ES2904366T3

ES2904366T3 - Derivados de imidazopirazina, procedimiento para la preparación de los mismos, y sus usos como luciferinas

Info

Publication number: ES2904366T3
Application number: ES18722450T
Authority: ES
Inventors: Yves-Louis Janin; Eloi Paul Coutant; Vincent Hervin; Glwadys Gagnot; Yves Jacob; Sophie Goyard; Thierry Rose
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Institut Pasteur de Lille
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Institut Pasteur de Lille
Priority date: 2017-04-28
Filing date: 2018-04-30
Publication date: 2022-04-04
Anticipated expiration: 2038-04-30
Also published as: DK3615516T3; EP3964501A1; EP3615516A1; JP2024009933A; EP3615516B1; US20200129644A1; US11938199B2; JP2020521724A; WO2018197727A1; JP7366752B2; EP3395803A1; CA3061245A1

Abstract

Uso de un compuesto de la siguiente fórmula (I) en presencia de una solución que comprende un ácido fuerte para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo; **(Ver fórmula)** en donde: R1 representa H o un grupo seleccionado de grupos alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7, arilo C6-C10, aralquilo y heteroarilo de C5-C10 miembros, estando dichos grupos alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7, arilo C6-C10, aralquilo y heteroarilo de C5-C10 miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y1; R2 representa un grupo seleccionado de grupos arilo C6-C10 y heteroarilo de C5-C10 miembros, estando dichos grupos arilo C6-C10 y heteroarilo de C5-C10 miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y2; o R1 y R2 juntos forman con los dos átomos de carbono a los que están unidos respectivamente un grupo cicloalqueno C5-C7, un grupo heterocicloalqueno C4-C7, o un areno C6-C10, estando dichos grupo cicloalqueno C5-C7 y grupos heterocicloalqueno C4-C7 condensados con un areno C6-C10, estando dichos grupo cicloalqueno C5-C7, grupo heterocicloalqueno C4-C7, areno C6-C10, grupo cicloalqueno C5-C7 y grupos heterocicloalqueno C4-C7 opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y12; R3 representa H, un alquilo C1-C6, un grupo aralquilo, un grupo hetaralquilo o un grupo heterocicloalquil-CH2-, estando dicho alquilo C1-C6, grupo aralquilo, grupo hetaralquilo y grupo heterocicloalquil-CH2- opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y3; R4 representa H o un grupo seleccionado de grupos alquilo C1-C6 y cicloalquilo C3-C7, estando dichos grupos alquilo C1-C6 y cicloalquilo C3-C7 opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y4; R5 representa un grupo -C(=O)Ra o un grupo -C(=O)ORa, estando dichos grupo C(=O)Ra y grupo -C(=O)ORa opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y5; Ra representa H, un grupo alquilo C1-C6, un grupo cicloalquilo C3-C7, un arilo C6-C10, o un grupo aralquilo, estando dichos grupo alquilo C1-C6, grupo cicloalquilo C3-C7, arilo C6-C10 y grupo aralquilo opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ya; Z representa un arilo C6-C10, grupos heteroarilo de C5-C10 miembros, un alquilo C1-C6, un cicloalquilo C3-C7, un heterocicloalquilo C4-C7, seleccionándose Z en particular de fenilo, furanilo, tiofenilo, piridinilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, ciclopentilo, ciclohexilo, tetrahidrofuranilo y dioxolanilo, estando dicho arilo C6-C10, grupos heteroarilo de C5-C10 miembros, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C7 y heterocicloalquilo C4-C7 opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Yz; seleccionándose dichos grupos Y1, Y2, Y12, Y3, Y4, Y5, Ya e Yz cada uno independientemente de: - un alquilo C1-C6; - un cicloalquilo C3-C7; - un arilo C6-C10; - un grupo heteroarilo de C5-C10 miembros; - un halógeno, en particular -F; - un grupo -CF3; - un grupo -CN; - un grupo -ORi; - un grupo -OSO3H; - un grupo -NRiRii; - un grupo guanidinilo; - un grupo -C(=O)ORa, siendo Ra tal como se definió anteriormente; Ri y Rii cada uno representan independientemente H, un grupo alquilo C1-C6, un grupo cicloalquilo C3-C10, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc; o junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un grupo heterocicloalquilo C4-C7.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de imidazopirazina, procedimiento para la preparación de los mismos, y sus usos como luciferinas La presente invención pertenece al campo de la bioluminiscencia en biología y/o medicina. En particular, la invención proporciona derivados de imidazopirazina, procedimientos para la preparación de los mismos, y sus usos como luciferinas.

En el pasado reciente, los sistemas indicadores bioluminiscentes, hechos de una luciferasa/fotoproteína expresada y una luciferina, se han convertido en herramientas importantes en muchos campos de investigación, tal como estudios biológicos y bioquímicos, formación de imágenes de células completas o animales, diagnósticos, así como en muchos tipos de cribados de posibles actividades biológicas de moléculas pequeñas. Se han utilizado pocos tipos de luciferasas como indicadores bioluminiscentes para tales ensayos. Las luciferasas de luciérnaga relativamente grandes (es decir, 65 kDa) que requieren una luciferina, oxígeno y ATP se adaptaron inicialmente y, más tarde, luciferasas más pequeñas (es decir, 19-35 kDa) de origen marino a menudo se encontraron más apropiadas ya que son independientes de ATP y más pequeñas. Muchos tipos de luciferasas y fotoproteínas que se unen a calcio que se encuentran en un conjunto muy diverso de criaturas marinas en realidad usan luciferinas con un sistema de anillo de imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona. La coelenterazina (1) es el sustrato natural de las fotoproteínas de Cnidaria Aequorea, Mitrocoma, Obelia, y Periphylla, o la fotoproteína de Clytia hidroide. Además, también es el sustrato natural de las luciferasas del pensamiento marino Renilla, el camarón Oplophorus, y los copépodos planctónicos Gaussia y Metridia. Finalmente, la luciferina de Vargula/vargulina (2) es el sustrato de las luciferasas de los ostrácodos Conchoecia y Vargula o el pez Porichthys.

Numerosas investigaciones se han centrado en la mejora de dichos sistemas bioluminiscentes. El uso de análogos de luciferina tal como los compuestos 4-9 en combinación con diversas formas de luciferasas de Renilla condujeron a señales con cambio de color púrpura y/o una más intensa.

Otro logro provino del uso de luciferasas artificiales hechas de fragmentos catalíticos modificados de luciferasa de Oplophorus en combinación con una variedad de sustratos no naturales. Se obtuvieron así señales fuertemente mejoradas con furimazina (12).

Con muchos de estos sistemas de luciferina/luciferasa artificiales, se observaron mejoras en la intensidad de la señal de bioluminiscencia así como en su duración en comparación con el uso de las luciferasas de tipo natural correspondientes y su sustrato natural coelenterazina (1).

Sin embargo, existe la necesidad de sistemas bioluminiscentes que proporcionen una señal más fuerte (con una relación señal/ruido más alta) durante más tiempo. De hecho, el uso de tales sistemas como indicadores en cribados de alto rendimiento requiere una fuerte señal de bioluminiscencia durante al menos 30 minutos para permitir retrasos inherentes a los procedimientos robóticos. Además, cuanto más fuerte sea la señal de un ensayo dado, mayor será la posibilidad de miniaturización de este ensayo, lo cual es deseable cuando se considera el coste involucrado en la realización de grandes campañas de cribado de alto rendimiento. En la formación de imágenes de células completas, también es deseable en muchos casos una alta intensidad bioluminiscente inicial así como una alta relación de "señal bioluminiscente" sobre "ruido quimioluminiscente". Por ejemplo, tal intensidad de señal puede permitir el diseño de herramientas biológicas muy diversas basadas en el uso de una luciferasa pequeña (hasta ahora 19 kDa para las más pequeñas), una luciferina y un microscopio común en lugar de las muchas herramientas basadas en la monitorización de una señal de fluorescencia, que requiere el uso de un fluoróforo, tal como la proteína verde fluorescente más grande (27 kDa), y un microscopio con un dispositivo para iluminar este fluoróforo en una longitud de onda dada para detectar una señal en la longitud de onda emisora del fluoróforo.

Además, las condiciones de almacenamiento recomendadas de estas luciferinas (en solución o como polvo seco) requieren el uso de temperaturas muy bajas (-80°C) ya que se ha notificado que las soluciones de dichos compuestos son muy inestables durante la noche a temperatura ambiente (documento US 20140302539).

Levi etal. (JACS 2007, 129, 11900-11901) han descrito el uso de 3-acetiloxi-4,8-dibencil-6-fenil-imidazo[1,2-a]pirazina para la detección de luciferasa en una célula. Sin embargo, este compuesto no se utiliza en dicho documento junto con un ácido fuerte.

Por consiguiente, es un objeto de la presente invención proporcionar una alternativa a las luciferinas convencionales, que conduzcan a señales de bioluminiscencia sustancialmente mejores en términos de intensidad, relación señal/ruido y/o duración.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar precursores estables de luciferinas, almacenables en condiciones convenientes antes de su uso.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un método fácil, versátil y fiable de desprotección de estos precursores estables de luciferinas. En particular, un método de desprotección tan fácil no requeriría llevarse a cabo bajo gas inerte.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un procedimiento versátil y fiable de preparación de dichas luciferinas y precursores de luciferina, que dan acceso al espacio químico inexplorado que rodea a estos compuestos y/o permiten la preparación y purificación a escala de kilo.

Los inventores han demostrado por primera vez que los compuestos de fórmula (I) pueden desprotegerse fácilmente poniéndolos en contacto con un ácido fuerte.

Además, los inventores han demostrado por primera vez que una selección de derivados de imidazopirazina produce excelentes señales bioluminiscentes.

En particular, los inventores han descubierto que los compuestos de fórmula (III) proporcionan señales bioluminiscentes notablemente mejoradas, en términos de intensidad, relación señal/ruido y/o duración, en comparación con sustratos previamente notificados tal como la furimazina (12).

Por tanto, en un aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de la siguiente fórmula (I) en presencia de una solución que comprende un ácido fuerte para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo;

en donde:

R¹representa H o un grupo seleccionado de grupos alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, estando dichos grupos C¹-C⁶alquilo, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y¹;

R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, estando dichos grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y²;

o R¹y R²juntos forman con los dos átomos de carbono a los que están unidos respectivamente un grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, un grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, o un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷condensados con un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, areno C⁶-C¹⁰, grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y¹²;

R³representa H, un alquilo C¹-C⁶, un grupo aralquilo, un grupo hetaralquilo o un grupo heterocicloalquil-CH²-, estando dicho grupo alquilo C¹-C⁶, grupo aralquilo, grupo hetaralquilo y grupo heterocicloalquil-CH²- opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y³;

R⁴representa H o un grupo seleccionado de grupos alquilo C¹-C⁶y cicloalquilo C³-C⁷, estando dichos grupos alquilo C¹-C⁶y cicloalquilo C³-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y⁴;

R⁵representa un grupo -C(=O)Ra o un grupo -C(=O)ORa, estando dichos grupo C(=O)Ra y grupo -C(=O)ORa opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y⁵;

Ra representa H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C⁷, un arilo C⁶-C¹⁰, o un grupo aralquilo, estando dichos grupo alquilo C¹-C⁶, grupo cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰y grupo aralquilo opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ya;

Z representa un arilo C⁶-C¹⁰, grupos heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, un alquilo C¹-C⁶, un cicloalquilo C³-C⁷, un heterocicloalquilo C⁴-C⁷, seleccionándose Z en particular de fenilo, furanilo, tiofenilo, piridinilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, ciclopentilo, ciclohexilo, tetrahidrofuranilo y dioxolanilo, estando dicho arilo C⁶-C¹⁰, grupos heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷y heterocicloalquilo C⁴-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Yz;

seleccionándose dichos grupos Y¹, Y², Y¹², Y³, Y⁴, Y⁵, Ya e Yz cada uno independientemente de:

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un arilo C⁶-C¹⁰;

- un grupo heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros;

- un halógeno, en particular -F;

- un grupo -CF³;

- un grupo -CN;

- un grupo -ORi;

- un grupo -OSO³H;

- un grupo -NRiRii;

- un grupo guanidinilo;

- un grupo -C(=O)ORa, siendo Ra como se definió anteriormente;

Ri y Rii cada uno representa independientemente H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc; o forma junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos un grupo heterocicloalquilo C⁴-C⁷.

La presencia del ácido fuerte permite la obtención del correspondiente compuesto desprotegido (después de la eliminación del resto R⁵), que es una luciferina, es decir, en el marco de la presente invención una imidazopirazinona capaz de emitir fotones en condiciones básicas y/o en presencia de una proteína luminógena, en particular una enzima adecuada denominada luciferasa.

Dicha luciferina, que puede estar en presencia del ácido fuerte, puede usarse diluida en un medio tamponado, p. ej. que comprende ácido 2-(A/-morfolin)etanosulfónico (MES), tris(hidroximetil)aminometano (TRIS), ácido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazinetanosulfónico (HEPES) y/o solución salina tamponada con fosfato (PBS), preferiblemente que conduzca a un pH de entre 6 y 9, más preferiblemente que conduzca a un pH de entre 7 y 8, para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo.

En una realización particular, el ácido fuerte es ácido clorhídrico.

En una realización particular, la solución que comprende un ácido fuerte es una solución de ácido clorhídrico etanoica. En una realización particular, la fracción volumétrica de ácido clorhídrico (37% en agua) en dicha solución es del 0,1 al 10%, en particular aproximadamente el 1%.

Una vez realizada la desprotección, el compuesto desprotegido correspondiente en presencia de la solución que comprende el ácido fuerte puede usarse directamente en medios tamponados conocidos por el experto en la técnica, sin necesidad de neutralización antes de dicho uso en medios tamponados.

Por tanto, el compuesto de la siguiente fórmula (I) se pone en contacto en particular con un ácido fuerte antes de ser utilizado en un medio tamponado para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo.

En otros términos, el compuesto de la siguiente fórmula (I) puede usarse en presencia de una solución que comprende un ácido fuerte (que permite la desprotección de dicho compuesto de la siguiente fórmula (I)) para detectar y/o medir la actividad enzimática de un proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo, en particular después de la dilución del compuesto desprotegido en un medio tamponado (p. ej., MES, TRIS, HEPES, PBS) conduciendo preferiblemente a un pH de entre 6 y 9, conduciendo más preferiblemente a un pH de entre 7 y 8.

En una realización particular, R¹representa H.

En una realización particular, R⁴representa H.

En una realización particular, R⁵representa (C=O)Me.

En una realización particular, R³representa un grupo aralquilo o un grupo hetaralquilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente.

En una realización más particular, R3 representa un bencilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, en particular con al menos un halógeno, más particularmente F.

En una realización aún más particular, R³representa un bencilo, sustituido con al menos un halógeno, más particularmente F. En este caso, R3 puede representar un bencilo, sustituido con un halógeno, más particularmente F, o un bencilo, sustituido por dos halógenos que sean idénticos o diferentes, más particularmente F y/o Cl, siendo la sustitución por ejemplo en 2,3; 2,5; 2,6 o 3,5.

Por ejemplo, R3 se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización particular, R²representa un fenilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, representando R²en particular un fenilo opcionalmente sustituido con al menos un grupo Y²seleccionado de:

- un alquilo C¹-C⁶, en particular un metilo;

- un halógeno, en particular F;

- un grupo -ORi;

representando H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc, representando Ri en particular H, Me o Bn, representando Ri más particularmente H;

seleccionándose R²más particularmente del grupo que consiste en:

En una realización particular, Z se selecciona de fenilo, furanilo, tiofenilo y está opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente,

representando Z en particular un fenilo, furanilo o tiofenilo, opcionalmente sustituido con al menos un grupo Yz seleccionado de:

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno, en particular F o Cl;

- un grupo -CF³;

- un grupo -ORi, en particular un grupo -OMe;

seleccionándose Z más particularmente del grupo que consiste en:

Cabe señalar que la presente invención incluye la combinación de todas las realizaciones enumeradas anteriormente para R¹, R², R³, R⁴y/o Z.

En particular, R³representa un bencilo, opcionalmente sustituido con al menos un halógeno, más particularmente F; y Z representa un furanilo o tiofenilo, opcionalmente sustituido con al menos un Yz tal como se definió anteriormente. En una realización particular, la presente invención se refiere al uso, tal como se definió anteriormente, de un compuesto de la siguiente fórmula (Ia):

en donde:

R²se selecciona del grupo que consiste en:

R³representa un grupo aralquilo, en particular un bencilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, en particular con al menos un halógeno, más particularmente F, o un grupo hetaralquilo;

R⁵es tal como se definió anteriormente;

Z se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización particular, la proteína luminógena es una luciferasa derivada de luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

En una realización particular, la presente invención se refiere al uso, tal como se definió anteriormente, de un compuesto de la siguiente fórmula (IV) tal como se define a continuación.

La presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente para su uso, después de ponerlo en contacto con una solución que comprende un ácido fuerte, en un método in vivo para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena.

La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente para la implementación de un kit que comprende dicho compuesto de fórmula (I) y una solución que comprende un ácido fuerte.

La presente invención también se refiere a un kit que comprende:

i) Un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente; y

ii) Una solución que comprende un ácido fuerte.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (I) y la solución que comprende un ácido fuerte están en recipientes separados.

En una realización particular, el kit tal como se definió anteriormente comprende además un compuesto seleccionado del grupo que consiste en una proteína luminógena, un polinucleótido que codifica para la proteína luminógena, un vector recombinante que comprende el polinucleótido, y un transformante que comprende el polinucleótido.

En una realización más particular de la invención, la proteína luminógena se elige de:

- las luciferasas y fotoproteínas que se encuentran en organismos marinos tales como Cnidaria Aequorea, Mitrocoma, Obelia, y Periphylla; Clytia hidroide; pensamiento marino Renilla, camarón Oplophorus, copépodos planctónicos Gaussia y Metridia; ostrácodos Conchoecia y Vargula; el pez Porichthys; recogiéndose estas luciferasas y fotoproteínas en particular de fuentes naturales o produciéndose mediante ingeniería genética;

- cualquier mutante en el que la secuencia de aminoácidos esté mutada a partir de la secuencia natural de las luciferasas y fotoproteínas tal como se definió anteriormente mediante tecnología de recombinación genética; - un dominio que cataliza la luminiscencia de las luciferasas y fotoproteínas nativas tal como se definió anteriormente o sus proteínas mutadas, en particular la proteína de 19 kDa de luciferasa de Oplophorus (acceso de GenBank BAB 13776, 196 aminoácidos) o sus proteínas mutadas.

Estas proteínas luminógenas y sus proteínas mutadas pueden producirse mediante métodos bien conocidos por el experto en la técnica.

Alternativamente, algunos de ellos pueden estar disponibles comercialmente en JNC Corporation (Cosmo Bio), Wako Pure Chemicals Industries, Promega Corporation, Prolume, etc.

En particular, la proteína luminógena corresponde a un dominio catalítico de luciferasa optimizado (en términos de secuencia, producción, estabilidad, así como propiedades de bioluminiscencia) (nanoKAZ, 19kDa) de la luciferasa derivada de Oplophorus. Esta optimización puede realizarse mediante técnicas bien conocidas por el experto en la técnica.

En una realización incluso más particular, la proteína luminógena es una luciferasa de Oplophorus, en particular la luciferasa nanoKAZ (referencia de GenBank NCBI: AB823628.1).

En particular, la presente invención se refiere a un kit que comprende:

i) Un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente;

ii) Una solución que comprende un ácido fuerte; y

iii) Un medio tamponado.

La presente invención también se refiere al kit tal como se definió anteriormente, como una herramienta de diagnóstico in vitro o ex vivo .

La presente invención también se refiere a un kit tal como se definió anteriormente para su uso como herramienta de diagnóstico in vivo.

La presente invención también se refiere a un método para producir luminiscencia, el cual comprende

- poner en contacto un compuesto de fórmula (I) con una solución que comprende un ácido fuerte para obtener un compuesto desprotegido;

- poner en contacto dicho compuesto desprotegido con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

- poner en contacto un compuesto de fórmula (I) con una solución que comprende un ácido fuerte para obtener una solución concentrada que comprende un compuesto desprotegido;

- diluir dicha solución concentrada que comprende un compuesto desprotegido en un medio tamponado para obtener una solución diluida que comprende dicho compuesto desprotegido;

- poner en contacto dicha solución diluida que comprende dicho compuesto desprotegido con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

Dicha solución concentrada comprende el compuesto desprotegido y en particular comprende además dicho ácido fuerte.

La presente invención también se refiere a un método para detectar luminiscencia en una muestra que comprende - poner en contacto un compuesto de fórmula (I) con una solución que comprende un ácido fuerte para obtener un compuesto desprotegido;

- poner en contacto una muestra con dicho compuesto desprotegido;

- opcionalmente poner en contacto la muestra con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ, si no está presente en la muestra; y

- detectar luminiscencia.

La presente invención también se refiere a un método para detectar luminiscencia en una muestra que comprende - poner en contacto un compuesto de fórmula (I) con una solución que comprende un ácido fuerte para obtener una solución concentrada que comprende un compuesto desprotegido;

- poner en contacto una muestra con dicha solución diluida que comprende dicho compuesto desprotegido; - opcionalmente poner en contacto la muestra con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ, si no está presente en la muestra; y

- detectar luminiscencia.

En una realización particular, la muestra contiene células vivas.

En otra realización particular, la muestra contiene una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

La presente invención también se refiere a un método para detectar luminiscencia en un animal transgénico que expresa una proteína luminógena, que comprende:

- administrar dicho compuesto desprotegido a dicho animal; y

- detectar luminiscencia.

La presente invención también se refiere a un método para detectar luminiscencia en un animal transgénico que expresa una proteína luminógena o un animal que hospeda un organismo transgénico que expresa una proteína luminógena, que comprende:

- administrar dicha solución diluida que comprende dicho compuesto desprotegido a dicho animal; y detectar luminiscencia. La presente invención también se refiere a un método para someter a ensayo la actividad de una secuencia asociada con la regulación del promotor, el cual comprende

- utilizar un polinucleótido que codifica para una proteína luminógena como gen indicador y, como sustrato de luminiscencia, un compuesto desprotegido tal como se definió anteriormente.

La presente invención también se refiere a un método para someter a ensayo la actividad de una secuencia asociada con la regulación del promotor, el cual comprende

- utilizar un polinucleótido que codifica para una proteína luminógena como gen indicador y, como sustrato de luminiscencia, un compuesto desprotegido dentro de la solución diluida tal como se definió anteriormente. En lo anterior, el compuesto de fórmula (I) es en particular de fórmula (IV) o de fórmula (II) tal como se define a continuación.

En los métodos definidos anteriormente, el compuesto de fórmula (I) se encuentra en particular, antes de su uso, dentro de un kit tal como se definió anteriormente. Por tanto, los métodos tal como se definieron anteriormente que enumeran un compuesto de fórmula (I), un ácido fuerte y opcionalmente un medio tamponado pueden entenderse como métodos en donde se usan las diferentes partes de los kits mencionados anteriormente.

La presente invención también se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (II):

R¹representa H o un grupo seleccionado de grupos C¹-C⁶alquilo, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, estando dichos grupos C¹-C⁶alquilo, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y¹;

o R¹y R²juntos forman con los dos átomos de carbono a los que están unidos respectivamente un grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, un grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, o un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷condensados con un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, areno C⁶-C¹⁰, grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y ¹²;

R³representa H, un alquilo C¹-C⁶, un grupo aralquilo, un grupo hetaralquilo o un grupo heterocicloalquil-CH²-, estando dicho alquilo C¹-C⁶, grupo aralquilo, grupo hetaralquilo y grupo heterocicloalquil-CH²- opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y³;

R⁵representa un grupo -C(=O)Ra o un grupo-C(=O)ORa, estando dichos grupo C(=O)Ra grupo y grupo -C(=O)ORa opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y⁵;

Z representa un arilo C⁶-C¹⁰, grupos heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, un alquilo C¹-C⁶, un cicloalquilo C³-C⁷, un heterocicloalquilo C⁴-C⁷, seleccionándose Z en particular de fenilo, furanilo, tiofenilo, piridinilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, ciclopentilo, ciclohexilo, tetrahidrofuranilo y dioxolanilo, estando dichos arilo C⁶-C¹⁰, grupos heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷y heterocicloalquilo C⁴-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Yz;

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un arilo C⁶-C¹⁰;

- un grupo heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros;

- un halógeno, en particular -F;

- un grupo -CF³;

- un grupo -CN;

- un grupo -ORi;

- un grupo -OSO³H;

- un grupo -NRiRn;

- un grupo guanidinilo;

- un grupo -C(=O)ORa, siendo Ra tal como se definió anteriormente;

Ri y Rii cada uno representan independientemente H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc; o junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un grupo heterocicloalquilo C⁴-C⁷;

con la condición de que cuando R¹y R⁴representan H, entonces:

- R²es distinto de fenilo no sustituido y 4-hidroxi-fenilo, o

- R³es distinto de bencilo no sustituido, o

- Z es distinto de fenilo no sustituido, 4-hidroxi-fenilo y de furano no sustituido.

En una realización particular, la presente invención se refiere a compuestos con la fórmula general II y los siguientes nombres:

acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(furan-3-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-((1,3-dioxolan-2-il)metil)-8-bencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(4-(benciloxi)bencil)-6-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-metil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(furan-3-ilmetil)-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(tiofen-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(4-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(piridin-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((tetrahidrofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2,8-dibencil-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-bencil-6-fenil-8-((tetrahidrofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-6-fenil-8-((tetrahidrofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 4-(3-acetoxi-2-(4-acetoxibencil)-8-bencilimidazo[1,2-a]pirazin-6-il)fenilo acetato de 2,12-dibencil-5H-cromeno[4,3-e]imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(2,6-difluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((5-(trifluorometil)furan-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2,8-dibencil-6-(2,6-difluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(2-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(3-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(4-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-(4-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-(4-metoxifenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-isopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(3-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(4-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-6-fenil-8-(piridin-3-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(4-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-(p-tolil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-bromobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(4-clorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-(m-tolil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-ciclopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-ciclopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-(3-metoxifenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-fluorobencil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-(3-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(2-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(sec-butil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((3-metiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencilimidazo[1,2-a]quinoxalin-1-ilo

acetato de 2,4-dibencilimidazo[1,2-a]quinoxalin-1-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(1 -feniletil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetiloxazol-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(2,4-difluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(ciclohexilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(ciclopentilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(biciclo[2.2.1]heptan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-bencil-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(4-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(4-hidroxifenil)-2-(3-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2,8-dibencil-5-metil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(4-hidroxibencil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-clorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-bencil-8-(2-clorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-(3-fluoro-4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(2-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-fenetil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-8-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-bencil-8-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-8-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2-clorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3-clorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(4-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2,12-dibencil-6-fluorobenzo[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3-ilo

acetato de 12-bencil-6-fluoro-2-(furan-2-ilmetil)benzo[f]imidazo[1,2-a]quinoxalin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((3-metilisoxazol-5-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((3-etilisoxazol-5-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(2,3-difluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-6-fenil-8-(2-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-6-fenil-8-(3-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-6-fenil-8-(2,3,5-trifluorobencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-6-fenil-8-(2,3,5-trifluorobencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((5-propilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((4,5,6,7-tetrahidrobenzofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((4-etil-5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((4-etil-5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-6-fenil-2-((4,5,6,7-tetrahidrobenzofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((5-isopropil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(1-(furan-2-il)etil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(4-hidroxibencil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(4-hidroxibencil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-isopropil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(3-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(4-hidroxibencil)-6-(3-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo.

La presente descripción también se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (III):

en donde:

R¹representa H o un grupo seleccionado de grupos alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, estando dichos grupos alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷, arilo C⁶-C¹⁰, aralquilo y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y¹;

R³representa un grupo aralquilo, estando dicho grupo aralquilo opcionalmente sustituido con al menos un grupo Y³; R⁴representa H o un grupo seleccionado de alquilo C¹-C⁶y grupos cicloalquilo C³-C⁷, estando dichos alquilo C¹-C⁶y grupos cicloalquilo C³-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y⁴;

Z representa un grupo de la siguiente fórmula:

R, R', R" y R'" representan cada uno independientemente H o un grupo seleccionado de:

- un grupo alquilo C¹-C⁶;

- un grupo cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno;

- un grupo -ORi;

- un grupo -CF3;

X representa O o S;

seleccionándose dichos grupos Yi, Y², Y³e Y⁴, cada uno independientemente de:

- un grupo alquilo C¹-C⁶;

- un grupo cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno;

- un grupo -ORii;

Ri y Rii cada uno representa independientemente H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰o un grupo aralquilo;

con la condición de que:

- cuando Z=Z1:

o al menos uno de R, R' y R" no representa H; o

o cuando R, R' y R" representan H, entonces R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²en particular un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F;

- cuando Z=Z2:

o al menos uno de R, R', R" y R''' no representa H; o

o cuando R, R', R" y R'" representan H; entonces R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C6-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²en particular un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F; o

o cuando R, R' y R'" representan H y R" representa un grupo alquilo C¹-C⁶o un grupo -ORí; entonces R²no representa un grupo 4-HO-Ph-, representando R²en particular un grupo fenilo o un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²más particularmente un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F.

En una realización particular, la presente descripción se refiere a un compuesto de fórmula (III) tal como se definió anteriormente, en donde:

❖ Z representa un grupo Z2 y R³representa un grupo aralquilo, estando dicho grupo aralquilo sustituido con al menos un grupo Y³, con la condición de que:

o al menos uno de R, R', R" y R''' no representa H; o

o cuando R, R ', R" y R'" representan H; entonces R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C6-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²en particular un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo -F; o

o cuando R, R' y R'" representan H y R" representa un grupo alquilo C¹-C⁶o un grupo -ORí; entonces R²no representa un grupo 4-HO-Ph-, representando R²en particular un grupo fenilo o un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²más particularmente un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F;

o

Z representa un grupo de la siguiente fórmula:

Siendo R y R' en particular distintos de H.

En una realización más particular, la presente descripción se refiere a un compuesto de fórmula (III) tal como se definió anteriormente, en donde:

❖ Z representa un grupo Z2 y R3 representa un grupo aralquilo, estando dicho grupo aralquilo sustituido con al menos un grupo -F,

o

❖ Z representa un grupo Z1, siendo R y R' en particular distintos de H.

❖ R³representa un grupo aralquilo, estando dicho grupo aralquilo sustituido con al menos un grupo Y³, con la condición de que cuando Z=Z2:

o al menos uno de R, R', R" y R''' no representa H; o

o cuando R, R', R" y R'" representan H; entonces R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C6-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²en particular un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo -F; o

o cuando R, R' y R"' representan H y R" representa un grupo alquilo C¹-C⁶o un grupo -ORi; entonces R²no representa un grupo 4-HO-Ph-, representando R²en particular un grupo fenilo o un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F, representando R²más particularmente un grupo 2-F-fenilo, 3-F-fenilo o 2,6-diF-fenilo; o R³representa un grupo seleccionado de grupos aralquilo C⁶-C¹⁰sustituidos con al menos un grupo halógeno, en particular -F;

o

❖ R²representa un grupo seleccionado de grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros, estando dichos grupos arilo C⁶-C¹⁰y heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y²;

o

❖ Z representa un grupo Z1, siendo R y R' en particular distintos de H.

En una realización particular, R¹representa H.

En una realización particular, R⁴representa H.

En una realización particular, R³representa un grupo bencilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, en particular con al menos un halógeno, más particularmente F.

En una realización incluso más particular, R3 representa un bencilo, sustituido con al menos un halógeno, más particularmente F. En este caso, R3 puede representar un bencilo, un halógeno sustituido, más particularmente F, o un bencilo, sustituido con dos halógenos que son iguales o diferentes, más particularmente F y/o Cl, siendo la sustitución, por ejemplo, en 2,3; 2,5; 2,6 o 3,5.

Por ejemplo, R3 se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización particular, R²representa un fenilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, representando R²en particular un fenilo opcionalmente sustituido con al menos un halógeno, en particular F; seleccionándose R²más particularmente del grupo que consiste en:

En una realización particular, Z se selecciona entre Z1 y Z2,

representando R, R', R" y R'" cada uno independientemente en particular H o un grupo seleccionado de:

- un grupo alquilo C¹-C⁶;

- un grupo cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno;

- un grupo -ORi;

- un grupo -CF³;

seleccionándose Z más particularmente del grupo que consiste en:

Cabe señalar que la presente descripción incluye la combinación de todas las realizaciones enumeradas anteriormente en el presente documento para R¹, R², R³, R⁴y/o Z.

En particular, R³representa un bencilo, opcionalmente sustituido con al menos un halógeno, más particularmente F; y Z representa un furanilo o tiofenilo, opcionalmente sustituido con al menos un Yz tal como se definió anteriormente. En una realización particular, el compuesto de fórmula (III) es un compuesto de la siguiente fórmula (IIIa):

en donde:

R²que se selecciona en p

R³que se selecciona en particular del grupo que consiste en:

Z se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización particular, la presente descripción se refiere a compuestos con la fórmula general IIIa y los siguientes nombres:

8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2.8- dibencil-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-6-(2,6-difluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-6-fenil-2-((5-(trifluorometil)furan-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2.8- dibencil-6-(2,6-difluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-6-(3-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((5-etiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-bencil-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-bencil-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(3-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(3-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(3-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2-clorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(3-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(3-fluorobencil)-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-bencil-8-(2,3-difluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-((4-etil-5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona

8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(3-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona.

La presente descripción también se refiere al uso de un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente como una herramienta de diagnóstico in vitro o ex vivo.

La presente descripción también se refiere a un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente para su uso como herramienta de diagnóstico in vivo.

La presente descripción también se refiere a un método para producir luminiscencia, que comprende poner en contacto un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

La presente descripción también se refiere a un método para detectar luminiscencia en una muestra que comprende - poner en contacto una muestra con un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente; - opcionalmente poner en contacto la muestra con una proteína luminógena, en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ, si no está presente en la muestra; y

- detectar luminiscencia.

En una realización particular, la muestra contiene células vivas.

En otra realización particular, la muestra contiene una proteína luminógena, en particular un luciferasa Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

La presente descripción también se refiere a un método para detectar luminiscencia en un animal transgénico que expresa una proteína luminógena, que comprende:

- administrar un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente a dicho animal; y - detectar luminiscencia.

La presente descripción también se refiere a un método para someter a ensayo la actividad de una secuencia asociada con la regulación del promotor, que comprende el uso de un polinucleótido que codifica para una proteína luminógena como gen indicador y, como sustrato de luminiscencia, un compuesto de fórmula (III) o (IIIa) tal como se definió anteriormente.

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (IV):

en donde:

R¹, R², R³, R⁴y Z son tal como se definen para la fórmula (III) o (IIIa).

R⁵es tal como se definió anteriormente.

Cabe señalar que la presente descripción incluye la combinación de todas las realizaciones enumeradas anteriormente en el presente documento para la fórmula (III) y/o (IIIa).

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (V):

en donde R¹, R², R³, R⁴y Z son tal como se definen para la fórmula (III) o (IIIa).

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (VI):

en donde:

Ri, R², R³, R⁴y Z son tal como se definen para la fórmula (III) o (Illa);

Rd representa un grupo seleccionado de alquilo C¹-C⁶, cicloalquilo C³-C⁷y aralquilo, en particular metilo, etilo o bencilo. Cabe señalar que la presente descripción incluye la combinación de todas las realizaciones enumeradas anteriormente en el presente documento para la fórmula (III) y/o (IIIa).

En una realización particular, la presente descripción se refiere a compuestos de fórmula general (IV) y los siguientes nombres:

acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(2,6-difluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((5-(trifluorometil)furan-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2,8-dibencil-6-(2,6-difluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-6-(3-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-bencil-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2-clorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-clorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(3-fluorobencil)-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-bencil-8-(2,3-difluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,5-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-6-fenil-8-(2,3,5-trifluorobencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(3,5-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-(2,6-difluorobencil)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((5-propilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((4-etil-5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((4-etil-5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-bencil-2-((5-isopropil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-((5-etil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-etil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(1 -(furan-2-il)etil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo

acetato de 8-(2,3-difluorobencil)-2-((5-isopropil-4-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(3-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo;

o compuestos con la fórmula general (V) y los siguientes nombres:

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-etilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoico

(3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)fenilalanina

ácido 2-((3-bencil-5-(2,6-difluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-(trifluorometil)furan-2-il)propanoico (3-bencil-5-(2,6-difluorofenil)pirazin-2-il)fenilalanina

ácido 2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-ciclopropilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-fluorofenil)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-etilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-(3-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(2-fluorofenil)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-etiltiofen-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoico (3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalanina

(3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalanina

ácido 2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico

ácido 2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoico

ácido 2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoico ácido 2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico

ácido 2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoico ácido 2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoico

ácido 3-(5-etilfuran-2-il)-2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoico ácido 2-((3-(2-clorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico ácido 2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoico ácido 3-(5-etilfuran-2-il)-2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoico ácido 3-(3-(2,6-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-(furan-2-ilmetil)propanoico ácido 3-(3-(3,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-(furan-2-ilmetil)propanoico ácido 3-(3-(3-clorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-(furan-2-ilmetil)propanoico

ácido 3-(3-(3-fluorobencil)-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)propanoico ácido 3-(3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-(furan-2-ilmetil)propanoico ácido 3-(3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)propanoico ácido 3-(3-(2,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-(furan-2-ilmetil)propanoico ácido 3-(3-(2,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)propanoico ácido 3-(3-(3,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 2-bencil-3-(3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)propanoico

ácido 2-bencil-3-(5-fenil-3-(2-(trifluorometil)bencil)pirazin-2-il)propanoico

ácido 2-bencil-3-(5-fenil-3-(3-(trifluorometil)bencil)pirazin-2-il)propanoico

ácido 2-bencil-3-(5-fenil-3-(2,3,5-trifluorobencil)pirazin-2-il)propanoico

ácido 3-(3-(2,6-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(3,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(furan-2-il)-2-((5-fenil-3-(2,3,5-trifluorobencil)pirazin-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(3,5-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,6-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((5-etilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(3-(2,6-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(4,5-dimetilfuran-2-il)-2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)metil)propanoico

ácido 3-(4,5-dimetilfuran-2-il)-2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)metil)propanoico

ácido 2-((3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-etil-5-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-etil-5-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-isopropil-4-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-etil-4-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-etil-4-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)butanoico (144)

ácido 2-((3-(2,3-difluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-isopropil-4-metilfuran-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-(3-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico

ácido 2-((3-bencil-5-(3-(hidroxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico.

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un compuesto de la siguiente fórmula (VII):

en donde:

R³representa un grupo aralquilo, estando dicho grupo aralquilo opcionalmente sustituido con al menos un grupo Y³; Y es un grupo saliente, en particular un halógeno, más particularmente un -Cl;

seleccionándose dichos grupos Yi, Y²e Y³cada uno independientemente de:

- un grupo alquilo C¹-C⁶;

- un grupo cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno;

- un grupo -ORm;

Rii representa H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰o un grupo aralquilo;

con la condición de que dicho compuesto no sea de una de las siguientes fórmulas:

En una realización particular, R¹representa H.

En una realización particular, R³representa un grupo bencilo, opcionalmente sustituido tal como se definió anteriormente, en particular con al menos un halógeno, más particularmente F,

seleccionándose R3 más particularmente del grupo que consiste en:

Definiciones

Los siguientes términos y expresiones contenidos en el presente documento se definen de la siguiente manera: Tal como se usa en el presente documento, un intervalo de valores en la forma "x-y" o "de x a y", o "x a y", incluye los números enteros x, y, y los números enteros entre ellos. Por ejemplo, las frases "1-6", o "de 1 a 6" o "1 a 6" pretenden incluir los números enteros 1,2, 3, 4, 5 y 6. Las realizaciones preferidas incluyen cada número entero individual en el intervalo, así como cualquier subcombinación de números enteros. Por ejemplo, los números enteros preferidos para "1 -6" pueden incluir 1,2, 3, 4, 5, 6, 1 -2, 1 -3, 1 -4, 1 -5, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, etc.

Tal como se usa en el presente documento, el término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isoamilo, neopentilo, 1 -etilpropilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo, hexilo, etc. El resto alquilo de los grupos que contienen alquilo, tal como los grupos aralquilo u O-alquilo, tiene el mismo significado que el alquilo definido anteriormente. Los grupos alquilo inferior, que se prefieren, son grupos alquilo tal como se definieron anteriormente que contienen de 1 a 4 carbonos. Una designación tal como "alquilo C1-C4" se refiere a un radical alquilo que contiene de 1 a 4 átomos de carbono.

Tal como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillo de alquilo mono o bicíclico saturado o parcialmente saturado que contiene de 3 a 7 átomos de carbono. Una designación tal como "cicloalquilo C⁵-C⁶" se refiere a un radical cicloalquilo que contiene de 5 a 6 átomos de carbono en el anillo. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen grupos tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, pinenilo y adamantanilo. El resto cicloalquilo de grupos que contienen cicloalquilo, tal como grupos O-cicloalquilo, tiene el mismo significado que el alquilo definido anteriormente.

Tal como se usa en el presente documento, el término "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático de hidrocarburo mono o bicíclico, sustituido o no sustituido, que tiene de 6 a 10 átomos de carbono en el anillo. Los ejemplos incluyen fenilo y naftilo. Los grupos arilo preferidos incluyen grupos fenilo y naftilo sustituidos o no sustituidos. Se incluyen dentro de la definición de "arilo" los sistemas de anillos condensados, que incluyen, por ejemplo, sistemas de anillos en los que un anillo aromático se condensa con un anillo de cicloalquilo. Los ejemplos de tales sistemas de anillos condensados incluyen, por ejemplo, indano, indeno y tetrahidronaftaleno.

Tal como se usa en el presente documento, el término "aralquilo" se refiere a un grupo arilalquilo de fórmula Ar-alquilo-, en donde "arilo" y "alquilo" son tal como se definieron anteriormente, siendo Ar en particular Ph, siendo alquilo en particular Me(-CH²-).

