ES2954899T3 - Procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia - Google Patents
Procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia Download PDFInfo
- Publication number
- ES2954899T3 ES2954899T3 ES14797083T ES14797083T ES2954899T3 ES 2954899 T3 ES2954899 T3 ES 2954899T3 ES 14797083 T ES14797083 T ES 14797083T ES 14797083 T ES14797083 T ES 14797083T ES 2954899 T3 ES2954899 T3 ES 2954899T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- cancer
- titer
- vaccine
- antigenic peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 103
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 352
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 169
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 claims abstract description 166
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 claims abstract description 166
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 142
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 229940029042 WT1 peptide vaccine Drugs 0.000 claims description 68
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 37
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 36
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 23
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims description 23
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 19
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 claims description 18
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 claims description 18
- 201000009365 Thymic carcinoma Diseases 0.000 claims description 17
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 claims description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 13
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008183 Pulmonary blastoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006359 hepatoblastoma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000013066 thyroid gland cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 3
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 18
- 238000013519 translation Methods 0.000 abstract description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 53
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 41
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 29
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 24
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 13
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 13
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 13
- 101800000324 Immunoglobulin A1 protease translocator Proteins 0.000 description 12
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 3
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K calcium;sodium;phosphate Chemical compound [Na+].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O QXJJQWWVWRCVQT-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLKRUSPZOTYMAT-YFKPBYRVSA-N 6-hydroxy-L-dopa Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC(O)=C(O)C=C1O YLKRUSPZOTYMAT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108010038061 Chymotrypsinogen Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001340534 Eido Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108091006057 GST-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 101000694110 Nicotiana tabacum Lignin-forming anionic peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006058 Ugi-reaction Methods 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 201000006392 childhood kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000016661 childhood malignant kidney neoplasm Diseases 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical compound OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000046004 human WT1 Human genes 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical class O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N rhodamine B 5-isothiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(N=C=S)C=C1C(O)=O YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
Abstract
Se proporciona un método para predecir un efecto clínico en un sujeto en una inmunoterapia con péptido WT1, comprendiendo dicho método: a) una etapa para poner en contacto una muestra derivada del sujeto con el péptido antigénico WT1 o una variante del mismo; y b) una etapa para detectar la unión de la muestra al péptido antigénico WT1 o una variante del mismo y medir así el título de anticuerpo IgG anti-péptido antigénico WT1 existente en la muestra, caracterizado porque se produce un aumento en la IgG del péptido antigénico anti-WT1. El título de anticuerpos en el sujeto determina el logro de un efecto clínico favorable. También se proporciona un kit para realizar el método según la presente invención, conteniendo dicho kit el péptido antígeno WT1 o una variante del mismo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia
Campo técnico
La presente solicitud se refiere a un procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia con el péptido WT1.
Técnica anterior
El gen 1 del tumor de Wilms ha sido identificado como el gen responsable del tumor de Wilms, que es un cáncer renal infantil (documentos que no son patentes 1 y 2), y el gen codifica un factor de transcripción con una estructura de dedo de cinc. Aunque, en un primer momento, se consideró que el gen WT1 era un gen supresor tumoral, estudios posteriores (documentos que no son patentes 3 a 6) demostraron que este gen actúa como un gen del cáncer, en lugar de un gen supresor tumoral, en tumores de órganos hematopoyéticos y tipos de cáncer sólido.
En fechas recientes, se ha llevado a cabo la inmunoterapia con el péptido WT1 que emplea un producto del gen WT1 o un fragmento del mismo. Para diseñar una estrategia de tratamiento a largo plazo después de iniciar la inmunoterapia, la predicción del grado del efecto clínico tiene importancia clínica. Por tanto, es conveniente desarrollar un procedimiento de alta precisión para predecir el efecto clínico.
Documentos de la técnica anterior
Documentos de patente
Documento de patente 1: Patente japonesa n.° 3728439
Documentos que no son patentes
Documento que no es patente 1: Daniel A. Haber et al., Cell, 29 de junio de 1990, 61(7):1257-1269.
Documento que no es patente 2: Call K.M. et al., Cell, 9 de febrero de 1990, 60(3):509-520.
Documento que no es patente 3: Menke A.L. et al., Int. Rev. Cytol., 1998, 181:151-212, análisis.
Documento que no es patente 4: Yamagami T. et al., Blood, 1 de abril de 1996, 87(7):2878-2884.
Documento que no es patente 5: Inoue K. et al., Blood, 15 de abril de 1998, 91(8):2969-2976.
Documento que no es patente 6: Tsuboi A. et al., Leuk. Res., mayo de 1999, 23(5):499-505.
Documento que no es patente 7: Fujiki F. et al., J. Immunother., abril de 2007, 30(3):282-293.
Divulgación de la invención
Problemas que va a resolver la invención
Los objetivos que va a alcanzar la presente invención incluyen proporcionar un procedimiento para predecir con mayor precisión el efecto clínico a largo plazo en un sujeto al que se le ha administrado una vacuna del péptido WT1. Los objetivos que va a alcanzar la presente invención también incluyen proporcionar un kit para predecir con mayor precisión el efecto clínico.
Medios para resolver los problemas
Los presentes inventores han desarrollado un sistema para medir los anticuerpos IgG contra un péptido WT1 empleando un péptido antigénico WT1 que corresponde a una vacuna de péptido WT1 que se administra a un sujeto y, de este modo, han completado la presente invención. En concreto, los presentes inventores han desarrollado un sistema para medir la valoración de anticuerpos IgG1, IgG3 e IgG4 contra un péptido antigénico WT1 y usar estos valores como índices.
Concretamente, la presente invención proporciona lo siguiente:
(1) Un procedimiento para predecir el efecto clínico en un sujeto de una inmunoterapia con el péptido WT1 que comprende las siguientes etapas:
a) poner en contacto una muestra procedente del sujeto al que se le ha administrado una vacuna del péptido WT1 con un péptido antigénico WT1, en donde el péptido antigénico WT1 comprende la misma secuencia que la de la vacuna del péptido WT1 o una secuencia de aminoácidos que consiste en 5 o más aminoácidos contiguos derivados de la secuencia de aminoácidos de la vacuna del péptido WT1, y el péptido antigénico WT1 tiene una longitud de 5 a 30 aminoácidos; y
b) detectar la unión de la muestra al péptido antigénico WT1 y, con ello, medir una valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 presentes en la muestra,
en donde un aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 en el sujeto significa haber logrado un efecto clínico favorable, y
en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia global o una tasa de supervivencia sin progresión, y
en donde el sujeto es un paciente con una enfermedad asociada a WT1, y la enfermedad asociada a WT1 es una leucemia, incluida leucemia mieloide crónica, un tumor de órganos hematopoyéticos, incluido síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple y linfoma maligno, o un cáncer sólido, incluido cáncer esofágico, cáncer de estómago, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de las vías biliares, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, sarcoma, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de glándula tiroidea, carcinoide, neumoblastoma, hepatoblastoma, tumor cerebral y carcinoma tímico, y
en donde el péptido antigénico WT1 comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:7-56, 58-60, 62, 63 y 65-71, y
en donde la vacuna del péptido WT1 administrada al sujeto consiste en la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:2-6;
(2) El procedimiento de acuerdo con (1), en donde el péptido antigénico WT1 comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 21, 27, 31, 32, 42, 43 o 57-71;
(3) El procedimiento de acuerdo con (1) o (2), en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia global;
(4) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de (1) o (2), en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia sin progresión;
(5) El procedimiento de acuerdo con (1) a (4), en donde las subclases del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 medido son IgG1, IgG3 e IgG4, y en donde se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de cada uno de IgG1 e IgG3 es el doble o más del doble de la valoración de IgG4;
(6) El procedimiento de acuerdo con (5), en donde se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de IgG3 es menos del doble de la valoración de IgG1 y la valoración de IgG1 es menos del doble de la valoración de IgG3;
(7) El procedimiento de acuerdo con (1) a (6), en donde se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1; (8) El procedimiento de acuerdo con (7), en donde se mide la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1; (2) El procedimiento de acuerdo con (1), en donde el péptido antigénico WT1 comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 21, 27, 31, 32, 42, 43 o 57-71;
(9) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de (1) a (8), en donde la muestra es una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de suero o una muestra de orina;
(10) El procedimiento de acuerdo con (9), en donde la muestra es una muestra de suero;
(11) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de (1) a (10), en donde la enfermedad asociada a WT1 es un cáncer sólido, tal como cáncer esofágico, cáncer de estómago, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de las vías biliares, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, sarcoma, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de
próstata, cáncer testicular, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de glándula tiroidea, carcinoide, neumoblastoma, hepatoblastoma, tumor cerebral y carcinoma tímico;
(12) El procedimiento de acuerdo con (11), en donde la enfermedad asociada a WT1 es cáncer pancreático, tumor cerebral o carcinoma tímico;
(13) El procedimiento de acuerdo con (12), en donde la enfermedad asociada a WT1 es glioma maligno recurrente, carcinoma tímico o cáncer pancreático; y
(14) El uso de un kit que comprende un péptido antigénico WT1 en el procedimiento para predecir el efecto clínico en un sujeto de una inmunoterapia con el péptido WT1 que comprende cualquiera de (1) a (13). Efectos de la invención
De acuerdo con la presente invención, se puede proporcionar un procedimiento para predecir el efecto clínico a largo plazo, en un sujeto al que se le ha administrado una vacuna del péptido WT1, con mayor precisión en comparación con un procedimiento convencional. También se puede proporcionar un kit para predecir con mayor precisión el efecto clínico. Por tanto, se puede considerar, de una manera más adecuada, la propiedad de la administración continua de la vacuna del péptido WT1.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1: La figura 1 es un gráfico que representa el cambio de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 en pacientes con glioma maligno recurrente después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235.
