ES2923867T3 - Soporte de membrana y kit para probar muestra líquida usando el mismo - Google Patents

Soporte de membrana y kit para probar muestra líquida usando el mismo Download PDF

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ES2923867T3 ES18776540T ES18776540T ES2923867T3 ES 2923867 T3 ES2923867 T3 ES 2923867T3 ES 18776540 T ES18776540 T ES 18776540T ES 18776540 T ES18776540 T ES 18776540T ES 2923867 T3 ES2923867 T3 ES 2923867T3
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Abstract

La presente invención proporciona un soporte de membrana 3 que comprende una vía de flujo 2 y una zona de detección 3y, donde se proporciona una microestructura en el fondo de la vía de flujo 2 y una rugosidad superficial media de la microestructura es de 0,005 a 10,0 μm. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Soporte de membrana y kit para probar muestra líquida usando el mismo
Campo técnico
La presente invención se refiere a un soporte de membrana y a un kit de prueba de muestras líquidas que usa el soporte.
Antecedentes de la técnica
Recientemente, han llamado la atención los reactivos de pruebas en el lugar de atención (POCT) que usan, por ejemplo, reacciones antígeno-anticuerpo para determinar la contracción de enfermedades infecciosas, embarazo, nivel de azúcar en sangre y similares. Los reactivos POCT, que son reactivos de prueba usados cerca de sujetos o usados directamente por los sujetos, tienen características como la capacidad de determinación de resultados de la prueba en poco tiempo, un funcionamiento simple y bajo coste. En virtud de estas características, los reactivos POCT se usan frecuentemente, por ejemplo, en exámenes médicos en la etapa de síntomas leves y exámenes médicos regulares y se usan como una herramienta importante de examen en la atención médica domiciliaria que se espera que se expanda a partir de ahora.
En la mayoría de los reactivos POCT, la determinación se realiza introduciendo una muestra líquida, como sangre, en un kit de prueba y detectando una sustancia objetivo predeterminada contenida en la muestra líquida. Como método para detectar una sustancia objetivo predeterminada de una muestra líquida, se usa frecuentemente la inmunocromatografía. La inmunocromatografía es una técnica para detectar una sustancia mediante el suministro de una gota de líquido sobre un soporte de membrana de un kit de prueba, lo que permite que la gota de líquido se mueva sobre el soporte de membrana, permitiendo que una sustancia objetivo se una a una sustancia marcada y que el resultado se una además específicamente a una sustancia (en lo sucesivo referida como sustancia de detección) inmovilizada en el kit de prueba para producir un cambio de color o masa, y detectar el cambio. La sustancia de detección también puede denominarse reactivo.
Como soporte de membrana sobre el que se permite que se mueva una muestra líquida, a menudo se usa una membrana de nitrocelulosa (Bibliografía de Patentes 1). La membrana de nitrocelulosa tiene muchos microporos que tienen un diámetro de aproximadamente varios pm y una muestra líquida se mueve a través de los microporos con la ayuda de la fuerza capilar.
Sin embargo, la membrana de nitrocelulosa, que se deriva de un producto natural, tiene poros que no son uniformes en tamaño y disposición. Debido a esto, el caudal de una muestra líquida varía dependiendo de las membranas. Si varía el caudal, varía el tiempo necesario para detectar una sustancia objetivo, con el resultado de que puede realizarse una determinación incorrecta: "no se detectó la unión" antes de que se una la sustancia objetivo.
Para superar el problema anterior, se concibe un kit de prueba de muestras líquidas en el que se produce artificialmente una microtrayectoria de flujo (Bibliografía de Patentes 2). En la Bibliografía de Patentes 2, puede prepararse un soporte de membrana que tiene una estructura uniforme mediante el uso de un material sintético, con el resultado de que puede reducirse la posibilidad de una determinación incorrecta: "no se detectó la unión" hecha antes de que se uniera la sustancia objetivo.
Cuando se usa un material sintético, es necesario aumentar la afinidad de una sustancia de detección con el material para mejorar la sensibilidad de detección. Por tanto, se considera eficaz que se apliquen por adelantado al material varios tratamientos superficiales (Bibliografía de Patentes 3 y 4). La Bibliografía de Patente 5 divulga un soporte de membrana para un kit de prueba de muestras líquidas para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida, que tiene por lo menos una trayectoria de flujo que transporta la muestra líquida en la que se forma en la parte inferior de la trayectoria del flujo una microestructura que produce acción capilar para transportar la muestra líquida.
La Bibliografía de Patente 6 divulga un biodispositivo de área de superficie alta que comprende una matriz de nanopilares o nanotubos independientes con una relación de aspecto alta. El dispositivo se usa para sistemas microfluídicos integrados para el análisis o la separación de mezclas de proteínas o productos de digestión enzimática.
La Bibliografía de Patente 7 divulga un material compuesto reforzado con fibras que comprende fibras de carbono tratadas superficialmente, como fibras de carbono basadas en PAN. El grado de tratamiento superficial en términos de relación de concentración de oxígeno O/C es preferentemente de 0,1 a 0,3, medido en la superficie de la fibra de carbono mediante espectrometría de fotoelectrones de rayos X.
Lista de citas
Bibliografía de Patentes
Bibliografía de Patentes 1: JP 2014-062820 A
Bibliografía de Patentes 2: JP 5799395 B
Bibliografía de Patentes 3: JP 2013-113633 A
Bibliografía de Patentes 4: US 2011/0284110 A
Bibliografía de Patentes 5: WO 2016/098740 A1
Bibliografía de Patentes 6: WO 2008/097360 A2
Bibliografía de Patentes 7: EP 1589063 A1
Sumario de la invención
Problema técnico
En las Bibliografías de Patentes 3 y 4, no se proporcionan ni el efecto del tratamiento superficial sobre un material ni las condiciones de tratamiento apropiadas para mejorar la sensibilidad. Como resultado, no se proporcionó lo suficiente el rendimiento de un sistema. En las Bibliografía de Patentes 3 a 5, no se describe ni la rugosidad superficial media de la microestructura de un soporte de membrana ni la relación del número de átomos de oxígeno de una superficie de una zona de detección (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)).
La presente invención proporciona un soporte de membrana que permite una determinación con una sensibilidad muy alta.
Solución al problema
Más específicamente, la presente invención es como sigue:
(1) Un soporte de membrana que comprende: una trayectoria de flujo y una zona de detección, y una microestructura constituida por partes convexas proporcionadas en la parte inferior de la trayectoria de flujo, en donde la rugosidad superficial media Ra de la superficie de las partes convexas de la microestructura es de 0,005 a 1 gm y una altura de las partes convexas que constituyen la microestructura en la trayectoria del flujo es de 5 a 1000 gm.
(2) El soporte de membrana de acuerdo con (1), en el que hay por lo menos átomos de oxígeno en una superficie de la zona de detección; y una relación del número de átomos de oxígeno con respecto al número total de átomos de carbono, átomos de nitrógeno y átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) es de 0,01 a 0,50. (3) El soporte de membrana de acuerdo con cualquiera de (1) o (2), en el que el diámetro inferior de las partes convexas que constituyen la microestructura es de 5 a 1000 gm.
(4) El soporte de membrana de acuerdo con cualquiera de (1) a (3), en el que la distancia más cercana entre las partes convexas que constituyen las microestructuras dentro de la trayectoria del flujo es de 0 a 500 gm.
(5) El soporte de membrana de acuerdo con cualquiera de (1) a (4), en el que una relación de aspecto de las partes convexas que constituyen la microestructura es de 0,1 a 10, la relación de aspecto siendo la relación entre la altura de las partes convexas y su diámetro inferior.
(6) El uso del soporte de membrana de acuerdo con cualquiera de (1) a (5), en un kit de prueba para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida.
(7) El uso de acuerdo con (6), en el que la zona de detección produce un cambio de color cuando se detecta una sustancia objetivo.
(8) Un kit de prueba de muestras líquidas que tiene el soporte de membrana de acuerdo con cualquiera de (1) a (5).
(9) El kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con (8), que comprende además una sustancia de detección inmovilizada en la zona de detección capaz de producir un cambio de color tras unirse a una sustancia objetivo.
Efectos ventajosos de la invención
La presente invención puede proporcionar un soporte de membrana que permite una determinación con una sensibilidad muy alta.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 muestra una vista superior esquemática de un kit de prueba que es una realización de la presente invención.
La Figura 2 muestra una vista superior esquemática de un soporte de membrana que es una realización de la presente invención.
