ES2900624T3

ES2900624T3 - Formulación de anticuerpos

Info

Publication number: ES2900624T3
Application number: ES16162699T
Authority: ES
Inventors: Joachim Momm; Hans-Joachim Wallny
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2008-12-10
Filing date: 2009-12-09
Publication date: 2022-03-17
Anticipated expiration: 2029-12-09
Also published as: DK3072906T3; EP3072906B1; JP2026021446A; SI2376533T1; US20120315285A1; IL212922B; SMT201600222B; US20110236398A1; EP3792282A1; EP3072906A1; RU2011127913A; JP2018168158A; AU2009324371A1; IL276622A; MA33023B1; IL212922A0; MY157772A; NZ592918A; US8623367B2; PT3072906T

Abstract

Una formulación farmacéutica líquida que comprende de 50 a 150 mg/ml de anticuerpo ACZ885, un sistema tampón y un estabilizador, en donde el sistema tampón es histidina, en donde la formulación tiene un pH de 6,2 a 6,8, en donde el estabilizador es manitol, sorbitol o trehalosa, y en donde la formulación mantiene entre el 80 % y el 125 % de la actividad biológica original del anticuerpo durante 24-36 meses a 2-8 °C.

Description

DESCRIPCIÓN

Formulación de anticuerpos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a nuevas formulaciones farmacéuticas, en particular, a nuevas formulaciones farmacéuticas en las que el principio activo comprende anticuerpos humanos frente a la interleucina I p humana (IL-1p), en particular, los anticuerpos descritos en el documento WO 2002/016436.

Los anticuerpos, al igual que otros agentes terapéuticos proteínicos, son moléculas complejas y, en general, se deben utilizar grandes cantidades de anticuerpos en formulaciones farmacéuticas debido a su dosis terapéuticamente eficaz en mamíferos, particularmente, en seres humanos. Las formulaciones líquidas de agentes terapéuticos proteínicos deben conservar intacta la actividad biológica de los agentes terapéuticos proteínicos y proteger los grupos funcionales de los mismos de la degradación durante la fabricación y el período de validez. Las vías de degradación de las proteínas pueden implicar inestabilidad química o inestabilidad física.

Las primeras sugerencias sobre cómo resolver los problemas de inestabilidad de las formulaciones de agentes terapéuticos proteínicos incluían la liofilización del producto farmacológico, seguida de la reconstitución inmediatamente o poco antes de la administración. Sin embargo, la formulación reconstituida requiere ser reproducible, estable y fisiológicamente activa para lograr una preparación segura con resultados terapéuticos eficaces.

Convenientemente, las formulaciones farmacéuticas líquidas de agentes terapéuticos proteínicos, es decir, los anticuerpos, deben ser estables a largo plazo, y contener una cantidad segura y eficaz del compuesto farmacéutico.

Daugherty et al. (Advanced Drug Delivery Reviews 58, 2006 pág. 686-706) describen los obstáculos en la obtención de formulaciones líquidas estables de anticuerpos. El documento WO 03/039485 se refiere a formulaciones líquidas de anticuerpos IgG, p. ej. Zenapax™ (anti-CD25). El documento WO 03/105894 se refiere a formulaciones líquidas de anticuerpos IgG1 Synagis™ (anti-proteína F del VSR).

Un problema apreciado desde hace mucho tiempo de las formulaciones líquidas de agentes terapéuticos proteínicos es el de la agregación, donde las moléculas proteínicas se pegan físicamente entre sí, produciendo, por ejemplo, la formación de materia insoluble opaca o precipitación, que puede mostrar reacciones inmunitarias no deseadas. Además, un problema importante provocado por la formación de agregados es que, durante la administración, la formulación puede obstruir las jeringas o bombas, volviéndolas inseguras para los pacientes.

Por tanto, existe la necesidad de formulaciones que comprendan agentes terapéuticos proteínicos, en particular, anticuerpos, que sean estables a largo plazo y sin agregación a concentraciones elevadas de anticuerpos. La presente invención aborda la necesidad identificada anteriormente proporcionando una nueva formulación que comprende un anticuerpo, sin agregados proteínicos, estable y que tiene una viscosidad suficientemente baja y que, por tanto, es adecuada para la administración a mamíferos, en particular, a seres humanos.

La interleucina-lp (teniendo IL-1p o interleucina-1p el mismo significado en el presente documento) es un potente inmunomodulador que interviene en una amplia selección de reacciones inmunitarias e inflamatorias. La producción inapropiada o excesiva de IL-1 p está asociada con la patología de diferentes enfermedades y trastornos, tales como septicemia, choque séptico o endotóxico, alergias, asma, pérdida ósea, isquemia, apoplejía, artritis reumatoide y otros trastornos inflamatorios. Se ha propuesto el uso de anticuerpos frente a lL-1p en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por IL-1; véase, por ejemplo, el documento WO 95/01997 y la exposición de la introducción del mismo, así como el documento WO 02/16436.

El anticuerpo frente a IL-1p para las formulaciones de la presente invención es el anticuerpo ACZ885 descrito en el presente documento a continuación en SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, o fragmentos funcionales del mismo que conservan la afinidad por el antígeno, tales como los dominios F(ab)2, Fab, scFv, VH, y las CDR (Complementarity Determining Regions, regiones determinantes de la complementariedad). Los péptidos señal de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 se muestran en cursiva de acuerdo con el documento WO 02/16436.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una formulación de anticuerpo que sea estable tras el almacenamiento y la administración. De acuerdo con la presente invención, una formulación estable es una formulación en donde el anticuerpo contenido conserva esencialmente su estabilidad e integridad física y química durante el almacenamiento. Por ejemplo, la cantidad de sustancias e impurezas relacionadas con el producto tras la liofilización y el almacenamiento o tras el almacenamiento en el caso de una formulación líquida es de aproximadamente el 2-5 %, preferentemente el 2 3 %. La estabilidad de la formulación del anticuerpo puede medirse utilizando análisis de la actividad biológica y en donde la actividad biológica tras el almacenamiento sea de aproximadamente el 80-125 % de la actividad original. La actividad biológica del anticuerpo en la formulación de la invención tras el almacenamiento se mide en un análisis de genes indicadores, utilizando la estirpe celular modificada genéticamente descrita más adelante en el apartado de ejemplos del presente documento.

Un objeto adicional es proporcionar una formulación de anticuerpo líquida y estable que sea adecuada para la administración subcutánea. Preferentemente, la formulación líquida también es adecuada para la liofilización y la posterior reconstitución. También es un objeto proporcionar una formulación que sea estable durante al menos el tiempo durante el que se administrará a un mamífero, en particular, a un ser humano.

