WO2012176879A1 - がんの検査用試薬及び検査方法 - Google Patents

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WO2012176879A1
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伊東　恭悟
哲朗 笹田
智子 松枝
誠和 小松
正典 野口
山田　亮
七條　茂樹
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学校法人 久留米大学
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    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Definitions

  • the present invention relates to a peptide set composed of peptides derived from tumor antigens, beads or ELISA plates to which peptides derived from tumor antigens are bound, measurement of antibody titer against peptides derived from tumor antigens, and diagnosis of cancer of peptides derived from tumor antigens
  • the present invention relates to the use and use of peptides derived from tumor antigens for predicting the prognosis of cancer patients.
  • HLA human leukocyte antigen
  • Non-Patent Documents 1-3 These peptides derived from tumor antigens are peptides that bind to HLA class I.
  • the present invention provides a set of peptides consisting of tumor antigen-derived peptides that bind to HLA class I molecules.
  • the present invention provides beads or ELISA plates to which tumor antigen-derived peptides that bind to HLA class I molecules are bound.
  • the present invention provides a kit for measuring the antibody titer of an antibody that binds to a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I, including a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule.
  • the present invention provides a kit for diagnosing cancer comprising a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule. In one aspect, the present invention provides a kit for predicting prognosis of a cancer patient, comprising a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule.
  • the comparison of the amount of antibody with respect to 31 peptide in serum between a healthy person and a leukemia patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibodies with respect to 31 peptides in serum between a healthy person and a liver cancer patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibodies with respect to the 31 peptide in serum between a healthy person and a pancreatic cancer patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibodies with respect to 31 peptides in serum between a healthy person and a prostate cancer patient is shown.
  • a comparison of the amount of antibodies against 31 peptides in serum between a healthy person and an HCV patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibody with respect to 31 peptide in serum with a healthy person and an influenza patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibody with respect to 31 peptide in serum with a healthy person and an IgA nephropathy patient is shown.
  • the comparison of the amount of antibody with respect to 31 peptides in serum between a healthy person and a rheumatic patient is shown.
  • the relationship between the group with a high antibody titer or a group with a low antibody titer and the number of survival days when the median value of the antibody titer with respect to 31 peptides in the serum of a liver cancer patient group or a leukemia patient group is used as a threshold is shown.
  • the relationship between the group with a high or low antibody titer and the survival time of a liver cancer patient or a leukemia patient when the median of the antibody titer with respect to 31 peptides in the serum of a healthy person was made into a threshold value is shown.
  • the relationship between the number of days of survival and the group with high or low antibody titer when the median value of antibody titer against 30 or 28 peptides in the serum of the liver cancer patient group or leukemia patient group is used as a threshold is shown.
  • the relationship between the group with a high or low antibody titer and the survival time of a liver cancer patient or a leukemia patient when the median of the antibody titer with respect to 30 or 28 peptide in the serum of a healthy person was made into a threshold value is shown.
  • the one-way analysis of IgG antibody titer (fluorescence intensity) by a healthy person is shown.
  • the total survival time when dividing into two groups by the median of the sum total of IgG4 antibodies against 31 peptides in leukemia patients administered with anticancer agents is shown.
  • HLA class I is, for example, an HLA-A molecule.
  • HLA-A molecules can be, for example, HLA-A24, -A2, -A26 and HLA-A3 supertypes (HLA-A3, -A11, -A31, -A33 and -A68.1).
  • a set of peptides can be a collection of peptides.
  • the set of peptides provided by the present invention is composed of two or more different peptides selected from the peptides represented by SEQ ID NOs: 1-31.
  • the peptide set provided by the present invention is a peptide set composed of at least 28 types of peptides among the peptides consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31.
  • Further examples of the peptide set provided by the present invention include (i) a set of 31 peptides consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31, and (ii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-30.
  • (v Set of 28 peptides consisting of the amino acid sequence shown in ii) SEQ ID NO: 1-28 can be mentioned.
  • the 31 peptides consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 are peptides each consisting of 9 to 10 amino acid residues, and are shown in Table 1.
  • This peptide is a peptide derived from a tumor antigen that induces HLA-restricted cytotoxic activity against cancer cells, and has been administered to humans as a cancer vaccine.
  • SEQ ID NO: 1 is a peptide derived from cyclophilin B (CypB) and is an autoantigen involved in the formation of a higher-order structure of a protein due to peptidyl-polymer isomerase activity.
  • CypB has a different expression level in various cancer cells (bladder cancer, uterine cancer, stomach cancer, lung cancer cell lines), its expression has been widely confirmed in any cell.
  • SEQ ID NO: 2 is a peptide derived from the EGFR (Epidmal growth factor receptor) protein, which is also called HER1 or ErbB1, and is composed of 1210 amino acids, and is independent of epithelial cells, lung cancer cells, and androgen It plays an important role in prostate cancer, and is considered a target molecule, especially in cancer treatment.
  • EGFR is overexpressed in various malignant tumors, and is overexpressed in pancreatic cancer, lung cancer, prostate cancer, head and neck cancer, ovarian cancer, stomach cancer, colon cancer, breast cancer and the like.
  • SEQ ID NO: 3 is a peptide derived from the enhancer of zest homolog 2 (Enhancer of zest homolog 2; EZH2) composed of 746 amino acids, and this protein is a polycomb group protein having homology to the Drosophila enhancer of zest Involved in silencing. It has been reported that cancer occurs when this gene silencing mechanism is dysregulated, and expression of EZH2 has been confirmed in metastatic prostate cancer and brain tumors.
  • SEQ ID NOS: 4 and 5 are peptides derived from a heteronuclear ribonucleoprotein L: the heterogeneous nucleoprotein protein L (HNRPL) protein composed of 589 amino acids, and this protein was functional and translatable in the cytoplasm. It is a molecule that supplies a substrate for processing pre-messenger RNA, which is a process, and is considered to be involved in cell growth as an RNA-binding protein, and has been confirmed in many tissues and cancer cells.
  • HNRPL heterogeneous nucleoprotein protein L
  • SEQ ID NOs: 6 to 11 and 29 are peptides derived from the Lck protein (p56 lck ) consisting of 509 amino acids belonging to the src tyrosine kinase family, and are known to be involved in the activation signal of T lymphocytes.
  • Lck protein p56 lck
  • This protein is expressed in peripheral blood lymphocytes and activated T lymphocytes, but it can be used in many types of cancer (colon cancer, esophageal cancer, leukemia cell lines, prostate cancer patient tissues), especially metastatic. Expression has been confirmed in cancer.
  • SEQ ID NOs: 12 and 30 are peptides derived from the MRP3 protein composed of 1529 amino acids, and this protein is one of the MRP families constituting the ABC transporter.
  • the protein is considered to be involved in resistance to anticancer agents, particularly platinum preparations, and is expressed in many types of cancers.
  • SEQ ID NOs: 13 and 14 are peptides derived from prostate acid phosphatase (PAP) consisting of 342 amino acids, and the protein is a phosphatase that converts orthophosphate monoester to alcohol and orthophosphate, and is one of prostate-related antigens. It is. This protein is expressed in normal prostate, prostatic hypertrophy, prostate cancer and some epithelial cancers.
  • PAP prostate acid phosphatase
  • SEQ ID NO: 15 is a peptide derived from a protein composed of 779 amino acids having homology to that of mitogen-activated protein kinase kinase kinase (ppMAPkkk) protein.
  • MAPkk is involved in cell proliferation and the like, and phosphorylates MAPkk By doing so, it is a protein that promotes the transfer of MAPk into the nucleus, and its expression has been confirmed in many normal tissues and cancer tissues.
  • SEQ ID NO: 16 is a peptide derived from prostate specific antigen (PSA) consisting of 262 amino acids, and the protein is a kallikrein-like protease and one of prostate-related antigens expressed in normal prostate.
  • PSA prostate specific antigen
  • Secreted PSA is generally used as a tumor marker in the prostate, and although it is expressed less frequently in glioblastoma, it is expressed in 4 types of 5 types of colorectal cancer cell lines. (Colo 201, Colo 205, SW 480, SW 620).
  • SEQ ID NO: 17 is a peptide derived from prostate specific membrane antigen (PSMA), which is a membrane protein consisting of 750 amino acids, and this protein is a prostate-related antigen expressed in normal prostate and is strongly expressed in prostate cancer. ing. Moreover, it has been confirmed that PSMA is expressed in endothelial cells of new capillary blood vessels around kidney cancer, bladder cancer, and colon cancer.
  • PSMA prostate specific membrane antigen
  • SEQ ID NO: 18 is a peptide derived from a PTH-rP (parathyrido homone-related protein) protein composed of 177 amino acids. This protein acts on osteoblasts and is involved in bone formation and resorption. . This protein is expressed at high levels in prostate cancer, lung cancer, breast cancer, and various cancer cell lines.
  • PTH-rP parathyrido homone-related protein
  • SEQ ID NOs: 19 and 20 are peptides derived from a tumor antigen (SART2) protein composed of 958 amino acids identified from squamous cell carcinoma, and this protein is known to function as dermatan sulfate epimerase. . It has been confirmed that this protein is expressed in many tissues including normal cells.
  • SART2 tumor antigen
  • SEQ ID NOs: 21 to 25 are peptides derived from the SART3 protein composed of 963 amino acids. The function of the protein has not been elucidated yet, but it has been shown to function in the regulation of mRNA splicing. It is present in the cytoplasm and nucleus of most cancer cells and tissues.
  • SEQ ID NOs: 26 and 31 are peptides derived from a protein having homology to the ubiquitin-conjugated enzyme variant Kua (UBE2V) composed of 270 amino acids, and the function of the UBE2V protein has not been elucidated, but from within the nucleus It is abundant in the cytoplasm and is considered to be a cofactor of ubiquitin polymerization, and it has been confirmed that it is expressed not only in pancreatic cancer and brain tumor cells but also in normal tissues.
  • UBE2V ubiquitin-conjugated enzyme variant Kua
  • SEQ ID NOs: 27 and 28 are peptides derived from a protein having homology to the Wolf-Hirschhorn syncandate 2 protein (WHSC2) composed of 549 amino acids.
  • WHSC2 protein is caused by a partial deletion of the short arm of chromosome 4. It is said to have some function in the phenotype of WHS, which is a multiple malformation syndrome identified by mental and developmental disorders.
  • the expression of WHSC2 has been confirmed in cell lines such as brain tumor, colon cancer, bladder cancer, prostate cancer and the like.
  • the peptide used in the present invention can be produced by ordinary peptide synthesis.
  • the target peptide is produced by a chemical synthesis method, it can be produced by a method commonly used in ordinary peptide chemistry. For example, it is synthesized by a solid phase synthesis method using a peptide synthesizer. be able to.
