ES2899922T3 - Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales - Google Patents

Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales Download PDF

Info

Publication number
ES2899922T3
ES2899922T3 ES18723982T ES18723982T ES2899922T3 ES 2899922 T3 ES2899922 T3 ES 2899922T3 ES 18723982 T ES18723982 T ES 18723982T ES 18723982 T ES18723982 T ES 18723982T ES 2899922 T3 ES2899922 T3 ES 2899922T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
mmol
alkyl
oxo
reaction
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18723982T
Other languages
English (en)
Inventor
Jiping Fu
Wooseok Han
Subramanian Karur
Peichao Lu
Keith Bruce Pfister
Joseph Michael Young
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2899922T3 publication Critical patent/ES2899922T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed systems contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/16—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I): **(Ver fórmula)** en donde: R1 es H o halo, preferentemente R1 es H o F; R2 se selecciona independientemente en cada aparición de halo, CN, haloalquilo C1-C3, haloalcoxi C1-C3, -OR3, -N(R)R3 y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con hasta a tres grupos seleccionados de R3, -N(R)R3, CN, -OH, -CONR2, -COOR y -OR3; R3 es un alquilo C1-C4 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, haloalquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1- C3)2, -COOR, -CONR2, cicloalquilo C3-C5 y un éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el cicloalquilo C3-C5 y el éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados de halo, -OH, alcoxi C1-C3 y alquilo C1-C3; o R3 es un anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, alquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, -NH2, - NH(alquilo C1-C3), y -N(alquilo C1-C3)2; n es 0, 1 o 2, preferentemente n es 1; W es -COOR4, -C(O)NH-SO2R5, -C(O)NH-SO2NR2, 5-tetrazolilo o 1,2,4-oxadiazol-3-il-5(4H)-ona; R4 es H o alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN y -NR2, preferentemente, R4 es H; R5 es alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, - OR, oxo, CN, y -NR2; R6 es H o alquilo C1-C6; R7 es H o alquilo C1-C6, o R7 tomado junto con R9 y los átomos que conectan R7 con R9 forman un anillo como se describe más abajo; R8 es H o alquilo C1-C6; R9 se selecciona de: H; alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; y un anillo seleccionado de (a) cicloalquilo C3-C6, (b) fenilo, (c) heterociclilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, y (d) heteroarilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, en donde cada uno de los anillos (a) a (d) está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de alquilo C1-C2, (CH2)0-2-OR, -NR2, halo, CN, COOR y CONR2; o R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 3-7 miembros, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el cicloalquilo o el anillo heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados entre R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; R se selecciona independientemente en cada aparición de H y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OH, C1-C3 alcoxi, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), - N(alquilo C1-C3)2 y ciclopropilo; y dos grupos R unidos directamente al mismo átomo pueden opcionalmente tomarse junto con el átomo al que ambos están unidos para formar un anillo de 3-6 miembros que puede contener opcionalmente un heteroátomo seleccionado de N, O y S como miembro del anillo, y puede estar sustituido con hasta dos grupos seleccionados de -OH, oxo, alquilo C1-C3 y alcoxi C1-C3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad al documento núm. de serie de EE. UU. 62/490890, presentado el 27 de abril de 2017.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos tetracíclicos de piridona fusionados que son inhibidores de la replicación del virus de la hepatitis y, por tanto, son útiles para tratar infecciones virales, y particularmente el virus de la hepatitis B (HBV). La invención proporciona nuevos compuestos tetracíclicos de piridona como se describe en la presente descripción, composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos y métodos para usar estos compuestos y composiciones en el tratamiento y prevención de infecciones por HBV.
Antecedentes
A nivel mundial, más de 400 millones de personas están infectadas crónicamente con el virus de la hepatitis B (HBV) y más de 12 millones residen solo en los Estados Unidos. De esos pacientes con infección crónica, hasta el 40 por ciento eventualmente desarrollará complicaciones de insuficiencia hepática por cirrosis o desarrollo de carcinoma hepatocelular (HCC). El HBV pertenece a la familia de los Hepadnaviridae, un grupo de pequeños virus de ADN hepatotrópicos que se replican mediante la transcripción inversa de un intermedio de ARN. El genoma de1HBV de 3,2 kb en las partículas virales tiene una conformación circular de ADN parcialmente bicatenario (ADN circular relajado o ADNrc). El genoma del HBV consta de cuatro marcos de lectura abiertos (ORF) superpuestos, que codifican las proteínas del núcleo, la polimerasa (Pol), la envoltura y X. El ADNrc es transcripcionalmente inerte y debe convertirse en ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc) en el núcleo de las células infectadas antes de que puedan transcribirse los RNA virales. ADNccc es el único molde para la transcripción de1HBV y, debido a que los moldes de ARN del HBV son transcripción genómica reversa, su persistencia es necesaria para la infección persistente.
La envoltura del HBV comprende una mezcla de proteínas de antígeno de superficie (HBsAg). La cubierta de HBsAg es una mezcla de tres proteínas superpuestas: las tres comparten una región común, que corresponde a la más pequeña de las tres proteínas (SHBsAg). La mezcla consiste principalmente en SHBsAg, pero también incluye HBsAg Medio, que comprende SHBsAg más un segmento polipeptídico adicional, y HBsAg Grande, que comprende HBsAg M más otro segmento polipeptídico agregado. Además de formar la partícula del virión infeccioso, las proteínas S, M y L HBsAg también se ensamblan en una partícula subviral conocida como partícula de 22 nm, que no es infecciosa pero contiene las mismas proteínas que envuelven las partículas del virus infeccioso. De hecho, estas partículas subvirales no infecciosas se han usado como vacuna, ya que contienen las mismas proteínas de superficie antigénicas que el virión infeccioso del HBV y, por lo tanto, provocan anticuerpos que reconocen al agente infeccioso. Curiosamente, estas partículas subvirales superan en gran medida a los viriones infecciosos y se cree que protegen a los viriones infecciosos del sistema inmunológico del huésped infectado. Por su gran número, pueden actuar como señuelos, al distraer la respuesta inmunitaria a partir de las partículas infecciosas de virus, pero además se informa que suprimen la función de las células inmunitarias (monocitos, células dendríticas y células asesinas naturales) y, por lo tanto, pueden afectar la respuesta inmunitaria a1HBV. Debido a que estas partículas subvirales protegen al HBV infeccioso del sistema inmunitario del huésped, se ha reconocido que la reducción del nivel de partículas subvirales es un enfoque terapéutico viable. Ver, por ejemplo, WO2015/113990.
Uno de los síntomas diagnósticos clave del HBV crónico son los altos niveles séricos del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). Los datos clínicos de los últimos años sugieren que la respuesta virológica sostenida a menudo se asocia con una disminución del HBsAg durante el tratamiento durante la fase temprana del tratamiento ya en la semana 8, mientras que la exposición sostenida al HBsAg y otros antígenos virales puede conducir a una inmunotolerancia específica al HBV. Los pacientes con HB crónica que experimentaron disminuciones mayores y más rápidas en los niveles séricos de HBsAg lograron una tasa significativamente más alta (-40 %) de respuesta virológica sostenida según lo definido por el control viral sostenido después del tratamiento.
Las opciones de tratamiento actuales para el HBV incluyen terapias con interferón e inhibidores de nucleósidos/nucleótidos de la ADN polimerasa viral, tales como entecavir y tenofovir. Estos se centran en la reducción del nivel de viremia y la tolerancia de la disfunción hepática, y pueden tener efectos secundarios adversos y también seleccionar variantes de virus resistentes a los fármacos durante la terapia a largo plazo. Más importante aún, estas terapias no pueden erradicar el ADNccc del HBV intrahepático en pacientes con hepatitis B crónica o limitar la transcripción de HBsAg a partir del ADNccc preexistente, ni afectan la secreción de HBsAg sintetizado hacia la sangre de los pacientes para contrarrestar la respuesta inmunitaria innata del huésped. Como resultado, estos tratamientos contra el HBV son en la mayoría de los casos terapias de por vida y la interrupción a menudo conduce a una recaída virológica.
Por consiguiente, sigue existiendo la necesidad de tratamientos más eficaces para e1HBV, especialmente para tratar las infecciones crónicas por HBV (cHBV). La invención proporciona compuestos que se cree que funcionan al suprimir la secreción de partículas subvirales de 22 nm que contienen HBsAg. Estos compuestos son útiles para
tratar infecciones por HBV y para reducir la incidencia de trastornos hepáticos graves causados por infecciones por
HBV.
Resumen
La presente invención proporciona nuevos compuestos que inhiben la secreción de HBsAg de células infectadas con
el virus de la hepatitis B y, por tanto, reducen la carga viral y la replicación viral en pacientes que tienen una infección crónica por HBV. Por tanto, los compuestos de la invención son adecuados para el tratamiento de pacientes con HBV, incluido HBV crónico.
En un aspecto, la invención proporciona compuestos de Fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
en donde:
R1 es H o halo;
R2 se selecciona independientemente en cada aparición de halo, CN, haloalquilo C1-C3, haloalcoxi C1-C3,
-OR3, -N(R)R3 y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con hasta a tres grupos seleccionados de R3, -N(R)R3,
CN, -OH, -CONR2, -COOR y -OR3;
R3 es un alquilo C1-C4 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, haloalquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2, -COOR, -CONR2, cicloalquilo C3-C5 y un éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el cicloalquilo C3-C5 y el éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados de
halo, -OH, alcoxi C1-C3 y alquilo C1-C3;
o R3 es un anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de
halo, alquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), N(alquilo C1-C3)2;
n es 0, 1 o 2;
W es -COOR4, -C(O)NH-SO2R5, -C(O)NH-SO2NR2, 5-tetrazolilo o 1,2,4-oxadiazol-3-il-5(4H)-ona;
R4 es H o alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN y -NR2;
R5 es alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo,
CN, y -NR2;
R6 es H o alquilo C1-C6;
R7 es H o alquilo C1-C6,
o R7 tomado junto con R9 y los átomos que conectan R7 con R9 forman un anillo como se describe más abajo;
R8 es H o alquilo C1-C6;
R9 se selecciona de:
H;
alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; y
un anillo seleccionado de (a) cicloalquilo C3-C6, (b) fenilo, (c) heterociclilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, y (d) heteroarilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, en donde cada uno de los anillos (a) a (d) está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de alquilo C1-C2, (CH2)0-2-OR, -NR2, halo, CN, COOR y CONR2;
o R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 3-7 miembros, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el cicloalquilo o el anillo heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados entre R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo;
R se selecciona independientemente en cada aparición de H y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, - O h , C1-C3 alcoxi, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2 y ciclopropilo;
y dos grupos R unidos directamente al mismo átomo pueden opcionalmente tomarse junto con el átomo al que ambos están unidos para formar un anillo de 3-6 miembros que puede contener opcionalmente un heteroátomo seleccionado de N, O y S como miembro del anillo, y puede estar sustituido con hasta dos grupos seleccionados de -OH, oxo, alquilo C1-C3 y alcoxi C1-C3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, métodos para usar estos compuestos y composiciones para tratar infecciones virales, combinaciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y métodos para usar los compuestos en la fabricación de un medicamento.
Descripción detallada
Para los propósitos de interpretar esta especificación, se aplicarán las siguientes definiciones, y cuando sea apropiado, los términos usados en singular también incluirán el plural.
Los términos usados en la especificación tienen los siguientes significados a menos que el contexto lo indique claramente de otra manera:
Como se usa en la presente descripción, el término "sujeto" se refiere a un animal. En ciertos aspectos, el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, seres humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, pájaros y similares. En determinadas modalidades, el sujeto es un ser humano. Un "paciente", como se usa en la presente descripción, se refiere a un sujeto humano. Como se usa en la presente descripción, los términos "inhibición" o "inhibir" se refieren a la reducción o supresión de una condición, síntoma o trastorno o enfermedad dados, o una disminución significativa en la actividad inicial de una actividad o proceso biológico.
Como se usa en la presente descripción, el término "tratar" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno se refiere en una modalidad, a mejorar la enfermedad o trastorno (es decir, ralentizar o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o al menos uno de los síntomas clínicos de la misma). En otra modalidad, "tratar" o "tratamiento" se refieren a aliviar o mejorar al menos un parámetro físico que incluye aquellos que pueden no ser discernibles por el paciente. En otra modalidad más, "tratar" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente (por ejemplo, estabilización de un parámetro físico) o ambos. En otra modalidad más, "tratar" o "tratamiento" se refieren a prevenir o retrasar el inicio o desarrollo o progresión de la enfermedad o trastorno.
Como se usa en la presente descripción, el término "un", "una", "el" y términos similares usados en el contexto de la presente invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) deben interpretarse como que cubren tanto el singular como el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente descripción o que se contradiga claramente por el contexto.
Todos los métodos descritos en la presente descripción pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otra manera en la presente descripción o que el contexto lo contradiga claramente de otra manera. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o lenguaje ilustrativo (por ejemplo, "tal como") proporcionado en la presente descripción está destinado simplemente a iluminar mejor la invención y no supone una limitación en el alcance de la invención reivindicada de otra manera.
"Opcionalmente sustituido" significa que el grupo al que se hace referencia puede estar sustituido en una o más posiciones con uno cualquiera o cualquier combinación de los radicales enumerados a continuación. Se entiende que el número, la colocación y la selección de sustituyentes abarcan sólo aquellas sustituciones que un químico experto esperaría que fueran razonablemente estables; por tanto, "oxo" no sería un sustituyente en un anillo arilo o heteroarilo, por ejemplo, y un solo átomo de carbono no tendría tres sustituyentes hidroxi o amino. A menos que se especifique de otra manera, los sustituyentes opcionales son típicamente hasta cuatro grupos seleccionados de halo, oxo, CN, amino, hidroxi, -alquilo C1-3, -OR*, -NR*2, -SR*, -SO2R*, -COOR* y -CONR*2, donde cada R* es independientemente H o alquilo C1-3.
"Arilo", como se usa en la presente descripción, se refiere a un grupo fenilo o naftilo a menos que se especifique de otra manera. Los grupos arilo, a menos que se especifique de otra manera, pueden estar opcionalmente sustituidos con hasta cuatro grupos seleccionados de halo, CN, amino, hidroxi, alquilo C1-3, -OR*, -NR*2,-SR*, -SO2R*, -COOR* y -CONR*2, donde cada R* es independientemente H o alquilo C1-3.
"Halo" o "halógeno", como se usa en la presente descripción, puede ser flúor, cloro, bromo o yodo.
"Alquilo C1-6" o "alquilo C1-C6”, como se usa en la presente descripción, denota cadena lineal o ramificada de alquilo que tiene 1-6 átomos de carbono. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C4 o C3, entonces la definición debe modificarse en consecuencia, como "alquilo C1-4" representará metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo.
"Alquileno C1-6" o "alquileno C1-C6", como se usa en la presente descripción, se refiere a cadena lineal o ramificada de alquilo que tiene 1-6 átomos de carbono y dos valencias abiertas para la conexión a otros dos grupos. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C4 o C3, la definición se modificará en consecuencia, como "alquileno C1-4" representará metileno (-CH2-), etileno (CH2CH2), propileno de cadena lineal o ramificada (-CH2CH2CH2- o -CH2-CHMe-CH2-) y similares.
"Alcoxi C1-6", como se usa en la presente descripción, indica alcoxi (-O-alquilo) de cadena lineal o ramificada que tiene 1-6 átomos de carbono. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C4 o C3, entonces la definición debe modificarse en consecuencia, tal como "alcoxi C1-4" representará metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi y terc-butoxi.
"Haloalquilo C1-4” o "haloalquilo C1-C4", como se usa en la presente descripción, denota cadena lineal o ramificada de alquilo que tiene 1-4 átomos de carbono en donde al menos un hidrógeno se ha sustituido con un halógeno. El número de reemplazos de halógeno puede ser desde uno hasta el número de átomos de hidrógeno en el grupo alquilo no sustituido. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C6 o C3, entonces la definición debe modificarse en consecuencia. Así, "haloalquilo C1-4" representará metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo que tienen al menos un hidrógeno sustituido con halógeno, tal como donde el halógeno es flúor: CF3CF2-, (CF3)2CH-, CH3-CF2-, CF3CF2-, CF3, CF2H-, CF3CF2CH(CF3)- o CF3CF2CF2CF2-.
"Cicloalquilo C3-8", como se usa en la presente descripción, se refiere a un anillo de hidrocarburo monocíclico saturado de 3 a 8 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Si se especifica un número diferente de átomos de carbono, como C3-C6, entonces la definición se modificará en consecuencia.
"Heterociclilo de 4- a 8- miembros", "heterociclilo de 5- a 6- miembros", "heterociclilo de 3- a 10- miembros", "heterociclilo de 3- a 14- miembros", "heterociclilo de 4- a 14- miembros" y "Heterociclilo de 5 a 14 miembros" se refiere, respectivamente, a anillos heterocíclicos de 4- a 8- miembros, de 5- a 6- miembros, de 3- a 10- miembros, de 3- a 14- miembros, de 4- a 14- miembros y de 5- a 14- miembros; a menos que se especifique de otra manera, tales anillos contienen de 1 a 7, de 1 a 5 o de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre como miembros del anillo, y los anillos pueden estar saturados o parcialmente saturados pero no aromáticos. El grupo heterocíclico puede estar unido a otro grupo en un átomo de nitrógeno o de carbono. El término "heterociclilo" incluye grupos de un solo anillo, grupos de anillos fusionados y grupos con puentes. Entre los ejemplos de heterociclilo se incluyen, entre otros, pirrolidina, piperidina, piperazina, pirrolidinona, morfolina, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, tetrahidrotiopirano, tetrahidropirano, 1,4-dioxano, 1,4-oxatiano, 8-azabiciclo[3.2.1]octano, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano, 3-Oxa-8-aza-biciclo[3.2.1] octano, 8-Oxa-3-aza-biciclo[3.2.1]octano, 2-Oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]heptano, 2,5-Diaza-biciclo[2.2.1]heptano, azetidina, etilendioxo, oxetano o tiazol. En ciertas modalidades, si no se especifica de otra manera, los grupos heterocíclicos tienen 1-2 heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, y 4-7 átomos del anillo, y están opcionalmente sustituidos con hasta cuatro grupos seleccionados de halo, oxo, CN, amino, hidroxi, alquilo C1-3, -OR*, -NR*2, -SR*, -SO2R*, - COOR* y - C O n R * 2, donde cada R* es independientemente H o alquilo C1-3. En particular, los grupos heterocíclicos que contienen un átomo de azufre están opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos oxo en el azufre.
"Éter cíclico de 4-6 miembros", como se usa en la presente descripción, se refiere a un anillo de 4 a 6 miembros que comprende un átomo de oxígeno como miembro del anillo. Los ejemplos incluyen oxetano, tetrahidrofurano y tetrahidropirano.
"Heteroarilo" es un anillo completamente insaturado (aromático). El término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillo aromático monocíclico o bicíclico o tricíclico de 5-14 miembros, que tiene de 1 a 8 heteroátomos seleccionados de N, O o S. Típicamente, el heteroarilo es un anillo o sistema de anillos de 5-10 miembros (por ejemplo, un grupo monocíclico de 5-7 miembros o un grupo bicíclico de 8-10 miembros), a menudo un anillo de 5-6 miembros que contiene hasta cuatro heteroátomos seleccionados de N, O y S, aunque a menudo un anillo heteroarilo no contiene más de un O o S divalente en el anillo. Los grupos heteroarilo típicos incluyen furano, isotiazol, tiadiazol, oxadiazol, indazol, indol, quinolina, 2- o 3 - tienilo, 2- o 3 - furilo, 2- o 3-pirrolilo, 2-, 4- o 5-imidazolilo, 3-, 4- o 5-pirazolilo, 2-, 4-o 5-tiazolilo, 3-, 4- o 5-isotiazolilo, 2-, 4- o 5-oxazolilo, 3-, 4-, o 5-isoxazolilo, 3- o 5-(1,2,4-triazolilo), 4- o 5-(1,2,3-triazolilo), tetrazolilo, triazina, pirimidina, 2-, 3- o 4-piridilo, 3- o 4-piridazinilo, 3-, 4- o 5-pirazinilo, 2-pirazinilo y 2-, 4- o 5-pirimidinilo. Los grupos heteroarilo están opcionalmente sustituidos con hasta cuatro grupos seleccionados de halo, CN, amino, hidroxi, alquilo C1-3, -OR*, -NR*2, -SR*, -SO2R*, -COOR* y -CONR*2, donde cada R* es independientemente H o alquilo C1-3.
El término "hidroxi" o "hidroxilo" se refiere al grupo -OH.
En la presente descripción se describen varias modalidades de la invención. Se reconocerá que las características especificadas en cada modalidad pueden combinarse con otras características especificadas para proporcionar modalidades adicionales.
Las siguientes modalidades enumeradas son representativas de la invención:
Un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000006_0001
en donde:
R1 es H o halo;
R2 se selecciona independientemente en cada aparición de halo, CN, haloalquilo C1-C3, haloalcoxi C1-C3, -OR3, -N(R)R3 y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con hasta a tres grupos seleccionados de R3, -N(R)R3, CN, -OH, -CONR2, -COOR y -OR3;
R3 es un alquilo C1-C4 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, haloalquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2, -COOR, -CONR2, cicloalquilo C3-C5 y un éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el cicloalquilo C3-C5 y el éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados de halo, -OH, alcoxi C1-C3 y alquilo C1-C3;
o R3 es un anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, alquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, -NH2, -NH(alquilo N(alquilo C1-C3)2;
n es 0, 1 o 2;
W es -COOR4, -C(O)NH-SO2R5, -C(O)NH-SO2NR2, 5-tetrazolilo o 1,2,4-oxadiazol-3-il-5(4H)-ona;
R4 es H o alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN y -NR2;
R5 es alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN, y -NR2;
R6 es H o alquilo C1-C6;
R7 es H o alquilo C1-C6, o R7 tomado junto con R9 y los átomos que conectan R7 con R9 forman un anillo como se describe más abajo;
R8 es H o alquilo C1-C6;
R9 se selecciona de:
H;
alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; y
un anillo seleccionado de (a) cicloalquilo C3-C6, (b) fenilo, (c) heterociclilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, y (d) heteroarilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, en donde cada uno de los anillos (a) a (d) está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de alquilo C1-C2, (CH2)o-2-OR, -NR2, halo, CN, COOR y CONR2; o R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 3-7 miembros, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el cicloalquilo o el anillo heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados entre R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2y oxo;
R se selecciona independientemente en cada aparición de H y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados entre halo, -OH, alcoxi C1-C3, oxo, CN, - N h 2 , -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2, y ciclopropilo;
y dos grupos R unidos directamente al mismo átomo pueden opcionalmente tomarse junto con el átomo al que ambos están unidos para formar un anillo de 3-6 miembros que puede contener opcionalmente un heteroátomo seleccionado de N, O y S como miembro del anillo, y puede estar sustituido con hasta dos grupos seleccionados de -OH, oxo, alquilo C1-C3 y alcoxi C1-C3;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Cuando R3 es un éter cíclico en esta modalidad, se selecciona típicamente entre oxetanilo, tetrahidrofuranilo, y tetrahidropiranilo.
2. El compuesto de la modalidad 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es H o F.
3. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las modalidades anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R2 es -OR3.
4. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde W es - COOR4; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En compuestos preferidos de esta modalidad, W es -COOH. 5. El compuesto de cualquiera de las modalidades 1-4, en donde R6 es H y R8 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. El compuesto de cualquiera de las modalidades 1-5, en donde R9 es alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido con hasta dos grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; o R9 es ciclopropilo, ciclobutilo u oxetanilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de metilo, halo y (CH2V 2-OR; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. El compuesto de cualquiera de las modalidades 1-5, en donde R9 se toma junto con R7 y los átomos que conectan R9 a R7 para formar un anillo cicloalquilo de 5-6 miembros o un anillo heterocíclico de 5-6 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el cicloalquilo o anillo heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta dos grupos seleccionados de R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. El compuesto de cualquiera de las modalidades 1-7, en donde n es 1; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. El compuesto de cualquiera de las modalidades 7-8, que es de la fórmula:
Figure imgf000007_0001
en donde:
R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 5 o 6 miembros o un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros que contiene O como miembro del anillo; en donde el anillo cicloalquilo o heterocíclico está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados entre R, -OR, -NR2, halo y CN; y
R4 es H o alquilo C1-C4; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. El compuesto de cualquiera de las modalidades 1-6, que tiene la fórmula:
Figure imgf000007_0002
en donde R4 es H o alquilo C1-C4; y
R9 es alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido con hidroxi o metoxi, o R9 es cicloalquilo C3-C4 opcionalmente sustituido con metilo o (CH2K 2-OR; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 10, que es de la fórmula:
Figure imgf000007_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 8, en donde el compuesto es de la fórmula:
Figure imgf000008_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 8, que es de la fórmula:
Figure imgf000008_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. tn los compuestos de esta modalidad, R es preferentemente metilo, o dos grupos R en el mismo carbono, que tomados juntos forman un anillo seleccionado de ciclopropilo, ciclobutilo y oxetanilo.
14. t l compuesto de una cualquiera de las modalidades 1-13, en donde R1 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
15. t l compuesto de una cualquiera de las modalidades 1-13, en donde R1 es F; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
16. t l compuesto de una cualquiera de las modalidades 1-15, en donde R4 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
17. t l compuesto de la modalidad 1, que se selecciona de:
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
y los enantiómeros individuales de cualquiera de estos; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En particular, cada uno de los compuestos de los Ejemplos, incluido cada compuesto enumerado en la Tabla I, es una modalidad específica de los compuestos de la invención.
18. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de cualquiera de las modalidades anteriores mezclado con al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
19. Un método para tratar a un sujeto que tiene una infección por hepatitis B, que comprende administrar al sujeto un compuesto de cualquiera de las modalidades 1-17 o una composición farmacéutica de la reivindicación 17.
20. El método de la modalidad 19, en donde el compuesto de una cualquiera de las modalidades 1-17 o la composición farmacéutica de la modalidad 18 se usa en combinación con un agente terapéutico adicional seleccionado de un interferón o peginterferón, un inhibidor de la polimerasa de1HBV, un inhibidor de la entrada viral, un inhibidor de la maduración viral, un inhibidor del ensamblaje de la cápside, un modulador del núcleo del HBV, un inhibidor de la transcriptasa inversa, un agonista de TLR o un inmunomodulador.
21. Un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B, que comprende poner en contacto el virus de la hepatitis B, ya sea in vitro o in vivo, con un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las modalidades 1-17.
22. Una combinación farmacéutica, que comprende un compuesto de cualquiera de las modalidades 1-17 y al menos un agente terapéutico adicional.
23. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-17 para uso en terapia.
24. El compuesto de acuerdo con la modalidad 23, en donde la terapia es el tratamiento de una infección viral.
25. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-17 en la fabricación de un medicamento.
Otra modalidad de la invención proporciona un compuesto como se describió anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento. En un aspecto, el medicamento es para el tratamiento de un sujeto que tiene una infección por HBV. En una modalidad particular, el sujeto es un ser humano diagnosticado con HBV crónico.
También dentro del alcance de esta invención está el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento; en algunas modalidades, este medicamento es para el tratamiento o prevención de una enfermedad viral y/o infección en un ser humano, particularmente cuando el virus involucrado es el HBV.
Dentro del alcance de esta invención se incluye una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Opcionalmente, la composición comprende al menos dos portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.
De acuerdo con otro aspecto de esta modalidad, la composición farmacéutica de acuerdo con esta invención comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos otro agente antiviral.
La invención también proporciona el uso de una composición farmacéutica como se describió anteriormente para el tratamiento de una infección por HBV en un ser humano que tiene o está en riesgo de tener la infección.
La invención también proporciona el uso de una composición farmacéutica como se describió anteriormente para el tratamiento de la infección por HBV en un ser humano que tiene o está en riesgo de tener la enfermedad.
Otro aspecto de la invención implica un método para tratar o prevenir una enfermedad y/o infección viral de la hepatitis B en un ser humano mediante la administración al ser humano de una cantidad antiviral eficaz de un compuesto de la invención, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición como se describió anteriormente, sola o en combinación con al menos otro agente antiviral, administrada junto o por separado.
Un aspecto adicional de esta invención se refiere a un artículo de fabricación que comprende una composición de la invención que es eficaz para tratar una enfermedad y/o infección viral de hepatitis B; y material de empaque que comprende una etiqueta que indica que la composición puede usarse para tratar la enfermedad y/o infección por un virus de la hepatitis B; en donde la composición comprende un compuesto de Fórmula (I) de acuerdo con esta invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto más de esta invención se refiere a un método para inhibir la replicación de1HBV, que comprende exponer el virus a una cantidad eficaz del compuesto de Fórmula (I), o una sal del mismo, en condiciones donde se inhibe la replicación del virus. Este método puede practicarse in vitro o in vivo.
También se incluye en el alcance de la invención el uso de un compuesto de Fórmula (I), o una sal del mismo, para inhibir la replicación del HBV.
En toda la modalidad que se refiere a un compuesto de Fórmula (I), el compuesto de Fórmula (I) puede ser un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-17 que se describieron anteriormente.
En algunas modalidades, el compuesto de Fórmula (I) se coadministra o se usa en combinación con al menos un agente terapéutico adicional seleccionado de: un interferón o peginterferón, un inhibidor de la polimerasa de1HBV, un inhibidor de la entrada viral, un inhibidor de la maduración viral, un inhibidor del ensamblaje de la cápside, un modulador del núcleo del HBV, un inhibidor de la transcriptasa inversa, un agonista de TLR o un inmunomodulador. Opcionalmente, el compuesto de Fórmula (I) puede prepararse para uso simultáneo o secuencial en combinación con un agente terapéutico adicional; o el compuesto de Fórmula (I) puede combinarse en una combinación farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I) y al menos un agente terapéutico adicional. Algunos agentes terapéuticos particulares que pueden usarse en combinación con los compuestos de la invención incluyen inmunomoduladores descritos en la presente descripción, interferón alfa 2a, interferón alfa-2b, interferón alfa-2a pegilado, interferón alfa-2b pegilado, agonistas de TLR-7 y TLR-9, entecavir, tenofovir, cidofovir, telbivudina, didanosina, zalcitabina, estavudina, lamivudina, abacavir, emtricitabina, apricitabina, atevirapina, ribavirina, aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, adefovir, efavirenz, nevirapina, delavirdina y etravirina. Moduladores adecuados del núcleo se describen en el documento núm. WO2013/096744; inhibidores adecuados de la cápside de1HBV se describen en el documento núm. US2015/0252057.
