JPWO2014181805A1 - ペプチドカクテルワクチン - Google Patents

Abstract

本発明は、がんを有する患者へ投与されるペプチドカクテルワクチンであって、該患者において有効な少なくとも２種類以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、ペプチドカクテルワクチンを提供する。本発明はまた、前記ペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。本発明はさらに、前記ペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防する方法を提供する。

Description

本発明は、がんの治療または予防のための汎ＨＬＡ型対応ペプチドカクテルワクチンに関する。

現在、がん免疫療法としては、生体外で増殖させたＮＫ細胞やＴ細胞を用いた養子免疫療法や樹状細胞療法、あるいはがん細胞やがん細胞を樹状細胞と融合させた細胞による能動免疫療法などがおこなわれている。しかしながら、抗原が特定されたものではないため、科学的に効果を解析することができず、第三者が検証できないという欠点を有する。また、いずれも大規模な施設を要し、高額であるため、一部の患者しか受けることができないという欠点を有する。そのため、どこででも受けられる能動特異免疫療法として、がんペプチドワクチンの開発が望まれている。

がんワクチンは、がんを特異的に認識傷害する免疫反応、特に細胞傷害性Ｔ細胞（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ， ＣＴＬ）の活性化を生体内で起こさせ、がんを拒絶退縮させる治療法であり、能動特異的免疫療法とも呼ばれる。その中でペプチドワクチンは、がん関連抗原ペプチドを乳化添加剤などとともに体内に投与し、ＣＴＬを賦活化させるものである。

ＣＴＬはＴ細胞抗原受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴＣＲ）を持つ。このＴＣＲを介してがん細胞のヒト白血球抗原（Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ， ＨＬＡ）クラス Ｉ分子上に提示されたペプチド（８〜１０個のアミノ酸）が認識されると、活性化のシグナルがＣＴＬ内に伝達される（抗原刺激）。抗原刺激されたＣＴＬは、賦活化Ｔ細胞と呼ばれる活性化ＣＴＬとなって、同じペプチドを提示する細胞のみを標的として傷害・排除に働く。さらにこれらのＣＴＬは近傍の免疫系の活性化と自らの細胞（がん特異的ＣＴＬ）の増加を惹起して、がん排除への免疫ネットワークを作動させる（非特許文献１〜１０）。

ペプチドワクチンには、ＣＴＬが認識するがん関連抗原、即ち、がん細胞に多く発現するが、正常細胞には発現していない、もしくは発現が極めて少ない抗原のペプチドが用いられる。がん関連抗原を認識する免疫反応を起こさせると、ＣＴＬはこの抗原を持つ細胞だけを攻撃し、正常細胞を傷害しない。

ペプチドワクチンが皮下に投与された場合、まず皮膚の抗原提示細胞によって捕捉され、投与部位近くのリンパ節にペプチドが搬送される。このリンパ節内で患者のリンパ球がペプチドによって賦活化され、そのペプチドに特異的なＣＴＬが増殖する。増殖したＣＴＬはリンパ節から循環系に入り、体内を循環してがん細胞を探し出し傷害する。ペプチドワクチンによる治療法は、このようにして薬効を発揮させる新しい作用メカニズムに則った治療法である。

一方、ペプチドそのものはがん細胞を傷害することはない。また、その他の直接的な薬理作用は今のところ確認されていない。そのため、高い安全性が期待されている。

ペプチドを用いたワクチンは、悪性黒色腫やリンパ腫に対する特異的免疫療法として１９９０年代から欧米において臨床研究が行われ、有効性を示す報告がなされている。しかしながら、ペプチドワクチンとして単独の薬剤の承認はまだない。

本発明者らは、個々のがん患者末梢血におけるＴ細胞エピトープ（候補ペプチド）に対するハイスループット型の抗体測定法（特許文献１）を開発し、テーラーメイド型ペプチドワクチン（ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅ、ＰＰＶ）療法を行っている（特許文献２）。当該療法では、注射刺入部の疼痛、硬結が主な副作用であり、多くの抗がん剤にみられるような悪心、嘔吐や脱毛などを伴わず、患者のＱＯＬ向上が期待できる結果を得ている。

特許第３９６０６１４号明細書 米国特許第７７１８６１４号明細書

Ｎａｋａｏ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４：２５６５−２５７４， ２０００． Ｙａｎｇ Ｄ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５９：４０５６−４０６３， １９９９． Ｈａｒａｓｈｉｍａ Ｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３１：３２３−３３２， ２００１． Ｉｎｏｕｅ Ｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｕｒｏｌ． １６６：１５０８−１５１３， ２００１． Ｈａｒａｄａ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ． ５７（２）：１５２−１５９， ２００３． Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ． ９４（７）：６２２−６２７， ２００３． Ｏｇａｔａ Ｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ． ６０：２７３−２８１， ２００４． Ｙａｏ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ９１：２８７−２９６， ２００４． Ｓｈｏｍｕｒａ Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ４０：１７７６−１７８６， ２００４． Ｙａｍａｄａ Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６１： ６４５９−６４６６， ２００１．

上述の養子免疫療法や樹状細胞療法、あるいはがん細胞やがん細胞を樹状細胞と融合させた細胞による能動免疫療法などには、第三者が検証することが困難であるという問題点がある。さらに、このような治療法を行うには大規模な施設を要し、また高額であるため一部の患者しか受けることができないなどの欠点を有する。これらの問題点を克服するため、本発明者らはテーラーメイド型ペプチドワクチン（ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅ、ＰＰＶ）療法を開発中である。しかしながら、ＰＰＶ療法は患者ごとに用いるペプチドの選択を要するため、汎用性の面で短所を有する。そこで、ＰＰＶ療法の短所を克服した、ペプチドワクチンの開発が望まれている。