En general, se prefieren utilizar pequeños volúmenes de formulación farmacéutica para inyección subcutánea (normalmente de 1,0 ml-1,2 ml como máximo). En el caso de las formulaciones que comprenden anticuerpos, p. ej., terapias con altas dosis de anticuerpos, la administración subcutánea requiere formulaciones de anticuerpos de alta concentración (p. ej., 50 mg/ml-150 mg/ml o mayores). Debido a las altas concentraciones de anticuerpos que se requieren, las formulaciones que comprenden anticuerpos plantean desafíos relativos a la estabilidad física y química del anticuerpo, la formación de agregados y la dificultad con la fabricación, el almacenamiento y la administración de la formulación de anticuerpo.

El aumento de la viscosidad de las formulaciones proteínicas tiene consecuencias negativas en el procesamiento, p. ej., la procesabilidad del líquido a través de la administración del fármaco al paciente, p. ej., a alta viscosidad, la formulación líquida ya no pasa a través del calibre de una aguja fácilmente, provocando malestar al paciente; la duración de la inyección; la utilizabilidad del autoinyector. Además, se desean formulaciones de anticuerpos de concentración relativamente alta con viscosidades adecuadamente bajas como requisito previo para facilitar la fabricación, el almacenamiento y la administración. El término "viscosidad", como se utiliza en el presente documento, puede ser "viscosidad cinemática" o "viscosidad absoluta". Comúnmente, la viscosidad cinemática se expresa en centistokes (cSt). La unidad de la viscosidad cinemática en el SI es el mm2/s, que equivale a 1 cSt. La viscosidad absoluta se expresa en unidades de centipoise (cP). La unidad de la viscosidad absoluta en el SI es el milipascalsegundo (mPas), donde 1 cP = 1 mPas.

Por lo tanto, la presente invención proporciona formulaciones que comprenden anticuerpos frente a IL-1p y que son estables y carecen de agregados a concentraciones elevadas de anticuerpos, mientras que tienen una viscosidad suficientemente baja.

Una formulación farmacéutica líquida de anticuerpo debe presentar una variedad de características predefinidas. Una de las principales preocupaciones por los productos farmacéuticos líquidos es la estabilidad, ya que las proteínas tienden a formar agregados solubles e insolubles durante la fabricación y el almacenamiento. Además, se pueden producir diferentes reacciones químicas en solución (desamidación, oxidación, recorte, isomerización, etc.) que conduzcan a un aumento en los niveles de productos de degradación y/o la pérdida de actividad biológica. Preferentemente, una formulación líquida de anticuerpo debe presentar un período de validez superior a 18 meses. Lo más preferentemente, una formulación líquida de ACZ885 debe presentar un período de validez superior a 24 meses. El período de validez y la actividad de un anticuerpo frente a IL-1p se definen en el análisis de la actividad biológica del apartado de ejemplos, por lo que la actividad debe permanecer entre el 80 % y el 125 % de la actividad original.

Una formulación de anticuerpo ACZ885 debe presentar un período de validez de aproximadamente 36 a 60 meses a 2 8 °C. Preferentemente, la formulación líquida de ACZ885 debe presentar un período de validez de aproximadamente 24 a 36 meses a 2-8 °C. Preferentemente, la formulación liofilizada de ACZ885 debe presentar un período de validez de aproximadamente preferentemente hasta 60 meses a 2-8 °C.

Los principales factores que determinan el período de validez suelen ser la formación de subproductos y productos de degradación y la pérdida de actividad biológica. La formulación de la presente invención consigue estos niveles de estabilidad deseados.

Aparte de una estabilidad física y química suficientes, la formulación debe tener un valor de pH y una osmolalidad aceptables (de 250 a 500 mOsm/kg) para la aplicación subcutánea. Sin embargo, en los datos publicados se informa de la posibilidad de administrar las preparaciones con alta osmolalidad (de hasta 1100 mOsm/kg) por vía subcutánea sin aumentar significativamente la percepción del dolor o la duración del ardor tras la inyección. También se sabe que una alta concentración de anticuerpos aumentaría la viscosidad de la formulación y también la agregación. La formulación farmacéutica adecuada de acuerdo con la invención tiene una viscosidad de aproximadamente menos de 16 mPas, preferentemente de 3 a 16 mPas, y preferentemente de 3-10 mPas.

De acuerdo con la presente invención, ahora se ha descubierto que, sorprendentemente, se pueden obtener formulaciones de anticuerpos particularmente estables que tienen propiedades ventajosas para preservar la actividad del anticuerpo durante un largo período de almacenamiento, evitando la agregación y teniendo una viscosidad adecuada a pesar de las altas concentraciones de anticuerpo. La presente invención proporciona en su aspecto más amplio una formulación farmacéutica (formulación de la invención) que comprende un anticuerpo, como principio activo, y un sistema tampón, un estabilizador y un tensioactivo. La formulación de la invención es líquida, pero también es adecuada para liofilizarse y posteriormente reconstituirse en una formulación líquida con una concentración de anticuerpo menor, igual o mayor. Una formulación reconstituida es una formulación que se ha preparado a partir de un liofilizado, de manera que el anticuerpo de la formulación se dispersa en la formulación reconstituida.

La presente invención se refiere a una nueva formulación farmacéutica que comprende anticuerpo ACZ885, como principio activo, y un sistema tampón, en donde el valor de pH es de 6,2 a 6,8.

Los presentes inventores han descubierto ahora que se puede preparar una formulación estable utilizando un sistema tampón que da lugar a una formulación que tiene un pH de 6,2 a 6,8. En un aspecto particular, el pH es cualquier valor de pH dentro de los enumerados anteriormente; por ejemplo, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8.

Los sistemas tampón preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen el sistema tampón histidina, y los mejores resultados se obtuvieron utilizando histidina.

La concentración del sistema tampón adecuado utilizado para la formulación de acuerdo con la presente invención es de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 50 mM, o de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 40 mM, dependiendo, por ejemplo, del tampón y de la estabilidad deseada de la formulación.

En la realización preferida, el sistema tampón es histidina; y la histidina se utiliza preferentemente a una concentración de 10 a 50 mM, preferentemente de 15 a 40 mM, preferentemente de 20 a 30 mM.

Preferentemente, la formulación de la invención puede comprender además un estabilizador. Los estabilizadores de acuerdo con la presente invención incluyen trehalosa, manitol y sorbitol. Los mejores resultados se obtienen cuando se utiliza sacarosa o manitol. La concentración de los estabilizadores adecuados utilizados para la formulación de acuerdo con la presente invención es de aproximadamente 50 a 300 mM, preferentemente de 180 a 300 mM, lo más preferentemente de aproximadamente 270 mM de sacarosa o manitol. En un aspecto particular, la formulación líquida liofilizada y reconstituida comprende sacarosa o manitol como estabilizador. En otro aspecto particular, la formulación líquida comprende manitol como estabilizador.

La formulación de la invención puede comprender además opcionalmente uno o más excipientes seleccionados de un grupo que comprende agente de carga, sal, tensioactivo y conservante.

Un agente de carga es un compuesto que añade masa a una formulación farmacéutica y contribuye a la estructura física de la formulación en forma liofilizada. Los agentes de carga adecuados de acuerdo con la presente invención incluyen manitol, glicina, polietilenglicol y sorbitol. La concentración del agente de carga utilizada para la formulación de acuerdo con la presente invención es 20-90 mM.

