremmille nisäkkäille, kuten ihmisille, indikoitu annosväli voi olla 1-200 μg ligandia, joka on leimattu 0.1-15 101938 24 mCi, edullisesti 0.1-30 mCi, kuten 3-15 mCi, γ-emittoivalla radionuklidilla riippuen käytetystä γ-emittoivasta nuklidista. Esimerkiksi In tapauksessa on edullisempaa käyttää alarajalla olevaa radioaktiivi -5 suutta, kun taas Te tapauksessa on edullisempaa käyttää ylärajalla olevaa annosta.
Kelaattien rikastumista tuumorigeenisiin kohtiin voidaan seurata vastaavilla kuvaustekniikoilla, kuten käyttämällä radioaktiivista-lääkekuvaus- 10 instrumentointia, esim. skanneria, γ-kameraa, kiertävää -γ- kameraa, jotka kaikki ovat edullisesti tietokoneavusteisia; PET-skanneria (positroniemissio- tomografia); MRI laitteita tai CAT skannauslaitteita.
Keksinnön mukaiset kelaatit voidaan antaa 15 vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa. Tällaiset suolat voidaan valmistaa konventionaaliseen tapaan ja niiden aktiivisuus on samaa luokkaa kuin vapaiden yhdisteiden.
Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetel-20 mässä käytettävät keksinnön mukaiset kelaatit voidaan edullisesti valmistaa hieman ennen antoa kohteeseen, so. leimaus halutulla detektoitavalla metalli-ionilla, erityisesti halutulla α-, β- tai γ-radionuklidilla, voidaan suorittaa hieman ennen antoa.
25 Keksinnön mukaiset kelaatit voivat olla käyttökelpoisia kuvattaessa tai hoidettaessa eri tyyppisiä kiinteitä tai ei-kiinteitä kasvaimia ja niiden etäispesäkkeitä, esim. aivolisäke-, maha-suoli-haima-, keskushermostojärjestelmä-, aivo-, rinta-, munasarja-, 30 paksusuoli-, eturauhas-, munuais- tai keuhkosyöpiä, paraganglioomaa, neuroplastoomaa, glioomaa, medullaa-rista kilpirauhaskarsinoomaa, myeloomaa, luukasvaimia, karsinoideja jne. sekä niiden etäispesäkkeitä.
Näitä käyttötarkoituksia varten on edullista 35 valita polypeptidiyksiköksi sellainen yhdiste, joka akkumuloituu spesifisesti diagnostisen tai terapeuttisen kohteen erityiselimeen tai -kudokseen. Keksinnön 101938 25 mukaisesti voidaan saada reseptori-spesifisiä ligande-ja ja kelaatteja, jotka kohdistuvat määrättyihin solu-populaatioihin .
Keksintö tuo edelleen uutena sovellutuksena 5 esiin: i. farmaseuttisen ainekokoomuksen, joka sisältää keksinnön mukaista ligandia vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa sekä yhtä tai useampaa farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa 10 tai laimennusainetta; ii. farmaseuttisen ainekokoomuksen, joka sisältää keksinnön mukaista kelaattia vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa sekä yhtä tai useampaa farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa 15 tai laimennusainetta.
iii. Keksinnön mukaisen ligandin käytön vapaassa muodossa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa kohdekudosten kuvaamiseen tarkoitetun diagnostisen aineen valmistuksessa.
20 Tällaiset ainekokoomukset voidaan valmistaa konventionaaliseen tapaan. Ne ovat edullisesti nestemäisessä muodossa.
Keksinnön mukainen ainekokoomus voi olla myös erillisinä pakkauksina varustettuna käyttöohjeilla 25 ligandin ja metalli-ionin sekoittamiseksi keskenään ja saadun kelaatin antamiseksi. Se voi olla myös kaksois-pakkauksen muodossa, so. yhtenä pakkauksena, joka sisältää erilliset yksikköannokset ligandia ja detektoi-tavaa metalli-ionia, varustettuna käyttöohjeilla ko.
30 annoksien sekoittamiseksi keskenään ja kelaatin antamiseksi. Laimennusaine tai kantaja voi olla sisälly-·, tettynä yksikköannosmuotoihin.
Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat on annettu °C ja [a] D-arvot ovat korjaamattomia. Seuraa- 35 via lyhenteitä käytetään: Boc= tert-butoksikarbonyyli; TFA= trifluorietikkahappo; DTPA= dietyleenitriamiini-pentaetikkahappo; DMF= dimetyyliformamidi.
101938 26
Tekijä "F" ilmaisee saatujen tuotteiden pep-tidipitoisuuden (F= 1 tarkoittaa 100 % peptidipitoi-suutta) . Ero 100 % nähden [(1- 1/F) x 100] johtuu etikkahaposta ja vedestä.
5 ESIMERKKI 1: DTPA - NH -CH-. - CH-, - COOCH-, 5 g natriumbikarbonaattia ja 2.1 g H2N-CH2-CH2-CO-OCH3, HCl liuotetaan 30 1 veteen. 5.3 g DTPA-dianhydridin lisäyksen ja 1 min reaktioajan jälkeen 10 seoksen pH sovitetaan arvoon 3 HCl avulla ja sitten arvoon 5.5 IN NaOH avulla. Saatu seos kylmäkuivataan ja sitten puhdistetaan kromatografisesti eluoimalla ensin 7/4/2- ja sitten 7/5/4 kloroformi/metanoli/50 % etikkahapposeoksella saaden otsikon mukaisen yhdis-15 teen. MH+: 479 (FAB-MS).
ESIMERKKI 2: DTPA - NH - CH-, - CH, - CO - NHNH-.
200 mg hydratsiinihydraattia lisätään 330 mg 20 DTPA-NH-CH2-CH2-CO-OCH3 :n metanoliliuokseen. 24 h huo neenlämpötilassa reagoimisen jälkeen metanoli haihdutetaan pois ja jäännös kromatografoidaan silkageelillä käyttäen eluenttina 5/8/3 klorofor mi/ jääetikka/vesiseosta. Saatu tuote puhdistetaan 25 edelleen ioninvaihtohartsilla (AG 4-X4, OH-muoto; Bio- ..... rad). Otsikon mukainen yhdiste saadaan valkoisena lyo- filisaattina. MH+: 479 (FAB-MS) .
ESIMERKKI 3: DTPA - 6 - Ala - mEGF 30 a) Atsidin valmistus 14.3 mg DTPA-P-Ala-hydratsidia liuotetaan 1 ml DMF ja jäähdytetään -15°C. 0.02 ml 3N HCl dietyyli-eetteriliuosta ja 5.4 μΐ tert-butyylinitriittiä lisä-35 tään sitten liuokseen. 30 min kuluttua saatua liuosta voidaan käyttää seuraavaan vaiheeseen (emäliuos sisältää 0.03 mMol atsidia/ml liuos).