  • the crude peptide thus obtained can be purified by purification methods commonly used in protein chemistry, such as salting out method, ultrafiltration method, reverse phase chromatography method, ion exchange chromatography method, affinity chromatography method, etc. Can be purified by.
  • a peptide when produced by genetic recombination technology, it is obtained by incorporating a DNA fragment encoding the target amino acid sequence into an appropriate expression vector, and transforming microorganisms or animal cells using this expression vector. By culturing the obtained transformant, the desired peptide can be obtained.
  • expression vectors that can be used, plasmids, viral vectors, and the like known in the art can be used. In order to facilitate the expression and purification of peptides, techniques for expressing peptides as fusion proteins are also well known in the art.
  • a conventional method such as calcium chloride method, calcium phosphate coprecipitation method, DEAE dextran method, lipofectin method, electroporation method and the like can be used.
  • the obtained peptide can be purified from the cell extract or culture supernatant collected from the cultured medium by the purification method described above.
  • the peptide used in the present invention may be a salt or a solvate, and the C-terminus and / or the N-terminus may be altered to an ester or amide.
  • the peptide used in the present invention may be a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I to which a tag is added (for example, a peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31).
  • the tag means a portion added to a polypeptide for purification, detection, etc. of the polypeptide, such as histidine (His), glutathione-S-transferase (GST), maltose binding protein (MBP), myc.
  • the polypeptide to which the tag is added is an appropriate host using an expression vector such as pET30a (manufactured by Novagen) (for His tag) or pGEX (manufactured by GE Healthcare Biosciences) (for GST tag). It is obtained by expressing in cells.
  • the peptide used in the present invention is a tumor that binds to HLA class I in which a substituent or protecting group that is usually used in the field of peptide synthesis or a substituent or protecting group that stabilizes the peptide is bound to the N-terminus or C-terminus.
  • a substituent or protecting group that is usually used in the field of peptide synthesis or a substituent or protecting group that stabilizes the peptide is bound to the N-terminus or C-terminus.
  • It may be an antigen-derived peptide (for example, a peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31).
  • substituents and protecting groups include, but are not limited to, amide groups, acetyl groups, benzyloxycarbonyl groups (Cbz groups or Z groups), Boc and Fmoc.
  • the present invention provides a bead or ELISA plate to which a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule is bound. .
  • the peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I molecules are as described in “1. Set of peptides consisting of peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I”.
  • the present invention comprises a bead or ELISA plate bound with two or more different peptides selected from the peptides represented by SEQ ID NO: 1-31, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31
  • a bead or ELISA plate bound with two or more different peptides selected from the peptides represented by SEQ ID NO: 1-31, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 Provided are beads or ELISA plates to which at least 28 peptides of the peptides are bound.
  • the present invention provides: (I) SEQ ID NO: 1-31; (Ii) SEQ ID NOs: 1-30; (Iii) SEQ ID NOs: 1-29 and 31; (Iv) SEQ ID NOs: 1-28, 30 and 31; (V) SEQ ID NO: 1-29; (Vi) SEQ ID NOs: 1-28 and 30; (Vii) SEQ ID NOs: 1-28 and 31; or (viii) SEQ ID NOs: 1-28 Are provided with beads or ELISA plates to which peptides consisting of the respective amino acid sequences constituting each of the peptides are bound.
  • one kind of peptide is bound to one bead even if one kind of bead is bound to one bead in a sufficient amount for the measurement in the present invention.
  • Different sets of beads may be used depending on the type of peptide.
  • the present invention provides: (I) one bead to which 31 peptides each having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 are bound in an amount sufficient for the measurement in the present invention; (Ii) A sufficient amount of 30 peptides each comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 1-30, 1-29 and 31, or SEQ ID NOs: 1-28, 30 and 31 for measurement in the present invention; One bead bound with (Iii) 29 types of peptides consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1-29, SEQ ID NOs: 1-28 and 30, or SEQ ID NOs: 1-28 and 31 are each bound in an amount sufficient for the measurement in the present invention.
  • the amount sufficient for the measurement in the present invention is not limited as long as it is an amount capable of performing the measurement or test provided by the present invention.
  • an amount capable of measuring the antibody titer or amount of an antibody that binds to a tumor antigen-derived peptide that binds to an HLA class I molecule in human plasma for example, 31 peptides comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31) ( For example, it may be 10 times, 30 times, 100 times, 300 times or 1000 times the amount of the antibody).
  • the present invention provides: (I) a set of 31 kinds of beads in which each one of 31 kinds of peptides consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 is bound to one bead; (Ii) SEQ ID NO: 1-30, SEQ ID NO: 1-29 and 31, or one of 30 peptides consisting of the amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31 were bound to one bead 30 A set of different types of beads; (Iii) 29 types of peptides in which each one of 29 peptides consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1-29, SEQ ID NOs: 1-28 and 30, or SEQ ID NOs: 1-28 and 31 are bound to one bead A set of beads; and (iv) a set of 28 beads in which each one of 28 peptides consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1-28 is bound to one bead.
  • an ELISA plate (a) even if an ELISA plate has a plurality of types of peptides bound to one well, (b) a well that differs depending on the type of peptide that has one type of peptide bound to one well.
  • an ELISA plate in which the amount of bound peptide is the same for example, the same number of moles or the same weight) is provided between the wells.
  • the present invention provides: (I) an ELISA plate containing 31 peptides each consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 in a sufficient amount for measurement in the present invention in one well; (Ii) 30 kinds of peptides consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1-30, SEQ ID NOs: 1-29 and 31, or SEQ ID NOs: 1-28, 30 and 31 are each measured in the present invention.
  • the present invention provides: (I) an ELISA plate containing 31 types of wells each having 31 types of peptides each having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31 bound to one well; (Ii) 1 type of each of 30 types of peptides consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1-30, SEQ ID NOs: 1-29 and 31, or SEQ ID NOs: 1-28, 30 and 31 bound to one well 30 ELISA plate containing different types of wells; (Iii) 29 types in which each one of 29 peptides consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1-29, SEQ ID NOs: 1-28 and 30, or SEQ ID NOs: 1-28 and 31 is bound to one well. an ELISA plate containing a well; and (iv) an ELISA plate containing 28 wells each of which is one of 28 peptides consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-28 bound to one well.
  • the bead may be a polystyrene bead or a magnetic bead as long as the peptide can be bound thereto.
  • the size of the beads is not particularly limited, and may be 5 to 7 ⁇ m in diameter, for example.
  • the beads that can be used in the present invention may be beads that can be used in xMAP (registered trademark) manufactured by Luminex Corporation.
  • the ELISA plate is only required to be able to bind a peptide, and may be, for example, a polystyrene plate. A person skilled in the art can appropriately bind the peptide used in the present invention to the beads or ELISA plate.
  • Kit for measuring antibody titer of antibody against peptide derived from tumor antigen that binds to HLA class I, and kit for testing cancer or prognosis of cancer patient prognosis provides HLA class I
  • a kit for measuring the antibody titer of an antibody against a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I, comprising a peptide derived from a tumor antigen that binds to a molecule is provided.
  • the present invention provides a test kit for testing for cancer or prognosis of cancer patients, comprising a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I.
  • peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I molecules may be included in the kit as beads or ELISA plates to which they are bound.
  • the peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule is as described above in “1. Set of peptides consisting of peptides derived from a tumor antigen that binds to HLA class I”.
  • the tumor antigen-derived peptide that binds to the HLA class I molecule is a peptide consisting of two or more different peptides selected from the peptide represented by SEQ ID NO: 1-31, the peptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-31
  • the kit further includes, for example, a buffer solution, a washing solution (for example, PBS containing a surfactant (for example, Tween 20)), a blocking solution (for example, BSA, milk-derived protein), a labeled antibody (for example, an HRP-labeled antibody, cy3).
  • a buffer solution for example, PBS containing a surfactant (for example, Tween 20)
  • a blocking solution for example, BSA, milk-derived protein
  • a labeled antibody for example, an HRP-labeled antibody, cy3
  • a fluorescently labeled antibody for example, a chromogenic substrate (for example, TMB (3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine)), a peptide composed of 9 or 10 random amino acid residues for control and / or the peptide. Beads may be included.
  • Labeled antibodies can be human IgG (eg, total IgG, IgG1, IgG2, IgG3 and / or IgG4) and / or antibodies that specifically bind to human IgM (eg, anti-human IgG antibody, anti-human IgG1 antibody, anti-human IgG2).
  • Antibody, anti-human IgG3 antibody, anti-human IgG4 antibody, anti-human IgM antibody can be human IgG (eg, total IgG, IgG1, IgG2, IgG3 and / or IgG4) and / or antibodies that specifically bind to human IgM (eg, anti-human IgG antibody, anti-human IgG1 antibody, anti-human IgG2).
  • Antibody, anti-human IgG3 antibody, anti-human IgG4 antibody, anti-human IgM antibody e.g, anti-human IgG3 antibody, anti-human IgG4 antibody.
  • Tumors in a sample eg, human serum, human plasma, etc.
  • a sample eg, human serum, human plasma, etc.
  • Peptides derived from antigens eg, (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1-28) Antibody detection, amount measurement, and antibody titer measurement.
  • Antibody detection, amount measurement, antibody titer measurement may be antibody detection, amount measurement, antibody titer measurement for each type of peptide derived from tumor antigen binding to HLA class I molecule. Regardless of the method, it may be detection of all antibodies to peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I molecules, measurement of the total amount of antibodies, and measurement of the sum of antibody titers.
  • the antibody titer may be measured using fluorescence intensity as an index. The antibody titer may be expressed by assuming that the fluorescence intensity when using a control peptide in which no antibody is present in human blood (for example, a peptide consisting of 9 or 10 random amino acid residues) is 1.
  • the antibody that binds to a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule can be at least one antibody selected from the group consisting of total IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 and IgM.
  • Anti-peptide antibodies in the blood may be measured by any method known in the art.
  • a measuring method for example, ELISA method (Pedersen MK et al., J. Immunol. Methods 2006 Apr 20; 311 (1-2): 198-206. Epub 2006 Mar 6), Luminex method ( Komatsu N. et) al., Scand JCl in Lab Invest. 64, 535-546, 2004), RIA method (Maruta T. et al., Immunol Invest. 2006; 35 (2): 137-48.), immunochromatography .
  • it is preferable to measure by the Luminex method that can measure antibodies against various antigens at once by the array system.
  • the peptides constituting the drug of the present invention are solid-phased on microbead carriers each having a different fluorescent dye, and antibodies in the patient's peripheral blood that bind to the solid-phased peptides are fluorescently or the like. Detect and measure.
  • the class of the anti-peptide antibody to be measured is appropriately determined according to the type of peptide, but is usually IgG (for example, total IgG, IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4) or IgM.
