ES2975263T3 - Formas cristalinas de un compuesto triazolopirimidínico - Google Patents

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Abstract

En el presente documento se proporcionan formas cristalinas de un compuesto de triazolopirimidina, que es útil para tratar una enfermedad o trastorno mediado por PRC2. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Formas cristalinas de un compuesto triazolopirimidínico
Campo de la invención
Esta invención se refiere a formas cristalinas del clorhidrato de N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina, a composiciones farmacéuticas que las comprenden, al uso médico de las formas cristalinas y a procesos para la preparación de las formas cristalinas.
ANTECEDENTES
Las proteínas del grupo Polycomb (PcG, por sus siglas en inglés) son enzimas modificadoras de la cromatina que están desreguladas en muchos cánceres humanos. El complejo represor Polycomb 2 (PCR2), que incluye SUZ12 (siglas en inglés de supresor de zeste 12), EED (siglas en inglés de desarrollo embrionario del ectodermo) y la subunidad catalítica, EZH2 (siglas en inglés de potenciador del homólogo de zeste 2), reprime genes mediante la metilación de la lisina 27 de la histona H3 nuclear (H3K27me3) en y alrededor de las regiones promotoras de los genes diana. PCR2 es el componente crucial de la maquinaria celular implicada en la regulación epigenética de la transcripción génica y desempeña una función crucial en el desarrollo y la diferenciación y regeneración de tejidos. Aunque EZH2 es la subunidad catalítica, PCR2 requiere al menos EED y SUZ12 para su actividad de metiltransferasa. EED, SUZ12 y EZH2 están sobreexpresados en muchos cánceres, que incluyen, sin carácter limitante, cáncer de mama, cáncer de próstata, carcinoma hepatocelular, etc. Se han identificado mutaciones activadoras de EZH2 en pacientes con DLBCL (siglas en inglés de linfoma difuso de linfocitos B grandes) y pacientes con FL (siglas en inglés de linfoma folicular). La inhibición de la actividad metiltransferasa de PCR2 por parte de compuestos que compiten con el cofactor S-adenosilmetionina (SAM) en DLBCL revierte la metilación de H3K27, reactiva la expresión de genes diana e inhibe el crecimiento/proliferación tumoral. Por lo tanto, PRC2 proporciona una diana farmacológica para DLBCL y otros cánceres.
Al preparar una composición farmacéutica, se busca una forma del agente terapéutico que tenga un equilibrio de las propiedades deseadas, tales como, por ejemplo, la tasa de disolución, solubilidad, biodisponibilidad y/o estabilidad de almacenamiento. La existencia de múltiples formas sólidas, a las que se hace referencia a menudo como polimorfos, es muy conocida para compuestos farmacéuticos sólidos, y la estabilidad física y química, así como las propiedades de manipulación de tales compuestos, a menudo dependen de qué forma sólida se utilice. Por consiguiente, la selección de una forma sólida particular de la sustancia farmacológica activa (p. ej., una forma salina, una forma hidratada o solvada, o una forma polimórfica) es a menudo muy importante en el diseño de un proceso de producción fiable y reproducible, y en el almacenamiento, la manipulación y distribución de una forma segura y eficaz de la sustancia farmacológica.
«Impurities: Guideline for Residual Solvents» es una guía sobre las cantidades de disolventes residuales toleradas en productos farmacéuticos, que fue producida por el Consejo Internacional para la Armonización de los Requisitos Técnicos para Productos Farmacéuticos de Uso Humano (ICH, por sus siglas en inglés). Esta guía recomienda el uso de disolventes menos tóxicos en la fabricación de sustancias farmacéuticas y formas farmacéuticas, y establece límites farmacéuticos para los disolventes residuales (impurezas volátiles orgánicas) en los productos farmacológicos. Esta guía divide los disolventes en tres clases en función del riesgo: los disolventes de Clase 1, que se sabe que provocan toxicidades inaceptables; los disolventes de Clase 2, que están asociados con una toxicidad menos grave; y los disolventes de Clase 3, que tienen un potencial tóxico bajo.
De acuerdo con la guía de ICH, unas cantidades residuales de los disolventes de Clase 3 de 50 mg al día o menos (correspondientes a 5000 ppm o un 0,5 %) serían aceptables sin justificación. Los límites de concentración se calculan utilizando la siguiente ecuación suponiendo que se administra una masa de producto de 10 g al día:
Concentration (ppm) = (1000 X PDE)/dose
La PDE (siglas en inglés de exposición diaria permitida) se proporciona en términos de mg/día y la dosis se proporciona en g/día. También pueden aceptarse cantidades más altas de los disolventes de Clase 3 siempre que sean realistas en relación con la capacidad de fabricación y las buenas prácticas de fabricación.
La solicitud de patente con número de serie de EE. UU. N° 14/977 273 divulga ciertos compuestos triazolopirimidínicos para tratar enfermedades o trastornos mediados por PRC2. Esta solicitud de patente fue publicada el 23 de junio de 2016 como US 2016-0176882. Un compuesto divulgado en esa solicitud es N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidina-5-amina (forma libre) y su sal de tipo clorhidrato. La forma libre (a la que se hace referencia en el presente documento como Compuesto A) tiene la siguiente estructura:
La sal de tipo clorhidrato (a la que se hace referencia en el presente documento como Compuesto X) tiene la siguiente estructura:
La forma libre, el Compuesto A, muestra solubilidades acuosas bajas tanto a un nivel de pH fisiológicamente relevante de 7,4 como en líquido gástrico simulado (SGF, por sus siglas en inglés). Se determinó que las exposiciones del Compuesto A fueron subproporcionales en dosis más altas en estudios farmacocinéticos con roedores, lo que puede conducir a exposiciones insuficientes y variables en entornos clínicos. Se llevaron a cabo experimentos para encontrar una sal adecuada con el fin de mejorar la solubilidad acuosa. Se descubrió que solo la sal clorhídrica proporciona la mejora necesaria en solubilidad, y presenta una exposición proporcional a la dosis en roedores después de evaluar una serie de sales que también incluyeron fosfato, furmarato, tartarato, succinato, maleato y mesilato.
El procedimiento descrito en el documento US 14/977 273 para producir el Compuesto X utiliza isopropanol (IPA, un disolvente de Clase 3) como medio. Se observaron cantidades variables de IPA en diferentes lotes del Compuesto X obtenidos mediante el procedimiento descrito en el documento US 14/977273, lo que se determinó mediante 1H RMN (y se ilustra en la entrada 1 de la tabla 2 a continuación), siendo la cantidad de IPA en algunos lotes superior a un 0,5 % en peso. También ha resultado muy difícil eliminar el IPA residual del producto final. Adicionalmente, el Compuesto X obtenido de este modo mostró cristalinidades bajas y variables, a juzgar por los espectros de DRXP. Se ha intentado eliminar el IPA residual y mejorar la cristalinalidad sin mucho éxito. Por lo tanto, se necesita disponer de métodos que puedan producir de forma sistemática el Compuesto X en la forma deseada, es decir, una forma que esté sustancialmente exenta de disolvente orgánico residual y que muestre una cristalinidad mejorada y fiable.
COMPENDIO
La presente invención proporciona formas cristalinas del Compuesto X (clorhidrato de N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina).
Las realizaciones de estas formas cristalinas incluyen las caracterizadas en el presente documento como Formas A, H<a>y H<b>, así como combinaciones o mezclas de estas formas cristalinas.
Tabla 1
Los nombres utilizados en el presente documento para caracterizar una forma específica, p. ej., «H<a>», etc., no se deben considerar limitantes respecto a cualquier otra sustancia que posea unas características físicas y químicas similares o idénticas, sino que más bien se debe entender que estas denominaciones son simples identificadores que se deben interpretar de acuerdo con la información de caracterización que también se presenta en el presente documento.
La presente invención proporciona métodos de preparación de formas cristalinas del Compuesto X.
La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden forma(s) cristalina(s) del Compuesto X y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede comprender además al menos un agente terapéutico adicional. Son de particular interés los agentes terapéuticos adicionales seleccionados entre: otros agentes anticancerosos, inmunomoduladores, agentes antialérgicos, agentes contra las náuseas (o antieméticos), analgésicos, agentes citoprotectores y combinaciones de estos.
La(s) forma(s) cristalina(s) del Compuesto X de la presente invención se puede(n) utilizar en el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2.
La(s) forma(s) cristalina(s) del Compuesto X de la presente invención se puede(n) utilizar en terapia.
La(s) forma(s) cristalina(s) del Compuesto X de la presente invención se puede(n) utilizar para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2.
Otras características y ventajas de la presente divulgación serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La FIG. 1 representa un patrón de difracción de rayos X en polvo representativo de la Forma A (forma anhidra).
La FIG. 2 representa termogramas de calorimetría diferencial de barrido (CDB) / análisis termogravimétrico (ATG) de la Forma A.
La FIG. 3 representa una gráfica de sorción dinámica de vapor (SDV) de la Forma A a 25 °C.
La FIG. 4 representa un patrón de difracción de rayos X en polvo representativo de la Forma H<a>(forma monohidratada).
La FIG. 5 representa termogramas de calorimetría diferencial de barrido (CDB) / análisis termogravimétrico (ATG) de la Forma H<a>.
La FIG. 6 representa una gráfica de sorción dinámica de vapor de la Forma H<a>a 25 °C.
La FIG. 7 representa una gráfica de sorción dinámica de vapor de la Forma H<a>a 50 °C.
La FIG. 8 representa un patrón de difracción de rayos X en polvo representativo de la Forma H<b>(forma dihidratada).
La FIG. 9 representa termogramas de calorimetría diferencial de barrido (CDB) / análisis termogravimétrico (ATG) de la Forma H<b>.
La FIG. 10 representa una gráfica de sorción dinámica de vapor de la Forma H<b>a 25 °C.
La FIG. 11 representa una comparación de la Forma A obtenida mediante el procedimiento (A) descrito en el Ejemplo 3 más adelante frente a la obtenida mediante el procedimiento (B) descrito en el Ejemplo 2 más adelante (también descrito en el documento US 14/977273).
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Se ha postulado que el IPA puede quedar atrapado en la red cristalina cuando el Compuesto X se forma en un medio de isopropanol, ya que durante todo el proceso de formación de la sal el material permaneció como una «suspensión» y nunca se disolvió completamente. En la Tabla 2 se resumen los resultados obtenidos de los experimentos llevados a cabo con disolventes de Clase 3 seleccionados y combinaciones de estos. Se descubrió inesperadamente que las combinaciones de EtOH/agua y acetona/agua (entradas 11 y 12) hicieron posible una disolución completa del Compuesto X y también sostuvieron el estado de supersaturación durante un periodo óptimo, especialmente a temperatura elevada. Estas combinaciones proporcionan formas cristalinas del Compuesto X que están sustancialmente exentas de disolventes orgánicos, p. ej., que contienen no más de un 0,3 % y habitualmente no más de un 0,1 % de disolvente orgánico en peso después de un secado normal.
Tabla 2
Con el par de disolventes seleccionado, las condiciones de cristalización se optimizaron aún más, como se indica en la Tabla 3. Se observó que las condiciones mostradas en las Entradas 5 y 6 de la Tabla 3 produjeron el material con un contenido mucho menor del disolvente orgánico residual y una cristalinidad más elevada, a la vez que se obtuvo un rendimiento mejor con las condiciones de la Entrada 5. Las condiciones de la Entrada 5 también se pudieron reproducir a escala de multigramo, tal como se indica en la Entrada 7 de la Tabla 3.
Tabla 3
Forma A del Compuesto X (Forma anhidra)
En una realización, el Compuesto X se proporciona como un material cristalino que comprende la Forma A. La forma cristalina del Compuesto X comprende una forma cristalina a la que se hace referencia en el presente documento como «Forma A» del Compuesto X.
En una realización, la Forma A del Compuesto X se caracteriza por unos parámetros de la celda unitaria aproximadamente i uales a los si uientes:
Grupo espacial: P-1
Moléculas de Compuesto X/unidad asimétrica: 2
Volumen/número de moléculas en la celda unitaria = 946,0(9) A3
Densidad (calculada) = 1,449 g/cm3
en donde los parámetros de la celda unitaria de la Forma A del Compuesto X se miden a una temperatura de aproximadamente 100 (±2) K (-173 °C).
