CN110831942B - 作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物 - Google Patents

作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110831942B
CN110831942B CN201880042367.6A CN201880042367A CN110831942B CN 110831942 B CN110831942 B CN 110831942B CN 201880042367 A CN201880042367 A CN 201880042367A CN 110831942 B CN110831942 B CN 110831942B
Authority
CN
China
Prior art keywords
added
reaction
compound
stirred
oxo
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201880042367.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110831942A (zh
Inventor
傅继平
W·韩
S·卡鲁
路培超
K·B·普菲斯特
J·M·杨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Publication of CN110831942A publication Critical patent/CN110831942A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110831942B publication Critical patent/CN110831942B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed systems contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/16—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供如本文所述的式(I)化合物以及药学上可接受的盐、含有所述化合物的药物组合物，和使用这些化合物、盐和组合物来治疗病毒感染(尤其是由乙肝病毒引起的感染)和减少与HBV相关联的严重病症出现的方法。

Description

作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年4月27日提交的美国序列号62/490890的优先权权益，其 内容通过引用全文的方式纳入本文。
技术领域
本发明涉及新型稠合四环吡啶酮化合物，它们是肝炎病毒复制的抑制剂， 因此可用于治疗病毒感染，尤其是乙肝病毒(HBV)感染。本发明提供了如本 文所述的新型四环吡啶酮化合物，包含此类化合物的药物组合物，以及在治疗 和预防HBV感染中使用这些化合物和组合物的方法。
背景技术
在全球范围内，超过4亿人长期感染乙肝病毒(HBV)，仅美国就有1200万感 染者。在那些长期感染的患者中，多达40％的患者最终会因肝硬化或发展肝细 胞癌(HCC)而出现肝衰竭并发症。HBV属于肝病毒科(Hepadnaviridae)家族， 这是一类小嗜肝性DNA病毒，它们通过RNA中间体的逆转录而复制。病毒颗 粒中的3.2-kb HBV基因组呈环状，部分双链DNA构象(松弛的环状DNA或 rcDNA)。HBV基因组由四个重叠的开放阅读框(ORF)组成，它们编码核心、聚 合酶(Pol)、包膜和X蛋白。rcDNA具有转录惰性，必须先在受感染细胞的核内 转化为共价闭合环状DNA(cccDNA)，然后才能转录病毒RNA。cccDNA是HBV 转录的唯一模板，并且因为HBV RNA模板基因组逆转录，其持久性是持续感染 所需的。
HBV的包膜包含表面抗原蛋白(HBsAg)的混合物。HBsAg外壳是三种重 叠蛋白质的混合物：所有三种蛋白质共享一个共有区域，该区域对应于三种蛋 白质中最小的一种(SHBsAg)。该混合物主要由SHBsAg组成，但也包括中等 HBsAg(Medium HbsAg，其包含SHBsAg和一个附加多肽区段)和大HBsAg (Large HbsAg，其包含M HBsAg和另一个附加多肽区段)。除了形成感染性病 毒体颗粒之外，S、M和L HBsAg蛋白还组装成亚病毒颗粒，称为22-nm颗粒， 该颗粒不具感染性，但包含包裹感染性病毒颗粒的相同蛋白质。实际上，这 些亚病毒型非感染性颗粒已被用作疫苗，因为它们含有与感染性HBV病毒体相 同的抗原表面蛋白，因此可引发识别该感染性物质的抗体。有趣的是，这些 亚病毒颗粒的数量大大超过了感染性病毒体，并被认为能保护感染性病毒体免 于受感染宿主免疫系统的作用。从绝对数量上看，它们可发挥诱饵作用，分 散针对感染性病毒颗粒的免疫应答，但除此之外，据报道它们还抑制免疫细胞 (单核细胞、树突细胞和自然杀伤细胞)的功能，从而可能因此削弱针对HBV的 免疫应答。由于这些亚病毒颗粒可保护感染性HBV免受宿主免疫系统作用， 因此降低亚病毒颗粒的水平已被认为是一种可行的治疗方法。参见例如， WO2015/113990。
慢性HBV的关键诊断症状之一是乙肝表面抗原(HBsAg)的高血清水平。近 年来的临床数据表明，持续的病毒学应答通常与治疗早期(早至第8周)的治疗期 HBsAg下降相关联，而持续暴露于HBsAg和其它病毒抗原可能会导致HBV特异 性免疫耐受。经历了血清HBsAg水平更大幅且更快速下降的慢性HB患者实现 显著较高的持续病毒学应答率(约40％)，如治疗后持续病毒控制所确定。
HBV的现有治疗选择包括干扰素疗法和病毒DNA聚合酶的核苷/核苷酸抑 制剂，例如恩替卡韦(entecavir)和替诺福韦(tenofovir)。这些集中于降低病毒 血症水平和对肝功能障碍的耐受性，从而可能具有不利的副作用，并且还在长 期治疗过程中就耐药性病毒变体进行选择。更重要的是，这些疗法既无法根 除慢性乙肝患者的肝内HBV cccDNA库或限制已有cccDNA的HBsAg转录，也不 影响合成的HBsAg分泌到患者血液中以抵消宿主的先天性免疫反应。因此， 这些HBV治疗在大多数情况下是终身治疗，而停药通常会导致病毒学复发。
因此，仍需更有效的HBV治疗方法，尤其是治疗慢性HBV感染(cHBV)的方 法。本发明提供了据信通过遏制含HBsAg的22nm亚病毒颗粒的分泌而发挥作 用的化合物。这些化合物可用于治疗HBV感染并减少由HBV感染引起的严重 肝脏疾病的发生。
发明内容
本发明提供了新型化合物，所述新型化合物抑制来自乙肝病毒感染细胞的 HBsAg分泌，从而减少慢性HBV感染患者的病毒载量和病毒复制。因此，本 发明的化合物适于治疗HBV(包括慢性HBV)患者。
一方面，本发明提供式(I)的化合物：
Figure BDA0002333517370000031
其中：
R1是H或卤素；
R2在每次出现时独立地选自卤素，CN，C1-C3卤代烷基，C1-C3卤代烷氧基， -OR3，-N(R)R3和C1-C3烷基，其任选地被选自R3，-N(R)R3，CN，-OH，-CONR2， -COOR和-OR3的至多3个基团取代；
R3是C1-C4烷基，其任选地被选自卤素，C1-C3卤代烷基，-OH，C1-C3烷氧 基，C1-C3卤代烷氧基，氧代，CN，-NH2，-NH(C1-C3烷基)，-N(C1-C3烷基)2， -COOR，-CONR2，C3-C5环烷基和4-6元环醚的1-3个基团所取代，其中C3-C5环 烷基和4-6元环醚各自任选地被选自卤素，-OH，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基的1 或2个基团取代；
或者，R3是C3-C5环烷基环或4-6元环醚，其中C3-C5环烷基环或4-6元环醚各 自任选地被选自卤素，C1-C3烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3卤代烷氧基，C1-C3卤代烷基，-NH2，-NH(C1-C3烷基)和-N(C1-C3烷基)2的1-3个基团取代；
n是0、1或2；
W是–COOR4，–C(O)NH-SO2R5，–C(O)NH-SO2NR2、5-四唑基或1,2,4-噁二 唑-3-基-5(4H)-酮；
R4是H或C1-C6烷基，其任选地被选自卤素，-OR，氧代，CN和-NR2的1-3 个基团取代；
R5是C1-C6烷基，其任选地被选自卤素，-OR，氧代，CN和-NR2的1-3个基 团取代；
R6是H或C1-C6烷基；
R7是H或C1-C6烷基，
或者，R7与R9和连接R7与R9的原子一起形成环，如下所述；
R8是H或C1-C6烷基；
R9选自：
H；
C1-C6烷基，其任选地被选自C3-C6环烷基，-OR，-NR2，卤素，CN，COOR， CONR2和氧代的至多3个基团取代；和
环，其选自(a)C3-C6环烷基，(b)苯基，(c)5-6元杂环基，其含有选自N、O 和S的一个或两个杂原子作为环成员，和(d)5-6元杂芳基，其含有选自N、O和S 的一个或两个杂原子作为环成员，其中环(a)-(d)中各者任选地被选自C1-C2烷基， (CH2)0-2-OR，-NR2，卤素，CN，COOR和CONR2的至多3个基团取代；
或者，R9与R7和连接R9与R7的原子一起形成3-7元环烷基环，或含有N、O 或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环任选地被选自R，-OR，-NR2， 卤素，CN，COOR，CONR2和氧代的至多3个基团取代；
R在每次出现时独立地选自H和C1-C3烷基，其任选地被选自卤素，-OH， C1-C3烷氧基，氧代，CN，-NH2，-NH(C1-C3烷基)，-N(C1-C3烷基)2和环丙基的 1-3个基团取代；
并且，直接连接至同一原子的两个R基团可任选地与和这两个基团都连接 的原子一起形成3-6元环，其可任选地包含选自N、O和S的杂原子作为环成员， 并且可被选自-OH，氧代，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基的至多2个基团取代；
或其药学上可接受的盐。
本发明还包括含有这些化合物的药物组合物，使用这些化合物和组合物治 疗病毒感染的方法，包含这些化合物的药物组合物，和使用这些化合物制备药 物的方法。
具体实施方式
出于解释本说明书目的，将应用以下定义，并在适当时，以单数形式使用 的术语也将包括复数形式。
除非上下文中另有明确说明，否则本说明书中使用的术语具有以下含义：
如本文所用，术语“对象”指动物。在某些方面，动物是哺乳动物。对 象还指例如灵长类动物(例如，人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、 小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，该对象是人。如本文所用，“患者” 是指人类对象。
