ES2938648T3 - Inhibidores selectivos de JAK1 - Google Patents

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ES2938648T3 ES18701296T ES18701296T ES2938648T3 ES 2938648 T3 ES2938648 T3 ES 2938648T3 ES 18701296 T ES18701296 T ES 18701296T ES 18701296 T ES18701296 T ES 18701296T ES 2938648 T3 ES2938648 T3 ES 2938648T3
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Johan Johansson
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Abstract

En el presente documento se describen compuestos de Fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que R1-R8 tienen cualquiera de los significados definidos en el presente documento. También se describen composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (I) y métodos para usar las mismas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores selectivos de JAK1
Antecedentes
La familia JAK (cinasa asociada a Janus) incluye cuatro tirosina cinasas no receptoras, JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2, que desempeñan un papel crítico en la transducción de señal mediada por citocina y factor de crecimiento (Schindler C, y Darnell JE Jr., Annu. Rev. Biochem. 1995;64;621-651). La cinasa JAK1 interactúa con, entre otros, los receptores de interferón de tipo I (por ejemplo, IFNalpha), interferón de tipo II (por ejemplo, IFNgamma), la cadena gamma común yc (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21), y la familia de interleucina-6 (IL-10, IL-13 e IL-22) (N Engl J M ed2013, 368, 161-170). Después de que estas citocinas se unen a sus receptores, se produce la oligomerización del receptor, lo que da como resultado que las colas citoplásmicas de las JAK cinasas asociadas se muevan a la proximidad y faciliten la trans-fosforilación y la activación de los residuos de tirosina en la JAK cinasa. Las JAK cinasas fosforiladas se unen y activan diversas proteínas del transductor de señal y del activador de la transcripción (STAT). Estas proteínas STAT después dimerizan y se translocan al núcleo donde funcionan tanto como moléculas de señalización como factores de transcripción y finalmente se unen a secuencias de ADN específicas presentes en los promotores de genes que responden a citocinas (Leonard et al., (2000), J. Allergy Clin. Immunol.105:877-888). Diversas inmunodeficiencias y enfermedades autoinmunes tales como alergias, asma, alopecia areata, rechazo al trasplante (aloinjerto), artritis reumatoide, esclerosis lateral amiotrófica y esclerosis múltiple, y cánceres sólidos y hematológicos son resultado de la alteración de la señalización en la vía JAK/STAT. Véase, por ejemplo, Frank, (1999), Mol. Med.
5:432-456 Vijayakriishnan et al, Trends Pharmacol. S c i 2011, 32, 25-34 y Flanagan et al,; Open Rheumatol J . 2012, 6, 232-244; N Engl J Med 2013, 368, 161-170; Exp. Dermatol. 2014, 23, 7-11; J. Med. Chem.2014, 57, 5023-5038, J Allergy Clin Immunol 2014; 133:1162-74, y Expert Opin Orp Drug(2015) 3 (4), 419-431.
Un elemento importante de JAK1 es la capacidad de emparejarse con otras JAK cinasa en los dominios intracelulares de diferentes subunidades del receptor. Por ejemplo, JAK3 se asocia con la cadena gamma común (yc) de los diversos receptores de citocinas y pares con JAK1 ( Immunol. Rev. 2008, 223, 132-142). Se ha indicado que jAK1 es dominante sobre JAK3, y la inhibición de JAK1 es suficiente para inactivar la señalización a través de la cadena gamma común a pesar de la actividad de JAK3 ( Chem. Biol. 2011, 18 (3), 314-323). Por lo tanto, la inhibición selectiva de JAK1 puede ser suficiente para tratar una serie de enfermedades inflamatorias y autoinmunes asociadas con la señalización de citocinas a través de la ruta JAK1/JAK3-STAT. Sin embargo, se estimula el desarrollo de inhibidores selectivos de JAK1 que tienen poca o ninguna actividad inespecífica contra otras JAK cinasas. En particular, los compuestos identificados como inhibidores selectivos de jAK1 actualmente en desarrollo clínico muestran solamente una selectividad marginal de JAK1. ( Future Med. Chem. (2015) 7(2), 203-235). Por ejemplo, las relaciones de selectividad de JAK1/JAK2 indicadas en ensayos bioquímicos para inhibidores de JAK1 en el desarrollo activo para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, tal como Filgotinib (J. Med. Chem. 2014, 57, 9323-9342) y ABT-494 (documento WO2015061665 - figura 1) son 2.8 en base a la CI50 medida aproximadamente en el Km de ATP. Por lo tanto, se espera que esos compuestos tengan cierta actividad diana contra otras JAK cinasas y, por lo tanto, efectos secundarios adicionales que podrían limitarse con inhibidores de JAK1 más selectivos. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar inhibidores de JAK1 altamente potentes y selectivos para tratar trastornos relacionados con JAK1, por ejemplo, leucemia, linfoma, rechazo de trasplantes (por ejemplo, rechazo al trasplante de islotes de páncreas, aplicaciones de trasplante de médula ósea (por ejemplo, enfermedad de injerto contra huésped), enfermedades autoinmunes (por ejemplo, diabetes tipo 1), e inflamación (por ejemplo, asma, reacciones alérgicas), sin efectos secundarios reales o percibidos asociados con la actividad inespecífica, tal como la anemia.
Sumario
La presente divulgación se refiere a compuestos novedosos que poseen inhibición de JAK1 selectiva. Por consiguiente, se proporcionan en el presente documento compuestos de Fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
Fórmula (I)
en la que:
cada uno de Ri , R3, y R4 se escoge individualmente de hidrógeno y metilo;
R2 se escoge de hidrógeno, metilo, y -CH2CH2OH;
n es 1 o 2;
R5 se escoge de metilo, etilo, y -CH 2OR8;
R6 se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7 se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8 se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
La presente divulgación también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un diluyente, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Además, se divulga un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1 (por ejemplo, diabetes tipo 1, lupus, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, psoriasis, asma, dermatitis atópica, trastornos tiroideos autoinmunes, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, COPD, vitÍligo, y alopecia areata). En otra realización, se divulga el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento o formulación para tratar un trastorno relacionado con JAK1. En otra realización, se divulgan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1.
Además, se divulga un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la inhibición de JAK1 en un sujeto. En otra realización, se divulga el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento o formulación para inhibir JAK1 en un sujeto. En otra realización, se divulgan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la inhibición de JAK1 en un sujeto.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 ilustra el diagrama de difracción de polvo de rayos X de la forma cristalina del compuesto del título enumerado para el Ejemplo 35.
La figura 2 ilustra la Puntuación del índice de pelo (HIS) después de tratar ratones C3H/HeJ con alopecia areata establecida con 0.5 mg/kg del compuesto del Ejemplo 35 en comparación con ratones no tratados.
La figura 3 ilustra el porcentaje de reducción de eosinófilos en el lavado broncoalveolar en ratas marrones de Noruega estimuladas con OVA después del tratamiento con el compuesto del Ejemplo 35 en comparación con ratas estimuladas, pero no tratadas.
Descripción detallada
Compuestos
En una realización, se divulgan compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
en la que:
cada uno de R1, R3, y R4 se escoge individualmente de hidrógeno y metilo;
R2 se escoge de hidrógeno, metilo, y -CH2CH2OH;
n es 1 o 2;
R5 se escoge de metilo, etilo, y -CH 2OR8;
R6 se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7 se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8 se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En algunas realizaciones, cada uno de R1-R4 se escoge independientemente de hidrógeno y metilo.
En algunas realizaciones, R1, R3, y R4 son todos hidrógeno.
En algunas realizaciones, n es 1.
En algunas realizaciones, R5 es metilo o -C H 2OR8.
En algunas realizaciones, R6 es metilo o flúor.
En algunas realizaciones, R7 es metilo.
En algunas realizaciones, R8 es metilo.
En al menos una realización, R1, R3 y R4 son H; R2 es metilo; R6 es flúor; R7 es metilo; R5 es -CH 2OR8; y R8 es metilo. En una realización, los compuestos de Fórmula (I) son compuestos de Fórmula (la):
Figure imgf000005_0001
en la que:
cada uno de Ría , R3a, y R4a se escoge individualmente de hidrógeno y metilo;
R2a se escoge de hidrógeno, metilo, y -CH2CH2OH;
n es 1 o 2;
R5a se escoge de metilo, etilo, y -CH 2ORsa;
R6a se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7a se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8a se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En algunas realizaciones, cada uno de Ría-R4a se escoge independientemente de hidrógeno y metilo.
En algunas realizaciones, Ría , R3a, y R4a son todos hidrógeno.
En algunas realizaciones, n es 1.
En algunas realizaciones, R5a es metilo o -CH 2OR8a.
En algunas realizaciones, R6a es metilo o flúor.
En algunas realizaciones, R7a es metilo.
En algunas realizaciones, R8a es metilo.
En al menos una realización, Ría , R3a y R4a son H; R2a es metilo; R6a es flúor; R7a es metilo; R5a es -C H 2OR8a; y R8a es metilo.
En una realización, los compuestos de Fórmula (I) son compuestos de Fórmula (Ib):
Figure imgf000006_0001
en la que:
R5b se escoge de metilo, etilo, y -CH 2ORsb;
R6b se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7b se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8b se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En algunas realizaciones, R5b es metilo o -CH 2OR8b.
En algunas realizaciones, R6b es metilo o flúor.
En algunas realizaciones, R7b es metilo.
En algunas realizaciones, R8b es metilo.
En al menos una realización, R6b es flúor; R7b es metilo; R5b es -C H 2OR8b; y R8b es metilo.
En algunas realizaciones, se divulgan los compuestos de la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente de los mismos:
Tabla 1
Figure imgf000006_0002
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000016_0001
Los compuestos divulgados de Fórmula (I), (la), (Ib), o la Tabla 1, pueden prepararse usando los métodos y procesos descritos en el presente documento. En un aspecto, los compuestos divulgados de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, se preparan de acuerdo con los procesos descritos en los Ejemplos.
Los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, son capaces de existir en diversas formas estereoisoméricas y la presente divulgación se refiere a cada una de las formas estereoisoméricas que pueden existir para cada compuesto y a mezclas de los mismos, incluyendo los racematos. Se entiende que un sustituyente puede estar unido a un centro quiral de un átomo de carbono y, por lo tanto, los compuestos divulgados incluyen enantiómeros, diastereómeros y racematos. El término "enantiómero" incluye pares de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla racémica. El término se usa para designar una mezcla racémica cuando sea apropiado. Los términos "diastereómeros" o "diastereoisómeros" incluyen estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí. La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema Cahn-Ingold-Prelog R-S. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada centro quiral se puede especificar mediante R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta es desconocida se pueden designar (+) o (-) según la dirección (dextro o levorrotatoria) que giran la luz del plano polarizado en la longitud de onda de la línea D de sodio. En la medida en que una estructura o nombre químico no indique la quiralidad, la estructura o el nombre pretenden incluir cualquier estereoisómero individual correspondiente a esa estructura o nombre, así como cualquier mezcla de estereoisómeros, incluyendo los racematos.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" incluye sales de adición de ácidos que conservan la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1. Pueden formarse sales farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos u ácidos orgánicos, tales como sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clortofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, subsalicilato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Los ácidos inorgánicos a partir de los cuales se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares. Los ácidos orgánicos a partir de los cuales se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido trifluoroacético, ácido sulfosalicílico y similares.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1 se pueden sintetizar a partir de un resto básico o ácido, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse haciendo reaccionar formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato, o similares, de Na+, Ca2+, Mg2+, o K+), o haciendo reaccionar formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Dichas reacciones se realizan típicamente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, es deseable el uso de medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, cuando sea posible. Se pueden encontrar listas de sales adecuadas adicionales, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
Cualquier fórmula dada en el presente documento también pretende representar formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente para los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en el presente documento excepto que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa seleccionados. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1 incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 16F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1 pueden incluir diversos compuestos marcados con isotopos en los que los isótopos radioactivos, tales como 2H, 3H, 13C y 14C, están presentes. Los compuestos marcados isotópicamente de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1 generalmente se pueden preparar mediante técnicas de convención conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos adjuntos usando reactivos marcados isotópicamente apropiados en lugar de los reactivos no etiquetados previamente empleados.
Composiciones farmacéuticas
La presente divulgación incluye, en al menos una realización, composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
La expresión "excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable" incluye compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico, son adecuados para su uso en contacto con tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable. Los excipientes, vehículos y diluyentes farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica y cualquier selección de excipientes, vehículos y diluyentes farmacéuticamente aceptables reales depende del uso pretendido y del método de administración de la composición farmacéutica.
Las composiciones divulgadas pueden estar en una forma adecuada para su uso oral (por ejemplo, como comprimidos, pastillas, cápsulas duras o blandas, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para su uso tópico (por ejemplo, como cremas, ungüentos, geles, o soluciones o suspensiones acuosas u oleosas), para administración por inhalación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para administración por insuflación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido), o para administración parenteral (para ejemplo, como una solución acuosa u oleosa estéril para dosificación intravenosa, subcutánea o intramuscular, o como un supositorio para la dosificación rectal).
Las composiciones divulgadas pueden obtenerse por procedimientos convencionales usando excipientes farmacéuticos convencionales, ya conocidos en la técnica. Por lo tanto, las composiciones destinadas para su uso oral pueden contener, por ejemplo, uno o más agentes colorantes, edulcorantes, saporíferos y/o conservantes.
Los excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados para una formulación de comprimido incluye, por ejemplo, diluyentes inertes tales como lactosa, carbonato de sodio, fosfato de calcio o carbonato de calcio; agentes de granulación y desintegración tales como almidón de maíz o ácido alogénico; agentes aglutinantes tales como almidón; agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco; agentes conservantes tales como phidroxibenzoato de etilo o propilo; y antioxidantes, tales como ácido ascórbico. Las formulaciones de comprimido pueden estar sin recubrir o recubiertas para modificar su desintegración y la absorción posterior del principio activo dentro del tracto gastrointestinal, o para mejorar su estabilidad y/o apariencia usando agentes de recubrimiento convencionales y procedimientos ya conocidos en la técnica.
Las composiciones para uso oral pueden estar en forma de cápsulas de gelatina dura en las que el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las que se mezcla el principio activo agua o aceite, tal como aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas generalmente contienen el principio activo en forma de polvo fino o en forma de partículas nano o micronizadas junto con uno o más agentes de suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes tales como lecitina o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos (por ejemplo estearato de polioxietileno), o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecanoetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de polietilensorbitán. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes tales como p-hidroxibenzoato de etilo o propilo; antioxidantes tales como ácido ascórbico; agentes colorantes; agentes saporíferos; y/o agentes edulcorantes tales como sacarosa, sacarina o aspartamo.
Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal tal como aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas también pueden contener un agente espesante tal como cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y agentes saporíferos para proporcionar una preparación oral agradable al paladar. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua generalmente contienen el principio activo junto con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes de dispersión o agentes humectantes adecuados y los agentes de suspensión se ejemplifican mediante los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales tales como edulcorantes, saporíferos y colorantes.
Las composiciones farmacéuticas también pueden estar en la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, tal como, por ejemplo, parafina líquida o una mezcla de cualquiera de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser, por ejemplo, gomas de origen natural tales como goma arábiga o goma tragacanto, fosfátidos de origen natural tales como soja, lecitina, un éster o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol (por ejemplo, monooleato de sorbitán) y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno tal como monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes, saporíferos, y conservantes.
Las composiciones farmacéuticas también pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleosa inyectable estéril, que se puede formular de acuerdo con procedimientos conocidos usando uno o más de los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión apropiados, que se han mencionado anteriormente. Una preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, una solución en 1,3-butanodiol.
Las composiciones para administración por inhalación y/o insuflación pueden estar en forma de un aerosol presurizado convencional dispuesto para dispensar el principio activo como un aerosol que contiene gotitas sólidas o líquidas finamente divididas. Se pueden usar propulsores de aerosol convencionales tales como hidrocarburos fluorados volátiles y el dispositivo de aerosol se dispone convenientemente para dispensar una cantidad medida de principio activo. Para obtener más información sobre la formulación, se remite al lector al Capítulo 25.2 en el Volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
La cantidad de principio activo que se combina con uno o más excipientes para producir una única forma de dosificación variará necesariamente dependiendo del huésped tratado y la ruta particular de administración. Para obtener más información sobre Vías de administración y regímenes de dosificación, se remite al lector al Capítulo 25.3 en el Volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990. Dependiendo de, por ejemplo, la potencia y las características físicas del compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo (es decir, principio activo), las composiciones farmacéuticas que se pueden mencionar incluyen aquellas en las que el principio activo está presente en al menos el 1 % (o al menos el 10%, al menos el 30% o al menos el 50%) en peso. Es decir, la relación de principio activo con respecto a los otros componentes (es decir, la adición de excipiente, vehículo y diluyentes) de la composición farmacéutica es de al menos 1:99 (o al menos 10:90, al menos 30:70 o al menos 50:50) en peso.
Los compuestos de Fórmula (1), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden administrarse una vez, dos veces, tres veces al día o muchas veces en un período de 24 horas según sea médicamente necesario. Un experto en la técnica podría fácilmente determinar la cantidad de cada dosis individual en función del sujeto. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (1), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se administran en una forma de dosificación, o en algunas realizaciones, se administran en múltiples formas de dosificación.
Métodos
Los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden inhibir la JAK1 cinasa y la actividad de proteína asociada relacionada con la JAK1 cinasa, por ejemplo, como se muestra en los ensayos ilustrados a continuación y, por lo tanto, pueden ser útiles en el tratamiento de aquellas afecciones en las que se desea y/o se requiere dicha inhibición. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden ser útiles en el tratamiento de aquellas afecciones en las que se desea y/o se requiere que JAK1 cinasa se inhiba o se disminuya, o en algunas realizaciones, afecciones en las que se desea y/o se requiere que la actividad proteica relacionada con JAK1 cinasa se inhiba o se disminuya. Se espera que los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1 y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos sean útiles en el tratamiento de trastornos que pueden beneficiarse de la inhibición de JAK1 cinasa, por ejemplo, una enfermedad/trastorno respiratorio y/o inflamación y/o una enfermedad que tiene un componente inflamatorio.
[0053] Por consiguiente, en una realización, se divulga un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en la inhibición de JAK1 cinasa.
En otra realización, se divulga el uso de un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para inhibir JAK1 cinasa.
Aún en otra realización, se divulgan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la inhibición de JAK1 cinasa.
En al menos una realización de la presente divulgación, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria de la enzima JAK1 (CI50) menor que o igual a aproximadamente 0.010 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM. En al menos otra realización, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria (CI50) de menos de o igual a aproximadamente 0.050 micromolar en un ensayo de JAK-STAT6-luciferasa inducido por IL-13 celular.
En otra realización de la presente divulgación, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria de la enzima JAK1 (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.010 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, y una actividad inhibitoria de la enzima JAK2 y JAK3 (CI50) de más de o igual a aproximadamente 0.5 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM. En al menos otra realización, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria de la enzima JAK1 (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.010 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, una actividad inhibitoria de la enzima JAK2 y JAK3 (CI50) mayor de o igual a aproximadamente 0.5 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, y una actividad inhibitoria (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.050 micromolar en un ensayo de JAK-STAT6-luciferasa inducido por IL-13 celular.
En otra realización, se divulga un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1.
En otra realización, se divulga el uso de un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento o formulación para tratar un trastorno relacionado con JAK1.
En otra realización, se divulga el uso de un compuesto de Fórmula (1), (la), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno relacionado con JAK.