  • the test reagent provided by the present invention may be any reagent prepared so that antibodies in blood can be measured by ELISA or Luminex method containing the peptides of SEQ ID NOs: 1-31, for example, SEQ ID NO:
  • the peptide 1 to 31 itself (for example, a dry powder or a solution dissolved in an appropriate solvent) may be used.
  • a plate immobilized on a microplate or membrane for ELISA or the membrane itself, or immobilized on microbeads Reagents comprising beads may be used, and it is preferable to use beads obtained by immobilizing antibodies against 31 kinds and various peptides on microbeads that can be measured at once.
  • solid phase immobilization may be performed by immobilizing 31 kinds of peptides at one time on one support carrier, for example, one bead or one well of 96 wells, and one kind of peptide per one bead or one well. Any of the beads may be used, but in the case of beads, it is preferable to use 31 kinds of beads prepared by immobilizing one kind of peptide for each bead.
  • the measurement can be performed as follows. First, an antigen peptide is bound to a conventional ELISA plate such as a 96-well, and the plate is appropriately blocked to prevent nonspecific adsorption. Next, serum or plasma prepared from the blood of the subject by a known method is appropriately diluted and added to each well of the plate, and reacted for a predetermined time. After the plate is washed to remove unbound components, an antibody that can bind to a human antibody (for example, a rabbit anti-human antibody) is added. If it is desired to detect IgG, gamma chain specific anti-human IgG can be used.
  • a human antibody for example, a rabbit anti-human antibody
  • the plate After reacting for a predetermined time, the plate is washed and detectably labeled antibody (eg, anti-rabbit IgG) is added. Labeling can be performed by methods well known to those skilled in the art using enzymes, fluorescent dyes, chemiluminescent substances, biotin, radiation compounds, and the like. After reacting the plate for a predetermined time, the label is detected by adding an appropriate substrate and measuring the decrease of the substrate or the increase of the product, or measuring the fluorescence, luminescence, or radioactivity. In this way, the amount of antibody against a specific peptide in the serum of the subject can be measured.
  • labeled antibody eg, anti-rabbit IgG
  • Luminex As a method using microbeads, there is the xMAP technology of Luminex. This is a flowmetry measurement method using a fluorescent microbead array system developed by Luminex, in which peptide-bound microbeads and serum are brought into contact with each other, and then a fluorescently labeled secondary antibody is bound to the flowmeter. The fluorescence intensity is measured by
  • Tumor antigens in a sample eg, human serum, human plasma, etc.
  • a sample eg, human serum, human plasma, etc.
  • Beads or ELISA plates bound with peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I molecules” Peptides derived from (eg, (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v ) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1-28)
  • Diagnosis of cancer or prognosis of cancer patients is based on tumor antigen-derived peptides that bind to HLA class I in the patient's blood (eg (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (Iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1 It can be achieved by measuring the sum of antibody titers of antibodies that bind to -28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-28).
  • the antibody titer may be measured using fluorescence intensity as an index. Moreover, you may quantify the antibody amount in a sample instead of an antibody titer.
  • the antibody that binds to a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule can be at least one antibody selected from the group consisting of total IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 and IgM.
  • IgG total IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
  • IgM that binds to the peptide consisting of the amino acid sequence
  • the median value of healthy persons or cancer patient groups is used as a threshold value, and it is determined whether the subject shows a value equal to or higher than the threshold value and whether the patient is a cancer patient or has a long life prognosis. be able to.
  • a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I eg, (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 (Iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) Whether or not the patient shows a value equal to or higher than the threshold value by measuring IgG1 binding to the peptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1-28) as a threshold for the median value of healthy subjects or each patient group It is possible to predict whether or not the prognosis will be long, which can help determine the patient's treatment strategy.
  • peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I eg, (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) (V) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) SEQ ID NO: 1-28
  • the median value of a healthy person or a patient group is used as a threshold value, and whether the prognosis is long or not depending on whether the patient shows a value higher than the threshold value.
  • an anticancer drug for example, a cancer chemotherapeutic agent
  • the antibody titer of IgG4 binding to a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I is higher than the threshold
  • an anticancer agent for example, a cancer chemotherapeutic agent
  • Cancer chemotherapeutic agents include, for example, molecular targeted drugs (eg, imatinib, rituximab), alkylating agents (eg, ifosfamide, cyclophosphamide), antimetabolites (eg, tegafur, fluorouracil, methotrexate), plant alkaloids ( For example, irinotecan, etoposide, paclitaxel, vinblastine), anticancer antibiotics (eg, actinomycin D, mitomycin C), platinum formulations (eg, oxaliplatin, carboplatin, cisplatin), or biological response modifiers (eg, Interferon ⁇ , interferon ⁇ , interferon ⁇ , interleukin 2).
  • molecular targeted drugs eg, imatinib, rituximab
  • alkylating agents eg, ifosfamide, cyclophosphamide
  • antimetabolites eg, t
  • peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I eg (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) SEQ ID NO: 1-28
  • By measuring the antibody titer of IgM against a peptide consisting of an amino acid sequence setting a reference value for a group of healthy subjects using the sum of the measured values as a representative value, and setting whether or not the value is higher than the upper limit of the reference, It can be used as a test for determining whether or not cancer (eg, leukemia, liver cancer, pancreatic cancer, prostate cancer) is afflicted.
  • cancer eg, leukemia, liver cancer, pancreatic cancer, prostate
  • the reference value can be the upper limit of the range of antibody titers that include 95% or more of the healthy human group.
  • peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I eg, (i) SEQ ID NO: 1-31; (ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NO: 1-28 and 31; or (viii) SEQ ID NO: 1-28 Since the antibody titer in blood decreases depending on human age, IgM binding to a peptide consisting of an amino acid sequence) can be confirmed whether or not the cancer is accurately affected by matching the age of the healthy subject group and the subject.
  • Judgment can be made.
  • an antibody that is expected to contain 95% or more of healthy subjects of the same age as the subject based on data of antibody titers of IgM that bind to peptides derived from tumor antigens that bind to HLA class I measured in advance for healthy subjects
  • the range of values may be calculated, and the upper limit value may be used as the reference value for the healthy person group.
  • the difference in age may be, for example, less than 5 years, less than 4 years, less than 3 years, or less than 2 years.
  • the antibody titer of total IgG that binds to a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I is measured, the presence or absence of leukemia or liver cancer can be determined, and it binds to HLA class I.
  • the presence or absence of leukemia or pancreatic cancer can be determined, and the IgG2 binding to a peptide derived from a tumor antigen binding to HLA class I If the antibody titer is measured, the presence or absence of leukemia can be determined, and if IgG3 binding to the tumor antigen-derived peptide that binds to HLA class I is measured, the presence or absence of liver cancer or pancreatic cancer Liver cancer or pancreatic cancer when IgG4 binding to a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I is measured It is possible to determine the presence or absence of diseased (see Figure 1-4).
  • determining whether a subject has leukemia is a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject (eg, (i) SEQ ID NOs 1-31-; (ii) SEQ ID NOs: 1-30; (iii) SEQ ID NOs: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NOs: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NOs: 1-29; (vi) SEQ ID NOs: 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NOS: 1-28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1-28) at least selected from the group consisting of IgG, IgG1, IgG2 and IgM This can be done by measuring the antibody titer of one antibody.
  • a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject
  • the determination of whether or not a subject suffers from liver cancer is performed by determining whether or not a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject (for example, (i) SEQ ID NO: 1 (Ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: 1 to 28 and 30; (vii) SEQ ID NOs: 1-28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1-28) from the group consisting of total IgG, IgG3, IgG4 and IgM This can be done by measuring the antibody titer of at least one selected antibody.
  • a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject for example, (i) SEQ ID NO
  • the determination of whether or not a subject suffers from pancreatic cancer is performed by determining whether or not a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject (for example, (i) SEQ ID NO: 1 (Ii) SEQ ID NO: 1-30; (iii) SEQ ID NO: 1-29 and 31; (iv) SEQ ID NO: 1-28, 30 and 31; (v) SEQ ID NO: 1-29; (vi) SEQ ID NO: Selected from the group consisting of IgG1, IgG3, IgG4, and IgM that bind to 1-28 and 30; (vii) SEQ ID NOs: 1-28 and 31; or (viii) a peptide consisting of the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 1-28) It can be performed by measuring the antibody titer of at least one antibody.
  • a peptide derived from a tumor antigen that binds to HLA class I in the blood of the subject for example, (i
  • the above determination of whether or not leukemia, liver cancer, pancreatic cancer or prostate cancer is afflicted can also be used for differential diagnosis of these cancers.
  • the total IgG, IgG1, and IgG2 in a sample derived from a subject eg, serum, plasma, etc.
  • IgM is significantly higher than that of a healthy person
  • IgG3 and IgG4 are healthy persons. If there is no significant difference, it can be determined that the subject is suffering from leukemia and not from liver cancer, pancreatic cancer or prostate cancer; a sample from the subject (eg, serum, If the total IgG, IgG3 and IgM in plasma etc.
  • IgG4 is significantly lower than in healthy subjects, and IgG1 and IgG2 are not significantly different from those in healthy subjects, It can be determined that the patient is suffering from cancer and not leukemia, pancreatic cancer or prostate cancer; IgG1 and IgG in a sample derived from a subject (eg, serum, plasma, etc.) Is significantly lower compared to healthy individuals, IgG4 and IgM are significantly higher compared to healthy individuals, and total IgG and IgG2 are not significantly different from healthy individuals, the subject is suffering from pancreatic cancer It can be determined that the subject does not suffer from leukemia, liver cancer, and prostate cancer; IgM in a sample derived from a subject (eg, serum, plasma, etc.) is significantly higher than that of a healthy person, and total IgG, IgG1, If IgG2, IgG3, and IgG4 are not significantly different from those of healthy humans, it can be determined that the subject is suffering from prostate cancer and not leukemia, pancreatic cancer or
  • the determination of whether or not the patient has leukemia, liver cancer, pancreatic cancer or prostate cancer can be performed by differential diagnosis between these cancers and HCV infected persons, influenza infected persons, IgA nephropathy, rheumatism, etc. Can also be used.
  • total IgG, IgG3, and IgM in samples derived from subjects are significantly higher than healthy individuals
  • IgG4 is significantly lower than healthy humans
  • IgG1 and IgG2 are compared to healthy individuals If there is no significant difference, it can be determined that the subject has developed liver cancer, and the total IgG and IgG1 in the sample derived from the subject (eg, serum, plasma, etc.) are significantly higher than that of a healthy person.
  • IgG2, IgG3, IgG4, and IgM are not significantly different from those of healthy individuals, it can be determined that the subject is infected with HCV but does not develop liver cancer.
  • the invention relates to a tumor antigen derived from a tumor antigen that binds to HLA class I comprising contacting a sample (eg, human serum, human plasma) with a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule.
  • a sample eg, human serum, human plasma
  • a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule e.g, human serum, human plasma
  • a method for measuring the antibody titer of an antibody for example, total IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM
  • the antibody titer measurement method can be carried out in vitro.