本文所用术语“抑制”或“抑制性”指给定病症、症状或紊乱或疾病的减少或 遏制，或生物活动或过程的基线活性的显著降低。
如本文所用，术语“治疗”或“处理”任何疾病或紊乱指在一实施方式中改善 疾病或病症(即减缓或防止或减少疾病的发展或其至少一种临床症状)。在其它 实施方式中，“处理”或“治疗”指减轻或改善至少一个物理参数，包括患者并未 辨识的那些参数。在另一些实施方式中，“处理”或“治疗”指从身体(例如，一 个可辨识症状的稳定)或者生理(例如，一个物理参数的稳定)方面调节疾病或病 症，又或两者兼而有之。在又一些实施方式中，“处理”或“治疗”指预防或延 缓疾病或病症的发生或发展或进展。
如本文所用，用于本发明上下文的术语“一个”、“一种”、“该”以及类似表 达(尤其在权利要求书的内容中)应解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或者 与上下文明显矛盾。
本文所述的所有方法可以任何合适的顺序进行，除非另有说明或者与上下 文明显矛盾。本文涉及的任何和所有实施例/实例，或者示例性的语言(例如， “例如/如/诸如”)的使用仅仅是为了更好地阐述本发明，而不是对本发明所要求 保护范围的限制。
“任选取代的”指所指基团可以在一个或多个位置被其后列出的基团的任何 一个或任何组合取代。取代基的数量、位置和选择应理解为仅包括专业化学 工作者预期合理稳定的那些取代；因此，“氧代”不会是芳基或杂芳基环上的取 代基，例如，一个碳原子不会具有三个羟基或氨基取代基。除非另有说明， 否则任选的取代基通常是选自卤素，氧代，CN，氨基，羟基，-C1-3烷基，-OR*， -NR* 2，-SR*，-SO2R*，-COOR*和-CONR* 2的至多4个基团，其中每个R*独立地 是H或C1-3烷基。
除非另有说明，否则本文所用的“芳基”指苯基或萘基。除非另有说明， 否则芳基可任选地被选自卤素，CN，氨基，羟基，C1-3烷基，-OR*，-NR* 2，-SR*， -SO2R*，-COOR*和-CONR* 2的至多4个基团取代，其中每个R*独立地是H或C1-3烷基。
本文所用的“卤素”或“卤原子”可以是氟、氯、溴或碘。
如本文所用，“C1-6烷基”或“C1-C6烷基”表示具有1-6个碳原子的直链或支化 烷基。如果指定了不同数目的碳原子，例如C4或C3，则该定义应作相应的修 改，例如“C1-4烷基”代表甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基和 叔丁基。
如本文所用，“C1-6亚烷基”或“C1-C6亚烷基”表示具有1-6个碳原子和用于连 接另两个基团的两个开放价的直链或支化烷基。如果指定了不同数量的碳原 子，例如C4或C3，则该定义应作相应的修改，例如“C1-4亚烷基”表示亚甲基 (-CH2-)，亚乙基(-CH2CH2-)，直链或支化的亚丙基(-CH2CH2CH2-或 -CH2-CHMe-CH2-)等。
本文所用的“C1-6烷氧基”表示具有1-6个碳原子的直链或支化烷氧基(-O-烷 基)。如果指定了不同数目的碳原子，例如C4或C3，则该定义应作相应的修改， 例如“C1-4烷氧基”表示甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，异丁氧基， 仲丁氧基和叔丁氧基。
本文所用的“C1-4卤代烷基”或“C1-C4卤代烷基”表示具有1-4个碳原子的直 链或支化烷基，其中至少一个氢已被卤素取代。卤素取代基的数目可以为从 一个到最高至未取代烷基上的氢原子数。如果指定了不同数量的碳原子，例 如C6或C3，则应相应地修改该定义。因此，“C1-4卤代烷基”表示甲基，乙基， 丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基和叔丁基，其至少一个氢被卤素取代， 例如当其中卤素为氟时：CF3CF2-，(CF3)2CH-，CH3-CF2-，CF3CF2-，CF3，CF2H-， CF3CF2CH(CF3)-或CF3CF2CF2CF2-。
如本文所用，“C3-8环烷基”是指3至8个碳原子的饱和单环烃环。此类基团 的示例包括环丙基，环丁基，环戊基和环己基。如果指定了不同数量的碳原 子，例如C3-C6，则应相应地修改定义。
“4至8元杂环基”，“5至6元杂环基”，“3至10元杂环基”，“3至14元杂环基”， “4至14元杂环基”和“5至14元杂环基”分别是指4至8元，5至6元，3至10元，3至 14元，4至14元和5至14元杂环；除非另有说明，否则这些环含有选自氮、氧和 硫的1至7、1至5或1至3个杂原子作为环成员，并且这些环可以是饱和或部分饱 和但非芳族的。杂环基可以在氮或碳原子处连接至另一个基团。术语“杂 环基”包括单环基团，稠合环基团和桥连基团。此类杂环基的示例包括但不限 于：吡咯烷，哌啶，哌嗪，吡咯烷酮，吗啉，四氢呋喃，四氢噻吩，四氢噻喃， 四氢吡喃，1,4-二噁烷，1,4-氧硫杂环己烷，8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷，3,8-二氮 杂双环[3.2.1]辛烷，3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1] 辛烷，2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷，2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷，氮杂环丁 烷，亚乙二氧代，氧杂环丁烷或噻唑。在某些实施方式中，如果没有另外说 明，则杂环基具有选自N、O和S的1-2个杂原子作为环成员，和4-7个环原子， 并且任选地被选自卤素，氧代，CN，氨基，羟基，C1-3烷基，-OR*，-NR*2， -SR*，-SO2R*，-COOR*和-CONR*2的至多4个基团取代，其中每个R*独立地为 H或C1-3烷基。特别地，含有硫原子的杂环基任选地在硫上被一个或两个氧代 基取代。
如本文所用，“4-6元环醚”是指包含一个氧原子作为环成员的4至6元环。 示例包括氧杂环丁烷，四氢呋喃和四氢吡喃。
“杂芳基”是完全不饱和的(芳族)环。术语“杂芳基”是指具有选自N、O或 S的1至8个杂原子的5-14元单环或双环或三环芳族环系统。通常，杂芳基为 5-10元环或环系统(例如5-7元单环基团或8-10元双环基团)，通常5-6元环包含选 自N、O和S的至多4个杂原子，不过杂芳基环在环内通常包含不超过1个二价O 或S。典型的杂芳基包括呋喃，异噻唑，噻二唑，噁二唑，吲唑，吲哚，喹 啉，2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，2-或3-吡咯基，2-、4-或5-咪唑基，3-、4- 或5-吡唑基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-异噻唑基，2-、4-或5-噁唑基，3-、4-或5-异噁唑基，3-或5-(1,2,4-三唑基)，4-或5-(1,2,3-三唑基)，四唑基，三嗪， 嘧啶，2-、3-或4-吡啶基，3-或4-哒嗪基，3-、4-或5-吡嗪基，2-吡嗪基和2-、4- 或5-嘧啶基。杂芳基可任选地被选自卤素，CN，氨基，羟基，C1-3烷基，-OR*， -NR* 2，-SR*，-SO2R*，-COOR*和-CONR* 2的至多4个基团取代，其中每个R*独 立地是H或C1-3烷基。
术语“羟基”是指基团-OH。
本文描述了本发明的多种实施方式。应理解，每个实施方式中指定的特 征可以与其它指定特征组合以提供其它实施方式。
下文列举的实施方式是本发明的代表：
一种式(I)化合物：
Figure BDA0002333517370000071
其中：
R1是H或卤素；
R2在每次出现时独立地选自卤素，CN，C1-C3卤代烷基，C1-C3卤代烷氧基， -OR3，-N(R)R3和C1-C3烷基，其任选地被选自R3，-N(R)R3，CN，-OH，-CONR2， -COOR和-OR3的至多3个基团取代；
R3是C1-C4烷基，其任选地被选自卤素，C1-C3卤代烷基，-OH，C1-C3烷氧 基，C1-C3卤代烷氧基，氧代，CN，-NH2，-NH(C1-C3烷基)，-N(C1-C3烷基)2， -COOR，-CONR2，C3-C5环烷基和4-6元环醚取代，其中C3-C5环烷基和4-6元环 醚各自任选地被选自卤素，-OH，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基的1或2个基团取代；
或者，R3是C3-C5环烷基环或4-6元环醚，其中C3-C5环烷基环或4-6元环醚各 自任选地被选自卤素，C1-C3烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3卤代烷氧基，C1-C3卤代烷基，-NH2，-NH(C1-C3烷基)和-N(C1-C3烷基)2的1-3个基团取代；
n是0、1或2；
W是–COOR4，–C(O)NH-SO2R5，–C(O)NH-SO2NR2、5-四唑基或1,2,4-噁二 唑-3-基-5(4H)-酮；
R4是H或C1-C6烷基，其任选地被选自卤素，-OR，氧代，CN和-NR2的1-3 个基团取代；
R5是C1-C6烷基，其任选地被选自卤素，-OR，氧代，CN和-NR2的1-3个基 团取代；
R6是H或C1-C6烷基；
R7是H或C1-C6烷基，或R7与R9和连接R7与R9的原子一起形成环，如下所述；
R8是H或C1-C6烷基；
R9选自：
H；
C1-C6烷基，其任选地被选自C3-C6环烷基，-OR，-NR2，卤素，CN，COOR， CONR2和氧代的至多3个基团取代；和
环，其选自(a)C3-C6环烷基，(b)苯基，(c)5-6元杂环基，其含有选自N、O 和S的一个或两个杂原子作为环成员，和(d)5-6元杂芳基，其含有选自N、O和S 的一个或两个杂原子作为环成员，其中环(a)-(d)中各者任选地被选自C1-C2烷基， (CH2)0-2-OR，-NR2，卤素，CN，COOR和CONR2的至多3个基团取代；
或者，R9与R7和连接R9与R7的原子一起形成3-7元环烷基环，或含有N、O 或S作为环成员的3-7元杂环；其中环烷基或杂环任选地被选自R，-OR，-NR2， 卤素，CN，COOR，CONR2和氧代的至多3个基团取代；
R在每次出现时独立地选自H和C1-C3烷基，其任选地被选自卤素，-OH， C1-C3烷氧基，氧代，CN，-NH2，-NH(C1-C3烷基)，-N(C1-C3烷基)2和环丙基的 1-3个基团取代；
并且，直接连接至同一原子的两个R基团可任选地与和这两个基团都连接 的原子一起形成3-6元环，其可任选地包含选自N、O和S的杂原子作为环成员， 并且可被选自-OH，氧代，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基的至多2个基团取代；
