CN116102575A

CN116102575A - 环状2-氨基嘧啶类化合物及其用途

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Publication number: CN116102575A
Application number: CN202111321376.9A
Authority: CN
Inventors: 丁克; 丁健; 陈灏; 谢华; 陆小云; 张弢; 任小梅; 童林江
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Jinan University
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS; Jinan University
Priority date: 2021-11-09
Filing date: 2021-11-09
Publication date: 2023-05-12

Abstract

本发明涉及化学医药领域，涉及一种具有式(1)所示结构的环状2‑氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子及其用途；本发明的化合物可以有效抑制EGFR蛋白激酶耐药突变体(如EGFR^T790M和EGFR^{19del/T790M/C797S})的活性，并可以克服现有第三代选择性EGFR^T790M小分子抑制剂Osimertinib(AZD9291)，Olmutinib(HM6171)，Rociletinib(CO‑1686)等诱发的非小细胞肺癌等肿瘤病人的临床耐药。

Description

环状2-氨基嘧啶类化合物及其用途

技术领域

本发明涉及化学医药领域，特别是涉及一种环状2-氨基嘧啶类化合物及其用途。

背景技术

持续地进行增殖是肿瘤细胞最重要的特征之一。同时，肿瘤细胞持续的发展和增生可以破坏组织、器官的结构和功能，导致患者最终因器官功能衰竭而死亡。通常，细胞的增殖受到细胞增殖信号的严格调控，但肿瘤细胞能够通过一系列的变异，逃避增殖信号的调控。因此，通过药物来阻断肿瘤细胞的相关机制，是肿瘤治疗的重要手段。

其中，以EGFR为代表的受体酪氨酸激酶是接受生长因子增殖信号的关键蛋白。肿瘤细胞可通过EGFR的突变，将蛋白固定在其活性构象，使其在不依赖外源性配体的情况下持续激活下游与增殖相关的信号通路。在非小细胞肺癌患者中，有约20％的患者出现EGFR的突变并显示出EGFR突变依赖性的肿瘤细胞增殖，绝大多数为第19外显子的缺失突变(19deletion mutation)与21号外显子的点突变(L858R)。因此，近年来有多种靶向EGFR突变的治疗方法被应用到临床之中，如：竞争性阻断EGFR与配体如EGF和TGF-α结合的单克隆抗体帕尼单抗和西妥昔单抗，以及模拟ATP结构，阻断EGFR磷酸化的激酶抑制剂吉非替尼和奥希替尼等。EGFR抑制疗法的使用极大地提高了非小细胞肺癌患者的生存期，以吉非替尼为例，它的使用使患者的生存期从传统化疗的不足10月，提高到了将近30月。以上证据表明，EGFR是一个可靠有效的药物作用靶标。

2003年以及2004年上市的EGFR激酶抑制剂吉非替尼和厄洛替尼在用药一段时间后都会发生耐药的现象，体现为肿瘤细胞对药物的敏感性下降。其中一个主要原因(约25％)为EGFR的激酶区域发生了第二个点突变(T790M)，该突变一方面通过空间位阻增大的氨基酸阻碍药物的结合，降低了药物对EGFR的结合能力，另一方面又增强了激酶与底物ATP的相互作用，进而使得竞争性的酪氨酸激酶抑制剂失去活性。

2015年上市的抑制剂奥希替尼通过引入共价相互作用力，有效地克服T790M点突变的耐药问题，其首先获得批准作为使用吉非替尼后发生耐药的病人治疗二线用药。同时，进一步的研究表明，奥希替尼作为一线用药时，可取得比传统EGFR疗法治疗更好的效果且能有效针对脑转移的患者。因此，以奥希替尼为代表的共价结合EGFR抑制剂在可预见的未来成为非小细胞肺癌患者用药的首选。

但奥希替尼同样会产生耐药现象，研究表明，激酶区域发生的第三个点突变(C797S)可以消除共价结合抑制剂形成共价键的能力，使药物失去抑制活性。这类突变已经在约10-20％奥希替尼耐药的患者中被发现。

目前，临床尚未有针对EGFR C797S点突变的抑制剂用于治疗奥希替尼的临床耐药。已有的文献报导少数几个抑制剂，大多具有明显的缺点。如变构抑制剂EAI045及其衍生物无法作用于19外显子缺失激活突变的EGFR，而ALK抑制剂brigatinib，以及Park等报道的喹唑啉类EGFR抑制剂则缺乏足够的细胞活性，brigatinib需要与抗体联用才能发挥体内药效。

发明内容

基于此，本发明提供了一种环状2-氨基嘧啶类化合物，该类化合物可以有效抑制EGFR蛋白激酶耐药突变体(如EGFR^L858R/T790M,EGFR^{L858R/T790M/C797S},EGFR^{19del/T790M/C797S})的活性。

具有式1所示结构的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：

式中：

X、Y分别独立选自CR₅R₆、O、NR₁₃、S、S＝O、S(O)₂、C＝O、NH(C＝O)；

R₁选自：氢、、羟基、羰基、芳基、杂芳基、磺酰基、磷氧基、取代或非取代的烷基或环烷基、取代或非取代的含有N、S、O杂原子的烷基或环烷基，所述取代基分别独立选自卤素、烷基、环烷基、含有N、S、O的烷基、含有N、S、O的环烷基、羟基、氰基、氨基、酯基、酰胺基、芳基、含有N、S、O的芳基、磺酰基；

R₂、R₃、R₅、R₆、R₁₃分别独立地选自：氢、卤素、氰基、硝基、三氟甲基、取代或未取代的C₁～C₆烷基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的C₁～C₆烷氧基、或者取代或未取代的C₃～C₆环烷氧基，其中，所述取代基分别独立选自卤素、烷基、环烷基、含有N、S、O的烷基、含有N、S、O的C₃～C₆环烷基、羟基、氰基、氨基、酯基、酰胺基、芳基、含有N、S、O的芳基、磺酰基；

R₄选自：取代或未取代的C₁～C₆烷基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的含有N、S、O的环烷基，所述取代基包括C₁～C₆烷基、C₃～C₆环烷基、C₃～C₆环氧烷基、氨基、酯基、氰基、酰胺基、硫代酰胺基；R₄还包括-(CH₂)_mNR₈R₉、-(CH₂)_mOCR₇R₈R₉或者-(CH₂)_mCR₇R₈R₉；其中，m选自：0、1、2、3或4；

