ES2955844T3 - Formulación tópica para promover la curación de heridas - Google Patents

Abstract

Una formulación tópica que comprende un agente activo, un agente que aumenta la viscosidad, una base para ungüento, un conservante antimicrobiano y un agente emulsionante, en donde el agente activo comprende salvigenina y opcionalmente asiaticósido. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Formulación tópica para promover la curación de heridas

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de la fecha de presentación de la Solicitud Provisional de Estados Unidos N° 62/363,284, presentada el 17 de julio de 2016.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La Plectranthus amboinicus (también conocida anteriormente o alternativamente como Coleus amboinicus Lour., Coleus aromaticus Benth., Coleus aromaticus auct., Plectranthus aromaticus Roxb., Plectranthus aromaticus Benth., y Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng.), es una hierba medicinal perenne de la familia Lamiaceae (también conocida como Labiatae) nativa del sur y este de África. La Plectranthus amboinicus también se conoce como pachulí, orégano cubano, borraja india, menta india, menta mexicana, orégano mexicano, borraja campestre y tomillo español.

La Centella asiatica (también conocida anteriormente o alternativamente como Centella asiatica Urban, Centella asiatica (L.) Urban, Hydrocotyle asiatica L. y Trisanthus cochinchinensis Lour.) es una planta medicinal perenne de la familia Mackinlayaceae o subfamilia Mackinlayoideae de las Apiaceae (también conocida como Umbelliferae) familia nativa de Asia, África y América del Sur. La Centella asiatica también se conoce como maravilla de agua europea, gotu kola, kola, pennywort, pennywort indio, pennywort de pantano, pennyweed, ginseng indio, hierba de pezuña de caballo, pegaga, mandookaparni, tigre herbal, spadeleaf o Tono. Los extractos de Centella asiatica generalmente comprenden dos compuestos principales: asiaticósido y ácido madecásico.

La US 2007/237841 divulga composiciones aplicadas tópicamente, que comprenden extractos de Plectranthus amboinicus y Centella asiatica para tratar trastornos de la piel que incluyen potenciar la curación de heridas para pacientes diabéticos. Los componentes activos principales de la Centella asiatica comprenden asiaticósido y ácido madecásico.

La EP 1925310 A1 divulga composiciones que comprenden extractos de Plectranthus amboinicus para potenciar la curación de heridas en pacientes diabéticos.

La US 2013/309337 divulga composiciones farmacéuticas tópicas para tratar trastornos de la piel, que comprenden extractos brutos de Plectranthus amboinicus y extractos de Centella asiatica Urban

Grayer et al. divulgan en Biochemical Systematics and Ecology 38 (2010), 335-341, la presencia y distribución de flavonoides de exudados en Plecanthus y Coleus. Se descubrió que los flavonoides más comunes que se producían en ambos clados eran cismaritina y salvigenina.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente divulgación se basa, por lo menos en parte, en los efectos terapéuticos superiores de una formulación tópica que comprende una combinación de un extracto de Plectranthus amboinicus y un extracto de Centella asiatica como se describe en la presente, que comprende salvigenina y/o asiaticósido, para promover la curación de heridas, por ejemplo, en pacientes diabéticos que tienen úlcera de pie diabético. Por ejemplo, la formulación tópica mejoró con éxito la curación la úlcera de pie en pacientes diabéticos y la eficacia fue mucho más alta que el Aquacel®, un control positivo. La aplicación local de la formulación tópica también mostró una distribución sistémica limitada de por lo menos los ingredientes activos de la misma (salvigenina y/o asiaticósido) en pacientes con DFU, y se descubrió que era segura en los pacientes.

Por consiguiente, en la presente se proporciona una formulación tópica que comprende: (i) un agente activo que comprende salvigenina en una cantidad de aproximadamente el 0,0001% al 0,5% (p/p) (por ejemplo, de aproximadamente el 0,0001% al 0,1% en peso) y asiaticósido en una cantidad de aproximadamente el 0,05% al 5% (p/p) (por ejemplo, de aproximadamente el 0,05% al 1% en peso); (ii) un agente que aumenta la viscosidad en una cantidad de aproximadamente el 1,0-10% (p/p); (iii) una base para pomadas en una cantidad de aproximadamente el 5-30% (p/p); (iv) un conservante antimicrobiano en una cantidad de aproximadamente el 0,005-0,2% (p/p); y (v) un agente emulsionante en una cantidad de aproximadamente el 0,5-10% (p/p).

En algunas realizaciones, el agente activo es un extracto de Plectranthus amboinicus (PA), un extracto de Centella asiatica (CA), o una combinación de extractos de PA y CA, que (individualmente o en combinación) comprende salvigenina y asiaticósido.

En una realización, el agente activo es una combinación del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica. El agente activo puede ser de aproximadamente el 0,1-30% (p/p) y comprende por lo menos salvigenina y asiaticósido. En algunos casos, la formulación tópica puede comprender salvigenina en un intervalo de aproximadamente el 0,0001% al 0,5% (p/p), por ejemplo, de aproximadamente el 0,0001% al 0,1% (p/p). En algunos casos, la formulación tópica puede comprender salvigenina en un intervalo de aproximadamente el 0,0001% al 0,1% (p/p) y asiaticósido en un intervalo del 0,05% al 1% (p/p). En cualquiera de las formulaciones tópicas descritas en la presente, el agente activo en la misma puede comprender además cirsimaritina, madecasósido o una combinación de los mismos.

El extracto de Plectranthus amboinicus puede ser de aproximadamente el 0,1-5% (p/p) o de aproximadamente el 0,1-1% (p/p) en la formulación tópica. En algunas realizaciones, el extracto de Plectranthus amboinicus comprende flavonoides, aceites esenciales, compuestos fenólicos, terpenoides o una combinación de los mismos.

El extracto de Plectranthus amboinicus puede prepararse poniendo en contacto una Plectranthus amboinicus completa o una parte de la misma con un solvente que tenga un índice de polaridad menor de 7 (por ejemplo, menor de 5) para producir una solución y secando la solución para producir el extracto de Plectranthus amboinicus. En una realización específica, el extracto de Plectranthus amboinicus se prepara mediante un proceso que comprende: (i) poner en contacto una Plectranthus amboinicus completa o una parte de la misma con un alcohol (por ejemplo, etanol) para producir un extracto bruto de Plectranthus amboinicus; (ii) poner en contacto el extracto bruto de Plectranthus amboinicus con una resina adsorbente no iónica; iii) eluir la resina adsorbente no iónica con un solvente que tenga un índice de polaridad menor de 7 (por ejemplo, menor de 5) para producir una solución; y iv) secar la solución para producir el extracto de Plectranthus amboinicus.

Alternativa o adicionalmente, el extracto de Centella asiatica puede comprender asiaticósido, madecasósido o ambos. En algunas realizaciones, el extracto de Centella asiatica es de aproximadamente el 0,1-20% (p/p) o de aproximadamente el 0,5-5% (p/p) en la formulación tópica.

En algunas realizaciones, la proproción entre el extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica es de aproximadamente 1:10 a aproximadamente 10:1, por ejemplo, aproximadamente de 1:5 a 5:1.

La formulación tópica puede comprender el agente que aumenta la viscosidad en aproximadamente un 1,0-10% (p/p). Los ejemplos de agentes que aumentan la viscosidad incluyen, pero no se limitan a, alcohol cetoestearílico, colesterol, alcohol estearílico, clorocresol, cera blanca, ácido esteárico, alcohol cetílico o una combinación de los mismos.

La formulación tópica puede comprender la base para pomadas en aproximadamente un 5-30% (p/p) (por ejemplo, un 10-30% en peso). En algunos casos, la base para pomadas puede ser una base para cremas. Los ejemplos de base para pomadas incluyen, pero no se limitan a, uno o más compuestos de vaselina (por ejemplo, vaselina líquida, vaselina blanca).

El conservante antimicrobiano en la formulación tópica descrita en la presente puede ser de aproximadamente el 0,005-0,2% (p/p) (por ejemplo, del 0,01-0,2% en peso). Puede comprender uno o más compuestos de parabeno (por ejemplo, metilparabeno y/o propilparabeno).

El agente emulsionante (por ejemplo, Span® 60 y/o Tween® 60) en la formulación tópica puede ser de aproximadamente el 0,5-10 % (p/p) (por ejemplo, el 0,5-6% en peso).

En algunos ejemplos, la formulación tópica descrita en la presente puede comprender la base para pomadas en aproximadamente el 10-30% (p/p), el conservante antimicrobiano en aproximadamente el 0,01-0,2% (p/p) y el agente emulsionante en aproximadamente el 0,5-6% (p/p).

Cualquiera de las formulaciones tópicas descritas en la presente puede comprender además opcionalmente uno o más solventes, por ejemplo, propilenglicol.