27 101938 b) Kytkeminen 3 mg mEGF (1-53) liuotetaan 1 ml DMF ja jäähdytetään 0°C. Tähän liuokseen lisätään 0.88 μΐ N-5 etyylidi-isopropyyliamiinia ja sitten 25 μΐ kohdassa a) saatua liuosta. Saadun seoksen annetaan seistä 16 h jääkaapissa. Reaktion etenemistä seurataan ohutlevy-kromatografisesti (eluenttina 7/5/4 klorofor- mi/metanoli/50 % etikkahappo) ja seokseen lisätään 10 vielä 0.88 μΐ N-etyylidi-isopropyyliamiinia ja 25 μΐ kohdassa a) saatua atsidiliuosta. Vielä 12 h jääkaappi jakson jälkeen seos haihdutetaan vakuumissa ja jäännös puhdistetaan käänteisfaasi HPLC avulla (pylväs: ET 250/8/4 NUCLEOSIL 300-7 C18; Macherey ja Nagel). F -15 0.91.
Aminohappoanalyysi: teor. havaittu ASX 7 7.1 GLX 3 3.2 20 SER 6 5.3 HIS 1 0.9 THR 2 1.6 beta-ALA 1 1.1 ARG 4 4.0 (standardi) 25 TYR 5 5.1 CYS-CYS 6 3.2 VAL 2 1.8 MET 1 1.3 ILE 2 2.2 3 0 LEU 4 4.4 PRO 2 1.9
ESIMERKKI 4: —In leimattu DTPA-B-Ala-mEGF
35 1 mg DTPA-P-Ala-mEGF liuotetaan 0.01 M etik- kahappoon. Saatu liuos suodatetaan 0.22 μ Millex-GV suodattimen läpi. 111InCl3 Amersham, 370 MBq/ml) esi- 101938 28 laimmennetaan samaan tilavuuteen 0.5 M natriumasetaa-tilla. Leimaus suoritetaan sekoittamalla DTPA-P-Ala-mEGF InCl3 liuoksen kanssa ja jatkamalla sekoitusta varovasti huoneenlämpötilassa.
5
ESIMERKKI 5: —Y leimattu DTPA-B-Ala-mEGF
90 90 90 Y saadaan Sr- Y radionuklidigeneraattoris-ta. Generaattorin muodostus, sen eluointi ja 10 [ Y]EDTA:n konversio asetaattikompleksiksi suoritetaan julkaisussa, M. Chinol ja D.J. Hnatowich, J. Nucl.
Med. 28, 1465-1470 (1987), esitetyn menetelmän mukai sesti. 1 mg ΌΤΡΑ-β-Ala-mEGF liuotettuna 5 ml 0.01 M etikkahappoon annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan ja 9 0 15 sen jälkeen joukkoon lisätään 1.0 mCi Y 50 μΐ steriilissä 0.5 M asetaattiliuoksessa. Seos jätetään seisomaan 30 min-1 h ajaksi kelatoitumisen maksimoimiseksi.
ESIMERKKI 6: fDTPA-B-Ala-Trp—1 -tetragastriini 20
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 3 menetelmän mukaisesti (atsidin valmistus ja kytkeminen) , mutta käyttäen H-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 mEGF:n si-j asta.
25 [oc]20d = -6.7° (c= 0.5, 95 % AcOH) F= 0.77.
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen 11:LIn tai 90Y esimerkkien 4 tai vast. 5 menetelmien mukaisesti.
3 0 ESIMERKKI 7 : ΓΡΤΡΑ-β-Ala-Phe—1 -blnsuliini
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 3 menetelmän mukaisesti, mutta käyttämällä A1, B29-Di-
Boc-insuliinia mEGF:n sijasta ja poistamalla suojaryh-35 mä 100 % CF3COOH:lla tunnetulla tavalla. F= 0.83 29 101938
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen 111In tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
5 ESIMERKKI 8 : Asetwli-DPhe (pCl) -DPhe fpCl) -DTrp-Ser-
Tvr-DLvs(R)-Leu-Arq-Pro-DAla-NH-, yOH2-cooa io R - -co-ch2-n-ch2-ch2-n-ch2-ch2-n I I \
CH, CH2 CH2-COOH
I I
COOH COOH
15 150 mg DTPA-hydratsidia 25 ml DMF liuoksessa jäähdytetään -20°. Tähän seokseen lisätään 0.37 ml 3 N HC1 eetteriliuosta ja sitten 72 μΐ t-butyylinitriittiä ja saatua seosta sekoitetaan n. 30 min samalla pitäen lämpötila välillä -15-(-20)°. Tämän jälkeen lisätään 20 -20° jäähdytettyä, 200 mg asetyyli-DPhe(pCl)- DPhe(pCl)-DTrp-Ser-Tyr-DLys-Leu-Arg-Pro-DAla-NH2 :n ja 100 ml DMF liuosta ja sitten N-etyyli-di-isopropyyliamiinia, kunnes pH saadaan arvoon 9. Saatua seosta sekoitetaan n. 70 h 0° pitäen pH arvossa 9.
25 Sen jälkeen DMF poistetaan vakuumissa, kunnes jäljelle jää 5 ml tilavuus, josta otsikon mukainen yhdiste saostetaan lisäämällä eetteriä. Sakka suodatetaan, pestään ja kuivataan.
Puhdistusta varten otsikon mukainen yhdiste 30 liuotetaan 150 ml veteen, liuoksen pH sovitetaan arvoon 7 lisäämällä NH4OH, adsorboidaan duoliitti ES 881 pylvääseen ja eluoidaan käyttäen H20-dioksaani-AcOH:n gradienttia. Otsikon mukaisen yhdisteen sisältävät fraktiot kerätään ja sitten lyofilisoidaan. [a]20D = 35 -14.5° (c= 0.2, 95 % AcOH).
Lähtöaineet valmistetaan seuraavasti: 101938 30 a. DTPA-hydratsidi 2 g natriumbikarbonaattia liuotetaan 7 1 veteen. Liuokseen lisätään 0.74 g BocHN-NH2 ja sitten 2 5 g DTPA dianhydridiä. Muutaman sekunnin kuluttua saadaan kirkas liuos. Sitten seos haihdutetaan 40° tilavuuteen 0.5 1 ja liuoksen pH sovitetaan arvoon 5 (maks.) 1 N HC1 avulla. 15 min sekoituksen jälkeen seoksen pH sovitetaan arvoon 7 1 N NaOH avulla ja sit-10 ten lyofilisoidaan. Tämän jälkeen tuote kromatogra-foidaan silikageelillä käyttäen eluenttina kloroformin, metanolin, veden ja AcOH:n seosta. Monosubstitu-oitu tuote otetaan talteen ja puhdistetaan edelleen ioninvaihtohartsilla (AG 4-X4, OH-muoto; Biorad). Saa-15 tu tuote liuotetaan 10 ml TFA liuokseen, seosta sekoitetaan 30 min ajan. DTPA-hydratsidi saostetaan lisäämällä di-isopropyylieetteriä, suodatetaan ja kuivataan alipaineessa.