Figura 2: La figura 2 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de supervivencia global en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 3: La figura 3 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WH235 y la tasa de supervivencia global en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 4: La figura 4 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WH235 y la tasa de supervivencia sin progresión en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 5: La figura 5 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de supervivencia sin progresión en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 6: La figura 6 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 7: La figura 7 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 8: La figura 8 es un gráfico que representa la relación entre el tipo de anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de supervivencia global en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo Th1 y los cuadrados blancos representan el tipo que no es Th1.
Figura 9: La figura 9 es un gráfico que representa la relación entre el tipo de anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de supervivencia sin progresión en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo Th1 y los cuadrados blancos representan el tipo que no es Th1.
Figura 10: La figura 10 es un gráfico que representa las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del tipo Th1 y del tipo que no es Th1 cuando se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo Th1 y los cuadrados blancos representan el tipo que no es Th1.
Figura 11: La figura 11 es un gráfico que representa las respectivas tasas de supervivencia global del tipo IgG1/tipo IgG3/tipo IgG1 e IgG3 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo IgG1, los círculos negros representan el tipo IgG3 y los triángulos negros representan el tipo IgG1 e IgG3.
Figura 12: La figura 12 es un gráfico que representa las respectivas tasas de supervivencia del tipo IgG1/tipo IgG3/tipo IgG1 e IgG3 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo IgG1, los círculos negros representan el tipo IgG3 y los triángulos negros representan el tipo IgG1 e IgG3.
Figura 13: La figura 13 es un gráfico que representa las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del tipo IgG1/tipo IgG3/tipo IgG1 e IgG3 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan el tipo IgG1, los círculos negros representan el tipo IgG3 y los triángulos negros representan el tipo IgG1 e IgG3.
Figura 14: La figura 14 es un gráfico que representa las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en que no aumentó/grupo en que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 4 a 8 semanas después de iniciar la administración combinada de la vacuna del péptido WT1235 y la vacuna del péptido WT1332 (cooperador) en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 15: La figura 15 es un gráfico que representa las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en que no aumentó/grupo en que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 4 a 8 semanas después de iniciar la administración combinada de la vacuna del péptido WT1235 y la vacuna del péptido WT1332 (cooperador) en pacientes con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 16: La figura 16 es un gráfico que representa las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en que no aumentó/grupo en que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 cuando se mide la valoración del anticuerpo de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1332 (cooperador) en pacientes
con glioma maligno recurrente. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-325 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 17: La figura 17 es un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 y la tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 en pacientes con carcinoma tímico. Los cuadrados negros representan un grupo en el que aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo de aumento de la valoración del anticuerpo) y los cuadrados blancos representan un grupo en el que no aumentó la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (grupo en que no aumentó la valoración del anticuerpo).
Figura 18: La figura 18 es un gráfico que representa los resultados medidos de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1332 usando variantes de péptidos antigénicos WT1 en un paciente con glioma maligno recurrente al que se le ha administrado la vacuna del péptido WT1332 (cooperador). Los cuadrados blancos representan los resultados cuando se emplea WT1-frg3, los círculos negros representan los resultados cuando se emplea WT325-342, los triángulos blancos representan los resultados cuando se emplea WT332-347, los cuadrados negros representan los resultados cuando se emplea WT334-342 y los círculos blancos representan los resultados cuando se emplea WT332-338 como antígenos para un ELISA.
Figura 19: La figura 19 es un gráfico que representa los resultados medidos de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1235 usando variantes de péptidos antigénicos WT1 en un paciente con carcinoma tímico al que se le ha administrado la vacuna del péptido WT1235. Los cuadrados blancos representan los resultados cuando se emplea WT1-frg2, los círculos negros representan los resultados cuando se emplea WT235-252, los triángulos blancos representan los resultados cuando se emplea WK235-243 y los cuadrados negros representan los resultados cuando se emplea WT237-243 como antígenos para un ELISA.
Figura 20: La figura 20 es un gráfico que representa los resultados medidos de la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1-I26 usando variantes de péptidos antigénicos WT1 en un paciente con cáncer pancreático que recibe un tratamiento combinado con una vacuna del péptido WT1-I26 y un antineoplásico. Los cuadrados blancos representan los resultados cuando se emplea WT1-frg1, los círculos negros representan los resultados cuando se emplea WT118-135, los triángulos negros representan los resultados cuando se emplea WK126-134, los cuadrados negros representan los resultados cuando se emplea WT126-131, los círculos blancos representan los resultados cuando se emplea WT129-134 y los triángulos blancos representan los resultados cuando se emplea WT126-130 como antígenos para un ELISA.
Modos para llevar a cabo la invención
En resumen, la presente invención se refiere a un procedimiento para predecir el efecto clínico en un sujeto de la inmunoterapia con el péptido WT1, tal como se indicó anteriormente, que comprende las siguientes etapas: a) poner en contacto una muestra procedente del sujeto con un péptido antigénico WT1; y b) detectar la unión de la muestra al péptido antigénico WT1 y, con ello, medir una valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 presentes en la muestra, en donde un aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 en el sujeto significa haber logrado un efecto clínico favorable.
En una realización preferida de la presente invención, el procedimiento para predecir el efecto clínico en el sujeto de la inmunoterapia con el péptido WT1 comprende las etapas a) y b), en donde las subclases del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 medido son IgG1, IgG3 e IgG4, y en donde se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de cada uno de IgG1 e IgG3 es el doble o más del doble de la valoración de IgG4. Preferentemente, el procedimiento se caracteriza porque se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de IgG3 es menos del doble de la valoración de IgG1 y la valoración de IgG1 es menos del doble de la valoración de IgG3.
En otra realización preferida, se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 de 8 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1. En una realización más preferida, se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1.
En la presente invención, la expresión "vacuna del péptido WT1" se refiere a un péptido derivado de un producto del gen WT1 (SEQ ID NO:1) o un péptido modificado del mismo que se administra a un sujeto como vacuna en una inmunoterapia con el péptido WT1. La vacuna del péptido WT1 incluye, por ejemplo, la vacuna del péptido WT1235 (SEQ ID nO:2), la vacuna del péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SeQ ID NO:3) (documento de patente 1), la vacuna del péptido WT1-I26 (SEQ ID NO:4), la vacuna del péptido WT1w (SEQ ID NO:5). Como alternativa, la vacuna del péptido WT1 puede ser una vacuna del péptido cooperador WT1332 (SEQ ID NO:6) (documento que no
es patente 7). La vacuna del péptido WT1 no presenta limitaciones concretas y puede usarse un péptido conocido como vacuna que se utiliza, o que se utilizará en el futuro, en la inmunoterapia con el péptido WT1.
En la presente invención, las expresiones "péptido antigénico WT1 que corresponde a la vacuna del péptido WT1" y "péptido antigénico WT1" se emplean indistintamente. Un péptido antigénico WT1 es un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en 5 o más aminoácidos contiguos derivados de una secuencia de aminoácidos de una vacuna del péptido WT1 administrada a un sujeto, y puede detectar un anticuerpo contra la vacuna del péptido WT1. Los 5 o más aminoácidos contiguos son, por ejemplo, 5, 6, 7, 8, 9 o más aminoácidos contiguos. El péptido antigénico WT1 en la presente invención tiene la secuencia indicada anteriormente y su longitud es de 5 a 30 aminoácidos. Un "péptido antigénico WT1" puede ser una proteína o un péptido que comprenda la misma secuencia de aminoácidos que la de una vacuna del péptido WT1 administrada a un sujeto. Como alternativa, el péptido antigénico WT1 puede ser un péptido que consista en la misma secuencia de aminoácidos que la de una vacuna del péptido WT1 administrada a un sujeto. Concretamente, el péptido antigénico WT1 puede ser un péptido per se que consista en la secuencia de aminoácidos de una vacuna del péptido WT1 administrada a un sujeto o puede ser un péptido que comprenda toda o parte de la secuencia de aminoácidos de la vacuna del péptido WT1.
El péptido antigénico WT1 es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:7-56, 58-60, 62, 63 y 65-71. En una realización preferida, el péptido antigénico WT1 es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 21, 27, 31, 32, 42, 43, 58-60, 62, 63 y 65 71, por ejemplo, un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 21, 27, 31, 32, 42, 43 o 58-60. En una realización más preferida, el péptido antigénico WT1 es un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 32, 42 o 58-60. En la presente invención, cualquier aminoácido de los aminoácidos que componen el péptido antigénico WT1 puede modificarse de modo adecuado. La modificación de un residuo de aminoácido puede llevarse a cabo mediante un procedimiento conocido.
En la presente memoria descriptiva, "la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 aumenta" significa el caso en que (1) la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de una vacuna de WT1 no disminuye por debajo de un valor predeterminado, o (2) la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de una vacuna de WT1 aumenta hasta un valor predeterminado o superior a este, en comparación con la valoración antes de la administración de la vacuna de WT1. En la presente invención, este valor varía en función de condiciones como el objeto de medición (el número del sujeto, la edad, el sexo, el peso corporal, el estado) y el procedimiento de medición, las condiciones de medición y el procedimiento estadístico y, por tanto, el valor debe determinarse previamente. Este valor puede determinarse empíricamente a partir de datos acumulados. Por consiguiente, los expertos en la materia a la que pertenece la presente invención apreciarán que puede seleccionarse un valor concreto en función de la especificidad y la sensibilidad deseadas, el tipo de muestra usada y el procedimiento de preparación de la muestra, y otros factores descritos en el presente documento, llevando a cabo experimentos habituales. Por ejemplo, este valor concreto puede determinarse midiendo la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1 empleando una muestra que se considera negativa para la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1 y remitiéndose al valor promedio más el doble de la desviación estándar calculado a partir del resultado. Los expertos en la materia también apreciarán que la medición del anticuerpo antipéptido antigénico WT1 empleando el péptido antigénico WT1 mencionado anteriormente significa la medición de un anticuerpo contra la vacuna del péptido WT1 a la que corresponde el péptido antigénico WT1.