En un ejemplo, la formulación tópica descrita en la presente comprende una combinación del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica en una cantidad de aproximadamente el 0,1-30% (p/p), alcohol cetoestearílico en una cantidad de aproximadamente el 1,0-10% (p/p) (por ejemplo, aproximadamente del 2 al 8% o de aproximadamente el 3-7%), una combinación de vaselina blanca y vaselina líquida en una cantidad total de aproximadamente el 5-30% (p/p) (por ejemplo, de aproximadamente el 5-25% o aproximadamente el 5-20%), una combinación de metilparabeno y propilparabeno en una cantidad total de aproximadamente el 0,005-0,2% (p/p), y una combinación de monoestearato de sorbitán y polisorbato 60 en una cantidad total de aproximadamente el 0,5-10% (p/p) (por ejemplo, del 0,5-8% o del 0,5-6%). Dicha formulación tópica puede comprender además propilenglicol en una cantidad de aproximadamente el 2-20% (p/p) (por ejemplo, del 2-10% o del 4-15%).

En otro aspecto, la presente divulgación proporciona un método para la curación de heridas, que comprende administrar la formulación tópica divulgada en la presente en el sitio de una herida de un sujeto con necesidad de ello.

En una realización, la formulación tópica puede administrarse por lo menos una vez al día, por ejemplo, dos veces al día.

En un ejemplo, el sujeto a tratar puede ser un paciente diabético humano que padece úlcera de pie diabético. Por ejemplo, el paciente diabético humano puede tener diabetes tipo I o tipo II. En otro ejemplo, el sujeto es un paciente humano que tiene una herida abierta, por ejemplo, abrasión, incisión, laceración, punción o avulsión. En otro ejemplo, el sujeto es un paciente humano que tiene una herida crónica, que puede ser una herida quirúrgica, una herida traumática, una úlcera por presión, una úlcera venosa, una úlcera diabética o una herida provocada por un carcinoma, una quemadura, dermatitis atópica, úlcera de decúbito. En algunos ejemplos, el sujeto es un paciente humano que tiene acné.

También dentro del alcance de la presente divulgación se encuentran (i) una formulación tópica como se describe en la presente para su uso en la promoción de la cicatrización de heridas, y (ii) usos del extracto de Plectranthus amboinicus, el extracto de Centella asiatica o una combinación de los mismos en la fabricación de un medicamento para uso en la promoción de la cicatrización de heridas, en donde el extracto de Plectranthus amboinicus, el extracto de Centella asiatica o la combinación de los mismos se formula en una formulación tópica como se describe en la presente.

En la descripción siguiente se exponen los detalles de una o más realizaciones de la invención. Otras características o ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de los siguientes dibujos y la descripción detallada de varias realizaciones, y también de las reivindicaciones adjuntas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 es un diagrama de flujo que muestra un proceso ejemplar para preparar extractos de Plectranthus amboinicus.

La Figura 2 es un diagrama de flujo que muestra un proceso ejemplar para preparar extractos de Centella asiatica. Las Figuras 3A y 3B incluyen gráficos que muestran el efecto del extracto de Plectranthus amboinicus (PA) y el extracto de Centella asiatica (CA) sobre la proliferación de células endoteliales según se determina mediante un ensayo de MTT (Figura 3A) y sobre la migración de células endoteliales según se determina mediante un ensayo de raspado (Figura 3B).

Las Figuras 4A y 4B incluyen gráficos que muestran el efecto del extracto de Plectranthus amboinicus (PA) y el extracto de Centella asiatica (CA) sobre la proliferación de células de queratinocitos según se determina mediante un ensayo de SRB (Figura 4A) y sobre la migración de células de queratinocitos según se determina mediante un ensayo de rascado (Figura 4B).

Las Figuras 5A y 5B incluyen un gráfico que muestra el efecto de la salvigenina para promover la curación de heridas en un ensayo de formación de tubos capilares in vitro y un gráfico que muestra el efecto del asiaticósido para promover la migración de queratinocitos.

La Figura 6 es un gráfico que muestra el efecto del extracto de Plectranthus amboinicus (PA) y el extracto de Centella asiatica (CA) sobre la curación normal de heridas en un modelo animal.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE EL INVENTO

Las úlceras en los pies son una complicación común asociada con la diabetes como resultado de la descomposición del tejido de la piel y la exposición de las capas inferiores. Todos los diabéticos están en riesgo de desarrollar úlceras en los pies. Aproximadamente el 15-20% de los diabéticos desarrollarán úlceras en los pies. Entre ellos, aproximadamente el 33% de los pacientes requerirán amputación.

Los tratamientos actualmente disponibles para las úlceras del pie diabético (DFU) incluyen el uso de instrumentos de protección, como zapatos para diabéticos, yesos, aparatos ortopédicos para los pies, vendas de compresión y plantillas para zapatos para prevenir callos y durezas. Tales instrumentos médicos podrían ser costosos y a menudo provocan inconvenientes en la vida diaria de los pacientes. Alternativamente, pueden realizarse procedimientos quirúrgicos para eliminar las úlceras del pie con un desbridamiento. Hasta la fecha, el Regranex® es el único medicamento aprobado por la Food and Drugs Administracion (FDA) para el tratamiento de las DFU. En junio de 2008, la FDA anunció un nuevo cambio en el etiquetado del Regranex® para indicar que había un riesgo cinco veces mayor de mortalidad por cáncer en el grupo expuesto a Regranex®.

La presente divulgación se basa, por lo menos en parte, en el desarrollo de una formulación tópica que comprende una combinación de un extracto de Plectranthus amboinicus y un extracto de Centella asiatica, que mostró una eficacia significativamente mayor para promover la curación de heridas y efectos secundarios bajos en pacientes con DFU. Esta formulación tópica es a base de cremas y comprende por lo menos aproximadamente de un 0,0001% a un 0,5% (p/p) de salvigenina como ingrediente activo. En algunas realizaciones, la formulación tópica puede comprender además aproximadamente de un 0,05% a un 5% (p/p) de asiaticósido como ingrediente activo adicional. La formulación tópica comprende además aproximadamente un 1,0-10% (p/p) de agente o agentes que aumentan la viscosidad, aproximadamente un 5-30% (p/p) de base o bases para pomada (por ejemplo, base para cremas), aproximadamente un 0,005-0,2% (p/p) conservante o conservantes antimicrobianos; y aproximadamente un 0,5-10% (p/p) de agente o agentes emulsionantes. Todos los componentes pueden disolverse en uno o más solventes adecuados como propilenglicol y agua.

Los estudios farmacocinéticos de la formulación de crema tópica mencionados anteriormente demostraron su seguridad en pacientes con DFU. Lo que es más importante, la administración tópica de la formulación en crema llevó a una distribución sistémica muy baja de por lo menos los dos ingredientes activos, salvigenina y asiaticósido, después de la aplicación local en los sitios de las heridas de los pacientes, y se descubrió que era segura en los pacientes tratados con la formulación tópica localmente.

Además, se realizó un ensayo clínico de fase III para evaluar la eficacia de la formulación tópica a base de cremas para el tratamiento de la úlcera crónica del pie diabético. Inesperadamente, la pomada tópica mostró una eficacia significativamente mayor para promover el cierre de úlceras en pacientes diabéticos, particularmente en aquellos que tenían úlceras grandes o úlceras plantares; en comparación con un producto de control, Aquacel®.

Por consiguiente, en la presente se proporcionan formulaciones tópicas que comprenden uno o ambos del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica, y métodos de uso de los mismos para promover la curación de heridas en un sujeto con necesidad de tratamiento.

Formulaciones tópicas

La presente divulgación proporciona una formulación tópica para promover la curación de heridas (por ejemplo, la curación de heridas para pacientes diabéticos), que comprende un agente activo, que puede ser un extracto de Plectranthus amboinicus que comprende salvigenina, un extracto de Centella asiatica que comprende asiaticósido o un combinación del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica. La formulación tópica descrita en la presente puede comprender salvigenina en una cantidad que varía del 0,0001% al 0,5% (p/p), y opcionalmente asiaticósido, que puede estar en una cantidad que varía del 0,05% al 5% (p/p). En algunas realizaciones, la formulación tópica comprende el extracto de Plectranthus amboinicus, el extracto de Centella asiatica o ambos en una cantidad de aproximadamente el 0,1-30% (p/p).

La formulación tópica comprende además uno o más portadores o excipientes, incluyendo uno o más agentes que aumentan la viscosidad (por ejemplo, aproximadamente un 1,0-10%), una o más bases para pomadas (por ejemplo, una o más bases para crema) que pueden variar de aproximadamente el 5-30%, uno o más conservantes antimicrobianos (por ejemplo, aproximadamente el 0,005-0,2% en peso), uno o más agentes emulsionantes (aproximadamente el 0,5-10% en peso) o una combinación de los mismos. Estos componentes pueden disolverse o dispersarse en un solvente adecuado.