或其药学上可接受的盐。
在该实施方式中，当R3为环状醚时，其通常选自氧杂环丁烷基，四氢呋喃 基和四氢吡喃基。
2.如实施方式1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为H或F。
3.如前述实施方式中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其 中R2是–OR3。
4.如实施方式1至3中任一项所述的化合物，其中W为–COOR4；或其药 学上可接受的盐。在该实施方式的优选化合物中，W为-COOH。
5.如实施方式1-4中任一项所述的化合物，其中R6为H且R8为H；或其药学 上可接受的盐。
6.如实施方式1-5中任一项所述的化合物，其中R9是C1-C6烷基，其任选地 被选自C3-C6环烷基，-OR，-NR2，卤素，CN，COOR，CONR2和氧代的至多2 个基团取代；R9是环丙基，环丁基或氧杂环丁烷基，并且任选地被选自甲基， 卤素和(CH2)0-2-OR的一个或两个基团取代；或其药学上可接受的盐。
7.如实施方式1-5中任一项所述的化合物，其中R9与R7和连接R9至R7的原子 一起形成5-6元环烷基环或含N、O或S作为环成员的5-6元杂环；其中环烷基或 杂环任选地被选自R，-OR，-NR2，卤素，CN，COOR，CONR2和氧代的至多2 个基团取代；或其药学上可接受的盐。
8.如实施方式1-7中任一项所述的化合物，其中n是1；或其药学上可接受的 盐。
9.如实施方式7-8中任一项所述的化合物，其具有下式：
Figure BDA0002333517370000101
其中：
R9与R7和连接R9与R7的原子一起形成5或6元环烷基环或含有O作为环成员 的5或6元杂环；其中环烷基或杂环任选地被选自R，-OR，-NR2，卤素和CN的 一个或两个基团取代；和
R4是H或C1-C4烷基；或其药学上可接受的盐。
10.如实施方式1-6中任一项所述的化合物，其具有下式：
Figure BDA0002333517370000102
其中R4为H或C1-C4烷基；和
R9为任选地被羟基或甲氧基取代的C1-C4烷基，或R9为任选地被甲基或 (CH2)0-2-OR取代的C3-C4环烷基；或其药学上可接受的盐。
11.如实施方式10所述的化合物，其具有下式：
Figure BDA0002333517370000103
或其药学上可接受的盐。
12.如实施方式8所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure BDA0002333517370000104
或其药学上可接受的盐。
13.如实施方式8所述的化合物，其具有下式：
Figure BDA0002333517370000111
或其药学上可接受的盐。在该实施方式的化合物中，R优选为甲基，或 在同一碳上的两个R基团一起形成选自环丙基，环丁基和氧杂环丁烷基的环。
14.如实施方式1-13中任一项所述的化合物，其中R1为H；或其药学上可 接受的盐。
15.如实施方式1-13中任一项所述的化合物，其中R1为F；或其药学上可 接受的盐。
16.如实施方式1-15中任一项所述的化合物，其中R4是H；或其药学上可 接受的盐。
17.如实施方式1所述的化合物，其选自：
Figure BDA0002333517370000112
Figure BDA0002333517370000121
Figure BDA0002333517370000131
Figure BDA0002333517370000141
Figure BDA0002333517370000151
Figure RE-GDA0003717514280000011
其中任一种的个体对映体；或其药学上可接受的盐。
特别地，实施例的每种化合物，包括表I中列出的每种化合物，是本发明化合物的具体 实施方式。
18.一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的运载体混合的前述实施方式 中任一项所述的化合物。
19.一种治疗患有乙肝感染的对象的方法，其包括向所述对象给予实施方式1-17中任 一项所述的化合物或实施方式17所述的药物组合物。
20.如实施方式19所述的方法，其中实施方式1-17中任一项所述的化合物或实施方式 18所述的药物组合物与选自干扰素或聚乙二醇干扰素，HBV聚合酶抑制剂，病毒进入抑制 剂，病毒成熟抑制剂，衣壳组装抑制剂，HBV核调节剂，逆转录酶抑制剂，TLR激动剂或免疫调 节剂的其它治疗剂组合使用。
21.一种抑制乙肝病毒复制的方法，其包括使乙肝病毒在体外或体内与实施方式1-17 中任一项所述的化合物接触。
22.一种药物组合物，其包含实施方式1-17中任一项所述的化合物和至少一种其它治 疗剂。
23.如实施方式1-17中任一项所述的化合物，其用于治疗。
24.如实施方式23所述的化合物，其中所述治疗是细菌感染的治疗。
25.如实施方式1-17中任一项所述的化合物在制备药物中的用途。
本发明的另一个实施方式提供了用作药物的上述化合物或其药学上可接受的盐。一方 面，该药物用于治疗患有HBV感染的对象。在一个特定的实施方式中，所述对象是被诊断患 有慢性HBV的人。
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途也在本发明的范围内；在 一些实施方式中，该药物用于治疗或预防人的病毒性疾病和/或感染，特别是在所涉及的病 毒是HBV的情况中。
本发明的范围包括药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的 盐，以及药学上可接受的运载体或赋形剂。任选地，该组合物包含至少两种 药学上可接受的运载体和/或赋形剂。
根据该实施方式的另一方面，本发明所述的药物组合物还包含治疗有效量 的至少一种其它抗病毒剂。
本发明还提供了如上所述的药物组合物在患有感染或有感染风险的人中 治疗HBV感染的用途。
本发明还提供了如上所述的药物组合物在患有疾病或有患病风险的人中 治疗HBV感染的用途。
本发明的另一方面涉及治疗或预防人的乙肝病毒疾病和/或感染的方法，其 通过以下方式上进行：向该人给予抗病毒有效量的本发明的化合物、其药学上 可接受的盐或上述组合物，其单独给予或联合至少一种其它抗病毒剂一起或分 开给予。
本发明的另一个方面涉及一种制品，其包含有效治疗乙肝病毒疾病和/或感 染的本发明的组合物；包含标签的包装材料，所述标签指示所述组合物可用于 治疗乙肝病毒的疾病和/或感染；其中所述组合物包含本发明的式(I)的化合物或 其药学上可接受的盐。
本发明的另一方面涉及抑制HBV复制的方法，其包括在抑制病毒复制的条 件下使病毒暴露于有效量的式(I)化合物或其盐。该方法可以在体外或体内实 践。
本发明范围内还包括式(I)化合物或其盐在抑制HBV复制中的用途。
在涉及式(I)的化合物的所有实施方式中，式(I)的化合物可以是如上述实施 方式1-17中任一项所述的化合物。
在一些实施方式中，式(I)化合物与选自以下的至少一种其它治疗剂共同给 予或联合使用：干扰素或聚乙二醇干扰素，HBV聚合酶抑制剂，病毒进入抑制 剂，病毒成熟抑制剂，衣壳组装抑制剂，HBV核调节剂，逆转录酶抑制剂，TLR 激动剂或免疫调节剂。任选地，式(I)化合物可制备用于与其它治疗剂同时或 依次联用；或者，式(I)化合物可被组合入包含式(I)化合物和至少一种其它治疗 剂的药物组合。可与本发明的化合物联用的一些具体治疗剂包括本文所述的 免疫调节剂，干扰素α2a，干扰素α-2b，聚乙二醇化干扰素α-2a，聚乙二醇化干 扰素α-2b，TLR-7和TLR-9激动剂，恩替卡韦(entecavir)，替诺福韦(tenofovir)，西多福韦(cidofovir)，替比夫定(telbivudine)，多达诺辛(didanosine)，扎西他滨(zalcitabine)，司他夫定(stavudine)，拉米夫定(lamivudine)，阿巴卡韦(abacavir)， 恩曲他滨(emtricitabine)，阿普西他滨(apricitabine)，阿维哌汀(atevirapine)，利 巴韦林(ribavirin)，阿昔洛韦(acyclovir)，泛昔洛韦(famciclovir)，伐昔洛韦(valacyclovir)，更昔洛韦(ganciclovir)，阿德福韦(adefovir)，依法韦仑(efavirenz)，奈韦拉平(nevirapine)，地拉夫定(delavirdine)和依曲韦林(etravirine)。合适的 核调节剂公开于WO2013/096744；合适的HBV衣壳抑制剂描述于 US2015/0252057。
这些其它试剂可与本发明的化合物组合以产生单一药物剂型。或者，这 些其它试剂可作为多剂型(例如，使用药盒)的一部分分别给予于患者。所述其 它试剂可在给予本发明的化合物或其药学上可接受的盐之前，同时或之后给予 患者。或者，这些其它治疗剂可与本发明的化合物分开给予，并且任选地通 过与本发明的化合物不同的给予途径并按照不同的给药方案给予，只要本发明 的化合物和其它治疗剂同时用于治疗HBV感染或由HBV感染引起或并发的紊 乱即可。
每天适用的本发明化合物的剂量范围通常为0.01至100mg/kg体重，优选为 0.1至50mg/kg体重。每个剂量单位可方便地包含5％至95％的活性化合物(w/w)。 优选地，这样的制剂包含20％至80％的活性化合物。
当然，实际的药物有效量或治疗剂量将取决于本领域技术人员已知的因 素，例如患者的年龄和体重、给药途径和疾病的严重程度。在任何情况下， 所述组合将根据患者的独特状况以允许递送药学有效量的剂量和方式给予。
当本发明的组合物包含本发明的化合物和一种或多种其它治疗或预防剂 的组合时，该化合物和其它试剂两者应以约10％-100％的剂量水平存在，更优选 地为占单一疗法方案中正常给予的剂量的约10％-80％。
预期用于此类联合疗法的抗病毒剂包括有效抑制人中病毒形成和/或复制 的药剂(化合物或生物制剂)，其包括但不限于：干扰病毒在人中形成和/或复制 必需的宿主或病毒机制的药剂。此类药剂可选自恩替卡韦，替诺福韦，西多 福韦，替比夫定，多达诺辛，扎西他滨，司他夫定，拉米夫定，阿巴卡韦，恩 曲他滨，阿普西他滨，阿维哌汀，利巴韦林，阿昔洛韦，泛昔洛韦，伐昔洛韦， 更昔洛韦，阿德福韦，依法韦仑，奈韦拉平，地拉夫定和依曲韦林，以及本文 所述的免疫调节剂，包括干扰素和聚乙二醇化干扰素，TLR-7激动剂和TLR-9激动剂。
本发明的许多化合物包含一个或多个手性中心。这些化合物可制备并以 单一异构体或异构体混合物形式使用。分离异构体(包括非对映异构体和对映 异构体)的方法是本领域已知的，并且本文描述了合适方法的示例。在某些实 施方式中，本发明的化合物以单一的基本上纯的异构体形式使用，意味着该化 合物的样品的至少90％是特定的异构体，而该样品的小于10％是任何其它异构 体或异构体混合物。优选地，该样品的至少95％是单一异构体。合适的异 构体的选择在普通技术人员水平之内，因为一种异构体通常在本文所述的用于 测量HBV活性的体内或体外测定中更具活性，并且将是优选的异构体。当异 构体之间的体外活性差异相对较小(例如小于约4倍)时，可使用如本文所述的方 法，基于针对细胞培养物中病毒复制的活性水平来选择优选的异构体：具有较 低MIC(最低抑制浓度)或EC-50的异构体是优选的。