En una realización, la invención proporciona la Forma A del Compuesto X que se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende los siguientes valores de 20 (Ka de Cu A = 1,5418 A): 12,5 ± 0,1, 13,0 ± 0,1, 25,2 ± 0,1 y 30,8 ± 0,1. En otra realización, además de los valores de 20 especificados anteriormente, la Forma A exhibe uno o más (p. ej., 2, 3, 4 o 5) valores adicionales de 20 seleccionados entre los de la Lista 1. En otra realización más, la Forma A exhibe un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al que se muestra en la Figura 1.
Li 1: Li i DRXP r l F rm A l m X 2 : l i m in n n r
En otra realización, la Forma A del Compuesto X experimenta una pérdida gradual de masa mediante ATG que asciende a una pérdida de aproximadamente un 0,6 % en 200 °C.
Forma H<a>del Compuesto X (monohidrato)
En una realización, el Compuesto X se proporciona como un monohidrato en una forma cristalina a la que se hace referencia en el presente documento como «Forma H<a>» del Compuesto X. La Forma H<a>del Compuesto X tiene una estequiometría de una molécula de agua por cada molécula de Compuesto X.
En un aspecto, la invención proporciona la Forma H<a>del Compuesto X que se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende los siguientes valores de 20 (Ka de Cu A = 1,5418 A): 13,8 ± 0,1,20,8 ± 0,1, 26,2 ± 0,1, 26,7 ± 0,1 y 28,2 ± 0,1. En otra realización, además de los valores de 20 especificados anteriormente, la Forma H<a>exhibe uno o más (p. ej., 2, 3, 4 o 5) valores adicionales de 20 seleccionados entre los de la Lista 2. En otra realización más, la Forma H<a>exhibe un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al que se muestra en la Figura 4. Lista 2: Lista de picos de DRXP para la Forma H<a>del Compuesto X 20: los picos más intensos están subra ados
Se ha descubierto que el monohidrato se forma fácilmente en mezclas de agua/disolvente con una actividad de agua por encima de 0,5-0,6 y muestra una estabilidad aceptable frente a la humedad y la temperatura.
En otra realización, la Forma H<a>del Compuesto X exhibe una endoterma intensa durante la CDB a aproximadamente 256 ± 1 °C.
En otra realización, la Forma H<a>del Compuesto X experimenta una pérdida gradual de masa mediante ATG que asciende a una pérdida de aproximadamente un 4,2 % en 111 °C.
Forma H<b>del Compuesto X (dihidrato)
En una realización, el Compuesto X se proporciona como un dihidrato en una forma cristalina a la que se hace referencia en el presente documento como «Forma H<b>» del Compuesto X. La Forma H<b>del Compuesto X tiene una estequiometría de dos moléculas de agua por cada molécula de Compuesto X.
En un aspecto, la invención proporciona la Forma H<b>del Compuesto X que se caracteriza por un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende los siguientes valores de 20 (Ka de Cu A = 1,5418 A): 9,0 ± 0,1, 17,1 ± 0,1, 22,8 ± 0,1, 26,9 ± 0,1 y 35,3 ± 0,1. En otra realización, además de los valores de 20 especificados anteriormente, la Forma H<b>exhibe uno o más (p. ej., 2, 3, 4 o 5) valores adicionales de 20 seleccionados entre los de la Lista 3. En otra realización más, la Forma H<b>exhibe un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al que se muestra en la Figura 8.
Lista 3: Lista de picos de DRXP para la Forma H<b>del Compuesto X 20: los picos más intensos están subra ados
En otra realización, la Forma H<b>del Compuesto X experimenta una pérdida gradual de masa mediante ATG que asciende a una pérdida de aproximadamente un 8,5 % en 122 °C.
La presencia de impurezas de la reacción y/o impurezas del procesamiento se puede determinar mediante técnicas analíticas conocidas en la materia tales como, por ejemplo, cromatografía, espectroscopía de resonancia magnética nuclear, espectrometría de masas o espectroscopía infrarroja.
En un aspecto de la invención, los polimorfos de la invención tienen propiedades cristalinas y son preferentemente al menos un 50 % cristalinos, más preferentemente al menos un 60 % cristalinos, aún más preferentemente al menos un 70 % cristalinos y con la mayor preferencia al menos un 80 % cristalinos. La cristalinidad se puede estimar mediante técnicas convencionales de difractometría de rayos X.
En algunas realizaciones, la forma sólida del Compuesto X comprende una o más de las Formas descritas en el presente documento. Una forma sólida del Compuesto X puede incluir dos o más de estas Formas, es decir, puede ser una mezcla de dos o más Formas. En algunas realizaciones, una muestra de la forma sólida consiste principalmente en una sola Forma seleccionada entre las Formas A, H<a>y H<b>, lo que significa que un 50 % o más del material es de una Forma sólida. Las cantidades relativas de varias Formas en una mezcla se pueden determinar a partir de datos DRXP. Tal como se describe en el presente documento, algunas de las Formas pueden evolucionar o interconvertirse en condiciones adecuadas, tales como las Formas A y H<a>, que pueden estar presentes como una mezcla, y pueden interconvertirse dependiendo de la humedad relativa y la temperatura a las que se mantenga el material.
En un aspecto de la invención, los polimorfos de la invención son de un 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 % a un 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % cristalinos.
En la presente memoria descriptiva, los picos de difracción de rayos X en polvo (expresados en grados 20) se miden utilizando rayos X de cobre con una longitud de onda de 1,5406 A (alfa 1) y 1,5444 A (alfa 2).
Las formas cristalinas de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas o solvatadas. El término «solvato» se utiliza en el presente documento para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una cantidad de uno o más disolventes farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptables incluyen etanol y agua. El término «hidrato» se emplea cuando el disolvente es agua. Dos polimorfos del Compuesto X como se describen en el presente documento son hidratos.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,4 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,2 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma H<a>del Compuesto X.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma H<b>del Compuesto X.
En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X combinada con la Forma H<a>del Compuesto X. En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X combinada con la Forma H<a>del Compuesto X. En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X combinada con la Forma H<b>del Compuesto X. En otra realización, la forma cristalina es la Forma A del Compuesto X combinada con la Forma H<a>del Compuesto X y la Forma H<b>del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona una composición que comprende una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente.
En otra realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otra realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
La composición farmacéutica es útil en el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2. En otra realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica tal como se ha definido anteriormente que comprende además agente(s) terapéutico(s) adicional(es).
En otra realización, la presente invención proporciona una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, para su uso en terapia, sola u opcionalmente combinada con otro compuesto de la presente invención y/o al menos otro tipo de agente terapéutico.
En otra realización, la presente invención proporciona una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, para su uso en terapia, para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2, sola, y/o al menos otro tipo de agente terapéutico.
En otra realización, la presente invención se refiere a las formas sólidas descritas anteriormente para su uso en un método para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2, que comprende administrar a un paciente que necesite tal tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, sola, y/o al menos otro tipo de agente terapéutico.
En otra realización, la presente invención se refiere a las formas sólidas descritas anteriormente para su uso en un método para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un primer y un segundo agente terapéutico, en donde el primer agente terapéutico es una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, y el segundo agente terapéutico es otro tipo de agente terapéutico.
En otra realización, la presente invención también proporciona el uso de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2, sola, u opcionalmente combinada con al menos otro tipo de agente terapéutico.
En otra realización, la presente invención proporciona un preparado combinado de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y agente(s) terapéutico(s) adicional(es) para su uso en terapia. En otra realización, la presente invención proporciona una combinación de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y agente(s) terapéutico(s) adicional(es) para su uso simultáneo o por separado en terapia.
En otra realización, la presente invención proporciona un preparado combinado de una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y agente(s) terapéutico(s) adicional(es) para su uso simultáneo, secuencial o por separado en el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2. Dicha forma sólida se puede administrar como una composición farmacéutica descrita en el presente documento.
Los ejemplos de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2 incluyen, sin carácter limitante, linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), linfoma folicular, otros linfomas, leucemia, mieloma múltiple, mesotelioma, cáncer gástrico, tumor rhabdoide maligno, carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, carcinoma de mama, cánceres de las vías biliares y vesícula biliar, carcinoma de vejiga, tumores cerebrales que incluyen neuroblastoma, glioma, glioblastoma y astrocitoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de colon, melanoma, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, carcinoma nasofaríngeo, cáncer ovárico, cáncer pancreático, carcinoma de células renales, cáncer rectal, cánceres de tiroides, tumores de paratiroides, tumores uterinos y sarcomas de tejidos blandos seleccionados entre rhabdomiosarcoma (RMS), sarcoma de Kaposi, sarcoma sinovial, osteosarcoma y sarcoma de Ewing. En otra realización, la presente invención se refiere a las formas sólidas descritas anteriormente para su uso en un método para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un primer agente terapéutico opcionalmente con un segundo agente terapéutico, en donde el primer agente terapéutico es una forma sólida seleccionada entre cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente y el segundo agente terapéutico es otro tipo de agente terapéutico; en donde las enfermedades o trastornos se seleccionan entre linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), linfoma folicular, otros linfomas, leucemia, mieloma múltiple, cáncer gástrico, tumor rhabdoide maligno y carcinoma hepatocelular.
En otra realización, el (los) agente(s) terapéutico(s) adicional(es) utilizado(s) en composiciones farmacéuticas combinadas o métodos combinados o usos combinados, se selecciona(n) entre uno o más, preferentemente de uno a tres, de los siguientes agentes terapéuticos: otros agentes anticancerosos, inmunomoduladores, agentes antialérgicos, agentes contra las náuseas (o antieméticos), analgésicos, agentes citoprotectores y combinaciones de estos.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X, en donde dicha Forma A contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,2 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X, que comprende los pasos de:
<1>) suspender W-((5-fluoro-2,3-d¡h¡drobenzofuran-4-¡l)met¡l)-8-(2-met¡lp¡rid¡n-3-¡l)-[1,2,4]tr¡azolo[4,3-c]p¡r¡m¡d¡n-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta a al menos aproximadamente 50 °C;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a al menos aproximadamente 50 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-d¡h¡drobenzofuran-4-¡l)met¡l)-8-(2-met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]p¡r¡m¡d¡n-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que se puede obtener mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-ilH1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, que se puede obtener mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X, que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta al menos aproximadamente 50 °C;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente con ácido clorhídrico a la vez que se mantiene la temperatura a al menos aproximadamente 50 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona un proceso de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que se puede obtener mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-ilH1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, obtenida mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En otra realización, la presente invención proporciona la Forma cristalina A del Compuesto X que contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual, preferentemente menos de un 0,3 % en peso de disolvente orgánico residual, más preferentemente menos de un 0,1 % en peso de disolvente orgánico residual, que se puede obtener mediante un proceso que comprende los pasos de:
1) suspender el Compuesto A en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua que se selecciona de un grupo que consiste en etanol y acetona;
2) calentar la suspensión resultante hasta una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C;
3) acidificar la suspensión resultante con ácido clorhídrico para formar una solución transparente añadiendo una solución de HCl 0,5 N en una mezcla de agua y dicho disolvente orgánico miscible en agua, a la vez que se mantiene una temperatura de aproximadamente 50 a 75 °C; y
4) reducir la temperatura de la solución para fomentar la formación de cristales con el fin de obtener la Forma A del Compuesto X.
En realizaciones adicionales de los procesos anteriores de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X, la presente invención proporciona las siguientes proporciones preferidas de la mezcla de disolventes:
Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 80 a un 100 % en peso. Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 85 a un 100 % en peso. Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 90 a un 100 % en peso. Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 95 a un 100 % en peso. Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 85 a un 95 % en peso.
Una proporción de la mezcla de disolventes de H2O y EtOH en donde el EtOH está en de un 90 a un 95 % en peso.
En realizaciones adicionales de los procesos anteriores de preparación de la Forma cristalina A del Compuesto X, la presente invención proporciona los siguientes intervalos preferidos de temperatura para el paso 2:
Un intervalo de temperatura es de 50 a 75 °C.
Un intervalo de temperatura es de 60 a 75 °C.
Un intervalo de temperatura es de 70 a 75 °C.
En el presente documento se describen diversas realizaciones (enumeradas) de la invención. Se reconocerá que las características especificadas en cada realización se pueden combinar con otras características especificadas para proporcionar realizaciones adicionales de la presente invención. También se entiende que cada uno de los elementos individuales de las realizaciones es su propia realización independiente.
Otras características de la presente invención deberían volverse evidentes en el transcurso de las descripciones anteriores de realizaciones ilustrativas que se proporcionan para ilustrar la invención y que no se pretende que la limiten.