Estos agentes adicionales pueden combinarse con los compuestos de esta invención para crear una única forma de dosificación farmacéutica. Alternativamente, estos agentes adicionales pueden administrarse por separado al paciente como parte de una forma de dosificación múltiple, por ejemplo, mediante el uso de un kit. Dichos agentes adicionales pueden administrarse al paciente antes, al mismo tiempo o después de la administración de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Alternativamente, estos agentes terapéuticos adicionales pueden administrarse por separado y opcionalmente por diferentes vías de administración y en diferentes esquemas de dosificación del compuesto de la invención, siempre que el compuesto de la invención y el agente terapéutico adicional se usen simultáneamente para el tratamiento de una infección por HBV o un trastorno causado o complicado por una infección por HBV.
El intervalo de dosis de los compuestos de la invención aplicable por día es normalmente de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente de 0,1 a 50 mg/kg de peso corporal. Cada unidad de dosificación puede contener convenientemente de 5 % a 95 % de compuesto activo (p/p). Preferentemente, tales preparaciones contienen de 20 % a 80 % de compuesto activo.
La cantidad o dosificación terapéutica farmacéuticamente eficaz real dependerá, por supuesto, de factores conocidos por los expertos en la técnica, tales como la edad y el peso del paciente, la vía de administración y la gravedad de la enfermedad. En cualquier caso, la combinación se administrará en dosis y de una manera que permita administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz en base a la condición única del paciente.
Cuando la composición de esta invención comprende una combinación de un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes en niveles de dosificación de entre aproximadamente 10 y 100 %, y con mayor preferencia entre aproximadamente 10 y 80 % de la dosis administrada normalmente en un régimen de monoterapia.
Los agentes antivirales contemplados para su uso en dicha terapia de combinación incluyen agentes (compuestos o biológicos) que son efectivos para inhibir la formación y/o replicación de un virus en un ser humano, incluidos, entre otros, agentes que interfieren con el huésped o con los mecanismos virales necesarios para la formación y/o replicación de un virus en un ser humano. Tales agentes pueden seleccionarse de entecavir, tenofovir, cidofovir, telbivudina, didanosina, zalcitabina, estavudina, lamivudina, abacavir, emtricitabina, apricitabina, atevirapina, ribavirina, aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, adefovir, efavirenz, nevirapina, delavirdina, y etravirina, e inmunomoduladores descritos en la presente descripción, que incluyen interferones e interferones pegilados, agonistas de TLR-7 y agonistas de TLR-9.
Muchos compuestos de la invención contienen uno o más centros quirales. Estos compuestos pueden prepararse y usarse como isómeros únicos o como mezclas de isómeros. Los métodos para separar los isómeros, que incluyen diastereómeros y enantiómeros, se conocen en la técnica, y en la presente descripción se describen ejemplos de métodos adecuados. En determinadas modalidades, los compuestos de la invención se usan como un único isómero sustancialmente puro, lo que significa que al menos el 90 % de una muestra del compuesto es el isómero especificado y menos del 10 % de la muestra es cualquier otro isómero o mezcla de isómeros. Preferentemente, al menos 95 % de la muestra es un isómero único. La selección de un isómero adecuado está dentro del nivel ordinario de experiencia, ya que un isómero será típicamente más activo en el ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente descripción para medir la actividad del HBV, y será el isómero preferido. Cuando las diferencias de actividad in vitro entre los isómeros son relativamente pequeñas, por ejemplo, menos de aproximadamente un factor de 4, puede seleccionarse un isómero preferido en función del nivel de actividad contra la replicación viral en cultivo celular, mediante el uso de métodos tales como los descritos en la presente descripción: se prefiere el isómero que tiene una menor MIC (concentración mínima inhibitoria) o EC-50.
Los compuestos de la invención pueden sintetizarse mediante las rutas sintéticas generales ilustradas más abajo, cuyos ejemplos específicos se describen con más detalle en los Ejemplos. Orientaciones adicionales para la síntesis de los compuestos de Fórmula (I) e intermedios sintéticos útiles para estas síntesis se describen en las publicaciones de los documentos pCT applications WO2015/113990 y WO2015/173164.
El esquema 1 ilustra un método general útil para preparar compuestos de la invención, como se demuestra en los ejemplos en la presente descripción. Se conocen en la técnica una variedad de materiales de partida de indazol-3-carboxilato. El carboxilato puede reducirse a un alcohol mediante el uso de métodos conocidos en la técnica, y el alcohol puede protegerse con un grupo protector tal como éteres de sililo conocidos (por ejemplo, TBS). El nitrógeno N-2 puede alquilarse con una alfa-halocetona adecuada para introducir el grupo que contiene R9. La aminación reductora es un método para introducir nitrógeno en el centro del carbonilo. Una vez que la amina primaria está en su lugar, el alcohol protegido en C3 del indazol puede desprotegerse y oxidarse hasta un estado de oxidación de aldehído, momento en el que se cicla con la amina primaria para formar el nuevo anillo de 6 miembros sustituido con R9.
La imina del nuevo anillo se anula luego para formar un anillo fusionado adicional mediante un método conocido en la técnica, mediante el uso de (Z)-etil 2-(etoximetilen)-3-oxobutanoato. Luego, el nuevo anillo se oxida para proporcionar el anillo de piridona que se muestra en la Fórmula (I). Los métodos útiles para preparar estos compuestos se describen en publicaciones de los documentos núms. Solicitudes PCT WO2015/113990 y WO2015/173164.
Esquema 1. Método general para sintetizar compuestos de Fórmula (I).
Figure imgf000016_0001
Mediante el uso de este método general, otros materiales de partida conocidos y los ejemplos de la presente descripción, una persona con experiencia normal puede sintetizar compuestos de Fórmula (I). Los enantiómeros de estos compuestos pueden separarse mediante HPLC quiral y métodos conocidos similares. Alternativamente, los enantiómeros pueden sintetizarse mediante las rutas sintéticas generales ilustradas en el Esquema 2, cuyos ejemplos específicos se describen con más detalle en los Ejemplos.
Esquema 2. Método estereoselectivo para sintetizar compuestos de Fórmula (II).
Figure imgf000017_0001
Aunque un enantiómero de compuestos de esta fórmula es típicamente más activo que el otro enantiómero, ambos isómeros exhiben actividad sobre HBsAg como se demuestra en la presente descripción.
El término "un isómero óptico" o "un estereoisómero" se refiere a cualquiera de las diversas configuraciones estereoisoméricas que pueden existir para un compuesto dado de la presente invención e incluye isómeros geométricos. Se entiende que un sustituyente puede estar unido a un centro quiral de un átomo de carbono. El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no poder superponerse sobre la imagen especular de su pareja, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que pueden superponerse sobre la imagen especular de su pareja. Por tanto, la invención incluye enantiómeros, diastereómeros o racematos del compuesto. Los "enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla "racémica". El término se usa para designar una mezcla racémica cuando sea apropiado. Los "diastereoisómeros" son estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí. La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema Cahn- lngold- Prelog R-S. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada carbono quiral puede especificarse mediante R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta se desconoce pueden designarse (+) o (-) en dependencia de la dirección (dextro- o levorrotatoria) en que giran la luz polarizada plana en la longitud de onda de la línea D del sodio. Ciertos compuestos descritos en la presente descripción contienen uno o más centros o ejes asimétricos y, por tanto, pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-.
En dependencia de la elección de los materiales de partida y de los procedimientos, los compuestos pueden presentarse en forma de uno de los posibles isómeros o como mezclas de los mismos, por ejemplo como isómeros ópticos puros, o como mezclas de isómeros, como racematos y mezclas de diastereoisómeros, en dependencia del número de átomos de carbono asimétricos. La presente invención pretende incluir todos estos estereoisómeros posibles, incluidas mezclas racémicas, mezclas diastereoisómeras y formas ópticamente puras. Los isómeros ópticamente activos (R)- y (S)- pueden prepararse mediante el uso de sintones quirales o reactivos quirales, o pueden resolverse mediante el uso de técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un doble enlace, el sustituyente puede tener configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, el sustituyente del cicloalquilo puede tener una configuración cis o trans. También se pretende que estén incluidas todas las formas tautoméricas.
Cualquier mezcla resultante de isómeros puede separarse en base a las diferencias fisicoquímicas de los constituyentes, en isómeros o diastereómeros geométricos u ópticos puros o sustancialmente puros, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada.
Cualquier racemato resultante de productos finales o intermedios puede resolverse en las antípodas ópticas por métodos conocidos, por ejemplo, por separación de sus sales diastereoméricas, obtenidas con un ácido o base ópticamente activo, y al liberar el compuesto ácido o básico ópticamente activo. En particular, puede emplearse un resto básico para resolver los compuestos de la presente invención en sus antípodas ópticas, por ejemplo, mediante cristalización fraccionada de una sal formada con un ácido ópticamente activo, por ejemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil tartárico, ácido diacetil tartárico, ácido di-O,O'-p-toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico o ácido alcanfor-10-sulfónico. Los productos racémicos también pueden resolverse mediante cromatografía quiral, por ejemplo, cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) mediante el uso de un adsorbente quiral.
Además, los compuestos de la presente invención, incluidas sus sales, también pueden obtenerse en forma de sus hidratos, o incluir otros disolventes usados para su cristalización. Los compuestos de la presente invención pueden inherentemente o por diseño formar solvatos con disolventes farmacéuticamente aceptables (incluida agua); por lo tanto, se pretende que la invención abarque formas tanto solvatadas como no solvatadas. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto de la presente invención (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) con una o más moléculas de disolvente. Tales moléculas de disolvente son las que se usan comúnmente en la técnica farmacéutica, que se sabe que son inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo donde la molécula de disolvente es agua.
Los compuestos de la presente invención, incluidas las sales, hidratos y solvatos de los mismos, pueden inherentemente o por diseño formar polimorfos.
Como se usa en la presente descripción, los términos "sal" o "sales" se refieren a una sal de adición de ácido o de adición de base de un compuesto de la presente invención. Las "sales" incluyen en particular "sales farmacéuticamente aceptables". El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que típicamente no son biológicamente o de otro modo indeseables. En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales ácidas y/o básicas en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a los mismos.
Pueden formarse sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos, por ejemplo, sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, alcanforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etanodisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, hidroyoduro/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfosalicilato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato.
Los ácidos inorgánicos de los cuales pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares.
Los ácidos orgánicos de los que pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido sulfosalicílico y similares. Las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables pueden formarse con bases orgánicas e inorgánicas.
Las bases inorgánicas de las que pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, sales de amonio y metales de las columnas I a XII de la tabla periódica. En determinadas modalidades, las sales se derivan de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, zinc y cobre; Las sales particularmente adecuadas incluyen sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio.
Las bases orgánicas a partir de las cuales pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas, resinas de intercambio iónico básicas y similares. Ciertas aminas orgánicas incluyen isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina y trometamina.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir de un resto básico o ácido, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse al hacer reaccionar formas libres de ácido de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (como hidróxido de Na, Ca, Mg o K, carbonato, bicarbonato, o similares), o al hacer reaccionar formas libres de base de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Tales reacciones se llevan a cabo típicamente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, es deseable el uso de medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, cuando sea posible. Pueden encontrarse listas de sales adecuadas adicionales, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences ", 20a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
Cualquier fórmula dada en la presente descripción pretende representar formas no marcadas así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos de la presente invención que tienen hasta tres átomos con distribuciones de isótopos no naturales, por ejemplo, sitios que están enriquecidos en deuterio o 13C o 15N. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas que se dan en la presente descripción, excepto que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica seleccionada o un número de masa distinto de la distribución de masa de abundancia natural. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en exceso de manera útil en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I respectivamente. La invención incluye varios compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquellos en los cuales los isótopos radiactivos, como 3H y 14C, o aquellos en los cuales isótopos no radiactivos, tales como 2H y 13C están presentes en niveles sustancialmente por encima de la distribución normal de isótopos. Estos compuestos marcados isotópicamente son útiles en estudios metabólicos (con 14C, por ejemplo), estudios de cinética de reacción (con, por ejemplo, 2H o 3H), técnicas de detección o de formación de imágenes, como la tomografía por emisión de positrones (p Et ) o tomografía computarizada de emisión de fotón único (SPECT) que incluye ensayos de distribución en tejido de sustrato o fármaco, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. En particular, un compuesto marcado con 18F de la presente invención puede ser particularmente deseable para estudios de PET o SPECT. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención generalmente pueden prepararse mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos y Preparaciones adjuntos mediante el uso de un reactivo apropiado marcado isotópicamente en lugar del reactivo no marcado normalmente empleado. Las muestras marcadas pueden ser útiles con una incorporación de isótopos bastante baja, como cuando se usa un radiomarcador para detectar cantidades trazas del compuesto.
Además, la sustitución de un sitio específico con isótopos más pesados, en particular deuterio (es decir, 2H o D), puede brindar ciertas ventajas terapéuticas derivadas de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor vida media in vivo o una reducción de los requisitos de dosificación o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera un sustituyente de un compuesto de la presente invención, y típicamente una muestra de un compuesto que tiene deuterio como sustituyente tiene al menos 50 % de incorporación de deuterio en la posición o posiciones marcadas. La concentración de tal isótopo más pesado, específicamente deuterio, puede definirse por el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de enriquecimiento isotópico" como se usa en la presente descripción significa la relación entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado. Si un sustituyente en un compuesto de esta invención se denota deuterio, dicho compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de al menos 3500 (52,5 % de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), al menos 4000 (60 % de incorporación de deuterio), al menos 4500 (67,5 % de incorporación de deuterio), al menos 5000 (75 % d incorporación de deuterio), al menos 5500 (82,5 % de incorporación de deuterio), al menos 6000 (90 % d incorporación de deuterio), al menos 6333,3 (95 % de incorporación de deuterio), al menos 6466,7 (97 % de incorporación de deuterio),
Figure imgf000019_0001
menos 6600 (99 % de incorporación de deuterio) o al menos 6633, incorporación de deuterio).
Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquellos en donde el disolvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO.
Los compuestos de la presente invención que contienen grupos capaces de actuar como donantes y/o aceptores de enlaces de hidrógeno pueden ser capaces de formar cocristales con formadores de cocristales adecuados. Estos cocristales pueden prepararse a partir de compuestos de la presente invención mediante procedimientos conocidos de formación de cocristales. Dichos procedimientos incluyen triturar, calentar, cosublimar, cofundir o poner en contacto los compuestos en solución de la presente invención con el formador de cocristales en condiciones de cristalización y aislar los cocristales así formados. Los formadores de cocristales adecuados incluyen los descritos en el documento núm. WO 2004/078163. Por tanto, la invención proporciona además cocristales que comprenden un compuesto de la presente invención.
Métodos de uso
Todos los métodos descritos en la presente descripción pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otra manera en la presente descripción o que el contexto lo contradiga claramente de otra manera. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o lenguaje ilustrativo (por ejemplo, "tal como") proporcionado en la presente descripción está destinado simplemente a iluminar mejor la invención y no supone una limitación en el alcance de la invención reivindicada de otra manera.
Los compuestos de la invención pueden administrarse mediante métodos conocidos, que incluyen oral, parenteral, inhalación y similares. En determinadas modalidades, el compuesto de la invención se administra por vía oral, en forma de píldora, pastilla, trocisco, cápsula, solución o suspensión. En otras modalidades, un compuesto de la invención se administra mediante inyección o infusión. La infusión se realiza típicamente por vía intravenosa, a menudo durante un período de tiempo entre aproximadamente 15 minutos y 4 horas. En otras modalidades, un compuesto de la invención se administra por vía intranasal o por inhalación; Los métodos de inhalación son particularmente útiles para el tratamiento de infecciones respiratorias. Los compuestos de la presente invención exhiben biodisponibilidad oral, por lo que a veces se prefiere la administración oral.
En determinadas modalidades de la presente invención, se usa un compuesto de la presente invención en combinación con un segundo agente antiviral, como los que se mencionan en la presente descripción.
Por el término "combinación", se entiende una combinación fija en una forma de unidad de dosificación, como formas de dosificación separadas adecuadas para usar juntas, ya sea de forma simultánea o secuencial, o como un kit de partes para la administración combinada donde un compuesto de la presente invención y una pareja de combinación puede administrarse independientemente al mismo tiempo o por separado dentro de intervalos de tiempo que permitan especialmente que las parejas de combinación muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, sinérgico, o cualquier combinación de los mismos.
El segundo agente antiviral puede administrarse en combinación con los compuestos de la presente invención en donde el segundo agente antiviral se administra antes, simultáneamente o después del compuesto o compuestos de la presente invención. Cuando se desea la administración simultánea de un compuesto de la invención con un segundo agente y la vía de administración es la misma, entonces puede formularse un compuesto de la invención con un segundo agente en la misma forma de dosificación. Un ejemplo de una forma de dosificación que contiene un compuesto de la invención y un segundo agente es una tableta o una cápsula.
En algunas modalidades, una combinación de un compuesto de la invención y un segundo agente antiviral puede proporcionar actividad sinérgica. El compuesto de la invención y el segundo agente antiviral pueden administrarse juntos, separados pero de forma simultánea o secuencial.
Una "cantidad eficaz" de un compuesto es la cantidad necesaria o suficiente para tratar o prevenir una infección viral y/o una enfermedad o afección descrita en la presente descripción. En un ejemplo, una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I es una cantidad suficiente para tratar una infección viral en un sujeto. En otro ejemplo, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para tratar el HBV en un sujeto que necesita dicho tratamiento. La cantidad eficaz puede variar en dependencia de factores tales como el tamaño y el peso del sujeto, el tipo de enfermedad o el compuesto particular de la invención. Por ejemplo, la elección del compuesto de la invención puede afectar lo que constituye una "cantidad eficaz". Un experto en la técnica sería capaz de estudiar los factores contenidos en la presente descripción y realizar la determinación con respecto a la cantidad eficaz de los compuestos de la invención sin experimentación indebida.
El régimen de administración puede afectar lo que constituye una cantidad eficaz. El compuesto de la invención puede administrarse al sujeto antes o después del inicio de una infección viral. Además, pueden administrarse varias dosis divididas, así como dosis escalonadas, diaria o secuencialmente, o la dosis puede infundirse continuamente o puede ser una inyección en bolo. Además, las dosis del (de los) compuesto(s) de la invención pueden aumentarse o disminuirse proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica o profiláctica.
Los compuestos de la invención pueden usarse en el tratamiento de estados, trastornos o enfermedades como se describe en la presente descripción, o para la fabricación de composiciones farmacéuticas para usar en el tratamiento de estas enfermedades. La invención proporciona métodos de uso de compuestos de la presente invención en el tratamiento de estas enfermedades o para la preparación de composiciones farmacéuticas que tienen compuestos de la presente invención para el tratamiento de estas enfermedades.
El lenguaje "composición farmacéutica" incluye preparaciones adecuadas para la administración a mamíferos, por ejemplo, seres humanos. Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos a mamíferos, por ejemplo, seres humanos, pueden administrarse per se o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, de 0,1 a 99,5 % (con mayor preferencia, de 0,5 a 90 %) de al menos un compuesto de Fórmula (I) o cualquier subgénero del mismo como ingrediente activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable, u opcionalmente dos o más portadores farmacéuticamente aceptables.
La frase "portador farmacéuticamente aceptable" se reconoce en la técnica e incluye un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, adecuado para administrar compuestos de la presente invención a mamíferos. Los portadores incluyen rellenos, diluyentes, excipientes, disolventes o materiales encapsulantes líquidos o sólidos, implicados en llevar o transportar el agente sujeto desde un órgano, o parte del cuerpo, a otro órgano o parte del cuerpo. Cada portador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la formulación y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados, tales como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilen glicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilen glicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tampones, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; Solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tampón de fosfato; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas. Típicamente, los portadores farmacéuticamente aceptables están esterilizados y/o sustancialmente libres de pirógenos.
También pueden estar presentes en las composiciones agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como también agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes.
Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, a-tocoferol y similares; y agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiamino tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.
Las formulaciones de la presente invención incluyen las adecuadas para administración oral, nasal, por inhalación, tópica, transdérmica, bucal, sublingual, rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquier método bien conocido en la técnica de la farmacia. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un material portador para producir una única forma de dosificación será generalmente la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. Generalmente, del cien por ciento, esta cantidad variará de aproximadamente 1 por ciento a aproximadamente noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, preferentemente de aproximadamente 5 por ciento a aproximadamente 70 por ciento, con la máxima preferencia de aproximadamente 10 por ciento a aproximadamente 30 por ciento.
Los métodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de asociar un compuesto de la presente invención con el portador y, opcionalmente, uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan mediante asociación uniforme e íntima de un compuesto de la presente invención con portadores líquidos, o portadores sólidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, se da forma al producto.
Las formulaciones de la invención adecuadas para la administración oral pueden estar en forma de cápsulas, bolsitas, píldoras, tabletas, pastillas para chupar (mediante el uso de una base saborizada, por ejemplo, usualmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto), polvos, gránulos o como una solución o un suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (mediante el uso de una base inerte, como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga) y/o como enjuagues bucales y similares, cada uno de los cuales contiene una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como ingrediente activo. Un compuesto de la presente invención también puede administrarse en forma de bolo, electuario o pasta.
En las formas de dosificación sólidas de la invención para administración oral (cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos, gránulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico, y/o cualquiera de los siguientes: rellenos o extensores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarosa y/o goma arábiga; humectantes, como glicerol; agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio; agentes retardadores de la solución, como parafina; aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolín y arcilla bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilen glicoles sólidos, lauril sulfato de sodio y mezclas de los mismos; y agentes colorantes. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes tampón. También pueden emplearse composiciones sólidas de un tipo similar como rellenos en cápsulas de gelatina rellenas blandas y duras mediante el uso de excipientes tales como lactosa o azúcares de la leche, así como también polietilen glicoles de altos pesos moleculares y similares.
Una tableta puede prepararse por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos pueden prepararse mediante el uso de aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetil celulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, desintegrante (por ejemplo, almidón glicolato de sodio o carboximetil celulosa de sodio reticulada), agente activo de superficie o dispersante. Los comprimidos moldeados pueden prepararse mediante el moldeado en una máquina adecuada de una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.
Los comprimidos y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas de la presente invención, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden opcionalmente calificarse o prepararse con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la industria farmacéutica. También pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo en ellos mediante el uso de, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro retenedor de bacterias o por incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua estéril o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composición que liberen el ingrediente o los ingredientes activos solamente, o preferentemente, en una cierta porción del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que pueden usarse incluyen sustancias poliméricas y ceras. El ingrediente activo también puede estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o más de los excipientes descritos anteriormente.
Las formas de dosificación líquidas para la administración oral de los compuestos de la invención incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener un diluyente inerte comúnmente usado en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilen glicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, maní, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilen glicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos.
Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.
Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, ésteres de polioxietilén sorbitol y sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.
Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas de la invención para administración rectal o vaginal pueden presentarse como un supositorio, que puede prepararse al mezclar uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o portadores no irritantes adecuados que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilen glicol, una cera para supositorios o un salicilato, y que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a temperatura corporal y, por lo tanto, se derretirá en el recto o en la cavidad vaginal y liberará el compuesto activo.
Las formulaciones de la presente invención que son adecuadas para la administración vaginal también incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol que contienen los portadores que se sabe que son apropiados en la técnica.
Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, aerosoles, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo puede mezclarse en condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, tampón o propulsor que pueda ser necesario.
Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo de esta invención, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilen glicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de zinc o mezclas de los mismos.
Los polvos y aerosoles pueden contener, además de un compuesto de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Los aerosoles pueden contener, adicionalmente, propulsores habituales, como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volátiles no sustituidos, tales como butano y propano.
Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar al cuerpo una administración controlada de un compuesto de la presente invención. Dichas formas de dosificación pueden prepararse al disolver o dispersar el compuesto en el medio apropiado. También pueden usarse potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad de dicho flujo puede controlarse al proporcionar una membrana de control de la velocidad o al dispersar el compuesto activo en una matriz de polímero o gel.
Las formulaciones oftálmicas, ungüentos para los ojos, polvos, soluciones y similares también se contemplan dentro del alcance de esta invención.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención adecuadas para administración parenteral pueden comprender uno o más compuestos de la invención en combinación con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables tales como soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones isotónicas estériles acuosas o no acuosas, o polvos estériles que pueden reconstituirse en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido o agentes de suspensión o espesantes.
Ejemplos de portadores acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, éteres de glicol, polioles (tales como glicerol, propilen glicol, polietilen glicol y similares) y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, como el aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, como el oleato de etilo. Puede mantenerse la fluidez adecuada, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones y mediante el uso de tensioactivos.
Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede asegurarse mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenolsórbico y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y similares en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede producirse mediante la inclusión de agentes que retrasan la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del fármaco por inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede lograrse mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tenga escasa solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, la absorción retardada de una forma de fármaco administrada por vía parenteral se logra al disolver o suspender el fármaco en un portador oleoso.
Las formas de depósito inyectables se preparan formando matrices microencapsuladas de los compuestos en cuestión en polímeros biodegradables como polilactida-poliglicólido. En dependencia de la relación de fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, puede controlarse la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli (ortoésteres) y poli (anhídridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan al atrapar el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal.
Las preparaciones de la presente invención pueden administrarse por vía oral, parenteral, tópica o rectal. Por supuesto, se dan mediante formas adecuadas para cada vía de administración. Por ejemplo, se administran en forma de comprimidos o cápsulas, mediante inyección, inhalación, loción ocular, ungüento, supositorio, etc., administración mediante inyección, infusión o inhalación; tópico mediante loción o ungüento; y rectal por supositorios.
Las frases "administración parenteral" y "administrado parenteralmente" como se usan en la presente descripción significan modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, usualmente por inyección, e incluyen, sin limitación, la inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal. La infusión intravenosa es a veces un método de administración preferido para los compuestos de la invención. La infusión puede usarse para administrar una única dosis diaria o múltiples dosis. En algunas modalidades, un compuesto de la invención se administra por infusión durante un intervalo entre 15 minutos y 4 horas, típicamente entre 0,5 y 3 horas. Dicha infusión puede usarse una vez al día, dos veces al día o hasta tres veces al día.
Las frases "administración sistémica", "administrada sistémicamente", "administración periférica" y "administrada periféricamente", como se usan en la presente descripción, significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material que no sea directamente en el sistema nervioso central, de manera que ingrese en el sistema del paciente y, por tanto, está sujeto a metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, administración subcutánea. Estos compuestos pueden administrarse a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía de administración adecuada, que incluyen las vías oral, nasal, como por ejemplo, mediante un aerosol, por vía rectal, intravaginal, parenteral, intracisternal y tópica, como mediante polvos, ungüentos o gotas, incluso bucal y sublingual. Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables por métodos convencionales conocidos por los expertos en la técnica.
Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, composición y modo de administración en particular, sin ser tóxico para el paciente. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o el éster, sal o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto particular que se emplea, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales que se usan en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, sexo, peso, condición, salud general e historial médico previo del paciente que se trata, y similares factores bien conocidos en las técnicas médicas.
Un médico o veterinario que tenga una experiencia normal en la técnica puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría iniciar dosis de los compuestos de la invención que se emplean en la composición farmacéutica a niveles inferiores a los requeridos para lograr el efecto terapéutico que se desea y aumentar gradualmente la dosis hasta lograr el efecto que se desea.
En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que sea la dosis más baja eficaz para producir un efecto terapéutico. Una dosis tan eficaz dependerá generalmente de los factores descritos anteriormente. Generalmente, las dosis intravenosas y subcutáneas de los compuestos de esta invención para un paciente, cuando se usan para los efectos indicados, oscilarán entre aproximadamente 0,0001 y aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por día, con mayor preferencia entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 50 mg por kg por día, y aún con mayor preferencia de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 20 mg por kg por día. Una cantidad eficaz es aquella que previene o trata una infección viral, como el HBV.
El tratamiento con un compuesto o composición descritos en la presente descripción puede repetirse diariamente durante un período suficiente para reducir o eliminar sustancialmente una infección por HBV o carga viral. Por ejemplo, el tratamiento puede continuarse durante una semana, o dos semanas, o 3 a 4 semanas, o 4 a 8 semanas, u 8 a 12 semanas, 2 a 6 meses o más, por ejemplo, hasta que la carga viral u otra medida de la infección muestren una reducción sustancial de la carga viral o la actividad viral u otros signos o síntomas de la infección por HBV. El médico tratante experto puede determinar fácilmente una duración adecuada del tratamiento.
Si se desea, la dosis diaria eficaz del compuesto activo puede administrarse como una dosis única por día, o como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente, en unidades de dosificación. Los compuestos administrados por vía oral o por inhalación se administran comúnmente en una a cuatro dosis por día. Los compuestos administrados por inyección se administran típicamente una vez al día o una vez en días alternos. Los compuestos administrados por infusión se administran típicamente de una a tres dosis por día. Cuando se administran múltiples dosis en un día, las dosis pueden administrarse a intervalos de aproximadamente 4 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 8 horas o aproximadamente 12 horas.
Si bien es posible que un compuesto de la presente invención se administre solo, es preferible administrar el compuesto como una composición farmacéutica como las descritas en la presente descripción. Por tanto, los métodos de uso de los compuestos de la invención incluyen administrar el compuesto como una composición farmacéutica, en donde al menos un compuesto de la invención se mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable antes de la administración.
Uso de compuestos de la invención en combinación con inmunomoduladores
Los compuestos y composiciones descritos en la presente descripción pueden usarse o administrarse en combinación con uno o más agentes terapéuticos que actúan como inmunomoduladores, por ejemplo, un activador de una molécula coestimuladora o un inhibidor de una molécula inmunoinhibidora o una vacuna. La proteína de Muerte Programada 1 (PD-1) es un miembro inhibidor de la familia extendida de reguladores de células T CD28/CTLA4 (Okazaki y otros (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82.; Bennett y otros (2003) J. Immunol.
170:711-8). PD-1 se expresa en linfocitos B, linfocitos T y monocitos activados. PD-1 es una proteína inmunoinhibidora que regula negativamente las señales de TCR (Ishida, Y. y otros (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. y otros (Publicación electrónica del 29 de diciembre de 2006) Immunol. Immunother. 56(5):739-745), y está regulada positivamente en infecciones crónicas. La interacción entre PD-1 y PD-L1 puede actuar como un punto de control inmunológico, lo que puede conducir, por ejemplo, a una disminución de los linfocitos infiltrantes, una disminución de la proliferación mediada por el receptor de células T y/o una evasión inmunitaria por parte de células cancerosas o infectadas (Dong y otros (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank y otros (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi y otros (2004) Clin. Cancer Res. 10: 5094-100). La inmunosupresión puede revertirse al inhibir la interacción local de PD-1 con PD-L1 o PD-L2; el efecto es aditivo cuando la interacción de PD-1 con PD-L2 también está bloqueada (Iwai y otros (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. EE.UU. 99:12293-7; Brown y otros (2003) J. Immunol. 170:1257-66). La inmunomodulación puede lograrse mediante unión a la proteína inmunoinhibidora (por ejemplo, PD-1) o a proteínas de unión que modulan la proteína inhibidora (por ejemplo, PD-L1, PD-L2).