本发明的化合物可通过下文所示的一般合成途径合成，其具体示例更详细 地描述于实施例中。在公开的PCT申请WO2015/113990和WO2015/173164中 公开了用于合成式(I)化合物和可用于这些合成的合成中间体的附加指导。
方案1说明了可用于制备本发明化合物的一般方法，如本文实施例所证明。 各种不同的吲唑-3-羧酸酯原料是本领域已知的。羧酸酯可用本领域已知的方 法还原成醇，而该醇可用保护基团例如已知的甲硅烷基醚(例如，TBS)保护。 N-2氮可用合适的α-卤代酮烷基化，以引入含R9的基团。还原胺化是在羰基中 心引入氮的一种方法。一旦伯胺就位，吲唑C3处的受保护的醇可脱保护并氧 化为醛氧化态，此时，其与伯胺环化，形成被R9取代的新的6元环。
然后通过本领域已知的方法使用(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯将 新环的亚胺环化以形成附加稠合环。然后将新环氧化以提供式(I)所示的吡啶 酮环。在公开的PCT申请WO2015/113990和WO2015/173164中公开了可用于 制备这些化合物的方法。
方案1.合成式(I)化合物的一般方法。
Figure BDA0002333517370000201
使用该一般方法，其它已知的起始原料和本文的实施例，本领域技术人员 能够合成式(I)化合物。这些化合物的对映异构体可通过手性HPLC和类似的 已知方法分离。或者，对映异构体可通过方案2中所示的一般合成途径合成， 其具体示例更详细地描述于实施例中。
方案2.合成式(II)化合物的立体选择性方法。
Figure BDA0002333517370000202
虽然该式化合物的一种对映异构体通常比另一种对映异构体更具活性，但 这两种异构体均显示对HBsAg的活性，如本文所述。
术语“光学异构体”或“立体异构体”是指对于本发明的给定化合物而言可能 存在的多种不同立体异构构型中的任何一种，并且包括几何异构体。应理解， 取代基可在碳原子手性中心处连接。术语“手性”指与其镜像配偶体具有不可 重叠性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配偶体重叠的分子。因此，本 发明包括化合物的对映体、非对映体或外消旋体。“对映异构体”是一对立体 异构体，它们是彼此的不可重叠镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消 旋”混合物。该术语用于表示合适的外消旋混合物。“非对映异构体”是具有 至少两个非对称原子的立体异构体，但它们彼此是非镜像的。绝对立体化学 根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统指定。当化合物是纯对映异构体时，各手性碳 原子处的立体化学可通过R或S指定。未知其绝对构象的拆分化合物可根据它们 使钠D线的波长处的平面偏振光旋转的方向(右旋的或左旋)指定为(+)或(-)。 本文中所述的某些化合物包含一个或多个非对称中心或轴，并且可因此产生对 映体、非对映体和其它立体异构体形式，其在绝对立体化学方面可定义为(R)- 或(S)-。
取决于起始物质和过程的选择，化合物可以可能的异构体之一或其混合物 的形式存在，例如以纯的光学异构体形式，或以异构体混合物，如外消旋体和 非对映异构体混合物形式存在，这取决于不对称碳原子的数量。本发明意在 包括所有这些可能的立体异构体，包括外消旋混合物，非对映异构体混合物和 光学纯形式。光学活性的(R)-和(S)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制 备，或使用常规技术拆分。如果化合物包含双键，其取代基可以是E或Z构型。 如果化合物包含双取代的环烷基，则环烷基取代基可具有顺式-或反式-构型。 还意在包括全部互变异构形式。
任何所得的异构体混合物均可基于成分的物理化学差异而被分离成纯或 基本纯的几何或光学异构体或非对映异构体，例如，通过色谱和/或分级结晶。
任何所得最终产物或中间体的外消旋体可通过已知方法拆分成旋光对映 体，例如，通过分离其非对映体盐，用光学活性酸或碱得到，以及释放光学活 性酸性或碱性化合物。具体而言，可以因此使用碱性部分将本发明的化合物 拆分成其光学对映体，例如，通过分步结晶由光学活性酸形成的盐，所述酸为 例如，酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O,O'-对-甲苯酰基酒石酸、 扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物还可以通过手性色谱拆分，例 如，使用手性吸附剂的高压液相色谱(HPLC)。
此外，包括其盐的本发明的化合物也可以其水合物的形式获得，或者包括 用于其结晶的其它溶剂。本发明化合物可以固有地或通过设计与药学上可接 受的溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明旨在包括溶剂化和非溶剂化的 形式。术语“溶剂合物”指具有一个或多个溶剂分子的本发明化合物(包括其药 学上可接受的盐)的分子复合物。这类溶剂分子常用于制药领域，已知对接受 者无害，例如，水、乙醇等。术语“水合物”是指溶剂分子为水的复合物。
包括其盐、水合物和溶剂合物的本发明的化合物可以固有的或通过设计形 成多晶型物。
如本文所用术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐和碱加成盐。 “盐”具体包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”指保持本发明化 合物的生物学效果和特性的盐，该盐一般没有生物学或其它方面的不利之处。 在许多情形中，本发明的化合物能够因为存在氨基和/或羧基或类似基团而形成 酸式和/或碱式盐。
药学上可接受的酸加成盐可由无机酸和有机酸形成，例如，乙酸盐，天冬 氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，溴化物/氢溴酸盐，碳酸氢盐/碳酸盐，硫酸氢 盐/硫酸盐，樟脑磺酸盐，氯化物/盐酸盐，氯脲乙酸盐，柠檬酸盐，乙二磺酸 盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，葡糖酸盐，葡萄糖醛酸盐，马尿酸盐，氢碘酸盐 /碘化物，羟乙基磺酸盐，乳酸盐，乳糖醛酸盐，十二烷基硫酸盐，苹果酸盐， 马来酸盐，丙二酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，甲基硫酸盐，萘甲酸盐，萘磺酸 盐，烟酸盐，硝酸盐，十八烷酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，双羟萘酸盐， 磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐，聚半乳糖醛酸盐，丙酸盐，硬脂酸盐，琥珀酸 盐，磺基水杨酸盐，酒石酸盐，甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可获得盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可获得盐的有机酸包括例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二 酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、 甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学上可接受的碱加成盐可以由无机碱和有机碱 形成。
可获得盐的无机碱包括例如铵盐和元素周期表第I至XII栏中的金属。在 某些实施方式中，由钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜获得盐；特别合适 的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可获得盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺(包括天然产生 的取代胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星、胆 碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的药学上可接受的盐可由碱性或酸性部分通过传统化学方法合成。 通常，这类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计算量的适当碱(例如 Na、Ca、Mg或K的氢氧化物，碳酸盐，碳酸氢盐等)反应来制备，或通过使这 些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当酸反应来制备。这类反应通常在 水中或有机溶剂或两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，希望使用 非水介质，如醚，乙酸乙酯，乙醇，异丙醇或乙腈。其它合适的盐的列表可 以例如在《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，20版，马 克出版公司(Mack Publishing Company，Easton，Pa.)，(1985)；以及《药用盐 手册：性质、选择及用途》(Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection, andUse)，Stahl和Wermuth编著(Wiley-VCH公司，德国魏因海姆，2002)中找 到。
