JPH10511639A

JPH10511639A - 腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原を含有する組成物ならびにアジュバント及び／又は成長因子

Info

Publication number: JPH10511639A
Application number: JP8512031A
Authority: JP
Inventors: ファン・デア・ブルッゲン，ピエール; ブーン−ファラー，ティエリー; ファン・デン・エインデ，ベノイト
Original assignee: ルードヴィッヒ・インスティテュート・フォア・キャンサー・リサーチ
Priority date: 1994-09-30
Filing date: 1995-09-27
Publication date: 1998-11-10
Also published as: ZA958229B; CA2201327A1; AU3886495A; CN1159759A; WO1996010413A1; AU690371B2; EP0782453A1

Abstract

(57)【要約】改良された免疫源的効果を備えた組成物が開示される。これら組成物は、ＭＨＣ，ＨＬＣ又はＢ細胞レセプタと複合化されたとき、免疫応答を誘発する単数または複数種のペプチドを含有している。これら組成物は、免疫応答を強化させる、サポニン等のアジュバントを含有している。特に好適であるのは、ＭＡＧＥ，ＢＡＧＥ及びＧＡＧＥ誘導ペプチドを含む、腫瘍拒絶抗原前駆体から誘導されるペプチド等の、ＭＨＣ結合のための基準を満たすペプチド等の、細胞障害性Ｔ細胞応答を刺激する組成物である。

Description

【発明の詳細な説明】腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原を含有する組成物ならびにアジュバント及び／又は成長因子関連出願本出願は、それぞれ、複合化腫瘍拒絶抗原およびＭＨＣ／ＨＬＡ分子の存在下における細胞障害性Ｔ細胞の刺激を記載する下記の出願、即ち、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４（米国を指定）、１９９２年８月３１日出願の出願番号第９３８，３３４号、１９９３年１月２２日出願の出願番号第００８，４４６号、１９９３年４月２８日出願の出願番号第５４，７１４号、１９９４年２月２８日出願の出願番号２０３，０５４号、１９９４年２月１４日出願の出願番号第１９５，１８６号、１９９４年２月１５日出願の出願番号第１９６，６３０号、１９９３年３月１８日出願の出願番号第３２，９７８号、いずれも１９９４年３月２４日出願の出願番号第２１７，１８６号、第２１７，１８７号および第２１７，１８８号、１９９４年４月１日出願の出願番号第１９０，４１１号、および１９９４年６月３日出願の出願番号第２５３，５０３号、の一部継続である。発明の分野本発明は、腫瘍拒絶抗原前駆体（”ＴＲＡＰｓ”）及び腫瘍拒絶抗原（”ＴＲＡｓ”）と称されるクラスの分子に対する免疫応答の発生に有効な組成物に関する。免疫応答には、とりわけ、ＴＲＡＰｓとＴＲＡｓに対する抗体と、ＴＲＡと主要組織適合抗原分子（”ＭＨＣｓ”）に対して特異的なＴ細胞との産生が含まれる。このようなＴ細胞および抗原は、例えば、マウス、ラット、ラビット、羊、山羊その他のヒト以外の動物内において産生可能であり、腫瘍を同定する診断方法に利用可能である。前記組成物は、更に、癌状態または、メラノーマや形成異常母斑などの細胞形質転換が発生した状態を有する対象体に対する、腫瘍、癌細胞および形質転換細胞に対する免疫応答を誘発させるための投与によって、治療用にも使用可能である。背景および従来技術宿主細胞による癌細胞の認識または認識の欠如の研究は、数多くの方向で行われてきた。この分野の理解には、基礎免疫学と腫瘍学との両方についてのいくらか理解していることが前提となる。マウス腫瘍に関する初期の研究によって、これらの腫瘍が同系の動物に移植された時に腫瘍細胞の拒絶に導く分子を示すことが判った。これらの分子は、受容側の動物のＴ細胞によって「認識」され、移植された細胞の溶解を伴う細胞溶解Ｔ細胞応答を誘発する。その最初の証拠は、メチルコラントレン等の化学的発癌物質によって誘発された腫瘍によって得られた。腫瘍によって発現されＴ細胞応答を導出する抗原は、腫瘍によって異なることが判った。化学的発癌物質による腫瘍の誘発と細胞表面抗原の相違に関する一般的教示内容に関してはプレーン（Ｐｒｅｈｎ）他，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．１８：７６９〜７７８（１９５７）；クライン（Ｋｌｅｉｎ）他，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２０：１５６１〜１５７２（１９６０）；グロス（Ｇｒｏｓｓ），ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．３：３２６〜３３３（１９４３），ベイソンブリオ（Ｂａｓｏｍｂｒｉｏ），ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．３０：２４５８〜２４６２（１９７０）を参照。この種の抗原は、「腫瘍特異性移植抗原」即ち”ＴＳＴＡｓ”として知られるようになった。化学的発癌物質によって誘発された時におけるそのような抗原の発現が観察された後、腫瘍が生体外で紫外線照射によつて誘発された場合にも類似の結果が得られた。クリプケ（Ｋｒｉｐｋｅ），Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．５３：３３３〜１３３６（１９７４）参照。