En otra realización, se divulgan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1.
[0062] De acuerdo con la presente divulgación, la expresión "trastorno relacionado con JAK1" incluye, por ejemplo, diabetes tipo 1, lupus, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, psoriasis, asma, dermatitis atópica, trastornos tiroideos autoinmunes, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, COPD, vitíligo, y alopecia areata.
Los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se pueden administrar en dosis variables dependiendo de la vía de administración. Por ejemplo, las dosificaciones orales pueden variar entre aproximadamente 0.01 mg/kg de peso corporal al día (mg/kg/día) a aproximadamente 100 mg/kg/día, tal como de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 20 mg/kg/día, por ejemplo, de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 15 mg/kg/día, por ejemplo, aproximadamente de 12.5 mg/kg/día. Las dosificaciones intravenosas pueden variar de entre aproximadamente 0.5 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día durante la infusión a velocidad constante. Las dosificaciones inhaladas pueden variar de entre aproximadamente 0.0001 mg/kg/día a aproximadamente 0.10000 mg/kg/día, tal como de aproximadamente 0.0001 mg/kg/día a aproximadamente 0.001 mg/kg/día, por ejemplo aproximadamente 0.0006 mg/kg/día. Las dosificaciones inhaladas también pueden variar de acuerdo con el dispositivo de administración utilizado. Por ejemplo, las dosificaciones inhaladas a través de un dispositivo inhalador de polvo seco pueden variar de entre aproximadamente 0.010 mg/kg/día a aproximadamente 0.020 mg/kg/día.
En cualquier caso, el médico, o la persona capacitada, podrá determinar la dosis real que será más adecuada para un paciente individual, que es probable que varíe con la vía de administración, el tipo y la gravedad de la afección que se va a tratar, así como la especie, edad, peso, sexo, función renal, función hepática y respuesta del paciente particular a tratar. Las dosificaciones mencionadas anteriormente son ejemplares del caso promedio; puede haber, por supuesto, casos individuales en los que se justifiquen intervalos de dosificación mayores o menores, y estos están dentro del alcance de esta invención
Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad efectiva" incluye una cantidad de un compuesto de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente del mismo, que provocará una respuesta biológica o médica en un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con JAK1 y/o la mejora de los síntomas de un trastorno relacionado con JAK1 y/o la ralentización o retraso de la progresión de un trastorno relacionado con JAK1. El efecto puede ser objetivo (es decir, medible mediante alguna prueba o marcador) o subjetivo (es decir, el sujeto da una indicación o siente un efecto).
El término "sujeto" incluye mamíferos de sangre caliente, por ejemplo, primates, vacas, cerdos, ovejas, perros, gatos, conejos, ratas y ratones. En algunas realizaciones, el sujeto es un primate, por ejemplo, un humano. En algunas realizaciones, el sujeto padece un trastorno relacionado con JAK1. En algunas realizaciones, el sujeto necesita tratamiento (por ejemplo, el sujeto se beneficiaría biológica o médicamente del tratamiento).
El término "inhibir", "inhibición" o "que inhibe" incluye una disminución en la actividad inicial de una actividad o proceso biológico. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, inhiben JAK1 cinasa. En algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, son inhibidores JAK1 selectivos. La expresión "inhibidor selectivo de JAK1" incluye los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que inhiben JAK1 pero son inactivos o menos activos contra jAK2 o JAK3, o contra tanto JAK2 como JAK3. Por lo tanto, en algunas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, inhiben la JAK1 cinasa pero son inactivos o menos activos contra JAK2 o JAK3, o contra tanto JAK2 como JAK3. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria de la enzima JAK1 (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.010 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, y una actividad inhibitoria de la enzima JAK2 y JAK3 (CI50) de más de o igual a aproximadamente 0.5 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM. En al menos otra realización, los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, muestran una actividad inhibitoria de la enzima JAK1 (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.010 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, una actividad inhibitoria de la enzima JAK2 y JAK3 (CI50) mayor de o igual a aproximadamente 0.5 micromolar a una concentración fisiológica de ATP de 5 mM, y una actividad inhibitoria (CI50) menor de o igual a aproximadamente 0.050 micromolar en un ensayo de JAK-STAT6-luciferasa inducido por IL-13 celular.
La expresión "tratar", "que trata" y "tratamiento" incluye la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con la JAK1 cinasa y la mejora de uno o más síntomas de un trastorno relacionado con JAK1 en un sujeto, o la desaceleración o retraso de la progresión de un trastorno relacionado con JAK1 en un sujeto. Los compuestos de Fórmula (I), (la), (Ib) o la Tabla 1, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, están así indicados en el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de las afecciones mencionadas anteriormente.
Ejemplos
Los compuestos de Fórmula (I), (Ia), (Ib), o la Tabla 1, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se pueden preparar usando los métodos y procedimientos descritos en el presente documento, o usando métodos y procedimientos similares. Se apreciará que cuando se dan condiciones de proceso típicas o ilustradas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones de proceso a menos que se indique otra cosa. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos o disolventes particulares usados, pero dichas condiciones pueden determinarse por un experto en la técnica.
Además, como será evidente para los expertos en la técnica, pueden ser necesarios grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales experimenten reacciones no deseadas. La elección de un grupo protector adecuado para un grupo funcional particular, así como las condiciones adecuadas para la protección y la desprotección se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, se describen numerosos grupos protectores, y su introducción y eliminación, en T. W. Greene y G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Tercera Edición, Wiley, Nueva York, 1999, y referencias citadas en el mismo. Los procesos para preparar compuestos de la invención se ilustran mediante los procedimientos a continuación. La asignación estereoquímica de los enantiómeros aislados se realizó en base a la actividad biológica contra JAK1 en los Estudios de Inhibición de Enzimas, como se muestra en la Tabla 24.
Intermedio 1: 7-nitro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1H-indol
Etapa 1
Una solución de NaOH (599 g, 14986.55 mmol) en agua (1500 ml) se añadió a una mezcla agitada de 7-nitro-1 H-indol (243 g, 1498.65 mmol) e hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (50.9 g, 149.87 mmol) en DCM (3000 ml) a 25 °C, durante un periodo de 5 minutos al aire. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 20 minutos. Se añadió cloruro de 4-metilfenilsulfonilo (371 g, 1948.25 mmol) al aire y la mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (2000 ml), y se lavó secuencialmente con agua (2 x 500 ml), K2CO3 acuoso al 10 % (2 x 500 ml), y HCl 1 M (2 x 500 ml) y NaCl saturado (2 x 500 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó. Cuando quedaban aproximadamente 200 ml de DCM, se añadió EtOAc (500 ml). El disolvente se eliminó a presión reducida. Cuando quedaban aproximadamente 200 ml de EtOAc, se añadió MTBE (1000 ml). El precipitado se recogió por filtración, se lavó con MTBE (1000 ml) y se secó al vacío para proporcionar 7-nitro-1 -tosil-1 H-indol (402 g, 85 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 52.39 (s, 3H), 7.09 (d, 1H), 7.40 - 7.55 (m, 3H), 7.75 - 7.85 (m, 3H), 7.95 - 8.00 (m, 1H), 8.06 (d, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 317.
Etapa 2
Se añadió gota a gota bromo (81 ml, 1580 mmol) a 7-nitro-1-tosil-1 H-indol (50 g, 158 mmol) en CCU (1000 ml) a 80 °C. La solución resultante se agitó a 80 °C durante 6 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se concentró al vacío y el residuo se lavo con EtOAc para proporcionar 3-bromo-7-nitro-1-tosil-1H-indol (53 g, 85%) en forma de un sólido de color pardo.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 52.41 (s, 3H), 7.55 - 7.62 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 7.85 - 7.92 (m, 3H), 7.96 (d, 1H), 8.49 (s, 1H).
m/z (ES-), [M-H]+ = 393.
Etapa 3
Una solución de 3-bromo-7-nitro-1-tosil-1H-indol (200 g, 506 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (193 g, 759 mmol), acetato potásico (99 g, 1012 mmol) y PdCh(dppf) (18.5 g, 25.3 mmol) en 1,4-dioxano (1500 ml) se desgasificó con nitrógeno tres veces y la mezcla de reacción se agitó a 90 °C durante 8 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El sólido se trató con agua, se filtró, se lavó con metanol y se secó al vacío para proporcionar 7-nitro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1H-indol (150 g, 67 %) en forma de un sólido de color gris.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 1.41 (s, 12H), 2.47 (s, 3H), 7.38 - 7.43 (m, 3H), 7.66 (d, 1H), 7.87 (d, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.29 - 8.32 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 443.
Intermedio 2: 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol
Se cargó 7-nitro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1H-indol, Intermedio 1 (50 g, 113 mmol) en un reactor de 1 l equipado con un condensador y entrada de nitrógeno. Se añadieron 2,4-didoro-5-metilpirimidina (24 g, 147 mmol) y 2-metiltetrahidrofurano (200 ml, 4 vol) al reactor. Una solución de carbonato potásico (46.9 g, 339 mmol) en agua (10 ml, 2 vol) se desgasificó y se llevó de nuevo con N2 y se añadió a la mezcla de reacción. El reactor se desgasificó y se llenó de nuevo (3 x N2), se añadió aducto de dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio diclorometano (4.62 g, 5.65 mmol) a la mezcla de reacción, se desgasificó y se llenó de nuevo con N2 (3 x) y la reacción se calentó entonces lentamente a 60 °C. Después de 30 min, se formó un precipitado. La reacción se agitó durante 1 h y la temperatura del reactor se ajustó a 25 °C. Después de 30 min de enfriamiento, la temperatura interna fue de 42 °C y se añadió heptano (1 vol). La temperatura del reactor se ajustó entonces a 5 °C. A 20 °C, se añadió agua (4 vol) y la refrigeración continuó a 5 °C durante 1 hora y después se agito durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró en un embudo Büchner y el sólido se lavó con agua (4 vol) y EtOAc (2 vol) para proporcionar un sólido de color amarillo claro que se secó en un flujo de nitrógeno. El sólido se agitó en EtOAc (1 vol), se filtró y el sólido resultante se secó al vacío para proporcionar (42.8 g). Las aguas madre se combinaron y se evaporaron al vacío para proporcionar (20 g). Se empaquetaron 700 g de sílice suspendida en heptano en una columna (10 x 300 mm). Los sólidos se disolvieron en DCM, se combinaron y se cargaron en la columna. Después de la elución completa de DCM, la columna se eluyó con EtOAc al 20 % en heptanos, seguido de un gradiente de EtOAc al 20 - 50 % en heptano. El compuesto deseado se combinó y se evaporó al vacío. El residuo se suspendió en EtOAc al 50 % en heptano (0.5 vol), se filtró y se secó en un flujo de nitrógeno para proporcionar 3-(2-cloro-5-metilpirimidi n-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol (35.6 g, 71 %) en forma de un sólido.
H RMN (400 MHz, DMSO-de) 52.40 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 7.54 (d, 2H), 7.61 (t, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.95 - 8.04 (m, 1H), 8.40 (dd, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.79 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 442.9.
Intermedio 3: 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol
Se disolvió 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 -tosil-1 H-indol, Intermedio 2 (2.477 g, 5.59 mmol) en 2:1 de 1,4­ dioxano/agua (75 ml) y se añadió hidróxido sódico 3.8 M (22 ml, 83.9 mmol). La mezcla de reacción resultante se calentó a 50 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se neutralizó mediante la adición de HCl 2 M. El sólido formado se eliminó por filtración, se lavó con EtOAc, Et2O y se secó al vacío para proporcionar 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol (1.894 g, 117 % (húmedo)) en forma de un sólido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 52.52 (s, 3H), 7.47 (t, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.90 (d, 1H), 12.66 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 289.2.
Intermedio 4: 3-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol
Etapa 1
Se añadió PdCh(dppf)*CH2Cl2 (0.554 g, 0.68 mmol) a 7-nitro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1H-indol, Intermedio 1 (3.00 g, 6.78 mmol), 2,4,5-tricloropirimidina (1.617 g, 8.82 mmol) y K2CO3 (2.81 g, 20.35 mmol) en 4:1 de THF/agua (75 ml) a 25 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (150 ml) y se lavó con salmuera (150 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrapida sobre sílice usando un gradiente de EtOAc al 8 - 30 % en éter de petróleo como fase móvil. Las fracciones puras se evaporaron al vacío y el residuo se cristalizó en acetonitrilo para proporcionar 1-((4-clorofenil)sulfonil)-3-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol (1.43 g, 43.4 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 52.42 (s, 3H), 7.52 (d, 2H), 7.66 (t, 1H), 7.91 - 8.14 (m, 3H), 8.52 (dd, 1H), 8.90 (s, 1H), 9.08 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 463.
Etapa 2
Una solución de NaOH (2.202g, 55.05 mmol) en agua (30 ml) se añadió a una suspensión agitada de 3-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol (1.7 g, 3.67 mmol) en 1,4-dioxano (30 ml) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 1 hora y después se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con agua (50 ml), NaHCO3 saturado (50 ml), salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar 3-(2,5-dicloropirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol, (0.500 g, 44.1 %) en forma de un sólido de color amarillo.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 57.34 (t, 1H), 8.06 (dd, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.87 (dd, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 309.
Intermedio 5: 2-fluoro-3-(metilsulfonil)anilina
Etapa 1
Se añadió en una porción yoduro de cobre (I) (1.002 g, 5.26 mmol) a 3-bromo-2-fluoroanilina (5 g, 26.31 mmol), N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (0.464 g, 5.26 mmol) y yoduro sódico (7.89 g, 52.63 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a 25 °C durante un periodo de 1 minuto en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a 110 °C durante 1 día. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrapida sobre sílice usando un gradiente de EtOAc al 5 - 30 % en éter de petróleo como fase móvil. Las fracciones puras se evaporaron al vacío para proporcionar 2-fluoro-3-yodoanilina (5.00 g, 80 %) en forma de un aceite de color pardo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 55.32 (s a, 2H), 6.59 - 6.83 (m, 2H), 6.83 - 6.93 (m, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 238.
Etapa 2
Se añadió yoduro de cobre (I) (0.402 g, 2.11 mmol) a 2-fluoro-3-yodoanilina (5.00 g, 21.10 mmol), metanosulfinato sódico (3.23 g, 31.64 mmol), N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (0.558 g, 6.33 mmol) en DMSO (20 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a 95 °C durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con agua (50 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 1:1 de EtOAc/éter de petróleo para proporcionar 2-fluoro-3-(metilsulfonil)anilina (3.20 g, 80 %) en forma un aceite incoloro que solidificó en reposo.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 53.20 (s, 3H), 3.96 (s a, 2H), 6.97 - 7.13 (m, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 190.
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando el sulfinato indicado para dar el Intermedio 6 descrito en la Tabla 2:
Tabla 2
Figure imgf000023_0001
Intermedio 7: (3-bromo-2-fluorofenil)(etil)sulfano
Se añadió gota a gota diisopropilamida de litio (17.14 ml, 34.29 mmol) a 1-bromo-2-fluorobenceno (5.00 g, 28.57 mmol) en THF (250 ml) a -78 °C durante un periodo de 10 minutos en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 60 minutos. Se añadió gota a gota 1,2-dietildisulfano (5.20 g, 42.54 mmol) durante 20 minutos. La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 60 minutos y después a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 250 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrapida sobre sílice usando un gradiente de EtOAc al 0 - 10 % en pentano como eluyente. Las fracciones puras se evaporaron al vacío para proporcionar (3-bromo-2-fluorofenil)(etil)sulfano (5.27 g, 78 %) en forma de un aceite incoloro.
1H RMN (300 MHz, CDCla) 1.32 (t, 3H), 2.95 (c, 2H), 6.90 - 7.04 (m, 1H), 7.22 - 7.34 (m, 1H), 7.35 - 7.47 (m, 1H).
Intermedio 8: (3-(etiltio)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo
Se añadió en una porción (3-bromo-2-fluorofenil)(etil)sulfano, Intermedio 7 (4.14 g, 17.61 mmol) a ciclohexano-1,2-diamina (6.03 g, 52.82 mmol), ácido fosfórico, sal potásica (3.74 g, 17.61 mmol), yoduro de cobre (I) (8.38 g, 44.02 mmol) y carbamato de ferc-butilo (10.31 g, 88.04 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) a 25 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 100 °C durante 6 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrapida sobre sílice usando un gradiente de EtOAc al 0 - 10 % en pentano. Las fracciones puras se evaporaron al vacío para proporcionar (3-(etiltio)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo (1.412 g, 29.6 %) en forma de un aceite de color amarillo.1
1H RMN (400 MHz, CDCla) 51.31 (t, 3H), 1.55 (s, 9H), 2.94 (c, 2H), 6.73 (s a, 1H), 6.91 - 7.19 (m, 2H), 7.92 - 8.05 (m, 1H).
Intermedio 9: (3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo
Se añadió en una porción de (3-(etiltio)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo, Intermedio 8 (1.4 g, 5.16 mmol) a ácido 3-clorobenceno-1-carboperoxoico (2.67 g, 15.48 mmol) en DCM (15 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml), se filtró, se lavó con NaHCO3 saturado (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 , se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa desarrollada con 3:1 de éter de petróleo/EtOAc para proporcionar (3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo, (1.650 g, 105 %) en forma de un aceite de color amarillo. m/z (ES-), [M-H]+ = 302.
Intermedio 10: 3-(etilsulfonil)-2-fluoroanilina
Se añadió ácido 2,2,2-trifluoroacético (10.0 g, 87.70 mmol) a (3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)carbamato de ferc-butilo, Intermedio 9 (1.65 g, 5.44 mmol) en d Cm (20 ml) a 20 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se evaporó al vacío, se disolvió de nuevo en DCM (50 ml), se lavó con NaHCO3 saturado (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío para proporcionar 3-(etilsulfonil)-2-fluoroanilina (0.786 g, 71.1 %) en forma de un aceite de color amarillo.
1H RMN 5 (CDCl3, 400 MHz) 51.32 (t, 3H), 3.32 (c, 2H), 3.60 - 4.10 (s a, 2H), 7.00 - 7.17 (m, 2H), 7.17 - 7.34 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 204.
Intermedio 11: 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina
Etapa 1
Se cargaron 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol, Intermedio 2 (20.0 g, 45.16 mmol), clorhidrato de 2-fluoro-3-(metilsulfonil)anilina, Intermedio 5 (11.2 g, 49.68 mmol), carbonato de cesio (30.9 g, 94.8 mmol), Pd2(dba)3 (4.14 g, 4.52 mmol) y 2'-(diciclohexilfosfino)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (3.55 g, 9.03 mmol) en un reactor de 1 l en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron 2-metiltetrahidrofurano (200 ml) y agua (100 ml) a temperatura ambiente. La reacción se evacuó, se llenó de nuevo con N2 (3 x), después se calentó a 72.5 °C (Tr = 80 °C) y se agitó durante 4 h (se formó un precipitado de color pardo después de 3 h). Se añadió heptano (400 ml, 20 vol), el calentamiento se detuvo y la reacción se enfrió a 17 °C durante 30 min. El precipitado se agitó durante 10 min y después se filtró en un embudo büchner. La torta de filtro se lavó con agua (2 vol x 3), 1:2 de EtOAc/heptano (3 vol x 3) y después se secó al vacío/nitrógeno para proporcionar N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-5-metil-4-(7-nitro-1 -tosil-1 H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (25.93 g, 96 %) en forma de un sólido de color pardo. Continuó sin purificación adicional. m/z (ES+), [M+H]+ = 596.2.