III. DEFINICIONES
Los términos y las expresiones generales que se utilizan anteriormente y en lo sucesivo en el presente documento tienen preferentemente, dentro del contexto de esta invención, los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario, donde términos y expresiones más generales dondequiera que se utilicen pueden, de forma independiente entre sí, ser reemplazados por definiciones más específicas o permanecer, definiendo así realizaciones más detalladas de la invención.
Las características y ventajas de la invención pueden ser comprendidas más fácilmente por los expertos en la técnica al leer la siguiente descripción detallada. Se debe apreciar que ciertas características de la invención que, por razones de claridad, se describen anteriormente y más adelante en el contexto de realizaciones separadas, también pueden combinarse para formar una sola realización. Por el contrario, varias características de la invención que, por razones de brevedad, se describen en el contexto de una sola realización, también pueden combinarse para formar subcombinaciones de esta.
Se debe interpretar que los términos «un», «una», «el», «la» y términos similares utilizados en el contexto de la presente invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) cubren tanto el singular como el plural a menos que se indique lo contrario en el presente documento o se contradiga claramente por el contexto.
Todos los números que expresan cantidades de ingredientes, porcentajes en peso, temperaturas, etc. que van precedidos de la palabra «aproximadamente» deben interpretarse solamente como aproximaciones de modo que se pueden utilizar ligeras variaciones por encima y por debajo del número indicado para conseguir sustancialmente los mismos resultados que el número indicado. Por consiguiente, a menos que se indique lo contrario, los parámetros numéricos que van precedidos de la palabra «aproximadamente» son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se deseen obtener. Como mínimo, y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico debe interpretarse al menos teniendo en cuenta el número de dígitos significativos notificados y aplicando técnicas ordinarias de redondeo.
Los nombres utilizados en el presente documento para caracterizar una forma específica, p. ej., «H<a>», etc., son meramente identificadores que deben interpretarse de acuerdo con la información de caracterización presentada en el presente documento y no deben limitarse de modo que excluyan cualquier otra sustancia que posea características físicas y químicas similares o idénticas.
Todas las mediciones están sujetas a error experimental y están dentro de la naturaleza de la invención.
Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en el presente documento o el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o lenguaje ilustrativo (p. ej., «tal como») proporcionado en el presente documento pretende únicamente ilustrar mejor la invención y no plantea una limitación al alcance de la invención que por lo demás se reivindica.
La expresión «farmacéuticamente aceptable» indica que la sustancia o composición debe ser compatible desde un punto de vista químico y/o toxicológico con los otros ingredientes que comprende una formulación, y/o el mamífero que está siendo tratado con ella.
Dependiendo de las condiciones del proceso, los productos finales se obtienen en forma libre (neutra) o de sal. Si se desea, una forma de un compuesto se puede convertir en otra forma. Una base o ácido libre se puede convertir en una sal; una sal se puede convertir en el compuesto libre u otra sal; una mezcla de compuestos isoméricos de la presente invención se puede separar en los isómeros individuales.
Se pueden sintetizar sales farmacéuticamente aceptables a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, se pueden preparar sales de este tipo haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se pueden consultar listas de sales adecuadas en Allen, L.V., Jr., ed.,Remington: The Science and Practice of Pharmacy,22.a Edición, Pharmaceutical Press, Londres, Reino Unido (2012).
Tal como se utiliza en el presente documento, «polimorfo(s)» se refiere a forma(s) cristalina(s) que tiene(n) la misma estructura/composición química pero diferentes disposiciones espaciales de las moléculas y/o iones que forman los cristales.
Tal como se utiliza en el presente documento, «amorfo» se refiere a una forma sólida de una molécula, átomo y/o iones que no es cristalina. Un sólido amorfo no muestra un patrón de difracción de rayos X definitivo.
Para fines de farmacopea, los «disolventes orgánicos residuales» en los productos farmacéuticos se definen como productos químicos orgánicos volátiles que se utilizan o producen durante la fabricación de sustancias farmacológicas o excipientes, o durante la preparación de productos farmacológicos. Los disolventes orgánicos residuales no se eliminan completamente mediante técnicas de fabricación prácticas.
Tal como se utiliza en el presente documento, «disolvente orgánico miscible en agua» se refiere a un disolvente orgánico que es líquido a temperatura ambiente y es completamente miscible con agua, preferentemente se selecciona entre etanol y acetona.
Tal como se utiliza en el presente documento, se pretende que un patrón de DRXP «que comprende» una serie de picos seleccionados entre un grupo especificado de picos, incluya patrones de DRXP que tienen picos adicionales que no están incluidos en el grupo especificado de picos.
«EED» se refiere al producto proteico del gen del desarrollo embrionario del ectodermo.
«PRC2» se refiere al complejo represor Polycomb 2.
La expresión «enfermedad o trastorno mediado por PRC2» se refiere a cualquier enfermedad o trastorno que está regulado directa o indirectamente por PRC2. Esto incluye, sin carácter limitante, cualquier enfermedad o trastorno que está regulado directa o indirectamente por EED.
La expresión «enfermedades o trastornos mediados por EED y/o PRC2» se refiere a enfermedades o trastornos que están regulados directa o indirectamente por EED y/o PRC2.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término «paciente» engloba todas las especies de mamíferos.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término «sujeto» se refiere a un animal. Normalmente, el animal es un mamífero. Un «sujeto» también se refiere a cualquier organismo humano o no humano que se podría beneficiar potencialmente del tratamiento con un inhibidor de EED. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (p. ej., seres humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En ciertas realizaciones, el sujeto es un primate. En otras realizaciones más, el sujeto es un ser humano. Los sujetos ilustrativos incluyen seres humanos de cualquier edad con factores de riesgo para la enfermedad del cáncer.
Tal como se utiliza en el presente documento, un sujeto «necesita» un tratamiento si dicho sujeto se beneficiaría, desde un punto de vista biológico, médico o en su calidad de vida, de tal tratamiento (preferentemente, un ser humano).
Tal como se utiliza en el presente documento, el término «inhibir», «inhibición» o «que inhibe» se refiere a la reducción o supresión de una afección, síntoma o trastorno o enfermedad determinados, o una disminución significativa en la actividad de referencia de una actividad o proceso biológico.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término «tratar», «que trata» o «tratamiento» de cualquier enfermedad/trastorno se refiere al tratamiento de la enfermedad/trastorno en un mamífero, particularmente en un ser humano, e incluye: (a) mejorar la enfermedad/trastorno (es decir, ralentizar o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad/trastorno, o al menos uno de los síntomas clínicos de estos); (b) aliviar o modular la enfermedad/trastorno (es decir, provocar la regresión de la enfermedad/trastorno, ya sea de manera física (p. ej., estabilización de un síntoma discernible), fisiológica (p. ej., estabilización de un parámetro fisiológico), o ambas; (c) aliviar o mejorar al menos un parámetro físico que incluye aquellos que puede que no sean perceptibles por el sujeto; y/o (d) prevenir o retrasar que se produzca el inicio o desarrollo o progresión de la enfermedad o trastorno en un mamífero, en particular cuando tal mamífero está predispuesto a la enfermedad o trastorno pero aún no se ha diagnosticado que lo padece.
Tal como se utiliza en el presente documento, «prevenir» o «prevención» cubre el tratamiento preventivo (es decir, profilaxis y/o reducción del riesgo) de un estado patológico asintomático en un mamífero, particularmente en un ser humano, destinado a reducir la probabilidad de aparición de un estado patológico clínico. Los pacientes se seleccionan para la terapia preventiva en función de factores que se sabe que incrementan el riesgo de sufrir un estado patológico clínico en comparación con la población general. Las terapias de «profilaxis» se pueden dividir en (a) prevención primaria y (b) prevención secundaria. La prevención primaria se define como el tratamiento en un sujeto que aún no ha presentado un estado patológico clínico, mientras que la prevención secundaria se define como prevenir una segunda aparición del mismo estado clínico patológico o uno similar.
Tal como se utiliza en el presente documento, «reducción del riesgo» o «reducir el riesgo» engloba terapias que reducen la incidencia de desarrollo de un estado clínico patológico. Como tales, las terapias de prevención primaria y secundaria son ejemplos de reducción del riesgo.
Se pretende que la «cantidad terapéuticamente eficaz» incluya una cantidad de un compuesto de la presente invención que suscitará la respuesta biológica o médica en un sujeto, por ejemplo, reducción o inhibición de EED y/o PRC2, o mejorará los síntomas, aliviará las afecciones, retrasará o ralentizará la progresión de la enfermedad o prevendrá una enfermedad o trastorno mediado por PRC2. Cuando se aplica a una combinación, la expresión se refiere a cantidades combinadas de los principios activos que dan como resultado el efecto preventivo o terapéutico, ya sea cuando se administran en combinación, en serie o simultáneamente.
Las abreviaturas tal como se utilizan en el presente documento, se definen de la siguiente manera: «EtOH» para etanol, «1x» para una vez, «2x» para dos veces, «3x» para tres veces, «°C» para grados centígrados, «ac» para acuoso, «Col» para columna, «eq» para equivalente o equivalentes, «g» para gramo o gramos, «mg» para miligramo o miligramos, «L» para litro o litros, «mL» para mililitro o mililitros, «pL» para microlitro o microlitros, «N» para normal, «M» para molar, «nM» para nanomolar, «mol» para mol o moles, «mmol» para milimol o milimoles, «min» para minuto o minutos, «h» para hora u horas, «ta» para temperatura ambiente, «tR» para tiempo de retención, «TN» para toda la noche, «atm» para atmósfera, «psi» para libras por pulgada al cuadrado, «conc.» para concentrado, «ac» para acuoso, «sat» para saturado, «PM» para peso molecular, «mo» o «ponda» para microondas, «pf» para punto de fusión, «p» para peso, «MS» o «Espec Mas» para espectrometría de masas, «ESI» para espectroscopía de masas con ionización por electronebulización, «HR» para alta resolución, «HRMS» para espectrometría de masas de alta resolución, «LC-MS» para cromatografía líquidaespectrometría de masas, «HPLC» para cromatografía líquida de alta resolución, «RP HPLC» para HPLC en fase inversa, «TLC» o «tlc» para cromatografía en capa fina, «RMN» para espectroscopía por resonancia magnética nuclear, «nOe» para espectroscopía con efecto Overhauser nuclear, «<1>H» para protón, «ó» para delta, «s» para singlete, «d» para doblete, «t» para triplete, «c» para cuadruplete, «m» para multiplete, «a» para ancho, «Hz» para hercio, «ee» para «exceso enantiomérico» y «a», «p», «R», «S», «E», y «Z» son denominaciones esteroquímicas con las que está familiarizado el experto en la técnica.
MÉTODOS GENERALES
Se utilizaron los siguientes métodos en los Ejemplos ilustrados, excepto cuando se señala otra cosa.
Las formas cristalinas se pueden preparar mediante diversos métodos que incluyen, por ejemplo, cristalización o recristalización en un disolvente adecuado, sublimación, crecimiento a partir de una masa fundida, transformación al estado sólido a partir de otra fase, cristalización en un fluido supercrítico y pulverización por chorro. Las técnicas de cristalización o recristalización de formas cristalinas en una mezcla de disolventes incluyen, por ejemplo, evaporar el disolvente, disminuir la temperatura de la mezcla de disolventes, añadir núcleos de cristalización a una mezcla de disolventes supersaturada de la molécula y/o sal, liofilizar la mezcla de disolventes y añadir antidisolventes (contradisolventes) a la mezcla de disolventes. Se pueden emplear técnicas de cristalización de alto rendimiento para preparar formas cristalinas, incluidos los polimorfos.
Para las técnicas de cristalización que emplean disolvente, la elección del disolvente o disolvente normalmente depende de uno o más factores, tales como la solubilidad del compuesto, la técnica de cristalización y la presión de vapor del disolvente. Se pueden emplear combinaciones de disolventes, por ejemplo, el compuesto se puede solubilizar en un primer disolvente para proporcionar una solución, seguido de la adición de un antidisolvente para disminuir la solubilidad del compuesto en la solución y para proporcionar la formación de cristales. Un antidisolvente es un disolvente en el que el compuesto tiene una solubilidad baja.
En un método para preparar cristales, se suspende y/o agita un compuesto en un disolvente adecuado para proporcionar una suspensión, que se puede calentar para fomentar la disolución. El término «suspensión», tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una solución saturada del compuesto que también puede contener una cantidad adicional del compuesto para proporcionar una mezcla heterogénea del compuesto y un disolvente a una temperatura dada.