El uso de un tensioactivo puede reducir la agregación de la proteína reconstituida y/o reducir la formación de partículas en la formulación reconstituida. La cantidad de tensioactivo añadida es tal que reduzca la agregación de la proteína reconstituida y minimice la formación de partículas tras la reconstitución.

Los tensioactivos adecuados de acuerdo con la presente invención incluyen polisorbatos (p. ej., polisorbatos 20 u 80); poloxámeros (p. ej., poloxámero 188); Tritón; dodecilsulfato de sodio (SDS); laurilsulfato de sodio; octilglicósido de sodio; lauril-, miristil-, linoleil- o estearil-sulfobetaína; lauril-, miristil-, linoleil- o estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- o cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- o isoestearamidopropil-betaína (p. ej., lauroamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopropil- o isoestearamidopropil-dimetilamina; metilcocoil-taurato de sodio o metiloleil-taurato de disodio; y la serie MONAQUAT® (Mona Industries, Inc., Paterson, Nueva Jersey), polietilglicol, polipropilglicol y copolímeros de etilenglicol y propilenglicol (p. ej. Pluronics, PF68, etc.). En una realización preferida, el tensioactivo se puede seleccionar del grupo que consiste en polisorbatos 20 y polisorbatos 80.

La concentración del tensioactivo utilizado para la formulación de acuerdo con la presente invención es de aproximadamente el 0,001-0,5 %, o de aproximadamente el 0,005-0,10 %, preferentemente del 0,01-0,10 %, lo más preferentemente de aproximadamente el 0,04 al 0,06 % en peso en volumen de la formulación. El tensioactivo se puede añadir a la formulación previa a la liofilización, la formulación liofilizada y/o la formulación reconstituida según se desee, pero preferentemente a la formulación previa a la liofilización.

Opcionalmente, se pueden utilizar conservantes en las formulaciones de la invención. Los conservantes adecuados para utilizar en la formulación de la invención incluyen cloruro de octadecildimetilbencilamonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en la que los grupos alquilo son compuestos de cadena larga) y cloruro de bencetonio. Otros tipos de conservantes incluyen alcoholes aromáticos, tales como fenol, alcohol butílico y bencílico, alquilparabenos tales como metilparabeno o propilparabeno, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol y m-cresol.

Se pueden incluir otros vehículos, excipientes o estabilizadores farmacéuticamente aceptables tales como los descritos en "Remington's Science and Practice of Pharmacy" 21.a edición, (2005) o "Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding", 3.a edición (2008) en la formulación de la invención siempre que no afecten negativamente a las características deseadas de la formulación. Los vehículos, excipientes o estabilizadores aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen agentes tampón adicionales; conservantes; codisolventes; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; agentes quelantes tales como EDTA; complejos metálicos (p. ej. complejos de Zn-proteína); polímeros biodegradables tales como poliésteres; y/o contraiones formadores de sal tales como sodio.

La invención proporciona, en un aspecto, una formulación líquida, liofilizada o reconstituida estable que comprende anticuerpo ACZ885 y un sistema tampón, en donde el pH de la formulación líquida o reconstituida es de 6,2 a 6,8 para conseguir una estabilidad suficiente, una agregación mínima y una viscosidad aceptablemente baja. La formulación de acuerdo con la presente invención es adecuada para liofilizar, y la reconstitución con agua se logra dentro de un período de tiempo aceptable, normalmente inferior a 10 minutos. La invención proporciona una formulación reconstituida estable que comprende anticuerpo ACZ885 y un sistema tampón, cuya formulación reconstituida se ha preparado a partir de una mezcla liofilizada del anticuerpo y un sistema tampón, en donde el pH del la formulación reconstituida es de 6,2 a 6,8, y el tiempo de reconstitución es inferior a 10 min. Una formulación reconstituida estable es una formulación en donde el anticuerpo que contiene conserva esencialmente su estabilidad e integridad física y química tras el almacenamiento durante un período de tiempo desde la reconstitución hasta el uso, normalmente unas cuantas horas y hasta varios días.

En una realización adicional, la invención proporciona un método para preparar una formulación que comprende las etapas de: (a) liofilizar la formulación que comprende anticuerpo ACZ885 y un sistema tampón; y (b) reconstituir la mezcla liofilizada de la etapa (a) en un medio de reconstitución de manera que la formulación reconstituida sea estable.

La formulación de la etapa (a) puede comprender además un estabilizador y uno o más excipientes seleccionados de un grupo que comprende agente de carga, sal, tensioactivo y conservante como se ha descrito anteriormente.

Como medio de reconstitución, se pueden utilizar varios ácidos orgánicos diluidos o agua, es decir, agua estéril, Agua Bacteriostática para Inyección (ABI) o. El medio de reconstitución puede seleccionarse entre agua, es decir, agua estéril, agua bacteriostática para inyección (ABI) o el grupo que consiste en ácido acético, ácido propiónico, ácido succínico, cloruro de sodio, cloruro de magnesio, solución ácida de cloruro de sodio, solución ácida de cloruro de magnesio y solución ácida de arginina, en una cantidad de aproximadamente 50 a aproximadamente 100 mM.

Por tanto, la invención proporciona una formulación farmacéutica que comprende:

a) anticuerpo ACZ885; utilizado a una concentración de aproximadamente 10 a 150 mg/ml; y

b) un sistema tampón histidina, y el sistema tampón se puede utilizar a una concentración de aproximadamente 10 a 50 mM; y en donde el pH del sistema tampón es cualquier valor de pH de entre 6,2 y 6,8; y opcionalmente:

c) un estabilizador, trehalosa, manitol o sorbitol, lo más preferentemente manitol, a una concentración de aproximadamente 50 a 300 mM; y opcionalmente

d) excipientes adicionales seleccionados del grupo que comprende agente de carga, sal, tensioactivo y conservante.

En determinadas realizaciones de la invención, se utiliza un agente de carga (p. ej., manitol o glicina) en la preparación de la formulación previa a la liofilización. El agente de carga puede permitir la producción de una torta liofilizada uniforme sin excesivas bolsas en la misma.

Una formulación líquida preferida de la presente invención proporciona una formulación que comprende ACZ885 a la concentración: 10-150 mg/ml, manitol 270 mM, histidina 20 mM y polisorbato 80 al 0,04 %, en donde el pH de la formulación es 6,5.

Una formulación reconstituida preferida de la invención proporciona un liofilizado que en forma reconstituida produce una formulación reconstituida que comprende ACZ885 a la concentración: 10-150 mg/ml, sacarosa 270 mM, histidina 30 mM y polisorbato 80 al 0,06 %, en donde el pH de la formulación es 6,5.

La invención proporciona además un método para tratar a un mamífero, particularmente a un ser humano, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación reconstituida divulgada en el presente documento a un mamífero, particularmente un ser humano, en donde el mamífero, particularmente el ser humano, tiene un trastorno que requiere tratamiento con anticuerpo ACZ885. Por ejemplo, la formulación se puede administrar por vía subcutánea.