La Figura 3 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de microestructuras que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La Figura 4 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La Figura 5 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La Figura 6 muestra (a) una vista en planta (vista superior) de una microestructura que es una realización de la presente invención; y (b) una vista en perspectiva de una parte convexa que constituye la microestructura mostrada en (a).
La Figura 7 muestra una vista superior esquemática de una microestructura que es una realización de la presente invención.
La Figura 8 muestra una vista esquemática para explicar un tratamiento superficial.
Descripción de realizaciones
A continuación se describirán realizaciones de la presente invención. Las realizaciones de la presente invención no se limitan a los Ejemplos (descritos más adelante) y pueden modificarse de varias maneras dentro del intervalo de una idea técnica de la misma.
El soporte de membrana de acuerdo con una realización es un soporte de membrana para un kit de prueba de muestras líquidas, que detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida.
La sustancia objetivo de la presente, que no está limitada, puede ser cualquier sustancia siempre que pueda someterse a una reacción antígeno-anticuerpo con varios patógenos, varios marcadores clínicos y anticuerpos. Los ejemplos de la sustancia objetivo incluyen, pero no están particularmente limitados a, antígenos de virus como virus de la gripe, norovirus, adenovirus, virus RS, HAV, HBs y HIV; antígenos de bacterias como MRSA, estreptococos del grupo A, estreptococos del grupo B y bacterias de Legionella; toxinas producidas por bacterias, Mycoplasma, Chlamydia trachomatis, hormonas como la gonadotropina coriónica humana; y proteína C reactiva, mioglobina, troponina miocárdica, varios marcadores tumorales, agroquímicos y hormonas ambientales. Si la sustancia objetivo es particularmente una sustancia que debe detectarse y tratarse rápidamente, como el virus de la gripe, el norovirus, la proteína C reactiva, mioglobina y troponina miocárdica, el soporte de membrana para un kit de prueba de muestras líquidas es extremadamente útil. La sustancia objetivo puede ser un antígeno, que únicamente induce una respuesta inmunitaria, o puede ser un hapteno, que no puede inducir una respuesta inmunitaria por sí mismo pero puede unirse a un anticuerpo a través de una reacción antígeno-anticuerpo. La sustancia objetivo se suspende o disuelve habitualmente en una muestra líquida. La muestra líquida puede ser una muestra obtenida suspendiendo o disolviendo la sustancia objetivo en, por ejemplo, una solución tampón.
El kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización (en lo sucesivo también referido simplemente como "kit de prueba") detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida. La Figura 1 es una vista superior esquemática de un kit de prueba. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 1, un kit de prueba 18 tiene un soporte de membrana 3 y una caja 18a para acomodar el soporte de membrana 3. El soporte de membrana 3 tiene, en la superficie del mismo, una zona de gota 3x en la que se suministra una gota de una muestra líquida y una zona de detección 3y para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida. La zona de gota 3x está expuesta en una primera abertura 18b de la caja 18a. La zona de detección 3y está expuesta en la segunda abertura 18c de la caja 18a.
La Figura 2 es una vista superior esquemática del soporte de membrana 3. Como se muestra en la Figura 2, el soporte de membrana 3 tiene por lo menos una trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida. En la parte inferior de la trayectoria de flujo 2, se proporciona una microestructura (no mostrada, los detalles se describirán más adelante). La microestructura está presente por lo menos entre la zona de gota 3x y la zona de detección 3y. La microestructura puede proporcionarse sobre la superficie completa del soporte de membrana 3. La superficie completa del soporte de membrana 3 puede servir como trayectoria de flujo 2 para una muestra líquida. Debido a la microestructura se produce acción capilar. Una muestra líquida es transportada desde la zona de gota 3x hasta la zona de detección 3y (a lo largo de la dirección de transporte d) a través de la microestructura con la ayuda de la acción capilar producida por la microestructura. Cuando se detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida en la zona de detección 3y, cambia el color de la zona de detección 3y.
La forma completa del soporte de membrana 3 no está particularmente limitada; sin embargo, la forma puede ser, por ejemplo, un polígono como un rectángulo, un círculo o un elipsoide. Si el soporte de membrana 3 es un rectángulo, la longitud (longitud del lado más corto) L1 del soporte de membrana 3 puede ser, por ejemplo, de 2 mm a 100 mm y la anchura (longitud del lado más largo) L2 del soporte de membrana 3 puede ser, por ejemplo, de 2 mm a 100 mm. El espesor del soporte de la membrana, excluyendo las alturas de la microestructura, puede ser, por ejemplo, de 0,1 mm a 10 mm.
Cada una de las Figuras 3 a 6 muestran una microestructura provista en la parte inferior de la trayectoria de flujo de acuerdo con la realización y un ejemplo de partes convexas que constituyen la microestructura. En cada una de las Figuras 3 a 6, (a) es una vista en planta (vista superior) de la microestructura; y (b) es una vista en perspectiva de una de las partes convexas que constituyen la microestructura. Como se muestra en las Figuras 3 a 6, una microestructura 7 es un conjunto de partes convexas 8. Más específicamente, el soporte de membrana 3 tiene una parte plana 9 correspondiente a la parte inferior de la trayectoria de flujo 2 de una muestra líquida y una pluralidad de partes convexas 8 correspondientes a la parte plana 9. El espacio entre las partes convexas 8 sirve como trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del soporte de membrana 3 con la ayuda de la acción capilar. En otras palabras, el espacio en la microestructura 7 sirve como trayectoria de flujo 2 para transportar una muestra líquida a lo largo de la superficie del soporte de membrana 3 por acción capilar. Las partes convexas 8 pueden estar dispuestas en la superficie del soporte de membrana 3 de manera regular o de manera simétrica traslacional.
La forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 puede seleccionarse libremente. Los ejemplos de la forma de las partes convexas 8 incluyen un cono, una pirámide poligonal, un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, un cilindro, una columna poligonal, un hemisferio y un semielipsoide. Como forma de la parte inferior de una microestructura, por ejemplo, se menciona un círculo o polígono (por ejemplo, cuadrado, rombo, rectángulo, triángulo o hexágono). Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8a puede ser un cono como se muestra en la Figura 3. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8b puede ser una pirámide cuadrada como se muestra en la Figura 4. Por ejemplo, la forma de las partes convexas 8c puede ser una pirámide hexagonal como se muestra en la Figura 5. Por ejemplo, como se muestra en la Figura 6, la forma de la parte convexa 8d puede ser un prisma cuadrangular (estructura de línea-espacio donde una parte convexa 8d es lineal). Debido a que cuando se mira hacia abajo a la microestructura 7 (se ve desde arriba), puede verse toda la superficie del soporte de membrana 3 y puede verificarse fácilmente un cambio de color cuando se detecta una sustancia objetivo mediante un medio óptico, es adecuada una estructura de cono como un cono y una pirámide poligonal como forma de las partes convexas 8, entre las formas mencionadas anteriormente. De las estructuras de cono, se prefiere un cono circular.
No es necesario que la forma de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 sea una forma geométricamente precisa y puede ser una forma que tenga una esquina redondeada y una forma que tenga microconvexocóncavos en la superficie.
El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 5 pm o más y 1000 pm o menos, y más preferiblemente de 10 pm o más y 500 pm o menos. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 5 pm o más, la precisión de la microfabricación puede mantenerse baja y el coste de formación de la microestructura 7 tiende a reducirse. Si el diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 es de 1000 pm o menos, el número de partes convexas 8 en un solo kit de prueba aumenta y puede desarrollarse fácilmente una muestra líquida.
El diámetro 4 de cada una de las superficies inferiores 10 de las partes convexas 8 se define como la longitud representativa de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8. La longitud representativa que define la superficie inferior 10 es un diámetro si la forma de la superficie inferior 10 es un círculo; la longitud del lado más corto si la forma es un triángulo o un rectángulo; la longitud de la línea diagonal más larga si la forma es un polígono de un pentágono o más; y una longitud máxima de la superficie inferior 10 en el caso de formas distintas de las mencionadas anteriormente.