Tal como se usa en el presente documento, el término "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático que contiene de 5 a 10 átomos de carbono en el anillo en el que uno o más átomos de carbono en el anillo están reemplazados por al menos un heteroátomo tal como -O-, -N- o -S -. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, oxatiolilo, oxadiazolilo, triazolilo, oxatriazolilo, furazanilo, tetrazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, indolilo, isoindolilo, indazolilo, benzofuranilo, isobenzofuranilo, purinilo, quinazolinilo, quinolilo, isoquinolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, benzotiofenilo, tianaftenilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, cinolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo y quinoxalinilo. Dentro de la definición de "heteroarilo" se incluyen los sistemas de anillos condensados, que incluyen, por ejemplo, sistemas de anillos en los que un anillo aromático está condensado con un anillo de heterocicloalquilo. Los ejemplos de tales sistemas de anillos condensados incluyen, por ejemplo, ftalamida, anhídrido ftálico, indolina, isoindolina, tetrahidroisoquinolina, cromano, isocromano, cromeno e isocromeno.

Tal como se usa en el presente documento, el término "hetaralquilo" se refiere a un grupo heteroarilalquilo de fórmula Heteroaril-alquilo-, en donde "heteroarilo" y "alquilo" son tal como se definieron anteriormente, siendo alquilo en particular Me(-CH²-).

Tal como se usa en el presente documento, el término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que, dentro del alcance del juicio médico sensato, son adecuados para el contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin una excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otras complicaciones problemáticas acordes con una relación beneficio/riesgo razonable.

Tal como se usa en el presente documento, el término "proteínas luminógenas" se refiere a luciferasas y fotoproteínas que usan luciferinas.

Por "ácido fuerte" se entiende un ácido que se ioniza completamente en solución acuosa al perder un protón.

Por "grupo saliente" se entiende un nucleófugo que retiene el par solitario de su enlace anterior con otra especie, en particular en una reacción de sustitución nucleófila. El grupo saliente se elige, por ejemplo, del grupo que consiste en halógenos, en particular -I, -Br, -Cl y -F, y triflato -OS(O2)CF3.

Todos los demás términos usados en la descripción de la presente invención tienen sus significados tal como se conoce bien en la técnica.

En otro aspecto, la presente invención está dirigida a sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos anteriormente. Tal como se usa en el presente documento, "sales farmacéuticamente aceptables" incluye sales de compuestos de la presente invención derivadas de la combinación de tales compuestos con ácido no tóxico.

Las sales de adición de ácido incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, nítrico y fosfórico, así como ácidos orgánicos tales como ácido acético, cítrico, propiónico, tartárico, glutámico, salicílico, oxálico, metanosulfónico, para-toluensulfónico, succínico y benzoico, y ácidos orgánicos e inorgánicos relacionados.

Además de las sales farmacéuticamente aceptables, en la invención se incluyen otras sales. Pueden servir como intermedios en la purificación de los compuestos, en la preparación de otras sales, o en la identificación y caracterización de los compuestos o intermedios.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención también pueden existir como diversos solvatos, tales como con agua, metanol, etanol, dimetilformamida, acetato de etilo y similares. También pueden prepararse mezclas de tales solvatos. La fuente de tal solvato puede ser del disolvente de cristalización, inherente al disolvente de preparación o cristalización, o accidental a tal disolvente. Dichos solvatos están dentro del alcance de la presente invención.

Se reconoce que los compuestos de la presente invención pueden existir en diversas formas estereoisoméricas. Como tales, los compuestos de la presente invención incluyen tanto diastereómeros como enantiómeros. Los compuestos se preparan normalmente como racematos y pueden usarse convenientemente como tales, pero los enantiómeros individuales pueden aislarse o sintetizarse mediante técnicas convencionales si así se desea. Dichos racematos y enantiómeros individuales y mezclas de los mismos forman parte de la presente invención.

Se conoce bien en la técnica cómo preparar y aislar tales formas ópticamente activas. Pueden prepararse estereoisómeros específicos mediante síntesis estereoespecífica usando productos de partida enantioméricamente puros o enriquecidos enantioméricamente. Los estereoisómeros específicos de los productos de partida o de los productos pueden resolverse y recuperarse mediante técnicas conocidas en la técnica, tales como resolución de formas racémicas, cromatografía normal, de fase inversa y quiral, recristalización, resolución enzimática o recristalización fraccionada de las sales de adición formadas por los reactivos utilizados para tal fin. Métodos útiles para resolver y recuperar estereoisómeros específicos descritos en Eliel, E. L.; Wilen, S.H. Stereochemistry of Organic Compounds; Wiley: Nueva York, 1994, y Jacques, J, et al. Enantiomers, Racemates, and Resolutions; Wiley: Nueva York, 1981, cada uno incorporado por referencia en el presente documento en su totalidad.

Síntesis

Los compuestos descritos en la presente descripción pueden prepararse mediante una serie de métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen, pero no se limitan a, los descritos a continuación, o mediante modificaciones de estos métodos aplicando técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica de síntesis orgánica. Las modificaciones y sustituciones apropiadas serán fácilmente evidentes y bien conocidas o se podrán obtener fácilmente de la bibliografía científica para los expertos en la técnica. En particular, estos métodos pueden encontrarse en R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Wiley-VCH Publishers, 1999.

Se contempla que todos los procedimientos divulgados en asociación con la presente descripción se practiquen en cualquier escala, incluyendo miligramo, gramo, multigramo, kilogramo, multikilogramo o escala industrial comercial.

Se apreciará que los compuestos divulgados en la presente descripción pueden contener uno o más átomos de carbono sustituidos de manera asimétrica, y pueden aislarse en formas ópticamente activas o racémicas. Por tanto, se pretenden todas las formas quirales, diastereoméricas, racémicas, isoméricas de una estructura, a menos que se indique específicamente la estereoquímica o forma isomérica específica. Es bien conocido en la técnica cómo preparar y aislar tales formas ópticamente activas. Por ejemplo, pueden separarse mezclas de estereoisómeros mediante técnicas convencionales que incluyen, pero no se limitan a, resolución de formas racémicas, cromatografía normal, de fase inversa y quiral, formación de sal de preferencia, recristalización, y similares, o mediante síntesis quiral o bien a partir de productos de partida quirales o bien mediante síntesis deliberada de centros quirales diana.

Los compuestos divulgados en la presente descripción pueden prepararse mediante una variedad de rutas sintéticas. Los reactivos y productos de partida están disponibles comercialmente, o se sintetizan fácilmente mediante técnicas bien conocidas por un experto en la técnica. Todos los sustituyentes, a menos que se indique de otro modo, son tal como se definieron previamente.

En las reacciones descritas a continuación en el presente documento, puede ser necesario proteger grupos funcionales reactivos, por ejemplo grupos hidroxilo, amino, imino, tio o carboxilo, cuando se deseen en el producto final, para evitar su participación no deseada en las reacciones. Pueden usarse grupos protectores convencionales según la práctica convencional; para ejemplos, véase T.W. Greene y P. G. M. Wuts en Protective Groups in Organic Chemistry, 3a ed., John Wiley and Sons, 1999; J. F. W. McOmie en Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, 1973.

La presente descripción también se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (III) tal como se definió anteriormente, que comprende una etapa de conversión de un compuesto de fórmula (IV) tal como se definió anteriormente en un compuesto de fórmula (III).

En una realización particular, el procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (III) tal como se definió anteriormente comprende:

i) Una etapa de poner en contacto un compuesto de fórmula (IV) tal como se definió anteriormente con un ácido fuerte en presencia de un disolvente del compuesto de fórmula (IV); o

ii) Una etapa de poner en contacto un compuesto de fórmula (IV) tal como se definió anteriormente con un ácido fuerte o amoniaco, en particular bajo gas inerte cuando se usa amoniaco, en presencia de un disolvente del compuesto de fórmula (IV).

En una realización particular, el ácido fuerte es ácido clorhídrico.

En una realización particular, la conversión de (IV) en (III) se realiza a una temperatura comprendida entre 40°C y 90°C, por ejemplo a 50°C, en particular en un tubo sellado.

En una realización particular, el ácido fuerte utilizado para la conversión de (IV) en (III) es ácido clorhídrico, en particular en solución en etanol.

En una realización particular, la conversión de (IV) en (III) se realiza a una temperatura comprendida entre 40°C y 90°C, en particular a 50°C.

En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (IV) se prepara según un procedimiento que comprende:

i) Una etapa de conversión de un compuesto de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente en un compuesto de fórmula (V), seguido de una etapa de conversión del compuesto de fórmula (V) en un compuesto de fórmula (IV); o

ii) Una etapa de conversión de un compuesto de fórmula (VI) en un compuesto de fórmula (IV).

i) Una etapa de hidrólisis de la función éster COO-Ra de un compuesto de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente, en particular poniendo en contacto el compuesto de fórmula (VI) con una base fuerte en presencia de un disolvente de dicho compuesto de fórmula (VI) para dar un compuesto de fórmula (V), seguido de una etapa de poner en contacto el compuesto de fórmula (V) con un compuesto seleccionado del grupo que consiste en anhídridos, cloroformiatos y dicarbonatos; o

ii) Una etapa de poner en contacto dicho compuesto de fórmula (VI) con una mezcla de ácido acético y anhídrido alifático, en particular anhídrido acético.

En una realización particular, la base fuerte utilizada para la conversión de (VI) en (V) es hidróxido de sodio, realizándose la hidrólisis en particular a una temperatura comprendida entre 15 y 30°C.

En una realización particular, el compuesto seleccionado del grupo que consiste en anhídridos, cloroformiatos y dicarbonatos es anhídrido acético o piválico, realizándose el contacto con dicho compuesto en particular a una temperatura comprendida entre 15 y 30°C.

En una realización particular, la conversión de (VI) en (IV) se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 100°C y 150°C, en particular a 140°C, en particular bajo irradiación de microondas.

En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (VI) se obtiene a partir de un procedimiento que comprende:

i) una etapa de sustitución del grupo hidroxilo de un compuesto de la siguiente fórmula (VIII):

por un grupo saliente -Y, siendo Y en particular un halógeno, para dar un compuesto de la fórmula (VII) siguiente:

y

ii) una etapa de poner en contacto el compuesto de la siguiente fórmula (VII):

con un compuesto de la siguiente fórmula (IX):

en donde

R¹, R², R³, R⁴, Z y Rd son tal como se definieron anteriormente,

en presencia de un catalizador que comprende cobre o paladio y un ligando elegido de BINAP, Xantphos, dicloro[1,3-bis(2,6-di-3-pentilfenil)imidazol-2-iliden] (3-cloropiridilo) (PEPPSI-IPentCl),

obteniendo así un compuesto de fórmula (VI).

En una realización particular, Y es Cl, siendo la etapa vi) una etapa de poner en contacto un compuesto de fórmula (VIII) con dicloruro fenilfosfónico, en particular a una temperatura comprendida entre 60°C y 150°C, más particularmente a 100°C.

En una realización particular, Y es Br, siendo la etapa i) una etapa de poner en contacto un compuesto de fórmula (VIII) con anhídrido tríflico, seguido de una etapa de poner en contacto el producto obtenido en la etapa anterior con bromuro de sodio, en particular a una temperatura comprendida de 80°C a 160°C, por ejemplo a 120°C, en particular en un tubo sellado.

En una realización particular, la etapa ii) se realiza en presencia de una base, en particular carbonato de cesio. En una realización particular, el catalizador y el ligando de la etapa ii) son acetato de paladio y BINAP, respectivamente, realizándose dicha etapa ii) a una temperatura comprendida entre 40°C y 80°C, más particularmente a 60°C.

En una realización particular, dicho compuesto de fórmula (VIII) se obtiene a partir de un procedimiento que comprende una etapa de deshidrogenación y aromatización de un compuesto de la fórmula (X) siguiente:

En particular a partir de un procedimiento que comprende:

i) Una etapa de poner en contacto el compuesto de fórmula (X) con azufre, en presencia de un disolvente, a una temperatura comprendida entre 180°C y reflujo; o

ii) Una etapa de poner en contacto el compuesto de fórmula (X) con oxidantes a base de peróxidos tal como ácido peracético, seguido de una etapa de tratamiento térmico a una temperatura comprendida entre 150°C y 190°C, en particular en presencia de un disolvente.

Las rutas generales para preparar los ejemplos de la presente descripción se muestran en los esquemas A-C a continuación en el presente documento.

Los reactivos y productos de partida están disponibles comercialmente, o se sintetizan fácilmente mediante técnicas bien conocidas por un experto en la técnica. Todos los sustituyentes de los compuestos A-Q representados en los esquemas A-C son, a menos que se indique de otro modo, tal como se definieron anteriormente para los compuestos correspondientes (III)-(X).

Con respecto a las rutas sintéticas descritas en el esquema A, la etapa a es una adición 1,4 de aminoésteres B sobre nitrovinilos A que se consigue preferentemente en ausencia de disolventes. La etapa b es la reducción del grupo nitro de los compuestos C que se consigue preferentemente en medio ácido utilizando zinc. La etapa c implica la ciclación provocada por calor de la diamina libre resultante D en compuesto E. Las etapas a, b y c, por lo general, se extendían telescópicamente para minimizar las reacciones secundarias y las pérdidas potenciales en el curso de los procedimientos de purificación. La etapa e es una deshidrogenación/aromatización del compuesto E para dar los derivados de hidroxipirazina H, que se consigue preferiblemente utilizando azufre en un disolvente inerte en ebullición. Se encontró una alternativa mediante la preparación de derivados de 1-óxido de 5-oxo-2,3,4,5-tetrahidropirazina J usando ácido peracético (etapa f) y su reordenamiento en derivados de hidroxipirazina H (etapa h). Cuando R1 es H, también puede prepararse la 3-hidroxipirazina H, mediante la etapa g, usando la condensación notificada (J. Am. Chem. Soc., 1949, 78; documento US 2520088, 1949; J. Am. Chem. Soc., 1952, 1580; documento US 4046763, 1977) de glioxales G y aminoamidas F (elaboradas a partir de la reacción entre aminoésteres B y amoniaco mediante la etapa d). La etapa j es la sustitución del grupo hidroxilo del compuesto H por un halógeno para dar los compuestos L. En el caso de que el grupo X sea un cloruro, el reactivo preferido utilizado para lograr esta transformación es el dicloruro fenilfosfónico. Estos compuestos también pueden prepararse en dos etapas (i y l) a través de un intermedio de éster dotado de una fuerte capacidad saliente, tal como los ésteres tríflicos K seguido de una reacción similar a una reacción aromática de Finkelstein (Heterocycles, 1998, 1255; documento WO 2012119046, 2012). También es posible una sustitución posterior con una sal de yodo para obtener derivados de yodo (X = I) mediante una reacción conocida catalizada por ácido (J. Org. Chem., ^{1 9 6 1}, 1907; Tetrahedron, 1998, 9701; Synlett, 2003, 1801). Además, la conversión directa de los derivados de 1-óxido de 5-oxo-2,3,4,5-tetrahidropirazina J en cloropirazinas L (etapa k) también se encontró posible, por ejemplo, mediante el uso de dicloruro fenilfosfónico y calor. Finalmente, una publicación reciente (Org. Process. Res. Dev. 2017, 21, 346) ofrece la posibilidad de preparar, a partir de estas halogenopirazinas, las correspondientes aminopirazinas M, a través de la etapa m, que son intermedios clave en la gran mayoría de la preparación notificada anteriormente de imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona luciferinas (Chem. Eur. J.

2015, 21, 17158).

Tal como se representa en el esquema B, a partir de las halogenopirazinas L, la preparación de las luciferinas O protegidas de fórmula general P se encontró que era posible, o bien en dos etapas por separado a través de los aminoácidos O o en un solo recipiente (one pot) a partir de sus precursores de aminoésteres de fórmula general N. Entre muchos aspectos interesantes, es importante mencionar que nuestra invención responde a la necesidad insatisfecha de disponer de una solución recién hecha, y por lo tanto de un título reproducible, de cualquier luciferina de fórmula general Q. Pues las luciferinas O-protegidas (pre-luciferinas), de fórmula general P, pueden, tras un tratamiento simple y sin precedentes con ácido, conducir a soluciones listas para usar de las luciferinas correspondientes Q. De hecho, estas luciferinas O-protegidas P son mucho más estables y pueden transportarse y almacenarse convenientemente durante mucho tiempo a temperatura ambiente y luego hidrolizarse para generar fácilmente soluciones de luciferinas para su uso inmediato. Además, la eliminación de dicho grupo se logra de manera simple en un vial utilizando soluciones que contienen un ácido fuerte, tal como ácido clorhídrico, sin la necesidad de atmósfera inerte. Este uso sin precedentes de un ácido es realmente fundamental para proporcionar un grado de estabilidad de la solución resultante, ya que se observa poco o ningún producto resultante del procedimiento de quimioluminiscencia en el curso de esta etapa de desprotección. Esto está en marcado contraste con los usos notificados anteriormente (Tetrahedron Lett., 1977, 2685; Chemistry, 2013, 14970) de una base, tal como amoníaco, el cual en presencia de oxígeno conduce a una descomposición mucho más extensa. Con respecto a la química descrita en el esquema B, la etapa n es una reacción de aminación que utiliza una amplia variedad de a-aminoésteres B para dar los compuestos N. Esto puede lograrse usando catalizadores de cobre o paladio y una variedad de ligandos tal como se describe en el caso de muchos derivados aromáticos o heteroaromáticos halogenados (Acc. Chem. Res., 1998, 852; J. Organomet. Chem., 1999,125; Chem. Rev., 2006, 2651; Angew. Chem., Int. Ed., 2008, 6338; Angew. Chem, Int. Ed, 2008, 3096; J. Org. Chem., 2013, 7930; Org. Lett, 2016, 4128; Beilstein J. Org. Chem., 2012, 2004; Tetrahedron, 2011, 9405). En los casos presentes, para evitar reacciones secundarias, se encontró que esta etapa requería una temperatura baja (60°C). La etapa o es una hidrólisis de la función éster de N, preferiblemente lograda en condiciones básicas para dar los ácidos O. La etapa p es una ciclización seguida de una protección de O que se logra mediante la activación de la función de ácido de O, preferiblemente con una variedad de reactivos tales como anhídridos, cloroformiatos o dicarbonatos. Esto da directamente los compuestos O-protegidos P, bastante más estables. Además, la etapa o y p en muchos casos pueden realizarse en un solo recipiente (one pot) (etapa q) usando ácido acético junto con anhídrido acético. Finalmente, los compuestos N u O pueden transformarse directamente en la luciferina correspondiente Q utilizando, por ejemplo, ácido clorhídrico y/o ácido acético caliente (etapa r).

Al considerar cada etapa sintética representada individualmente en los esquemas anteriores, la etapa e, la deshidrogenación/aromatización de piperazin-2-onas E en 2-hidroxipirazinas H la preparación de la N-óxidos J mediante la etapa f y su reordenamiento en 2-hidroxipirazinas H mediante la etapa h, la transformación de los N-óxidos J en las halogenopirazinas L mediante la etapa k y el aislamiento de los derivados O-protegidos P obtenidos a partir de los compuestos O mediante la etapa p o a partir del compuesto N mediante la etapa q son los únicos que no tienen precedentes. Además, antes o después de cada una de estas etapas, la química adicional que se centra en las cadenas laterales R1, R2, R3 y R4 y sus diversos grupos protectores o funciones pueden planificarse con el fin de alterarlos y/o hacerlos compatibles con la química utilizada en las siguientes etapas. Por ejemplo, la hidrogenación de eventuales grupos bencilo que protegen las funciones OH presentes en compuestos de tipo N u O puede realizarse antes de sus transformaciones en compuestos de tipo P mediante la etapa o-q.

Estas rutas sintéticas están haciendo un amplio uso de muchos aminoésteres de tipo B. Por consiguiente, para preparar tales intermedios; usamos, por ejemplo, las rutas representadas en el esquema C. La primera ruta se basa en el uso notificado (Bull. Acad. Sci. USSR Div. Chem. Sci. (Trad. Ingl.), 1980, 458; Bull. Acad. Sci. USSR Div. Chem. Sci. (Trad. Ingl.), 1981, 466) de nitroacetato de etilo para preparar los correspondientes nitroacrilatos que luego se reducen a aminoésteres. Una simplificación del procedimiento nos llevó a extender las primeras tres etapas de este método y solo aislar adecuadamente los nitroésteres intermedios R antes de su reducción final en aminoésteres B. La segunda ruta está dotada de un mayor alcance y se basa en el uso de una reacción de Knoevenagel con malonato de dietilo que, tras una reducción, da los correspondientes malonatos sustituidos. A partir de ellos, tal como se notificó (Ber. Dtsch. Chem. Ges., 1902, 3772; Org. Process. Res. Dev., 2007, 1069), los ésteres de a-oxima se preparan fácilmente y pueden reducirse a los correspondientes aminoésteres. Una vez más, extender las primeras tres etapas muy a menudo nos llevó a aislar adecuadamente solo las oximas intermedias S antes de su reducción final a aminoésteres. Tal como se describe adicionalmente en detalle a continuación, también se emplearon métodos menos generales para preparar otros tipos de ésteres de a-oxima.

Esquema C. i: HC(OMe)³, Dowex 50W , MeOH. i i : AciO, calor, i i i : NaBfLr, z'PrOH. iv : Zn , EtOH,

H30 Cr. v: AcOH, piperidina, EtOH, 4 Á de tamiz molecular, v i: H ², Pd/C, EtOH. EtONa, v ii: a)

EtOH, isoamilnitrito, b) H30+C1~.

Dibujos

La Figura 1 ilustra los perfiles de HPLC a lo largo del tiempo para la hidrólisis de acetilo de P-21 (M = 451) en la luciferina Q-12 correspondiente (M = 409). Obtenido en un aparato Agilent, con una columna XDB-C18 de 3,5 pm y un gradiente de agua/metanol (que contiene formiato de amonio 5 mM, desde 95-5 hasta 5-95 en 3,5 min, 3,5 min a 5-95, y luego de nuevo a 95-5 en 0,5 min), monitorización UV ajustada a 254 nM.

La Figura 2 ilustra la emisión de bioluminiscencia a lo largo de dos horas de furimazina (Q-1) e hidroxifurimazina (Q-80), así como las imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-onas Q-84 y Q-85 de la invención.

La Figura 3 ilustra el intervalo dinámico (unidades relativas (RLU) frente a diluciones en serie) de nanoKAZ, que se representó utilizando la imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona Q-3.

La Figura 4 muestra una representación comparativa de Lineweaver-Burk de la actividad bioluminiscente de la nanoKAZ usando furimazina (Q-1) e imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona Q-3 como sustratos: la inversa de la velocidad de reacción (unidades relativas [RLU]/segundo) se representa frente a la inversa de la concentración de sustrato (105 M-1), manteniendo constante la concentración de la enzima en ambos casos. Las dos líneas de puntos (regresión lineal) convergen en la misma intersección con el eje x (-1/Km) y diferentes intersecciones con el eje y (1/Vmax). Se indican las ecuaciones de las dos regresiones lineales y los factores de correlación correspondientes (R2) con los datos experimentales.

La Figura 5 compara la expresión y ubicación de quimeras proteicas fusionadas con la nanoKAZ en líneas celulares HEK y Jurkat transfectadas transitoriamente, y células T humanas primarias: el receptor de citocinas IL7Ra:nanoKAZ en la membrana (arriba), la proteína de unión a tubulina enconsina EMTB:nanoKAZ asociada con microtúbulos (centro), el factor de transcripción STAT5a:nanoKAZ denso en todo el citoplasma y débil en el núcleo (abajo). Se adquirieron imágenes durante un segundo de células vivas utilizando los sustratos Q-1 (línea superior) y Q-3 (líneas 2-4) que muestran la resolución subcelular en condiciones de cultivo celular y la ganancia de emisión de luz con Q-3.

La Figura 6 representa una superposición de dos espectros de 1H RMN del mismo lote del compuesto acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (almacenado a 4°C) elaborado el día de su producción (A) y 30 meses después (B).

Ejemplos

Descripción, química

Procedimiento experimental general

Se usó un horno de microondas Biotage initiator 2 para las reacciones que mencionaban dicho método de calentamiento. Los espectros de 1H RMN se registraron en un espectrómetro Bruker Avance 400 a 400 MHz y 100 MHz, respectivamente. Los desplazamientos (5) se dan en ppm con respecto a la señal de TMS y las constantes de acoplamiento (J se dan en Hercios. La cromatografía en columna se realizó o bien sobre gel de sílice Merck 60 (0,035 - 0,070 mm) o bien alúmina neutra usando una bomba de disolvente y un sistema de recogida automatizado accionado por un detector de UV ajustado a 254 nm a menos que se requiriera de otro modo. La deposición de muestra se llevó a cabo por absorción de la mezcla a purificar sobre una pequeña cantidad de la fase sólida seguido de su deposición en la parte superior de la columna. Los espectros de masas de baja resolución se obtuvieron en un sistema LC/MSD Agilent serie 1100 utilizando un sistema de ionización por electropulverización atmosférica y los espectros de masas de alta resolución (HRMS) se obtuvieron utilizando un instrumento Waters Micromass Q-Tof con una fuente de iones de electropulverización.

Procedimientos generales para la síntesis de a-aminoésteres B mediante a-nitroésteres R, preparación de nitroésteres R. Etapa 1: preparación del dimetilacetal. Se disolvieron el aldehído correspondiente (0,044 mol) y ortoformiato de trimetilo (5,8 ml, 0,053 mol) en metanol (7,3 ml, 0,24 mol, secado sobre tamiz molecular de 3A). A esto se le añadió la resina de intercambio iónico DOWEX 50WX8-100 (0,2 g) y la solución se agitó durante la noche en una atmósfera protegida con cloruro de calcio. Luego, la resina se retiró por filtración, el filtro se lavó con metanol seco y el filtrado se concentró hasta sequedad (a 30 mbar) para producir el acetal volátil correspondiente (generalmente no completamente estable en CDCh). Etapa 2: condensación con nitroacetato de etilo, preparación de los nitroacrilatos. Para eliminar eventuales trazas de agua, antes de esta reacción, bajo una atmósfera protegida con cloruro de calcio, se agitó el nitroacetato (5,7 g, 0,042 mol) en anhídrido acético (5 ml, 0,053 mol) durante 15 minutos. A esta solución se le añadió el acetal bruto descrito anteriormente disuelto en anhídrido acético (5,1 ml, 0,053 mol) y la solución se calentó a la temperatura y el tiempo descritos en cada caso a continuación mientras se dejaba destilar el acetato de metilo de bajo punto de ebullición resultante. A continuación, esto se concentró completamente hasta sequedad para producir los 3-aril-2-nitroacrilatos brutos. Etapa 3: reducción con borohidruro de sodio, preparación de los nitroésteres sustituidos. El acrilato bruto se dispersó/disolvió en isopropanol (100 ml, secado sobre un tamiz molecular de 4A). A esto se le añadió borohidruro de sodio en porciones (2 g, 0,053 mol) y la suspensión se calentó hasta reflujo antes de dejarla enfriar de nuevo hasta temperatura ambiente. A continuación, se añadió cuidadosamente ácido acético (3,3 ml, 0,053 mol) y el isopropanol se eliminó a vacío. El residuo bruto se dispersó en agua (100 ml) y se añadió ácido clorhídrico al 10% (5,7 ml, 0,0057 mol) para ayudar a la hidrólisis de los hidruros de boro a medio reaccionar. La solución resultante se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. A continuación, el residuo se purificó tal como se describe en cada caso a continuación para producir el a-nitroéster R correspondiente.

3-(4-fluorofenil)-2-nitropropanoato de etilo (R-1): obtenido como un aceite (2,72 g, 23% a partir de 4-fluorobenzaldehído) después de calentar a 190°C durante 4 h en el transcurso de la etapa de condensación y dos cromatografías sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1) y (ciclohexano - diclorometano 2/1). 1H RMN (CDCh): 7,21 (m, 2H), 7,02 (m, 2H), 5,32 (dd, 1H, J = 5,7, 9,4), 4,30 (m, 2H), 3,56 (dd, 1H, J = 9,4, 14,7), 3,47 (dd, 1H, J = 5,7, 14,7), 1,31 (m, 3H). HRMS (m/z): [M-H]- calculado para C¹¹H¹¹FNO⁴: 240,0672; hallado, 240,0645.

3-(2-metoxifenil)-2-nitropropanoato de etilo (R-2): obtenido como un aceite (6,12 g, 53% a partir de 2-metoxibenzaldehído) después de calentar a 150°C durante 9 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 9/1). 1H RMN (CDCh): 7,28 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,91 (m, 2H), 5,57 (dd, 1H, J = 6,2, 9,1), 4,28 (q, 2H, J = 7,1), 3,82 (s, 3H), 3,55 (dd, 1H, J = 6,2, 14,1), 3,51 (dd, 1H, J = 9,1, 14,1), 1,28 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C^H^NOsNa: 276,0848; hallado, 276,0831.

3-(3-metoxifenil)-2-nitropropanoato de etilo (R-3): obtenido como un aceite (2,34 g, 21% a partir de 3-metoxibenzaldehído) después de calentar a 150°C durante 9 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 9/1). 1H RMN (CDCh): 7,25 (t, 1H, J = 7,9), 6,81 (m, 3H), 5,35 (dd, 1H, J = 5,8, 9,3), 4,31 (q, 2H, J = 7,2), 3,81 (s, 3H), 3,56 (dd, 1H, J = 9,3, 14,7), 3,47 (dd, 1H, J = 5,8; 14,7), 1,31 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C12H15NOsNa: 276,0848; hallado, 276,0831.

3-(4-metoxifenil)-2-nitropropanoato de etilo (R-4): obtenido como un aceite (6,95 g, 55% a partir de 4-metoxibenzaldehído) después de calentar a 150°C durante 9 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 9/1). 1H RMN (CDCh): 7,15 (m, 2H), 6,86 (m, 2H), 5,31 (dd, 1H, J = 5,9, 9,5), 4,30 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J = 9,5, 14,6), 3,44 (dd, 1H, J = 5,9, 14,6), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C^H^NOsNa: 276,0848; hallado, 276,0840.

3-(4-(benciloxi)fenil)-2-nitropropanoato de etilo (R-5): obtenido como un sólido amarillo (4,08 g, 51% a partir de 4-benciloxibenzaldehído) después de calentar a 150°C durante 9 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 92/8 a 9/1). 1H RMN (CDCh): 7,46-7,33 (m, 5H), 7,15 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 5,31 (dd, 1H, J = 6,0, 9,3), 5,06 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 3,52 (dd, 1H, J = 9,3, 14,6), 3,44 (dd, 1H, J = 6,0, 14,6), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C1sH19NO5Na: 352,1161; hallado, 352,1150.

2- nitro-3-m-tolilpropanoato de etilo (R-6): obtenido como un aceite (1,05 g, 16% a partir de 3-metilbenzaldehído) después de calentar a 180°C durante 8 h en el transcurso de la etapa de condensación y dos cromatografías sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano de 2/1 a 1/6) y (ciclohexano - acetato de etilo 97/3). 1H RMN (CDCh): 7,22 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,01 (m, 2H), 5,33 (dd, 1H, J = 5,8; 9,4), 4,30 (q, 2H, J = 7,1), 3,54 (dd, 1H, J = 9,4, 14,6), 3,46 (dd, 1H, J = 5,8, 14,6), 2,34 (s, 3H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). HRMS (m/z): [M-H]- calculado para C¹²H¹⁴NO⁴: 236,0923; hallado, 236,0983.

3- (furan-2-il)-2-nitropropanoato de etilo (R-7): En el presente caso, el nitroacrilato se preparó directamente a partir de furfural tal como se describió anteriormente. (Org. Biomol. Chem, 2012, 524) Obtenido como un aceite (5,04 g, 39% a partir de furfural) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - metanol 99/1). 1H RMN (CDCh): 7,36 (m, 1H), 6,32 (m, 1H), 6,19 (m, 1H), 5,44 (dd, 1H, J = 5,5, 9,3), 4,32 (q, 2H, J = 7,2), 3,66 (dd, 1H, J = 9,3; 15,7), 3,54 (dd, 1H, J = 5,5; 15,7), 1,32 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para CgHuNOsNa: 236,0535; hallado, 236,0522.

3-(5-metilfuran-2-il)-2-nitropropanoato de etilo (R-8): obtenido como un aceite (3,44 g, 60% a partir de 5-metilfurfural) después de calentar a 140°C durante 2 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano 3/2). 1H RMN (CDCh): 6,02 (d, 1H, J = 3,0), 5,86 (dd, 1H, J = 3,0, 0,9), 6,19 (m, 1H), 5,40 (dd, 1H, J = 5,5, 9,3), 4,30 (q, 2H, J = 7,1), 3,58 (dd, 1H, J = 9,3; 15,7), 3,45 (dd, 1H, J = 5,5, 15,7), 2,23 (s, 3H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C10H1sNO5Na: 250,0691; hallado, 250,0682.

3-(4,5-dimetilfuran-2-il)-2-nitropropanoato de etilo (R-9): según lo visto por 1H RMN, este compuesto se obtuvo después de calentar a 140°C durante 2 h en el transcurso de la etapa de condensación y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano 2/1) como un aceite que también contenía el 50% en moles de 3-(4,5-dimetilfuran-2-il)acrilato de etilo (1,94 g). Esto se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

3-(5-etilfuran-2-il)-2-nitropropanoato de etilo (R-10): obtenido como aceite (3,68 g, 39% a partir de 5-etilfurfural) después de calentar a 140°C durante 2 h en el transcurso de la etapa de condensación y dos cromatografías sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano de 2/1 a 1/6) y (ciclohexano - acetato de etilo 97/3). 1H RMN (CDCh): 6,05 (d, 1H, J = 3,0), 5,88 (m, 1H), 6,19 (m, 1H), 5,42 (dd, 1H, J = 5,7, 9,1), 4,31 (q, 2H, J = 7,0), 3,61 (dd, 1H, J = 9,1, 15,7), 3,48 (dd, 1H, J = 5,7; 15,7), 2,60 (q, 2H, J = 7,0), 1,32 (t, 3H, J = 7,0), 1,21 (t, 3H, J = 7,5). HRMS (m/z): [M-H]-calculado para C¹¹H¹⁴NO⁵: 240,0872; hallado, 240,0857.

3-(furan-3-il)-2-nitropropanoato de etilo (R-11): obtenido como un aceite (0,74 g, 34% a partir de furan-3-carbaldehído) a partir de (E)-3-(furan-3-il)-2-nitroacrilato de etilo preparado tal como se describió anteriormente (Org. Biomol. Chem., 2012, 524), después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 9/1). 1H RMN (CDCI³): 7,40 (m, 1H), 7,34 (m, 1H), 6,30 (m, 1H), 5,26 (dd, 1H, J = 5,3, 9,4), 4,32 (q, 2H, J = 7,1), 3,39 (dd, 1H, J = 9,4, 15,2), 3,32 (dd, 1H, J = 5,4; 15,2), 1,32 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C9H11NÜ5Na, 236,0559; hallado, 236,0567.

2-nitro-3-(tiofen-2-il)propanoato de etilo (R-12) Obtenido como aceite (3,43 g, 33% a partir de tiofen-2-carbaldehído) después de calentar a 140°C durante 4 h en el transcurso de la etapa de condensación y dos cromatografías sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano 3/2) y (ciclohexano - acetato de etilo de 97/3 a 95/5). 1H RMN (CDCh): 7,23 (dd, 1H, J = 1,3, 5,1), 6,96 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 5,35 (dd, 1H, J = 5,6, 9,2), 4,32 (q, 2H, J = 7,1), 3,83 (dd, 1H, J = 9,2, 15,4), 3,70 (dd, 1H, J = 5,6; 15,4), 1,32 (t, 3H, J = 7,1). HRMS (m/z): [M-H]- calculado para C⁹H⁸NO⁴, 228,0331; hallado, 228,0348.

Procedimiento general para la reducción de los a-nitroésteres R. El a-nitroéster eonsiderado (0,023 mol) se disolvió en etanol (75 ml) y ácido clorhídrico al 37% (29 ml, 0,34 mol) y se enfrió hasta °C. Se añadió en porciones zinc en polvo (9,05 g, 0,13 mol, tamaño inferior a 10 pm). Se dejó agitar durante la noche, se eliminó el etanol a vacío, se dispersó el residuo en agua y acetato de etilo, se basificó la suspensión con amoniaco al 22%, esto se extrajo con acetato de etilo, se lavó la fase orgánica con agua, salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad para producir el aminoéster que en algunos casos se purificó adicionalmente tal como se describe a continuación.

2-amino-3-(4-fluorofenil)propanoato de etilo (B-1): obtenido como un aceite (1,95 g, 94%). 1H RMN (CDCb): 7,18 (m, 3H), 7,01 (m, 1H), 4,17 (q, 2H, J = 7,1), 3,68 (dd, 1H, J = 5,5, 7,6), 3,04 (dd, 1H, J = 5,5, 13,6), 2,86 (dd, 1H, J = 7,6, 13,6), 1,48 (s, 2H), 1,25 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁵FNO²: 212,1087; hallado, 212,1069.

2-amino-3-(2-metoxifenil)propanoato de etilo (B-2): obtenido como un aceite (5,16 g, 90%). 1H RMN (CDCh): 7,23 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,86-6,92 (m, 2H), 4,19 (q, 2H, J = 7,2), 3,84 (s, 3H), 3,81 (dd, 1H, J = 5,8, 8,1), 3,10 (dd, 1H, J = 5,8; 13,3), 2,84 (dd, 1H, J = 8,1, 13,3), 1,51 (s, 2H), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO³: 224,1287; hallado, 224,1218.

2-amino-3-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (B-3): obtenido como un aceite (0,81 g, 92%). 1H RMN (CDCh): 7,23 (t, 1H, J = 7,9), 6,77-6,82 (m, 3H), 4,19 (q, 2H, J = 7,1), 3,81 (s, 3H), 3,73 (dd, 1H, J = 5,2, 7,9), 3,08 (dd, 1H, J = 5,2; 13,5), 2,84 (dd, 1H, J = 7,9, 13,5), 1,51 (s, 2H), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO³: 224,1287; hallado, 224,1260.

2-amino-3-(4-metoxifenil)propanoato de etilo (B-4): obtenido como un aceite (4,2 g, 95%). 1H RMN (CDCh): 7,15 (m, 2H), 6,88 (m, 2H), 4,19 (q, 2H, J = 7,1), 3,80 (s, 3H), 3,68 (dd, 1H, J = 5,3, 7,7), 3,03 (dd, 1H, J = 5,3; 13,7), 2,83 (dd, 1H, J = 7,7, 13,7), 1,48 (s, 2H), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO³: 224,1287; hallado, 224,1238.

2-amino-3-(4-(benciloxi)fenil)propanoato de etilo (B-5): obtenido como un aceite (2,65 g, 67%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 96/4). 1H RMN (CDCb): 7,46-7,33 (m, 5H), 7,13 (m, 2H), 6,93 (m, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,18 (q, 2H, J = 7,1), 3,68 (dd, 1H, J = 5,3, 7,8), 3,04 (dd, 1H, J = 5,3, 13,7), 2,84 (dd, 1H, J = 7,8, 13,7), 1,47 (s, 2H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹⁸H²²NO³: 300,1600; hallado, 300,1591.

2-amino-3-(m-tolil)propanoato de etilo (B-6): obtenido como un aceite (0,73 g, 80%). 1H RMN (CDCh): 7,22 (m, 1H), 7,02 (m, 3H), 4,19 (q, 2H, J = 7,1), 3,72 (dd, 1H, J = 8,0, 5,2), 3,07 (dd, 1H, J = 13,6, 5,2), 2,84 (dd, 1H, J = 13,6, 8,0), 2,34 (s, 3H), 1,50 (s, 2H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO², 208,1338; hallado, 208,1334.

2-amino-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (B-7): obtenido como un aceite (4,84 g, 94%). 1H RMN (CDCh): 7,34 (dd, 1H, J = 0,8, 1,9), 6,30 (dd, 1H, J = 1,9, 3,2), 6,12 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,80 (dd, 1H, J = 7,3, 5,2), 3,10 (dd, 1H, J = 14,9, 5,2), 2,99 (dd, 1H, J = 14,9, 7,3), 1,59 (s, 2H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C⁹H¹⁴NO³, 184,0974; hallado, 184,0955.

2-amino-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (B-8): obtenido como un aceite (1,26 g, 75%). 1H RMN (CDCh): 5,97 (d, 1H, J = 2,9), 5,85 (dd, 1H, J = 2,9, 0,9), 4,24 - 4,14 (m, 2H), 3,72 (dd, 1H, J = 7,3, 5,0), 3,03 (dd, 1H, J = 14,9, 5,0), 2,91 (dd, 1H, J = 14,9, 7,3), 2,24 (s, 3H), 1,57 (s, 2H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁶NO³, 198,1130; hallado, 198,1089.

2-amino-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoato de etilo (B-9) Obtenido como un aceite (0,6 g, 7% a partir de 4,5-dimetilfurfural). 1H RMN (CDCh): 5,88 (s, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,00 (dd, 1H, J = 4,8, 14,9), 2,87 (dd, 1H, J = 7,5, 14,9), 2,15 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,64 (s, 2H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁸NO³, 212,1287; hallado, 212,1246.

2-amino-3-(5-etilfuran-2-il)propanoato de etilo (B-10): obtenido como un aceite (1,83 g, 56%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 98/2 a 97/3). 1H RMN (CDc I3): 6,00 (d, 1H, J = 3,0), 5,87 (d, 1H, J = 3,0), 4,20 (m, 2H), 3,74 (dd, 1H, J = 7,2, 5,1), 3,05 (dd, 1H, J = 14,9, 5,1), 2,94 (dd, 1H, J = 14,9, 7,2), 2,24 (q, 2H, J = 7,5), 1,58 (s, 2H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2), 1,21 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁸NO³, 212,1287; hallado, 212,1261.

2-amino-3-(furan-3-il)propanoato de etilo (B-11): obtenido como un aceite (1,4 g, 88%). 1H RMN (CDCI³): 7,38 (m, 1H), 7,31 (m, 1H), 6,28 (m, 1H), 4,20 (q, 2H, J = 7,2), 3,65 (dd, 1H, J = 7,0, 5,3), 2,90 (dd, 1H, J = 14,3, 5,3), 2,79 (dd, 1H, J = 14,3, 7,0), 1,57 (s, 2H), 1,29 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C⁹H¹⁴NO³, 184,0974; hallado, 184,0951.