20 b. Asetyyli-DPhe(pCl)-DPhe(pCl)-DTrp-Ser-Tyr-DLys-Leu-Arg-Pro-DAla-NH2 Tämä peptidi syntetisoidaan miedolla happo-lohkaisuhartsilla [esim. 4-(2' , 4'-dimetoksifenyyli-aminometyyli)-fenoksimetyylipolystyreeni , 1 % ristisi- 25 dottu; saatavissa esim. Novabiochemiltä] käyttäen N-O-Fmoc suojattuja aminohappoja, jotka lisätään seuraa-vassa järjestyksessä:
Fmoc-DAla-OH —> Fmoc-Pro-OH —> Fmoc-Arg(Pmc)-OH —> Fmoc-Leu-OH —> Fmoc-DLys(Boc)-OH —> Fmoc-Tyr(tBu)-OH 30 -> Fmoc-Ser(tBu)-OH -> Fmoc-DTrp-OH -> Fmoc-DPhe(pCl)- OH —> Fmoc-DPhe(pCl)-OH.
Jokaisessa syklissä aminohapot aktivoidaan di-isopropyylikarbodi-imidi/HOBt:11a DMF liuoksessa ja täydellisen kytkeytymisen jälkeen Fmoc-ryhmät lohkais-35 taan 20 % piperidiinillä DMF liuoksessa. N-asetylaatio viimeisessä vaiheessa suoritetaan etikkahapon anhydri-dillä.
31 101938
Suojattua peptidihartsia käsitellään TFA/vedellä (95:5) sivuketjun suojaryhmien poistamisen ja peptidin vapauttamisen suorittamiseksi samanaikaisesti. Puhdistus aikaansaadaan RP-HPLC avulla ja sen 5 jälkeisellä ionivaihtohartsilla, AG-4X4 asetaatilla. Siten saadaan otsikon mukainen yhdiste.
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen X11ln tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
10 ESIMERKKI 9: DTPÄ-DNal-(2)1-DPhe(p-Cl)-DTrp-Ser-
Tyr-DLys-Leu-Lys-Pro-DAla-NH2
I I
ch2 ch2
I I
_ c CHOH CHOH
15 I I
CHjOH UH]OH
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 8 menetelmän mukaisesti (atsidin valmistus ja kytkemi-20 nen), mutta käyttäen lähtömateriaalina H-DNal(2)1-DPhe (p-Cl) -DTrp-Ser-Tyr-DLys (CH2-CHOH-CH2OH) -Leu-Lys (CH2-CHOH- CH2OH)-Pro-DAla-NH2. F= 0.83.
Lähtöpeptidi voidaan valmistaa kiinteäfaasi-25 synteesimenetelmällä, esim. esimerkin 8b mukaisesti, mutta käyttäen Fmoc-DLys (CH2-CHOH-CH2OH) sykleissä 3 ja 5 sekä Fmoc-DNal-OH viimeisessä syklissä. Täydellisen kytkeytymisen jälkeen suojattua peptidihartsia käsitellään TFA/vedellä (95:5) sivuketjun suojaryhmien 30 poistamisen ja peptidin vapauttamisen suorittamiseksi. Peptidi puhdistetaan RP-HPLC ja sen jälkeen ioninvaih-tohartsilla, AG-4X4 asetaatilla. [a] 20D = -16° (c= 0.5, 95 % AcOH).
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten 3 5 käyttäen 111In tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
101938 32 ESIMERKKI 10: Asetwli-His-Trp-Ala-Val-DAla-Lvs(β-Ala-DTPA)-Leu-OEt
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 3 5 menetelmän mukaisesti (atsidin valmistus ja kytkeminen) , mutta käyttäen Asetyyli-His-Trp-Ala-Val-DAla-Lys-Leu-OEt lähtöaineena.
Lähtöpeptidi voidaan valmistaa EP patenttijulkaisun 315 367-A mukaisesti.
10 Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen mIn tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
Keksinnön mukaisten kelaattien affiniteetti kasvaimissa oleviin reseptoreihin määritetään seuraa-15 vasti:
ESIMERKKI 11: SITOUTUMISOMINAISUUDET
EGF reseptoripositiivinen ihmisen kasvain 20 poistetaan ja varastoidaan välittömästi -70°C. Seuraa-van eristysvaiheen aikana materiaalia pidetään 0-4°C. Kasvainkudos leikellään pieniksi kuutioiksi ennen ho-mogenointia 5 osaan puskuria A (2 0 mM HEPES, 0.1 mM EDTA ja 250 mM sukroosi, pH 7.4) . Membraanit eriste-25 tään differentiaalisentrifugoinnilla. Sitten materiaali laimennetaan inkubointipuskurilla, joka sisältää 30 mM HEPES, pH 7.4, 1 mg/ml BSA ja 1 mM bent samidi inia.
Koeseos (200 μΐ lopullinen tilavuus) sisältää 100 000 cpm [1251] -EGF, kudosta (5-25 μg proteiinia/määritys) 30 ja esimerkin 3 mukaista yhdistettä konsentraatiossa 10‘9 M. Jääkylmien koeliuosten vortexsekoituksen jälkeen putket (polypropyleeni) siirretään vesihauteeseen ja inkuboidaan 30 min ajan 37°C. Reaktio pysäytetään lisäämällä jääkylmää Hank'in tai Tris puskuria (4 ml) .
35 Tris puskuri sisältää 10 mM Tris 0.9 % natriumkloridi-liuoksessa ja sen pH on sovitettu arvoon 7.4. Suoda-tuspuskurit sisältävät rutiininomaisesti 1 % BSA
33 101938 (fraktio V) ei-spesifisen sitoutumisen estämiseksi lasikuitusuodattimiin (tyyppi A/E), joita on pidetty muutamia minuutteja suodatuspuskurissa ennen käyttöä. Putkia huuhdellaan 4 ml suodatuspuskurilla ja huuhte-5 luliuos saatetaan vastaavien suodattimien päälle. Suodattimien kolmatta pesua seuraa kuivaus ja suodatti-mi in sitoutuneen radioaktiivisuuden mittaus ]?-laskimella. Suodattimien pesu kestää n. 10 s. Havaitaan, että esimerkin 3 mukainen yhdiste inhiboi spesi-10 fisesti sidottua [125I]-EGF:a (ICS0= 1.3 nM) .
Samanlainen sitoutumismääritysmenetelmä toistetaan, mutta käyttäen koeaineena 1 μ9 esimerkin 3 yhdistettä leimattuna 0.2 mCi li;LInCl3:11a. Kokeet suoritetaan silikonisoiduissa boorisilikaattilasiputkissa 15 ja käytetään kontrolleja, jotka sisältävät lisäksi 10‘7 M EGF ei-spesifisen sitoutumisen määrittämiseksi. Näissä määrityksissä havaitaan, että esimerkin 4 yhdiste sitoutuu EGF reseptoreihin suurella affiniteetilla (IC50= 3 nM) .