Se pueden añadir núcleos de cristalización a cualquier mezcla de cristalización para fomentar la cristalización. Se puede emplear la adición de núcleos de cristalización para controlar el crecimiento de un polimorfo particular o para controlar la distribución del tamaño de partícula del producto cristalino. En general, se necesitan núcleos de cristalización de tamaño pequeño para controlar de manera eficaz el crecimiento de los cristales en el lote. Se pueden generar núcleos de cristalización de tamaño pequeño tamizando, moliendo o micronizando cristales más grandes, o mediante la microcristalización de las soluciones. Se debe tener cuidado de que la molienda o micronización de los cristales no dé como resultado un cambio en la forma de cristalinidad de la forma cristalina deseada (es decir, cambio a una forma amorfa o a otro polimorfo).
Una mezcla de cristalización enfriada se puede filtrar a vacío y los sólidos aislados se pueden lavar con un disolvente adecuado, tal como el disolvente de recristalización frío, y secarse con una purga de nitrógeno para proporcionar la forma cristalina deseada. Los sólidos aislados se pueden analizar mediante una técnica espectroscópica o analítica adecuada, tal como resonancia magnética nuclear en estado sólido, calorimetría diferencial de barrido, difracción de rayos X en polvo o similares, para confirmar la formación de la forma cristalina preferida del producto. La forma cristalina resultante se produce normalmente en una cantidad superior a aproximadamente un 70 % en peso de rendimiento aislado, preferentemente superior a un 90 % en peso de rendimiento aislado, basándose en el peso del compuesto empleado originalmente en el procedimiento de cristalización. El producto se puede someter a una molienda conjunta o hacerse pasar a través de un tamiz de malla para disgregar el producto, si es necesario.
Las formas cristalinas se pueden preparar directamente a partir del medio de reacción del proceso final para preparar el Compuesto X. Esto se puede conseguir, por ejemplo, empleando en el paso final del proceso un disolvente o una mezcla de disolventes en la que se pueda cristalizar el Compuesto (I). Como alternativa, se pueden obtener formas cristalinas mediante técnicas de destilación o adición de disolventes. Los disolventes adecuados para este propósito incluyen, por ejemplo, los disolventes apolares y disolventes polares mencionados anteriormente, que incluyen disolventes polares próticos tales como alcoholes y disolventes polares apróticos tales como cetonas.
Difracción de rayos X en polvo (DRXP)
Los datos de difracción de rayos X en polvo (DRXP) se obtuvieron utilizando un Bruker D8 Discover con ánodo de Ka de Cu. Las muestras de polvo se colocaron en un portaobjetos de vidrio y se centraron en el haz de rayos X. La distancia entre la muestra y el detector fue de aproximadamente 30 cm, con tres marcos combinados. La radiación fue Ka de Cu (A = 1,5418 A). Los datos se recogieron para 2 < 20 < 45° con un tiempo de exposición de la muestra de al menos 270 segundos.
Los parámetros atómicos derivados (coordenadas y factores de temperatura) se refinaron a través de la matriz completa de mínimos cuadrados. La función minimizada en los refinamientos fue ! w(|F<0>| - |Fc|)<2>. R se define como1||F| - |F||/Í |Fo| mientras que Rw = [ I w( |Fo| - |Fc|)<2>/ ! w |Fo|<2>]<1/2>donde w es una función de ponderación adecuada que se basa en errores de las intensidades observadas. Se examinaron mapas de diferencias en todas las etapas del refinamiento. Se introdujeron átomos de hidrógeno en posiciones idealizadas con factores de temperatura isotrópicos, pero no se modificaron los arámetros de hidró eno.
Análisis termogravimétrico
Se realizó un análisis termogravimétrico para cada forma cristalina utilizando un instrumento de ATG de TA Discovery. Para cada uno de los análisis, la celda de ATG/cámara de muestra se purgó con 20 mL/min de nitrógeno gaseoso de pureza ultra alta. Se realizó una calibración de peso utilizando pesos estándar con purga de nitrógeno. La velocidad de calentamiento fue de 10 °C por minuto en el intervalo de temperatura entre ta y 300 °C. El cambio porcentual de peso (% p) se representó en una gráfica frente a la temperatura de la muestra medida.
Calorimetría diferencial de barrido
Se realizó una calorimetría diferencial de barrido para cada forma cristalina utilizando un CDB de TA Discovery. Para cada uno de los análisis, la celda de CDB/cámara de muestra se purgó con 50 mL/min de nitrógeno gaseoso de pureza ultra alta. El instrumento se calibró con indio de alta pureza. La velocidad de calentamiento fue de 10 °C por minuto en el intervalo de temperatura entre 30 y 300 °C. El flujo de calor, que se normalizó según el peso de la muestra, se representó en una gráfica frente a la temperatura de la muestra medida. Los datos se expresaron en unidades de vatios/gramo («W/g»). La gráfica se realizó con los picos endotérmicos apuntando hacia abajo. Se evaluó el pico de fusión endotérmica (punto de fusión) para la temperatura de inicio extrapolada.
Sorción dinámica de vapor
La sorción dinámica de vapor se realizó en un instrumento de SDV Advantage de Surface Measurement Systems. Se cargaron aproximadamente 10 mg de material en un crisol para muestras. Las muestras se expusieron a ciclos de sorción/desorción en pasos de un 10 % de humedad relativa (Hr ) en el intervalo de 50 %-90 %-0 %-90 %-50 % de HR a 25 °C y 50 °C. Se estableció una condición de equilibrio diana de cambio de masa inferior a un 0,002 % en 5 min, con períodos de equilibrio mínimo y máximo de 10 y 360 min, respectivamente. El gas portador fue nitrógeno con un caudal de 100 mL/min. El sistema se calibra con soluciones saturadas de sal. El cambio porcentual de peso (% p) de la muestra en cada eta a se midió se re resentó en una ráfica frente a la resión arcial obetivo.
RMN empleada en la caracterización de los Ejemplos
Los espectros de<1>H RMN se obtuvieron con espectrómetros con transformada de Fourier Bruker que funcionaban a las siguientes frecuencias:<1>H RMN: 400 MHz (Bruker).<13>C RMN: 100 MHz (Bruker). Los datos de los espectros se presentan en el siguiente formato: desplazamiento químico (multiplicidad, número de hidrógenos). Los desplazamientos químicos se especifican en ppm campo abajo respecto a un patrón interno de tetrametilsilano (unidades ó, tetrametilsilano = 0 ppm) y/o con referencia a picos de disolvente, que en los espectros de<1>H RMN aparecen a 2,49 ppm para CD2HSOCD3, 3,30 ppm para CD2HOD, 1,94 para CD3CN y 7,24 ppm para CDCb , y que en los espectros de<13>C RMN aparecen a 39,7 ppm para CD3SOCD3, 49,0 ppm para CD3OD y 77,0 ppm para CDCl<3>. Todos los espectros de<13>C r Mn se sometieron a desacoplamiento de protón. Las mediciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente o se especifica en caso contrario. La cantidad de residuo de disolvente se calculó en función de las integraciones de los hidrógenos más representativos en los espectros de<1>H RMN correspondientes.
V. EJEMPLOS
Los siguientes Ejemplos se han preparado, aislado y caracterizado utilizando los métodos divulgados en el presente documento. No se pretende que los siguientes ejemplos limiten el alcance de la invención.
[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina)
Intermedio 3: 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidina
5-Bromo-4-hidrazinil-2-(metiltio)pirimidina(2): A una solución de 5-bromo-4-cloro-2-(metiltio)pirimidina (1, 49,0 g, 0,205 mol) en etanol (1000 mL), se añadió hidrazina (21,5 g, 0,430 mol). La reacción se agitó a ta durante 4 h. La suspensión resultante se filtró, se lavó con hexano y se secó al vacío para obtener el compuesto de título (44,1 g, 92 %) como un sólido blanco.1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,42 (s, 3H), 8,08 (s, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 234,9; 236,9.
intermedio3: Se disolvió 5-bromo-4-hidrazinil-2-(metiltio)pirimidina (2) (40,0 g, 0,17 mol) en 200 mL de trietoximetano. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (EA: PE = 1:15~1:1) para obtener el compuesto del título (38,3 g, 92 %) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, metanol-d4) 5 ppm 2,82 (s, 3H), 8,03 (s, 1H), 8,87 (s, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 245,0; 247,0.
Intermedio A1: 8-bromo-N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina
2-Bromo-4-(2,2-dietoxietoxi)-1-fluorobenceno(A1.1): A una solución de 3-bromo-4-fluorofenol (500 g, 2,62 mol) y 2-bromo-1,1-dietoxietano (670 g, 3,4 mol) en 2,0 L de DMF, se añadió K<2>CO<3>(1085 g, 7,86 mol) en una porción. La suspensión se calentó a 110 °C y se agitó durante la noche en atmósfera de N<2>. Después de enfriar hasta ta, la reacción se diluyó con 10,0 L de H<2>O y se extrajo con EtOAc (2,0 L x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera dos veces, se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice (EtOAc/hexano = de 0:100 a 5:100) para obtener el compuesto de título (810 g, 80 %) como un aceite amarillo. 1H-RMN (400 MHz, metanol-d4) 5 ppm 1,27 (t, 6 H), 3,65 (c, 2 H), 3,78 (c, 2 H), 3,97 (d, 2 H), 4,82 (t, 1 H), 3,97 (d, 2 H), 6,84 (dd, 1 H), 7,04 (dd, 1 H), 7,13 (d, 1 H).
4- Bromo-5-fluorobenzofurano(A1.2ajunto con el regioisómeroA1.2b): A una solución de PPA (1324 g, 3,93 mol) en tolueno (2,0 L), se añadióA1.1(810 g, 2,62 mol) en 30 min a 95 °C. La mezcla de reacción se agitó a 95 °C durante 2 h. Después de enfriar hasta ta, se añadieron lentamente 4,0 L de agua-hielo. La mezcla se extrajo con PE (2,0 L x 2), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (2,0 L x 2), se secó con Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre gel de sílice (EtOAc/PE = de 0:100 a 5:100) para obtener una mezcla deA1.2ayA1.2b(A1.2a : A1.2b = 1:0,7, 310 g, 55 % de rendimiento) como un aceite amarillo.
5- Fluorobenzofuran-4-carbonitrilo(A1.3): A una mezcla deA1.2ayA1.2b(310 g, 1,44 mol) y Zn(CN<)2>(253 g, 2,16 mol) en 1,0 L de DMF, se añadió Pd(PPh3)4 (162 g, 0,14 mol) en atmósfera de N<2>. La mezcla de reacción se calentó a 100 °C y se agitó durante 18 h. Después de enfriar hasta ta, la mezcla se diluyó con 5,0 L de agua y se extrajo con EtOAc (1,0 L x 2). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (1 L), se secó con Na2SO4 (anhidro), se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó con una columna ultrarrápida (fase móvil: EtOAc/PE = 1:70 en 30 min, tiempo de ret. = 11 min, caudal: 120 mL/min) para obtener el compuesto del título (92 g, 40 %) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, metanol-d<4>) 5 ppm 7,07 (d, 1H), 7,30 (dd, 1H), 7,89 (dd, 1H), 8,10 (dd, 1H).
((5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)carbamato de tert-butilo(A1.4): A una solución deA1.3(44,5 g, 276,4 mmol) y Boc<2>O (90,0 g, 414,6 mmol) en 1,0 L de MeOH, se añadió Pd/C (5 g, al 10 % p). La mezcla de reacción se desgasificó con H<2>y se agitó en atmósfera de H<2>durante la noche. La mezcla se filtró a través de celite, se lavó con MeOH (300 mL x 2) y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se recristalizó en PE para obtener el compuesto del título (61,0 g, 93 %) como un sólido blanco.<1>H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 1,38 (s, 9H), 3,21 (t, 2H), 4,12 (d, 2H), 4,53 (t, 2H), 6,63 (dd, 1H), 6,86 (dd, 1H), 7,25 (s a, 1H). LC-MS: [M- tBu H]+ = 212,1.
(5-Fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metanamina(A1.5): Una solución deA1.4(18,3 g, 68,5 mmol) en 50 mL de HCl/dioxano (4 mol/L) se agitó a ta durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con una mezcla de disolvente (MeOH: MeCN = 1:10, 500 mL), a continuación se añadió K2CO3 (18,0 g, 342,5 mmol). La mezcla se calentó a 60 °C y se agitó durante 3 h, se enfrió hasta ta, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice (MeOH: EtOAc = de 0:100 a 1:4) para obtener el compuesto del título (9,2 g, 80 %) como un aceite amarillo.<1>H-RMN (400 MHz, metanol-d<4>) 5 ppm 3,27 (t, 2H), 3,77 (s, 2H), 4,56 (t, 2H), 6,59 (dd, 1H), 6,81 (dd, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 168,1.