Las formulaciones de la invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de enfermedades o afecciones médicas mediadas por IL-1, p. ej., afecciones inflamatorias, alergias y afecciones alérgicas, reacciones de hipersensibilidad, enfermedades autoinmunitarias, infecciones graves y rechazo de trasplantes de órganos o tejidos.

Es un objeto de la presente invención proporcionar un uso de la formulación de la invención para el tratamiento de enfermedades o afecciones médicas mediadas por IL-1.

Por ejemplo, las formulaciones de la invención se pueden utilizar para el tratamiento de receptores de trasplante de corazón, pulmón, corazón y pulmón combinados, hígado, riñón, páncreas, piel o córnea, incluyendo rechazo de aloinjerto o rechazo de xenoinjerto, y para la prevención de la enfermedad de injerto contra hospedador, tal como tras un trasplante de médula ósea, y arterioesclerosis asociada al trasplante de órganos.

Las formulaciones de la invención son particularmente útiles para el tratamiento, la prevención o la mejora de enfermedades autoinmunitarias y de afecciones inflamatorias, en particular, afecciones inflamatorias con una etiología que incluye un componente autoinmunitario, tal como artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, artritis crónica progresiva y artritis deformante) y enfermedades reumáticas, incluyendo afecciones inflamatorias y enfermedades reumáticas que implican pérdida ósea, dolor inflamatorio, hipersensibilidad (incluyendo tanto hipersensibilidad de las vías respiratorias como hipersensibilidad dérmica) y alergias. Las enfermedades autoinmunitarias específicas para las que se pueden emplear formulaciones de la invención incluyen trastornos hematológicos autoinmunitarios (que incluyen, p. ej., anemia hemolítica, anemia aplásica, anemia eritrocitaria pura y trombocitopenia idiopática), lupus eritematoso sistémico, policondritis, esclerodoma, granulomatosis de Wegener, dermatomiositis, hepatitis crónica activa, miastenia grave, psoriasis, síndrome de Steven-Johnson, esprúe idiopático, enfermedad inflamatoria intestinal autoinmunitaria (incluyendo, p. ej., colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y síndrome del intestino irritable), oftalmopatía endocrina, enfermedad de Graves, sarcoidosis, esclerosis múltiple, cirrosis biliar primaria, diabetes juvenil (diabetes mellitus de tipo I), uveítis (anterior y posterior), queratoconjuntivitis seca y queratoconjuntivitis primaveral, fibrosis pulmonar intersticial, artritis psoriásica y glomerulonefritis (con y sin síndrome nefrótico, p. ej., incluyendo síndrome nefrótico idiopático o nefropatía por cambios mínimos).

Las formulaciones de la invención también son útiles para el tratamiento, la prevención o la mejora del asma, bronquitis, neumoconiosis, enfisema pulmonar y otras enfermedades obstructivas o inflamatorias de las vías respiratorias.

Las formulaciones de la invención son útiles para tratar reacciones inflamatorias agudas e hiperagudas indeseables que están mediadas por IL-1 o implican la producción de IL-1, especialmente IL-1p, o el fomento de la liberación de TNF por IL-1, p.ej., infecciones agudas, por ejemplo, choque séptico (p. ej., choque endotóxico y síndrome de dificultad respiratoria del adulto), meningitis, neumonía; y quemaduras graves; y para el tratamiento de la caquexia o el síndrome de emaciación asociado con la liberación mórbida de TNF, como consecuencia de una infección, cáncer o disfunción orgánica, especialmente caquexia relacionada con el SIDA, p. ej., asociada con o como consecuencia de la infección por VIH.

Las formulaciones de la invención son particularmente útiles para tratar enfermedades del metabolismo óseo, incluyendo la artrosis, la osteoporosis y otras artritis inflamatorias, y disminución de la masa ósea en general, incluyendo la disminución de la masa ósea senil y, en particular, enfermedad periodontal.

Las formulaciones de la invención son útiles en la prevención y el tratamiento de síndromes autoinflamatorios en pacientes tales como mamíferos, particularmente seres humanos. Los síndromes autoinflamatorios de acuerdo con la invención son, p. ej., pero sin limitación, un grupo de trastornos hereditarios caracterizados por episodios recurrentes de inflamación que, en contraste con las enfermedades autoinmunitarias, carecen de autoanticuerpos de títulos altos o de linfocitos T específicos del antígeno. Además, los síndromes autoinflamatorios de acuerdo con la invención muestran un aumento de la secreción de IL-1p (pérdida del papel regulador negativo de la pirina que parece mutada en dichas enfermedades), activación de NFkB y apoptosis de leucocitos alterada). Los síndromes autoinflamatorios de acuerdo con la invención son Síndrome de Muckle-Wells (SMW), DALA (Diabetes Autoinmunitaria Latente del Adulto), Síndrome Autoinflamatorio Familiar inducido por el Frío (SAFF), Síndromes Periódicos Asociados con la Criopirina (SPAC), enfermedad inflamatoria multisistémica de inicio neonatal (NOMID, Neonatal-Onset Mutlisystem Inflammatory Disease), síndrome articular, cutáneo y neurológico crónico infantil (CINCA, Chronic Infantile Neurological, Cutaneous, Articular), Fiebre Mediterránea Familiar (FMF) y/o cierta forma de artritis juvenil tal como la Artritis Idiopática Juvenil de inicio sistémico (AIJs), cierta forma de artritis reumatoide juvenil tal como la artritis reumatoide idiopática juvenil de inicio sistémico y/o cierta forma de artritis reumatoide del adulto.

Preferentemente, las formulaciones de la invención son útiles en la prevención y el tratamiento de la artritis reumatoide juvenil y la artritis reumatoide del adulto y/o el síndrome de Muckle Wells.

Las formulaciones de la invención también pueden ser útiles en el tratamiento de la diabetes de tipo 2, donde los estudios clínicos y preclínicos muestran una función de los islotes mejorada por el bloqueo de IL-1. Las formulaciones de la invención también son útiles en el tratamiento de diferentes patologías relacionadas con la diabetes tales como retinopatía, cicatrización de heridas, enfermedades vasculares (incluyendo la reestenosis arterial tras la colocación de una endoprótesis vascular o angioplastia), disfunción renal, enfermedad renal crónica y síndrome metabólico y obesidad. Las formulaciones de la invención también pueden ser útiles en el tratamiento de las migrañas, sinovitis, gota, pseudogota/artritis gotosa o condrocalcinosis, Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (EPOC), daño pulmonar inducido por ventilación mecánica, diferentes tipos de dolor, tales como dolor resistente a la morfina, dolor neuropático, dolor por parto prematuro, dolor discogénico, dolor inflamatorio, dolor de cabeza o migraña. La IL-1p participa en la percepción del dolor y amplifica las señales neurogénicas. Además, las formulaciones de la invención de la invención son útiles en el tratamiento de la aterosclerosis, el cólico renal activo, el cólico biliar y el dolor relacionado con estos trastornos.