  • the present invention relates to contacting a peptide derived from a tumor antigen that binds to an HLA class I molecule with a sample (eg, human serum, human plasma), derived from a tumor antigen that binds to HLA class I.
  • a sample eg, human serum, human plasma
  • a tumor antigen that binds to HLA class I e.g., human serum, human plasma
  • a method for diagnosing cancer or determining a prognosis for cancer patients comprising measuring antibody titers of antibodies that bind to peptides (eg, total IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM).
  • the method for diagnosing cancer or determining the prognosis of cancer patients can be performed in vitro.
  • Non-limiting examples of embodiments provided by the present invention include the following (1) to (29).
  • the peptide set, bead, bead set or ELISA plate according to (6) which is used for determination of cancer or prediction of prognosis of cancer patients.
  • An antibody that binds to a peptide derived from a tumor antigen comprising the beads according to (2), the set of beads according to (3), the ELISA plate according to (4), or the ELISA plate according to (5) Kit for measuring antibody titer.
  • composition or kit according to (12) or (13), wherein the cancer is at least one cancer selected from the group consisting of leukemia, liver cancer, pancreatic cancer, and prostate cancer.
  • the determination of leukemia further comprising at least one antibody selected from the group consisting of anti-human IgG antibody, anti-human IgG1 antibody, anti-human IgG2 antibody and anti-human IgM antibody (12) to (14)
  • the kit according to any one of the above; for determination of liver cancer further comprising at least one antibody selected from the group consisting of anti-human IgG antibody, anti-human IgG3 antibody, anti-human IgG4 antibody and anti-human IgM antibody (12 ) To (14); a pancreatic cancer further comprising at least one antibody selected from the group consisting of an anti-human IgG1 antibody, an anti-human IgG3 antibody, an anti-human IgG4 antibody and an anti-human IgM antibody
  • the kit according to any one of (12) to (14) for determination; for determination of prostate cancer further comprising an anti-human IgM antibody
  • the kit according to any one of 12) to (14); further for prognosis prediction of leukemia or liver cancer patients comprising at least
  • the method further includes comparing the upper limit of the reference value of the sum of the antibody titers in the sample collected from the subject with the reference value of the sum of the antibody titers in the sample collected from the healthy person, and between the upper limit value and the lower limit value of the reference value
  • the method according to any one of (16) to (18), wherein the sum of antibody titers of 95% or more healthy persons is included in (22)
  • the method further comprises comparing an upper limit value of a reference value of a sum of antibody titers in a sample collected from a subject and a reference value of a sum of antibody titers in a sample collected from a healthy person of the same age as the subject,
  • the method according to any one of (16) to (18) wherein a sum of antibody titers of 95% or more subjects and healthy individuals of the same age is included between the upper limit value and the lower limit value.
  • the antibody is at least one antibody selected from the group consisting of a human IgG antibody, a human IgG1 antibody, a human IgG2 antibody and a human IgM antibody, and leukemia is determined in any of (16) to (24)
  • the method according to any one of (16) to (24), wherein the antibody is at least one antibody selected from the group consisting of a human IgG antibody, a human IgG3 antibody, a human IgG4 antibody, and a human IgM antibody, and liver cancer is determined.
  • the antibody is at least one antibody selected from the group consisting of a human IgG1 antibody, a human IgG3 antibody, a human IgG4 antibody, and a human IgM antibody, from which pancreatic cancer is determined (16)
  • the method according to any one of (24); any one of (16) to (24), wherein the antibody is a human IgM antibody and prostate cancer is determined
  • the antibody is at least one antibody selected from the group consisting of a human IgG antibody, a human IgG1 antibody, a human IgG3 antibody, a human IgG4 antibody, and a human IgM antibody, and distinguishes liver cancer from HCV infection.
  • (26) The set of peptides according to (1), the beads according to (52), the set of beads according to (3), the ELISA plate according to (4), or the ELISA plate according to (5) Use in the manufacture of a kit for measuring the antibody titer of an antibody that binds to a peptide derived from a tumor antigen.
  • (27) The set of peptides according to (1), the beads according to (2), the set of beads according to (3), the ELISA plate according to (4), or the ELISA plate according to (5) Use in the manufacture of a kit for determining cancer or prognosis for cancer patients.
  • Example 1 Measurement of antibody binding to peptide consisting of each amino acid sequence constituting SEQ ID NO: 1-31 in serum of cancer patient (1) Preparation of peptide Each peptide consisting of SEQ ID NO: 1-31 A peptide synthesized by a solid phase synthesis method and purified to a purity of 90% or more was prepared.
  • beads bound to the peptides represented by SEQ ID NOs: 1 to 31 were prepared at 30 ° C.
  • carboxy beads manufactured by Luminex
  • 0.1 M MES (2-morpholinoethanesulfonic acid) buffer pH 7.0
  • the beads were washed with 0.05% Tween-20 / PBS, and primary antibodies (biotinylated goat anti-human IgG ( ⁇ ) antibody, anti-IgM antibody, anti-IgG1 to anti-IgG2 antibody) were detected to detect each antibody class. ) was added at 100 ⁇ l / well and reacted at room temperature for 1 hour. After the beads were washed with 0.05% Tween-20 / PBS, streptavidin-R-phycoerythrin conjugate (SAPE) was added at 100 ⁇ l / well and reacted at 30 ° C. for 30 minutes. Next, the fluorescence intensity was measured with a Luminex fluorescence flowmetry system, and the measured values (FIU) for each class of antibodies (IgM, total IgG, and IgG1 to IgG4) bound to the beads were obtained.
  • SAPE streptavidin-R-phycoerythrin conjugate
  • IgG1 to IgG4 significant differences were observed for leukemia and liver cancer patients for IgG (IgG1 to IgG4).
  • IgG2 significant differences were observed for leukemia and liver cancer
  • IgG3 and IgG4 significant differences were observed for liver cancer and pancreatic cancer
  • IgM Were significantly different for all cancer patients, namely leukemia, liver cancer, pancreatic cancer and prostate cancer. From the above, since IgG and IgM are measured using a test reagent comprising 31 kinds of peptides of the present invention, a significant difference from a healthy person is seen. It was found that the presence or absence can be inspected.
  • Example 2 Examination of prognostic predictive factors For patients with leukemia and liver cancer in which significant differences were observed in IgG from healthy individuals, the representative values of IgG, IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4 represent the patient's life prognosis.
  • the Kaplan-Meier curves were divided into two groups with the median value of the patient group or the median value of healthy persons as a threshold value to determine whether they were related, and whether or not there was a significant difference by the log rank test was examined. The results are shown in FIGS. From the results shown in FIGS.
  • Example 3 Examination as a determination factor for cancer As for IgM, each of the liver cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and leukemia patient groups showed a significant difference from the healthy group, and thus anti-peptide IgM We examined whether or not the measured total value of the above would be a criterion for cancer. In examining, the group of healthy people was examined by age group, as shown in FIG. 13 and FIG. 14, there was a difference in the average of the representative values by age group, while the age of the patient group was over 35 years old Therefore, the group of healthy subjects was a group (46 persons) consisting of subjects who were 35 years old or older.
  • the reference value of the healthy person group was obtained by the percentile method using the group, and the reference value (> 95% range) was 2952 to 39412 (unit: FIU).
  • the upper limit value (39412) of the reference value is set as a normal value (that is, the cancer is negative), and when the value is higher than the upper limit value of the reference value, the detection sensitivity when it is positive, the false positive rate,
  • the inspection efficiency was determined by the following formulas 1 to 3. The results are shown in Table 3.
  • a is a subject showing a value higher than the upper limit value of the set reference value, and is a patient who is determined to be positive
  • b is a subject showing a value higher than the upper limit value of the reference value.
  • Example 4 Study on peptide set As described above, it was found that the prognosis of a patient can be predicted and the presence or absence of cancer can be determined by using a test reagent consisting of SEQ ID NOs : 1-31. We examined the minimum necessary peptide set that can be used. The average values of the measured values of IgG and IgM were determined for each peptide of 46 healthy people aged 35 years and over and 109 cancer patients group of liver cancer, prostate cancer, pancreatic cancer and leukemia. As a result, it was found that the three peptides shown in Table 4 below showed low values in the healthy group and the cancer patient group in both IgG and IgM.
  • a peptide set consisting of SEQ ID NOs: 1 to 28 can be used as a test agent provided by the present invention, and a peptide set consisting of 1 to 3 types selected from SEQ ID NOs: 1 to 28 and SEQ ID NOs: 29 to 31 is used. It was found that it was possible to predict prognosis and to determine cancer by using it.
  • Example 5 Prognostic analysis of leukemia patients treated with anticancer drugs by IgG4 antibody titer The total survival time when divided into two groups by the median of the sum of IgG4 antibodies against 31 peptides in leukemia patients administered with anticancer drugs is Wilcoxon When the test was conducted, the higher the antibody titer, the better the prognosis (see FIG. 15).

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Abstract

　ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体価の測定用キット、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドのがんの診断への使用およびＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドのがん患者の予後予測への使用を提供する。

Description

がんの検査用試薬及び検査方法
　本発明は、腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドセット、腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体価の測定、腫瘍抗原由来のペプチドのがんの診断への使用および腫瘍抗原由来のペプチドのがん患者の予後予測への使用等に関する。
　悪性腫瘍は日本人の死亡原因の第１位を占め年間約３３万人が死亡している。世界では年間約６００万人ががんで死亡している。がん治療においては、外科的切除、抗がん剤および放射線療法などが行われている。しかしながらかかる療法には再発やＱＯＬの問題、さらにはこれらの治療法が受けられない進行がんである場合の選択肢が無い等の問題がある。がんに対する免疫療法（ワクチン療法）は長い間第４の治療法として待望されている。
　がんペプチドワクチン療法における主要なエフェクターと考えられている特異的Ｔ細胞による細胞性免疫はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）拘束性であり、特定のＨＬＡ型を有する患者のみを対象としたワクチン開発が発明者らを含めた世界中で実施されてきた。
　既にＨＬＡ－Ａ２４、－Ａ２、－Ａ２６およびＨＬＡ－Ａ３スーパータイプ（ＨＬＡ－Ａ３、－Ａ１１、－Ａ３１、－Ａ３３および－Ａ６８．１）のいずれかに結合し、それぞれのＨＬＡ拘束性にＣＴＬ誘導能を有する腫瘍抗原由来のペプチドが同定され、かかるペプチドががんペプチドワクチンとして有用であることが報告されている（非特許文献１－３）。これらの腫瘍抗原由来のペプチドはＨＬＡクラスＩに結合するペプチドである。
Yajima N et al., Clin Cancer Res. 2005 Aug 15;11(16):5900-11. Mochizuki K et al., Int J Oncol. 2004 Jul;25(1):121-31. Tsuda N et al., J Immunother. 2004 Jan-Feb;27(1):60-72.