IntermedioA1: Una mezcla deA1.5(1,41 g, 8,2 mmol) y 8-bromo-5-(metiltio)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidina (3) (1,0 g, 4,1 mmol) se calentó a 40 °C y se agitó durante 16 h. Después de enfriar hasta ta, la mezcla se diluyó con EtOAc (35 mL). El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc (3 mL x 3), se secó al vacío para obtener el compuesto del título (1,0 g, 67 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, DMSO) 5 ppm 3,27 (t, 2H), 4,53 (t, 2H), 4,66 (d, 2H), 6,71 (dd, 1H), 6,95 (t, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,75 (t, 1H), 9,48 (s, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 363,7; 365,7.
A una mezcla deA1(40 mg, 0,110 mmol) en 1,4-dioxano (3 mL), MeCN (0,30 mL) y agua (0,30 mL), se añadió ácido (2-metilpiridina-3-il)borónico (30,1 mg, 0,220 mmol), carbonato de potasio (45,5 mg, 0,330 mmol ) y Pd(Ph3P)4 (12,69 mg, 10,98 pmol). La mezcla resultante se agitó en atmósfera de N2 a 110 °C durante 3 h, se enfrió hasta ta y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (DCM: MeOH = 10:1) para proporcionar Ñ-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina como un sólido blanco (20 mg, 46,0 %).
Como alternativa, se preparó N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina de la siguiente manera. A una suspensión deA1(25,5 g, 70 mmol), 2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (30,6 g , 140 mmol) y NaHCOs (35,3 g, 420 mmol) en una solución de una mezcla de 1,4-dioxano (300 mL) y H<2>O (100 mL), se añadió PdCh(dppf) (5,94 g, 612 mmol). La mezcla se desgasificó con N<2>y se calentó a 110 °C durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió hasta ta y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (EtOAc: MeOH = 20:1) para obtener 14 g del producto deseado. Se añadieron 200 mL de acetona al producto y la suspensión resultante se calentó a 50 °C durante 2 h. El sólido blanco se recolectó mediante filtración y se secó al vacío para obtener N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina) (13,6 g, 52 %) 1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,40 (s, 3H), 3,33 (t, 2H), 4,56 (t, 2H), 4,72 (s, 2H), 6,72 (dd, 1H), 6,96 (dd, 1H), 7,31 (dd, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,74 (d, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,72 (t, 1H), 9,49 (s, 1H). LC-MS: [M+H]+ = 376,9.
Ejemplo 2: Preparación de la Forma A del Compuesto X (clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina) utilizando isopropanol (IPA) (Entrada 1 en la Tabla 2)
A una suspensión de N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (6,0 g, 15,94 mmol) en 100 mL de IPA, se añadió una solución de HCl 0,5 N en IPA (33,0 mL, 16,50 mmol) gota a gota a ta. La suspensión se agitó a 50 °C durante 12 h, a continuación se enfrió hasta ta y se agitó durante 5 h. El sólido resultante se recolectó mediante filtración y se secó a 40 °C al vacío durante 2 días para proporcionar la sal de tipo<clorhidrato de la Forma A del Compuesto X como un sólido blanco (6,5 g, 98 % ) 1H>RmN<(DMSO-d6) 5 ppm 2,65 (s, 3 H),>3,35 (t, 2H), 4,57 (t, 2H), 4,74 (d, 2H), 6,73 (dd, 1H), 6,97 (dd, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,85 - 7,94 (m, 1H), 8,46 (d, 1H), 8,80 (dd,<1H), 9,07 (t, 1H), 9,58 (s, 1H).>LC-mS:<[M+H]+ = 376,9. La cantidad de residuo de disolvente se calculó basándose en las>integraciones de los hidrógenos más representativos en el espectro de 1HRMN correspondiente. Concretamente, la integración en 5 1,04 que corresponde a 6 hidrógenos de los grupos metilo del IPA es de 0,31, mientras que la de 3 hidrógenos del grupo metilo en 2-metilpiridina en 52,64 es de 3. Por lo tanto, el porcentaje molar del IPA se calcula de la siguiente manera: 0,31 / 6 (1+ 0,31 / 6) = 4,9 %; mientras que el porcentaje de IPA en peso se calcula de la siguiente manera: 60 * (0,31 / 6) / {(376,38 36,46 60 * (0,31 / 6)} = 0,74 % {PM (IPA) = 60, PM (compuesto A) = 376,40 y PM (HCl) = 36,46)}.
Ejemplo 3: Preparación de la Forma A del Compuesto X (clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina) utilizando EtOH/ H<2>O (Entrada 7 en la Tabla 2)
A 4,0 g de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina en un matraz de 500 mL, se añadieron 200 mL de EtOH/H2O (95/5, v/v) y la mezcla se agitó con agitación mecánica. La suspensión resultante se calentó hasta 75 °C con un baño de aceite y se mantuvo a esta temperatura durante 1 h. A la suspensión mantenida a 75 °C, se añadieron 23,38 mL de HCl 0,5 N en EtOH (1,1eq) gota a gota. La mezcla se volvió transparente después de la adición del ácido clorhídrico. La solución resultante se agitó a 75 °C durante 2 h. A continuación, la mezcla se enfrió hasta ta en 3 h y se recolectó el Compuesto X resultante en forma de sólido blanco (3,5 g, 79,7 %) mediante filtración y se secó durante 6 h al vacío. La cantidad de residuo de EtOH se calculó basándose en la integración del hidrógeno en el espectro de 1H RMN. Concretamente, la integración en 51,06 que corresponde a 3 H del grupo metilo del EtOH es de 0,01, mientras que la de 3 hidrógenos del grupo metilo en 2-metilpiridina en 52,65 es de 3. Por lo tanto, el porcentaje molar del EtOH se calcula de la siguiente manera: 0,01 / 3 (1+ 0,01 / 3) = 0,33 %; mientras que el porcentaje de EtOH en peso se calcula de la siguiente manera: 46,07 * (0,01 / 3) / {(376,38 36,46 * (0,01 / 3)} = 0,04 % {PM (EtOH) = 46,07, PM (compuesto A) = 376,40 y PM (HCl) = 36,46)}.
Ejemplo 4: Preparación de la Forma H<a>del Compuesto X
Se añadieron 1,0 g de la Forma A del Compuesto X a 10 mL de una mezcla de etanol/agua (3:1) para obtener una suspensión. La suspensión se agitó a ta durante 3 días. El sólido resultante se recolectó mediante una filtración al vacío y se secó a ta durante la noche. La forma H<a>del Compuesto X (0,81 g) se obtuvo con un 77 % de rendimiento.
Ejemplo 5: Preparación de la Forma H<b>del Compuesto X
Se disolvieron 200 mg de la Forma A del Compuesto X en una cantidad mínima de una mezcla de acetona/agua (1:1) a 60 °C, para obtener una solución transparente. La solución se evaporó a ta durante de 3 a 5 días. El sólido resultante se recolectó mediante una filtración al vacío y se secó a ta durante la noche. Se obtuvo la forma H<b>del Compuesto X.
Preparación de HCl 0,5 N en EtOH o acetona:
Se añadieron 4,0 mL de HCl acuoso concentrado disponible en el mercado (al 36,5 %, p/p, en agua) a 96,0 mL de EtOH o acetona (opcionalmente a temperatura reducida) y la solución se mezcló bien para obtener HCl 0,5 N en EtOH o acetona.
Procedimiento para los experimentos resumidos en la Tabla 2:
A 10 mg del Compuesto X en un vial de muestra a 50 °C, se añadió el disolvente seleccionado gota a gota. La adición de disolvente se detuvo cuando se obtuvo una solución transparente o cuando la cantidad de disolvente alcanzó 1 mL. La mezcla resultante se agitó continuamente a 50 °C durante 2 h, a continuación se enfrió hasta ta y se agitó durante la noche. Se determinaron las solubilidades a 50 °C y ta según la homogeneidad de la mezcla resultante.
Procedimiento para los experimentos resumidos en la Tabla 3:
Los experimentos de las Entradas 1 a 6 en la Tabla 3 se llevaron a cabo de acuerdo con el procedimiento descrito en la formación de la sal en el Ejemplo 3 anterior, pero con diferentes parámetros que se enumeran en la Tabla 3.
VI. FARMACOLOGÍA Y UTILIDAD
Como componente clave del complejo PRC2, EED no tiene actividad enzimática intrínseca. Sin embargo, es crucial para la correcta función de PRC2. EED se une directamente a H3K27me3 y este evento de unión ubica el complejo PRC2 en el sustrato cromatínico y activa alostéricamente la actividad metiltransferasa. Actuar sobre el sitio alostérico dentro de la subunidad EED reguladora de PRC2 puede ofrecer un ángulo novedoso y único que sea ventajoso respecto a, o complementario a, actuar directamente sobre el mecanismo de competición con SAM de EZH2 o PRC2. Por consiguiente, actuar sobre EED representa una estrategia muy atractiva para el desarrollo de una terapia novedosa para el tratamiento de muchas formas de cáncer. En particular, se necesitan moléculas de bajo peso molecular que, al actuar sobre EED, inhiban la actividad de PRC2. Recientemente se ha descubierto que los derivados de triazolopirimidina como se divulgan en el presente documento son útiles para actuar sobre EED para el tratamiento de enfermedades o trastornos mediados por EED o PRC2, especialmente cánceres.
La utilidad del Compuesto X de la presente invención se puede demostrar utilizando cualquiera de los siguientes procedimientos de prueba. Se evaluó el Compuesto X con el fin de determinar su capacidad para inhibir la actividad de PRC2 en un complejo pentamérico de EZH2, SUZ12, EED, Rbap48 y AEBP en ensayos bioquímicos. La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir la actividad celular de PRC2 se evaluó analizando la metilación de la lisina 27 de la histona H3 en líneas celulares humanas. La capacidad del Compuesto X para inhibir cánceres procedió de su capacidad de modular la actividad en líneas de células cancerosas humanas que portan una dependencia específica respecto a la actividad de PRC2 para mantener el crecimiento canceroso.
Ensayo de unión competitiva EED-péptido H3K27Me3 por AlphaScreen (a-screen)
Para evaluar la potencia de los compuestos en el ensayo de unión competitiva EED-H3K27Me3, los compuestos se diluyeron en serie con un factor de 3 en DMSO para obtener en total doce concentraciones. A continuación, se transfirieron los compuestos en cada concentración (75 nL de cada uno) con Mosquito a placas ProxiPlate 384 plus de Perkin Elmer de 384 pocillos. Se añadieron 8 pL de las soluciones que contenían la proteína EED (1 -441 )-His 30 nM y el péptido biotina-H3K27Me3 (19-33) 15 nM en el tampón (HEPES 25 mM, pH 8, 0,02 % de Tween-20, 0,5 % de BSA) a los pocillos y a continuación se incubaron con los compuestos durante 20 min. La mezcla con las microesferas de detección AlphaScreen se preparó justo antes de su uso mezclando microesferas aceptoras con quelato de níquel y microesferas donantes con estreptavidina en una relación 1:1 (Perkin Elmer, N.° de producto 6760619C/M/R) en el tampón descrito anteriormente. A continuación, se añadieron 4 pL de mezcla de microesferas de detección a la placa y se incubó en la oscuridad a ta durante 1 h. La concentración final de microesferas donantes y aceptoras fue de 10 pg/mL para cada caso. Las placas se leyeron en EnVision (PerkinElmer) utilizando la configuración AlphaScreen adaptada para una detección de señales óptima con un filtro de 615 nm, después de una excitación de la muestra a 680 nm. La señal de emisión a 615 nm se utilizó para cuantificar la inhibición de los compuestos. Las señales AlphaScreen se normalizaron en función de la lectura procedente de los controles positivos (control con señal máxima) y negativos (control con señal mínima) para obtener el porcentaje de actividades restantes. Los datos se ajustaron a continuación a una ecuación de respuesta a la dosis utilizando el programa Helios (Novartis) para obtener los valores de CI50. Helios en un software de análisis de datos de ensayos interno de Novartis que utiliza los métodos descritos por Normolle, D. P.,Statistics in Medicine,12:2025-2042 (1993); Formenko, I.et al., Computer Methods and Programs in Biomedicine,82, 31-37 (2006); Sebaugh, J. L.,Pharmaceutical Statistics,10:128-134 (2011); Kelly, C.et al., Biometrics,46(4):1071-1085 (1990); y Kahm, M.et al., Journal of Statistical Software,33(7): (2010)(grofit: Fitting Biological Growth Curves with R,páginas 1-21, disponible en http://www.jstatsoft.org/).