Las formulaciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de los síndromes de fiebre periódica: fiebre mediterránea familiar (FMF), síndrome periódico asociado al receptor del factor de necrosis tumoral (TRAPS, Tumor Necrosis Factor Receptor Associated Periodic Syndrome), síndrome de hiperinmunoglobulina D (HIDS, Hyperimmunoglobulin D syndrome), también denominado síndrome de fiebre periódica asociada a la mevalonato quinasa, síndrome autoinflamatorio familiar inducido por el frío y síndrome de fiebre periódica, estomatitis aftosa, faringitis, adenitis (PFAPA, Periodic fever, Aphthous-stomatitis, Pharyngitis, Adenitis), donde la IL-1 p es una citocina dominante. Otras enfermedades en donde la IL-1 p es una citocina dominante y que pueden tratarse con formulaciones de la invención de acuerdo con la invención comprenden síndrome de antisintetasa, Síndrome de Activación de Macrófagos (SAM), enfermedad de Behget, síndrome de Blau, síndrome PAPA (Pyogenic Arthritis, Pyoderma gangrenosum and Acne, artritis piógena, pioderma gangrenoso y acné), síndrome de Schnizler, síndrome de Sweet. El bloqueo del receptor de ligando de IL-1 p y los compuestos de IL-1 p de la invención también se pueden utilizar para tratar la vasculitis; Arteritis de Células Gigantes (ACG), púrpura de Henoch-Schoenlein, vasculitis sistémica primaria, enfermedad de Kawasaki (síndrome de los ganglios linfáticos mucocutáneos), arteritis de Takayasu, poliarteritis nodosa, vasculitis crioglobulinémica esencial, PoliAngeítis Microscópica (PAM) y Síndrome de Churg-Strauss (SCS), vasculitis urticaria. Además, las formulaciones de la invención son útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias como sarcoidosis, pénfigo, espondilitis anquilosante, enfermedad de Alzheimer, amiloidosis, amiloidosis secundaria y Enfermedad de Still del Adulto (ESA).

Las formulaciones de la invención se pueden utilizar para tratar enfermedades asociadas con e1 HLA-B27 (Human Leukocyte antigen B27, antígeno leucocitario humano B27) tales como, pero sin limitación, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, Morbus Reiter y artritis enteropática. Los compuestos de IL-1p de acuerdo con la invención se pueden utilizar para tratar la fiebre reumática, la polimialgia reumática y la arteritis de células gigantes. Finalmente, las formulaciones de la invención se pueden utilizar para tratar infecciones, en particular, infecciones bacterianas e infecciones víricas, más en particular infecciones bacterianas asociadas con síntomas u observaciones artríticas, tales como, pero sin limitación, osteomielitis hematogénica, artritis infecciosa, artritis tuberculosa.

Para las indicaciones anteriores, la dosis apropiada variará dependiendo, por ejemplo, del anticuerpo particular frente a IL-1p que se vaya a emplear, del hospedador, del modo de administración, y de la naturaleza y gravedad de la afección que se esté tratando. La frecuencia de dosificación para usos profilácticos normalmente estará en el intervalo de aproximadamente una vez a la semana hasta aproximadamente una vez cada 3 meses, más habitualmente en el intervalo de aproximadamente una vez cada 2 semanas hasta aproximadamente una vez cada 10 semanas, p. ej., una vez cada 4 a 8 semanas.

La formulación de la invención se administra adecuadamente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos, y se puede administrar al paciente en cualquier momento desde el diagnóstico en adelante; se puede administrar como el único tratamiento o junto con otros fármacos o terapias útiles en el tratamiento de las afecciones descritas anteriormente en el presente documento.

Normalmente, un tratamiento profiláctico comprende administrar la formulación de la invención de una vez al mes a una vez cada 2 a 3 meses, o con menor frecuencia.

La formulación de la invención que comprende ACZ885 se administra preferentemente por vía intravenosa, pero también mediante inyección subcutánea o intramuscular. Para tales fines, la formulación se puede inyectar utilizando una jeringa. Por ejemplo, la formulación que comprende ACZ885 se administra utilizando un autoinyector, una jeringa normal que puede estar precargada, opcionalmente en un envase estéril, y opcionalmente jeringas con dispositivos de seguridad. También se contemplan como dispositivos de administración adecuados los parches de microagujas y recubiertos con reservorios.

La formulación de la invención se puede administrar a un mamífero, preferentemente a un ser humano que necesite tratamiento con anticuerpo frente a IL-1 p, es decir, ACZ885, de acuerdo con métodos conocidos tales como la administración intravenosa en forma de bolo o por infusión continua durante un período de tiempo, por vía intramuscular, intraperitoneal, intracerobrospinal, subcutánea, intraarticular, intrasinovial, intratecal, oral, tópica o por inhalación.

Las formulaciones que se van a utilizar para la administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente mediante la filtración a través de membranas de filtración estériles, antes o después de la liofilización y reconstitución. Como alternativa, la esterilidad de toda la mezcla se puede lograr esterilizando en autoclave los ingredientes, a excepción del anticuerpo, a aproximadamente 120 °C durante aproximadamente 30 minutos, por ejemplo.

La formulación de la invención que comprende ACZ885 se administra preferentemente mediante inyección subcutánea en los tratamientos de la Artritis Reumatoide en adultos (AR), AR juvenil (AIJs, AIJP), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), SPAC, síndrome de Muckle-Wells (SMW), Artrosis (A) y potencialmente diabetes de tipo 2 y gota.

La presente invención proporciona además una formulación líquida isotónica, que se obtiene diluyendo la formulación reconstituida con una solución para infusión.

El término tratamiento se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a las medidas profilácticas o preventivas.

El término mamífero para fines de tratamiento se refiere a cualquier animal clasificado como mamífero, incluyendo seres humanos, animales domésticos y de granja, y animales de zoológico, deportivos o de compañía, tales como perros, caballos, gatos, vacas, etc. Preferentemente, el mamífero es un ser humano.

Un trastorno es cualquier afección que se beneficiaría del tratamiento con un anticuerpo frente a IL-1p. Esto incluye enfermedades o trastornos crónicos y agudos, incluyendo las afecciones patológicas que predisponen al mamífero al trastorno en cuestión. Los ejemplos no limitantes de trastornos que se tratarán en el presente documento incluyen las enfermedades y los trastornos mencionados anteriormente.

Una cantidad terapéuticamente eficaz es al menos la concentración mínima requerida para lograr una mejora o una prevención medible de un trastorno particular.

Leyenda de las figuras:

La Figura 1 muestra una descripción general de los resultados obtenidos mediante RP-HPLC (Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography, cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa) (parte superior) y SEC (Size-Exclusion Chromatography, cromatografía de exclusión por tamaño) (parte inferior) para la formulación de ACZ885 tras 4 semanas de almacenamiento a 40 °C.