Como se muestra en la Figura 3, si la forma de la parte convexa 8a es un cono, el diámetro 4a de la superficie inferior 10a de la parte convexa 8a corresponde al diámetro de la parte inferior (círculo) del cono. Como se muestra en la Figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada regular, el diámetro 4b de la superficie inferior 10b de la parte convexa 8b es la longitud de los lados de la superficie inferior (cuadrado regular) 10b. Como se muestra en la Figura 5, si la forma de la parte convexa 8c es una pirámide hexagonal regular, el diámetro 4c de la superficie inferior 10c de la parte convexa 8c es la longitud de una línea diagonal (longitud de la línea diagonal más larga) que pasa por el centro de la parte inferior superficie (hexágono regular) 10c. Como se muestra en la Figura 6, si la forma de la parte convexa 8d es un rectángulo, el diámetro 4d de la superficie inferior 10d de la parte convexa 8d es la longitud del lado más corto de la superficie inferior (rectángulo) 10d (en la Figura 6, la longitud del lado perpendicular a la dirección de transporte d de una muestra líquida).
La altura 6 de cada una de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 5 pm a 1000 pm y más preferiblemente de 10 pm a 500 pm. Si la altura 6 de las partes convexas 8 es de 5 pm o más, el volumen de la trayectoria de flujo 2 aumenta, con el resultado de que puede desarrollarse una muestra líquida en un tiempo más corto. Si la altura 6 de cada una de las partes convexas 8 es de 1000 pm o menos, pueden reducirse el tiempo y el coste para formar la microestructura 7, con el resultado de que se facilita preparar la microestructura 7.
La altura 6 de la parte convexa 8 se define como una longitud máxima de la parte convexa 8 en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 3, si la forma de la parte convexa 8a es un cono, la altura 6a de la parte convexa 8a es una longitud máxima (la altura del cono) de la parte convexa 8a en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 4, si la forma de la parte convexa 8b es una pirámide cuadrada, la altura 6b de la parte convexa 8b es una longitud máxima (la altura de la pirámide cuadrada) de la parte convexa 8b en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 5, si la forma de la parte convexa 8c es una pirámide hexagonal, la altura 6c de la parte convexa 8c es una longitud máxima (la altura de la pirámide hexagonal) de la parte convexa 8c en la dirección perpendicular a la parte plana 9. Como se muestra en la Figura 6, si la forma de la parte convexa 8d es un prisma cuadrangular, la altura 6d de la parte convexa 8d es una longitud máxima (la altura del prisma cuadrangular) de la parte convexa 8d en la dirección perpendicular a la parte plana 9.
La distancia más próxima 5 entre las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferentemente de 0 a 500 gm. Es preferiblemente de 500 gm o menos y más preferiblemente de 2 gm o más y de 100 gm o menos. No es concebible que la distancia más cercana 5 entre las partes convexas 8 sea menor de 0 gm. Si la distancia más cercana es de 500 gm o menos, el área de contacto entre una muestra líquida y la trayectoria de flujo 2 aumenta y de este modo aumenta la fuerza capilar, con el resultado de que puede moverse más fácilmente una muestra líquida. La "distancia más cercana entre las partes convexas 8" en la presente se refiere a la distancia más cercana entre una pareja de partes convexas 8 adyacentes.
La relación de aspecto de cada una de las partes convexas 8 que constituyen la microestructura 7 es preferiblemente de 0,1 a 10 y más preferiblemente de 0,1 a 2,0. La relación de aspecto en la presente se refiere a un valor obtenido dividiendo la altura 6 (Lh) de la parte convexa 8 por la longitud representativa (diámetro 4) (Lv) de la superficie inferior 10 de la parte convexa 8, (Lh/Lv). Si la relación de aspecto es de 0,1 o más, el área de contacto entre una muestra líquida y la trayectoria de flujo 2 aumenta y de este modo aumenta la fuerza capilar, con el resultado de que se mueve más fácilmente una muestra líquida. Si la relación de aspecto es de 10 o menos, se facilita preparar la microestructura.
La microestructura 7 y el soporte de membrana 3 del kit de prueba de muestras líquidas 18 de la realización pueden estar hechos de un termoplástico. En otras palabras, el soporte de membrana 3 que tiene la microestructura 7 puede producirse procesando un material base similar a una película hecho de un termoplástico.
Los ejemplos del método de procesamiento incluyen impresión térmica, impresión UV, moldeo por inyección, grabado, fotolitografía, corte a máquina y procesamiento con láser. De ellos, la impresión térmica a un termoplástico es adecuada como método para aplicar un procesamiento preciso a bajo coste. Los ejemplos de termoplástico incluyen una resina de poliéster, una resina de poliolefina, una resina de poliestireno, una resina de policarbonato, una fluororresina y una resina acrílica. Más específicamente, pueden usarse varios tipos de resinas, incluyendo el tereftalato de polietileno (PET), un polímero de cicloolefina (COP), polipropileno (PP), poliestireno (PS), policarbonato (PC), fluoruro de polivinilideno (PVDF), polimetilmetacrilato (PMMA) y polietileno (PE).
En el caso de procesamiento usando un molde, como el moldeo por impresión y por inyección, como la parte superior de un cono es estrecha en comparación con la parte inferior, el volumen de metal raspado en la formación del molde es más pequeño que en un molde columnar que tiene la misma área inferior, y por tanto, el molde puede prepararse a bajo coste con un cono. En este caso, puede detectarse una sustancia objetivo en una muestra líquida a bajo coste.
Como se ha descrito anteriormente, el soporte de membrana 3 tiene la microestructura 7 provista sobre la superficie del soporte de membrana 3, una trayectoria de flujo 2 formada por la microestructura 7 para transportar una muestra líquida y una zona de detección (sección de detección) 3y para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida. El soporte de membrana 3 puede ser un soporte de membrana 3 para un kit de prueba de muestras líquidas 18, que detecta una sustancia objetivo en una muestra líquida.
La rugosidad superficial media (Ra) del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 es de 0,005 a 10,0 gm. La rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 es preferiblemente de 0,1 gm o más, más preferiblemente de 0,2 gm o más, aún más preferiblemente de 0,5 gm o más y aún más preferiblemente de 1 gm o más. La rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 es de 1 gm o menos y puede ser de 10 gm o menos. La rugosidad superficial media (Ra) del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 se refiere a una rugosidad superficial media de las partes convexas 8 y se emplea la definición determinada en JIS B0601: 2013. La rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 puede reformularse como una rugosidad superficial media de las partes convexas 8 en la microestructura 7 del soporte de membrana 3.
En el soporte de membrana 3, la rugosidad superficial media (Ra) de la parte plana 9 puede ser de 0,005 a 10,0 gm. La rugosidad superficial media de la parte plana 9 puede ser un valor indicado como una rugosidad media del soporte de membrana anterior. La rugosidad superficial media (Ra) de la parte plana 9 es preferiblemente de 10 gm o menos, más preferiblemente de 5 gm o menos, más preferiblemente de 3 gm o menos y más preferiblemente de 2 gm o menos.
La Figura 7 se usa para describir un método para determinar una rugosidad superficial media de las partes convexas 8 de la microestructura 7. La rugosidad (perfil) se mide a lo largo de la superficie de la parte convexa 8 (a lo largo de la línea lineal 20 en la vista superior) como un punto medio en un centro de vértice (por ejemplo, el centro convexo 19) de la parte convexa 8. La línea lineal 20 es cualquier línea que pasa a través del centro del vértice (por ejemplo, el centro convexo 19) como un punto medio y que tiene una longitud de 20d. La longitud 20d es la misma longitud que el diámetro de la parte inferior de la parte convexa 8. Si la línea lineal 20 es una línea recta colocada en el mismo plano (por ejemplo, ambos extremos y el centro están presentes en el mismo plano), más específicamente, la parte convexa 8 tiene forma como un cono truncado, una pirámide poligonal truncada, cilindro y columna poligonal, se calcula a partir del perfil de rugosidad una rugosidad superficial media (Ra) definida en JIS B0601. Si la línea lineal 20 es una línea recta que no está en el mismo plano, más específicamente, la parte convexa 8 tiene una forma como un cono, una pirámide poligonal, un hemisferio o un semielipsoide, se proporciona la corrección de inclinación en base al perfil de rugosidad y se calcula como un plano liso una rugosidad superficial media (Ra) definida en JIS B0601.
Si el soporte de membrana 3 que tiene la microestructura 7 se produce mediante impresión térmica, la rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 puede ajustarse para que caiga dentro del intervalo numérico mencionado anteriormente, por ejemplo, mediante grabado, fotolitografía, corte a máquina y procesamiento con láser. Particularmente, la rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 se ajusta preferiblemente controlando una rugosidad superficial media del molde que se usará en la impresión térmica, para que sea un valor predeterminado. Por ejemplo, la rugosidad superficial media del soporte de membrana 3 en la microestructura 7 se ajusta preferiblemente procesando la superficie de un molde, por ejemplo, mediante grabado, fotolitografía, corte a máquina, pulido y/o procesamiento con láser. En cuanto al pulido, puede mencionarse el corte, por ejemplo, en dados y chorro de arena. En el caso de procesamiento con láser, puede ajustarse una rugosidad superficial media controlando la salida de un láser.