20 Kun tehdään samanlainen sitoutumismääritysme netelmä, mutta käyttäen LHRH reseptoripositiivista etupuoleista aivolisäkekalvoa, joka on saatu Sprague-Dawley rotista, 1μ9 esimerkin 8 mukaista yhdistettä leimattuna 0.4 mCi i:L1InCl3:lla (leimaus suoritettu 25 huoneenlämpötilassa 15 min aikana) ja 10‘6 M (DAlas)LHRH ei-spesifisen sitoutumisen määrittämiseksi, havaitaan luIn leimatun esimerkin 8 mukaisen yhdisteen sitoutuvan LHRH reseptoreihin suurella affiniteetilla (ICS0= 1.1 nM) .
30
. . ESIMERKKI 12: BIOJAKAUTUMINEN
Radioaktiivisuuden biojakautuminen voidaan määrittää joko standardikuvausmenetelmillä paljaita 35 hiiriä, jotka painavat 20+5 g ja joissa on EGF resep-toripositiivinen kasvain (MDA 231, MDA 468 tai A 431 kasvain), käyttämällä tai lopettamalla jaksottaisesti 101938 34 lukuisia tällaisia eläimiä ja määrittämällä elimen radioaktiivisuus. Esimerkin 4 mukaista yhdistettä annetaan i.v. eläimille annoksena, joka vastaa 90-100 μΟί, ja radioaktiivisuus määritetään 5 min, 10 min, 15 5 min, 30 min, 60 min, 20 h ja 48 h kuluttua. 5 min injektiosta radioaktiivisuus detektoidaan maksassa, munuaisissa, virtsarakossa ja kasvainkohdassa. Radioaktiivisuus kasvaa ja paikallistuu kasvainkohtaan 60 min injektiosta.
10
ESIMERKKI 13: DTPA-mEGF
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 8 menetelmän mukaisesti, mutta käyttäen mEGF lähtöainee-15 na.
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen 1:L1In tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
20 ESIMERKKI 14: 1-(p-isotiosvanaattobentswli)-DTPA-mEGF
3 mg mEGF ja 5 ml asetonitriili/veden (1/1 v/v) liuokseen, joka sovitetaan pH 9.8 Na2C03 avulla, lisätään 1.5 mg N-{2-[bis(karboksimetyyli)amino]-25 etyyli}-N'-{2-bis-[bis(karboksimetyyli)amino]-2-(p- isotiosyanaattobentsyyli)-etyyli}-glysiini [tai l-(p-isotiosyanaattobentsyyli)-DTPA]. 9 h reagoinnin huo neenlämpötilassa jälkeen liuos laimennetaan vedellä 20 ml ja saatetaan RP-HPLC pylvääseen. Otsikon mukainen 30 yhdiste eristetään gradienttieluutiolla (puskuri A: ._ 0.1 % trifluorietikkahappo, puskuri B: 0.1 % trifluo- rietikkahappoliuos asetonitriilissä) ja se saadaan valkoisena lyofilisaattina kylmäkuivauksen jälkeen.
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten 35 käyttäen 1:L1In tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 mukaisen menetelmän mukaisesti.
101938 35
ESIMERKKI 15: p-isotiosvanaattobentswli-DOTA-mEGF
Otsikon mukainen yhdiste saadaan esimerkin 14 menetelmän mukaisesti käyttäen p-isotiosyanaatto-5 bentsyyli-DOTA 1-(p-isotiosyanaattobentsyyli)-DTPA sijasta.
Otsikon mukainen yhdiste leimataan sitten käyttäen In tai 90Y esimerkin 4 tai vast. 5 menetelmän mukaisesti.
Claims (10)
1. Biologisesti aktiivinen peptidi, tunnettu siitä, että se on valittu ryhmästä, johon 5 kuuluu epidermaalinen kasvutekijä, LHRH, LHRH- agonistit, LHRH-antagonist it, botnbesiini, bombesiini-antagonistit ja niiden analogit ja johdannaiset, jossa peptidissä on ainakin yksi kelatoiva ryhmä liitettynä peptidin aminoryhmään, joka kelatoiva ryhmä on johdet-10 tu seuraavista: dietyleenitriamiinipentaetikkahappo (DPTA), N-hydroksietyyli-N,N',N'-etyleenidiamiini- trietikkahappo (HEDTA), etyleeniglykoli-Ο,Ο'-bis(2-aminoetyyli)-N,N,N',N'-tetraetikkahappo (EGTA), N,N’- bis(hydroksibentsyyli)etyleenidiamiini-Ν,Ν1-dietikka-15 happo (HBED) ja trietyleenitetra-amiiniheksaetikka- happo (TTHA); substituoitu EDTA ja DTPA; 1,4,7,10-tetra-atsasyklododekaani-N,N1,Ν1 1, N1 1 1 -tetraetikkahappo (DOTA) ja 1,4,8,11-tetra-atsasyklotetradekaani-N,N',N'1 ,N''1-tetraetikkahappo (TETA); yhdisteet, 20 joilla on kaava Ia, Ib tai Ie, Γ 7" ^ M A (Ia) / w\ '—S 10 30 /*10 ^ N fr
35 V (Ib> S11 *10 101938 R'0^7 V^IO . c>" ho 10 jossa R10 on -CH2COOH tai sen funktionaalinen johdannainen; Rn on -Alk-Xx tai _(CH2)n-^^<CH,).-Xi jossa n ja m ovat toisistaan riippumatta 0, 1, 2 tai 15 3, Aik on ^.^alkyleeni, X1 on -NCS tai NH2, joka on valinnaisesti substituoitu suojaryhmälla, ja A-rengas on substituoitu tai substituoimaton; jolloin kelatoiva ryhmä on liitetty peptidin aminoryh-mään siten, että muodostuu amidi- tai tioamidisidos, 20 jolla muodostuneella peptidillä on sitoutumisaffini-teetti kohdereseptoreihin, ja joka peptidi on vapaassa muodossa, suolamuodossa tai kompleksoituna detektoita-vaan aineeseen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen peptidi, 25 tunnettu siitä, että kelatoiva ryhmä on liitetty aminoryhmään epäsuorasti divalentin siltaryhmän avulla.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen peptidi, tunnettu siitä, että kelatoiva ryhmä on 30 liitetty aminoryhmään amidisidoksella.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen peptidi, tunnettu siitä, että divalentti siltaryhmä on kaavan (αχ) mukainen radikaali 1 Z-R-CO- (αχ) 101938 jossa R on alkyleeni, hydroksisubstituoitu alkyleeni, C2.i1alkenyleeni/ -CH, sykloheksyleeni, Rs 5 substituoitu sykloheksyleeni tai kaavan (a2) mukainen radikaali, 10 (a2) jossa n ja m ovat kuten edellä on määritelty ja rengas A on substituoitu tai substituoimaton; Rs on luonnon tai synteettisen α-aminohapon C(a)-15 hiileen liittyneen tähteen mukainen tähde; Z on divalenttiryhmä, joka on johdettu funktionaalisesta osuudesta, joka kykynee reagoimaan kovalentti-sesti kelatoivan aineen kanssa.