(i) Agentes Activos

El agente activo en la formulación tópica descrita en la presente comprende salvigenina y, opcionalmente, asiaticósido. En algunas realizaciones, el agente activo puede ser o un extracto de Plectranthus amboinicus que comprende salvigenina o un extracto de Centella asiatica que comprende asiaticósido solos, o una combinación de los mismos. La concentración del agente activo en la formulación tópica puede variar entre aproximadamente el 0,1-30% (p/p). Por ejemplo, el agente activo puede comprender aproximadamente el 0,1-5%, 0,5-3%, 1-2%, 1-3%, 2-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15 -20%, 10-20%, 20-25%, 15-30%, 20-30%, 10-30% o 25-30% (p/p) de la formulación tópica. La concentración del agente activo en la formulación tópica descrita en la presente se refiere al porcentaje del peso total del agente activo en forma seca sobre el peso total de la formulación tópica en su conjunto.

La formulación tópica descrita en la presente puede comprender aproximadamente del 0,0001% al 0,5% (p/p) de salvigenina, por ejemplo, aproximadamente del 0,001% al 0,5% (p/p), aproximadamente del 0,001% al 0,3% (p/p), aproximadamente del 0,001% al 0,2% (p/p), aproximadamente del 0,01% al 0,1% (p/p), aproximadamente del 0,002% al 0,5% (p/p), aproximadamente del 0,002% al 0,4% (p/p), aproximadamente del 0,002% al 0,3% (p/p), aproximadamente del 0,001% al 0,1% (p/p), aproximadamente del 0,005% al 0,01% (p/p), aproximadamente del 0,01% al 0,5% (p/p), aproximadamente del 0,02% al 0,5% (p/p) y aproximadamente del 0,1% al 0,5% (p/p). Alternativa o adicionalmente, la formulación tópica descrita en la presente puede comprender asiaticósido en una cantidad que varía de aproximadamente el 0,05% a aproximadamente el 5% (p/p), por ejemplo, de aproximadamente el 0,1 -2,5% (p/p), de aproximadamente el 0,1-2% (p/p), aproximadamente del 0,1 al 1% (p/p), de aproximadamente el 0,25-2,5% (p/p), de aproximadamente el 0,5-5% (p/p), de aproximadamente el 0,5-2,5% (p/p), o de aproximadamente el 0,5-1% (p/p).

Como se usa en la presente, se pretende que el término "aproximadamente" se refiera a un límite numérico estricto de los parámetros especificados (incluyendo el límite tanto superior como inferior). Un experto en la técnica habría entendido el significado de "aproximadamente" en asociación con un contexto específico. En algunos casos, el término "aproximadamente" se refiere a un /-5% del valor particular (por ejemplo, /-3% o /-2%).

En una realización, el agente activo en la formulación tópica es una combinación del extracto de Plectranthus amboinicus que comprende salvigenina y el extracto de Centella asiatica que comprende asiaticósido. La proporción entre el extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica puede ser de aproximadamente 1:10 a 10:1. Por ejemplo, la proporción entre el extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica en la formulación tópica puede ser de aproximadamente 1:10a 1:1, de aproximadamente 1:1 a 10:1, de aproximadamente 1:10 a 1:5, de aproximadamente 1:5 a 1:1, de aproximadamente 10:1 a 5:1, de aproximadamente 5:1 a 1:1, de aproximadamente 1:10 a 1:4, de aproximadamente 1:4 a 1:1, de aproximadamente 10:1 a 4:1, o de aproximadamente 4:1 a 1:1.

Un extracto de Plectranthus amboinicus se refiere a un extracto obtenido de la planta de Plectranthus amboinicus usando uno o más solventes adecuados. En algunos casos, por lo menos uno de los solventes usados para preparar el extracto tiene un índice de polaridad menor de 7 (por ejemplo, menor de 5). Consultar la Tabla 1 a continuación. Como se usa en la presente, un solvente se refiere a una sustancia o una mezcla de sustancias que disuelve a otra para formar una solución. Un extracto de Plectranthus amboinicus como se describe en la presente puede prepararse usando un solvente. El solvente usado en cada paso de extracción para preparar los extractos descritos en la presente (incluyendo tanto el extracto de Plectranthus amboinicus como el de Centella asiatica) puede ser un único solvente. Alternativamente, puede ser una mezcla de dos o más solventes.

El extracto de Plectranthus amboinicus descrito en la presente puede comprender terpenoides (por ejemplo, monoterpenoides, diterpenoides, triterpenoides y/o sesquiterpenoides), flavonoides, fenólicos, aceites esenciales o una combinación de los mismos. El extracto de Plectranthus amboinicus puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 0,1-5% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente el 0,1-0,5%, 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4 -4,5%, o el 4,5-5% (p/p) del extracto de Plectranthus amboinicus. Alternativamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente el 0,1-1%, 0,1-2%, 0,1-3%, 0,1-4% o 0,1-5% (p/p) del extracto de Plectranthus amboinicus. En una realización específica, la formulación tópica comprende aproximadamente el 0,1-1% o el 0,1-0,5% del extracto de Plectranthus amboinicus.

El extracto de Plectranthus amboinicus descrito en la presente puede prepararse extrayendo una planta de Plectranthus amboinicus completa o una parte de la misma con uno o más solventes adecuados para producir una solución y luego secando la solución para producir el extracto de Plectranthus amboinicus. Como el extracto de Plectranthus amboinicus comprende flavonoides, terpenoides (por ejemplo, monoterpenoides, diterpenoides, triterpenoides y/o sesquiterpenoides), fenólicos o aceites esenciales, que son moléculas no polares, por lo menos uno de los solventes de extracción puede tener una polaridad relativamente baja (por ejemplo, que tiene un índice de polaridad menor de 7) para facilitar la disolución de las moléculas no polares. La "extracción" puede realizarse o poniendo en contacto el material de Plectranthus amboinicus directamente con un solvente adecuado o eluyendo los componentes activos de la Plectranthus amboinicus de resinas a las que están unidos los componentes activos.

La Tabla 1 a continuación enumera los solventes comúnmente usados y su índice de polaridad (índice de polaridad de Snyder):

T l 1. lv n m l r ín i l ri

continuación

En algunos ejemplos, puede usarse un solvente que tenga un índice de polaridad menor de 7 para extraer los componentes activos de Plectranthus amboinicus para producir el extracto de Plectranthus amboinicus. Dicho solvente puede ser acetato de etilo, acetato de metilo, propanol, butanol o cloroformo. Alternativamente, el solvente puede ser una mezcla de uno o más solventes que tengan diferentes índices de polaridad. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, una mezcla de etanol y acetato de etilo, acetato de etilo y butanol, etanol y propanol, acetato de metilo y butanol.

En algunas realizaciones, el extracto de Plectranthus amboinicus puede prepararse mediante un proceso que implica el uso de un solvente, como un solvente que tiene un índice de polaridad menor de 7 (por ejemplo, aproximadamente 6,5, aproximadamente 6,0; aproximadamente 5,5, aproximadamente 5,0, <4,9, <4,8, <4,7, <4,6 o <4,5). Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, metanol, etanol, acetona, acetato de etilo, butanol, diclorometano o una combinación de los mismos.

A continuación se proporciona un proceso ejemplar para preparar el extracto de Plectranthus amboinicus. Consultar también la Figura 1.

Los materiales de Plectranthus amboinicus, que pueden ser una Plectranthus amboinicus completa o una parte de la misma (por ejemplo, hojas), pueden prepararse mediante metodología de rutina. El material de Plectranthus amboinicus puede ser una planta fresca o una parte de la misma. Alternativamente, el material de Plectranthus amboinicus puede estar en forma seca. La Plectranthus amboinicus puede secarse opcionalmente para formar polvos, que pueden usarse como material de Plectranthus amboinicus para preparar el extracto de Plectranthus amboinicus.

Cualquiera de los materiales de Plectranthus amboinicus como se describe en la presente puede extraerse, una o más veces, con un solvente adecuado para producir un extracto bruto. El solvente para usar en la preparación del extracto bruto puede ser un solvente de alta polaridad, por ejemplo, que tenga un índice de polaridad mayor de 5 y preferiblemente menor de 7 (por ejemplo, >5,2; >5,5, >5,8, >6 o mayor y preferiblemente menor de 7). Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, etanol, acetona, metanol, agua o una combinación de los mismos. Si es necesario, el extracto bruto puede concentrarse mediante un método convencional para producir un extracto bruto concentrado.

Luego el extracto bruto puede ponerse en contacto con una resina adecuada (por ejemplo, una resina absorbente no iónica) en condiciones adecuadas que permitan la unión de los componentes activos del extracto bruto a la resina. Las resinas ejemplares para su uso en la preparación del extracto de Plectranthus amboinicus incluyen, pero no se limitan a, DIAIo N® HP20, DIAION® HP20SS, Sepabeads® SP207, Amberlite™ XAD-2, o Amberlite™ XAD-4.