2- amino-3-(tiofen-2-il)propanoato de etilo (B-12): obtenido como un aceite (2,5 g, 58%) después de la dilución del aceite en acetato de etilo, extracción con ácido clorhídrico 1 N y, tras basificación de esta fase acuosa con amoniaco al 22% y extracción con acetato de etilo. Después, la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad. 1H RMN (CDCL): 7,19 (dd, 1H, J = 1,1,5,1), 6,96 (dd, 1H, J = 3,3, 5,1), 6,88 (m, 1H), 4,21 (q, 2H, J = 7,1), 3,72 (dd, 1H, J = 7,2, 4,8), 3,30 (dd, 1H, J = 14,7, 4,8), 3,17 (dd, 1H, J = 14,7, 7,2), 1,57 (s, 2H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C⁹H¹⁴NO²S, 200,0745; hallado, 200,0726.

Procedimientos generales para la síntesis de a-aminoésteres B mediante ésteres de a-oximas S, preparación de ésteres de a-oximas S. Etapa 1, condensación de Knoevenagel de malonato de dietilo y aldehído, preparación de 2-metilenmalonato de dietilo sustituido. Bajo una atmósfera inerte, se calentaron el aldehído considerado (0,048 mol), malonato de dietilo (7,54 g, 0,048 mol), ácido acético (0,14 g, 0,002 mol), piperidina (0,2 g, 0,002 mol) y tamiz molecular de 4Á (15 g) en etanol seco (20 ml, secado sobre tamices moleculares de 4 Angstrom) sin agitar a 60°C durante 10 horas y los espectros de 1H RMN de una muestra de bruto normalmente indicaban la desaparición completa del aldehído de partida. Etapa 2, reducción del 2-metilenmalonato de dietilo sustituido, preparación del malonato sustituido. Se filtró la suspensión que contenía el tamiz molecular de 4 Á descrita anteriormente, el tamiz molecular de 4 Á se lavó con etanol seco. A la solución de etanol resultante (160 ml de volumen total) se le añadió paladio sobre carbono al 10% (1,27 g, 0,001 mol) y esto se agitó durante la noche en una atmósfera de hidrógeno (1 atm). La suspensión resultante se filtró, el filtrado se concentró hasta sequedad para dar malonato sustituido bastante puro. Alternativamente, tal como se especifica en algunos de los ejemplos siguientes, esta hidrogenación se logró usando borohidruro de sodio (1,1 eq.). Se idearon dos procedimientos, procediendo el primero mediante la adición de borohidruro de sodio a 0°C en pequeñas porciones a una solución etanólica y agitando a 0°C durante dos horas antes del tratamiento final, el segundo mediante la adición de borohidruro de sodio a 4°C y agitando durante la noche a esta temperatura antes de utilizar el siguiente procedimiento de tratamiento final. A esto le sigue su acidificación con ácido acético (1,2 equivalentes), dilución en un exceso de agua y extracción con acetato de etilo. Después, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir el malonato sustituido bruto. Etapa 3, preparación de ésteres de a-oximas a partir de malonatos sustituidos. Se disolvió el malonato sustituido bruto (0,0422 mol) en etanol (60 ml, secado sobre tamiz molecular de 4 Á) y se enfrió hasta 0°C. Se añadió una solución al 21% de etóxido de sodio en etanol (18,4 ml, 0,0493 mol) seguido de una adición lenta de nitrito de isoamilo (6,2 ml, 0,046 mol). Este se agitó a 0°C durante dos horas, se acidificó ligeramente mediante la adición de ácido clorhídrico 1 N y se diluyó en agua (200 ml). Esta solución se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir los ésteres de a-oximas brutos purificados adicionalmente tal como se describe a continuación.

3- ciclopentil-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-1): obtenido como un sólido blanco (2,50 g, 35% a partir de ciclopentanocarbaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 85/15).

1H RMN (CDCla): 9,51 (s, 1H), 4,32 (q, 2H, J = 7,0), 2,67 (d, 2H, J = 7,6), 2,20 (m, 1H), 1,70 (m, 4H), 1,53 (m, 2H), 1,36 (t, 3H, J = 7,0), 1,25 (m, 2H). HRMS: calculado para C10H17NOaNa: 222,1106; hallado, 222,1164.

3-ciclohexil-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-2): obtenido como un sólido blanco (4,34 g, 50% a partir de ciclohexanocarbaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1).

1H RMN (CDCla): 9,85 (s, 1H), 4,31 (q, 2H, J = 7,2), 2,55 (d, 2H, J = 7,1), 1,70 (m, 6H), 1,36 (t, 3H, J = 7,0), 1,20 (m, 3H), 1,04 (m, 2H). HRMS: calculado para CnH19NO3Na: 236,1263; hallado, 236,1291.

3-(biciclo[2.2.1]heptan-2-il)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-3): obtenido como una mezcla oleosa de diastereoisómeros (1,39 g, 25% a partir de los dos isómeros de norbornano-2-carboxaldehído) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 7/1 a 4/1) y (diclorometano - etanol 99/1). 1H RMN (CDCl3): 4,33 (m, 4H, valor arbitrario), 2,66 (m, 3,2H), 2,50 (m, 0,9H), 2,22 (m, 3,3H), 2,08 (m, 1,2H), 1,96 (m, 0,7H), 1,85 (m, 0,8H), 1,73 (m, 2,8H), 1,48 (m, 4,5H), 1,34 (m, 10,8H), 1,15 (m, 4,5H), 0,79 (m, 1,3H). HRMS: calculado para C12H19NO3Na, 248,1263; hallado, 248,1265.

2-(hidroxiimino)-3-(tetrahidrofuran-2-il)propanoato de etilo (S-4): Este compuesto se obtuvo utilizando Pd/C al 10% para la etapa de hidrogenación y dejándolo actuar durante 48 horas. De un lote de 12,8 g, solo se purificó una muestra mediante cromatografía (diclorometano - etanol 97/3) para dar un sólido blanco. 1H RMN (CDCh): 9,74 (s, 1H), 4,32 (q, 2H, J = 7,2), 4,28 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 2,96 (dd, 1H, J = 5,5; 12,8), 2,80 (dd, 1H, J = 5,9, 12,8), 1,88 (m, 3H), 1,62 (m, 1H), 1,35 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para CaH15NO4Na: 224,0899; hallado, 224,0874.

2-(hidroxiimino)-3-(3-metiltiofen-2-il)propanoato de etilo (S-5): obtenido como un sólido amarillo (1,38 g, 32% a partir de 3-metiltiofen-2-carbaldehído), usando borohidruro de sodio a 0°C, después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCh): 9,88 (s, 1H), 7,06 (d, 1H, J = 5,1), 6,77 (d, 1H, J = 5,1), 4,33 (q, 2H, J = 7,2), 4,09 (s, 2H), 2,28 (s, 3H), 1,36 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C1üH13NO3SNa: 250,0514; hallado, 250,0513.

3-(5-etiltiofen-2-il)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-6): obtenido como un aceite (1,36 g, 29% a partir de 5-etiltiofen-2-carbaldehído), usando borohidruro de sodio a 0°C, después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCh): 10,06 (s, 1H), 6,75 (m, 1H), 6,59 (m, 1H), 4,34 (q, 2H, J = 7,2), 4,09 (s, 2H), 2,78 (m, 2H), 1,38 (t, 3H, J = 7,2), 1,28 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para CnH15NO3SNa: 264,0670; hallado, 264,0676.

3-(4,5-dimetiltiofen-2-il)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-7): obtenido como un aceite (0,69 g, 31% a partir de 4,5-dimetiltiofen-2-carbaldehído), usando borohidruro de sodio a 0°C, después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCh): 9,77 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 4,34 (q, 2H, J = 7,2), 4,03 (s, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,37 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para CnH15NSO3Na: 264,0670; hallado, 264,0656.

2-(hidroxiimino)-3-(5-(trifluorometil)furan-2-il)propanoato de etilo (S-8): obtenido como un sólido blanco (0,62 g, 36% a partir de 5-trifluorometilfuran-2-carbaldehído), usando borohidruro de sodio a 0°C, después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 99/1) y (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCh): 9,70 (s, 1H), 6,72- 6,64 (m, 1H), 6,21 - 6,15 (m, 1H), 4,33 (q, 2H, J = 7,1), 4,05 (s, 2H), 1,34 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹⁰H¹¹F³NO⁴: 266,0640; hallado, 266,0584.

2-(hidroxiimino)-3-(piridin-2-il)propanoato de etilo (S-9): obtenido como un sólido (4,94 g, 49% a partir de picolinaldehído) después de una cromatografía (diclorometano - etanol 97/3). 1H RMN (cDcb): 10,53 (s, 1H), 8,53 (m, 1H), 7,61 (dt, 1H, J = 1,8, 7,5), 7,29 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 4,29 (q, 2H, J = 7,1), 4,23 (s, 2H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). Hr Ms : calculado para C¹⁰H¹³N²O³: 209,0926; hallado, 209,0857.

2-(hidroxiimino)-3-(piridin-3-il)propanoato de etilo (S-10): obtenido como un sólido de color tostado (7,19 g, 43% a partir de nicotinaldehído) después de una cromatografía (diclorometano - etanol de 97/3 a 96/4). 1H RMN (CDCh): 12,79 (s, 1H), 8,65 (m, 1H), 8,46 (dd, 1H, J = 1,6, 4,9), 7,74 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 4,30 (q, 2H, J = 7,1), 4,01 (s, 2H), 1,32 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹⁰H¹³N²O³: 209,0926; hallado, 209,0921.

2-(hidroxiimino)-3-(2-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (S-11): obtenido como un sólido blanco (1,05 g, 33% a partir de 2-(trifluorometil)benzaldehído), 90% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 4/1 a 3/1). 1H RMN (CDCla): 9,66 (s, 1H), 7,68 (d(a), 1H, J = 7,5), 7,45 (m, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,16 (d(a), 1H, J = 7,7), 4,29 (q, 2H, J = 7,2), 4,23 (s, 2H), 1,27 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C12H12F3NO3Na: 298,0667; hallado, 298,0660.

2-(hidroxiimino)-3-(3-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (S-12): obtenido como un sólido blanco (1,3 g, 41% a partir de 3-(trifluorometil)benzaldehído)) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 4/1 a 3/1). 1H RMN (CDCla): 9,87 (s, 1H), 7,62 (s(a), 1H), 7,50 (m, 2H), 7,42 (m, 1H), 4,32 (q, 2H, J = 7,0), 4,05 (s, 2H), 1,35 (t, 3H, J = 7,0). HRMS: calculado para C12H12F3NO3Na: 298,0667; hallado, 298,0643.

2- (hidroxiimino)-3-(4-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (S-13): obtenido como un sólido blanco (4,61 g, 62% a partir de 4-(trifluorometil)benzaldehído)) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 99/1). 1H RMN (CDCls): 9,76 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 4,32 (q, 2H, J = 7,1), 4,05 (s, 2H), 1,35 (t, 3H, J = 7.1) . HRMS: calculado para C¹²H¹³F³NO³: 276,0847; hallado, 276,0834.

3- (4-clorofenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-14): obtenido como un sólido blanco (2,31 g, 37% a partir de 4-clorobenzaldehído), usando borohidruro de sodio a 4°C durante la noche, después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCh): 9,70 (s, 1H), 7,27 (m, 4H), 4,31 (q, 2H, J = 7,1), 3,96 (s, 2H), 1,35 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para CnHuClNOaNa, 264,0403; hallado, 264,0437.

3-(2-clorofenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-15): De un lote de 13,1 g, usando borohidruro de sodio a 4°C, solo se purificó una muestra de 0,5 g mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1) y una recristalización en ciclohexano para dar un sólido blanco (0,36 g). 1H RMN (CDCh): 9,47 (s, 1H), 7,38 (m, ¹H), 7,18 (m, 3H), 4,30 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,13 (s, 2H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para CnH12ClNO3Na: 264,0403; hallado, 264,0401.

3- (4-bromofenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-16): obtenido como un sólido blanco (1,43 g, 42% a partir de 4- bromobenzaldehído), usando borohidruro de sodio a 4°C durante la noche, después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCh): 9,70 (s, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 4,31 (q, 2H, J = 7.1) , 3,96 (s, 2H), 1,32 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para CnH13BrNO3, 286,0079; hallado, 286,0056.

3-(2-fluorofenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-17): obtenido como un sólido blanco (3,11 g, 57% a partir de 2-fluorobenzaldehído), después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCh): 10,20 (s, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 4,30 (q, 2H, J = 7,1), 4,04 (s, 2H), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para CnH12FNO3Na: 248,0699; hallado, 248,0704.

3-(3-fluorofenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-18): obtenido como un sólido blanco (9,46 g, 65% a partir de 3-fluorobenzaldehído) después de una cromatografía (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCh): 10,02 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 4,32 (q, 2H, J = 7,2), 3,99 (s, 2H), 3,74 (m, 1H), 1,35 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para CnH^PNOaNa: 248,0699; hallado, 248,0699.

3-(2,4-difluorofen¡l)-2-(h¡drox¡¡mino)propanoato de etilo (S-19): obtenido como un sólido blanco (2,21 g, 50% a partir de 2,4-difluorobenzaldehído) después de una cromatografía (ciclohexano - acetato de etilo 6/1). 1H RMN (CDCta): 1H RMN (CDCta): 9,72 (s, 1H), 7,22 (m, 1H), 6,80 (m, 2H), 4,30 (q, 2H, J = 7,1), 3,98 (s, 2H), 1,33 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para CnH11F2NO3Na: 266,0605; hallado, 266,0601.

2-(h¡drox¡¡m¡no)-3-(o-tol¡l)propanoato de etilo (S-20): obtenido como un sólido blanco (3,38 g, 61% a partir de 2-metilbenzaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCla): 10,09 (s, 1H), 7,16 (m, 4H), 4,28 (q, 2H, J = 7,1), 4,00 (s, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,31 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C12H15NO3Na: 244,0950; hallado, 244,0942.

2-(h¡drox¡¡m¡no)-3-(p-tol¡l)propanoato de etilo (S-21): obtenido como un sólido blanco (3,31 g, 60% a partir de 4-metilbenzaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCta): 10,07 (s, 1H), 7,24 (m, 2H), 7,11 (m, 2H), 4,31 (q, 2H, J = 7,1), 3,97 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,35 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C12H15NO3Na: 244,0950; hallado, 244,0944.

2-(h¡drox¡¡m¡no)-3-(4-¡soprop¡lfen¡l)propanoato de etilo (S-22): obtenido como un sólido (2,04 g, 48% a partir de 4-isopropilbenzaldehído) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1).). 1H RMN (CDCta): 9,74 (s, 1H), 7,26 - 7,22 (m, 2H), 7,16 - 7,11 (m, 2H), 4,29 (q, 2H, J = 7,1), 3,95 (s, 2H), 2,87 (hept, 1H, J = 6,9), 1,32 (t, 3H, J = 7,1), 1,23 (d, 6H, J = 6,9). HRMS: calculado para CuH ¹gNO³Na, 272,1263; hallado, 272,1258.

Síntesis adicional de ésteres de a-oximas S, mediante reacciones de acoplamiento carbono-carbono

Preparación de 3-(5-c¡cloprop¡lfuran-2-¡l)-2-(h¡drox¡¡m¡no)propanoato de etilo (S-23). Etapa 1, síntesis de 2-((5-bromofuran-2-il)metilen)malonato de dietilo. Se dispersó 2-(furan-2-ilmetilen)malonato de dietilo (Coll. Czech. Chem. Commun., 1987, 2534) (2 g, 8,39 mmol) en ácido acético (20 ml) y luego se le añadió N-bromosuccinimida (2,98 g, 16,78 mmol). Esto se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se diluyó en acetato de etilo, se lavó abundantemente con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1) para dar el derivado bromado como un sólido naranja (1,1 g, 41%). 1H RMN (CDCta): 1H RMN (CDCta): 7,35 (s, 1H), 6,71 (d, 1H, J = 3,5), 6,44 (d, 1H, J = 3,5), 4,41 (q, 2H, J = 7,1), 4,29 (q, 2H, J = 7,1), 1,41 (t, 3H, J = 7,1), 1,33 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C12H13BrO5Na, 338,9844; hallado, 338,9868. Alternativamente, una condensación de Knoevenagel entre 5-bromofurfural y malonato de dietilo usando las condiciones descritas anteriormente también dio este compuesto (4,72 g, 87%). Etapa 2: síntesis de 2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metilen)malonato de dietilo: se dispersaron 2-((5-bromofuran-2-il)metilen)malonato de dietilo (4,7 g, 14,8 mmol), ácido ciclopropilborónico (1,66 g, 19,3 mol) y carbonato de cesio (18,84 g, 57,8 mmol) en una mezcla 95/5 de tolueno y agua (120 ml). Esto se desgasificó insuflando una corriente suave de argón en la suspensión, se le añadió [1,1 '-b¡s(d¡fen¡lfosf¡no)ferroceno] dicloropaladio complejado con diclorometano (0,30 g, 0,36 mmol) y esto se calentó a reflujo bajo argón durante 50 minutos. La solución oscura resultante se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 8/1) para dar el derivado que lleva ciclopropilo como un aceite (3,12 g, 75%). 1H RMN (CDCta): 7,32 (s, 1H), 6,65 (d, 1H, J = 3,4), 6,09 (d, 1H, J = 3,4), 4,37 (q, 2H, J = 7,1), 4,25 (q, 2H, J = 7,1), 1,89 (tt, 1H, J = 8,4, 5,0), 1,37 (t, 3H, J = 7,1), 1,30 (t, 3H, J = 7,1), 1,01 - 0,93 (m, 2H), 0,88 - 0,79 (m, 2H). HRMS: calculado para C ^s O a N a , 301,1052; hallado, 301,1034. Etapa 3 y 4: síntesis de 3-(5-c¡cloprop¡lfuran-2-¡l)-2-(h¡drox¡¡m¡no)propanoato de etilo (S-23): a partir del compuesto anterior, utilizando la preparación general de ésteres de oximas descrita anteriormente, utilizando borohidruro de sodio durante la noche a 4°C para la etapa de reducción, se obtuvo este compuesto como un sólido naranja (1,09 g, 44% a partir de 2-((5-c¡cloprop¡lfuran-2-¡l)met¡len)malonato de dietilo) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1). 1H RMN (CDCta): 1H RMN (CDCta): 9,42 (sa, 1H), 5,97 (m, 1H), 5,84 (d, 1H, J = 8,1), 4,33 (q, 2H, J = 7,1), 3,97 (s, 2H), 1,84 (m, 1H), 1,36 (t, 3H, J = 7,1), 0,84 (m, 2H), 0,73 (m, 2H). HRMS (m/z): Hr MS: calculado para C12H^NO4Na, 260,0899; hallado, 260,0892.

Preparación de 2-(h¡drox¡¡m¡no)-3-(3-prop¡lfen¡l)propanoato de etilo (S-24): Etapa 1, preparación de 2-(4-bromobenciliden)malonato de dietilo. Usando una condensación de Knoevenagel entre 3-bromobenzaldehído y malonato de dietilo usando las condiciones descritas anteriormente, este compuesto se obtuvo como un aceite que se usó directamente en la siguiente etapa. Etapa 2, preparación de 2-(3-c¡cloprop¡lbenc¡l¡den)malonato de dietilo. Utilizando el protocolo descrito anteriormente para la preparación de 2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metilen)malonato de dietilo, este compuesto se obtuvo como un aceite (4,68 g, 60% a partir de 3-bromobenzaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCta): 7,72 (s, 1H), 7,27 (m, 2H), 7,17 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 4,36 (q, 2H, J = 7,1), 4,32 (q, 2H, J = 7,1), 1,90 (m, 1H), 1,35 (t, 3H, J = 7,1), 1,32 (t, 3H, J = 7,1). Etapa 3, preparación de 2-(3-propilbencil)malonato de dietilo. Una hidrogenación catalítica de dos días de duración con paladio al 10% sobre carbono tal como se describió anteriormente, proporcionó este compuesto que se utilizó directamente en la etapa final. Etapa 4, una reacción de oximación del 2-(3-propilbencil)malonato de dietilo bruto usando la condición general descrita anteriormente dio S-24 (0,2 g, 14% a partir de 2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metilen)malonato de dietilo) como un sólido blanco después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCta): 9,74 (sa, 1H), 7,19 (m, 3H), 7,05 (m, 1H), 4,31 (q, 2H, J = 7,2), 3,99 (s, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,65 (m, 2H), 1,34 (t, 3H, J = 7,2), 0,96 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para Ci4Hi9NÜ3Na, 272,1263; hallado, 272,1250.

Preparación de 2-(hidroxiimino)-3-(4-propilfenil)propanoato de etilo (S-25): Utilizando los mismos procedimientos descritos para la preparación de 2-(hidroxiimino)-3-(3-propilfenil)propanoato de etilo (S-24), este isómero se obtuvo (2,64 g, 56% a partir de 4-bromobenzaldehído) como un sólido blanco después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 6/1). 1H RMN (CDCh): 9,64 (s, 1H), 7,26 (m, 2H), 7,11 (m, 2H), 4,31 (q, 2H, J = 7,2), 3,98 (s, 2H), 2,57 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,34 (t, 3H, J = 7,2), 0,95 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C14H19NÜ3Na, 272,1263; hallado, 272,1276.

3-(3-ciclopropilfenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-26). Utilizando la preparación general de ésteres de oximas descrita anteriormente, usando borohidruro de sodio durante la noche a 4°C para la etapa de reducción, este compuesto se obtuvo como un aceite incoloro (1,72 g, 50% a partir de 2-(3-ciclopropilbenciliden)malonato de dietilo) después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 6/1). 1H RMN (CDCh): 9,99 (sa, 1H), 7,20 (m, 3H), 6,91 (m, 1H), 4,31 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,88 (m, 1 H), 1,34 (t, 3H, J = 7,2), 0,96 (m, 2H), 0,69 (m, 2H). HRMS: calculado para CwH17NÜ3Na, 270,1106; hallado, 270,1112.

3-(4-ciclopropilfenil)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-27). Utilizando la preparación general de ésteres de oximas descrita anteriormente, usando borohidruro de sodio durante la noche a 4°C para la etapa de reducción, este compuesto se obtuvo como un sólido amarillo pálido (1,03 g, 27% a partir de 4-bromobenzaldehído) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 6/1). 1H RMN (CDCh): 9,31 (s, 1H), 7,22 (m, 2H), 6,99 (m, 2H), 4,29 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,95 (s, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,33 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,93 (m, 2H), 0,67 (m, 2H). HRMS: calculado para CuH17NÜ3Na, 270,1106; hallado, 270,1109.

Síntesis adicional de ésteres de a-oximas utilizando otros métodos

3-(4,5-dimetiloxazol-2-il)-2-(hidroxiimino)propanoato de etilo (S-28): En una atmósfera inerte, se disolvió 2,4,5-trimetiloxazol (1,05 g, 9,44 mmol) en tetrahidrofurano seco (10 ml). La solución se enfrió hasta -78°C con un baño de hielo seco y se le añadió diisopropilamina de litio 2 N en tetrahidrofurano (4,7 ml, 9,44 mmol). Esto se agitó durante 5 minutos y se le añadió oxalato de dietilo (1,28 ml, 9,92 mmol) y la solución se dejó calentar de nuevo hasta 20°C y se agitó adicionalmente durante 10 minutos. La solución se diluyó en agua, se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El aceite resultante se disolvió en etanol (100 ml), se añadieron clorhidrato de hidroxilamina (2,76 g, 39,7 mmol) y piridina seca (3,3 ml, 40,8 mmol) y esto se calentó a reflujo durante 6 horas. La suspensión resultante se diluyó en agua, se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 1/1) y la fracción correspondiente se dispersó en ciclohexano a ebullición y se filtró después de enfriar para producir el éster de oxima objetivo como un polvo blanco (0,15 g, 7%). 1H RMN (CDCh): 11,99 (s, 1H), 4,30 (q, 2H, J = 7,2), 4,08 (s, 2H), 2,20 (d, 3H, J = 0,8), 2,05 (d, 3H, J = 0,8), 1,31 (t, 3H, J = 7,2). Los experimentos de correlación a larga distancia establecieron la regioselectividad de la reacción. HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁴N²Ü⁴, 227,1032; hallado, 227,1035.

2-(hidroxiimino)-3-fenilbutanoato de etilo (S-29): Etapa 1: preparación de 2-(1-feniletil)malonato de dietilo: bajo una protección de cloruro de calcio, se disolvió malonato de dietilo (5,32 g, 0,033 mol) en DMF seco (50 ml, secado sobre tamices moleculares de 4 Á) y se le añadió hidruro de sodio al 60% en aceite mineral (1,39 g, 0,0348 mol) en porciones mientras se mantenía la temperatura de la solución a 20°C con un baño de agua. Esto se agitó hasta el final del desprendimiento de hidrógeno y se añadió (1-cloroetil)benceno 4,8 ml, 0,036 mol). Esto se agitó durante 7 días, se diluyó en agua y acetato de etilo, la fase orgánica se lavó 5 veces con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad a alto vacío para eliminar el malonato de dietilo sin reaccionar y el (1-cloroetil)benceno para dar un aceite (6,22 g) lo suficientemente puro para la siguiente etapa. Etapa 2: reacción con nitrito de isoamilo. En una atmósfera inerte, se disolvieron 4,68 g del aceite resultante en etanol seco (50 ml, secado sobre tamices moleculares de 4 Á) y se enfrió a 0°C con hielo. Se añadió una solución de etanolato de sodio al 21% en etanol (7,7 ml, 0,0207 mol) seguido del nitrito de isoamilo (2,6 ml, 0,0194 mol). Esto se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La solución resultante se trató luego tal como se describió anteriormente para la preparación general de ésteres de a-oximas y se obtuvo como un aceite (1,07 g, 14% a partir de malonato de dietilo) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCl3, esta vez es una mezcla separable pero que se equilibra lentamente de los dos isómeros de oxima): 10,69 (s, 0,2H), 9,72 (s, 0,8H), 4,82 (q, 0,8H, J = 7,2), 4,21 (m, 2H), 4,02 (q, 0,2H, J = 7,2), 1,68 (d, 2,4H, J = 7,2), 1,54 (d, 0,6H, J = 7,2), 1,26 (t, 2,4H, J = 7,3), 1,15 (t, 0,6H, J = 7,3). HRMS: calculado para C12H15NÜ3Na, 244,0950; hallado, 244,0939.

Método general para la reducción de los ásteres de a-oximas S a a-aminoésteres B. Se disolvió el éster de a-oxima sustituido considerado (0,065 mol) en etanol (70 ml) y ácido clorhídrico al 37% (49 ml, 0,58 mol) y la solución se enfrió hasta °C. Se añadió en porciones zinc en polvo (12,9 g, 0,19 mol, tamaño inferior a 10 gm). Se dejó agitar durante 2 horas, se diluyó en agua, se basificó con amoniaco al 22%, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera y se concentró hasta sequedad para producir el aminoéster puro. Si se utilizó una oxima bruta, la fase orgánica se contraextrajo con ácido clorhídrico 1 N, la fase acuosa ácida se basificó nuevamente con amoníaco al 22% y se extrajo con acetato de etilo, esta fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad para producir el aminoéster que, en algunos casos, se purificó adicionalmente tal como se describe a continuación.

2-amino-3-ciclopentilpropanoato de etilo (B-13): obtenido como un aceite (1,16 g, 85%). 1H RMN (CDCh): 4,17 (q, 2H, J = 7,2), 3,42 (dd, 1H, J = 5,8, 8,1), 1,93 (m, 1H), 1,80 (m, 2H), 1,75-1,48 (m, 8H), 1,27 (t, 3H, J = 7,2), 1,12 (m, 2H). HRMS: calculado para C¹⁰H²⁰NO²: 186,1494; hallado, 186,1491.

2-amino-3-ciclohexilpropanoato de etilo (B-14): obtenido como un aceite (2,35 g, 92%). 1H RMN (CDCh): 4,17 (m, 2H), 3.48 (dd, 1H, J = 5,8, 8,7), 1,72 (m, 5H), 1,61-137 (m, 5H), 1,28 (t, 3H, J = 7,3), 1,28-1,10 (m, 3H), 0,92 (m, 2H). HRMS: calculado para C¹¹H²²NO²: 200,1651; hallado, 200,1648.

2-amino-3-(biciclo[2.2.1]heptan-2-il)propanoato de etilo (B-15): obtenido como un aceite (1,21 g, 92%) como una mezcla de cuatro diastereoisómeros (visto por cuatro señales de COOEt en 13C). 1H RMN (CDCb): 4,17 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 2,16 (m, 1,6H), 1,91 (m, 1H), 1,75 (m, 1,6H), 1,50 (m, 5H), 1,28 (m, 5,9H), 1,10 (m, 2,4H), 0,64 (m, 0,6H). HRMS: calculado para C¹²H²²NO²: 212,1651; hallado, 212,1650.

2-amino-3-(tetrahidrofuran-2-il)propanoato de etilo (B-16): obtenido como un aceite (5,68 g, 36% a partir de furfural) como mezcla de dos diastereoisómeros en una proporción de 3/2. 1H RMN (CDCh): Isómero mayoritario: 4,17 (q, 2H, J = 7,3), 4,01 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,62 (dd, 1H, J = 8,9; 3,5), 2,03 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,68 (ddd, 2H, J = 3,5, 8,9, 13,8), 1,68 (s, 2H), 1,51 (m, 1H), 1,27 (t, 3H, J = 7,3). Isómero minoritario: 4,17 (q, 2H, J = 7,2), 4,01 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,56 (dd, 1H, J = 7,3, 5,4), 2,03 (m, 1H), 1,89 (m, 2H), 1,80 (m, 2H), 1,61 (s, 2H), 1.49 (m, 1H), 1,27 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C⁹H¹⁸NO³: 188,1287; hallado, 188,1258.

2-amino-3-(4,5-dimetiltiofen-2-il)propanoato de etilo (B-17): obtenido como un aceite (0,46 g, 87%). 1H RMN (CDCh): 6,54 (s, 1H), 4,22 (d, 2H, J = 7,1), 3,66 (dd, 1H, J = 4,8, 7,4), 3,17 (dd, 1H, J = 4,8, 14,5), 3,03 (dd, 1H, J = 7,4, 14,5), 2,29 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 1,59 (s, 2H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹¹H¹¹NO²S: 228,1058; hallado, 228,1053.

2-amino-3-(3-metiltiofen-2-il)propanoato de etilo (B-18): obtenido como un aceite (1,10 g, 89%). 1H RMN (CDCh): 7,08 (d, 1H, J = 5,1), 6,80 (d, 1H, J = 5,1), 4,20 (m, 2H), 3,70 (dd, 1H, J = 5,1, 7,6), 3,23 (dd, 1H, J = 5,1, 14,7), 3,04 (dd, 1H, J = 7,6, 14,7), 2,20 (s, 3H), 1,59 (s, 2H), 1,28 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁶NO²S: 214,0902; hallado, 214,0901.

2-amino-3-(5-etiltiofen-2-il)propanoato de etilo (B-19): obtenido como un aceite (1,18 g, 92%). 1H RMN (CDCh): 6,66 (m, 1H), 6,61 (m, 1H), 4,21 (q, 2H, J = 5,1, 7,2), 3,68 (dd, 1H, J = 4,8, 7,3), 3,21 (dd, 1H, J = 4,8, 14,7), 3,04 (dd, 1H, J = 7,3, 14,7), 2,80 (m, 2H), 1,62 (s, 2H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1), 1,29 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁸NO²S: 228,1058; hallado, 228,1055.

2-amino-3-(o-tolil)propanoato de etilo (B-20): obtenido como un aceite (2,69 g, 85%). 1H RMN (CDCh): 7,16 (m, 4H), 4,17 (q, 2H, J = 7,2), 3,71 (dd, 1H, J = 8,7, 5,6), 3,14 (dd, 1H, J = 13,8, 5,6), 2,84 (dd, 1H, J = 13,8, 8,7), 2,82 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO²: 208,1338; hallado, 208,1332.

2-amino-3-(p-tolil)propanoato de etilo (B-21): obtenido como un aceite (2,70 g, 87%). 1H RMN (CDCh): 7,11 (m, 4H), 4,19 (q, 2H, J = 7,1), 3,70 (dd, 1H, J = 7,9, 5,3), 3,07 (dd, 1H, J = 13,6, 5,3), 2,84 (dd, 1H, J = 13,6, 7,9), 2,34 (s, 3H), 1,28 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO²: 208,1338; hallado, 208,1333.

2-amino-3-(piridin-2-il)propanoato de etilo (B-22): obtenido como un aceite (2,21 g, 56%). 1H RMN (CDCh): 8,55 (m, 1H), 7,61 (dt, 1H, J = 1,9, 7,6), 7,18 (m, 1H), 7,15 (m, 1H), 4,18 (q, 2H, J = 7,2), 3,98 (dd, 1H, J = 4,8, 8,2), 3,28 (dd, 1H, J = 4,8, 14,2), 3,04 (dd, 1H, J = 8,2, 14,2), 1,70 (s, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁵N²O²: 195,1134; hallado, 195,1062.

2-amino-3-(piridin-3-il)propanoato de etilo (B-23): obtenido como un aceite (4,07 g, 63%). 1H RMN (CDCh): 8,49 (m, 2H), 7,56 (m, 1H), 7,22 (ddd, 1H, J = 0,8, 4,8, 5,6), 4,16 (q, 2H, J = 7,2), 3,70 (dd, 1H, J = 5,5, 7,5), 3,05 (dd, 1H, J = 5,5, 13,5), 2,88 (dd, 1H, J = 7,5, 13,5), 1,46 (s, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁵N²O²: 195,1134; hallado, 195,1131.

2-amino-3-(2-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (B-24): obtenido como un aceite (0,72 g, 78%, 90% de pureza).

1H RMN (CDCla): 7,58 (d, 1H, J = 8,1), 7,41 (m, 1H), 7,32 (d, 1H, J = 7,7), 7,26 (m, 1H), 4,07 (m, 2H), 3,66 (dd, 1H, J = 5,7, 8,9), 3,21 (dd, 1H, J = 5,7; 14,3), 2,86 (dd, 1H, J = 8,9, 14,3), 1,45 (s, 2H), 1,13 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁵F³NO²: 262,1055; hallado, 262,1082.

2-amino-3-(3-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (B-25): obtenido como un aceite (0,75 g, 78%). 1H RMN (CDCI³): 7,51 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,43 (m, 2H), 4,17 (q, 2H, J = 7,3), 3,74 (dd, 1H, J = 5,5, 7,5), 3,13 (dd, 1H, J = 5,5, 13,8), 2.96 (dd, 1H, J = 7,5, 13,8), 1,51 (s, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C¹²H¹⁵F³NO²: 262,1055; hallado, 262,1054.

2-amino-3-(4-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (B-26): obtenido como un aceite (1,23 g, 91%). 1H RMN (CDCh): 7,58 (d, 2H, J = 8,3), 7,35 (d, 2H, J = 8,3), 4,18 (q, 2H, J = 7,3), 3,74 (dd, 1H, J = 5,8, 7,8), 3,14 (dd, 1H, J = 5,8; 13,4), 2.96 (dd, 1H, J = 7,8, 13,4), 1,50 (s, 2H), 1,25 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C¹²H¹⁵F³NO²: 262,1055; hallado, 262,1129.

2-amino-3-(2-fluorofenil)propanoato de etilo (B-27): obtenido como un aceite (2,57 g, 88%). 1H RMN (CDCh): 7,23 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 4,17 (q, 2H, J = 7,1), 3,76 (dd, 1H, J = 7,9, 5,9), 3,11 (dd, 1H, J = 13,6, 5,9), 2,93 (dd, 1H, J = 13,6, 7,9), 1,24 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁵FNO², 212,1087; hallado, 212,1089.

2-amino-3-(2,4-difluorofenil)propanoato de etilo (B-28): obtenido como un aceite (1,11 g, 85%). 1H RMN (CDCh): 7,19 (m, 1H), 6,80 (m, 2H), 4,15 (q, 2H, J = 7,1), 3,70 (dd, 1H, J = 7,9, 5,9), 3,04 (dd, 1H, J = 13,7, 5,9), 2,89 (dd, 1H, J = 13,7, 7,9), 1,52 (s, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁴F²NO², 230,0993; hallado, 230,1006.

2-amino-3-(4-clorofenil)propanoato de etilo (B-29): obtenido como un aceite (1,48 g, 73%). 1H RMN (CDCh): 7,29 (m, 2H), 7,16 (m, 2H), 4,18 (q, 2H, J = 7,3), 3,69 (dd, 1H, J = 5,6, 7,5), 3,05 (dd, 1H, J = 5,6; 13,7), 2,84 (dd, 1H, J = 7,5, 13.7) , 1,47 (s (1), 2H), 1,26 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para CnH^ClNOa, 228,0791; hallado, 228,0806.

2-amino-3-(2-clorofenil)propanoato de etilo (B-30): obtenido como un aceite (3,73 g, 19% a partir de 2-clorobenzaldehído). 1H RMN (CDCla): 7,38 (m, 1H), 7,22 (m, 3H), 4,16 (m, 2H), 3,84 (dd, J = 8,5, 5,8 Hz, 1H), 3,24 (dd, J = 13,5, 5,8 Hz, 1H), 3,96 (dd, J = 13,5, 8,5 Hz, 1H), 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H). HRMS: calculado para CnH^ClNOa: 228,0791; hallado, 228,0791.

2-amino-3-(4-bromofenil)propanoato de etilo (B-31): obtenido como un aceite (0,61 g, 76%). 1H RMN (CDCh): 7,44 (m, 2H), 7,10 (m, 2H), 4,18 (q, 2H, J = 7,3), 3,69 (dd, 1H, J = 5,3, 7,7), 3,04 (dd, 1H, J = 5,3, 13,7), 2,84 dd, 1H, J = 7,7, 13.7) , 1,47 (s(l), 2H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para CnH ¹aBrNO², 272,0286; hallado, 272,0296.

2-amino-3-(3-fluorofenil)propanoato de etilo (B-32): obtenido como un aceite (4,89 g, 89%). 1H RMN (CDCh): 7,27 (m, 1H), 7,01-6,92 (m, 3H), 4,18 (q, 2H, J = 7,0), 3,72 (dd, 1H, J = 5,4, 7,9), 3,08 (dd, 1H, J = 5,4, 13,7), 2,88 (dd, 1H, J = 7.9, 13,7), 1,49 (s, 2H), 1,26 (t, 3H, J = 7,0). HRMS: calculado para C¹¹H¹⁵FNO²: 212,1087; hallado, 212,1088.

Clorhidrato de 2-amino-3-(4-isopropilfenil)propanoato de etilo (B-33): obtenido como un aceite que se trató inmediatamente con una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano y se concentró hasta sequedad para dar la sal clorhidrato como un polvo blanco (1,9 g, 91% de pureza). 1H RMN (DMSO-afe): 8,23 (s, 3H), 7,22- 7,12 (m, 4H), 4,16 -4,02 (m, 3H), 3,16 (dd, 1H, J = 13,9, 5,8), 3,01 (dd, 1H, J = 13,9, 7,8), 2,86 (hept, 1H, J = 6,9), 1,18 (d, 6H, J = 6,9), 1,06 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹⁴H²²NO²: 236,1651; hallado, 236,1651.

2-amino-3-(4-ciclopropilfenil)propanoato de etilo (B-34): obtenido como un aceite (0,71 g, 80%). 1H RMN (CDCh): 7,09 (m, 2H), 7,01 (m, 2H), 4,18 (q, 2H, J = 7,0), 3,70 (dd, 1H, J = 5,2, 7,9), 3,06 (dd, 1H, J = 5,2, 13,7), 2,83 (dd, 1H, J = 7.9, 13,7), 1,87 (m, 1H), 1,54 (s, 2H), 1,28 (t, 3H, J = 7,0), 0,95 (m, 2H), 0,68 (m, 2H). HRMS: calculado para C¹⁴H²⁰NO²: 234,1494; hallado, 234,1490.

2-amino-3-(3-ciclopropilfenil)propanoato de etilo (B-35): obtenido como un aceite (1,66 g, 89%). 1H RMN (CDCh): 7,19 (m, 1H), 6,95 (m, 3H), 4,19 (q, 2H, J = 7,0), 3,71 (dd, 1H, J = 5,2, 7,9), 3,05 (dd, 1H, J = 5,2; 13,5), 2,83 (dd, 1H, J = 7.9, 13,5), 1,88 (m, 1H), 1,53 (s, 2H), 1,28 (t, 3H, J = 7,0), 0,95 (m, 2H), 0,68 (m, 2H). HRMS: calculado para C¹⁴H²⁰NO²: 234,1494; hallado, 234,1496.

Clorhidrato de 2-amino-3-(4-propilfenil)propanoato de etilo (B-36): obtenido como un aceite que se trató inmediatamente con una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano y se concentró hasta sequedad para dar la sal clorhidrato como un polvo blanco (2,46 g, 85%). 1H RMN (DMSO-d6): 8,59 (sa, 3H), 7,15 (s, 4H), 4,20 (dd, J = 7,5, 5.9 Hz, 1H), 4,10 (m, 2H), 3,16 (dd, J = 7,9, 5,9 Hz, 1H), 3,02 (dd, J = 14,2, 7,9 Hz, 1H), 2,54 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1.09 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C¹⁴H²²NO²: 236,1651; hallado, 236,1659.

Clorhidrato de 2-amino-3-(3-propilfenil)propanoato de etilo (B-37): obtenido como un aceite que se trató inmediatamente con una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano y se concentró hasta sequedad para dar la sal clorhidrato como un polvo blanco (1,89 g 90%). 1H RMN (DMSO-d6): 8,72 (sa, 3H), 7,24 (m, 1H), 7,08 (m, 3H), 4,18 (dd, J = 7,9, 5,6 Hz, 1H), 4,08 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,21 (dd, J = 13,9, 5,6 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 13,9, 7,9 Hz, 1H), 2,53 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C¹⁴H²²NO²: 236,1651; hallado, 236,1637.

2-amino-3-(5-(trifluorometil)furan-2-il)propanoato de etilo (B-38): obtenido como un aceite de 95% de pureza (0,53 g, 93%). 1H RMN (CDCla): 6,66 (dd, 1H, J = 3,3, 1,2), 6,20 - 6,15 (m, 1H), 4,20 - 4,10 (m, 2H), 3,79 - 3,73 (m, 1H), 3,08 (dd, 1H, J = 15,0, 5,4), 2,99 (dd, 1H, J = 15,0, 7,1), 1,60 (sa, 2H), 1,22 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C10H13F3NO3, 252,0847; hallado, 252,0852.