La Figura 2 muestra una descripción general de los resultados obtenidos para la potencia relativa de la formulación de ACZ885 tras 4 semanas de almacenamiento a 40 °C.

EJEMPLOS

Preparación de una formulación líquida y su liofilizado

Se desarrolla una formulación de ACZ885 que permite tanto la administración intravenosa tras la reconstitución como la dilución posterior y la administración subcutánea tras la reconstitución.

Se seleccionaron cuatro sistemas tampón diferentes (sistemas tampón citrato, histidina, succinato de sodio y fosfato de sodio/potasio, concentración 40 mM cada uno) para probar su idoneidad para las formulaciones de ACZ885.

Se utilizan los ciclos de agitación y congelación/descongelación como ensayo en condiciones extremas para atribuir el orden de idoneidad de los sistemas tampón con respecto a la agregación proteínica.

La agregación proteínica podría evitarse de manera más eficaz utilizando tampón histidina o citrato en un intervalo de pH de 5,0-7, como se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1_____ Resultados analíticos del cribado del sistema tampón

Suma de

Sal tampón Valores de pKa pH (previsto) pH (medido) agregados según

la SEC r%l

^Histidina6,0 5,8 0,37

pKa = 6,1, grupo 6,5 6,2 0,21

imidazol 7,0 6,6 0,38

Succinato pKa1 = 4,19, pKa2 = 5,0 5,2 0,39

5,57 5,5 5,6 0,39

Suma de Sal tampón Valores de pKa pH (previsto) pH (medido) agregados según

la SEC [%]

6,0 6,0 0,42

Fosfato 6,0 6,2 0,47

pKa2 = 7,21 6,5 6,7 0,74

7,0 7,0 3,94

^{Citrato 5,0 5,3 0,38}

^{pKa2 = 4,76, pKa3 =}5,5 5,7 0,40_{6,40 6,0 6,2 0,39}

Se investigó un intervalo de pH de 3,5 a 8,0 con aumentos progresivos de 0,5 unidades. Tras 4 semanas de almacenamiento a 40 °C, se concluyeron diferentes pH óptimos de 6,2 a 6,8 basados en los resultados de las diferentes técnicas analíticas aplicadas, como se muestra en la Figura 1.

Tabla 2 Resultados analíticos de la liofilización

Códig Tampón (20 mM) Sacarosa Viscosidad Osmolaridad Suma de agregados o añadida [mPas] [mOsm] según la SEC [%]

F1 Histidina a pH 6,2 -- 14,8 382 5,4

F2 Histidina a pH 6,2 90 mM 11,0 392 0,6

F3 Citrato a pH 6,0 -- 13,2 386 3,9

F4 Citrato a pH 6,0 90 mM 11,0 445 0,6

Los resultados para las muestras con tampón histidina y citrato fueron similares. El tampón citrato puede ser negativo en las formulaciones subcutáneas debido a una mayor percepción del dolor tras su aplicación; por lo tanto, se puede preferir la histidina al citrato para las aplicaciones subcutáneas.

Tras la selección de los sistemas tampón adecuados, se investigó el impacto de los estabilizadores sobre la agregación proteínica. Se analizaron formulaciones que contenían sacarosa, glicina, manitol, sorbitol o trehalosa tras 6 y 16 semanas de almacenamiento a 5 °C y a 40 °C. Se observó una coloración amarilla para las formulaciones que contenían sacarosa almacenadas a 40 °C, probablemente debido a la reacción de Maillard entre los grupos amino de la proteína o histidina y el azúcar reductor. Se seleccionó una formulación que contenía sacarosa o manitol para la formulación liofilizada y reconstituida. Las formulaciones que contenían manitol se seleccionaron para la formulación líquida.

Se realizaron estudios adicionales para evaluar la influencia de la concentración de tensioactivo sobre la estabilidad físicoquímica de la formulación de la invención. Los siguientes datos de materia de partículas mostraron los valores más altos para la formulación sin tensioactivos, lo que indica que el Tween es beneficioso para la estabilidad física de las muestras. A una concentración de Tween al 0,10 %, los datos de materia de partículas tienden a ser superiores en comparación con los niveles inferiores.

Tabla 3 Resultados analíticos para el Tween: Partículas subvisibles mediante oscurecimiento de la luz (material de partículas) tras 10 meses__________________________________________________________________________

5 °C 25 °C

Concentración del Partículas/ Partículas/ Partículas/ Partículas/ Partículas/ Partículas/ Tween ml ml ml ml ml ml

>1,0 Mm >1,0 Mm >10,9 Mm >25,7 Mm >10,9 Mm >25,7 Mm

sin Tween 6353 11644 14 0 3 0

Tween 80 al 0,01 % 862 2044 0 0 2 0

Tween 80 al 0,04 % 1217 2077 2 0 0 0

Tween 80 al 0,10 % 2180 2424 0 0 3 0

Tween 20 al 0,01 % 1349 2105 0 0 0 0

Tween 20 al 0,04 % 1410 1077 1 0 2 0

5 °C 25 °C

>1,0 Mm >1,0 Mm >10,9 Mm >25,7 Mm >10,9 Mm >25,7 Mm Tween 20 al 0,10 % 1071 2382 2 0 2 0

Se almacenaron muestras de formulación líquida que contenían ACZ885 a 150 mg/ml, histidina 20 mM, manitol 270 mM, Tween 80 al 0,04 % (m/v), con un pH de 6,5 a 5 °C, 25 °C y 40 °C durante hasta 24 meses. A 5 °C, no se pudieron detectar cantidades importantes de agregados solubles ni insolubles. La actividad biológica, determinada utilizando el análisis de genes indicadores descrito más adelante, estuvo dentro del 70-125 %. Estos datos (véanse las Tablas 4 a 6) mostraron que la formulación analizada resultó ser estable tras el almacenamiento durante 24 meses.

Tabla 4 Datos analíticos del cribado, 5 °C

^{Períodos de}Inicio 2 meses 4 meses 10 meses 16,5 meses ^{24 meses} _{almacenamiento}

Análisis mediante

_{SEC [mg/ml]}152,2 155,0 151,9 153,0 153,0 151,9 Análisis de genes

_{indicadores [%]}121 n.d. 97 99 110 99 (n=4)

Pardusca

Ligeramente Ligeramente Ligeramente

5-B6) ^{Aspecto de la}pardusca pardusca pardusca (B Incolora Incolora

solución: color

(B8-B9) (B8-B9) (B8) Sin partículas visibles muy opalescente opalescente Turbidez n.d. n.d. n.d. n.d.