5 Pro, Phe, Gin, Lys, Pal, Ser, Thr, Glu, Asp, Trp tai Nai; ja Q on K3-R37, jossa K3 on Leu, MeLeu, lie, Melle, Aib, Pro, Val, MeVal, Phe, Ape, MeApe, Met, Ser, Gin, Glu tai Trp ja R37 on C1.3alkyyliamino, (dialkyyli) amino 10 tai C^alkoksi tai Q on C^alkoksi, Cx.^alkyyliamino tai Cx.io (dialkyyli) amino tai yhdiste, jolla on kaava IXb, A7 - B4 - Gin - Trp - Ala - Val - V - Xe - Ye - Tx (IXb) 123 4 5 6 789 10 15 jossa A7 on vety, Boc, Lys, Arg; B4 on suora sidos tai Asn, Thr, Glp; W on Gly tai Ala; X6 on suora sidos, His(R38), Phe, Ser tai Ala;
20 Ys on suora sidos, Leu tai Phe; T3 on amino, NH(CH2)4CH3, bentsyyliamino, Met-R39, Leu-Rag, Ile-R39, Ile-R39 tai Nle-R39; R30 on vety tai bentsyyli; ja R39 on amino, hydroksi, metoksi tai -NHNH2; 25 ja joka peptidi on vapaassa tai suolan muodossa.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen 20 peptidi, tunnettu siitä, että peptidiosa on kaavan VII mukainen LHRH-antagonisti R33 - A3 - B3 - C3 - D3 - E3 - F3 - G3 - Hx - I3 - K3 -nh2 (VII) 25 jossa R33 on vety, C^asyyli tai karbamoyyli; A3 on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, CF3:lla, C^-j-alkyylillä ja/tai Ci^alkoksilla, a- tai β-naftyyli-D-alaniini, D-30 Trp, joka on substituoitu valinnaisesti 5- tai 6-asemassa halogeenilla tai C^-alkoksilla ja/tai 1-asemassa formyylillä tai asetyylillä, D- tai L-Pro, D-tai L-3,4-dehydroprollini, D- tai L-Ser, D- tai L-Thr, D- tai L-Ala, D-pyroglutamiini, 3-(9-antryyli)-D,L- 35 alanyyli, 3-(2-fluorenyyli)-D,L-alanyyli tai 3-(Het)-D,L-alanyyli, jossa Het on heterosyklinen aryyliradi-kaali, joka on 101938 Vr> ΐ» A t.i λΓ^
10 J 15 jossa A2 ja A3 on riippumattomasti valittu ryhmästä, johon kuuluu vety, C^alkyyli, kloori ja bromi; A4 on O, S tai N; B-l on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, N02:lla, C^-alkyylillä tai 20 C1.3-alkoksilla, D-a-metyyliPhe, jonka 4-asema on valinnaisesti substituoitu kloorilla, 2,2- difenyyliglysiini tai 3-(2-naftyyli)-D-alaniini; C3 on D-Trp, jonka 5- tai 6-asema on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, N02:lla tai C^alkoksilla 25 ja/tai 1-asema formyylillä tai asetyylillä, 3-(2- tai 1-(naftyyli))-D-alaniini, 3-D-pyridyylialaniini, D- Tyr, D-Phe, joka on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, C^alkyylillä ja/tai C^alkoksilla, D-3-Pz-Ala, D-Tin-Glu tai D-Nic-Lys;
30 Di on L-Ser; Ex on Tyr, Phe, jonka fenyylirengas on valinnaisesti substituoitu halogeenillä, C1.3alkyylillä ja/tai C^alkoksilla, Orn, Lys, Lys-Nic, MPic-Lys, Lys-Pic, Mpic-Lys, DMG-Lys, Pmc-Lys, Pzc-Lys, His, Dpo, Arg, 3-35 (3-pyridyyli)-Ala, Trp, N-(3-pyridyyli)-asetyyli-Lys tai Glu(pMeo-fenyyli) Cit, HOBLys tai PzACAla, 101938 F3 on D-Phe, jonka fenyylirengas on substituoitu valinnaisesti halogeenilla, N02:lla, C^alkyylillä tai C1.3alkoksilla, D-Trp, jonka 5- tai 6-asetna on valinnaisesti substituoitu halogeenilla, N02:lla ja/tai 5 Cx^alkoksilla ja/tai 1-asema formyylillä tai asetyy-lillä, 3-(2-naftyyli)-L-alanyyli, D-Tyr, D-Orn, D-Lys, D-Lys-Nic, D-MNic-Lys, D-MPic-Lys, D-Pmc-Lys, D-Pzc-Lys, D-Bz-lys, D-ILys, AnGlu, D-NACAla, D-PzACAla, D-PmACAla, D-3-(3-pyridyyli)-Ala, D-His (subst. H tai 10 bentsyyli) D-Arg, D-homo-Arg (Et2) , D-Cit, D-HCi, D-Lys-Pic, D-Cit (Cj^alkyyli) , D-HCi (C^alkyyli) , D-Glu(AA) tai a-amino-to-ureido-C2_4-alkaanihappo, Gx on Leu, Nle, Nval, N-a-metyyliLeu, Trp, Phe, Met, Tyr, Vai, Ile, allolle, Abu tai Ala; 15 Η3 on Arg, IOrn, ILys tai Cyp-Lys; Ι3 on Pro, hydroksiproliini, 3,4-dehydroproliini, Pip; ja Kx on D-Ala, D-Leu, Gly, D-Ser tai Sar; joka peptidi on vapaassa tai suolan muodossa.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen 20 peptidi, tunnettu siitä, että peptidiosa on kaavan IXa mukainen bombesiiniantagonisti &3S - Ai - Bj - Cj - Dj - E3 - Fj - Gj - Hj - I3 - Q (IXa) 123456789 10 25 jossa R36 on vety, C^alkyyli, C2.salkanoyyli, ^.jsykloalkoksikarbonyyli tai Cj^alkoksikarbonyyli ; A6 on suora sidos tai Gly, Arg, Lys, Phe, Asp, Nai, Pro, β-Ala tai Glp;
30 B3 on suora sidos tai Gly, Pro tai Asn; C3 on suora sidos tai Lys tai D-Nal; : D3 on suora sidos tai His, MeHis, EtHis, PrHis, Gin, Glu (OMe)-Glp, Leu, MeLeu, Lys, Pal, Phe, Pro, Arg, Trp tai Thr;
35 E3 on Trp, Vai, Nai, Leu, Lys, Pal; F3 on Ala, MeAla, Aib, Gly, Pro, Leu, Phe, Ser, Vai, Nai, Thr, Arg tai Glu; 101938 G3 on Vai, Aib, Leu, Ile, Thr, Phe tai Ser; H3 on Gly, Sar, Ala, Ser, Aib, Pro, Lys, Asp, Arg, Vai, Ac3c, Ac5c tai Ac6c; I3 on His, MeHis, Aib, Val, Leu, MeLeu, Ala, lie, Met,
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen yhdiste kompleksoidussa muodossa, jolloin detektoitava aine on fluoresoiva aine, paramagneettinen ioni, positroni tai γ-emittoiva radionuklidi.
8. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen peptidin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ; a) peptidistä, joka sisältää kelatoivan ryhmän, pois tetaan ainakin yksi siinä oleva suojaryhmä, tai b) kaksi peptidifragmenttia, joista kumpikin sisältää 35 ainakin yhden aminohapon suojatussa tai suojaamattomassa muodossa ja joista toinen sisältää kelatoivan ryhmän, liitetään yhteen amidisidoksella, joka on sei- 101938 lainen, jolla saadaan haluttu aminohapposekvenssi, jonka jälkeen toteutetaan valinnaisesti menetelmän vaihe a), tai c) kelatoiva aine ja haluttu peptidi suojatussa tai 5 suojaamattomassa muodossa liitetään yhteen siten, että kelatoiva ryhmä sitoutuu peptidin haluttuun aminoryh-mään, jonka jälkeen toteutetaan valinnaisesti vaihe a), tai d) suojaamattomasta tai suojatusta peptidistä, joka 10 sisältää kelatoivan ryhmän, poistetaan funktionaalinen ryhmä tai se konvertoidaan toiseksi funktionaaliseksi ryhmäksi siten, että saadaan toinen suojaamaton tai suojattu peptidi, joka sisältää kelatoivan ryhmän, ja jälkimmäisessä tapauksessa toteutetaan menetelmän vai-15 he a) , ja otetaan näin saatu peptidi talteen vapaassa tai suolan muodossa.
9. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukaisen peptidin käyttö kompleksoidussa muodossa detektoitavan 20 aineen kanssa diagnostisena aineena.
10. Kitti käytettäväksi kuvausaineena, tunnettu siitä, että se sisältää yksikköannok-sia detektoitavaa ainetta ja peptidiä, joka on vapaassa tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan muodossa 25 ja kompleksoimattomassa muodossa jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukaisesti. 101938
Applications Claiming Priority (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898916597A GB8916597D0 (en) | 1989-07-20 | 1989-07-20 | Improvements in or relating to organic compounds |
| GB8916597 | 1989-07-20 | ||
| GB9004258 | 1990-02-26 | ||
| GB909004258A GB9004258D0 (en) | 1990-02-26 | 1990-02-26 | Improvements in or relating to organic compounds |
| GB909005295A GB9005295D0 (en) | 1990-03-09 | 1990-03-09 | Improvements in or relating to organic compounds |
| GB9005295 | 1990-03-09 | ||
| PCT/EP1990/001169 WO1991001144A1 (en) | 1989-07-20 | 1990-07-12 | Labeled polypeptide derivatives |
| EP9001169 | 1990-07-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI911319A0 FI911319A0 (fi) | 1991-03-18 |
| FI101938B true FI101938B (fi) | 1998-09-30 |
| FI101938B1 FI101938B1 (fi) | 1998-09-30 |
Family
ID=27264588
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI911319A FI101938B1 (fi) | 1989-07-20 | 1991-03-18 | Polypeptidijohdannaisia |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0436005B1 (fi) |
| JP (1) | JPH04500823A (fi) |
| AT (1) | ATE120374T1 (fi) |
| AU (1) | AU638043B2 (fi) |
| CA (1) | CA2032499C (fi) |
| DE (1) | DE69018226T2 (fi) |
| DK (1) | DK0436005T3 (fi) |
| ES (1) | ES2070329T3 (fi) |
| FI (1) | FI101938B1 (fi) |
| HU (1) | HU219336B (fi) |
| IE (1) | IE67637B1 (fi) |
| IL (1) | IL95118A (fi) |
| WO (1) | WO1991001144A1 (fi) |
Families Citing this family (79)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5700444A (en) * | 1992-02-20 | 1997-12-23 | Rhomed Incorporated | Chemotactic peptide pharmaceutical applications |
| US5460785A (en) * | 1989-08-09 | 1995-10-24 | Rhomed Incorporated | Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions |
| US5443816A (en) * | 1990-08-08 | 1995-08-22 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical preparation and method |
| US5948384A (en) * | 1990-09-14 | 1999-09-07 | Syngenix Limited | Particulate agents |
| GB9020075D0 (en) | 1990-09-14 | 1990-10-24 | Filler Aaron G | Contrast agents for magnetic resonance imaging of axonal transport |
| US7238340B1 (en) | 1991-11-27 | 2007-07-03 | Cis Bio International | Monoamine, diamide, thiol-containing metal chelating agents |
| US5965107A (en) * | 1992-03-13 | 1999-10-12 | Diatide, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| US5997844A (en) * | 1991-02-08 | 1999-12-07 | Diatide, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| US5849261A (en) * | 1991-02-08 | 1998-12-15 | Diatide, Inc. | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy |
| US5443815A (en) * | 1991-11-27 | 1995-08-22 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| GB9115375D0 (en) * | 1991-07-17 | 1991-09-04 | Salutar Inc | Compounds |
| US5225180A (en) * | 1991-09-10 | 1993-07-06 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled somatostatin-derived peptides for imaging |
| US6919067B2 (en) | 1991-09-13 | 2005-07-19 | Syngenix Limited | Compositions comprising a tissue glue and therapeutic agents |
| WO1993009816A1 (en) * | 1991-11-14 | 1993-05-27 | Battelle Memorial Institute | Method for diagnosing and treating cancer |
| US5783170A (en) * | 1991-11-27 | 1998-07-21 | Diatide, Inc. | Peptide-metal chelate conjugates |
| US5738838A (en) * | 1992-02-20 | 1998-04-14 | Rhomed Incorporated | IKVAV peptide radiopharmaceutical applications |
| US5556609A (en) * | 1992-02-20 | 1996-09-17 | Rhomed Incorporated | YIGSR peptide radiopharmaceutical applications |
| ES2155447T3 (es) * | 1992-01-03 | 2001-05-16 | Rhomed Inc | Aplicaciones farmaceuticas de peptidos-iones metalicos. |
| US5371184A (en) * | 1992-02-05 | 1994-12-06 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Radiolabelled peptide compounds |
| US5643549A (en) * | 1992-02-20 | 1997-07-01 | Rhomed Incorporated | Leukostimulatory agent for in vivo leukocyte tagging |
| AU3967593A (en) * | 1992-03-25 | 1993-10-21 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Method of intraoperatively detecting and locating tumoral tissues |
| US5508020A (en) | 1992-06-05 | 1996-04-16 | Diatech, Inc. | Technetium-99M labeled peptides for imaging |