2-amino-3-(5-ciclopropilfuran-2-il)propanoato de etilo (B-39): obtenido como un aceite (0,70 g, 88%). 1H RMN (CDCI³): 5,99 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,85 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 4,20 (q, 2H, J = 7,2), 3,74 (dd, 1H, J = 7,1, 5,1), 3,03 (dd, 1H, J = 14,8, 5,1), 2,93 (dd, 1H, J = 14,8, 7,1), 1,84 (m, 1H), 1,36 (t, 3H, J = 7,2), 0,84 (m, 2H), 0,73 (m, 2H). HRMS: calculado para C¹²H¹⁷NO³, 224,1287; hallado, 224,1282.

2-amino-3-(4,5-dimetiloxazol-2-il)propanoato de etilo (B-40): obtenido como un aceite (0,23 g, 74%). 1H RMN (CDCh): 4,19 (m, 2H), 3,90 (dd, 1H, J = 4,5, 8,1), 3,14 (dd, 1H, J = 4,5, 15,0), 2,96 (dd, 1H, J = 8,1, 15,0), 2,27 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,84 (s (1), 2H), 1,26 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C¹⁰H¹⁷N²O³, 213,1229; hallado, 213,1230.

2-amino-3-fenilbutanoato de etilo (B-41): obtenido como un aceite (0,76 g, 88%) que contiene una mezcla 1/2 de dos diastereoisómeros. 1H RMN (CDCla): 7,39-7,21 (m, 5H), 4,20 (q, 1,3H, J = 7,1), 4,20 (q, 0,7H, J = 7,1), 3,62 (d, 0,3H, J = 6,0), 3,56 (d, 0,7H, J = 7,2), 3,18 (m, 0,3H), 3,12 (m, 0,3H), 1,44 (s, 2H), 1,36 (d, 2H, J = 7,2), 1,34 (d, 1H, J = 6,0), 1,29 (t, 2H, J = 7,1), 1,16 (t, 1H, J = 7,1). HRMS: calculado para C¹²H¹⁸NO², 208,1338; hallado, 208,1331.

Preparación de 2-amino-4-fenilbutanoato (B-42): se calentaron 5-fenil-4,5-dihidroisoxazol-3-carboxilato de etilo (documento WO20100142801, 2010) (0,47 g, 2,14 mmol), formiato de amonio (2,7 g, 21,4 mmol) y paladio al 10% sobre carbono (0,11 g, 0,10 mmol) a reflujo en etanol (50 ml) durante una hora. Esto se filtró, el producto insoluble se lavó con una pequeña cantidad de etanol y se añadió ácido clorhídrico al 37% (1,6 ml, 13,6 mmol) antes de añadir zinc en polvo (0,42 g, 6,3 mmol) en porciones. Esto se agitó durante 90 min, la solución resultante se diluyó en agua básica con amoniaco al 22% y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad para producir el aminoéster eomo un aceite (0,32 g, 72%).

1H RMN (CDCla): 7,31 (m, 2H), 7,22 (m, 3H), 4,19 (m, 2H), 3,46 (dd, 1H, J = 5,3, 7,9), 2,76 (m, 2H), 2,07 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,65 (s, 2H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1).

Preparación de 2-amino-3-(1,3-dioxolan-2-il)propanoato de etilo (B-43): Etapa 1: Se disolvió el 2-((1,3-dioxolan-2-il)metil)malonato de dietilo (7,8 g, 0,317 mol) descrito anteriormente (J. Org. Chem., 2006, 360) en etanol (40 ml) y se añadió gota a gota hidróxido de potasio (1,78 g, 0,0317 mol) disuelto en etanol (60 ml)). La solución se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se calentó brevemente a reflujo. Este se concentró, se disolvió en agua que se hizo más básica con amoniaco al 22%. La fase acuosa se lavó con diclorometano, se aciduló con ácido clorhídrico al 37%, se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir ácido 2-((1,3-dioxolan-2-il)metil)-3-etoxi-3-oxopropanoico (3,85 g, 55%).

1H RMN (CDCl3): 5,05 (t, 1H, J = 3,7), 4,24 (q, 2H, J = 7,1), 3,98 (m, 2H), 3,82 (m, 2H), 3,64 (t, 1H, J = 6,9), 2,40 (m, 2H), 1,30 (t, 3H, J = 7,1). Etapa 2: Bajo argón, este compuesto (3,85 g, 0,0176 mol) se disolvió en tolueno (50 ml, secado sobre molecular de 4A). Se le añadió trietilamina (2,95 ml, 0,021 mol) y luego difenilfosforilazida (4,18 ml, 0,021 mol). Se agitó a 80°C durante 1 h30, se eliminó el tolueno a vacío y el aceite resultante se extrajo repetidamente con ciclohexano. La concentración hasta sequedad de este extracto condujo a un aceite que se agitó a temperatura ambiente en ácido clorhídrico al 4% (50 ml) durante la noche. La solución resultante se diluyó en más ácido, se lavó con acetato de etilo, la fase acuosa se basificó con amoníaco al 22%, se extrajo con acetato de etilo y esta fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad para producir el aminoéster como un aceite (0,14 g, 16%). 1H RMN (CDCh): 5,05 (dd, 1H, J = 4,3, 5,0), 4,0 (m, 2H), 3,87 (m, 2H), 3,66 (dd, 1H, J = 4,6, 8,2), 2,15 (ddd, 1H, J = 4,6, 5,0, 14,2), 1,94 (ddd, 1H, J = 4,3, 8,2, 14,2), 1,57 (s, 2H), 1,29 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C⁸H¹⁶NO⁴, 190,1079; hallado, 190,1061.

Síntesis de piperazin-2-onas E, preparación representativa de (3S,5S) y (3S,5R)-3-bencil-5-fenilpiperazin-2-onas. Etapa a, preparación de (2-nitro-1-feniletil)-L-fenilalaninato de etilo: se añadió 2-nitrovinilbenceno (3,78 g, 0,025 mol) a una base libre recién extraída de éster etílico de L-fenilalanina (4,9 g, 0,025 mol). Al agitar en un rotavapor a temperatura ambiente, la suspensión se homogeneizó en aproximadamente 10 minutos para dar el aducto 1,4 C. Etapa b, preparación de (2-amino-1-feniletil)fenilalaninato de etilo: este aceite se dispersó en una solución fría de dioxano (100 ml) y ácido clorhídrico al 37% (38,7 ml, 0,33 mol). Se añadió polvo de zinc (7,45 g, 0,11 g, <10 gm) en porciones en el transcurso de 10 minutos. Luego se dejó que la temperatura subiera hasta temperatura ambiente y la suspensión se agitó durante 2 horas. Esto se diluyó en agua, se basificó con un exceso de amoniaco al 22% y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre carbonato de sodio y se concentró hasta sequedad para dar el compuesto D bruto como un aceite Etapa c, preparación de 3-bencil-5-fenilpiperazin-2-onas E: bajo una atmósfera de argón, este aceite se calentó a 140°C durante 3 horas. El etanol se eliminó a vacío y el sólido resultante se sometió a procedimientos de purificación tal como se describe a continuación. Nota: cuando se separan, la atribución de estructura de estos pares de diastereoisómeros puede realizarse comprobando la existencia (o no) de un efecto nOe entre H-3 y H-5.

(3S,5R)-3-bencil-5-fenilpiperazin-2-ona (E-1): La mezcla en bruto de diastereoisómeros se dispersó en ciclohexano en ebullición para eliminar el éster de L-fenilalanina sin reaccionar y el sólido resultante se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 96/4 a 95/5) para producir este compuesto como un sólido blanco (2,05 g, 35%). 1H RMN (CDCl3): 7,42- 7,29 (m, 9H), 7,26 - 7,20 (m, 1H), 6,27 (s, 1H), 4,06 (dd, 1H, J = 9,7, 4,7), 3,84 (dt, 1H, J = 10,1, 3,4), 3,60 (dd, 1H, J = 13,6, 3,1), 3,41 - 3,25 (m, 2H), 2,91 (dd, 1H, J = 13,6, 10,1), 1,78 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁹N²O, 267,1497; hallado: 267,1459.

(3S,5S)-3-bencil-5-fenilpiperazin-2-ona (E-2): una segunda fracción cromatográfica proporcionó este isómero en forma de un sólido blanco (1,29 g, 22%). 1H RMN (CDCh): 7,46 - 7,18 (m, 10H), 6,44 (s, 1H), 4,27 (dd, 1H, J = 9,6; 4,0), 3,89 (dd, 1H, J = 10,7, 3,6), 3,54 - 3,44 (m, 1H), 3,41 (dt, 1H, J = 11,5, 4,0), 3,32 (dd, 1H, J = 13,8; 3,6), 3,18 (dd, 1H, J = 13,8, 10,7), 1,79 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁹N²O, 267,1497; hallado: 267,1435.

3-Bencil-5-(p-tolil)p¡peraz¡n-2-ona (E-3): Este compuesto se obtuvo como una mezcla en bruto de los dos diastereoisómeros (5,40 g) dispersando el sólido resultante en ciclohexano en ebullición y filtrando a 20°C y se utilizó directamente en la etapa de aromatización. HRMS: calculado para C¹⁸H²⁰N²O, 281,1654; hallado: 281,1649.

3-Benc¡l-5-(m-tol¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-4): Se obtuvo una muestra analítica de una mezcla de los dos diastereoisómeros mediante una recristalización en ciclohexano, pero la mayor parte del sólido y el filtrado se utilizaron directamente en la etapa de aromatización. HRMS: calculado para C¹⁸H²⁰N²O, 281,1654; hallado: 281,1645.

C is^-^-m etilbencil^-fenilpiperazin^-ona (E-5): Este compuesto se obtuvo como un polvo blanco (4,04 g, 26%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 98/2 a 95/5) y una dispersión en ciclohexano en ebullición. 1H RMN (CDCl3): 7,40 - 7,27 (m, 6H), 7,14 (m, 3H), 6,58 (s (a), 1H), 4,03 (dd, 1H, J = 4,1, 10.5) , 3,82 (d (a), 1H, J = 10,5), 3,68 (dd, 1H, J = 2,7; 14,0); 3,36 (m; 2H); 2,92 (dd; 1H; J = 10,8, 13,7), 2,45 (s, 3H), 1,77 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O, 281,1654; hallado: 281,1652.

Trans^-^-metilbenciO^-fenilpiperazin^-ona (E-6): Este compuesto se obtuvo como un polvo blanco (2,77 g, 17%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 98/2 a 95/5) y una dispersión en ciclohexano en ebullición. 1H RMN (CDCh): 7,41 - 7,30 (m, 5H), 7,14 (m, 4H), 6,80 (s (a), 1H), 4,35 (dd, 1H, J = 5,0, 9.8) , 3,89 (dd, 1H, J = 3,3, 11,2), 3,43 (m, 2H), 3,39 (dd, 1H, J = 3,3, 13,9), 3,16 (dd, 1H, J = 11,2, 13,9), 2,40 (s, 3H), 1,76 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O, 281,1654; hallado: 281,1652.

C is^-^-m etilbencil^-fenilpiperazin^-ona (E-7): Este compuesto se obtuvo como un polvo blanco (3,70 g, 26%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 98/2 a 95/5) y una dispersión en ciclohexano en ebullición. 1H RMN (CDCh): 7,40 - 7,28 (m, 5H), 7,20 (m, 1H), 7,13 (m, 2H), 7,04 (m, 1H), 6,72 (s (a), 1H), 4,05 (dd, 1H, J = 5,4, 9,5), 3,83 (d (a), 1H, J = 10,4), 3,58 (dd, 1H, J = 3,0, 13,6), 3,35 (m, 2H), 2,86 (dd, 1H, J = 10,4, 13,6), 2,34 (s, 3H), 1,80 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O, 281,1654; hallado: 281,1649.

Trans^-^-m etilbencil^-fenilpiperazin^-ona (E-8): Este compuesto se obtuvo como un polvo blanco (2,73 g, 19%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 98/2 a 95/5) y una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCla): 7,39 - 7,30 (m, 5H), 7,19 (m, 1H), 7,05 (m, 3H), 6,81 (s (a), 1H), 4,26 (dd, 1H, J = 4,0, 9.9) , 3,87 (dd, 1H, J = 3,8, 10,7), 3,45 (m, 2H), 3,28 (dd, 1H, J = 3,5, 13,7), 3,14 (dd, 1H, J = 10,7, 13,7), 2,31 (s, 3H), 1.81 (s, 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O, 281,1654; hallado: 281,1656.

^S^R ^-bencil^-^-m etoxifen iO piperazin^-ona (E-9): Este isómero se obtuvo como un vidrio (1,06 g, 25%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 96/4 a 95/5) y (ciclohexano - acetato de etilo de 1/2 a 1/3). 1H RMN (CDCla): 7,40-7,22 (m, 7H), 6,98 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 6,69 (s (a), 1H), 4,39 (dd, 1H, J = 3,7, 10,7), 3,74 (s, 3H), 3,85 (dd, 1H, J = 3,2, 9,2), 3,53 (dd, 1H, J = 3,5, 13,7), 3,44 (ddd, 1H, J = 4,0, 8,0, 11,0), 3,28 (t, 1H, J = 11,0), 3,01 (dd, 1H, J = 8,3, 13,7), 1,90 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1591.

(35.55) -3-benc¡l-5-(2-metox¡fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-10): Este isómero se obtuvo como un sólido blanco (0,52 g, 12%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 96/4 a 95) y (acetato de etilo - etanol de 1/0 a 99/1). 1H RMN (CDCls): 7,36-7,20 (m, 7H), 6,94 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 6,65 (s (a), 1H), 4,64 (dd, 1H, J = 4,2, 8,1), 3,77 (s, 3H), 3,71 (dd, 1H, J = 3,3, 10,8), 3,59 (m, 1H), 3,47 (ddd, 1H, J = 1,0, 11,2), 3,36 (dd, 1H, J = 3,3, 13,7), 3,09 (dd, 1H, J = 10,8, 13,7), 2,08 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1589.

(3S,5R)-3-benc¡l-5-(3-metox¡fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-11): Este isómero se obtuvo como un vidrio (1,33 g, 30%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y (ciclohexano - acetato de etilo 1/4). 1H RMN (CDCls): 7,34-7,20 (m, 6H), 6,94 (m, 2H), 6,83 (m, 1H), 6,72 (s (a), 1H), 4,02 (dd, 1H, J = 6,3, 8,7), 3,83 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,58 (dd, 1H, J = 3,3, 13,4), 3,34 (m, 2H), 2,91 (dd, 1H, J = 10,3, 13,4), 1,90 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1582.

(35.55) -3-benc¡l-5-(3-metox¡fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-12): Este isómero se obtuvo como un vidrio (0,84 g, 19%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y (acetato de etilo - etanol de 1/0 a 99/1). 1H RMN (CDCh): 7,33-7,22 (m, 6H), 6,94 (m, 2H), 6,85 (m, 1H), 6,76 (s (a), 1H), 4,22 (dd, 1H, J = 4,1, 9.5) , 3,88 (dd, 1H, J = 3,6, 10,6), 3,80 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 3,31 (dd, 1H, J = 3,6, 13,8), 3,16 (dd, 1H, J = 10,7, 13,8), 1.81 (s (a), ¹H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1584.

(3S,5R)-3-benc¡l-5-(4-metox¡fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-13): Este isómero se obtuvo como un vidrio (1,37 g, 27%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y (ciclohexano - acetato de etilo 1/4). 1H RMN (CDCh): 7,28 (m, 7H), 6,87 (m, 2H), 6,38 (s (a), 1H), 3,99 (dd, 1H, J = 4,3; 10,3), 3,82 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,58 (dd, 1H, J = 3,8, 13,6), 3,31 (m, 2H), 2,89 (dd, 1H, J = 10,2, 13,6), 1,90 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1585.

(35.55) -3-benc¡l-5-(4-metox¡fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-14): este isómero se obtuvo como un polvo blanco (0,81 g, 16%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y (acetato de etilo - etanol de 1/0 a 99/1). 1H RMN (CDCh): 7,28 (m, 7H), 6,81 (m, 2H), 6,73 (s (a), 1H), 4,19 (dd, 1H, J = 4,0, 9,8), 3,86 (dd, 1H, J = 3,6, 10,6), 3,80 (s, 3H), 3,44 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 3,36 (td, 1H, J = 3,8, 11,5), 3,30 (dd, 1H, J = 3,8, 13,9), 3,17 (dd, 1H, J = 10,6, 13,9), 1,85 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1533.

(3S,5R)-3-bencil-5-(2-fluorofen¡l)piperaz¡n-2-ona (E-15): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (4,06 g, 39%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 96/4 a 94/6) y (ciclohexano - acetato de etilo de 2/3 a 1/3) seguido de una dispersión en ciclohexano en ebullición y secado exhaustivo a 70°C a vacío. 1H RMN (CDCla): 7,49 (m, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,26 (m, 2H), 7,16 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,65 (s (a), 1H), 4,42 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,57 (dd, 1H, J = 3,3, 13,8), 3,29 (t, 1H, J = 10,9), 2,95 (dd, 1H, J = 9,1, 13,8), 1,73 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1391.

^S^S^-bencil^-^-fluoro feniO piperazin^-ona (E-16): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (2,16 g, 20%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 96/4 a 94/6). 1H RMN (CDCl3): 7,44 (m, 1H), 7,27 (m, 6H), 7,13 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 6,74 (s (a), 1H), 4,65 (dd, 1H, J = 4,3, 9,1), 3,84 (dd, 1H, J = 3,5, 10,8), 3,48 (m, 2H), 3,34 (dd, 1H, J = 3,8, 13,7), 3,15 (dd, 1H, J = 10,7, 13,7), 1,78 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1367.

3-benc¡l-5-(2,6-d¡fluorofen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-17): Este compuesto se obtuvo como una mezcla 1/1 de diastereoisómeros después de una recristalización en ciclohexano (1,97 g, 62%). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁷F²N²O: 303,1309, encontrado: 303,1323.

^S^R ^-bencil^-^-fluorofen iO piperazin^-ona (E-18): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (1,26 g, 29%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97/3 a 95/5) y (ciclohexano - acetato de etilo 1/2 a 1/3). 1H RMN (CDCla): 7,28 (m, 7H), 7,01 (m, 2H), 6,61 (s (a), 1H), 4,05 (t, 1H, J = 7,3), 3,82 (d, 1H, J = 9,3), 3,58 (dd, 1H, J = 3,0, 13,6), 3,31 (m, 2H), 2,89 (dd, 1H, J = 9,8, 13,6), 1,72 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1342.

(35.55) -3-benc¡l-5-(4-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-19): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (1,26 g, 29%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y (acetato de etilo - etanol 99/1). 1H RMN (CDCls): 7,29 (m, 7H), 7,05 (m, 2H), 6,79 (s (a), 1H), 4,21 (dd, 1H, J = 4,5, 9,5), 3,86 (dd, 1H, J = 3,7, 10,6), 3,40 (m, 2H), 3,16 (dd, 1H, J = 10,7, 13,9), 1,74 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1315.

3-bencil-5-(3-fluorofenil)piperazin-2-ona (E-20): Esta mezcla de isómeros se obtuvo como un aceite, después de lavarla con ciclohexano para eliminar el éster etílico de etilfenilalanina sin reaccionar, y se usó directamente en la etapa de aromatización.

(3S,5R)-3-benc¡l-5-(4-(benc¡lox¡)fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-21): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (0,92 g, 17%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 95/5 a 92/8) y (ciclohexano -acetato de etilo 1/2) y una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCl3): 7,45 - 7,21 (m, 12H), 6,94 (m, 2H), 6,47 (s (a), 1H), 5,06 (s, 2H), 4,00 (dd, 1H, J = 4,3; 10,1), 3,83 (dd, 1H, J = 3,0, 10,1), 3,59 (dd, 1H, J = 3,0, 13,6), 3,32 (m, 2H), 2,90 (dd, 1H, J = 10,1, 13,6), 1,73 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C²⁵H²⁵N²O³: 373,1916, encontrado: 373,1932.

(35.55) -3-benc¡l-5-(4-(benc¡lox¡)fen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-22): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (0,59 g, 11%) después de dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 95/5 a 92/8) y (acetato de etilo -etanol de 1/0 a 99/1). 1H RMN (CDCh): 7,45 - 7,23 (m, 12H), 6,96 (m, 2H), 6,67 (s (a), 1H), 5,07 (s, 2H), 4,21 (dd, 1H, J = 4,0, 9,6), 3,85 (dd, 1H, J = 3,5, 10,7), 3,40 (m, 2H), 3,31 (dd, 1H, J = 3,5, 13,8), 3,18 (dd, 1H, J = 10,7, 13,7), 1,76 (s (a), 1 h ). Hr MS: calculado para C²⁵H²⁵N²O³: 373,1916, encontrado: 373,1907.

(3S,5R)-3-benc¡l-5-(4-(benc¡lox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-23): Este isómero se obtuvo como un polvo (2,47 g, 54%, 90% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 98/2 a 95/5). 1H RMN (CDCl3): 7,44 - 7,21 (m, 10H), 7,15 (m, 1H), 7,01 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 6,19 (s (a), 1H), 5,13 (s, 2H), 3,96 (m, 1H), 3,81 (dd, 1H, J = 3,0, 10,1), 3,58 (dd, 1H, J = 3,0, 13,8), 3,28 (m, 2H), 2,88 (dd, 1H, J = 10,2, 13,8), 1,71 (s (a), 1 h ). HRMS: calculado para C²⁴H²⁵FN²O³: 391,1822, encontrado: 391,1828.

(35.55) -3-benc¡l-5-(4-(benc¡lox¡)-3-fluorofen¡l)p¡peraz¡n-2-ona (E-24): Este isómero se obtuvo como un polvo (0,5 g, 11%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 98/2 a 95/5). 1H RMN (CDCh): 7,45 - 7,22 (m, 10H), 7,13 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 6,19 (s (a), 1H), 5,14 (s, 2H), 4,15 (dd, 1H, J = 4,1,9,3), 3,86 (dd, 1H, J = 3,6, 10,4), 3,45 - 3,33 (m, 2H), 3,29 (dd, 1H, J = 4,1, 14,4), 3,16 (dd, 1H, J = 10,8, 13,8), 1,71 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C²⁴H²⁵FN²O³: 391,1822, encontrado: 391,1828.

C¡s-3-(2-fluorobenc¡l)-5-fen¡lp¡peraz¡n-2-ona (E-25): Este isómero racémico se obtuvo a partir de B-27 como un polvo blanco (2,85 g, 31%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y una dispersión en ciclohexano en ebullición. 1H RMN (CDCh): 7,35 (m, 6H), 7,21 (m, 1H), 7,07 (m, 2H), 6,60 (s (a), 1H), 4,08 (dd, 1H, J = 6,4, 8,3), 3,92 (dd, 1H, J = 3,1,9,6), 3,65 (dd, 1H, J = 3,0, 14,0), 3,34 (m, 2H), 2,97 (dd, 1H, J = 9,6, 14,0), 1,78 (s (a), 1H). HRm S: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1412.

Trans-3-(2-fluorobencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-26): Este isómero racémico se obtuvo a partir de B-27 como un polvo blanco (2,15 g, 23%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 95/5) y una recristalización de una muestra en ciclohexano con fines analíticos. 1H RMN (CDCI³): 7,40-7,26 (m, ⁶H), 7,21 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 6,92 (s (a), 1H), 4,33 (dd, 1H, J = 3,9; 9,8), 3,92 (dd, 1H, J = 3,9, 10,6), 3,51 -3,33 (m, 3H), 3,27 (dd, 1H, J = 4,0, 14,0), 1,72 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1410.

3-(2-clorobencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-27): Este compuesto se obtuvo a partir de B-30 como un polvo blanco que contiene una mezcla de los dos diastereoisómeros después de una recristalización en ciclohexano (2,21 g, 45%).

1H RMN (CDCla): 7,42-7,29 (m, 7H), 7,25-7,14 (m, 2H), 6,85 (sa, 0,4H), 6,69 (sa, 0,6H), 4,37 (dd, J = 9,8, 4,2 Hz, 0,4H), 4,10-3,98 (m, 1,4H), 3,83 (dd, J = 13,8, 3,4 Hz, 0,6H), 3,51-3,30 (m, 3H), 3,02 (dd, J = 13,8, 9,8 Hz, 0,6H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹BCIN²O: 301,1108; hallado, 301,1117.

Cis-3-(2-metoxibencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-28): Este isómero se obtuvo como un polvo (4,03 g, todavía conteniendo el 5% del aminoéster) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97,5/2,5).

1H RMN (CDCI³): 7,39-7,27 (m, ⁶H), 7,21 (m, 1H), 6,89 (m, 2H), 6,38 (s (a), 1H), 4,05 (dd, 1H, J = 5,3, 9,3), 3,92 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,75 (dd, 1H, J = 3,3, 13,7), 3,35 (m, 2H), 2,88 (dd, 1H, J = 10,3, 13,7), 1,81 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1607.

Trans-3-(2-metoxibencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-29): Este isómero se obtuvo como un polvo (2,23 g, 24%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97,5/2,5). 1H RMN (CDCI³): 7,39-7,30 (m, 5H), 7,21 (m, 2H), 6,92 (m, 1H), 6,82 (m, 1H), 6,70 (s (a), 1H), 4,36 (dd, 1H, J = 3,9; 9,9), 3,97 (dd, 1H, J = 3,9, 10,7), 3,68 (s, 3H), 3,46 3,32 (m, 4H), 3,26 (dd, 1H, J = 3,8, 13,5), 1,83 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 297,1603, encontrado: 297,1604.

Cis-3-(3-fluorobencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-30): Este isómero se obtuvo como un polvo (2,25 g, 13%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97,5/2,5) y una recristalización en una mezcla de tolueno y ciclohexano. 1H RMN (CDCI³): 7,40-7,24 (m, ⁶H), 7,10 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,62 (s (a), 1H), 4,07 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H, J = 2,9, 10,0), 3,55 (dd, 1H, J = 2,9, 13,5), 3,34 (m, 2H), 2,93 (dd, 1H, J = 10,0, 13,5), 1,74 (s (a), ¹h ). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁹FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1400.

Trans-3-(3-fluorobencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-31): Este isómero se obtuvo como un polvo (2,49 g, 15%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97,5/2,5). 1H RMN (CDCI³): 7,35 (m, 5H), ^{7 , 2 6}(m, 3H), 6,70 (s (a), 1H), 4,21 (dd, 1H, J = 4,2, 9,3 Hz, 1H), 3,87 (dd, 1H, J = 3,8, 10,3), 3,54-3,41 (m, 2H), 3,30 (dd, 1H, J = 3,8, 14,0), 3,30 (dd, 1H, J = 10,3, 14,0), 1,77 (s (a), 1H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁹FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1409.

3-(4-fluorobencil)-5-fenilpiperazin-2-ona (E-32): Este compuesto se obtuvo como un polvo blanco (0,9 g, 59% a partir de fenilnitroestireno), como una mezcla de diastereoisómeros después de una recristalización en ciclohexano. HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁸FN²O: 285,1403, encontrado: 285,1408.

(3S,5S)-3-metil-5-fenilpiperazin-2-ona (E-33): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (0,2 g, 12%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 9/1) y una recristalización en una mezcla de tolueno-ciclohexano. Nota: mediante una simple recristalización del producto de reacción bruto, se obtuvo un rendimiento global mucho mejor (7,49 g, 47%) de una mezcla 1/1 de estos isómeros en dos lotes. 1H RMN (CDCI³): 7.37 (m, 5H), 6,47 (s, 1H), 4,16 (dd, 1H, J = 4,2, 10,3), 3,75 (d, 1H, J = 6,9), 3,41 (m, 2H), 1,46 (d, 3H, J = 6,9). HRMS calculado para C¹¹H¹⁴N²O H: 191,1184 Encontrado: 191,1109.

(3S,5R)-3-metil-5-fenilpiperazin-2-ona (E-34): Este isómero se obtuvo como un polvo blanco (0,19 g, 11%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 97/3 a 9/1) y una recristalización en una mezcla de tolueno-ciclohexano. Nota: simplemente recristalizando el producto de reacción bruto, se obtuvo un rendimiento mucho mejor (7,49 g, 47%) de una mezcla 1/1 de estos isómeros en dos lotes de recristalización. 1H RMN (CDCI³): 7.38 (m, 5H), ^{6 , 8 6}(s, 1H), 4,29 (dd, 1H, J = 4,2, 10,3), 3,78 (q, 1H, J = 7,0), 3,47 (m, 2H), 1,51 (d, 3H, J = 7,0). HRMS calculado para C¹¹H¹⁴N²O H: 191,1184 Encontrado: 191,1138.

3-Bencil-6-metil-5-fenilpiperazin-2-ona (E-35): Se obtuvo una mezcla de diversos diastereoisómeros de este compuesto después de eliminar el éster etílico de fenilalanina sin reaccionar a alto vacío a 180°C y una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - metanol de 98/2 a 95/5). Una de estas fracciones pudo recristalizarse en ciclohexano para dar el diastereoisómero único (0,8 g, 7%) descrito a continuación (con una configuración indeterminada). En cualquier caso, este compuesto también, como las otras fracciones que contienen diferentes diastereoisómeros, se utilizaron en la siguiente etapa. 1H RMN (CDCI³): 7,38-7,28 (m, 7H), 7,24-7,20 (m, 3H), 6,62 (s, 1H), 3,90-3,87 (dd, 1H, J = 10,2, 3,8), 3,70-3,63 (m, 2H), 3,30-3,16 (m, 2H), 1,73 (s, 1H), 1,03-0,98 (m, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H²¹N²O: 281,1654, encontrado: 281,1659.

2-Bencil-1,4a,5,10b-tetrahidro-2H-cromeno[3,4-b]pirazin-3(4H)-ona (E-36): Este compuesto se preparó como se describió anteriormente a partir de 3-nitro-2H-cromeno (Synthesis, 1984, 348; Bioorg. Med. Chem., 2011,5420) pero ejecutando la etapa de adición a 0°C durante la noche y se obtuvo, al calentar a reflujo el sólido resultante en ciclohexano, como una mezcla inseparable que contenía un diastereoisómero mayoritario (4,75 g, 76%). 1H RMN (CDCI³): 7,38 - 7,29 (m, 16H), 7,20 (m, 1H), 7,02 (s (a), 1H), 6,97 (m, 1H), 6,85 (m, 1H), 4,31 (dd, 1H, J = 4,3; 10,3), 3,99 (m, 2H), 3,90 (dd, 1H, J = 3,8, 10,0), 3,68 (ddd, 1H, J = 3,9, 9,6, 11,1), 3,30 (dd, 1H, J = 3,9, 13,6), 3,12 (dd, 1H, ^J ^{= 10,0, 13,6), 1,79 (s (a), 1H).}HRmS: ^{calculado para C18H19N2O2 : 295,1447, encontrado: 295,1402.}

Procedimiento general para la síntesis de pirazin-2-oles H utilizando azufre. La piperazin-2-ona (0,011 mol) y el azufre (0,72 g, 0,0225 mol) considerados se calentaron a reflujo en 1,3-diclorobenceno (40 ml) durante 10 horas. Esto se concentró hasta sequedad y el residuo se purificó tal como se describe a continuación.

3-Metil-5-fenilpirazin-2-ol (H-1): Obtenido a partir de E-33 y/o E-34 como un polvo beige (1,33 g, 69%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:2). 1H RMN (DMsO-afe) 12,31 (s, ¹H), 7,83 (m, 3H), 7,39 (m, 2H), 7,28 (m, 1H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹¹H¹¹N²O: 187,0871; hallado, 187,0808.

3-(2-Fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-2): Obtenido a partir de E-25 y/o E-26 como un polvo blanco (3,66 g, 88%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol 97,7:2,5). 1H RMN (DMSO-afe) 12,45 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,73 (m, 2H), 7,38-7,22 (m, 5H), 7,19-7,12 (m, 2H), 4,12 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁴FN²O: 281,1090; hallado, 281,1087.

3-(2-Clorobencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-3): Obtenido a partir de E-27 como un polvo (2,06 g, 68%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol 98:2) y una dispersión en una mezcla en ebullición de tolueno y ciclohexano. 1H RMN (DMSO): 12,47 (sa, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,46 (m, 1H), 7,32 (m, 5H), 7,25 (m, 1H), 4,22 (s, 2H). HRMS: calculado para C17Hu CIN2O: 297,0795; hallado, 297,0795.

3-(2-Metoxibencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-4): Obtenido a partir de (E-28) y/o (E-29) como un polvo blanco (1,7 g, 30%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol de 98,5:1,5 a 97,5:2,5) y una dispersión en una mezcla en ebullición de ciclohexano y tolueno. 1H RMN (DMSO-afe) 12,35 (s (a), 1H), 7,86 (s, 1H), 7,73 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,23 (m, 2H), 7,11 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 4,04 (s, 2H), 3,75 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²O²: 293,1290; hallado, 293,1280.

3-(3-Fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-5): Obtenido a partir de E-30 y/o E-31 como un polvo blanco (3,92 g, 88%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano/etanol 98: 2). Se recristalizó una muestra en una mezcla de ciclohexano y tolueno con fines analíticos. 1H RMN (DMSO-afe) 12,45 (s (a), 1H), 7,89 (s, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,41-7,26 (m, 4H), 7,17 (m, 2H), 7,04 (m, 1H), 4,10 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁴FN²O: 281,1090; hallado, 281,1650.

3-(4-Fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-6): Este compuesto bruto se obtuvo a partir de E-32 después de evaporación hasta sequedad y se usó directamente en la etapa de cloración sin ninguna purificación.

3-Bencil-5-fenilpirazin-2-ol (H-7): Este compuesto se obtuvo a partir de E-1 y/o E-2 como un polvo blanco (2,28 g, 73%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 98/2 a 97/3). 1H RMN (DMSO-afe) 12,41 (s, 1H), 7,85 (m, 3H), 7,40 (m, 4H), 7,30 (m, 3H), 7,20 (m, 1H), 4,07 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁵N²O: 263,1184; hallado, 263,1118.

3-Bencil-5-(p-tolil)pirazin-2-ol (H-8): Se aisló una muestra pura (1,48 g) de este compuesto (obtenido a partir de E-3) como un sólido blanco mediante una dispersión de la mezcla en bruto en diclorometano, el filtrado concentrado y la mayor parte de este sólido se utilizaron directamente en la siguiente etapa. 1H RMN (DMSO-afe) 12,35 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,40-7,17 (m, 7H), 4,06 (s, 2H), 2,30 (s, 3H). HRMS: calculado para C ^ H ^ O N a : 299,1160; hallado, 299,1177.

3-Bencil-5-(m-tolil)pirazin-2-ol (H-9): Se obtuvo una fracción en bruto de E-4 y se aisló mediante filtración del precipitado resultante y lavado con tolueno. Se obtuvo una muestra analítica a partir de una recristalización en tolueno del filtrado concentrado. 1H RMN (DMSO-afe) 12,35 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,66 (m, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,33-7,17 (m, 5H), 7,08 (m, 1H), 4,07 (s, 2H)), 2,33 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹sH¹⁶N²ONa: 299,1160; hallado, 299,1172.

3-(2-Metilbencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-10): Este compuesto se obtuvo a partir de E-5 y/o E-6 como un polvo (5,65 g, 88%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 99/1 - 98/2). 1H RMN (d Ms O-Od) 12,40 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,77 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,16 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 4,08 (s, 2H), 2,37 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²ON: 277,1341; hallado, 277,1392.

3-(3-Metilbencil)-5-fenilpirazin-2-ol (H-11): Este compuesto se obtuvo a partir de E-7 y/o E-8 como un polvo (5,52 g, 88%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 99/1 - 98/2) y una muestra (0,29 g) se recristalizó en una mezcla de tolueno y ciclohexano (0,27 g). 1H RMN (DMSO-afe) 12,38 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,28 (m, 1H), 7,16 (m, 3H), 7,01 (m, 1H), 4,03 (s, 2H), 2,26 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²ON: 277,1341; hallado, 277,1395.

3-Bencil-5-(2-metoxifenil)pirazin-2-ol (H-12): Este compuesto se obtuvo a partir de E-9 y/o E-10 como un polvo (0,54 g, 79%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97/3) 1H RMN (CDCI³): 13,33 (s (a), 1H), 8,05 (s, 1H), 8,02 (dd, J = 7,7, 1,7 Hz, 1H), 7,51 - 7,42 (m, 2H), 7,37 - 7,28 (m, 3H), 7,25 - 7,19 (m, 1H), 7,08 (td, J = 7,7, 1,0 Hz, 1H), 7,02- 6,94 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 3,92 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²O², 293,1290; hallado, 293,1253.

3-Bencil-5-(4-metoxifenil)pirazin-2-ol (H-13): Este compuesto se obtuvo a partir de E-13 y/o E-14 como un polvo (0,9 g, 45%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98/2). 1H RMN (DMSO-afe) 12,30 (s, 1H), 7,77 (m, 3H), 7,30 (m, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,21 (m, 1H), 6,96 (m, 2H), 4,06 (s, 2H), 3,77 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²O²: 293,1290; hallado, 293,1284.

3-Bencil-5-(3-metoxifenil)pirazin-2-ol (H-14): Se obtuvo una muestra analítica de este compuesto como un polvo blanco después de una recristalización del residuo resultante en tolueno, el resto se utilizó directamente en la siguiente etapa.

1H RMN (DMSO-afe) 12,41 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,41 (m, 8H), 6,85 (m, 1H), 4,07 (s, 2H), 3,77 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²O²: 293,1290; hallado, 293,1279.

3-Bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-ol (H-15): Este compuesto se obtuvo a partir de (E-21) y/o (E-22) como un polvo (0,8 g, 62 %) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98/2). 1H Rm N (CDCh) 12,31 (s, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,40 (m, 4H), 7,37 (m, 9H), 7,19 (m, 1H), 7,03 (m, 2H), 5,13 (s, 2H), 4,06 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁴H²²N²O²: 369,1603; hallado, 369,1603.

3-Bencil-5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)pirazin-2-ol (H-16): Este compuesto se obtuvo a partir de E-23 y/o E-24 como un polvo (2 g) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 985/15) y se recristalizó una muestra en tolueno con fines analíticos. 1H RMN (DMSO-afe) 12,40 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,68 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,48-7,12 (m, 11H), 5,20 (s, 2H), 4,06 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁴H²⁰FN²O²: 387,1509; hallado, 387,1514.

3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-ol (H-17): Este compuesto se obtuvo a partir de E-15 y/o E-16 como un polvo blanco (3,38 g, 62%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 975/25) y una recristalización en tolueno. 1H RMN (DMSO-afe) 12,38 (s, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,28 (m, 8H), 4,06 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁴FN²O: 281,1090; hallado, 281,1050.

3-bencil-5-(2,6-difluorofenil)pirazin-2-ol (H-18): Este compuesto se obtuvo a partir de E-17 como un polvo blanco (1,45 g, 83%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 99/1). 12,49 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,27 (m, 4H), 7,19 (m, 3H), 4,01 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³F²N²O: 299,0996; hallado, 299,0994.

3-bencil-5-(4-fluorofenil)pirazin-2-ol (H-19): Este compuesto se obtuvo a partir de E-18 y/o E-19 como un polvo blanco (0,43 g, 72%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 1/1). 1H RMN (DMSO-ofe) 12,4 (s, 1H), 7,87 (m, 3H), 7,22 (m, 7H), 4,06 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁴FN²O: 281,1090; hallado, 281,1030.

3-Bencil-5-(3-fluorofenil)pirazin-2-ol (H-20): Este compuesto se obtuvo a partir de E-20 como un polvo naranja puro al 90% (1,69 g) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98/2). 1H RMN (DMSO-afe) 12,50 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,42-7,17 (m, 6H), 7,08 (m, 1H), 4,07 (s, 2H). CL-EM (m/z) = 281.

Síntesis de pirazin-2-ol H mediante la etapa d a través de 1-óxidos de 5-oxo-2,3,4,5-tetrahidropirazina J, preparación representativa de 3-bencil-5-fenilpirazin-2-ol (H-7). Etapa 1, preparación de 1-óxido de 6-bencil-5-oxo-2-fenil-2,3,4,5-tetrahidropirazina (J-1): Se disolvió la 3-bencil-5-fenilpiperazin-2-ona (intermedios E-1/E2) (0,44 g, 1,65 mmol) en ácido acético (5 ml) y se añadió una solución al 36% de ácido peracético en ácido acético (0,77 g, 3,63 mmol). Esto se agitó durante la noche, se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre un tamiz molecular y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 1/1 a 1/2) para producir el N-óxido (0,26 g, 56%) como un polvo blanco. Nota, las correlaciones COSY establecieron firmemente las estructuras de este compuesto. 1H RMN (CDCh): 7,43 (m, 2H), 7,35-7,20 (m, 6H), 7,15 (m, 2H), 6,84 (s (a), 1H), 5,12 (t, 1H, J = 4,4), 4,13 (s, 2H), 4,00 (dd, 1H, J = 4,4, 13,3), 3,63 (dt, 1H, J = 4,4, 13,3). HRMS: calculado para C¹⁷H¹⁷N²O²: 281,1190; hallado, 281,1234. Etapa 2: reordenamiento térmico del N-óxido. En un vial adaptado para microondas, se disolvió J-1 bruto (0,41 g, 1,46 mmol) en clorobenceno (5 ml). Esto se selló y se calentó en un horno microondas a 190°C durante dos horas. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 3/2) para dar 3-bencil-5-fenilpirazin-2-ol (H-7) (0,20 g, 52% a partir de los intermedios E-1/E2) con datos analíticos idénticos a los descritos anteriormente.

3-Bencil-6-metil-5-fenilpirazin-2-ol (H-21): Obtenido a partir de E-35, o los otros diastereoisómeros, mediante 1-óxido de 6-bencil-3-metil-5-oxo-2-fenil-2,3,4,5-tetrahidropirazina, tal como se describió anteriormente después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 2/1) y una recristalización en ciclohexano para obtener una muestra analíticamente pura. 1H RMN (CDCh) 13,33 (s, 1H), 7,48 (m, 6H), 7,39 (m, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (m, 1H), 4,19 (s, 2H), 2,37 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁷N²O: 277,1341; hallado, 277,1344.

Síntesis de 2-bencil-5H-cromeno [3,4-b]pirazin-3-ol (H-22): En atmósfera inerte, en un tubo provisto de tapón de Teflón, se agitaron (E-36) (0,1 g, 0,34 mmol) y N-yodosuccinimida (0,16 g, 0,69 mmol) en DMF seco (4 ml) a 60°C durante 90 minutos y luego 24 horas a 20°C. La solución resultante se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 3/1) para dar el compuesto esperado como un polvo (0,03 g, 30%). 1H RMN (DMSO-afe): 12,33 (s, 1H), 7,78 (dd, 1H, J = 1,6 y 7,6), 7,37-7,25 (m, 4H), 7,23-7,16 (m, 2H), 7,05 (dt, 1H, J = 1,0, 8,5), 6,91 (dd, 1H, J = 0,8, 8,1), 5,13 (s, 2H), 4,07 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁵N²O²: 291,1133, encontrado 291,1066.