(23 UTN) (17 UTN) LLS [Da] 155'750 151 '800 147'400 142'300 147'800 155'700 Valor de pH 6,7 6,7 6,6 6,6 6,6 6,6 _{Subproductos y}AP1: 0,3 AP1: 0,4 AP1: 0,4 AP1: 0,6 AP1: 0,6 AP1: 0,8 ^{productos de}DPx: 1,2 DPx: sin resolver DPx: sin resolver DPx: 0,2_{degradación según}

la SEC [%] _{DP3: 0,2}Impurezas según la

0,8 0,8 0,8 0,8 0,9 1,1 _{SDS-PAGE [%]}

H1: 0,7 H1: 0,7

M1: 3,1 M1: 2,1

M2: 0,3 M2: 0,0

Impurezas según el

bioanalizador [%] n.d. n.d. n.d. n.d. M3: 0,7 M3: 0,6

L1: 0,0 L1: 0,0

L2: 0,3 L2: 0,3

suma: 5,2 suma: 3,8 0K: 48,7 0K: 43,4

1K: 19,6 1K: 19,1 CEX [%] n.d. n.d. n.d. n.d. _{2K: 15,8 2K: 10,5}

Suma de otras: Suma de 15,9 otras: 27,0 APx a DP3: de mayor a menor peso molecular; AP1: dímero, DPx: P100, DP3: P50

Tabla ¡Error! No hay texto de estilo especificado en el documento. Datos analíticos del cribado, 25 °C Períodos de

_{almacenamiento}Inicio 2 meses 4 meses 10 meses 16,5 meses 24 meses Análisis mediante

_{SEC [mg/ml]}152,2 146,7 145,8 149,8 141,8 134,2 Análisis de genes 121 _{indicadores [%]}n.d. 100 85 74 70 (n=4)

Pardusca (B5-B6) Ligeramente

Aspecto de la Incolora Incolora pardusca Ligeramente Ligeramente

_{solución: color}pardusca (B8-B9) pardusca (B6)

(B8-B9) Sin partículas visibles muy

_opalescentemuy opalescente Turbidez n.d. n.d. n.d. n.d.

_{(22 UTN)}(24 UTN) LLS [Da] 155'750 150'250 152'250 148'700 172'250 189'800 Valor de pH 6,7 6,7 6,6 6,6 6,6 6,6

-- - - - APx: 0,4

AP1: - - - AP2: 0,2 Subproductos y AP1: 0

,7 AP1: 0,9 AP1: 1,8 AP1: 2,6 AP1: 3,7 productos de

degradación 0,3

AP: 0,2 AP: 0,2 AP: 0,5 según la SEC [%]

- DPx: 1,4 DPx: 3,7 DPx: 1,7 DPx: 2,6

DP3: DP3: 0,2 DP3: 0,6 DP3: 1,1 DP3: 1,5

0

,1

Impurezas según

la SDS-PAGE [%] ^0,81,5 1,7 3,6 4,2 6,7

H1: 1,7 H1: 2,1

H2: 0,0 H2: 0,4

H3: 0,0 H3: 0,3

M1: 4,1 M1: 3,7

Impurezas según

el bioanalizador n.d. n.d. n.d. n.d. M2: 1,0 M2: 1,1 [%]

M3: 0,7 M3: 0,7

M4: 0,3 M4: 0,0

L1: 0,4 L1: 0,6

L2: 0,8 L2: 0,7 suma: 8,9 suma: 9,7

0K: 36,2 _{0K: 12,6}1K: 16,6 _{1K: 6,7}CEX [%] n.d. n.d. n.d. n.d.

2K: 11,0 _{2K: 3,3}Suma ^{de otras:}Suma de otras: 77,4 36,2

APx a DP3: de mayor a menor peso molecular; AP1: dímero, DPx: P100; DP3: P50

Tabla 1_____ Datos analíticos del cribado, 40 °C

Períodos de

_{almacenamiento}Inicio 2 meses 4 meses 10 meses 16,5 meses Análisis mediante

_{SEC [mg/ml]}152,2 142,9 128,1 114,1 94,5

Análisis de genes

_{indicadores [%]}121 78 53 n.d. n.d.

Ligeramente

Aspecto de la Ligeramente ^Parduscasolución: color ^Incolorapardusca (B7) pardusca (B6- Amarilla (G4-G5)

B7) _(B4)

fuera del intervalo Turbidez n.d. n.d. n.d. n.d.

(58 UTN)

LLS [Da] 155'750 162'950 192'500 259'650 403'350 Valor de pH 6,7 6,6 6,6 6,6 6,6

- APx: 0,4 APx: 1,9 APx: 4,4 APx: 6,1

- AP2: 0,1 AP2: 0,3 AP2: 1,4 AP2: 2,1 Subproductos y

_{productos de}AP1: 0,3 AP1: 2,8 AP1: 5,0 AP1: 10,2 AP1: 15,0 degradación

_{según la SEC [%]}- AP: 0,2 AP: 0,8 AP: 2,2 AP: 3,3

- - DPx: 5,5 DPx: 11,7 DPx: 12,2

- DP3: 0,9 DP3: 1,9 DP3: 4,4 DP3: 8,6 Impurezas según

_{la SDS-PAGE [%]}0,8 5,8 6,7 12,5 13,3

véase el CEX [%] n.d. n.d. n.d. n.d. cromatogra ma

APx a DP3: de mayor a menor peso molecular; AP1: dímero, DPx: P100, DP3: P50

Reconstitución de la formulación liofilizada

Las formulaciones líquidas para ACZ885 de acuerdo con la invención son adecuadas para la liofilización. La liofilización se puede realizar en condiciones normales bien conocidas en la técnica farmacéutica. Puede incluirse un agente de carga para añadir peso y visibilidad al liofilizado, tal como glicina.

Tras mezclar el anticuerpo, el agente tampón (en una cantidad de 10 a 40 mM), el estabilizador y el tensioactivo, se liofiliza la formulación.

Tabla 7_____ Formulaciones para la estabilidad técnica (antes de la liofilización)

Códig Sacarosa [mM] Histidina a pH 6,0-6,2 [mM] Tween 80 [%]

o

F1 60 10 0,02

F3 90 10 0,02

La reconstitución generalmente tiene lugar a una temperatura de 15-25 °C para garantizar una hidratación completa. El liofilizado se reconstituye con agua estéril.

La concentración diana tras la reconstitución es de 150 mg/ml, liofilizando y reconstituyendo cada formulación con agua.

Estabilidad

Las diferentes formulaciones se almacenan durante tres meses a 2-8 °C, 25 °C y 40 °C.

La agregación producida tras la liofilización y el almacenamiento se utiliza como indicador de la estabilidad proteínica.

Análisis de genes indicadores

La actividad biológica de ACZ885 se midió en un análisis de genes indicadores, utilizando la estirpe celular modificada genéticamente. Esta estirpe celular se obtuvo de la célula de riñón embrionario humano y se transfectó de manera estable con una construcción indicadora en la que se fusionó el promotor NF-Kb (un promotor que responde a IL-1 p) cadena arriba del gen de luciferasa. La transfección se realizó mediante la introducción simultánea de un gen de resistencia a la neomicina. En esta estirpe celular, la exposición a IL-1p estimuló la expresión de luciferasa de una manera dependiente de la dosis. La adición de cantidades graduadas de ACZ885 a una dosis submáxima fija de IL-1 p provocó una disminución en la expresión de luciferasa durante un período de incubación de hasta 18 horas. Al final del período de incubación, se cuantificó la cantidad de luciferasa basándose en su actividad enzimática en el lisado celular. La luciferasa catalizó la conversión del sustrato luciferina en oxiluciferina, un producto quimioluminiscente. A continuación, se determinó la quimioluminiscencia de tipo resplandor resultante con un luminómetro apropiado.