Etapa 2
En un reactor de 1 l, se cargó 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 -tosil-1 H-indol (27.0 g, 45.3 mmol) a temperatura ambiente, se añadieron 2-metiltetrahidrofurano (250 ml) y NaOH 3.8 M (ac.) (250 ml) para dar una mezcla insoluble de color pardo. La mezcla se calentó a 85 °C y se agitó durante una noche. Se cargó heptano (10 vol) en la mezcla de reacción, se enfrió a 17 °C durante 40 min y se agitó durante 30 min. El sólido se filtró con un embudo büchner y la torta de filtró se lavó con agua (3 x 40 ml). pH del lavado ac.: 10-11 en papel de pH. Se cargaron 40 ml de agua a la torta de filtró y se suspendió mientras se ajustó el pH a 7 por HCl 0.5 N. El sólido se filtró de nuevo con un embudo büchner, se lavó con agua (50 ml), se secó en una atmósfera de nitrógeno/vacío durante 20 min y después se lavó con heptano/EtOAc (4 x 40 ml). (material de partida sin reaccionar al 45 % por LCMS, el compuesto se hizo reaccionar de nuevo en las mismas condiciones). El sólido se cargó en un reactor de 1 l y se añadieron 2-metiltetrahidrofurano (250 ml) y NaOH 3.8 M (ac.) (250 ml) para dar una mezcla insoluble de color pardo. La mezcla se calentó a 85 °C y se agitó durante una noche. Se cargó heptano (10 vol) en la mezcla de reacción, se enfrió a 17 °C durante 40 min y se agitó durante 30 min. El sólido se filtró con un embudo büchner y la torta de filtró se lavó con agua (3 x 40 ml). pH del lavado ac.: 10-11 en papel de pH. Se cargaron 40 ml de agua a la torta de filtró y se suspendió mientras se ajustó el pH a 7 por HCl 0.5 N. El sólido se filtró de nuevo con un embudo büchner, se lavó con agua (50 ml), se secó en una atmósfera de nitrógeno/vacío durante 20 min, después se lavó con heptano/EtOAc (4 x 40 ml) y se secó para proporcionar N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-5-metil-4-(7-nitro-1 H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (20.0 g, 100 %).
m/z (ES+), [M+H]+ = 442.1.
Etapa 3
Se cargó N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-5-metil-4-(7-nitro-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (11.0 g, 24.9 mmol) en un reactor de 1 l y se añadió 2:1 de 2-metiltetrahidrofurano/EtOH (330 ml). El reactor se calentó a 80 °C, se agitó durante 10 min para la solubilidad y después se enfrió lentamente a 30 °C. Se añadieron Pd al 10 %-C (2.00 g, 24.9 mmol, húmedo al 50 %) y una solución de formiato de amonio (9.43 g, 149.5 mmol) en agua (10 ml) (endotérmica) a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó lentamente a 80 °C y se agitó durante 15 min. Después se dejó enfriar a 40-50 °C, se filtró en un embudo Büchner en una atmósfera de nitrógeno (con precaución), se lavó la torta con 1:1 de THF caliente/EtOH (50 ml) y el filtrado se concentró y se coevaporó al vacío con DCM (50 ml) para proporcionar 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina 10.0 g, 98 %) en forma de un sólido de color pardo.
m/z (ES+), [M+H]+ = 412.4.
Intermedio 12: N-(3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)-5-metil-4-(7-nitro-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina
Se añadieron Pd2(dba)3 (159 mg, 0.17 mmol) y 2'-(diciclohexilfosfino)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (136 mg, 0.35 mmol) a 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol, Intermedio 3 (500 mg, 1.73 mmol), 3-(etilsulfonil)-2-fluoroanilina, Intermedio 10 (352 mg, 1.73 mmol) y carbonato de cesio (1693 mg, 5.20 mmol) en DMF (15 ml) a 23 °C en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 80 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y el disolvente se evaporó al vacío para proporcionar N-(3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)-5-metil-4-(7-nitro-1 H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (1.22 g, 155 %) en forma de un sólido de color oscuro. Se usó sin purificación adicional. m/z (ES+), [M+H]+ = 456.
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando los Intermedios de partida indicados para dar los Intermedios 13-14 descritos en la Tabla 6:
Tabla 6
Figure imgf000025_0001
Intermedio 15: 3-(2-((3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina
Se agitaron N-(3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)-5-metil-4-(7-nitro-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina, Intermedio 12 (1.406 g, 3.09 mmol), cloruro de amonio (0.991 g, 18.52 mmol) y hierro (1.034 g, 18.52 mmol) en 1:1:1 de MeOH/THF/agua (75 ml) a 60 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 10:1 de DCM/MeOH como eluyente para proporcionar 3-(2-((3-(etilsulfonil)-2-fluorofenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-amina (0.600 g, 46 %) en forma de un sólido de color pardo.
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5 1.11 (t, 3H), 2.37 (s, 3H), 3.33 (c, 2H), 5.12 (s a, 2H), 6.39 (d, 1H), 6.74 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.44 - 7.66 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.34 (t, 1H), 9.03 (s, 1H), 11.34 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 426.
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando el intermedio de partida indicado para dar los Intermedios 16-17 descritos en la Tabla 7:
Tabla 7
Figure imgf000026_0001
Intermedio 18: 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina
Etapa 1
Una solución de carbonato potásico (40.9 ml, 678.28 mmol) se cargó en un reactor de 1 l equipado con un termómetro y una entrada de nitrógeno. La mezcla se desgasificó tres veces con N2 a temperatura ambiente (23 °C). Se añadieron 7-nitro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1H-indol, Intermedio 1 (100 g, 226.09 mmol), 2,4-dicloro-5-fluoropirmidina (49.1 g, 293.92 mmol) y metil THF (1000 ml) y se agitaron durante 10 min a temperatura ambiente. La mezcla resultante se desgasificó 3 veces con nitrógeno. Se añadió un aducto de dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio diclorometano (9.23 g, 11.30 mmol) a la mezcla de reacción y la mezcla resultante se desgasificó y se llenó de nuevo (3 x N2) y se agitó a 23 °C durante una noche para dar un precipitado de color amarillo. Se cargó heptano (500 ml) en la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. Después, la agitación se detuvo y el precipitado se dejó sedimentar. La mezcla de reacción se enfrió to 5 °C y se agitó durante 1 h. El precipitado se filtró a través de un embudo de vidrio, se lavó con agua hasta que el agua alcanzó el pH neutro (13 vol, lavado de desplazamiento, 1.3 l). Después, la torta de filtro se lavó con una mezcla 1:1 de EtOAc/heptano (5 x 2 vol, 1 l) a temperatura ambiente, heptano (2 x 200 ml, 2 x 2 vol) y el sólido se secó al vacío a 35 °C durante una noche para proporcionar 3-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol (97 g, 89 % de rendimiento eficaz).
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 52.41 (s, 3H), 7.51 (d, 2H), 7.69 (t, 1H), 7.95 (d, 2H), 8.01 (dd, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.81 (dd, 1H), 9.01 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 447.2.
Etapa 2
Se añadieron 3-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-il)-7-nitro-1-tosil-1 H-indol (89.5 g, 200.30 mmol), clorhidrato de 2-fluoro-3-(metilsulfonil)anilina, Intermedio 5 (54.2 g, 240.36 mmol), Pd2(dba)3 (9.17 g, 10.01 mmol) y 2'-(diciclohexilfosfino)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (7.88 g, 20.03 mmol) en un reactor de 2 l en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron 2-2-metiltetrahidrofurano desgasificado (1000 ml) y una solución de carbonato de cesio (137 g, 420.62 mmol) en agua (450 ml) a temperatura ambiente y la mezcla de reacción se desgasificó (x 7). Después, la reacción se calentó a 72.6 °C y después se agitó durante una noche. La reacción se enfrió a 4-5 °C y se agitó durante al menos 30 min. El sólido se filtró en un embudo Büchner, se lavó con 2-2-metiltetrahidrofurano frío (300 ml, 3 vol), agua (3 x 300 ml, 3 vol) y una mezcla 1:2 de EtOAc/heptano (3 x 300 ml, 3 vol) y se secó al vacío a 40 °C para proporcionar 5-fluoro-N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-4-(7-nitro-1 -tosil-1 H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (77.89 g, 65 % de rendimiento eficaz) en forma de un sólido de color pardo.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 52.56 - 2.64 (m, 3H), 3.42 (d, 3H), 7.52 - 7.64 (m, 4H), 7.73 (t, 1H), 7.98 - 8.09 (m, 3H), 8.22 (t, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.79 (d, 1H), 8.94 (d, 1H), 9.89 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 600.2.
Etapa 3
Se cargó 5-fluoro-N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-4-(7-nitro-1-tosil-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (97.7 g, 129.87 mmol) en un reactor de 5 l a temperatura ambiente. Se añadieron una mezcla de THF (100 ml) y NaOH 3.8 M (ac.) (1000 ml) para dar una mezcla insoluble de color pardo. La mezcla se calentó a 75 °C con reflujo y se agitó durante el fin de semana. Se cargaron THF (10 vol) y heptano (10 vol) en la mezcla de reacción. Después, se dejó enfriar a 17 °C durante 40 min, se agitó durante 60 min y el sólido se filtró en un embudo Büchner. La torta de filtro se lavó con ácido cítrico 1 M (500 ml, hasta un pH neutro), agua (5 x 300 ml, hasta pH neutro) seguido de heptano/EtOAc (4 x 400 ml). El sólido se secó al vacío para proporcionar 5-fluoro-N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-4-(7-nitro-1H-indol-3-il)pirimidin-2- amina (55.0 g, 95 %).
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 53.27 - 3.38 (m, 3H), 7.30 (t, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.64 (t, 1H), 8.11 - 8.29 (m, 3H), 8.52 (d, 1H), 8.98 (d, 1H), 9.60 (s, 1H), 12.57 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 446.2.
Etapa 4
A una suspensión agitada de 5-fluoro-N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-4-(7-nitro-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (59.5 g, 123.5 mmol, 92.5 % en peso) en 2:1 de THF/EtOH (600 ml) a temperatura ambiente y en una atmósfera de nitrógeno se le añadieron Pd al 10 %/C (12.0 g, 123.5 mmol, húmedo al 50 %) y una solución de formiato de amonio (46.8 g, 741.4 mmol) en agua (50 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a 70 °C y se agitó durante 30 min. Se añadieron 12 g de carbono activado y la mezcla se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se enfrió a 40 °C y se filtró en un embudo Büchner (papel) en una atmósfera de nitrógeno. La torta de filtro se lavó con THF/EtOH (160 ml). El filtrado se concentró a 4 vol y la suspensión resultante se enfrió a temperatura ambiente y se filtró en una atmósfera de nitrógeno. El sólido se lavó con agua (2 vol), etanol (2 vol) y se secó en una atmósfera de nitrógeno/vacío a 40 °C para proporcionar 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1 H-indol-7-amina (44.3 g, 86 %) en forma de un sólido de color pardo claro.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 3.28 (s, 3H), 5.20 (s a, 2H), 6.43 (dd, 1H), 6.78 (t, 1H), 7.44 (t, 1H), 7.57 - 7.63 (m, 1H), 7.66 (d, 1H), 8.09 - 8.25 (m, 2H), 8.38 (d, 1H), 9.34 (s, 1H), 11.57 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 416.3.
Intermedio 19: 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol
Se añadió en porciones hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral) (1.32 g, 33.10 mmol) a una suspensión de color amarillo en agitación de 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1 H-indol, Intermedio 3 (6.37 g, 22.07 mmol) en THF anhidro (150 ml) a 0 °C. Después de agitar durante 25 min (detención del desprendimiento de gas) se añadió rápidamente gota a gota (2-(clorometoxi)etil)trimetilsilano (4.10 ml, 23.17 mmol). Después de 5 minutos, el baño de refrigeración se eliminó y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Se añadió más cantidad de hidruro sódico (dispersión al 60% en aceite mineral) (130 mg, 3.3 mmol) y (2-(clorometoxi)etil)trimetilsilano (0.4 ml, 2.3 mmol). La reacción se agitó durante 40 min más, después se interrumpió con NaHCO3 saturado (ac.) y la mezcla de color amarillo pálido se diluyó con Et2O. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con Et2O (x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en cloroformo y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice automatizada usando una columna de 120 g. Se usó un gradiente de EtOAc al 5 % en hexano durante 3 min seguido de EtOAc al 5 - 45 % en hexano durante 25 min como fase móvil. El producto se recogió usando la longitud de onda 254 nm para proporcionar 3- (2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol (9.21 g, 100 %) en forma de un sólido de color amarillo.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 -0.16 (s, 9H) 0.60 - 0.73 (m, 2H) 2.51 - 2.52 (m, 3H) 3.11 - 3.22 (m, 2H) 5.72 (s, 2H) 7.48 (t, 1H) 7.94 (d, 1H) 8.57 (s, 1H) 8.64 (s, 1H) 8.84 (d, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 419.2.
Intermedio 20: 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-7-amina
Etapa 1
Se añadió carbonato de cesio (2.333 g, 7.16 mmol) a 3-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol, Intermedio 19 (1.0 g, 2.39 mmol), 2-fluoro-3-(metilsulfonil)anilina, Intermedio 5 (0.542 g, 2.86 mmol), Pd2(dba)3 (0.219 g, 0.24 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2'-(N,N-dimetilamino)-bifenil (Davephos) (0.188 g, 0.48 mmol) en DMF (20 ml) a 25 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 3 horas y después se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 ml), se lavó con agua (50 ml), NaHCO3 saturado (50 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrapida sobre sílice usando un gradiente de EtOAc al 5 - 60 % en éter de petróleo como fase móvil. Las fracciones puras se evaporaron al vacío para proporcionar N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-5-metil-4-(7-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-3-il)pi rimidin-2-amina (0.940 g, 69 %) en forma de un sólido de color amarillo.
1H RMN (300 MHz, CDCb) 5 -0.08 (s, 9H), 0.74 - 0.87 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 3.22 - 3.38 (m, 5 H), 5.67 (s, 2H), 7.21 -7.33 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.48 - 7.60 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.89 (t, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 572.2.
Etapa 2
Se disolvieron N-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)-5-metil-4-(7-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-3-il)pirimidin-2-amina (2.76 g, 4.83 mmol), hierro (11.59 g, 207.59 mmol) y clorhidrato de amonio (11.1o g, 207.59 mmol) en 1:1:1 de MeOH/THF/agua (120 ml) y se agitaron a 70 °C durante 4 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente. El sólido se eliminó por filtración, el filtrado se vertió en agua (200 ml) y se extrajo con DCM (8 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se filtraron a través de un separador de fases y se evaporaron al vacío para proporcionar 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina (2.52 g, 96 %) en forma de una goma de color naranja.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.05 (s, 9H), 0.87 - 0.93 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.56 - 3.65 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 5.73 (s, 2H), 6.53 (d, 1H), 6.78 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.28 (d, 2H), 9.13 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 542.3.
Intermedio 21: (S)-2-bromo-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida
Se añadió en una porción DIPEA (0.679 ml, 3.89 mmol) a 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (200 mg, 0.49 mmol) y ácido (S)-2-bromopropanoico (149 mg, 0.97 mmol) en DMF (3 ml) a 25 °C. La solución resultante se enfrió a -40 °C y se añadió gota a gota anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico (619 mg, 0.97 mmol) a -40 °C y la agitación continuó durante 30 min. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (25 ml) y se lavó con salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 1:20 de MeOH/DCM como eluyente para proporcionar (S)-2-bromo-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, (224 mg, 84 %) en forma de un sólido de color pardo.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 5 1.86 (d, 3H), 2.42 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 4.78 - 4.90 (m, 1H), 7.01 (t, 1H), 7.38 - 7.52 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.25 - 8.34 (m, 2H), 9.21 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 11.37 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 546.
Intermedio 22: Diclorhidrato del ácido (R)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico
Etapa 1
Se pusieron 2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (250 g, 2.40 mol), DCM (1500 ml) y 2,6-dimetilpiridina (656.7 g, 6.13 mol) en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 3000 ml y la mezcla se enfrió a -78 °C. Se añadió gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico (630 g, 2.23 mol) con agitación a -78 °C y la solución resultante se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua (1000 ml), se lavó con HCl 1 M (3 x 500 ml) y salmuera (1 x 500 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Después, el residuo se añadió gota a gota en un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 3000 ml agitado que contenía 1-metilpiperazina (213.3 g, 2.13 mol), DCM (800 ml), agua (400 ml,) y carbonato potásico (491.3 g, 3.53 mol) a 0 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después se diluyó con DCM (500 ml). La mezcla resultante se lavó con agua (1 x 500 ml) y salmuera (500 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice preparativa usando un gradiente de acetato de etilo al 17 - 50 % en éter de petróleo como fases móviles para proporcionar 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (226 g, 68%) en forma de un aceite de color amarillo claro. m/z (ES+), [M+H]+ = 187.
Etapa 2
En un matraz de fondo redondo de 4 bocas de 3000 ml se puso hidrogenocloruro (2000 ml, 60.34 mol, 6 M/l) seguido de 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (226 g, 1.21 mol). La solución resultante se agitó durante una noche a 100 °C y después se concentró al vacío. La mezcla resultante se diluyó con acetonitrilo (1000 ml) y el sólido se recogió por filtración. El producto se recristalizó (x 5) a temperatura ambiente en etanol (1 g/20 ml) para proporcionar diclorhidrato del ácido (R)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico (124 g, 42 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (300MHZ,CDaOD) 51.69 - 1.71 (d, 3H), 3.04 (s, 3H), 3.83 (m, 8H), 4.35 - 4.42 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 173.
Intermedio 23: 2-((S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo
Se añadió 2,6-dimetilpiridina (0.672 ml, 5.77 mmol) a una solución enfriada a -78 °C de 2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (500 mg, 4.81 mmol) en DCM (5 ml). La mezcla se agitó durante 5 min y después se añadió gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico (0.974 ml, 5.77 mmol). La reacción se agitó durante 30 min, la refrigeración se eliminó y la mezcla de reacción se dejó llegar a la temperatura ambiente durante 30 min. La solución se lavó con HCl 1 M (ac.) (20 ml), se secó con un separador de fases y después se añadió lentamente a una mezcla de diclorhidrato de (S)-1,2-dimetilpiperazina (0.944 g, 5.05 mmol) suspendido en DCM (10 ml) y una solución de carbonato potásico (1.993 g, 14.42 mmol) en agua (10 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con salmuera (25 ml), se secó con un separador de fases y se evaporó al vacío para producir 2-((S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (0.726 g, 75 %) en forma de un aceite de color naranja claro.
1H RMN (500 MHz, CDCb) 51.05 (d, 3H), 1.29 (d, 3H), 2.1 - 2.25 (m, 2H), 2.25 - 2.37 (m, 4H), 2.46 (t, 1H), 2.69 - 2.83 (m, 3H), 3.28 (c, 1H), 3.70 (s, 3H).
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando la amina indicada para dar el Intermedio 24 descrito en la Tabla 8:
Tabla 8
Figure imgf000029_0001
Intermedio 25: Diclorhidrato del ácido (R)-2-((S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoico
Se agitó 2-((S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo, Intermedio 23 (726 mg, 3.62 mmol) en HCl 6 M (6 ml, 36.00 mmol) a reflujo durante 16 h. (La realización se hizo en seco). Se añadió agua (6 ml) y se agitó durante 2 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se concentró al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El sólido se eliminó por filtración, se lavó con acetonitrilo y se secó al vacío para producir diclorhidrato del ácido (R)-2-((S)-3,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoico (626 mg, 66.6 %) en forma de un sólido. 1H RMN (500 MHz, D2O) 5 1.33 (d, 3H), 1.37 - 1.48 (m, 3H), 2.88 (s, 3H), 3.07 - 3.23 (m, 1H), 3.28 - 3.85 (m, 7H).