Posteriormente, la resina puede lavarse una o más veces y eluirse con un solvente adecuado, por ejemplo, un solvente que tenga un índice de polaridad menor de 7, para producir un extracto de Plectranthus amboinicus, que luego puede secarse mediante un método convencional (por ejemplo, secarse por congelación, secarse por pulverización o secarse por concentración) para producir el extracto seco de Plectranthus amboinicus, que puede estar en forma semisólida o de pasta.

En algunas realizaciones, el paso de absorción de resina puede realizarse mezclando el extracto bruto con la resina en un recipiente. En otras realizaciones, el paso de separación de resina puede realizarse mediante un ajuste de columna de cromatografía.

El extracto de Centella asiatica como se describe en la presente se refiere a un extracto obtenido de plantas de Centella asiatica completas o de una parte de las mismas. El extracto de Centella asiatica puede comprender asiaticósido, ácido madecásico o una combinación de los mismos.

El extracto de Centella asiatica puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 0,1-20% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,1-0,5%, 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4 -4,5%, 4,5-5%, 5-5,5%, 5,5-6%, 6-6,5%, 6,5-7%, 7-7,5%, 7,5-8%, 8-8,5%, 8,5-9%, 9 -9,5%, 9,5-10%, 10-10,5%, 10,5-11%, 11-11,5%, 11,5-12%, 12-12,5%, 12,5-13%, 13-13,5%, 13,5-14%, 14 -14,5%, 14,5-15%, 15-15,5%, 15,5-16%, 16-16,5%, 16,5-17%, 17-17,5%, 17,5-18%, 18-18,5%, 18,5-19%, 19 -19,5%, o 19,5-20% (p/p) del extracto de Centella asiatica. Alternativamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,1-5%, 0,1-10%, 0,1-15%, 0,1-20%, 0,5-5%, 0,5-10%, 0,5-15% o 0,5-20% (p/p) del extracto de Centella asiatica. En ejemplos específicos, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 por ciento (p/p) de extracto de Centella asiatica.

El extracto de Centella asiatica puede prepararse siguiendo un método convencional, por ejemplo, los descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 5.834.437, 6.417.349, 6.475.536 y 6.267.996, la CN 1313124, la CN 1089497 y la CN 1194154. A continuación se muestra un ejemplo.

Los materiales de Centella asiatica pueden prepararse a través de la práctica rutinaria. Tales materiales pueden ser plantas de Centella asiatica fresca o una parte de las mismas, o Centella asiatica seca. Los materiales de Centella asiatica pueden extraerse con un solvente adecuado, como agua, etanol o una mezcla de los mismos, para producir un extracto bruto. El extracto bruto, que opcionalmente puede concentrarse, puede mezclarse con una resina adecuada o cargarse en una columna rellena con la resina. Después de lavarse una o más veces, la resina puede eluirse con un solvente adecuado. El eluyente resultante puede concentrarse para formar una pasta, que puede secarse mediante un método convencional, por ejemplo, secado al vacío, para producir polvos del extracto de Centella asiatica. Cuando sea necesario, el polvo de Centella asiatica puede molerse a través de una malla (por ejemplo, una malla N° 100). Consultar también la Figura 2.

En un ejemplo, puede prepararse un extracto de Plectranthus amboinicus de la siguiente manera. Una parte superficial de Plectranthus amboinicus (aproximadamente 1,5 g), incluyendo las hojas y/o los tallos, puede recolectarse y extraerse con un solvente que tenga una polaridad menor de 7 (por ejemplo, metanol, etanol, acetona, acetato de etilo, butanol, diclorometano o una combinación de los mismos) a temperatura ambiente durante de 30 min a 6 horas. Alternativamente, este proceso de extracción puede llevarse a cabo a una temperatura de aproximadamente 50 a 80° C. El extracto bruto resultante puede cargarse directamente en una columna de resina adsorbente no iónica y eluirse con un solvente que tenga una polaridad menor de 6 (por ejemplo, etanol, acetato de etilo, butanol, diclorometano, hexano, tolueno o una combinación de los mismos). Los componentes eluidos pueden recogerse y purificarse mediante extracción con un solvente que tenga una polaridad menor de 6 (por ejemplo, los descritos en la presente). El filtrado resultante puede recogerse para producir un extracto de PA.

Puede prepararse un extracto de Centella asiatica mediante el mismo proceso o uno similar al descrito anteriormente. El Extracto de PA y/o el Extracto de CA pueden concentrarse usando un evaporador rotatorio reductor de presión.

(ii) Portadores y excipientes

La formulación tópica comprende además uno o más portadores y excipientes, incluyendo agentes que aumentan la viscosidad, bases para pomadas (por ejemplo, bases para cremas), conservantes antimicrobianos, agentes emulsionantes y/o solventes.

Un “agente que aumenta la viscosidad" es un agente que se usa para espesar una formulación. Los agentes que aumentan la viscosidad ejemplares pueden incluir, por ejemplo, alcohol cetoestearílico, colesterol, alcohol estearílico, clorocresol, cera blanca, ácido esteárico, alcohol cetílico o una combinación de los mismos. El agente que aumenta la viscosidad puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 1,0-10% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4-4,5%, 4,5-5%, 5-5,5%, 5,5-6%, 6-6,5%, 6,5-7%, 7-7,5%, 7,5-8%, 8-8,5%, 8,5-9%, 9-9,5% o 9,5-10% (p/p) del agente que aumenta la viscosidad. Alternativamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 1-5%, 2,5-7,5% o 5-10% (p/p) del agente que aumenta la viscosidad.

Una "base para pomadas" puede ser cualquier preparación o vehículo semisólido en el que pueda incorporarse un agente activo. Las bases para pomadas ejemplares incluyen, pero no se limitan a, bases para pomadas oleaginosas (por ejemplo, vaselina blanca o pomada blanca), bases para pomadas de absorción (por ejemplo, vaselina hidrófila, lanolina anhidra, Aquabase™, Aquaphor® y Polysorb®), bases para pomadas de emulsión de agua/aceite (por ejemplo, crema fría, lanolina hidratada, pomada de agua de rosas, Hydrocream™, Eucerin® y Nivea®), bases para pomadas de emulsión de aceite/agua (por ejemplo, pomadas hidrófilas, Dermabase™, Velvachol® y Unibase®), y bases para pomadas miscibles en agua (por ejemplo, pomada de polietilenglicol (PEG) y Polybase™). Las bases para pomadas pueden ser farmacológicamente inertes pero pueden atrapar agua para proporcionar una película protectora emoliente. En una realización específica, la base para pomadas puede ser cualquier compuesto de vaselina (por ejemplo, vaselina, vaselina blanca, parafina blanda blanca, vaselina líquida, parafina líquida). En una realización específica adicional, la base para pomadas es vaselina blanca (número CAS 8009-03-8). La base para pomadas puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 5-30% (p/p), por ejemplo, 10-30% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente el 5-25%, 5-20%, 5-15%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 20-25% o 25-30% (p/p) de la base para pomadas. Específicamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 por ciento (p/p) de la base para pomadas.

En algunas realizaciones, la "base para pomadas" descrita en la presente contiene menos del 20% de agua y volátiles, y más del 50% de hidrocarburos, ceras o polioles como vehículo.

En algunas realizaciones, la "base para pomadas" descrita en la presente es una "base para cremas" que contiene más del 20% de agua y volátiles y/o contiene típicamente menos del 50% de hidrocarburos, ceras o polioles como vehículo para el fármaco. La base para cremas puede ser una preparación multifásica que contiene una fase lipófila y una fase acuosa. En algunos casos, la base para cremas es una base para cremas lipófila, que tiene una fase lipófila como fase continua. Tal base para cremas contiene habitualmente agentes emulsionantes de agua en aceite como alcoholes de lana, ésteres de sorbitán y monoglicéridos. En otros casos, la base para cremas es una base para cremas hidrófila, que tiene una fase acuosa como fase continua. Tal base para cremas típicamente contiene agentes emulsionantes de aceite en agua como jabones de sodio o trolamina, alcoholes grasos sulfatados, polisorbatos y ésteres de alcoholes grasos y ácidos grasos polioxilados, que pueden combinarse con agentes emulsionantes de agua en aceite, si es necesario.

Un “conservante antimicrobiano" puede ser cualquier compuesto capaz de destruir microbios, prevenir la multiplicación o crecimiento de microbios, o prevenir la acción patógena de microbios. Los conservantes antimicrobianos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, un compuesto de parabeno (un éster de ácido parahidroxibenzoico; por ejemplo, parabeno, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, heptilparabeno, bencilparabeno, isobutilparabeno, isopropilparabeno, bencilparabeno o sus sales de sodio), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, alcohol bencílico, ácido bórico, bronopol, cetrimida, cloruro de cetilpiridinio, clorhexidina, clorobutanol, clorocresol, cloroxilenol, cresol, alcohol etílico, glicerina, hexetidina, imidurea, fenol, fenoxietanol, alcohol feniletílico, nitrato fenilmercúrico, propileno glicol y timerosal. El conservante antimicrobiano puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 0,005-0,2%, por ejemplo, aproximadamente el 0,01-0,2% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente el 0,005-0,01%, 0,01-0,05%, 0,05-0,1%, 0,1-0,15% o 0,15-0,2% (p/p) del conservante antimicrobiano. Específicamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19 o 0,2 por ciento (p/p) del conservante antimicrobiano.