上述のタイプの腫瘍に関してはＴ細胞を介した免疫応答が観察されたが、一方、自然発生性腫瘍は一般的に非−免疫原性であると教示された。従って、これらは、腫瘍を有する対象体の腫瘍に対する反応を誘発する抗原を提示するものではないと考えられた。ヒューイット（Ｈｅｗｉｔｔ）他，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ３３：２４１〜２５９（１９７６）参照。ここに参考文献としてその開示内容を添付するブーン（Ｂｏｏｎ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５２：１１８４〜１１９３（１９８０）に記載されているように、ｔｕｍ^-抗原提示細胞系のファミリは、マウス腫瘍細胞または細胞系の突然変異によって得られる免疫原性変異体である。詳述すると、ｔｕｍ^-抗原は、同系のマウス中において免疫応答を起こさず腫瘍を形成する腫瘍細胞（即ち、”ｔｕｍ⁺”細胞）を突然変異させることによって得られる。これらのｔｕｍ⁺細胞が突然変異された時、これらは同系マウスによって拒絶され、腫瘍を形成することが出来ない（従って、”ｔｕｍ^-”）。ここにその開示内容を参考文献として添付するブーン（Ｂｏｏｎ）他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７４：２７２（１９７７）参照。これまで多くのタイプの腫瘍がこの現象を示すことが証明されている。例えば、フロスト（Ｆｒｏｓｔ）他，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４３：１２５（１９８３）参照。ｔｕｍ^-変異体は、免疫拒絶システムを導出させるので進行性腫瘍を形成することが出来ないと考えられる。この仮説を支持する証拠として、ファン・ペル（ＶａｎＰｅｌ）他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７６：５２８２〜５２８５（１９７９）による、通常は腫瘍を形成することがない”ｔｕｍ^-”変異体が、致死下の照射によってその免疫システムを抑制した場合に、マウス内において腫瘍を形成することが出来るという観察、および肥満細胞腫Ｐ８１５の腹膜注入ｔｕｍ^-細胞が１２〜１５日間指数関数的に増殖し、その後、リンパ球とマクロファージの導入によって僅か数日中に除去されるという観察（ウィッテンホーヴ（Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５２：１１７５〜１１８３（１９８０））等がある。更に別の証拠として、マウスが、後に免疫抑制的な量の照射を受けて細胞が攻撃されても、その後の同じｔｕｍ^- 変異体に対する攻撃に耐えることが出来る免疫記憶を得るという観察がある（ブーン（Ｂｏｏｎ）他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７４：２７２〜２７５（１９７７）；前述のファン・ペル（ＶａｎＰｅｌ）他；前述のウィッテンホーヴ（Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ）他）。その後の研究によって、自然発生性腫瘍が突然変異を受けた時に、免疫原性変異体を産生し、これが反応を起こすことが判った。事実、これらの変異体は、元の腫瘍に対する免疫防御反応を導出することが出来た。ファン・ペル（ＶａｎＰｅｌ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５７：１９９２〜２００１（１９８３）参照。従って、同系拒絶反応の標的である腫瘍において、いわゆる”腫瘍拒絶抗原”の提示を導出することが可能であることが示された。異質の遺伝子が自然発生性腫瘍にトランスフェクションされた場合にも類似の結果が得られた。この点に関しては、フィアソン（Ｆｅａｒｓｏｎ）他，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４８：２９７５〜１９８０（１９８８）を参照。腫瘍細胞の表面に提示され、細胞障害Ｔ細胞に認識され溶解を起こす１つのクラスの抗原が認識された。この類の抗原を、以下、”腫瘍拒絶抗原”即ち”ＴＲＡ（ｓ）”という。ＴＲＡｓには、抗原反応を導出するものもあるし導出しないものもある。これらの抗原は、これまで、生体外での細胞溶解Ｔ細胞特性研究、即ち、特定の細胞溶解Ｔ細胞（以下、ＣＴＬ）サブセットによる抗原の同定の研究、を通じて行われてきた。このサブセットは、提示された腫瘍拒絶抗原の認識後に増殖し、そしてその抗原を発現している細胞が溶解される。特性研究によって、前記抗原を発現する細胞を特異的に溶解するＣＴＬクローンが同定された。この研究の具体例としては、レヴィ（Ｌｅｖｙ）他，Ａｄｖ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２４：１〜５９（１９７７）；ブーン（Ｂｏｏｎ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５２：１１８４〜１１９３（１９８０）；ブルナー（Ｂｒｕｎｎｅｒ）他，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２４：１６２７〜１６３４（１９８０）；マリャンスキー（Ｍａｒｙａｎｓｋｉ）他，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２４：１６２７〜１６３４（１９８０）：マリャンスキー（Ｍａｒｙａｎｓｋｉ）他，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４０６〜４１２（１９８２）；パラディーノ（Ｐａｌｌａｄｉｎｏ）他，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：５０７４〜５０７９（１９８７）が挙げられる。