Más específicamente, es preferible que el método para producir un kit de prueba 18 de acuerdo con la realización tenga un paso de producir un soporte de membrana 3 que tenga una microestructura 7 por impresión térmica (paso de impresión térmica). En el paso de impresión térmica, se aplica un molde que tiene una pluralidad de partes cóncavas en la superficie a un sustrato similar a una película formado, por ejemplo, por un termoplástico para enfrentar la superficie al sustrato, y se calienta el sustrato. De esta manera, se forma un soporte de membrana
3 que tiene una microestructura 7 que tiene una pluralidad de partes convexas 8, que corresponden a las formas de las partes cóncavas, y una parte plana 9.
En una realización, en la superficie de la zona de detección, hay por lo menos un átomo de carbono, un átomo de nitrógeno y un átomo de oxígeno.
La relación entre el número de átomos de oxígeno y el número total de tipos individuales de átomos (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) es de 0,01 a 0,50. En el soporte de membrana de una realización, la relación del número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) en la superficie de la zona de detección es de 0,01 o más, preferiblemente de 0,05 o más, más preferiblemente de 0,10 o más y aún más preferiblemente de 0,20 o más. En el soporte de membrana de una realización, la relación del número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) en la superficie de la zona de detección es de 0,50 o menos, preferiblemente de 0,40 o menos, más preferiblemente de 0,38 o menos, más preferiblemente de 0,36 o menos, más preferiblemente de 0,30 o menos y aún más preferiblemente de 0,10 o menos. A medida que aumenta la relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de la zona de detección, una sustancia de detección se inmoviliza más fácilmente en la superficie. Si la sustancia de detección se inmoviliza en la superficie, la cantidad de sustancia de detección que fluye hacia afuera cuando se desarrolla una muestra líquida se reduce y puede realizarse una detección altamente sensible. Si la relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de la zona de detección es de 0,50 o menos, se reduce aún más el caso de una detección incorrecta provocada por la reacción de un marcador y una sustancia de detección cuando se desarrolla una solución que no contiene la sustancia objetivo.
La relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de la zona de detección se calcula en base a una espectroscopia electrónica de rayos X (XPS). A continuación se describirá el cálculo de la relación del número de átomos de oxígeno en base a XPS. El espectro obtenido por medición se somete a la corrección de la energía de unión realizada por un enlace C-C en un espectro C1s. En el espectro obtenido tras la corrección de la energía de unión, para cada uno de los picos del espectro C1s, espectro N1s y espectro O1s, se resta el fondo (BG). Cada una de las áreas de los picos (intensidad de la señal) de los átomos individuales calculada restando BG de los picos respectivos se divide por un coeficiente de corrección (coeficiente de sensibilidad relativa, función transparente y corrección de energía cinética) y el cálculo se realiza de tal manera que el total de las áreas después de la corrección se convierte en 100. Los valores individuales obtenidos de este modo se consideran el número de átomos de carbono, número de átomos de nitrógeno y número de átomos de oxígeno, y se calcula la relación del número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)).
La relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de la zona de detección puede ajustarse para que caiga dentro del intervalo mencionado anteriormente tratando la superficie de la zona de detección. Los ejemplos del método de tratamiento de superficies incluyen, pero no se limitan a, procesamiento de plasma, tratamiento de corona, radiación UV, tratamiento con UV/ozono, modificación de la superficie con, por ejemplo, 3-aminopropiltrietoxisilano y glutaraldehído.
Preferiblemente, solo se aplica un tratamiento superficial a la zona de detección. Si el tratamiento superficial se aplica solo a la zona de detección, una sustancia de detección no se inmoviliza en la zona de no detección (región excepto la zona de detección) en la trayectoria de flujo y la sustancia de detección puede inmovilizarse de manera altamente eficiente solo en la zona de detección. Como resultado, se vuelve fácil reconocer una señal de detección en la zona de detección (aumenta la relación S/N).
Como método para reformar la superficie de la zona de detección tratando selectivamente la superficie de la zona de detección, se expone un método para aplicar una máscara (protección) a la región excepto la zona de detección y aplicar un tratamiento superficial a la zona de detección. La Figura 8 se usa para explicar un método de aplicar selectivamente un tratamiento de superficie a la superficie de la zona de detección. Se dispone una protección 14 que tiene una abertura en el soporte de membrana 3 para exponer la zona de detección (una sección tratada superficialmente). La parte del soporte de membrana 3 cubierta con la protección 14 se convierte en una parte no tratada (zona de no detección) 15. Como protección 14, se prefiere una placa metálica. Se aplica un tratamiento superficial a la parte expuesta para obtener un soporte de membrana 3 que tiene la relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de la zona de detección dentro del intervalo anterior.
En la realización anterior, como material para un soporte de membrana, se usa preferiblemente una resina que tiene una relación superficial de número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) de menos de 0,01 y se usa más preferiblemente una resina que tiene una relación superficial del número de átomos de oxígeno de 0,005 o menos. Una resina que tiene una relación superficial del número de átomos de oxígeno de menos de 0,01 es una resina que no contiene átomos de oxígeno en la fórmula estructural de un componente principal y puede ser una resina que contiene un átomo de carbono, ni un átomo de nitrógeno ni un átomo de oxígeno, como una resina de poliolefina, una resina de poliestireno y una fluororresina. Los ejemplos de la resina incluyen polietileno (PE), un polímero de cicloolefina (COP), polipropileno (PP), poliestireno (PS) y fluoruro de polivinilideno (PVDF). Una resina que tiene una relación superficial del número de átomos de oxígeno de menos de 0,01 puede ser una resina que contiene un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno y que no contiene un átomo de oxígeno, como una resina de poliimida. Si se usa una resina que contiene un átomo de carbono, ni un átomo de nitrógeno ni un átomo de oxígeno, la relación del número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) de la zona de detección se vuelve sustancialmente igual al número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de oxígeno).
Cuando una relación de superficie del número de átomos de oxígeno es de 0,005 o menos, si se forma un soporte de membrana, se produce un kit de prueba usando el soporte de membrana y se desarrolla una muestra líquida, se suprime adicionalmente la adhesión de un marcador en la zona de no detección. Cuando se coloca un marcador en una zona de no detección, incluso si se genera una señal que tiene la misma intensidad en la zona de detección, rara vez se reconoce la señal (disminuye la relación S/R).
En un kit de prueba de muestras líquidas 18 de acuerdo con la realización, cuando se detecta una sustancia objetivo en la zona de detección 3y del soporte de membrana 3, cambia el color. El cambio de color puede ser un cambio de color que puede observarse por medios ópticos.
Como medios ópticos, se mencionan principalmente dos métodos: un medio de determinación visual y un medio para medir la intensidad de la fluorescencia. En el caso de la determinación visual, es preferible producir un cambio de color expresado por una diferencia de color (AE descrito en JIS Z8781-4:2013) de 0,5 o más entre dos estímulos de color antes y después de la detección cuando el color se mide por el sistema de color de espacio de color CIE1976L*a*b*. Si la diferencia de color es de 0,5 o más, puede realizarse fácilmente la determinación visual de la diferencia de color. En el caso de una determinación basada en la medición de la intensidad de la fluorescencia, es preferible producir una diferencia de color que satisfaga una relación entre la intensidad de la fluorescencia (Fl1) en la zona de detección 3y y la intensidad de la fluorescencia (Fl2) en la región en sentido ascendente y la región en sentido descendente adyacente a la zona de detección 3y, (Fl1/Fl2) = 10/1 o más. Si la relación es de 10/1 o más, pueden separarse fácilmente la señal y el ruido.
Para preparar la zona de detección 3y en el kit de prueba de muestras líquidas 18 de la realización, se inmoviliza una sustancia de detección en por lo menos parte de la trayectoria de flujo 2, en una realización. Más específicamente, una sustancia de detección que detecta una sustancia objetivo se inmoviliza en la zona de detección 3y. Se produce un cambio de color en la zona de detección 3y manteniendo una sustancia objetivo por la sustancia de detección (mediante la reacción con la sustancia de detección) en la zona de detección 3y.