En una modalidad, las terapias de combinación de la invención incluyen un inmunomodulador que es un inhibidor o antagonista de una molécula inhibidora de una molécula de punto de control inmunológico. En otra modalidad, el inmunomodulador se une a una proteína que inhibe de forma natural la molécula de punto de control inmunoinhibidora. Cuando se usan en combinación con compuestos antivirales, estos inmunomoduladores pueden potenciar la respuesta antiviral y, por tanto, potenciar la eficacia en relación con el tratamiento con el compuesto antiviral solo.
El término "puntos de control inmunológico" se refiere a un grupo de moléculas en la superficie celular de las células T CD4 y CD8. Estas moléculas pueden actuar eficazmente como "frenos" para modular negativamente o inhibir una respuesta inmunitaria adaptativa. Las moléculas de puntos de control inmunológico incluyen, entre otras, Muerte Programada 1 (PD-1), Antígeno 4 de linfocito T citotóxico (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40 y LAG3, que inhiben directamente células inmunitarias. Los agentes inmunoterapéuticos que pueden actuar como inhibidores de puntos de control inmunológico útiles en los métodos de la presente invención incluyen, entre otros, inhibidores de PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 y/o TGFR beta. La inhibición de una molécula inhibidora puede realizarse mediante inhibición a nivel de ADN, ARN o proteína. En algunas modalidades, puede usarse un ácido nucleico inhibidor (por ejemplo, un dsRNA, siRNA o shRNA), para inhibir la expresión de una molécula inhibidora. En otras modalidades, el inhibidor de una señal inhibidora es un polipéptido, por ejemplo, un ligando soluble, o un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a la molécula inhibidora. Por "en combinación con", no se pretende implicar que la terapia o los agentes terapéuticos deban administrarse al mismo tiempo y/o formularse para su administración juntos, aunque estos métodos de administración están dentro del alcance descrito en la presente descripción. El inmunomodulador puede administrarse simultáneamente con, antes o después de, uno o más compuestos de la invención y opcionalmente, una o más terapias o agentes terapéuticos adicionales. Los agentes terapéuticos en la combinación pueden administrarse en cualquier orden. En general, cada agente se administrará en una dosis y/o en un horario determinado para ese agente. Se apreciará además que los agentes terapéuticos usados en esta combinación pueden administrarse juntos en una sola composición o administrarse por separado en diferentes composiciones. En general, se espera que cada uno de los agentes terapéuticos que se usan en combinación se use a niveles que no superen los niveles a los que se usan individualmente. En algunas modalidades, los niveles usados en combinación serán más bajos que los usados individualmente.
En determinadas modalidades, los compuestos antivirales descritos en la presente descripción se administran en combinación con uno o más inmunomoduladores que son inhibidores de PD-1, PD-L1 y/o PD-L2. Cada uno de estos inhibidores puede ser un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno del mismo, una inmunoadhesina, una proteína de fusión o un oligopéptido. Se conocen en la técnica ejemplos de tales inmunomoduladores.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un anticuerpo anti-PD-1 elegido entre MDX-1106, Merck 3475 o CT-011.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es una inmunoadhesina (por ejemplo, una inmunoadhesina que comprende una porción extracelular o de unión a PD-1 de PD-L1 o PD-L2 fusionada a una región constante (por ejemplo, una región Fc de una secuencia de inmunoglobulina).
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un inhibidor de PD-1 como AMP-224.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un inhibidor de PD-L1 tal como un anticuerpo anti-PD-L1.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un antagonista de unión anti-PD-Ll elegido entre YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C o MDX-1105. MDX-1105, también conocido como BMS-936559, es un anticuerpo anti-PD-Ll descrito en el documento núm. WO2007/005874. El anticuerpo YW243.55.S70 es un anti-PD-Ll descrito en el documento núm. WO 2010/077634.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es nivolumab (Número de registro CAS: 946414-94-4). Los nombres alternativos de nivolumab incluyen MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, o BMS-936558. Nivolumab es un anticuerpo monoclonal IgG4 completamente humano que bloquea específicamente la PD-1. Nivolumab (clon 5C4) y otros anticuerpos monoclonales humanos que se unen específicamente a PD-1 se describen en los documentos núms. US 8,008,449, EP2161336 y WO2006/121168.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un anticuerpo anti-PD-1 Pembrolizumab. Pembrolizumab (también conocido como Lambrolizumab, MK-3475, MK03475, SCH-900475 o KEYTRUDA®; Merck) es un anticuerpo monoclonal IgG4 humanizado que se une a PD-1. El pembrolizumab y otros anticuerpos anti-PD-1 humanizados se describen en Hamid, O. y otros (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, en el documento núm. EE.UU. 8.354.509, en el documento núm. WO2009/114335, y en el documento núm. WO2013/079174.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es Pidilizumab (CT-011; Cure Tech), un anticuerpo monoclonal IgGlk humanizado que se une a PD1. El pidilizumab y otros anticuerpos monoclonales anti-PD-1 humanizados se describen en el documento núm. WO2009/101611.
Otros anticuerpos anti-PD 1 útiles como inmunomoduladores para su uso en los métodos descritos en la presente descripción incluyen AMP 514 (Amplimmune) y anticuerpos anti-PD1 descritos en los documentos núms. EE.UU.
8,609,089, EE.UU. 2010028330 y/o EE.UU. 20120114649. En algunas modalidades, el anticuerpo anti-PD-Ll es MSB0010718C. MSB0010718C (también denominado A09-246-2; Merck Serono) es un anticuerpo monoclonal que se une a PD-L1.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es MDPL3280A (Genentech/Roche), un anticuerpo monoclonal IgG1 optimizado para Fc humano que se une a PD-L1. MDPL3280A y otros anticuerpos monoclonales humanos contra PD-L1 se describen en los documentos núms. Patente de EE. u U . núm.: 7,943,743 y Publicación de EE. UU. núm.: 20120039906. Otros agentes de unión anti-PD-Ll útiles como inmunomoduladores para los métodos de la invención incluyen YW243.55.S70 (ver los documentos núms. WO2010/077634), MDX-1105 (también denominado BMS -936559) y agentes aglutinantes anti-PD-L1 descritos en el documento núm. WO2007/005874.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; por ejemplo, descrito en los documentos núms. WO2010/027827 y WO2011/066342), es un receptor soluble de fusión p D - l 2 Fc que bloquea la interacción entre PD1 y B7-H1.
En algunas modalidades, el inmunomodulador es un anticuerpo anti-LAG-3 como BMS-986016. BMS-986016 (también denominado BMS986016) es un anticuerpo monoclonal que se une a LAG-3. BMS-986016 y otros anticuerpos anti-LAG-3 humanizados se describen en los documentos núms. EE.UU. 2011/0150892, WO2010/019570, y WO2014/008218
En determinadas modalidades, las terapias de combinación descritas en la presente descripción incluyen un modulador de una molécula coestimuladora o una molécula inhibidora, por ejemplo, un ligando o receptor coinhibidor.
En una modalidad, el modulador coestimulador, por ejemplo, agonista, de una molécula coestimuladora se elige entre un agonista (por ejemplo, un anticuerpo agonista o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o fusión soluble) de OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a / CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 o ligando CD83.
En otra modalidad, las terapias de combinación descritas en la presente descripción incluyen un inmunomodulador que es una molécula coestimuladora, por ejemplo, un agonista asociado con una señal positiva que incluye un dominio coestimulador de CD28, CD27, ICOS y/o GITR.
Los agonistas de GITR ilustrativos incluyen, por ejemplo, proteínas de fusión de GITR y anticuerpos anti-GITR (por ejemplo, anticuerpos anti-GITR bivalentes), tales como una proteína de fusión de GITR descrita en los documentos núms. Patente de EE. UU. núm.: 6,111,090, Patente Europea núm.: 090505B1, Patente de EE. UU. núm.: 8,586,023, Publicación PCT núms.: WO 2010/003118 y 2011/090754, o un anticuerpo anti-GITR descrito, por ejemplo, en Patente de EE. UU. núm.: 7,025,962, Patente europea núm.: 1947183B1, Patente de EE. UU. núm.: 7,812,135, Patente de EE. UU. núm.: 8,388,967, Patente de EE. UU. núm.: 8,591,886, Patente europea núm.: EP 1866339, Publicación PCT núm.: WO 2011/028683, Publicación PCT núm. :WO 2013/039954, Publicación PCT núm.: WO2005/007190, Publicación PCT núm.: WO 2007/133822, Publicación PCT núm.: WO2005/055808, Publicación PCT núm.: WO 99/40196, Publicación PCT núm.: WO 2001/03720, Publicación PCT núm.: WO99/20758, Publicación PCT núm.: WO2006/083289, Publicación PCT núm.: WO 2005/115451, Patente de EE. UU. núm.: 7,618,632, y Publicación PCT núm.: WO 2011/051726.
En una modalidad, el inmunomodulador usado es un ligando soluble (por ejemplo, un CTLA-4-Ig), o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une a PD-L1, PD-L2 o CTLA4. Por ejemplo, la molécula del anticuerpo anti-PD-1 puede administrarse en combinación con un anticuerpo anti-CTLA-4, por ejemplo, ipilimumab. Los anticuerpos anti-CTLA4 ilustrativos incluyen Tremelimumab (anticuerpo monoclonal IgG2 disponible de Pfizer, anteriormente conocido como ticilimumab, CP-675,206); e Ipilimumab (anticuerpo CTLA-4, también conocido como MDX-010, Número CAS 477202-00-9).
En una modalidad, se administra una molécula de anticuerpo anti-PD-1 después del tratamiento con un compuesto de la invención como se describe en la presente descripción.
En otra modalidad, se administra una molécula de anticuerpo anti-PD-1 o PD-L1 en combinación con un anticuerpo anti-LAG-3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En otra modalidad, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 o PD-L1 se administra en combinación con un anticuerpo anti-TIM-3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En otras modalidades más, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 o PD-L1 se administra en combinación con un anticuerpo anti-LAG-3 y un anticuerpo anti-TIM-3, o fragmentos de unión a antígeno del mismo. La combinación de anticuerpos enumerada en la presente descripción puede administrarse por separado, por ejemplo, como anticuerpos separados, o enlazada, por ejemplo, como una molécula de anticuerpo biespecífica o triespecífica. En una modalidad, se administra un anticuerpo biespecífico que incluye una molécula de anticuerpo anti-PD-1 o PD-L1 y un anticuerpo anti-TIM-3 o anti-LAG-3, o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En determinadas modalidades, la combinación de anticuerpos enumerados en la presente descripción se usa para tratar un cáncer, por ejemplo, un cáncer como se describió en la presente descripción (por ejemplo, un tumor sólido). La eficacia de las combinaciones mencionadas anteriormente puede probarse en modelos animales conocidos en la técnica. Por ejemplo, los modelos animales para probar el efecto sinérgico de anti-PD-1 y anti-LAG-3 se describen, por ejemplo, en Woo y otros (2012) Cancer Res. 72 (4): 917-27).
Los inmunomoduladores ilustrativos que pueden usarse en las terapias de combinación incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, afutuzumab (disponible de Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomida (CC-5013, Revlimid®); talidomida (Thalomid®), actimid (CC4047); y citocinas, por ejemplo, IL-21 o IRX-2 (mezcla de citocinas humanas que incluyen interleucina 1, interleucina 2 e interferón y, CAS 951209-71-5, disponible en IRX Therapeutics).
Las dosis ilustrativas de tales inmunomoduladores que pueden usarse en combinación con los compuestos antivirales de la invención incluyen una dosis de molécula de anticuerpo anti-PD-1 de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, por ejemplo, 3 mg/kg, y una dosis de un anticuerpo anti-CTLA-4, por ejemplo, ipilimumab, de aproximadamente 3 mg/kg.
Los ejemplos de modalidades de los métodos de uso de los compuestos antivirales de la invención en combinación con un inmunomodulador incluyen estos, que pueden usarse junto con un compuesto de Fórmula I o cualquier subgénero o especie del mismo que se describe en la presente descripción:
i. Un método para tratar una infección viral en un sujeto, que comprende administrar al sujeto un compuesto de Fórmula (I) como se describe en la presente descripción, y un inmunomodulador.
ii. El método de la modalidad i, en donde el inmunomodulador es un activador de una molécula coestimuladora o un inhibidor de una molécula de punto de control inmunológico.
iii. El método de cualquiera de las modalidades i y ii, en donde el activador de la molécula coestimuladora es un agonista de uno o más de los ligandos OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 y CD83.
iv. El método de cualquiera de las modalidades i-iii anteriores, en donde el inhibidor de la molécula del punto de control inmunológico se elige entre PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 y TGFR beta.
v. El método de cualquiera de las modalidades i-iii, en donde el inhibidor de la molécula del punto de control inmunológico se elige entre un inhibidor de PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 o CTLA4, o cualquier combinación de los mismos.
vi. El método de cualquiera de las modalidades i-v, en donde el inhibidor de la molécula del punto de control inmunológico es un ligando soluble o un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une a la molécula del punto de control inmunológico.
vii. El método de cualquiera de las modalidades i-vi, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo es de una IgG1 o IgG4 (por ejemplo, IgG1 o IgG4 humana).
viii. El método de cualquiera de las modalidades i-vii, en donde el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo se altera, por ejemplo, Se muta, para aumentar o disminuir uno o más de: unión al receptor Fc, glicosilación del anticuerpo, número de residuos de cisteína, función de célula efectora o función de complemento.
ix. El método de cualquiera de las modalidades i-viii, en donde la molécula de anticuerpo es una molécula de anticuerpo biespecífica o multiespecífica que tiene una primera especificidad de unión a PD-1 o PD-L1 y una segunda especificidad de unión a TIM-3, LAG-3 o PD-L2.
X. El método de cualquiera de las modalidades i-ix, en donde el inmunomodulador es un anticuerpo anti-PD-1 elegido entre Nivolumab, Pembrolizumab o Pidilizumab.
xi. El método de cualquiera de las modalidades i-x, en donde el inmunomodulador es un anticuerpo anti-PD-L1 elegido entre YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, o MDX-1105.
xii. El método de cualquiera de las modalidades i-x, en donde el inmunomodulador es una molécula de anticuerpo anti-LAG-3.
xiii. El método de la modalidad xii, en donde la molécula de anticuerpo anti-LAG-3 es BMS-986016.
xiv. El método de cualquiera de las modalidades i-x, en donde el inmunomodulador es una molécula de anticuerpo anti-PD-1 administrada por inyección (por ejemplo, Por vía subcutánea o intravenosa) a una dosis de aproximadamente 1 a 30 mg/kg, por ejemplo, aproximadamente de 5 a 25 mg/kg, aproximadamente de 10 a 20 mg/kg, aproximadamente de 1 a 5 mg/kg o aproximadamente 3 mg/kg, por ejemplo, una vez a la semana a una vez cada 2, 3 o 4 semanas.
xv. El método de la modalidad xiv, en donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra a una dosis de aproximadamente 10 a 20 mg/kg en semanas alternas.
xvi. El método de la modalidad xv, en donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1, por ejemplo, Nivolumab, se administra por vía intravenosa a una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a 3 mg/kg, por ejemplo, Aproximadamente 1 mg/kg, 2 mg/kg o 3 mg/kg, cada dos semanas.
xvii. El método de la modalidad xv, en donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1, por ejemplo, nivolumab, se administra por vía intravenosa a una dosis de aproximadamente 2 mg/kg a intervalos de 3 semanas.
Los compuestos que se describen en la presente descripción pueden sintetizarse mediante las rutas sintéticas generales más abajo, cuyos ejemplos específicos se describen con más detalle en los Ejemplos.
Procedimientos Sintéticos Generales
Todos los materiales de partida, bloques de construcción, reactivos, ácidos, bases, agentes deshidratantes, disolventes y catalizadores usados para sintetizar los compuestos de la invención están disponibles comercialmente o pueden producirse mediante métodos de síntesis orgánica conocidos por un experto en la técnica (Houben-Weyl 4a ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volumen 21). Los métodos generales para la síntesis de compuestos de la invención se ilustran mediante los Ejemplos más abajo, el método general del Esquema 1 y los métodos descritos en las publicaciones Solicitudes PCT WO2015/113990 y WO2015/173164.
Lista de abreviaturas
Ac acetyl
CAN Acetonitrilo
AcOEt / EtOAc Acetato de etilo
AcOH ácido acético
ac acuoso
Bn bencilo
Bu butilo (nBu = n-butilo, tBu = terc-butilo)
CDI Carbonildiimidazol
DBU 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]-undec-7-eno
Boc2O dicarbonato de di-terc-butilo
DCE 1,2-Dicloroetano
DCM Diclorometano
DIAD Azodicarboxilato de diisopropilo
DiBAl-H Hidruro de diisobutilaluminio
DIPEA N-Etildiisopropilamina
DMA N,N-dimetilacetamida
DMAP Dimetilaminopiridina
DMF N,N'-Dimetilformamida
DMSO Dimetilsulfóxido
EDCI 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
EI Ionización por electropulverización
Et2O Éter dietílico
EtaN Trietilamina
Éter Éter dietílico
EtOAc Acetato de etilo
EtOH Etanol
FA Ácido fórmico
FC Cromatografía Rápida
h hora(s)
HCl Ácido clorhídrico
HOBt 1-hidroxibenzotriazol
HPLC Cromatografía Líquida de Alta Resolución
H2O Agua
IPA isopropanol
L litro(s)
LC-MS Espectrometría de Masas por Cromatografía Líquida
LiHMDS Bis(trimetilsilil)amida de litio
Me metilo
Yo Yodometano
MeOH Metanol
mg miligramo
min minuto(s)
mL mililitro
MS Espectrometría de Masa
Pd/C paladio sobre carbón
PG grupo protector
Ph fenilo
PhaP trifenil fosfina
Prep Preparativo
Rf relación de frentes
RP fase inversa
Rt Tiempo de retención
rt Temperatura ambiente
SFC Cromatografía de Fluidos Supercríticos
SiO2 Gel de sílice
T3P® Anhídrido de ácido propilfosfónico
TBAF Fluoruro de tetrabutilamonio
TBDMS t-butildimetilsililo
TEA Trietilamina
TFA Ácido trifluoroacético
THF Tetrahidrofurano
TLC Cromatografía de Capa Fina
TsCl cloruro de tolueno sulfonilo
Dentro del alcance de este texto, un grupo fácilmente eliminable que no es un constituyente del producto final deseado particular de los compuestos de la presente invención se denomina "grupo protector", a menos que el contexto lo indique de otra manera. La protección de grupos funcionales por dichos grupos protectores, los propios grupos protectores y sus reacciones de escisión se describen, por ejemplo, en trabajos de referencia estándar, como por ejemplo, Science of Synthesis: Houben-Weyl Methods of Molecular Transformation. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Alemania. 2005. 41627 págs. (URL: http://www.science-of-synthesis.com (versión electrónica, 48 volúmenes)); JFW McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres y Nueva York 1973, en TW Greene y PGM Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Tercera edición, Wiley, Nueva York 1999, en "The Peptides"; Volumen 3 (editores: E. Gross y J. Meienhofer), Academic Press, Londres y Nueva York 1981, en "Methoden der organischen Chemie" (Métodos de Química Orgánica), Houben Weyl, 4a edición, Volumen 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, en H.-D. Jakubke y H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Aminoácidos, Péptidos, Proteínas), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach y Basel 1982, y en Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Una característica de los grupos protectores es que pueden eliminarse fácilmente (es decir, sin que ocurran reacciones secundarias no deseadas), por ejemplo, mediante solvólisis, reducción, fotólisis o alternativamente en condiciones fisiológicas (por ejemplo, Mediante escisión enzimática).
Las sales de los compuestos de la presente invención que tienen al menos un grupo formador de sal pueden prepararse de una manera conocida per se. Por ejemplo, pueden formarse sales de compuestos de la presente invención que tienen grupos ácidos, por ejemplo, al tratar los compuestos con compuestos metálicos, tales como sales de metales alcalinos de ácidos carboxílicos orgánicos adecuados, por ejemplo, la sal sódica del ácido 2-etilhexanoico, con compuestos orgánicos de metales alcalinos o alcalinotérreos, tales como los correspondientes hidróxidos, carbonatos o hidrogenocarbonatos, tales como hidróxido de sodio o potasio, carbonato o hidrogenocarbonato, con los correspondientes compuestos de calcio o con amoníaco o una amina orgánica adecuada, cantidades estequiométricas o preferentemente se usa sólo un pequeño exceso del agente formador de sal. Las sales de adición de ácido de los compuestos de la presente invención se obtienen de la manera habitual, por ejemplo, al tratar los compuestos con un ácido o un reactivo de intercambio aniónico adecuado. Las sales internas de los compuestos de la presente invención que contienen grupos formadores de sales ácidas y básicas, por ejemplo, Un grupo carboxi libre y un grupo amino libre, pueden formarse, por ejemplo, Mediante la neutralización de sales, tales como sales ácidas de adición, hasta el punto isoeléctrico, por ejemplo, con bases débiles, o por tratamiento con intercambiadores de iones.
Las sales pueden convertirse de manera habitual en los compuestos libres; las sales de metal y amonio pueden convertirse, por ejemplo, mediante tratamiento con ácidos adecuados, y sales ácidas de adición, por ejemplo, mediante tratamiento con un agente básico adecuado.
Las mezclas de isómeros que se pueden obtener de acuerdo con la invención pueden separarse de una manera conocida per se en los isómeros individuales; los diastereoisómeros pueden separarse, por ejemplo, mediante reparto entre mezclas de disolventes polifásicos, recristalización y/o separación cromatográfica, por ejemplo sobre gel de sílice o, por ejemplo, mediante cromatografía líquida de media presión sobre una columna de fase inversa, y los racematos pueden separarse, por ejemplo, por formación de sales con reactivos formadores de sal ópticamente puros y separación de la mezcla de diastereoisómeros que se pueden obtener así, por ejemplo mediante cristalización fraccionada, o por cromatografía sobre materiales de columna ópticamente activos.
Los productos intermedios y finales pueden procesarse y/o purificarse de acuerdo con métodos estándar, por ejemplo, mediante el uso de métodos cromatográficos, métodos de distribución, (re)cristalización y similares.
Ejemplos
La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos, que no deben interpretarse como limitantes. Los ensayos usados para demostrar la eficacia de los compuestos de Fórmula (I) en estos ensayos se consideran generalmente como predictivos de la eficacia en sujetos.
Condiciones Generales:
Los espectros de masas se ejecutaron en sistemas LC MS usando ionización por electropulverización. Estos eran los detectores WATERS Acquity Single Quard. [M+H]+ se refiere a pesos moleculares monoisotópicos.
Los espectros de NMR se realizaron en espectrómetros de NMR Varian 400 o Varian 500 de acceso abierto. Los espectros se midieron a 298 K y se referenciaron utilizando el pico de disolvente. Los cambios químicos para 1H NMR se informan en partes por millón (ppm).
Los espectros de masas se ejecutaron en sistemas LC MS con una de las siguientes condiciones:
Sistema de clase Waters Acquity UPLC H equipado con detector SQD.
Columna: ACQUITY UPLC HSS C18 (50*2,1) mm, 1,8u.
Temperatura de la columna: Ambiente.
Fase móvil:
A) 0,1 % FA 5mM acetato de amonio en agua.
b) 0,1 % FA en Acetonitrilo.
Gradiente: 5-5 % solvente B en 0,40 min, 5-35 % solvente B en 0,80 min, 35-55 % solvente B en 1,2 min, 55-100 % solvente B en 2,5 min.
Velocidad de flujo: 0,55 mL/min.
Los compuestos se detectaron con un Detector Waters de matriz de fotodiodos.
Sistema Waters LCMS equipado con detector ZQ 2000.
Columna: X-BRIDGE C18 (50*4,6) mm, 3,5u.
Temperatura de la columna: Ambiente.
Fase móvil:
A) 0,1 % NH3 en agua.
b) 0,1 % NH3 en Acetonitrilo.
Gradiente: 5-95 % solvente B en 5,00 min.
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min.
Los compuestos se detectaron con un Detector Waters de matriz de fotodiodos.
Sistema Waters ACQUITY UPLC equipado con detector ZQ 2000 MS.
Columna: Kinetex por Phenomenex, 2,6 um, 2,1 x 50mm
Temperatura de la columna: 50 °C
Gradiente: 2-88 % (o 00-45 %, o 65-95 %) solvente B durante un periodo de 1,29 min
Velocidad de flujo: 1,2 mL/min.
Los compuestos se detectaron con un Detector Waters de matriz de fotodiodos.
Las separaciones quirales se llevaron a cabo con las siguientes columnas:
AD: ChiralPak AD-H, SFC 21x250mm
OD: ChiralPak OD-H, SFC 21x250mm
Ejemplo 1.1:
ácido 6-(terc-butil)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1,1-I]y [1,1-II] Etapal: (7-metoxi-2H-indazol-3-il)metanol [1,1a]
Figure imgf000031_0001
A metil 7-metoxi-2H-indazol-3-carboxilato (950 mg, 4,61 mmol) se añadió THF (Volumen: 25 mL), se enfrió hasta 0 °C luego se añadió LAH (2M en THF; 3,46 mL, 6,91 mmol). La reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó por 2 horas o hasta que se terminó con lCmS. La reacción se enfrió en baño de hielo, luego se apagó cuidadosamente por adición en exceso de agua en forma de gotas (0,8 ml) y como sales formadas de sulfato de magnesio y luego se añadió sulfato de sodio. La reacción se retiró del baño de hielo y se agitó por 1 horas, se filtró a través de celite, se concentró hasta residuo para dar el compuesto deseado 1.1a en rendimiento cuantitativo, usado, tal cual, LC-MS (m/z): 179,1 [M+H]+, 0,48 min.
Etapa 2: 3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol [1,1b]
Figure imgf000031_0002
A 1.1a (810 mg, 4,55 mmol) se añadió DCM (Volumen: 25 mL) e imidazol (990 mg, 14,55 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos. Luego se añadió TBDMSCl (2055 mg, 13,64 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción se añadió 10 ml de metanol, se agitó por 2-3 minutos y se concentró la mayoría del solvente. Luego se añadió 250 ml de acetato de etilo, y la capa orgánica se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 1,1b, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, el cual se usó, tal cual. LC-MS (m/z): 293,3 [M+H]+, 1,15 min.
Etapa 3: 1-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona [1,1c]
Figure imgf000031_0003
A 1.1b (1300 mg, 4,45 mmol) se añadió DMF (Volumen: 20 mL), y Carbonato de litio (1314 mg, 17,78 mmol) y la mezcla se agitó por 10 minutos a 75-80 °C. Luego 1-bromo-3,3-dimetilbutan-2-ona (1990 mg, 11,11 mmol) se añadió con la reacción a 75-80 °C, y la mezcla se agitó a 75-80 °C por 15 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción se añadió 150 ml de acetato de etilo, que se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de columna de gel de sílice, usando 0 a 30 % EtOAc/heptanos. El regio-isómero deseado eluyó y se concentró hasta masa constante para dar 520 mg del producto deseado 1,1c en 30 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 391,3 [M+H]+, 1,31 min.
Etapa 4: (2-(2-amino-3,3-dimetilbutil)-7-metoxi-2H-indazol-3-il)metanol [1,1d]
Figure imgf000032_0001
A 1.1c (520 mg, 1,331 mmol) se añadió MeOH (Volumen: 8mL), acetato de amonio (1539 mg, 19,97 mmol) y cianoborohidruro de sodio (251 mg, 3,99 mmol). La reacción luego se agitó a 55 °C por 40 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción cruda se añadió 350 ml de DCM y 25 ml de metanol, se extrajo con 1:1 solución de (6 M NaOH, solución de sal saturada). La capa acuosa se extrajo nuevamente con DCM. Los compuestos orgánicos se combinaron, se lavaron con solución de sal saturada, se secaron con sulfato de sodio, se filtró a través de tapón de filtro de 1 cm x 2cm de celite, se lavaron con DCM con 10 % metanol, se concentraron hasta residuo para dar el producto deseado 1,1d asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 278,3 [M+H]+, 0,51 min.
Etapa 5: 3-(terc-butil)-7-metoxi-3,4-dihidropirazino[1,2-b]indazol [1,1e]
Figure imgf000032_0002
A 1.1d (360 mg, 1,298 mmol) se añadió DCM (Volumen: 12 mL), y dióxido de manganeso (1128 mg, 12,98 mmol). La reacción luego se agitó temperatura ambiente por 2 horas. Luego dióxido de manganeso adicional (564 mg, 6,49 mmol) se añadió y se agitó durante toda la noche por un total de 20 horas o hasta que se terminó con LCMS. Puede añadirse dióxido de manganeso adicional si es necesario. Al curdo se añadió 30 ml de DCM se agitó por 30 minutos luego se filtró a través de a tapón de filtro de 1 cm x 2 cm de celite, se enjuagó con DCM y se concentró hasta residuo. El residuo se disolvió en 5 ml de DCM y se añadió exceso de TFA (0,300 mL, 3,89 mmol), se agitó por 5-10 minutos a temperatura ambiente luego se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 1,1e asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 258,3 [M+H]+, 0,59 min.
Etapa 6: etil 6-(terc-butil)-10-metoxi-2-oxo-2,6,7,13c-tetrahidro-1H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [1.1f]
Figure imgf000032_0003
A 1.1e (250 mg, 0,972 mmol) se añadió etanol (Volumen: 8 mL), y (Z)-etil 2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (543 mg, 2,91 mmol). La reacción luego se agitó a 85-90 °C por 16 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 1.1f, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, el cual se usó, tal cual, en la siguiente etapa. LC-MS (m/z): 398,3 [M+H]+, 0,77 min.
Etapa 7: etil 6-(terc-butil)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [1.1g-I] y [1.1g-II]
Figure imgf000033_0001
A 1.1f (384 mg, 0,966 mmol) se añadió DME (Volumen: 7 mL), y luego cloranilo (238 mg, 0,966 mmol). La reacción se agitó a 90-95 °C por 90 minutos o hasta que se terminó con LCMS. La reacción cruda se concentró hasta residuo y se purificó por cromatografía de gel de sílice, usando 0-100 % EtOAc (con 25 % etanol)/heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 140 mg del producto racémico deseado 1.1g en 37 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 396,4 [M+H]+, 0,77 min.
El material racémico anterior 128 mg se separó por cromatografía quiral usando (Columna OD, SFC=100ml/min, CO2/MeOH=75/25, 276 bar) para dar los productos 1.1g-I (pico 1, tR 4,40 min.) a 58 mg y el producto 1.1g-II (pico 2, tR 6,69 min.) a 55 mg.