このタイプの分析は、マイナー組織適合性抗原、雄特異的Ｈ−Ｙ抗原、”ｔｕｍ^-”抗原と称さるここに記載のクラスの抗原等の、ＣＴＬｓによって認識される他のタイプの抗原に必要である。上述の課題の一例である腫瘍は、Ｐ８１５として知られている。ここにその開示内容を参考文献として添付するデプレーン（ＤｅＰｌａｅｎ）他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２２７４〜２２７８（１９８８）；スジコーラ（Ｓｚｉｋｏｒａ）他，ＥＭＢＯＪ９：１０４１〜１０５０（１９９０）及びシビル（Ｓｉｂｉｌｌｅ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：３５〜４５（１９９０）参照。このＰ８１５腫瘍は、メチルコラントレンによってＤＢＡ／２マウス内で誘発され、生体外腫瘍と細胞系の両方として培養される肥満細胞腫である。Ｐ８１５系は、突然変異後において、Ｐ９１Ａ（前記デプレーン（ＤｅＰｌａｅｎ））、３５Ｂ（前記スジコーラ（Ｓｚｉｋｏｒａ））及びＰ１９８（前記シビル（Ｓｉｂｉｌｌｅ））と呼ばれる変異体等、これまで数多くのｔｕｍ^-変異体を産生してきた。腫瘍拒絶抗原とは異なり、そしてこれが重要な相違点であるが、ｔｕｍ^-抗原は、腫瘍細胞が突然変異した後でしか存在しない。腫瘍拒絶抗原は、突然変異が無くても、特定の腫瘍の細胞上に存在する。従って、上記参考文献によれば、ある細胞系が、”Ｐ１”と呼ばれる系等のｔｕｍ⁺であり、これを刺激してｔｕｍ^-変異体を産生することが出来る。ｔｕｍ^-表現体はその親細胞系の表現体と異なっているので、ｔｕｍ^-細胞系とそのｔｕｍ⁺の親の系のＤＮＡの相違が予想でき、そしてその相違はｔｕｍ^-細胞中における目的の遺伝子の位置を特定することに利用できる。その結果、Ｐ９１Ａ，３５Ｂ及びＰ１９８等のｔｕｍ^-変異体の遺伝子が、遺伝子の遺伝コード領域における点突然変異によってその正常な対立遺伝子と異なっていることが発見された。前述のスジコーラ（Ｓｚｉｋｏｒａ）及びシビル（Ｓｉｂｉｌｌｅ）及びラークウィン（Ｌｕｒｑｕｉｎ）他，Ｃｅｌｌ５８：２９３〜３０３（１９８９）参照。しかし、これは本発明のＴＲＡｓには当てはまらないことが判った。これらの参考文献は、更に、前記ｔｕｍ^-抗原から誘導されたペプチドが、ＣＴＬｓによって認識されるＬ^d分子によって提示されるものであることを示した。Ｐ９１Ａは、Ｌ^dによって提示され、Ｐ３５はＤ^dによって、そしてＰ１９８はＫ^dによって、それぞれ提示される。ここに参考文献として全部含ませる先行特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４，米国特許出願第８０７，０４３；７６４，３６４；７２８，８３８；及び７０７，７０２は、腫瘍拒絶抗原または”ＴＲＡｓ”にプロセッシングされる様々なＴＲＡＰｓをコードする遺伝子および他の核酸分子に関係する発明が記載されている。本出願の一部を構成する配列認識番号１〜２６は、様々なＴＲＡＰｓをコードする遺伝子と、ＭＡＧＥ−１ＴＲＡＰから誘導される、以後、ＭＺ２Ｅと称するＴＲＡ（配列認識番号２６）との配列を示している。前記遺伝子は、分離、精製された腫瘍拒絶抗原のソース又はＴＲＡ自身として有用であり、後述するように、これらはいずれも、前記抗原がその”マーカー” となる癌を治療する薬剤として、あるいは、腫瘍学における様々な診断および調査方法に利用できる。例えば、ｔｕｍ^-細胞を使用して、様々なｔｕｍ^-抗原やｔｕｍ⁺細胞を提示する細胞を溶解するＣＴＬｓを発生させることができることが知られている。例えば、ここに参考文献として添付する、マリャンスキー（Ｍａｒｙａｎｓｋｉ）他，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１２：４０１（１９８２）；及びファン・デン・エインデ（ＶａｎｄｅｎＥｙｎｄｅ）他，ＭｏｄｅｒｎＴｒｅｎｄｓｉｎＬｕｅｋｅｍｉａＩＸ（１９９０年６月）を参照。前記腫瘍拒絶抗原先駆体を、前記遺伝子によってトランスフェクションされた細胞中で発現させ、目的の腫瘍に対する免疫応答を発生させることができる。ヒト新生生物（腫瘍）のパラレルな例において、自己由来混合リンパ球−腫瘍細胞培養（以下”ＭＬＴＣ”）が、しばしば、自己由来腫瘍細胞を溶解し、かつ、天然キラー標的、自己由来ＥＢＶ−形質転換Ｂ細胞や自己由来線維芽細胞は溶解しない応答（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）リンパ球を生産することが観察されている（アニキーニ（Ａｎｉｃｈｉｎｉ）他，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ８：３８５〜３８９（１９８７）参照）。この応答は、メラノーマに関して特によく研究されており、ＭＬＴＣは、末梢血液細胞または腫瘍浸潤リンパ球のいずれかによって行われてきた。この分野に関する文献としては、クナス（Ｋｎｕｔｈ）他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：２８０４〜２８０２（１９８４）；ムカールジ（Ｍｕｋｈｅｒｊｉ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：２４０（１９８３）；ヘリン（Ｈｅｒｉｎ）他，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃ．３９：３９０〜３９６（１９８７）；トパリアン（Ｔｏｐａｌｉａｎ）他，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ６：８３９〜８５３（１９８８）等がある。安定な細胞障害Ｔ細胞クローン（以後、ＣＴＬｓ）がＭＬＴＣ応答細胞から誘導され、これらのクローンは、腫瘍細胞に対する特異性を有する。前記ムカールジ（Ｍｕｋｈｅｒｊｉ）他、前記ヘリン（Ｈｅｒｉｎ），前記クナス（Ｋｎｕｔｈ）他，参照。腫瘍細胞上においてこれらの自己由来ＣＴＬｓによって認識される抗原は、人為構造を表すものではないと考えられる、というのは、これらはインヴィヴォで腫瘍細胞上に観察されるからである。前記トパリアン（Ｔｏｐａｌｉａｎ）他，デジョヴァンニ（Ｄｅｇｉｏｖａｎｎｉ）他，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：１８６５〜１８６８（１９９０）。これらの観察と、本出願において特定のハツカネズミ腫瘍拒絶抗原先駆体の遺伝子の分離に使用された技術との組合せによって、ヒトの腫瘍において提示されたＴＲＡｓの腫瘍拒絶抗原先駆体をコードする核酸配列が分離された。従って、いま、以下に記載のその派生効果とともに、特定の腫瘍に最も特徴的なものを非限定的に含む、腫瘍拒絶抗原先駆体をコードする前記核酸配列の分離が可能となった。更に、主要組織適合抗原複合体、つまり”ＭＨＣｓ”として知られている分子のクラスによるＴＲＡｓの提示に関して集中的に研究が行われた。これら分子のヒトの場合、”ヒト白血球抗原”、つまり”ＨＬＡｓ”である。この研究によって、当該分野に関していくつかの意外な発見がなされた。特に、ここにその開示を参考文献として含ませる米国特許出願第９３８，３３４号、現在米国特許第号において、前記ＨＬＡ−Ａ１分子によって提示されるノナペプチドが教示されている。この参考文献は、特定のＨＬＡ分子に対して特定のペプチドが特異性を有することが既知であれば、ある特定のペプチドが１つのＨＬＡ分子に結合し、他とは結合しないということが予測される、ということを教示している。これらペプチドは、ここに配列認識番号２７〜３４として提示され、トラヴァーサリ（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）他，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１４５３〜１４５７（１９９２）にも開示されている。これは重要である、というのは、個人によって保有するＨＬＡ表現型は異なるからである。その結果、ある特定のペプチドあるいはある特定のモチーフが、ある特定のＨＬＡ分子に対するパートナーであることが同定されることによって、それから診断的および治療的な派生効果が得られるとしても、これらはその特定のＨＬＡ表現型を有する個人だけにしか関係しない。細胞異常は１つの特定ＨＬＡ表現型に限られないので、この分野において更に研究する必要があり、標的治療には、対象となる異常細胞の表現型に関するいくらかの知識が必要である。１９９３年１月２２日出願で、参考文献として含ませる米国特許出願第００８，４４６号において、前記ＭＡＧＥ−１発現産生物が第２のＴＲＡにプロセッシングされるという事実が開示されている。この第２のＴＲＡは、ＨＬＡ−Ｃｗ^* １６０１によって提示される。同開示内容は、あるＴＲＰが複数のＴＲＡｓを産生可能であることを示している。１９９２年１２月２２日出願で、ここに参考文献として含ませる米国特許出願第９９４，９２８号には、チロシナーゼが腫瘍拒絶抗原前駆体として記載されている。これは、クウォン（Ｋｗｏｎ）の米国特許第４，８９８，８１４号から周知の分子である。この参考文献は、いくつかの正常細胞（例えばメラニン細胞）によって産生される分子が、腫瘍細胞中にてプロセッシングされて、ＨＬＡ−Ａ２分子によって提示される腫瘍拒絶抗原を産生することが開示されている。これによって提示されるペプチドは、１９９３年４月２８日出願の米国特許第５４，７１４号に記載されている。配列認識番号３５がこのペプチドを記載している。ＨＬＡ分子によって提示される更に別のチロシナーゼ誘導ペプチドが、１９９４年２月２８日出願で、参考文献として含ませる出願番号第２０３，０５４号と第２３３，３０５号とに記載されている（配列認識番号３６〜４１）。ＴＲＡｓであるその他のペプチドが、別の特許出願に記載されている。１９９４年２月１４日出願で、ここに参考文献として含ませる米国特許出願第１９５，１８６号は、ＭＡＧＥ−１から誘導され、ＨＬＡ−Ｃｗ^*１６０１と複合化する３つのペプチド（ここでは配列認識番号４２〜４４）を記載している。１９９４年２月１５日出願の出願番号第１９６，６３０号は、無関連の腫瘍拒絶抗原前駆体、いわゆる”ＢＡＧＥ”遺伝子と、プロセッシングされてＨＬＡ−Ｃｗ^*１６０１によって提示され、そこから誘導されるペプチドとを開示している。これらは、配列認識番号４５〜４８に記載され、この出願は参考文献として含ませる。配列認識番号４８が、その腫瘍拒絶抗原である。腫瘍拒絶抗原前駆体の別のコード配列が、１９９３年３月１８日出願で参考文献として含ませる出願番号第３２，９７８号に記載されている。これらは、ここに、配列認識番号４９及び５０として含まれる。この遺伝子のより拡張された配列が、参考文献として含ませる１９９４年７月８日出願の出願番号第２７２，３５１号に記載され、これは、配列認識番号５１である。１９９３年７月２２日出願の出願番号第９６，０３９号には、腫瘍拒絶抗原前駆体ＧＡＧＥの配列が記載されている。この情報に関しては配列認識番号５２を参照。ＭＨＣ分子によって提示されたとき、細胞障害性Ｔ細胞による溶解を引き起こす一連のペプチドは、そのすベてが１９９４年３月２４日出願で、そのすべてがここに参考文献として含ませる出願番号第２１７，１８６号、第０８／２１７，１８８号および第２１７，１８７号に記載されている。