En el procedimiento de la presente invención, puede usarse como muestra un líquido corporal, que es una muestra derivada de un sujeto y que se sabe, en general, que contiene un anticuerpo. Preferentemente, la muestra es una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de suero o una muestra de orina. Más preferentemente, la muestra es una muestra de suero. La muestra puede prepararse en una condición adecuada para su uso en el procedimiento de la presente invención, por ejemplo, empleando un tampón.
En la presente invención, un sujeto es un paciente con una enfermedad asociada a WT1, en donde la enfermedad asociada a WT1 es una leucemia, tal como leucemia mieloide crónica, un tumor de órganos hematopoyéticos, tal como síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple y linfoma maligno, o un cáncer sólido, tal como cáncer esofágico, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de las vías biliares, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, sarcoma, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de glándula tiroidea, carcinoide, neumoblastoma, hepatoblastoma, tumor cerebral y carcinoma tímico. En una realización preferida, el sujeto es un paciente con glioblastoma maligno recurrente (GBM), carcinoma tímico o cáncer pancreático.
La medición de la valoración de anticuerpos en el procedimiento de la presente invención puede llevarse a cabo empleando diversos procedimientos que se usan habitualmente en las técnicas de medición de anticuerpos. Estos procedimientos incluyen el inmunoensayo. Los ejemplos concretos de inmunoensayos incluyen ELISA y radioinmunoensayos ("radioimmunoassays", RIA).
Por ejemplo, un ELISA se realiza de la siguiente manera. En primer lugar, se inmoviliza un péptido antigénico WT1 que puede participar en una reacción específica de antígeno-anticuerpo con un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 que se va a medir. A esto se le añade una muestra. Con ello, se produce la reacción de antígeno-anticuerpo entre el péptido antigénico WT1 inmovilizado y un anticuerpo en la muestra, y un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 presente en la muestra se une al péptido antigénico WT1 inmovilizado. A continuación, el anticuerpo antipéptido antigénico WT1 unido se detecta empleando un reactivo de detección de anticuerpos para medir la cantidad del anticuerpo presente en la muestra.
Como alternativa, se inmoviliza un reactivo de detección de anticuerpos y, con ello, se capturan los anticuerpos en la muestra. A continuación, se añade un péptido antigénico WT1 para que el péptido se una a un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 en los anticuerpos capturados. Además, se une un anticuerpo marcado específico del antígeno. Con ello se puede detectar y ensayar el anticuerpo antipéptido antigénico WT1 objetivo presente en la muestra.
Las selecciones, modificaciones y similares de cada proceso en estos procedimientos de medición son muy conocidas por los expertos en la materia. En la presente invención, pueden emplearse diversos procedimientos sin que los procedimientos mencionados anteriormente sean una limitación concreta (véase, por ejemplo, "Rinsho Kensa-ho Teiyo (Manual de medicina de laboratorio clínico de Kanai)", 33a edición revisada, KANEHARA & Co., LTD., 2010).
No existen limitaciones concretas con respecto al reactivo de detección de anticuerpos para detectar un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 y pueden emplearse diversos reactivos que se usan en general. Por ejemplo, puede emplearse un preparado que comprenda un anticuerpo anti-IgG humana, un anticuerpo anti-IgGl humana, un anticuerpo anti-IgG3 humana y/o un anticuerpo anti-IgG4 humana, que se unen específicamente a las IgG, IgG1, IgG3 y/o IgG4 humanas que se van a medir. Estas están disponibles en el mercado o pueden prepararse. Los procedimientos para preparar dicho reactivo de detección de anticuerpos son muy conocidos por los expertos en la materia. En una realización preferible, el reactivo de detección de anticuerpos empleado en la presente invención es un anticuerpo secundario marcado. En una realización más preferible, el reactivo de detección de anticuerpos empleado en la presente invención es una combinación de un anticuerpo secundario marcado y un anticuerpo terciario marcado que detecta el anticuerpo secundario.
En el procedimiento de la presente invención, un péptido antigénico WT1 puede sintetizarse de modo químico, por ejemplo, de acuerdo con un procedimiento en fase sólida o un procedimiento en fase líquida. Cuando se emplea un procedimiento en fase sólida, se sintetiza un péptido sobre una fase sólida con las actuaciones de activar un aminoácido protegido en el N-terminal, acoplar, lavar, desbloquear y activar repetidamente hasta terminar el péptido deseado. Dicho producto se retira de la fase sólida, se purifica mediante HPLC o similares. Posteriormente, dicho producto se somete a otro tipo de investigaciones, tales como la verificación de la secuencia y los ensayos biológicos.
Como alternativa, el péptido antigénico WT1 puede sintetizarse mediante un sistema de traducción sin células. Como alternativa, puede producirse por medio de ingeniería genética a partir de la secuencia de nucleótidos que codifica el péptido antigénico WT1. Como alternativa, también puede obtenerse combinando estos procedimientos. La producción de un péptido antigénico WT1 mediante una técnica de ingeniería genética puede llevarse a cabo de acuerdo con la tecnología de recombinación génica habitual. Más específicamente, se prepara en una célula hospedadora un ADN recombinante que expresa un gen deseado que codifica el péptido antigénico WT1, se introduce el ADN recombinante en las células hospedadoras para su transformación y se cultiva el transformante. El transformante puede producir un polipéptido deseado en el entorno intracelular o extracelular como producto de expresión del transformante.
Cada actuación empleada en el presente documento, por ejemplo, la síntesis química de fragmentos de genes, el tratamiento enzimático para la escisión, la deleción, la adición o la unión de los mismos, el aislamiento, la purificación, la selección y similares, la introducción de un ADN recombinante en una célula hospedadora y el cultivo del transformante son muy conocidas por los expertos en la materia (véase, por ejemplo, Molecular Cloning, de T. Maniatis et al., Cold Spring Harbor Laboratory (1982)).
Si se desea, el péptido antigénico WT1 o la variante del mismo también puede aislarse y purificarse a partir del producto de expresión mencionado anteriormente mediante diversos procedimientos de separación que aprovechan las propiedades físicas y químicas del polipéptido.
Además, en el procedimiento de la presente invención, pueden utilizarse de modo adecuado procedimientos, medios, reactivos de medición usados en los mismos o similares conocidos para medir la cantidad de un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 en una muestra.
Por ejemplo, cuando se emplea un procedimiento en fase sólido en el procedimiento de medición mencionado anteriormente, un antígeno o un anticuerpo para el sistema de medición se inmoviliza sobre una fase sólida de acuerdo con el procedimiento conocido por los expertos en la materia. Como fase sólida, se puede usar un portador
inactivo insoluble que se suele utilizar. Algunos ejemplos de portadores incluyen bastoncillos, esferas, microplacas y tubos de ensayo fabricados con diversos materiales, tales como vidrio, polvo de celulosa, Sephadex, Sepharose, poliestireno, papel de filtro, carboximetilcelulosa, resinas de intercambio iónico, dextrano, películas de plástico, tubos de plástico, nailon, esferas de vidrio, seda, copolímeros de poliamina-metil vinil éter-ácido maleico, copolímeros de aminoácidos y copolímeros de etileno-ácido maleico.
La inmovilización del antígeno o del anticuerpo no presenta limitaciones concretas y puede emplearse tanto un enlace físico como un enlace químico. Algunos ejemplos habituales de inmovilización incluyen procedimientos que emplean una reacción química, tales como los procedimientos de enlaces covalentes, por ejemplo, procedimientos diazoicos, procedimientos peptídicos (tales como procedimientos con derivados de amidas ácidas, procedimientos con resinas de cloruro de carboxilo, procedimientos con resinas de carbodiimida, procedimiento con derivados de anhídrido maleico, procedimientos con derivados de isocianato, procedimientos de polisacáridos activados con cianobromuro, procedimientos con derivados de carbonato de celulosa, procedimientos con reactivos de condensación), procedimientos de alquilación, procedimientos de acoplamiento de un reactivo de reticulación (que emplean, por ejemplo, glutaraldehído o isocianato de hexametileno como reactivo de reticulación) y procedimientos de acoplamiento con reacción de Ugi; procedimientos de unión iónica que emplean soportes, tales como resinas de intercambio iónico; y procedimientos de adsorción física que emplean soportes de vidrio poroso, tales como esferas de vidrio.
El reactivo de marcaje en cada sistema de medición no presenta limitaciones concretas y puede utilizarse cualquier reactivo conocido o cualquier reactivo previsto para ser usado en el futuro. Algunos ejemplos específicos del mismo incluyen radioisótopos que suelen utilizarse en procedimientos de inmunoensayo; enzimas, tales como fosfatasa alcalina ("alkaline phosphatase", ALP) y peroxidasa (PDX); sustancias fluorescentes, tales como isotiocianato de fluoresceína ("fluorescein isothiocyanate", FITC) e isotiocianato de tetrametilrodamina ("tetramethylrhodamine isothiocyanate", RITC); y 1N-(2,2,6,6-tetrametil-1-oxil-4-piperidil)-5N-(aspartato)-2,4-dinitrobenceno (TOPA). Además, puede usarse microperoxidasa, quimotripsinógeno, procarboxipeptidasa, gliceroaldehído-3-fosfato deshidrogenasa, amilasa, fosforilasa, D-Nasa o P-Nasa. El procedimiento de marcaje que emplea estos materiales de marcaje puede llevarse a cabo de acuerdo con un procedimiento conocido.