本文给出的任何化学式意在表示本发明化合物的未经标记形式以及经同 位素标记的形式，其包含具有非天然同位素分布的至多3个原子，例如富含氘 或13C或15N的位点。同位素标记的化合物具有本文给出的化学式所描述的结 构，除了一个或多个原子被具有选定的原子质量或质量数而不是自然丰度质量 分布的原子代替之外。可向本发明化合物中有用地全面掺入(over-incorporated) 的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别为例如2H， 3H，11C，13C，14C，15N，18F 31P，32P，35S，36Cl，125I。本发明包括经同位素标记的本发明的多种不同的化合物，例如其中放射性同位素如3H和14C，或其中 非放射性同位素如2H和13C以基本上高于正常同位素分布的水平存在的那些。 这类经同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如使用14C)，反应动力学研究(例 如使用2H或3H)，检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发 射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或基底组织分布测定，或用于患者的放 射治疗。特别地，经18F标记的本发明化合物对于PET或SPECT研究可能是尤 其期望的。一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例 和制备中描述的那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替通常使用 的未标记的试剂，来制备本发明的经同位素标记的化合物。标记的样品在具 有极低同位素掺入的情况下可能有用，例如使用放射性标记检测痕量化合物 时。
另外，采用较重同位素，特别是氘(即2H或D)的位点特异性取代能提供因 代谢稳定性较高而产生的某些治疗优势，例如体内半衰期延长或剂量要求降低 或改善治疗指标。应理解，在此上下文中，认为氘是本发明化合物的取代基， 并且，具有氘作为取代基的化合物的样品通常在标记的位置具有至少50％的氘 掺入。这类较重同位素(特别是氘)的浓度可通过同位素富集因子确定。本文 所用术语“同位素富集因子”表示特定同位素的同位素丰度和自然丰度之间的比 例。如果在本发明化合物中的一个取代基表示为氘，那么这类化合物针对各 指定的氘原子具有的同位素富集因子是至少3500(各指定氘原子纳入52.5％氘)，至少4000(纳入60％氘)，至少4500(纳入67.5％氘)，至少5000(纳入75％氘)， 至少5500(纳入82.5％氘)，至少6000(纳入90％氘)，至少6333.3(纳入95％氘)， 至少6466.7(纳入97％氘)，至少6600(纳入99％氘)，或至少6633.3(纳入99.5％ 氘)。
根据本发明的药学上可接受的溶剂合物包含其中所述结晶的溶剂可以由 同位素取代的那些(例如，D2O、d6-丙酮、d6-DMSO)。
含有能够作为氢键供体和/或受体的基团的本发明的化合物可与合适的共 晶形成剂(former)形成共晶体。这些共晶体可通过已知的共晶体形成法由本发 明的化合物制备。这些方法包括在结晶条件下使本发明的化合物与共晶形成 剂研磨，加热，共升华，共融或在溶液中接触，并分离由此形成的共晶体。合 适的共晶形成剂包括述于WO 2004/078163的那些。因此，本发明还提供了包 含本发明化合物的共晶体。
使用方法
本文所述的所有方法可以任何合适的顺序进行，除非另有说明或者与上下 文明显矛盾。本文涉及的任何和所有实施例/实例，或者示例性的语言(例如， “例如/如/诸如”)的使用仅仅是为了更好地阐述本发明，而不是对本发明所要求 保护范围的限制。
本发明的化合物可通过已知方法给予，包括口服，胃肠外，吸入等。在 某些实施方式中，本发明的化合物以丸剂，锭剂，糖锭剂，胶囊剂，溶液剂或 混悬剂的形式口服给予。在其它实施方式中，本发明的化合物通过注射或输 注给予。输注通常在约15分钟-4小时之间的时间段内经静脉内进行。在其 它实施方式中，本发明化合物经鼻内或通过吸入给药；吸入方法对治疗呼吸道 感染特别有用。本发明的化合物显示口服生物利用度，因此有时优选口服。
在本发明的某些实施方式中，本发明的化合物与第二抗病毒剂，例如本文 命名的那些组合使用。
术语“组合”是指以一种剂量单位形式的固定组合，以适于同时或依次一起 使用的分开剂型形式，或以组合给药的药盒形式，其中本发明的化合物和组合 伴侣可同时独立给予或在时间间隔内分开给予，所述时间间隔尤其允许组合伴 侣显示联合作用，例如协同作用、效果或其任何组合。
第二抗病毒剂可与本发明的化合物联合给予，其中，第二抗病毒剂在本发 明的一种或多种化合物之前、同时或之后给予。当期望将本发明的化合物与 第二药剂同时给予并且给药途径相同时，则可将本发明的化合物与第二药剂配 制成相同剂型。含有本发明化合物和第二药剂的剂型的示例是片剂或胶囊剂。
在一些实施方式中，本发明的化合物和第二抗病毒剂的组合可提供协同活 性。本发明的化合物和第二抗病毒剂可一起、分开但同时，或依次给药。
化合物的“有效量”是治疗或预防本文所述的病毒感染和/或疾病或病症所 必需或充分的量。在一个示例中，式I化合物的有效量是足以治疗对象的病毒 感染的量。在另一个示例中，有效量是足以在需此治疗的对象中治疗HBV的 量。有效量可根据例如对象的大小和体重、疾病的类型或本发明的特定化合 物的因素而变化。例如，本发明化合物的选择会影响“有效量”的组成。本 领域普通技术人员能够研究本文所包含的因素，且不经过度实验即可确定有关 本发明化合物的有效量。
给药方案可影响有效量的组成。本发明的化合物可在病毒感染发作之前 或之后给予对象。此外，可每天或依次给予数个分开的剂量，以及交错剂量， 或者该剂量可连续输注，或可推注。此外，本发明化合物的剂量可根据治疗 或预防情况的紧急程度成比例地增加或减少。
本发明的化合物可用于治疗如本文所述的状态、紊乱或疾病，或者用于制 造用于治疗这些疾病的药物组合物。本发明提供了本发明化合物在治疗这些 疾病中的用途或用于制备用于治疗这些疾病的具有本发明化合物的药物组合 物的用途的方法。
术语“药物组合物”包括适合给予哺乳动物例如人的制剂。当将本发明的 化合物作为药物给予哺乳动物例如人时，可给予它们本身，或以药物组合物形 式给予，所述药物组合物包含例如0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的至少一种式(I) 化合物或其任何亚类作为活性成分，联合药学上可接受的运载体，或任选地两 种或更多种药学上可接受的运载体。
短语“药学上可接受的运载体”是本领域公认的，并且包括适合向哺乳动物 给予本发明的化合物的药学上可接受的物质、组合物或载剂。运载体包括液 体或固体填料，稀释剂，赋形剂，溶剂或包封材料，其在将主题药剂从身体的 一个器官或部分携带或运输到身体的另一器官或部分中涉及。在与制剂的其 它成分相容并且对患者无害方面，各运载体必须是“可接受的”。可用作药学上 可接受的运载体的物质的一些示例包括：糖，例如乳糖，葡萄糖和蔗糖；淀粉， 例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如乙基纤维素、乙酸纤维 素和羧甲基纤维素钠；粉末状胶黄芪；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可 脂和栓剂蜡；油，例如花生油，棉籽油，红花油，芝麻油，橄榄油，玉米油和 大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油，山梨糖醇，甘露糖醇和聚乙 二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧 化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液； 和药物制剂中使用的其它无毒相容性物质。药学上可接受的运载体通常是无 菌的和/或基本上无热原的。
组合物中也可存在润湿剂，乳化剂和润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸 镁，以及着色剂，脱模剂，包衣剂，甜味剂，调味剂和增香剂，防腐剂和抗氧 化剂。
药学上可接受的抗氧化剂的示例包括：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸， 盐酸半胱氨酸，硫酸氢钠，偏亚硫酸氢钠，亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，例 如抗坏血酸棕榈酸酯，丁基化羟基茴香醚(BHA)，丁基化羟基甲苯(BHT)，卵磷 脂，没食子酸丙酯，α-生育酚等；金属螯合剂，例如柠檬酸，乙二胺四乙酸 (EDTA)，山梨糖醇，酒石酸，磷酸等。
本发明的制剂包括适合于口服，鼻腔，吸入，局部，透皮，颊部，舌下， 直肠，阴道和/或胃肠外给药的那些制剂。所述制剂可方便地以单位剂型存在， 并且可通过药学领域公知的任何方法制备。可与运载体物质组合以产生单一 剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效果的化合物的量。通常，在100％中， 该量为约1％-约99％的活性物质，优选地为约5％至约70％，最优选地为约10％ 至约30％。
制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明的化合物与运载体和任选的 一种或多种辅助成分联合的步骤。通常，通过将本发明的化合物与液体运载 体或细分的固体运载体或两者均匀且紧密地结合，然后必要时使产品成型来制 备制剂。
适用于口服的本发明制剂可以是胶囊剂，扁囊剂，丸剂，片剂，锭剂(使用 调味基质，例如通常是蔗糖和阿拉伯胶或胶黄芪)，粉剂，颗粒剂，或水性或非 水性液体中的溶液剂或悬浮液形式，或水包油或油包水液体乳液形式，或酏剂 或糖浆形式，或糖锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶) 形式和/或漱口水形式等，其各自包含预定量的本发明化合物作为活性成分。本 发明的化合物也可以大丸剂，冲剂或糊剂的形式给药。
在用于口服的本发明固体剂型(胶囊，片剂，丸剂，糖衣丸，散剂，颗粒剂 等)中，将活性成分与一种或多种药学上可接受的运载体混合，所述药学上可接 受的运载体例如：柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下任何运载体：填料或增量剂， 例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维 素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂，例如甘油； 崩解剂，例如琼脂(agar-agar)，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，海藻酸，某些硅 酸盐和碳酸钠；溶液阻滞剂，例如石蜡；吸收促进剂，例如季铵化合物；润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；吸收剂，例如高岭土和膨润土；润滑剂， 例如滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，月桂基硫酸钠及其混合物； 和着色剂。就胶囊，片剂和丸剂而言，药物组合物还可包含缓冲剂。相似类 型的固体组合物也可作为填充剂用于软和硬填充明胶胶囊中，其使用例如乳糖 或乳糖分以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。