Un “agente emulsionante" es un compuesto o sustancia que actúa como estabilizador de una mezcla de dos o más líquidos que normalmente son inmiscibles (no mezclables o no combinables). Los agentes emulsionantes ejemplares pueden incluir, pero no se limitan a, agentes emulsionantes naturales (por ejemplo, acacia, agar, ácido algínico, alginato de sodio, tragacanto, condrux, colesterol, xantano, pectina, gelatina, yema de huevo, caseína, grasa de lana, colesterol, cera y lecitina), arcillas coloidales (por ejemplo, bentonita [silicato de aluminio] y Veegum [silicato de magnesio y aluminio]), derivados de aminoácidos de cadena larga, alcoholes de alto peso molecular (por ejemplo, alcohol estearílico, alcohol cetílico, alcohol oleílico, monoestearato de triacetina, diestearato de etilenglicol, monoestearato de glicerilo, monoestearato de propilenglicol y alcohol polivinílico), carbómeros (por ejemplo, carboxipolimetileno, ácido poliacrílico, polímero de ácido acrílico, y polímero carboxivinílico), carragenina, derivados celulósicos (por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, celulosa en polvo, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y metilcelulosa), ésteres de ácidos grasos de sorbitán (por ejemplo, monolaurato de polioxietilensorbitán [Tween® 20], polioxietilensorbitán [Tween® 60], monooleato de polioxietilensorbitán [Tween® 80], monopalmitato de sorbitán [Span® 40], monoestearato de sorbitán [Span® 60], triestearato de sorbitán [Span® 65], monooleato de glicerilo y monooleato de sorbitán [Span® 80]), ésteres de polioxietileno (por ejemplo, monoestearato de polioxietileno [Myrj® 45], aceite de ricino hidrogenado con polioxietileno, aceite de ricino polietoxilado, estearato de polioximetileno y Solutol), ésteres de ácidos grasos de sacarosa, ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol (por ejemplo, Cremophor®), éteres de polioxietileno (por ejemplo, lauril éter de polioxietileno [Brij® 30]) y poli(vinilpirrolidona), monolaurato de dietilenglicol, oleato de trietanolamina, oleato de sodio, oleato de potasio, oleato de etilo, ácido oleico, laurato de etilo, lauril sulfato de sodio, Pluronic F 68, poloxámero 188, bromuro de cetrimonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio y docusato de sodio y/o combinaciones de los mismos. El agente emulsionante puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 0,5-10% (p/p), por ejemplo, 0. 5-6% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4-4,5%, 4,5 -5%, 5-5,5%, 5,5-6%, 5-10%, 6-10% o 8-10% (p/p) del agente emulsionante. Específicamente, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, o 10 por ciento (p/p) del agente emulsionante.

La formulación tópica de la invención puede contener además uno o más solventes (por ejemplo, solventes no acuosos agua o agua). Los solventes no acuosos ejemplares pueden incluir, pero no se limitan a, cualquier solvente conocido, incluyendo propilenglicol, glicol y mezclas de los mismos. El solvente no acuoso puede estar presente en la formación tópica a una concentración de aproximadamente el 2-65% (p/p). Por ejemplo, la formulación tópica puede comprender aproximadamente un 2-15%, 15-30%, 30-45% o 45-65% (p/p) del solvente. En algunas realizaciones, la formulación tópica de la invención también puede contener agua.

En algunas realizaciones, la formulación tópica de la invención puede comprender además uno o más emolientes, fragancias o pigmentos. La fórmula tópica también puede usarse junto con un vendaje para heridas (por ejemplo, venda con adhesivo, parche de yeso y similares). (por ejemplo, ciclohexano, n-hexano, n-decano, i-octano, octano, éter butílico, tetracloruro de carbono, trietilamina, éter i-propílico, tolueno, p-xileno, t-butil metil éter, benceno, éter bencílico, diclorometano, cloruro de metileno, cloroformo, dicloroetano, dicloruro de etileno, 1-butanol, alcohol ibutílico, tetrahidrofurano, acetato de etilo, 1-propanol, 2-propanol, acetato de metilo, ciclohexanona, metiletilcetona (MEK), nitrobenceno, benzonitrilo, 1,4-dioxano o p-dioxano)

Métodos para promover la curación de heridas

Cualquiera de las formulaciones tópicas descritas en la presente puede usarse para promover la curación de heridas en un sujeto con necesidad del tratamiento. La formulación tópica puede aplicarse al sitio de una herida siguiendo una dosificación y un régimen de tratamiento adecuados. El régimen de dosificación y administración para el método descrito dependerá de la naturaleza y condición de la herida que se esté tratando, la edad y condición del paciente, y cualquier terapia previa o concurrente. En algunos casos, la formulación tópica puede aplicarse una vez a la semana, una vez cada dos días, una vez al día, dos veces al día, tres veces al día o cuatro veces al día durante un período de tiempo adecuado. El tratamiento puede darse por terminado cuando la herida esté recuperada. Cuando sea necesario, el tratamiento puede reanudarse, por ejemplo, si reaparece una herida.

El término "herida" se refiere a una lesión en el tejido vivo provocada por un corte, un golpe u otro impacto (por ejemplo, provocado por una afección médica como un trastorno de la piel), típicamente uno en el que la piel está cortada o rota. La herida puede estar asociada con una condición médica, por ejemplo, un trastorno de la piel. El término "curación de heridas" denota el proceso dinámico y complejo de reemplazar estructuras celulares y/o capas de tejido desvitalizados o faltantes. El término "promoción de la curación de heridas" o "promover la curación de heridas" indica la inducción de un nivel o tasa de reemplazo aumentados para estructuras celulares y/o capas de tejido desvitalizados o faltantes. Como ejemplo, la promoción de la curación de heridas puede estar indicada por el cierre parcial o completo de la úlcera o por un aumento en la tasa de curación de una úlcera (incluyendo, pero no limitados a, cambios más rápidos en el tamaño, el área o la gravedad de la úlcera, un cierre más rápido de la úlcera, y/o un aumento en el porcentaje de cambio desde el valor de referencia del tamaño, área o gravedad de la úlcera cuando se compara con una úlcera de control tratada con un placebo).

El sujeto a tratar con la formulación tópica puede ser un humano o un mamífero no humano. En algunas realizaciones, el sujeto es un paciente humano que tiene una herida abierta, lo que se refiere a una lesión o daño en los tejidos vivos (por ejemplo, la piel) que provoca una alteración en la continuidad normal de las estructuras biológicas. Una herida abierta puede incluir, pero no se limita a, una abrasión, incisión, laceración, punción, avulsión, corte u otras lesiones similares.

En otras realizaciones, el sujeto es un paciente humano que tiene una herida crónica, que pueden ser lesiones o daños en los tejidos vivos (por ejemplo, la piel) que provocan una alteración en la continuidad normal de las estructuras biológicas y no curan en un conjunto ordenado de etapas y/o en una cantidad de tiempo predecible. Una herida crónica puede incluir, pero no se limita a: una herida quirúrgica, una herida traumática, una úlcera por presión, una úlcera venosa o una úlcera diabética. En otros ejemplos, una herida crónica puede estar asociada con una enfermedad o trastorno, por ejemplo, un carcinoma, quemadura, escara, un trastorno de la piel como dermatitis atópica.

En un ejemplo, el sujeto es un paciente humano que tiene úlcera en el pie asociada con diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II). La diabetes mellitus (también conocida como diabetes) es un grupo de enfermedades metabólicas que dan como resultado niveles elevados de azúcar en la sangre durante un período prolongado. La diabetes puede ser el resultado de que el páncreas no produzca suficiente insulina o que las células del cuerpo no respondan adecuadamente a la insulina producida. Los tres tipos principales de diabetes mellitus son el Tipo I (también conocida como “diabetes mellitus insulinodependiente" (IDDM) o “diabetes juvenil"; resulta de la incapacidad del páncreas para producir suficiente insulina), Tipo 2 (también conocida como "diabetes mellitus no insulinodependiente" (NIDDM) o “diabetes del adulto"; resulta de la incapacidad de las células para responder adecuadamente a la insulina), y diabetes gestacional (observada durante el embarazo cuando se observan niveles altos de azúcar en la sangre en ausencia de un historial previo de diabetes). Se observan muchas complicaciones graves en pacientes diabéticos que incluyen, pero no se limitan a, heridas crónicas como úlceras del pie diabético (también conocidas como úlceras diabéticas).