R₇选自：氢或C₁～C₃烷基；

R₈和R₉分别独立地选自：氢、取代或未取代的C₁～C₆烷基，或者R₈、R₉和与其相连的N或C一同形成取代或未取代的含有杂原子的单环、稠环、螺环或桥环；

L选自：取代或未取代的直链C₂～C₈烷基、取代或未取代的直链C₂～C₈烯基，其中，所述烷基和烯基中的一个或多个亚甲基可分别独立被替换为O、S和NR₁₄，其中，所述直链中的一个或多个S、N或C可一同形成取代或未取代的含有杂原子的单环、稠环、螺环或桥环，所述取代基分别独立选自卤素、烷基、环烷基、杂烷基、杂环烷基、羟基、氰基、氨基、酯基、酰胺基、芳基、杂芳基、磺酰基；

R₁₄选自：氢、烷基、环烷基、卤代烷基、卤代环烷基、含有N、S、O的烷基、含有N、S、O的环烷基、羟基、氰基、氨基、酯基、酰胺基、芳基、含有N、S、O的芳基、磺酰基。

在其中一些实施例中，所述环状2-氨基嘧啶类化合物为：

其中，n选自3～10；

X、Y分别独立选自CR₅R₆、O、NR₁₃、S、S＝O、S(O)₂、C＝O、NH(C＝O)。

在其中一些实施例中，所述环状2-氨基嘧啶类化合物为：

其中，n₁、n₂选自1～6；

在其中一些实施例中，所述环状2-氨基嘧啶类化合物为：

其中，n₁、n₂选自1～6；环A取自芳基、C₃～C₆环烷基、、C₃～C₆环氧烷基、含有N、S、O的芳基；

在其中一些实施例中，R₁为S(O)₂R₁₂，R₁₂选自：氢、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的C₃～C₆环氧烷基。

在其中一些实施例中，R₂选自氢、卤素、卤代芳烃、氰基、三氟甲基；

在其中一些实施例中，R₃选自氢、三氟甲基、卤素、取代或未取代的C₁～C₆烷基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的含有N、S、O的烷基、取代或未取代的含有N、S、O的C₃～C₆环烷基；

在其中一些实施例中，所述R₄选自：

或者

在其中一些实施例中，所述环状2-氨基嘧啶类化合物选自如下之一：

本发明还提供了环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子的应用。

上述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备突变型EGFR抑制剂中的应用。

上述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备防治肿瘤的药物中的应用。

在其中一些实施例中，所述肿瘤为EGFR基因突变的恶性肿瘤。

在其中一些实施例中，所述肿瘤为EGFR^{L858R/T790M/C797S}或EGFR^{19del/T790M/C797S}突变的恶性肿瘤。

在其中一些实施例中，所述肿瘤为：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌或胶质瘤。

本发明还提供了一种防治肿瘤的药物组合物。

具体技术方案如下：

一种药物组合物，包括活性成分以及药学上可接受的载体，所述活性成分包括上述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子，可以对EGFR家族蛋白酶产生抑制作用，从而可以抑制多种肿瘤细胞的生长。对比野生型癌细胞，本发明的化合物对突变型癌细胞具有较高的选择性。本发明的化合物尤其能够有效抑制EGFR蛋白激酶耐药突变体(如EGFR^T790M和EGFR^T790M/C797S)的活性，能够选择性作用于EGFR^L858R/T790M、EGFR^19del以及EGFR^{L858R/T790M/C797S}肺癌细胞，可以克服现有第三代选择性EGFR^T790M小分子抑制剂Osimertinib(AZD9291)，Olmutinib(HM6171)，Rociletinib(CO-1686)等诱发的非小细胞肺癌等肿瘤病人的临床耐药。

(2)本发明的化合物可用于制备抗肿瘤药物，并可以克服现有药物吉非替尼、厄洛替尼，尤其是Osimertinib(AZD9291)等诱发的耐药，是一类新颖的能够克服现有EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药的并具有选择性和良好药代性质的蛋白激酶抑制剂，可用于治疗人类及其它哺乳动物的肿瘤等过度增殖性疾病。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

本发明所述化合物中，当任何变量(例如R₁、R₂等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环系统的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环系统为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代形式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。

本文所用术语“烷基”是指饱和链状烷基，“链状烷基”是指直链或支链的烷基，如C₁～C₄烷基是指具有1至4个碳原子的饱和直链或支链的烷基，其中直链烷基的示例包括但不限于乙基，正丙基等，支链烷基的示例包括但不限于异丙基，叔丁基等；

术语“环烷基”是指具有环状结构的烷基，如C₃～C₄环烷基指具有3至4个碳原子的具有环状结构的烷基，示例包括但不限于环丙基，环丁基、甲基取代环丙基等。

术语“烷氧基”表示末端含有一个氧原子的直链或支链烷基，示例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基等。

本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。

本发明提供一种式1化合物，其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子，

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y和L的定义同前。

本发明包括式1化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式1化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。

可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。

因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。

如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。

Berg等，Pharmaceutical SaltsJ.Pharm.Sci.1977:66:1-19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。

由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如羧基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。

除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下具体实施例中所列方案显示的反应制备本发明化合物。因此，下列说明性方案是为说明的目的而不是局限于所列化合物或任何特定的取代基。方案中显示的取代基数目并不必需符合权利要求中所用的数目，且为清楚起见，显示单取代基连接到在上文中式1的定义下允许有多取代基的化合物上。

本发明提供的具有式1结构的化合物及其药学上可接受的盐可用于治疗人或其它哺乳动物肿瘤等过渡增殖性疾病或症状。尤其是用于治疗或控制非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌、胶质瘤等过渡增殖性疾病。

药物代谢物及前药：本发明所涉及的化合物及其药学上可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本发明所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。

药物组合物：本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式1化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。

本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用作EGFR蛋白酶抑制剂。在另一优选例中，用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物。