本発明者らは、従来から行われている能動免疫療法およびＰＰＶ療法の有する上述の短所を克服するために、鋭意研究を重ね、患者へ投与されるペプチドカクテルワクチンであって、該患者において有効な少なくとも２種類以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、ペプチドカクテルワクチンを完成させた。

カクテル製剤の場合、親和性の高いペプチドが競合的にＨＬＡ分子に結合し、親和性が相対的に低いペプチドの効果が落ちる可能性が指摘されていた。この点に関しては、ＨＬＡ−Ａ２４結合性ペプチドのカクテルにおいて効果が認められるという報告があることから（Ａｋｉｙａｍａ Ｙ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２００４， ２４：５７１−７を参照のこと）、カクテルワクチンの可能性が示唆されている。しかしながら、当該報告は、異なるＨＬＡタイプのペプチドカクテルによる汎ＨＬＡペプチドワクチンの可能性を示唆したものではない。一方、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡら（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ， ２００６， ２９：２２４−２３１Ｍａｓａｎｏｒｉ Ｎｏｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１０， ２９；１０（１２））は、ペプチドの種類や組み合わせによって、別々に投与する場合と混合して投与する場合で、結果が異なることを示した。これらの違いは、局所の非特異的な炎症の惹起やＨＬＡ分子に対する競合的なペプチドの結合などが考えられている。従って、カクテルにした場合のワクチンとしての効果は容易に類推できるものではなく、臨床試験によってのみ明らかになると考えられる。

本発明は、過去の単独ペプチド投与における臨床試験の結果に基づいて、候補ペプチドを選び、これらのペプチドをカクテルにした場合、ＨＬＡタイプに依存せずに臨床効果が得られるかどうかを、異なるがん種における臨床試験に供することで検証した結果完成された、ＴＮを含む標準治療抵抗性乳がん患者、スキルス胃がんを含む進行・再発胃がん患者、および前立腺がんの治療に用いるペプチドカクテル製剤に関するものである。

すなわち、本発明は、以下のものを提供するものである：
（１）がんを有する患者へ投与されるペプチドカクテルワクチンであって、
該患者において有効な少なくとも２種類以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、
ペプチドカクテルワクチン；
（２）Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、Ｌｃｋ−４８６（配列番号５）、ＥＧＦＲ−８００（配列番号６）、ＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）、Ｌｃｋ−２４６（配列番号８）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）、ＨＮＲＰＬ−１４０（配列番号１０）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）、ＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＰＳＭＡ−６２４（配列番号１７）、ＰＴＨｒＰ−１０２（配列番号１８）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）およびＬｃｋ−２０８（配列番号２０）からなる群から選択される少なくとも２個以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、（１）に記載のペプチドカクテルワクチン；
（３）ＰＡＰ−２４８（配列番号２１）、ＥＺＨ２−７３５（配列番号２２）、ＵＢＥ２Ｖ−８５（配列番号２３）、ＭＲＰ３−５０３（配列番号２４）、ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−５１１（配列番号２６）、ＳＡＲＴ３−３０９（配列番号２７）、ＨＮＲＰＬ−５０１（配列番号２８）、ＳＡＲＴ２−１６１（配列番号２９）、ｐｐＭＡＰｋｋｋ−４３２（配列番号３０）およびＬｃｋ−４２２（配列番号３１）からなる群から選択される少なくとも１個以上のＣＴＬエピトープペプチドをさらに含む、（２）に記載のペプチドカクテルワクチン；
（４）ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）およびＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）を含む、（２）に記載のペプチドカクテルワクチン；
（５）ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）およびＬｃｋ−２４６（配列番号８）を含む、（１）に記載のペプチドカクテルワクチン；
（６）ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）およびＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）を含む、（１）に記載のペプチドカクテルワクチン；
（７）（１）〜（６）のいずれか一つに記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療するための方法；および
（８）（１）〜（６）のいずれか一つに記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防するための方法、
に関する。
（９）５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で投与される、（１）〜（６）のいずれか一つに記載のペプチドカクテルワクチン。
（１０）５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で（１）〜（６）のいずれか一つに記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療するための方法。
（１１）５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で（１）〜（６）のいずれか一つに記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防するための方法。

本発明によれば、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３スーパータイプあるいはＨＬＡ−Ａ２６のそれぞれに拘束性の細胞傷害性Ｔ細胞を誘導することにより、汎ＨＬＡ型のペプチドカクテルワクチンを提供することが可能になる。またそのようなペプチドカクテルワクチンを投与することによる、がんの治療または予防が可能になる。

本発明のペプチドワクチンカクテル製剤は、ペプチドワクチンの長所（がん抗原エピトープのみ）およびテーラーメイド型の長所（２次免疫賦活）、ならびにタンパク質ワクチンの長所（ＨＬＡ非拘束）を有する世界最初の発明といえる。本発明のペプチドワクチンカクテル製剤は、設備の整った大病院のみならず、小規模の診療所でも投与できる。また、抗がん剤治療のような重篤な副作用も少なく、ＱＯＬが維持されるため、入院の必要がない。従って、手術療法、抗がん剤療法、放射線療法に続く第４のがんの治療法として有用である。また、作用機序が異なる治療法との併用療法などの可能性を有する。

ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＡ群（０．３ｍｇ／０．１５ｍＬ／ペプチド）の細胞性免疫能（ＣＴＬ）を示す。黒：症例番号１１０５、左下がり斜線：症例番号１１０６、右下がり斜線：症例番号１３０１、白：症例番号１４０１、格子柄：症例番号１４０２ ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＢ群（１ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチド）の細胞性免疫能（ＣＴＬ）を示す。黒：症例番号１１０１、左下がり斜線：症例番号１２０１、右下がり斜線：症例番号１２０２、白：症例番号１２０４、格子柄：症例番号１３０２、横線：症例番号１４０４ ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＣ群（３ｍｇ／１．５ｍＬ／ペプチド）の細胞性免疫能（ＣＴＬ）を示す。黒：症例番号１１０２、左下がり斜線：症例番号１１０３、右下がり斜線：症例番号１１０４、白：症例番号１１０７、格子柄：症例番号１３０３、横線：症例番号１４０３ ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＡ群（０．３ｍｇ／０．１５ｍＬ／ペプチド）の血清ＰＳＡ値の推移を示す。丸・実線：症例番号１１０５、四角・破線：症例番号１１０６、四角・実線：症例番号１３０１、三角・実線：症例番号１４０１、丸・破線：症例番号１４０２ ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＢ群（１ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチド）の血清ＰＳＡ値の推移を示す。丸・実線：症例番号１１０１、四角・実線：症例番号１２０１、丸・破線：症例番号１２０２、白四角・破線：症例番号１２０４、三角・実線：症例番号１３０２、黒四角・破線：症例番号１４０４ ＫＲＭ−２０第Ｉ相臨床試験におけるＣ群（３ｍｇ／１．５ｍＬ／ペプチド）の血清ＰＳＡ値の推移を示す。三角・破線：症例番号１１０２、丸・破線：症例番号１１０３、白菱形・実線：症例番号１１０４、丸・実線：症例番号１１０７、四角・破線：症例番号１３０３、黒菱形・実線：症例番号１４０３

１つの態様において、本発明は、がんを有する患者へ投与されるペプチドカクテルワクチンであって、該患者において有効な少なくとも２種類以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、ペプチドカクテルワクチンに関する。

一実施形態では、前記ペプチドカクテルワクチンは、前記ＣＴＬエピトープペプチドとして、Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、Ｌｃｋ−４８６（配列番号５）、ＥＧＦＲ−８００（配列番号６）、ＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）、Ｌｃｋ−２４６（配列番号８）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）、ＨＮＲＰＬ−１４０（配列番号１０）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）、ＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＰＳＭＡ−６２４（配列番号１７）、ＰＴＨｒＰ−１０２（配列番号１８）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）およびＬｃｋ−２０８（配列番号２０）からなる群から選択される、少なくとも２個以上のペプチドを含む。例えば、前記ペプチドカクテルワクチンは、Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、Ｌｃｋ−４８６（配列番号５）、ＥＧＦＲ−８００（配列番号６）、ＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）、Ｌｃｋ−２４６（配列番号８）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）、ＨＮＲＰＬ−１４０（配列番号１０）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）、ＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＰＳＭＡ−６２４（配列番号１７）、ＰＴＨｒＰ−１０２（配列番号１８）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）およびＬｃｋ−２０８（配列番号２０）を含む。

他の実施形態では、前記ペプチドカクテルワクチンは、ＰＡＰ−２４８（配列番号２１）、ＥＺＨ２−７３５（配列番号２２）、ＵＢＥ２Ｖ−８５（配列番号２３）、ＭＲＰ３−５０３（配列番号２４）、ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−５１１（配列番号２６）、ＳＡＲＴ３−３０９（配列番号２７）、ＨＮＲＰＬ−５０１（配列番号２８）、ＳＡＲＴ２−１６１（配列番号２９）、ｐｐＭＡＰｋｋｋ−４３２（配列番号３０）およびＬｃｋ−４２２（配列番号３１）からなる群から選択される少なくとも１個以上のペプチドをさらに含んでもよい。

別の実施形態では、前記ペプチドカクテルワクチンは、ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）およびＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）を含む。また別の実施形態では、前記ペプチドカクテルワクチンは、ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）およびＬｃｋ−２４６（配列番号８）を含む。さらに別の実施形態では、前記ペプチドカクテルワクチンは、ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）およびＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）を含む。

本発明者らは以前、ＣＴＬエピトープに対する抗体の陽性率が患者の予後と良い相関を示すことを見出した（Ｍａｓａｎｏｒｉ Ｎｏｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１０， ２９；１０（１２）を参照のこと）。これより、当該抗体に対する陽性率の高いペプチドを選択することで、治療効果の高いペプチドワクチンカクテルを作製できると考えた。従って、本発明のペプチドカクテルワクチンに用いられるペプチドは、患者の血液試料中の抗ペプチド抗体陽性率を指標に選別される。用いられる血液試料は、ペプチドワクチンによるがん治療の開始前に採取されたものであり、全血、血清および血漿が含まれる。血液試料は、当技術分野において知られる常套的方法によって調製することができる。

患者血液試料中の抗ペプチド抗体は、当技術分野において知られるいずれの方法により測定してもよい。測定方法としては、例えばＥＬＩＳＡ法（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ＭＫ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ２００６ Ａｐｒ ２０；３１１（１−２）：１９８−２０６． Ｅｐｕｂ ２００６ Ｍａｒ ６．）、ルミネックス法（Ｋｏｍａｔｓｕ Ｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ ６４， ５３５−５４６， ２００４）、ＲＩＡ法（Ｍａｒｕｔａ Ｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ． ２００６；３５（２）：１３７−４８．）が挙げられる。本発明では、ルミネックス法により測定することが好ましい。測定する抗ペプチド抗体のクラスはペプチドの種類にしたがい適宜決定されるが、通常ＩｇＧまたはＩｇＭである。

本発明のペプチドカクテルワクチンには、上述のように測定した抗ペプチド抗体の陽性率が高いペプチドが用いられる。好ましくは、抗ペプチドＩｇＧ１抗体陽性率が高いペプチドが用いられる。