En algunas realizaciones, el sujeto a tratar por los métodos descritos en la presente padece una herida grave, por ejemplo, tiene una úlcera con un área mayor de 2 cm2 (por ejemplo, 3 cm2, 4 cm2 o 5 cm2). En algunos ejemplos, el sujeto padece de una o más úlceras plantares

Kits para su uso en la promoción de la curación de heridas

La presente divulgación también proporciona kits para su uso en la promoción de la curación de heridas. Tales kits pueden incluir uno o más recipientes que comprenden una formulación tópica como se describe en la presente, que comprende un extracto de Plectranthus amboinicus, un extracto de Centella asiatica o una combinación del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica.

En algunas realizaciones, el kit puede comprender instrucciones de uso de acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en la presente. Las instrucciones incluidas pueden comprender una descripción de la administración de la formulación tópica para promover la curación de heridas de acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en la presente. El kit puede comprender además una descripción de la selección de un individuo adecuado para el tratamiento basándose en la identificación de si ese individuo tiene heridas que necesitan tratamiento.

Las instrucciones relacionadas con el uso de una formulación tópica generalmente incluyen información sobre la dosificación, el programa de dosificación y la vía de administración para el tratamiento previsto. Los recipientes pueden ser dosis unitarias, envases a granel (por ejemplo, paquetes multidosis) o dosis subunitarias. Las instrucciones suministradas en los kits de la invención típicamente son instrucciones escritas en una etiqueta o en un prospecto (por ejemplo, una hoja de papel incluida en el kit), pero también son aceptables instrucciones legibles por máquina (por ejemplo, instrucciones en un disco de almacenamiento magnético u óptico).

La etiqueta o prospecto indica que la composición se usa para promover la curación de heridas. Pueden proporcionarse instrucciones para poner en práctica cualquiera de los métodos descritos en la presente.

Los kits de esta invención están en un envase adecuado. Los envases adecuados incluyen, pero no se limitan a, viales, botellas, tarros, envases flexibles (por ejemplo, bolsas de plástico o Mylar selladas) y similares. Por lo menos un agente activo en la composición es un agente activo seleccionado del grupo que consiste en un extracto de Plectranthus amboinicus, un extracto de Centella asiatica y una combinación de un extracto de Plectranthus amboinicus y un extracto de Centella asiatica.

Los kits pueden proporcionar opcionalmente componentes adicionales, como información interpretativa. Normalmente, el kit comprende un recipiente y una o más etiquetas o prospectos en el recipiente o asociados con el recipiente. En algunas realizaciones, la invención proporciona artículos de fabricación que comprenden contenidos de los kits descritos anteriormente.

Sin más elaboración, se cree que un experto en la técnica puede, basándose en la descripción anterior, utilizar la presente invención en toda su extensión.

EJEMPLO 1: Efectos del extracto de Plectranthus amboinicus y del extracto de Centella asiatica sobre la proliferación y migración de células endoteliales

(i) Ensayo MTT - Proliferación

El extracto de Plectranthus amboinicus (PA) y el extracto de Centella asiatica (CA) se prepararon siguiendo las descripciones proporcionadas en la presente. Para este estudio se usó la línea celular endotelial EA.hy926. Las células se colocaron en placas a una densidad de 4 x 104 células/pocillo en una placa de 96 pocillos durante un día y luego se trataron con el extracto de PA o CA en un medio libre de suero durante 70 horas. Después del tratamiento, las células se tiñeron con colorante MTT durante 2 horas.

Como se muestra en la Figura 3A, el extracto de PA mejoró la proliferación celular, mientras que el efecto de CA sobre la proliferación celular no fue tan bueno como el extracto de PA.

(ii) Ensayo de raspado - Migración

Las células endoteliales EA.hy926 se colocaron en placas a una densidad de 8 x 104 células /pocillo en una placa de 48 pocillos durante 24 horas. La monocapa de células confluentes formada de este modo se rascó y se trató con el extracto de PA o CA en un medio libre de suero durante 72 horas.

Los resultados obtenidos de este estudio muestran que el extracto de PA mejoró significativamente la migración de células endoteliales, que es esencial para la curación de heridas. Las células tratadas con el extracto de CA también mostraron signos de migración, pero el resultado no fue tan significativo como el del extracto de PA. Figura 3B.

EJEMPLO 2: Efectos del extracto de Plectranthus amboinicus y del extracto de Centella asiatica sobre la proliferación y migración de queratinocitos

(i) Ensayo SRB - Proliferación

En este estudio se usó la línea celular de queratinocitos, células HaCaT. Las células se sembraron a una densidad de 4 x 104 células/ml en una placa de 96 pocillos durante un día y luego se trataron con el extracto de PA o CA descrito en el Ejemplo 1 anterior durante 24 horas. Después del tratamiento, las células se fijaron y tiñeron con colorante SRB.

Como se muestra en la Figura 4A, tanto PA como CA aumentan la proliferación celular de las células de queratinocitos.

(ii) Ensayo de raspado - Migración

Las células de queratinocitos HaCaT se colocaron en placas a una densidad de 8 x 104 células/pocillo en una placa de 48 pocillos durante un día. La monocapa de células confluentes formada de este modo se rascó y se trató con el extracto de PA o CA durante 24 horas. Se cuantificó el área de curación de heridas.

Los resultados obtenidos de este estudio demostraron que el extracto de PA indujo la migración celular (un efecto de curación de heridas) en los queratinocitos de manera dependiente de la dosis. El extracto de CA también mejoró la migración de células de queratinocitos a una concentración relativamente alta (por ejemplo, 30 μg/ml).

EJEMPLO 3: Efecto de curación de heridas de salvigenina y asiaticósido

Se realizó un ensayo de formación de tubo capilar in vitro usando células de vena umbilical humana (HUVEC) para examinar el efecto de curación de heridas de la salvigenina, un agente activo del extracto de PA divulgado en la presente.

Brevemente, se cubrieron placas Nunclon de noventa y seis pocillos con Matrigel (50 μl/pocillo) y se incubaron a 37° C durante 30 min para promover la gelificación. Se cultivaron HUVEC en medio M200 y se sembraron células entre los pases 2 y 4 (a 3 x 105 células en 100 μl de medio) en cada uno de los pocillos recubiertos con Matrigel. Se añadieron a los medios de cultivo una serie de diluciones de compuestos de prueba, como se muestra en la Figura 5A (incluyendo el factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) como control positivo y salvigenina) para examinar sus efectos biológicos sobre la formación de tubos. Después de una incubación de 6 h a 37° C en una atmósfera humidificada con 5% de CO², las HUVEC se aspiraron del medio, se fijaron y se completaron las redes de tubos capilares dentro de un área designada de un campo de bajo aumento (x10) que se fotografiaron y contaron con la ayuda de software de imagen de ordenador, ImagePro Plus V.4.5. Los datos de las pruebas se expresaron como el porcentaje de formación completa de tubos capilares en relación con los cultivos de control HUVEC no tratados incubados en las mismas condiciones.

Como se muestra en la Figura 5A, la salvigenina aumentó significativamente la formación de tubos por las células HUVEC.

Para investigar el efecto de curación de heridas del asiaticósido, se realizó un ensayo de migración por raspado de la siguiente. Se colocaron en placas células de queratinocitos HaCaT a una densidad de 8 x 104 células/pocillo en una placa de 48 pocillos durante un día. La monocapa de células confluentes formada de este modo se rascó y se trató con asiaticósido durante 24 horas. Se cuantificó el área de curación de heridas. Los resultados obtenidos de este estudio demostraron que el asiaticósido indujo la migración celular (un efecto de la curación de heridas) en los queratinocitos.

Como se muestra en la Figura 5B, el asiaticósido promovió significativamente la migración de células HaCaT, lo que contribuiría a la curación de heridas.

EJEMPLO 4: Los extractos de Plectranthus amboinicus promovieron la curación normal de heridas

Este estudio se realizó para investigar el efecto de varias formulaciones tópicas a base de cremas, incluyendo el extracto de PA, sobre el cierre normal de heridas en un modelo animal. Se asignaron al azar ratas Sprague-Dawley en 4 grupos. Luego, las ratas se anestesiaron con pentobarbital y se eliminaron los pelos del área quirúrgica. Se extirparon las pieles de las áreas medias dorsales de cada rata (grosor completo) usando un bisturí quirúrgico (2 cm x 2 cm).

Las ratas de los cuatro grupos se trataron con las siguientes formulaciones de cremas, que se prepararon de acuerdo con los métodos descritos en la presente:

- G1: crema como control de muestra en blanco,

- G2: pomada Winsolve-b (de Yungshin Pharma, Co. LTD, Taiwán) como control de referencia,

- G3: Formulación I (extracto de PA al 1,25%), y

- G4: Formulación II (extracto de PA al 0,25%).