La actividad enzimática puede medirse de acuerdo con un procedimiento conocido en función del tipo de enzima empleada. Por ejemplo, en el caso de emplear la peroxidasa como enzima de marcaje, se usa ABTSj (ácido 2,2'-azino-bis(3'-etilbenztiazolinsulfónico) como sustrato; en el caso de emplear la fosfatasa alcalina, se usa fosfato de pnitrofenilo como sustrato, y la descomposición de cada sustrato se mide, por ejemplo, con un espectrofotómetro. Cuando se emplea como marcador un radioisótopo, un material fluorescente o similares en lugar del marcador enzimático mencionado anteriormente, el marcador también puede medirse de acuerdo con un procedimiento conocido.
En el sistema de medición, puede usarse cualquier disolvente que suele emplearse y que no afecte de modo adverso a la reacción. Específicamente, puede emplearse preferentemente una disolución tampón con un pH de aproximadamente 5 a 9, tal como una disolución de tampón citrato, una disolución de tampón fosfato, una disolución de tampón Tris-ácido clorhídrico o una disolución de tampón acetato.
Las condiciones de la reacción inmunológica (unión) no presentan limitaciones concretas y se emplean las condiciones habituales que suelen utilizarse en estos ensayos. En general, la reacción puede llevarse a cabo a una temperatura de 45 °C o inferior, preferentemente de aproximadamente 4 a 40 °C, durante aproximadamente 1 a 40 h.
Como característica principal del procedimiento de la presente invención, se emplea la valoración de un anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 en una muestra, que se mide como se describió anteriormente, como índice clínico para predecir el efecto clínico en la inmunoterapia con el péptido WT1.
En concreto, los presentes inventores han descubierto que se produce un anticuerpo IgG antipéptido WT1 contra el péptido WT1 administrado en un sujeto que recibe inmunoterapia con el péptido WT1 y que la valoración del anticuerpo IgG antipéptido WT1, en un determinado momento, se correlaciona con un efecto clínico. Concretamente, los presentes inventores han descubierto que una valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1, que se mide empleando un péptido antigénico WT1 correspondiente al péptido WT1 administrado o una variante del mismo, puede ser un índice eficaz para predecir el efecto clínico en la inmunoterapia con el péptido WT1. Además, los presentes inventores analizaron las subclases del anticuerpo IgG antipéptido WT1 producido y descubrieron que el efecto clínico en la inmunoterapia con el péptido WT1 es mejor en el tipo Th1 que en el tipo que no es Th1. Además, los presentes inventores analizaron con mayor detalle el tipo Th1 y descubrieron que el efecto clínico en la inmunoterapia con el péptido WT1 era mejor en el tipo IgG1 e IgG3 que en el tipo IgG1 y el tipo IgG3.
La expresión "tipo Th1" se refiere al caso en que los anticuerpos IgG1 o los anticuerpos IgG3, que pertenecen a la subclase de tipo Th1, son el doble o más del doble que los anticuerpos IgG4, que pertenecen a la subclase de tipo Th2. Concretamente, el "tipo Th1" cumple la siguiente fórmula (I) o fórmula (II).
(I) Valoración de anticuerpos IgG1 antipéptido antigénico WTI/valoración de anticuerpos IgG4 antipéptido antigénico WT1 >2,0
(II) Valoración de anticuerpos IgG3 antipéptido antigénico WT1/valoración de anticuerpos IgG4 antipéptido antigénico WT1 > 2,0
La expresión "tipo que no es Th1" se refiere al caso en que no se cumplen ambas fórmula (I) y fórmula (II) anteriores.
La expresión "tipo IgG1" se refiere al caso en que los anticuerpos IgG1 son el doble o más del doble que los anticuerpos IgG3, entre el tipo Th1. Concretamente, el "tipo IgG1" entre el tipo Th1 cumple la siguiente formula (III). (III) Valoración de anticuerpos IgG1 antipéptido antigénico WTI/valoración de anticuerpos IgG3 antipéptido antigénico WT1 > 2,0
La expresión "tipo IgG3" se refiere al caso en que los anticuerpos IgG3 son el doble o más del doble que los anticuerpos IgG1, entre el tipo Th1. Concretamente, el "tipo IgG3" entre el tipo Th1 cumple la siguiente formula (IV). (IV) Valoración de anticuerpos IgG3 antipéptido antigénico WTI/valoración de anticuerpos IgG1 antipéptido antigénico WT1 > 2,0
La expresión "tipo IgG1 e IgG3" se refiere al caso en que no se cumplen ambas fórmula (III) y fórmula (IV), entre el tipo Th1.
La presente invención también proporciona el uso de un kit que comprende un péptido antigénico WT1 para su uso en el procedimiento de la presente invención como se ha definido anteriormente en el presente documento. Dicho kit comprende un péptido antigénico WT1 como ingrediente activo, y el péptido antigénico WT1 genera una reacción de antígeno-anticuerpo con un anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 que se va a medir. Dicho kit también comprende cualquier reactivo, tal como un reactivo de detección de anticuerpos, usado en el sistema de medición en el procedimiento de la presente invención. El kit también puede comprender reactivos apropiados para llevar a cabo con facilidad la medición, por ejemplo, un diluyente de anticuerpos, un diluyente de la reacción, un tampón, un agente de lavado y un reactivo para detectar un marcador. Además, el kit también puede comprender materiales, tales como instrucciones, necesarios para llevar a cabo el procedimiento de la presente invención. El kit mide la valoración de anticuerpos IgG, preferentemente con un inmunoensayo. Más preferentemente, el kit mide la valoración de anticuerpos IgG con un ELISA. Puede usarse la variante del péptido antigénico WT1 descrita anteriormente en dicho kit. Además, puede emplearse un péptido en el que cualquier aminoácido de los aminoácidos que componen el péptido antigénico WT1 puede modificarse de modo adecuado.
La presente invención se describirá en detalle y de modo específico con ejemplos. Los ejemplos que no están cubiertos por el alcance de las reivindicaciones tienen carácter ilustrativo.
Ejemplo 1
Síntesis de péptidos antigénicos WT1
Se sintetizaron los péptidos WT1 que aparecen en las tablas 1-1 y 1-2 en Kabushiki Kaisha PHJapan. En las tablas 1-1 y 1-2, el "sitio de inicio" y el "sitio de terminación" muestran las posiciones de los correspondientes residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la proteína WT1 humana de tipo salvaje (SEQ ID NO:1).
Tabla 1-1
(continuación)
Tabla 1-2
Ejemplo 2
Valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1 y efectos clínicos en pacientes con glioblastoma maligno recurrente (GBM)
Los presentes inventores realizaron el siguiente estudio para confirmar la relación entre la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1 y los efectos clínicos en pacientes con GBM.
1. Materiales y procedimientos
1-1 La inmunoterapia con el péptido WT1 se llevó a cabo en 72 pacientes con GBM usando el péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SEQ ID NO:3)) como vacuna del péptido WT1. Se mezclaron 3 mg del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) con adyuvante incompleto Montanide ISA51 en una proporción en peso de 1:1 para preparar una emulsión. Esta emulsión se administró a cada paciente una vez a la semana durante 12 semanas mediante administración intracutánea. Se recogió sangre del paciente antes de iniciar la administración de la vacuna y en determinados momentos después de iniciar la administración y se centrifugó para obtener suero. El suero obtenido se crioconservó a -80 °C o inferior y se descongeló para su uso en el momento del ensayo. Cuando se observaron los efectos, se continuó la administración de la vacuna del péptido WT1 en intervalos de 2 a 4 semanas durante 12 semanas.
1-2 Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (anticuerpos IgG antipéptido WT1235) (ELISA)
A una placa de reacción de 96 pocillos, a la que se le había suministrado el kit de recubrimiento de péptidos Peptide Coating Kit (Takara Bio Inc.) con grupos amino unidos a la superficie inferior de los pocillos, se le añadió una disolución (4 μg/ml) del péptido WT1-235 disuelto en un tampón de reacción suministrado con el kit de recubrimiento de péptidos a 50 μl/pocillo. Se añadió un reactivo de acoplamiento a 30 μl/pocillo y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Los pocillos se lavaron con agua destilada para inmovilizar sobre ellos al antígeno. Se llevó a cabo el bloqueo agitando a temperatura ambiente durante 2 h usando Blocking One (Nacalai Tesque, Inc.). Posteriormente, los pocillos se lavaron con TBST al 0,05% (Tris 40 mM, cloruro de sodio 0,15 M y Tween-20 al 0,05 %, pH 8,0). A continuación, se añadió el suero diluido en 100 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos a 100 μl/pocillo y se dejó que reaccionase durante la noche a 4 °C. Después de lavar con TBST al 0,05 %, la placa se hizo reaccionar con un anticuerpo secundario a temperatura ambiente durante 2 h. El anticuerpo secundario empleado fue un anticuerpo anti-IgG humana de conejo marcado con peroxidasa (sc-2769, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 400 μg/ml) diluido en 1000 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos. Posteriormente, los pocillos se lavaron con TBST al 0,05 %. A continuación, la placa se hizo reaccionar con un anticuerpo terciario a temperatura ambiente durante 2 h. El anticuerpo terciario empleado fue un anticuerpo anti-IgG de conejo de cabra marcado con peroxidasa (sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 400 μg/ml) diluido en 1000 veces con TBST al 0,05%. Tras lavar con TEST al 0,05 %, se reveló el color con un kit TMB (KPL, Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.). La reacción se terminó con HCl 1 N y después se midió la absorbancia a 450 nm usando un lector de microplacas (CORONA ELECTRIC MTP-310Lab).
Los presentes inventores analizaron además la subclase de IgG de los anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 por medio del siguiente procedimiento para confirmar que la inducción de la respuesta inmunológica específica de WT1 detectada junto con un aumento del nivel de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 era de tipo Th1 o no era de tipo Th1.