Cada compuesto se sometió a un contracribado para determinar si interfería con las microesferas AlphaScreen. Los compuestos se diluyeron como se ha descrito en la sección precedente, y el ensayo se realizó añadiendo 12 pL del péptido biotina-miniPEG-His6 10 nM en el tampón anterior e incubando durante 20 min a ta antes de añadir las microesferas hasta una concentración de 10 pg/mL en cada caso. A continuación, las placas se incubaron durante 1 h a ta en la oscuridad antes de leerlas en EnVison.
Ensayo LC-MS con EED
Los compuestos representativos de la presente invención se diluyeron en serie y por separado con un factor de 3 en DMSO para obtener en total ocho o doce concentraciones. A continuación, se transfirieron los compuestos de prueba en cada concentración (120 nL de cada uno) con Mosquito a placas ProxiPlate 384 plus de Perkin Elmer de 384 pocillos. Se añadieron las soluciones (6 pL) del complejo PRC2 natural (wtPRC2) 24 nM y sAm 2 pM en tampón de reacción (Tris 20 mM, pH 8,0, 0,1 % de BSA, 0,01 % de Triton, DTT 0,5 mM) a los pocillos que se incubaron posteriormente con el compuesto de prueba durante 20 min. Se añadieron 6 pL de una solución del sustrato peptídico H3K27Me0 (histona H3[21-44]-biotina) 3 pM en tampón de reacción para iniciar cada reacción. Los componentes finales en la solución de reacción incluyen el complejo wtPRC2 12 nM, SAM 1 pM y péptido H3K27me0 1,5 pM con concentraciones variables de los compuestos. Un control positivo consistió en la enzima,<s>A<m>1 pM y sustrato 1,5 pM en ausencia del compuesto de prueba, y un control negativo consistió en únicamente SAM 1 pM y sustrato 1,5 pM. Cada reacción se incubó a ta durante 120 min, a continuación se detuvo con la adición de 3 pL por de solución de inactivación (TFA al 2,5% con d4-SAH 320 nM). La mezcla de reacción se centrifugó (centrífuga 5810 de Eppendorf, Rotor A-4-62) durante 2 min a 2000 rpm y se leyó en un espectrómetro de masas con triple cuadrupolo API 4000 con nebulizador Turbulon (Applied Biosystem) acoplado con UFLC Prominence (Shimadzu). A continuación, se normalizaron los niveles de producción de SAH en función de los valores procedentes de los controles positivos y negativos para obtener las actividades enzimáticas porcentuales. Los datos se ajustaron a continuación a una ecuación de respuesta a la dosis utilizando el programa Helios para obtener los valores de CI50 del compuesto de prueba.
Ensayo ELISA (metilación de H3K27)
Los compuestos representativos de la presente invención se diluyeron en serie y por separado con un factor de 3 en DMSO para obtener en total ocho o doce concentraciones. A continuación, los compuestos se añadieron a células G401 cultivadas en una placa de 384 pocillos con una dilución 1:500 para obtener la concentración más elevada de 20 pM. Las células se cultivaron posteriormente durante 48 h antes del procedimiento ELISA.
Extracción de histonas: Las células, en una placa de 384 pocillos, se lavaron con PBS (tampón PBS 10 * (80 g de NaCl (Sigma, S3014), 2 g de KCl (Sigma, 60128), 14,4 g de Na<2>HPO<4>(Sigma, S5136), 2,4 g de KH2PO4 (Sigma, P9791) hasta 1 L de agua, pH 7,4) y se sometieron a lisis con la adición de tampón de lisis (HCl 0,4 N; 45 pL por pocillo). La placa se agitó suavemente a 4 °C durante 30 min. El lisado celular se neutralizó con tampón de neutralización (fosfato de sodio dibásico 0,5 M, pH 12,5, DTT 1 mM; 36 pL por pocillo). La placa se agitó para garantizar que los lisados se mezclaran bien antes del protocolo de ELISA.
Protocolo de ELISA: Los lisados celulares se transfirieron a los pocillos de una placa de 384 pocillos y el volumen final se ajustó a 50 pL por pocillo con PBS. La placa se selló, se centrifugó a 2000 rpm durante 2 min y se incubó a 4 °C durante aproximadamente 16 h. La placa se lavó con tampón TBST (TBS 1 x (TBS 10x: 24,2 g de Tris (Sigma, T6066), 80 g de NaCl (Sigma, S3014) hasta 1 L de agua y se ajusta el pH a 7,6 con HCl) con un 0,1 % de Tween-20). Se añadió tampón de bloqueo (TBST, 5 % de BSA; 50 pL por pocillo) y la placa se incubó durante 1 h a ta. El tampón de bloqueo se eliminó y se añadió el anticuerpo primario (30 pL por pocillo). Se realizaron las siguientes diluciones con tampón de bloqueo: para el anticuerpo anti-H3K27me3 (Cell Signaling Technology, n.° 9733), la dilución fue de 1:1000; para el anticuerpo anti-H3K27me2 (Cell Signaling Technology, n.° 9288), la dilución fue de 1:100; para el anticuerpo anti-H3 (Abcam, n.° de cat.
24834), la dilución fue de 1:1000. El anticuerpo primario se incubó en la placa a ta durante 1 h. Los pocillos se lavaron con TBST y se incubaron con un anticuerpo secundario durante 1 h a ta. Para los anticuerpos secundarios, se llevaron a cabo las siguientes diluciones con tampón de bloqueo: para el anticuerpo anti-conejo (Jackson ImmunoResearch, n.° 111 035-003), la dilución fue de 1:2000; y para el anticuerpo anti-ratón (Cell signaling technology, n.° 7076), la dilución fue de 1:1000. Después de 1 h de incubación a ta, los pocillos se lavaron con TBST. Se añadió sustrato ECL (Pierce, n.° 34080) en una cantidad de 30 pL por pocillo y las placas se centrifugaron a 2000 rpm durante 2 min. La señal se leyó utilizando un lector Envision de PerkinElmer. Las lecturas de la metilación de H3K27 se normalizaron utilizando la señal de H3 y posteriormente se calculó el porcentaje de inhibición respecto a las muestras tratadas con DMSO. Los datos se ajustaron a continuación a una curva de respuesta a la dosis utilizando el programa Helios para obtener los valores de CI50 del compuesto de prueba.
Análisis por inmunoelectrotransferencia
Los compuestos representativos de la presente invención se analizaron para determinar su capacidad de inhibir de manera selectiva PRC2. Se realizó la inmunoelectrotrasnferencia utilizando técnicas estándar de biología molecular. Las células se sometieron a lisis en tampón de lisis SDS (Millipore, n.° de cat. 20-163) y la concentración de la proteína se midió con un ensayo de proteínas con BCA (Pierce, n.° de cat. PI-23221). Anticuerpos para las inmunoelectrotransferencias: anti-EZH2 (n.° 3147), anti-H3 (n.° 9715), anti-H3K4me1 (n.° 9723), anti-H3K4me2 (n.° 9725), anti-H3K4me3 (n.° 9727), anti-H3K9me2 (n.° 9753), anti-H3K36me2 (n.° 9758), anti-H3K27me2 (n.° 9755) y anti-H3K27me3 (n.° 9756) se adquirieron<de Cell Signaling Technology (Danvers, MA, e>E.<UU.). Anti-H3K9me1 (n.° 07-395), anti-H3K27me1 (n.° 07-448) y anti->H3K36me1 (n.° 07-548) se adquirieron de Millipore (Billerica, MA, EE. UU.). Anti-H3K36me3 (ab9050-100) se adquirió de<Abcam (Cambridge, Reino Unido). Anti-H3K9me3 (n.° 39161) se adquirió de Active Motif (Carlsbad, CA,>Ee.<UU.).>
Los compuestos de la presente invención inhiben específicamente la metilación del sustrato H3K26 de PRC2. Esto se puede demostrar mediante su capacidad de inhibir H3K27me2 y H3K27me3 en varias líneas de células cancerosas humanas, cuyos ejemplos incluyen células rhabdoides (G401) y células de linfoma (WSU-DLCL2, KARPAS422, SU-DHL4). Se obtiene un perfil de selectividad respecto a una serie de marcadores de metilación distintos, por ejemplo: H3K4me2; H3K9me2; H3K36me3 y H3K79me3.
Análisis de la proliferación celular
Se cultivaron células de linfoma de linfocitos B KARPAS422 utilizando condiciones de cultivo celular estándar en RPMI-1640 (Invitrogen, n.° de cat. 11875) complementado con un 15 % de FBS (Invitrogen, n.° de cat. 10099-141) en una incubadora humidificada a 37 °C, con un 5 % de CO2. Para evaluar el efecto de la inhibición de PRC2 sobre la proliferación celular, se sembraron células en crecimiento exponencial con una densidad de 1 x<10>5 células/mL en una placa de 12 pocillos (Corning, n.° de cat. CLS3513). Después de la siembra celular, se añadió un compuesto de la presente invención al medio celular (en concentraciones que varían de 0 a 100 pM, serie de diluciones 3x). Se determinaron los números de células viables cada 3-4 días hasta 14 días utilizando Vi-CELL (Beckman Coulter). En los días de recuento de células, se repuso medio de crecimiento fresco y el compuesto y las células se dividieron para volver a una densidad de 1 x<10>5 células/mL. El número de células totales se expresa como células viables ajustadas según la división por mL. Las curvas de respuesta a la dosis y los valores de CI50 se generaron utilizando Prism.
Análisis de las propiedades farmacocinéticas
Las propiedades farmacocinéticas de los compuestos según se divulgan en el presente documento se pueden determinar utilizando el protocolo que se describe a continuación.
Se disolvió un compuesto representativo de la presente invención en un 10 % de PEG300, 10 % de Solutol HS 15 y 80 % de tampón acetato de pH 4,65 para generar una concentración final de 0,2 mg/mL para la administración intravenosa (IV) y oral (PO).
Para los estudios PK en ratas, se utilizaron en total tres ratas Sprague Dawley macho para cada estudio PK IV y PO en ratas, respectivamente. La solución de la formulación se administró mediante un único bolo IV de 1 mg/kg y una única sonda oral (PO) de 2 mg/kg,
respectivamente. Se recogieron muestras de sangre (aproximadamente 150 pL) mediante una cánula yugular en puntos temporales apropiados.
Para el estudio de PK en ratones se utilizó un total de doce ratones ICR macho para el estudio IV y PO, respectivamente. La solución de la formulación se administró mediante un único bolo IV de 1 mg/kg y una única sonda oral (PO) de 2 mg/kg, respectivamente. Las muestras de sangre (aproximadamente 150 pL) se recogieron mediante punción retroorbital (~150 pL/ratón) después de anestesiar con isoflurano o mediante punción cardiaca (recogida terminal) en puntos temporales apropiados (n=3).
Las muestras se recogieron en tubos que contenían K3-EDTA y se almacenaron en hielo hasta que se centrifugaron. Las muestras de sangre se centrifugaron a aproximadamente 8000 rpm durante 6 min a 2-8 °C y el plasma resultante se separó y se almacenó congelado a aproximadamente -80 °C. Después de añadir el patrón interno, las muestras de plasma se cuantificaron mediante LC-MS/MS utilizando la curva de calibración. Se calcularon parámetros farmacocinéticos, que incluyeron el área bajo la curva de concentración (AUC), el tiempo medio de permanencia (MRT), el aclaramiento plasmático (CI), el volumen de distribución en estado estacionario (Vdss), la semivida de eliminación (t<1>/<2>), la concentración máxima (Cmáx), el tiempo de concentración máxima (Tmáx) y la biodisponibilidad oral (F %), utilizando las siguientes ecuaciones:
T t c d tM C
MRT = ■-<1>-<o>Al
--- - --- -I\t * O
f ” C d t
J 0
t es el tiempo y C es la concentración plasmática en el tiempo (t);
La dosisiv es la dosis para la administración intravenosa; y la dosisoral es la dosis para la administración oral.