En otras palabras, un método para producir el kit de prueba de muestras líquidas 18 comprende un paso de inmovilizar, en la zona de detección 3y, una sustancia de detección que produce un cambio de color manteniendo la sustancia objetivo en la zona de detección 3y. Debido a que una sustancia de detección (reactivo) puede inmovilizarse eficientemente en la zona de detección 3y, puede aplicarse el tratamiento superficial previamente al sitio del soporte de membrana 3, en el que debe proporcionarse la zona de detección 3y. Como método para el tratamiento superficial, puede usarse el método mencionado anteriormente.
En la realización, como sustancia de detección (reactivo), por ejemplo, se menciona un anticuerpo. El anticuerpo es un anticuerpo que se une a una sustancia objetivo a través de una reacción antígeno-anticuerpo, y puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal.
El cambio de color en la zona de detección 3y puede ser producido por un marcador que tiene un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo que reacciona específicamente con una sustancia objetivo en una muestra líquida. El cambio de color se produce, por ejemplo, manteniendo un marcador por una sustancia de detección (a través de una reacción con (uniéndose a) la sustancia de detección) en la zona de detección 3y y produciendo un color.
El marcador es, por ejemplo, un marcador en el que un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo se une a partículas como partículas coloidales y partículas de látex. El fragmento de unión a antígeno se refiere a un fragmento que se une específicamente a una sustancia objetivo, como un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo. El marcador puede unirse a una sustancia objetivo a través de un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo. Las partículas pueden tener propiedades magnéticas o fluorogenicidad. Los ejemplos de partículas coloidales incluyen partículas coloidales metálicas como partículas coloidales de oro y partículas coloidales de platino. Las partículas son preferiblemente partículas de látex en vista del control del tamaño de las partículas, la estabilidad de la dispersión y la capacidad de unión. El material para partículas de látex no está particularmente limitado; sin embargo, se prefiere el poliestireno.
En vista de la visibilidad, las partículas son preferiblemente partículas coloreadas o partículas fluorescentes y más preferiblemente partículas coloreadas. Las partículas coloreadas son satisfactorias si el color de las mismas es detectable a simple vista. Las partículas fluorescentes son satisfactorias si contienen una sustancia fluorescente. Las partículas pueden ser partículas de látex coloreadas o partículas de látex fluorescentes. Si las partículas son partículas de látex coloreadas, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta adecuadamente visualmente. Si las partículas son partículas de látex fluorescentes, el cambio de color mencionado anteriormente se detecta adecuadamente mediante la medición de la intensidad de la fluorescencia.
Para que el marcador como se ha mencionado anteriormente, reaccione con éxito con una sustancia objetivo en una muestra líquida que se suministrará gota a gota, se proporciona el marcador por lo menos en una parte del kit de prueba 18. El marcador puede proporcionarse, por ejemplo, a un miembro en el kit de prueba 18 o puede proporcionarse a por lo menos una parte (en sentido ascendente de la zona de detección 3y) de la trayectoria de flujo 2 del soporte de membrana 3. El marcador que reaccionó con (se unió a) una sustancia objetivo es retenido por una sustancia de detección (a través de la reacción (unión) de la sustancia de detección con la sustancia objetivo) en la zona de detección 3y. De esta manera, se produce un cambio de color (color producido por un marcador) en la zona de detección 3y.
Un método para analizar una muestra líquida de acuerdo es un método de prueba que usa el kit de prueba 18.
El método para probar una muestra líquida usando el kit de prueba 18 puede comprender un paso de preparación de una muestra líquida mezclando la muestra líquida y un marcador que se une específicamente a una sustancia objetivo en la muestra líquida para unir mutuamente la sustancia objetivo y el marcador; un paso de suministrar una gota de la muestra líquida mezclada a la zona de gota 3x provista en el soporte de membrana 3; un paso de transportar la muestra líquida mezclada desde la zona de gota 3x a la zona de detección 3y a través de la microestructura 7; y un paso de detectar un cambio de color (color del marcador) en la zona de detección 3y.
Alternativamente, el método de prueba anterior puede comprender un paso de suministrar una gota de una muestra líquida a la zona de gota 3x en la superficie del soporte de membrana 3; un paso de transportar la muestra líquida desde la zona de gota 3x hasta la zona de detección 3y a través de la microestructura 7 con la ayuda de la acción capilar ejercida por la microestructura 7 (partes convexas 8) formada en la superficie del soporte de membrana 3; y un paso de unir una sustancia objetivo en una muestra líquida al marcador a través del anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, además, unir la sustancia objetivo a un reactivo inmovilizado en la zona de detección 3y y detectar un cambio de color en la zona de detección 3y (determinar ópticamente la presencia o ausencia de cambio de color).
En el paso de unir mutuamente una sustancia objetivo y un marcador en el método de prueba anterior, un método para mezclar una muestra líquida y el marcador no está particularmente limitado. Por ejemplo, puede emplearse un método para añadir una muestra líquida en un recipiente que contiene el marcador o un método para mezclar un líquido que contiene, por ejemplo, un marcador y una muestra líquida. Alternativamente, se inserta un filtro en una abertura de goteo de un recipiente que contiene, por ejemplo, una muestra líquida, y puede inmovilizarse un marcador en el filtro.
Ejemplos
Las realizaciones se describirán a modo de Ejemplos y Ejemplos Comparativos; sin embargo, las realizaciones no están limitadas por estos Ejemplos.
[Ejemplo 1-1]
<Preparación del soporte de membrana>
Se aplicó impresión térmica a una lámina de poliestireno (lámina de estireno Denka fabricada por Denka Company Limited, espesor de película de 300 gm) para formar un soporte de membrana, en el que el diámetro de la parte inferior de una parte convexa de forma cónica (de una microestructura) 8 (en lo sucesivo, referida algunas veces como "diámetro de una parte convexa" o "diámetro"), era de 10 gm y la altura de la parte convexa con forma cónica (de una microestructura) (en lo sucesivo, referido a veces como "altura") era de 10 gm y las partes convexas con forma cónica se dispusieron de manera escalonada a la distancia más cercana entre las partes convexas mutuas de 5 gm, como se muestra en la Figura 3, y que tenía una rugosidad superficial media de 0,102 gm. La rugosidad superficial media se ajustó para que fuera un valor predeterminado aplicando chorro de arena a la superficie de un molde. Cada uno de los valores de rugosidad superficial media que se muestran en las Tablas 1 y 2 muestra la rugosidad superficial media de una microestructura (una rugosidad superficial media de las partes convexas). La rugosidad superficial media se determinó mediante un microscopio electrónico 3D de análisis de rugosidad superficial (ERA-600, fabricado por Elionix Inc.) (ver, Figura 7). Se eligieron arbitrariamente tres partes convexas 8 de forma cónica, y se midió un perfil de rugosidad a lo largo de una línea lineal 20 que pasa por el centro del vértice (punto central 19 de una parte convexa) de la parte convexa 8 como un punto medio y que tiene una longitud (20d) de 10 gm con respecto a cada una de las tres partes convexas 8. Los perfiles de rugosidad de tres líneas lineales 20 se sometieron a corrección de inclinación y se corrigieron como los perfiles de planos lisos. Los valores de la rugosidad superficial media (Ra) definidos en JIS B0601 se obtuvieron individualmente mediante cálculo. Los datos de las tres partes convexas se promediaron y se consideraron como un valor de evaluación. <Preparación de la zona de detección (sección de detección)>
La microestructura de un soporte de membrana producido como se ha mencionado anteriormente se recubrió con una placa metálica que servía como una máscara de tal manera que solo la parte a una distancia de 0,7 a 1,0 cm del borde debía irradiarse con energía y luego se aplicó UV. La placa metálica se preparó de tal manera que se proporcionó una abertura a la parte correspondiente a una parte superior de 0,7-1,0 cm para exponer el soporte de membrana. Como método de enmascaramiento, se empleó un método de colocación de la placa metálica sobre el soporte de membrana. De esta manera, se obtuvo el soporte de membrana 3 tratado superficialmente. En la Figura 8, la parte de 0,7-1,0 cm corresponde a la zona de detección 3y (sección de superficie tratada); mientras que la placa metálica corresponde a la protección 14.
inmovilización de la sustancia de detección>
A la parte en la que se aplicó el tratamiento UV como se ha mencionado anteriormente, se aplicó una solución de suspensión de anticuerpos anti NP de gripe tipo A y una solución de suspensión de anticuerpos anti NP de gripe tipo B en un ancho de línea de 1 mm (las cantidades de recubrimiento fueron de 3 gl) y se secaron los suficiente con aire caliente. De esta manera, se inmovilizaron en la zona de detección 3y un anticuerpo anti NP de gripe tipo A y un anticuerpo anti NP de gripe tipo B.