本发明的有益之处在于：

(1)提供一种结构新颖的环状2-氨基嘧啶类化合物。

(2)该类化合物可以有效抑制EGFR蛋白激酶耐药突变体的作用，可用于制备抗肿瘤药物。

(3)该类化合物可以克服现有药物吉非替尼、厄洛替尼尤其是奥希替尼(AZD9291)等诱发的耐药，对野生型EGFR具有选择性，具有良好的药代动力学性质。

实施例1

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC57866)的制备

合成路线如下：

步骤1. 3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-甲氧基-1H-吲哚(3)的制备

将6-甲氧基-1H-吲哚(1g，6.79mmol)溶解于25mL干燥的二氯甲烷中，体系置换为氩气后，置于冰浴中冷却至0℃。逐滴向溶液中加入浓度为3mol/L的甲基溴化镁乙醚溶液(3.4mL，10.18mmol)。滴加完毕后，将2,4,5-三氯嘧啶(1.25g，6.79mmol)溶解于另一份25mL干燥的二氯甲烷中，并将该溶液逐滴加入至反应体系中。加毕，将反应移至室温下继续反应3小时，过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，恢复冰浴，逐滴加入水(50mL)淬灭，过程中析出黄色固体。将上述混合物过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤两次至滤饼呈淡黄色。收集滤饼，干燥得标题化合物1.1g，淡黄色固体，收率55％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.09(s,1H),8.69(s,1H),8.62(s,1H),8.39(d,1H),7.03(s,1H),6.91(d,J＝8.7Hz,1H),3.81(s,3H).

步骤2. 3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-6-甲氧基-1H-吲哚(4)的制备

将3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-6-甲氧基-1H-吲哚(1.1g，3.74mmol)溶解于10mLDMF中，将反应置于冰浴中冷却至0℃。逐份加入60％质量分数，分散在矿物油中的氢化钠(0.22g，5.61mmol)，继续在冰浴下反应10分钟后，缓慢加入乙基磺酰氯(0.42mL，4.49mmol)，加毕，将反应移至室温继续反应1小时，过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，加入水(50mL)淬灭，过程中析出白色固体。将上述混合物过滤，滤饼用甲醇洗涤。收集滤饼，干燥得标题化合物1.2g，白色固体，收率83％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.95(s,1H),8.50(s,1H),8.32(d,J＝8.9Hz,1H),7.41(d,J＝2.2Hz,1H),7.13(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),3.87(s,3H),3.87–3.82(m,2H),1.14(t,J＝7.3Hz,3H).

步骤3. 3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-醇(5)的制备

将3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-6-甲氧基-1H-吲哚(0.2g，0.5mmol)溶解于3mL干燥的二氯甲烷中，将反应置于冷却浴中冷却至-40℃。逐滴加入1mol/L的三溴化硼二氯甲烷溶液(3mL，3.11mmol)，加毕，将反应移至室温继续反应5小时，反应过程中，取样，以乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液稀释后，取混合物上层以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，加入水(30mL)淬灭，过程中析出黄色固体。将上述混合物过滤，滤饼用甲醇洗涤。收集滤饼，干燥得标题化合物0.17g，黄色固体，收率88％。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.64(s,1H),8.52(s,1H),7.78(d,J＝2.4Hz,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,1H),6.98(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),3.77(q,J＝7.3Hz,2H),3.33(s,1H),1.12(t,J＝7.3Hz,3H).

步骤4. 6-(5-氨基-2-吗啉苯氧基)己醇(8)的制备

将2-氟-5-硝基苯酚(2g，12.73mmol)溶解于15mLDMF中，然后向体系中加入碳酸钾(5.28g，38.19mmol)及6-溴己烷-1-醇(1.84mL，14mmol)，将反应置于预热的80℃油浴中加热4小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)，待原料完全转化后，加入吗啉(1.66mL，19.10mmol)，继续在80℃下反应3小时，反应结束后加入80mL水，用乙酸乙酯萃取，有机相以饱和食盐水洗涤两次后，干燥、浓缩。残余物加入到盛有还原铁粉(2.84g，50.92mmol)和氯化铵(5.45g，101.85mmol)的100mL圆底烧瓶中，并用20mL水和20mL乙醇溶解。反应置于预热的100℃油浴中加热30分钟，待反应液黄色褪去后反应结束。反应以饱和碳酸氢钠溶液30mL淬灭，混合物通过硅藻土滤饼后用乙酸乙酯萃取，有机相以饱和食盐水洗涤两次后，干燥、浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为二氯甲烷：甲醇＝100：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得深棕色固体1.3g，总收率34％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.75(d,J＝8.1Hz,1H),6.35–6.20(m,2H),3.96(t,J＝6.5Hz,2H),3.86(d,J＝4.7Hz,4H),3.67(t,J＝6.4Hz,2H),3.55–3.03(m,2H),3.05–2.92(m,4H),1.86(p,J＝6.6Hz,2H),1.69–1.59(m,2H),1.50(ddd,J＝19.5,9.1,4.7Hz,4H),1.45–1.35(m,1H).

步骤5. 3-(5-氯-2-((3-((6-羟基己基)氧基)-4-吗啉苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-醇(9)的制备

将6-(5-氨基-2-吗啉苯氧基)己醇(0.2g，0.67mmol)、3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-醇(0.25g，0.67mmol)和对甲苯磺酸(0.17g，1.02mmol)溶解于5mL1-戊醇中，反应置于预热的140℃油浴中加热24小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为二氯甲烷：甲醇＝50：1，v/v)。反应结束后，以饱和碳酸氢钠溶液15mL淬灭，混合物以乙酸乙酯萃取。有机相干燥、浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为二氯甲烷：甲醇＝50：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得黄色泡沫状固体0.17g，收率40％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.33(s,1H),8.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.64(s,1H),7.44(d,J＝2.1Hz,1H),7.15(s,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),6.82–6.76(m,1H),3.97–3.87(m,4H),3.88–3.82(m,1H),3.81–3.75(m,2H),3.74–3.69(m,2H),3.42(q,J＝7.4Hz,2H),3.15–3.02(m,4H),1.78–1.71(m,2H),1.43–1.30(m,9H),0.93–0.90(m,1H).

步骤6. 2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC57866)的制备

将3-(5-氯-2-((3-((6-羟基己基)氧基)-4-吗啉苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-醇(0.17g，0.27mmol)、三苯基磷(0.71g，2.7mmol)溶解于150mL干燥的二氯甲烷中，将反应置换为氩气后，置于冰浴中冷却至0℃。向反应体系中加入偶氮二甲酸二异丙酯(0.53mL，2.7mmol)。加毕，将反应移至室温反应1.5小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝2：1，v/v)，反应结束后加入硅胶吸附，除去溶剂后通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为石油醚：乙酸乙酯＝3：1，v/v)。逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，用甲醇洗涤后过滤，收集滤饼，干燥后得黄色近白色固体0.078g，收率47％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.33(s,1H),8.21(d,J＝8.6Hz,1H),7.86–7.80(m,1H),7.65–7.55(m,1H),7.16(s,1H),6.98(d,J＝7.2Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.56(d,J＝6.6Hz,1H),4.46–4.37(m,2H),3.91(s,4H),3.40(dt,J＝11.9,6.5Hz,4H),3.11(s,4H),1.69–1.62(m,4H),1.46–1.35(m,4H),1.33(d,J＝7.4Hz,3H).