Etapa 8: ácido 6-(terc-butil)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico[1,1-I] y
Figure imgf000033_0002
A 1.1g-I (58 mg, 0,147 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1.000) , agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego NaOH 3M (0,147 ml, 0,440 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 CAN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 10,0 mg del producto deseado 1,1-I como una sal de TFA en 14 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,20-7,32 (m, 2H), 6,84 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,12 (br s, 2H), 4,97 (br s, 1H), 3,96 (s, 3H), 0,70 (s, 9H). A 1.1g-II (55 mg, 0,139 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1.000) , Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3m NaOH (0,139 ml, 0,417 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 CAN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 23,8 mg del producto deseado 1,1-II como una sal de TFA en 35 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,65 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,21-7,33 (m, 2H), 6,84 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,12 (br s, 2H), 4,96 (br s, 1H), 3,96 (s, 3H), 0,70 (s, 9H) Ejemplo 1.2:
ácido 6-(terc-butil)-11-metoxi-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1,2-I] y [1,2-II]
Figure imgf000033_0003
Figure imgf000034_0001
El compuesto 1.2g se sintetizó a partir del material de partida; metil 6-metoxi-2H-indazol-3-carboxilato mediante el proceso del Ejemplo 1.1 seguido por las etapas de la 1 a la 7 resultando en el producto deseado 1.2g como un racemato. LC-MS (m/z): 396,3 [M+H]+, 0,79 min.
El material racémico anterior (65 mg) se separó por cromatografía quiral usando Columna AD, (SFC=100ml/min, CO2/EtOH=70/30, 266bar) para dar los productos 1.2g-I (pico 1, tR 2,11 min.) a 32 mg y el producto 1.2g-II (pico 2, tR 5,42 min.) a 30 mg.
Etapa 8: ácido 6-(terc-butil)-11-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1,2-1] y [1,2-II]
Figure imgf000034_0002
A 1.2g-I (32 mg, 0,081 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1.000) , Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3M NaOH (0,081 ml, 0,243 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 8,8 mg del producto deseado 1.2-1 como una sal de TFA en 22 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 8,06 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,95-7,03 (m, 1H), 5,01-5,15 (m, 2H), 4,93 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 0,70 (s, 9H)
A 1.2g-II (30 mg, 0,076 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1.000) , Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3m NaOH (0,076 ml, 0,228 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 7,4 mg del producto deseado 1,.2-11 como una sal de TFA en 20 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 8,06 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,99 (br d, J=9,2 Hz, 1H), 5,00-5,18 (m, 2H), 4,93 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 0,70 (s, 9H)
Ejemplo 1.3:
ácido 6-(terc-butil)-12-metoxi-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2"1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1.3-1] y [1.3-II] E ta p a 1 a 7 : e til 6 -( te r c -b u t i l) - 12 -m e t o x i- 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o - 2 H -p i r id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l- 3 -c a r b o x i la to [ i .3 g - i ] y [ i .3 g - i i ]
Figure imgf000035_0001
El compuesto 1.3g se sintetizó a partir del material de partida; metil 5-metoxi-2H-indazol-3-carboxilato mediante el proceso del Ejemplo 1.1 seguido por las etapas de la 1 a la 7 resultando en el producto deseado 1.3g como un racemato. LC-MS (m/z): 396,3 [M+H]+, 0,81 min.
El material racémico anterior (148 mg) se separó por cromatografía quiral usando Columna AD, (SFC=100ml/min, CO2/EtOH=85/15, 236bar) para dar los productos 1.3g-I (pico 1, tR 10,41 min.) a 56 mg y el producto 1.3g-II (pico 2, tR 12,55 min.) a 68 mg.
Etapa 8: ácido 6-(terc-butil)-12-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1.3-1] y [13-II]
Figure imgf000035_0002
A 1.3g-I (55 mg, 0,139 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3m NaOH (0,139 ml, 0,417 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 18,7 mg del producto deseado 1.3-1 como una sal de TFA en 27 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,83 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,75 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,5, 1,9 Hz, 1H), 5,02-5,17 (m, 2H), 4,94 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 0,70 (s, 9H). A 1.3g-II (67 mg, 0,169 mmol) se añadió THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3M NaOH (0,169 ml, 0,508 mmol). Se añadió (30 mg, 0,076 mmol) THF (Volumen: 1,2 ml, Relación: 12,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 0,8 ml, Relación: 8,00) y luego 3M NaOH (0,076 ml, 0,228 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 4 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 29,8 mg del producto deseado 1.3-II como una sal de TFA en 36 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,75 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,2, 1,9 Hz, 1H), 5,02-5,18 (m, 2H), 4,94 (d, J=4,5 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 0,70 (s, 9H)
Ejemplo 1.4:
ácido 6-(terc-butil)-13-metoxi-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1.4-I] y [1.4-II]
Figure imgf000036_0001
El compuesto 1.4g se sintetizó a partir del material de partida; metil 4-metoxi-2H-indazol-3-carboxilato mediante el proceso del Ejemplo 1.1 seguido por las etapas de la 1 a la 7 resultando en el producto deseado 1.4g como un racemato. LC-MS (m/z): 396,3 [M+H]+, 0,81 min. El material racémico anterior (60 mg) se purificó por cromatografía quiral usando Columna OD, (SFC=100ml/min, CO2/MeOH=88/12, 246bar) para dar un racemato enriquecido 1.4g (pico 1, tR 8,74 min., 25 % y pico 2, tR 11,37 min., 75 %) a 30 mg.
Etapa 8: 6-(terc-butil)-13-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico ácido [1.4-I] y [1,4-11]
Figure imgf000036_0002
Al racemato enriquecido anterior 1.4g (30 mg, 0,076 mmol) se añadió THF (Volumen: 0,5 ml, Relación: 5,00), MeOH (Volumen: 0,1 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 0,3 ml, Relación: 3,00) y luego 3M NaOH (0,076 ml, 0,228 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 2 ml de DMSO con 5 % agua, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó para dar 18 mg de producto racémico enriquecido 1.4 como una sal de t Fa en 49 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,77 min.
El material racémico enriquecido (18 mg) se purificó adicionalmente por cromatografía quiral usando (Columna AS, SFC=100ml/min, CO2/EtOH=80/20, 226bar) para dar los productos 1.4-I (pico 1, tR 4,76 min.) a 2,6 mg en 9 % de rendimiento y el producto 1.4-II (pico 2, tR 9,41 min.) a 7,7 mg en 27 % de rendimiento ambos como base libre.
1.4- I LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,90 (br s, 1H), 7,89 (br s, 1H), 7,30-7,43 (m, 2H), 6,77 (br d, J=5,7 Hz, 1H), 4,99-5,18 (m, 2H), 4,93 (br s, 1H), 3,99 (s, 3H), 0,71 (s, 9H)
1.4- II LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,91 (br s, 1H), 7,90 (br s, 1H), 7,29-7,42 (m, 2H), 6,77 (br d, J=6,1 Hz, 1H), 5,02-5,17 (m, 2H), 4,93 (br s, 1H), 3,99 (s, 3H), 0,71 (s, 9H)
Ejemplo 1.5:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [1.5-1]y [1.5-II]
E ta p a 1 a 7: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p i r a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [1.5 g - I ] y [1.5 g -II]
Figure imgf000037_0001
El compuesto 1.5g se sintetizó a partir del material de partida; metil 2H-indazol-3-carboxilato mediante el proceso del Ejemplo 1.1 seguido por las etapas de la 1 a la 7 resultando en el producto deseado, 1.5g, como un racemato. LC-MS (m/z): 366,3 [M+H]+, 0,68 min. El material racémico anterior (60 mg) se purificó por cromatografía quiral usando Columna AD, (SFC=100ml/min, CO2/EtOH=70/30, 256bar) para dar los productos 1.5g-I (pico 1, tR 2,30 min.) a 13 mg y el producto 1.5g-II (pico 2, tR 3,97 min.) a 13 mg.
Etapa 8: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',l':3,4]pirazino[l,2-b]indazol-3-carboxílico [1.5-I] y [1.5-II]
Figure imgf000037_0002
A 1.5g-I (12 mg, 0,033 mmol) se añadió THF (Volumen: 0,2 ml, Relación: 1,000), MeOH (Volumen: 0,2 ml, Relación: 1,000) y luego 3M NaOH (0,033 ml, 0,099 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 1,2 ml de DMSO, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 6,8 mg del producto deseado 1.5-1 como una sal de TFA en 45 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 338,3 [M+H]+, 0,68 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,99 (s, 1H), 8,20 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,85 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,43-7,52 (m, 1H), 7,33-7,41 (m, 2H), 5,10-5,25 (m, 2H), 4,99 (d, J=4,7 Hz, 1H), 0,71 (s, 9H). A 1.5g-II (12 mg, 0,033 mmol) se añadió THF (Volumen: 0,2 ml, Relación: 1,000), MeOH (Volumen: 0,2 ml, Relación: 1,000) y luego 3M NaOH (0,033 ml, 0,099 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. El solvente se concentró, el residuo se disolvió en 1,2 ml de DMSO, se purificó por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 6,8 mg del producto deseado 1.5-II como una sal de TFA en 45 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 338,3 [M+H]+, 0,68 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,99 (s, 1H), 8,20 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,85 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,43-7,50 (m, 1H), 7,31-7,41 (m, 2H), 5,10-5,21 (m, 2H), 4,99 (d, J=4,4 Hz, 1H), 0,71 (s, 9H).
Ejemplo 2.1:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2"1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.1-I] y [2.1-II]
Etapa 1: (7-(benciloxi)-2H-indazol-3-il)metanol
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000038_0002
A metil 7-(benciloxi)-2H-indazol-3-carboxilato (6000 mg, 21,25 mmol) se añadió THF (Volumen: 100 mL), y se agitó hasta que se disolvió a temperatura ambiente. Luego la reacción se colocó en baño de agua a temperatura ambiente y 2M lAh en THF (15,94 mL, 31,9 mmol) se añadió cuidadosamente. La reacción se agitó por 2 horas a temperatura ambiente o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió en baño de hielo, luego se apagó cuidadosamente añadiendo THF adicional (Volumen: 100 mL), luego exceso de agua en forma de gotas (3,0 ml). Cuando se formó la sal, se añadió sulfato de magnesio seguido por sulfato de sodio. La reacción se eliminó de baño de hielo y se agitó por 55 minutos, se filtró a través de celite, se concentró hasta residuo para dar 4850 mg del producto deseado 2.1a en 90 % de rendimiento, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 255,2 [M+H]+, 0,71 min.
Etapa 2: 7-(benciloxi)-3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2H-indazol [2.1b]
Figure imgf000038_0003
A 2.1a (4850 mg, 19,07 mmol) se añadió DCM (Volumen: 100 mL) e imidazol (4155 mg, 61,0 mmol) se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos. Luego se añadió TBDMSC1 (8624 mg, 57,2 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 15 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción se añadió 10 ml de metanol se agitó por 2-3 minutos y se concentró la mayoría del solvente. Luego se añadió 300 ml de acetato de etilo, que se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.1b asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 369,5 [M+H]+, 1,16 min.
Etapa 3: 1-(7-(benciloxi)-3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2H-indazol-2-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona [2.1c]
Figure imgf000038_0004
A 2.1b (6985, 18,95 mmol) se añadió DMF (Volumen: 60 mL) y carbonato de litio (5602 mg, 76 mmol) y la mezcla se agitó por 10 minutos a 90 °C. Luego 1-bromo-3,3-dimetilbutan-2-ona (8484 mg, 47,4 mmol) se añadió con la reacción a 90 °C, y luego se agitó a 90 °C por 15 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción fría se añadió 450 ml de acetato de etilo, que se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de columna de gel de sílice, usando 0 a 25 % EtOAc/heptanos. El regio-isómero deseado eluyó y se concentró hasta masa constante para dar 3100 mg del producto deseado 2.1c en 35 % de rendimiento. LC-Ms (m/z): 467,4 [M+H]+, 1,30 min.
Etapa 4: (2-(2-amino-3,3-dimetilbutil)-7-(benciloxi)-2H-indazol-3-il)metanol [2.1d]
Figure imgf000039_0001
A 2.1c (3100 mg, 6,64 mmol) se añadió MeOH (Volumen: 29 mL), acetato de amonio (7680 mg, 100mmol) y cianoborohidruro de sodio (1252 mg, 19,93 mmol). La reacción luego se agitó a 55 °C por 40 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción cruda se añadió 350 ml de DCM y 25 ml de metanol, se extrajo con 1:1 solución de (6 M NaOH, solución de sal saturada). La capa acuosa se extrajo nuevamente con DCM. Los compuestos orgánicos se combinaron, se lavaron con solución de sal saturada, se secaron con sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de filtro de 1 cm x 2cm de celite, se lavaron con DCM con 10 % metanol, se concentraron hasta residuo para dar el producto deseado 2.1d (asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo), el cual se usó, tal cual. LC-MS (m/z): 354,3 [M+H]+, 0,73 min.
Etapa 5: 7-(benciloxi)-3-(terc-butil)-3,4-dihidropirazino[1,2-b]indazol [2.1e]
Figure imgf000039_0002
A 2.1d (2340 mg, 6,62 mmol) se añadió DCM (Volumen: 45 mL), y dióxido de manganeso (5755 mg, 66,2 mmol). La reacción luego se agitó temperatura ambiente por 2 horas. Luego añadió dióxido de manganeso adicional (2878 mg, 33,1 mmol) se y la mezcla se agitó durante toda la noche por un total de 20 horas o hasta que se terminó con LCMS. Puede añadirse dióxido de manganeso adicional si es necesario. Al curdo se añadió 30 ml de DCM se agitó por 30 minutos luego se filtró a través de a tapón de filtro de 1 cm x 2 cm de celite, se enjuagó con DCM y se concentró hasta residuo. El residuo se disolvió en 20 ml de DCM y exceso de TFA (1,530 mL, 19,86 mmol) se añadió, y la mezcla se agitó por 5-10 minutos a temperatura ambiente luego se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.1e (asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo), el cual se usó, tal cual. LC-MS (m/z): 334,3 [M+H]+, 0,82 min.
Etapa 6: etil 10-(benciloxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-2,6,7,13c-tetrahidro-1H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.1f]
Figure imgf000039_0003
A 2.1e (2200 mg, 6,60 mmol) se añadió Etanol (Volumen: 35 mL), y (Z)-etil 2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (3686 mg, 19,79 mmol). La reacción luego se agitó a 85-90 °C por 16 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.1f asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 474,6 [M+H]+, 0,92 min.
E ta p a 7: e til 10 -(b e n c i lo x i ) -6 -( te r c -b u t i l ) -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [2.1 g ]
Figure imgf000040_0001
A 2.1f (3120 mg, 6,59 mmol) se añadió DME (Volumen: 40 mL), y luego cloranilo (1620 mg, 6,59 mmol). La reacción se agitó a 90-95 °C por 90 minutos o hasta que se terminó con Lc MS. La reacción fría, 2 ml de agua se añadió; se agitó por 5 minutos luego se diluyó con 350 ml de DCM con 2 % etanol. Bicarbonato de sodio saturado (100 ml) y 150 ml de agua se añadieron y la mezcla se agitó por 5 minutos. La reacción se filtró y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua 2x, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice, usando 0-75 % EtOAc (con 25 % etanol)/heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 1145 mg del producto deseado 2.1g en 37 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 472,5 [M+H]+, 0,98 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,51 (s, 1H), 7,48-7,57 (m, 3H), 7,30-7,45 (m, 3H), 7,19 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,90 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 5,27 (s, 2H), 5,00-5,08 (m, 2H), 4,69 (br d, J=3,0 Hz, 1H), 4,22 (q, J=7,0 Hz, 2H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 0,68 (s, 9H).
Etapa 8: etil 6-(terc-butil)-10-hidroxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.1h]
Figure imgf000040_0002
A 2.1g (1120 mg, 2,375 mmol) se enjuagó con argón luego se añadió Pd-C (758 mg, 0,713 mmol). Luego bajo argón con una jeringa se añadió Etanol (Volumen: 40 mL). A la reacción se añadió a balón lleno de hidrógeno. La reacción se evacuó y se rellenó 5x con hidrógeno y luego se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se detuvo retirando el balón de hidrógeno y enjuagando la reacción con argón. Luego 100 ml de THF se añadió y la mezcla se agitó por 30 minutos. La reacción se filtró a través de un tapón de 1 x 2 cm de celite, se enjuagó con THF y se concentró hasta residuo para dar 900 mg del producto deseado 2.1h en 99 % de rendimiento, el cual se usó, tal cual. LC-MS (m/z): 382,5 [M+H]+, 0,68 min.
Etapa 9: etil 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.1i-I] y [2.1i-II]
Figure imgf000040_0003
A 2.1h (425 mg, 1,114 mmol) se añadió DMF (Volumen: 10 mL) y carbonato de cesio (1089 mg, 3,34 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 10 minutos, luego 1-bromo-3-metoxipropano (341 mg, 2,228 mmol) se añadió y la reacción se calentó hasta 50-55 °C y se agitó por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, se diluyó con 225 ml de DCM con 2 % etanol, se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice, usando 0-100 % EtOAc (con 25 % etanol)/heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 434 mg del producto racémico deseado 2.1i en 86 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 454,5 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (<dmso>) 5: 8,52 (s, 1H), 7,50 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,74-6,83 (m, 2H), 5,05-5,13 (m, 1H), 4,98-5,05 (m, 1H), 4,69 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,11-4,28 (m, 4H), 3,51 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,04 (quin, J=6,3 Hz, 2H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 0,68 (s, 9H).
El material racémico anterior 434 mg se separó por cromatografía quiral usando Columna OD, (SFC=80ml/min, CO2/MeOH=70/30, 266bar) para dar los productos 2.1i-I (pico 1, tR 3,93 min.) a 170 mg y el producto 2.1i-II (pico 2, tR 6,98 min.) a 172 mg.
Etapa 10: ácido 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.1-I] y [2.1-II]
Figure imgf000041_0001
A 2.1i-I (170 mg, 0,375 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (1,125 ml, 1,125 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 154 mg del producto deseado 2.1-I como base libre en 96 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,85 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,31 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,03-5,26 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,20 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,04 (quin, J=6,3 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H). A 2.1i-II (172 mg, 0,379 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (1,138 ml, 1,138 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 154 mg del producto deseado 2.1-II como base libre en 94 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,85 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17-7,28 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,20 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J=6,2 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,04 (quin, J=6,3 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.2:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-metoxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.2-I] y [2.2-II]
Figure imgf000042_0001
A 2.1h (425 mg, 1,114 mmol) se añadió DMF (Volumen: 10 mL) y carbonato de cesio (1089 mg, 3,34 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 10 minutos luego 1-bromo-2-metoxietano (310 mg, 2,228 mmol) se añadió y la reacción se calentó hasta 50-55 °C y se agitó por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, se diluyó con 225 ml de DCM con 2 % etanol, se lavó con bicarbonato de sodio saturado, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice, usando 0-100 % EtOAc (con 25 % etanol)/heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 414 mg del producto racémico deseado 2.2a en 85 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 440,5 [M+H]+, 0,78 min. El material racémico anterior 414 mg se separó por cromatografía quiral usando Columna Ad , (SFC=100ml/min, CO2/EtOH=75/25, 226bar) para dar los productos 2.2a-I (pico 1, tR 3,55 min.) a 134 mg y el producto 2.2a-II (pico 2, tR 4,97 min.) a 104 mg.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(2-metoxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.2-I] y [2.2-II]
Figure imgf000042_0002
A 2.2a-I (134 mg, 0,305 mmol) se añadió acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (0,915 ml, 0,915 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 117 mg del producto deseado 2.2-I como base libre en 93 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,15-7,30 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,22 (m, 2H), 4,96 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,24-4,34 (m, 2H), 3,70-3,78 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 0,69 (s, 9H). A 2.2a-II (104 mg, 0,237 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (0,710 ml, 0,710 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 93 mg del producto deseado 2.2-II como base libre en 95 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,32 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,03-5,29 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,23-4,32 (m, 2H), 3,68-3,79 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo ilustrativo para la síntesis de compuestos en donde R1 = F.
Etapa 1: 5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2.2-dimetilcidopentanona [1a]
Figure imgf000043_0001
Una mezcla de Pd(OAc)2 (8,16 mg, 0,036 mmol), terc-butóxido de sodio (0,454 g, 4,72 mmol), diciclohexil(2'-metil-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfano (32 mg), 2,2-dimetilddopentanona (0,547 ml, 4,36 mmol) y 4-bromo-1-metoxi-2-(3-metoxipropoxi)benceno (1 g, 3,63 mmol) en tolueno (4,0 mL) se calentó en un vial sellado a 50 °C por 18 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc y se filtró. El filtrado se concentró y el aceite restante se purificó por cromatografía de columna de gel de sílice, EtOAc/heptano 5 a 50 %, para dar el producto (500 mg, 45 % de rendimiento). LC-MS (m/z): 307,2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCls): 7,72 - 7,28 (m, 1H), 6,94 - 6,61 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,91 - 3,77 (m, 4H), 3,65 - 3,49 (m, 2H), 3,41 - 3,27 (m, 3H), 2,36 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 2,19 - 1,88 (m, 4H), 1,88 - 1,71 (m, 1H), 1,21 - 1,11 (m, 3H), 1,07 (s, 3H).
Etapa 2: 5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2.2-dimetilciclopentanamina [1b]
Figure imgf000043_0002
A la mezcla de 5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2.2-dimetilciclopentanona (320 mg, 1,0 mmol) en MeOH (3 mL) se añadió sal de amoníaco de ácido acético (1,6 g, 20,9 mmol) y cianoborohidruro de sodio (656 mg, 10,4 mmol). La mezcla se agitó a 80 °C por 8 horas y luego se concentró bajo presión reducida. El material restante se diluyó con EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El material crudo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (m/z): 308,0 [M+H]+.
Etapa 3: N-(5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2,2 dimetilciclopentil)formamida [1c]
Figure imgf000043_0003
A la mezcla de 5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2.2-dimetilciclopentanamina (320 mg, 1,041 mmol) en dioxano (3 ml) se añadió ácido fórmico (0,160 mL, 4,16 mmol). La mezcla se agitó a 100 °C por 6 horas. La mezcla se concentró para proporcionar el producto crudo que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS (m/z): 336,2 [M+H]+.
Etapa 4: 7-metoxi-8-(3-metoxipropoxi)-3,3-dimetil-2,3,3a,9b-tetrahidro-1H-ciclopenta[c]isoquinolina [1d-I] y [1d-II]
Figure imgf000043_0004
A una mezcla de N-(5-(4-metoxi-3-(3-metoxipropoxi)fenil)-2.2-dimetilciclopentil)formamida (349 mg, 1,04 mmol) en acetonitrilo (1,8 ml) se añadió PoCl3 (140 pl, 1,50 mmol). La mezcla se agitó a 85 °C por 2 horas y luego se concentró. El residuo se disolvió en EtOAc y se basificó añadiendo solución de hidróxido de amonio. Las fases se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El material restante se purificó por cromatografía de gel de sílice, acetona/heptano 5 a 50 % para dar el producto rac-1d-I y rac-ld-II.
Trans isómero rac-1d-II: (70 mg, 21 % de rendimiento). LCMS (m/z): 318,3 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCls): 8,22 (s, 1H), 6,93 - 6,83 (m, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,94 - 3,83 (m, 3H), 3,57 (q, J = 4,7 Hz, 2H), 3,35 (d, J = 1,5 Hz, 4H), 2,84 (s, 2H), 2,21 - 1,98 (m, 4H), 1,84 - 1,70 (m, 3H), 1,68 - 1,53 (m, 3H), 1,22 (s, 4H), 1,06 (s, 4H).
Cis isómero rac-1d-I: (54 mg, 16 % de rendimiento). LCMS (m/z): 318,3 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 8,17 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,14 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 3,92 - 3,83 (m, 3H), 3,77 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 3,57 (t, J = 5,4 Hz, 3H), 3,35 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 3,25 (q, J = 9,4 Hz, 1H), 2,42 -2,21 (m, 2H), 2,19 -2,01 (m, 3H), 1,64 (dd, J = 20,6, 7,8 Hz, 4H), 1,45 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,24 (d, J = 6,1 Hz, 4H), 0,89 (s, 4H).
La configuración relativa de rac-1d-I y rac-1d-N se confirmaron por experimento de efecto nuclear de Overhauser (nOe).
Etapa 5. Etil 8-fluoro-10-metoxi-11-(3-metoxipropoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-1,2,3,3a,7,12bhexahidrociclopenta[c]pirido[2.1-a]isoquinolina-6-carboxilato [1e-I] y [1e-II]
Figure imgf000044_0001
Bajo una atmósfera de argón, una mezcla de Mg (3,69 g, 152 mmol) y TMSCl (19,43 mL, 152 mmol) se trató con irradiación por ultrasonido por 15 min. A la mezcla se añadió DMF (30 mL)), etil (Z)-2-(etoximetileno)-4,4,4-trifluoro-3-oxobutanoato (4,56 g, 19mmol) se añadió en forma de gotas a 50 °C bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agitó por 3 min. adicionales a 50 °C. Después de retirar de exceso de TMSCl al vacío, la mezcla cruda se filtró y el filtrado (que contenía DMF) se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Figure imgf000044_0002
A una suspensión de Znl2 (920 mg, 2,88 mmol)) y 1d-I (915 mg, 2,88 mmol) en MeCN seco (10 mL), una solución de etil (Z)-2-(etoximetileno)-4,4-difluoro-3-((trimetilsilil)oxi)but-3-enoato (5091 mg, 17,30 mmol) crudo en DMF seco (30 mL) se añadió en forma de gotas a 50 °C, y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción se vertió en 10 % HCl y se extrajo con DCM. La capa orgánica se lavó con salmuera, y se secó sobre MgSO4. Después de la filtración, la capa orgánica se concentró y el aceite crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice (0-10 % MeOH/EtOAc) para proporcionar rac-le (1,2 g, 2,53 mmol, 88 % de rendimiento)) como un sólido amarillo pálido. El material luego se purificó por SFC quiral (Columna AD, velocidad de flujo 100ml/min, CO2/EtOH=70/30, 256 bar) para proporcionar los productos 1e-1 (tR 2,4 min) y 1e-2 (tR 4,4 min, 280 mg). LC-MS (m/z): 474,2 [M+H]+.
Etapa 6: ácido (3aS,12bR)-8-fluoro-10-metoxi-11-(3-metoxipropoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-1,2,3,3a,7,12bhexahidrociclopenta[c]pirido[2.1 -a]isoquinolina-6-carboxílico [3.1]
Figure imgf000044_0003
A la solución de 1e-2 (330 mg, 0,697 mmol) en THF (1 mL) se añadió NaOH (1,394 mL, 1,394 mmol). La mezcla de reacción se agitó por 2 h, luego la reacción se acidificó con 1,5 ml en HCl y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con salmuera, y se secó sobre MgSO4. Después de la filtración y concentración, el sólido resultante se recristalizó a partir de EtOH/Agua caliente (5ml; 5ml) y los sólidos se recogieron por filtración al vacío. El material se liofilizó adicionalmente a partir de MeCN y agua para dar el producto (230 mg, 0,511 mmol, 73,3 %) como un sólido canela. LC-MS (m/z): 446,4 [M+H]+. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 58,82 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 4,52 (d, J = 5,5 Hz, 1H),4,20 - 4,06 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,31 (dd, J = 15,9, 4,8 Hz, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,18 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 2,01 (p, J = 6,3 Hz, 2H), 1,57 - 1,50 (m, 1H), 0,87 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H). Para cada compuesto de Formula (I), se prefiere el enantiómero que tiene mayor potencia en la matriz HBsAg. Por analogía con otros compuestos que se cree que se unen en el mismo sitio diana, se creen que el isómero más potente en la matriz HBsAg en cada caso tiene una configuración estereoquímica absoluta que corresponde con estas estructuras:
Figure imgf000045_0001
donde el arco punteado indica que R7 y R9 tomados juntos forman un anillo como se describe para ciertos compuestos de Fórmula (I) y subestructuras de los mismos que se muestran en este documento.
Ejemplo 2.3:
Figure imgf000045_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(2-(2,2.2-trifluoroetoxi)etoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.3a]
Figure imgf000045_0003
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-(2-bromoetoxi)-1,1,1-trifluoroetano (21,71 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.3a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 508,5 [M+H]+, 0,88 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o - 10 -( 2 -( 2 ,2.2 - t r i f lu o r o e to x i)e t o x i) -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x íl ic o [2.3 ]
Figure imgf000046_0001
A 2.3a (21,32 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 8,2 mg del producto racémico deseado 2.3 como una sal de TFA en 32 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 480,4 [M+H]+, 0,89 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 2H), 6,84 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,06-5,22 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,30-4,38 (m, 2H), 4,20 (q, J=9,4 Hz, 2H), 3,99-4,06 (m, 2H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.4:
ácido
6-(terc-butil)-10-((1-(metoximetil)cidobutil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidm-2H-pirído[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxí ¡ico [2.4]
Figure imgf000046_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-((1-(metoximetil)ciclobutil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.4a]
Figure imgf000046_0003
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-(bromometil)-1-(metoximetil)ciclobutano (20,25 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.4a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 494,5 [M+H]+, 0,96 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((1-(metoximetil)ciclobutil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.4]
A 2,4a (20,73 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 4,0 mg del producto racémico deseado 2.4 como una sal de TFA en 16 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 466,5 [M+H]+, 1,00 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,19-7,27 (m, 2H), 6,87 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,17-5,25 (m, 1H), 5,05-5,13 (m, 1H), 4,94 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,05-4,18 (m, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,25 (s, 3H), 1,85-1,97 (m, 6H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.5:
ácido 6-(terc-butil)-10-(difluorometoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.5]
Figure imgf000047_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(difluorometoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.5a]
Figure imgf000047_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (77 mg, 0,236 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió etil 2-bromo-3,3-difluoropropanoato (41,0 mg, 0,189 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 20 horas, o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.5a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 432,5 [M+H]+, 0,91 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(difluorometoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.5]
Figure imgf000047_0003
A 2.5a (20,28 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 0,8 mg del producto racémico deseado 2.5 como una sal de TFA en 3 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 404,4 [M+H]+, 0,88 min. 1H NMR (<cdcl3>) 5: 8,58 (s, 1H), 7,74 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,35 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,18 (d, J=1,4 Hz, 1H), 6,81-7,17 (m, 1H), 5,22 (d, J=14,9 Hz, 1H), 4,96 (dd, J=14,9, 5,4 Hz, 1H), 4,26 (d, J=5,2 Hz, 1H), 0,85 (s, 9H)
Ejemplo 2.6:
ácido 6-(terc-butil)-10-((S)-2-metilbutoxi)-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2 "]':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.6]
Figure imgf000048_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-((S)-2-metilbutoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.6a]
Figure imgf000048_0002
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió (S)-1-bromo-2-metilbutano (15,84 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.6a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 452,5 [M+H]+, 1,01 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((S)-2-metilbutoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.6]
Figure imgf000048_0003
A 2.6a (18,97 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 6,5 mg del producto racémico deseado 2.6 como una sal de TFA en 26 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 424,5 [M+H]+, 1,05 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,28 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,16-5,24 (m, 1H), 5,05-5,14 (m, 1H), 4,94 (d, J=4,8 Hz, 1H), 3,88-4,10 (m, 2H), 1,83-1,98 (m, 1H), 1,50-1,66 (m, 1H), 1,20-1,33 (m, 1H), 1,01 (t, J=6,6 Hz, 3H), 0,92 (t, J=7,4 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.7:
Figure imgf000049_0001
Etapa 1: etil 10-(sec-butoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.7a]
Figure imgf000049_0002
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-bromobutano (14,37 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.7a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 438,5 [M+H]+, 0,92 min.