La potencia biológica de una muestra de prueba de ACZ885 se determinó comparando su capacidad para inhibir la inducción de la actividad luciferasa dependiente de IL-1p con la de un patrón de referencia de ACZ885. Las muestras y el patrón se normalizaron basándose en el contenido de proteínas. A continuación, se calculó la potencia relativa utilizando un análisis de estirpes en paralelo de acuerdo con la Farmacopea europea. El resultado final se expresó como la potencia relativa (en porcentaje) de una muestra en comparación con el patrón de referencia.

Reactivos y tampones:

- medio básico para cultivo celular MEM sales de Earle L-Glutamina;

- Suero Bovino Fetal (SBF) inactivado por calor, cribado de micoplasmas;

- geneticina;

- tampón de disociación celular sin enzimas, a base de PBS (Phosphate-Buffered Saline, solución salina tamponada con fosfato);

- medio básico para análisis OptiMEM-I GlutaMAX-I;

- sustrato de luciferasa para quimioluminiscencia de tipo resplandor;

- interleucina 1p (IL-1 p) recombinante.

Etapas del procedimiento de análisis:

(1) se prepararon diferentes concentraciones del patrón de referencia y muestras de prueba realizando varias diluciones 1:2 a partir de una solución de partida de ACZ885 a 400 ng/ml;

(2) se añadieron 2 x 104 células resuspendidas en medio de análisis a cada pocillo de una placa de microvaloración de 96 pocillos;

(3) el análisis se inició mediante la adición de una solución de IL-1 p. La incubación en una incubadora de CO2 humidificada fue de hasta 18 h;

(4) después de la incubación, se añadió solución de sustrato de luciferasa a todos los pocillos. La placa se incubó adicionalmente a oscuras durante 10 minutos y se determinó la luminiscencia de cada pocillo mediante un lector de luminiscencia de placas de microvaloración apropiado;

(6) se calculó la potencia relativa media no ponderada de una muestra utilizando la evaluación de estirpes en paralelo según la Farmacopea europea de al menos dos experimentos independientes.

Tabla 8 Resultados analíticos de la estabilidad técnica:

Código Duración Opalesce pH Análisis Iso-Quant Peso Suma de Análisis Bioanál de la ncia mediante molecular agregados mediante isis [%] reconstitu UV iso-Asp/ según la según la SEC

ción [mg/ml] LLS [kDa] SEC [%] [mg/ml]

proteína

J ^%]_______

F1 5°C (I) 4 min 45 s ninguna 6,2 171,8 3,8 149,2 1,0 164,8 103

5°C (II) 4 min 30 s ninguna 6,2 172,5 3,9 149,4 1,0 167,7

25°C 4 min 45 s ninguna 6,2 171,9 5,6 152,7 2,7 163,6 99

(I)

25°C 4 min 45 s ninguna 6,2 168,4 6,3 153,3 2,7 160,0

(II)

40°C 4 min 30 s ninguna 6,2 172,5 9,5 161,6 7,6 152,7 93

(I)

40°C >12 min ninguna 6,2 166,2 10,3 162,9 7,9 153,0

(II) *

F3 5°C (I) 4 min 00 s ninguna 6,2 167,4 3,4 149,6 0,8 163,1 101

5°C (II) 4 min 00 s ninguna 6,2 162,8 3,1 149,1 0,8 163,0

25°C 4 min 30 s ninguna 6,2 159,4 4,9 151,4 1,7 158,2 91

(I)

25°C 4 min 30 s ninguna 6,2 155,1 4,7 152,3 1,6 161,7

(II)

40°C 4 min 45 s ninguna 6,2 164,4 6,6 156,6 4,5 154,9 95

(I) *

40°C 5 min 45 s ninguna 6,2 166,01 6,1 155,7 4,5 156,8

J U T _____________

*fragmentos de torta pegados al fondo.

La formulación 3 mostró la menor cantidad de agregación. Las formulaciones 1 y 3 mostraron una actividad biológica tras el almacenamiento de aproximadamente el 90-105 % de la actividad original.

Administración de la formulación

La dosis adecuada (es decir, la cantidad terapéuticamente eficaz) de ACZ885 depende, por ejemplo, de la afección que se vaya a tratar, de la gravedad y del curso de la afección, de si el ACZ885 se administra con fines preventivos o terapéuticos, de la terapia previa, de la historia clínica y de la reacción del paciente hacia el ACZ885, así como del criterio del médico tratante.

SEQ ID NO: 1 de la región variable de la cadena pesada de ACZ885

^{-19 M E F G A s EV 1/ ÍG Tj y A} L L ^{R G V} ^{í? c Q 1}V 0 L V E b G G G V V Q P G R S L R L s 21 c A. A S G F T F q \J Y G M N W V R Q Ji p 41 G K G L E W V A I I W Y D G D N Q Y' 'í A 61 D S V K G R F T x q R D N S K N T L Y L 81 Q M N G L R A E D T A _v Y Y C A R D L R 101 T G P F D Y W G Q G T L V T V S ^{s l i e}SEQ ID NO: 2 de la región variable de la cadena ligera de ACZ885

I V L T Q S P D F Q S V T P ^{K E K V T}x ²¹T c R a s Q S x G s S L H W Y Q Q K P D 41 Q s P K L L I K Y A s ¡"Y S £ S G V p q R 61 F b G S G S G T D F T L T i N S L E A E 81 D A A Ax Y Y C H Q ^q S S L p F T F G p G 101 T K V D I K 10

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación farmacéutica líquida que comprende de 50 a 150 mg/ml de anticuerpo ACZ885, un sistema tampón y un estabilizador, en donde el sistema tampón es histidina, en donde la formulación tiene un pH de 6,2 a 6,8, en donde el estabilizador es manitol, sorbitol o trehalosa, y en donde la formulación mantiene entre el 80 % y el 125 % de la actividad biológica original del anticuerpo durante 24-36 meses a 2-8 °C.

2. La formulación de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el sistema tampón se utiliza a una concentración de 10 a 50 mM.

3. La formulación de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde dicho estabilizador es manitol.

4. La formulación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el estabilizador se utiliza a una concentración de 50 mM a 300 mM.

5. La formulación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende además un tensioactivo.

6. La formulación de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20 y polisorbato 80.

7. La formulación de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en donde el tensioactivo se utiliza a una concentración del 0,01 0,1 % en peso por volumen.

8. Una forma farmacéutica que comprende la formulación de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

9. Una jeringa que comprende la formulación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

10. Un autoinyector que comprende la formulación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.