<Preparación del marcador>
Se usaron un anticuerpo anti NP de virus de la gripe tipo A purificado (otro anticuerpo como se usa en lo anterior) y un anticuerpo anti NP de virus de la gripe tipo B purificado (otro anticuerpo como se usa en lo anterior). El anticuerpo anti NP de virus de la gripe tipo A se marcó covalentemente con partículas de látex rojo (CM/BL fabricado por Ceradyne Inc.) que tenían un tamaño de partícula de 0,394 gm, suspendidas en una solución tampón Tris que contenía un azúcar, un surfactante y una proteína de tal manera que la concentración de las partículas de látex llegó a ser del 0,025% p/v, y se trataron ultrasónicamente para preparar un marcador anti tipo A suficientemente dispersado y suspendido. El marcador anti tipo B se preparó de manera similar marcando un anticuerpo anti NP de virus de la gripe tipo B con partículas de látex azul (CM/BL fabricado por Ceradyne Inc.).
Se mezclaron el marcador anti tipo A y el marcador anti tipo B para preparar una solución mixta. La solución mixta se aplicó a la fibra de vidrio que tenía un tamaño de 3 cm x 1 cm (33GLASS N° 10539766, fabricado por Schleicher & Schuell) en una cantidad de 50 pl por centímetro cuadrado y se secó bien con aire caliente para producir una almohadilla marcada. Posteriormente, la almohadilla marcada se superpuso con una de las partes de borde del soporte de membrana (correspondiente al soporte de membrana 3 con superficie tratada) más cerca de la zona de detección 13y. La anchura (anchura de la parte del borde) del soporte de membrana superpuesta con la almohadilla marcada era de 2 mm. El soporte de membrana superpuesto con la almohadilla marcada se cortó en tiras que tenían una anchura de 5 mm mediante un cortador para preparar kits de prueba de muestras líquidas formados integralmente por el soporte de membrana y la almohadilla marcada.
En el borde del kit de prueba de muestras líquidas preparado como se ha mencionado anteriormente, se añadió gota a gota una muestra líquida (100 pl). La parte del borde del kit de prueba de muestras líquidas, sobre la que se añadió gota a gota la muestra, era una de las partes del borde más cercanas a la zona de detección. Como muestra líquida, se usaron dos tipos de muestras; una es una solución del virus de la gripe tipo A, A/Beijing/32/92 (H3N2) diluida con una solución de suspensión de espécimen unida a Quick navi-Flu fabricado por Denka Seiken Co., Ltd. como una solución de dilución, hasta 2 x 104 veces, y la otra es una solución del virus de la gripe tipo B B/Shangdong/7/97 diluida hasta 2 x 103 veces.
La determinación de la detección se realizó observando visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada (en la parte en la que se inmovilizaron un anticuerpo anti NP de gripe tipo A y un anticuerpo anti NP de gripe tipo B) en las zonas de detección (sección de detección de virus de gripe tipo A y sección de detección de virus de gripe tipo B) 15 minutos después de la adición gota a gota de una muestra líquida. El movimiento de la muestra líquida añadida gota a gota en el kit de prueba se verificó en base a una velocidad de flujo media y se confirmó si se movió la muestra líquida o no. La velocidad de flujo media se obtuvo mediante un cálculo basado en el tiempo desde el inicio del flujo de salida de la muestra líquida añadida gota a gota sobre la parte del borde del kit de prueba de muestras líquidas hasta la llegada de la muestra líquida a la línea coloreada de la zona de detección.
Como resultado de la determinación, en el caso de usar la solución de dilución A/Beijing/32/92 (H3N2) hasta 2 x 104 veces, se observó un cambio de color solo en la zona de detección tipo A; mientras que en el caso de usar la solución de dilución B/Shangdong/7/97 hasta 2 x 103 veces, se observó un cambio de color solo en la zona de detección de tipo B.
Luego, se obtuvo una tasa de dilución máxima a la que no puede observarse visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada 15 minutos después del inicio de la prueba aumentando la tasa de dilución del virus de la gripe tipo A A/Beijing/32/92 (H3N2) de 2 x 104 y se consideró como la tasa de dilución máxima permisible de determinación visible del tipo A. Posteriormente, se obtuvo una tasa de dilución máxima a la que no puede observarse visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada aumentando la tasa de dilución de la gripe tipo B virus B/Shangdong/7/97 de 2 x 103 y se consideró como la tasa de dilución máxima permitida de determinación visible del tipo B.
[Ejemplo 1-2]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,094 pm para la microestructura del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-3]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 500 pm y 500 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,109 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-4]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 1000 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,121 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-5]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 10 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,094 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-6]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 200 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,120 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-7]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,048 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-8]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,015 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1 se definieron como partes convexas con forma cónica que tenían un diámetro de 100 pm, una altura de 100 pm y una rugosidad superficial media de 0,015 pm.
[Ejemplo 1-9]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,27 pm para las microestructuras del Ejemplo 1­ 1.
[Ejemplo 1 -10, que no forma parte de la presente invención]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 6,8 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-11]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1 excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, la distancia más cercana entre las microestructuras se estableció en 100 pm, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,095 pm para las microestructuras del ejemplo 1-1.
[Ejemplo 1-12]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1 excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, la distancia más cercana entre las microestructuras se estableció en 500 pm, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,058 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo Comparativo 1-1]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 0,002 pm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
[Ejemplo Comparativo 1-2]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 1-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la rugosidad superficial media se estableció en 17 gm para las microestructuras del Ejemplo 1-1.
En la Tabla 1 se muestran los resultados de evaluación de los soportes de membrana de prueba de muestras líquidas y los kits de prueba de muestras líquidas obtenidos en los Ejemplos 1-1 a 1-12 y los Ejemplos Comparativos 1-1 a 1-2.
Figure imgf000014_0001
A partir de los resultados de la Tabla 1, se demostró que el kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización produce flujo microcapilar ajustando la altura y el diámetro de las microestructuras en la trayectoria del flujo, la distancia más cercana entre las microestructuras y la relación de aspecto para caer en los intervalos apropiados; y que una sustancia de detección puede detectarse con una sensibilidad muy alta ajustando la rugosidad superficial media de las microestructuras para que caiga dentro del intervalo adecuado, aumentando de este modo la cantidad de anticuerpo inmovilizado en la zona de detección.
[Ejemplos 1-13 a 1-24]
Las partículas a usar se cambiaron de partículas de látex coloreadas a partículas de látex fluorescentes (partículas de látex fluorescentes Micromer-F, material: poliestireno, fabricado por Corefront Corporation). Se obtuvo la tasa de dilución (tasa de dilución máxima permitida para la determinación de fluorescencia) a la que un lector de inmunocromato (C11787 fabricado por Hamamatsu Photonics KK) no puede leer la presencia o ausencia de una línea coloreada 10 minutos después del inicio de la prueba, en otras palabras, la tasa de dilución a la que la relación S/N es 10 o menos. El diámetro de las microestructuras, la distancia más cercana entre las microestructuras y la altura y relación de aspecto de las microestructuras se muestran en la Tabla 2. Los contenidos distintos a estos fueron los mismos que en los Ejemplos 1-1 a 1-12.
En la Tabla 2 se muestran los resultados de evaluación de los soportes de membrana para kits de prueba de muestras líquidas y kits de pruebas de muestras líquidas obtenidos en los Ejemplos 1-13 a 1 -24.
Figure imgf000016_0001
En la realización, la cantidad de sustancia de detección a inmovilizar puede aumentarse controlando la rugosidad superficial media de la superficie del soporte de la membrana, mejorando de este modo la sensibilidad de detección.
En la realización, en un método inmunocromatográfico, que permite la confirmación óptica de que se detectó una sustancia objetivo, se controla la rugosidad superficial media de un material para aumentar una señal de una zona de detección. De esta manera, se proporciona un kit de prueba de muestras líquidas que permite una determinación con alta sensibilidad.