これらの出願の内の第１のものは、ＨＬＡ−Ａ２によって提示されるＭＡＧＥ−３誘導ペプチドを記載している。５つのペプチドが注目される。これらは、ここに、配列認識番号５３〜５７として反復されている。前記第２の出願は、ＨＬＡ−Ａ２．１分子と複合化すると考えられる、ＭＡＧＥ−２から誘導される１１の配列（配列認識番号５８〜６８）を提供している。これらの出願の内の最後のものは、ＨＬＡ−Ａ２に複合化する、ＭＡＧＥ−３から誘導される更に２つのペプチド（配列認識番号６９及び７０）を開示している。１９９４年４月１日出願で、参考文献として含ませる、出願番号第１９０，４１１号は、ＭＡＧＥ−１から誘導され、それらが投与された宿主動物中において抗体の産生を引き起こす点において免疫源的な３つのペプチド（配列認識番号７１〜７３）を記載している。１９９４年６月３日出願で、参考文献として含ませる出願番号第２５３，５０３号は、別の腫瘍拒絶抗原前駆体遺伝子（配列認識番号７４）と、ＨＬＡ−Ｂ４４によって提示され、そこから誘導されるペプチドとを教示している。更に、同時係属出願であるクーリ（Ｃｏｕｌｉｅ）、イケダ（Ｉｋｅｄａ）及びブーン‐ファラー（Ｂｏｏｎ−Ｆａｌｌｅｕｒ）の出願には、ＤＡＧＥとして知られている腫瘍拒絶抗原前駆体（配列認識番号７６）をコードする配列が記載されている。ＤＡＧＥは腫瘍細胞上においてほとんど必ず見られ、正常細胞に関しては精巣上においてのみ見られるものである。このことにより、それは癌の診断用、そしてここに開示される諸出願において特に有用なものとなっている。上記リストが、ＴＲＡＰ及びＴＲＡに関する文献の全部と考えられてはならず、このリストは、その多様性と、これらの物質がＴ細胞増幅を誘発させるだけでなく、抗体の産生も刺激するということを示すために提供されるものである。抗体産生細胞をハイブリドーマを生成するためのソースとして使用し、これらハイブリドーマがモノクローナル抗体を産生するということは周知である。従って、ここで”抗体 ”という用語を使用するとき、これは、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体との両方を含むものである。出願番号第１４２，３６８号と第１９０，４１１号とを含む、本出願の親出願の両方は、ワクチン、免疫源的組成物などを調製するために、ＴＲＡＰｓ又はＴＲＡｓを、アジュバントとしての様々な物質の組み合わせることの有用性を記載している。しばしば、選択されたアジュバントが、フロイントの完全アジュバント、あるいは百日咳死菌体であれば、ａｌｕｍ沈殿させた抗原との組み合わせを用いた。アジュバントに関する一般的記載は、ここに参考文献として含ませるゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ），ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ＆Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版，１９８６年）の、ここに参考文献として含ませる第６１〜６３頁に提供されている。しかし、ゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ）は、対象の抗原が低分子量であるか、もしくは、その免疫源効果が低い場合には、免疫源的キャリアとカプリングすることが推奨されると記している。ゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ）によれば、このような分子は、一般に分子量は約１０００以下である。ゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ）によって、第２８３頁において提案されているキャリアとして、鈎穴カサガイ（ｋｅｙｈｏｌｅｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、そして家きん類イムノグロブリンがある。しかし、このようなキャリアの問題は、しばしばこれらキャリア自身が免疫源的であるということである。従って、免疫応答は、その一部、または大部分、あるいはその全部が免疫源自身よりもキャリア分子に向けられる一般的なものであってよい。アジュバントに関する当該技術の開発の具体は、ここに参考文献として含ませるケンシル（Ｋｅｎｓｉｌ）他の米国特許第５，０５７，５４０号である。ケンシル（Ｋｅｎｓｉｌ）他は、免疫源組成物中のアジュバントとして有効な種々のサポニン抽出物を開示している。天然物としては、これらの抽出物は完全には定義されていない。但し、ケンシル（Ｋｅｎｓｉｌ）他は、ＱＡ−７，ＱＡ−１９及びＱＡ−２１（ＱＳ−２１とも呼ばれる）を含む、様々な抽出物をいかに調合するかについて完全で実施可能な開示内容を提供している。ウシ血清アルブミン（”ＢＳＡ”）を種々の抽出物と組合せ（例８及び９）、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍ）への吸収後に、ネコの白血病ウィルス組換えグリコプロテイン”ｇｐ７０Ｒ△をテストした実験が記載されている。しかし、前記２つのテストされた免疫源は、それ自身が免疫源的であると予想される（ｇｐ７０Ｒ△は分子量が７０ｋｄであり、血清アルブミンもだいたい同じ分子量である）。それ自身では免疫源性が低いか、あるいは非免疫源的であり、従って、応答の誘発のために、ａｌｕｍ吸収の使用か、もくしは、ハプテン担体（ｈａｐｔｅｎｉｃｃａｒｒｉｅｒｓ）の使用を必要とする分子に関しては、全く実験されていない。