ペプチドの選別に用いられるＩｇＧ１抗体は、主にＴヘルパー１細胞の指令下に産生される。この抗体は、がん免疫活性化において重要な役割を担うと考えられており、一般的には用いられていない。本発明のペプチドカクテルワクチンは、日本人の９８％以上をカバーすることができるＨＬＡ−Ａ２４、−Ａ２、−Ａ３ｓｕｐｅｒ ｔｙｐｅおよびＨＬＡ−Ａ２６結合ペプチドから構成される。そのため、本発明のペプチドカクテルワクチンは、それぞれのＨＬＡタイプに拘束性の細胞傷害Ｔ細胞を誘導することが明らかにされ、かつ以下の実施例に記載されるように、臨床試験において安全性が証明され、生体内での特異的免疫応答を誘導できることが確認されている。従って、本発明のペプチドカクテルワクチンは、ペプチドワクチンの長所（がん抗原エピトープのみ）、テーラーメイド型の長所（２次免疫賦活）およびタンパク質ワクチンの長所（ＨＬＡ非拘束）を有する。

抗ペプチド抗体陽性率は、がんの種類によって異なる。すなわち、ある種類のがんに対するペプチドカクテルワクチンに用いるペプチドから除かれたペプチドであっても、他の種類のがんの患者における抗ペプチド抗体陽性率が高ければ、当該他の種類のがんに対する本発明のペプチドカクテルワクチンに用いることができる。

さらに本発明において、ペプチドカクテルワクチンに含まれる上述のＣＴＬエピトープペプチドは、それらの変異体も包含する。変異体は、例えば上記のうちの１つのアミノ酸配列において、１個〜数個、例えば２、３または４個のアミノ酸が、置換、欠失または付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであってもよい。あるいは、上述のペプチドを構成するアミノ酸のいずれかが適宜修飾されたものであってもよい。アミノ酸残基の修飾は、公知の方法にて実施することができる。これらの変異体および修飾体は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）に認識されるものである限り、本発明のペプチドカクテルワクチンに含まれるペプチドに含まれ得る。

本発明のペプチドカクテルワクチンは、２〜１４日に１回、例えば３〜１２日に１回、５〜１０日に１回または１週間に１回投与される。本発明のペプチドカクテルワクチンの１回あたりの投与量は、０．２〜１０ｍｇ／ペプチド、例えば０．３〜８ｍｇ／ペプチド、０．３〜５ｍｇ／ペプチド、０．３〜４ｍｇ／ペプチド、０．３〜３ｍｇ／ペプチド、０．３〜２．５ｍｇ／ペプチド、０．３〜２ｍｇ／ペプチド、０．３〜１．５ｍｇ／ペプチド、０．５〜５ｍｇ／ペプチド、０．５〜４ｍｇ／ペプチド、０．５〜３ｍｇ／ペプチド、０．５〜２．５ｍｇ／ペプチド、０．５〜２ｍｇ／ペプチド、０．５〜１．５ｍｇ／ペプチド、１〜３ｍｇ／ペプチド、１〜２．５ｍｇ／ペプチド、１〜２ｍｇ／ペプチドまたは１〜１．５ｍｇ／ペプチドである。なお、投与頻度、投与回数および投与量などは、疾患の種類、投与される患者の状態などの条件に応じて適宜選択できる。

他の態様において、本発明は、本発明のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。他の態様において、本発明は、本発明のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防する方法を提供する。前記のがんを予防する方法は、がんの再発を予防する方法であってもよい。この場合、手術後の微少残存病変を治療標的としてもよい。

さらなる態様において、本発明は、がんの治療における使用のための、本発明のペプチドカクテルワクチンに関する。あるいは、本発明は、がんの予防における使用のための、本発明のペプチドカクテルワクチンに関する。

別の態様において、本発明は、がんを治療するための医薬の製造のための、本発明のペプチドカクテルワクチンの使用に関する。あるいは、がんを予防するための医薬の製造のための、本発明のペプチドカクテルワクチンの使用に関する。

さらに、本発明は、がんを治療するための本発明のペプチドカクテルワクチンの製造のための、上述のＣＴＬエピトープペプチドまたはそれらの変異体もしくは修飾体の使用に関する。あるいは、本発明は、がんを予防するための本発明のペプチドカクテルワクチンの製造のための、上述のＣＴＬエピトープペプチドまたはそれらの変異体もしくは修飾体の使用に関する。

またさらに、本発明は、がんを治療するための、本発明のペプチドカクテルワクチンを含有する医薬組成物に関する。あるいは、本発明は、がんを予防するための、本発明のペプチドカクテルワクチンを含有する医薬組成物に関する。このような医薬組成物は、医薬上許容される担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでもよい。本発明の医薬組成物に含まれるペプチドカクテルワクチンの量および各ＣＴＬエピトープペプチドの量、医薬組成物の剤形、投与頻度などは、がんの種類、投与される対象の状態、標的部位などの条件に応じて適宜選択できる。

さらなる態様において、本発明は、上述のペプチドカクテルワクチンを製造するための方法に関する。また、それらを含む医薬組成物を製造するための方法に関する。

本発明において、上述のペプチドカクテルワクチンは、不完全フロイントアジュバントあるいはその他のアジュバントと、混合または混合・乳化されるものであってもよい。

本発明において、治療または予防の対象であるがんはいずれのがんであってもよい。また、標準治療法抵抗性の進行がんなどの高度進行がんであってもよい。例えば、食道がん、胃がん、十二指腸がん、大腸がん、小腸がん、肝臓がん、胆嚢がん、胆管がん、膵臓がんなどの消化器がん、非小細胞肺がんなどの肺がん、乳がん、胚細胞がん、皮膚がん、膀胱がん、尿路上皮がん、前立腺がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、内分泌がん、頭頸部がん、神経膠腫などの脳腫瘍、胸腺がん、血液腫瘍あるいは肉腫である。好ましくは、消化器がん、乳がんあるいは前立腺がんである。特に、スキルス胃がんを含む標準治療抵抗性胃がん、エストロジェン受容体（ＥＲ）陰性、プロゲステロン受容体（ＰｇＲ）陰性かつＨＥＲ２陰性であるトリプルネガティブ（ＴＮ）乳がん、あるいは去勢抵抗性前立腺がんである。