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando el intermedio de partida indicado para dar el Intermedio 26 descrito en la Tabla 9:
Tabla 9
Figure imgf000029_0002
Intermedio 27: Diclorhidrato del ácido (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoico
Etapa 1
Se añadió 2,6-dimetilpiridina (0.868 ml, 7.45 mmol) a una solución enfriada a -78 °C de 2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (0.646 g, 6.21 mmol) en DCM (10 ml). La mezcla se agitó durante 5 min y después se añadió gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico (1.259 ml, 7.45 mmol). La reacción se agitó durante 45 min, la refrigeración se eliminó y la mezcla de reacción se dejó alcanzar la temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La solución se lavó con HCl 1 M (ac.) (20 ml), se secó con un separador de fases y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetonitrilo (5 ml) y se añadió a una suspensión de diclorhidrato de (R)-1,3-dimetilpiperazina (1.22 g, 6.52 mmol) y carbonato potásico (2.57 g, 18.63 mmol) en acetonitrilo (10 ml). La reacción se calentó a 60 °C en una atmósfera de N2 durante 20 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, el sólido se eliminó por filtración, se lavó con acetonitrilo y el filtrado se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en DCM (10 ml) y NaHCO3 al 8 % (ac.) (10 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (10 ml). Los extractos combinados se secaron con un separador de fases y se evaporaron al vacío para producir 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (0.589 g, 47.4 %, 80 % de) en forma de un aceite de color pálido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 50.94 (d, 3H), 1.06 (d, 3H), 1.82 (t, 1H), 2.03 (t, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.37 - 2.55 (m, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.66 - 3.74 (m, 1H). (diastereoisómero más abundante descrito)
Etapa 2
Se disolvió 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (589 mg, 2.94 mmol) en HCl 6 M (ac.) (5 ml, 30.00 mmol) y se calentó a reflujo durante 18 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se evaporó al vacío para dar un residuo semisólido. Se añadió éter dietílico al residuo, se agitó durante 30 min y el sólido se eliminó por filtración y se secó al vacío para producir diclorhidrato del ácido (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoico (623 mg, 82 %) en forma de un sólido de color pálido.
1H RMN (500 MHz, D2O) 5 1.32 (d, 3H), 1.41 (d, 3H), 2.89 (s, 3H), 3.08 - 3.91 (m, 7H), 4.25 - 4.51 (m, 1H). (diastereoisómero más abundante descrito)
Intermedio 28: 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo
Se suspendieron 1-metilpiperazina (100 g, 988.4 mmol) y carbonato potásico (164 g, 1186 mmol) en acetonitrilo seco (800 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió 2-bromo-3-metoxipropanoato de metilo (201 g, 988.4 mmol) a la suspensión a 50 - 60 °C durante un periodo de 40 minutos. La mezcla resultante se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 61 °C durante 23 horas y después se enfrió a 20 °C. El sólido se eliminó por filtración. El filtrado se evaporó para dar un residuo oleoso que se disolvió en HCl 1 M (1000 ml). Después, el pH se ajustó a 1 con HCl 4 M (~300 ml). La solución resultante se extrajo con DCM (200 ml). La solución acuosa se hizo básica con Na2CO3 saturado (1000 ml) a pH 9 y se extrajo con d Cm (2 x 500 ml). El pH de la fase acuosa se elevó entonces a 10 - 11 con hidróxido sódico y se extrajo con DCM (2 x 500 ml). La cuatro fases orgánicas se combinaron y se evaporaron al vacío para producir 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo (181 g, 85 %).
1H RMN (400 MHz, CDCla) 52.07 (s, 3H), 2.14 - 2.34 (m, 4H), 2.39 - 2.52 (m, 4H), 3.14 (s, 3H), 3.22 (dd, 1H), 3.42 (dd, 1H), 3.48 - 3.56 (m, 4H).
Intermedio 29: 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo
Se añadió carbonato potásico (1.987 g, 14.38 mmol) a 2-bromopropanoato (2.041 g, 12.22 mmol) y 1-metilpiperazina (1.20 g, 11.98 mmol) en acetonitrilo (20 ml) a 20 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 60 °C durante 18 horas. El mezcla de color naranja brillante se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se filtró. La solución de color naranja se concentró al vacío. El residuo se disolvió en éter dietílico y se filtró. El filtrado se evaporó al vacío para proporcionar 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo, (2.2 g, 99 %) en forma de un aceite.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 1.23 (dd, 3H), 2.21 (d, 3H), 2.28 - 2.65 (m, 8H), 3.16 - 3.27 (m, 1H), 3.63 (s, 3H). m/z (ES+), [M+H]+ = 187.
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando los reactantes indicados para dar los Intermedios 30-44 descritos en la Tabla 10:
Tabla 10
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Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Intermedio 45: Diclorhidrato del ácido 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico
Se añadió gota a gota 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo, Intermedio 29 (6.00 g, 32.21 mmol) a HCl 6 M (70 ml, 420.00 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a 100 °C durante 12 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se lavó con DCM (2 x 2000 ml). La fase acuosa se eliminó a presión reducida para proporcionar diclorhidrato del ácido 2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico (6.00 g, 76 %) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 1.54 (d, 3H), 2.83 (s, 3H), 3.47 - 3.90 (m, 8H), 4.25 - 4.45 (m, 1H), 12.21 (s a, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 173.
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando el intermedio de partida indicado para dar los Intermedios 46-47 descritos en la Tabla 11:
Tabla 11
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000034_0001
Intermedio 48: 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de litio
Se añadió una solución de hidróxido de litio (0.321 g, 13.39 mmol) en agua (5 ml) a una solución de 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de metilo, Intermedio 28 (1.93 g, 8.92 mmol) en THF (5 ml). Se añadieron unas pocas gotas de MeOH hasta que la mezcla de reacción se volvió transparente. La reacción se calentó a 40 °C durante 24 h. Los productos orgánicos se evaporaron al vacío. El residuo se diluyó con agua y se liofilizó (x 3) para producir 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de litio, (1.92 g, 103 %) en forma de un sólido.
1H RMN (500 MHz, D2O) 52.06 (s, 3H), 2.48 (s a, 8H), 2.99 (t, 1H), 3.20 (s, 3H), 3.46 - 3.57 (m, 2H).
El procedimiento descrito anteriormente se repitió usando el intermedio de partida indicado para dar los Intermedios 49-59 descritos en la Tabla 12:
Tabla 12
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Intermedio 60: 3-etoxi-2-hidroxipropanoato de (S)-metilo
S e añadió triflato de magnesio (1.577 g, 4.90 mmol) a oxirano-2-carboxilato de (S)-metilo (2.00 g, 19.59 mmol) disuelto en etanol (10 ml) a 25 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante 30 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con salmuera (25 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 1:1 de EtOAc/éter de petróleo, para proporcionar 3-etoxi-2-hidroxipropanoato de (S)-metilo, (1.788 g, 61.6 %) en forma de un aceite incoloro.1
1H RMN (300 MHz, CDCla) 5 1.20 (t, 3H), 2.46 (s a, 1H), 3.45 - 3.67 (m, 2H), 3.74 (d, 2H), 3.83 (s, 3H), 4.19 - 4.41 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 203.
Intermedio 61: 3-etoxi-2-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)propanoato de (S)-metilo
Se añadió 2,6-dimetilpiridina (1.643 ml, 14.11 mmol) a 3-etoxi-2-hidroxipropanoato de (S)-metilo, Intermedio 60 (1.9 g, 12.82 mmol) en DCM (30 ml) a -78 °C en una atmósfera de nitrógeno. Después de mantener de nuevo la refrigeración completa, se añadió gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico (2.341 ml, 14.11 mmol) a través de una bomba de jeringa durante 1 hora. La solución resultante se agitó a -78 °C durante 30 minutos seguido de calentamiento a temperatura ambiente y agitación durante 1 hora más. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (100 ml), se lavó con 1 M HCl (75 ml) y la fase orgánica se secó al vacío para proporcionar 3-etoxi-2-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)propanoato de (S)-metilo (3.30 g, 92 %) en forma de un aceite de color pardo claro.
1H RMN (300 MHz, CDCb ) 5 1.23 (t, 3H), 3.48 - 3.75 (m, 2H), 3.82 - 4.01 (m, 3H), 4.23 - 4.46 (m, 2H), 5.22 - 5.36 (m, 1H).
Intermedio 62: 3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo
Se disolvió carbonato potásico (3.26 g, 23.55 mmol) en agua (420 ml) y se añadió gota a gota a una solución de 3-etoxi-2-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)propanoato de (S)-metilo, Intermedio 61 (3.3 g, 11.78 mmol) y 1-metilpiperazina (1.769 g, 17.66 mmol) en DCM (15 ml) a 0 °C durante un periodo de 5 minutos. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (500 ml) y se lavó con agua (100 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 1:1 de éter de petróleo/EtOAc, para proporcionar 3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (2.40 g, 88 %) en forma de un aceite de color amarillo.
1H RMN (300 MHz, CDCla) 5 1.18 (t, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.36 - 2.60 (m, 4H), 2.60 - 2.79 (m, 4H), 3.35 - 3.60 (m, 3H), 3.61 - 3.84 (m, 4H), 4.21 (c, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 231.
Intermedio 63: (R)-3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de litio
Se añadió hidróxido de litio (204 mg, 8.51 mmol) en agua (6 ml) a 3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo, Intermedio 62 (980 mg, 4.26 mmol) en 1:1 de THF/MeOH (12 ml) a 25 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con MeOH (50 ml), se lavó con éter de petróleo (2 x 50 ml) y se evaporó al vacío para proporcionar ácido (R)-3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico (421 mg, 45.7 %).
1H RMN (300 MHz, CDCb ) 5 1.19 (t, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.34 - 2.78 (m, 8H), 2.97 - 3.08 (m, 1H), 3.42 - 3.59 (m, 2H), 3.70 (dd, 1H), 3.76 - 3.87 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 217.
Intermedio 64: 3-(benciloxi)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato sódico
Etapa 1
En un matraz de fondo redondo equipado con un termómetro, se disolvió ácido (S)-2-amino-3-(benciloxi)propanoico (3.00 g, 15.37 mmol) en ácido sulfúrico (18.44 ml, 36.88 mmol) y se enfrió mediante un baño de hielo a 0 °C. Se añadió en pequeñas porciones una solución de nitrito sódico (1.696 g, 24.59 mmol) en agua (10 ml) durante 60 min, manteniendo la temperatura interna por debajo de 3 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C y se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió NaOH (50%, ac., p/p, 2.8 ml) hasta pH 4. Después, se añadió acetato de etilo (25 ml) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente mientras el pH se disminuyó a pH 3 mediante la adición de H2SO42 M (ac.). La fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con MgSO4, se filtraron sobre un separador de fases y se concentraron al vacío para proporcionar ácido (S)-3-(benciloxi)-2-hidroxipropanoico (2.55 g, 85 %, 98.0 % de e.e.).
1H RMN (500 MHz, CDCb ) 53.78 (dd, 1H), 3.83 (dd, 1H), 4.37 (t, 1H), 4.61 (d, 2H), 7.28 - 7.4 (m, 5H). No se observaron protones intercambiables.
Etapa 2
Se añadió gota a gota cloruro de acetilo (4.28 ml, 60.14 mmol) a metanol enfriado en un baño de hielo, 0 °C (14 ml). La mezcla se agitó a 0 °C durante 5 minutos y después se transfirió a una solución de ácido (S)-3-(benciloxi)-2-hidroxipropanoico (2.36 g, 12.03 mmol) en metanol (14.00 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se añadió ortoformiato de trimetilo (2.66 ml, 24.06 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida automatizada en una columna Biotage® KP-SIL de 50 g usando EtOAc al 50 % en heptano durante 12 VC como fase móvil. El compuesto se detectó usando la longitud de onda de 257 nm. El producto se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar 3-(benciloxi)-2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (1.94 g, 77 %).1
1H RMN (500 MHz, CDCb ) 53.04 (d, 1H), 3.76 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 4.31 - 4.36 (m, 1H), 4.54 (d, 1H), 4.61 (d, 1H), 7.27 - 7.37 (m, 5H).
E tap a 3
Se añadió gota a gota anhídrido tríflico (1.543 ml, 9.13 mmol) a una solución enfriada en un baño de hielo, 0 °C, de 3-(benciloxi)-2-hidroxipropanoato de (S)-metilo (1.92 g, 9.13 mmol) y DIPEA (1.595 ml, 9.13 mmol) en tolueno (20 ml). La reacción se agitó a 25 °C durante 30 minutos y después se enfrió a -78 °C. Se añadió una mezcla de 1-metilpiperazina (1.013 ml, 9.13 mmol) y DIPEA (1.595 ml, 9.13 mmol) en tolueno (20 ml) (manteniendo la temperatura por debajo de -70 °C). La mezcla de reacción se agitó con refrigeración durante una noche, tiempo durante el cual el baño de refrigeración alcanzó -40 °C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida automatizada en una columna Biotage® KP-SIL de 50 g usando EtOAc al 66 % en heptano durante 12 VC seguido de NH30.2 M en MeOH durante 10 VC como fase móvil. El producto se detectó usando la longitud de onda 250 nm. Las fracciones de producto se recogieron y se evaporaron al vacío para proporcionar 3-(benciloxi)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (1.32 g, 66 %, 96.0 % de e.e.).
1H RMN (500 MHz, CDCls) 52.42 (s, 3H), 2.5 - 2.71 (m, 4H), 2.71 - 2.83 (m, 4H), 3.49 (t, 1H), 3.66 - 3.74 (m, 4H), 3.78 (dd, 1H), 4.53 (dd, 2H), 7.24 - 7.39 (m, 5H). m/z (ES+), [M+H]+ = 293.6.
Etapa 4
Se disolvió 3-(benciloxi)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de (R)-metilo (308 mg, 1.05 mmol) en metanol (1.5 ml) e hidróxido sódico ac. 1 M (1.05 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se añadió más cantidad de hidróxido sódico ac. 1 M (0.2 ml) y la mezcla de reacción se agitó 2 h más a temperatura ambiente y 3 h a 45 °C. Después, la reacción se dejó llegar a la temperatura ambiente y se diluyó con agua (5 ml) y se liofilizó para dar 3-(benciloxi)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato sódico en bruto (356 mg) en forma de un sólido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 52.10 (s, 3H), 2.16 - 2.34 (m, 4H), 2.52 - 2.63 (m, 4H), 2.91 (dd, 1H), 3.58 (dd, 1H), 3.65 (dd, 1H), 4.39 - 4.48 (m, 2H), 7.23 - 7.28 (m, 1H), 7.28 - 7.36 (m, 4H). m/z (ES+), [M+H]+ = 279.2.
Intermedio 65: 2-(4-metilpiperazin-1-il)butanoato de litio
Se añadió hidróxido de litio (0.335 g, 14.00 mmol) a 2-(4-metilpiperazin-1-il)butanoato de etilo, Intermedio 30 (2.00 g, 9.33 mmol) en THF (6 ml), agua (6 ml) y MeOH (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a 40 °C durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se diluyó con agua (10 ml), se extrajo con éter dietílico (2 x 10 ml) y la capa acuosa se liofilizó para proporcionar 2-(4-metilpiperazin-1-il)butanoato de litio (1.680 g, 97 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 50.82 (t, 3H), 1.38 - 1.68 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.16 - 2.48 (m, 4H), 2.49 - 2.67 (m, 5H).
Intermedio 66: 2-(4-(ferc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propanoato de litio
Etapa 1
Se añadió carbonato potásico (0.890 g, 6.44 mmol) a 2-bromopropanoato de metilo (0.897 g, 5.37 mmol) y piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (1.00 g, 5.37 mmol) en acetonitrilo (10 ml) a 20°C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 60 °C durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml), se filtró a través de celite y el filtrado se evaporó al vacío. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (50 ml). La mezcla de reacción se filtró a través de celite y el filtrado se evaporó al vacío para proporcionar 4-(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (1.80 g, 123 %) en forma de un aceite incoloro, que se usó directamente en la siguiente etapa.1
1H RMN (300 MHz, CDCla) 1.33 (d, 3H), 1.46 (s, 9H), 2.45 - 2.75 (m, 4H), 3.25 - 3.60 (m, 5H), 3.72 (s, 3H). m/z (ES+), [M+H]+ = 273.
Etapa 2
Se añadió una solución de hidróxido de litio (0.158 g, 6.61 mmol) en agua (5 ml) a una solución agitada de 4-(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (1.80 g, 6.61 mmol) en 1:1 de THF/MeOH (10 ml). La solución resultante se agitó a 60 °C durante 4 horas. El disolvente se evaporó al vacío. El residuo se diluyó con agua (15 ml) y se liofilizó para proporcionar 2-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propanoato de litio,
(1.60 g, 91 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, D2O) 1.13 (d, 3H), 1.35 (s, 9H), 2.40 - 2.55 (m, 4H), 2.89 (c, 1H), 3.26 - 3.47 (m, 4H). m/z (ES+), [M+H]+ = 259.
Ejemplo 1
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)propanamida
Se añadió carbonato potásico (101 mg, 0.73 mmol) a (S)-2-bromo-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Intermedio 21 (200 mg, 0.37 mmol) y 2-(piperazin-1-il)etanol en DMF (5 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 18 horas, después se enfrió a temperatura ambiente, se filtró a través de celite y se evaporó al vacío. El producto se purificó por HPLC prepativa aquiral en una columna XBridge C18 OBD usando un gradiente de acetonitrilo al 41-58% en agua (NH3xH2O al 0.05 %) durante 7 min con un flujo de 30 ml/min. El producto se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)propanamida (100 mg, 50 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) 5 1.47 (d, 3H), 2.47 (s, 3H), 2,85 - 3.43 (m, 13H), 3.45 -3.60 (m, 1H), 3.86 (t, 2H), 7.06 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.30 - 7.54 (m, 1H), 7.54 - 7.72 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.47 (s a, 1H), 8.58 (t, 1 H)._m/z (ES+), [M+H]+ = 596.
Ejemplo 2
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
Se añadió en una porción DIPEA (13.9 ml, 78.08 mmol) a diclorhidrato del ácido (R)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoico, Intermedio 22 (3.34 g, 13.64 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (4.00 g, 9.72 mmol) en d Cm (70 ml) a 25°C. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 10 minutos. Después, se añadió gota a gota anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico, T3P (50 % en peso) (12.37 g, 19.44 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a 0 °C durante 1 hora y después se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida C18 usando un gradiente de MeOH al 5 - 60 % en agua como fase móvil. Las fracciones puras se agruparon y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa quiral en una columna ChiralCel OD-H (20 x 250 mm) usando EtOH al 40 % en CO2 y un flujo de 40 ml/min. Los enantiómeros se detectaron usando la longitud de onda de 220 nm. El isómero principal (isómero 1) se recogió para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida (1.85 g, 30 %) en forma de un sólido de color amarillo.
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 51.26 (d, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.30 - 2.75 (m, 11H), 3.25 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.30 - 7.48 (m, 2H), 7.48 - 7.65 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.23 - 8.40 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 11.38 (s, 1H).