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを提供する。
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キットを提供する。
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がんの診断用キットを提供する。
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がん患者の予後予測用キットを提供する。
血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と白血病患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と肝臓がん患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と膵臓がん患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と前立腺がん患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とＨＣＶ患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とインフルエンザ患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とＩｇＡ腎症患者の比較を示す。 血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とリウマチ患者の比較を示す。 肝臓がん患者群または白血病患者群の血清中の３１ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と生存日数との関係を示す。 健常人の血清中の３１ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と肝臓がん患者または白血病患者の生存日数との関係を示す。 肝臓がん患者群または白血病患者群の血清中の３０または２８ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と生存日数との関係を示す。 健常人の血清中の３０または２８ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と肝臓がん患者または白血病患者の生存日数との関係を示す。 健常人によるＩｇＭ抗体価（蛍光強度）の一元配置分析を示す 健常人によるＩｇＧ抗体価（蛍光強度）の一元配置分析を示す。 抗がん剤投与白血病患者における３１ペプチドに対するＩｇＧ４抗体の総和の中央値で２群に分けた場合の全生存期間を示す。
１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを提供する。
　ＨＬＡクラスＩ分子は、例えば、ＨＬＡ－Ａ分子である。ＨＬＡ－Ａ分子は、例えば、ＨＬＡ－Ａ２４、　－Ａ２、－Ａ２６およびＨＬＡ－Ａ３スーパータイプ（ＨＬＡ－Ａ３、－Ａ１１、－Ａ３１、－Ａ３３および－Ａ６８．１）であり得る。
　本明細書において、ペプチドのセットとは、ペプチドの集合であり得る。
　一つの実施態様として、本発明が提供するペプチドのセットは、配列番号１－３１で示すペプチドから選択される２以上の異なるペプチドで構成される。例えば、本発明により提供されるペプチドセットは、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドから構成されるペプチドセットである。本発明により提供されるペプチドセットの更なる例としては、（ｉ）配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１個のペプチドのセット、（ｉｉ）配列番号１－３０で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｖ）配列番号１－２９で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉ）配列番号１－２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３０で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなる２８個のペプチドのセットが挙げられる。
　配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１個のペプチドは、それぞれ９から１０アミノ酸残基からなるペプチドであり、表１に示される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　このペプチドは、がん細胞に対してＨＬＡ拘束性の細胞傷害活性を誘導する腫瘍抗原由来のペプチドであり、がんワクチンとして人への投与実績を有している。
配列番号１は、サイクロフィリンＢ（ＣｙｐＢ）由来のペプチドであり、ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ活性による、タンパク質の高次構造形成に関与する自己抗原である。
ＣｙｐＢは各種のがん細胞（膀胱がん、子宮がん、胃がん、肺がん細胞株）において発現量には差があるものの、いずれの細胞でも広く発現が確認されている。
配列番号２は、ＥＧＦＲ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）タンパク質由来のペプチドであり、当該タンパク質は、ＨＥＲ１、ＥｒｂＢ１とも呼ばれ、１２１０個のアミノ酸から構成され、上皮性細胞、肺がん細胞やアンドロジェン非依存性前立腺がんにおいて重要な役割を果たしており、特に、がん治療においては、標的分子と考えられている。ＥＧＦＲはさまざまな悪性腫瘍で過剰発現がみられ、膵臓がん、肺がん、前立腺がん、頭頸部がん、卵巣がん、胃がん、大腸がん、乳がん等で過剰発現がみられる。
配列番号３は、７４６アミノ酸で構成されるｚｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー（Ｅｎｈａｎｃｅｒ　ｏｆ　ｚｅｓｔｅ　ｈｏｍｏｌｏｇ　２；ＥＺＨ２）タンパク質由来のペプチドで、このタンパク質はｚｅｓｔｅのショウジョウバエエンハンサーに相同性があるポリコームグループタンパク質であり、遺伝子サイレンシングに関与している。この遺伝子サイレンシング機構が調節不全に陥るとがんになることが報告されており、ＥＺＨ２は転移性前立腺がんや脳腫瘍等で発現が確認されている。
配列番号４および５は、５８９アミノ酸から構成されるヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｌ：ｔｈｅ　ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌ（ＨＮＲＰＬ）タンパク質由来のペプチドであり、このタンパク質は、細胞質において機能的で翻訳可能になる前の過程であるプリメッセンジャーＲＮＡを処理するための基質を供給する分子で、ＲＮＡ結合タンパク質として細胞の増殖に関与すると考えられており、多くの組織およびがん細胞で発言が確認されている。
配列番号６～１１および２９は、ｓｒｃチロシンキナーゼファミリーに属する５０９アミノ酸からなるＬｃｋタンパク質（ｐ５６ｌｃｋ）由来のペプチドであり、Ｔリンパ球の活性化シグナルに関与していることが知られている。このタンパク質は、末梢血リンパ球や活性化Ｔリンパ球に発現しているが、多種類のがん（大腸がん、食道がん、白血病細胞株、前立腺がん患者組織）、特に、転移性がんに発現が確認されている。
配列番号１２および３０は、１５２９個のアミノ酸から構成されるＭＲＰ３タンパク質に由来するペプチドであり、このタンパク質は、ＡＢＣトランスポーターを成すＭＲＰファミリーの１つである。当該タンパク質は、抗がん剤、特に白金製剤に対する抵抗性に関与すると考えられており、多種類のがん種に発現がみられる。
配列番号１３及び１４は、３４２個のアミノ酸からなる前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、オルトリン酸モノエステルをアルコールとオルトリン酸に変換するフォスファターゼで、前立腺関連抗原の１つである。このタンパク質は、正常前立腺、前立腺肥大、前立腺がんや一部の上皮性がんに発現している。
配列番号１５は、マイトジェン活性化蛋白質キナーゼ　キナーゼ　キナーゼ（ｐｐＭＡＰｋｋｋ）タンパク質のものと相同性を有する７７９アミノ酸で構成されるタンパク質由来のペプチドであり、ＭＡＰｋｋｋは細胞の増殖等に関与し、ＭＡＰｋｋをリン酸化することでＭＡＰｋの核内への移行を促すタンパク質で、ＭＡＰｋｋｋ自身は多くの正常組織並びにがん組織に発現が確認されている。
配列番号１６は、２６２個のアミノ酸からなる前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、カリクレイン様プロテアーゼで、正常前立腺に発現する前立腺関連抗原の１つである。分泌型のＰＳＡは、前立腺における腫瘍マーカーとして一般的に利用されており、膠芽腫での発現頻度は低いものの、大腸がん細胞株における発現は５種類の大腸がん細胞株のうち４種類（Ｃｏｌｏ　２０１、Ｃｏｌｏ　２０５、ＳＷ　４８０、ＳＷ６２０）で検出されている。
配列番号１７は、７５０個のアミノ酸からなる膜タンパク質である前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、正常前立腺に発現する前立腺関連抗原で、前立腺がんに強発現している。また、ＰＳＭＡは腎臓がん、膀胱がん、及び大腸がん周辺の新生毛細血管の内皮細胞に発現していることが確認されている。
配列番号１８は、１７７個のアミノ酸から構成されるＰＴＨ－ｒＰ　（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ）タンパク質由来んペプチドであり、このタンパク質は、骨芽細胞に作用し、骨の形成や吸収に関わっている。このタンパク質は、前立腺がん、肺がん、乳がん、各種がん細胞株に高レベルに発現している。
配列番号１９及び２０は、扁平上皮がんから同定された９５８アミノ酸で構成される腫瘍抗原（ＳＡＲＴ２）タンパク質由来のペプチドであり、このタンパク質はデルマタン硫酸エピメラーゼとして機能していることが知られている。このタンパク質は正常細胞をはじめ、多くの組織で発現していることが確認されている。
配列番号２１～２５は、９６３個のアミノ酸から構成されるＳＡＲＴ３タンパク質由来のペプチドであり、当該タンパク質はその機能はまだ解明されていないが、ｍＲＮＡ　ｓｐｌｉｃｉｎｇの調節に働いていることが示されており、大部分のがん細胞や組織の細胞質と核に存在している。
配列番号２６及び３１は、２７０アミノ酸から構成されるｔｈｅ　ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｖａｒｉａｎｔ　Ｋｕａ　（ＵＢＥ２Ｖ）　に相同性を有するタンパク質由来のペプチドであり、ＵＢＥ２Ｖタンパク質の機能は解明されていないが、核内よりお細胞質に多く存在し、ユビキチンの重合の補助因子と考えられており、すい臓がんや脳腫瘍の細胞の他、正常組織のも発現することが確認されている。
配列番号２７及び２８は、５４９アミノ酸で構成されるｔｈｅ　Ｗｏｌｆ－Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒｎ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　２　ｐｒｏｔｅｉｎ　（ＷＨＳＣ２）に相同性を有するタンパク質由来のペプチドであり、ＷＨＳＣ２タンパク質は、第４染色体短腕の部分欠損に起因する精神的・発育的障害によって特定される多発性奇形症候群であるＷＨＳの表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）において、何らかの機能を有するとされている。ＷＨＳＣ２の発現は、脳腫瘍、大腸がん、膀胱がん、前立腺がん等の細胞株において、発現が確認されている。
本発明に用いるペプチドは、通常のペプチド合成により製造することができる。目的とするペプチドを化学的合成法で製造する場合には、通常のペプチド化学において慣用されている手法によって製造することができ、例えば、ペプチド合成機を使用して、固相合成法により合成することができる。このようにして得られた粗ペプチドは、タンパク質化学において通常使用されている精製方法、例えば、塩析法、限外ろ過法、逆相クロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法などによって精製することができる。
　一方、ペプチドを遺伝子組換え技術で生産する場合には、目的のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を適当な発現ベクターに組込み、この発現ベクターを用いて微生物や動物細胞を形質転換して、得られた形質転換体を培養することによって、所望の該ペプチドを得ることができる。使用できる発現ベクターとしては、当該技術分野において公知であるプラスミド、ウイルスベクターなどを用いることができる。ペプチドの発現および精製を容易にするために、ペプチドを融合タンパク質として発現させる手法も当該技術分野においてよく知られている。
発現ベクターを用いた宿主細胞の形質転換方法としては、慣用の方法、例えば、塩化カルシウム法、リン酸カルシウム共沈殿法、ＤＥＡＥデキストラン法、リポフェクチン法、エレクトロポレーション法などを使用することができる。得られたペプチドの精製は、培養した培地から回収した細胞抽出液もしくは培養上清から上記精製法により行うことができる。
　本発明に用いるペプチドは、塩または溶媒和物であってもよく、Ｃ末端および／またはＮ末端がエステルまたはアミドに改変されていてもよい。
　また、本発明に用いるペプチドは、タグが付加されたＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）であってもよい。
　本明細書においてタグとは、ポリペプチドの精製、検出等のためポリペプチドに付加される部分を意味し、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、ｍｙｃ、ＦＬＡＧタグなどが例示される。タグが付加されたポリペプチドは、例えば、ｐＥＴ３０ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ社製）（Ｈｉｓタグ用）、ｐＧＥＸ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社製）（ＧＳＴタグ用）などの発現ベクターを用いて、適当な宿主細胞で発現させることで得られる。
　また、本発明に用いるペプチドは、ペプチド合成の分野で通常使用される置換基や保護基またはペプチドを安定化させる置換基や保護基がＮ末端やＣ末端に結合したＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）であってもよい。このような置換基や保護基の例としては、限定はされないが、アミド基、アセチル基、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基またはＺ基）、Ｂｏｃ及びＦｍｏｃが挙げられる。
２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、上記「１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット」において説明したとおりである。
　よって、一つの実施態様として、本発明は、配列番号１－３１で示すペプチドから選択される２種以上の異なるペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１－３１；
（ｉｉ）配列番号１－３０；
（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１－２９；
（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　ビーズの場合、１つのビーズに複数の種類のペプチドがそれぞれ、本発明における測定に対して十分な量で結合した１種類のビーズであっても、１つのビーズに１つの種類のペプチドが結合したペプチドの種類により異なるビーズのセットであってもよい。
　よって、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドがそれぞれ、本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；
（ｉｉ）配列番号１－３０、配列番号１－２９および３１、または配列番号１－２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドがそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；