1-3 Ensayo de IgG1, IgG3 e IgG4 contra el péptido WT1-235 (ELISA)
Se llevó a cabo un ELISA del mismo modo que en el anterior párrafo 1-2. Cada anticuerpo secundario empleado fue un anticuerpo anti-IgG1 humana de ratón marcado con peroxidasa (n.° 9052-05 mAb de ratón, clon 4E3, Southern Biotech), un anticuerpo anti-IgG3 humana de ratón marcado con peroxidasa (n.° 9210-05 mAb de ratón, clon HP6050, Southern Biotech) o un anticuerpo anti-IgG4 humana de ratón marcado con peroxidasa (n.° 9190-05 mAb de ratón, clon HP6023, Southern Biotech). Para su uso, el anticuerpo anti-IgG1 humana de ratón marcado con peroxidasa y el anticuerpo anti-IgG4 humana de ratón marcado con peroxidasa se diluyeron cada uno en 2000 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos Peptide Coating Kit, y el anticuerpo anti-IgG3 humana de ratón marcado con peroxidasa se diluyó en 1000 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos. El anticuerpo terciario fue un anticuerpo anti-IgG de ratón de cabra marcado con peroxidasa (Promega K.K., W4028, 1 mg/ml) diluido en 2500 veces con TBST al 0,05 %.
2. Análisis estadístico
Se llevó a cabo la comparación entre dos grupos con el ensayo de Mann-Whitney. En cuanto a la diferencia en la tasa de aumento del nivel de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 entre un grupo de pacientes que responden y un grupo de pacientes que no responden, se ensayó la relación entre dos variables categóricas con el procedimiento
de cálculo exacto de Fisher. Además, se llevó a cabo la comparación de la tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1, la tasa de supervivencia sin progresión y la tasa de supervivencia global con un ensayo de rangos logarítmicos. La valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 se midió usando el suero negativo a anticuerpos antipéptido antigénico WT1 (suero del paciente antes de iniciar la inmunoterapia con el péptido WT1) y el valor promedio más el doble de la desviación estándar = 0,045. Por tanto, (1) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 fue de 0,05 o mayor después de iniciar la administración de la vacuna de WT1 o (2) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 aumentó en 0,05 o superior después de iniciar la administración de la vacuna de WT1, en comparación con antes de iniciar la administración de la vacuna de WT1, este acontecimiento se definió con la expresión "la valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 aumentó".
3. Resultados
(I) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1235) y efectos clínicos
(i) Cambio en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (figura 1)
La figura 1 muestra un gráfico que representa la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). La valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 aumentó a medida que transcurrían los días (avance del tratamiento) después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)), en comparación con antes de iniciar la administración. La valoración de anticuerpos aumentó significativamente 2 meses y 3 meses después de iniciar la administración, en comparación con antes de iniciar la administración.
(ii) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de supervivencia global (figuras 2 y 3) Las figuras 2 y 3 muestran un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) y la tasa de supervivencia global. Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos mostró una tasa de supervivencia global significativamente mayor que la del grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos, tanto en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración (figura 2) como en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración (figura 3). Además, el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración presentó una diferencia más clara entre el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos y el grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos, que la que presentó el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración.
(iii) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de supervivencia sin progresión (figuras 4 y 5)
Las figuras 4 y 5 muestran un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) y la tasa de supervivencia sin progresión. Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos tendió a mostrar una tasa de supervivencia sin progresión mayor que la del grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración (figura 4). El grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos mostró una tasa de supervivencia sin progresión significativamente mayor que la del grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración (figura 5).
(iv) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figuras 6 y 7)
Las figuras 6 y 7 muestran un gráfico que representa la relación entre el aumento de la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) y la tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1. Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos tendió a mostrar una tasa de continuación de la administración de la vacuna mayor que la del grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración (figura 6). El grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos mostró una tasa de continuación de administración de la vacuna significativamente mayor que la del grupo en el que no aumentó la valoración de anticuerpos, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración (figura 7).
(II) Tipo (tipo Th1/no tipo Th1) de anticuerpo IgG antipéptido WT1-235 (anticuerpo IgG antipéptido WTI235) y efectos clínicos
(i) Tipo Th1/no tipo Th1 y tasa de supervivencia global (figura 8)
La figura 8 muestra las respectivas tasas de supervivencia global del tipo Th1 y del tipo que no es Th1 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo Th1 tendió a mostrar una tasa de supervivencia global mayor que la del tipo que no es Th1.
(ii) Tipo Th1/no tipo Th1 y tasa de supervivencia sin progresión (figura 9)
La figura 9 muestra las respectivas tasas de supervivencia sin progresión del tipo Th1 y del tipo que no es Th1 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo Th1 tendió a mostrar una tasa de supervivencia sin progresión mayor que la del tipo que no es Th1.
(iii) Tipo Th1/no tipo Th1 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 10) La figura 10 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del tipo Th1 y del tipo que no es Th1 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo Th1 mostró una tasa de continuación de la administración de la vacuna significativamente mayor que la del tipo que no es Th1 (figura 10).
(III) Análisis de las subclases de IgG
(i) Aumento en la valoración de las subclases de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de supervivencia global (figura 11)
La figura 11 muestra las respectivas tasas de supervivencia global del tipo IgG1, del tipo IgG3 y del tipo IgG1 e IgG3 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo IgG1 e IgG3 mostró una tasa de supervivencia global significativamente más alta.
(ii) Aumento en la valoración de las subclases de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de supervivencia sin progresión (figura 12)
La figura 12 muestra las respectivas tasas de supervivencia sin progresión del tipo IgG1, del tipo IgG3 y del tipo IgG1 e IgG3 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo IgG1 e IgG3 tendió a mostrar una tasa de supervivencia sin progresión más alta.
(iii) Aumento en la valoración de las subclases de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 13)
La figura 13 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del tipo IgG1, del tipo IgG3 y del tipo IgG1 e IgG3 en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el tipo IgG1 e IgG3 mostró una tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 significativamente más alta.
Ejemplo 3
Valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración combinada de la vacuna del péptido WT1 y la vacuna del péptido cooperador WT1 y efectos clínicos en pacientes con glioblastoma maligno recurrente (GBM)
Los presentes inventores realizaron el siguiente estudio para confirmar la relación entre la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración combinada de una vacuna del péptido WT1 y una vacuna de péptido cooperador y los efectos clínicos en pacientes con GBM.
1. Materiales y procedimientos
1-1 La inmunoterapia con el péptido WT1 se llevó a cabo en 15 pacientes con GBM usando el péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SeQ ID NO:3) como vacuna del péptido WT1, y el péptido WT1332 (SEQ ID NO:6) como vacuna de péptido cooperador. El péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) se administró a 3 mg/cuerpo a cada paciente en un total de 5 veces una vez a la semana mediante administración intracutánea. El péptido cooperador WT1332 se aplicó en una dosis en aumento de 0,75 mg (n = 7), 1,5 mg (n = 4) o 3 mg (n = 4) y se administró a cada paciente en un total de 3 veces una vez cada dos semanas mediante administración intracutánea. La administración de la vacuna del péptido cooperador WT1 se realizó en forma de una mezcla con el péptido WT1-CTL. Se recogió sangre del paciente antes de iniciar la administración de la vacuna y en determinados momentos después de iniciar la administración y se centrifugó para obtener suero. El suero obtenido se crioconservó a -80 °C o inferior y se descongeló para su uso en el momento del ensayo. Cuando se observaron los efectos, la administración del péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) por sí solo y la administración combinada del péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) y el péptido cooperador WT1332 se volvió a repetir de forma alternada en intervalos de 2 a 4 semanas.
1-2 Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (anticuerpos IgG antipéptido WT1235) y anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 (anticuerpos IgG antipéptido WT1332) (ELISA)
La valoración de anticuerpos se midió del mismo modo que en el ejemplo 2. Para ensayar el anticuerpo IgG antipéptido WT1-235, se usó un péptido WT1-235 como péptido antigénico WT1. Para ensayar el anticuerpo IgG antipéptido WT1-325, se usó un péptido WT1-325 como péptido antigénico WT1. El WT1-325 es un péptido que contiene una porción (del primer al decimoprimer aminoácido) del péptido WT1332 administrado. Por tanto, ensayar el anticuerpo antipéptido WT1-325 significa ensayar un anticuerpo contra el péptido WT1332 administrado (anticuerpo IgG antipéptido WT1332).
2. Análisis estadístico
El análisis estadístico se llevó a cabo del mismo modo que en el ejemplo 2. Este análisis se llevó a cabo en 11 casos, excluidos los casos de abandono del ensayo clínico (3 casos en el grupo de administración de 0,75 mg y 1 caso en el grupo de administración de 3 mg). Como en el ejemplo 2, (1) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 fue de 0,05 o mayor después de iniciar la administración de la vacuna de WT1 o (2) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 aumentó en 0,05 o superior después de iniciar la administración de la vacuna de WT1, en comparación con antes de iniciar la administración de la vacuna de WT1, este acontecimiento se definió con la expresión "la valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 aumentó".
3. Resultados
(I) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1235) y efectos clínicos
(i) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 14)
La figura 14 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y del grupo en el que no aumentó, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 4 a 8 semanas después de iniciar la administración combinada de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) y la vacuna del péptido WT1332 (cooperador). Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos tendió a mostrar una tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 mayor que la del grupo en que no aumentó.
(II) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 (valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1332) y efectos clínicos
(i) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 15)
La figura 15 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 y del grupo en el que no aumentó, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 4 a 8 semanas después de iniciar la administración combinada de la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) y la vacuna del péptido WT1332 (cooperador). Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó tendió a mostrar una tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 mayor que la del grupo en que no aumentó.