Preparación general de a-aminoamidas F a partir de a-aminoésteres B. En un reactor de acero, se dispersó el aaminoéster considerado (0,065 mol, ya sea como base libre o como clorhidrato) en amoniaco metanólico 7 N (50 ml). Esto se calentó a 70°C durante 16-19 horas, se concentró hasta sequedad y el residuo se purificó tal como se describe adicionalmente a continuación.

2-Amino-3-fenilpropanamida (F-1) Obtenido a partir del clorhidrato del éster etílico de fenilalanina como un sólido blanco (10,29 g, 78%) tras 19 horas de calentamiento y una dispersión del residuo en isopropanol en ebullición (tres siembras). 1H RMN (DMSO-ds): 7,71 (s(a), 1H), 7,29 (m, 6H), 6,47 (s(a), 3H), 3,74 (dd, 1H, J = 5,9, 7,6), 3,04 (dd, 1H, J = 5,9; 13,7), 2,87 (dd, 1H, J = 7,6, 13,7), nota: los desplazamientos de las señales dependen de la concentración de la muestra, así como de su contenido de agua.

2-Amino-3-(tetrahidrofuran-2-il)propanamida (F-2): obtenido a partir de B-16 como un sólido que no se purificó adicionalmente. 1H RMN (CDCh): mezcla de isómeros: 7,23 (s, 1H), 5,63 (s, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,88 (m, 1H), 3,74 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 2,07 (m, 1H), 1,89 (m, 5H), 1,54 (m, 1H). HRMS: calculado para C⁷H¹⁵N²O: 159,1134; hallado, 159,1122.

2-Amino-3-(piridin-3-il)propanamida (F-3): obtenido a partir de B-23 como un sólido naranja (3,46 g, 99%). 1H RMN (DMSO-ds): 8,42 (m, 1H), 8,40 (dd, 1H, J = 1,9, 4,6), 7,62 (m, 1H), 7,26 (m, 2H), 6,95 (s (a), 1H), 4,02 (m, 2H), 3,35 (dd, 1H, J = 5,3, 8,0), 2,90 (dd, 1H, J = 5,2, 13,6), 2,64 (dd, 1H, J = 8,0, 13,6), 1,75 (m, 2H). HRMS: calculado para C⁸H¹²N³O: 166,0980; hallado, 166,0984.

Procedimiento general para la síntesis de pirazin-2-ol H mediante condensación entre glioxal y a-aminoamidas F. Estos compuestos se prepararon siguiendo los protocolos descritos anteriormente (J. Am. Chem. Soc., 1949, 78; documento US 4046763, 1977).

5-Fenilpirazin-2-ol (H-23): Obtenido a partir de fenilglioxal y clorhidrato de amida de glicina como un polvo beige (1,69 g, 48%). 1H RMN (DMSO-afe) 12,43 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 1,3), 8,06 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,30 (m, 1H). HRMS: calculado para C¹⁰H⁹N²O: 173,0715; hallado, 173,0654.

5-fenil-3-((tetrahidrofuran-2-il)metil)pirazin-2-ol (H-24): obtenido a partir de fenilglioxal y F-2 como un sólido rosa (1,02 g, 45%). 1H RMN (CDCla): 13,22 (s(a), 1H), 7,81 (m, 2H), 7,63 (s(a), 1H), 7,44 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 4,60 (p, 1H, J = 6,6), 3,99 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,30 (dd, 1H, J = 7,0, 14,8), 3,05 (dd, 1H, J = 6,1, 14,8), 2,17 (m, 1H), 1,98 (m, 2H), 1,76 (m, 1H). HRMS: calculado para C¹⁵H¹⁷N²O², 257,1290; hallado, 257,1281.

5-fenil-3-(piridin-3-ilmetil)pirazin-2-ol (H-25): Obtenido a partir de fenilglioxal y F-3 como un sólido blanco (0,57 g, 11%) después de una dispersión del extracto de acetato de etilo bruto en diclorometano y una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol de 95/5 a 9/1). 1H RMN (DMSO-afe): 12,47 (s(a), 1H), 8,57 (d, 1H, J = 1,7), 8,43 (dd, 1H, J = 1,7, 4,8), 7,89 (s, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,74 (m, 1H), 7,40-7,25 (m, 4H), 4,10 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁶H¹⁴N³O, 264,1137; hallado, 264,1122.

Procedimiento general para la síntesis de cloropirazinas L mediante las etapas j. Bajo una atmósfera protegida con calcio, se dispersó la 2-hidroxipirazina H considerada (0,02 mol) en dicloruro fenilfosfónico (10 ml) y la suspensión se calentó a 100°C durante, a menos que se indique de otro modo, 12 h. La solución resultante se diluyó en acetato de etilo y se vertió sobre un exceso de hielo triturado y se agitó durante 15 min. Esto se basificó con amoniaco al 22% y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad y se purificó tal como se describe a continuación.

2-Cloro-5-fenilpirazina (L-1): Obtenido a partir de H-23 como un sólido amarillo (1,42 g, 82%) después de calentar a 100°C durante 4 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano 1/1). 1H RMN (CDCl3): 8,80 (d, 1H, J = 1,5), 8,64 (d, 1H, J = 1,5), 8,00 (m, 2H), 7,51 (m, 3H). HRMS: calculado para C^HaClNa, 191,0376; hallado, 191,0322.

2-Cloro-3-metil-5-fenilpirazina (L-2): Obtenido a partir de H-1 como un sólido amarillo (1,18 g, 74%) tras calentar solo a 80°C durante 12 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - diclorometano 1/1). 1H RMN (CDCl3): 8,63 (s, 1H), 8,01 (m, 2H), 7,50 (m, 3H), 2,75 (s, 3H). HRMS: calculado para CnH^ClNa, 205,0533; hallado, 205,0464.

2-Cloro-3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazina (L-3): Obtenido a partir de H-2 en forma de un sólido blanco (3,01 g, 79%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 94/6). 1H RMN (CDCl3): 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 8,70 (s, 1H), 7,98-7,94 (m, 2H), 7,53-7,45 (m, 3H), 7,31-7,25 (m, 2H), 7,14-7,09 (m, 2H), 4,44 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CFN ², 299,0751; hallado, 299,0749.

2-Cloro-3-(2-clorobencil)-5-fenilpirazina (L-4): Obtenido a partir de H-3 como un sólido blanco (1,58 g, 73%) después de una recristalización en etanol. 1H Rm N (CDCl3): 8,70 (s, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,46 (m, 4H), 7,22 (m, 3H), 4,52 (s, 2H). HRMS: calculado para C ^aC laN a: 315,0456; hallado, 315,0466.

2-cloro-3-(2-metoxibencil)-5-fenilpirazina (L-5): Obtenido a partir de H-4 como un sólido blanco (0,73 g, 63%) después de una recristalización en etanol. 1H Rm N (CDCI³): 1H RMN (CDCI³, 400 MHz): 8,66 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,48 (m, 3H), 7,27 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 6,93 (m, 2H), 4,40 (s, 2H), 3,83 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹sH¹⁶ClN²O, 311,0951; hallado, 311,0949.

2-Cloro-3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazina (L-6): Obtenido a partir de H-5 como un aceite (3,19 g, 86%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 97/3). 1H RMN (CDCI³): 8,69 (s, ¹H), 8,03 (m, 2H), 7,52 (m, 3H), 7,29 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,12 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 4,39 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CIFN², 299,0751; hallado, 299,0749.

2- Cloro-3-(4-fluorobencil)-5-fenilpirazina (L-7): Obtenido a partir de H-6 como un sólido blanco (0,25 g, 29% a partir de E-32) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 97/3). 1H RMN (CDCI³): 8,68 (s, 1H), 8,02 (m, 2H), 7,52 (m, 3H), 7,36 (m, 2H), 7,02 (m, 2H), 4,36 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CIFN², 299,0751; hallado, 299,0746.

3- bencil-2-cloro-5-fenilpirazina (L-8): Obtenido a partir de H-7 en forma de un sólido amarillento (1,60 g, 82%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3: 2). Alternativamente, este compuesto se obtuvo con un rendimiento del 36% en las mismas condiciones de reacción pero utilizando el N-óxido J-1.1H RMN (CDCI³): 8,68 (s, 1H), 8,08 - 8,00 (m, 2H), 7,58 - 7,47 (m, 3H), 7,44 - 7,40 (m, 2H), 7,37 - 7,32 (m, 2H), 7,30 - 7,25 (m, 1H), 4,41 (s, 2H). HRMS: calculado para C17HuClN2, 281,0846; hallado, 281,0730.

2- Bencil-3-cloro-5-metil-6-fenilpirazina (L-9): Obtenido a partir de H-21 como un aceite (0,38 g, 20% en total a partir de 1-óxido de 6-bencil-3-metil-5-oxo-2-fenil-2,3,4,5-tetrahidropirazina) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 97:3). 1H RMN (CDCI³, 400 MHz): 7,62-7,59 (m, 2H), 7,53-7,45 (m, 3H), 7,40-7,37 (m, 2H), 7,33-7,22 (m, 4H), 4,36 (s, 2H), 2,61 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹BH¹⁶CIN², 295,1002; hallado, 295,1003.

3- Bencil-2-cloro-5-(p-tolil)pirazina (L-10): Obtenido a partir de H-8 como un sólido amarillo (1,83 g, 22% a partir de 1 -metil-4-(2-nitrovinil)benceno) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3/2).

1H RMN (CDCI³): 8,64 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,48 - 7,23 (m, 7H), 4,39 (s, 2H), 2,45 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN², 295,1002; hallado, 295,0999.

3-Bencil-2-cloro-5-(m-tolil)pirazina (L-11): Este compuesto se obtuvo a partir de H-9 como un sólido blanco (3,02 g, 33% a partir de 1-metil-3-(2-nitrovinil)benceno) después de calentar durante 18 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 965/35). 1H Rm N (CDCI³): 8,66 (s, 1H), 7,84 (m, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,43 - 7,24 (m, 6H), 4,40 (s, 2H), 2,48 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN², 295,1002; hallado, 295,1014.

2-Cloro-3-(2-metilbencil)-5-fenilpirazina (L-12): Este compuesto se obtuvo a partir de H-10 en forma de sólido (5,12 g, 89%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCI³): 8,69 (s, 1H), 7,98 (m, 2H), 7,50 (m, 3H), 7,20 (m, 4H), 4,39 (s, 2H), 2,46 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN², 295,1002; hallado, 295,1009.

2- Cloro-3-(3-metilbencil)-5-fenilpirazina (L-13): Este compuesto se obtuvo a partir de H-11 en forma de un sólido (5,03 g, 90%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96/4). 1H RMN (CDCI³): 8,68 (s, 1H), 8,05 (m, 2H), 7,51 (m, 3H), 7,22 (m, 3H), 7,08 (m, 1H), 4,37 (s, 2H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN², 295,1002; hallado, 295,0997.

3- Bencil-2-cloro-5-(2-metoxifenil)pirazina (L-14): Obtenido a partir de H-12 en forma de un sólido amarillo (1,82 g, 81%) después de calentar durante 18 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -diclorometano 3/2).

1H RMN (CDCI³): 8,86 (s, 1H), 7,91 (dd, 1H, J = 7,6, 1,8), 7,48 - 7,36 (m, 3H), 7,34 - 7,28 (m, 2H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 7,11 (td, 1H, J = 7,6, 0,8), 7,03 (d, 1H, J = 8,3), 4,37 (s, 2H), 3,90 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN²O, 311,0951; hallado, 311,0965.

3-Bencil-2-cloro-5-(2-fluorofenil)pirazina (L-15): Obtenido a partir de H-17 como un sólido amarillo (3,30 g, 67%) después de calentar durante 16 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -diclorometano 2/1).

1H RMN (CDCI³): 8,78 (d, 1H, J = 2,2), 8,04 (dt, 1H, J = 7,6, 1,8), 7,30 (m, 8H), 4,40 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CIFN², 299,0751; hallado, 299,0818.

3-Bencil-2-cloro-5-(3-fluorofenil)pirazina (L-16): Obtenido como un polvo a partir de H-20 después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 98/2) (0,98 g, 8% a partir de 1-fluoro-3-(2-nitrovinil)benceno). 1H RMN (CDCI³): 8,66 (s, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,41-7,24 (m, 4H), 7,18 (m, 1H), 4,40 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CIFN², 299,0751; hallado, 299,0749.

3-Bencil-2-cloro-5-(2,6-difluorofenil)pirazina (L-17): Obtenido a partir de H-18 como un sólido blanco (0,75 g, 56%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3/1). 1H RMN (CDCI³): 8,44 (m, 1H), 7,43 (m, 3H), 7,27 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 4,40 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹¹CIF²N², 317,0657; hallado, 317,0648.

3-bencil-2-cloro-5-(4-fluorofenil)pirazina (L-18): Obtenido a partir de H-19 como un sólido blanco (0,84 g, 52%) después de calentar durante 14 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -diclorometano 3/1). 1H RMN (CDCI³): 8,63 (s, 1H), 8,02 (m, 2H), 7,39 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 7,28 (m, 1H), 7,19 (m, 2H), 4,39 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁷H¹³CFN ², 299,0751; hallado, 299,0763.

3-Bencil-2-cloro-5-(4-metoxifenil)pirazina (L-19): Obtenido a partir de (H-13) como un sólido amarillo (0,33 g, 35%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3/2). 1H RMN (CDCI³): 8,61 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,31 (m, 2H), 7,27 (m, 1H), 7,02 (m, 2H), 4,37 (s, 2H), 3,89 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹BH¹⁶CIN²O, 311,0951; hallado, 311,0955.

3-Bencil-2-cloro-5-(3-metoxifenil)pirazina (L-20): Este compuesto se obtuvo a partir de1H-14 bruto como un polvo blanco (0,4 g, 32% de E-11/E-12), después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCI³): 8,66 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,58 (m, 2H), 7,41 (m, 3H), 7,33 (m, 2H), 7,25 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 4,39 (s, 2H), 3,90 (s, 3H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁶CIN²O, 311,0951; hallado, 311,0962.

3-Bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)-2-cloropirazina (L-21): Obtenido a partir de H-15 en forma de un sólido amarillo (5,66 g, 62%) después de calentar durante 18 horas y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 1/1).

1H RMN (CDCI³): 8,61 (s, 1H), 8,0 (m, 2H), 7,47-7,20 (m, 10H), 7,11 (m, 2H), 5,17 (s, 2H), 4,38 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁴H²⁰C¹N²O, 387,1264; hallado, 387,1266.

3-Bencil-5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)-2-cloropirazina (L-22): Obtenido a partir de H-16 como un sólido amarillo (1,39 g, 29% a partir del nitrovinilo) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 1/1). 1H RMN (CDCI³): 8,58 (s, 1H), 7,84 (m, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,50-7,24 (m, 10H), 7,11 (m, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,37 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁴H¹⁹CIFN²O, 405,1170; hallado, 405,1154.

2-bencil-3-cloro-5H-cromeno[4,3-b]pirazina (L-23): Obtenido a partir de H-22 como un polvo blanco (0,01 g, 10%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3/2). 1H RMN (CDCI³): 8,15 (dd, 1H, J = 2,0, 7,8), 7,41-7,31 (m, 5H), 7,28-7,24 (m, 1H), 7,13 (dt, 1H, J = 1,0, 8,1), 7,00 (dd, 1H, J = 1,0, 8,3), 5,31 (s, 2H), 4,37 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹⁴CIN²O, 309,0795; hallado, 309,0804.

2- cloro-5-fenil-3-(piridin-3-ilmetil)pirazina (L-24): Obtenido a partir de H-25 como un aceite (0,42 g, 83%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98/2). 1H RMN (CDCI³): 8,70 (m, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,52 (dd, 1H, J = 1,6, 4,9), 7,99 (m, 2H), 7,71 (m, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,26 (ddd, 1H, J = 0,8, 4,9, 8,0), 4,38 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁶H¹³CIN³, 282,0798; hallado, 282,0795.

Procedimiento general para la síntesis de bromopirazinas L (X = Br) mediante las etapas i y l. Etapa i: preparación del trifluorometanosulfonato K. A temperatura ambiente, se disolvió la hidroxipirazina considerada (3 mmol) en diclorometano seco (20 ml, estabilizado con amileno, secado sobre un tamiz de 4 Á). Luego se añadieron trietilamina (0,142 ml, 3,15 mmol) y anhídrido tríflico (0,51 ml, 3,06 mmol). La solución resultante se agitó durante 40 minutos, se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó tal como se describe a continuación. Etapa l: reacción de intercambio con bromuro de sodio. En un tubo con un tapón de rosca recubierto de Teflón, uno de estos ésteres triflato purificados (2 mmol) y bromuro de sodio seco (0,51 g, 5 mmol) se dispersaron en dimetilformamida seca (4 ml). Se añadió ácido tríflico (0,16 ml, 1,8 mmol), se cerró el tubo y se calentó a 120°C durante la noche. La solución resultante se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. A continuación, el residuo resultante se purificó adicionalmente tal como se describe a continuación.

Trifluorometanosulfonato de 3-bencil-5-fenilpirazin-2-ilo (K-1): Obtenido a partir de H-7 como un polvo blanco (0,34 g, 30%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 4/1 a 1/1).) 1H RMN (CDCI³): 8,60 (s, 1H), 8,05 - 7,97 (m, 2H), 7,57 - 7,49 (m, 3H), 7,39 - 7,30 (m, 4H), 7,29 - 7,23 (m, 1H), 4,32 (s, 2H). HRMS: calculado para C18H14F3N2O3S, 395,0677; hallado, 395,0695.

3- Bencil-2-bromo-5-fenilpirazina (L-25): Obtenido a partir de K-1 como cristales blancos (0,02 g, 30%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 3: 2). 1H RMN (CDCI³): 8,63 (s, 1h ), 8,05 - 7,97 (m, 2H), 7,56 - 7,47 (m, 3H), 7,43 - 7,37 (m, 2H), 7,35 - 7,29 (m, 2H), 7,28 - 7,21 (m, 1H), 4,41 (s, 2H). HRMS: calculado para C1/H14BrN2, 325,0340; hallado, 325,0319.

Trifluorometanosulfonato de 5-fenil-3-((tetrahidrofuran-2-il)metil)pirazin-2-ilo (K-2): Obtenido a partir de (H-24) como un aceite (0,37 g, 43%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 1/3). 1H RMN (CDCI³): 8,60 (s, 1H), 8,01 (m, 2H), 7,53 (m, 3H), 4,51 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,77 (m, 1H), 3,27 (dd, 1H, J = 7,8, 14,1), 3,10 (dd, 1H, J = 5,4, 14,1), 2,17 (m, 1H), 1,96 (m, 2H), 1,76 (m, 1H). HRMS: calculado para C¹⁶H¹⁶F³N²O⁴S, 389,0783; hallado, 389,0808.

2-Bromo-5-fenil-3-((tetrahidrofuran-2-il)metil)pirazina (L-26): Obtenido a partir de K-2 como un aceite (0,19 g, 62%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano- diclorometano 1/4 a diclorometano - etanol 99/1). 1H RMN (CDCI³): 8,62 (s, 1H), 8,02 (m, 2H), 7,50 (m, 3H), 4,57 (p, 1H, J = 6,7), 3,99 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,42 (dd, 1H, J = 6,7, 14,6), 3,14 (dd, 1H, J = 6,7, 14,6), 2,12 (m, 1H), 1,99 (m, 2H), 1,76 (m, 1H). HRMS: calculado para C15H1sBrN2O, 319,0446; hallado, 319,0464.

Trifluorometanosulfonato de 2-bencil-5H-cromeno[4,3-b]pirazin-3-ilo (K-3): Obtenido a partir de H-22, como un aceite y una muestra se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 2/1). 1H RMN (CDCta): 8,15 (dd, 1H, J = 1,7, 7,8), 7,44-7,30 (m, 6H), 7,14 (dt, 1H, J = 1,1, 8,0), 7,02 (dd, 1H, J = 0,9, 8,3), 5,31 (s, 2H), 4,30 (s, 2H). HRMS: calculado para C¹⁸H¹³F³N²O⁴S, 423,0627; hallado, 423,0638.

2-bencil-3-bromo-5H-cromeno [4,3-b]pirazina (L-27): Obtenido a partir de K-3, como un sólido blanco (0,04 g, 24%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-diclorometano 2/1). Nota: se logró un rendimiento mejorado (0,075 g, 40%) cuando se usó un exceso de 10 equivalentes de bromuro de sodio en las mismas condiciones de reacción. 1H RMN (CDCla): 8,15 (dd, 1H, J = 1,6, 7,8), 7,44-7,23 (m, 6H), 7,12 (dt, 1H, J = 1,0, 8,1), 7,02 (dd, 1H, J = 0,7, 8,1), 5,32 (s, 2H), 4,39 (s, 2H). HRMS: calculado para C1sH13BrN2O, 353,0290; hallado, 353,0295.

Procedimiento general para la síntesis de N-aril a-aminoésteres N a partir de halogenopirazinas L y a-aminoésteres B mediante las etapas n. En un vial sellable de 20 ml, se pesaron la 2-halogenopirazina L considerada (0,001 mol), el aminoéster considerado B (0,0011 mol, ya sea como base libre o como sal clorhidrato), carbonato de cesio (0,0022 mol o 0,0032 mol, 0,69 g o 1,04 g) y una mezcla 1/1 de acetato de paladio y 2,2'-bis(difenilfosfanil)-1,1'-binaftaleno (BINAP) (0,05 mmol, 47 mg). El aire se reemplazó por argón y, bajo atmósfera inerte, se inyectó acetonitrilo seco (8 ml) (también puede usarse dimetilformamida seca). Esto se calentó a 60°C durante 12 horas usando o bien un baño de aceite junto con una agitación muy rápida para romper los grumos de formación de hidrogenocarbonato de cesio, o bien un baño de ultrasonidos con regulación de temperatura. La suspensión de color rojo oscuro o negro resultante se dispersó en diclorometano; esto se filtró y se concentró hasta sequedad antes de una purificación adicional tal como se describe a continuación.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-metilpentanoato de etilo (N-1): Obtenido a partir de L-8 y IleOEt como un aceite (0,25 g, 52%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). N.B.: Se observó un grado de racemización (aproximadamente el 30%), bien tras el almacenamiento de IleOEt como base libre o tras la reacción de N-arilación. 1H RMN (mezcla diastereoisomérica, relación 0,30/0,70, CDCta): 8,41 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,38-7,32 (m, 5H), 7,29-7,26 (m, 1H), 4,84 (m, 0,7H), 4,75 (m, 0,3H), 4,65 (m, 1H), 4,31 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 1,83 (m, 1H), 1,35 (m, 1H), 1,24 (m, 3H), 1,02 (m, 1H), 0,85 (m, 3H), 0,75 (m, 3H). h Rm S: calculado para C²⁵H³⁰N³O², 404,2338; hallado, 404,2348.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-ciclopentilpropanoato de etilo (N-2): Obtenido a partir de L-8 y B-13 como un aceite (0,26 g, 58%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCla): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,38-7,32 (m, 5H), 7,29-7,26 (m, 1H), 4,78 (d, 1H, J = 7,4), 4,60 (m, 2H), 4,30 (d, 1H, J = 15,1), 4,21 (d, 1H, J = 15,1), 4,16 (q, 2H, J = 7,2), 1,83 (m, 1H), 1,70-1,39 (m, 7H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2), 1,01 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁷H³²N³O², 430,2495; hallado, 430,2485.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-ciclohexilpropanoato de etilo (N-3): Obtenido a partir de L-8 y B-14 como un aceite (0,36 g, 78%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,41 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,38-7,32 (m, 5H), 7,29-7,26 (m, 1H), 4,60 (m, 4H), 4,30 (d, 1H, J = 15,5), 4,20 (d, 1H, J = 15,5), 4,16 (m, 2H), 1,60 (m, 6H), 1,48 (m, 1H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2), 1,08 (m, 4H), 0,86 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁴N³O², 444,2651; hallado, 444,2647.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(biciclo[2.2.1]heptan-2-il)propanoato de etilo (N-4): Obtenido a partir de (L-8) y (B-15) como un aceite (1,48 g, 82%) como una mezcla de 4 diastereoisómeros (como se ve por el número de señales de CO en el espectro de 13C) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3): 8,41 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,38-7,25 (m, 6H), 4,77 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,31 - 4,16 (m, 4H), 2,17 (m, 0,4H), 2,10 (m, 0,6H), 2,02 (m, 0,4H), 1,90 - 0,88 (m, 14H), 0,50 (m, 0,6H). HRMS: calculado para C²⁹H³⁴N³O², 456,2651; hallado, 456,2661.

(3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-5): Obtenido a partir de L-8 y PheOEt, HCl como un aceite (1,07 g, 69%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano). 1H RMN (CDCta): 8,43 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,53 - 7,43 (m, 1H), 7,41 - 7,34 (m, 1H), 7,33 - 7,20 (m, 8H), 7,05 - 6,95 (m, 2H), 4,97 (m, 2H), 4,14 (s, 2H), 4,13 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,18 (dd, J = 13,8, 5,4 Hz, 1H), 3,09 (dd, J = 13,8, 5,9 Hz, 1H), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁸N³O², 438,2182; hallado, 438,2185.

(3-bencil-6-metil-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-6): Obtenido a partir de L-9 y PheOEt, HCl como un aceite (0,4 g, 84%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 94/6). 1H RMN (CDCh, 400 MHz): 7,60-7,57 (m, 2H), 7,48-7,44 (m, 2H), 7,39-7,35 (m, 1H), 7,31-7,20 (m, 8H), 7,03-7,00 (m, 2H), 5,00-4,95 (q, 1H, J = 7,0), 4,80-4,78 (m, 1H), 4,18-4,09 (m, 4H), 3,17-3,12 (m, 1H), 3,08-3,03 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 1,22-1,18 (t, J = 7,9 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O², 452,2338; hallado, 452,2347.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-fenilbutanoato de etilo (N-7): Obtenido a partir de L-8 y B-41 como un aceite (0,3 g, 67%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 96/4). 1H RMN (mezcla diastereoisomérica, relación 0,6/0,4) (CDCh): 8,40 (s, 0,6H), 8,34 (s, 0,3H), 7,94 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,39-7,19 (m, 7H), 7,21 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,89 (d, 0,4H, J = 7,7), 4,69 (d, 0,6H, J = 8,3), 4,20 (m, 0,8H), 4,08 (m, 0,8H), 4,08 (m, 2,6H), 3,37 (m, 0,6H), 3,0 (m, 0,4H), 1,28 (d, 1,8H), J = 7,1), 1,24 (d, 0,8H, J = 7,3), 1,16 (t, 1,8H, J = 7,5), 1,08 (t, 0,8H, J = 7,3). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O², 452,2338; hallado, 452,2378.

2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4-(benciloxi)fenil)propanoato de metilo (N-8): Obtenido a partir de L-21 PheOMe, HCl (0,53 g, 86%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano). 1H RMN (CDCh): 8,39 (s, 1H), 7,98 - 7,87 (m, 2H), 7,53 - 7,47 (m, 4H), 7,47 - 7,41 (m, 4H), 7,41 - 7,35 (m, 2H), 7,34 - 7,27 (m, 3H), 7,25 - 7,21 (m, 2H), 7,15 - 7,07 (m, 2H), 6,94 - 6,82 (m, 4H), 5,17 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,03 - 4,94 (m, 1H), 4,86 (d, 1H, J = 7,4), 4,15 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,15 (dd, 1H, J = 13,9, 5,3), 3,05 (dd, 1H, J = 13,9, 6,0). HRMS: calculado para C⁴¹H³⁸N³O⁴, 636,2863; hallado, 636,2897.

2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4-(benciloxi)fenil)propanoato de etilo (N-9): Obtenido como un aceite (1,17 g, 70%) a partir de L-21 y B-5 después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 91/9 a 9/1). 1H RMN (CDCh): 8,34 (s, 1H), 7,92- 7,83 (m, 2H), 7,49 - 7,43 (m, 4H), 7,43 - 7,37 (m, 4H), 7,37 -7,31 (m, 2H), 7,30 - 7,22 (m, 3H), 7,22- 7,17 (m, 2H), 7,11 - 7,02 (m, 2H), 6,91 - 6,77 (m, 4H), 5,13 (s, 2H), 5,05 (s, 2H), 4,95 - 4,87 (m, 1H), 4,86 - 4,79 (m, 1H), 4,15 - 4,09 (m, 4H), 3,10 (dd, 1H, J = 13,9, 5,4), 3,01 (dd, 1H, J = 13,9, 5,9), 1,19 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C⁴²H⁴⁰N³O⁴, 650,3019; hallado, 650,3049.

(3-bencil-5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-10): Obtenido como un aceite (0,66 g, 83%) a partir de L-22 y PheOEt, HCl después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 96/4 a 93/7). 1H RMN (CDCh): 8,33 (s, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,37 - 7,18 (m, 9H), 7,07 (m, 1H), 7,98 (m, 2H), 5,21 (s, 2H), 4,12 (m, 4H), 3,16 (dd, 1H, J = 5,4, 14,1), 3,08 (dd, 1H, J = 5,7, 14,1), 1,19 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C³⁵H³³FN³O³, 562,2506; hallado, 562,2506.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(tetrahidrofuran-2-il)propanoato de etilo (N-11): Obtenido a partir de L-8 y B-16 como un aceite (0,50 g, 60%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1).

1H RMN (mezcla diastereoisomérica, relación 0,53/0,47) (CDCh): 8,39 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,35 (m, 5H), 7,25 (m, 1H), 4,78 (m, 0,6H), 4,59 (m, 0,4H), 4,20 (m, 4H), 3,81 (m, 1,6H), 3,70 (m, 1,4H), 2,1 (m, 1H), 1,88 (m, 4H), 1,46 (m, 1H), 1,25 (t, 1,4H, J = 7,2), 1,18 (t, 1,6H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁶H³⁰N³O², 432,2287; hallado, 432,2253.

2-(3-bencil-5-fenilpirazin-2-ilamino)-3-(1,3-dioxolan-2-il)propanoato de etilo (N-12): Obtenido a partir de L-8 y B-43 como un aceite (0,61 g, 67%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 9/1 a 7/3). 1H RMN (CDCh): 8,41 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,37 - 7,31 (m, 5H), 7,25 (m, 1H), 5,66 (m, 1H), 4,85 (t, 2H, J = 4,3), 4,77 (m, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,18 (q, 2H, J = 7,1), 3,83 (m, 2H), 3,75 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 1,25 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁵H²⁸N³O⁴, 434,2080; hallado, 434,2117.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(2-metoxifenil)propanoato de etilo (N-13): Obtenido a partir de L-8 y B-2 como un sólido amarillo (0,32 g, 77%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3): 8,38 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,44 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,22 (m, 6H), 7,04 (dd, 1H, J = 7,4, 1,7), 6,88 (td, 1H, J = 7,4; 1,0), 6,83 (m, 1H), 5,30 (d, 1H, J = 7,0), 4,85 (m, 1H), 4,11 (m, 4H), 3,75 (s, 3H), 3,20 (dd, 1H, J = 13,6, 5,6), 3,15 (dd, 1H, J = 13,6, 7,6), 1,20 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³, 468,2287; hallado, 468,2281.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (N-14): Obtenido a partir de L-8 y B-3 como un aceite (0,30 g, 95% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,30 - 7,13 (m, 6H), 6,79 (m, 2H), 6,65 (m, 1H), 6,58 (m, 1H), 4,96 - 4,90 (m, 2H), 4,14 (m, 4H), 3,78 (s, 3H), 3,15 (dd, 1H, J = 5,6, 13,8), 3,07 (dd, 1H, J = 6,0, 13,8), 1,19 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³, 468,2287; hallado, 468,2301.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-metoxifenil)propanoato de etilo (N-15): Obtenido a partir de L-8 y B-4 como un aceite (0,16 g, 35%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 93/7). 1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,39-7,21 (m, 6H), 6,89 (m, 2H), 6,76 (m, 1H), 4,96 - 4,90 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,81 (s, 3H), 3,12 (dd, 1H, J = 4,8, 13,7), 3,03 (dd, 1H, J = 5,2, 13,7), 1,21 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³, 468,2287; hallado, 468,2271.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(2-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (N-16): Obtenido a partir de L-8 y B-24 como un aceite (0,08 g, 18%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,36 (s, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,62 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,37 - 7,18 (m, 9H), 5,01 - 4,93 (m, 2H), 4,17 (s, 2H), 4,12 (m, 2H), 3,31 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 1,17 (m, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁷F³N³O², 506,2055; hallado, 506,2053.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (N-17): Obtenido a partir de L-8 y B-25 como un aceite (0,14 g, 31%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,44 (s, 1H), 7,99 (m, 2H), 7,62 (m, 1H), 7,49 (m, 3H), 7,40 - 7,26 (m, 8H), 7,10 (m, 1H), 5,02 (m, 2H), 4,17 (s, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,25 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 1,19 (m, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁷F³N³O², 506,2055; hallado, 506,2063.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-(trifluorometil)fenil)propanoato de etilo (N-18): Obtenido a partir de L-8 y B-26 como un aceite (0,12 g, 26%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,44 (s, 1H), 7,98 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,29 - 7,26 (m, 5H), 7,03 (m, 2H), 5,02 (m, 2H), 4,19 (m, 2H), 4,14 (s, 2H), 3,26 (dd, 1H, J = 5,6, 13,6), 3,14 (dd, 1H, J = 5,7; 13,6), 1,22 (t, 3H, J = 7,0). HRMS: calculado para C²⁹H²⁷F³N³O², 506,2055; hallado, 506,2002.

(3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-19): Obtenido a partir de L-15 y PheOEt, HCl como un aceite (0,47 g, 81%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 91/9). 1H RMN (CDCla): 8,53 (d, 1H, J = 2,3), 8,04 (dt, 1H, J = 1,9, 7,9), 7,24 (m, 11H), 6,99 (m, 2H), 5,00 (m, 2H), 4,13 (m, 4H), 3,18 (dd, 1H, J = 5,1, 13,7), 3,10 (dd, 1H, J = 5,5, 13,7), 1,20 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2079.

2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4-fluorofenil)propanoato de etilo (N-20): Obtenido a partir de L-15 y B-1 como aceite (0,18 g, 90% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCla): 8,53 (d, 1H, J = 2,3), 8,05 (dt, 1H, J = 1,9, 7,9), 7,37-7,14 (m, 8H), 6,88 (m, 2H), 6,86 (m, 2H), 4,99 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,16 (m, 1H), 3,07 (m, 1H), 1,20 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶F²N³O², 474,1993; hallado, 474,1991.

2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-21): Obtenido a partir de L-15 y B-7 como un aceite (0,42 g, 72%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 91/9).

1H RMN (CDCl3): 8,52 (d, 1H, J = 2,3), 8,03 (dt, 1H, J = 1,9, 7,9), 7,41-7,24 (m, 8H), 7,17 (ddd, 1H, J = 1,3, 8,0, 11,4), 6,22 (dd, 1H, J = 1,8, 3,0), 5,84 (m, 1H), 5,19 (d (a), 1H, J = 7,6), 4,97 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,21 (m, 2H), 1,22 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁶H²⁵FN³O³, 446,1880; hallado, 446,1870.

2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-22): Obtenido a partir de L-15 y B-8 como un aceite (0,11 g, 30%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 98/2 a 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,52 (d, 1H, J = 2,3), 8,03 (dt, 1H, J = 1,9, 7,8), 7,35-7,24 (m, 7H), 7,16 (ddd, 1H, J = 1,2, 8,1, 11,1), 5,82 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 3,0), 5,19 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,95 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,16 (d, 2H, J = 5,4), 2,24 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷FN³O³, 460,2036; hallado, 460,2039.

2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-etilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-23): Obtenido a partir de L-15 y B-10 como un aceite (0,2 g, 46%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCb): 8,51 (d, 1H, J = 2,3), 8,03 (dt, 1H, J = 1,9, 7,8), 7,35-7,23 (m, 7H), 7,16 (ddd, 1H, J = 1,3, 8,1, 9.4) , 5,82 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 3,0), 5,19 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,95 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,15 (d, 2H, J = 5,3), 2,58 (q, 2H, J = 7,6), 1,24 (t, 3H, J = 7,2), 1,21 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C²⁸H²⁹FN³O³, 474,2193; hallado, 474,2186.

2-((3-bencil-5-(2-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-24): Obtenido a partir de L-15 y B-9 como un aceite (0,48 g, 86%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,51 (d, 1H, J = 2,4), 8,02 (dt, 1H, J = 1,9, 7,8), 7,35-7,23 (m, 7H), 7,16 (ddd, 1H, J = 1,3, 8.1.9.4) , 5,65 (s, 1H), 5,19 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,92 (m, 1H), 4,16 (m, 4H), 3,11 (d, 2H, J = 5,1), 2,13 (s, 3H), 1,88 (s, 3H), 1,25 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H²⁹FN³O³, 474,2193; hallado, 474,2203.

2-((3-bencil-5-(3-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-25): Obtenido a partir de L-16 y B-8 como un aceite (0,14 g, 90% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,73 (s, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,45-7,23 (m, 6H), 7,02 (m, 1H), 5,82 (m, 1H), 5,74 (d(a), 1H, J = 3,1), 5,18 (d(a), 1H, J = 7,5), 4,92 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,15 (d, 2H, J = 5,5), 2,22 (m, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷FN³O³, 460,2036; hallado, 460,2040.

2-((3-bencil-5-(4-fluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-26): Obtenido a partir de L-18 y B-8 como un aceite (0,12 g, 21%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 96/4). 1H RMN (CDCh): 8,36 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,34-7,23 (m, 5H), 7,15 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 3,0), 5,13 (d (a), 1H, J = 7,6), 4,92 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,15 (d, 2H, J = 5,3), 2,22 (s, 3H), 1,23 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷FN³O³, 460,2036; hallado, 460,2039.

2-((3-Bencil-5-(4-metoxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-27): Obtenido, utilizando DMF como disolvente de reacción, a partir de L-19 y B-8 como un aceite (0,16 g, 44%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 94/6). 1H RMN (CDCh): 8,35 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,33 7,23 (m, 5H), 7,01 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 2,6), 5,06 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,91 (m, 1H), 4,21 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 3,14 (d, 2H, J = 5,5), 2,22 (s, 3H), 1,23 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O⁴, 472,2236; hallado, 472,2230.

2-((3-Bencil-5-(3-metoxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato (N-28): Obtenido a partir de L-20 y B-8 como un aceite (0,07 g, 20%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 94/6). 1H RMN (CDCh): 8,41 (s, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,40-7,23 (m, 6H), 6,91 (m, 1H), 5,82 (m, 1H), 5,75 (d, 1H, J = 2,9), 5,06 (d(a), 1H, J = 7,3), 4,93 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 3,14 (d, 2H, J = 5,4), 2,23 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O⁴, 472,2236; hallado, 472,2250.

2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-29): Obtenido, utilizando DMF como disolvente de reacción, a partir de L-21 y B-8 como un aceite (0,31 g, 50%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCh): 8,36 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,50-7,23 (m, 10H), 7,01 (m, 2H), 5,81 (m, 1H), 5,76 (d, 1H, J = 2,6), 5,15 (s, 2H), 5,07 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,91 (m, 1H), 4,19 (m, 4H), 3,15 (d, 2H, J = 5,5), 2,24 (s, 3H), 1,23 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C³⁴H³⁴N³O⁴, 548,2549; hallado, 548,2533.

(3-bencil-5-(2,6-difluorofenil)pirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-30): Obtenido a partir de L-17) y PheOEt, HCl como un aceite (0,24 g, 65%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1). 1H RMN (CDCI³): 8,14 (s, 1H), 7,30-7,19 (m, 9H), 7,04 - 6,96 (m, 4H), 5,01 (m, 2H), 4,12 (m, 2H), 4,11 (s, 2H), 3,16 (dd, 1H, J = 5,2, 13,8), 3,08 (dd, 1H, J = 5,9, 13,8), 1,18 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁸H²⁵F²N³O², 474,1993; hallado, 474,2011.

2-((3-bencil-5-(2,6-difluorofenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-31): Obtenido a partir de L-17 y B-7 en forma de aceite (0,19 g, 52%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 9/1). 1H RMN (CDCla): 8,13 (s, 1H), 7,36-7,19 (m, 7H), 7,04 - 6,98 (m, 2H), 6,23 (m, 1H), 5,84 (m, 1H), 5,22 (d, 1H, J = 7,3), 4,96 (m, 1H), 4,16 (s, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,20 (d, 2H, J = 5,3), 1,12 (t, 3H, J = 7,0). HRMS: calculado para C²⁶H²aF²NaOa, 464,1786; hallado, 464,1799.

(5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de isopropilo (N-32): Obtenido a partir de L-1 y PheOiPr, HCl como un sólido, utilizando dimetilformamida como disolvente, después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 5/1). 1H RMN (CDCls): 8,48 (m, 1H), 8,01 (m, 1H), 7,89 (m, 2H,), 7,46 (m, 2H), 7,39-7,19 (m, 6H), 5,15 (d(a), 1H, J = 7,7), 5,07 (sept, 1H, J = 6,3), 4,92 (m, 1H), 3,29 (dd, 1H, J = 6,2, 13,8), 3,22 (dd, 1H, J = 6,0, 13,8), 1,27 (d, 3H, J = 6,3), 1,22 (d, 3H, J = 6,3). HRMS: calculado para C²²H²⁴N³O², 362,1869; hallado, 362,1851.

(3-metil-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de isopropilo (N-33): Obtenido a partir de L-2 y PheOiPr, HCl como un sólido, utilizando dimetilformamida, después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 6/1).