（ｉｉｉ）配列番号１－２９、配列番号１－２８および３０、または配列番号１－２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドがそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；および
（ｉｖ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドがそれぞれ同量で本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズを提供する。
　本明細書において、本発明における測定に対して十分な量とは、本発明が提供する測定または検査を行うことができる量であれば限定はされず、例えば、試料中（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）におけるＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチド）に結合する抗体の抗体価または量を測定できる量（例えば、該抗体量の１０倍、３０倍、１００倍、３００倍または１０００倍の量）であり得る。
　また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した３１種類のビーズのセット；
（ｉｉ）配列番号１－３０、配列番号１－２９および３１、または配列番号１－２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した３０種類のビーズのセット；
（ｉｉｉ）配列番号１－２９、配列番号１－２８および３０、または配列番号１－２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した２９種類のビーズのセット；および
（ｉｖ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した２８種類のビーズのセットを提供する。
　また、ＥＬＩＳＡプレートの場合、（ａ）１つのｗｅｌｌに複数の種類のペプチドが結合したＥＬＩＳＡプレートであっても、（ｂ）１つのｗｅｌｌに１つ種類のペプチドが結合したペプチドの種類により異なるｗｅｌｌを有するＥＬＩＳＡプレートであってもよい。上記（ａ）の場合、一つの実施態様において、１つのｗｅｌｌに複数の種類のペプチドが同量（例えば、同じモル数または同じ重量）で結合したＥＬＩＳＡプレートが提供される。また、上記（ｂ）の場合、一つの実施態様において、各ｗｅｌｌ間で、結合したペプチドが同量（例えば、同じモル数または同じ重量）であるＥＬＩＳＡプレートが提供される。
　ペプチドは、ＥＬＩＳＡプレートに直接結合させてもよく、タンパク質やリンカーなどを介して間接的に結合させてもよい。
　よって、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１－３０、配列番号１－２９および３１、または配列番号１－２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１－２９、配列番号１－２８および３０、または配列番号１－２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；および
（ｉｖ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドの各１種が結合した３１種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１－３０、配列番号１－２９および３１、または配列番号１－２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドの各１種が結合した３０種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１－２９、配列番号１－２８および３０、または配列番号１－２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドの各１種が結合した２９種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；および
（ｉｖ）１つのｗｅｌｌに配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドの各１種が結合した２８種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレートを提供する。
　ビーズは、ペプチドが結合できればよく、ポリスチレンビーズであっても、磁気ビーズであってもよい。ビーズの大きさも特に限定はされず、例えば、直径が５～７μｍであってもよい。例えば、本発明で用いることができるビーズは、Ｌｕｍｉｎｅｘ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎが製造するｘＭＡＰ（登録商標）に使用可能なビーズであってもよい。
　ＥＬＩＳＡプレートは、ペプチドが結合できればよく、例えば、ポリスチレン製のプレートであり得る。
　本発明に用いるペプチドのビーズまたはＥＬＩＳＡプレートへの結合は、当業者が適宜実施できる。
３．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体の抗体価の測定用キット、およびがんの検査用またはがん患者の予後予測の検査用キット
　本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体の抗体価の測定用キットを提供する。
　また、一つの側面において、本発明は、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がんの検査用またはがん患者の予後予測の検査用キットを提供する。
　一つの実施態様として、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、それが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートとしてキットに含まれていてもよい。ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、上記「１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット」において説明したとおりである。よって、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、配列番号１－３１で示すペプチドから選択される２種以上の異なるペプチド、配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドであり得、例えば、（ｉ）配列番号１－３１；
（ｉｉ）配列番号１－３０；
（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１－２９；
（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチドであり得る。
　キットは、さらに、例えば、緩衝液、洗浄液（例えば、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含んだＰＢＳ）、ブロッキング溶液（例えば、ＢＳＡ、牛乳由来タンパク質）、標識抗体（例えば、ＨＲＰ標識抗体、ｃｙ３で蛍光標識した抗体）、発色基質（例えば、ＴＭＢ（３，３'，５，５'－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ））、対照用の９または１０のランダムなアミノ酸残基からなるペプチドおよび／または当該ペプチドが結合したビーズを含んでもよい。標識抗体は、ヒトＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３および／またはＩｇＧ４）および／またはヒトＩｇＭに特異的に結合する抗体（例えば、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ２抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体、抗ヒトＩｇＭ抗体）であってもよい。
　上記「２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート」で説明したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを使用して、試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿等）中の腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の検出、量の測定、抗体価の測定をすることができる。抗体の検出、量の測定、抗体価の測定は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドの種類毎の抗体の検出、量の測定、抗体価の測定であってもよく、種類は問わずＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する全抗体の検出、抗体量の総和の測定、抗体価の総和の測定であってもよい。抗体価は蛍光強度を指標として測定してもよい。また、抗体価は、ヒト血中に抗体が存在しない対照用のペプチド（例えば、９または１０のランダムなアミノ酸残基からなるペプチド）を用いたときの蛍光強度を１として表してもよい。
　ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体は、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり得る。
血液中の抗ペプチド抗体は、当業界に知られるいずれの方法により測定してもよい。測定方法としては、例えばＥＬＩＳＡ法(Pedersen M.K. et al., J. Immunol. Methods. 2006 Apr 20;311(1-2):198-206. Epub 2006 Mar 6.)、ルミネックス法（Komatsu N. et al., Scand JCl in Lab Invest. 64, 535-546, 2004）、ＲＩＡ法(Maruta T. et al., Immunol Invest. 2006;35(2):137-48.)、免疫クロマト法が挙げられる。なかでも、アレイシステムによって多種抗原に対する抗体を一度に測定できるルミネックス法により測定することが好ましい。具体的には、本発明の薬剤を構成するペプチドをそれぞれ異なる蛍光色素を有するマイクロビーズ担体に固相化し、この固相化されたペプチドに対して結合する患者末梢血中の抗体を蛍光等によって検出・測定する。測定する抗ペプチド抗体のクラスはペプチドの種類にしたがい適宜決定されるが、通常ＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）またはＩｇＭである。
したがって、本発明が提供する検査用試薬は、配列番号１～３１のペプチドを含むＥＬＩＳＡやＬｕｍｉｎｅｘ法等によって、血液中の抗体が測定できるように調製された試薬であればよく、例えば、配列番号１～３１のペプチドそのもの（例えば、乾燥粉末や適切な溶媒に溶解した溶液状）であってもよい。また、測定に用いやすいように３１種を個別の試薬とする試薬セットとしてもよく、３１種を混合して１つの試薬とした組成物であってもよい。さらに、ヒトの血液中の抗体を測定するために適した形態に調製した状態、たとえば、ＥＬＩＳＡ用のマイクロプレートやメンブレン等に固相化したプレートまたはメンブレンそのものや、マイクロビーズ上に固相化したビーズからなる試薬であってもよく、３１種と多種のペプチドに対する抗体を一度に測定可能なマイクロビーズへ固相化したビーズを試薬として用いることが好ましい。なお、固相化は、１つの支持担体、例えば１つのビーズまたは９６ｗｅｌｌの１ｗｅｌｌに対して３１種のペプチドを一度に固相化したものでもよく、１つのビーズまたは１ｗｅｌｌごとに１種類のペプチドを固相化したもののいずれでもよいが、ビーズの場合は１つのビーズごとに１種類のペプチドを固相化して調製された３１種のビーズを用いることが好ましい。
より具体的な調製として、例えば、典型的なＥＬＩＳＡ法を用いる場合には、以下のようにして測定を行うことができる。まず、抗原であるペプチドを９６ウェルなどの慣用のＥＬＩＳＡプレートに結合させ、非特異的吸着を防止するためにプレートを適宜ブロッキングする。次に被験者の血液から既知の方法で調製した血清または血漿を適宜希釈してプレートの各ウェルに加えて、所定時間反応する。プレートを洗浄して未結合成分を除去した後、ヒト抗体と結合しうる抗体（例えばウサギ抗ヒト抗体）を加える。ＩｇＧを検出することが望まれる場合には、γ鎖特異的抗ヒトＩｇＧを用いることができる。所定時間反応した後、プレートを洗浄し、検出可能なように標識した抗体（例えば抗ウサギＩｇＧ）を加える。標識は、酵素、蛍光色素、化学発光物質、ビオチン、放射線化合物等を用いて、当業者によく知られる方法により行うことができる。プレートを所定時間反応した後、適当な基質を加えて基質の減少もしくは生成物の増加を測定するか、または蛍光、発光、放射活性を測定することにより、標識を検出する。このようにして、被験者の血清における特定のペプチドに対する抗体の量を測定することができる。
一方、マイクロビーズを用いた方法としては、Ｌｕｍｉｎｅｘ社のｘＭＡＰ技術があげられる。これは、Ｌｕｍｉｎｅｘ社が開発した蛍光マイクロビーズアレイシステムによるフローメトリー測定法であり、ペプチドを結合させたマイクロビーズと血清とを接触させ、次に、蛍光標識二次抗体を結合させて、フローメトリーにより蛍光強度を測定する。
また、免疫クロマト法の場合は、試験紙上に抗原（または抗体）を線状に分布させた部分を作っておき、検体中の抗体と着色粒子で標識された抗原との複合体が試験紙上を移動する際に、抗原（または抗体）に集中的に捕捉されることで現れる色付きのラインをクロマトリーダー等で読み込みを行い数値化することで測定が可能である。
　上記「２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート」で説明したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを用いて、試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿等）中の腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の検出、量の測定、抗体価の測定をすることで、がんの診断またはがん患者の予後予測の判定に使用することができる。
　がんの診断またはがん患者の予後予測は、患者の血中のＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の抗体価の総和を測定することにより、達成され得る。抗体価は蛍光強度を指標として測定してもよい。また、抗体価の代わりに、試料中の抗体量を定量してもよい。ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体は、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり得る。
　一つの実施態様において、予め多数（例えば、３０、１００、３００人）のがん患者（例えば、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がん）および健常人の血中の配列番号１－２８または配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭの抗体価の総和を測定しておき、被験者の血中の配列番号１－３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭの抗体価の総和と比較することで、被験者ががん患者であるか否かの判定または被験者の予後が良いか否かの判定をすることができる。判定の際には、健常人またはがん患者群の中央値を閾値とし、被験者が当該閾値以上の値を示すかどうかでがん患者であるか否か、生命予後が長いかどうかを判定することができる。
　例えば、白血病や肝臓がんにおいては、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ１を測定することで健常人または各患者群の中央値を閾値とし、当該閾値以上の値を示す患者であるかどうかで生命予後が長いかどうかを予測することが可能であり、これによって、患者の治療方針を決定していく一助となりえる。
　白血病においては、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ４を測定することで健常人または患者群の中央値を閾値とし、当該閾値以上の値を示す患者であるかどうかで生命予後が長いかどうかを予測することが可能である。白血病の患者が抗がん剤（例えば、がん化学療法剤）を投与されているとき、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ４の抗体価が当該閾値より高い場合は、抗がん剤（例えば、がん化学療法剤）の治療が効果を奏していると判断できる。また、その場合は、生命予後が長いと判断できる。