| CA2094785A1 (en) * | 1992-05-08 | 1993-11-09 | Jean Gariepy | Metal chelating peptide |
| US5716596A (en) * | 1992-06-23 | 1998-02-10 | Diatide, Inc. | Radioactively labeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
| US5871711A (en) * | 1992-06-23 | 1999-02-16 | Diatide, Inc. | Radioactively-labeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
| US5620675A (en) | 1992-06-23 | 1997-04-15 | Diatech, Inc. | Radioactive peptides |
| US6017512A (en) * | 1992-06-23 | 2000-01-25 | Diatide, Inc. | Radiolabeled peptides |
| US5346686A (en) * | 1992-10-05 | 1994-09-13 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Labelled interleukin-8 and medical uses thereof |
| US5449761A (en) * | 1993-09-28 | 1995-09-12 | Cytogen Corporation | Metal-binding targeted polypeptide constructs |
| JPH07149668A (ja) * | 1993-11-30 | 1995-06-13 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | アミロイド沈着検出用物質 |
| US6051206A (en) * | 1994-06-03 | 2000-04-18 | Diatide, Inc | Radiolabeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses |
| AU689626B2 (en) | 1994-07-25 | 1998-04-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Peptides marked with metal chelates |
| DE19505960A1 (de) | 1995-02-21 | 1996-08-22 | Deutsches Krebsforsch | Konjugat zur individuellen Dosierung von Arzneimitteln |
| US5597894A (en) * | 1995-06-05 | 1997-01-28 | The Louisiana State University Medical Center Foundation | Multi-tyrosinated somatostatin analogs |
| US5753206A (en) * | 1995-06-07 | 1998-05-19 | Immunomedics, Inc. | Radiometal-binding analogues of luteinizing hormone releasing hormone |
| AU725827B2 (en) * | 1996-07-12 | 2000-10-19 | Immunomedics Inc. | Radiometal-binding peptide analogues |
| GB9708265D0 (en) * | 1997-04-24 | 1997-06-18 | Nycomed Imaging As | Contrast agents |
| AU5113198A (en) * | 1996-12-02 | 1998-06-29 | Raymond M. Reilly | A radiolabelled ligand for selectively introducing an auger electron emitting radionuclide into the nucleus of a cancer cell |
| CA2346154A1 (en) | 2001-05-02 | 2002-11-02 | University Of Missouri | Gastrin receptor-avid peptide conjugates |
| JP2002506424A (ja) | 1997-04-22 | 2002-02-26 | キュレイター オブ ザ ユニバーシィティ オブ ミズーリ | ガストリン受容体−親和性ペプチド結合体 |
| US6180082B1 (en) | 1997-11-24 | 2001-01-30 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Method to enhance tissue accumulation of radiolabeled compounds |
| EP0961591B1 (en) * | 1997-11-24 | 2008-05-14 | Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College | Method to enhance tissue accumulation of radiolabeled compounds |
| US6524553B2 (en) | 1998-03-31 | 2003-02-25 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Quinolone vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| US6548663B1 (en) | 1998-03-31 | 2003-04-15 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Benzodiazepine vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| EA200001007A1 (ru) | 1998-03-31 | 2001-04-23 | Дюпон Фармасьютикалз Компани | Фармацевтические препараты для визуализации ангиогенных расстройств |
| US6537520B1 (en) | 1998-03-31 | 2003-03-25 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Pharmaceuticals for the imaging of angiogenic disorders |
| DE69927568T2 (de) * | 1998-06-05 | 2006-06-14 | Mallinckrodt Inc | Radioaktive markierte peptide für die diagnose und therapie von brust- und prostatatumoren und von metastasen dieser tumore |
| US6866837B2 (en) | 1998-06-05 | 2005-03-15 | Mallinckrodt Inc. | Radiolabeled peptides for the diagnosis and treatment of breast and prostate tumors and metastases of such tumors |
| US6465613B1 (en) | 1998-11-19 | 2002-10-15 | Tulane University | Hydrophilic somatostatin analogs |
| US6511649B1 (en) | 1998-12-18 | 2003-01-28 | Thomas D. Harris | Vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| CN1356913A (zh) | 1998-12-18 | 2002-07-03 | 杜邦药品公司 | 玻连蛋白受体拮抗剂药物 |
| US6569402B1 (en) | 1998-12-18 | 2003-05-27 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| US6794518B1 (en) | 1998-12-18 | 2004-09-21 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| AU2371400A (en) | 1998-12-18 | 2000-07-03 | Du Pont Pharmaceuticals Company | Vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals |
| DE19905094C1 (de) * | 1999-02-01 | 2000-10-12 | Schering Ag | Gadolinium (III)-Komplexe sowie ihre Verwendung für Zweischritt Strahlentherapieformen und diese enthaltende pharmazeutische Mittel |
| US6608174B1 (en) | 2000-02-18 | 2003-08-19 | Dabur Research Foundation | Radiolabeled vasoactive intestinal peptide analogs for diagnosis and radiotherapy |
| GR1003661B (el) * | 2000-05-25 | 2001-09-05 | Εθνικο Κεντρο Ερευνας Φυσικων Επιστημων (Εκεφε) "Δημοκριτος"... | ΣΥΝΘΕΣΗ, ΒΙΟΛΟΓΙΚΗ ΚΑΙ ΠΡΟΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΝΑΛΟΓΩΝ ΤΗΣ (D-Phe6, Leu-NHEt13, des-Met14)-ΒΟΜΒΕΣΙΝΗΣ (6-14)ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΜΕ ΠΑ ΡΑΓΩΓΑ ΤΟΥ 1,4,8,11-ΤΕΤΡΑΑΖΑΕΝΔΕΚΑΝΙΟΥ(1,4,8,11-TETRAAZAUNDECAN E)ΚΑΙ ΕΠΙΣΗΜΑΣΜΕΝΩΝ ΜΕ ΤΕΧΝΗΤΙΟ-99M- ΓΙΑ ΕΦΑΡΜΟΓΗ ΣΤΗΝ ΟΓΚΟΛΟΓ |
| WO2002054088A2 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Duke University | Contrast enhancement agent for magnetic resonance imaging |
| US7893223B2 (en) | 2001-07-17 | 2011-02-22 | Bracco Imaging S.P.A. | Multidentate AZA ligands able to complex metal ions and the use thereof in diagnostics and therapy |
| PL369336A1 (en) | 2001-09-21 | 2005-04-18 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Diagnostic or therapeutic somatostatin or bombesin analog conjugates and uses thereof |
| US7906102B2 (en) | 2001-10-03 | 2011-03-15 | Vanderbilt University | Ligands to radiation-induced molecules |
| WO2003074551A2 (en) | 2002-03-01 | 2003-09-12 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Conjugates of therapeutic or cytotoxic agents and biologically active peptides |