1H RMN (CDCl3): 8,36 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,37-7,18 (m, 6H), 5,06 (sept, 1H, J = 6,3), 5,01 (m, 1H), 4,88 (d(a), 1H, J = 7,3), 3,31 (dd, 1H, J = 6,2, 13,7), 3,22 (dd, 1H, J = 6,0, 13,7), 1,27 (d, 3H, J = 6,3), 1,22 (d, 3H, J = 6,3). HRMS: calculado para C²³H²⁶N³O², 376,2025; hallado, 376,2027.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-34): Obtenido a partir de L-8 y B-7 como un aceite (6,31 g, 89%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCl3): 8,42 (s, 1H), 7,99 - 7,92 (m, 2H), 7,52- 7,42 (m, 2H), 7,39 - 7,28 (m, 5H), 7,28 - 7,24 (m, 2H), 6,22 (dd, J = 3,2, 1,9 Hz, 1H), 5,85 (dd, J = 3,2, 0,7 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,95 (dt, J = 7,5, 5,3 Hz, 1H), 4,23 - 4,11 (m, 4H), 3,24 - 3,18 (m, 2H), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O³428,1974; hallado: 428,1965.

2-(3-bencil-5-fenilpirazin-2-ilamino)-3-(furan-3-il)propanoato de etilo (N-35): Obtenido a partir de L-8 y B-11 como un aceite (1,2 g, 89%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo de 95/5 a 9/1).

1H RMN (CDCl3): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,40 - 7,24 (m, 7H), 6,96 (m, 1H), 5,96 (m, 1H), 5,00 (m, 1H), 4,93 (m, 1H), 4,24 - 4,14 (m, 4H), 3,02 (dd, 1H, J = 5,1, 14,7), 2,95 (dd, 1H, J = 5,4, 14,7), 1,22 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O³428,1974; hallado: 428,2006.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-36): Obtenido a partir de L-8 y B-8 como un aceite (0,69 g, 74%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano). 1H RMN (CDc I3): 8,38 (s, 1H), 7,96 - 7,89 (m, 2H), 7,48 - 7,40 (m, 2H), 7,38 - 7,26 (m, 5H), 7,25 - 7,19 (m, 1H), 5,83 - 5,77 (m, 1H), 5,72 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,89 (dt, J = 7,5, 5,3 Hz, 1H), 4,21 - 4,08 (m, 4H), 3,12 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O³, 442,2131; hallado, 442,2121.

2-((3-bencil-5-(p-tolil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-37): Obtenido a partir de L-10 y B-8 como un aceite (0,23 g, 45%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCI³): 8,38 (s, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,26 - 7,17 (m, 7H), 5,81 (m, 1H), 5,74 (d, 1H, J = 3,0), 5,07 (d, 1H, J = 7,9), 4,91 (m, 1H), 4,15 (m, 4H), 3,13 (d, 2H, J = 5,3), 2,41 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O³, 456,2287; hallado, 456,2274.

2-((3-bencil-5-(m-tolil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-38): Obtenido a partir de L-11 y B-8 como un aceite (0,20 g, 26%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96:4).

1H RMN (CDCI³): 8,39 (s, 1H), 7,77 (m, 1H), 7,72 (m, 1H), 7,37 - 7,23 (m, 6H), 7,17 (m, 1H), 5,81 (m, 1H), 5,74 (d, 1H, J = 3,0), 5,09 (d, 1H, J = 7,5), 4,91 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,12 (d, 2H, J = 5,3), 2,45 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,22 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O³, 456,2287; hallado, 456,2253.

(3-bencil-5-(2-metoxifenil)pirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-39): Obtenido a partir de L-14 y PheOEt, HCl como un aceite (0,42 g, 72%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 90:10). 1H RMN (CDCI³): 8,59 (s, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,37 - 7,26 (m, 2H), 7,26 - 7,17 (m, 7H), 7,08 (m, 1H), 7,03 - 6,92 (m, 3H), 5,01 -4,93 (m, 1H), 4,86 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,11 (s, 2H), 4,10 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,15 (dd, J = 13,8, 5,5 Hz, 1H), 3,06 (dd, J = 13,8, 6,0 Hz, 1H), 1,16 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³, 468,2287; hallado, 468,2282.

2-((3-bencil-5-(2-metoxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-40): Obtenido a partir de L-14 y B-7 como un aceite (0,40 g, 64%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 90:10).

1H RMN (CDCI³): 8,58 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,37 - 7,27 (m, 5H), 7,25 - 7,19 (m, 2H), 7,08 (td, J = 7,5, 1.0 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,3, 0,6 Hz, 1H), 6,20 (dd, J = 3,1, 1,8 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 3,1, 0,5 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,00 - 4,91 (m, 1H), 4,15 (s, 2H), 4,13 (qd, J = 7,1, 1,4 Hz, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,19 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 1,19 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O⁴, 458,2080; hallado, 458,2083.

2-((3-benc¡l-5-(2-metox¡fen¡l)p¡raz¡n-2-¡l)amino)-3-(furan-3-¡l)propanoato de etilo (N-41): Obtenido a partir de L-14 y B-11 como un aceite (0,53 g, 84%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 90:10).

1H RMN (CDCla): 8,60 (s, 1H), 7,89 (dd, J = 7,6, 1,7 Hz, 1H), 7,38 - 7,19 (m, 7H), 7,13 - 7,04 (m, 1H), 7,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 5,97 - 5,91 (m, 1H), 5,02- 4,87 (m, 2H), 4,24 - 4,07 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 2,97 (qd, J = 14,7, 4.8 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O⁴, 458,2080; hallado, 458,2095.

2-((3-benc¡l-5-fenilp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(p¡r¡d¡n-2-¡l)propanoato de etilo (N-42): Obtenido a partir de L-8 y B-22 como un aceite (0,45 g, 64%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95: 5 a 75:25).

1H RMN (CDCla): 8,42- 8,39 (m, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,95 - 7,89 (m, 2H), 7,52 (td, J = 7,6, 1,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,39 (m, 2H), 7,36 - 7,29 (m, 3H), 7,29 - 7,23 (m, 2H), 7,23 - 7,18 (m, 1H), 7,11 (ddd, J = 7,6, 4,9, 1,0 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,03 (dt, J = 7,3, 5,4 Hz, 1H), 4,20 (s, 2H), 4,08 (una vez al día, J = 7,1, 1,1 Hz, 2H), 3,39 - 3,27 (m, 2H), 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷N⁴O², 439,2134; hallado, 439,2152.

(5-fenil-3-((tetrah¡drofuran-2-¡l)met¡l)p¡raz¡n-2-¡l)fen¡lalan¡nato de etilo (N-42'): Obtenido como una mezcla de dos diastereoisómeros a partir de L-26 y PheOEt, HCl como un aceite (0,06 g, 21%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 93: 7). 1H RMN (CDCh): 8,34 (s, 0,5H), 8,33 (s, 0,5H), 7,89 - 7,84 (m, 2H), 7,45 - 7,40 (m, 2H), 7,35 - 7,21 (m, 6H), 6,62 (d, J = 7,5 Hz, 0,5H), 6,44 (d, J = 7,1 Hz, 0,5H), 4,95 (dd, J = 13,0, 6,8 Hz, 0,5H), 4,86 (td, J = 7,4, 5,9 Hz, 0,5H), 4,37 - 4,30 (m, 0,5H), 4,30 - 4,23 (m, 0,5H), 4,22- 4,13 (m, 2H), 3,89 - 3,79 (m, 0,5H), 3,77 - 3,58 (m, 1,5H), 3,31 - 2,88 (m, 4,5H), 2,17 - 2,00 (m, 1H), 1,92- 1,61 (m, 3,5H), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 1,5H), 1.21 (t, J = 7,1 Hz, 1,5H). HRMS: calculado para C²⁶H³⁰N³O³, 432,2287; hallado, 432,2273.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(4,5-d¡met¡lfuran-2-¡l)propanoato de etilo (N-43): Obtenido a partir de L-8 y B-9 como un aceite (0,20 g, 49%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,39 (s, 1H), 7,97 - 7,90 (m, 2H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 7,39 - 7,19 (m, 6H), 5,65 (s, 1H), 5,11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4,88 (dt, J = 7,5, 5,4 Hz, 1H), 4,19 - 4,12 (m, 4H), 3,09 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O³, 456,2287; hallado, 456,2337.

2-((3-benc¡l-5-fenilp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(4,5-d¡met¡lt¡ofen-2-¡l)propanoato de etilo (N-44): Obtenido a partir de L-8 y B-17 como un aceite (0,24 g, 47%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96:4).

1H RMN (CDCl3): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,28 (m, 5H), 6,33 (s, 1H), 5,12 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,92 (dt, 1H, J = 7,2, 5,0), 4,18 (m, 4H), 3,32 (dd, 1H, J = 4,7, 14,8), 3,26 (dd, 1H, J = 5,4, 14,8), 2,28 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O²S, 472,2059; hallado, 472,2054.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(4,5-d¡met¡loxazol-2-¡l)propanoato de etilo (N-45): Obtenido a partir de L-8 y B-40 como un aceite (0,20 g, 49%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo de 97:3 a 3/1). 1H RMN (CDCh): 8,39 (s, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,37-7,21 (m, 6H), 5,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,07 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,15 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 5,6 y 15,3 Hz, 1H), 3,22 (dd, J = 5,4 y 15,3 Hz, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,18 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁹N⁴O³, 457,2240; hallado, 457,2234.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)amino)-3-(4-fluorofen¡l)propanoato de etilo (N-46): Obtenido a partir de (L-8) y (B-1) como un aceite (0,45 g, 69%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCl3): 8,41 (s, 1H), 7,99 - 7,91 (m, 2H), 7,51 - 7,41 (m, 2H), 7,40 - 7,32 (m, 1H), 7,31 - 7,25 (m, 3H), 7,23 - 7,17 (m, 2H), 6,91 - 6,79 (m, 4H), 4,99 - 4,84 (m, 2H), 4,21 - 4,06 (m, 4H), 3,15 (dd, J = 13,9, 5,1 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 13,9, 5.5 Hz, 1H), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2110.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)amino)-3-(3-fluorofen¡l)propanoato de etilo (N-46'): Obtenido a partir de L-8 y B-32 en forma de aceite (0,25 g, 64%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,44 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,32- 7,23 (m, 5H), 7,17 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,73 (m, 1H), 4,98 (m, 2H), 4,16 (m, 4H), 3,18 (dd, J = 5,5, 13,8 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 5,1, 13,8 Hz, 1H), 1,21 (t, J = 7.1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C28H27FN3O2, 456,2087; hallado, 456,2065.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)amino)-3-(2-fluorofen¡l)propanoato de etilo (N-47): Obtenido a partir de L-8 y B-27 como un aceite (0,32 g, 79%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCl3): 8,42 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,27 (m, 6H), 6,98 (m, 3H), 4,99 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3.22 (dd, 1H, J = 13,9, 5,5), 3,16 (dd, 1H, J = 13,9, 6,3), 1,20 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2084.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(2,4-d¡fluorofenil)propanoato de etilo (N-48): Obtenido a partir de L-8 y B-28 como un aceite (0,27 g, 61%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96:4).

1H RMN (CDCl3): 8,42 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,27 (m, 5H), 6,98 (m, 1H), 6,70 (m, 2H), 4,97 (m, 2H), 4,16 (m, 4H), 3,22 (dd, 1H, J = 5,4, 14,3), 3,10 (dd, 1H, J = 6,1, 14,3), 1,22 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶F²N³O², 474,1993; hallado, 474,1988.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-clorofenil)propanoato de etilo (N-49): Obtenido a partir de L-8 y B-29 como un aceite (0,38 g, 64%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo de 97:3 a 96:4).

1H RMN (CDCla): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,30 (m, 3H) 7,22 (m, 2H), 7,14 (m, 2H) 6,85 (m, 2H), 4,95 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,16 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 1,23 (t3H, J = 7,2 Hz,). Hr Ms : calculado para C28H27ClNaO2, 472,1792; hallado, 472,1782.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-bromofenil)propanoato de etilo (N-50): Obtenido a partir de L-8 y B-31 como un aceite (0,37 g, 57%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo de 97:3 a 96:4).

1H RMN (CDCla): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,29 (m, 5H), 7,22 (m, 2H), 6,79 (m, 2H), 4,95 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,16 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 1,23 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para CasHa/Br^Oa, 516,1287; hallado, 516,1267.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(o-tolil)propanoato de etilo (N-51): Obtenido a partir de L-8 y B-20 como un aceite (0,48 g, 90%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,40 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,48 - 7,42 (m, 2H), 7,38 - 7,24 (m, 6H), 7,15 (m, 2H), 7,06 (m, 1H), 6,93 (m, 1H), 4.92 (m, 2H), 4,16 (m, 4H), 3,14 (dd, 1H, J = 6,1, 14,0), 3,02 (dd, 1H, J = 7,1, 14,0), 2,29 (s, 3H), 1,16 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹N³O², 452,2338; hallado, 452,2352.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoato de etilo (N-52): Obtenido a partir de L-8 y B-6 como un aceite (0,28 g, 61%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCta): 8,41 (s, 1H), 8,07 - 7,90 (m, 2H), 7,48 - 7,42 (m, 2H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 7,30 - 7,26 (m, 1H), 7,26 - 7,23 (m, 1H), 7,21 - 7,16 (m, 2H), 7,15 - 7,08 (m, 1H), 7,07 - 7,01 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,78 (d, 1H, J = 7,5), 4,93 (t, 1H, J = 5,9), 4.92 (t, 1H, J = 6,5), 4,88 - 4,79 (m, 2H), 4,11 (q, 2H, J = 7,1), 4,11 (q, 2H, J = 15,4), 3,11 (dd, 1H, J = 13,8, 5,5), 3,03 (dd, 1H, J = 13,8, 6,1), 2,30 (s, 3H), 1,17 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C29H29NaO2, 452,2338; hallado, 452,2408.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(p-tolil)propanoato de etilo (N-53): obtenido a partir de L-8 y B-21 como un aceite (0,35 g, 87%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 94:6). 1H RMN (CDCta): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,28 (m, 3H), 7,22 (m, 2H), 7,04 (m, 2H), 6,89 (m, 2H), 4.93 (m, 2H), 4,15 (m, 4H), 3,15 (dd, 1H, J = 13,8, 5,2), 3,06 (dd, 1H, J = 13,8, 5,8), 2,35 (s, 3H), 1,21 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹N³O², 452,2338; hallado, 452,2325.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-propilfenil)propanoato de etilo (N-54): Obtenido a partir de L-8 y B-37 como un aceite (0,27 g, 79%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,26 (m, 5H), 7,16 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6.82 (m, 1H), 4,93, (m, 2H), 4,14 (m, 4H), 3,15 (dd, 1H, J = 13,7, 5,6), 3,07 (dd, 1H, J = 13,7, 6,1), 2,56 (m, 2H), 1,63 (m, 2H), 1,18 (t, 3H, J = 7,2), 0,95 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para Ca1Ha4NaO2, 480,2651; hallado, 480,2661.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-propilfenil)propanoato de etilo (N-55): Obtenido a partir de L-8 y B-36 como un aceite (0,25 g, 73%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,26 (m, 5H), 7,05 (m, 2H), 6,91 (m, 2H), 4,93, (m, 2H), 4,13 (m, 4H), 3,14 (dd, 1H, J = 13,9, 5,5), 3,06 (dd, 1H, J = 13,9, 6,0), 2,59 (m, 2H), 1,65 (m, 2H), 1,19 (t, 3H, J = 7,2), 0,97 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para Ca1Ha4NaO2, 480,2651; hallado, 480,2671.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-isopropilfenil)propanoato de etilo (N-56): Obtenido a partir de L-8 y B-33 como un aceite (0,25 g, 73%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCh): 8,40 (s, 1H), 7,97 - 7,90 (m, 2H), 7,49 - 7,40 (m, 2H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 7,32- 7,23 (m, 3H), 7,23 -7,17 (m, 2H), 7,12- 7,05 (m, 2H), 6,94 - 6,88 (m, 2H), 4,99 - 4,84 (m, 2H), 4,18 - 4,06 (m, 4H), 3,08 (qd, 2H, J = 13,8, 5,7), 2,96 - 2,84 (m, 1H), 1,25 (d, 6H, J = 6,9), 1,16 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para Ca1Ha4NaO2, 480,2683; hallado, 480,2690.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(4-ciclopropilfenil)propanoato de etilo (N-57): Obtenido a partir de L-8 y B-34 como un aceite (0,46 g, 76%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,31-7,23 (m, 3H), 7,20 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 6.86 (m, 2H), 4,93, (m, 2H), 4,13 (m, 4H), 3,13 (dd, 1H, J = 5,3, 13,9), 3,04 (dd, 1H, J = 5,9, 13,9), 1,89 (m, 1H), 1,19 (t, 3H, J = 7,2), 0,98 (m, 2H), 0,69 (m, 2H). HRMS: calculado para Ca¹Ha²NaO², 478,2495; hallado, 478,2487.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-ciclopropilfenil)propanoato de etilo (N-58): Obtenido a partir de L-8 y B-35 como un aceite (0,46 g, 79%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,28-7,19 (m, 5H), 7,13 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 6.82 (m, 1H), 6,77 (m, 1H), 4,93, (m, 2H), 4,13 (m, 4H), 3,13 (dd, 1H, J = 5,5, 13,7), 3,05 (dd, J = 6,0, 13,7 Hz, 1H), 1.86 (m, 1H), 1,18 (t, 3H, J = 7,2), 0,96 (m, 2H), 0,67 (m, 2H). HRMS: calculado para Ca¹Ha²NaO², 478,2495; hallado, 478,2480.

2-((3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(tiofen-2-il)propanoato de etilo (N-59): Obtenido a partir de L-8 y B-12 como un aceite (0,51 g, 80%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,42 (s, 1H), 8,00 - 7,89 (m, 2H), 7,50 - 7,42 (m, 2H), 7,40 - 7,32 (m, 1H), 7,32- 7,26 (m, 3H), 7,26 - 7,21 (m, 2H), 7,14 - 7,08 (m, 1H), 6,85 (dd, J = 5,2; 3,4 Hz, 1H), 6,58 - 6,50 (m, 1H), 5,12 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,99 (dt, J = 7,1, 5,0 Hz, 1H), 4,17 (s, 2H), 4,14 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,44 (dd, J = 14,6, 4,7 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 14,9, 4,9 Hz, 1H), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Hr MS: calculado para C²⁶H²⁶N³O²S, 444,1746; hallado, 444,1766.

2-((3-benc¡l-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)amino)-3-(3-met¡lt¡ofen-2-¡l)propanoato de etilo (N-60): Obtenido a partir de L-8 y B-18 como un aceite (0,41 g, 76%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCla): 8,44 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,33 - 7,23 (m, 5H), 7,05 (d, 1H, J = 4,8), 6,75 (d, 1H, J = 4,8), 5,15 (d, 1H, J = 7,1), 4,96 (m, 1H), 4,15 (m, 4H), 3,41 (dd, 1H, J = 5,1, 15,1), 3,31 (dd, 1H, J = 5,1, 15,1), 2,0 (s, 3H), 1,23 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O²S, 458,1902; hallado, 458,1910.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(5-et¡lt¡ofen-2-¡l)propanoato de etilo (N-61): Obtenido a partir de L-8 y B-19 como un aceite (0,47 g, 84%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCla): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,33 - 7,23 (m, 5H), 6,55 (m, 1H), 6,39 (m, 1H), 5,13 (d, 1H, J = 7,1), 4,91 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,34 (m, 2H), 2,79 (qd, 2H, J = 0,8, 7,5), 1,30 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 1,24 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O²S, 472,2059; hallado, 472,2055.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(5-et¡lfuran-2-il)propanoato de etilo (N-62): Obtenido de L-8 y B-10 como un sólido amarillo (0,48 g, 74%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,39 (s, 1H), 7,96 - 7,89 (m, 2H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 7,37 - 7,26 (m, 4H), 7,26 - 7,20 (m, 2H), 5,80 (dd, J = 2,0, 1,0 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,91 (dt, J = 7,5, 5,4 Hz, 1H), 4,22- 4,08 (m, 4H), 3,14 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 2,56 (qd, J = 7,5, 0,6 Hz, 2H), 1,21 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,19 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O³, 457,2319; hallado, 457,2314.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(5-c¡cloprop¡lfuran-2-¡l)propanoato de etilo (N-63): Obtenido a partir de L-8 y B-39 como un aceite (0,31 g, 67%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3): 8,39 (s, 1H), 7,97 - 7,90 (m, 2H), 7,48 - 7,41 (m, 2H), 7,38 - 7,20 (m, 6H), 5,78 (dd, J = 3,1,0,5 Hz, 1H), 5,72 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,08 (d, 1H, J = 7,6), 4,90 (dt, 1H, J = 7,6, 5,3), 4,20 - 4,11 (m, 4H), 3,12 (d, 2H, J = 5,3), 1,81 (tt, 1H, J = 8,5, 5,1), 1,22 (t, 3H, J = 7,1), 0,88 - 0,80 (m, 2H), 0,73 - 0,65 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³, 468,2287; hallado, 468,2291.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(5-(tr¡fluoromet¡l)furan-2-¡l)propanoato (N-64) de etilo: Obtenido a partir de L-8 y B-38 como un aceite (0,17 g, 44%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 93/7). 1H RMN (CDCl3): 8,40 (s, 1H), 7,99 - 7,92 (m, 2H), 7,50 - 7,42 (m, 2H), 7,40 - 7,33 (m, 1H), 7,33 - 7,20 (m, 5H), 6,55 (dd, J = 3,3, 1,2 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 3,3, 0,6 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 4,98 (dt, J = 7,1, 5,2 Hz, 1H), 4,26 - 4,09 (m, 4H), 3,29 (dd, J = 15,2, 5,2 Hz, 1H), 3,19 (dd, J = 15,2, 5,2 Hz, 1H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁵F³N³O³, 496,1848; hallado, 496,1847.

2-((3-bencil-5-fen¡lp¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(4-(benc¡lox¡)fen¡l)propanoato de etilo (N-65): Obtenido a partir de L-8 y B-5 como un aceite (0,68 g, 70%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3): 8,41 (s, 1H), 8,00 - 7,86 (m, 2H), 7,50 - 7,16 (m, 13H), 6,90 - 6,84 (m, 2H), 6,84 - 6,79 (m, 2H), 5,05 (s, 2H)), 4,99 - 4,84 (m, 2H), 4,12 (s, 2H, J = 7,1,0,6), 4,12 (s, 2H), 3,11 (dd, 1H, J = 13,9, 5,0), 3,01 (dd, 1H, J = 13,9, 5,5), 1,19 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C³⁵H³³N³O³, 544,2600; hallado, 544,2654.

(3-bencil-5-(4-(benc¡lox¡)fen¡l)p¡raz¡n-2-¡l)fen¡lalan¡nato de etilo (N-66): Obtenido, a partir de L-21 y PheOEt, HCl como un sólido blanco (4,47 g, 87%) después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 95/5 a 94/6). 1H RMN (CDCh): 8,36 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,32-7,20 (m, 8H), 7,08 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 5,15 (s, 2H), 4,97 (m, 1H), 4,86 (d (a), 1H, J = 8,1), 4,14 (m, 4H), 3,17 (dd, 1H, J = 5,5, 13,8), 3.08 (dd, 1H, J = 6,0, 13,8), 1,19 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C³⁵H³⁴N³O³, 544,2600; hallado, 544,2609.

2-((3-bencil-5-(4-(benc¡lox¡)fen¡l)p¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(furan-2-¡l)propanoato de etilo (N-67): Obtenido, a partir de L-21 y B-7 como un aceite (0,83 g, 79%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de 94/6 a 93/7). 1H RMN (CDCh): 8,35 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,32-7,20 (m, 5H), 7,08 (m, 2H), 6,22 (dd, 1H, J = 2,0, 3,0), 5,85 (dd, 1H, J = 0,7; 3,0), 5,15 (s, 2H), 5,07 (d(a), 1H, J = 7,6), 4,94 (m, 1H), 4,16 (m, 4H), 3,20 (d, 2H, J = 5,3), 1,21 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C³³H³²N³O⁴, 534,2393; hallado, 534,2410.

2-((3-benc¡l-5-(4-(bencilox¡)fen¡l)p¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(5-et¡lfuran-2-¡l)propanoato de etilo (N-68): Obtenido, a partir de L-21 y B-10 como un aceite (0,65 g, 60%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 94/6). 1H RMN (CDCh): 8,34 (s, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,32-7,20 (m, 5H), 7.08 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,76 (d, 1H, J = 3), 5,14 (s, 2H), 5,06 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,91 (m, 1H), 4,16 (m, 4H), 3,15 (d, 2H, J = 5,4), 2,57 (q, 2H, J = 7,8), 1,23 (t, 3H, J = 7,2), 1,21 (t, 3H, J = 7,8). HRMS: calculado para C³⁵H³⁶N³O⁴, 562,2706; hallado, 562,2716.

2-((3-benc¡l-5-(4-(benc¡loxi)fen¡l)p¡raz¡n-2-¡l)am¡no)-3-(4,5-d¡met¡lfuran-2-¡l)propanoato de etilo (N-69): Obtenido, a partir de L-21 y B-9 como un aceite (0,62 g, 56%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano -acetato de etilo 94/6). 1H RMN (CDCh): 8,34 (s, 1H), 7,88 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,32-7,20 (m, 5H), 7,07 (m, 2H), 5,66 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 5,06 (d(a), 1H, J = 7,4), 4,88 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,10 (d, 2H, J = 5,4), 2,14 (s, 3H), 1,89 (s, 3H), 1,23 (t, 3H, J = 7,8). HRMS: calculado para C³⁵H³⁶N³O⁴, 562,2706; hallado, 562,2690.

2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(3-propilfenil)propanoato de etilo (N-70): Obtenido, a partir de L-21 y B-37 (0,97 g, 85%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 98/2). 1H RMN (CDCh): 8,36 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,32 (m, 11H), 7,07 (m, 3H), 6,92 (m, 1H), 6,82 (m, 1H), 5,15 (s, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,84 (d, 1H, J = 7,5), 4,12 (m, 4H), 3,14 (dd, 1H, J = 13,7, 5,7), 3,07 (dd, 1H, J = 13,7, 6,2), 2,56 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,18 (t, 3H, J = 7,1), 0,96 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C³⁸H⁴⁰N³O³: 586,3069; hallado, 586,3096.

2- (3-bencil-5-fenilpirazin-2-ilamino)-4-fenilbutanoato de etilo (N-71): Obtenido a partir de L-8 y B-42 como un aceite (0,36 g, 80%) tras una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCl3): 8,42 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,38 (m, 5H), 7,28 (m, 3H), 7,20 (m, 1H), 7,06 (m, 2H), 4,97 (d (a), 1H, J = 7,0), 4,73 (m, 1H), 4,27 (d, 1H, J = 15,4), 4,21 (d, 1H, J = 15,4), 4,16 (q, 2H, J = 7,1), 2,43 (m, 2H), 2,21 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 1,26 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O², 452,2338; hallado, 452,2335.

(2-bencil-5H-cromeno[3,4-b]pirazin-3-il)fenilalaninato de etilo (N-72): Obtenido a partir de L-27 y PheOEt, HCl como un aceite naranja (0,05 g, 33%) después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 93/7).

1H RMN (CDCh): 8,07 (dd, 1H, J = 1,6, 7,7), 7,38-7,18 (m, 9H), 7,12 (dt, 1H, J = 1,0, 7,8), 7,01-6,93 (m, 3H), 5,18 (s, 2H), 5,01 -4,91 (m, 2H), 4,20-4,06 (m, 4H), 3,15 (dd, 1H, J = 5,2, 13,9), 3,05 (dd, 1H, J = 5,9, 13,9), 1,22 (t, 3H, J = 7,8). HRMS: calculado para C²⁹H²⁸N³O³, 466,2131; hallado, 466,2117.

(5-fenil-3-(piridin-3-ilmetil)pirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-73): Obtenido a partir de L-24 y PheOEt, HCl como un aceite (0,28 g, 62%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 2/1). 1H RMN (CDCl3): 8,52 (m, 3H), 8,44 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,46 (m, 3H), 7,35 (m, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,19 (ddd, 1H, J = 0,9, 4,9, 5,6), 7,03 (m, 2H), 5,01 (m, 1H), 4,84 (d (ancho, 1H, J = 7,4), 4,17 (q, 2H, J = 7,0), 4,08 (s, 2H), 3,24 (dd, 1H, J = 5,9; 13,5), 3,16 (dd, 1H, J = 5,9, 13,6), 1,23 (t, 3H, J = 7,0). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷N⁴O², 439,2134; hallado, 439,2137.

(3-(2-metilbencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-74): Obtenido a partir de L-12 y PheOEt, HCl como un aceite (0,40 g, 86%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCl3): 8,43 (s, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,43 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,20 (m, 5H), 7,11 (m, 1H), 6,98 (m, 3H), 5,01 (m, 1H), 4,86 (d(a), 1H, J = 7,1), 4,14 (m, 4H), 3,17 (dd, 1H, J = 5,6, 13,8), 3,07 (dd, 1H, J = 6,0, 13,8), 2,33 (s, 3H), 1,21 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹N³O², 452,2338; hallado, 452,2338.

3- (furan-2-il)-2-((3-(2-metilbencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoato de etilo (N-75): Obtenido a partir de L-12 y B-7 como un aceite (0,30 g, 71%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,43 (s, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,20 (m, 3H), 7,13 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,21 (dd, 1H, J = 1,8, 3,1), 5,85 (m, 1H), 5,09 (d (a), 1H, J = 7,6), 4,98 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,20 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 1,23 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O³, 442,2131; hallado, 442,2137.

(3-(3-metilbencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-76): Obtenido a partir de L-13 y PheOEt, HCl como un aceite (0,41 g, 89%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,43 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,21 (m, 4H), 7,08-6,96 (m, 4H), 4,97 (m, 2H), 4,14 (m, 4H), 3,17 (dd, 1H, J = 5,0, 13,7), 3,07 (dd, 1H, J = 5,7, 13,7), 2,31 (s, 3H), 1,20 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹N³O², 452,2338; hallado, 452,2337.

3-(furan-2-il)-2-((3-(3-metilbencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoato de etilo (N-77): Obtenido de L-13 y B-7 como un aceite (0,35 g, 75%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCta): 8,42 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,08 (m, 3H), 6,22 (dd, 1H, J = 2,0, 3,3), 5,83 (m, 1H), 5,16 (d(a), 1H, J = 7,6), 4,96 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,21 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,21 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O³, 442,2131; hallado, 442,2133.

(3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-78): Obtenido a partir de L-3 y PheOEt, HCl como un aceite (0,19 g, 40%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 94/6). 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 8,44 (s, 1H), 7,94-7,91 (m, 2H), 7,48-7,44 (m, 2H), 7,38-7,34 (m, 1H), 7,28-7,22 (m, 5H), 7,11- 7,05 (m, 4H), 5,10-5,08 (m, 1H), 5,04-4,99 (m, 1H), 4,20-4,09 (m, 4H), 3,28-3,23 (m, 1H), 3,18-3,13 (m, 1H)), 1,23-1,20 (t, 3H, J = 7,9). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2096.

2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoato de etilo (N-79): Obtenido a partir de L-3 y B-6 como un aceite (0,34 g, 69%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 8,42 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,23 (m, 2H), 7,16-7,04 (m, 4H), 6,95 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 5,06 (d(a), 1H, J = 7,3), 4,97 (m, 1H), 4,15 (m, 4H), 3,20 (dd, 1H, J = 5,5, 13,7), 3,10 (dd, 1H, J = 6,7, 13,7), 2,31 (s, 3H), 1,21 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹FN³O², 470,2244, hallado, 470,2253.

2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (N-80): Obtenido a partir de L-3 y B-3 como un aceite (0,32 g, 63%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 94/6).

1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 8,42 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,23 (m, 2H), 7,16 (m, 1H), 7,06 (m, 2H), 6,78 (m, 1H), 6,68 (m, 2H), 5,08 (d (a), 1H, J = 7,2), 4,99 (m, 1H), 4,16 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,23 (dd, 1H, J = 5,6; 13,9), 3,12 (dd, 1H, J = 6,4, 13,9), 1,22 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹FN³O³, 486,2193, hallado, 486,2182.

2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-81): Obtenido a partir de L-3 y B-7 como un aceite (0,29 g, 62%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 8,42 (s, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,09 (m, 2H), 6,24 (dd, 1H, J = 1,9, 3,2), 5,95 (d, 1H, J = 3,1), 5,28 (d (a), 1H, J = 7,6), 5,01 (m, 1H), 4,19 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,26 (m, 2H), 1,24 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁶H²⁵FN³O³, 446,1880, hallado, 446,1873.

2- ((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-82): Obtenido a partir de L-3 y B-8 en forma de aceite (0,23 g, 48%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCla, 400 MHz): 8,42 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,08 (m, 2H), 5.82 (m, 2H), 5,27 (d (a), 1H, J = 7,6), 4,97 (m, 1H), 4,19 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,20 (d, 2H, J = 5,8), 2,23 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷FN³O³, 460,2036, hallado, 460,2044.

3- (5-etilfuran-2-il)-2-((3-(2-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoato de etilo (N-83): Obtenido a partir de L-3 y B-10 como un aceite (0,19 g, 46%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5). 1H RMN (CDCla, 400 MHz): 8,41 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,07 (m, 2H), 5.82 (m, 2H), 5,27 (d(a), 1H, J = 7,3), 4,97 (m, 1H), 4,20 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,20 (d, 2H, J = 5,1), 2,57 (q, 2H, J = 7,5), 1,25 (t, 3H, J = 7,1), 1,20 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para C²⁸H²⁹FN³O³, 474,2193, hallado, 474,2198.

(3-(2-clorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-84): Obtenido a partir de L-4 y PheOEt, HCl como un aceite (0,19 g, 68%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96/4)1H RMN (CDCl3): 8,44 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,44 (m, 3H), 7,35 (m, 1H), 7,26-7,16 (m, 6H), 7,05 (m, 2H), 5,00 (m, 2H), 4,24 (m, 2H), 4,16 (dq, J = 7,2, 1,0 Hz, 2H), 3,22 (dd, J = 13,7, 5,4 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 13,7, 6,3 Hz, 1H), 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H). HRMS: calculado para C2sH27ClN3O2: 472,1792; hallado, 472,1784.

2-((3-(2-clorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-85): Obtenido a partir de L-4 y B-7 como un aceite (0,44 g, 65%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96/4).

1H RMN (CDCl3): 8,44 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,45 (m, 3H), 7,35 (m, 1H), 7,25-7,15 (m, 4H), 6,22 (m, 1H), 5,92 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,00 (m, 1H), 4,28 (m, 2H), 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,24 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C2sH25ClN3O3: 462,1584; hallado, 462,1576.

2-((3-(2-clorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-86): Obtenido a partir de L-4 y B-8 como un aceite (0,11 g, 36%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95/5).

1H RMN (CDCl3): 8,43 (s, 1H), 7,91 (m, 2H), 7,43 (m, 3H), 7,35 (m, 1H), 7,20 (m, 3H), 6,22 (m, 1H), 5,80 (m, 2H), 5,19 (d(a), 1H, J = 7,6), 4,98 (m, 1H), 4,28 (m, 2H), 4,20 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C27H27ClN3O3: 476,1741; hallado, 476,1744.

(3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-87): Obtenido a partir de L-6 y PheOEt, HCl como un aceite (0,40 g, 57%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 94:6). 1H RMN (CDCh): 8,45 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,36 - 7,21 (m, 4H), 7,10 - 6,92 (m, 5H), 5,02 (m, 1H), 4,85 (d(a), 1H, J = 7,5), 4,16 (q, 2H, J = 7,2), 4,11 (s, 2H), 3,21 (dd, 1H, J = 5,4, 13,8), 3,13 (dd, 1H, J = 5,9, 13,8), 1,22 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2067.

2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoato de etilo (N-88): Obtenido a partir de L-6 y B-7 como un aceite (0,22 g, 57%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,44 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,06 (m, 1H), 6,96 (m, 2H), 6,24 (dd, 1H, J = 2,0, 3,2), 5,89 (dd, 1H, J = 0,7; 3,2), 5,08 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,87 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,24 (d, 2H, J = 5,3), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁵FN³O³, 446,1880; hallado, 446,1883.

2- ((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-89): Obtenido a partir de L-6 y B-8 como un aceite (0,24 g, 57%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,43 (s, 1H), 7,93 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,96 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,06 (d(a), 1H, J = 7,9), 4,93 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,20 (d, 2H, J = 5,2), 2,22 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁷H²⁷FN³O³, 460,2036; hallado, 460,2039.

3- (5-etilfuran-2-il)-2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)propanoato de etilo (N-90): Obtenido a partir de L-6 y B-10 como un aceite (0,20 g, 90% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5). 1H RMN (CDCh): 8,43 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,96 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,78 (m, 1H), 5,06 (d (a), 1H, J = 7,7), 4,94 (m, 1H), 4,18 (m, 4H), 3,20 (d, 2H, J = 5,1), 2,57 (q, 2H, J = 7,6), 1,22 (m, 6H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁹FN³O³, 474,2193; hallado, 474,2199.

2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(m-tolil)propanoato de etilo (N-91): Obtenido a partir de L-6 y B-6 como un aceite (0,35 g, 74%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCl3): 8,45 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,23 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,93 (m, 3H), 6,81 (m, 1H), 4,96 (m, 1H), 4,82 (d (a), 1H, J = 7,4), 4,18 (m, 4H), 3,17 (dd, 1H, J = 5,5, 13,7), 3,09 (dd, 1H, J = 6,2, 13,7), 2,32 (s, 3H), 1,21 (t, 3H J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹FN³O², 470,2244; hallado, 470,2249.

2-((3-(3-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)amino)-3-(3-metoxifenil)propanoato de etilo (N-92): Obtenido a partir de L-6 y B-3 como un aceite (0,22 g, 45%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 95:5).

1H RMN (CDCI³): 8,44 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,19 (m, 2H), 6,93 (m, 3H), 6,79 (m, 1H), 6,60 (m, 2H), 4,97 (m, 1H), 4,81 (d (a), 1H, J = 7,7), 4,18 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,19 (dd, 1H, J = 5,7; 13,8), 3,10 (dd, 1H, J = 5,9, 13,8), 1,21 (t, 3H J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹FN³O³, 486,2193; hallado, 486,2209.

(3-(4-fluorobencil)-5-fenilpirazin-2-il)fenilalaninato de etilo (N-93): Obtenido a partir de L-7 y PheOEt, HCl como un aceite (0,12 g, 80% de pureza) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 94:6). 1H RMN (CDCl3): 8,44 (s, 1H), 7,96 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 3H), 7,16 (m, 2H), 7,01 - 6,94 (m, 4H), 5,02 (m, 1H), 4,88 (d (a), 1H, J = 7,5), 4,16 (q, 2H, J = 7,0), 4,10 (s, 2H), 3,24 (dd, 1H, J = 5,5, 13,8), 3,14 (dd, 1H, J = 5,9; 13,8), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁷FN³O², 456,2087; hallado, 456,2072.

2-(3-(2-metoxibencil)-5-fenilpirazin-2-ilamino)-3-fenilpropanoato de etilo (N-94): Obtenido a partir de L-5 y PheOEt, HCl como un aceite (0,1 g, 28%) después una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 96:4). 1H RMN (CDCl3): 8,37 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 7,21 (m, 4H), 7,02 (m, 2H), 6,93 (m, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,03 (d(a), 1H, J = 7,7), 5,08 (m, 1H), 4,17 (m, 4H), 3,72 (s, 3H), 3,20 (dd, 1H, J = 6,0, 13,9), 3,12 (dd, 1H, J = 6,2, 13,9), 1,21 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁹H²⁹N³O³, 468,2287; hallado, 468,2298.

Procedimiento general para la desbencilación de N-aril a-aminoésteres N que contienen O-bencilo. Se calentaron el compuesto considerado (0,53 mmol), formiato de amonio (0,17 g, 2,64 mmol) y paladio al 10% sobre carbono (30 mg, 0,026 mmol) a reflujo en etanol (15 ml) durante dos horas. La suspensión se filtró, el filtrado se concentró hasta sequedad para dar los productos desprotegidos bastante limpios tal como se describe a continuación.

(3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)tirosinato de etilo (N-95): Obtenido a partir de N-9 como un sólido blanco (0,18 g, 72%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97/3). 1H RMN (CDCh): 8,28 (s, 1H), 7,79 - 7,72 (m, 2H), 7,29 - 7,19 (m, 3H), 7,19 - 7,12 (m, 2H), 6,88 - 6,75 (m, 4H), 6,66 - 6,59 (m, 2H), 4,92- 4,75 (m, 2H), 4,13 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,09 (s, 2H), 3,06 (dd, J = 14,0, 5,4 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 14,0, 6,0 Hz, 1H), 1,19 (t, J = 7.1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁸N³O⁴, 470,2080; hallado, 470,2104.

2-((3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-metilfuran-2-il)propanoato de etilo (N-96): Obtenido a partir de N-29 como un vidrio (0,21 g, 81%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 3/1). 1H RMN (CDCl3): 8,29 (s, 1H), 7,76 (m, 2H), 7,28 (m, 5H), 6,84 (m, 2H), 5,98 (m, 1H), 5,76 (d(a), 1H, J = 3), 5,69 (s(a), 1H), 5,69 (d(a), 1H), 4,88 (m, 1H), 4,17 (m, 2H), 4,14 (s, 2H), 3,13 (dd, 2H), J = 3,0, 5,6), 2,23 (s, 3H), 1,23 (t, J = 7.1 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O⁴, 459,2112; hallado, 459,2108.

(3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)tirosinato de etilo (N-97): Obtenido a partir de N-65 como un sólido blanco (0,24 g, 46%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98,5/1,5). 1H RMN (CDCh): 8,39 (s, 1H), 7,98 - 7,88 (m, 2H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 7,38 - 7,31 (m, 1H), 7,31 - 7,22 (m, 3H), 7,22- 7,17 (m, 2H), 6,84 - 6,76 (m, 2H), 6,67 - 6,59 (m, 2H), 4,96 (s, 1H), 4,94 - 4,86 (m, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,19 - 4,07 (m, 2H), 3,13 - 3,03 (m, 1H), 3,03 -2.92 (m, 1H), 1,19 (t, 3H, J = 7,1). HRMS: calculado para C²⁸H²⁸N³O³, 454,2131; hallado, 454,2104.

Procedimiento general para la hidrólisis de N-aril a-aminoésteres N a los correspondientes N-aril a-aminoácidos O. En un matraz de fondo redondo, se mezclaron el éster considerado (0,0046 mol) e hidróxido de sodio en polvo (0,54 g, 0,0137 mol). La atmósfera se reemplazó con argón y se añadió tetrahidrofurano seco (30 ml). Se agitó durante la noche en atmósfera inerte, se acidificó con ácido clorhídrico 1 N y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir el ácido correspondiente tal como se describe a continuación.