　がん化学療法剤は、例えば、分子標的薬（例えば、イマチニブ、リツキシマブ）、アルキル化剤（例えば、イホスファミド、シクロホスファミド）、代謝拮抗剤（例えば、テガフール、フルオロウラシル、メトトレキサート）、植物アルカロイド（例えば、イリノテカン、エトポシド、パクリタキセル、ビンブラスチン）、抗がん性抗生物質（例えば、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ）、プラチナ製剤（例えば、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン）、または生物学的応答調節剤（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン２）であり得る。
　また、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に対するＩｇＭの抗体価を測定し、この測定値の総和を代表値として健常人群の基準値を設定し、基準の上限値より高い値かどうかを指標とすることで、がん（例えば、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がん）を罹患しているか否かを判定する検査として用いることが可能である。上記基準値は、健常人群の９５％以上が含まれる抗体価の範囲の上限値とすることができる。
　なお、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＭはヒト年齢に依存して血中の抗体価が減少するので、比較する健常人群と被験者の年齢を合わせることにより、正確ながんの罹患の有無の判定をすることができる。あるいは、予め健常人について測定したＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＭの抗体価のデータに基づき、被験者と同じ年齢の健常人の９５％以上が含まれると予想される抗体価の範囲を算出し、その上限値を健常人群の基準値としてもよい。健常人群と被験者の年齢を合わせる場合、同じ年齢が好ましいが、年齢の差が、例えば、５歳未満、４歳未満、３歳未満または２歳未満であってもよい。
　また、同様に、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する全ＩｇＧの抗体価を測定した場合は白血病または肝臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ１の抗体価を測定した場合は白血病または膵臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ２の抗体価を測定した場合は白血病の罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ３を測定した場合は肝臓がんまたは膵臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ４を測定した場合は肝臓がんまたは膵臓がんの罹患の有無を判定することができる（図１－４参照）。
　一つの実施態様において、被験者が白血病に罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
　また、一つの実施態様において、被験者が肝臓がんに罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する全ＩｇＧ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
　また、一つの実施態様において、被験者が膵臓がんに罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
　上記、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんに罹患しているか否かの判定は、また、それらがんの鑑別診断にも利用できる。
　例えば、健常人に比較し、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が有意に低く、ＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は白血病に罹患しているのであって肝臓がん、膵臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ３およびＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ４が健常人為比較し有意に低く、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は肝臓がんに罹患しているのであって白血病、膵臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中のＩｇＧ１およびＩｇＧ３が健常人に比較し有意に低く、ＩｇＧ４およびＩｇＭが健常人為比較し有意に高く、全ＩｇＧおよびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は膵臓がんに罹患しているのであって白血病、肝臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中のＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が健常人為比較し有意な差がなければ、被験者は前立腺がんに罹患しているのであって白血病、肝臓がんおよび膵臓がんに罹患していないと判定できる。
　さらに、上記、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんに罹患しているか否かの判定は、それらがんとＨＣＶ感染者、インフルエンザ感染者、ＩｇＡ腎症、リウマチ等の鑑別診断にも利用できる。
　例えば、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ３およびＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ４が健常人為比較し有意に低く、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者が肝臓がんを発症していると判定でき、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、およびＩｇＧ１が健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭが健常人と比較し有意な差がなければ、被験者はＨＣＶに感染しているものの、肝臓がんを発症していないと判定できる。
一つの実施態様において、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドと試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）を接触させることを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ）の抗体価の測定方法を提供する。当該抗体価の測定方法はｉｎ　ｖｉｔｒｏで実施することができる。
また、一つの実施態様において、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドと試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）を接触させること、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ）の抗体価の測定することを含む、がんの診断方法またはがん患者の予後予測の判定方法を提供する。当該がんの診断方法またはがん患者の予後予測の判定方法はｉｎ　ｖｉｔｒｏで実施することができる。
　本発明が提供する実施態様の非限定的な例には、下記（１）～（２９）が含まれる。
（１）以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセット。
（２）（１）に記載のペプチドが結合したビーズ。
（３）（１）に記載のペプチドが、１個のビーズ当たり各１種ずつ結合したビーズのセット。
（４）（１）に記載の各ペプチドがそれぞれ異なるｗｅｌｌに結合したＥＬＩＳＡプレート。
（５）（１）に記載の各ペプチドが等モルずつ１つのｗｅｌｌに結合したＥＬＩＳＡプレート。
（６）腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定に使用する、（１）に記載のペプチドセット、（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、または（４）または（５）に記載のＥＬＩＳＡプレート。
（７）がんの判定またはがん患者の予後予測に使用する、（６）に記載のペプチドセット、ビーズ、ビーズのセットまたはＥＬＩＳＡプレート。
（８）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（７）に記載のペプチドセット、ビーズ、ビーズのセットまたはＥＬＩＳＡプレート。
（９）（１）に記載のペプチドのセットを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用組成物またはキット。
（１０）（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
（１１）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（９）または（１０）に記載の組成物またはキット。
（１２）以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用組成物またはキット。
（１３）（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
（１４）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（１２）または（１３）に記載の組成物またはキット。
（１５）さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ２抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む白血病の判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む肝臓がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む膵臓がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＭ抗体を含む前立腺がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ抗体および抗ヒトＩｇＧ１抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む白血病または肝臓がん患者の予後予測用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；または、さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む肝臓がんとＨＣＶ感染の鑑別診断用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット。
（１６）被験者から採取した試料における、以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１－３１；（ｉｉ）配列番号１－３０；（ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；（ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１－２９；（ｖｉ）配列番号１－２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、がんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
（１７）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（１６）に記載の方法。
（１８）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（１６）または（１７）に記載の方法。
（１９）被験者から採取した試料における抗体価の総和と健常人から採取した試料における抗体価の総和の中間値またはがん患者から採取した試料における抗体価の総和の中間値を比較することを更に含む、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２０）被験者から採取した試料における抗体価の総和と、被験者と同年齢の健常人から採取した試料における抗体価の総和の中間値または被験者と同年齢のがん患者から採取した試料における抗体価の総和の中間値を比較することを更に含む、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２１）被験者から採取した試料における抗体価の総和と健常人から採取した試料における抗体価の総和の基準値の上限値を比較することを更に含み、該基準値の上限値と下限値の間に９５％以上の健常人の抗体価の総和が含まれる、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２２）被験者から採取した試料における抗体価の総和と被検者と同年齢の健常人から採取した試料における抗体価の総和の基準値の上限値を比較することを更に含み、該基準値の上限値と下限値の間に９５％以上の被検者と同年齢の健常人の抗体価の総和が含まれる、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２３）試料は、血清または血漿である、（１６）から（２３）のいずれかに記載の方法。
（２４）ｉｎ　ｖｉｔｒｏまたはｅｘ　ｖｉｖｏで実施される、（１６）から（２３）のいずれかに記載の方法。
（２５）抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ２抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、白血病を判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、肝臓がんを判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、膵臓がんを判定用する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＭ抗体であり、前立腺がんを判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ抗体およびヒトＩｇＧ１抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、白血病または肝臓がん患者の予後を予測する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；または、抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、肝臓がんとＨＣＶ感染を鑑別する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法。
（２６）（１）に記載のペプチドのセット、（５２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートの、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キットの製造における使用。
（２７）（１）に記載のペプチドのセット、（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートの、がんの判定用キットまたはがん患者の予後予測用キットの製造における使用。
（２８）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（２６）に記載の使用。
（２９）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（２７）に記載の使用。
　以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１：がん患者の血清における、配列番号１－３１を構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の測定