[Ejemplo 2-1]
<Preparación del soporte de membrana>
Se aplicó una impresión térmica a una lámina de poliestireno (lámina de estireno Denka fabricada por Denka Company Limited, espesor de película de 300 gm) para formar un soporte de membrana 3 en el que las partes convexas 8 tienen un diámetro de la parte inferior (en lo sucesivo referido algunas veces "diámetro de un parte convexa" o "diámetro") de 10 gm y una altura (en lo sucesivo referido algunas veces "altura") de 10 gm se dispusieron de manera escalonada a la distancia más cercana entre las microestructuras de 5 gm, como se muestra en la Figura 3. La microestructura de un soporte de membrana producido como se ha mencionado anteriormente se enmascaró con una placa metálica de tal manera que solo la parte a una distancia de 0,7 a 1,0 cm del borde puede irradiarse con energía, y luego, se aplicó UV para preparar un soporte de membrana que tenía una relación de número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) de 0,35. La relación del número de átomos de oxígeno se controló variando la cantidad, la intensidad, la longitud de onda y el tiempo de irradiación de UV y la energía de la irradiación UV durante el tratamiento con UV.
Se proporcionó una abertura en la parte de 0,7-1,0 cm de la placa metálica para exponer el soporte de membrana. Como método de enmascaramiento se empleó un método de colocación de la placa metálica sobre el soporte de membrana. De esta manera, se obtuvo el soporte de membrana 3 tratado superficialmente. En la Figura 8, la parte de 0,7-1,0 cm corresponde a la zona de detección 3y; mientras que la placa metálica corresponde a la protección 14.
<Cálculo de la relación del número de átomos de oxígeno>
Los valores de la mitad de la cantidad de átomos individuales se obtuvieron mediante XPS. Como dispositivo de medición se usó el K-ALPHA fabricado por Thermo SCIENTIFIC. Las condiciones de medición fueron las siguientes. Como fuente de rayos X se usó un rayo Al-Ka (con un monocromador); la neutralización eléctrica se llevó a cabo mediante haces duales, que era la irradiación coaxial de, es decir, un electrón de baja velocidad y un ion de Ar+ de baja velocidad; un ángulo de detección fue de 90°, salida: 36 W, área de medición: aproximadamente 400 gm x 200 gm, energía de paso: 50 eV, los datos se tomaron en condiciones de 0,1 eV/paso durante 50 mseg. y número acumulado: 5 veces. El intervalo de medición fue el siguiente: espectro de carbono C1s: 279 a 298 eV, espectro de oxígeno O1s: 525 a 545 eV y espectro de nitrógeno N1s: 392 a 410 eV. La corrección por energía de unión del espectro obtenido se realizó en base al enlace C-C (284.8 eV) en el espectro C1s. Con respecto a los espectros después de llevar a cabo la corrección de energía de unión, se realizó la corrección en el siguiente intervalo restando el fondo (BG) de acuerdo con el método de Shirley, de la siguiente manera. Espectro de carbono C1s: 281 a 292 eV, espectro de oxígeno O1s: 526 a 536 eV y espectro de nitrógeno N1s: 395 a 403 eV. Las áreas de los picos (intensidad de la señal) de los átomos individuales obtenidos restando BG de los picos respectivos obtenidos en los intervalos de medición anteriores se dividieron por los coeficientes de corrección (coeficiente de sensibilidad relativa, función transparente, corrección de energía cinética) y el cálculo se realizó de tal manera que el total de las áreas después de la corrección llego a ser de 100. Los valores individuales obtenidos de este modo se consideraron como el número de átomos de carbono, el número de átomos de nitrógeno y el número de átomos de oxígeno, y se calculó la relación del número de átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)).
inmovilización de la sustancia de detección>
A una parte tratada en la superficie de un soporte de membrana (correspondiente a la zona de detección 3y), se le aplicó una suspensión de un anticuerpo anti NP de gripe tipo A y una suspensión de un anticuerpo anti NP de gripe tipo B en una línea de 1 mm de anchura (cantidad de recubrimiento 3 gl) y se secó bien con aire caliente. De esta manera, se inmovilizaron el anticuerpo anti NP de gripe tipo A y el anticuerpo anti NP de gripe tipo B en la zona de detección 3y.
inmovilización del marcador>
Se usaron un anticuerpo anti NP del virus de la gripe A purificado (otro anticuerpo como el usado anteriormente) y un anticuerpo anti NP del virus de la gripe B purificado (otro anticuerpo como el usado anteriormente). El anticuerpo anti NP de gripe tipo A se marcó covalentemente con partículas de látex rojo que tenían un tamaño de partícula de 0,394 gm (CM/BL, fabricado por Ceradyne Inc.), suspendidas en una solución tampón Tris que contenía un azúcar, un surfactante y una proteína de tal manera que la concentración de las partículas de látex llegó a ser del 0,025% p/v, y se trató ultrasónicamente para preparar un marcador anti tipo A suficientemente dispersado y suspendido. De manera similar, el anticuerpo anti NP de virus de la gripe tipo B se marcó con partículas de látex azul (CM/BL, fabricado por Ceradyne Inc.) para preparar el marcador anti tipo B.
El marcador anti tipo A y el marcador anti tipo B se mezclaron para preparar una mezcla. La mezcla se aplicó a la fibra de vidrio que tenía un tamaño de 3 cm x 1 cm (33GLASS N° 10539766, fabricado por Schleicher & Schuell) en una cantidad de 50 gl por centímetro cuadrado y se secó bien con aire caliente para dar una almohadilla marcada. Posteriormente, la almohadilla marcada se superpuso con una de las partes de borde del soporte de membrana (correspondiente a un soporte de membrana tratado superficialmente 3) preparado como se ha mencionado anteriormente, y más cerca de la zona de detección 13y. La anchura (anchura de la parte del borde) del soporte de membrana superpuesta con la almohadilla marcada era de 2 mm. El soporte de membrana superpuesto con la almohadilla marcada se cortó en tiras que tenían una anchura de 5 mm mediante un cortador para preparar kits de prueba de muestras líquidas formados integralmente por el soporte de membrana y la almohadilla marcada.
En el borde del kit de prueba de muestras líquidas preparado como se ha mencionado anteriormente, se añadió gota a gota la muestra líquida (100 gl). El borde del kit de prueba de muestras líquidas en el que se añadió gota a gota la muestra líquida era una de las partes del borde más cercanas a la zona de detección. Se prepararon dos tipos de muestras líquidas de la siguiente manera. Como sustancia de detección se usaron el virus de la gripe tipo A A/Beijing/32/92(H3N2) y el virus de la gripe tipo B B/Shangdong/7/97. Como solución de dilución, se usó una solución de suspensión de especímenes unida a Quick Navigation-Flu, fabricada por Denka Seiken Co., Ltd. El virus de la gripe tipo A A/Beijing/32/92(H3N2) se diluyó con la solución de suspensión de muestra hasta 2 x 104 y se usó como muestra líquida A. El virus de la gripe tipo B B/Shangdong/7/97 se diluyó con la solución de suspensión de muestra hasta 2 x 103 veces y se usó como muestra líquida B. Se añadieron por separado la muestra líquida A y la muestra líquida B gota a gota.
La determinación de la detección se realizó observando visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada (en las partes en las que se inmovilizaron el anticuerpo anti NP de gripe tipo A y el anticuerpo anti NP de gripe tipo B) en las zonas de detección (una sección de detección del virus de la gripe tipo A y una sección de detección del virus de la gripe tipo B), 15 minutos después de la adición gota a gota de una muestra líquida. Se comprobó si la muestra líquida se movía o no observando visualmente el movimiento de la muestra líquida añadida gota a gota en el kit de prueba.
Como resultado de la determinación, en el caso de usar la solución de dilución A/Beijing/32/92 (H3N2) hasta 2 x 104 veces, se observó un cambio de color solo en la zona de detección tipo A; mientras que en el caso de usar la solución de dilución B/Shangdong/7/97 hasta 2 x 103 veces, se observó un cambio de color solo en la zona de detección de tipo B.
Luego, se obtuvo una tasa de dilución máxima a la que no puede observarse visualmente la presencia o ausencia de una línea de color 15 minutos después del inicio de la prueba aumentando la tasa de dilución del virus de la gripe tipo A A/Beijing/32/92 (H3N2) de 2 x 104. Posteriormente, se obtuvo una tasa de dilución máxima a la que no puede observarse visualmente la presencia o ausencia de una línea coloreada aumentando la tasa de dilución del virus de gripe tipo B B/Shangdong/7/97 de 2 x 103.