| US7611692B2 (en) | 2003-01-13 | 2009-11-03 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7922998B2 (en) | 2003-01-13 | 2011-04-12 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7226577B2 (en) | 2003-01-13 | 2007-06-05 | Bracco Imaging, S. P. A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| ATE435035T1 (de) | 2003-01-13 | 2009-07-15 | Bracco Imaging Spa | Verbesserte linker für radiopharmazeutische verbindungen |
| US8420050B2 (en) | 2003-01-13 | 2013-04-16 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US7850947B2 (en) | 2003-01-13 | 2010-12-14 | Bracco Imaging S.P.A. | Gastrin releasing peptide compounds |
| US20060188441A1 (en) * | 2005-02-22 | 2006-08-24 | Vladimir Tolmachev | Radiolabeled gallium complexes, methods for synthesis and use for PET imaging of EGFR expression in malignant tumors |
| DE102004043153B4 (de) * | 2004-09-03 | 2013-11-21 | Philipps-Universität Marburg | Erfindung betreffend GLP-1 und Exendin |
| AU2012202855B2 (en) * | 2004-09-03 | 2015-02-26 | Philipps-Universitat Marburg | GLP-1 and exendin related invention |
| GB0524987D0 (en) | 2005-12-08 | 2006-01-18 | Ge Healthcare Ltd | Novel imaging agents for fibrosis |
| EP2100900A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-16 | Universitätsspital Basel | Bombesin analog peptide antagonist conjugates |
| CA2721093A1 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Human serum albumin linkers and conjugates thereof |
| GB0922014D0 (en) | 2009-12-17 | 2010-02-03 | Ge Healthcare Ltd | Novel integrin binders |
| GB201017088D0 (en) | 2010-08-20 | 2010-11-24 | Ge Healthcare Ltd | Imaging tuberculosis |
| WO2013048832A1 (en) | 2011-09-29 | 2013-04-04 | Ge Healthcare Limited | 18 f - labelled 6 - ( 2 - fluoroethoxy) - 2 - naphthaldehyde for detecting cancer stem cells |
| WO2014122228A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | Westfaelische Wilhelms-Universitaet Muenster | Labelled compounds that bind to alpha-v-beta-3 integrin |
| EP3172222A4 (en) | 2014-07-24 | 2018-03-21 | Washington University | Compositions targeting radiation-induced molecules and methods of use thereof |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE454115B (sv) * | 1982-09-13 | 1988-03-28 | Wallac Oy | Homogenfasanalys med lantanidkelat som merksubstans |
| GB8610551D0 (en) * | 1986-04-30 | 1986-06-04 | Hoffmann La Roche | Polypeptide & protein derivatives |
| IN165717B (fi) * | 1986-08-07 | 1989-12-23 | Battelle Memorial Institute | |
| WO1989002752A1 (en) * | 1987-09-25 | 1989-04-06 | Genentech, Inc. | Method of diagnosing blood clots using fibrin-binding proteins |
| EP0437487B1 (en) * | 1988-10-04 | 1994-03-09 | Cancer Research Campaign Technology Limited | Targetting agents |
-
1990
- 1990-07-12 WO PCT/EP1990/001169 patent/WO1991001144A1/en active IP Right Grant
- 1990-07-12 CA CA002032499A patent/CA2032499C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-12 EP EP90911595A patent/EP0436005B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-12 ES ES90911595T patent/ES2070329T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-12 JP JP2510843A patent/JPH04500823A/ja active Pending
- 1990-07-12 HU HU177/90A patent/HU219336B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-07-12 AU AU60709/90A patent/AU638043B2/en not_active Ceased
- 1990-07-12 AT AT90911595T patent/ATE120374T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-07-12 DK DK90911595.8T patent/DK0436005T3/da active
- 1990-07-12 DE DE69018226T patent/DE69018226T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-18 IL IL9511890A patent/IL95118A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-07-18 IE IE261990A patent/IE67637B1/en not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-03-18 FI FI911319A patent/FI101938B1/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL95118A0 (en) | 1991-06-10 |
| HU906177D0 (en) | 1991-08-28 |
| AU6070990A (en) | 1991-02-22 |
| FI911319A0 (fi) | 1991-03-18 |
| AU638043B2 (en) | 1993-06-17 |
| CA2032499C (en) | 2002-05-14 |
| DE69018226T2 (de) | 1995-09-21 |
| FI101938B1 (fi) | 1998-09-30 |
| IE67637B1 (en) | 1996-04-17 |
| HU219336B (en) | 2001-03-28 |
| ATE120374T1 (de) | 1995-04-15 |
| EP0436005B1 (en) | 1995-03-29 |
| WO1991001144A1 (en) | 1991-02-07 |
| DE69018226D1 (de) | 1995-05-04 |
| CA2032499A1 (en) | 1991-01-21 |
| IL95118A (en) | 1995-01-24 |
| ES2070329T3 (es) | 1995-06-01 |
| EP0436005A1 (en) | 1991-07-10 |
| DK0436005T3 (da) | 1995-07-03 |
| HUT56583A (en) | 1991-09-30 |
| IE902619A1 (en) | 1991-02-27 |
| JPH04500823A (ja) | 1992-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI101938B (fi) | Polypeptidijohdannaisia | |
| JP5784911B2 (ja) | ボンベシンアナログペプチドアンタゴニスト複合体 | |
| JP3647881B2 (ja) | 放射性金属元素結合ペプチドの類似化合物 | |
| US6007792A (en) | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy | |
| JP3686503B2 (ja) | ペプチド誘導体 | |
| EP3152226B1 (en) | Modified cyclopentapeptides and uses thereof | |
| ES2646192T3 (es) | Antagonistas del receptor 2 de somatostatina | |
| US5686410A (en) | Polypeptide derivatives | |
| EP1390405B1 (en) | Preparation of cholecystokinin agonists and antagonists and their therapeutic and diagnostic use | |
| JP2003517037A (ja) | 新規ソマトスタチン類似体 | |
| Ishizaki et al. | Fundamental study of radiogallium-labeled aspartic acid peptides introducing octreotate derivatives | |
| Brans et al. | Glycation methods for bombesin analogs containing the (NαHis) Ac chelator for 99mTc (CO) 3 radiolabeling | |
| EP1257575B1 (en) | Radiolabeled vasoactive intestinal peptide analogs for diagnosis and radiotherapy | |
| JP4318985B2 (ja) | ソマトスタチンアナログ誘導体およびその利用 | |
| JP2023506297A (ja) | 癌のイメージングおよび治療のための修飾されたｇｒｐｒアンタゴニストペプチド | |
| TW202241926A (zh) | 用於診斷及治療之改良的膽囊收縮素-2受體(cck2r)標靶 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB | Transfer or assigment of application |
Owner name: NOVARTIS AG |
|
| MA | Patent expired |