ここに参考文献として含ませる、防衛刊行物（ｄｅｆｅｎｓｉｖｅｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ）７６９７２７５に対応のＰＣＴ出願ＷＯ９２１９７５８には、”ＭＴＰ−ＭＦ５９”と呼ばれるアジュバントが開示されている。このアジュバントは、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）タンパク質、”Ｐｆｓ−２５−Ｂ”と組み合わせて使用される。この組合せは、伝達阻止ワクチンとして記載されている。前記Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍタンパク質は、それ自身、免疫源となるに十分大きい。従って、当該技術において、改良されたアジュバントが、推定的に非免疫源的なタンパク質とペプチドと組み合わされて免疫的に有効な組成物を作り出すことができることを示すものは存在しない。今回、驚くべきことに、対象の動物に投与されたとき、免疫応答を誘発させる腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原を有する組成物を作り出すことが可能であるということが判った。特に好適な実施形態において、前記組成物の免疫源部分は、単数または複数種のＴＲＡＰ、又は、より好ましくは、ＴＲＡ分子とアジュバントからなる。特に好ましいのは、前記アジュバントが、上述の参考文献として合体されるケンシル（Ｋｅｎｓｉｌ）他の特許に開示されているように、ＱＳ２１である組成物である。本発明の免疫源は、ＴＲＡＰｓ又はＴＲＡｓからなり、これは、これら免疫源が、ハプテン（部分抗原）、キャリア、沈澱ａｌｕｍ、あるいは、通常時において、免疫源性が低い、あるいは、低いと期待される物質を含まないということを意味する。本発明を、次の開示においてより詳細に説明する。好適実施形態の詳細な説明例次の例は、ペプチドＭＺ２Ｅ（配列認識番号２６）のアジュバントＱＳ−２１との併用を示すものである。但し、タンパク質またはペプチド（本組成物の第１成分）と、アジュバント（本組成物の第２成分）とを慣例的に置き換えることも可能である。ＭＺ２ＥとＱ２１との組合せの予想外の効果は、別の組合せ、即ち、他のペプチドを使用した場合でも発生するはずである。被験体は、第ＩＶ段階のメラノーマ又は高リスク第ＩＩＩ段階の患者である。第ＩＶ段階の患者の平均生存日数は診断後１年であり、その長期生存の可能性は僅かに１５％である（バルチ（Ｂａｌｃｈ）他、皮膚メラノーマ（ＣｕｔａｎｅｏｕｓＭｅｌａｎｏｍａ），Ｊ．ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９２）。これらの患者に対する標準的療法として、デカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、又は、デカルバジンを含む薬剤組成物による治療があるが、その応答率は、僅かに８〜２５％に過ぎず、この治療が生存を長引かせるという証拠はない。バルチ（Ｂａｌｃｈ）他、前述。高リスク第ＩＩＩ段階のメラノーマ（５以上の陽性局所リンパ節を有するｐＴ４厚の体幹一次腫瘍または四肢メラノーマ）を有する患者の平均生存日数は発病から１〜２年であり、その長期生存の可能性は１９％である。バルチ（Ｂａｌｃｈ），他、前出。１２人の患者を研究に使用し、彼らはすべて、前述した基準に従って第ＩＶ段階または高リスク第ＩＩＩ段階の悪性メラノーマを有していることを、組織を調べることによって確認した。これらの患者は、更に次の基準を満たすものである。（ｉ）外科手術から完全に回復していること。（ｉｉ）免疫処置の４週間内に化学療法あるいは免疫療法を受けていないこと。（ｉｉｉ）予想生存期間が少なくとも３カ月あること。（ｉｖ）カリノフスキィパフォーマンス状態（ＫａｒｉｎｏｆｓｋｙＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＳｔａｔｕｓ）が６０以上であること。（ｖ）下記の実験結果を有するものであること。顆粒球＞２，５００／ｍｉｎ³ リンパ球＞７００／ｍｉｎ³ 血小板＞１００，０００／ｍｉｎ³ 血清クレアチン＜２．０ｍｇ／１００ｍｌ血清ビリルビン＜２．０ｍｇ／１００ｍｌ（ｖｉ）ＭＺ２Ｅ免疫処置のために、患者がＨＬＡ−Ａ１が陽性であること。（ｖｉｉ）ＭＺ２Ｅ免疫処置のために、患者の腫瘍がＭＡＧＥ−１を発現すること。（ｖｉｉｉ）患者が１９歳以上であり、書面によるインフォームド・コンセントを与える能力があること。以下の基準をいずれかを満たす潜在的対象体はすべて除外される。（ｉ）臨床的に重大な心臓疾患。（ｉｉ）抗生物質を必要とする活性感染、または出血障害、などの他の重大疾患。（ｉｉｉ）抗ヒスタミン剤、Ｎ−ＳＡＩＤＳ、又はコルチコステロイドでの治療。（ｉｖ）免疫不全、脾臓摘出、または、脾臓に対する放射線療法。（ｖ）妊娠または泌乳（ｖｉ）有効な避妊法を使用していない出産年齢の女性。すべての患者は、外来患者として治療された。彼らは、０．３ｍｌの燐酸バッファ塩溶液、ｐＨ７．４、に含まれたＭＺ２Ｅ（３０ｕｇ又は３００ｕｇ）とＱＳ２１（１００ｕｇ）とを皮下注射によって免疫処置された。６人の患者は、３０ｕｇのペプチドを受け、６人は３００ｕｇ受けた。最初の注射は、腿の腹側の三角筋領域に行い、その注射の場所は、フォロアップの注射では変えた。排出リンパ節が外科的に切除されているか、又は照射されている四肢には注射は行わなかった。注射は、第１日目に行い、その後、第８，１５，２２及び５７日目に行った。中断が必要な場合を除いて（研究者が決定）、患者を１２週間にわたってモニタした。病状の進行が明らかにならない限り、安定化または腫瘍の応答を示したすべての患者について研究を続けた。