本発明のペプチドカクテルワクチンの投与方法は、がんの種類、投与される対象の状態、および／または標的部位などの条件に応じて適宜選択することができる。当該方法としては、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経鼻投与、経口投与、経肺投与、座剤などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、本発明のペプチドカクテルワクチンの投与方法は皮下投与である。

本発明のペプチドカクテルワクチンは、汎ＨＬＡ型対応ペプチドカクテルワクチンである。本発明のペプチドカクテルワクチンはまた、少なくとも日本人の９８％以上のＨＬＡ型に適合しうる。従って、本発明のペプチドカクテルワクチンが投与される患者は、ペプチドカクテルワクチンの投与前および／または投与後に、そのＨＬＡ型が確認されていても、されていなくてもよい。一実施形態では、患者は７種類の異なるＨＬＡ−クラスＩ分子（ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ３１およびＨＬＡ−Ａ３３）のいずれかに陽性である。しかしながら、この場合であっても、患者がどのＨＬＡ型であるかを事前に確認することを要しない。

以下に、本発明をさらに具体的に説明する。なお、実施例により本発明をさらに詳細に述べるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

１．混合ペプチド製剤（ペプチドカクテルワクチン）に用いるペプチドの選択
７種類の異なるＨＬＡクラスＩ分子のいずれかに陽性である患者において有効な、汎ＨＬＡ型対応混合ペプチド製剤を作製するため、候補となるペプチドを選択した。候補ペプチドは、複数のＨＬＡ型に対応する３１種類のＣＴＬエピトープペプチドの中から選択された。これらの３１種類のペプチドを、以下の表に示す。

１−１．乳がん、胃がんおよび前立腺がんにおける抗体陽性率
上述の３１種類のペプチドについて、乳がん、胃がんまたは前立腺がんを患っている１０２名の患者の末梢血における抗ペプチドＩｇＧ１抗体陽性率を調べた。結果を以下の表に示す。

表２−１〜表２−６において、数値が太字で示されている場合、当該がんにおいて当該ペプチドが陽性であることを示す。「陽性率」の欄が太字であるペプチドは、調査した１０２名のがん患者末梢血における陽性率の高いものであり、後述の実施例で用いるペプチドとして選択された。７種類のペプチド（ＳＡＲＴ２−９３、ＳＡＲＴ３−５１１、ＳＡＲＴ３−３０９、ＨＮＲＰＬ−５０１、ＳＡＲＴ２−１６１、ｐｐＭＡＰｋｋｋ−４３２、およびＬｃｋ−４２２）は、カクテルワクチンとしての製剤上、問題があったため、後述の実施例で用いる候補からは削除された。また、乳がん、胃がんおよび前立腺がん患者における抗ペプチドＩｇＧ１抗体陽性率が相対的に低い（６〜３６％）４種類のペプチド（ＰＡＰ−２４８、ＥＺＨ２−７３５、ＵＢＥ２Ｖ−８５、およびＭＲＰ３−５０３）も、後述の実施例で用いる候補からは削除された。これら１１種類を除いた２０種類（Ｌｃｋ−４８８、ＳＡＲＴ３−７３４、Ｌｃｋ−９０、ＷＨＳＣ２−１０３、ＰＳＡ−２４８、Ｌｃｋ−４８６、ＥＧＦＲ−８００、ＷＨＳＣ２−１４１、Ｌｃｋ−２４６、ＰＡＰ−２１３、ＨＮＲＰＬ−１４０、ＳＡＲＴ３−１０９、ＭＲＰ３−１２９３、ＵＢＥ２Ｖ−４３、ＳＡＲＴ３−３０２、Ｌｃｋ−４４９、ＰＳＭＡ−６２４、ＰＴＨｒＰ−１０２、ＣｙｐＢ−１２９、Ｌｃｋ−２０８）を、胃がん、乳がんおよび前立腺がんに対するペプチドカクテルワクチンに用いるペプチドとして選別した。

１−２．がん種別の抗体陽性率
がん種によって選ばれるペプチドの種類が同じであるかを検討するため、上述の結果（表２−１〜表２−６）をがん種別に分類した。結果を以下の表に示す。表３−１〜表３−３は乳がん、表４−１〜表４−３は胃がんについての結果を示す。

乳がん患者のみの結果（表３−１〜表３−３）から選択されるペプチドでは、上位２０番目のペプチドが、Ｌｃｋ−２０８ではなくＰＡＰ−２４８であった（表３−２）。すなわち、乳がん患者においては、Ｌｃｋ−２０８の代わりにＰＡＰ−２４８を用いることができることが示された。その他のペプチドは、３種のがん（乳がん、胃がんおよび前立腺がん）をまとめて解析した結果に基づいて選ばれたペプチド（表２−１〜表２−６）と共通していることがわかった。胃がん患者のみの結果（表４−１〜表４−３）からは、３種のがんをまとめて解析した結果と同じペプチドが選択された。同様に、前立腺がん患者の結果からも、３種のがんをまとめて解析した結果と同じペプチドが選択されることがわかった。

また、それぞれの患者のＨＬＡタイプが該当するペプチド（表３−１〜表４−３において、数値が太字で示されている部分）に絞って解析しても、同様のペプチドが選択されることがわかった。さらに乳がんにおけるＴＮ症例（７例）および胃がんにおけるスキルス胃がん症例（１２例）でも同様のペプチドが選択されることがわかった。

以上の結果から、配列番号１から２０のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドが、本発明の製剤に好適であることが示された。これらのペプチド、および乳がんの結果で上位２０番目であったＰＡＰ−２４８について、由来するタンパク質名、タンパク質の一次構造における位置、アミノ酸配列、結合するＨＬＡタイプ、各がん種における抗体陽性率を以下の表にまとめる。