[Ejemplo 2-2]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 gm y 100 gm, respectivamente, para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-3]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 500 gm y 500 gm, respectivamente, para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-4]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 1000 gm y 100 gm, respectivamente, para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-5]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 10 pm, respectivamente, para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-6]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 200 pm, respectivamente, para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-7]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,12 para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-8]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,05 para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-9]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1 excepto que las microestructuras del Ejemplo 2-1 se definieron como partes convexas de forma cónica con un diámetro de 100 pm y una altura de 100 pm; y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,01.
[Ejemplo 2-10]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y se estableció la distancia más cercana entre las microestructuras para que fuese de 100 pm para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-11]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y se estableció la distancia más cercana entre las microestructuras para que fuese de 500 pm para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
[Ejemplo 2-12]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,50 para las microestructuras del ejemplo 2-1.
[Ejemplo Comparativo 2-1]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente; no se aplicó radiación UV; y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,005 para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
Los resultados de la evaluación del soporte de membrana de prueba de muestra líquida y los kits de prueba de muestra líquida obtenidos en los Ejemplos 2-1 a 2-12 y el Ejemplo Comparativo 2-1 se muestran en la Tabla 3.
Figure imgf000020_0001
[Ejemplo Comparativo 2-2]
Se preparó un kit de prueba de muestras líquidas en las mismas condiciones que en el Ejemplo 2-1, excepto que el diámetro y la altura de la parte convexa de forma cónica se establecieron en 100 pm y 100 pm, respectivamente, y la relación del número de átomos de oxígeno se estableció en 0,50 para las microestructuras del Ejemplo 2-1.
En la Tabla 4 se muestran los resultados de la evaluación del soporte de membrana de detección de muestras líquidas obtenido en el Ejemplo comparativo 2-2. Como muestra líquida, se usó una muestra líquida que no contenía virus. Se repitió el mismo procedimiento con respecto al Ejemplo 2-2 y al Ejemplo 2-12.
T l 4
Figure imgf000021_0001
De los resultados de las Tablas 3 y 4, se demostró que el kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización produce un flujo capilar. En la realización, se demostró que una sustancia de detección puede detectarse de manera muy sensible con una baja posibilidad de una detección falsa controlando una relación de número de átomos de oxígeno para que se encuentre dentro de un intervalo apropiado (ver, por ejemplo, el Ejemplo 2-2, Ejemplos 2-7 a 2-9 y Ejemplo 2-12). En la realización, se demostró que puede detectarse de forma muy sensible una sustancia de detección ajustando la altura de las microestructuras en la trayectoria de flujo para que se encuentre dentro del intervalo adecuado (ver, por ejemplo, el Ejemplo 2-2 y el Ejemplo 2-4). Si la relación del número de átomos de oxígeno es baja, no se realiza una determinación con alta sensibilidad (Ejemplo Comparativo 2-1); mientras que si la relación del número de átomos de oxígeno es alta, se produjo una falsa detección (Ejemplo Comparativo 2-2).
[Ejemplos 2-13 a 2-24]
Las partículas a usar se cambiaron de partículas de látex coloreadas a partículas de látex fluorescentes (partículas de látex fluorescentes Micromer-F, material: poliestireno, fabricado por Corefront Corporation). Se obtuvo la tasa de dilución (tasa de dilución máxima permitida para la determinación de fluorescencia) a la que un lector de inmunocromato (C11787 fabricado por Hamamatsu Photonics KK) no puede leer la presencia o ausencia de una línea coloreada 10 minutos después del inicio de la prueba, en otras palabras, la tasa de dilución a la que la relación S/N es de 10 o menos. El diámetro de las microestructuras, la distancia más cercana entre las microestructuras y la altura de las microestructuras y la relación de aspecto se muestran en la Tabla 5. Los contenidos distintos a estos fueron los mismos que en los Ejemplos 2-1 a 2-12.
En la Tabla 5 se muestran los resultados de la evaluación de los soportes de membrana para un kit de prueba de muestras líquidas y kits de prueba de muestras líquidas obtenidos en los Ejemplos 2-13 a 2-24.
Figure imgf000022_0001
En la realización, en un método inmunocromatográfico que permite la confirmación visual de que se había detectado una sustancia objetivo se controla el número de átomos de oxígeno en una zona de detección para aumentar la intensidad de una señal en la zona de detección. De esta manera, se proporciona un kit de prueba de muestras líquidas que permite una determinación con alta sensibilidad.
Como el soporte de membrana para un kit de prueba se produce en masa en poco tiempo, la relación del número de átomos de oxígeno en la superficie tendía a ser alta y, por tanto, la cantidad de tratamiento superficial aplicada a un material era relativamente alta. La realización en la que, por ejemplo, se especifica una relación del número de átomos de oxígeno, tiene un efecto: la posibilidad de hacer reaccionar un marcador con una sustancia de detección cuando se desarrolla una solución que no contiene la sustancia objetivo es baja, en otras palabras, la posibilidad de una detección incorrecta es baja. Por ejemplo, en la realización en la que se aumenta la relación del número de átomos de oxígeno en la superficie de una zona de detección, aumentando de este modo una cantidad de un anticuerpo que se inmovilizará en la zona de detección, puede detectarse con alta sensibilidad una sustancia de detección.
El kit de prueba de muestras líquidas de acuerdo con la realización permite la implementación de una prueba altamente sensible en un tiempo corto y, por tanto, es útil como reactivo POCT desechable.
Listado de signos de referencia
2: Trayectoria de flujo, 3: Soporte de membrana que tiene microestructuras provistas en el mismo, 3x: Zona de gota, 3y: Zona de detección (Sección de detección), 4,4a,4b,4c,4d: Longitud representativa de la superficie inferior de una parte convexa (diámetro de la parte inferior convexa), 5: Distancia más cercana entre microestructuras, 6,6a,6b,6c,6d: Altura de las partes convexas, 7,7a,7b,7c,7d: Microestructura, 8,8a,8b,8c,8d: Parte convexa, 9: Parte plana, 10,10a,10b,10c,10d: Superficie inferior de partes convexas, Protección 14, 18: Kit de prueba para muestra líquida, 18a: Caja, 18b: Primera abertura, 18c: Segunda abertura, 19: Centro de la parte convexa, 20: Línea lineal que pasa por el centro de la parte convexa, 20d: Longitud de la línea lineal que pasa por el centro de la parte convexa, d: Dirección del flujo de la muestra líquida (dirección de transporte)

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Un soporte de membrana (3) que comprende
una trayectoria de flujo (2) y una zona de detección (3y), y
una microestructura (7) constituida por partes convexas (8) dispuestas en la parte inferior de la trayectoria de flujo (2),
caracterizado porque
una rugosidad superficial media (Ra) de la superficie de las partes convexas (8) de la microestructura (7) es de 0,005 a 1 pm y
una altura (6) de las partes convexas (8) que constituyen la microestructura (7) en la trayectoria de flujo (2) es de 5 a 1000 pm.
2. Un soporte de membrana (3) de acuerdo con la reivindicación 1, en el que por lo menos hay átomos de oxígeno en una superficie de la zona de detección (3yy), y una relación del número de átomos de oxígeno con respecto al número total de átomos de carbono, átomos de nitrógeno y átomos de oxígeno (número de átomos de oxígeno/(número de átomos de carbono número de átomos de nitrógeno número de átomos de oxígeno)) es de 0,01 a 0,50.
3. El soporte de membrana (3) de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el diámetro inferior (4) de las partes convexas (8) que constituyen la microestructura (7) es de 5 a 1000 pm.
4. El soporte de membrana (3) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la distancia más cercana (5) entre las partes convexas (8) que constituyen la microestructura (7) en la trayectoria de flujo (2) es de 0 a 500 pm.
5. El soporte de membrana (3) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la relación de aspecto de las partes convexas (8) que constituyen la microestructura (7) es de 0,1 a 10, la relación de aspecto siendo la relación de la altura (6) de las partes convexas (8) con su diámetro inferior (4).
6. El uso del soporte de membrana (3) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en un kit de detección (18) para detectar una sustancia objetivo en una muestra líquida.
7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la zona de detección (3y) produce un cambio de color cuando se detecta la sustancia objetivo.
8. Un kit de prueba de muestras líquidas (18) que tiene el soporte de membrana (3) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
9. El kit de prueba de muestras líquidas (18) de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende además una sustancia de detección inmovilizada en la zona de detección (3y) capaz de producir un cambio de color tras unirse a una sustancia objetivo.
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