实施例2

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,11-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十一烷(HC5475)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(7)以5-溴代戊烷-1-醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.27(s,1H),8.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.73(d,J＝2.1Hz,1H),7.65(d,J＝1.7Hz,1H),7.16(s,1H),7.07(dd,J＝8.7,1.8Hz,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),6.56(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),4.40–4.31(m,2H),3.93–3.86(m,4H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),3.44–3.36(m,2H),3.14–3.05(m,4H),1.72–1.67(m,2H),1.57–1.52(m,2H),1.50–1.42(m,2H),1.34(t,J＝7.4Hz,3H),1.31–1.26(m,2H).

实施例3

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,13-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十三烷(HC57867)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(7)以7-溴代庚烷-1-醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),8.32(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.85(d,J＝2.2Hz,1H),7.51(d,J＝2.1Hz,1H),7.16(s,1H),6.92(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.56(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),4.40–4.30(m,2H),4.00–3.79(m,4H),3.52(t,J＝6.7Hz,2H),3.42(q,J＝7.3Hz,2H),3.19–3.00(m,4H),1.79(p,J＝6.1Hz,2H),1.69–1.61(m,2H),1.57–1.49(m,2H),1.34–1.22(m,5H),1.10(p,J＝7.0Hz,2H).

实施例4

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,14-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十四烷(HC57868)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(7)以8-溴代辛烷-1-醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),8.30(s,1H),8.16(d,J＝8.8Hz,1H),7.93(d,J＝1.9Hz,1H),7.49(d,J＝1.7Hz,1H),7.20(d,J＝17.3Hz,1H),6.89(dd,J＝8.5,3.9Hz,2H),6.55(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.28(t,J＝5.3Hz,2H),3.98–3.86(m,4H),3.49(t,J＝6.0Hz,2H),3.42(q,J＝7.3Hz,2H),3.18–3.04(m,4H),1.85–1.73(m,2H),1.60–1.56(m,2H),1.49(dt,J＝14.1,6.2Hz,2H),1.43–1.34(m,2H),1.34–1.27(m,5H),1.23–1.12(m,2H).

实施例5

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-氟-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC596F)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(6)以2,4-二氟-5-硝基苯酚代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.47(t,J＝4.9Hz,1H),8.30(t,J＝4.8Hz,1H),8.19(dd,J＝8.7,4.1Hz,1H),8.01–7.86(m,1H),7.61(s,1H),7.35–7.27(m,1H),7.05–6.93(m,1H),6.83–6.68(m,1H),4.48–4.32(m,2H),3.92–3.82(m,4H),3.43(dq,J＝11.0,6.9,4.8Hz,2H),3.36(t,J＝5.1Hz,2H),3.08(s,4H),1.72–1.64(m,2H),1.60–1.50(m,2H),1.45(s,2H),1.37–1.32(m,3H),1.32–1.25(m,2H).

实施例6

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-氯-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC596C)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(6)以4-氯-2-氟-5-硝基苯酚代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.49(s,1H),8.32(s,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.61(d,J＝2.0Hz,1H),7.54(s,1H),6.98(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),6.94(s,1H),4.45–4.34(m,2H),3.93–3.85(m,4H),3.43(q,J＝7.4Hz,2H),3.31(t,J＝5.8Hz,2H),3.15–3.03(m,4H),1.69–1.61(m,2H),1.57–1.52(m,2H),1.47–1.40(m,2H),1.38–1.35(m,2H),1.33–1.30(m,3H).

实施例7

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-甲基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC596M)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(6)以4-甲基-2-氟-5-硝基苯酚代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),8.40(s,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.69(s,1H),7.58(d,J＝2.0Hz,1H),6.92(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),6.90(s,1H),6.77(s,1H),4.43–4.34(m,2H),3.96–3.89(m,4H),3.41(dt,J＝11.5,6.5Hz,4H),3.19–3.10(m,4H),2.34(s,3H),1.66(s,4H),1.61–1.56(m,2H),1.46–1.39(m,2H),1.35–1.31(m,3H).

实施例8

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-乙基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5967)的制备

合成方法参照实施例1，中间体(8)以6-(5-氨基-4-乙基-2-吗啉苯氧基)己醇(14)代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(d,J＝1.6Hz,2H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(s,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),6.95–6.87(m,2H),6.79(s,1H),4.41–4.34(m,2H),3.96–3.89(m,4H),3.46–3.36(m,4H),3.19–3.12(m,4H),2.69(q,J＝7.6Hz,2H),1.58(p,J＝5.7Hz,2H),1.45(p,J＝7.6,7.2Hz,2H),1.37–1.17(m,10H).

中间体6-(5-氨基-4-乙基-2-吗啉苯氧基)己醇(14)的制备

步骤1. 6-(4-溴-2-吗啉-5-硝基苯氧基)己醇(11)的制备

将4-溴-2-氟-5-硝基苯酚(2g，8.47mmol)溶解于10mLDMF中，然后向体系中加入碳酸钾(2.34g，16.95mmol)及6-溴己烷-1-醇(1.69g，9.32mmol)，将反应置于预热的80℃油浴中加热4小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)，反应结束后，将反应液倒入水中，以乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗三次，干燥，浓缩，得黄色固体2.7g，收率79％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(s,1H),7.06(s,1H),4.06(t,J＝6.5Hz,2H),3.91–3.83(m,4H),3.69(t,J＝6.5Hz,2H),3.30–3.17(m,4H),1.89(p,J＝6.5Hz,2H),1.70–1.58(m,4H),1.54–1.49(m,3H).