１．ペプチドカクテルのラット単回皮下投与毒性試験
次に、候補ペプチドをカクテルにした場合の急性毒性を、ラットを用いた単回皮下投与毒性試験（ボゾリサーチセンター：試験番号Ｎ−Ｂ４８１， Ｎ−Ｂ４８２）によって調査し、安全性を確認した。
１−１．ペプチドカクテルの調製
用いたペプチドは、以下の表の通りである。それぞれ０．５および５ｍｇ／ｋｇ／日を６週齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ＳＰＦラット（１群雄雌各５匹）に単回皮下投与し、毒性を検討した。なお、比較対象として、生理食塩液を同様に投与する生食対照群と、生理食塩液と７％炭酸水素ナトリウム注射液とを１：１で混合したものを同様に投与する媒体対照群の２群を設けた。

１−２．結果
雌雄ともに死亡動物は見られず、最小致死量は５ｍｇ／ｋｇを上回った。また、雌雄ともに一般状態、体重推移に異常は見られなかった。さらに、剖検によって確認したところ、雌雄ともに投与部位ならびにいずれの器官および組織にも異常は見られなかった。これらの結果から、がんペプチド１０種カクテルおよびがんペプチド１６種カクテルを、ヒトにおける最大投与予定量の１００倍に相当する５ｍｇ／ｋｇ／日でラットに単回皮下投与しても、何ら毒性兆候は認められないことが示された。

１．ペプチドの溶解順番の検討
２０種類のペプチド（配列番号１〜２０）のうち、以下の表に示すペプチドは７％炭酸水素ナトリウム注射液に順次溶解する場合、溶解する順番によって不溶化物が認められた。そのため、溶解する順番を検討した。結果、溶解する順番を以下のように変更することによって溶解性を改善することができた。

１．ペプチド混合溶液を用いたＣＴＬ誘導実験
１−１．混合ペプチドの調製
以下の表に示す混合ペプチド１〜３を用いて、ＣＴＬ誘導実験を行った。各ペプチドをそれぞれ５０ｍｇ／ｍＬに調製し、同量を混合することにより、混合ペプチドを作製した。

１−２．ペプチドによる末梢単核球（ＰＢＭＣ）の刺激
ＨＬＡ−Ａ２／Ａ２４陽性である検体番号Ｐｔ．２から末梢血を採取し、常法によってＰＢＭＣを得た。得られたＰＢＭＣを、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＭｉｘ１〜３のいずれか、または各混交物に含まれるいずれかのシングルペプチドで刺激した。得られたペプチド刺激ＰＢＭＣを、ＰＢＭＣへのペプチド刺激に用いた混合ペプチドに含まれるシングルペプチド、また刺激に用いたシングルペプチドと同一のペプチドをパルスした標的細胞と共に培養した。産生されるＩＦＮ−γを測定し、ＣＴＬ誘導の指標とした。

詳細には、ＰＢＭＣを１ｘ１０^６細胞／ｍＬとなるように、ＲＰＭＩ１６４０培養液（１０％ＦＣＳ含有）に浮遊させた。２０μｇ／ｍＬのペプチド濃度を有するように、Ｍｉｘ１〜３溶液を調製した。９６ウェルＵ底プレートに、浮遊したＰＢＭＣを１００μＬ採取し、調製したＭｉｘ１〜３溶液を、それぞれ１００μＬ／ウェルで添加した。各検体のＨＬＡのシングルペプチドについても同様に調製し、それぞれ１００μＬ／ウェルで添加した。次いで、ＣＯ_２インキュベーター（５％ＣＯ_２）にて３７℃で培養した。培養開始から３日目、６日目、８日目、１０日目に、以下の手順で培養上清の交換を行った。まずウェル中の培養上清を、１００μＬだけ残るように吸引廃棄した。次に、上述のように調製したＭｉｘ１〜３およびシングルペプチドを、それぞれ１００μＬ／ウェルで添加した。培養開始から１３日目に、ウェル中の培養上清を、１００μＬだけ残るように吸引廃棄し、次いで、新しい培養液を１００μＬ添加した。

培養開始から１４日目に、標的細胞に活性化Ｔ細胞を加えた。ＨＬＡ−Ａ２の場合は、ＰＢＭＣへのペプチド刺激に用いたものと同じペプチドをパルスしたＴ２細胞を、標的細胞として用いた。ＨＬＡ−Ａ２４の場合は、ＰＢＭＣへのペプチド刺激に用いたものと同じペプチドをパルスしたＣ１Ｒ−Ａ２４細胞を、標的細胞として用いた。対照として、ＨＩＶペプチド（対照ペプチド）でパルスした標的細胞を用いた。活性化Ｔ細胞は、上述の通りに刺激したＰＢＭＣのうちＴ細胞が活性化した細胞である。まず、標的細胞を２ｘ１０^５細胞／ｍＬとなるように、ＲＰＭＩ１６４０培養液（１０％ＦＣＳ含有）に浮遊させた。ペプチド溶液を、ペプチド濃度が４０μｇ／ｍＬとなるように、ＲＰＭＩ１６４０培養液（１０％ＦＣＳ含有）を用いて調製した。９６ウェル平底プレートの各ウェルに、標的細胞を５０μＬ／ウェルの密度で加えた。調製したペプチド溶液を１ウェル当たり５０μＬ添加した。その後、２時間以上培養した。次に、上述の通り培養したＰＢＭＣを遠心分離に供した。沈んでいるＰＢＭＣを吸引しないように、培養上清を吸引廃棄し、ＲＰＭＩ１６４０培養液（１０％ＦＣＳ含有）を適量添加した。１５００ｒｐｍで５分間遠心分離に供した。再度、沈んでいる細胞を吸引しないように上清を吸引廃棄し、全量が２２０μＬ／ウェルになるようにＲＰＭＩ１６４０培養液（１０％ＦＣＳ含有）を加えた。培養した標的細胞に、前述の通り調製したＰＢＭＣを１００μＬ添加した。シングルペプチドで培養したものはそのペプチドを提示した標的細胞と、Ｍｉｘ１〜３で培養したものは、それぞれに含まれる５種類の各シングルペプチドを提示した標的細胞と混合した。１６〜１８時間インキュベートした。培養開始から１５日目に、ＨＴＳにてＥＬＩＳＡを実施した。