CI= Dosis.IV /AUC
ti/2 = 0.693 x MRT
Vdss =CI* MRT
F %= (Dos¡s¡vxAUCorai)/ Dosisora|xAUC¡v)x 100%
Protocolo para el ensayo de alta capacidad de solubilidad en el equilibrio
Los compuestos de la presente invención se solubilizaron en primer lugar con una concentración 10 mM en DMSO puro. A continuación, se transfirieron 20 pL en cada caso de la solución madre de DMSO a 6 pocillos de una placa de 96 pocillos. El disolvente DMSO se secó con un evaporador de disolventes GeneVac a 30 °C, con un vacío de 1 mbar durante 1 h. Después de la adición de 200 pL de soluciones tampón (pH 6,8 o FaSSIF), la placa se selló y se agitó a 160 rpm durante 24 h a ta. La placa se centrifugó a 3750 rpm durante 20 min, 5 pL de sobrenadante se mezclaron con 495 pL de MeOH/H2O (1:1). Se prepararon soluciones madre de 0,01 pM, 0,1 pM, 1 pM, 10 pM mediante una serie de diluciones para las curvas de calibración. El sobrenadante se cuantificó mediante HPLC o LC/MS utilizando la curva de calibración. La solubilidad en el equilibrio de alta capacidad se determinó en función de la concentración del sobrenadante.
Estudios de eficacia en un modelo de xenoinjerto de ratones
Todos los experimentos realizados se llevaron a cabo en ratones atímicos hembra Nude-nu en una instalación con certificación AAALAC. Los animales se mantuvieron en condiciones SPF en jaulas con ventilación individuales a una temperatura y humedad constantes (es decir, 20-26 °C; 40-70 %) con 5 o menos animales en cada jaula. Los animales tuvieron acceso libre a comida en gránulos secos esterilizados por irradiación y agua potable estéril. Todos los procedimientos y protocolos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales.
Las células Karpas 422 de linfoma de linfocitos B humanos se cultivaron en medio RPMI-1640 (Gibco; 11875-093) complementado con un 15 % de FBS (Gibco; 10099-141) y un 1 % de penicilina-estreptomicina (Gibco; 15140-122) a 37 °C en una atmósfera con un 5 % de CO2 en aire. Las células se mantuvieron en cultivos en suspensión con concentraciones entre 0,5 - 2 x 106 células/mL. Las células se dividieron a 1:3 cada 2-4 días. Para establecer los modelos tumorales de xenoinjerto, las células se recolectaron, se suspendieron en PBS, se mezclaron con Matrigel (BD Bioscience) en una relación volumétrica de 1:1 con una concentración de 1x108 células/mL y posteriormente se inyectaron por vía subcutánea en el flanco derecho de ratones atímicos balb/c (Vital River) con una concentración de 5x106 células por animal.
El compuesto se formuló como una suspensión en metilcelulosa (MC) al 0,5 % y Tween 80 al 0,5 % en tampón 50 mM de pH 6,8 (que se preparó en las propias instalaciones de acuerdo con la USP) y se administró por vía oral con sonda a dosis específicas.
El tratamiento se inició cuando el volumen del tumor medio alcanzó 100-300 mm3. El crecimiento tumoral y los pesos corporales se monitorizaron a intervalos regulares. Los dos diámetros más largos, la anchura (A) y la longitud (L) de los tumores del xenoinjerto se midieron manualmente con calibradores y el volumen tumoral se estimó utilizando la fórmula: 0.5 x L x A2.
Cuando proceda, los resultados se presentan como la media ± EEM. Los gráficos y el análisis estadístico se realizaron utilizando GraphPad Prism 5.00 (software GraphPad). Los datos de cambios tumorales y del peso corporal se analizaron estadísticamente. Si las varianzas en los datos estuvieron distribuidas normalmente (prueba de Bartlett para varianzas iguales), los datos se analizaron utilizando ANOVA de una vía con prueba de Dunnetpost hocpara la comparación del grupo de tratamiento respecto al de control. Se utilizó la prueba de Tukeypost hocpara la comparación intragrupal. Si este no fue el caso, se utilizó la prueba en rangos de Kruskal-Wallis con Dunnpost hoc.
Como una medida de la eficacia, se calcula el valor de % T/C al final del experimento de acuerdo con:
(A volumen tumoraltratado/A volumen tumoralcontrol)*100
La regresión del tumor se calculó de acuerdo con:
-(Avolum en tum oraltratad0/volumen tumoraFatadoal“ mienz° )*100
Donde Avolumen tumoral representa el volumen tumoral medio en el día de la evaluación menos el volumen tumoral medio al comienzo del experimento.
Se evaluó N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina en los ensayos con EED (a) Alphascreen de unión, cualificado, (b) LC-MS, cualificado y (c) ELISA, cualificado, que se han descrito anteriormente se observó que tenía actividad inhibidora de EED.
Las actividades antiproliferativas (valores de CI50) en las células de linfoma de linfocitos B KARPAS422 después de 14 días de tratamiento para N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina son de 0,0030 pM.
En consecuencia, se ha observado que N-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina inhibe EED y, por lo tanto, es útil en el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con EED y PRC2 que incluyen, sin carácter limitante, linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), linfoma folicular, otros linfomas, leucemia, mieloma múltiple, mesotelioma, cáncer gástrico, tumor rhabdoide maligno, carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, carcinoma de mama, cánceres de las vías biliares y vesícula biliar, carcinoma de vejiga, tumores cerebrales que incluyen neuroblastoma, glioma, glioblastoma y astrocitoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de colon, melanoma, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, carcinoma nasofaríngeo, cáncer ovárico, cáncer pancreático, carcinoma de células renales, cáncer rectal, cánceres de tiroides, tumores de paratiroides, tumores uterinos y sarcomas de tejidos blandos seleccionados entre rhabdomiosarcoma (RMS), sarcoma de Kaposi, sarcoma sinovial, osteosarcoma y sarcoma de Ewing.
V. COMPOSICIONES Y COMBINACIONES FARMACÉUTICAS
Un «portador (diluyente o excipiente) farmacéuticamente aceptable» se refiere a medios generalmente aceptados en la técnica para el suministro de agentes biológicamente activos a animales, en particular mamíferos, que incluyen disolventes, medios de dispersión, revestimientos, tensioactivos, antioxidantes, conservantes (p. ej., agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardadores de la absorción, sales, conservantes, estabilizadores de fármacos, aglutinantes, agentes tampón (p. ej., ácido maleico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido acético, bicarbonato de sodio, fosfato de sodio y similares), agentes de desintegración, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, colorantes y similares y combinaciones de estos, todos ellos generalmente reconocidos como seguros (GRAS, por sus siglas en inglés) con los que estarán familiarizados los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Allen, LV, Jr.et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy(2 Volúmenes), 22.a Edición, Pharmaceutical Press (2012). Las formulaciones se pueden preparar utilizando procedimientos convencionales de mezcla y disolución. Por ejemplo, la masa de la sustancia farmacológica (es decir, el compuesto de la presente invención o una forma estabilizada del compuesto (p. ej., un complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente de complejación conocido)) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente.
El Compuesto X se puede administrar para cualquiera de los usos descritos en el presente documento mediante cualquier medio adecuado, por ejemplo, por vía oral, tal como comprimidos, cápsulas (cada una de las cuales incluye formulaciones de liberación sostenida o de liberación retardada), pastillas, polvos, gránulos, elixires, tinturas, suspensiones (que incluyen nanosuspensiones, microsuspensiones, dispersiones secadas por pulverización), jarabes y emulsiones; por vía sublingual; bucal; parenteral, tal como mediante inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular o intrasternal, o técnicas de infusión (p. ej., como suspensiones o soluciones acuosas o no acuosas estériles, inyectables); por vía nasal, que incluye la administración a las membranas nasales, tal como mediante un espray de inhalación; por vía tópica, tal como en forma de una crema o ungüento; o por vía rectal tal como en forma de supositorios. Se pueden administrar solos, pero por lo general se administran con un portador farmacéutico seleccionado basándose en la ruta de administración elegida y la práctica farmacéutica estándar.
El Compuesto X se formula normalmente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosis fácilmente controlable del fármaco y para proporcionar al paciente un producto elegante y fácilmente manejable. La pauta posológica para los compuestos de la presente invención, obviamente, variará dependiendo de factores conocidos tales como las características farmacodinámicas del agente particular y su modo y ruta de administración; la especie, edad, sexo, salud, estado médico y peso del receptor; la naturaleza y extensión de los síntomas; el tipo de tratamiento simultáneo; la frecuencia del tratamiento; la ruta de administración, la función renal y hepática del paciente y el efecto deseado. El Compuesto X se puede administrar como una única dosis diaria, o la dosificación diaria total se puede administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día.
En ciertos casos, puede resultar ventajoso administrar el Compuesto X combinado con al menos un agente farmacéutico (o terapéutico) adicional, tal como otros agentes anticancerosos, inmunomoduladores, agentes antialérgicos, agentes contra las náuseas (o antieméticos), analgésicos, agentes citoprotectores y combinaciones de estos.
La expresión «terapia combinada» se refiere a la administración de dos o más agentes terapéuticos para tratar una afección, enfermedad o trastorno terapéutico que se describe en la presente invención. Una administración de este tipo engloba la coadministración de estos agentes terapéuticos de una manera sustancialmente simultánea, tal como en una única cápsula que tiene una proporción fija de los principios activos. De manera alternativa, una administración de este tipo engloba la coadministración en recipientes múltiples o independientes (p. ej., cápsulas, polvos y líquidos) para cada principio activo. El Compuesto X y los agentes terapéuticos adicionales se pueden administrar por la misma vía de administración o por vías de administración diferentes. Los polvos y/o líquidos se pueden reconstituir o diluir hasta una dosis deseada antes de la administración. Además, una administración de este tipo también incluye el uso de cada tipo de agente terapéutico de manera secuencial, ya sea aproximadamente al mismo tiempo o en momentos diferentes. En cualquier caso, la pauta de tratamiento proporcionará efectos beneficiosos de la combinación farmacológica para tratar las afecciones o trastornos descritos en el presente documento.
Los agentes quimioterápicos generales considerados para su uso en terapias combinadas incluyen anastrozol (Arimidex®), bicalutamida (Casodex®), sulfato de bleomicina (Blenoxane®), busulfán (Myleran®), busulfán para inyección (Busulfex®), capecitabina (Xeloda®), W4-pentoxicarbonil-5-desoxi-5-fluorocitidina, carboplatino (Paraplatin®), carmustina (BiCNU®), clorambucilo (Leukeran®), cisplatino (Platinol®), cladribina (Leustatin®), ciclofosfamida (Cytoxan® o Neosar®), citarabina, arabinósido de citosina (Cytosar-U®), citarabina en liposomas para inyección (DepoCyt®), dacarbazina (DTIC-Dome®), dactinomicina (Actinomicina D, Cosmegan), clorhidrato de daunorrubicina (Cerubidine®), citrato de daunorrubicina en liposomas para inyección (DaunoXome®), dexametasona, docetaxel (Taxotere®), clorhidrato de doxorrubicina (Adriamycin®, Rubex®), etopósido (Vepesid®), fosfato de fludarabina (Fludara®), 5-fluorouracilo (Adrucil®, Efudex®), flutamida (Eulexin®), tezacitibina, Gemcitabina (difluorodesoxicitidina), hidroxiurea (Hydrea®), Idarrubicina (Idamycin®), ifosfamida (IFEX®), irinotecán (Camptosar®), L-asparaginasa (ELSPAR®), leucovorina de calcio, melfalán (Alkeran®), 6-mercaptopurina (Purinethol®), metotrexato (Folex®), mitoxantrona (Novantrone®), milotarg, paclitaxel (Taxol®), nabpaclitaxel (Abraxane®), phoenix (Ytrio90/MX-DTPA), pentostatina, polifeprosán 20 con implante de carmustina (Gliadel®), citrato de tamoxifeno (Nolvadex®), tenipósido (Vumon®), 6-tioguanina, tiotepa, tirapazamina (Tirazone®), clorhidrato de topotecán para inyección (Hycamptin®), vinblastina (Velban®), vincristina (Oncovin®) y vinorelbina (Navelbine®).
Los agentes anticancerosos de particular interés para las combinaciones con el Compuesto X pueden incluir: inhibidores de cinasas dependientes de ciclina (CDK), inhibidores de cinasas de punto de control (CHK), inhibidores de C-RAF, inhibidores de fosfoinositida 3-cinasas (PI3K), inhibidores de BCL-2, inhibidores de proteína cinasas activadas por mitógenos (MEK), inhibidores de topoisomerasa II, inhibidores de SRC, inhibidores de histona-desacetilasas (HDAC), antibióticos antitumorales, agentes de desmetilación y antiestrógenos.