また、毒性反応が観察された場合には、患者は研究から除外されるか、もしくは、前記ペプチドの異なった投与量を与えた。患者は、次のような反応を示した。完全な反応において、腫瘍のすべての徴候、症候、生化学的および画像上の証拠が少なくとも３０日の期間消えた。部分的反応においては、少なくとも３０日間、最大直径と垂直直径との積の合計の少なくとも５０％のすべての測定可能な腫瘍の大きさが減少した。小さな反応においては、少なくとも３０日間、最大直径と垂直直径との積の合計の少なくとも２５％のすべての測定可能な腫瘍の大きさが減少し、新たな病変や病変の進行は現れなかった。安定的な疾病においては、少なくとも３０日間、最大直径と垂直直径との積の合計の２５％以下の変化が見られ、新たな病変や病変の進行は現れなかった。病状が進行すると、新たな腫瘍が出現するか、又は、最大直径と垂直直径との積の合計の少なくとも５０％の測定可能な腫瘍の大きさが増加した。上記例は、腫瘍拒絶抗原、即ち、ＭＺ２Ｅ、とアジュバント、即ち、ＱＳ２１、とを一定量有する組成物と、この組成物の癌（つまりメラノーマ）のインヴィヴォ治療における利用とを示すものである。前記腫瘍拒絶抗原は、その表面にそれを提示する腫瘍細胞に対する免疫応答を誘発するのに十分な量が使用される。本発明の組成物は、なんらかの腫瘍拒絶抗原前駆体（”ＴＲＡＰ”）又は、腫瘍拒絶抗原（”ＴＲＡ”）を、薬剤として許容可能なアジュバントとともに有するものである。本発明の好適実施形態は、上述し、配列認識番号６５に記載のＴＲＡＰｓ及びＴＲＡｓと、更に、背景の部分に記載したアジュバントとを利用するものである。上の記載から理解されるように、本発明の１つの重要な側面は、Ｔ細胞の増殖の刺激である。これは、最初の刺激であってもよいし、あるいは、前の刺激の補強であってもよい。具体的には、その表面上に、ここに記載したＴＲＡｓ等のペプチドを提示する細胞障害性Ｔ細胞を刺激することが望ましい。細胞障害性Ｔ細胞は、これらのＭＨＣとペプチドとの複合体を認識し、そのレセプタを介してそれらに結合して、増殖する。これらは、更に、その認識された細胞を溶解する。この応答は、インヴィヴォだけでなくインヴィトロでも使用可能である。というのは、ＭＨＣとペプチドとの特定の複合体に対して特異的な細胞障害性Ｔ細胞は、細胞の形質転換を経験した対象体の血液中に存在することが十分に確立されているからである。個人の血液サンプルを、インヴィトロで、問題のペプチドと、問題のＭＨＣ分子を提示する細胞とに接触させることによって、血液サンプル中のすべての細胞障害性Ｔ細胞は、増大、即ち、増幅する。この増幅は、その為に構成された周知のどのアッセイを使用することによっても測定することができる。特に好適なものは、放射性クローム（⁵¹Ｃｒ）放出アッセイと、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の放出の測定である。前記組成物は、Ｂ細胞の増殖の、又は、抗体産生の刺激物質としても有用である。ここでも、Ｂ細胞が抗体を産生し、その標的の大きさが、十分に、腫瘍拒絶抗原の大きさ、従って、腫瘍拒絶抗原前駆体の大きさ範囲内であることは周知である。Ｔ細胞の場合と同様に、その刺激化は、インヴィトロ又はインヴィヴォで、”最初の”ものであってもよいし、あるいは、以前の応答の増加であってもよい。使用するＴＲＡＰ又はＴＲＡの量は、その免疫処置の目的と投与される対象体によって変化する。例えば、ＴＲＡを提示する癌細胞の存在を診断するのに使用可能なネズミ抗原を生成する場合には、タンパク質またはペプチドの量は、上述の例に記載したもののような、インヴィトロ療法において使用される量よりも少なくてよい。一般に、好適投与量は、毎投与当り、約１ｕｇ〜約７５０ｕｇのタンパク質またはペプチドの範囲であってよい。好適実施形態においては、その範囲は、約１０ｕｇ〜約５００ｕｇの範囲である。最も好ましくは、毎投与当り約３０ｕｇ〜約３００ｕｇの範囲で使用することができる。もちろん、本発明の治療的態様において、研究者は、例えば、６カ月齢の幼児と成人とでは投与量が異なることから、その投与量を変化させることができる。投与の方法も様々であってよいが、好適な投与方法は、経口、皮下、筋内、静脈、および腹膜内投与である。前記組成物中のＴＲＡＰ又はＴＲＡタンパク質またはペプチドの選択は、当業者によって決めることが可能な諸パラメータによって変化する。例えば、各種ＴＲＡｓが各種ＭＨＣ分子によって提示されることが当該技術において認識されている。従って、もしも周知技術を使用して、対象体が、その腫瘍細胞上にＨＬＡ −Ａ２分子を提示するタイプであると分類されたならば、例えば、ＨＬＡ−Ｃｗ^* １６０１によって提示されるものではなく、ＨＬＡ−Ａ２分子によって提示されるＴＲＡが使用されるであろう。同様に、ポリメラーゼ連鎖反応（”ＰＣＲ” ）、溶解研究、およびその他の当該技術において周知のアッセイ方法を使用して、どの単数または複数の腫瘍拒絶抗原前駆体遺伝子が対象患者によって発現されているかを判定することができる。これによって、どのタンパク質またはペプチドを使用するが決定される。ここでも、例えば、対象体の腫瘍細胞がＭＡＧＥ− １ではなくて、ＭＡＧＥ−３を発現しているのであれば、免疫処置において使用されるペプチドは、ＭＡＧＥ−１からではなくＭＡＧＥ−３から誘導されるべきである。ここに記載した分子は、”腫瘍”拒絶抗原および”腫瘍”拒絶抗原前駆体と称されているが、その治療および診断における利用方法は、癌自身を越えているものであると意図されている。当該技術において、癌自身ではない、例えば形成異常母斑（ｄｉｓｐｌａｓｔｉｃｎｅｖｉｓ）などの病理状態は周知である。すべてのこのような状態が本発明の意図された範囲に包合される。本発明のその他の側面は、当業者にとって明白であろう。