片剂可通过压制或模制制成，任选地与一种或多种辅助成分一起制成。压 制片剂可使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)，润滑剂，惰性稀释剂， 防腐剂，崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠或交联的羧甲基纤维素钠)，表面活性剂或 分散剂来制备。模制片剂可通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿 的粉末状化合物的混合物来制备。
本发明的药物组合物的片剂和其它固体剂型，例如糖衣丸，胶囊，丸剂和 颗粒剂，可任选地用包衣和衣壳(例如肠溶衣和制药领域中公知的其它包衣)加 载(scored)或制备。它们也可使用例如变化比例的羟丙基甲基纤维素以提供所 需的释放特性，其它聚合物基质，脂质体和/或微球体来被配制为提供活性成分 在其中的缓慢或受控释放。它们可通过例如通过潴留细菌的过滤器过滤，或 者通过掺入可溶于无菌水或在用前即刻可溶于一些其它无菌注射用介质的无 菌固体组合物形式的灭菌剂进行灭菌。这些组合物还可任选地包含避光剂， 并且可以具有这样的组合物，它们仅或优先在胃肠道的特定部分中任选地以延 迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的示例包括聚合物和蜡。如 果合适，活性成分也可以是伴有一种或多种上述赋形剂的微胶囊形式。
用于口服给予本发明化合物的液体剂型包括药学上可接受的乳剂，微乳 剂，溶液，混悬剂，糖浆和酏剂。除活性成分外，液体剂型还可包含本领域 常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇，异丙醇， 碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油类(尤其是 棉籽油，花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢呋 喃醇，聚乙二醇和脂肪酸酯脱水山梨糖醇及其混合物。
除惰性稀释剂外，口服组合物还可包含佐剂，例如湿润剂，乳化剂和悬浮 剂，甜味剂，调味剂，着色剂，加香剂和防腐剂。
除活性化合物外，悬浮液还可含有悬浮剂，例如乙氧基化的异硬脂醇，聚 氧乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯，微晶纤维素，偏氢氧化铝，膨润土，琼脂和胶 黄芪，及其混合物。
用于直肠或阴道给予的本发明药物组合物的制剂可以栓剂形式存在，该栓 剂可通过将一种或多种本发明的化合物与一种或多种合适的无刺激性赋形剂 或运载体混合而制备，所述赋形剂或运载体包括例如可可脂，聚乙二醇，栓剂 蜡或水杨酸酯，它们在室温下为固体，但在体温下为液体，因此会在直肠或阴 道腔内融化并释放出活性化合物。
适用于阴道给予的本发明的制剂还包括阴道栓，棉塞，乳膏，凝胶，糊剂， 泡沫或喷雾制剂，其含有本领域已知为合适的运载体。
用于本发明化合物的局部或透皮给药的剂型包括散剂，喷雾剂，软膏剂， 糊剂，乳膏剂，洗剂，凝胶剂，溶液剂，贴剂和吸入剂。可在无菌条件下将 活性化合物与药学上可接受的运载体以及可能需要的任何防腐剂，缓冲剂或推 进剂混合。
除了本发明的活性化合物之外，软膏，糊剂，乳膏和凝胶剂还可包含赋形 剂，例如动植物脂肪，油，蜡，石蜡，淀粉，胶黄芪，纤维素衍生物，聚乙二 醇，硅酮，膨润土，硅酸，滑石粉和氧化锌，或其混合物。
除本发明化合物外，粉剂和喷雾剂还可包含赋形剂，例如乳糖，滑石，硅 酸，氢氧化铝，硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂还可包 含常规推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃，例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有提供向身体受控递送本发明化合物的附加优点。可通过将 化合物溶解或分散在适当的介质中来制备这种剂型。吸收促进剂也可用于增 加化合物穿过皮肤的流量。可通过提供控速膜或将活性化合物分散在聚合物 基质或凝胶中来控制所述流量的速率。
认为眼科制剂，眼药膏，粉剂，溶液等也在本发明的范围内。
适用于胃肠外给药的本发明药物组合物可包含一种或多种本发明化合物 与一种或多种药学上可接受的运载体，例如无菌等渗水性溶液或非水性溶液， 分散液，悬浮液或乳剂，或可在用前即刻重建为无菌注射型溶液或分散液的无 菌粉末，其可含有抗氧化剂，缓冲剂，抑菌剂，溶质，这些溶质使制剂与预期 接受者的血液或悬浮剂或增稠剂等渗。
可在本发明的药物组合物中使用的合适的水性和非水性运载体的示例包 括水，乙醇，乙二醇醚，多元醇(例如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，及其合适 的混合物，植物油，例如橄榄油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。例如， 通过使用包衣材料，例如卵磷脂，通过在分散液的情况下通过保持所需的粒径， 和通过使用表面活性剂，能够保持适当的流动性。
这些组合物还可包含佐剂，例如防腐剂，湿润剂，乳化剂和分散剂。可 通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚山梨 酸等来确保对微生物作用的预防。组合物中也可能需要包含等张剂，如糖、 氯化钠等。此外，可通过加入能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶来 实现可注射药物形式的长期吸收。
在某些情况下，为了延长药物的作用，需要减慢皮下或肌内注射药物的吸 收。这可通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。然后， 药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又可取决于晶体尺寸和晶型。 或者，通过将药物溶解或悬浮在油载剂中来实现胃肠外给予药物形式的延迟吸 收。
通过在可生物降解的聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成主题化合物的 微胶囊基质来制备可注射的贮库形式(depot form)。取决于药物与聚合物的比 例以及所用特定聚合物的性质，可控制药物的释放速率。其它可生物降解的 聚合物的示例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可通过将药物圈留在与身体组织 相容的脂质体或微乳液中来制备储库型可注射制剂。
本发明的制剂可口服，胃肠外，局部或直肠给予。当然，它们是以适用 于各给药途径的形式给出的。例如，它们以片剂或胶囊剂形式，通过注射， 吸入，滴眼液，软膏，栓剂等给予，通过注射，输注或吸入给予；通过洗剂或 软膏局部给予；和通过栓剂直肠给予。
本文所用短语“胃肠外给药”和“经胃肠外给予”表示除肠道和局部给药外的 给药形式，通常通过注射，例如但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊 内、眼内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下 (subcapsular)、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注给药。静脉输注有时是 本发明化合物的优选递送方法。输注可用于递送单日剂量或多剂量。在一 些实施方式中，本发明的化合物通过在15分钟-4小时，通常为0.5-3小时的间隔 中输注来给予。这种输注可每天使用一次，每天两次或每天最多3次。
本文所用的短语“全身性给药”，“全身给药”，“外周性给药”和“外周给药” 是指化合物、药物或其它物质的非直接进入进入中枢神经系统的给药，从而其 进入患者的系统，因而经历代谢和其它类似过程，例如，皮下给予。
这些化合物可通过任何合适的给药途径给予人类和其它动物以进行治疗， 包括口服，鼻腔给予，例如通过喷雾，直肠，阴道内，胃肠外，脑池内和局部 给予，如通过粉剂，软膏剂或滴剂给予，包括颊部和舌下给予。
无论选择何种给药途径，可以合适的水合形式使用的本发明化合物和/或本 发明的药物组合物均通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学上可接 受的剂型。
可改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平，从而获得就具体患 者、组合物与给药方式有效实现所需治疗应答且对患者无毒性的活性成分量。
所选剂量水平将取决于多种因素，包括所使用的本发明的特定化合物或其 酯、盐或酰胺的活性，给药途径，给药时间，所用具体化合物的排出速率，治 疗时长，与所用特定化合物联用的其它药物，化合物和/或物质，所治疗患者的 年龄，性别，体重，情况，一般健康状况和既往病史等医学领域众所周知的因 素。
具有本领域普通技能的医师或兽医可容易地确定并开出所需药物组合物 的有效量。例如，医师或兽医可以低于获得所需治疗效果所需水平的剂量起 始在药物组合物中使用的本发明化合物的剂量，并逐渐增加剂量直至获得所需 效果。
通常，本发明化合物的合适每日剂量应为有效产生治疗效果的最低剂量的 化合物量。这样的有效剂量通常将取决于上述因素。一般对于患者而言，当 用于获得指示效果时，本发明化合物的静脉内和皮下剂量将为约0.0001-约 100mg/kg体重/天，更优选约0.01-约50mg/kg/天，并且更加优选约0.1-约20mg/kg/ 天。有效量是预防或治疗病毒感染(例如HBV)的量。
采用本文所述的化合物或组合物进行的治疗可每天重复进行，持续足以减 少或基本上消除HBV感染或病毒载量的时间。例如，治疗可持续一周，或两 周，或3-4周，或4-8周，或8-12周，2-6个月或更久，例如直至病毒载量或其它 感染度量显示病毒载量或病毒活动性或HBV感染的其它迹象或症状大幅减少。 具备技能的治疗医师能够容易地确定合适的治疗持续时间。
必要时，活性化合物的有效日剂量可以是每天单次给药，也可在一天中以 适当的间隔，以两个，三个，四个，五个，六个或更多个亚剂量(任选地以单位 剂型)分开地给药。口服或吸入递送的化合物通常每天服用1-4个剂量。通 过注射递送的化合物通常每天或每隔一天给药一次。通过输注递送的化合物 通常每天以1-3个剂量给药。当一天内多次给药时，可以约4小时，约6小时， 约8小时或约12小时的间隔给药。
虽然本发明的化合物可单独给药，但是优选以药物组合物的形式(如本发明 所述的那些)给药。因此，使用本发明的化合物的方法包括将所述化合物以药 物组合物形式给药，其中在给药之前将至少一种本发明的化合物与药学上可接 受的运载体混合。
本发明化合物与免疫调节剂联合的用途