Ejemplo 4
Valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido
cooperador WT1 y efectos clínicos en pacientes con glioblastoma maligno recurrente (GBM)
Los presentes inventores también realizaron el siguiente estudio para confirmar la relación entre la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido cooperador WT1 y los efectos clínicos en pacientes con GBM.
1. Materiales y procedimientos
1-1 La inmunoterapia con el péptido WT1 se llevó a cabo en 14 pacientes con GBM usando el péptido WT1332 como vacuna del péptido cooperador WT1. Se mezclaron 0,75 mg (n = 4), 1,5 mg (n = 4) o 3 mg (n = 6) del péptido WT1332 con adyuvante incompleto Montanide ISA51 en una proporción en peso de 1:1 para preparar una emulsión. Esta emulsión se administró a cada paciente un total de 3 veces una vez cada dos semanas mediante administración intracutánea. Se recogió sangre del paciente antes de iniciar la administración de la vacuna y en determinados momentos después de iniciar la administración y se centrifugó para obtener suero. El suero obtenido se crioconservó a -80 °C o inferior y se descongeló para su uso en el momento del ensayo. Cuando se observaron los efectos, se continuó posteriormente la administración de la vacuna del péptido cooperador WT1332 en intervalos de 2 a 4 semanas.
1-2 Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 (anticuerpos IgG antipéptido WT1332) (ELISA)
La valoración de anticuerpos se midió del mismo modo que en el ejemplo 2. Se usó un péptido WT1-325 como péptido antigénico WT1. El péptido WT1-325 es un péptido que contiene una porción (del primer al decimoprimer aminoácido) del péptido WT1332 administrado. Por tanto, ensayar el anticuerpo antipéptido WT1-325 significa ensayar un anticuerpo contra el péptido WT1332 administrado (anticuerpo IgG antipéptido W H 332).
2. Análisis estadístico
El análisis estadístico se llevó a cabo del mismo modo que en el ejemplo 2. Este análisis se llevó a cabo en 8 casos, excluidos los casos de abandono del ensayo clínico (2 casos en el grupo de administración de 1,5 mg y 4 casos en el grupo de administración de 3 mg). Como en el ejemplo 2, (1) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 fue de 0,05 o mayor después de iniciar la administración de la vacuna de WT1 o (2) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 aumentó en 0,05 o superior después de iniciar la administración de la vacuna de WT1, en comparación con antes de iniciar la administración de la vacuna de WT1, este acontecimiento se definió con la expresión "la valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 aumentó".
3. Resultados
(I) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 (valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1332) y efectos clínicos
(i) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 16)
La figura 16 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-325 y del grupo en el que no aumentó, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1332 (cooperador). Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó tendió a mostrar una tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 mayor que la del grupo en que no aumentó.
Ejemplo 5
Valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1 y efectos clínicos en pacientes con carcinoma tímico
Los presentes inventores realizaron de modo similar el siguiente estudio para confirmar la relación entre la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1 y los efectos clínicos en pacientes con carcinoma tímico.
1. Materiales y procedimientos
1-1 Como en el ejemplo 2, la inmunoterapia con el péptido WT1 se llevó a cabo en 10 pacientes con carcinoma tímico usando el péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SEQ ID NO:3) como vacuna del péptido WT1. Se recogió sangre del paciente antes de iniciar la administración de la vacuna y en determinados momentos después de iniciar la administración y se centrifugó para obtener suero. La valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 en el suero obtenido se midió del mismo modo que en el ejemplo 2 (ELISA).
2. Análisis estadístico
El análisis estadístico se llevó a cabo del mismo modo que en el ejemplo 2. Como en el ejemplo 2, (1) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 fue de 0,05 o mayor después de iniciar la administración de la vacuna de WT1 o (2) cuando la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 aumentó en 0,05 o superior después de iniciar la administración de la vacuna de WT1, en comparación con antes de iniciar la administración de la vacuna de WT1, este acontecimiento se definió con la expresión "la valoración de anticuerpos antipéptido antigénico WT1 aumentó".
3. Resultados
(I) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1235) y efectos clínicos
(i) Aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y tasa de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 (figura 17)
La figura 17 muestra las respectivas tasas de continuación de la administración de la vacuna del péptido WT1 del grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 y del grupo en el que no aumentó, en el caso en que se usó como índice la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna WH235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)). Durante el periodo de observación, el grupo en el que aumentó la valoración de anticuerpos tendió a mostrar una tasa de continuación de la administración de la vacuna mayor que la del grupo en que no aumentó (figura 17).
Análisis
En la inmunoterapia con el péptido WT1 que emplea el péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243) modificado), se descubrió que el grupo en que aumentó la valoración de anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1235 mostró efectos clínicos favorables. Esto también es cierto con respecto a la valoración de anticuerpos de 8 a 9 semanas después de iniciar la administración de la vacuna y de la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna. Entre estos, se descubrió que la correlación con los efectos clínicos era mayor cuando se basa en la valoración de anticuerpos de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna.
Este experimento reveló también que el grupo con el nivel más alto de IgG1 o IgG3 que de IgG4 entre los anticuerpos IgG antipéptido WT1-235 (tipo Th1) mostró unos efectos clínicos más favorables. Entre estos, se descubrió que el tipo IgG1 e IgG3 era el que mostraba los efectos clínicos más favorables.
Se obtuvieron resultados similares en el caso de la administración combinada del péptido cooperador WT1332 y la vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado)) o en el caso de la administración del péptido cooperador WT1332 solo.
Ejemplo 6
Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT1332 usando una variante del péptido antigénico WT1 (figura 18) Los presentes inventores realizaron el siguiente estudio para confirmar si podía ensayarse un anticuerpo IgG antipéptido WT1332, incluso cuando se usa una variante del péptido antigénico WT1.
1. Materiales y procedimientos
1-1 Suero
Una muestra de suero procedente de un paciente con glioblastoma maligno al que se le administró una vacuna del péptido WT1332 (SEQ ID NO:6) se obtuvo antes de iniciar la administración de la vacuna, cuatro semanas después de iniciar la administración de la vacuna y un año y dos meses después de iniciar la administración. Una muestra de suero procedente de un paciente con carcinoma tímico maligno al que solo se le administró una vacuna del péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SEQ ID NO:3)) se obtuvo como control negativo del mismo modo que el indicado anteriormente. Cada muestra de suero se conservó a -20 °C hasta el ensayo.
1-2 Preparación de variantes del péptido antigénico WT1
Se prepararon las variantes del péptido antigénico WT1 mostradas en la siguiente tabla.
Tabla 2
Procedimiento
Se construyó un vector que expresaba WT1-frg3 (SEQ ID NO:57) como una proteína marcada con GST empleando un vector pGEX-5X-3 (GE Healthcare Japan Corp.). El vector preparado se transfirió a células competentes DH5a por choque térmico. Se cultivaron las células de E. coli con el vector transferido. En el momento en que el valor de DO600 alcanzó entre 0,4 y 0,6, se añadió al medio isopropil-p- D-tiogalactósido (IPTG) en una concentración final de 1 mM para inducir la expresión de proteínas. Las células se cultivaron durante 3 h más.
Las células bacterianas se recogieron mediante centrifugación y después se lisaron en un tampón de muestras de SDS (Tris-HCl 0,125 M, DTT 0,1 M, SDS al 4%, sacarosa al 10% y azul de bromofenol, pH 6,8). Este lisado se fraccionó en función de los pesos moleculares mediante SDS-PAGE con un aparato de electroforesis de tipo disco NA-1800 (Nihon Eido Corp.). Una porción de cada fracción recogida de este modo por SDS-PAGE se tiñó con CBB y se recuperó una fracción que contenía WT1. La proteína purificada se disolvió en un tampón de inmovilización para ELISA (NaCO310 mM, NaHCO330 mM y NaN3 al 0,02 %, pH 9,6) y se usó como antígeno para el ELISA.
1-3 Medición de la valoración de anticuerpos
1-3-1 Medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg3 (SEQ ID NO:57)
La solución de la proteína GST-WT1 frag1 (10 ng/μl) se añadió en 100 μl/pocillo a una placa de 96 pocilios para el ELISA. La placa se mantuvo a 37 °C durante la noche para que el antígeno se inmovilizase sobre ella. Después de lavar con TBST al 0,05 %, se llevó a cabo el bloqueo mediante agitación a temperatura ambiente durante 2 h con un tampón de bloqueo (gelatina al 1 %/TEST al 0,05%). A continuación, se añadió suero diluido en 100 veces con TBST al 0,05 % a 100 μl/pocillo y se dejó reaccionar durante la noche a 4 °C. La placa se hizo reaccionar con un anticuerpo anti-IgG humana de cabra marcado con peroxidasa (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) como anticuerpo secundario a temperatura ambiente durante 2 h. A continuación, se reveló el color con un kit TMB (KPL, Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.). La reacción se terminó con HCl 1 N y después se midió la absorbancia a 450 nm usando un lector de microplacas (CORONA ELECTRIC MTP-32).