步骤2. 6-(2-吗啉基-5-硝基-4-乙烯基苯氧基)己醇(13)的制备

将6-(4-溴-2-吗啉-5-硝基苯氧基)己醇(0.3g，0.74mmol)，乙烯基频那醇硼酸酯(0.17g，1.12mmol)和1mol/L的碳酸钠水溶液(1.5mL，1.5mmol)溶解于5mL1,4-二氧六环中。用真空泵将体系脱气30秒后，置换为氩气，并重复此操作两次。在氩气下向混合物中加入四三苯基膦钯(0.086g，0.07mmol)，再次将瓶内气体置换为氩气后，将反应置于预热的100℃油浴中加热7小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝2：1，v/v)，反应结束后，将反应液倒入水中，以乙酸乙酯萃取，有机相干燥、浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为石油醚：乙酸乙酯＝3：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得暗黄色固体0.20g，收率76％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.58(d,J＝1.1Hz,1H),7.33(dd,J＝10.9,1.4Hz,1H),6.94(s,1H),5.61(d,J＝17.3Hz,1H),5.42(d,1H),4.09(t,J＝6.4Hz,2H),3.95–3.85(m,4H),3.69(td,J＝6.5,1.4Hz,2H),3.33–3.22(m,4H),1.90(p,J＝6.6Hz,2H),1.66–1.61(m,2H),1.57–1.47(m,4H),1.32–1.23(m,1H).

步骤3. 6-(5-氨基-4-乙基-2-吗啉苯氧基)己醇(14)的制备

将6-(2-吗啉基-5-硝基-4-乙烯基苯氧基)己醇(0.20g，0.57mmol)溶解于5mL甲醇中。用真空泵将体系脱气30秒后，置换为氩气，并重复此操作两次。在氩气下向混合物中加入10％钯碳(0.02g，含55％的水)，将瓶内气体置换为氢气后，常温下搅拌8小时。反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为二氯甲烷：甲醇＝15：1，v/v)，反应结束后，混合物通过硅藻土滤饼后，滤液浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为二氯甲烷：甲醇＝100：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得深棕色固体0.13g，收率71％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.67(s,1H),6.29(s,1H),3.95(t,J＝6.4Hz,2H),3.91–3.84(m,4H),3.68(t,J＝6.5Hz,2H),3.60–3.22(m,2H),3.08–2.97(m,4H),2.48(q,J＝7.5Hz,2H),1.96(s,1H),1.84(h,J＝7.9,7.2Hz,2H),1.63–1.48(m,6H),1.26–1.19(m,3H).

实施例9

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-环丙基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5969)的制备

合成方法参照实施例8，中间体(12)以环丙基硼酸代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.45(s,1H),8.33(s,1H),8.24(d,J＝8.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.70(s,1H),7.60(d,J＝2.0Hz,1H),6.98(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),6.78(s,1H),4.43–4.36(m,2H),3.93–3.86(m,4H),3.48–3.32(m,4H),3.13–3.06(m,4H),1.71–1.63(m,2H),1.58–1.53(m,2H),1.44–1.30(m,7H),1.11–1.02(m,2H),0.75–0.67(m,2H).

实施例10

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-异丙基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5963)的制备

合成方法参照实施例8，中间体(12)以4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.46(s,1H),8.41(s,1H),8.05(d,J＝8.8Hz,1H),7.55(d,J＝2.1Hz,1H),7.47(s,1H),6.95–6.90(m,1H),6.90–6.84(m,2H),4.41–4.34(m,2H),3.97–3.90(m,4H),3.48–3.36(m,4H),3.26–3.13(m,5H),1.67–1.60(m,4H),1.51–1.41(m,2H),1.32–1.25(m,11H).

实施例11

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-异丁基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5968)的制备

合成方法参照实施例8，中间体(12)以4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基丙-1-烯-1-基)-1,3,2-二氧苯甲醛代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.41(s,1H),8.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(s,1H),6.93–6.85(m,2H),6.72(s,1H),4.41–4.34(m,2H),3.96–3.89(m,4H),3.74(q,J＝7.0Hz,1H),3.46–3.36(m,4H),3.19–3.12(m,4H),2.53(d,J＝7.3Hz,2H),1.90(dhept,J＝13.6,7.1Hz,1H),1.61–1.53(m,2H),1.45(q,J＝12.7,9.7Hz,2H),1.29(dt,J＝9.0,7.1Hz,7H),0.98(d,J＝6.6Hz,6H).

实施例12

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-(3,3-二甲基丁基)-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5965)的制备

合成方法参照实施例8，中间体(12)以2-(3,3-二甲基-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(d,J＝2.2Hz,2H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.62–7.54(m,2H),6.90(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),6.87(s,1H),6.76(s,1H),4.41–4.32(m,2H),3.99–3.88(m,4H),3.47–3.35(m,4H),3.23–3.11(m,4H),2.65–2.54(m,2H),1.70–1.64(m,2H),1.57(d,J＝6.1Hz,2H),1.56–1.44(m,4H),1.33–1.28(m,5H),1.03(s,9H).

实施例13

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-环戊基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC5960)的制备

合成方法参照实施例8，中间体(12)以2-(环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.45(s,1H),8.41(s,1H),8.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(s,1H),6.96(s,1H),6.92–6.85(m,2H),4.41–4.34(m,2H),3.96–3.89(m,4H),3.47–3.36(m,4H),3.26–3.13(m,5H),2.15–2.03(m,2H),1.92–1.81(m,2H),1.79–1.71(m,2H),1.70–1.64(m,4H),1.62–1.54(m,2H),1.51–1.40(m,2H),1.33–1.22(m,5H).

实施例14

(E)-2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷-9-烯(HC614)的制备

合成路线如下：

步骤16-(烯丙基氧基)-3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H吲哚(15)的制备

将3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-6-醇(1g，2.69mmol)，碳酸钾(2g，5.47mmol)溶解于20mLDMF中，搅拌下加入3-溴丙烯(0.48g，4.03mmol)。将混合物于60℃下搅拌7小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，加入50mL水稀释反应液，然后用30mL乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗两次后(50mL*2)，干燥、浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为石油醚：乙酸乙酯＝10：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得白色固体0.31g，收率28％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.65(s,1H),8.63(s,1H),8.17(d,J＝2.3Hz,1H),7.85(d,J＝9.1Hz,1H),7.17–7.09(m,1H),6.14(ddd,J＝22.6,10.6,5.4Hz,1H),5.54(dd,J＝17.3,1.4Hz,1H),5.44–5.33(m,1H),4.70(d,J＝5.4Hz,2H),3.43(q,J＝7.4Hz,2H),1.30(t,J＝7.4Hz,3H).