本文所述的化合物和组合物可与发挥免疫调节剂作用的一种或多种治疗 剂联合使用或给予，所述治疗剂例如是共刺激分子的活化剂或免疫抑制分子的 抑制剂，或疫苗。程序性死亡1(PD-1)蛋白是T细胞调节剂的扩展CD28/CTLA4 家族的抑制性成员(Okazaki等.(2002)Curr Opin Immunol 14:391779-82；Bennett 等.(2003)J.Immunol.170:711-8)。PD-1在活化的B细胞、T细胞和单核细胞上 表达。PD-1是负调节TCR信号的免疫抑制性蛋白(Ishida,Y.等.(1992)EMBO J. 11:3887-3895；Blank,C.等.(Epub 2006 12月29日)Immunol.Immunother. 56(5):739-745)，并且在慢性感染中上调。PD-1和PD-L1之间的相互作用可作 为免疫检查点发挥作用，例如可导致浸润淋巴细胞的减少，T细胞受体介导的 增殖的减少和/或癌细胞或受感染细胞的免疫逃逸(Dong等.(2003)J.Mol.Med. 81:281-7；Blank等.(2005)Cancer Immunol.Immunother.54:307-314；Konishi等. (2004)Clin.Cancer Res.10:5094-100)。可通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局 部相互作用来逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，这种作 用是加和的(Iwai等.(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 99:12293-7；Brown等. (2003)J.Immunol.170:1257-66)。通过与免疫抑制蛋白(例如，PD-1)或调节该 抑制蛋白的结合蛋白(例如，PD-L1，PD-L2)结合，可实现免疫调节。
在一个实施方式中，本发明的组合疗法包括一种免疫调节剂，其为免疫检 查点分子的抑制分子的抑制剂或拮抗剂。在另一个实施方式中，免疫调节剂 与天然抑制免疫抑制性检查点分子的蛋白质结合。当与抗病毒化合物联用 时，这些免疫调节剂可增强抗病毒反应，因此相较于单独使用抗病毒化合物进 行的治疗而言可提高疗效。
术语“免疫检查点”是指CD4和CD8 T细胞的细胞表面上的一组分子。这 些分子可有效地发挥“刹车(brake)”作用，以下调或抑制适应性免疫反应。免 疫检查点分子包括但不限于程序性死亡1(PD-1)，细胞毒性T淋巴细胞抗原4 (CTLA-4)，B7H1，B7H4，OX-40，CD137，CD40和LAG3，它们直接抑制免疫 细胞。可用作本发明方法中的免疫检查点抑制剂的免疫治疗剂包括但不限于 PD-L1，PD-L2，CTLA4，TIM3，LAG3，VISTA，BTLA，TIGIT，LAIR1，CD160、 2B4和/或TGFRβ。抑制分子的抑制可通过在DNA，RNA或蛋白质水平上的抑 制来进行。在一些实施方式中，抑制性核酸(例如，dsRNA，siRNA或shRNA) 可用于抑制抑制性分子的表达。在其它实施方式中，抑制信号的抑制剂是与 抑制性分子结合的多肽，例如可溶性配体，或抗体或其抗原结合片段。
“与……组合”并不代表暗示必须同时给予和/或配制用于一起递送的疗法 或治疗剂，不过这些递送方法均在本文所述的范围内。免疫调节剂可与一种 或多种本发明的化合物，以及任选地一种或多种其它疗法或治疗剂同时给予或 在其之前或之后给予。组合中的治疗剂可以任何顺序给予。通常，各药剂 将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表来给予。还应认识到，在该组合中使 用的治疗剂可在单一组合物中一起给予或在不同组合物中分开给予。通常期 望组合使用的各治疗剂的使用水平均不超过其单独使用的水平。在一些实施 方式中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。
在某些实施方式中，本文所述的抗病毒化合物与的一种或多种免疫调节剂 组合给予，所述免疫调节剂是PD-1，PD-L1和/或PD-L2的抑制剂。每种这样的 抑制剂均可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。此 类免疫调节剂的示例是本领域已知的。
在一些实施方式中，免疫调节剂是选自MDX-1106，Merck 3475或CT-011 的抗PD-1抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如， 免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫粘 附素)。
在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-1抑制剂，例如AMP-224。
在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-L1抑制剂，例如抗PD-L1抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是抗PD-L1结合性拮抗剂，其选自 YW243.55.S70，MPDL3280A，MEDI-4736，MSB-0010718C或MDX-1105。 MDX-1105，也称为BMS-936559，是WO2007/005874中所述的抗PD-L1抗体。 抗体YW243.55.S70是WO 2010/077634中描述的抗PD-L1。
在一些实施方式中，免疫调节剂是纳武单抗(nivolumab)(CAS登记号： 946414-94-4)。纳武单抗的替代名称包括MDX-1106，MDX-1106-04， ONO-4538或BMS-936558。纳武单抗是一种完全人IgG4单克隆抗体，可特异 性阻断PD-1。特异结合PD-1的纳武单抗(克隆5C4)和其它人单克隆抗体公开于 US 8,008,449、EP2161336和WO2006/121168中。
在一些实施方式中，免疫调节剂是抗PD-1抗体派姆单抗(Pembrolizumab)。 派姆单抗(也称为兰波单抗(Lambrolizumab)，MK-3475，MK03475，SCH-900475 或
Figure BDA0002333517370000331
Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗 和其它人源化抗PD-1抗体公开于Hamid,O.等.(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134–44，US 8,354,509，WO2009/114335和WO2013/079174。
在一些实施方式中，免疫调节剂是匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011；CureTech)，一种与PD1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹利珠单抗和其它人源 化抗PD-1单克隆抗体公开于WO2009/101611。
在本文公开的方法中用作免疫调节剂的其它抗PD1抗体包括AMP 514(Amplimmune)，以及在US 8,609,089，US 2010028330和/或US 20120114649中 公开的抗PD1抗体。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体是MSB0010718C。MSB0010718C(也称作A09-246-2；Merck Serono)是与PD-L1结合的单克隆抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是MDPL3280A(Genentech/Roche)，其是 与PD-L1结合的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其它 人单克隆抗体已公开于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906。可用 作本发明方法的免疫调节剂的其它抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见 WO2010/077634)，MDX-1105(也称为BMS-936559)和WO2007/005874中公开的 抗PD-L1结合剂。
在一些实施方式中，免疫调节剂是AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例 如，公开于WO2010/027827和WO2011/066342)，是阻断PD1和B7-H1之间相互 作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是抗LAG-3抗体，例如BMS-986016。 BMS-986016(也称为BMS986016)是与LAG-3结合的单克隆抗体。BMS-986016 和其它人源化的抗LAG-3抗体公开于US 2011/0150892，WO2010/019570和 WO2014/008218。
在某些实施方式中，本文公开的组合疗法包括共刺激分子或抑制分子例如 共抑制性配体或受体的调节剂。
在一个实施方式中，共刺激分子的共刺激调节剂，例如激动剂，是选自以 下物质的激动剂(例如，激动性抗体或其抗原结合片段或可溶融合体)：OX40， CD2，CD27，CDS，ICAM-1，LFA-1(CD11a/CD18)，ICOS(CD278)，4-1BB (CD137)，GITR，CD30，CD40，BAFFR，HVEM，CD7，LIGHT，NKG2C， SLAMF7，NKp80，CD160，B7-H3或CD83配体。
在另一个实施方式中，本文公开的组合疗法包括免疫调节剂，其是共刺激 分子，例如与包括CD28，CD27，ICOS和/或GITR的共刺激结构域的阳性信号 相关的激动剂。
示例性GITR激动剂包括，例如，GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如，二价 抗GITR抗体)，例如，描述于以下文本中的GITR融合蛋白：美国专利号 6,111,090，欧洲专利号090505B1，美国专利号8,586,023，PCT公开号WO 2010/003118和2011/090754，或描述于以下文本中的抗GITR抗体：美国专利号 7,025,962，欧洲专利号1947183B1，美国专利号7,812,135，美国专利号8,388,967， 美国专利号8,591,886，欧洲专利号EP 1866339，PCT公开号WO 2011/028683， PCT公开号WO 2013/039954，PCT公开号WO2005/007190，PCT公开号WO2007/133822，PCT公开号WO2005/055808，PCT公开号WO 99/40196，PCT公开 号WO 2001/03720，PCT公开号WO99/20758，PCT公开号WO2006/083289，PCT 公开号WO 2005/115451，美国专利号7,618,632和PCT公开号WO 2011/051726。