(3-bencil-5-fenilpirazin-2-il)fenilalanina (O-1): Obtenido a partir de N-5 como una espuma dura (1,7 g, 91%). 1H RMN (DMSO-ds): 12,61 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,32- 7,15 (m, 11H), 6,84 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 4,30 (d, 1H, J = 14,5), 4,06 (d, 1H, J = 14,5), 3,21 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁴N³O², 410,1869; hallado, 410,1875.

2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4-(benciloxi)fenil)propanoico (O-2): Obtenido a partir de los intermedios N-8 o N-9 en forma de espuma dura (0,42 g, 87%). 1H r Mn (CDCh): 8,31 (s, 1H), 7,88 - 7,81 (m, 2H), 7,49 - 7,29 (m, 11H), 7,24 - 7,16 (m, 3H), 7,13 - 7,08 (m, 2H), 7,08 - 7,01 (m, 2H), 6,95 - 6,87 (m, 2H), 6,86 - 6,79 (m, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,86 - 4,76 (m, 1H), 4,71 (d, 1H), J = 6,3), 4,06 (d, 1H, J = 15,4), 4,00 (d, 1H, J = 15,5), 3,19 (dd, 1H, J = 14,2, 5,2), 3,01 (dd, 1H, J = 14,2, 6,9). HRMS: calculado para C⁴⁰H³⁶N³O⁴, 622,2706; hallado, 622,2763.

(3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)fenilalanina (O-3): Obtenido a partir de N-66 como una espuma que todavía contiene algo de acetato de etilo (3,73 g). 1H RMN (DMSO-afe): 12,60 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,29 - 7,15 (m, 9H), 7,04 (m, 2H), 6,71 (m, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,64 (m, 1H), 4,28 (d, 1H, J = 14,6), 4,03 (d, 1H, J = 14,5), 3,21 (m, 2H). HRMS: calculado para C³³H³⁰N³O³, 516,2287; hallado, 516,2273.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(3-propilfenil)propanoico (O-4): Este compuesto se obtuvo a partir de N-70 como un vidrio (0,76 g) que todavía contiene algo de acetato de etilo. 1H RMN (CDCl3): 8,33 (s, 1H), 7,86 (m, 2H), 7,34 (m, 11H), 7,09 (m, 5H), 6,96 (s, 1H), 6,87 (m, 1H), 4,81 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,07 (d, 1H, J = 15,4), 3.93 (d, 1H, J = 15,4), 3,27 (dd, 1H, J = 14,2, 5,2), 3,05 (dd, 1H, J = 14,2, 7,6), 2,56 (m, 2H), 1,62 (m, 2H), 0,93 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C³⁶H³⁶N³O³: 558,2757; hallado, 558,2746.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico (O-5): Obtenido a partir de N-67 como un espuma que todavía contiene algo de acetato de etilo (0,8 g). 1H RMN (CDCh): 10,29 (s (a), 1H), 8,33 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,37-7,23 (m, 7H), 7,08 (m, 2H), 6,25 (dd, 1H, J = 1,9, 3,4), 5,95 (dd, 1H, J = 0,5, 3,4), 5,14 (s, 2H), 5,0 (d (a), 1H, J = 7,4), 4,85 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,28 (dd, 1H, J = 5,0, 15,4), 3,20 (dd, 1H, J = 6,5, 15,0). HRMS: calculado para C³¹H²⁸N³O⁴, 506,2080; hallado, 516,2109.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoico (O-⁶): Obtenido a partir de N-69 como una espuma que todavía contiene algo de acetato de etilo (0,61 g). 1H RMN (CDCh): 9,16 (s(a), 1H), 8,32 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,49- 7,22 (m, 10H), 7,08 (m, 2H), 5,77 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 5,01 (d(a), 1H, J = ⁶,⁶), 4,76 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,18 (dd, 1H, J = 4,9; 15,3), 3,10 (dd, 1H, J = 7,1, 15,3), 2,14 (s, 3H), 1,89 (s, 3H). HRMS: calculado para C33H32^O4534,2393; hallado, 534,2410.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-(benciloxi)fenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-etilfuran-2-il)propanoico (O-7): Obtenido a partir de N-^{6 8}como una espuma que todavía contiene algo de acetato de etilo (0,59 g). 1H RMN (CDCh): 9,16 (s(a), ¹H), 8,32 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,41 (m, 2H), 7,37- 7,22 (m, 9H), 7,08 (m, 2H), 5,89 (m, 2H), 5,14 (s, 2H), 4,96 (d(a), 1H, J = 6,4), 4,80 (m, 1H), 4,12 (m, 2H), 3,23 (dd, 1H, J = 4,9; 15,2), 3,14 (dd, 1H, J = 7,1, 15,2), 2,57 (q, 2H, J = 7,6), 1,19 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C³³H³²N³O⁴, 534,2393; hallado, 534,2405.

(3-bencil-5-(4-(benciloxi)-3-fluorofenil)pirazin-2-il)fenilalanina (O-⁸): Obtenido a partir de N-10 como una espuma dura (0,56 g, 92%). 1H RMN (DMSO-afe): 12,61 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,73 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,29 - 7,16 (m, 11H), 6,82 (d(a), 1H, J = 8,2), 5,20 (s, 2H), 4,66 (m, 1H), 4,27 (d, 1H, J = 15,0), 4,02 (d, 1H, J = 15,0), 3,19 (m, 2H). HRMS: calculado para C³³H²⁹FN³O³, 535,2225; hallado, 535,2239.

Procedimiento general para la desbencilación de N-aril a-aminoácidos que contienen O-bencilo O. Se disolvieron el derivado de O-bencilo considerado (1,5 mmol) y formiato de amonio (2,8 g, 0,044 mol) en isopropanol (50 ml). A esto se le añadió paladio al 10% sobre carbono (0,16 g, 0,15 mmol) y la suspensión se calentó a reflujo durante una hora. Este se enfrió, se filtró y se concentró hasta sequedad a alto vacío. Esto dio lugar a una espuma que todavía contenía algo de isopropanol. En algunos casos, se detectó algo de compuesto sin reaccionar y el residuo bruto se sometió luego a una segunda ronda de hidrogenación. Tal como se describe a continuación, se hicieron algunos intentos para purificar aún más los aminoácidos resultantes (con pérdidas bastante grandes) pero resultó que mientras el compuesto bruto se haya sometido a un secado completo a alto vacío (para eliminar todo el formiato de amonio) es adecuado para su uso en la siguiente etapa.

(3-Bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)tirosina (O-9): El residuo se obtuvo a partir de O-2, se dispersó en agua y se filtró y el sólido obtenido se secó y se volvió a dispersar en ácido clorhídrico 0,5 M, se filtró y se secó completamente de nuevo para dar el compuesto puro (0,37 g, 45%). 1H RMN (DMSO-afe): 8,31 (s, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,22 (m, 5H), 7,02 (m, 2H), 6,82 (m, 2H), 6,61 (m, 2H), 6,54 (sa, 1H), 4,54 (m, 1H), 4,28 (d, 1H, J = 14,6), 4,02 (d, 1H, J = 14,6), 3,06 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁴N³O⁴: 442,1767; hallado, 442,1773.

(3-Bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)fenilalanina (O-10): El residuo se obtuvo a partir de O-3, se dispersó en agua y se filtró y el sólido obtenido se secó y se volvió a dispersar en ácido clorhídrico 0,5 M, se filtró y se secó completamente de nuevo para dar el compuesto puro (2,06 g, 70% del éster correspondiente). 1H RMN (DMSO-afe): 8,34 (s, ¹H), 7,72 (m, 2H), 7,20 (m, 5H), 7,08 (m, 5H), 6,82 (m, 2H), 6,34 (sa, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,05 (d, 1H, J = 14,8), 3,92 (d, 1H, J = 14,8), 3,25 (dd, 1H, J = 13,4, 4,7), 3,10 (dd, 1H, J = 13,4, 6,2). HRMS: calculado para C²⁶H²⁴N³O³: 426,1818; hallado, 426,1806.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(3-propilfenil)propanoico (O-11): El residuo se obtuvo a partir de O-4, disperso en agua, se basificó con amoniaco y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir este compuesto como un vidrio (0,5 g, 71% a partir del éster inicial) que todavía contenía una pequeña cantidad de acetato de etilo. 1H RMN (DMSO-afe): 9,56 (s(a), 1H), 8,38 (s, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,20 (m, ⁶H), 7,04 (m, 5H), 6,80 (m, 2H), 6,52 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,20 (d, 1H, J = 14,9), 3,98 (d, 1H, J = 14,9), 3,14 (m, 2H), 2,44 (m, 2H), 1,50 (m, 2H), 0,83 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O³: 468,2287; hallado, 468,2286.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(furan-2-il)propanoico (O-12): Este compuesto se obtuvo a partir de O-5 como un espuma dura (0,54 g, 85% a partir del éster inicial N-67) que todavía contenía una pequeña cantidad de isopropanol después de un secado extenso a alto vacío. 1H RMN (DMSO-afe): 9,56 (s(a), ¹H), 8,34 (s, ¹H), 7,73 (m, 2H), 7,46 (dd, 1H, J = 0,7, 1,8), 7,31-7,14 (m, ⁶H), 6,80 (m, 2H), 6,61 (d, 1H, J = 7,3), 6,30 (dd, 1H, J = 1,8, 3,1), 6,07 (dd, 1H, J = 0,7, 3,1), 4,67 (m, 1H), 4,20 (d, 1H, J = 14,8), 4,04 (d, 1H, J = 14,9), 3,24 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁴H²²N³O⁴: 416,1610; hallado, 416,1606.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(4,5-dimetilfuran-2-il)propanoico (O-13): El residuo se obtuvo a partir de O-⁶, se dispersó en agua, se basificó con amoniaco y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo de ^{1 /1}a ⁰/ ¹) para dar el compuesto como un vidrio que todavía contenía algo de acetato de etilo (0,21 g, 42% a partir del éster N-^{6 9}). 1H RMN (DMSO-afe): 12,4 (s, 1H), 9,49 (s(a), 1H), 8,33 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,32-7,16 (m, ⁶H), 6,80 (m, 2H), 6,54 (d, 1H, J = 8,0), 5,82 (s, 1H), 4,60 (m, 1H), 4,23 (d, 1H, J = 14,8), 4,04 (d, 1H, J = 14,8), 3,10 (m, 2H), 2,07 (s, 3H), 1,81 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O⁴: 444,1923; hallado, 444,1937.

Ácido 2-((3-bencil-5-(4-hidroxifenil)pirazin-2-il)amino)-3-(5-etilfuran-2-il)propanoico (O-14): El residuo se obtuvo a partir de O-7, se dispersó en agua, se basificó con amoniaco y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad para producir el compuesto con una pureza del 80% como un vidrio que todavía contenía algo de acetato de etilo (0,11 g). 1H RMN (DMSO-afe): 9,54 (s(a), 1H), 8,29 (s, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,41-7,16 (m, 6H), 6,80 (m, 2H), 5,79 (s(a), 2H), 4,37 (m, 1H), 4,08 (d, 1H, J = 14,5), 3,98 (d, 1H, J = 14,5), 3,24 (dd, 1H, J = 4,6; 15,2), 3,07 (dd, 1H, J = 6,6, 15,2), 2,45 (q, 2H, J = 7,6), 1,06 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O⁴: 444,1923; hallado, 444,1930.

(3-Bencil-5-(3-fluoro-4-hidroxifenil)pirazin-2-il)fenilalanina (O-15): Este compuesto se obtuvo a partir de O-8, utilizando etanol como disolvente, como una espuma dura (0,43 g, 92%) que todavía contiene una pequeña cantidad de etanol después de un secado extenso a alto vacío. 1H RMn (DMSO-afe): 8,37 (s, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,26-7,13 (m, 11H), 6,99 (m, 1H), 6,61 (d (a), 1H, J = 7,4), 4,55 (m, 1H), 4,18 (d, 1H, J = 14,7), 3,98 (d, 1H, J = 14,7), 3,23 (dd, 1H, J = 4,7, 13,6), 3,13 (dd, 1H, J = 8,9, 13,6). HRMS: calculado para C²⁶H²³FN³O³: 444,1723; hallado, 444,1732.

Procedimiento general para la síntesis de imidazo[1,2-a]pirazinas P protegidas con O a partir de a-aminoésteres N mediante las etapas o y p. En un recipiente sellable, se pesaron el a-aminoéster de N-pirazilo considerado (1,0 mmol) e hidróxido de sodio (0,06 g, 1,5 mmol). El aire se reemplazó con argón y se inyectó THF anhidro (5 ml). Esto se agitó a 20°C bajo una atmósfera inerte durante la noche. Dependiendo del grupo protector de O deseado, se añadió anhídrido acético (0,28 ml, 3,0 mmol) o los equivalentes correspondientes de anhídrido piválico. Después de agitar durante tres horas más a temperatura ambiente, esto se diluyó en acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera y se concentró hasta sequedad. Las trazas de ácido acético y anhídrido acético se eliminaron mediante coevaporación con tolueno y luego ciclohexano y el residuo se purificó adicionalmente tal como se describe a continuación.

Acetato de 8-bencil-2-(sec-butil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-1): Obtenido a partir de N-1 como un sólido blanco (0,11 g, 48%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCb): 7,92 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,66 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 2,89 (seis, 1H, J = 7,5), 2,49 (s, 3H), 1,89 (m, 1H), 1,74 (m, 1H), 1,39 (d, 3H, J = 7,5), 0,93 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para C²⁵H²⁶N³O², 400,2025; hallado, 400,2024.

Acetato de 8-bencil-2-(ciclopentilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-2): Obtenido a partir de N-2 como un polvo (0,21 g, 88%) después de una concentración hasta sequedad. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 2,78 (d, 2H, J = 7,4), 2,50 (s, 3H), 2,38 (m, 1H), 1,80 (m, 2H), 1,64 (m, 4H), 1,29 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁸N³O², 426,2181; hallado, 426,2180.

Acetato de 8-bencil-2-(ciclohexilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-3): Obtenido a partir de N-3 como un polvo (0,24 g, 72%) tras una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 2,78 (d, 2H, J = 7,2), 2,50 (s, 3H), 1,87 (m, 1H), 1,75 (m, 5H), 1,27 (m, 3H), 1,05 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁸H³⁰N³O², 440,2338; hallado, 440,2326.

Acetato de 8-bencil-2-(biciclo[2.2.1]heptan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-4): Obtenido a partir de N-4 como un polvo (0,58 g, 52%) como mezcla de dos diastereoisómeros después de una recristalización en n-heptano.

1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 0,4H), 7,79 (s, 0,6H), 7,65 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 2,85 - 2,57 (m, 2H), 2,51 y 2,50 (2s, 3H), 2,42 (m, 0,6H), 2,26 (m, 1H), 2,11 (m, 1H), 2,04 (m, 0,4H), 1,84 (m, 0,6H), 1,73 (m, 0,8H), 1,63 - 1,15 (m, 6H), 0,82 (m, 0,6H). HRMS: calculado para C²⁹H³⁰N³O², 452,2338; hallado, 452,2355.

Acetato de 2,8-dibencil-5-metil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-5): Obtenido como un vidrio a partir de N-6 (0,3 g, 76%). 1H RMN (CDCl3): 1H RMN (CDCh): 7,62 (m, 2H), 7,51-7,38 (m, 5H), 7,33-7,23 (m, 8H), 4,58 (s, 2H), 4,15 (s, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,14 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2020.

Acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-6): Obtenido a partir de N-34 como un sólido beige (0,10 g, 36%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 4:1). 1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,42-7,30 (m, 4H), 7,23 (m, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,16 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²²N³O³, 424,1661; hallado, 424,1607.

Acetato de 2,8-dibencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-7): Obtenido a partir de N-5 como un sólido amarillento (0,17 g, 50%) después de una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 5H), 7,25 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 2,18 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁴N³O², 434,1869; hallado, 434,1825.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(1-feniletil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-8): Obtenido a partir de N-7 como un polvo blanco después de una recristalización en n-heptano (0,12 g, 44%). 1H r Mn (CDCh): 7,90 (m, 2H), 7,74 (s, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 5H), 7,25 (m, 2H), 4,68 (d, 1H, J = 13,8), 4,63 (d, 1H, J = 13,8), 4,34 (q, 1H, J = 6,7), 2,14 (s, 3H), 1,83 (d, 3H, J = 6,7). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2031.

Acetato de 8-bencil-2-fenetil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-9): Obtenido a partir de N-71 como un polvo blanco tras una recristalización en n-heptano (0,22 g, 67%). 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,35-7,21 (m, 8H), 4,65 (s, 2H), 3,12 (m, 4H), 2,42 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2026.

Acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-10): Obtenido a partir de N-36 como un sólido blanco (0,14 g, 24%) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano-acetato de etilo 5:1) y una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCh): 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,64 - 7,57 (m, 2H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1 H), 7,35 - 7,27 (m, 2H), 7,25 - 7,16 (m, 1 H), 6,03 - 5,97 (m, 1 H), 5,93 - 5,86 (m, 1 H), 4,62 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O³, 438,1818; hallado, 438,1828.

Acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-(p-tolil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-11): Obtenido a partir de N-37 como un sólido blanco (0,15 g, 70%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,82- 7,79 (m, 3H), 7,62 (m, 2H), 7,33 - 7,20 (m, 5H), 6,01 (d, 1H, J = 1), 5,90 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,28 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O³, 452,1974; hallado, 452,1960.

Acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-(m-tolil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-12) Obtenido a partir de N-38 como un sólido blanco (0,1 g, 53%) después de una recristalización (lenta) en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,82 (s, 1H), 7,73 (m, 1 H), 7,79 (m, 1 H), 7,37 - 7,20 (m, 5H), 6,01 (d, 1H, J = 3), 5,91 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,28 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O³, 452,1974; hallado, 452,1981.

Acetato de 8-bencil-2-(furan-3-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-13): Obtenido a partir de N-35 como un sólido beige (0,74 g, 67%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,36 - 7,30 (m, 3H), 7,24 (m, 1H), 6,38 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,00 (m, 2H), 2,34 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²²N³O³, 424,1661; hallado, 424,1688.

Acetato de 2-((1,3-dioxolan-2-il)metil)-8-bencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-14): Obtenido a partir de N-12 como un sólido blanco (0,46 g, 76%) después de recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1 H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1 H), 5,29 (t, 1H, J = 4,5), 4,64 (s, 2H), 3,97 - 3,86 (m, 4H), 3,22 (d, 2H, J = 4,5), 2,49 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁵H²⁴N³O³, 430,1767; hallado, 430,1762.

Acetato de 8-bencil-2-(4-(benciloxi)bencil)-6-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-15): Obtenido a partir de N-9 como un sólido marrón (0,27 g, 66%) después de una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCh): 7,84 (m, 2H), 7,71 (s, 1 H), 7,61 (m, 2H), 7,48 - 7,29 (m, 12H), 7,25 - 7,20 (m, 3H), 7,06 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 5,14 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 4,62 (s, 2H), 2,17 (s, 3H). HRMS: calculado para C⁴²H³⁶N³O⁴, 646,2706; hallado, 646,2728.

Acetato de 2-bencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-16): Obtenido a partir de N-32 como un sólido amarillo (0,22 g, 48%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh): 9,08 (m, 1H), 7,94 - 7,90 (m, 3H), 7,50 (m, 2H), 7,43 (m, 1H), 7,36 - 7,24 (m, 5H), 4,19 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²¹H¹⁸N³O², 344,1399; hallado, 344,1389.

Acetato de 2-bencil-8-metil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-17): Obtenido a partir de N-33 como un sólido amarillo (0,59 g, 88%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh7,91 (m, 2H), 7,80 (m, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,41 (m, 1H), 7,35 - 7,23 (m, 5H), 4,21 (s, 2H), 2,96 (m, 3H), 2,18 (s, 3H). HRMS: calculado para C²²H²⁰N³O², 358,1556; hallado, 358,1544.

Acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-18): Obtenido a partir de N-40 como un sólido beige (0,27 g, 68%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh): 8,21 (s, 1H), 8,05 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,59 (dd, J = 7,9, 0,9 Hz, 2H), 7,39 - 7,27 (m, 4H), 7,23 - 7,18 (m, 1H), 7,09 (td, J = 7,6, 1,1 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 8,3, 0,9 Hz, 1H), 6,33 (dd, J = 3,2, 1,9 Hz, 1 H), 6,16 - 6,10 (m, 1 H), 4,60 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,32 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O⁴, 454,1767; hallado, 454,1785.

Acetato de 8-bencil-2-(furan-3-ilmetil)-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-19): obtenido a partir de N-41 como un sólido beige (0,15 g, 29%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 8,21 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,41 - 7,27 (m, 5H), 7,22 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,15 - 7,06 (m, 1H), 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,40 - 6,34 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 3,98 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,30 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O⁴, 454,1767; hallado, 454,1786.

Acetato de 2,8-dibencil-6-(2-metoxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-20): Obtenido a partir de N-39 como un sólido beige (0,22 g, 53%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh): 8,17 (s, 1H), 8,05 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,38 - 7,27 (m, 7H), 7,26 - 7,16 (m, 2H), 7,09 (td, J = 7,6, 1,0 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 8,3, 0,7 Hz, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 2,15 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³, 464,1974; hallado, 464,1979.

Acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-21): Obtenido a partir de N-62 como un sólido blanco (0,27 g, 57%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,64 - 7,57 (m, 2H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,24 - 7,18 (m, 1H), 6,01 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,93 - 5,87 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,61 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,22 (t, J = 7,5 Hz, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O³, 452,1974; hallado, 452,2014.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(tiofen-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-22): Obtenido a partir de N-59 como un sólido blanco (0,37 g, 73%) después de una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92- 7,87 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,49 - 7,42 (m, 2H), 7,42- 7,34 (m, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 2H), 7,25 - 7,20 (m, 1H), 7,19 (dd, J = 5,1, 1,3 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 5,1,3,5 Hz, 1H), 6,93 - 6,88 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,38 (d, J = 0,8 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H). h Rm S: calculado para C²⁶H²²N³O²S, 440,1433; hallado, 440,1486.

Acetato de 8-bencil-2-((3-metiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-23): Obtenido a partir de N-60 como un sólido (0,37 g, 95%). 1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 7,10 (d, 1H, J = 5,2), 6,83 (d, 1H, J = 5,2), 4,64 (s, 2H), 4,32 (s, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O²S, 454,1589; hallado, 454,1591.

Acetato de 8-bencil-2-((5-etiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-24): Obtenido a partir de N-61 como un sólido blanco (0,25 g, 56%) después de una recristalización de n-heptano. 1H r Mn (CDCh): 7,93 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 6,72 (m, 1H), 6,63 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,32 (s, 2H), 2,82 (q, 2H, J = 7,6), 2,33 (s, 3H), 1,31 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O²S, 468,1746; hallado, 468,1757.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((5-(trifluorometil)furan-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-25): Obtenido a partir de N-64 como un sólido blanco (0,07 g, 43%) después de una recristalización en n-heptano. 1H r Mn (CDCh): 7,94 - 7,87 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,63 - 7,57 (m, 2H), 7,49 - 7,42 (m, 2H), 7,42- 7,35 (m, 1H), 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,24 - 7,17 (m, 1H), 6,73 (dd, 1H, J = 3,3, 1,2), 6,21 (dd, 1H, J = 3,4, 0,7), 4,61 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 2,40 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²¹F³N³O³, 492,1535; hallado, 492,1566.

Acetato de 8-bencil-2-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-26): Obtenido a partir de N-51 como un sólido blanco (0,44 g, 96%): 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,76 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,48 -7,18 (m, 10H), 4,64 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,06 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2032.

Acetato de 8-bencil-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-27): Obtenido a partir de N-52 como un sólido beige (0,17 g, 61%) después una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,92- 7,85 (m, 2H), 7,77 (s, 1H), 7,66 - 7,58 (m, 2H), 7,49 - 7,35 (m, 3H), 7,35 - 7,27 (m, 2H), 7,24 - 7,16 (m, 2H), 7,15 - 7,01 (m, 3H), 4,62 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,17 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2053.

Acetato de 8-bencil-2-(4-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-28): Obtenido a partir de N-53 como un sólido blanco (0,21 g, 60%) después una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,91 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,49 -7,13 (m, 10H), 4,65 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O², 448,2025; hallado, 448,2034.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(3-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-29): Obtenido a partir de N-54 como un sólido blanco (0,14 g, 54%) después de una recristalización en n-heptano. 1H Rm N (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 2H), 7,10 (m, 3H), 4,65 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 2,59 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,66 (m, 2H), 0,97 (t, 3H, J = 7,3). HRMS: calculado para C³¹H³⁰N³O², 476,2338; hallado, 476,2346.

Acetato de 8-bencil-2-(3-ciclopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-30): Obtenido a partir de N-58 como un sólido blanco (0,29 g, 65%) después una recristalización de n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,23 (m, 2H), 7,06 (m, 2H), 6,96 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,89 (m, 1H), 0,95 (m, 2H), 0,70 (m, 2H). HRMS: calculado para C³¹H²⁸N³O², 474,2181; hallado, 474,2189.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(4-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-31): Obtenido a partir de N-55 como un sólido blanco (0,25 g, 73%) después de una recristalización en n-heptano. 1H Rm N (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 3H), 7,15 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,66 (m, 2H), 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C³¹H³⁰N³O², 476,2338; hallado, 476,2332.

Acetato de 8-bencil-2-(4-ciclopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-32): Obtenido a partir de N-57 como un sólido blanco (0,29 g, 68%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,22 (m, 3H), 7,04 (m, 2H), 4,64 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,92 (m, 1H), 0,94 (m, 2H), 0,68 (m, 2H). HRMS: calculado para C³¹H²⁸N³O², 474,2181; hallado, 474,2183.

Acetato de 8-bencil-2-(4-isopropilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-33): Obtenido a partir de N-56 como un sólido blanco (0,16 g, 70%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,93 - 7,84 (m, 2H), 7,77 (s, 1H), 7,65 - 7,59 (m, 2H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,33 (m, 1H), 7,33 - 7,28 (m, 2H), 7,24 - 7,14 (m, 5H), 4,62 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,90 (hept, 1H, J = 6,9), 2,13 (s, 3H), 1,25 (d, 6H, J = 6,9). HRMS: calculado para C³¹H³⁰N³O², 476,2338; hallado, 476,2337.

Acetato de 8-bencil-2-(4-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-34): Obtenido a partir de N-46 como un sólido beige (0,31 g, 70%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,94 - 7,86 (m, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,50 - 7,36 (m, 3H), 7,35 - 7,17 (m, 5H), 7,00 (dd, J = 9,8, 7,7 Hz, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,15 (s, 2H), 2,25 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1776.

Acetato de 8-bencil-2-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-35): Obtenido a partir de N-46' como un sólido blanco (0,13 g, 57%) después de una recristalización en n-heptano. 1H Rm N (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7.63 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 - 7,22 (m, 4H), 7,06 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,29 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1778.

Acetato de 8-bencil-2-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-36): Obtenido a partir de N-47 como un sólido blanco (0,22 g, 71%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,90 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7.63 (m, 2H), 7,48 - 7,21 (m, 8H), 7,10 (m, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 2,29 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1769.

Acetato de 8-bencil-2-(2,4-difluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-37): Obtenido a partir de N-48 como un sólido blanco (0,13 g, 52%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,90 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7.63 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 6,84 (m, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²²F²N³O², 470,1680; hallado, 470,1686.

Acetato de 8-bencil-2-(4-clorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-38): Obtenido a partir de N-49 como un sólido blanco (0,23 g, 62%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,28 (m, 7H), 4,63 (s, 2H), 4,14 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C28H23ClN3O2, 468,1479; hallado, 468,1485.

Acetato de 8-bencil-2-(4-bromobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-39): Obtenido a partir de 50 como un sólido blanco (0,18 g, 49%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,44 (m, 5H), 7,32 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,14 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C28H23BrN3O2, 512,0974; hallado, 512,0950.

Acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-40): Obtenido a partir de N-43 como un color beige sólido (0,09 g, 45%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCb): 7,94 - 7,86 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,50 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 2H), 7,25 - 7,16 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,13 (s, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,91 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O³, 452,1974; hallado, 452,1990.

Acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetiltiofen-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-41): Obtenido a partir de N-44 como un sólido blanco (0,14 g, 59%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 6,59 (s, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,26 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,09 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O²S, 468,1746; hallado, 468,1758.

Acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetiloxazol-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-42): Obtenido a partir de N-45 como cristales blancos (0,1 g, 34%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 2,08 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁵N⁴O³, 453,1927; hallado, 453,1915.

Acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-43): Obtenido a partir de N-24 como una cera (0,44 g, 95%). 1H RMN (CDCla): 8,20 (dt, 1H, J = 1,8, 8,0), 8,09 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,37 -7,24 (m, 5H), 7,15 (ddd, 1H, J = 1,8, 8,1, 9,4), 5,91 (s, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,41 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,92 (s, 3H). Hr Ms : calculado para C²⁸H²⁵FN³O³, 470,1880; hallado, 470,1890.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(piridin-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-44): Obtenido a partir de N-42 como un aceite (0,41 g, 91%). 1H RMN (CDCla): 8,56 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,90 (m, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,32 (m, 3H), 7,17 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 2,35 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³N⁴O², 435,1821; hallado, 435,1823.

Acetato de 8-bencil-2-(2-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-45): Obtenido a partir de N-13 como un sólido blanco (0,23 g, 72%) después una recristalización en n-heptano. 1H rMn (CDCh): 7,90 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7.64 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,24 (m, 3H), 6,92 (m, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,16 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³, 464,1974; hallado, 464,1978.

Acetato de 8-bencil-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-46): Obtenido a partir de N-14 como un sólido blanco (0,20 g, 56%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,92- 7,86 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,65 - 7,58 (m, 2H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,34 (m, 1H), 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,25 - 7,18 (m, 2H), 6,91 - 6,86 (m, 1H), 6,86 - 6,83 (m, 1H), 6,81 - 6,75 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³, 464,1974; hallado, 464,1982.

Acetato de 8-bencil-2-(4-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-47): Obtenido a partir de N-15 como un sólido blanco (0,04 g, 28%) después una recristalización en n-heptano. 1H r Mn (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,23 (m, 2H), 6,87 (m, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³, 464,1974; hallado, 464,1990.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-((tetrahidrofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-48): Obtenido a partir de N-11 como un aceite (0,36 g, 81%). 1H RMN (CDCla): 7,93 - 7,87 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,62- 7,57 (m, 2H), 7,48 - 7,41 (m, 2H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 7,32- 7,27 (m, 2H), 7,23 - 7,17 (m, 1H), 4,66 - 4,55 (m, 2H), 4,32- 4,23 (m, 1H), 3,89 - 3,69 (m, 2H), 3,10 - 2,95 (m, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,09 - 1,98 (m, 1H), 1,92- 1,82 (m, 2H), 1,77 - 1,66 (m, 1H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O³, 428,1974; hallado, 428,1956.

Acetato de 2,8-dibencil-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-49): Obtenido a partir de N-19 como un sólido (0,21 g, 45%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 8,20 (m, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,32 (m, 10H), 7,15 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 2,18 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1838.

Acetato de 8-bencil-2-(4-fluorobencil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-50): Obtenido a partir de N-20 como un sólido (0,1 g, 63%) después de una recristalización en n-heptano. 1H Rm N (CDCh): 8,20 (dt, 1H, J = 2,0, 7,9), 8,06 (s, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,38-7,21 (m, 7H), 7,15 (m, 1H), 7,01 (m, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,16 (s, 2H), 2,26 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²²F²N³O², 470,1680; hallado, 470,1670.

Acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-51): Obtenido a partir de N-21 como un sólido (0,15 g, 36%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCb): 8,20 (m, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,31 (m, 6H), 7,14 (m, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,16 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,35 (s, 3H). Hr Ms : calculado para C²⁶H²¹FN³O³, 442,1567; hallado, 442,1631.

Acetato de 8-bencil-6-(2-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-52): Obtenido a partir de N-22 como un vidrio (0,08 g, 72%). 1H RMN (CDCla): 8,19 (dt, 1H, J = 1,8, 7,8), 8,09 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,37-7,21 (m, 5H), 7,15 (ddd, 1H, J = 1,2, 8,1, 12,0), 6,02 (d, 1H, J = 3,0), 5,90 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³FN³O³, 456,1723; hallado, 456,1734.

Acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(2-fluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-53): Obtenido a partir de N-23 como una cera (0,18 g, 95%). 1H RMN (CDCh): 8,19 (dt, 1H, J = 1,8, 7,8), 8,10 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,39-7,22 (m, 5H), 7,15 (ddd, 1H, J = 1,2, 8,1, 12,0), 6,04 (d, 1H, J = 3,0), 5,93 (m, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 2,65 (q, 2H, J = 7,6), 2,34 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C²⁸H²⁵FN³O³, 470,1880; hallado, 470,1884.

Acetato de 8-bencil-6-(3-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-54): Obtenido a partir de N-25 como un polvo blanco después de una recristalización en n-heptano (0,018 g, 14%). 1H RMN (CDCh): 7,85 (s, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,60 (m, 2H), 7,46-7,37 (m, 2H), 7,34-7,21 (m, 3H), 6,02 (d, 1H, J = 3,1), 5,90 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,26 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³FN³O³, 456,1723; hallado, 456,1732.

Acetato de 8-bencil-6-(4-fluorofenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-55): obtenido a partir de N-26 como un vidrio (0,1 g, 83%). 1H RMN (CDCh): 7,88 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,34-7,12 (m, 6H), 6,02 (d, 1H, J = 3,0), 5,90 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³FN³O³, 456,1723; hallado, 456,1721.

Acetato de 2,8-dibencil-6-(2,6-difluorofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-56): Obtenido a partir de N-30 como un sólido (0,16 g, 61%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,66 (s, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,31 (m, 9H), 7,02 (m, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 2,13 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²¹F²N³O², 470,1680; hallado, 470,1630.

Acetato de 8-bencil-6-(2,6-difluorofenil)-2-(furan-2-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-57): Obtenido a partir de N-31 como una cera (0,19 g, 95%). 1H RMN (CDCh): 7,70 (s, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,37-7,19 (m, 6H), 7,02 (m, 2H), 6,35 (m, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,31 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H¹⁹F²N³O³, 460,1473; hallado, 460,1430.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(2-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-58): Obtenido a partir de N-16 como una cera (0,07 g, 95%). 1H RMN (CDCh): 7,93 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,65 (m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,53 - 7,21 (m, 9H), 4.65 (s, 2H), 4,38 (s, 2H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²³F³N³O², 502,1742; hallado, 502,1722.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(3-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-59): Obtenido a partir de N-17 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,08 g, 57%). 1H RMN (CDCh): 7,91 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,63 (m, 3H), 7,54-7,38 (m, 6H), 7,34 - 7,21 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,25 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²³F³N³O², 502,1742; hallado, 502,1795.

Acetato de 8-bencil-6-fenil-2-(4-(trifluorometil)bencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-60): Obtenido a partir de N-18 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,08 g, 66%). 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,49-7,38 (m, 5H), 7,33 - 7,22 (m, 3H), 4,63 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²³F³N³O², 502,1742; hallado, 502,1730.

Acetato de 2,12-dibencil-5H-cromeno[4,3-e]imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-61): Obtenido a partir de N-72 como una cera (0,06 g, 95%). 1H RMN (CDCla): 8,14 (dd, 1H, J = 1,6, 7,8), 7,61 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,38-7,20 (m, 9H), 7,10 (dt, 1H, J = 1,0, 8,4), 6,90 (d, 1H, J = 8,0), 5,58 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 4,15 (s, 2H), 2,14 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁴N³O³, 462,1818; hallado, 462,1812.

Acetato de 8-bencil-6-(4-metoxifenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-62): Obtenido a partir de N-27 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,11 g, 69%). 1H RMN (CDCh): 7,84 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 7,0 (m, 2H), 6,02 (m, 1H), 5,91 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,17 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O⁴, 468,1923; hallado, 468,1919.

Acetato de 8-bencil-6-(3-metoxifenil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-63): Obtenido a partir de N-28 como una cera (0,08 g, 95%). 1H RMN (CDCla): 7,84 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,52 (m, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,38-7,29 (m, 3H), 7,23 (m, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,02 (d, 1H, J = 3), 5,91 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O⁴, 468,1923; hallado, 468,1928.

Acetato de 8-bencil-2-((5-ciclopropilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-64): Obtenido a partir de N-63 como un sólido blanco después una recristalización en n-heptano (0,13 g, 42%). 1H RMN (CDCh): 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,64 - 7,57 (m, 2H), 7,48 - 7,41 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 2H), 7,24 - 7,17 (m, 1H), 5,98 (d, 1H, J = 3,1), 5,86 (d, 1H, J = 3,1), 4,61 (s, 2H), 4,15 (s, 2H), 2,34 (s, 3H), 1,84 (tt, 1H, J = 8,4, 5,1), 0,89 - 0,80 (m, 2H), 0,76 - 0,69 (m, 2H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³, 464,1974; hallado, 464,1990.

Acetato de 2-bencil-6-fenil-8-(piridin-3-ilmetil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-65): Obtenido a partir de N-73 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,1 g, 37%). 1H RMN (CDCh): 8,87 (d, 1H, J = 2,0), 8,50 (dd, 1H, J = 1,7, 5,0), 7,92 (m, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,48-7,22 (m, 9H), 4,63 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²²N⁴O², 435,1821; hallado, 435,1805.

Acetato de 2-bencil-8-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-66): Obtenido a partir de N-74 como un sólido blanco (0,29 g, 77%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,87 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,44 (m, 2H), 7,37 (m, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,27 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,17 (m, 2H), 4,67 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O²: 448,2025; hallado, 448,2031.

Acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-8-(2-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-67): Obtenido a partir de N-75 como un sólido blanco (0,18 g, 64%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,88 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,23 (m, 1H), 7,16 (m, 2H), 6,36 (dd, 1H, J = 1,9, 3,4), 6,17 (m, 1H), 4,66 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O³, 438,1818; hallado, 438,1823.

Acetato de 2-bencil-8-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-68): Obtenido a partir de N-76 como un sólido blanco (0,27 g, 70%) después una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCl3): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,50-7,37 (m, 5H), 7,32 (m, 4H), 7,28-7,20 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O²: 448,2025; hallado, 448,2026.

Acetato de 2-(furan-2-ilmetil)-8-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-69): Obtenido a partir de N-77 como un sólido blanco (0,23 g, 70%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCh): 7,93 (m, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,49-7,37 (m, 6H), 7,22 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 6,35 (dd, 1H, J = 1,7, 3,1), 6,16 (m, 1H), 4,60 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,35 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴N³O³, 438,1818; hallado, 438,1820.

Acetato de 2-bencil-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-70): Obtenido a partir de N-78 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,12 g, 61%). 1H RMN (CDCh): 7,86-7,83 (m, 3H), 7,52 7,48 (dt, 1H, J = 7,4, 1,9), 7,47-7,23 (m, 8H), 7,14-7,08 (m, 2H), 4,72 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²²FN³O², 452,1774, hallado, 452,1774.

Acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-71): Obtenido a partir de N-79 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,18 g, 58%). 1H RMN (CDCh): 7,84 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,23 (m, 2H), 7,13-7,06 (m, 5H), 4,72 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁵FN³O², 466,1931, hallado, 466,1938.

Acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-72): Obtenido a partir de N-80 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,26 g, 87%). 1H RMN (CDCh): 7,85 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,10 (m, 2H), 6,90 (m, 2H), 6,81 (m, 1H), 4,71 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,80 (s, 3H), 2,23 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁵FN³O³, 482,1880, hallado, 482,1873.

Acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-73): Obtenido a partir de N-81 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,19 g, 73%). 1H RMN (CDCI³): 7,87 (s, 1H), 7.85 (m, 2H), 7,50-7,34 (m, 5H), 7,24 (m, 1H), 7,10 (m, 2H), 6,35 (dd, 1H, J = 1,9, 3,2), 6,17 (dd, 1H, J = 0,7, 3,2), 4,70 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,37 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²¹FN³O³, 442,1567, hallado, 442,1567.

Acetato de 8-(2-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-74): Obtenido a partir de N-82 como sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (^{0 , 0 8}g, 38%). 1H RMN (CDCI³): 7,87 (s, 1H), 7.85 (m, 2H), 7,50-7,34 (m, 4H), 7,24 (m, 1H), 7,10 (m, 2H), 6,04 (d, 1H, J = 3,0), 5,91 (m, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³FN³O³, 456,1723, encontrado 456,1719.

Acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(2-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-75): Obtenido a partir de N-83 como sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,05 g, 28%). 1H r Mn (CDCI³): 7,87 (s, 1H), 7.85 (m, 2H), 7,50-7,34 (m, 4H), 7,24 (m, 1H), 7,10 (m, 2H), 6,04 (d, 1H, J = 3,1), 5,92 (m, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 2,64 (q, 2H, J = 7,2), 2,36 (s, 3H), 1,24 (t, 3H, J = 7,2). HRMS: calculado para C²⁸H²⁵FN³O³, 470,1880, hallado, 470,1881.

Acetato de 2-bencil-8-(2-clorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-76): Obtenido a partir de N-84 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (^{0 , 1 2}g, 67%). 1H Rm N (CDCI³): 7,84 (s, ¹H), 7,83 (m, ²H), 7,50 7,20 (m, 12H), 4,82 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 2,20 (s, 3H). HRMS: calculado para C2sH23ClN3O2: 468,1479; hallado, 468,1489.

Acetato de 8-(2-clorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-77): Obtenido a partir de N-85 como un sólido blanco después de una recristalización en n-heptano (0,27 g, 70%). 1H RMN (CDCI³): 7,88 (s, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,46-7,34 (m, ⁶H), 7,23 (m, 2H), 6,36 (m, 1H), 6,18 (m, 1H), 4,81 (s, 2H), 4,25 (s, 2H), 2,38 (s, 3H). HRMS: calculado para C26H2üClN3O3: 458,1271; hallado, 458,1266.

Acetato de 8-(2-clorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-78): Obtenido a partir de N-^{8 6}como un sólido después de una recristalización en n-heptano (0,03 g, 27%). 1H RMN (CDCI³): 7,88 (s, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,46-7,33 (m, 5H), 7,21 (m, 2H), 6,04 (m, 1H), 5,91 (m, 1H), 4,81 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²⁴CIN³O³: 472,1428; hallado, 472,1408.

Acetato de 2-bencil-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-79): Obtenido a partir de N-87 como un sólido (0,19 g, 50%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,90 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,42- 7,25 (m, 9H), 6,95 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 2,20 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1775.

Acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(3-metilbencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-80): Obtenido a partir de N-91 como un sólido (0,16 g, 50%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (c Dc I3): 7,91 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,28 (m, 1H), 7,22 (m, 1H), 7,09 (m, 3H), 6,95 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,20 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁵FN³O², 466,1931; hallado, 466,1926.

Acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(3-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-81): Obtenido a partir de N-92 como un sólido (^{0 , 1 2}g, 60%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,90 (m, ²H), 7,82 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,26 (m, 2H), 6,95 (m, 3H), 6,80 (m, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 2,24 (s, 3H). h Rm S: calculado para C²⁹H²⁵FN³O³, 482,1880; hallado, 482,1879.

Acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-82): Obtenido a partir de N^{- 8 8}como un sólido (0,13 g, 59%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,91 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,42- 7,33 (m, 4H), 7,26 (m, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,36 (dd, 1H, J = 2,0, 3,2), 6,17 (dd, 1H, J = 0,8, 3,2), 4,62 (s, 2H), 4,24 (s, 2H), 2,36 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²¹FN³O³, 442,1567; hallado, 442,1549.

Acetato de 8-(3-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-83): Obtenido a partir de N-89 como un sólido (0,10 g, 45%) después de una recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,91 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,42- 7,24 (m, 4H), 6,92 (m, 1H), 6,03 (d, 1H, J = 3,0), 5,91 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,28 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁷H²³FN³O³, 456,1723; hallado, 456,1732.

Acetato de 2-((5-etilfuran-2-il)metil)-8-(3-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-84): Obtenido a partir de N-90 como un sólido blanco (0,05 g, 11% a partir de la cloropirazina) después de una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano acetato de etilo ⁶/ ¹) y recristalización en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,91 (m, ²H), 7,85 (s, ¹H), 7,48 (m, 2H), 7,42- 7,24 (m, 4H), 6,92 (m, 1H), 6,03 (d, 1H, J = 3,1), 5,92 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,63 (q, 2H, J = 7,5), 2,36 (s, 3H), 2,63 (t, 3H, J = 7,5). HRMS: calculado para C²⁸H²⁵FN³O³, 470,1880; hallado, 470,1888.

Acetato de 2-bencil-8-(4-fluorobencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-85): Obtenido a partir de N-93 como un sólido (0,04 g, 33%) después de una recristalización en dos siembras en n-heptano. 1H RMN (CDCI³): 7,90 (m, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,47 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,36 - 7,24 (m, 5H), 7,00 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O², 452,1774; hallado, 452,1789.

Acetato de 2-bencil-8-(2-metoxibencil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-86): Obtenido a partir de N-94 como un sólido blanco (0,06 g, 70%) después una recristalización de n-heptano. 1H r Mn (CDCh): 7,84 (m, 2H), 7,82 (s, 1H), 7,43-7,23 (m, 10H), 6,93 (m, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,18 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O³: 464,1974; hallado, 464,1983.

Acetato de 2-bencil-6-fenil-8-((tetrahidrofuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-87): Obtenido a partir de N-42' como un sólido (0,03 g, 30%) después de una recristalización en n-heptano y una pequeña cantidad de tolueno.

1H RMN (CDCla): 7,90 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,48 - 7,41 (m, 2H), 7,40 - 7,35 (m, 1H), 7,34 - 7,20 (m, 5H), 4,85 - 4,75 (m, 1H), 4,18 (s, 2H), 3,98 (td, J = 7,7, 6,2 Hz, 1H), 3,78 (td, J = 7,8, 6,1 Hz, 1H), 3,64 (dd, J = 14,3, 7,4 Hz, 1H), 3,38 (dd, J = 14,3, 6,1 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,21 - 1,74 (m, 5H). HRMS: calculado para C²⁶H²⁶N³O³, 428,1974; hallado, 428,1936.

Pivalato de 8-bencil-2-(4-(benciloxi)bencil)-6-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-88): Obtenido a partir de N-9 como un sólido (1,06 g, 48%) después de una recristalización en ciclohexano. 1H RMN (CDCl3) 57,86 - 7,72 (m, 2H), 7,61 (s, 1H), 7,60 - 7,55 (m, 2H), 7,47 - 7,36 (m, 8H), 7,36 - 7,32 (m, 2H), 7,32- 7,29 (m, 1H), 7,29 - 7,27 (m, 1H), 7,23 - 7,19 (m, 1H), 7,19 - 7,14 (m, 2H), 7,08 - 7,01 (m, 2H), 6,93 - 6,86 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,09 (s, 2H), 1,33 (s, 9H). HRMS: calculado para C⁴⁵H⁴²N³O⁴, 688,3175; hallado, 688,3148.

Pivalato de 2,8-dibencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-89): Obtenido a partir de N-5 en forma sólida (0,12 g, 42%) tras dos cromatografías sobre gel de sílice (diclorometano-etanol 99:1) y (ciclohexano-acetato de etilo 90:10). 1H RMN (CDCla): 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,72 (s, 1H), 7,68 - 7,60 (m, 2H), 7,52- 7,44 (m, 2H), 7,44 - 7,37 (m, 1H), 7,37 - 7,20 (m, 8H), 4,66 (s, 2H), 4,20 (s, 2H), 1,36 (s, 9H). HRMS: calculado para C³¹H²⁹N³O², 476,2338; hallado, 476,2362.

Síntesis representativa de 2,8-dibencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-2) directamente a partir de los aaminoésteres N-5. En una atmósfera inerte, se disolvió N-5 (0,41 g, 0,93 mmol) en etanol (10 ml) y ácido clorhídrico al 37% (0,4 ml). Este se selló y se calentó a 90°C durante la noche. Después, la solución se dejó cristalizar a 0°C, el precipitado resultante se filtró, se lavó con etanol y se secó a vacío para producir el compuesto Q-2 como un polvo naranja (0,11 g, 30%). 1H RMN (DMSO-cfe): 8,68 (s(a), 1H), 8,01 (m, 2H), 7,52- 7,17 (m, 14H), 4,58 (s, 2H), 4,31 (s, 2H). HRMS: calculado para C²⁶H²²N³O, 392,1763; hallado, 392,1776.

8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-1): Al usar condiciones de reacción similares, el compuesto Q-1 (también conocido como furimazina) se obtuvo como un polvo marrón (0,03 g, 30%). 1H RMN (DMSO-cfe): 8,38 (s, 1H), 7,96 (d, 2H, J = 7,6), 7,56 (dd, 1H, J = 1,8, 0,8), 7,54 - 7,41 (m, 5H), 7,34 - 7,19 (m, 3H), 6,39 (dd, 1H, J = 3,2, 1,8), 6,17 (dd, 1H, J = 3,2, 0,8), 4,46 (s, 2H), 4,21 (s, 2H). HRMS: C²⁴H²⁰N³O², 382,1556; hallado: 382,1531.

Síntesis representativa de derivados poli O-acetilados P a partir de a-aminoésteres N mediante la etapa q. Se calentaron el éster considerado (0,3 mmol) y una mezcla 1/1 de ácido acético y anhídrido acético (10 ml) en un horno microondas a 140°C durante cuatro horas y media. La solución resultante se concentró hasta sequedad y se purificó adicionalmente tal como se describe a continuación.

Acetato de 4-((3-acetoxi-8-bencil-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-2-il)metil)fenilo (P90): Obtenido a partir de N-97 como un aceite que contiene trazas de ácido acético después de coevaporación con tolueno (0,26 g). 1H RMN (CDCh): 7,90 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,39 (m, 5H), 7,22 (m, 3H), 7,04 (m, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,21 (s, 2H, J = 10,6), 2,31 (s, 3H), 2,21 (s, 3H). HRMS: calculado para C³⁰H²⁶N³O⁴, 492,1923; hallado, 492,1927.

Acetato de 4-(3-acetoxi-2-(4-acetoxibencil)-8-bencilimidazo[1,2-a]pirazin-6-il)fenilo (P-91): Obtenido a partir de N-95 como un polvo blanco (0,018 g, 10%) después de una recristalización en una mezcla de tolueno y ciclohexano (dos siembras). 1H RMN (CDCh): 7,92- 7,86 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,62- 7,55 (m, 2H), 7,33 - 7,26 (m, 4H), 7,25 - 7,14 (m, 3H), 7,05 - 6,99 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,19 (s, 3H). HRMS: calculado para C³²H²⁸N³O⁶, 550,1978; hallado, 550,1995.

Acetato de 4-(3-acetoxi-8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)imidazo[1,2-a]pirazin-6-il)fenilo (P-92): Obtenido como un polvo púrpura (0,13 g, 63%) a partir de N-96 después de una recristalización en una mezcla de diclorometano y ciclohexano. 1H RMN (CDCh): 7,92 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,33 - 7,17 (m, 7H), 6,02 (d, 1H, J = 2,9), 5,91 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,18 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,27 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁹H²⁶N³O⁵, 496,1873; hallado, 496,1859.

Preparación de pivalato de 8-bencil-2-(4-hidroxibencil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-93): Se suspendieron el O-pivaloato bisbencilado P-88 (0,18 g, 0,26 mmol) y paladio al 10% sobre carbono (0,25 mg, 0,026 mmol) en etanol (15 ml). Esto se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno durante 24 horas y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 97/3) para dar el compuesto desprotegido como un sólido rojo (0,06 g, 45%). 1H RMN (DMSO-afe): 9,65 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,87 - 7,80 (m, 2H), 7,51 - 7,43 (m, 2H), 7,34 - 7,24 (m, 2H), 7,24 - 7,15 (m, 1H), 7,07 - 6,99 (m, 2H), 6,93 - 6,83 (m, 2H), 6,77 - 6,64 (m, 2H), 4,47 (s, 2H), 3,92 (s, 2H), 1,36 (s, 9H). HRMS: calculado para C³¹H³⁰N³O⁴, 508,2236; hallado, 508,2269.

Protocolo general para la ciclación y monoacetilación de a-aminoácidos O que contienen OH. Esta reacción hace un buen uso de la diferencia de reactividad de la función ácida y del hidroxiimidazol resultante en comparación con la(s) función/funciones fenólica(s) presente(s) en otras partes de estos productos de partida. Además, la cantidad variable de agua que está presente nos ha llevado a proceder sistemáticamente mediante la adición escalonada de inicialmente dos equivalentes de anhídrido acético seguido de la monitorización de la reacción mediante análisis de 1H RMN de una muestra antes de añadir más anhídrido acético o del tratamiento final de la reacción. Dicho todo esto, aquí hay un procedimiento "típico". El ácido desprotegido considerado (0,4 mmol) se dispersó o bien en acetato de etilo o bien tolueno. A esto se le añadió un anhídrido acético inicial (95 microl, 0,9 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 30 min. Se realizó un análisis de 1H RMN de la muestra y, dependiendo del grado de desaparición del producto de partida, más anhídrido acético. Debe tenerse cuidado de no añadir demasiado de esto, ya que la poliacetilación tendrá lugar con bastante rapidez, especialmente en tolueno a reflujo. En unos pocos casos desafortunados, esta reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente en anhídrido acético y, junto con una pequeña cantidad del producto de monoacetilación objetivo, la poliacetilación fue el resultado principal. Cuando fue relevante, la solución resultante se concentró hasta sequedad y se purificó tal como se describe a continuación. Los compuestos obtenidos contenían habitualmente menos del 5% de producto bis acetilado.

Acetato de 2,8-dibencil-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-94): Este compuesto se obtuvo a partir de O-10 como un sólido beige (0,11 g, 52%) usando tolueno como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (diclorometano - etanol 98/2). 1H RMN (DMSO-afe): 9,64 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,26 (m, 8H), 6,87 (m, 2H), 4,46 (s, 2H), 4,08 (s, 2H), 2,37 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁴N³O³: 450,1818; hallado, 450,1825.

Acetato de 8-bencil-6-(4-hidroxifenil)-2-(3-propilbencil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-95): La reacción se llevó a cabo, usando O-11, en acetato de anhídrido a temperatura ambiente durante 30 min. La solución resultante se dispersó en agua, se extrajo con acetato de etilo, la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró hasta sequedad. Una cromatografía del residuo sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 4/1) dio el compuesto objetivo como un sólido beige (0,02 g, 10%) junto con el producto diacetilado correspondiente (0,13 g, 65%). 1H RMN (CDCla): 7,76 (m, 2H), 7,70 (s, 1H), 7,61 (m, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,22 (m, 2H), 7,07 (m, 3H), 6,90 (m, 2H), 4,62 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,56 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,65 (m, 2H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3H). HRMS: calculado para C³¹H³⁰N³O³: 492,2287; hallado, 492,2260.

Acetato de 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-97): Este compuesto se obtuvo a partir de O-12 como un sólido beige (0,33 g, 60%) usando acetato de etilo como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 2/1). 1H RMN (DMSO-afe): 9,65 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,90 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,27 (m, 2H), 7,22 (m, 1H), 6,88 (m, 2H), 6,39 (dd, 1H, J = 1,8, 3,1), 6,19 (dd, 1H, J = 0,8, 3,1), 4,46 (s, 2H), 4,13 (s, 2H), 2,40 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁶H²²N³O⁴, 440,1610; hallado, 440,1603.

Acetato de 8-bencil-2-((4,5-dimetilfuran-2-il)metil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-98): Este compuesto se obtuvo a partir de O-13 como un sólido beige (0,05 g, 22%) usando acetato de etilo como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 3/1). 1H RMN (CDCl3): 7,75 (m, 2H), 7,74 (s, 1H), 7,58 (m, 2H), 7,26 (m, 4H), 6,91 (m, 2H), 5,89 (s, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,13 (s, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 1,90 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O⁴: 468,1923; hallado, 468,1922.

Acetato de 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P99): Este compuesto se obtuvo a partir de O-14 como un sólido beige (0,05 g, 45%) usando acetato de etilo como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo ³/ ¹). 1H RMN (CDCl3): 7,76 (m, 2H), 7,74 (s, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,26 (m, 4H), 6,91 (m, 2H), 6,01 (m, 1H), 5,90 (m, 1H), 4,61 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 2,61 (q, 2H, J = 7,6), 2,35 (s, 3H), 1,22 (t, 3H, J = 7,6). HRMS: calculado para C²⁸H²⁶N³O⁴: 468,1923; hallado, 468,1929.

Acetato de 8-bencil-2-(4-hidroxibencil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P-100): Este compuesto se obtuvo a partir de O-9 como un sólido beige (0,10 g, 68%) utilizando acetato de etilo como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 2/1). 1H RMN (DMSO-afe) 9,65 (s, 1H), 9,20 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,89 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,24 (m, 3H), 7,07 (m, 2H), 6,87 (m, 2H), 6,69 (m, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,96 (s, 2H), 2,37 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²⁴N³O⁴: 466,1767; hallado, 466,1758.

Acetato de 2,8-dibencil-6-(3-fluoro-4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (P101): Este compuesto se obtuvo a partir de O-15 como un sólido blanco (0,11 g, 24%) utilizando acetato de etilo como disolvente y una cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano - acetato de etilo 3/1) seguido de una recristalización en tolueno/ciclohexano. 1H RMN (DMSO-afe): 7,71 (s, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,52 (m, 1H), 7,34 - 7,20 (m, 8H), 7,04 (m, 1H), 6,67 (s(a), 1H), 4,62 (s, 2H), 4,21 (s, 2H), 2,18 (s, 3H). HRMS: calculado para C²⁸H²³FN³O³: 468,1723; hallado, 468,1725.

Protocolo general para la generación de soluciones de imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona Q mediante hidrólisis ácida de derivados de acetato de imidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo P. El acetato considerado P (1 mg) se disolvió en DMSO (0,2 ml) y luego se diluyó añadiendo una solución de etanol ácido (0,3 ml) preparada a partir de la adición de ácido clorhídrico al 37% (100 gl) sobre etanol al 100% (12 ml). Esta solución de 0,5 ml se incubó a 50°C durante 2 horas para dar una solución madre que luego se almacenó a -80°C. Tal como se representa en la figura 1, en el caso del compuesto P-21, la monitorización por CL/EM de la hidrólisis a la correspondiente 8-bencil-2-((5-etilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-12; véase la tabla a continuación) señaló una reacción completa en menos de dos horas. Nota: estas condiciones solo están adaptadas a la hidrólisis del grupo protector (tal como se definió anteriormente) del oxígeno en la posición 2 del sistema de anillo imidazo[1,2-a]pirazina y no a la hidrólisis de cualquier grupo acetilo adicional eventualmente presente en otra parte del sustrato de esta reacción.

Propiedades de bioluminiscencia de una selección de imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona Q generada en solución a partir de los correspondientes precursores O-acetilados P.

Algunos de los sustratos sintetizados descritos anteriormente se evaluaron hasta para los cinco siguientes tipos de aplicaciones utilizando luciferasas derivadas de Oplophorus o complementación de partes de estas enzimas. Si los ensayos bioluminiscentes dependen de la transfección celular para expresar quimeras de luciferasa, entonces pueden preferirse los métodos de ensayo que se basan en formación de imágenes de microscopio óptico para las células difíciles de transfectar para evaluar la emisión de luz de las células individuales. En los otros casos, son adecuados un luminómetro monotubo o lector de placas, una cámara digital (incluidos teléfonos inteligentes), un detector de luz o una película fotográfica que integre la luz en todo el volumen.

1- Ensayos in vitro de bioluminiscencia de luciferasas o fragmentos de lisado celular, fluidos biológicos o proteínas purificadas de diversos grados en solución tampón. Las mediciones se monitorizan normalmente mediante un luminómetro de placa de pocillos múltiples o un tren de lectura de luminómetro de gotas muestreadas en un tubo por separado mediante burbujas de aire de un manipulador de líquidos. Esto fue en particular el método principal empleado para cribar estos sustratos y valorar sus propiedades de bioluminiscencia.

2- Ensayos in cellulo de bioluminiscencia de suspensión de células o exosomas. Las células pueden estar vivas en medios de cultivo, inactivas en condiciones de inhibición de la producción de ATP, en condiciones de fijación química blanda o en condiciones de permeación celular. Los fragmentos o indicadores de luciferasa pueden fusionarse con proteínas que se dirigen a la superficie celular, el citoplasma, los orgánulos, el núcleo o los exosomas. Las mediciones se monitorizan normalmente mediante un luminómetro de placa de pocillos múltiples, un tren de lectura de gotas de luminómetro muestreado en un tubo por separado mediante burbujas de aire de un manipulador de líquidos, o de un citómetro con ajuste de bioluminiscencia.

3- Ensayos in cellulo y formación de imágenes de bioluminiscencia de células, orgánulos, exosomas, virus o partículas adherentes o no adherentes usando un microscopio óptico. La fusión de proteína:luciferasa puede expresarse mediante células y obtenida en imágenes vivas en el medio de cultivo, inactivas en condiciones de inhibición de la producción de ATP, en condiciones de fijación química blanda o en condiciones de permeación celular. La fusión de proteína:luciferasa puede añadirse al medio y dirigirse a la superficie celular, el citoplasma, los orgánulos, el núcleo, los exosomas o eventualmente llevarse a células diana ya sea por virus, células o agentes que infectan al huésped, complejos biológicos o partículas.

4- Ensayos in vivo de bioluminiscencia de luciferasa o fragmento utilizado como indicador de proteínas expresadas en animales vivos o tejidos perfundidos utilizando un microscopio de luz, escáneres de luz, cámaras o sistemas de formación de imágenes bioluminiscentes.

5- Ensayo de bioluminiscencia de moléculas, partículas, complejos, virus o células inmovilizados en sólido 2D (membrana, portaobjetos, perla, fibra) o soporte 3D (matriz, perlas permeables, redes de fibras, tejidos permeables) con aplicación típica como inmunotransferencia de tipo Western y Northern para la detección de objetivos de proteínas y ADN en solución, lisado celular o biofluidos, pero también para la detección de compuestos tóxicos y en suelos, líquidos para pruebas de peligros biológicos o químicos en el medio ambiente. La detección es posible en un bioluminómetro, una cámara digital (incluidos teléfonos inteligentes), un escáner, un sistema de formación de imágenes o una película fotosensible.

1-Ensayo in vitro de bioluminiscencia.

Las curvas de bioluminiscencia representativas que se muestran en la figura 2 proporcionaron una valoración para furimazina (Q-1), 8-bencil-2-(furan-2-ilmetil)-6-(4-hidroxifenil)imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-80), 8-(2-fluorobencil)-2-(furan-2-ilmetil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-84) y 8-(2-fluorobencil)-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6-fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona (Q-85) se obtuvo usando una luciferasa expresada in vitro tal como se describe a continuación. La plantilla de ADN nanoKAZ se clonó en un vector basado en pT7CFE1 de Thermo Scientific y se expresó nanoKAZ usando el kit de IVT acoplado humano de 1 etapa ThermoFisher Scientific - ADN (ref. 88881) según las instrucciones del fabricante. La mezcla de reacción resultante se diluyó 400 veces en tampón (DPBS (Gibco) Tween 20 al 0,1% (v/v)) y se conservó a -80°C. El cribado de las imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-onas se realizaron en placas de 96 pocillos usando 50 pl/pocillo de una dilución 1/20 en DPBS (Gibco) Tween 20 al 0,1% (v/v) de la solución nanoKAZ. Después de añadir 50 pl/pocillo de una dilución 1/50 de la solución madre (4,5 mM) de imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-onas en DPBS (Gibco) Tween 20 al 0,1% (v/v), la intensidad de luminiscencia mostrada por los diferentes análogos de luciferina se midió en un luminómetro Berthold Centro (programa de conteo de luminiscencia de Renilla con un tiempo de integración de 1 segundo), y se monitorizó la disminución de la señal a lo largo del tiempo durante 2 horas en un experimento cinético con incrementos de 3 minutos.

Para ilustrar la mejora de las propiedades de bioluminiscencia lograda para muchas de las imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-onas descritas en el presente documento, se proporcionan cuatro valores en la Tabla 1: intensidad máxima (V1), semivida de la señal (V2), área bajo la curva durante diez minutos (V3) y área bajo la curva durante dos horas (V4), normalizados utilizando furimazina (Q-1) como referencia.

Se considera que las propiedades de bioluminiscencia de los compuestos sometidos a prueba mejoran cuando al menos uno de los valores V1-V4 es superior a 1, y cuando ninguno de los valores V1-V4 es 0,05 o inferior.

Siguiendo el protocolo de hidrólisis descrito anteriormente, se elaboraron las siguientes imidazo[1,2-a]pirazin-3(7H)-ona luciferinas Q in situ a partir de las imidazo[1,2-a]pirazinas P protegidas con O correspondientes y se evaluaron por sus propiedades de bioluminiscencia (intensidad máxima (V1), semivida de la señal (V2), área bajo la curva durante 2 horas (V3) y área bajo la curva durante diez minutos (V4), normalizadas con furimazina (Q-1) como referencia):

Este tipo de ensayo de bioluminiscencia de luciferasas en solución se usa normalmente en cribado de alto rendimiento. Estos ensayos tienen como objetivo medir la intensidad de la emisión de luz en momentos únicos o múltiples o valorar la cinética de procesos. Los protocolos pueden adaptarse a varias concentraciones de proteínas marcadas con luciferasa y a varias concentraciones de sustratos. Estas mediciones requieren una alta intensidad junto con un máximo de linealidad de la intensidad con la concentración de sustrato para un amplio intervalo dinámico, intensidad estable, idealmente durante una hora, así como un bajo ruido de fondo. Pueden expresarse quimeras proteína:nanoKAZ a partir de células transfectadas. La transfección puede realizarse usando un agente químico, electroporación o restos moleculares que proporcionen propiedades de absorción celular a plásmidos lineales o circulares o vectores lentivirales. Pueden realizarse ensayos en células transfectadas transitoriamente o después de la integración génica en el gen que expresa constitutivamente la quimera de nanoKAZ.

Tal como se representa en la figura 3, se valoró el intervalo dinámico de nanoKAZ utilizando luciferina Q-3. La enzima se diluyó tres por tres veces y se midió la bioluminiscencia en un volumen constante (100 pl) y a una concentración constante del sustrato. La bioluminiscencia es lineal con respecto a la concentración de enzima a lo largo de 5 órdenes de magnitud, sobrecargando el sistema de detección. Este intervalo puede aumentarse en dos órdenes de magnitud disminuyendo 2 veces el volumen para una alta concentración de enzima y aumentando dos veces el volumen para una baja concentración de enzima.

Considerando la hipótesis de un mecanismo de Michaelis-Menten para la nanoKAZ, la Km y Vmax se extrapolaron a partir de la representación de Lineweaver-Burk de la actividad enzimática que cataliza o bien Q-1 o Q-3. La figura 4 muestra la inversa de la velocidad de reacción frente a la inversa de la concentración de sustrato manteniendo constante la concentración de la enzima. Los datos se ajustaron con regresión lineal satisfaciendo factores de correlación altos (R). Las Km son iguales para ambos sustratos (Km = 2 pM) mientras que la Vmax es 3 veces menor para Q-1 (0,6-106 RLU/s) que para Q-3 (2,0-106 RLU/s).

Esta valoración de la actividad de la proteína-luciferasa puede aplicarse al ensayo de células transfectadas transitoriamente:

- comparación de sustratos: intensidad, estabilidad, actividad catalítica, constante de Michaelis, mecanismo catalítico, inhibición por exceso de sustrato, inhibición por subproductos, inactivación por subproductos;

- optimización del tampón de reacción;

- efectos de mutación sobre la actividad catalítica de la luciferasa;

- efecto del tamaño, rigidez y composición del conector de proteína-luciferasa sobre la actividad catalítica de la luciferasa;

- eficacia de expresión del plásmido;

- eficacia de la transfección;

- regulación de la transcripción usando un dominio regulador en sentido 5’ del gen de luciferasa en el plásmido;

- ensayos de interacciones proteicas a partir de la complementación de dos fragmentos de la nanoKAZ utilizados como indicador condensados con cada proteína asociada y recuperando la actividad luciferasa tras la asociación de proteínas asociadas.

Esta valoración de la actividad de la proteína-luciferasa puede aplicarse al ensayo de células transfectadas constitutivamente:

- efecto de la composición, temperatura, gas del medio;

- cribado de fármacos de expresión génica específica (regulación del factor de unión en sentido 5’ del gen de nanoKAZ);

- efecto del knock-in, knock-down o knock-out de genes por interferencia de ARN o edición génica sobre la expresión de proteínas, el crecimiento celular.

2- Ensayos in cellulo de bioluminiscencia de suspensión de células o exosomas.

Este tipo de ensayos surge de la necesidad de realizar una valoración bioluminiscente en las células. Las células pueden estar vivas en condiciones de crecimiento usando medios de cultivo, o en reposo en condiciones usando inhibidores de la síntesis de ATP como azida sódica o desoxiglucosa, ya que la reacción de nanoKAZ no necesita nucleósido trifosfato. Las células pueden destruirse después de unas condiciones de fijación química ligera mediante la adición de paraformaldehído (0,5%, 20 min a temperatura ambiente) y luego varias etapas de lavado con PBS. También pueden utilizarse condiciones de permeación celular para mantener la estructura general celular con saponina, digitonina o una concentración baja de Tritón X100 para sacar proteínas solubles de las células (eventualmente la quimera proteína-nanoKAZ no unida) o para obtener proteínas (como eventualmente la quimera proteína-nanoKAZ) para dirigirse a células unidas. Los indicadores o fragmentos de luciferasa pueden fusionarse con proteínas que se dirigen a la superficie celular, el citoplasma, los orgánulos, el núcleo o los exosomas.

Tal como se describió para in vitro, estos ensayos in cellulo tienen como objetivo medir la intensidad de la emisión de luz en puntos de tiempo únicos o múltiples o junto con la cinética. Los protocolos pueden adaptarse a varias concentraciones de proteínas marcadas con luciferasa y a varias concentraciones de sustratos. Estas mediciones requieren alta intensidad junto con un máximo de linealidad de la intensidad con la concentración de sustrato para un amplio intervalo dinámico, intensidad estable a lo largo de las mediciones en una escala de una hora, y bajo nivel de ruido. Pueden añadirse quimeras de proteína nanoKAZ en los medios a células, expresadas a partir de algunas células específicas añadidas a un tipo diferente de células o de células transfectadas en general. La transfección puede realizarse usando un agente químico, electroporación o restos moleculares que proporcionen propiedades de absorción celular a plásmidos lineales o circulares o vectores lentivirales. Los ensayos pueden realizarse en células transfectadas transitoriamente o después de la integración génica en el gen que expresa constitutivamente la quimera de nanoKAZ.

Las mediciones se controlan normalmente mediante un luminómetro de placa de pocillos múltiples, un tren de lectura de gotas de luminómetro muestreadas en un tubo por separado por burbujas de aire de un manipulador de líquidos. Como opuesto a un ensayo in vitro, un ensayo in cellulo puede realizarse utilizando un citómetro con ajuste de bioluminiscencia.

Se realizan cuatro tipos de experimentos como ensayo bioluminiscente a base de células:

- 2.1 Ensayo de unión de proteína-nanoKAZ en la superficie celular intacta o dentro de células permeabilizadas: las quimeras de proteína-nanoKAZ pueden estar libres o asociadas a un complejo, una perla, un virus, otra célula. Estos ensayos basados en células se desarrollan normalmente para diagnósticos de unión de hormonas y citocinas, diagnósticos de direccionamiento celular, diagnóstico de infectibilidad celular, cribado de fármacos para la protección de células huésped frente a infecciones;

- 2.2 Medición de la intensidad de bioluminiscencia de luciferasa a partir de la expresión celular individual de la quimera de proteína-nanoKAZ a partir de células transfectadas transitoria o constitutivamente o importación de quimeras a la célula con fusión de dominio de importación automática, electroporación o inyección. Normalmente, desarrollo de ensayos para la regulación de la expresión génica. Cribado de fármacos, ARNi, patógenos y factores ambientales sobre la regulación génica específica;

- 2.3 Medición de la intensidad de bioluminiscencia de luciferasa para someter a ensayo el número de proteínanaKAZ (fragmento 1-85 del extremo N terminal) y proteína-noKAZ (fragmento 86-166 del extremo C terminal) asociadas que proporcionan la recuperación de la actividad de luciferasa mediante complementación para células transfectadas tal como se describió para ensayos in vitro. Normalmente, el desarrollo de ensayos para la interacción proteína-proteína dentro o en la superficie de las células y el ensayo de alteración por fármacos, ARNi, patógenos y factores ambientales;

- 2.4 Medición de la intensidad de bioluminiscencia de luciferasa para someter a ensayo el número de complementación obtenida de la adición de quimeras de fragmentos de proteína-nanoKAZ libres o asociadas a un complejo, una perla, un virus, otra célula y añadidas a células intactas proporcionando quimeras de un fragmento de proteína-nanoKAZ complementario en su superficie o dentro de las células permeabilizadas. Aplicaciones idénticas a 2.1 pero en las que la luz la proporciona la complementación de fragmentos de nanoKAZ en lugar de la presencia de la fusión completa. La rigurosidad del sistema reduce el riesgo de interacciones no específicas.

3- Ensayos in cellulo y formación de imágenes de bioluminiscencia de células adherentes o no adherentes, orgánulos, exosomas, virus o partículas utilizando un microscopio óptico.

La adquisición de bioluminiscencia utilizando un microscopio óptico proporciona una medición cuantitativa de emisión de luz célula por célula, la principal ventaja. Esto es significativo especialmente cuando la eficacia de la transfección es baja en el caso de expresión de nanoKAZ proporcionada por plásmidos. Si bien nanoKAZ está activo y no requiere ATP, las células pueden estar vivas en medios de cultivo, inactivas en condiciones de inhibición de la producción de ATP (azida de sodio, desoxiglucosa), en condiciones de fijación química ligera (PFA al 0,5% 20 min a TA y luego 2 lavados con PBS), en condiciones de permeación celular (digitonina, saponina, tritón). Cuanto mayor es la eficacia de bioluminiscencia, menor es el tiempo de exposición y menor es la sensibilidad requerida para el detector o la cámara. NanoKAZ con sustratos desarrollados tales como Q-3 o Q-12 abre la formación de imágenes de bioluminiscencia al microscopio óptico convencional. Cuanto menor sea el tiempo de exposición, mayor será la resolución, que se ve obstaculizada por el movimiento de células vivas. Cualquier ganancia en la emisión de luz mejora la calidad de las imágenes. Los indicadores o fragmentos de luciferasa pueden fusionarse con proteínas que se dirigen a la superficie celular, citoplasma, orgánulos, núcleo o exosomas y pueden ser transportados por virus, células o agentes que infectan al huésped, complejos biológicos, perlas o cualquier partícula. La segunda ventaja de la microscopía es proporcionar la ubicación de la emisión de luz con una resolución subcelular.

Para el tiempo de exposición de segundos a minutos, se obtuvieron imágenes de la bioluminiscencia en células usando una cámara EMCCD enfriada (Andor) en un microscopio invertido de campo amplio (Axiovert 200, Zeiss) usando un objetivo de aire de 20 x 0,75 NA y un objetivo de agua apocromático 63 x 1,2 NA en una caja negra hermética a la luz. Todas las fuentes de luz salieron de la caja a través de persianas controladas. El microscopio tiene una platina motorizada para portaobjetos o placas, lo que permite el cribado automático de la placa de pocillos. Para un tiempo de exposición más corto (menos de un segundo), se usó un fotodiodo de avalancha altamente sensible (PhotekIF) como detector en el mismo sistema de microscopio a un lado de la cámara. Este detector de alta sensibilidad permite seleccionar un gran número de células con tiempos de exposición inferiores a un segundo, pero no proporciona detalles subcelulares, organización ni ubicación de restos bioluminiscentes, sino solo luz en la célula completa. Las ventajas en comparación con mediciones in vitro mediciones adquiridas utilizando luminómetros es restringir la medición de la intensidad de emisión de fotones a una sola célula en condiciones de crecimiento y permite cinéticas rápidas. Con el par enzima/sustrato, nanoKAZ/análogo Q-3, el tiempo de adquisición para una placa de 96 pocillos está en el intervalo de una hora cuando se usa el sistema convencional con una cámara EMCCD, y en el intervalo de un minuto cuando se usa el detector de fotodiodos de avalancha. Los tiempos de experiencia se ampliaron 3 veces con nanoKAZ/furimazina para obtener la misma calidad que con nanoKAZ/análogo Q-3. Cualquier aumento de la eficacia catalítica y la emisión de fotones mejora la resolución de las imágenes y disminuye la duración de la experiencia.

Se usó complementación de fragmentos NanoKAZ/análogo Q-3 como indicador bioluminiscente para la interacción de proteínas tal como se describió anteriormente (2.3 y 2.4). Se cotransfectaron células HEK y Jurkat con dos plásmidos que codificaban para proteínas asociadas por separado marcadas con naKAZ o noKAZ tal como se describió anteriormente. La relación de pares de plásmidos y las cantidades totales de plásmidos se optimizaron para obtener la mayor transfección y expresión de pares de proteínas; en la figura 5 se muestran diversos ejemplos.

4- Ensayos in vivo de bioluminiscencia de luciferasa o fragmento utilizado como indicador de proteínas expresados en animales vivos o tejidos perfundidos utilizando microscopio óptico, escáneres de luz, cámaras o sistemas de formación de imágenes bioluminiscentes.

La furimazina (Q-1) y sus derivados tienen espectros de emisión centrados en 460 nm pero presentan picos grandes que con colas más allá de 580 nm. La bioluminiscencia obtenida con el análogo Q-3 proporciona fotones, teniendo el 10% de ellos una longitud de onda más allá de 560 nm hasta 600 nm. Esta emisión de amplio espectro hacia el rojo permite, por tanto, el uso de nanoKAZ/furimazina para la obtención de imágenes in vivo. La emisión de luz más allá de 580 es miles de veces mayor que las luciferasas de luciérnagas o escarabajos que emiten rojo. Se inyectaron IL7:nanoKAZ y análogo Q-3 en ratones. Se adquirieron imágenes cuantitativas de alta calidad con un sistema de obtención de imágenes de bioluminiscencia (Ivis).

5- Ensayo de bioluminiscencia de moléculas, partículas, complejos, virus o células inmovilizados en superficie sólida o soporte 3D

Las aplicaciones típicas son inmunotransferencias de tipo Western y Northern para la detección de dianas de ADN y proteínas a partir de soluciones, lisados celulares o biofluidos. Estos compuestos se inmovilizan en superficies 2D (membrana, portaobjetos, perla, fibra) o soporte 3D (matriz, gel, perla permeable, redes de fibras, tejidos permeables). Puede usarse proteína-nanoKAZ para revelar la presencia de una diana que interactúa como anticuerpos:nanoKAZ antes de la unión o después de la unión, dependiendo de la alteración de la actividad nanoKAZ durante la inmovilización. Estas aplicaciones podrían extenderse a la detección de sustancias tóxicas y compuestos en suelos, líquidos para someter a prueba el peligro biológico o químico en el medio ambiente cuando esas moléculas pueden inmovilizarse en el soporte. Podrían desarrollarse aplicaciones en dispositivos de diagnóstico de punto de atención de microfluidos a base de papel utilizando detección de bioluminiscencia (Lab. Chips 2013, 13, 2210-2251). La detección es posible utilizando un bioluminómetro, una cámara digital (incluidos teléfonos inteligentes), un escáner, un sistema de obtención de imágenes o una película fotosensible.

Propiedad de estabilidad a largo plazo de los precursores de luciferinas O-acetiladas P/(I)

Se realizaron dos espectros de 1H RMN del mismo lote del compuesto acetato de 8-bencil-2-((5-metilfuran-2-il)metil)-6- fenilimidazo[1,2-a]pirazin-3-ilo (almacenado a 4°C) el día de su producción (figura 6A) y 30 meses después (figura 6B) respectivamente.

La comparación de los dos espectros de 1H RMN subraya la ventajosa estabilidad de los precursores de luciferinas O-acetiladas con la fórmula general I.

Se obtuvieron resultados similares con los precursores de luciferinas O-acetiladas almacenados a temperatura ambiente.

Los resultados anteriores están en marcado contraste con las precauciones necesarias para mantener la calidad de las luciferinas disponibles comercialmente, tales como furimazina o coelenterazina, lo que subraya su muy débil estabilidad de almacenamiento. En efecto, se recomienda almacenar estas luciferinas, desecadas o en solución, a -20°C, o para un almacenamiento más prolongado a -70°C, protegidas de la luz, lo más libres de oxígeno posible, especificándose que dichas luciferinas pueden almacenarse a 4°C durante solamente hasta dos semanas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de un compuesto de la siguiente fórmula (I) en presencia de una solución que comprende un ácido fuerte para detectar y/o medir la actividad enzimática de una proteína luminógena, in vitro, in cellulo o ex vivo;

en donde:

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un arilo C⁶-C¹⁰;

- un grupo heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros;

- un halógeno, en particular -F;

- un grupo -CF3;

- un grupo -CN;

- un grupo -ORi;

- un grupo -OSO³H;

- un grupo -NRiRii;

- un grupo guanidinilo;

- un grupo -C(=O)ORa, siendo Ra tal como se definió anteriormente;

Ri y Rii cada uno representan independientemente H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc; o junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un grupo heterocicloalquilo C⁴-C⁷.

2. Uso según la reivindicación 1, en donde:

- R¹representa H;

- R⁴representa H;

- R⁵representa (C=O)Me;

- R³representa un grupo aralquilo o un grupo hetaralquilo, opcionalmente sustituido tal como se define en la reivindicación 1, en particular un bencilo, opcionalmente sustituido tal como se define en la reivindicación 1, más particularmente con al menos un halógeno, incluso más particularmente F;

- R²representa un fenilo, opcionalmente sustituido tal como se define en la reivindicación 1,

representando R²en particular un fenilo opcionalmente sustituido con al menos un grupo Y²seleccionado de:

- un alquilo C¹-C⁶, en particular un metilo;

- un halógeno, en particular F;

- un grupo -ORi;

representando Ri H, un grupo alquilo C¹-C⁶, un grupo cicloalquilo C³-C¹⁰, un grupo aralquilo o un grupo protector ad hoc, representando Ri en particular H, Me o Bn;

seleccionándose R²más particularmente del grupo que consiste en:

y/o

- Z se selecciona de fenilo, furanilo, tiofenilo y está opcionalmente sustituido tal como se define en la reivindicación 1, representando Z en particular un fenilo, furanilo o tiofenilo, opcionalmente sustituido con al menos un grupo Yz seleccionado de:

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un halógeno, en particular F o Cl;

- un grupo -CF³;

- un grupo -ORi; en particular un grupo -OMe;

seleccionándose Z más particularmente del grupo que consiste en:

3. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la proteína luminógena es una luciferasa derivada de luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

4. Compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 para su uso, después de ponerlo en contacto con una solución que comprende un ácido fuerte, en un método in vivo de detección y/o medición de la actividad enzimática de una proteína luminógena.

5. Kit que comprende:

i) un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2; y

ii) una solución que comprende un ácido fuerte;

y que además comprende opcionalmente un compuesto seleccionado del grupo que consiste en una proteína luminógena, un polinucleótido que codifica para la proteína luminógena, un vector recombinante que comprende el polinucleótido y un transformante que comprende el polinucleótido, siendo dicha proteína luminógena en particular una luciferasa de Oplophorus, más particularmente la luciferasa nanoKAZ.

6. Compuesto de la siguiente fórmula (II):

R¹y R²juntos forman con los dos átomos de carbono a los que están unidos respectivamente un grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, un grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, o un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷condensados con un areno C⁶-C¹⁰, estando dichos grupo cicloalqueno C⁵-C⁷, grupo heterocicloalqueno C⁴-C⁷, areno C⁶-C¹⁰, grupo cicloalqueno C⁵-C⁷y grupos heterocicloalqueno C⁴-C⁷opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Y ¹²;

- un alquilo C¹-C⁶;

- un cicloalquilo C³-C⁷;

- un arilo C⁶-C¹⁰;

- un grupo heteroarilo de C⁵-C¹⁰miembros;

- un halógeno, en particular -F;

- un grupo -CF³;

- un grupo -CN;

- un grupo -ORi;

- un grupo -OSO³H;

- un grupo -NRiRii;

- un grupo guanidinilo;

- un grupo -C(=O)ORa, siendo Ra tal como se definió anteriormente;

con la condición de que cuando R¹y R⁴representan H, entonces:

- R²es distinto de fenilo no sustituido y 4-hidroxi-fenilo, o

- R³es distinto de bencilo no sustituido, o