步骤2 4-吗啉-3-(戊-4-烯-1-酰氧基)苯胺(16)的制备

合成方法参照实施例1，步骤4，6-溴己烷-1-醇以5-溴戊烯代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃δ6.84(d,J＝8.6Hz,1H),6.63(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.22(d,J＝2.3Hz,1H),5.75(ddt,J＝17.0,10.3,6.8Hz,1H),5.19–5.03(m,1H),4.96(ddt,J＝17.0,2.1,0.9Hz,1H),4.45(s,2H),4.02(t,J＝6.8Hz,2H),3.84–3.75(m,4H),3.39–3.24(m,4H),2.22–2.08(m,2H),1.89–1.69(m,2H).

步骤3 4-(6-(烯丙基氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)-5-氯-N-(4-吗啉-3-(戊-4-烯-1-酰氧基)苯基)嘧啶-2-胺(17)的制备

合成方法参照实施例1，步骤5，中间体5和8分别以中间体15和16代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(s,1H),8.35(s,1H),8.27(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(d,J＝2.3Hz,1H),7.33(d,J＝2.3Hz,1H),7.16(s,1H),7.07(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),6.98(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.12(ddt,J＝17.1,10.6,5.3Hz,1H),5.82(ddt,J＝16.9,10.1,6.7Hz,1H),5.49(dd,J＝17.3,1.5Hz,1H),5.36(dd,J＝10.5,1.3Hz,1H),5.08–4.95(m,2H),4.68–4.62(m,2H),4.06–3.80(m,7H),3.41(q,J＝7.4Hz,2H),3.18–2.97(m,4H),2.17(q,J＝7.1Hz,2H),1.87(p,J＝6.6Hz,2H),1.31(t,J＝7.4Hz,3H).

步骤3(Z)-2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷-9-烯(HC614)的制备

将4-(6-(烯丙基氧基)-1-(乙基磺酰基)-1H-吲哚-3-基)-5-氯-N-(4-吗啉-3-(戊-4-烯-1-酰氧基)苯基)嘧啶-2-胺(17)(0.05g，0.08mmol)溶解于50mL干燥的二氯甲烷中，将瓶内气体置换为氩气后，搅拌下滴入0.05mL三氟乙酸，溶液颜色变为棕色。室温下搅拌3min后，在氩气氛围下加入Grubbs 2代催化剂(0.014g，0.0016mmol)。加毕，在室温下反应7小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为二氯甲烷：甲醇＝15：1，v/v)。反应结束后，浓缩反应液。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为二氯甲烷：甲醇＝100：1-50：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得白色固体0.030g，收率63％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(d,J＝10.8Hz,2H),8.31(d,J＝8.9Hz,1H),7.84(d,J＝2.3Hz,1H),7.57(d,J＝2.1Hz,1H),7.38(s,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.56(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),5.61–5.50(m,1H),5.50–5.39(m,1H),4.72(d,J＝4.6Hz,2H),3.97–3.90(m,4H),3.48–3.35(m,4H),3.19–3.04(m,4H),2.28(q,J＝6.2Hz,2H),1.75–1.64(m,3H),1.38–1.29(m,3H).

实施例15

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC620)的制备

合成方法参照实施例1，步骤4中吗啉以1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.41(s,1H),8.34(s,1H),8.20(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(d,J＝2.0Hz,1H),7.59(d,J＝1.8Hz,1H),7.21(d,J＝20.3Hz,1H),6.96(dd,J＝8.8,1.8Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),6.54(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),4.42–4.35(m,2H),3.58(d,J＝11.5Hz,2H),3.42(q,J＝7.4Hz,2H),3.37(t,J＝5.7Hz,2H),2.76(s,4H),2.61(t,J＝11.1Hz,6H),2.52–2.45(m,1H),2.37(s,3H),1.98(d,J＝11.2Hz,2H),1.84–1.74(m,2H),1.70–1.63(m,2H),1.62–1.56(m,2H),1.51–1.45(m,2H),1.34–1.28(m,5H),0.94–0.82(m,2H).

实施例16

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁶-甲基-4⁴-(4-甲基哌嗪-1-基)-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC6492)

合成方法参照实施例1，步骤4中吗啉以1-甲基哌嗪代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.40(d,J＝3.2Hz,2H),8.17(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(s,1H),7.57(d,J＝1.9Hz,1H),6.97–6.88(m,2H),6.78(s,1H),4.43–4.34(m,2H),3.51–3.31(m,4H),3.16(s,4H),2.66(s,4H),2.39(s,3H),2.32(s,3H),1.70–1.61(m,2H),1.60–1.53(m,2H),1.50–1.40(m,2H),1.33–1.28(m,5H).

实施例17

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉-4⁶-(三氟甲基)-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC745)

合成方法参照实施例1，中间体(6)以4-三氟甲基-2-氟-5-硝基苯酚代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.48(s,1H),8.43(s,1H),8.09(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.60(d,J＝2.0Hz,1H),7.38(s,1H),7.14(s,1H),6.90(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),4.48–4.31(m,2H),3.93(s,4H),3.46–3.37(m,2H),3.36(t,J＝5.5Hz,2H),3.17–3.11(m,4H),1.71–1.64(m,2H),1.56(d,J＝5.3Hz,1H),1.44(dt,J＝12.8,7.2Hz,2H),1.32(t,J＝7.4Hz,4H),1.28(d,J＝2.7Hz,2H).

实施例18

2⁵-氯-4⁶-甲基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC743)

合成方法参照实施例1，省略步骤2，中间体(6)以2-氟-4-甲基-5-硝基苯酚代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.55(s,1H),8.37–8.28(m,2H),8.25(d,J＝8.8Hz,1H),7.74(s,1H),7.03(d,J＝1.7Hz,1H),6.83–6.79(m,1H),6.78(s,2H),4.41–4.28(m,2H),4.00–3.87(m,4H),3.46(t,J＝5.6Hz,2H),3.24–3.08(m,4H),2.34(s,3H),1.65–1.61(m,2H),1.59–1.52(m,2H),1.48–1.41(m,2H),1.33–1.29(m,2H).