結果を以下の表に示す。ＨＬＡ−Ａ２／Ａ２４陽性である検体番号Ｐｔ．２由来の末梢血を用いた測定で、３種類のペプチド（ＳＡＲＴ２−９３、ＵＢＥ２Ｖ−４３、ＳＡＲＴ３−３０２）において、ＩＦＮ−γのネット値が５０ｐｇ／ｍＬ以上であり、危険率５％以下を有意とした場合に有意差が認められた。なお、上記「ネット値」とは、バックグラウンドを差し引いた蛍光強度で表される測定値である。また、Ｍｉｘ１で刺激したウェルではＳＡＲＴ２−９３とＬｃｋ−４８８、Ｍｉｘ２で刺激したウェルではＬｃｋ−２４６、Ｍｉｘ３で刺激したウェルではＳＡＲＴ３−７３４とＬｃｋ９０で、それぞれ有意なＣＴＬ活性が誘導された。以上のことから、複数のペプチドの混合物を加えて培養してもペプチド特異的ＣＴＬの誘導が認められることがわかった。さらに、単独のペプチドを加えて培養する場合と複数のペプチドの混合物を加えて培養した場合とでは、誘導されるＣＴＬのペプチド特異性に違いがあることがわかった。

１．２０種類ペプチドを混合した混合ペプチドワクチン（ＫＲＭ−２０）を用いた去勢抵抗性再燃前立腺がん患者に対する第Ｉ相ワクチン臨床試験
配列番号１から２０のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドを含有する混合２０ペプチドワクチン（ＫＲＭ−２０）の去勢抵抗再燃前立腺がん（ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ：ＣＲＰＣ）に対する最小免疫効果用量（ＭＩＥＤ）、安全性、免疫応答、および予備的な抗腫瘍効果を調べるために、臨床試験を行った。ＫＲＭ−２０は、配列番号１から２０のいずれかのアミノ酸配列を有するペプチドを生理食塩水に溶解した溶液と、これら２０種類のペプチドを７％炭酸水素ナトリウム溶液に溶解した溶液を、１：１の割合で混合した混合ペプチドワクチン製剤である。
１−１．方法
無作為に割り当てられた３群（Ａ〜Ｃ群）の患者に対して、３種類の異なる用量のＫＲＭ−２０をそれぞれ１週間に１回、計６回投与した。６回目の投与から１週間後に、ペプチド特異的細胞傷害性Ｔ細胞および抗体（ＩｇＧ）を測定することにより、免疫応答を解析した。各群の投与量は以下の表の通りである。

臨床試験に登録した１７例の患者の背景は以下の表の通りである。

ＰＳ：全身状態（Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｔｕｓ）、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐの分類に従って記載した。
ＳＣ：スクリーニング
ＰＳＡ：前立腺特異抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）
ＣＲ：完全奏効（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、血清ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以下に下降し、前立腺生検にてがん病巣が検出されず、がんに関連した症状を認めない場合を指す。
ＰＲ：部分奏効（ｐａｒｔｉａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、血清ＰＳＡ値が５０％以上下降したものの４ｎｇ／ｍＬ以下には下降しなかった場合、もしくは血清ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以下に下降したものの生検でがん細胞を認める場合を指す。
ＮＣ：変化無し（Ｎｏ Ｃｈａｎｇｅ）、血清ＰＳＡ値が５０％未満の改善か２５％未満の増悪を呈した場合を指す。
ＰＤ：進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、血清ＰＳＡ値が２５％以上の増悪を呈した場合、もしくは推定腫瘍体積の２５％あるいはそれ以上の増加が見られた場合、または同等の新しい病変が生じた場合を指す。
臨床試験を中止した２例（症例番号：１２０４および１１０３）で見られた有害事象は、いずれもＫＲＭ−２０投与との関連はないと考えられた。

１−２．結果
１−２−１．有害事象およびＰＳＡ値
臨床試験を実施した１７名の患者において、ワクチン投与に関連する重篤な有害事象は認められなかった。最も一般的なワクチン投与に関連する有害事象としては、投与箇所におけるグレード１の皮膚炎症反応（７６．５％）、グレード２のアミノトランスフェラーゼの上昇（５．９％）、およびグレード２の皮膚感染（５．９％）であった。３名の患者で血清ＰＳＡ値の減少が観察された。

１−２−２．液性免疫能（抗体価）の増強
第Ｉ相臨床試験において臨床試験を中止した２名を除く１５名の患者について免疫応答を解析した。ＫＲＭ−２０に含まれる各ペプチドに対する抗ペプチド抗体価の推移を、以下の表に示す。太字で表した数値は、投与開始時の抗体価に比べて２倍以上の値が得られている数値であり、「増強」と判定した。「増強」と判定された結果を示すペプチドを、「増強ペプチド」とする。増強ペプチドのうち、被験者のＨＬＡ型に相当するペプチド（太字、斜体）の数を、増強ペプチド数として最下段に示した。ＫＲＭ−２０の表示欄は各ペプチド抗体価の総和である。

１０例（６６．７％）でＣＴＬの上昇が、１１例（７３．３％）でＩｇＧの上昇が観察された。線形回帰モデル（ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ）による計算の結果、ＣＴＬ応答におけるＫＲＭ−２０のＭＩＥＤは０．８ｍｇ／ペプチドであり、ＫＲＭ−２０の推奨用量は１ｍｇ／ペプチドであった。増強ペプチドを１つでも有している患者は、０．３ｍｇ投与群では４／５（４／５、括弧内は投与完了症例）例、１ｍｇ投与群では３／６（２／５）例、３ｍｇ投与群では５／６（５／５）例であった。