（１）ペプチドの調製
　配列番号１～３１で構成されるそれぞれのペプチドを固相合成法にて合成し、純度９０％以上に精製したペプチドを準備した。
（２）被験者および血液試料の調製
１０代から９０代までの健常人７４名、インフルエンザ感染者２０名、ＨＣＶ感染者２２名、ＩｇＡ腎症患者２０名、リウマチ患者２０名、肝臓がん患者３９名、すい臓がん患者２０名、前立腺がん患者２０名、白血病患者２６名から常法に従い血清もしくは血漿（ヘパリン加血）を調製した。なお、これらの患者は配列番号１～３１のいずれかのペプチドをワクチンとして投与した経歴のない被験者である。
（３）ペプチド結合ビーズの調製
　特に記載のないかぎり、３０℃で配列番号１～３１のそれぞれで表されるペプチドを結合したビーズの調製を行った。まず、１．５ｍＬチューブにカルボキシビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ社製）を１０００μＬで分注し、遠心して上清を除去したのちに、０．１Ｍ　ＭＥＳ（２－モルホリノエタンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ７．０）を添加して洗浄し、当該緩衝液を除去した。次いで、３００μＬの０．１Ｍ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、配列番号１～３１ペプチドをジメチルスルホキシドに１０ｍｇ／ｍＬで溶解したペプチド溶液５０μＬと４５０μＬの０．１Ｍ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を混合し、各４００μＬを上記の各チューブへ添加した。次いで、ＥＤＣ（Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩）（１０ｍｇ／ｍＬ／０．１Ｍ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０））を１０μＬずつ添加した。
　暗所で２０時間・振とう反応させた。反応後、上清を除去し、１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を各チューブに５００μＬずつ添加し、暗所で３０分間・振とう反応させた。次に、各チューブに入ったビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、イムノブロックを入れて調製した保存用溶液で回収した。なお、ブランクビーズはペプチドを添加せずＤＭＳＯのみを用いて同様の操作を行って調製し、コントロールビーズとして、Ｃ－３５ペプチド（配列番号３２：ＹＬＬＰＲＲＧＰＲＬ）を用いて、同様の操作を行って調製した。
　これらの３３種のビーズはそれぞれビーズ数が均等となるように混合した溶液を調製した。
（４）抗ペプチド抗体測定
　被験者から得た血清を１０％イムノブロックで１００倍に希釈した。フィルタープレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、先に作成した配列番号１～３１の各ペプチドをそれぞれ結合したビーズおよび陰性コントロールビーズの混合液を１．５μＬ／ウェルで添加した。ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄した後、希釈血清を１００μＬ／ウェルで加え、３０℃で１．５時間反応した。反応後、ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、各抗体クラスを検出するために一次抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（γ）抗体、抗ＩｇＭ抗体、抗ＩｇＧ１～抗ＩｇＧ２抗体）を１００μｌ／ウェルで加え、室温で１時間反応した。ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄した後、ストレプトアビジン－Ｒ－フィコエリスリンコンジュゲート（ＳＡＰＥ）を１００μｌ／ウェルで加え、３０℃で３０分間反応した。次に、Ｌｕｍｉｎｅｘ蛍光フローメトリーシステムで蛍光強度を測定し、ビーズに結合した各クラスの抗体（ＩｇＭ、総ＩｇＧ、および各ＩｇＧ１～４）における測定値（ＦＩＵ）をそれぞれ得た。
（５）データ解析
　各抗体のクラスについて、被験者ごと得られた３１種のペプチドのＦＩＵそれぞれからブランクビーズおよび測定コントロール（バッファーのみの測定値）の値を差し引いた配列番号１～３１それぞれの値を合計して代表値とした。そして得られた代表値を用いて、インフルエンザ感染者群、ＨＣＶ感染者群、ＩｇＡ腎症患者群、リウマチ患者群、肝臓がん患者群、すい臓がん患者群、前立腺がん患者群、および白血病患者群に対してそれぞれ年齢調整を行った健常人群との間に有意な差があるかどうかをウイルコクソンの符号順位検定によって検討した
結果を表２および図１～８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 表２および図１～８の結果から、ＩｇＧ（ＩｇＧ１～ＩｇＧ４）については白血病及び肝臓がん患者について有意差がみられた。ＩｇＧ１については、白血病、肝臓がんについて有意差がみられ、ＩｇＧ２については、白血病について有意差がみられ、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４については、肝臓がんおよび膵臓がんについて有意差がみられ、ＩｇＭについては、全てのがん患者、すなわち白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんについて有意差がみられた。
以上から、本発明の３１種のペプチドからなる検査用試薬を用いてＩｇＧおよびＩｇＭを測定することで、健常人との有意差が見られることから、本検査用試薬によって、がんの罹患の有無等を検査しえることがわかった。
実施例２：予後予測因子の検討
　健常人との間でＩｇＧにおいて有意差がみられた白血病および肝臓がん患者について、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の各代表値が患者の生命予後と関連しているかどうかを患者群の中央値または健常人の中央値を閾値として２群に分けたカプランマイヤー曲線を作成し、ログランク検定により有意な差がみられるかどうかを検討した。結果を図９および１０に示す。
図９および１０の結果から、白血病については、白血病患者群の中央値を閾値とした場合、ＩｇＧ１において、閾値以上の患者において生命予後が長いという結果が得られたことから、白血病患者群の中央値をカットオフ値とすれば、白血病患者の生命予後を予測しえることがわかった。一方、肝臓がんについては、健常人群の中央値を閾値とした場合、閾値以上の患者において生命予後が長いという結果が得られたことから、健常人の中央値をカットオフ値とすれば、白血病患者の生命予後を予測しえることがわかったのにおいて、有意な差がみられたことから、これらをカットオフ値とすることで、患者の生命予後を判断する予後予測因子となり得ることが分かった。
実施例３：がんの判定因子としての検討
ＩｇＭについて、肝臓がん、前立腺がん、すい臓がん、白血病患者群のそれぞれが、健常人群に対して有意な差がみられたため、抗ペプチドＩｇＭの測定合計値ががんの判定因子になるかどうかについて検討を行った。検討するに当たり、健常人群の年代別に検討を行ったところ、図１３および図１４に示す通り年代別の代表値の平均に差がみられ、一方、患者群の年齢は３５歳以上であったことから、健常人群の年齢も３５歳以上の被験者からなる群（４６名）とした。
次いで、健常人基準値を求めるため、当該群を用いて健常人群の基準値をパーセンタイル法で求めたところ、基準値（＞９５％範囲）は２９５２～３９４１２（単位：ＦＩＵ）であった。
この基準値の上限値（３９４１２）以下を正常値（すなわち、がんの罹患が陰性）として設定し、基準値の上限値より高い値の場合、陽性とした場合の検出感度、偽陽性率、検査効率を以下の式１～３によって求めた。結果を表３に示す。なお、式中のａは設定した基準値の上限値より高い値を示す被験者であって、患者であり陽性と判定される人数、ｂは基準値の上限値より高い値を示す被験者であって、健常人であるが陽性と判定される人数、ｃは基準値の上限以下であって患者であるが陰性と判定される人数、ｄは基準値の上限以下であって健常人であり陰性と判定される人数を示している。
（式１）検査感度（％）　＝　ａ／（ａ＋ｃ）×１００
（式２）偽陽性率（％）　＝　ｂ／（ｂ＋ｃ）×１００
（式３）検査効率（％）　＝　（ａ＋ｄ）／（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ）×１００
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 表３の結果から、健常人の基準値の上限値以下をがんが陰性とするカットオフ値の設定をすれば、高い感度並びに低い偽陽性率でがんの罹患を検査しえることがわかった。すなわち、本発明が提供する３１種のペプチドを含む検査用試薬を用いてＩｇＭを測定して得た値は、がんの判定因子として用いることが可能であり、３１種のペプチドを含む検査用試薬はがんの罹患の検査に用いることが可能であることが分かった。特に、膵臓がん、前立腺がんの罹患において、感度及び特異性が高い検査が可能であった。
実施例４：ペプチドセットに関する検討
　以上のように、配列番号１～３１からなる検査用試薬を用いることで患者の予後を予測することやがんの有無を判定しえることが分かったため、当該判定が可能となる最低限必要なペプチドセットについて検討を行った。
３５歳以上の健常人群４６名と肝臓がん、前立腺がん、すい臓がんおよび白血病のがん患者群１０９名についてそれぞれのペプチドごとにＩｇＧおよびＩｇＭの測定値の平均値を求めた。その結果、以下の表４に示す３つのペプチドは、ＩｇＧおよびＩｇＭのいずれにおいても、健常人群およびがん患者群において低い値を示すことが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 そこで、これらのペプチドを除いたペプチドセットによって得られた測定値が健常人群と各がん患者群における予後予測因子またはがんの判定因子として用いることが可能かどうかを検討した。
結果を図１１および１２、表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
 図１１および１２、表５の結果から、配列番号２９～３１のいずれか１～３種を除いてもＩｇＧにおける予後予測因子やＩｇＭにおけるがんの判定因子としての利用に影響を与えないことが分かった。
すなわち、配列番号１～２８からなるペプチドセットでも本発明が提供する検査薬として用いることが可能であり、配列番号１～２８と配列番号２９～３１から選ばれる１～３種からなるペプチドセットを用いることで予後予測やがんの判定が可能であることが分かった。
実施例５：　ＩｇＧ４抗体価による抗がん剤投与白血病患者の予後解析
　抗がん剤投与白血病患者における３１ペプチドに対するＩｇＧ４抗体の総和の中央値で２群に分けた場合の全生存期間をウイルコクソンで検定したところ抗体価が高い方が有意に予後良好であった（図１５参照）。

Claims (17)

  1. ＨＬＡクラスＩ分子に結合するする腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット。
  2. 腫瘍抗原由来のペプチドが、配列番号１－３１のアミノ酸配列で示されるペプチドから選択される異なる２種以上のペプチドから構成される、請求項１に記載のペプチドセット。
  3. 腫瘍抗原由来のペプチドが、配列番号１－３１のアミノ酸配列で示されるペプチドから選択される、２８種以上３１種以下のペプチドから構成される請求項１または請求項２に記載のペプチドセット。
  4. ペプチドセットが
    （ｉ）配列番号１－３１；
    （ｉｉ）配列番号１－３０；
    （ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；
    （ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；
    （ｖ）配列番号１－２９；
    （ｖｉ）配列番号１－２８および３０；
    （ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または
    （ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
    のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットである、請求項１から３のいずれかに記載のペプチドセット。
  5. 請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドが結合したビーズ。
  6. 請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドが、１個のビーズ当たり各１種ずつ結合したビーズのセット。
  7. 請求項１から請求項４のいずれかに記載の各ペプチドがそれぞれ異なるｗｅｌｌに固相化されたＥＬＩＳＡプレート。
  8. 請求項１から請求項４のいずれかに記載の各ペプチドが等モルずつ１つのｗｅｌｌに固相化されたＥＬＩＳＡプレート。
  9. 請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドのセットを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
  10. 請求項５に記載のビーズ、請求項６に記載のビーズのセット、請求項７に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは請求項８に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
  11. ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
  12. 配列番号１－３１のアミノ酸配列からなるペプチドから選択される２８乃至３１のペプチドにより構成されるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
  13. ペプチドセットが、
    （ｉ）配列番号１－３１；
    （ｉｉ）配列番号１－３０；
    （ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；
    （ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；
    （ｖ）配列番号１－２９；
    （ｖｉ）配列番号１－２８および３０；
    （ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または
    （ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
    のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットである、請求項１１または請求項１２に記載のがんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
  14. 請求項５に記載のビーズ、請求項６に記載のビーズのセット、請求項７記載のＥＬＩＳＡプレートまたは請求項８に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
  15. ヒトから採取した試料における、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
  16. アミノ酸配列番号１－３１で示されるペプチド群から選択される２８乃至３１のペプチドから構成されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、請求項１５に記載のがんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
  17. ヒトから採取した試料における、以下の配列番号：
    （ｉ）配列番号１－３１；
    （ｉｉ）配列番号１－３０；
    （ｉｉｉ）配列番号１－２９および３１；
    （ｉｖ）配列番号１－２８、３０および３１；
    （ｖ）配列番号１－２９；
    （ｖｉ）配列番号１－２８および３０；
    （ｖｉｉ）配列番号１－２８および３１；または
    （ｖｉｉｉ）配列番号１－２８
    のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、請求項１５または請求項１６に記載のがんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
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