实施例19

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-6-甲基-4⁴-吗啉-1¹H-5,12-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC782)

合成方法参照实施例1，中间体(8)以6-(5-氨基-2-吗啉苯氧基)庚烷-1-醇(18)代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(s,1H),8.33(s,1H),8.26(d,J＝8.9Hz,1H),7.87(d,J＝2.3Hz,1H),7.55(d,J＝2.0Hz,1H),7.20(s,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.57(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.48–4.29(m,2H),4.05–3.94(m,1H),3.88(t,J＝4.3Hz,4H),3.42(q,J＝7.4Hz,2H),3.09(dtd,J＝16.3,11.6,5.7Hz,4H),1.84–1.72(m,2H),1.33–1.28(m,6H),0.92(d,J＝5.9Hz,3H).

中间体6-(5-氨基-2-吗啉苯氧基)庚烷-1-醇(18)的制备

步骤1 2-((7-(苄氧基)庚烷-2-基)氧基)-1-氟-4-硝基苯(20)的制备

将2-氟5-硝基苯酚(中间体6，0.5g，3.18mmol)、7-(苄氧基)庚烷-2-醇(中间体19，1.06g，4.77mmol)、三苯基磷(1.25g，4.77mmol)溶解于15mL干燥的二氯甲烷中，将体系中气体置换为氩气后，冷却至0℃。保持在该温度下缓慢加入偶氮二甲酸二异丙酯(0.95mL，4.77mmol)，加毕，将反应移至室温，继续反应1小时，期间反应液颜色逐渐由红色变为棕褐色，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，浓缩反应液。残余物吸附至硅胶上，通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为石油醚：乙酸乙酯＝20：1-10：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得黄色油状物0.6g，收率70％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.31–7.27(m,1H),7.04(d,J＝11.2Hz,1H),4.43(h,J＝6.1Hz,1H),3.49(t,J＝6.5Hz,2H),1.72–1.60(m,4H),1.57–1.44(m,4H),1.36(d,J＝6.1Hz,3H).

步骤2 6-(5-氨基-2-吗啉苯氧基)庚烷-1-醇(18)的制备

将中间体20(0.6g，1.66mmol)、碳酸钾(0.46g，3.32mmol)和吗啉(0.29g，3.32mmol)溶解于10mLDMF中，80℃下反应3小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)。反应结束后，将反应液溶解于30mL乙酸乙酯中，依次用100mL水、饱和食盐水洗涤，有机相浓缩，残余物溶解于8.5mL乙酸、1.5mL乙酸乙酯和0.5mL水的混合溶剂中。加入0.06g钯碳，50℃在氢气氛围下反应6小时，反应过程中以TLC监测反应进程(展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v和二氯甲烷：甲醇＝50：1，v/v)。反应结束后，反应液通过硅藻土过滤并浓缩。残余物通过快速硅胶柱层析法纯化，(流动相为二氯甲烷：甲醇＝50：1，v/v)，逐份收集流出液，浓缩含有目标物的组分，干燥后得棕色油状物0.32g，收率62％

实施例20

(Z)-2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,13-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十三烷-10-烯(HC8037)的制备

合成方法参照实施例14，步骤2中原料5-溴戊烯以6-溴己烯代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.23(s,1H),8.12(d,J＝8.8Hz,1H),8.08(d,J＝2.4Hz,1H),7.61–7.57(m,1H),7.17(s,1H),6.93–6.90(m,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),6.55(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),5.75–5.68(m,1H),5.64–5.57(m,1H),4.76(d,J＝5.5Hz,2H),3.91–3.88(m,4H),3.62(t,J＝6.1Hz,2H),3.46–3.40(m,2H),3.10–3.06(m,4H),2.12–2.06(m,2H),1.54–1.48(m,2H),1.46–1.39(m,2H),1.35–1.30(m,3H).

实施例21

(Z)-2⁵-氯-11-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,11-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十一烷-8-烯(HC8035)的制备

合成方法参照实施例14，步骤2中原料5-溴戊烯以4-溴丁烯代替。。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(s,1H),8.22(s,1H),8.10(d,J＝8.7Hz,1H),7.94(d,J＝2.3Hz,1H),7.64(d,J＝1.9Hz,1H),7.23(s,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),6.85(dd,J＝8.7,2.0Hz,1H),6.54(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),5.57(dt,J＝13.6,6.7Hz,1H),5.43(dt,J＝15.3,7.4Hz,1H),4.68(d,J＝6.7Hz,2H),3.96–3.85(m,4H),3.57(t,J＝7.0Hz,2H),3.43(q,J＝7.4Hz,2H),3.15–2.99(m,4H),2.43(q,J＝7.0Hz,2H),1.34(t,J＝7.4Hz,3H).

实施例22

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,9,12-三唑-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十二烷(HC788)的制备

合成方法参照实施例19，步骤1中原料19以3-(2-(苄氧基)乙氧基)丙烷-1-醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.27(s,1H),8.22(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.52(d,J＝2.1Hz,1H),7.18(s,1H),7.09(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.54(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),4.53–4.42(m,2H),3.94–3.87(m,3H),3.81–3.71(m,2H),3.59(d,J＝6.6Hz,1H),3.46(t,J＝5.1Hz,2H),3.44–3.36(m,2H),3.16–2.99(m,3H),1.71(q,J＝6.8Hz,2H),1.46–1.36(m,2H),1.32(t,J＝7.4Hz,3H).

实施例23

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,8,11-三唑-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十一烷(HC7921)的制备

合成方法参照实施例19，步骤1中原料19以2-(2-(苄氧基)乙氧基)乙烷-1-醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(s,1H),8.22(s,1H),8.13(d,J＝8.8Hz,1H),7.96(d,J＝2.3Hz,1H),7.59(d,J＝2.0Hz,1H),7.32–7.29(m,1H),7.18(s,1H),6.88(d,J＝8.0Hz,1H),6.56(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.48–4.42(m,2H),3.91–3.85(m,4H),3.81–3.77(m,2H),3.63(q,J＝5.9,5.3Hz,2H),3.60–3.56(m,2H),3.42(q,J＝7.4Hz,2H),3.12–3.04(m,4H),1.33(t,J＝7.4Hz,3H).