Las formulaciones se aplicaron a cada sitio de herida dos veces al día y las heridas se cubrieron con estopilla. Se colocaron cubiertas en los cuellos de las ratas Sprague-Dawley (n = 6; 12 semanas de edad) para evitar que las heridas recibieran arañazos de animales. Para la medición del cierre de la herida, se tomaron fotografías de las heridas los días 4, 6, 8, 10, 12, 14 y 16. Al tomar fotografías, se colocó una regla estándar al lado de las heridas. Antes de analizar las heridas con Image pro (Media cybernetics), la longitud se estandarizó con la regla estándar en la imagen para evitar los errores provocados por las diferentes distancias de imagen.

Los resultados obtenidos de este estudio mostraron que las Formulaciones I y II mostraron efectos prometedores para promover el cierre de heridas en ratas. Tabla 2 y Figura 6.

Tabla 2. Efectos del cierre de heridas

EJEMPLO 5: Estudio farmacocinético in vivo sobre una crema tópica que comprende un extracto de Plectranthus amboinicus y un extracto de Centella asiatica

Se evaluaron las propiedades farmacocinéticas de una formulación tópica que contenía extractos de Plectranthus amboinicus y Centella asiatica (1,25% en total, que contenía del 0,0001% al 0,1% de salvigenina en peso y del 0,05% al 1% de asiaticósido en peso) en pacientes humanos que tenían úlceras de pie diabético crónicas (DFU). Los extractos de PA y CA en la formulación tópica se prepararon de acuerdo con los métodos descritos en la presente. La formulación tópica es a base de crema y comprende además alcohol cetoestearílico (aproximadamente el 1,0-10% en peso, por ejemplo, aproximadamente el 3,5-6,5% en peso), vaselina blanca y vaselina líquida 350 cps (aproximadamente el 5%-30% en peso en total, por ejemplo, aproximadamente el 5-15% en peso en total), metilparabeno y propilparabeno (aproximadamente del 0,005% al 0,2% en peso en total, por ejemplo, un 0,005-0,2% en peso en total), emulsionantes como Span®60 y Tween® 60 (aproximadamente el 0,5-10% en peso en total, por ejemplo, aproximadamenteel 0,5-5% en peso en total), y uno o más solventes como propilenglicol (aproximadamente el 2-20% en peso, por ejemplo, aproximadamente el 4-10% en peso). Los extractos se formularon en una formulación tópica a base de cremas que además contenía vaselina líquida, propilenglicol, alcohol cetílico estearílico, vaselina blanca, Span® 60, Tween® 60, propilparabeno, metilparabeno y agua.

Un total de 12 pacientes completaron el estudio. Cada sujeto recibió una dosis de la formulación de crema el Día 1 seguido de la recogida de muestras de sangre, luego dos veces al día desde el Día 2 hasta el Día 13, y se programó una recogida de muestras de sangre adicional el Día 14 después de la dosis final. Se analizaron muestras de sangre para medir las concentraciones en plasma de salvigenina y asiaticósido, dos ingredientes activos de la crema, mediante una metodología validada de L^c /MS/MS. Los resultados obtenidos desde el día 1 mostraron que en los 12 pacientes, 2 pacientes tenían concentraciones en plasma detectables de salvigenina <12,403 μg/ml; y 5 pacientes tenían concentraciones en plasma detectables de asiaticósido <9,276 ng/ml.

Los resultados obtenidos a partir del día 14 mostraron que 4 de los 12 pacientes tenían concentraciones en plasma detectables de salvigenina <16,972 μg/ml; y 5 de los 12 pacientes tenían concentraciones en plasma detectables de asiaticósido <6,154 ng/ml.

En general, los resultados obtenidos de este estudio mostraron que las administraciones tópicas de la formulación tópica usada en este estudio clínico dieron como resultado una distribución sistémica limitada tanto de salvigenina como de asiaticósido.

Se informó de un total de 6 eventos adversos (EA) por 3 pacientes. Todos los EA se consideraron de intensidad leve y el investigador consideró que esos EA eran "No relacionados" o "Improbablemente relacionados" con el tratamiento del estudio. Al finalizar, se mejoraron 4 AE y 2 AE no cambiaron. No hubo informes de EA significativos, muerte o EA graves.

Conclusión: este estudio de 14 días reveló que la aplicación local de la formulación tópica usada en este estudio dio como resultado una distribución sistémica limitada de por lo menos los ingredientes activos salvigenina y asiaticósido y es segura en pacientes con DFU.

EJEMPLO 6: Ensayo clínico de fase III usando una crema tópica que comprende un extracto de Plectranthus amboinicus y un extracto de Centella asiatica

En un análisis intermedio, se aleatorizó un total de 124 pacientes que tenían DFU en un ensayo multicéntrico para evaluar el efecto de curación de heridas de la formulación de crema tópica descrita en el Ejemplo 5 anterior. A continuación se enumeran los criterios de inclusión y exclusión para la participación en el ensayo. Como control de tratamiento se usó el vendaje Aquacel® Hydrofiber® (ConvaTec, Princeton, ⁿ J, USA).

Criterios de selección

Criterios de inclusión para pacientes

Los pacientes eran elegibles para participar si se cumplían todos de los siguientes criterios:

1. firmó un consentimiento informado por escrito antes de la primera evaluación del estudio;

2. por lo menos 20 y menos de 80 años de edad;

3. Diabetes mellitus (tipo 1 o 2) con una HbA1c <12,0% medida durante la selección o en el plazo de los tres meses anteriores a la aleatorización;

4. un índice tobillo-brazo en la extremidad objetivo de por lo menos 0,8 medido durante la selección o en el plazo de los tres meses anteriores a la aleatorización;

5. una úlcera objetivo con las siguientes características:

a. grado 1 o 2 según el sistema de clasificación de úlceras de Wagner;

b. no más alto que el tobillo;

c. sin infección activa;

d. área en sección transversal de entre 1 y 25 cm2 después del desbridamiento; y

e. presente durante por lo menos 4 semanas antes de la aleatorización;

6. las personas en edad fértil tuvieron una prueba de embarazo negativa y no estaban amamantando en la visita de selección; y

7. capaz y dispuesto a asistir a las visitas programadas y cumplir con los procedimientos del estudio.

Criterio de exclusión

Los pacientes fueron excluidos de la participación si era aplicable alguno de los siguientes:

1. presencia de necrosis, purulencia o tractos sinusales que no pueden eliminarse mediante desbridamiento; 2. neuroartropatía de Charcot aguda determinada por examen clínico y/o radiográfico;

3. se sometió a un procedimiento de revascularización destinado a aumentar el flujo sanguíneo en la extremidad objetivo del tratamiento <4 semanas antes de la aleatorización;

4. estado nutricional deficiente definido como una albúmina <2,5 g/dl;

5. AST y/o ALT > 3 veces el límite superior normal;

6. creatinina sérica > 2 veces el límite superior normal;

7. tratamiento con agentes inmunosupresores o quimioterapéuticos, radioterapia o corticosteroides sistémicos en el plazo de las 4 semanas previas a la aleatorización;

8. uso de cualquier fármaco o terapia en investigación en el plazo de las 4 semanas anteriores a la aleatorización; 9. una afección psiquiátrica (por ejemplo, ideación suicida), problema actual o crónico de abuso de alcohol o drogas que se considere que representa una amenaza para el cumplimiento; o

10. considerado por el investigador como no apto para el estudio por cualquier otra razón.

Criterios de interrupción para pacientes individuales

Los pacientes eran libres de retirarse del estudio por cualquier motivo y en cualquier momento sin dar razón para hacerlo y sin penalización o perjuicio.

Además, se descontinuó del estudio a los pacientes si era aplicable alguno de los siguientes:

1. violación y/o desviación significativa del protocolo del estudio;

2. falta de eficacia satisfactoria (definida como un empeoramiento del grado de Wagner al nivel 3) ;

3. preocupaciones de seguridad;

4. perdido durante el seguimiento;

5. retira el consentimiento;

6. si se consideró en el mejor interés del paciente; o

7. terminación del estudio por parte del patrocinador.

Objetivos y resultados del estudio

El objetivo principal de este estudio era evaluar el uso de la formulación tópica a base de cremas en la curación de heridas en pacientes humanos que padecen DFU.

La variable principal fue el número de úlceras objetivo curadas en cada grupo en el plazo de 16 semanas. El resultado principal de eficacia fue la comparación de la incidencia de curación completa de la úlcera objetivo entre los dos grupos de tratamiento al final del tratamiento.

A los efectos de este estudio, una curación completa se definió como una epitelización completa que se mantuvo sin drenaje durante por lo menos 2 semanas y fue confirmada por un evaluador cegado.

Los resultados secundarios de eficacia fueron: tiempo para completar la curación de la úlcera (el tiempo de la curación original se tomó como el tiempo hasta la curación) ; cambio porcentual en el área de superficie de la úlcera con respecto al valor de referencia; porcentaje de sujetos con una reducción del 50% del área de superficie de la úlcera; e incidencia de infección de la úlcera objetivo.

Los resultados de seguridad incluyeron la evaluación de la incidencia de eventos adversos emergentes del tratamiento, valores de laboratorio clínico y signos vitales.