Etapa 2: 10-(sec-butoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico ácido [2.7]
Figure imgf000049_0003
A 2.7a (18,97 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 6,5 mg del producto racémico deseado 2.7 como una sal de TFA en 27 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 410,5 [M+H]+, 0,95 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,60 (dd, J=8,5, 1,8 Hz, 1H), 7,19-7,26 (m, 2H), 6,82 (dd, J=7,7, 3,0 Hz, 1H), 5,14-5,23 (m, 1H), 5,04-5,13 (m, 1H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,66 (dt, J=12,5, 6,2 Hz, 1H), 1,58-1,83 (m, 2H), 1,31 (dd, J=10,9, 6,0 Hz, 3H), 0,89-0,99 (m, 3H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.8:
E ta p a 1: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o -10 -( ( te t r a h id r o fu r a n o -3 - i l )m e t o x i) -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x ila to [2.8 a ]
Figure imgf000050_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió (tetrahidrofuran-3-il)metil 4-metilbencenosulfonato (24,19 mg, 0,094 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.8a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 466,5 [M+H]+, 0,79 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -3-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.8]
Figure imgf000050_0002
A 2.8a (21,88 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 3,7 mg del producto racémico deseado 2.8 como una sal de TFA en 13 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,83 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,30 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,5 Hz, 1H), 5,04-5,24 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,00-4,21 (m, 2H), 3,72-3,87 (m, 2H), 3,57-3,71 (m, 2H), 2,69-2,84 (m, 1H), 1,99-2,13 (m, 1H), 1,65-1,77 (m, 1H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.9:
ácido
6-(terc-butil)-2-oxo-10-(2-(trifluorometoxi)etoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.9] E ta p a 1: e til 6 -( te r c -b u t i l) - 2 -o x o - 10 -( 2 -( t r i f lu o r o m e to x i)e t o x i ) -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ] p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [2.9 a ]
Figure imgf000051_0001
A 2.1h (15 mg, 0,039 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (44,8 mg, 0,138 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-2-(trifluorometoxi)etano (18,97 mg, 0,098 mmol). La reacción se calentó hasta 50 °C y se agitó por 15 minutos o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.9a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 494,6 [M+H]+, 0,99 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(2-(trifluorometoxi)etoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.9]
Figure imgf000051_0002
A 2.9a (19,25 mg, 0,039 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (156 pl, 0,156 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,3 mg del producto racémico deseado 2.9 como una sal de TFA en 23 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 466,4 [M+H]+, 0,92 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,69 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,21-7,31 (m, 2H), 6,87 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,28 (m, 2H), 4,96 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,48 (br dd, J=18,4, 4,9 Hz, 4H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.10:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2.2-difluometoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2',1':3,4Jpirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.10]
E ta p a 1: etil 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 2.2 - d if lu o r o e to x i) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H - p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [2.10 a ]
Figure imgf000052_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2.2-difluoroetil trifluorometanosulfonato (25,3 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 50 °C y se agitó por 15 minutos o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.10a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 446,4 [M+H]+, 0,81 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(2.2-difluoroetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.10]
Figure imgf000052_0002
A 2.10a (20,94 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 3,6 mg del producto racémico deseado 2.10 como una sal de TFA en 14 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 418,4 [M+H]+, 0,84 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,72 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,21-7,32 (m, 2H), 6,92 (d, J=7,6 Hz, 1H), 6,35-6,65 (m, 1H), 5,05-5,27 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,51 (td, J=14,5, 3,4 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.11:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-propoxi-6,7-dihidro-2H-pirído[2'1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.11]
Figure imgf000052_0003
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-propoxi-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.11a] A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromopropano (14,51 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.11a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 424,5 [M+H]+, 0,89 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-propoxi-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.11]
Figure imgf000053_0001
A 2.11a (19,90 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,4 mg del producto racémico deseado 2.11 como una sal de TFA en 22 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 396,4 [M+H]+, 0,92 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,29 (m, 2H), 6,81 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,22 (m, 2H), 4,94 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,02-4,16 (m, 2H), 1,75-1,88 (m, 2H), 1,02 (t, J=7,4 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.12:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2-oxo-6,7-dihidm-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.12]
Figure imgf000053_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.12a]
Figure imgf000053_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-2-(2-metoxietoxi)etano (21,60 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.12a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 484,5 [M+H]+, 0,77 min.
E ta p a 2: á c id o 6 -( te r c -b u t i l ) - 10 -( 2 -( 2 -m e to x ie to x i )e t o x i ) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l - 3 -c a rb o x íl ic o [2.12 ]
Figure imgf000054_0001
A 2.12a (22,73 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 6,6 mg del producto racémico deseado 2.12 como una sal de TFA en 24 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 456,5 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,65 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,25 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,23-4,34 (m, 2H), 3,79-3,88 (m, 2H), 3,61 (dd, J=5,6, 3,8 Hz, 2H), 3,47 (dd, J=5,6, 3,8 Hz, 2H), 3,23 (s, 3H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.13:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2,3-dimetoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidm-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.13]
Figure imgf000054_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2,3-dimetoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.13a]
Figure imgf000054_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-2,3-dimetoxipropano (21,60 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.13a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 484,5 [M+H]+, 0,78 min.
E ta p a 2: á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 2 ,3 - d im e to x ip r o p o x i) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H - p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l-3 -c a rb o x íl ic o [2.13 ]
Figure imgf000055_0001
A 2.13a (20,94 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,6 mg del producto racémico deseado 2.13 como una sal de TFA en 21 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 456,5 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,65 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,14-7,29 (m, 2H), 6,84 (dd, J=7,6, 4,0 Hz, 1H), 5,03-5,25 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,11-4,31 (m, 2H), 3,76 (br t, J=4,5 Hz, 1H), 3,47-3,62 (m, 2H), 3,40 (d, J=3,6 Hz, 3H), 3,28 (s, 3H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.14:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-etoxipmpoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2',V:3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.14]
Figure imgf000055_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(3-etoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.14a]
Figure imgf000055_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-3-etoxipropano (19,71 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.14a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 468,5 [M+H]+, 0,86 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 3 -e to x ip r o p o x i) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l -3 -c a rb o x íl ic o [2.14 ]
Figure imgf000056_0001
A 2.14a (21,98 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 6,2 mg del producto racémico deseado 2.14 como una sal de TFA en 23 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 440,5 [M+H]+, 0,90 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,29 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,20 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,55 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,42 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,04 (quin, J=6,3 Hz, 2H), 1,09 (t, J=7,0 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.15:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-isopropoxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidm-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.15]
Figure imgf000056_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-isopropoxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.15a]
Figure imgf000056_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-(2-bromoetoxi)propano (19,71 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.15a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 468,5 [M+H]+, 0,87 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c -b u t i l ) - 10 -( 2 - is o p r o p o x ie to x i) -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p i r id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l- 3 -c a rb o x íl ic o [2.15 ]
Figure imgf000057_0001
A 2.15a (20,94 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 4,5 mg del producto racémico deseado 2.15 como una sal de TFA en 17 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 440,5 [M+H]+, 0,91 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,28 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,06-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,21-4,30 (m, 2H), 3,74-3,82 (m, 2H), 3,66 (dt, J=12,2, 6,1 Hz, 1H), 1,11 (d, J=6,1 Hz, 6H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.16:
ácido 6-(terc-butil)-10-isobutoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.16]
Figure imgf000057_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-isobutoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.16a]
Figure imgf000057_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-2-metilpropano (16,17 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.16a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 438,5 [M+H]+, 0,95 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 - is o b u to x i-2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x í l ic o [2.16 ]
Figure imgf000058_0001
A 2.16a (20,56 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,2 mg del producto racémico deseado 2.16 como una sal de TFA en 21 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 410,5 [M+H]+, 1,00 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,14-7,29 (m, 2H), 6,81 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,29 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 3,77-4,04 (m, 2H), 2,12 (dt, J=13,3, 6,6 Hz, 1H), 1,02 (dd, J=6,5, 4,9 Hz, 6H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.17:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-hidroxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.17]
Figure imgf000058_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(3-hidroxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.17a]
Figure imgf000058_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-bromopropan-1-ol (16,40 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, se añadió 0,5 ml de DMF. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa, las fracciones deseadas se recogieron, 0,04 ml de 6M HCl se añadió y se liofilizó para dar 9,4 mg del producto racémico deseado 2.17a como sal de HCl en 42 % de rendimiento usado, tal cual. LC-MS (m/z): 440,5 [M+H]+, 0,70 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c -b u t i l) - 10 -( 3 -h id r o x ip r o p o x i) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l- 3 -c a rb o x íl ic o [2.17 ]
Figure imgf000059_0001
A 2.17a (9,4 mg, 0,021 mmol) se disolvió en 1 ml de DMF, luego se añadió LiOH 1M ac. (86 pl, 0,086 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. El crudo se purificó por LC preparativa de fase inversa, las fracciones deseadas se recogieron, 0,04 ml de 6M HCl se añadió y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua, se añadió 0,02 ml de 6M HCl adicional y se liofilizó nuevamente. Luego la muestra se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 3,2 mg del producto racémico deseado 2.17 como sal de HCl en 31 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+, 0,71 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,28 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,24 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,22 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,60 (t, J=6,2 Hz, 2H), 1,95 (quin, J=6,2 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.18:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-hidroxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.18]
Figure imgf000059_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-hidroxietoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.18a]
Figure imgf000059_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-bromoetanol (14,74 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, se añadió 0,5 ml de DMF. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa, las fracciones deseadas se recogieron, 0,04 ml de 6M HCl se añadió y se liofilizó para dar 7,0 mg del producto racémico deseado 2.18a como sal de HCl en 32 % de rendimiento usado, tal cual. LC-Ms (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,68 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 2 -h id r o x ie to x i) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l- 3 -c a rb o x íl ic o [2.18 ]
Figure imgf000060_0001
A 2.18a (7,0 mg, 0,016 mmol) se disolvió en 1 ml de DMF, luego se añadió LiOH 1M ac. (0,066 mL, 0,066 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. El crudo se purificó por LC preparativa de fase inversa, las fracciones deseadas se recogieron, 0,04 ml de 6M HCl se añadió y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua, se añadió 0,02 ml de 6M HCl adicional y se liofilizó nuevamente. Luego la muestra se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 2,3 mg del producto racémico deseado 2.18 como sal de HCl en 29 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 398,4 [M+H]+, 0,69 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,16-7,29 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,07-5,20 (m, 2H), 4,96 (br d, J=3,8 Hz, 1H), 4,17 (t, J=4,9 Hz, 2H), 3,81 (br t, J=4,9 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.19:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(3-(trifluorometoxi)propoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.19]
Figure imgf000060_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(3-(trifluorometoxi)propoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.19a]
Figure imgf000060_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-3-(trifluorometoxi)propano (24,42 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.19a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 508,6 [M+H]+, 1,02 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o -10 -(3 -( t r i f lu o r o m e to x i)p r o p o x i) -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x íl ic o [2.19 ]
Figure imgf000061_0001
A 2.19a (23,85 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 10,6 mg del producto racémico deseado 2.19 como una sal de TfA en 37 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 480,4 [M+H]+, 0,97 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17-7,31 (m, 2H), 6,86 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,21-4,35 (m, 4H), 2,22 (br t, J=6,2 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.20:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(2-(2-oxopirrolidin-1-il)etoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.20]
Figure imgf000061_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(2-(2-oxopirrolidin-1-il)etoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.20a]
Figure imgf000061_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-(2-bromoetil)pirrolidin-2-ona (22,66 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 7 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.20a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 493,5 [M+H]+, 0,93 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o - 10 -( 2 -( 2 -o x o p ir r o l id in -1 - i l )e t o x i) -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x íl ic o [2.20 ]
Figure imgf000062_0001
A 2.20a (23,15 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 7,4 mg del producto racémico deseado 2.20 como una sal de TFA en 27 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 465,4 [M+H]+, 0,73 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,29 (m, 2H), 6,86 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,07-5,24 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,2 Hz, 1H), 4,28 (t, J=5,6 Hz, 2H), 3,58-3,68 (m, 2H), 3,47-3,55 (m, 2H), 2,13-2,26 (m, 2H), 1,90 (quin, J=7,5 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.21:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-(2-metoxietoxi)propoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2', 1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.21]
Figure imgf000062_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(3-(2-metoxietoxi)propoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.21a]
Figure imgf000062_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-3-(2-metoxietoxi)propano (23,25 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 7 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.21a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 498,6 [M+H]+, 0,88 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 3 -( 2 -m e to x ie to x i)p r o p o x i ) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ] p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x íl ic o [2.21 ]
Figure imgf000063_0001
A 2.21a (23,39 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 12,5 mg del producto racémico deseado 2.21 como una sal de TfA en 44 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 470,5 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17-7,28 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,25 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,20 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,59 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,49-3,54 (m, 2H), 3,40-3,44 (m, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,04 (quin, J=6,2 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.22:
ácido 10-((1,4-dioxan-2-il)metoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirído[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.22]
Figure imgf000063_0002
Etapa 1: etil 10-((1,4-dioxan-2-il)metoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.22a]
Figure imgf000063_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió (1,4-dioxan-2-il)metil metanosulfonato (23,15 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.22a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 482,4 [M+H]+, 0,76 min.
E ta p a 2 : á c id o 10 -( (1,4 -d io x a n - 2 - i l )m e to x i ) -6 -( t e r c -b u t i l ) - 2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l -3 -c a rb o x íl ic o [2.22 ]
Figure imgf000064_0001
A 2,22a (22,63 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó. El producto crudo se disolvió nuevamente en 1 ml de DMF y se purificó nuevamente por LC preparativa de fase inversa, y se liofilizó para dar 6,2 mg del producto racémico deseado 2.22 como una sal de TFA en 22 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 454,6 [M+H]+, 0,86 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,29 (m, 2H), 6,83 (d, J=6,7 Hz, 1H), 5,16-5,25 (m, 1H), 5,05-5,15 (m, 1H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,11-4,18 (m, 2H), 3,91-4,04 (m, 1H), 3,82-3,91 (m, 1H), 3,75-3,82 (m, 1H), 3,61-3,71 (m, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.23:
ácido 6-(terc-butil)-10-(carboximetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.23]
Figure imgf000064_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-metoxi-2-oxoetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.23a]
Figure imgf000064_0003
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió metil 2-bromoacetato (16,04 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 50 °C y se agitó por 1 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.23a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 454,4 [M+H]+, 0,76 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( c a r b o x im e to x i) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o - 2 H -p i r id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l- 3 -c a rb o x íl ic o [2.23 ]
Figure imgf000065_0001
A 2.23a (19,05 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 8,0 mg del producto racémico deseado 2.23 como una sal de TFA en 36 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+, 0,68 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 13,10 (br s, 1H), 8,95 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,22 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,74 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,13 (d, J=2,3 Hz, 2H), 4,96 (br s, 1H), 4,89 (s, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.24:
ácido 6-(terc-butil)-10-((1-((metilsulfonil)metil)ciclopropil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.24]
Figure imgf000065_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-((1 -((metilsulfonil)metil)ciclopropil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.24a]
Figure imgf000065_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-(bromometil)-1-((metilsulfonil)metil)ciclopropano (26,8 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.24a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 528,5 [M+H]+, 0,85 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((1 -((metilsulfonil)metil)ciclopropil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.24]
Figure imgf000066_0001
A 2.24a (24,80 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 2,4 mg del producto racémico deseado 2.24 como una sal de TFA en 8 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 500,4 [M+H]+, 0,78 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,65 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,17-7,29 (m, 2H), 6,75 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,17-5,28 (m, 1H), 5,05-5,15 (m, 1H), 4,96 (br d, J=4,8 Hz, 1H), 4,26 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,07 (d, J=9,9 Hz, 1H), 3,01 (s, 3H), 0,78-0,93 (m, 4H), 0,70 (s, 9H).
Ejemplo 2.25:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.25]
Figure imgf000066_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.25a]
Figure imgf000066_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-(bromometil)tetrahidrofurano (19,47 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.25a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 466,5 [M+H]+, 0,90 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o - 10 -( ( te t r a h id r o fu r a n o -2 - i l )m e t o x i) -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x íl ic o [2.25 ]
Figure imgf000067_0001
A 2.25a (21,88 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 7,6 mg del producto racémico deseado 2.25 como una sal de TFA en 29 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,84 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,14-7,30 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,03-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,20-4,33 (m, 1H), 4,05-4,19 (m, 2H), 3,80 (qd, J=7,1, 3,5 Hz, 1H), 3,64-3,74 (m, 1H), 1,98-2,11 (m, 1H), 1,78-1,97 (m, 2H), 1,66-1,75 (m, 1H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.26:
ácido 6-(terc-butil)-10-(oxetan-3-iloxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.26]
Figure imgf000067_0002
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(oxetan-3-iloxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.26a]
Figure imgf000067_0003
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-bromooxetano (16,16 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.26a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 438,5 [M+H]+, 0,81 min.
E ta p a 2 : á c id o 6 -( te r c -b u t i l ) - 10 -( o x e ta n -3 - i lo x i ) -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H - p ir id o [2 ',1 ': 3 ,4 ] p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l -3 -c a rb o x íl ic o [2.26 ]
Figure imgf000068_0001
A 2,26a (20,56 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,4 mg del producto racémico deseado 2.26 como una sal de TFA en 21 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 410,4 [M+H]+, 0,74 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,70 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,20 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,50 (d, J=7,5 Hz, 1H), 5,48 (br t, J=5,4 Hz, 1H), 5,06-5,24 (m, 2H), 4,99 (dt, J=11,9, 5,9 Hz, 3H), 4,64 (ddd, J=11,6, 7,0, 5,1 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.27:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(piperídin-4-iloxi)-6,7-dihidm-2H-pirído[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.27]
Figure imgf000068_0002
Etapa 1: etil 10-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)oxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.27a]
Figure imgf000068_0003
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió terc-butil 4-bromopiperidina-1-carboxilato (27,7 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 10 ml de acetato de etilo se añadió, se lavó con agua 2x, se filtró y se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.27a usado, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. Lc -MS (m/z): 565,6 [M+H]+, 0,98 min.
E ta p a 2 : e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 2 -o x o - 10 -( p ip e r id in -4 - i lo x i ) -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [2.27 b ]
Figure imgf000069_0001
A 2.27a (23,69 mg, 0,042 mmol) se añadió DCM (Volumen: 1,8 mL, Relación: 3,60), TFA (0,355 mL, 4,61 mmol) y se agitó a temperatura ambiente por 1 horas, o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.27b usado, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 465,5 [M+H]+, 0,61 min.
Etapa 3: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(piperidin-4-iloxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.27]
Figure imgf000069_0002
A 2.27b (19,51 mg, 0,042 mmol) se añadió 1 ml de DMF y LiOH 1M ac. (0,294 mL, 0,294 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 3,4 mg del producto racémico deseado 2.27 como una sal de TFA en 14 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 437,5 [M+H]+, 0,64 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,96 (s, 1H), 8,50 (br s, 2H), 7,69 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,15-7,31 (m, 2H), 6,97 (d, J=7,7 Hz, 1H), 5,12 (br s, 2H), 4,95 (br s, 1H), 4,89-4,93 (m, 1H), 3,12 (br s, 2H), 2,17 (br s, 2H), 1,83-1,97 (m, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.28:
E ta p a 1: e til 6 -( te r c -b u t i l ) - 10 -( (2.2 -d im e t i l - 1.3 -d io x o la n -4 - i l )m e to x i ) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o - 2 H -p i r id o [2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x ila to [2.28 a ]
Figure imgf000070_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 4-(bromometil)-2.2-dimetil-1.3-dioxolano (23,01 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.28a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 496,4 [M+H]+, 0,84 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(2,3-dihidroxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.28]
Figure imgf000070_0002
A 2.28a (23,29 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Lc -MS (m/z): 468,4 [M+H]+, 0,89 min. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa usando ACN/agua con 0,1 % TFA. Las fracciones deseadas (in ACN/agua con 0,1 % TFA) combinaron y se dejaron asentar a temperatura ambiente por 20 horas para dar el producto desprotegido deseado, seguido por Lc Ms . Luego 0,2 ml de 3M HCl solución se añadió y se liofilizó. El producto se disolvió nuevamente en 1:1 ACN/agua y se liofilizó nuevamente para dar 7,0 mg del producto racémico deseado 2.28 como sal de HCl en 31 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 428,4 [M+H]+, 0,63 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,29 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,24 (m, 2H), 4,96 (br d, J=4,5 Hz, 1H), 4,17 (dt, J=9,8, 3,6 Hz, 1H), 3,99-4,09 (m, 1H), 3,90 (br s, 1H), 3,49 (br d, J=5,6 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.29:
ácido 6-(terc-butil)-10-ciclobutoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.29] E ta p a 1: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -c ic lo b u to x i-2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [2.29 a ]
Figure imgf000071_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió bromociclobutano (15,93 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.29a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 436,4 [M+H]+, 0,91 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-ciclobutoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.29]
Figure imgf000071_0002
A 2.29a (20,47 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 2,0 mg del producto racémico deseado 2.29 como una sal de TFA en 8 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 408,4 [M+H]+, 0,94 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,20 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,66 (d, J=7,5 Hz, 1H), 5,04-5,20 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,89 (quin, J=7,1 Hz, 1H), 2,07-2,20 (m, 2H), 1,83 (q, J=10,2 Hz, 1H), 1,61-1,75 (m, 1H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.30:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-(metilsulfonil)propoxi)-2-oxo-6, 7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.30]
E ta p a 1: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 3 -( m e t i ls u lfo n i l )p r o p o x i) -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p i r id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [2.30 a ]
Figure imgf000072_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-3-(metilsulfonil)propano (23,72 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.30a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 502,4 [M+H]+, 0,71 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(3-(metilsulfonil)propoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.30]
Figure imgf000072_0002
A 2.30a (23,57 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 11,3 mg del producto racémico deseado 2.30 como una sal de TfA en 40 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 474,3 [M+H]+, 0,72 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,30 (m, 2H), 6,83 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,25 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,24-4,36 (m, 2H), 3,30-3,35 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 2,18-2,32 (m, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.31:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.31] E ta p a 1: etil 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 3 -m e t o x ip r o p o x i) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p i r a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [2.31 a ]
Figure imgf000073_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-3-metoxipropano (18,05 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.31a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 454,5 [M+H]+, 0,82 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.31]
Figure imgf000073_0002
A 2.31a (21,32 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 9,3 mg del producto racémico deseado 2.31 como una sal de TFA en 36 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,83 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,13-7,30 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,26 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,20 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,04 (t, J=6,3 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.32:
ácido 10-(azeiidin-3-ilmeioxi)-6-(ierc-buiil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.32]
Etapa 1: etil 10-((1 -(terc-butoxicarbonil)azetidin-3-il)metoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.32a]
Figure imgf000074_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió terc-butil 3-(bromometil)azetidina-1-carboxilato (29,5 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 15 ml de acetato de etilo se añadió, se lavó con agua 2x, solución de sal saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 2.32a usado, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 551,7 [M+H]+, 1,01 min.
Etapa 2: etil 10-(azetidin-3-ilmetoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.32b]
Figure imgf000074_0002
A 2.32a (26,0 mg, 0,047 mmol) se añadió DCM (Volumen: 2 mL, Relación: 4,00) ácido trifluoroacético (0,4 mL, 5,19 mmol) y se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo. El crudo se disolvió en 1 ml de DMF y se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 13,5 mg del producto deseado 2.32b en 64 % de rendimiento, usado, tal cual, para la siguiente etapa. LC-MS (m/z): 451,4 [M+H]+, 0,61 min.
Etapa 3: ácido 10-(azetidin-3-ilmetoxi)-6-(terc-butil)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.32]
Figure imgf000074_0003
A 2.32b (13,5 mg, 0,030 mmol) se añadió 1 ml de DMF y LiOH 1M ac. LiOH (0,120 mL, 0,120 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 6,6 mg del producto racémico deseado 2.32 como una sal de TFA en 40 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 423,4 [M+H]+, 0,62 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,97 (s, 1H), 8,71 (br d, J=15,6 Hz, 2H), 7,70 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,21-7,33 (m, 2H), 6,88 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,12 (br s, 2H), 4,96 (br s, 1H), 4,37 (br d, J=6,6 Hz, 2H), 4,11 (br s, 2H), 3,91 (br d, J=5,9 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.33:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((S)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.33-1] y [2.33-11]
Figure imgf000075_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((S)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.33a]
Figure imgf000075_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió (S)-5-(bromometil)pirrolidin-2-ona (21,00 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.33a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 479,4 [M+H]+, 0,71 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((S)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.33-1] y [2.33-II]
Figure imgf000075_0003
A 2.33a (22,49 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa, usando una columna Sunfire C18 OBD, que eluyó con ACN/agua con 0,1 % TFA, resultando en el producto deseados 2.33-I (pico 1, tR 5,97 min.) a 3,3 mg en 12 % de rendimiento y el producto 2.33-II (pico 2, tR 6,16 min.) a 2,5 mg en 9 % de rendimiento, ambos como sales de TFA. 2.33-I LC-MS (m/z): 451,4 [M+H]+, 0,70 min. 1H Nm R (DMsO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,30 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,21 (m, 2H), 4,95 (br d, J=4,2 Hz, 1H), 4,12 (d, J=4,9 Hz, 2H), 3,97 (br dd, J=7,5, 4,5 Hz, 1H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,08-2,26 (m, 2H), 1,90-2,01 (m, 1H), 0,69 (s, 9H). 2.33-II LC-MS (m/z): 451,4 [M+H]+, 0,71 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,96 (s, 1 H) 7,84 (s, 1 H) 7,67 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,20 - 7,30 (m, 2 H) 6,86 (d, J=7,58 Hz, 1 H) 5,07 - 5,22 (m, 2 H) 4,95 (br d, J=4,55 Hz, 1 H) 4,06 -4,18 (m, 2 H) 3,97 (br dd, J=7,51,4,77 Hz, 1 H) 2,28 -2,39 (m, 2 H) 2,08 -2,23 (m, 2 H) 1,94 (dt, J=16,81,4,90 Hz, 1 H) 0,69 (s, 9 H)
Ejemplo 2.34:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((R)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.34-1] y [2.34-II]
Figure imgf000076_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((R)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.34a]
Figure imgf000076_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió (R)-5-(bromometil)pirrolidin-2-ona (21,00 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.34a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 479,4 [M+H]+, 0,70 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(((R)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.34-1] y [2.34-II]
Figure imgf000076_0003
A 2.34a (22,49 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa, usando una columna Sunfire C18 OBD, que eluyó con ACN/agua con 0,1 % TfA, resultando en el producto deseado 2.34-I (pico 1, tR 5,86 min.) a 4,0 mg en 15 % de rendimiento y el producto 2.34-II (pico 2, tR 6,09 min.) a 3,4 mg en 13 % de rendimiento, ambos como sales de TFA. 2.34-I LC-MS (m/z): 451,4 [M+H]+, 0,70 min. 1H n Mr (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17-7,28 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,06-5,20 (m, 2H), 4,95 (br d, J=4,2 Hz, 1H), 4,12 (d, J=4,9 Hz, 2H), 3,97 (br dd, J=7,7, 4,5 Hz, 1H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,08-2,26 (m, 2H), 1,89-2,01 (m, 1H), 0,69 (s, 9H). 2.34-II LC-MS (m/z): 451,4 [M+H]+, 0,71 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,96 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,33 (m, 2H), 6,86 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,03-5,24 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,07-4,23 (m, 2H), 3,97 (br dd, J=7,3, 4,5 Hz, 1H), 2,29-2,39 (m, 1H), 2,08-2,24 (m, 2H), 1,86-2,00 (m, 1H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.35:
ácido 6-(terc-butil)-10-((1-metoxipropan-2-il)oxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.35-I] y [2.35-IIJ
Figure imgf000077_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-((1-metoxipropan-2-il)oxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.35a]
Figure imgf000077_0002
A 2.1h (16 mg, 0,042 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (47,8 mg, 0,147 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-bromo-1-metoxipropano (16,05 mg, 0,105 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.35a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 454,5 [M+H]+, 0,81 min.