19F RMN (282 MHz, DMSO-de) 5 -121.22. m/z (ES+), [M+H]+ = 566.
El procedimiento descrito para el Ejemplo 2 se repitió usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 3-5 descritos en la Tabla 17 a continuación:
Tabla 17
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Ejemplo 6
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
El isómero 2 de la reacción del Ejemplo 2 se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se purificó de nuevo por cromatografía ultrarrápida C18 usando un gradiente de MeOH al 10 - 60 % en agua (FA al 0.1 %). Las fracciones puras se evaporaron al vacío. El residuo se purificó de nuevo por SFC preparativa en una columna ChiralCel OD-H (20 x 250 mm) usando EtOH al 40 % en CO2 y un flujo de 40 ml/min. Los isómeros se detectaron usando la longitud de onda de 220 nm. El isómero 2 se recogió para proporcionar (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida (40 mg) en forma de un sólido de color blanco.1 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.41 (d, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.49 - 2.87 (m, 8H), 3.15 (s, 3H), 3.39 (c, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.14 (dd, 1H), 7.28 - 7.38 (m, 1H), 7.53 - 7.63 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.09 (dd, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H).
19F RMN (400 MHz, CD3OD) 5 -125.65. m/z (ES+), [M+H]+ = 566.
Ejemplo 7
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida
Etapa 1
S e disolvieron diclorhidrato del ácido (R)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanoico, Intermedio 26 (113.0 mg, 0.42 mmol) y di(1H-imidazol-1-il)metanona (127 mg, 0.78 mmol) en DMF (3 ml) y se agitaron durante 1 h a temperatura ambiente. S e añadió 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina, Intermedio 20 (90.0 mg, 0.17 mmol) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (10.0 ml) y se vertió en Na2CO3 sat. (30 ml). Las fases se agitaron, se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se filtraron a través de un separador de fases y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa de fase inversa en una columna Waters Sunfire C18 ODB (5 |jm, 19 x 150 mm) un gradiente de acetonitrilo al 5 - 95 % en HCO2H 0.1 M (ac.), pH 3. Las fracciones de producto se recogieron y se liofilizaron para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidi n-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida (125 mg, 104 % (agua presente)) en forma de un sólido de color amarillo pálido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.07 (s, 9H), 0.85 - 0.92 (m, 2H), 0.98 (d, 6H), 1.24 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.20 - 2.33 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.64 (d, 2H), 2.72 - 2.82 (m, 2H), 3.10 (c, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.45 - 3.57 (m, 2H), 5.68 (d, 1H), 5.78 (d, 1H), 7.06 (t, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.16 - 8.22 (m, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.45 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 724.
Etapa 2
Se disolvió (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida (97.0 mg, 0.13 mmol) en Dc M (1.3 ml) y se añadió TFA (0.25 ml, 3.37 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 h. La reacción se diluyó con DCM y se vertió en NaHCO3 sat. (10 ml). Las fases se agitaron, se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos se combinaron, se filtraron a través de un separador de fases y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por SFC quiral en una columna Cellucoat (250 x 30 mm, 5 |jm) usando 100:0.5 de EtOH al 35 %/DEA en CO2 a 120 bar y un flujo de 140 ml/min. El pico de producto se detectó a 270 nm. El producto se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se purificó de nuevo por SFC en una columna Waters BEH (5 |jm, 30 x 250 mm) usando una fase móvil de MeOH 20 mM/NH3 en CO2. Las fracciones de producto se recogieron y se liofilizaron para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 7 (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
El isómero 2 de la reacción del Ejemplo 2 se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se volvió a purificar mediante cromatografía ultrarrápida C18 utilizando un gradiente de 10 - 60 % de MeOH en agua (0.1 % de FA). Las fracciones puras se evaporaron al vacío. El residuo se volvió a purificar mediante SFC preparativa en un ChiralCel OD-H (20x250 mm) utilizando EtOH al 40 % en CO2 y un flujo de 40 ml/min. Los isómeros se detectaron usando la longitud de onda de 220 nm. El isómero 2 se recogió para producir (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-ilo )-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida (40 mg) como un sólido blanco.
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.41 (d, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.49 - 2.87 (m, 8H), 3.15 (s, 3H), 3.39 (q, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.14 (dd, 1H), 7.28 - 7.3820 (m, 1H), 7.53 - 7.63 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.09 (dd, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 -8.61 (m, 1H).
[0186] 19F RMN (400 MHz, CD3OD) 5 -125.65. m/z (ES+), [M+H]+ = 566.
[0187] Example 7 (21 mg, 27 %).
1H RMN (600 MHz, DMSO-de) 50.98 (d, 6H), 1.28 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.21 - 2.35 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.62 - 2.69 (m, 2H), 2.71 - 2.81 (m, 2H), 3.19 (c, 1H), 3.25 (s, 3H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.25 - 8.35 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 11.39 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
Ejemplo 8
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida
Se disolvieron diclorhidrato del ácido (R)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanoico, Intermedio 26 (199 mg, 0.73 mmol) y 1,1'-carbonildiimidazol (91 mg, 0.56 mmol) en DMF (2 ml) y se agitaron a temperatura ambiente durante 1.5 h. Se añadió 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 18 (202 mg, 0.49 mmol) y la reacción se calentó a 60 °C durante 3 h. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió DCM (25 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 al 8 % (3 x 25 ml), se secó con un separador de fases y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 25 - 65 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 229 nm. El producto se recogió y se liofilizó para producir (R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1 -il)propanamida, Ejemplo 8 (188 mg, 65 %, 99.4 % de) en forma de un sólido de color blanco.1
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 50.98 (d, 6H), 1.28 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.2 - 2.34 (m, 2H), 2.65 (d, 2H), 2.7 - 2.81 (m, 2H), 3.19 (c, 1H), 3.27 - 3.34 (m, 3H), 7.03 (t, 1H), 7.38 - 7.5 (m, 2H), 7.58 - 7.66 (m, 1H), 8.14 - 8.25 (m, 2H), 8.28 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.60 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 598.3.
Ejemplo 9
(R)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Isómero 1
E tap a 1
S e disolvieron 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina, Intermedio 20 (225 mg, 0.42 mmol), 2-((3S,5S)-4-(ferc-butoxicarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 55 (143 mg, 0.50 mmol) y piridina (0.088 ml, 1.04 mmol) en DCM (5.0 ml) y la mezcla de reacción resultante se enfrió a 0 °C. A la mezcla de reacción enfriada se le añadió 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano, T3P (0.371 ml, 1.25 mmol) y la mezcla de reacción se dejó llegar lentamente a la temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 16 h. La reacción se interrumpió con agua, se diluyó con DCM (5 ml), se vertió en Na2CO3 al 10 % (30 ml), se agitó, las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se filtraron a través de un separador de fases y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 45 - 95 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 270 nm. Las fracciones de producto se recogieron y se liofilizaron para proporcionar 4-(1-((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2S,6S)-ferc-butilo (256 mg, 76 %) en forma de un sólido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.08 (d, 9H), 0.78 - 0.97 (m, 2H), 1.18 - 1.31 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.32 - 2.47 (m, 5H), 2.61 - 2.78 (m, 2H), 3.18 - 3.36 (m, 4H), 3.42 - 3.57 (m, 2H), 3.77 - 3.89 (m, 2H), 5.70 (d, 1H), 5.75 - 5.86 (m, 1H), 7.06 (t, 1H), 7.27 - 7.45 (m, 2H), 7.55 (t, 1H), 8.14 - 8.23 (m, 2H), 8.27 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 9.53 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 810.
Etapa 2
A 4-( 1 -((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2S,6S)-ferc-butilo (179.8 mg, 0.22 mmol) disuelto en DCM (2.0 ml) se le añadió TFA (0.5 ml, 6.73 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 96 h. La reacción se diluyó con DCM, se interrumpió mediante la adición de agua, se vertió en NaHCO3 sat. (10 ml), se agitó, las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 5 ml). Los extractos orgánicos combinados se filtraron a través de un separador de fases y se concentraron al vacío. Los isómeros se separaron por SFC quiral en una columna Chiralpak IB (250 x 30 mm, 5 |jm) usando 100:0.5 de EtOH al 30 %/DEA en CO2 a 120 bar y un flujo de 150 ml/min. El Isómero 1 se recogió y se evaporó al vacío para producir el Isómero 1 de (R)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1 -il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 9 (50 mg, 41 %, 97 % de e.e.).
1H RMN (500 MHz, CDCb) 5 1.22 - 1.33 (m, 6H), 1.39 (d, 3H), 2.19 - 2.36 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.69 - 2.8 (m, 2H), 3.14 - 3.28 (m, 4H), 3.29 - 3.41 (m, 2H), 6.77 (d, 1H), 7.12 (t, 1H), 7.20 - 7.31 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.73 (d, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.99 (t, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.45 (s, 1H). No se observó un protón intercambiable.
Ejemplo 10
(S)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1 -il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida
S e recogió el isómero 2 de la síntesis del ejemplo 9, etapa 2 y se evaporó al vacío para producir (S)-2-((3 S ,5 S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3 -(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 10
(S)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1 -il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 10 (48 mg, 36 %, 90 % de e.e.).1
1H RMN (500 MHz, CDCb) 5 1.24 - 1.32 (m, 6H), 1.35 (d, 3H), 2.33 - 2.47 (m, 5H), 2.61 - 2.78 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.33 - 3.44 (m, 3H), 6.79 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 7.2 - 7.31 (m, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.72 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.99 (t, 1H), 9.87 (s, 1H), 11.45 (s, 1H). No se observó un protón intercambiable.
Ejemplo 11
(R)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 1
Etapa 1
S e disolvieron 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 18 (318 mg, 0.77 mmol), 2-((3S,5S)-4-(terc-butoxicarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 55 (235 mg, 0.80 mmol) y DIPeA (0.535 ml, 3.06 mmol) en DMF (2 ml) y se añadió hexafluorofosfato de 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1, 1,3,3-tetrametilisouronio (V) (306 mg, 0.80 mmol). La reacción se calentó a 50 °C durante 1.5 horas y después s e enfrió a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (25 ml) y Na2CO3 al 5 % (ac.) (25 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y se evaporaron al vacío. El compuesto se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 45 - 85 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 230 nm. El producto se recogió y se liofilizó. Los diastereoisómeros se separaron usando SFC quiral en una columna CelluCoat (250 x 20 mm, 5 |jm) usando 100:0.5 de EtOH al 35 %/DEA en CO2 a 120 bar como eluyente y un flujo de 70 ml/min. Los diastereoisómeros se detectaron a 300 nm. El primer compuesto de elución se recogió y se evaporó al vacío como el isómero 1. El residuo se disolvió en acetonitrilo/agua y se liofilizó para producir 4-(1-((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2S,6S)-ferc-butilo Isómero 1 (62.0 mg, 25.3 %, 99.9 % de) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 1.19 - 1.34 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.40 (dd, 2H), 2.75 (dd, 2H), 3.26 - 3.37 (m, 4H), 3.75 - 3.87 (m, 2H), 7.04 (t, 1H), 7.39 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.14 - 8.25 (m, 2H), 8.28 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 11.54 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 684.3.
Etapa 2
Se disolvió (2S,6S)-4-(1-((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo (62 mg, 0.09 mmol) en DCM (4 ml) y se añadió TFA (1 ml, 12.98 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y después se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en DCM (25 ml), NaHCO3 al 8 % (ac.) (25 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con un separador de fases y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por SFC en una columna Waters BEH 2-EP (5 |jm, 30 x 250 mm) usando MeOH/NH320 mM como eluyente. El producto se recogió y se evaporó al vacío para producir (R)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 11 (32.7 mg, 61.8 %).
1H RMN (600 MHz, DMSO-de) 5 1.06 (d, 6H), 1.26 (d, 3H), 2.12 - 2.21 (m, 2H), 2.61 (dd, 2H), 3.06 - 3.14 (m, 2H), 3.20 (c, 1H), 3.30 (s, 3H), 7.03 (t, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.59 - 7.65 (m, 1H), 8.16 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 11.63 (s a, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 584.2.
Ejemplo 12
(S)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 2
Etapa 1
El segundo compuesto de elución de la reacción del Ejemplo 11, etapa 1 se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en acetonitrilo/agua - se formó un sólido de color blanco. El sólido se filtró, se lavó con acetonitrilo/agua y se secó al vacío para producir 4-( 1 -((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2S,6S)-ferc-butilo Isómero 2 (89 mg, 36.3 %, 99.3 % de) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 1.18 - 1.31 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.44 (dd, 2H), 2.69 (dd, 2H), 3.26 - 3.36 (m, 3H), 3.49 (c, 1H), 3.78 - 3.89 (m, 2H), 7.03 (t, 1H), 7.38 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.15 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 11.60 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 684.2.
Etapa 2
Se disolvió (2S,6S)-4-(1-((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de terc-butilo Isómero 2 (89 mg, 0.13 mmol) en DCM (4 ml) y se añadió TFA (1 ml, 12.98 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y después se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en DCM (25 ml), NaHCO3 al 8 % (ac.) (25 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con un separador de fases y se evaporaron al vacío. El residuo se disolvió en DMSO y se purificó por SFC en una columna Waters BEH 2-EP (5 jm , 30 x 250 mm) usando MeOH/NH3 20 mM como eluyente. El producto se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 12 (32.4 mg, 42.6 %).
1H RMN (600 MHz, DMSO-de) 5 1.06 (d, 6H), 1.19 (d, 3H), 2.21 (dd, 2H), 2.52 - 2.59 (m, 2H), 3.08 - 3.17 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.37 - 3.5 (m, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), 8.13 - 8.23 (m, 2H), 8.26 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 11.67 (s a, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 584.2.
Ejemplo 13
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida
Se añadió DIPEA (2.54 ml, 14.58 mmol) a 2-(4-metilpiperazin-1-il)butanoato de litio, Intermedio 65 (1.81 g, 9.72 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (2.00 g, 4.86 mmol) en DCM (50 ml) a 15 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 min, se añadió gota a gota T3P (50% en EtOAc) (6.18 g, 9.72 mmol) a 0 °C y la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Después, el disolvente se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida C18 usando un gradiente de MeOH al 5 -80 % en agua (NH4HCO3). Las fracciones puras se evaporaron a sequedad. El residuo se purificó de nuevo por HPLC preparativa en una columna SunFire Prep C18 OBD (5 |jm, 30 x 100 mm), usando mezclas polares decrecientes de agua (que contenían % de NH4HCO3) en acetonitrilo como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se evaporaron al vacío. Los enantiómeros se separaron por SFC preparativa quiral en una columna ChiralPak AD-H (50 x 250 mm, 5 jm ) usando IPA al 50 % (DEA al 0.1 %) en CO2 y un flujo de 150 ml/min. Los enantiómeros se detectaron usando UV a 254 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida, Ejemplo 13 (200 mg, 7 %, 96.4 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.05 (t, 3H), 1.77 - 1.99 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.45 - 2.90 (m, 8H), 3.11 -3.23 (m, 4H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.06 - 8.15 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H). no se observó protón intercambiable. 19F RMN (400 MHz, CD3OD) 5 -125.77. m/z (ES+), [M+H]+ = 580.
Ejemplo 14
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida
El segundo isómero de elución de la síntesis del Ejemplo 13 se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida Isómero 2, Ejemplo 14 (200 mg, 7 %, 92.8 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.05 (t, 3H), 1.77 - 1.99 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.45 - 2.95 (m, 8H), 3.11 -3.23 (m, 4H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.06 - 8.15 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables. 19F Rm N (400 m Hz , CD3OD) 5 -125.72. m/z (ES+), [M+H]+ = 580.
Los procedimientos descritos anteriormente para el Ejemplo 13 y 14 se repitieron usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 15-18 descritos en la Tabla 18 a continuación:
Tabla 18
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000044_0001
Ejemplo 19
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida
S e añadió 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (300 mg, 0.73 mmol) a 2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanoato de litio, Intermedio 49 (313 mg, 1.46 mmol), anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico, T3P (50% in EtOAc) (928 mg, 1.46 mmol) y DIPEA (1.019 ml, 5.83 mmol) en DCM (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml), se lavó con NaHCO3 sat. (2 x 100 ml), salmuera (2 x 100 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 10:1 de DCM/MeOH. Las fracciones de producto se evaporaron al vacío. Los diastereoisómeros se separaron por HPLC preparativa quiral en una columna ChiralPak-AD-H-SL001 (20 x 250 mm) usando IPA al 50 % en hexano (DEA al 0.1 %) como fase móvil y un flujo de 15 ml/min. Los diasteroisómeros se detectaron usando UV a 254 y 220 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida, Ejemplo 19 (30 mg, 24 %, 99.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) 5 1.07 (t, 3H), 1.17 (d, 6 H), 1.75 - 1.98 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.52 - 2.70 (m, 2H), 2.89 (dd, 2H), 2.93 - 3.10 (m, 2H), 3.11 - 3.25 (m, 4H), 7.03 (t, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.54 - 7.64 (m, 1 h ), 7.93 (s, 1H), 8.10 (dd, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.52 - 8.62 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables.
19F RMN (282 MHz, DMSO-cfe) 5 -121.25. m/z (ES+), [M+H]+ = 608.
Ejemplo 20
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1 -il)butanamida
El segundo isómero de elución de la síntesis del Ejemplo 19 se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar el Isómero 2 de (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida, Ejemplo 20 (5 mg, 4 %, 90 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 5 1.09 (t, 3H), 1.25 - 1.45 (m, 6H), 1.70 - 1.98 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.98 -3.13 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 3.15 - 3.60 (m, 5H), 7.03 (t, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.53 - 7.65 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.50 - 8.65 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables.
19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) 5 -121.11. m/z (ES+), [M+H]+ = 608.
Los procedimientos descritos anteriormente para el Ejemplo 19 y el Ejemplo 20 se repitieron usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 21-23 descritos en la Tabla 19 a continuación:
Tabla 19
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Ejemplo 24
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida Etapa 1
Se añadió DIPEA (0.637 ml, 3.65 mmol) a 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-amina, Intermedio 11 (500 mg, 1.22 mmol), 2-(4-(ferc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 66 (628 mg, 2.43 mmol), EDC (349 mg, 1.82 mmol) y HOBT (279 mg, 1.82 mmol) en DMF (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 15 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua (75 ml), se extrajo EtOAc (2 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3 x 100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 8:1 de DCM/MeOH para proporcionar 4-(1-((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (440 mg, 55.6 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido. m/z (ES+), [M+H]+ = 652.
Etapa 2
Se añadió gota a gota TFA (0.050 ml, 0.64 mmol) a 4-(1-((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (420 mg, 0.64 mmol) en DCM (20 ml) a 20 °C. La solución resultante se agitó a 20 °C durante 2 horas. El disolvente se evaporó al vacío. El residuo se diluyó con DCM (50 ml), se lavó con NaHCO3 (2 x 50 ml) y los productos orgánicos se evaporaron al vacío. Los enantiómeros se separaron por HPLC preparativa quiral en una columna Phenomenex Lux 5u Cellulose-4, AXIA Packed (250 x 21.2 mm, 5 jm ) usando MeOH al 100 % (DEA al 0.1 %) como eluyente y un flujo de 20 ml/min. Los isómeros se detectaron a una longitud de onda de 254 y 220 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida Isómero 1, Ejemplo 24 (53 mg, 27 %, 99.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 51.26 (d, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.45 - 2.65 (m, 4H), 2.73 - 2.85 (m, 4H), 3.22 - 3.40 (m, 4H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.50 (m, 2H), 7.50 - 7.62 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.18 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 11.48 (s a, 1H). No se observó un protón intercambiable.