1-3-2 Medición de la valoración de anticuerpos usando WT332-347 (SEQ ID NO:58), WT334-342 (SEQ ID NO:59) o WT332-338 (SEQ ID NO:60)
A una placa de reacción de 96 pocillos a la que se había suministrado el kit de recubrimiento de péptidos Peptide Coating Kit (Takara Bio Inc.) con grupos amino (-NH2) unidos a la superficie inferior de los pocillos se le añadió una disolución (4 μg/ml) del péptido WT1 disuelto en un tampón de reacción suministrado con el kit de recubrimiento de péptidos a 50 μl/pocillo. Se añadió un reactivo de acoplamiento a 30 μl/pocillo y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Los pocillos se lavaron con agua destilada para inmovilizar sobre ellos al antígeno. Se llevó a cabo el bloqueo agitando a temperatura ambiente durante 2 h usando Blocking One (Nacalai Tesque, Inc.). Posteriormente, los pocillos se lavaron con TBST al 0,05 %. A continuación, se añadió el suero diluido en 100 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos a 100 μl/pocillo y se dejó que reaccionase durante la noche a 4 °C. Después de lavar con TBST al 0,05%, la placa se hizo reaccionar con un anticuerpo anti-IgG humana de conejo marcado con peroxidasa (sc-2769, Santa Cruz Biotechnology, Inc., 400 mg/ml) diluido en 1000 veces con una disolución de bloqueo suministrada con el kit de recubrimiento de péptidos como anticuerpo secundario a temperatura ambiente durante 2 h. Después de lavar con TBST al 0,05 %, se reveló el color con un kit TMB (KPL, Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.). La reacción se terminó con HCl 1 N y después se midió la absorbancia a 450 nm usando un lector de microplacas (CORONA ELECTRIC MTP-310Lab).
2. Resultados
(I) Medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg3 (SEQ ID NO:57)
La valoración de anticuerpos IgG anti-WT1332 en el suero antes de la inmunización y en momentos determinados después de la inmunización se midió con un ELISA usando WT1-frg3 (SEQ ID nO:57) como antígeno para un paciente inmunizado con el péptido WT1332 y otro paciente inmunizado sólo con el péptido WT1235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SEQ ID NO:3)). Como resultado, en el paciente inmunizado con el péptido WT1332, la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1332 aumentó después de la inmunización (figura 18). Por otra parte, en el paciente que no fue inmunizado con el péptido WT1332, la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1332 no aumentó. Estos resultados demuestran que un ELIsA realizado con WT1-frg3 (SEQ ID NO:57) como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1332 en el suero de un paciente.
(II) Medición de la valoración de anticuerpos usando WT332-347 (SEQ ID NO:58), WT334-342 (SEQ ID NO:59) o WT332-338 (SEQ ID NO:60)
Cuando se mide mediante un ELISA que emplea cualquiera de los péptidos, la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1332 aumentó después de la inmunización en el paciente inmunizado con el péptido WT1332 (figura 18). Por otra parte, en el paciente que no fue inmunizado con el péptido WT1332, la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1332 no aumentó. Estos resultados demuestran que un ELISA realizado con WT332-347 (SEQ ID NO:58), WT334-342 (SEQ ID NO:59) o WT332-338 (SEQ ID NO:60) como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1332 en el suero de un paciente.
Ejemplo 7
Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT1?35 usando una variante del péptido antigénico WT1 (figura 19) Los presentes inventores realizaron el siguiente estudio para confirmar si podía ensayarse un anticuerpo IgG antipéptido WT1235, incluso cuando se usa una variante del péptido antigénico WT1.
1. Materiales y procedimientos
1-1 Suero
Una muestra de suero procedente de un paciente con carcinoma tímico maligno al que se le administró una vacuna
del péptido WTI235 (péptido WT1-CTL (mp235-243 modificado) (SEQ ID NO:3)) se obtuvo cuatro semanas después de iniciar la administración de la vacuna y siete meses después de iniciar la administración. Cada muestra de suero se conservó a -20 °C hasta el ensayo.
1-2 Preparación de variantes del péptido antigénico WT1
Se prepararon las variantes del péptido antigénico WT1 mostradas en la siguiente tabla.
Tabla 3
(continuación)
1-3 Medición de la valoración de anticuerpos
La medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg2 (SEQ ID NO:61) se llevó a cabo del mismo modo que con el mencionado WT1-frg3 (SEQ ID NO:57). La medición de la valoración de anticuerpos usando WK235-243 (SEQ ID NO:62) o WT237-243 (SEQ ID NO:63) se llevó a cabo del mismo modo que con el mencionado WT332-347 (SEQ ID NO:58). 2.
2. Resultados
(I) Medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg2 (SEQ ID NO:61)
La valoración de anticuerpos IgG anti-WT1235 en el paciente al que se le administró el péptido WT1235 se midió con ELISA usando WT1-frg2 (SEQ ID NO:61) como antígeno. Como resultado, se detectó un aumento en la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1235 (figura 19). Además, se obtuvieron resultados similares al caso en que se usó el péptido WT1-235 (WT235-243) como antígeno en el ejemplo mencionado. Estos resultados demuestran que un ELISA realizado con WT1-frg2 (SEQ ID NO:61) como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1235 en el suero de un paciente.
(II) Medición de la valoración de anticuerpos usando WK235-243 (SEQ ID NO:62) o WT237-243 (SEQ ID NO:63) Además, en el caso en que se usó cada uno de estos péptidos como antígeno, se detectó un aumento en la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1235 (figura 19). Además, se obtuvieron resultados similares al caso en que se usó el péptido WT1-235 (WT235-243) como antígeno en el ejemplo mencionado. Estos resultados demuestran que un ELISA realizado con WK235-243 (SEQ ID NO:62) o WT237-243 (SEQ ID NO:63) como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1235 en el suero de un paciente.
Ejemplo 8
Ensayo de anticuerpos IgG antipéptido WT11?r usando una variante del péptido antigénico WT1 (figura 20) Los presentes inventores realizaron el siguiente estudio para confirmar si podía ensayarse un anticuerpo IgG antipéptido WT1126, incluso cuando se usa una variante del péptido antigénico WT1.
1. Materiales y procedimientos
1-1 Suero
Una muestra de suero procedente de un paciente con cáncer pancreático que ha recibido un tratamiento combinado con el péptido WT1-I26 y un antineoplásico se obtuvo antes de iniciar la administración de la vacuna y siete meses después de iniciar la administración. Cada muestra de suero se conservó a -20 °C hasta el ensayo.
1-2 Preparación de variantes del péptido antigénico WT1
Se prepararon las variantes del péptido antigénico WT1 mostradas en las siguientes tablas.
Tabla 4-1
Tabla 4-2
1-3 Medición de la valoración de anticuerpos
La medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg1 (SEQ ID NO:64) se llevó a cabo del mismo modo que con el mencionado WT1-frg3 (SEQ ID NO:57). La medición de la valoración de anticuerpos usando WT126-134 (SEQ ID NO:65), WK126-134 (SEQ ID NO:66), WT128-134 (SEQ ID NO:67), WT126-132 (SEQ ID NO:68), WT129-134 (SEQ ID NO:69), WT126-131 (SEQ ID NO:70) o WT126-130 (SEQ ID NO:71) se llevó a cabo del mismo modo que con el mencionado WT332-347 (SEQ ID NO:58).
2. Resultados
(I) Medición de la valoración de anticuerpos usando WT1-frg1 (SEQ ID NO:64)
La valoración de anticuerpos IgG anti-WT1126 en el paciente al que se le administró el péptido WT1-I26 se midió con un ELISA usando WT1-frg1 (SEQ ID NO:64) como antígeno. Como resultado, se detectó un aumento en la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1-i26 después de iniciar la administración de la vacuna (figura 20). Estos resultados demuestran que un ELISA realizado con WT1-frg1 (SEQ ID NO:64) como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1-i26 en el suero de un paciente.
(II) Medición de la valoración de anticuerpos usando WT126-134 (SEQ ID NO:65), WK126-134 (SEQ ID NO:66), WT128-134 (SEQ ID NO:67), WT126-132 (SEQ ID NO:68), WT129-134 (SEQ ID NO:69), WT126-131 (SEQ ID NO:70) o WT126-130 (SEQ ID NO:71)
Además, en el caso en que se usó cada uno de estos péptidos como antígeno, se detectó un aumento en la valoración de anticuerpos IgG anti-WT1-i26 después de iniciar la administración de la vacuna (figura 20). Estos resultados demuestran que un ELISA realizado con cada uno de estos péptidos como péptido antigénico WT1 puede medir el nivel de anticuerpos IgG anti-WT1-i26 en el suero de un paciente.
Los resultados descritos anteriormente demuestran que pueden predecirse los efectos clínicos del tratamiento con la
vacuna de WT1 después de iniciar la administración de una vacuna de péptido WT1 midiendo la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 empleando un péptido antigénico WT1 que corresponde a la vacuna del péptido WT1 administrada. Estos resultados también demuestran que puede lograrse una predicción más precisa midiendo las subclases (IgG1, IgG3 e IgG4) del anticuerpo IgG. Estos resultados demuestran además que cuando se usa una variante del péptido antigénico WT1 también se puede medir la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 y que también pueden predecirse los efectos clínicos del tratamiento con la vacuna de WT1.
Aplicabilidad industrial
La presente invención puede proporcionar un procedimiento para predecir con mayor precisión los efectos clínicos de un tratamiento con la vacuna de WT1. La predicción más precisa puede lograrse ensayando un anticuerpo antipéptido antigénico WT1 en un sujeto de ensayo y usando el valor obtenido como índice. Por tanto, la presente invención puede utilizarse para ensayar la aplicabilidad de un tratamiento con una vacuna de WT1 a pacientes con una enfermedad relacionada con WT1 y la predicción de sus efectos clínicos.