Etapa 2: 6-(terc-butil)-10-((1-metoxipropan-2-il)oxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico ácido [2.35-1] y [2.35-II]
Figure imgf000077_0003
A 2.35a (19,05 mg, 0,042 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (168 pl, 0,168 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa, usando una columna Sunfire C18 OBD, que eluyó con ACN/agua con 0,1 % TFA, resultando en el producto deseados 2.35-I (pico 1, tR 5,50 min.) a 3,0 mg en 13 % de rendimiento y el producto 2.35-II (pico 2, tR 5,67 min.) a 3,0 mg en 13 % de rendimiento, ambos como sales de TFA. 2.35-I LC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,93 (s, 1H), 7,61 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,28 (m, 2H), 6,85-6,92 (m, 1H), 5,13-5,22 (m, 1H), 5,03-5,12 (m, 1H), 4,94 (br d, J=4,7 Hz, 1H), 4,88-4,93 (m, 1H), 3,49-3,61 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 1,28 (d, J=6,2 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H). 2.35-II LC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+, 0,85 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,93 (s, 1H), 7,61 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,18-7,27 (m, 2H), 6,85-6,91 (m, 1H), 5,14-5,20 (m, 1H), 5,05-5,13 (m, 1H), 4,94 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,87-4,93 (m, 1H), 3,49-3,61 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 1,30 (d, J=6,2 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.36:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-(dimetilamino)-2-oxoetoxi)-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.36]
Figure imgf000078_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-(dimetilamino)-2-oxoetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.36a]
Figure imgf000078_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 2-bromo-N,N-dimetilacetamida (19,59 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.36a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 467,5 [M+H]+, 0,70 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(2-(dimetilamino)-2-oxoetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.36]
Figure imgf000078_0003
A 2.36a (21,93 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 9,7 mg del producto racémico deseado 2.36 como una sal de TFA en 36 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 439,4 [M+H]+, 0,70 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,65 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,21 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,74 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,08-5,19 (m, 2H), 5,00 (d, J=1,7 Hz, 2H), 4,96 (br d, J=2,2 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.37:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -3-il)oxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.37]
Figure imgf000079_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -3-il)oxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.37a]
Figure imgf000079_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-bromotetrahidrofurano (17,81 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.37a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 452,4 [M+H]+, 0,75 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidrofurano -3-il)oxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.37]
Figure imgf000079_0003
A 2.37a (21,22 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 7,5 mg del producto racémico deseado 2.37 como una sal de TFA en 29 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 424,4 [M+H]+, 0,77 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,94 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,16-7,29 (m, 2H), 6,80 (dd, J=7,5, 4,8 Hz, 1H), 5,25 (br s, 1H), 5,05-5,22 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 3,83-4,00 (m, 3H), 3,78 (tt, J=8,4, 4,3 Hz, 1H), 2,23-2,37 (m, 1H), 1,95-2,16 (m, 1H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.38:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oxi)-6J-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.38]
Figure imgf000080_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.38a]
Figure imgf000080_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 4-bromotetrahidro-2H-piran (19,47 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 20 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.38a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 466,5 [M+H]+, 0,79 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)oxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.38]
Figure imgf000080_0003
A 2.38a (21,88 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 8,1 mg del producto racémico deseado 2.38 como una sal de TFA en 31 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,64 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,16-7,29 (m, 2H), 6,94 (d, J=7,7 Hz, 1H), 5,05-5,25 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,79-4,91 (m, 1H), 3,89 (ddt, J=11,7, 7,9, 4,0 Hz, 2H), 3,46-3,58 (m, 3H), 2,06 (br dd, J=9,9, 4,9 Hz, 2H), 1,67 (ddd, J=13,1, 9,1,3,7 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.39:
ácido 6-(terc-butil)-10-((3,3-difluorociclobutil)metoxi)-2-oxo-6, 7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.39]
Figure imgf000081_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-((3,3-difluorociclobutil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.39a]
Figure imgf000081_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-(bromometil)-1,1-difluorocidobutano (21,83 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.39a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 486,4 [M+H]+, 0,92 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((3,3-difluorociclobutil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.39]
Figure imgf000081_0003
A 2.39a (22,82 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 9,1 mg del producto racémico deseado 2.39 como una sal de TFA en 33 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 458,4 [M+H]+, 0,94 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,66 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,32 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,05-5,29 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,14-4,32 (m, 2H), 2,61-2,86 (m, 3H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.40:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(3,3,3-trifluoropropoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.40]
Figure imgf000082_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(3,3,3-trifluoropropoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.40a]
Figure imgf000082_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-bromo-1,1,1-trifluoropropano (50,1 mg, 0,283 mmol). La reacción se calentó hasta 85 °C y se agitó por 40 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.40a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 478,4 [M+H]+, 0,89 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-(3,3,3-trifluoropropoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.40]
Figure imgf000082_0003
A 2.40a (22,44 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 2,0 mg del producto racémico deseado 2.40 como una sal de TFA en 7 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 450,3 [M+H]+, 0,91 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1H), 7,69 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,34 (m, 2H), 6,90 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,06-5,24 (m, 2H), 4,95 (br d, J=4,7 Hz, 1H), 4,41 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,90 (tt, J=11,5, 5,6 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.41:
ácido 6-(terc-butil)-10-(2-fluometoxi)-2-oxo-6J-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.41]
Figure imgf000083_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-(2-fluoroetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.41a]
Figure imgf000083_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-bromo-2-fluoroetano (14,98 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.41a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 428,4 [M+H]+, 0,77 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(2-fluoroetoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.41]
Figure imgf000083_0003
A 2.41a (20,09 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 9,5 mg del producto racémico deseado 2.41 como una sal de TFA en 39 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 400,3 [M+H]+, 0,79 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,12-7,34 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,06-5,25 (m, 2H), 4,96 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,87-4,93 (m, 1H), 4,72-4,81 (m, 1H), 4,43-4,50 (m, 1H), 4,36-4,42 (m, 1H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.42:
ácido 6-(terc-butil)-10-etoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.42]
Figure imgf000084_0001
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-etoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.42a]
Figure imgf000084_0002
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió bromoetano (12,86 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.42a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 410,4 [M+H]+, 0,82 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-etoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido [2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.42]
Figure imgf000084_0003
A 2.42a (19,25 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 7,2 mg del producto racémico deseado 2.42 como una sal de TFA en 29 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 382,4 [M+H]+, 0,87 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,94 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,16-7,30 (m, 2H), 6,80 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,04-5,23 (m, 2H), 4,95 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,20 (q, J=7,0 Hz, 2H), 1,42 (t, J=6,9 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H) Ejemplo 2.43:
ácido 6-(terc-butil)-10-(3-(dimetilamino)pmpoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.43]
E ta p a 1: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( 3 -( d im e t i la m in o ) p r o p o x i) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o - 2 H -p ir id o [ 2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l- 3 -c a rb o x ila to [2.43 a ]
Figure imgf000085_0001
A 2.1h (22 mg, 0,058 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (56,4 mg, 0,173 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-bromo-N,N-dimetilpropan-1-amina (14,37 mg, 0,087 mmol). La reacción se calentó hasta 50 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 17 mg del producto racémico deseado 2.43a como una sal de TFA en 63 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 467,5 [M+H]+, 0,62 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-(3-(dimetilamino)propoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.43]
Figure imgf000085_0002
A 2.43a (17 mg, 0,036 mmol) se añadió 1 ml de DMF y LiOH 1M ac. (0,146 mL, 0,146 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 9,0 mg del producto racémico deseado 2.43 como una sal de TFA en 43 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 439,4 [M+H]+, 0,62 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 9,47 (br s, 1H), 8,97 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,20-7,32 (m, 2H), 6,85 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,11 (br s, 2H), 4,96 (br s, 1H), 4,25 (br t, J=5,4 Hz, 2H), 3,24-3,30 (m, 2H), 2,84 (d, J=4,0 Hz, 6H), 2,21 (br dd, J=9,2, 6,1 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 2.44:
ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metoxi)-6J-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.44]
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.44a]
Figure imgf000086_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 4-(bromometil)tetrahidro-2H-piran (21,12 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.44a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 480,4 [M+H]+, 0,84 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-2-oxo-10-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metoxi)-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.44]
Figure imgf000086_0002
A 2.44a (22,54 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 8,6 mg del producto racémico deseado 2.44 como una sal de TFA en 32 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 452,4 [M+H]+, 0,86 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,95 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 2H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,16-5,24 (m, 1H), 5,04-5,15 (m, 1H), 4,95 (d, J=4,8 Hz, 1H), 3,97-4,11 (m, 2H), 3,89 (br dd, J=11,2, 2,8 Hz, 2H), 2,07-2,16 (m, 1H), 1,72 (br t, J=14,6 Hz, 2H), 1,31-1,46 (m, 2H), 0,69 (s, 9H)
Ejemplo 2.45:
ácido 6-(terc-butil)-10-((3-metibxetan-3-il)metoxi)-2-oxo-6J-dihidm-2H-pirído[2'1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.45]
E ta p a 1: e til 6 -( te r c -b u t i l ) - 10 -( (3 - m e t i lo x e ta n -3 - i l )m e t o x i ) -2 - o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [ 2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l -3 -c a rb o x ila to [2.45 a ]
Figure imgf000087_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 3-(bromometil)-3-metiloxetano (19,47 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.45a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 466,4 [M+H]+, 0,79 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((3-metiloxetan-3-il)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.45]
Figure imgf000087_0002
A 2.45a (21,88 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 1,0 mg del producto racémico deseado 2.45 como una sal de TFA en 4 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (DMSO-da) 5: 8,96 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,19-7,31 (m, 2H), 6,90 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,24 (br d, J=14,9 Hz, 1H), 5,09 (br dd, J=14,7, 5,2 Hz, 1H), 4,95 (br d, J=5,0 Hz, 1H), 4,54 (t, J=5,5 Hz, 2H), 4,35 (dd, J=5,8, 3,1 Hz, 2H), 4,17-4,31 (m, 2H), 1,42 (s, 3H), 0,70 (s, 9H).
Ejemplo 2.46:
ácido 6-(terc-butil)-10-((1-cyanocicbpmpil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.46]
E ta p a 1: e til 6 -( te r c - b u t i l ) - 10 -( ( l - c y a n o c ic lo p r o p il )m e to x i) -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ': 3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [2.46 a ]
Figure imgf000088_0001
A 2.1h (18 mg, 0,047 mmol) se añadió DMF (Volumen: 0,5 mL) y carbonato de cesio (53,8 mg, 0,165 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego se añadió 1-(bromometil)ciclopropanocarbonitrilo (18,88 mg, 0,118 mmol). La reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, 0,5 ml de DMF se añadió, luego se filtró a través de a 0,45 nM en filtro lineal. La solución de DMF con el producto deseado 2.46a se usó, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 461,4 [M+H]+, 0,80 min.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-((1-cyanociclopropil)metoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.46]
Figure imgf000088_0002
A 2.46a (21,64 mg, 0,047 mmol) que ya estaba en 1 ml de DMF se añadió LiOH 1M ac. (188 pl, 0,188 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 30 minutos o hasta que se terminó con LCMS. Se puede añadir LiOH 1M ac. adicional según se necesite. La reacción cruda se purificó por LC preparativa de fase inversa y se liofilizó para dar 5,8 mg del producto racémico deseado 2.46 como una sal de TFA en 22 % de rendimiento. lC-MS (m/z): 433,4 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,95 (s, 1 H) 7,70 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,17 - 7,31 (m, 2 H) 6,79 (d, J=7,58 Hz, 1 H) 5,21 - 5,32 (m, 1 H) 5,06 - 5,18 (m, 1 H) 4,97 (d, J=4,99 Hz, 1 H) 4,10 - 4,33 (m, 2 H) 1,36 - 1,49 (m, 2 H) 1,13 - 1,29 (m, 2 H) 0,70 (s, 9 H).
Ejemplo 2.47:
ácido 6-(terc-butil)-10-isopropoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2'1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.47-I] y [2.47-11]
Etapa 1: etil 6-(terc-butil)-10-isopropoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [2.47a-I] y [2.47a-II]
Figure imgf000089_0001
A 2.1h (250 mg, 0,655 mmol) se añadió DMF (Volumen: 5 mL) y carbonato de cesio (641 mg, 1,966 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 10 minutos luego 2-bromopropano (161 mg, 1,311 mmol) se añadió y la reacción se calentó hasta 70 °C y se agitó por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió, se diluyó con 100 ml de DCM con 3 % etanol, se lavó con agua 3x, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice, usando 0-85 % EtOAc(con 25 % etanol)/heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 234 mg del producto racémico deseado 2.47a en 84 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 424,6 [M+H]+, 0,94 min. 1H NMR (DMSO-d6) 5: 8,51 (s, 1H), 7,47 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,17 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,79 (t, J=3,7 Hz, 2H), 5,04-5,12 (m, 1H), 4,96-5,04 (m, 1H), 4,87 (dt, J=12,1, 6,0 Hz, 1H), 4,69 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,22 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,34 (t, J=6,4 Hz, 6H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 0,69 (s, 9H). El material racémico 2.47a, 370 mg se separó por cromatografía quiral usando (Columna a D, SFC=100ml/min, cO2/MeOH=80/20, 266bar) para dar los productos 2.47a-I (pico 1, tR 3,72 min.) a 157 mg y el producto 2.47a-II (pico 2, tR 5,63 min.) a 170 mg.
Etapa 2: ácido 6-(terc-butil)-10-isopropoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [2.47-1] y [2.47-II]
Figure imgf000089_0002
A 2.47a-I (157 mg, 0,371 mmol) se añadió acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (1,112 ml, 1,112 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 15 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 150 ml de DCM con 2 % etanol y 10 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente 1 x 75 ml DCM con 2 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua 4 x 75 ml, se filtraron y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 10 ml de 1:1 ACN/agua, se filtró y se liofilizó para dar 136,8 mg del producto deseado 2.47-1 como base libre en 92 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 396,3 [M+H]+, 0,91 min. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 5 ppm: 8,82 (s, 1 H) 7,52 (d, J=8,46 Hz, 1 H) 7,26 - 7,36 (m, 2 H) 6,85 (d, J=7,58 Hz, 1 H) 5,09 - 5,19 (m, 1 H) 5,02 - 5,09 (m, 1 H) 4,90 - 4,96 (m, 1 H) 4,76 (d, J=4,50 Hz, 1 H) 1,44 (d, J=6,06 Hz, 6 H) 0,81 (s, 9 H). A 2.47a-II (170 mg, 0,401 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (1,204 ml, 1,204 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 16 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 15 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 150 ml de DCM con 2 % etanol y 10 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente 1 x 75 ml DCM con 2 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua 4 x 75 ml, se filtraron y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 10 ml de 1:1 ACN/agua, se filtró y se liofilizó para dar 143,3 mg del producto deseado 2.47-II como base libre en 89 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 396,3 [M+H]+, 0,90 min. 1H NMR (400 MHz, METANOL-d4) 5 ppm: 8,82 (s, 1 H) 7,51 (d, J=8,46 Hz, 1 H) 7,26 - 7,38 (m, 2 H) 6,85 (d, J=7,63 Hz, 1 H) 5,10 - 5,18 (m, 1 H) 5,03 - 5,09 (m, 1 H) 4,89 - 4,96 (m, 1 H) 4,76 (d, J=4,45 Hz, 1 H) 1,44 (d, J=6,06 Hz, 6 H) 0,80 (s, 9 H)
Ejemplo 3.1:
ácido 6-(1-hidroxi-2-metilpropan-2- il)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2'1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [3.1-I] y [3.1-II]
Figure imgf000090_0001
Etapa 1: 4-(benciloxi)-1-bromo-3,3-dimetilbutan-2-ona [3.1a]
Figure imgf000090_0002
A 4-(benciloxi)-3,3-dimetilbutan-2-ona (48,17 g, 234 mmol) en MeOH (Volumen: 700 mL) se enfrió hasta -78 °C, Bromina (13,23 mL, 257 mmol) se añadió y se agitó hasta temperatura ambiente. Bicarbonato de sodio saturado se añadió hasta que la solución se volvió básica. Los compuestos orgánicos se extrajeron en DCM, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron para dar el producto. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc(0-15 % EtOAc, 30 min) para dar 33,2g de 3.1a en 49,9 % de rendimiento. 1H NMR (400 MHz, CDCls) 5 ppm 7,25 - 7,38 (m, 5H) 4,47 - 4,51 (m, 2 H) 4,23 (s, 2 H) 3,41 - 3,46 (m, 2 H) 1,23 (s, 6 H)
Etapa 2: 4-(benciloxi)-1-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-3,3-dimetilbutan-2-ona [3.1b]
Figure imgf000090_0003
A 1.1b (3,4 g, 11,63 mmol) y 3,1a (13,26 g, 46,5 mmol) en DMSO (Volumen: 124 ml, Relación: 1,000)- Agua (Volumen: 6,22 ml, Relación: .05), carbonato de cesio (22,73 g, 69,8 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente por 4 h. El crudo se extrajo en DCM y se concentró. EtOAc se añadió y se lavó con salmuera para retirar todo el DMSO y se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc(0-20 % EtOAc, elución en gradiente de 23 min) para dar 1,24 g de 3,1b en 21,5 % de rendimiento. LC-Ms (m/z): 497,6 [M+H]+,1,23 min.
Etapa 3: (2-(2-amino-4-(benciloxi)-3,3-dimetilbutil)-7-metoxi-2H-indazol-3-il)metanol [3.1c]
Figure imgf000091_0001
A 3.1b (1,6 g, 3,22 mmol) en Metanol (Volumen: 30 ml), Acetato de amonio (4,97 g, 64,4 mmol) y Cianoborohidruro de sodio (2,024 g, 32,2 mmol) se añadieron y se agitó a 70 °C por 3 días. El crudo se diluyó con DCM y se lavó con bicarbonato de sodio saturado y los compuestos orgánicos se concentraron. Los compuestos orgánicos que contenía 3,1c se llevaron a la siguiente etapa sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 384,4 [M+H]+,0,74 min.
Etapa 4: 3-(1-(benciloxi)-2-metilpropan-2-il)-7-metoxi-3,4-dihidropirazino[1,2-b]indazol [3.1d]
Figure imgf000091_0002
A 3.1c (1,6 g, 4,17 mmol) en DCM (Volumen: 40 mL), Dióxido de manganeso (7,25 g, 83 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente. La reacción se apaga después de agitar a temperatura ambiente por 2 h. El crudo se filtró y el filtrado se trató nuevamente con Dióxido de manganeso (7,25 g, 83 mmol) y se agitó durante toda la noche. La reacción cruda se filtró nuevamente y se concentró para dar el producto crudo 3,1d que se llevó a la siguiente etapa tal cual, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 364,4 [M+H]+,0,82 min.
Etapa 5: Etil 6-(1-(benciloxi)-2-metilpropan-2-il)-10-metoxi-2-oxo-1,6,7,13c-tetrahidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [3.1e]
Figure imgf000091_0003
3,1d (0,994 g, 2,73 mmol) y etil (Z)-2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato(1,528 g, 8,20 mmol) se calentó en EtOH (Volumen: 17 mL) a 120 °C durante toda la noche. El crudo que contenía 3,1e se concentró y se llevó a la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 504,5 [M+H]+,0,98 min.
E ta p a 6 : Etil 6 -(1 -( b e n c i lo x i) -2 -m e t i lp r o p a n - 2 - i l ) - 10 -m e to x i-2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ': 3 ,4 ] p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x ila to [3.1 f]
Figure imgf000092_0001
A 3.1e (1375 mg, 2,73 mmol) en DME (Volumen: 40 ml), Cloramina-T (738 mg, 3,00 mmol) se añadió y se calentó a reflujo por 2 h. El crudo se concentró y se disolvió nuevamente en DCM-Metanol(cantidad mínima) y se purificó por cromatografía de gel de sílice usando primero Heptano-EtOAc(0-100 %) para retirar todo el SM/subproductos no polares y luego se purificó con DCM-Metanol (0-20 % MeOH) para dar, después de la concentración, 630 mg de 3.1f en 46 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 502,4 [M+H]+,0,96 min.
Etapa 7: Etil 6-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [3.1g-I] y [3.1g-II]
Figure imgf000092_0002
A 3.1f (630 mg, 1,256 mmol) en EtOH (Volumen: 40 mL), 10 % paladio sobre carbono (800 mg, 7,52 mmol) se añadió y se purgó con nitrógeno seguido por hidrógeno. Un balón de hidrógeno se conectó y el crudo se agitó por 4 h. La reacción se monitoreó ya que se formaron subproductos cuando la debencilación llegó al 70-80 %. La reacción se filtró en este momento y el crudo se concentró. El crudo concentrado se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc con 25 % EtOH(0-100 %) para dar, después de la concentración, 139 mg de 3.1g en 26,9 % de rendimiento que se dio por purificación quiral. LC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+,0,65 min. El material racémico anterior 139 mg se separó por cromatografía quiral usando (Columna OD, SFC=80ml/min, CO2/MeOH=75/25, 266bar) para dar los productos 3.1g-I (pico 1, tR 5,17 min.) a 42 mg y el producto 3.1g-II (pico 2, tR 9,86 min.) a 43 mg.
Etapa 8: ácido 6-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-10-metoxi-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [3.1-1] y [3.1-II]
Figure imgf000092_0003
A 3.1g-I (42 mg, 0,102 mmol) en Acetonitrilo (Volumen: 1, Relación: 1,000)-Agua (Volumen: 1, Relación: 1,000), Hidróxido de litio (15 mg, 0,357 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente. Después de 1 h, el crudo se acidificó con 1M ácido sulfúrico en 100 ml agua(hasta que se vio rojo el papel de pH) y se extrajo en DCM y se concentró. Los compuestos orgánicos se liofilizaron nuevamente para dar 32,5 mg de 3.1-I en 79 % de rendimiento.1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,89 (s, 1H), 7,44 (d, J=8,51 Hz, 1H), 7,23-7,33 (m, 2H), 6,74 (d, J=7,53 Hz, 1H), 5,17 (d, J=14,53 Hz, 1H), 4,85-5,02 (m, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,27-3,42 (m, 2H), 1,03 (s, 3H), 0,36 (s, 3H). LC-MS (m/z): 384,3 [M+H]+, 0,69 min. A 3.1g-II (42 mg, 0,102 mmol) en Acetonitrilo (Volumen: 1, Relación: 1,000)-Agua (Volumen: 1, Relación: 1,000), Hidróxido de litio (15 mg, 0,357 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente. Después de 1 h, el crudo se acidificó con 1M ácido sulfúrico en 100 ml agua (hasta que se vio rojo el papel de pH) y se extrajo en DCM y se concentró. Los compuestos orgánicos se liofilizaron nuevamente para dar 32,5 mg de 3.1-II en 79 % de rendimiento.1H NMR (400 MHz, CDCla) 58,89 (s, 1H), 7,44 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,21-7,33 (m, 2H), 6,74 (d, J=7,48 Hz, 1H), 5,17 (br d, J=14,48 Hz, 1H), 4,85-5,02 (m, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,27-3,41 (m, 2H), 0,99-1,20 (m, 3H), 0,35 (s, 3H). LC-MS (m/z): 384,3 [M+H]+,0,69 min.
Ejemplo 4.1: ácido 10-metoxi-6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [4.1-I] y [4.1-II]
Figure imgf000093_0001
Etapa 1: 1-bromo-4-metoxi-3,3-dimetilbutan-2-ona
Figure imgf000093_0002
4.1 a
A 4-metoxi-3,3-dimetilbutan-2-ona (9,81 g, 75 mmol) en 200 ml MeOH (Volumen: 250 mL) se enfrió hasta -78 °C, Br2 (4,27 mL, 83 mmol) en 50 ml se añadió en forma de gotas y se agitó hasta temperatura ambiente durante toda la noche. Bicarbonato de sodio saturado se añadió hasta que la solución se volvió básica. Los compuestos orgánicos se extrajeron en DCM, se secaron con sulfato de sodio y se concentraron para dar 4,1a asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 5 ppm 4,24 (s, 2 H) 3,35 (s, 2 H) 3,31 (s, 3 H) 1,21 (s, 6 H) Etapa 2: 1-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-4-metoxi-3,3-dimetilbutan-2-ona [4.1b]
Figure imgf000093_0003
A 1.1b (1,5 g, 5,13 mmol) y 4,1a (2,7 g, 12,91 mmol) en DMSO (Volumen: 47,9 ml, Relación: 1,000))- Agua (Volumen: 3,36 ml, Relación: 0,07), carbonato de cesio (6,68 g, 20,52 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El crudo se extrajo en DCM y se concentró. EtOAc luego se añadió al curdo y se lavó con salmuera para retirar todo el DMSO y se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc(0-50 % EtOAc) para dar, después de la concentración, 572 mg de 4,1b (más polar en ISCO) en 26,5 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 421,4 [M+H]+,1,26 min.
Etapa 3: (2-(2-amino-4-metoxi-3,3-dimetilbutil)-7-metoxi-2H-indazol-3-il)metanol [4.1c]
A 4.1b (572 mg, 1,360 mmol) en MeOH (Volumen: 7), acetato de amonio (1048 mg, 13,60 mmol) y cianoborohidruro de sodio (0,9 g, 14,32 mmol) se añadieron y se agitó a 70 °C por 3 días. El crudo se diluyó con DCM y se lavó con bicarbonato de sodio saturado y los compuestos orgánicos se concentraron. Los compuestos orgánicos que contenían 4.1c se llevaron a la siguiente etapa sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 308,4 [M+H]+,0,53 min.
Etapa 4: 7-metoxi-3-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-3,4-dihidropirazino[l,2-b]indazol [4.1d]
Figure imgf000094_0001
A 4.1c (0,418 g, 1,36 mmol) en DCM (Volumen: 20 mL), MnO2 (4,3 g, 49,5 mmol) se añadió y se agitó durante toda la noche. El crudo se filtró a través de celite y la celite se lavó con DCM. Las capas orgánicas se concentraron y el crudo que contenía 4,1d se llevó a la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 288,3 [M+H]+,0,60 min.
Etapa 5: Etil 10-metoxi-6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-2-oxo-1,6,7,13c-tetrahidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [4.1e]
Figure imgf000094_0002
4,1d (0,391 g, 1,36 mmol) y etil (Z)-2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (0,760 g, 4,08 mmol) se calentó en EtOH (Volumen: 6,80 ml) a 100 °C durante toda la noche. El crudo que contenía 4.1e se concentró y se llevó a la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 428,4 [M+H]+,0,78 min.
Etapa 6: Etil 10-metoxi-6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [4.1f-I] y [4.1f-II]
Figure imgf000094_0003
A 4.1e (1210 mg, 2,83 mmol) en DME (Volumen: 20 mL), Cloramina-T (834 mg, 3,40 mmol) se añadió y se calentó a reflujo por 2 h. El crudo se concentró y se disolvió nuevamente en DCM-Metanol(cantidad mínima) y se purificó por cromatografía de gel de sílice primero usando Heptano-EtOAc(0-100 %) para retirar todo SM/subproducto no polar y luego se purificó con DCM-Metanol (0-20 % MeOH) para dar, después de la concentración, 130 mg de 4.1f en 10,8 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 426,4 [M+H]+,0,77 min. El material racémico anterior 130 mg se separó por cromatografía quiral usando (Columna o D, SFC=100ml/min, CO2/MeOH=65/35, 266 bar) para dar los productos 4.1f-I (pico 1, tR 2,04 min.) a 38 mg y el producto 4.1f-II (pico 2, tR 4,47 min.) a 37 mg.
Figure imgf000095_0001
A 4.1f-I (38 mg, 0,089 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LíoH (11,24 mg, 0,268 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 29 mg del producto deseado 4.1-1 como base libre en 78 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 398,4 [M+H]+, 0,79 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,69 (s, 1H), 7,45 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,17-7,36 (m, 2H), 6,74 (d, J=7,53 Hz, 1H), 5,12 (d, J=14,92 Hz, 1H), 4,91 (dd, J=5,45, 14,94 Hz, 1H), 4,73 (d, J=5,23 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 3,02 (d, J=9,93 Hz, 1H), 2,93 (d, J=9,93 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,36 (s, 3H). A 4.1f-II (37 mg, 0,087 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (10,95 mg, 0,261 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1: 1 ACN/agua y se liofilizó para dar 26 mg del producto deseado 4.1-II como base libre en 71,5 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 398,4 [M+H]+, 0,79 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,69 (s, 1H), 7,45 (d, J=8,46 Hz, 1H), 7,17-7,36 (m, 2H), 6,74 (d, J=7,53 Hz, 1H), 5,12 (d, J=14,92 Hz, 1H), 4,92 (dd, J=5,43, 14,87 Hz, 1H), 4,73 (d, J=5,18 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 3,02 (d, J=9,98 Hz, 1H), 2,93 (d, J=9,93 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,36 (s, 3H).
Ejemplo 5.1: ácido 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H, 7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico [5.1-I] y [5.1-II]
Etapa 1: 5-bromo-2.2-dimetilciclopentan-l-ona
Figure imgf000095_0002
Figure imgf000095_0003
5.1a
A 2.2-dimetilciclopentan-1-ona (25 g, 223 mmol) en MeOH (Volumen: 446 ml), Bromina (12,63 ml, 245 mmol) se añadió a temperatura de hielo picado y se agitó durante toda la noche. El crudo se lavó con bicarbonato de sodio sat. y se extrajo en DCM, se secó con sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar 5.1a, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. 1H NMR (400 MHz, CDCh) 5 ppm 4,30 (dd, J=6,92, 4,77 Hz, 1 H) 2,30 - 2,52 (m, 1 H) 2,05 -2,24 (m, 2 H) 1,74 - 1,88 (m, 1 H) 1,15 -1,28 (s, 3 H) 1,07 (s, 3 H)
Etapa 2: 5-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-2.2-dimetilcidopentan-1-ona [5.1b]
Figure imgf000096_0001
A 5.1a (5,41 g, 28,3 mmol) y 1,1b (2,07 g, 7,08 mmol) en DMSO (Volumen: 25 ml, Relación: 0,833)-Agua (Volumen: 1,5 mL, Relación: 0,05), carbonato de cesio (13,84 g, 42,5 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El crudo se extrajo en DCM y se concentró. EtOAc se añadió y se lavó con salmuera para retirar todo el DMSO y se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc(0-50 % EtOAc) para dar, después de la concentración, el producto deseado, 5,1b (1,14 g, 2,83 mmol, 40,0 % de rendimiento) es el producto más polar que eluye a aproximadamente 40-50 % EtOAc. LC-MS (m/z): 403,5 [M+H]+,1,30 min.
Etapa 3: (2-(2-amino-3,3-dimetilciclopentil)-7-metoxi-2H-indazol-3-il)metanol [5.1c]
Figure imgf000096_0002
A 5.1b (1,14 g, 2,83 mmol) en MeOH (Volumen: 15 ml), acetato de amonio (2,183 g, 28,3 mmol) y cianoborohidruro de sodio (0,9 g, 14,32 mmol) se añadieron y se agitó a 70 °C por 3 días. El crudo se diluyó con DCM y se lavó con bicarbonato de sodio saturado y los compuestos orgánicos se concentraron. Los compuestos orgánicos que contenía 5,1c se llevaron a la siguiente etapa sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 290,4 [M+H]+,0,61 min.
Etapa 4: 9-metoxi-3,3-dimetil-2,3,3a,11a-tetrahidro-1H-ciclopenta[5,6]pirazino[1,2-b]indazol [5.1d]
Figure imgf000096_0003
A 5.1c (0,819 g, 2,83 mmol) en DCM (Volumen: 30 mL), MnO2 (5,5 g, 63,3 mmol) se añadió y se agitó durante toda la noche. El crudo se filtró a través de celite y la celite se lavó con DCM. Las capas orgánicas se concentraron y el crudo que contenía 5.1d se llevó a la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 270,3 [M+H]+,0,61 min.
Etapa 5: Etil 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,8,8a,14a-hexahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [5.1e]
5,1d (0,762 g, 2,83 mmol) y etil (Z)-2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (1,581 g, 8,49 mmol) se calentó en EtOH (Volumen: 14,15 ml) a 120 °C durante toda la noche. El crudo que contenía 5,1e se concentró y se llevó a la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 410,4 [M+H]+,0,78 min.
Etapa 6: Etil 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [5.1f-I] y [5.1f-II]
Figure imgf000097_0001
A 5.1e (1159 mg, 2,83 mmol) en DME (Volumen: 30 mL), Cloramina-T (834 mg, 3,40 mmol) se añadió y se calentó a reflujo por 2 h. El crudo se concentró y se disolvió nuevamente en DCM-Metanol (cantidad mínima) y se purificó por cromatografía de gel de sílice primero usando Heptano-EtOAc(0-100 %) para retirar todo SM/subproducto no polar y luego se purificó con DCM-Metanol(0-20 % MeOH) para dar, después de la concentración, 243 mg de 5.1f en 21 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 408,4 [M+H]+,0,86 min. El material racémico anterior 243 mg se separó por cromatografía quiral usando (SFC=100ml/min, CO2/MeOH=70/30, 246bar) para dar los productos 5.1f-I (pico 1, tR 3,58 min.) a 82 mg y el producto 5.1f-II (pico 2, tR 5,40 min.) a 66 mg.