El criterio de valoración exploratorio fue la recurrencia de la úlcera objetivo en el plazo del período de seguimiento evaluado en aquellos sujetos que demostraron una curación completa de la herida al final del período de comparación.

Resultados

Se analizó la eficacia de la curación de heridas de los pacientes diabéticos tratados con la formulación de crema tópica descrita en el Ejemplo 5 o Aquacel® en el conjunto de análisis completo (FAS) y la población por intención de tratar modificada (mITT). En la población general de FAS y mITT, los resultados mostrados en la Tabla 3 indican que un porcentaje más alto de pacientes tratados con la formulación tópica lograron la curación completa de la úlcera en comparación con los pacientes tratados con Aquacel®. Este resultado mostró que la formulación tópica usada en este estudio fue superior a la dl Aquacel®, un producto existente para tratar la curación de heridas, por lo menos en la curación completa de la úlcera, que es el criterio de valoración principal del estudio.

Además, el análisis de subgrupos se realizó en una población de pacientes con áreas de úlceras de referencias > 5 cm2 y úlceras plantares. Este tipo de úlcera se conocía en la técnica por ser difícil de recuperar. Los resultados de la Tabla 3 indican que la tasa de curación completa de los pacientes tratados con la formulación tópica fue más alta que la tasa de curación completa de los pacientes tratados con Aquacel®.

T l : ri ri v l r i n rin i l: T r i n m l

Por tanto, los resultados provisionales de este ensayo clínico de Fase III indicaron que la formulación de crema tópica probada en los mismos, que comprende extractos de PA y CA, mostró efectos terapéuticos superiores en la promoción de la curación de heridas en pacientes con DFU en relación con el control de Aquacel ® Hydrofiber®.

OTRAS REALIZACIONES

Todas las características divulgadas en esta memoria descriptiva pueden combinarse entre sí de cualquier manera. Cada característica divulgada en esta memoria descriptiva puede ser reemplazada por una característica alternativa que tenga el mismo propósito, o uno equivalente o similar. Por tanto, a menos que se indique expresamente lo contrario, cada característica divulgada es solo un ejemplo de una serie genérica de características equivalentes o similares.

A partir de la descripción anterior, un experto en la técnica puede determinar fácilmente las características esenciales de la presente invención y, sin apartarse del espíritu y alcance de la misma, puede realizar varios cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a varios usos y condiciones. Por tanto, otras realizaciones también están dentro de las reivindicaciones.

EQUIVALENTES Y ALCANCE

En las reivindicaciones, artículos como "un", "uno" y "el" pueden significar uno o más de uno, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto. Las reivindicaciones o descripciones que incluyen "o" entre uno o más miembros de un grupo se consideran satisfechas si uno, más de uno o todos los miembros del grupo están presentes, se emplean o son relevantes de otro modo para un producto o proceso dado, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo por el contexto. La invención incluye realizaciones en las que exactamente un miembro del grupo está presente, se emplea o es relevante de otro modo para un producto o proceso dado. La invención incluye realizaciones en las que más de uno, o todos los miembros del grupo están presentes, se emplean o son relevantes de otro modo para un producto o proceso determinado.

Además, la invención abarca todas las variaciones, combinaciones y permutaciones en las que una o más limitaciones, elementos, cláusulas y términos descriptivos de una o más de las reivindicaciones enumeradas se introducen en otra reivindicación. Por ejemplo, cualquier reivindicación que dependa de otra reivindicación puede modificarse para incluir una o más limitaciones que se encuentran en cualquier otra reivindicación que dependa de la misma reivindicación base. Cuando los elementos se presentan como listas, por ejemplo, en formato de grupo Markush, también se divulga cada subgrupo de los elementos y cualquier elemento o elementos pueden eliminarse del grupo. Debe entenderse que, en general, cuando se hace referencia a la invención, o a aspectos de la invención, como que comprenden elementos y/o características particulares, ciertas realizaciones de la invención o aspectos de la invención consisten, o consisten esencialmente en, tales elementos y/o características. Por motivos de simplicidad, esas realizaciones no se han expuesto específicamente literalmente en la presente. También se observa que se pretende que los términos "que comprende" y "que contiene" sean abiertos y permitan la inclusión de elementos o pasos adicionales. Cuando se dan intervalos, se incluyen los puntos finales. Además, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto y la comprensión de un experto en la técnica, los valores que se expresan como intervalos pueden asumir cualquier valor específico o subintervalo dentro de los intervalos indicados en diferentes realizaciones de la invención, a la décima de la unidad del límite inferior del intervalo, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una formulación tópica, que comprende:

(i) un agente activo que comprende salvigenina en una cantidad de aproximadamente el 0,0001% al 0,5% (p/p) y asiaticósido en una cantidad de aproximadamente el 0,05% al 5% (p/p);

(ii) un agente que aumenta la viscosidad en una cantidad de aproximadamente el 1,0-10% (p/p);

(iii) una base para pomadas en una cantidad de aproximadamente el 5-30% (p/p);

(iv) un conservante antimicrobiano en una cantidad de aproximadamente el 0,005-0,2% (p/p); y

(v) un agente emulsionante en una cantidad de aproximadamente el 0,5-10% (p/p).

2. La formulación tópica de la reivindicación 1, en donde el agente activo es un extracto de Plectranthus amboinicus, un extracto de Centella asiatica, o una combinación de los mismos, y en donde el extracto de Plectranthus amboinicus y/o el extracto de Centella asiatica comprende salvigenina y/o asiaticósido.

3. La formulación tópica de la reivindicación 1 o 2, en donde el agente activo está en una cantidad de aproximadamente el 0,1-30% (p/p) en la formulación tópica.

4. La formulación tópica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la formulación tópica comprende salvigenina que varía del 0,0001% al 0,1% (p/p), y/o en donde la formulación tópica comprende asiaticósido que varía del 0,05% al 1% (p/p)..

5. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el agente activo comprende además cirsimaritina, madecasósido o una combinación de los mismos.

6. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde en la formulación tópica, la base para pomadas es de aproximadamente el 10-30% (p/p), el conservante antimicrobiano es aproximadamente el 0,01-0,2% (p/p), y el agente emulsionante es de aproximadamente el 0,5-6% (p/p).

7. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde el extracto de Plectranthus amboinicus se prepara poniendo en contacto una Plectranthus amboinicus completa o una parte de la misma con un solvente que tiene un índice de polaridad menor de 7 para producir una solución y secando la solución para producir el extracto de Plectranthus amboinicus.

8. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde la formulación tópica comprende tanto el extracto de Plectranthus amboinicus como el extracto de Centella asiatica en una proporción en peso de aproximadamente 1:10 a 10:1, preferiblemente de aproximadamente 1:5 a 5:1.

9. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el agente que aumenta la viscosidad es alcohol cetoestearílico, colesterol, alcohol estearílico, clorocresol, cera blanca, ácido esteárico, alcohol cetílico o una combinación de los mismos, la base para la pomada comprende uno o más compuestos de vaselina, y/o el conservante antimicrobiano comprende uno o más compuestos de parabeno.

10. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la base para la pomada es una base para cremas.

Preferiblemente en donde la formulación comprende uno o más solventes; preferiblemente en donde el uno o más solventes comprenden propilenglicol.

11. La formulación tópica de la reivindicación 1, en donde la formulación tópica comprende una combinación del extracto de Plectranthus amboinicus y el extracto de Centella asiatica en una cantidad de aproximadamente el 0,1-30% (p/p), alcohol cetoestearílico en una cantidad de aproximadamente el 1,0-10%. (p/p), una combinación de vaselina blanca y vaselina líquida en una cantidad total de aproximadamente el 5-30% (p/p), una combinación de metilparabeno y propilparabeno en una cantidad total de aproximadamente el 0,005-0,2% (p/p), y una combinación de monoestearato de sorbitán y polisorbato 60 en una cantidad total de aproximadamente el 0,5-10% (p/p).

preferiblemente que comprende además propilenglicol en una cantidad de aproximadamente el 2-20% (p/p).

12. La formulación tópica de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, para su uso en la promoción de la curación de heridas en un sujeto.

13. La formulación tópica para el uso de la reivindicación 12,

en donde la formulación es para administración tópica por lo menos una vez al día, preferiblemente dos veces al día;

o/preferiblemente en donde el sujeto es un paciente diabético humano que padece úlcera de pie diabético.

14. La formulación tópica para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 12-13, en donde el sujeto es un paciente humano que tiene una herida abierta, que opcionalmente es abrasión, incisión, laceración, punción o avulsión.

15. La formulación tópica para el uso de la reivindicación 14,

en donde el sujeto es un paciente humano que tiene una herida crónica, que opcionalmente es una herida quirúrgica, una herida traumática, una úlcera por presión, una úlcera venosa, una úlcera diabética o una herida provocada por un carcinoma, quemadura, escara o dermatitis atópica; o

en donde el sujeto es un paciente humano que tiene acné.