Algunos pacientes pueden experimentar reacciones alérgicas a los compuestos de la presente invención y/u otro(s) agente(s) anticanceroso(s) durante o después de la administración; por lo tanto, a menudo se administran agentes antialérgicos para minimizar el riesgo de una reacción alérgica. Los agentes antialérgicos adecuados incluyen corticosteroides (Knutson, S.et al., PLoS One,DOI:10.1371/journal.pone.0111840 (2014)) tales como dexametasona (p. ej., Decadron®), beclometasona (p. ej., Beclovent®), hidrocortisona (también conocida como cortisona, succinato sódico de hidrocortisona, fosfato sódico de hidrocortisona, y comercializada con los nombres comerciales Ala-Cort®, fosfato de hidrocortisona, Solu-Cortef®, Hydrocort Acetate® y Lanacort®), prednisolona (comercializada con los nombres comerciales Delta-Cortel®, Orapred®, Pediapred® y Prelone®), prednisona (comercializada con los nombres comerciales Deltasone®, Liquid Red®, Meticorten® y Orasone®), metilprednisolona (también conocida como 6-metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona, comercializada con los nombres comerciales Duralone®, Medralone®, Medrol®, M-Prednisol® y Solu-Medrol®); antihistamínicos tales como difenhidramina (p. ej., Benadryl®), hidroxizina y ciproheptadina; y broncodilatadores tales como los agonistas de los receptores beta-adrenérgicos, albuterol (p. ej., Proventil®) y terbutalina (Brethine®).
Los inmunomoduladores de particular interés para combinaciones con los compuestos de la presente invención incluyen uno o más de: un activador de una molécula coestimuladora o un inhibidor de una molécula que es un punto de control inmunitario (p. ej., uno o más inhibidores de PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 o CTLA4) o cualquier combinación de estos.
En ciertas realizaciones, el inmunomodulador es un activador de una molécula coestimuladora. En una realización, el agonista de la molécula coestimuladora se elige entre un agonista (p. ej., un anticuerpo agonista o fragmento de unión al<antígeno de este, o una fusión soluble) de ligando de OX40,>Cd2,<CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS>(CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 o CD83.
En ciertas realizaciones, el inmunomodulador es un inhibidor de una molécula que es un punto de control inmunitario. En<una realización, el inmunomodulador es un inhibidor de PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4,>TiM3,<LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT,>LAIR1, CD160, 2B4 y/o TGFR beta. En una realización, el inhibidor de una molécula que es un punto de control inmunitario inhibe PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 o CTLA4, o cualquier combinación de estos. El término «inhibición» o «inhibidor» incluye una reducción en un cierto parámetro, p. ej., una actividad, de una molécula concreta, p. ej., un inhibidor de un punto de control inmunitario. Por ejemplo, la inhibición de una actividad, p. ej., una actividad de PD-1 o PD-L1, de al menos 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 % o más está incluida en este término. Por lo tanto, no es necesario que la inhibición sea de un 100 %.
Algunos pacientes pueden experimentar náuseas durante y después de la administración del compuesto de la presente invención y/u otro(s) agente(s) anticanceroso(s); por lo tanto, se utilizan antieméticos para prevenir las náuseas (estómago superior) y vómitos. Los antieméticos adecuados incluyen aprepitant (Emend®), ondansetrón (Zofran®), granisetrón HCl (Kytril®), lorazepam (Ativan®, dexametasona (Decadron®), proclorperazina (Compazine®), casopitant (Rezonic® y Zunrisa®) y combinaciones de estos.
A menudo se prescriben medicamentos para aliviar el dolor experimentado durante el periodo de tratamiento para hacer que el paciente se sienta más cómodo. A menudo se utilizan analgésicos comunes que no necesitan receta, tales como Tylenol®. Sin embargo, los analgésicos opioides, tales como hidrocodona/paracetamol o hidrocodona/acetaminofeno (p. ej., Vicodin®), morfina (p. ej., Astramorph® o Avinza®), oxicodona (p. ej., OxyContin® o Percocet®), clorhidrato de oximorfona (Opana®) y fentanilo (p. ej., Duragesic®) también son útiles para el dolor moderado o intenso.
En un intento de proteger las células normales de la toxicidad del tratamiento y de limitar la toxicidad a los órganos, se pueden utilizar como una terapia complementaria agentes citoprotectores (tales como neuroprotectores, atrapadores de radicales libres, cardioprotectores, neutralizadores de la extravasación de antraciclina, nutrientes y similares). Los agentes citoprotectores adecuados incluyen Amifostina (Ethyol®), glutamina, dimesna (Tavocept®), mesna (Mesnex®), dexrazoxana (Zinecard® o Totect®), xaliprodén (Xaprila®) y leucovorina (también conocida como leucovorina cálcica, factor de citrovorum y ácido folínico).
La estructura de los compuestos activos identificados con números de código, denominaciones comerciales o genéricas se puede consultar en la edición actual del compendio estándar «The Merck Index» o en bases de datos, p. ej., Patents International (p. ej., IMS World Publications).
En una realización, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden el Compuesto X junto con un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración a un sujeto humano o animal, ya sea solo o junto con otros agentes anticancerosos.
En una realización, la presente invención se refiere a las formas sólidas descritas anteriormente para su uso en el tratamiento de sujetos humanos o animales que padecen una enfermedad proliferativa celular tal como un cáncer. Esto puede comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención (p. ej., un compuesto de la presente invención) o una sal farmacéuticamente aceptable de este, ya sea solo o combinado con otros agentes anticancerosos.
En particular, las composiciones se formularán juntas como un agente terapéutico combinado o se administrarán por separado.
En la terapia combinada para el tratamiento de una neoplasia maligna, el Compuesto X y otro(s) agente(s) anticanceroso(s) se pueden administrar de manera simultánea, concurrente o secuencial sin límites de tiempo específicos, en donde una administración de este tipo proporciona niveles terapéuticamente eficaces de los dos compuestos en el cuerpo del sujeto.
En una realización preferida, el Compuesto X y el (los) otro(s) agente(s) anticanceroso(s) se administran generalmente de manera secuencial en cualquier orden por infusión o vía oral. La pauta posológica puede variar dependiendo del estadio de la enfermedad, estado físico del paciente, perfiles de seguridad de los fármacos individuales y tolerancia de los fármacos individuales, así como también otros criterios muy conocidos por el médico especialista y médico(s) general(es) que administran la combinación. El compuesto de la presente invención y otro(s) agente(s) anticanceroso(s) se pueden administrar con una separación entre ellos de unos minutos, horas, días o incluso semanas dependiendo del ciclo particular que se esté utilizando para el tratamiento. Además, el ciclo podría incluir la administración de un fármaco más a menudo que el otro durante el ciclo de tratamiento y con dosis diferentes por administración del fármaco.
En otro aspecto de la presente invención, se proporcionan kits que incluyen el Compuesto X y un miembro de la combinación tal como se divulga en el presente documento. Los kits representativos incluyen (a) el Compuesto X, (b) al menos un miembro de la combinación, p. ej., tal como se ha indicado anteriormente, conforme a lo cual un kit de este tipo puede comprender un prospecto u otra ficha técnica que incluye directrices para la administración.
El Compuesto X también se puede utilizar para su conveniencia combinado con procesos terapéuticos conocidos, por ejemplo, la administración de hormonas o especialmente radiación. El Compuesto X se puede utilizar en particular como radiosensibilizador, especialmente para el tratamiento de tumores que muestran poca sensibilidad a la radioterapia.
En otro aspecto de la presente invención, se proporcionan kits que incluyen el Compuesto X y un miembro de la combinación tal como se divulga en el presente documento. Los kits representativos incluyen (a) el Compuesto X, (b) al menos un miembro de la combinación, p. ej., tal como se ha indicado anteriormente, conforme a lo cual un kit de este tipo puede comprender un prospecto u otra ficha técnica que incluye directrices para la administración.
En las terapias combinadas de la invención, el Compuesto X y el otro agente terapéutico pueden ser elaborados y/o formulados por el mismo fabricante o por diferentes fabricantes. Además, el Compuesto X y el otro agente terapéutico (o farmacéutico) se pueden integrar en una terapia combinada: (i) antes de dispensar el producto combinado a los facultativos (p. ej., en el caso de un kit que comprende el Compuesto X y el otro agente terapéutico); (ii) por parte de los propios facultativos (o bajo la dirección del facultativo) poco antes de la administración; (iii) en los propios pacientes, p. ej., durante la administración secuencial del Compuesto X y el otro agente terapéutico.
La composición (o formulación) farmacéutica para la aplicación se puede envasar de diversas formas dependiendo del método utilizado para administrar el fármaco. Generalmente, un artículo para distribución incluye un recipiente en el que se ha depositado la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los expertos en la técnica estarán familiarizados con los recipientes adecuados y estos incluyen materiales tales como botellas (de plástico y vidrio), sobres, ampollas, bolsas de plástico, cilindros metálicos y similares. El recipiente también puede incluir un ensamblaje a prueba de manipulaciones para evitar un acceso indiscreto al contenido del recipiente. Además, el recipiente tiene depositada en él una etiqueta que describe el contenido del recipiente. La etiqueta también puede incluir advertencias apropiadas.

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Una forma cristalina del clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1.2.4] triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina, en donde dicha forma cristalina contiene menos de un 0,5 % en peso de disolvente orgánico residual.
2. Una forma cristalina del clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1.2.4] triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende valores de 20 (Ka de Cu A = 1,5418 A) de 12,5 ± 0,1, 13,0 ± 0,1,25,2 ± 0,1 y 30,8 ± 0,1.
3. La forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, que exhibe un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente igual al que se muestra en la Figura 1.
4. Una forma sólida hidratada del clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1.2.4] triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina.
5. La forma sólida hidratada de acuerdo con la reivindicación 4, en donde dicha forma hidratada es la Forma H<a>monohidratada que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende los siguientes valores de 20 (°) (Ka de Cu A = 1,5418 A): 13,8 ± 0,1, 20,8 ± 0,1,26,2 ± 0,1, 26,7 ± 0,1 y 28,2 ± 0,1.
6. La forma sólida hidratada de acuerdo con la reivindicación 4, en donde dicha forma hidratada es la Forma H<b>dihidratada que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende los siguientes valores de 20 (°) (Ka de Cu A = 1,5418 A): 9,0 ± 0,1, 17,1 ± 0,1,22,8 ± 0,1, 26,9 ± 0,1 y 35,3 ± 0,1.
7. Una composición farmacéutica, que comprende uno o más portadores farmacéuticamente aceptables y clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina cristalino de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7 que comprende además al menos un agente terapéutico adicional.
9. El clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina cristalino de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en terapia.
10. El clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina cristalino de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha terapia es el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por EED y/o PRC2, en donde dicha enfermedad o trastorno se selecciona entre linfoma difuso de linfocitos B grandes, linfoma folicular, otros linfomas, leucemia, mieloma múltiple, mesotelioma, cáncer gástrico, tumor rhabdoide maligno, carcinoma hepatocelular, cáncer de próstata, carcinoma de mama, cánceres de las vías biliares y vesícula biliar, carcinoma de vejiga, tumores cerebrales que incluyen neuroblastoma, schwannoma, glioma, glioblastoma y astrocitoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de colon, melanoma, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de pulmón, carcinoma nasofaríngeo, cáncer ovárico, cáncer pancreático, carcinoma de células renales, cáncer rectal, cánceres de tiroides, tumores de paratiroides, tumores uterinos y sarcomas de tejidos blandos.
11. Un proceso para preparar la Forma A cristalina anhidra del clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente con ácido clorhídrico a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para obtener la Forma A anhidra del clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina.
12. El proceso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el disolvente orgánico miscible en agua es etanol y la proporción de EtOH es de un 80 a un 100 % en peso.
13. Un proceso para preparar la Forma cristalina de la reivindicación 1, que comprende los pasos de:
1) suspender W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina (Compuesto A) en una mezcla de agua y disolvente orgánico miscible en agua;
2) calentar la suspensión resultante hasta aproximadamente 50 °C o más;
3) acidificar la suspensión resultante para formar una solución transparente a la vez que se mantiene la temperatura a aproximadamente 50 °C o más; y
4) reducir la temperatura de la solución resultante para obtener el clorhidrato de W-((5-fluoro-2,3-dihidrobenzofuran-4-il)metil)-8-(2-metilpiridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-c]pirimidin-5-amina cristalino.
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