Etapa 7: 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico ácid
Figure imgf000097_0002
A 5.1f-I (82 mg, 0,201 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LíoH (25,3 mg, 0,604 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 51 mg del producto deseado 5.1-1 como base libre en 63,5 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 380,4 [M+H]+, 0,83 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,51 (s, 1H), 7,50 (br d, J=8,41 Hz, 1H), 7,20-7,41 (m, 2H), 6,75 (br d, J=7,29 Hz, 1H), 5,24 (br s, 1H), 4,43 (br d, J=5,92 Hz, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,23-3,44 (m, 1H), 2,53 (br dd, J=6,53, 14,60 Hz, 1H), 1,73-1,90 (m, 1H), 1,51-1,73 (m, 1H), 1,35 (s, 3H), 0,48 (s, 3H). A 5.1f-II (66 mg, 0,162 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 5 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (20,39 mg, 0,486 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 53 mg del producto deseado 5.1-II como base libre en 82 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 380,3 [M+H]+, 0,82 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,51 (s, 1H), 7,49 (br d, J=8,51 Hz, 1H), 7,21-7,41 (m, 2H), 6,75 (br d, J=7,48 Hz, 1H), 5,24 (br t, J=5,55 Hz, 1H), 4,43 (br d, J=6,36 Hz, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,26-3,41 (m, 1H), 2,53 (br dd, J=6,55, 14,77 Hz, 1H), 1,81 (ddd, J=5,40, 8,36, 13,33 Hz, 1H), 1,51-1,73 (m, 1H), 1,35 (s, 3H), 0,48 (s, 3H).
Ejemplo 5.2:
12-fluoro-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H, 7H-áctopenta[5,6]pirido[2'1':3,4]pirazmo[1,2-b]indazol-6-carboxílico ácido [5.2-1] y [5.2-II]
Figure imgf000098_0001
Etapa 1 a 6: Etil 12-fluoro-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [5.2f-I] y [5.2f-II]
Figure imgf000098_0002
El Compuesto 5.2f se sintetizó a partir del material de partida; 3-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)-7-fluoro-2H-indazol (que es a partir de metil 7-fluoro-2H-indazol-3-carboxilato análogo al método usado para preparar 1,1b) mediante el proceso del Ejemplo 5.1 seguido por las etapas de la 1 a la 6 resultando en 310 mg de 5.2f como un racemato en 27,7 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 396,5 [M+H]+, 0,91 min. El material racémico anterior (310mg) se separó por cromatografía quiral usando (Columna OD, SFC=100ml/min, CO2/MeOH80/20, 226bar) para dar los productos 5.2f-I (pico 1, tR 3,95 min.) a 110 mg y el producto 5.2f-II (pico 2, tR 6,11 min.) a 105 mg.
Etapa 7: ácido 12-fluoro-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico
Figure imgf000098_0003
Figure imgf000098_0004
A 5.2f-I (105 mg, 0,266 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (33,4 mg, 0,797 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 7 mg del producto deseado 5.2-1 como base libre en 6,8 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,83 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 5 ppm 8,52 (s, 1 H) 7,73 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,30 - 7,40 (m, 2 H) 7,13 (dd, J=10,78, 7,56 Hz, 1 H) 5,16 - 5,37 (m, 1 H) 4,45 (d, J=6,50 Hz, 1 H) 3,21 -3,41 (m, 1 H) 2,54 (dtd, J=14,80, 8,59, 8,59, 6,16 Hz, 1 H) 1,84 (ddd, J=13,61, 8,72, 5,06 Hz, 1 H) 1,64 (dt, J=13,55, 8,27 Hz, 1 H) 1,36 (s, 3 H) 0,48 (s, 3 H). A 5.2f-II (1 10mg, 0,278 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 4 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (35 mg, 0,835 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 7 mg del producto deseado 5.2-II como base libre en 6,5 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 368,3 [M+H]+, 0,83 min; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 ppm 8,51 (s, 1 H) 7,73 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,27 - 7,38 (m, 2 H)7,07 - 7,25 (m, 1 H) 5,26 (t, J=5,75 Hz, 1 H) 4,43 (d, J=6,50 Hz, 1 H) 3,26 - 3,41 (m, 1 H) 2,45 - 2,64 (m, 1 H) 1,84 (ddd, J=13,58, 8,69, 5,06 Hz, 1 H) 1,59 - 1,70 (m, 1 H) 1,36 (s, 3 H) 0,48 (s, 3 H).
Ejemplo 6.1:
12-(3-metoxipropoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,
7H-cidopenta[5,6]pirido[2',1'.-3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico ácido [6.1-I] y [6.1-II]
Figure imgf000099_0001
Etapa 1 a 6: Etil 12-(benciloxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [6.1f]
Figure imgf000099_0002
El compuesto 6.1f se sintetizó a partir del material de partida; 2.1b mediante el proceso del Ejemplo 5.1 seguido por las etapas de la 1 a la 6 resultando en el producto deseado 6.1f como un racemato. LC-MS (m/z): 484,4 [M+H]+, 0,99 min.
Etapa 7: Etil 12-hidroxi-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [6.1g]
Figure imgf000099_0003
A 6.1f (315 mg, 0,651 mmol) en EtOH (Volumen: 25 ml), se purgó con nitrógeno seguido por la adición de 10 % Pd-C (350 mg, 0,329 mmol) y se purgó con nitrógeno nuevamente. Un balón de hidrógeno luego se conectó y la mezcla de reacción se purgó con hidrógeno. El crudo se agitó por 1 hora y se filtró en celite y se purgó con DCM-Etanol. El crudo se concentró para producir 262 mg de 6.1g crudo en rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 394,4 [M+H]+, 0,69 min.
E ta p a 8: E til 12 -( 3 - m e t o x ip r o p o x i ) -3 ,3 -d im e t i l - 7 -o x o -2 ,3 ,3 a ,14 a - te t r a h id r o -1 H ,7 H -c id o p e n t a [5 ,6 ]p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l -6 -c a r b o x i la to [6.1 h - I] y [6.1 h - I I ]
Figure imgf000100_0001
A 6.1g (150 mg, 0,381 mmol) en DMF (Volumen: 5mL), se añadieron 1-bromo-3-metoxipropano (0,083 mL, 0,763 mmol) y carbonato de cesio (373 mg, 1,144 mmol) y se agitó. El crudo se filtró y se enjuagó con EtOAc y se lavó con salmuera sat. para retirar todo el DMF. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-(EtOAc:EtOH=75:25) (0-100 %) para dar, después de la concentración, 99 mg del producto deseado 6.1h en 55,8 % de rendimiento, que se obtuvo por purificación quiral. LC-MS (m/z): 466,5 [M+H]+, 0,84 min.
El material racémico anterior (99 mg) se separó por cromatografía quiral usando (Columna OD, SFC=100ml/min, CO2/MeOH=75/25, 246bar) para dar los productos 6.1h-I (pico 1, tR 5,24 min.) a 41 mg y el producto 6.1h-II (pico 2, tR 7,61 min.) a 38 mg.
Etapa 9: ácido 12-(3-metoxipropoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico [6.1-1] y [6.1-II]
Figure imgf000100_0002
A 6.1h-I (41mg, 0,088 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 2 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 1 ml, Relación: 1,000) y luego LíoH (11,09 mg, 0,264 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 19 mg del producto deseado 6.1-1 como base libre en 46,8 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,88 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,48 (s, 1H), 7,40-7,57 (m, 1H), 7,25-7,34 (m, 2H), 6,78 (d, J=7,58 Hz, 1H), 5,23 (t, J=5,70 Hz, 1H), 4,29-4,44 (m, 3H), 3,55-3,71 (m, 2H), 3,29-3,40 (m, 4H), 2,38-2,64 (m, 1H), 2,24 (quin, J=6,32 Hz, 2H), 1,81 (ddd, J=5,14, 8,66, 13,60 Hz, 1H), 1,53-1,68 (m, 1H), 1,34 (s, 3H), 0,48 (s, 3H). A 6.1h-II (38 mg, 0,082 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 2 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 1 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (10,28, 0,245 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 19 mg del producto deseado 6.1-II como base libre en 50,5 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 438,4 [M+H]+, 0,89 min; 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,49 (s, 1H), 7,47 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,24-7,34 (m, 2H), 6,78 (d, J=7,58 Hz, 1H), 5,23 (t, J=5,89 Hz, 1H), 4,28-4,44 (m, 3H), 3,53-3,74 (m, 2H), 3,29-3,40 (m, 4H), 2,38-2,65 (m, 1H), 2,24 (quin, J=6,32 Hz, 2H), 1,81 (ddd, J=5,23, 8,66, 13,60 Hz, 1H), 1,54-1,68 (m, 1H), 1,34 (s, 3H), 0,48 (s, 3H)
Ejemplo 6.2
ácido 12-(2-metoxietoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-cidopenta[5,6]pirído[2, '1 ':-3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico [6.2-I] y [6.2-II]
Figure imgf000101_0001
Etapa 1: Etil 12-(2-metoxietoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-cidopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxilato [6.2h-1] y [6.2h-II]
Figure imgf000101_0002
A 6.1g (150 mg, 0,381 mmol) en DMF (Volumen: 3 mL), se añadieron 1-bromo-2-metoxietano (0,076 mL, 0,763 mmol) y carbonato de cesio (373 mg, 1,144 mmol) y se agitó. El crudo se filtró y se enjuagó con EtOAc y se lavó con salmuera sat. para retirar todo el DMF. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-(EtOAc:EtOH=75:25) (0-100 %) para dar, después de la concentración, 61 mg de 6.2h en 35,4 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 452,4 [M+H]+, 0,80 min.
El material racémico anterior (61 mg) se separó por cromatografía quiral usando (Columna AD, SFC=100ml/min, CO2/MeOH=70/30, 236bar) para dar los productos 6.2h-I (pico 1, tR 2,93 min.) a 28 mg y el producto 6.2h-II (pico 2, tR 4,91 min.) a 29 mg.
Etapa 2: ácido 12-(2-metoxietoxi)-3,3-dimetil-7-oxo-2,3,3a,14a-tetrahidro-1H,7H-ciclopenta[5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico [6.2-1] y [6.2-II]
Figure imgf000101_0003
A 6.2h-I (28 mg, 0,062 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 2 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 1 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (7,81 mg, 0,186 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 15 mg del producto deseado 6,2-1 como base libre en 54,3 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 424,4 [M+H]+, 0,82 min;1H NMR (400 MHz, CDCls) 5 8,48 (s, 1H), 7,42-7,55 (m, 1H), 7,25-7,33 (m, 2H), 6,77 (d, J=7,63 Hz, 1H), 5,23 (t, J=5,70 Hz, 1H), 4,30-4,48 (m, 3H), 3,86-3,99 (m, 2H), 3,49 (s, 3H), 3,21-3,43 (m, 1H), 2,51 (dt, J=8,46, 14,77 Hz, 1H), 1,80 (ddd, J=5,16, 8,68, 13,60 Hz, 1H), 1,49-1,68 (m, 1H), 1,34 (s, 3H), 0,47 (s, 3H). A 6.2h-II (29mg, 0,064 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 2 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 1 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (8,09 mg, 0,193 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 15 mg del producto deseado 6,2-II como base libre en 52,4 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 424,4 [M+H]+, 0,82 min;1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,48 (s, 1H), 7,48 (d, J=8,51 Hz, 1H), 7,25-7,34 (m, 2H), 6,76 (d, J=7,58 Hz, 1H), 5,23 (br t, J=5,77 Hz, 1H), 4,32-4,48 (m, 3H), 3,84-4,01 (m, 2H), 3,49 (s, 3H), 3,24-3,42 (m, 1H), 2,51 (br dd, J=6,24, 14,79 Hz, 1H), 1,80 (ddd, J=5,14, 8,68, 13,57 Hz, 1H), 1,63-1,71 (m, 1H), 1,33 (s, 3H), 0,46 (s, 3H).
Ejemplo 7.1
ácido 6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [7.1-I] y [7.1-II]
Figure imgf000102_0001
Etapa 1: 1-(7-(benciloxi)-3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2H-indazol-2-il)-4-metoxi-3,3-dimetilbutan-2-ona [7.1b]
Figure imgf000102_0002
A 2.1b (7,5 g, 20,35 mmol) en DIPEA (35,5 ml, 204 mmol), se añadió 4.1a (14,44 g, 69,1 mmol) y se calentó con agitación por 4 h. a 110 °C. El crudo se disolvió en 20 ml DCM y se lavó con 0,723 ml ácido sulfúrico en agua y los compuestos orgánicos se concentraron. Los compuestos orgánicos se purificaron nuevamente por cromatografía de gel de sílice usando Heptano-EtOAc(0-50 %). El regio-isómero deseado eluyó y se concentró para dar 5,503 g del producto deseado 7,1b en 57,3 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 497,5 [M+H]+, 1,32 min.
Etapa 2: (2-(2-amino-4-metoxi-3,3-dimetilbutil)-7-(benciloxi)-2H-indazol-3-il)metanol [7.1c]
Figure imgf000102_0003
A 7.1b (5,5 g, 11,07 mmol) en MeOH (Volumen: 40 ml) se añadieron acetato de amonio (10,5 g, 136 mmol) y cianoborohidruro de sodio (3,48 g, 55,4 mmol) y se agitó a 70 °C por 3 días. El crudo se diluyó con DCM y se lavó con bicarbonato de sodio saturado y los compuestos orgánicos se concentraron. Los compuestos orgánicos que contenía 7,1c se llevaron a la siguiente etapa sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 384,5 [M+H]+, 0,70 min.
Etapa 3: 7-(benciloxi)-3-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-3,4-dihidropirazino[1,2-b]indazol [7.1d]
Figure imgf000103_0001
A 7.1c (4,25 g, 11,07 mmol) en DCM (Volumen: 50 ml), MnO2 (9,62 g, 111 mmol) se añadió y se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El crudo se filtró y el recogido MnO2 se enjuagó con dCm y se concentró para producir crudo 7.1d usado, tal cual, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 364,5 [M+H]+, 0,91 min.
Etapa 4: Etil 10-(benciloxi)-6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-2-oxo-1,6,7,13c-tetrahidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [7.1e]
Figure imgf000103_0002
7.1d (4,02 g, 11,07 mmol) y etil (Z)-2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (8,25 g, 44,3 mmol) se calentó en EtOH (Volumen: 55 ml) a 120 °C durante toda la noche. El crudo que contenía 7.1e se concentró y se llevó a la siguiente etapa tal cual, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 504,5 [M+H]+, 0,95 min.
Etapa 5: Etil 10-(benciloxi)-6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [7.1f]
Figure imgf000103_0003
A 7.1e (5,57 g, 11,07 mmol) se añadió DME (Volumen: 80 mL) y luego yodo (8,43 g, 33,2 mmol). La reacción se agitó a 35-40 °C durante toda la noche. La reacción se diluyó con 400 ml de DCM, se trató con solución de bicarbonato de sodio saturado cuidadosamente para evitar que se calentara y la evolución de CO2, bisulfito de sodio saturado para retirar la solución residual de yodo/HI y de sal saturada. Los compuestos orgánicos se separaron y se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron hasta residuo. El residuo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-100 % Heptano/EtOAc-EtOH(75:25), se concentró hasta residuo para dar 1,51 g de 7.1f en 27,2 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 502,5 [M+H]+, 0,95 min.
E ta p a 6 : E til 10 -h id r o x i- 6 -(1 -m e to x i-2 -m e t i lp r o p a n -2 - i l ) - 2 -o x o - 6 ,7 - d ih id r o -2 H - p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [ 1,2 - b ] in d a z o l-3 -c a rb o x ila to [7.1 g ]
Figure imgf000104_0001
A 7.1f (1,51 g, 3,01 mmol) en MeOH (Volumen: 30,1 ml), se purgó con nitrógeno seguido por la adición de degussa 10 % Pd-C (1,5 g, 1,410 mmol) y se purgó con nitrógeno nuevamente. Un balón de hidrógeno luego se conectó y la mezcla de reacción se purgó con hidrógeno. El crudo se agitó por 1 horas y se filtró en celite y se enjuagó con DCM-Etanol. El crudo se concentró para dar 1,04 g de 7,1 g en 84 % de rendimiento y se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS (m/z): 412,4 [M+H]+, 0,66 min.
Etapa 7: Etil 6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [7.1h-I] y [7.1h-II]
Figure imgf000104_0002
A 7.1g (900 mg, 2,187 mmol) en DMF (Volumen: 8750 pl), se añadieron 1-bromo-3-metoxipropano (478 pl, 4,37 mmol) y carbonato de cesio (2138 mg, 6,56 mmol) y se agitó. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-100 % heptano-(EtOAc/EtOH:75/25) para dar, después de la concentración, 667 mg de 7.1h en 63 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 484,5 [M+H]+, 0,79 min.
El material racémico anterior (667 mg) se separó por cromatografía quiral usando (Columna AD, SFC=100ml/min, CO2/MeOH=75/25, 236bar) para dar los productos 7.1h-I (pico 1, tR 2,71 min.) a 279 mg y el producto 7.1h-II (pico 2, tR 5,07 min.) a 279 mg.
Etapa 8: ácido 6-(1-metoxi-2-metilpropan-2-il)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [7.1-1] y [7.1-11]
Figure imgf000104_0003
A 7.1h-I (279 mg, 0,577 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 20 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 20 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (72,6 mg, 1,731 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 234 mg del producto deseado 7.1-1 como base libre en 85 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 456,5 [M+H]+, 0,82 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-^) 5 ppm 8,76 (s, 1 H) 7,63 (br d, J=8,41 Hz, 1 H) 7,12 - 7,34 (m, 2 H) 6,82 (br d, J=7,63 Hz, 1 H) 5,12 - 5,24 (m, 1 H) 4,95 - 5,12 (m, 2 H) 4,20 (br t, J=6,38 Hz, 2 H) 3,45 - 3,63 (m, 2 H) 3,25 (s, 3 H) 2,95 - 3,09 (m, 4 H) 2,81 (br d, J=9,93 Hz, 1 H) 1,87 -2,13 (m, 2 H) 0,88 (s, 3 H) 0,36 (s, 3 H). A 7.1h-II (279 mg, 0,577 mmol) se añadió acetonitrilo (Volumen: 20 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 20 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (72,6 mg, 1,731 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 242 mg del producto deseado 7.1-II como base libre en 87 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 456,5 [M+H]+, 0,82 min;1H NMR (400 MHz, CDCls) 5 ppm 8,69 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,27 - 7,33 (m, 2 H) 6,77 (d, J=7,58 Hz, 1 H) 5,15 (d, J=14,87 Hz, 1 H) 4,90 (dd, J=14,89, 5,31 Hz, 1 H) 4,72 (d, J=5,38 Hz, 1 H) 4,33 (t, J=6,65 Hz, 2 H) 3,62 (t, J=5,82 Hz, 2 H) 3,37 (s, 6 H) 3,02 (d, J=9,93 Hz, 1 H) 2,93 (d, J=9,98 Hz, 1 H) 2,25 (quin, J=6,32 Hz, 2 H) 1,04 (s, 3 H) 0,37 (s, 3 H).
Ejemplo 8.1
ácido 6-(terc-butil)-1-fluoro-10-(3-metoxipmpoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirído[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [8.1-I] y [8.1-Il]
Figure imgf000105_0001
Etapa 1: (Z)-etil 2-(etoximetileno)-4,4-difluoro-3-((trimetilsilil)oxi)but-3-enoato [8.1a]
Figure imgf000105_0002
Bajo una atmósfera de argón, una mezcla de polvo de magnesio (1,214 g, 50 mmol) y cloruro de trimetilsililo (6,34 mL, 50 mmol)) se sometió a ondas sonoras antes de la reacción por 15-20 minutos. Luego a solución de etil (Z)-2-(etoximetileno)-4,4,4-trifluoro-3-oxobutanoato (1,5 g, 6,25 mmol) en DMF seco(3 ml) se añadió en forma de gotas durante 5-6 minutos a 50 °C bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agitó por 30 min. adicionales a 50 °C. La mezcla cruda luego se filtró a través de un embudo de filtro desechable con polietileno frito. La solución resultante de DMF con el producto deseado 8.1a asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual.
Etapa 2: Etil 10-(benciloxi)-6-(terc-butil)-1-fluoro-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [8.1b]
Figure imgf000105_0003
A 2.1e (420 mg, 1,260 mmol), se añadió 8.1a crudo (1,513 g, 6,30 mmol) anterior. Acetonitrilo (Volumen: 5 mL) y yoduro de zinc (402 mg, 1,260 mmol) luego se añadió y el crudo se sometió a reflujo durante toda la noche a 50-60 °C. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0 a 100 % heptano-(EtOAc:EtOH= 75:25) y las fracciones deseadas se concentraron para dar 210 mg del producto deseado 8.1b en 34 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 490,4 [M+H]+, 1,00 min.
E ta p a 3: E til 6 -( te r c -b u tN ) -1 - f lu o r o -10 -h id r o x i -2 -o x o -6 ,7 -d ih id r o -2 H -p ir id o [2 ',1 ':3 ,4 ]p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [8.1 c ]
Figure imgf000106_0001
Figure imgf000106_0002
A 8.1b (210 mg, 0,429 mmol) en Etanol (Volumen: 20 mL), se purgó con nitrógeno seguido por la adición de 10 % Pd-C (210 mg, 1,973 mmol). Luego se burbujeó gas de hidrógeno a través de la solución con ventilación seguido por la conexión de un balón de hidrógeno y la reacción se agitó por 2 h. El crudo se filtró en celite y se concentró para producir crudo 8.1c que se llevó a la siguiente etapa sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 400,4 [M+H]+, 0,67 min.
Etapa 4: Etil 6-(terc-butil)-1-fluoro-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [8.1d-I] y [8.1d-II]
Figure imgf000106_0003
A 8.1c (103 mg, 0,258 mmol) en DMF (Volumen: 1 mL), se añadieron 1-bromo-3-metoxipropano (0,056 mL, 0,516 mmol) y carbonato de cesio (252 mg, 0,774 mmol) y se agitó. El crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-100 % Heptano-(EtOAc/EtOH:75/25). Las fracciones deseadas se concentraron para dar 81 mg del producto racémico deseado, 8.1d en 66 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 472,5 [M+H]+, 0,83 min. El material racémico anterior (81 mg) se separó por cromatografía quiral usando (Columna AD, SFC=100ml/min, CO2/EtOH=70/30, 237bar) para dar los productos 8.1d-I (pico 1, tR 2,77 min.) a 24 mg y el producto 8.1d-II (pico 2, tR 5,52 min.) a 24 mg.
Etapa 5: ácido 6-(terc-butil)-1-fluoro-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [8.1-1] y [8.1-II]
Figure imgf000106_0004
A 8.1d-I (24 mg, 0,051 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 3 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 3 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (6,41 mg, 0,153 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 11 mg del producto deseado 8,1-1 como base libre en 46,3 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 444,4 [M+H]+, 0,87 min. 1H NMR (400 MHz, CDCls) 58,58 (s, 1H), 7,55 (dd, J=4,77, 8,63 Hz, 1H), 7,18-7,34 (m, 1H), 6,76 (d, J=7,58 Hz, 1H), 5,26 (d, J=14,87 Hz, 1H), 4,95 (dd, J=5,14, 14,87 Hz, 1H), 4,25-4,42 (m, 3H), 3,63 (t, J=5,99 Hz, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,25 (quin, J=6,27 Hz, 2H), 0,78-0,85 (m, 9H). A 8.1d-II (24mg, 0,051 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 3 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 3 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (6,41 mg, 0,153 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 20 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 100 ml de DCM con 5 % etanol y 15 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente, 50 ml de DCM con 5 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio saturado, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron a través de tapón de sulfato de sodio de 1cm x 1,5 cm y se concentraron hasta residuo. El residuo se disolvió en 1:1 ACN/agua y se liofilizó para dar 11 mg del producto deseado 8,1-II como base libre en 46,3 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 444,4 [M+H]+, 0,87 min. 1H NMR (400 MHz, CDCls) 5 8,59 (s, 1H), 7,55 (dd, J=4,77, 8,68 Hz, 1H), 7,18-7,34 (m, 1H), 6,76 (d, J=7,58 Hz, 1H), 5,25 (br d, J=14,77 Hz, 1H), 4,95 (br dd, J=3,99, 14,75 Hz, 1H), 4,27-4,40 (m, 3H), 3,63 (t, J=5,99 Hz, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,25 (quin, J=6,27 Hz, 2H), 0,81 (s, 9H).
Ejemplo 9.1:
(R)-6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico ácido [9.1]
Figure imgf000107_0001
Etapa 1: (R)-metil 7-(benciloxi)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutil)-2H-indazol-3-carboxilato [9.1a]
Figure imgf000107_0002
A metil 7-(benciloxi)-2H-indazol-3-carboxilato (18,5 g, 65,5 mmol) se añadió fosfina de trifenilo (20,63 g, 79 mmol), (R)-terc-butil (1-hidroxi-3,3-dimetilbutan-2-il)carbamato (17,80 g, 82 mmol) y se disolvió en THF (Volumen: 185 mL). La reacción se colocó en un baño agua y (E)-di-terc-butil diazeno-1 ,2-dicarboxilato (18,11 g, 79 mmol) se añadió en forma de porciones para mantener la temperatura interna por debajo de 22 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo. El residuo crudo se disolvió en acetato de etilo con 20 % heptano, se lavó con 0,5 M HCl, agua, bicarbonato de sodio, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El producto crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-25 % EtOAc en heptanos con el regioisómero deseado que eluye primero en gel de sílice. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 27,3 gramos del producto deseado 9.1a en 87 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 482,4 [M+H]+, 1,15 min.
Etapa 2: (R)-metil 2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutil)-7-hidroxi-2H-indazol-3-carboxilato [9.1b]
Figure imgf000107_0003
A 9.1a (27,3 g, 56,7 mmol) se añadió THF (Volumen: 350 mL) y se enjuagó con nitrógeno. Luego Pd-C (3,02 g, 2,83 mmol) se añadió cuidadosamente. Luego a la reacción se añadió a balón de hidrógeno. La reacción se evacuó y se rellenó 7x con hidrógeno y luego se agitó a temperatura ambiente por 90 min, o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción se añadió 100 ml de DCM, se enjuagó con nitrógeno, se filtró a través de un tapón de celite y se enjuagó con THF. El solvente se concentró hasta masa constante para dar el producto deseado 9.1b usado, tal cual, para la siguiente etapa, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 392,3 [M+H]+, 0,91 min.
E ta p a 3: (R ) -m e t i l 2 -(2 -( ( te r c -b u to x ic a r b o n il )a m in o ) -3 ,3 -d im e t i lb u t i l ) -7 -(3 -m e to x ip r o p o x i) -2 H - in d a z o l-3 -c a r b o x i la to [9.1 c ]
Figure imgf000108_0001
A 9,1b (22,2 g, 56,7 mmol) se añadió DMF (Volumen: 3 mL) y carbonato de cesio (37,0 g, 113 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 5 minutos luego 1-bromo-3-metoxipropano (13,02 g, 85 mmol) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. A la reacción se añadió 800 ml de acetato de etilo con 20 % heptano, se lavó con agua 3x, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-45 % acetato de etilo y heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 23,2 gramos del producto deseado 9.1c como una base libre en 88 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 464,4 [M+H]+, 1,03 min.
Etapa 4: (R)-terc-butil (1-(3-(hidroximetil)-7-(3-metoxipropoxi)-2H-indazol-2-il)-3,3-dimetilbutan-2-il)carbamato [9.1d]
Figure imgf000108_0002
A 9.1c (23,2 g, 50,0 mmol) se añadió THF (Volumen: 140 mL) y luego borohidruro de sodio (5,68 g, 150 mmol). La reacción se calentó hasta 60-65 °C con agitación. Luego metanol se añadió lentamente durante 30-35 minutos y la reacción se agitó a 70-75 °C por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se colocó en baño de agua para enfriamiento. Luego se añadió cuidadosamente 140 ml de solución de cloruro de amonio saturado y luego se agitó por 45 minutos a temperatura ambiente. Luego 750 ml de acetato de etilo se añadió y 70 ml de agua, se extrajo, la capa orgánica se lavó con solución de bicarbonato saturado, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta masa constante para dar 21,4 gramos del producto deseado 9.1d como una base libre en 98 % de rendimiento, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 436,4 [M+H]+, 0,83 min.
Etapa 5: (R)-terc-butil (1-(3-formil-7-(3-metoxipropoxi)-2H-indazol-2-il)-3,3-dimetilbutan-2-il)carbamato [9.1e]
Figure imgf000108_0003
A 9.1d (21,4 g, 49,1 mmol) se añadió DCM (Volumen: 150 mL) y luego yodobenceno diacetato (22,16 g, 68,8 mmol). Luego TEMPO (0,768 g, 4,91 mmol) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente por 3 horas o hasta que se terminó con LCMS. Luego 700 ml de acetato de etilo se añadió, se lavó con tiosulfato de sodio, solución de carbonato de sodio, agua, solución de sal saturada, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-50 % acetato de etilo y heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 14,55 gramos del producto deseado 9.1e como una base libre en 68 % de rendimiento, usado, tal cual. LC-Ms (m/z): 434,4 [M+H]+, 0,96 min.
E ta p a 6 : (R ) -3 -( te r c -b u t i l ) -7 -(3 -m e to x ip r o p o x i) -3 ,4 -d ih id r o p ir a z in o [1,2 -b ] in d a z o l [9.1 f]
Figure imgf000109_0001
A 9.1e (14,55 g, 33,6 mmol) se añadió DCM (Volumen: 180 mL) y luego TFA (38,8 mL, 503 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 1 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 9.1f asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 316,3 [M+H]+, 0,66 min.
Etapa 7: (6R)-etil 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-2,6,7,13c-tetrahidro-1H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [9.1g]
Figure imgf000109_0002
A 9.1f (10,59 g, 33,6 mmol) se añadió Etanol (Volumen: 110 mL, Relación: 10,00), Agua (Volumen: 11 mL, Relación: 1,000) y (Z)-etil 2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (21,88 g, 118 mmol). La reacción luego se agitó a 90-95 °C por 16 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se concentró hasta residuo para dar el producto deseado 9.1g asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo, usado, tal cual. LC-MS (m/z): 456,3 [M+H]+, 0,78 min.