19F RMN (376 MHz, DMSO-de) -121.21. m/z (ES+), [M+H]+ = 552.
Ejemplo 25
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida El segundo isómero de elución de la reacción del Ejemplo 24, etapa 2, se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 25 (47 mg, 24 %, 92.6 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.1
1H RMN (300 MHz, DMSO-de) 51.25 (d, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.65 (m, 4H), 2.68 - 2.85 (m, 4H), 3.22 - 3.40 (m, 4H), 6.97 (t, 1H), 7.35 - 7.50 (m, 2H), 7.50 - 7.62 (m, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 11.43 (s a, 1H). No se observó un protón intercambiable.
19F RMN (282 MHz, DMSO-de) -121.20. m/z (ES+), [M+H]+ = 552.
Ejemplo 26
(R)-2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida
Etapa 1
Se añadió en una porción DIPEA (1.02 ml, 5.83 mmol) a 2-((3R,5R)-4-(ferc-butoxicarbonil)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)butanoato de litio, Intermedio 56 (438 mg, 1.46 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (300 mg, 0.73 mmol) en DCM (5 ml) a 25 °C. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 10 min. Se añadió gota a gota anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico, T3P (928 mg, 1.46 mmol) a 0 °C y la reacción se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 1:10 de MeOH/DCM para proporcionar 4-(1-((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-1-oxobutan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2R,6R)-terc-butilo (200 mg, 39.5 %) en forma de un sólido de color amarillo.
1H RMN (400 MHz, CDaOD) 5 1.03 - 1.11 (m, 3H), 1.18 - 1.52 (m, 15H), 1.81 - 1.92 (m, 2H), 2.35 - 2.80 (m, 5H), 2.82 - 2.93 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.75 - 3.99 (m, 2H), 4.08 - 4.21 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.52 - 7.61 (m, 1H), 7.91 (d, 1 H), 8.09 (d, 1H), 8.26 (s, 1h ), 8.51 - 8.61 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables. Mezcla de diastereoisómeros.
m/z (ES+), [M+H]+ = 694.
Etapa 2
Se añadió TFA (5 ml, 64.90 mmol) a 4-( 1 -((3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)amino)-1-oxobutan-2-il)-2,6-dimetilpiperazin-1-carboxilato de (2R,6R)-ferc-butilo (370 mg, 0.53 mmol) en DCM (20 ml) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía preparativa de fase inversa en una columna XBridge Prep C18 OBD (5 |jm, 19 x 150 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 30 - 50 % en agua (NH3H2O al 0.03 %) durante 7 min con un flujo de 30 ml/min. Los compuestos se detectaron usando una longitud de onda de 220 y 254 nm. Los diastereoisómeros se separaron por HPLC preparativa quiral en una columna ChiralPak-AD-H-SL001 (20 x 250 mm) usando EtOH al 50 % en hexano (DEA al 0.1 %) durante 85 min y un flujo de 15 ml/min. Los compuestos se detectaron usando una longitud de onda de 220 y 254 nm. El primer compuesto de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar R-2-((3R,5R)-3,5-dimetilpi perazi n-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida, Ejemplo 26 (78 mg, 28 %, 99.0 % de e.e.).
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.09 (t, 3H), 1.41 (d, 6H), 1.80 - 2.00 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.77 (dd, 2H), 3.07 (dd, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.28 - 3.40 (m ,1H), 3.55 - 3.72 (m, 2H), 7.02 (t, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.53 - 7.62 (m, 1H), 7.92 (d, 1H), 8.05 - 8.13 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.40 - 8.49 (m, 2H), 8.50 - 8.60 (m, 1H).
19F RMN (376 MHz, CD3OD) 5 -125.59. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
Ejemplo 27
(S)-2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida
El segundo compuesto de elución de la reacción del Ejemplo 26, Etapa 2 se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida Ejemplo 27 (30.0 mg, 13 %, 99.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1.07 (t, 3H), 1.22 (d, 6H), 1.80 - 1.93 (m, 2H), 2.40 - 2.58 (m, 5H), 2.81 (dd, 2H), 3.07 -3.18 (m, 4H), 3.19 - 3.29 (m, 2H), 7.03 (t, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.53 - 7.63 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 8.05 - 8.15 (m, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.52 - 8.62 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
Los procedimientos descritos anteriormente para los Ejemplos 26 y 27 se repitieron usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 28-33 descritos en la Tabla 20 a continuación:
Tabla 20
Figure imgf000048_0001
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Ejemplo 34
(S)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
Se disolvieron 3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 48 (430 mg, 2.06 mmol), hexafluorofosfato de 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronio (V) (785 mg, 2.06 mmol) y DIPEA (1.068 ml, 6.11 mmol) en DMF (10 ml) agitada a temperatura ambiente durante 5 min y después se añadió 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 18 (635 mg, 1.53 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, después se diluyó con DCM (75 ml) y Na2CO3 al 5 % (ac.) (50 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con un separador de fases, se filtraron y se evaporaron al vacío. El compuesto se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 15 - 65 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 220 nm. Los picos de producto se recogieron y se liofilizaron. Después se cristalizaron en acetonitrilo y el sólido se recogió por filtración, se lavó con una cantidad mínima de acetonitrilo y se secó al vacío. Los enantiómeros se separaron por SFC quiral en una columna CelluCoat (250 x 30 mm, 5 |jm) usando 100:0.5 de IPA al 25 %/DEA en CO2 a 150 bar con un flujo de 140 ml/min. Los enantiómeros se detectaron por UV a 270 nm. El primer enantiómero de elución se recogió y se liofilizó para proporcionar N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 34 (213 mg, 23 %, 99.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 2.14 (s, 3H), 2.24 - 2.44 (m, 4H), 2.56 - 2.67 (m, 2H), 2.68 - 2.8 (m, 2H), 3.24 - 3.35 (m, 6H), 3.50 (t, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.79 (dd, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.41 - 7.55 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.19 (t, 1H), 8.22 - 8.32 (m, 2H), 8.44 (d, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 11.47 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 600.2.
Ejemplo 35
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
El segundo enantiómero de elución del Ejemplo 34 se recogió y se liofilizó. El residuo se recristalizó agitando una suspensión en EtOH/agua (3:1) (5 ml), se calentó a 70 °C usando un baño de aceite y se añadió una semilla. Después, la temperatura del baño de aceite se ajustó a 23 °C y la suspensión se dejó llegar lentamente a la temperatura ambiente. La agitación continuó durante 5 días para dar una suspensión de tipo lechosa que contenía cristales con forma de aguja cortos con una mezcla de cristales con forma de aguja más largos. La suspensión se calentó a 70 °C con agitación, el calentamiento y la agitación se apagaron entonces y la mezcla se dejó llegar lentamente a la temperatura ambiente (2 x). Solamente bonitos cristales con forma de aguja largos. La suspensión se dejó en reposo durante una semana más sin agitación. El sólido se eliminó por filtración y se secó al vacío a 40 °C para proporcionar (R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 35 (186 mg, 20 %, 99.4 % de e.e.) en forma de cristales con forma de aguja de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 2.14 (s, 3H), 2.23 - 2.45 (m, 4H), 2.57 - 2.67 (m, 2H), 2.69 - 2.78 (m, 2H), 3.26 - 3.34 (m, 6H), 3.50 (t, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.79 (dd, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.4 - 7.55 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.13 - 8.33 (m, 3H), 8.44 (d, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 11.48 (s, 1H). 19F RMN (470 MHz, DMSO-de) 5 -120.52, -147.75. m/z (ES+), [M+H]+ = 600.5.
Una muestra del Ejemplo 35 se montó en una montura de oblea de cristal de silicio (SSC) y se registró la difracción de polvo de rayos X con Theta-Theta PANalytical X'Pert PRO (longitud de onda de radiación de Cu filtrada con níquel de rayos X 1.5418 A, tensión 45 kV, emisión de filamento 40 mA). S e usaron divergencia variable automáticas y ranuras autodifusoras y las muestras se giraron durante la medición. Las muestras se escanearon a partir de 2 - 50° 2Theta utilizando un ancho de paso de 0.013° y un tiempo de medición de paso de 233 segundos usando un detector PIXCEL (longitud activa 3.35° 2Theta). Las posiciones de los picos característicos de los cristales se enumeran en la Tabla 21 a continuación (determinada por XRPD) y se muestran en la figura 1:
Tabla 21 - Cinco picos más característicos del Ejemplo 35:
°2-theta
7.6
12.7
14.8
19.3
25.5
Un experto en la técnica apreciará que los datos del patrón de difracción presentados en el presente documento no deben considerarse absolutos y cualquier forma cristalina que proporcione un patrón de difracción de potencia sustancialmente idéntico a los descritos en el presente documento está dentro del alcance de la presente divulgación (para más información véase Jenkins, R & Snyder, R.L. "Introduction to X-Ray Powder Diffractometry" John Wiley & Sons, 1996).
Ejemplo 36
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida
S e añadió HATU(hexafluorofosfato de 3-óxido de (1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio) (832 mg, 2.19 mmol) a 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 11 (300 mg, 0.73 mmol), 2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanoato de litio, Intermedio 58 (511 mg, 2.55 mmol) y DIPEA (1.273 ml, 7.29 mmol) en DMF (1 ml). La solución resultante se agitó a 25 °C durante 16 horas. El producto en bruto se purificó por cromatografía preparativa de fase inversa en una columna XBridge Prep C18 OBD (5 |jm, 19 x 150 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 30 - 55 % en agua (NH3H2O al 0.03 %) como eluyente y un flujo de 30 ml/min. El compuesto se detectó usando una longitud de onda de 220 y 254 nm. Los enantiómeros se separaron por SFC quiral en una columna (R,R)WHELK-01 5/100 Kromasil (250 x 21.1 mm) usando 1:1 de MeOH al 50 %/acetonitrilo (DEA al 0.1 %) en CO2 y un flujo de 50 ml/min. El compuestos se detectaron usando una longitud de onda de 220 nm.
El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida, Ejemplo 36 (40 mg, 6 %, 99.9 % de e.e.).
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 51.08 (t, 3H), 1.72 - 2.02 (m, 4H), 2.38 - 2.50 (m, 6H), 2.70 - 2.85 (m, 4H), 2.88 - 3.10 (m, 4H), 3.15 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.26 (d, 1h), 7.34 (t, 1H), 7.52 - 7.65 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.08, (d, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.52 - 8.63 (m, 1H). No se observaron protones intercambiables.
19F RMN (376 MHz, CD3OD) 5 -125.64. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
Ejemplo 37
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida
El segundo isómero de elución de la síntesis del Ejemplo 36 se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida, (40 mg, 6 %, 99.9 % de e.e.).
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 51.07 (t, 3H), 1.73 - 2.03 (m, 4H), 2.39 - 2.49 (m, 6H), 2.68 - 2.83 (m, 4H), 2.88 - 3.09 (m, 4H), 3.15 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.25 (d, 1h), 7.34 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.08, (d, 1 h ), 8.28 (s, 1H), 8.50 - 8.63 (m, 1 H). No se observaron protones intercambiables. 19F RMN (376 MHz, CD3OD) 5 -125.70.
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
Los procedimientos descritos anteriormente para los Ejemplos 36 y 37 se repitieron usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 38-45 descritos en la Tabla 22 a continuación:
Tabla 22
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Ejemplo 46
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida
Se disolvieron diclorhidrato del ácido 2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanoico, Intermedio 47 (175 mg, 0.68 mmol) y CDI (84 mg, 0.52 mmol) en DMF (2 ml) y se agitaron a temperatura ambiente durante 1.5 h. Se añadió 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 18 (187 mg, 0.45 mmol) y la reacción se calentó a 60 °C durante 4 h. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se añadió DCM (25 ml) y la fase orgánica se lavó con NaHCO3 al 8 % (3 x 25 ml), se secó con un separador de fases y se evaporó al vacío. El compuesto se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 25 - 70% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 228 nm. El producto se recogió y se liofilizó. Los enantiómeros se separaron usando SFC quiral en una columna CelluCoat (250 x 20 mm, 5 |jm) usando 100:0.5 de IPA al 40 %/DEA en CO2 a 120 bar como eluyente y un flujo de 140 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 270 nm. El primer compuesto de elución se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se purificó de nuevo por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 25 - 70 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. El compuesto se detectó por UV a 228 nm. Las fracciones de producto se recogieron y se liofilizaron para producir (R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida, Ejemplo 46 (40 mg, 30 %, 99.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 51.25 (d, 3H), 1.71 - 1.82 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.52 - 2.67 (m, 4H), 2.77 - 2.89 (m, 4H), 3.23 - 3.39 (m, 3H), 3.57 (c, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.37 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.13 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 11.61 (s a, 1H). 19F RMN (470 MHz, DMSO-de) 5 -120.55, -147.73. m/z (ES+), [M+H]+ = 584.4.
Ejemplo 47
(S)-2-((R)-2,4-dimetilpi perazi n-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida
Etapa 1
Se suspendieron 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina, Intermedio 20 (300 mg, 0.55 mmol) y 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 69 (103 mg, 0.55 mmol) en DCM (5 ml) y se añadió piridina (0.134 ml, 1.66 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano, T3P (0.989 ml, 1.66 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 1 h. Se añadieron otra porción de 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 53 (20 mg, 0.11 mmol) y T3P (200 jl, 0.34 mmol). La mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (15 ml), se inactivó con NaHCO3 sat. (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 min. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 5 ml). La fase orgánica combinada se secó con MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida (377 mg, 96 %).
m/z (ES+), [M+H]+ = 710.5.
Etapa 2
Se disolvió 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida (335 mg, 0.47 mmol) en DCM (3.5 ml), se enfrió con un baño de hielo y se añadió TFA (1.083 ml, 14.16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadió DCM (5 ml) seguido de TFA (1 ml) y la agitación continuó durante 5 h. Después, la mezcla de reacción se calentó a 40 °C durante una noche. Se añadió DCM (25 ml) seguido de NaHCO3 (10 ml) y MeOH (1 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó con MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió de nuevo en DCM (25 ml), NaHCO3 sat. (10 ml) y MeOH (1 ml), se agitó y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se secó con MgSO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. Los compuestos se recogieron por UV a 269 nm y se evaporaron al vacío. Los diastereoisómeros se separaron por SFC quiral en una columna Chiralpak IB (30 x 250 mm, 5 jm ) usando 100:0.5 de EtOH al 35 %/TEA en CO2 a 120 bar como fase móvil y un flujo de 80 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 260 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (S)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 47 (20 mg, 8 %, 99.9 % de).1
1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) 5 1.03 (d, 3H), 1.30 (d, 3H), 1.86 (t, 1H), 2.07 - 2.23 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.54 - 2.63 (m, 2H), 2.68 - 2.78 (m, 1H), 2.79 - 2.91 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.69 (c, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.32 - 7.47 (m, 2H), 7.49 - 7.61 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.22 - 8.35 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 11.38 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.4.
Ejemplo 48
(R)-2-((R)-2,4-dimetilpi perazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida
El segundo isómero de elución de la reacción del Ejemplo 47, etapa 2 se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida (22 mg, 9 %, 99.2 % de).
1H RMN (500 MHz, DMSO-da) 5 1.11 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.11 - 2.23 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.44 - 2.49 (m, 1H), 2.54 - 2.66 (m, 3H), 2.66 - 2.78 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.76 - 3.89 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.51 - 7.59 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.23 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 11.37 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.4.
Ejemplo 49
(R) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida
Se agitaron diclorhidrato del ácido (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoico, Intermedio 27 (573 mg, 2.21 mmol) y CDI (275 mg, 1.70 mmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente durante 1 h (desprendimiento de gas). Se añadió 3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-amina, Intermedio 18 (816 mg, 1.47 mmol) disuelto en DMF (2 ml) y la reacción se agitó a 50 °C durante 5 h. La reacción se diluyó con DCM (25 ml) y Na2CO3 al 5% (ac.) (25 ml), se agitó y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 25 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron con un separador de fases y se concentraron al vacío. El residuo se purificó dos veces por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 15 - 65 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 235 nm. El producto se liofilizó para proporcionar (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 49 (234 mg, 32 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 1.11 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.1 - 2.23 (m, 4H), 2.42 - 2.54 (m, 1H), 2.54 -2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.78 (m, 1H), 3.25 - 3.36 (m, 3H), 3.77 - 3.88 (m, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.57 - 7.68 (m, 1H), 8.15 - 8.24 (m, 2H), 8.29 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 11.55 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 584.3.
Ejemplo 50
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpi perazi n-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida
Se suspendieron 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-amina, Intermedio 11 (387 mg, 0.94 mmol) y diclorhidrato del ácido 2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)butanoico, Intermedio 46 (300 mg, 1.10 mmol) en DCM anhidro (25 ml) y se añadió piridina (0.3 ml, 3.71 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C en un baño de hielo y se añadió gota a gota T3P (1.5 ml, 2.52 mmol). El baño de hielo se eliminó y la mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 20 min. La mezcla de reacción se inactivó con NaHCO3 sat. (20 ml) y se agitó a 23 °C durante 30 min. La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en dos inyecciones en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 70 % en tampón 95/5/0.2 de H2O/ACN/NH3 durante 25 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. El primer isómero de elución se recogió y se liofilizó para proporcionar (S)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida, Ejemplo 50 (205 mg, 37 %).
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 50.97 (t, 3H), 1.10 (d, 3H), 1.65 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.87 (m, 1H), 1.91 - 2.01 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 2.81 - 2.94 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.55 (t, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.5 - 7.58 (m, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.24 - 8.34 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.20 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
Ejemplo 51
(R)-2-((R)-2,4-dimetilpi perazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida
El segundo isómero de elución de la reacción del Ejemplo 50 se recogió y se liofilizó para proporcionar (R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida, Ejemplo 51 (210 mg, 38 %).1
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 50.95 (t, 3H), 1.13 (d, 3H), 1.57 - 1.69 (m, 1H), 1.72 - 1.86 (m, 1H), 2.00 - 2.09 (m, 1H), 2.09 - 2.23 (m, 4H), 2.38 - 2.58 (m, 6H), 2.72 - 2.81 (m, 1H), 2.81 - 2.91 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.44 - 3.53 (m, 1H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.45 (m, 2H), 7.51 - 7.6 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.24 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 11.32 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
El procedimiento descrito anteriormente para los Ejemplos 50-51 se repitieron usando los intermedios indicados para dar los Ejemplos 52-57 descritos en la Tabla 23 a continuación
Tabla 23
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Figure imgf000057_0001
Ejemplo 58
(R)-2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida
Etapa 1
S e suspendieron 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina, Intermedio 20 (210 mg, 0.39 mmol) y 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 51 (97 mg, 0.44 mmol, ~84% en peso) en DCM (10 ml) y se añadió piridina (0.10 ml, 1.24 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota T3P (0.9 ml, 1.51 mmol, 50 % en peso en EtOAc). La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 1 hora. S e añadió 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 51 (24 mg, 0.11 mmol) seguido de T3P (0.2 ml, 0.34 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 30 min. La mezcla de reacción se inactivó con NaHCO3 sat. (20 ml) y se agitó a 22 °C durante 15 min. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 10 ml). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases y se concentró al vacío. Los diastereoisómeros se separaron por SFC quiral en una columna CelluCoat (5 |jm, 250 x 30 mm) usando 100:0.5 de EtOH al 32 %/DEA en CO2 a 120 bar y un flujo de 140 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 220 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar 2-((S)-2,4-dimetilpi perazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 1 (125 mg, 45 %, 99.9 % de).