従って、ここで繰り返す必要はない。ここに使用した用語および表現は、記載のための用語であり、限定のためのものではなく、このような用語および表現を使用するに当たって、図示され記載された特徴構成、またはその一部のいかなる均等物も除外する意図はなく、本発明の範囲内において様々な改変が可能であると認識される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１０月７日【補正内容】請求の範囲：１．以下を有する組成物、（ｉ）腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原と、以下の少なくとも１つ、（ｉｉ）薬剤的に許容可能なアジュバント、そして（ｉｉｉ）少なくとも、１つのＴ細胞成長因子またはＢ細胞成長因子。２．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＭＡＧＥタンパク質である。３．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＢＡＧＥタンパク質である。４．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＧＡＧＥタンパク質である。５．請求項１の組成物であつて、前記腫瘍拒絶抗原は、ＭＡＧＥタンパク質から誘導されたものである。６．請求項５の組成物であって、前記ＭＡＧＥタンパク質は、ＭＡＧＥ−１，ＭＡＧＥ−２又はＭＡＧＥ−３である。７．請求項６の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原は、配列認識番号１〜配列認識番号５の内の１つからなる。８．請求項１の組成物であって、前記薬剤的に許容可能なアジュバントは、キラヤサポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａ）から誘導された実質的に純粋なサポニンである。９．請求項８の組成物であって、前記実質的に純粋なサポニンは、ＱＡ−７，ＱＡ−２１，ＱＡ−１７及びＱＡ−１８からなるグループから選択される。１０．請求項１の組成物であって、前記薬剤的に許容可能なアジュバントはＭＴＰ−ＭＦ５９である。１１．対象体中の免疫応答を刺激する方法であって、前記対象体に対して、請求項１の組成物を、前記腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分な量を投与する工程を有する。１２．請求項１１の方法であつて、前記免疫応答は、前記腫瘍拒絶抗原と、前記腫瘍拒絶抗原が結合する主要組織適合複合体分子との複合体に対して特異的なＴ細胞の増殖を含む。１３．請求項１１の方法であって、前記Ｔ細胞は細胞障害性Ｔ細胞である。１４．請求項１１の方法であって、前記免疫応答は、前記腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原に対する抗体の産生を含む。１５．静脈投与形態の請求項１の組成物。１６．リポソーム形態の請求項１の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ファン・デン・エインデ，ベノイトベルギー国ビー−1200 ブリュッセルアベニュー・ヒポクラート 74 ユーシーエル 7459

Claims

【特許請求の範囲】１．以下を有する組成物、（ｉ）腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原、そして（ｉｉ）少なくとも、薬剤的に許容可能なアジュバントと、Ｔ又はＢ細胞成長因子とのいずれか一方。２．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＭＡＧＥタンパク質である。３．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＢＡＧＥタンパク質である。４．請求項１の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原前駆体はＧＡＧＥタンパク質である。５．請求項１の組成物であつて、前記腫瘍拒絶抗原はＭＡＧＥタンパク質から誘導されたものである。６．請求項５の組成物であって、前記ＭＡＧＥタンパク質は、ＭＡＧＥ−１，ＭＡＧＥ−２又はＭＡＧＥ−３である。７．請求項６の組成物であって、前記腫瘍拒絶抗原は、配列認識番号１〜配列認識番号５の内の１つからなる。８．請求項１の組成物であって、前記薬剤的に許容可能なアジュバントは、キラヤサポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａｒｉａ）から誘導された実質的に純粋なサポニンである。９．請求項８の組成物であって、前記実質的に純粋なサポニンは、ＱＡ−７，ＱＡ−２１，ＱＡ−１７及びＱＡ−１８からなるグループから選択される。１０．請求項１の組成物であって、前記薬剤的に許容可能なアジュバントはＭＴＰ−ＭＦ５９である。１１．対象体中の免疫応答を刺激する方法であって、前記対象体に対して、請求項１の組成物を、前記腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分な量を投与する工程を有する。１２．請求項１１の方法であつて、前記免疫応答は、前記腫瘍拒絶抗原と、前記腫瘍拒絶抗原が結合する主要組織適合複合体分子との複合体に対して特異的なＴ細胞の増殖を含む。１３．請求項１１の方法であって、前記Ｔ細胞は細胞障害性Ｔ細胞である。１４．請求項１１の方法であって、前記免疫応答は、前記腫瘍拒絶抗原前駆体または腫瘍拒絶抗原に対する抗体の産生を含む。１５．静脈投与形態の請求項１の組成物。１６．リポソーム形態の請求項１の組成物。