Etapa 8: (R)-etil 6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxilato [9.1 h]
Figure imgf000109_0003
A 9.1g (15,3 g, 33,6 mmol) se añadió DME (Volumen: 190 mL), y luego yodo (36,7 g, 144 mmol). La reacción se agitó a 35-40 °C por 5 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 800 ml de DCM, se lavó con bisulfito de sodio solución 2x, agua, solución de carbonato de sodio, agua, solución de sal saturada, se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta residuo. El material crudo se purificó por cromatografía de gel de sílice usando 0-95 % (acetato de etilo con 25 % etanol) y heptano. Las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar el producto crudo deseado. Al residuo se añadió 100 ml de éter de etilo con 1 % etanol y se calentó hasta reflujo con agitación por 5 minutos, luego se enfrió hasta temperatura ambiente por 1 horas. El sólido se recogió por filtración, se lavó con éter de etilo y se secó hasta masa constante. El producto crudo necesitó purificación adicional mediante cromatografía de gel de sílice usando 0-60 % (DCM con 10 % etanol) y DCM, las fracciones deseadas se concentraron hasta masa constante para dar 7,71 gramos del producto deseado 9.1h como base libre en 51 % de rendimiento, usado, tal cual. LC-mS (m/z): 454,3 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,52 (s, 1 H) 7,50 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,17 (t, J=8,00 Hz, 1 H) 6,72 - 6,85 (m, 2 H) 5,06 - 5,12 (m, 1 H) 4,98 - 5,05 (m, 1 H) 4,69 (d, J=4,50 Hz, 1 H) 4,14 - 4,28 (m, 4 H) 3,51 (t, J=6,28 Hz, 2 H) 3,25 (s, 3 H) 2,04 (quin, J=6,36 Hz, 2 H) 1,26 (t, J=7,09 Hz, 3 H) 0,68 (s, 9 H).
Etapa 9: ácido (R)-6-(terc-butil)-10-(3-metoxipropoxi)-2-oxo-6,7-dihidro-2H-pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-3-carboxílico [9.1]
Figure imgf000110_0001
A 9.1h (7,71 g, 17,00 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 120 ml, Relación: 1,000), Agua (Volumen: 120 ml, Relación: 1,000) y luego LiOH (51,0 ml, 51,0 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente por 2 horas o hasta que se terminó con LCMS. La reacción se diluyó con 400 ml de agua acidificada con 1M HCl hasta pH de 2-3, luego se añadió 800 ml de DCM con 3 % etanol y 200 ml de solución de cloruro de sodio saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se extrajo nuevamente 1 x 150 ml DCM con 2 % etanol. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua 4 x 150 ml, se filtraron y se concentraron hasta masa constante para dar 7,1 gramos del producto deseado 9.1 como base libre en 99 % de rendimiento. El exceso enantiomérico (e.e.) se determinó o cromatografía quiral usando Columna AD, SFC=5mL/min, CO2/EtOH=75/25, (con una mezcla de enantiómeros que se separa a temperatura ambiente 1,53 min. y temperatura ambiente 2,21 min.) dando el producto deseado 9.1 a temperatura ambiente 2,20 min., en 99 % e.e. LC-MS (m/z): 426,3 [M+H]+, 0,81 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 8,95 (s, 1 H) 7,63 (d, J=8,46 Hz, 1 H) 7,15 - 7,32 (m, 2 H) 6,82 (d, J=7,58 Hz, 1 H) 5,14 -5,24 (m, 1 H) 5,04 - 5,13 (m, 1 H) 4,95 (d, J=4,70 Hz, 1 H) 4,20 (t, J=6,41 Hz, 2 H) 3,51 (t, J=6,26 Hz, 2 H) 3,25 (s, 3 H) 2,01 - 2,08 (m, 2 H) 0,69 (s, 9 H). El producto 9.1 puede convertirse a una sal de tris(hidroximetil)aminometano (TRIS) mediante el siguiente procedimiento. A 9.1 (11,05 g, 26,0 mmol) se añadió Acetonitrilo (Volumen: 185 ml, Relación: 9,25) se agitó a 50 °C por 1 horas, hasta disolución completa. Luego 2-amino-2-(hidroximetil)propano-1.3-diol (3,15 g, 26,0 mmol) se añadió y se agitó por 3 horas a 50 °C. Después de 1 hora, se añadió Acetonitrilo adicional (Volumen: 20 ml, Relación: 1,000) para ayudar con la agitación y continuó a 50 °C por un periodo total de 3 horas. Luego la solución se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó por 18 horas a temperatura ambiente. El sólido se recogió por filtración, se lavó con ACN, se secó al vacío a 40 °C por 24 horas para dar 12,82 gramos del producto deseado 9.1 como la sal de TRIS en 89 % de rendimiento. LC-MS (m/z): 426,3 [M+H]+, 0,80 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-CÍ6) 5 ppm 8,93 (s, 1H), 7,63 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,22 (d, J=8,1 Hz, 1H), 6,82 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,15-5,22 (m, 1H), 5,05-5,13 (m, 1H), 4,94 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,34 (br s, 3H), 4,20 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J=6,3 Hz, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,21 (s, 6H), 2,04 (quin, J=6,3 Hz, 2H), 0,69 (s, 9H).
Ejemplo 10.1:
12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo- 1,3,3a, 14a-tetrahidro- 7H-furo[3 ',4':5,6]pirido[2',1 ':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico ácido [10.1-I] y [10.1-II]
Figure imgf000110_0002
Etapa 1: 1-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-3-hidroxi-3-metilbutan-2-ona [10.1a]
Figure imgf000110_0003
A una mezcla de 1,1b (1,65 g, 5,64 mmol) y carbonato de cesio (7,35 g, 22,57 mmol) en DMSO (Volumen: 19,89 ml, Relación: 16) se añadió agua (Volumen: 1,243 ml, Relación: 1,000). La mezcla se agitó 10 min, luego se añadió 1-bromo-3-hidroxi-3-metilbutan-2-ona (2,043 g, 11,28 mmol). Después de 30 min, se añadió 100 ml EtOAc, y los compuestos orgánicos se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y se concentraron. El material se purificó en SiO2 (0-60 % EtOAc/Hep) para dar, después de la concentración, el producto deseado 10.1a (0,8 g, 2,038 mmol, 36,1 % de rendimiento) a partir del pico más polar con el m/z correcto por LC-MS. LC-MS (m/z): 393,4 [M+H]+, 1,09 min.
Etapa 2: 4-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-2.2-dimetilfuran-3(2H)-ona [10.1b]
Figure imgf000111_0001
10.1a (800 mg, 2,038 mmol) se disolvió en tolueno (Volumen: 2mL). Se añadió reactivo de Bredereck (0,514 mL, 2,242 mmol). El frasco se introdujo en un condensador a reflujo, y se calentó hasta 100 °C. A 1 h, la reacción se declaró completada mediante LC-MS. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró sobre tierra diatomácea. El material crudo se purificó en una columna de 24 g SiO2 (0->50 % EtOAc en heptanos) para proporcionar, después de la concentración el producto deseado 10.1b (600 mg, 1,490 mmol, 73,1 % de rendimiento) como un aceite amarillo a partir del pico mayor. LC-MS (m/z): 403,5 [M+H]+, 1,28 min.
Etapa 3: 4-(3-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-7-metoxi-2H-indazol-2-il)-2.2-dimetildihidrofuran-3(2H)-ona [10.1c]
Figure imgf000111_0002
Un vial de 4 mL se cargó con 10,1b (600 mg, 1,49 mmol) y THF (Volumen: 7450 pl). El vial se enfrió hasta -10 °C en un baño de hielo/salmuera. Se añadió L-Selectride (1639 pl, 1,639 mmol) en forma de gotas. La reacción se declaró completada por LC-MS a 20 min y se apagó con cloruro de amonio, se extrajo con EtOAc, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El material crudo se purificó en SiO2 (0-60 % EtOAc/Hep) para proporcionar después de la concentración el producto deseado 10.1c (500 mg, 1,236 mmol, 83 % de rendimiento) como un aceite. LC-MS (m/z): 405,4 [M+H]+, 1,21 min.
Etapa 4: 9-metoxi-3,3-dimetil-1,3,3a,11a-tetrahidrofuro[3',4':5,6]pirazino[1,2-b]indazol [10.1d]
Figure imgf000111_0003
A 10.1c (230 mg, 0,568 mmol) en etanol (Volumen: 3 mL), se añadió acetato de amonio (657 mg, 8,53 mmol). El vial se selló y la mezcla se agitó a 60 °C por 1 h. Se añadió cianoborohidruro de sodio (35,7 mg, 0,568 mmol) y se continuó agitando por 1 h. Se añadieron dos porciones más de cianoborohidruro de sodio durante las siguientes dos horas. La mezcla cruda se diluyó con DCM y se lavó con 6 N NaOH para proporcionar amina cruda (420 mg, 50 % pura). Este material se absorbió en THF (6 mL) y se añadió TBAF en THF (1,2 mL, 1,2 mmol). At 30 min, la reacción se diluyó con 1 N NaOH y se extrajo con DCM. Los orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar la hidroxiamina como un aceite marrón. LC-MS (m/z): 292,3 [M+H]+, 0,66 min. La hidroxiamina se absorbió en DCM (8,5 mL) y se añadió MnO2 (950 mg, 10,8 mmol). La mezcla se agitó por 20 h, se diluyó con DCM, y se pasó a través de un tapón de tierra diatomácea. La solución se concentró y el material se purificó en 12 g SiO2 (0->60 % EtOAc/heptano). El pico que comenzó a 30 % EtOAc se aisló como el producto deseado 10.1d (120 mg, 51 % de rendimiento) como un sólido blanco. LC-MS (m/z): 272,3 [M+H]+, 0,68 min.
Etapa 5: etil 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-1,3,3a,14a-tetrahidro-7H-furo[3',4':5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6 -carboxilato [10.1 e]
Figure imgf000112_0001
Un vial de 4mL se cargó con 10,1d (120 mg, 0,44 mmol) en agua (1,8 ml). Se añadió Etil (E)-2-(etoximetileno)-3-oxobutanoato (165 mg, 0,89 mmol). El vial se selló, se purgó con N2, y se calentó hasta 80 °C durante toda la noche. La mezcla se extrajo con DCM, los compuestos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite. El aceite se absorbió en DME (1,8 mL) y se añadió p-cloroanilo (217 mg). La mezcla se calentó a 100 °C por 90 min. Después de enfriar a temperatura ambiente, el solvente se retiró bajo una corriente de nitrógeno para proporcionar el producto deseado 10.1 e como un sólido marrón que se usó sin purificación adicional, asumiendo que tiene rendimiento cuantitativo. LC-MS (m/z): 410,5 [M+H]+, 0,77 min.
Etapa 6 : ácido 12-metoxi-3,3-dimetil-7-oxo-1,3,3a,14a-tetrahidro-7H-furo[3',4':5,6]pirido[2',1':3,4]pirazino[1,2-b]indazol-6-carboxílico
Figure imgf000112_0002
A una solución de 10.1e crudo (120 mg, 0,29 mmol) en THF (0,9 mL) se añadió LiOH acuoso (1 mL, 1,0 mmol) y se agitó 1 horas. La solución se acidificó hasta pH 1 añadiendo 4,0 N HCl (ac.) y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar un sólido marrón, que se purificó primero por cromatografía quiral (columna Sunfire B-9m-1050, TFA al 0,1 % en H2O/MeCN, 75 mL/min), para dar 59,9 mg de producto racémico de 10.1 en 51 % de rendimiento. 382,5 [M+H]+, 0,88 min. El producto racémico anterior se purificó por cromatografía quiral (Columna AS, SFC-UV15=5mL/min, CO2/EtOH=75/25, crudo en MeOH+dietil amina) para proporcionar 10.1-1 (17,7 mg, un tiempo de retención de 1,79 min) como un sólido blanco y 10.1-II (13,6 mg, un tiempo de retención de 3,24 min.) como un sólido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 8,87 (s, 1 H), 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,38 (s, 1 H), 7,32 (dd, J = 8,3, 7,6 Hz, 1 H), 6,89 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 5,55 (dd, J = 6,9, 3,3 Hz, 1 H), 5,50 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 4,88 (d, J = 10,2 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 10,9, 3,8 Hz), 3,98 (s, 3H), 1,47 (s, 3H), 0,56 (s, 3H). LC-MS (m/z): 382,5 [M+H]+, 0,88 min.
Ejemplos biológicos
Línea celular del HBV
Se generó HepG2-Clone42, una línea celular que expresa HBV inducible por Tet con una copia 1,3mer integrada de manera estable de la cepa ayw del HBV, basada en la línea celular HepAD38 inducible por Tet con ligeras modificaciones. Ladner SK, y otros, Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 41(8):1715-1720 (1997). Se cultivaron células HepG2-Clone42 en DMEM/F-12 Glutamax™ (Life Technologies, Carlsbad, CA, EE. UU.), suplementado con suero bovino fetal al 10 % (Life Technologies), G-418 (Corning, Manassas, VA, EE. UU.) a una concentración final de 0,5 mg/mL y 5 pg/mL de Doxiciclina (Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.) y se mantuvo en CO2 al 5 % a 37 °C.
Ensayo de HBsAg
Células HepG2-Clone42 se sembraron en placas negras de fondo transparente de 96 pocillos a una concentración de 6,0 x 104 células/pocillo. 24 horas después de la siembra, las células se trataron con 200 pl/pocillo de medios que contenían diluciones en serie de cinco veces de compuestos en DMSO. Se usó DMSO solo como control sin fármaco. La concentración final de DMSO en todos los pocillos fue de 0,5 %.
S e u s ó e l k it d e E L IS A d e H B s A g (A lp h a D ia g n o s t ic In te rn a t io n a l, S a n A n to n io , T X , E E .U U . , C a tá lo g o # 4110 ) p a ra d e te r m in a r e l n iv e l (s e m ic u a n t ita t iv o ) d e l s A g d e H B V s e c r e ta d o . E l e n s a y o E L IS A d e H B S A g s e r e a liz ó s ig u ie n d o e l p ro to c o lo d e l fa b r ic a n te c o m o s e d e s c r ib e .
Etapa 1. Pipetear 100 ^L de cada una de las muestras tratadas con compuesto o DMSO en placas de ELISA de HBsAg. Sellar las placas e incubar a temperatura ambiente durante 60 minutos.
Etapa 2. Aspirar las muestras y lavarlas tres veces con Tampón de Lavado. Dispensar 100 ^L de conjugado anticuerpo-HRP en cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos.
Etapa 3. Aspirar las muestras y lavarlas tres veces con Tampón de Lavado. Añadir 100 ^L de sustrato TMB a todos los pocillos e incubar 15 minutos a temperatura ambiente.
Etapa 4. Dispensar 100 ^L de Solución de Parada en cada pocillo. Medir la absorbancia de la placa ELISA a 450 nm.
Curvas de dosis-respuesta
Las curvas de dosis-respuesta se generaron y el valor de EC5o se definió como la concentración de compuesto a la cual la secreción de HBsAg se redujo 50 % en comparación con el control de DMSO.
Los valores de EC50 se determinaron como sigue:
Determinar el porcentaje de inhibición de la secreción de HBsAg. Calcular el porcentaje de inhibición de la inhibición de la secreción de HBsAg mediante el uso de la siguiente ecuación:
Figure imgf000113_0001
donde Xc es la señal de absorbancia del pozo tratado con compuesto; Mb es la señal de absorbancia promedio (señal de fondo) para la columna 12 (sin células tampón de muestra de ELISA HBsAg) y Md es la señal de absorbancia promedio de los pocillos tratados con DMSO. Luego, calcular los valores de EC50 mediante regresión no lineal mediante el uso de una ecuación logística de curva de cuatro parámetros.
El modelo de ajuste de curva empleado es XLFit Dose Response One Site Model 204: y = (A+((B-A)/(1+(10A((C-x)*D))))) donde A es el valor mínimo de y, B es el valor máximo de y, C es el valor logEC50 y D es el factor de la pendiente. En la siguiente tabla >100 nM; 100 nM > + > 1 nM; 1 nM> ++
Figure imgf000113_0002
Figure imgf000114_0001
Figure imgf000115_0001

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    Un compuesto de Fórmula (I):
    Figure imgf000116_0001
    en donde:
    R1 es H o halo, preferentemente R1 es H o F;
    R2 se selecciona independientemente en cada aparición de halo, CN, haloalquilo C1-C3, haloalcoxi C1-C3, -OR3, -N(R)R3 y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con hasta a tres grupos seleccionados de R3, -N(R)R3, CN, -OH, -CONR2, -COOR y -OR3;
    R3 es un alquilo C1-C4 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, haloalquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2, -COOR, -CONR2, cicloalquilo C3-C5 y un éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el cicloalquilo C3-C5 y el éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituidos con uno o dos grupos seleccionados de halo, -OH, alcoxi C1-C3 y alquilo C1-C3;
    o R3 es un anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros, en donde el anillo cicloalquilo C3-C5 o éter cíclico de 4-6 miembros están cada uno opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, alquilo C1-C3, -OH, alcoxi C1-C3, haloalcoxi C1-C3, haloalquilo C1-C3, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), y -N(alquilo C1-C3)2;
    n es 0, 1 o 2, preferentemente n es 1;
    W es -COOR4, -C(O)NH-SO2R5, -C(O)NH-SO2NR2, 5-tetrazolilo o 1,
  2. 2,4-oxadiazol-3-il-5(4H)-ona; R4 es H o alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN y -NR2, preferentemente, R4 es H;
    R5 es alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -OR, oxo, CN, y -NR2;
    R6 es H o alquilo C1-C6;
    R7 es H o alquilo C1-C6,
    o R7 tomado junto con R9 y los átomos que conectan R7 con R9 forman un anillo como se describe más abajo;
    R8 es H o alquilo C1-C6;
    R9 se selecciona de:
    H;
    alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; y
    un anillo seleccionado de (a) cicloalquilo C3-C6, (b) fenilo, (c) heterociclilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, y (d) heteroarilo de 5-6 miembros que contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S como miembros del anillo, en donde cada uno de los anillos (a) a (d) está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados de alquilo C1-C2, (Ch2)0-2-OR, -NR2, halo, CN, COOR y CONR2;
    o R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 3-7 miembros, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el cicloalquilo o el anillo heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta tres grupos seleccionados entre R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo;
    R se selecciona independientemente en cada aparición de H y alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados de halo, -Oh , C1-C3 alcoxi, oxo, CN, -NH2, -NH(alquilo C1-C3), -N(alquilo C1-C3)2 y ciclopropilo;
    y dos grupos R unidos directamente al mismo átomo pueden opcionalmente tomarse junto con el átomo al que ambos están unidos para formar un anillo de 3-6 miembros que puede contener opcionalmente un heteroátomo seleccionado de N, O y S como miembro del anillo, y puede estar sustituido con hasta dos grupos seleccionados de -OH, oxo, alquilo C1-C3 y alcoxi C1-C3;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
    El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R2 es -OR3.
  3. 3. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde W es -COOR4; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  4. 4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde R6 es H y R8 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  5. 5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde R9 es alquilo Ci-C6 opcionalmente sustituido con hasta dos grupos seleccionados de cicloalquilo C3-C6, -OR, -NR2, halo, CN, Co Or , CONR2 y oxo; o R9 es ciclopropilo, ciclobutilo u oxetanilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de metilo, halo y (CH2V 2-OR;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  6. 6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde R9 se toma junto con R7 y los átomos que conectan R9 a R7 para formar un anillo cicloalquilo de 5-6 miembros o un anillo heterocíclico de 5-6 miembros que contiene N, O o S como miembro del anillo; en donde el anillo cicloalquilo o heterocíclico está opcionalmente sustituido con hasta dos grupos seleccionados de R, -OR, -NR2, halo, CN, COOR, CONR2 y oxo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  7. 7. El compuesto de la reivindicación 6, que es de la fórmula:
    Figure imgf000117_0001
    en donde:
    R9 tomado junto con R7 y los átomos que conectan R9 con R7 forman un anillo cicloalquilo de 5 o 6 miembros o un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros que contiene O como miembro del anillo; en donde el anillo cicloalquilo o heterocíclico está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de R, -OR, -NR2, halo y CN;
    y R4 es H o alquilo C1-C4;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  8. 8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que es de la fórmula:
    Figure imgf000117_0002
    en donde R4 es H o alquilo C1-C4; y
    R9 es alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido con hidroxi o metoxi, o R9 es cicloalquilo C3-C4 opcionalmente sustituido con metilo o (CH2K 2-OR;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, preferentemente de la fórmula:
    Figure imgf000117_0003
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  9. 9. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el compuesto es de la fórmula:
    Figure imgf000118_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;
    o
    que es de la fórmula:
    Figure imgf000118_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  10. 10. El compuesto de la reivindicación 1, que se selecciona de:
    Figure imgf000119_0001
    Figure imgf000120_0001
    Figure imgf000121_0001
    Figure imgf000122_0001
    Figure imgf000123_0001
    Figure imgf000124_0001
    y los enantiómeros individuales de cualquiera de estos;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  11. 11. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones anteriores mezclado con al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
  12. 12. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 o una composición farmacéutica de la reivindicación 11 para su uso en un método para tratar a un sujeto que tiene una infección por hepatitis B, que comprende administrar al sujeto un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 o una composición farmacéutica de la reivindicación 11, en donde preferentemente el compuesto o la composición farmacéutica se usa en combinación con un agente terapéutico adicional seleccionado de un interferón o peginterferón, un inhibidor de la polimerasa del HBV, un inhibidor de la entrada viral, un inhibidor de la maduración viral, un inhibidor del ensamblaje de la cápside, un modulador del núcleo del HBV, un inhibidor de la transcriptasa inversa, un agonista de TLR y un inmunomodulador.
  13. 13. Un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B, que comprende poner en contacto el virus de la hepatitis B in vitro, con un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10;
    o
    un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B, que comprende poner en contacto el virus de la hepatitis B in vivo con un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10.
  14. 14. Una combinación farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y al menos un agente terapéutico adicional.
  15. 15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso en terapia, preferentemente en donde la terapia es el tratamiento de una infección viral.
ES18723982T 2017-04-27 2018-04-27 Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales Active ES2899922T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762490890P 2017-04-27 2017-04-27
PCT/IB2018/052921 WO2018198079A1 (en) 2017-04-27 2018-04-27 Fused indazole pyridone compounds as antivirals

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2899922T3 true ES2899922T3 (es) 2022-03-15

Family

ID=62148437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18723982T Active ES2899922T3 (es) 2017-04-27 2018-04-27 Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales

Country Status (9)

Country Link
US (3) US10301312B2 (es)
EP (2) EP3998269A1 (es)
JP (1) JP7290573B2 (es)
CN (1) CN110831942B (es)
AR (1) AR111419A1 (es)
ES (1) ES2899922T3 (es)
TW (1) TWI810182B (es)
UY (1) UY37699A (es)
WO (1) WO2018198079A1 (es)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10738035B2 (en) 2015-05-13 2020-08-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
US10179792B2 (en) 2016-03-07 2019-01-15 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
CN110066278B (zh) 2017-06-01 2021-06-08 广东东阳光药业有限公司 稠合三环类化合物及其在药物中的应用
BR112020004112A2 (pt) 2017-08-28 2020-09-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. agentes antiviras da hepatite b
JP2021507906A (ja) * 2017-12-20 2021-02-25 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス剤としての融合三環式ピラゾロ−ジヒドロピラジニル−ピリドン化合物
US11058678B2 (en) 2018-01-22 2021-07-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
TWI801517B (zh) 2018-03-12 2023-05-11 加拿大商愛彼特生物製藥公司 經取代的2-吡啶酮三環化合物、其類似物及其使用方法
US10729688B2 (en) 2018-03-29 2020-08-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
UY38383A (es) 2018-09-21 2020-04-30 Enanta Pharm Inc Heterociclos funcionalizados como agentes antivirales
JP2022511378A (ja) 2018-09-30 2022-01-31 サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッド 縮合四環系化合物および医薬品におけるそれらの使用
EP3883570A4 (en) 2018-11-21 2022-07-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. FUNCTIONALIZED HETEROCYCLES AS ANTIVIRAL AGENTS
TW202033523A (zh) * 2019-01-17 2020-09-16 美商愛彼特生物製藥股份有限公司 經取代的多環羧酸、其類似物及使用其之方法
US11236111B2 (en) 2019-06-03 2022-02-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
US11472808B2 (en) 2019-06-04 2022-10-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolo[1,2-c]pyrimidines as hepatitis B antiviral agents
US11760755B2 (en) 2019-06-04 2023-09-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
US11738019B2 (en) 2019-07-11 2023-08-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
CN112300161B (zh) * 2019-07-30 2021-10-29 上海挚盟医药科技有限公司 一类用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染的化合物及其制备方法和应用
WO2021055425A2 (en) 2019-09-17 2021-03-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
US11802125B2 (en) 2020-03-16 2023-10-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents
US20240182472A1 (en) * 2022-10-04 2024-06-06 Bluejay Therapeutics, Inc. Indazole pyridone compounds and uses thereof

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2116183B (en) 1982-03-03 1985-06-05 Genentech Inc Human antithrombin iii dna sequences therefore expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby a process for expressing human antithrombin iii and pharmaceutical compositions comprising it
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
DE69738749D1 (de) 1996-08-16 2008-07-17 Schering Corp Zelloberflächen-antigen aus säugetieren und verwandte reagenzien
JP2001520039A (ja) 1997-10-21 2001-10-30 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヒト腫瘍壊死因子レセプター様タンパク質、ｔｒ１１，ｔｒ１１ｓｖ１およびｔｒ１１ｓｖ２
JP2002502607A (ja) 1998-02-09 2002-01-29 ジェネンテク・インコーポレイテッド 新規な腫瘍壊死因子レセプター相同体及びそれをコードする核酸
IL147442A0 (en) 1999-07-12 2002-08-14 Genentech Inc Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovscularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
US20050176796A1 (en) * 2002-02-19 2005-08-11 D'alessio Roberto Tricyclic pyrazole derivatives, process for their preparation and their use as antitumor agents
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
CA2514733A1 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
EP1631588A2 (en) 2003-05-23 2006-03-08 Wyeth Gitr ligand and gitr ligand-related molecules and antibodies and uses thereof
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
DK2343320T3 (da) 2005-03-25 2018-01-29 Gitr Inc Anti-gitr-antistoffer og anvendelser deraf
EP3530736A3 (en) 2005-05-09 2019-11-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907424T1 (sl) 2005-07-01 2015-12-31 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Humana monoklonska protitelesa proti programiranem smrtnem ligandu 1 (PD-L1)
US20110212086A1 (en) 2006-01-19 2011-09-01 Genzyme Corporation GITR Antibodies For The Treatment of Cancer
AU2008266951B2 (en) 2007-06-18 2013-12-12 Merck Sharp & Dohme B.V. Antibodies to human programmed death receptor PD-1
EP2175884B8 (en) 2007-07-12 2017-02-22 GITR, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
CN102203258A (zh) 2008-07-02 2011-09-28 新兴产品开发西雅图有限公司 TGF-β拮抗剂多靶点结合蛋白
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
RS54233B1 (en) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc. PD-1 ANTAGONIST COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR THEIR APPLICATION
US20110159023A1 (en) 2008-08-25 2011-06-30 Solomon Langermann Pd-1 antagonists and methods for treating infectious disease
CN102149820B (zh) 2008-09-12 2014-07-23 国立大学法人三重大学 能够表达外源gitr配体的细胞
CN108997498A (zh) 2008-12-09 2018-12-14 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
JP2012518598A (ja) * 2009-02-25 2012-08-16 Ｍｓｄ株式会社 ピリミドピリミドインダゾール誘導体
LT3023438T (lt) 2009-09-03 2020-05-11 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-gitr antikūnai
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
PT2519543T (pt) 2009-12-29 2016-10-07 Emergent Product Dev Seattle Proteínas de ligação de heterodímero e suas utilizações
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
KR101981873B1 (ko) 2011-11-28 2019-05-23 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
SG10201608528YA (en) 2011-12-21 2016-12-29 Novira Therapeutics Inc Hepatitis b antiviral agents
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
SG11201605970QA (en) * 2014-01-30 2016-08-30 Hoffmann La Roche Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
PL3114128T3 (pl) 2014-03-07 2019-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Nowe skondensowane w pozycji 6 heteroarylodihydropirymidyny stosowane w leczeniu i profilaktyce zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu B
CA2948080A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2016023877A1 (en) 2014-08-14 2016-02-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel pyridazones and triazinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
US9637485B2 (en) 2014-11-03 2017-05-02 Hoffmann-La Roche Inc. 6,7-dihydrobenzo[a]quinolizin-2-one derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infection
EP3256471B1 (en) 2015-02-11 2018-12-12 F. Hoffmann-La Roche AG Novel 2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017016960A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of (6s)-6-alkyl-10-alkoxy-9-(substituted alkoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid analogues
WO2017016921A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag New crystalline forms of (6s)-10-methoxy-6-isopropyl-9-(3-methoxypropoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid
EP3328855B1 (en) * 2015-07-27 2019-05-15 H. Hoffnabb-La Roche Ag Novel tetracyclic 4-oxo-pyridine-3-carboxylic acid derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017102648A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and a nucleos(t)ide analogue
WO2017108630A1 (en) 2015-12-21 2017-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and an hbv capsid assembly inhibitor
WO2017114812A1 (en) 2015-12-29 2017-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and an interferon
CA3014369A1 (en) 2016-02-19 2017-08-24 Novartis Ag Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) * 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2018047109A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 Novartis Ag Polycyclic pyridone compounds as antivirals
TW201819380A (zh) * 2016-10-18 2018-06-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之稠合四環吡啶酮化合物
CN106928245B (zh) 2017-03-06 2019-06-11 河南春风医药科技有限公司 一种喹嗪酮类化合物及其制备方法和应用
CN106928215B (zh) 2017-03-06 2019-03-22 河南春风医药科技有限公司 一种喹嗪酮类化合物的制备方法
AR111419A1 (es) * 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales

Also Published As

Publication number Publication date
US20180312507A1 (en) 2018-11-01
EP3998269A1 (en) 2022-05-18
JP2020517667A (ja) 2020-06-18
AR111419A1 (es) 2019-07-10
US20190300530A1 (en) 2019-10-03
EP3615533B1 (en) 2021-09-08
US20200270252A1 (en) 2020-08-27
CN110831942B (zh) 2023-04-04
EP3615533A1 (en) 2020-03-04
WO2018198079A1 (en) 2018-11-01
US10975078B2 (en) 2021-04-13
TWI810182B (zh) 2023-08-01
US10301312B2 (en) 2019-05-28
JP7290573B2 (ja) 2023-06-13
TW201841919A (zh) 2018-12-01
CN110831942A (zh) 2020-02-21
UY37699A (es) 2018-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2899922T3 (es) Compuestos de indazol piridona fusionados como antivirales
ES2897913T3 (es) Compuestos de piridona tetracíclicos como antivirales
US11234977B2 (en) Fused tricyclic pyrazolo-dihydropyrazinyl-pyridone compounds as antivirals
WO2019166951A1 (en) Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2017216686A1 (en) 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2019097479A1 (en) Novel dihydroisoxazole compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2017216685A1 (en) Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2018073753A1 (en) Fused tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2018047109A1 (en) Polycyclic pyridone compounds as antivirals