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.09 (s, 9H), 0.77 - 0.89 (m, 1H), 0.92 - 1.17 (m, 4H), 1.25 (d, 3H), 1.81 - 1.95 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.22 - 2.34 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.62 (m, 3H), 2.67 - 2.86 (m, 2H), 3.07 - 3.65 (m, 6H), 5.72 (d, 1H), 5.87 (d, 1H), 7.05 (t, 1H), 7.35 - 7.48 (m, 2H), 7.51 - 7.6 (m, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.23 - 8.31 (m, 1H), 8.31 - 8.41 (m, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.86 (s, 1H).
Etapa 2
Se disolvió 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 1 (123 mg, 0.17 mmol) en DCM anhidro (2 ml) y se añadió TFA (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 19 h. Se añadió DCM (10 ml) seguido de NaHCO3 (10 ml) y MeOH (1 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con una mezcla 5:1 de DCM/MeOH (2 x 6 ml). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. El producto se recogió y se liofilizó para proporcionar (R)-2-((S)-2,4-dimetilpi perazi n-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidi n-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 58 (63 mg, 63 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 1.03 (d, 3H), 1.30 (d, 3H), 1.86 (t, 1H), 2.08 - 2.22 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.46 - 2.62 (m, 2H), 2.68 - 2.78 (m, 1H), 2.79 - 2.91 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.69 (c, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.33 - 7.45 (m, 2H), 7.5 - 7.59 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.25 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 11.36 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.3.
Ejemplo 59
(S)-2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1 -il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida Isómero 2
Etapa 1
El segundo isómero de elución de la reacción del Ejemplo 58, etapa 1, se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 2 (120 mg, 43 %, 99.7 % de).
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.09 (s, 9H), 0.81 - 0.91 (m, 1H), 0.95 - 1.16 (m, 7H), 1.95 (t, 1H), 2.03 - 2.18 (m, 4H), 2.33 - 2.43 (m, 4H), 2.43 - 2.57 (m, 1H), 2.58 - 2.72 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.4 - 3.56 (m, 2H), 3.84 (s, 1H), 5.73 (d, 1H), 5.87 (d, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.11 - 8.22 (m, 2H), 8.27 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.84 (s, 1H).
Etapa 2
Se disolvió 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)propanamida Isómero 2 (118 mg, 0.17 mmol) en DCM anhidro (2 ml) y se añadió TFA (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas. Se añadió DCM (10 ml) seguido de NaHCO3 (10 ml) y MeOH (1 ml). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con una mezcla 5:1 de DCM/MeOH (2 x 6 ml ). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80 % en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. Las fracciones de producto se liofilizaron para proporcionar (S)-2-((S)-2,4-dimetilpi perazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida, Ejemplo 59 (74 mg, 77 %) en forma de un sólido de color blanco.1
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 1.12 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.16 - 2.22 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.43 - 2.48 (m, 1H), 2.54 - 2.66 (m, 3H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.76 - 3.88 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.51 - 7.59 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.34 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 11.36 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 580.5.
Ejemplo 60
(R)-2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1 -il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida
Etapa 1
Se disolvieron 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)butanoato de litio, Intermedio 52 (104 mg, 0.52 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-amina, Intermedio 20 (210 mg, 0.39 mmol) en DCM (10 ml) y se añadió piridina (0.1 ml, 1.24 mmol) seguido de T3P (1.0 ml, 1.68 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante una noche. La mezcla de reacción se inactivó con NaHCO3 (15 ml), se agitó durante 10 min más, y se extrajo con DCM (3 x 7 ml). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm, 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. Las fracciones puras se agruparon y se liofilizaron. Los diastereoisómeros se separaron por SFC quiral en una columna ChiralPak IB (5 |jm, 250 x 30 mm) usando 100:0.5 de EtOH al 23 %/DEA en CO2 a 120 bar y un flujo de 150 ml/min. Los compuestos se detectaron usando UV a 270 nm. El primer isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)butanamida Isómero 1 (69 mg, 24 %, 99.3 % de).
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.08 (s, 9H), 0.80 - 0.96 (m, 2H), 0.99 (t, 3H), 1.06 (d, 3H), 1.63 - 1.87 (m, 3H), 2.06 - 2.16 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.56 (d, 2H), 2.73 - 2.86 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.31 (s, 1H), 3.47 - 3.56 (m, 2H), 5.78 (dd, 2H), 7.05 (t, 1H), 7.37 - 7.44 (m, 2H), 7.52 - 7.59 (m, 1H), 8.13 - 8.21 (m, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.61 (s, 1H).
Etapa 2
Se disolvió 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-7-il)butanamida Isómero 1 (67 mg, 0.09 mmol) en DCM (2 ml) y se añadió TFA (3 ml).
La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 17 h. Se añadieron DCM (10 ml) y NaHCO3 (15 ml), se agitaron, las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 5 ml). Las fases orgánicas combinadas se filtraron a través de un separador de fases y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. Los picos de producto se recogieron y se liofilizaron para proporcionar (R)-2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida, Ejemplo 60 (31 mg, 56%) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 50.97 (t, 3H), 1.10 (d, 3H), 1.62 - 1.88 (m, 3H), 1.97 (t, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 2.82 - 2.95 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.56 (t, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.24 - 8.37 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 11.22 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
Ejemplo 61
(S)-2-((S)-2,4-dimetilpi perazi n-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida
Etapa 1
El segundo isómero de elución del Ejemplo 60, etapa 1, se recogió y se evaporó al vacío para proporcionar 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)butanamida (133 mg, 47 %, 95.9 % de).1
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 5 -0.09 (s, 9H), 0.82 - 0.91 (m, 1H), 0.92 - 1.02 (m, 4H), 1.12 (d, 3H), 1.53 - 1.66 (m, 1H), 1.69 - 1.84 (m, 1H), 1.91 - 2.02 (m, 1H), 2.02 - 2.1 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.66 (m, 4H), 2.74 -2.84 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.48 - 3.56 (m, 3H), 5.77 (d, 1H), 5.84 (d, 1H), 7.05 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.52 -7.59 (m, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.24 - 8.31 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.73 (s, 1H).
Etapa 2
Se disolvió 2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)butanamida Isómero 2 (131 mg, 0.18 mmol) en DCM (2 ml) y se añadió TFA (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 17 h. Se añadieron DCM (10 ml) y NaHCO3 (15 ml), se agitaron, las fases se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 5 ml). Las fases orgánicas combinadas se filtraron a través de un separador de fases y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 19 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 20 minutos con un flujo de 19 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. El producto se recogió y se liofilizó para proporcionar (S)-2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)butanamida Isómero 2, Ejemplo 61 (65 mg, 60 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 50.95 (t, 3H), 1.13 (d, 3H), 1.56 - 1.70 (m, 1H), 1.72 - 1.85 (m, 1H), 2.01 - 2.09 (m, 1H), 2.09 - 2.23 (m, 4H), 2.34 - 2.58 (m, 6H), 2.73 - 2.81 (m, 1H), 2.81 - 2.91 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.45 - 3.54 (m, 1H), 6.98 (t, 1H), 7.36 - 7.46 (m, 2H), 7.50 - 7.59 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.33 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.5.
Ejemplo 62
(R)-3-etoxi-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
Se añadió en una porción DIPEA (688 pl, 3.94 mmol) a (R)-3-etoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato de litio, Intermedio 63 (237 mg, 1.09 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-amina, Intermedio 11 (180 mg, 0.44 mmol) en DCM (1 ml) a 0 °C. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 10 min. Después, se añadió gota a gota anhídrido cíclico del ácido 1-propanofosfónico, T3P (835 mg, 1.31 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml), se lavó con NaHCO3 saturado (2 x 50 ml) y salmuera (2 x 50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa usando 20:1 de DCM/MeOH como eluyente. El producto (50 % de e.e.) se purificó por HpLC preparativa quiral en una columna Chiralpak IA (20 x 250 mm, 5 pm) usando IPA al 20 % en MTBE (DEA al 0.1 %) como eluyente con un flujo de 20 ml/min durante 19 min. El producto se detectó usando la longitud de onda de 254 y 220 nm. El isómero principal se recogió para proporcionar (R)-3-etoxi-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 62 (40 mg, 15 %, 99.7 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) 51.21 (t, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.42 (s, 6H), 2.50 - 2.73 (m, 4H), 2.74 - 3.02 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.45 - 3.65 (m, 3H), 3.86 (dd, 1H), 3.97 (dd, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.13 (d, 2H), 7.31 (t, 1H), 7.49 - 7.63 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.47 - 8.52 (m, 1H). 19F RMN (282 MHz, CD3OD) 5 -125.71. m/z (ES+), [M+H]+ = 610.
Ejemplo 63
(R)-3-etoxi-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
El procedimiento descrito anteriormente para el Ejemplo 62 se repitió usando los intermedios 18 y 63 para dar el Ejemplo 63 (80 mg, 24 %, 97.9 % de e.e.) en forma de un sólido de color blanco.
Se purificó por HPLC preparativa quiral en una columna ChiralPak-AD-H-SL002, (20 x 250 mm) usando IPA al 50 % en hexano (DEA al 0.1 %) y un flujo de 14 ml/min durante 56 min. El compuesto se detectó usando 254 y 220 nm. El isómero principal se evaporó al vacío.1
1H RMN (300 MHz, CD3OD) 5 1.21 (t, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.45 - 2.72 (m, 4H), 2.73 - 3.02 (m, 4H), 3.21 (s, 3H), 3.44 -3.66 (m, 3H), 3.78 - 4.04 (m, 2H), 7.00 - 7.21 (m, 2H), 7.42 (t, 1H), 7.58 - 7.73 (t, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.23 - 8.37 (m, 2H), 8.42 (t, 1H).
No se observaron protones intercambiables 19F RMN (282 MHz, CD3OD) 5 -149.01, -124.61
m/z (ES+), [M+H]+ = 614.
Ejemplo 64
(R)-3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida
Etapa 1
Se suspendieron 3-(benciloxi)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanoato sódico, Intermedio 64 (317 mg, 0.93 mmol) y 3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-indol-7-amina, Intermedio 20 (448 mg, 0.83 mmol) en acetato de etilo (20 ml) y se añadió piridina (0.25 ml, 3.09 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota T3P (1.0 ml, 1.68 mmol, 50% en peso en acetato de etilo). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 10 min y después a 22 °C durante 14 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C, se añadió gota a gota T3P (1.0 ml, 1.68 mmol) y la agitación continuó a 22 °C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 0°C, se añadió gota a gota T3P (0.5 ml, 0.84 mmol) y se agitó a 22 °C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió de nuevo a 0 °C, se añadió gota a gota T3P (0.5 ml, 0.84 mmol) y la agitación continuó a 22 °C durante 16 h. Se añadió agua (5 ml) y la mezcla se agitó a 22 °C durante 30 min. Se añadió NaHSO4 (20 ml) seguido de DCM (10 ml) y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 10 ml). La fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3 (metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida (690 mg, cuant.) que se usó directamente en la siguiente etapa. m/z (ES+), [M+H]+ = 802.3.
Etapa 2
Se disolvió 3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida Isómero 2 (600 mg, 0.75 mmol) en DCM anhidro (3 ml) y se añadió TFA (3 ml, 26 mmol) a la solución agitada a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 4 h. Se añadió TFA (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 22 °C durante 3 días. Se añadió TFA (2 ml) y la agitación continuó durante 4 días. Se añadió TFA (2 ml) y la mezcla se agitó a 22 °C durante una noche. Se añadió DCM (20 ml) y la mezcla se neutralizó con NaHCO3 sat. (50 ml) y se añadió MeOH (3 ml). La capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con MeOH al 10 % en DCM (2 x 11 ml). La fase orgánica combinada se filtró a través de un separador de fases seguido de un pequeño lecho de sílice, que se lavó con una mezcla de DCM y MeOH. El filtrado combinado se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 |jm 250 x 50 mm) usando un gradiente de acetonitrilo al 20 - 80% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 30 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 269 nm. Los picos de producto se recogieron y se liofilizaron. Los enantiómeros se separaron por HPLC preparativa quiral en una columna Lux C4 (30 x 250 mm, 5 |jm) usando 100:0.1 de MeOH al 100 %/NH3 como eluyente y un flujo de 40 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 260 nm. El segundo isómero de elución se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se purificó de nuevo por HPLC preparativa en una columna XBridge C18 (10 jm , 250 x 50 mm de D.I.) usando un gradiente de acetonitrilo al 25 - 75% en 95/5/0.2 de tampón H2O/ACN/NH3 durante 25 minutos con un flujo de 100 ml/min. Los compuestos se detectaron por UV a 270 nm. Las fracciones puras se liofilizaron para proporcionar (R)-3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida, Ejemplo 64 (161 mg, 32 %) en forma de un sólido.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 52.15 (s, 3H), 2.26 - 2.44 (m, 7H), 2.59 - 2.69 (m, 2H), 2.71 - 2.82 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.58 (t, 1H), 3.79 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H), 6.98 (t, 1H), 7.24 - 7.36 (m, 5H), 7.40 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.52 - 7.58 (m, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.33 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.21 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 672.5.
Ejemplo 65
(S)-3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1 - il)propanamida
El primer isómero de elución de la reacción del Ejemplo 64, etapa 2 se recogió y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en acetonitrilo/agua y se liofilizó para proporcionar (S)-3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida Ejemplo 65 (63 mg, 12 %) en forma de un sólido.1
1H RMN (500 MHz, DMSO-de) 52.15 (s, 3H), 2.27 - 2.44 (m, 7H), 2.59 - 2.69 (m, 2H), 2.72 - 2.82 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.58 (t, 1H), 3.79 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H), 6.98 (t, 1H), 7.24 - 7.37 (m, 5H), 7.40 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.33 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.21 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 672.4.
Ejemplo 66
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida
Etapa 1
Se añadió carbonato potásico (4.21 g, 30.45 mmol) a 2-bromo-3-metoxipropanoato de metilo (3 g, 15.23 mmol) y piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (3.12 g, 16.75 mmol) en acetonitrilo (60 ml) a 25 °C al aire. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y la torta de filtro se lavó con más cantidad de acetonitrilo. El filtrado se combinó y el disolvente se eliminó a presión reducida. El producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida en alúmina, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 100 % en éter de petróleo. Las fracciones puras se evaporaron a sequedad para proporcionar 4-(1,3-dimetoxi-1-oxopropan-2- il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (2.300 g, 50.0 %) en forma de un aceite incoloro.
m/z (ES+), [M+H]+ = 303.
Etapa 2
Se añadió hidróxido de litio (0.238 g, 9.92 mmol) a una suspensión de 4-(1,3-dimetoxi-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (1.0 g, 3.31 mmol) en una mezcla de disolvente de MeOH (5 ml), t Hf (5.00 ml) y agua (25 ml), después se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se concentró al vacío para proporcionar 2-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)-3-metoxipropanoato de litio en bruto (1.200 g) en forma de un sólido de color amarillo. m/z (ES+), [M+H]+ = 289.
Etapa 3
Se añadió 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano (5398 mg, 9.99 mmol) a una solución del Intermedio 33 (415 mg, 1.00 mmol), 2-(4-(terc-butoxicarbonil) piperazin-1-il)-3-metoxipropanoato de litio (588 mg, 2.00 mmol) y DIPEA (1.745 ml, 9.99 mmol) en DCM (30 ml) a ta, después se agitó a ta durante una noche. La reacción se diluyó con agua (100 ml), se extrajo con DCM (3 x 20 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), después se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa (columna XBridge Prep C18 OBD, 5 |j de sílice, 19 mm de diámetro, 150 mm de longitud), usando mezclas polares decrecientes de agua (que contenían NH3 al 0.05%) y MeCN como eluyentes. Las fracciones que contenían el compuesto deseado se evaporaron a sequedad para proporcionar 4-(1-((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-3-metoxi-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de tercbutilo (305 mg, 44.5 %) en forma de un sólido de color amarillo. m/z (ES+), [M+H]+ = 686.
Etapa 4
Se añadió 4-(1-((3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)amino)-3-metoxi-1-oxopropan-2-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (300 mg, 0.44 mmol) a una solución de 1:3 de TFA-DCM (10 ml), después se agitó a ta durante 1 h. Después, el disolvente se concentró al vacío y el producto en bruto se purificó por HPLC preparativa (columna XBridge Prep C18 OBD, 5 j de sílice, 19 mm de diámetro, 150 mm de longitud), usando mezclas polares decrecientes de agua (que contenían ácido fórmico al 0.1%) y MeCN como eluyentes. Las fracciones apropiadas se concentraron a sequedad para proporcionar N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida (200 mg, 78 %) en forma de un sólido de color amarillo. Los compuestos se purificaron adicionalmente por HPLC preparativa quiral en una columna chiralpak ID-3, eluyendo isocráticamente con MeOH al 10% en MTBE (modificado con DEA al 0.1%) como eluyente. Las fracciones que contenían el primer compuesto de elución se concentraron a sequedad para proporcionar el ejemplo 66, (R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida (39.0 mg, 19.43 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 52.50 (s, 3H), 2.68-2.71 (m, 2H), 2.80 - 2.90 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 3.62 - 3.69 (m, 2H), 3.76 - 3.83 (m, 1H), 7.00-7.06 (t, 1H), 7.44-7.49 (t, 1H), 7.60 - 7.65 (m, 2H), 8.16 - 8.27 (m, 3H), 8.40 - 8.44 (m, 2H), 9.47 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 12.20 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 586.
Ejemplo 67
Las fracciones del segundo isómero de elución del Ejemplo 66 se concentraron a sequedad para proporcionar el Ejemplo 67, (S)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida (35.0 mg, 17.50 %) en forma de un sólido de color blanco.
1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 52.50 (s, 3H), 2.73 (m, 2H), 2.83 - 2.92 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 3.64 - 3.69 (m, 2H), 3.76 - 3.82 (m, 1H), 7.00-7.06 (t, 1H), 7.44-7.49 (t, 1H), 7.60 - 7.65 (m, 2H), 8.16 - 8.27 (m, 3H), 8.41 - 8.44 (m, 2H), 9.47 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 12.29 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 586.
Ejemplo 68: Estudios de inhibición de enzimas
Los estudios de inhibición de enzimas se realizaron usando JAK1 recombinante (aminoácidos 866-1154, Life Technologies, #PV4774, Carlsbad, CA), JAK2 (aminoácidos 831-1132, AstraZeneca R & D Boston), o JAK3 (aminoácidos 781-1124, AstraZeneca R & D Boston) en condiciones de tampón de HEPES 50 mM pH 7.3, Dt T 1 mM, Tween-20 al 0.01 %, BSA 50 |jg/ml y MgCh 10 mM. La enzima JAK se expresó como fusión GST N-terminal en células de insecto y se purificó por cromatografía de afinidad de glutatión y exclusión por tamaño. Las enzimas se ensayaron en su concentración final aproximada de ATP fisiológica de 5 mM, en presencia de un inhibidor dosificado a concentraciones de ensayo finales de 30, 3, 0.3, 0.03, 0.003 y 0 jM .