实施例24

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,10,13-三唑-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯并环十三烷(HC7922)的制备

合成方法参照实施例19，步骤1中原料19以4-(2-(苄氧基)乙氧基)丁醇代替。

实施例25

2⁵-氯-1¹-(乙基磺酰基)-4⁴-吗啉基-1¹H-5,9-二氧杂-3-氮杂-1(3,6)-吲哚-2(4,2)-嘧啶-4(1,3)-苯-7(1,4)-环己酮环壬烷(HC809)

合成方法参照实施例19，步骤1中原料19以1,4-环己烷二甲醇代替。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.43(s,1H),8.34(s,1H),8.25(d,J＝8.9Hz,1H),7.47(d,J＝2.1Hz,1H),7.39(d,J＝2.1Hz,1H),7.12(s,1H),7.05–6.99(m,1H),6.95(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),4.13(q,J＝6.9Hz,2H),3.94–3.85(m,4H),3.68(d,J＝6.0Hz,2H),3.54–3.47(m,2H),3.16–3.03(m,4H),1.91–1.74(m,4H),1.31(t,J＝7.4Hz,3H),1.01(t,J＝10.1Hz,4H).

实施例26环状2-氨基嘧啶类化合物对野生型EGFR及突变型EGFR激酶的活性抑制实验

EGFR(WT)为野生型表皮生长因子受体，EGFR(T790M)为带有第790位氨基酸由苏氨酸突变成甲硫氨酸的表皮生长因子受体，EGFR(L858R)为带有第858位氨基酸由亮氨酸突变成精氨酸的表皮生长因子受体，EGFR(L861Q)为带有第861位氨基酸由亮氨酸突变成谷氨酰胺的表皮生长因子受体，EGFR(L858R/T790M)为带有第858位氨基酸由亮氨酸突变成谷氨酰胺，第790位氨基酸由苏氨酸突变成甲硫氨酸双突变的表皮生长因子受体。EGFR(L858R/T790M/C797S)为带有第858位氨基酸由亮氨酸突变成谷氨酰胺，第790位氨基酸由苏氨酸突变成甲硫氨酸，第797位由半胱氨酸突变为丝氨酸的三突变的表皮生长因子受体。EGFR(19del/T790M/C797S)为第十九号外显子部分缺失，第790位氨基酸由苏氨酸突变成甲硫氨酸，第797位由半胱氨酸突变为丝氨酸的三突变的表皮生长因子受体。

用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测化合物对激酶活性的抑制作用。EGFR^WT购自Eurofins公司，EGFR^{19del/T790M/C797S}激酶购自BPSBioscience公司。主要实验步骤如下：酶反应底物Poly(Glu,Tyr)_4:1用无钾离子的PBS(10mM磷酸钠缓冲液，150mM NaCl,pH 7.2-7.4)稀释成20μg/mL，37℃反应12-16h包被酶标板。每孔加入用反应缓冲液(50mM HEPES pH7.4,50mM MgCl₂,0.5mM MnCl₂,0.2mM Na₃VO₄,1mMDTT)稀释的ATP(终浓度5μM)溶液，加入待测化合物或溶剂对照，然后激酶启动反应，37℃摇床反应1h。T-PBS洗板三次，加入抗体PY99于37℃摇床反应0.5h。T-PBS洗板后，加入辣根过氧化物酶标记的IgG，37℃摇床反应0.5h。再次洗板后，加入2mg/mL的OPD显色液，25℃避光反应1-10min。加入2M H₂SO₄终止反应，用可调波长式微孔板酶标仪SPECTRA MAX 190检测，采用波长为492nm。IC₅₀值由抑制曲线分析得到。

表1中所列为化合物编号(与上述实施例中的化合物编号对应)以及化合物对各激酶抑制活性的检测结果。

表1：环状2-氨基嘧啶类化合物对激酶的抑制活性结果

从表1可知，本发明的环状2-氨基嘧啶类化合物，对EGFR三突变蛋白酶产生抑制作用，从而可以抑制多种肿瘤细胞的生长。本发明的化合物尤其能够有效选择性抑制EGFR蛋白激酶耐药突变体(EGFR^{19del/T790M/C797S})的活性，能够选择性作用于EGFR^L858R/T790M以及EGFR^{19del/T790M/C797S}肺癌细胞，可以克服现有第三代选择性EGFR^T790M小分子抑制剂Osimertinib(AZD9291)，Olmutinib(HM6171)，Rociletinib(CO-1686)等诱发的非小细胞肺癌等肿瘤病人的临床耐药。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述化合物为具有式(1)所示结构的化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子：

式中：

R₁选自：氢、羟基、羰基、芳基、杂芳基、磺酰基、磷氧基、取代或非取代的烷基或环烷基、取代或非取代的含有N、S、O杂原子的烷基或环烷基，所述取代基分别独立选自卤素、烷基、环烷基、含有N、S、O的烷基、含有N、S、O的环烷基、羟基、氰基、氨基、酯基、酰胺基、芳基、含有N、S、O的芳基、磺酰基；

R₇选自：氢或C₁～C₃烷基；

2.根据权利要求1所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子为：

其中，n选自3～10；

3.根据权利要求1所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子为：

其中，n₁、n₂选自1～6；

4.根据权利要求1所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子为：

其中，n₁、n₂选自1～6；环A取自芳基、C₃～C₆环烷基、C₃～C₆环氧烷基、含有N、S、O的芳基；

5.根据权利要求1～4任一所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述R₁为S(O)₂R₁₂，R₁₂选自：氢、C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的C₃～C₆环氧烷基。

6.根据权利要求1～4任一所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述R₂选自氢、卤素、卤代芳烃、氰基、三氟甲基。

7.根据权利要求1～4任一所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述R₃选自氢、三氟甲基、卤素、取代或未取代的C₁～C₆烷基、取代或未取代的C₃～C₆环烷基、取代或未取代的含有N、S、O的烷基、取代或未取代的含有N、S、O的C₃～C₆环烷基。

8.根据权利要求1～4任一所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述R₄选自：

9.根据权利要求1～8任一所述的环状2-氨基嘧啶类化合物，其特征在于，所述环状2-氨基嘧啶类化合物选自如下化合物：

10.根据权利要求1-9所述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备突变型EGFR抑制剂中的应用。

11.根据权利要求1-9所述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子在制备防治肿瘤的药物中的应用。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为EGFR基因突变的恶性肿瘤。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为EGFR^{19del/T790M/C797S}突变的恶性肿瘤。

14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、胃肠间质瘤、白血病、组织细胞性淋巴癌、鼻咽癌、头颈部肿瘤、结肠癌、直肠癌或胶质瘤。

15.一种药物组合物，其特征在于，包括活性成分以及药学上可接受的载体，所述活性成分包括有权利要求1-9所述的环状2-氨基嘧啶类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体或者其前药分子。