Claims (14)
1. Un procedimiento para predecir el efecto clínico en un sujeto de una inmunoterapia con el péptido WT1 que comprende las siguientes etapas:
a) poner en contacto una muestra procedente del sujeto al que se le ha administrado una vacuna del péptido WT1 con un péptido antigénico WT1, en donde el péptido antigénico WT1 comprende la misma secuencia que la de la vacuna del péptido WT1 o una secuencia de aminoácidos que consiste en 5 o más aminoácidos contiguos derivados de la secuencia de aminoácidos de la vacuna del péptido WT1, y el péptido antigénico WT1 tiene una longitud de 5 a 30 aminoácidos; y
b) detectar la unión de la muestra al péptido antigénico WT1 y, con ello, medir una valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 presentes en la muestra,
en donde un aumento en la valoración de anticuerpos IgG antipéptido antigénico WT1 en el sujeto significa haber logrado un efecto clínico favorable, y
en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia global o una tasa de supervivencia sin progresión, y en donde el sujeto es un paciente con una enfermedad asociada a WT1, y la enfermedad asociada a WT1 es una leucemia, incluida leucemia mieloide crónica, un tumor de órganos hematopoyéticos, incluido síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple y linfoma maligno, o un cáncer sólido, incluido cáncer esofágico, cáncer de estómago, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de las vías biliares, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, sarcoma, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de glándula tiroidea, carcinoide, neumoblastoma, hepatoblastoma, tumor cerebral y carcinoma tímico, y
en donde el péptido antigénico WT1 comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:7-56, 58-60, 62, 63 y 65-71, y
en donde la vacuna del péptido WT1 administrada al sujeto consiste en la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:2-6.
2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido antigénico WT1 comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID NO:20, 21,27, 31, 32, 42, 43, 58-60, 62, 63 y 65-71.
3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia global.
4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el efecto clínico es una tasa de supervivencia sin progresión.
5. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde las subclases del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 medido son IgG1, IgG3 e IgG4, y en donde se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de IgG1 e IgG3 es el doble o más del doble de la valoración de IgG4.
6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, en donde se determina que se ha logrado un efecto clínico favorable cuando la valoración de IgG3 es menos del doble de la valoración de IgG1 y la valoración de IgG1 es menos del doble de la valoración de IgG3.
7. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 de 8 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1.
8. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, en donde se mide la valoración del anticuerpo IgG antipéptido antigénico WT1 de 12 a 14 semanas después de iniciar la administración de la vacuna del péptido WT1.
9. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde la muestra es una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de suero o una muestra de orina.
10. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la muestra es una muestra de suero.
11. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la enfermedad asociada a WT1 es un cáncer sólido, incluido cáncer esofágico, cáncer de estómago, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de células germinales, cáncer hepático, cáncer de las vías biliares,
cáncer de cabeza y cuello, cáncer de piel, sarcoma, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer uterino, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de glándula tiroidea, carcinoide, neumoblastoma, hepatoblastoma, tumor cerebral y carcinoma tímico.
12. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la enfermedad asociada a WT1 es cáncer pancreático, tumor cerebral o carcinoma tímico.
13. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la enfermedad asociada a WT1 es glioma maligno recurrente, carcinoma tímico o cáncer pancreático.
14. El uso de un kit que comprende un péptido antigénico WT1 en el procedimiento para predecir el efecto clínico en un sujeto de una inmunoterapia con el péptido WT1 de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013101566 | 2013-05-13 | ||
PCT/JP2014/062630 WO2014185387A1 (ja) | 2013-05-13 | 2014-05-12 | 免疫療法の臨床効果の予測法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2954899T3 true ES2954899T3 (es) | 2023-11-27 |
Family
ID=51898365
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES14797083T Active ES2954899T3 (es) | 2013-05-13 | 2014-05-12 | Procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10408840B2 (es) |
EP (1) | EP2998740B1 (es) |
JP (1) | JP6634287B2 (es) |
KR (1) | KR20160007579A (es) |
CN (2) | CN111781359A (es) |
AU (1) | AU2014266396A1 (es) |
CA (1) | CA2912514A1 (es) |
ES (1) | ES2954899T3 (es) |
WO (1) | WO2014185387A1 (es) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2531142T3 (es) | 2005-10-17 | 2015-03-11 | Sloan Kettering Inst Cancer | Péptidos WT1 de unión a HLA de clase II, y composiciones y métodos que los comprenden |
CA2645766A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
EP2802347B1 (en) | 2012-01-13 | 2019-01-09 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
US9919037B2 (en) | 2013-01-15 | 2018-03-20 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
IL297617B2 (en) | 2016-12-22 | 2023-11-01 | Cue Biopharma Inc | Multimeric polypeptides modulate T cells and methods for their use |
KR102619015B1 (ko) | 2017-03-15 | 2023-12-28 | 큐 바이오파마, 인크. | 면역 반응을 조절하는 방법 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2310052T3 (es) | 1998-09-30 | 2008-12-16 | Corixa Corporation | Composiciones y metodos para la inmunoterapia especifica de wt1. |
US7063854B1 (en) | 1998-09-30 | 2006-06-20 | Corixa Corporation | Composition and methods for WTI specific immunotherapy |
US20030235557A1 (en) * | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
JP4592641B2 (ja) * | 2000-05-24 | 2010-12-01 | 治夫 杉山 | Wt1関連疾患の検査方法 |
US20030138863A1 (en) | 2000-05-24 | 2003-07-24 | Haruo Sugiyama | Method for examining wt1-related disease |
JP3846199B2 (ja) * | 2000-05-24 | 2006-11-15 | 治夫 杉山 | Wt1関連疾患の検査方法 |
JP3728439B2 (ja) | 2001-03-22 | 2005-12-21 | 治夫 杉山 | Wt1改変ペプチド |
CA2893995A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-06 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method of diagnosis of cancer |
CN101580538B (zh) | 2003-11-05 | 2013-06-19 | 株式会社国际癌症免疫研究所 | Wt1衍生的hla-dr-结合抗原肽 |
EP3384926A1 (en) * | 2007-12-05 | 2018-10-10 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Cancer vaccine composition |
WO2012176879A1 (ja) * | 2011-06-24 | 2012-12-27 | 学校法人 久留米大学 | がんの検査用試薬及び検査方法 |
CN103797369B (zh) * | 2011-09-14 | 2017-09-19 | 株式会社癌免疫研究所 | 抗wt1抗体的测定方法 |
-
2014
- 2014-05-12 CA CA2912514A patent/CA2912514A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-12 AU AU2014266396A patent/AU2014266396A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-12 KR KR1020157034861A patent/KR20160007579A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-12 US US14/890,529 patent/US10408840B2/en active Active
- 2014-05-12 CN CN202010697473.7A patent/CN111781359A/zh active Pending
- 2014-05-12 ES ES14797083T patent/ES2954899T3/es active Active
- 2014-05-12 JP JP2015517076A patent/JP6634287B2/ja active Active
- 2014-05-12 CN CN201480039936.3A patent/CN105378479A/zh active Pending
- 2014-05-12 WO PCT/JP2014/062630 patent/WO2014185387A1/ja active Application Filing
- 2014-05-12 EP EP14797083.4A patent/EP2998740B1/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2998740A1 (en) | 2016-03-23 |
EP2998740B1 (en) | 2023-07-05 |
KR20160007579A (ko) | 2016-01-20 |
CA2912514A1 (en) | 2014-11-20 |
WO2014185387A1 (ja) | 2014-11-20 |
EP2998740A4 (en) | 2016-11-09 |
AU2014266396A1 (en) | 2015-12-03 |
JP6634287B2 (ja) | 2020-01-22 |
US20160084841A1 (en) | 2016-03-24 |
US10408840B2 (en) | 2019-09-10 |
CN105378479A (zh) | 2016-03-02 |
JPWO2014185387A1 (ja) | 2017-02-23 |
CN111781359A (zh) | 2020-10-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2954899T3 (es) | Procedimiento para predecir el efecto clínico de una inmunoterapia | |
CN110430801B (zh) | 使用tnf抑制剂治疗胃肠道疾病 | |
CN110072551B (zh) | 使用利用可摄入装置释放的il-12/il-23抑制剂治疗胃肠道疾病 | |
ES2777939T3 (es) | Moduladores del sistema inmunitario | |
JP2015533788A5 (es) | ||
ES2342646A1 (es) | Metodo de diagnostico de canceres que expresan el receptor her-2 o sus variantes truncadas. | |
ES2861587T3 (es) | Composiciones y métodos para detectar y tratar el cáncer de esófago | |
CN105026422B (zh) | Sh2结构域变体 | |
ES2899360T3 (es) | Composiciones y procedimientos para detectar y tratar cáncer gástrico | |
RU2670052C1 (ru) | Антигенный полипептид для выявления в плазме крови иммунного маркера - аутоантитела к vegfr1 и его применение | |
ES2402564T3 (es) | Uso de EEF1A como biomarcador para el cribado de inhibidores de METAP2 | |
WO2013045737A1 (es) | Péptido inmunogénico del gluten y sus aplicaciones | |
JP5145549B2 (ja) | 腫瘍マーカー | |
WO2011109663A1 (en) | Neoplasia-specific autoantibodies and methods | |
TW201042258A (en) | Method for prognosis of gastric cancer | |
WO2013039166A1 (ja) | 抗wt1抗体の測定方法 | |
CA3076997C (en) | Anti-ckap4 monoclonal antibody | |
JP2009276153A (ja) | 胃癌の判定方法 | |
KR20190020364A (ko) | 혈액 내 gastrokine 1 단백을 이용하는 위암 진단 | |
CN114748627B (zh) | 可溶性cd58在胰腺癌预防和治疗中的应用 | |
JP5211315B2 (ja) | 腫瘍マーカ、腫瘍診断キットおよび腫瘍マーカの測定方法 | |
WO2012133994A1 (ko) | Pauf 및 그의 결합 파트너를 상호작용을 이용한 암 치료제의 스크리닝 방법 | |
WO2017093589A1 (es) | Anticuerpos monoclonales frente a bambi y uso para tratamiento de enfermedades inflamatorias | |
CN103539840A (zh) | 表皮生长因子受体模拟表位肽及其应用 | |
WO2009077156A1 (en) | Method for colorectal tumors diagnosis |