カクテルワクチンを１ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチドおよび３ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチドで６回投与した後、抗体価が２倍以上上昇した患者の割合を、テーラーメイドタイプのワクチン投与と比較した。結果を以下の表に示す。ほとんどのペプチドで抗体価の上昇する患者の割合が増加していた。ＰＴＨｒＰ−１０２のみテーラーメイドタイプの方の割合が高かった。このことから、カクテルワクチンの方がテーラーメイドタイプのワクチンと比べて抗体産生応答が早くおこることが示された。

１−２−３．細胞性免疫能（ＣＴＬ）の増強
細胞性免疫能（ＣＴＬ）の賦活化作用について、表１６〜１８および図１〜３に示した。

以上の抗体価とＣＴＬの増強の成績からロジスティック解析を行い、免疫学的最小免疫反応有効量は液性免疫（抗体価）および細胞性免疫（ＣＴＬ）でそれぞれ０．２７ｍｇおよび０．８０ｍｇと算出された。

カクテルワクチンを１ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチドまたは３ｍｇ／０．５ｍＬ／ペプチドで４回または６回投与した後、ＥＬＩＳＰＯＴで測定したＣＴＬ値が２倍以上上昇した患者の割合を、テーラーメイドタイプのワクチン投与と比較した。結果を以下の表に示す。ＣｙｐＢ−１２９、ＰＡＰ−２４８、ＷＨＳＣ２−１０３、ＷＨＳＣ２−１４１など一部のペプチドでは、投与回数４回でもＣＴＬ値の上昇を示す患者の割合が増加していた。このことから、カクテルワクチンの方がテーラーメイドタイプのワクチンと比べてＣＴＬ誘導が早くおこることが示された。

１−２−３．ＰＳＡの推移
ＰＳＡの推移を図４〜６に示す。低用量群の０．３ｍｇ投与群では投与前の上昇カーブとほぼ同じ様に推移した。１ｍｇ投与群では１例で５０％以上の減少（ＰＲ症例）を示し、更に１例は基準値内まで回復（ＣＲ症例）した。３ｍｇ投与群では２例でＰＳＡの減少が見られたが、ＮＣ判定であった。以上のことから、ＰＳＡに対する効果から考えると、１ｍｇ程度の投与量で十分であることがわかった。

本発明によれば、がん治療において、患者のＨＬＡタイプに依存せずに用いることができるペプチド製剤の提供が可能になる。これは、従来から行われている能動免疫療法およびＰＰＶ療法の有する短所を克服するものである。本発明は、ＴＮを含む標準治療抵抗性乳がん患者、スキルス胃がんを含む進行・再発胃がん患者、および前立腺がんなどのがんの治療において利用可能である。

Claims (11)

1. がんを有する患者へ投与されるペプチドカクテルワクチンであって、
   該患者において有効な少なくとも２種類以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、
   ペプチドカクテルワクチン。
2. Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、Ｌｃｋ−４８６（配列番号５）、ＥＧＦＲ−８００（配列番号６）、ＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）、Ｌｃｋ−２４６（配列番号８）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）、ＨＮＲＰＬ−１４０（配列番号１０）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）、ＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＰＳＭＡ−６２４（配列番号１７）、ＰＴＨｒＰ−１０２（配列番号１８）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）およびＬｃｋ−２０８（配列番号２０）からなる群から選択される少なくとも２個以上のＣＴＬエピトープペプチドを含む、請求項１に記載のペプチドカクテルワクチン。
3. ＰＡＰ−２４８（配列番号２１）、ＥＺＨ２−７３５（配列番号２２）、ＵＢＥ２Ｖ−８５（配列番号２３）、ＭＲＰ３−５０３（配列番号２４）、ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−５１１（配列番号２６）、ＳＡＲＴ３−３０９（配列番号２７）、ＨＮＲＰＬ−５０１（配列番号２８）、ＳＡＲＴ２−１６１（配列番号２９）、ｐｐＭＡＰｋｋｋ−４３２（配列番号３０）およびＬｃｋ−４２２（配列番号３１）からなる群から選択される少なくとも１個以上のＣＴＬエピトープペプチドをさらに含む、請求項２に記載のペプチドカクテルワクチン。
4. ＳＡＲＴ２−９３（配列番号２５）、ＳＡＲＴ３−１０９（配列番号１１）、Ｌｃｋ−４８８（配列番号１）、ＰＡＰ−２１３（配列番号９）およびＵＢＥ２Ｖ−４３（配列番号１４）を含む、請求項２に記載のペプチドカクテルワクチン。
5. ＰＳＡ−２４８（配列番号４）、ＣｙｐＢ−１２９（配列番号１９）、ＷＨＳＣ２−１０３（配列番号１２）、ＳＡＲＴ３−３０２（配列番号１５）およびＬｃｋ−２４６（配列番号８）を含む、請求項１に記載のペプチドカクテルワクチン。
6. ＳＡＲＴ３−７３４（配列番号２）、Ｌｃｋ−９０（配列番号３）、Ｌｃｋ−４４９（配列番号１６）、ＭＲＰ３−１２９３（配列番号１３）およびＷＨＳＣ２−１４１（配列番号７）を含む、請求項１に記載のペプチドカクテルワクチン。
7. 請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療するための方法。
8. 請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防するための方法。
9. ５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドカクテルワクチン。
10. ５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを治療するための方法。
11. ５〜１０日に１回、０．５〜３ｍｇ／ペプチド／回の投与量で請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドカクテルワクチンを投与することを含む、がんを予防するための方法。

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