Para JAK1, se incubaron 4 nM de la enzima con 1.5 jM de sustrato peptídico (FITC-C6-KKHTDDGYMPMSPGVA-NH2 (SEQ ID NO:1), Intonation, Boston, MA). Para jAk2, se incubaron 0.3 nM de enzima con 1.5 jM de sustrato peptídico (5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH2 (SEQ ID NO:2), Intonation, Boston, MA). Para JAK3, se incubaron 0.1 nM de enzima con 1.5 jM de sustrato peptídico (5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH2 (SEQ ID NO:2), Intonation, Boston, MA). Los péptidos fosforilados y no fosforilados se separaron y se cuantificaron mediante un sistema Caliper LC3000 (Caliper Life Sciences, MA) para calcular el porcentaje de inhibición. Los resultados de este ensayo se muestran en la Tabla 24.
Ejemplo 69: Ensayo de JAK-STAT6-luciferasa inducido por interleucina celular (pSTAT6)
Se generó una línea celular estable basada en monocitos U937 que tiene un gen indicador de luciferasa genómicamente incorporado bajo el control del promotor STAT6 (U937-STAT6-Luc). Las células se cultivaron en suspensión en medio de crecimiento (RPMI 1640 con GlutaMAX y Hepes 25 mM, FCS al 10%, sodio al 1%, aminoácidos no esenciales al 1% y 0.5 mg/ml de geneticina (para selección)) a 37 °C y CO 2 al 5 %.
Las células se recogieron mediante centrifugación a 250 g durante 5 min y se resuspendieron en tampón de ensayo (HEPES 20 mM, 1 x HBSS y BSA al 0.1%) hasta 1000 células por ml. Para la estimulación de las células se usó interleucina (IL-13) también disuelta en tampón de ensayo a 300 pM o 7 nM, respectivamente. Esto da 150 pM y 3.5 nM, respectivamente en el ensayo final, induciendo la señal al 80% de Emáx. Los compuestos de ensayo y control se aplicaron a placas de ensayo (placas de color blanco de bajo volumen de 384 pocillos) en diluciones en serie de 10 mM a 0.5 nM a 5 nl por pocillo en DMSO.
A cada pocillo se le añadieron 4 |jl de células y 4 |jl de interleucina (IL-13) y las placas se sellaron y se incubaron a 37 °C durante 4 horas y media y después a temperatura ambiente durante 30 minutos. El ensayo se desarrolló mediante la adición de 4 jl por pocillo de SteadyGlo (Promega) y después de 20 min las placas se leyeron en un lector de placas Envision con filtro de luminiscencia.
En el ensayo, por lo tanto, los compuestos se diluyeron 1600 veces y las curvas de dosis-respuesta para la inhibición de la señal inducida por interleucina determinan la CI 50 para los compuestos. El ensayo determinó compuestos en el intervalo de CI 50 de 2 nM a 2 jM, relevantes para los compuestos de control y ensayo.
Tabla 24
Figure imgf000063_0001
Figure imgf000064_0001
Ejemplo 70 - Estudio de valoración de la dosis para Alopecia Areata in vivo
Un compuesto dentro del alcance de la presente divulgación se administró por vía oral a ratones C3H/HeJ con alopecia areata (AA) establecida a dosis crecientes hasta que se observó crecimiento claro del pelo. El crecimiento del pelo se expresa como la Puntuación del índice de pelo (HIS) evaluada semanalmente y en comparación con los ratones sanos (pelaje completo = HIS de 300) y los ratones con AA completa (sin pelaje = HIS de 0).
A. Grupos de animales
Grupo 1 -(n = 6) grupo de tratamiento de ratones con alopecia areata
Grupo 2 -(n = 6) ratones no tratados con alopecia areata (grupo de control)
Grupo 3 -(n = 6) controles sanos
B. Tratamiento
Los tres grupos se mantuvieron 6 por 6 en jaulas de makrolon en una instalación con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h a 21 ± 2 °C y con una humedad relativa de 55 ± 15%. La comida para roedores y el agua se sirvieron ad libitum.
Las fotografías se tomaron antes del inicio del estudio y justo antes de la finalización. El peso corporal (PC) e HIS se controlaron una vez a la semana. Una vez al día, a los ratones del Grupo 1 se les sirvieron 5 g de comida para roedores molida empapada con el compuesto del ejemplo 35 en 10 ml de agua del grifo a dosis aumentadas por etapas (se controlaron el PC e HIS una vez a la semana):
1. 2 semanas a 0.5 mg/kg de peso corporal (PC),
2. 2 semanas a 2.5 mg/kg de PC, y
3. 2 semanas a 12.5 mg/kg de PC.
C. Finalización
A las 1-2 h después de la última dosis a la concentración más alta del compuesto del Ejemplo 35, mediante la cual se había observado un crecimiento claro del pelo y se había registrado la puntuación de crecimiento del pelo, se sacrificaron los ratones del Grupo 1. Se tomaron muestras de sangre de detrás del ojo en tubos de ensayo recubiertos con EDTA (Multivette 300, Sarstedt) y se mantuvieron en hielo. El plasma se obtuvo mediante centrifugación (4 °C, 4000G, 5 min) y se transfirieron 50 |jl a una placa NUNC de 96 pocillos y se almacenaron a -20 °C hasta que se analizaron con respecto a la concentración del fármaco por LC-MSMS.
D. Resultados
Los resultados para los tres grupos se presentan como un gráfico en la figura 2, con HIS en el eje Y y el tiempo (semanas) en el eje X.
E. Resultados
La exposición media en plasma (concentración total) del compuesto del Ejemplo 35 en el momento de la finalización fue 338 nM, y el HIS = 218.
Los resultados indican que:
1. El compuesto del Ejemplo 35 produjo una respuesta deseada a la dosis más alta, aunque es necesario un tratamiento más prolongado para alcanzar un HIS = 300.
2. 12.5 mg/kg de PC será la dosis preferida para un experimento completo (12 semanas) que demuestre un efecto completo (HIS = 300).
Ejemplo 71 - Estudio de las propiedades farmacodinámicas del modelo de inflamación pulmonar OVA in vivo Las ratas marrones de Noruega se sensibilizaron y estimularon con albúmina de ovario de pollo (OVA). (Clinical and Experimental Allergy, 37 (2007) 973-988). Después de inhalar una cantidad de compuesto micronizado dentro del alcance de la presente divulgación, la reducción en la inflamación de las vías respiratorias en el pulmón de la rata marrón de Noruega estimulada con OVA se midió como % de reducción de eosinófilos en el lavado broncoalveolar (BAL) en comparación con ratas estimuladas, pero no tratadas usando el siguiente protocolo. Como el control del modelo, se usó una dosis superior i.t. (2 * 300 jg/kg) del compuesto de referencia modelo, Budesonida.
A. Grupos de animales
Se dividieron 74 animales en 8 grupos experimentales y se trataron de la siguiente manera:
Grupo 1 (solución salina/solución salina/aire), n = 6 - Sensibilización simulada (solución salina) el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) y simulada (solución salina) estimulado el Día 14 (P1). Tratamiento - aire ambiental
Grupo 2 (OVA/Solución salina/Lactosa), n = 8 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de estimulación simulada i.t. (solución salina) el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI Lactosa.
Grupo 3 (OVA/OVA/Lactosa), n = 12 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI Lactosa.
Grupo 4 (OVA/OVA/Ejemplo 35), n = 10 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI; Compuesto del Ejemplo 35, dosis diana 0.03 jg/kg
Grupo 5 (OVA/OVA/Ejemplo 35), n = 10 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI; Compuesto del Ejemplo 35, dosis diana 0.3 jg/kg
Grupo 6 (OVA/OVA/Ejemplo 35), n = 10 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI; Compuesto del Ejemplo 35, dosis diana 3 jg/kg
Grupo 7 (OVA/OVA/Ejemplo 35), n = 10 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - DPI; Compuesto del Ejemplo 35, dosis diana 30 jg/kg
Grupo 8 (OVA/OVA/Budesonida), n = 8 - Sensibilizado el Día 0 (S1) y el Día 7 (S2) con una mezcla Al(OH)3/OVA seguida de la estimulación con OVA i.t. el Día 14 (P1). Tratamiento - i.t. con Budesonida (compuesto de referencia modelo) a 2 x 300 jg/kg el Día 14. Dos veces al día.
B. Procedimiento experimental
Antes del inicio de la primera sensibilización (S1), se registró el peso corporal (PC) y todas las ratas fueron marcadas en la cola con el número de identificación. El PC se registró adicionalmente antes de S2 y antes del punto de terminación (D15). Se determinó todo el BAL de los animales. En el momento de la finalización, el realizador o realizadores (investigador) estaban cegados al estado de las ratas individuales.
i. Sensibilización
A las ratas se les administró por vía subcutánea (s.c.) una mezcla de OVA/Al(OH)3 (100 |jg de OVA: 100 mg de alúmina en 1 ml de solución salina/rata), y se les inyectó por vía intraperitoneal (i.p.) 0.5 ml/rata de toxina B. Pertussis (0.1 jg/ml) el Día 0 y el Día 7. La sensibilización simulada fue realizada por inyecciones s.c. e i.p. de una solución salina isotónica con el mismo volumen y estrategia.
ii. Administración de compuestos
Procedimiento de operativo de la inhalación de polvo seco (DPI)
Cada sistema de exposición consistía en una cámara de inhalación de exposición pasada de flujo, tubos de contención de rata y un mecanismo de alimentación de polvo Wright modificado. Las mediciones de la concentración de aerosol en la cámara de inhalación para cada nivel de dosis se realizaron por muestreo de filtro en uno de los puertos de inhalación (AP40, 47 mm, Millipore). Se consiguieron diferentes dosis del compuesto del Ejemplo 35 variando el tiempo de exposición mientras se mantenían constantes las concentraciones del artículo de ensayo y el flujo en las cámaras de exposición. Las ratas del Grupo 2 y 3 se expusieron a lactosa en el tubo de contención (cámaras Battelle). Las dosis diana inhaladas (|jg/kg) se calcularon suponiendo una duración de exposición de 2-10 minutos y un peso corporal de 250 g usando la siguiente fórmula:
Dosis (mg/kg/día) = C x RMV x D
PC x 1000
donde C = concentración de aerosol (jg/l). RMV: Volumen respiratorio por minuto (l/min) = 4.19 x PC (g) 0.66/1000 (McMahon 1977) D = Duración de la exposición. PC Peso corporal (kg).
Según los resultados del análisis de filtro, la carga pulmonar (dosis pulmonar) se puede calcular de acuerdo con la fórmula:
Dosis pulmonar = dosis inhalada * fracción depositada en el pulmón
Administración intratraqueal del compuesto de referencia modelo (budesonida)
Las ratas se pesaron el día anterior a la estimulación con OVA. En el momento de la estimulación, las ratas se anestesiaron con una mezcla de isoflurano (aire e isoflurano al 4%) en posición supina con un ángulo de 30-40° y se instilaron con vehículo o compuesto. Esta instilación intratraqueal se realizó mediante el uso de una cánula de metal modificada con un bulbo en bolo en el extremo. Las ratas se colocaron en jaulas en posición supina con la cabeza levantada hasta recuperar la conciencia. El compuesto de referencia se administró dos veces al día, siendo la segunda administración diaria 6 horas después de la primera administración diaria. Volumen de instilación: 0.25 ml/rata.
iii. Estimulación (provocación con OVA)
Cinco minutos (5') antes de la estimulación con OVA, se recogió sangre (0.2 ml) de la vena de la lengua y se recogió plasma (60 ul/pocillo) en una placa de 96 pocillos profundos. La provocación se produjo el Día 14 (P1) y se aplicó 2 horas después de la administración del compuesto. Las ratas se anestesiaron con una mezcla de isoflurano (aire y isoflurano al 4%) y se pusieron en posición supina con un ángulo de 30-40° y se instilaron con la solución salina isotónica o OVA (0.1 mg/ml). La instilación intratraqueal se realizó mediante el uso de una cánula de metal modificada con un bulbo en bolo en el extremo. Las ratas se colocaron en jaulas en posición supina con la cabeza levantada hasta recuperar la conciencia. La estimulación simulada se realizó por instilación i.t. de una solución salina isotónica con el mismo volumen y estrategia. Volumen de instilación: 0.25 ml/rata
iv. Terminación y lavado bronco-alveolar
A las 22 horas después de la estimulación con OVA (P1), las ratas se sacrificaron con una inyección intraperitoneal de 1 ml de pentobarbital (50 mg/ml). La sangre se puede tomar de la vena yugular en tubos recubiertos con EDTA, se centrifugó (Rotanta 46R, 480 xg, 10 min, 20 °C) y se recogerán muestras de plasma en 2 placas de 96 pocillos profundos (60 ul/pocillo) colocadas en seco hielo y almacenadas a un mínimo de -70 °C para el análisis adicional. El lavado broncoalveolar (BAL) se realizó por perfusión manual de todo el pulmón con p Bs . Después de exponer la tráquea, se insertó un tubo de polietileno (PE120) y se ligó con sutura. El tubo se conectó a una jeringa, se llenó previamente con 4.2 ml de PBS a temperatura ambiente, se inyectó lentamente en el pulmón, con una duración de 10 segundos en el pulmón. El fluido se recogió por aspiración lenta en la jeringa. Este procedimiento se realizó dos veces. El fluido BAL final se transfirió a un tubo de ensayo (4 ml, polipropileno (PP)). Los tubos con muestras BAL se pesaron (suponiendo que 1 ml de BALF es igual a 1 g). El BAL se mantuvo en hielo hasta la centrifugación (Rotanta 46R, 300 xg, 10 min, 4 °C). Después de la centrifugación, el sobrenadante se dividió en 4 placas de 96 pocillos (0.1 ml/pocillo) colocadas en hielo seco, se guardaron y se almacenaron en un mín. de -70 °C hasta el análisis de los mediadores.
Después, el sedimento celular se suspender de nuevo en 0.5 ml de PBS y se mantuvo en hielo hasta el recuento celular. El número total y diferencial de células se contó utilizando un SYSMEX XT-1800i Vet semiautomatizado (Sysmex, Kobe Japón) con el programa cerrado: BALrOVAi.
C. Resultados
Basándose en el análisis de filtro, se obtuvieron las siguientes dosis de pulmón (|jg/kg de peso corporal) del ejemplo micronizado 35:
Grupo 4: 0.08
Grupo 5: 0.11
Grupo 6: 0.6
Grupo 7: 4.76
Los resultados se presentan como gráficos de barras con valores de p anteriores, como alternativa, indicando n.s. no significativo, y el % de reducción de eosinófilos en comparación con el grupo 3 no tratado (OVA/OVA) de cada grupo experimental en la figura 3.
Los resultados indican que:
1. El compuesto del Ejemplo 35 redujo los eosinófilos en BAL en 7, (no significativo), 28 (no significativo), 68 (p <0.01) y 61 (p <0.01)% a las dosis pulmonares de 0.08, 0.11, 0.6 y 4.76 jg/kg respectivamente.
2. La provocación de OVA (Grupo 3) aumentó significativamente la cantidad de eosinófilos en BAL.
3. El compuesto del Ejemplo 35 redujo significativamente la presencia de eosinófilos de una manera dependiente de la dosis con una inhibición máx del 68% en comparación con el control con OVA (grupo 3), y que se observa una meseta de inhibición desde la dosis de 0.6 jg/kg.
4. El compuesto de referencia modelo Budesonida en la dosis superior a 2 * 300 mg/kg (Grupo 8) mostró una inhibición del 97% de eosinófilos, en un intervalo observado para este modelo.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (18)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000068_0001
en la que:
cada uno de R1, R3, y R4 se escoge individualmente de hidrógeno y metilo;
R2 se escoge de hidrógeno, metilo, y -CH2CH2OH;
n es 1 o 2;
R5 se escoge de metilo, etilo, y -C H 2OR8;
R6 se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7 se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8 se selecciona de metilo, etilo, y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que cada uno de R1-R4 se escoge independientemente de hidrógeno y metilo.
3. El compuesto de las reivindicaciones 1-2, en el que R1, R3, y R4 son todos hidrógeno.
4. El compuesto de las reivindicaciones 1-3, en el que R2 es metilo.
5. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R5 es metilo o -C H 2OR8.
6. El compuesto de las reivindicaciones 1-5, en el que R8 es metilo.
7. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R6 es un metilo o un átomo de flúor.
8. El compuesto de las reivindicaciones 1-7, en el que R6 es un átomo de flúor.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R7 es metilo.
10. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la estructura de fórmula (la):
Figure imgf000069_0001
en la que:
cada uno de Ría, R3a, y R4a se escoge individualmente de hidrógeno y metilo; R2a se escoge de hidrógeno, metilo, y -CH2CH2OH;
n es 1 o 2;
R5a se escoge de metilo, etilo, y -C H 2ORsa;
R6a se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7a se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8a se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la estructura de fórmula (Ib):
Figure imgf000069_0002
en la que:
R5b se escoge de metilo, etilo, y -C H 2OR8b;
R6b se escoge de metilo, cloro, y flúor;
R7b se selecciona de metilo, etilo, y ciclopropilo; y
R8b se selecciona de metilo, etilo y bencilo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. El compuesto escogido de la reivindicación 1, escogido de:
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(2-(3-(etilsulfonil)-2-fluorofenilamino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida; (R)-N-(3-(2-(3-(ciclopropilsulfonil)-2-fluorofenilamino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(5-cloro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(S) -2-((3S,5S)-3,5-dimetilpi perazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indol-7-il)propanamida;
(R) -2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(S) -2-((3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida;
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida;
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida;
(S) -N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida;
(S)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida;
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida;
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(S) -N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)butanamida;
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida; (S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(piperazin-1-il)propanamida; (R) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S)-2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(R) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(S) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(R) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(R) -2-((3R,5R)-3,5-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(S) -N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida;
(R)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)butanamida;
(R) -N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida;
(S) -N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)butanamida;
(S)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-((3S,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida;
(S) -N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida;
(S)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida;
(R)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)propanamida;
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(R) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(R) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(R) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(R) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(S) -2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(R)-2-((R)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxipropanamida;
(R) -2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(S) -2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)propanamida;
(R) -2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(S) -2-((S)-2,4-dimetilpiperazin-1-il)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)butanamida;
(R)-3-etoxi-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpi rimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R)-3-etoxi-N-(3-(5-fluoro-2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(S) -3-(benciloxi)-N-(3-(2-((2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenil)amino)-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida;
(R) -N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida; y
(S) -N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(piperazin-1-il)propanamida;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
13. El compuesto de la reivindicación 1, que es (R)-N-(3-(5-fluon>2-(2-fluoro-3-(metNsulfonil)fenilamino)pirimidm-4-N)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida o una sal farmacéuticamente aceptable de l mismo.
14. El compuesto de la reivindicación 1, que es (R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1 H-indol-7 -il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida.
15. El compuesto de la reivindicación 1, que es una sal farmacéuticamente aceptable de (R)-N-(3-(5-fluoro-2-(2-fluoro-3-(metilsulfonil)fenilamino)pirimidin-4-il)-1H-indol-7-il)-3-metoxi-2-(4-metilpiperazin-1-il)propanamida.
16. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-15, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un diluyente, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
17. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1-15, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1, en el que el trastorno relacionado con JAK1 se escoge de diabetes tipo 1, lupus, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, psoriasis, asma, dermatitis atópica, trastornos tiroideos autoinmunes, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, COPD, vitiligo y alopecia areata.
18. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con JAK1, en la que el trastorno relacionado con JAK1 se escoge de diabetes tipo 1, lupus, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, psoriasis, asma, dermatitis atópica, trastornos tiroideos autoinmunes, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, COPD, vitiligo y alopecia areata.
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