在一个实施方式中，所使用的免疫调节剂是可溶性配体(例如CTLA-4-Ig) 或与PD-L1，PD-L2或CTLA4结合的抗体或抗体片段。例如，抗PD-1抗体分 子可与抗CTLA-4抗体(例如伊匹单抗(ipilimumab))组合给予。抗CTLA4抗体 的示例包括替西木单抗(Tremelimumab)(可获自Pfizer的IgG2单克隆抗体，旧称 替西单抗(ticilimumab)，CP-675,206)；和伊匹单抗(CTLA-4抗体，也称为 MDX-010，CAS编号477202-00-9)。
在一个实施方式中，在用本文所述的本发明化合物治疗后给予抗PD-1抗体 分子。
在另一个实施方式中，将抗PD-1或PD-L1抗体分子与抗LAG-3抗体或其抗 原结合片段组合给予。在另一个实施方式中，抗PD-1或PD-L1抗体分子与抗 TIM-3抗体或其抗原结合片段组合给予。在其它实施方式中，抗PD-1或PD-L1 抗体分子与抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体或其抗原结合片段组合给予。本文 所述抗体的组合可以例如以单独抗体形式分开给予，或例如以双特异性或三特 异性抗体分子相联给予。在一个实施方式中，给予包括抗PD-1或PD-L1抗体 分子和抗TIM-3或抗LAG-3抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体。在某些实施方式中，本文所述的抗体的组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如 实体瘤)。可以在本领域已知的动物模型中测试上述组合的功效。例如，测 试抗PD-1和抗LAG-3的协同作用的动物模型描述于例如Woo等.(2012)Cancer Res.72(4):917-27)。
可以用于组合疗法的示例性免疫调节剂包括但不限于，例如阿夫土珠单抗(afutuzumab)(可获自
Figure BDA0002333517370000351
)，乙二醇化非格司亭(pegfilgrastim)
Figure BDA0002333517370000352
来 那度胺(lenalidomide)(CC-5013，
Figure BDA0002333517370000353
)；沙利度胺 (thalidomide)
Figure BDA0002333517370000354
阿克汀(actimid)(CC4047)；和细胞因子，例如IL-21 或IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白介素1，白介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可获自IRX Therapeutics)。
可与本发明的抗病毒化合物组合使用的此类免疫调节剂的示例性剂量包 括约1-10mg/kg，例如3mg/kg的抗PD-1抗体分子的剂量，和约3mg/kg的抗CTLA-4抗体(例如伊匹单抗)的剂量。
将本发明的抗病毒化合物与免疫调节剂结合使用的方法的实施方式的示 例包括这些，它们可与本文公开的式I化合物或其任何亚类或物质一起使用：
i.一种治疗对象中病毒感染的方法，其包括向对象给予如本文所述的式(I) 化合物，和免疫调节剂。
ii.如实施方式i所述的方法，其中所述免疫调节剂是共刺激分子的活化剂 或免疫检查点分子的抑制剂。
iii.如实施方式i和ii中任一项所述的方法，其中所述共刺激分子的活化剂 是OX40，CD2，CD27，CDS，ICAM-1，LFA-1(CD11a/CD18)，ICOS(CD278)， 4-1BB(CD137)，GITR，CD30，CD40，BAFFR，HVEM，CD7，LIGHT，NKG2C， SLAMF7，NKp80，CD160，B7-H3和CD83配体中的一种或多种的激动剂。。
iv.如上述实施方式i-iii中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点分子的 抑制剂选自PD-1，PD-L1，PD-L2，CTLA4，TIM3，LAG3，VISTA，BTLA， TIGIT，LAIR1，CD160，2B4和TGFRβ。
v.如实施方式i-iii中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点分子的抑制 剂选自PD-1，PD-L1，LAG-3，TIM-3或CTLA4的抑制剂，或其任何组合。
vi.如实施方式i-v中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点分子的抑制 剂是与所述免疫检查点分子结合的可溶性配体或抗体或其抗原结合片段。
vii.如实施方式i-vi中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段 来自IgG1或IgG4(例如人IgG1或IgG4)。
viii.如实施方式i-vii中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片 段被改变(例如突变)以增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合，抗体糖基化， 半胱氨酸残基的数目，效应细胞功能或补体功能。
ix.如实施方式i-viii中任一项所述的方法，其中所述抗体分子是对PD-1或 PD-L1具有第一结合特异性且对TIM-3，LAG-3或PD-L2具有第二结合特异性的 双特异性或多特异性抗体分子
x.如实施方式i-ix中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是选自纳武 单抗，派姆单抗或匹利珠单抗的抗PD-1抗体。
xi.如实施方式i-x中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是抗PD-L1 抗体，其选自YW243.55.S70，MPDL3280A，MEDI-4736，MSB-0010718C或 MDX-1105。
xii.如实施方式i-x中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是抗LAG-3 抗体分子。
xiii.如实施方式xii所述的方法，其中所述抗LAG-3抗体分子是 BMS-986016。
xiv.如实施方式i-x中任一项所述的方法，其中所述免疫调节剂是抗PD-1 抗体分子，其以约1-30mg/kg，例如约5-25mg/kg，约10-20mg/kg，约1-5mg/kg 或约3mg/kg的剂量，例如每周一次至每2、3或4周一次，通过注射(例如，皮下 或静脉内)给予。
xv.如实施方式xiv所述的方法，其中每隔一周以约10-20mg/kg的剂量给予 抗PD-1抗体分子。
xvi.如实施方式xv所述的方法，其中，抗PD-1抗体分子(例如纳武单抗)以 约1mg/kg-3mg/kg，例如约1mg/kg，2mg/kg或3mg/kg的剂量每两周一次静脉内 给予。
xvii.如实施方式xv所述的方法，其中抗PD-1抗体分子(例如纳武单抗)以约 2mg/kg的剂量以3周的间隔静脉内给予。
本文所述的化合物可以通过下文的一般合成途径合成，其具体示例在实施 例中更详细地描述。
一般合成方法
用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构模块、试剂、酸、碱、脱水 剂、溶剂和催化剂可商品化购得，或可通过本领域普通技术人员已知的有机合 成方法制备(Houben-Weyl第四版.1952,《有机合成方法》(“Methods of Organic Synthesis”),Thieme,21卷)。下文的实施例、方案1中的一般方法以及公开的 PCT申请WO2015/113990和WO2015/173164中公开的方法说明了合成本发明化 合物的一般方法。
缩写列表
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
AcOEt/EtOAc 乙酸乙酯
AcOH 乙酸
aq 水性
Bn 苄基
Bu 丁基(nBu＝正丁基，tBu＝叔丁基)
CDI 羰二咪唑
DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]-十一碳-7-烯
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DIAD 偶氮二羧酸二异丙酯
DiBAl-H 二异丁基氢化铝
DIPEA N-乙基二异丙胺
DMA N,N-二甲基乙酰胺
DMAP 二甲氨基吡啶
DMF N,N’-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺
EI 电喷射离子化
Et2O 二乙醚
Et3N 三乙胺
醚(Ether) 二乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
FA 甲酸
FC 急骤层析
h (一个或多个)小时
HCl 盐酸
HOBt 1-羟基苯并三唑
HPLC 高效液相色谱法
H2O 水
IPA 异丙醇
L (一或多)升
LC-MS 液相色谱质谱
LiHMDS 双(三甲基硅烷基)锂酰胺
Me 甲基
MeI 碘甲烷
MeOH 甲醇
mg 毫克
min (一或多)分钟
mL 毫升
MS 质谱法
Pd/C 钯炭
PG 保护基团
Ph 苯基
Ph3P 三苯基膦
Prep 制备型
Rf 正值比(ratio of fronts)
RP 反相
Rt 保留时间
rt 室温
SFC 超临界流体色谱法
SiO2 硅胶
Figure BDA0002333517370000391
丙基膦酸酐
TBAF 四丁基氟化铵
TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
TsCl 甲苯磺酰氯
在本文的范围内，除非上下文另外指出，否则不属于本发明化合物的特定 所需最终产物的组成的易于除去的基团被称为“保护基”。通过此类保护基团对 官能团的保护，所述保护基团本身，及其裂解反应描述于，例如，标准参考文 件中，例如，《合成科学：分子转化的Houben-Weyl方法》(Science of Synthesis: Houben-Weyl Methods of MolecularTransformation).乔治·蒂姆出版社(Georg Thieme Verlag)，德国斯图加特.2005.41627页数.(URL: http://www.science-of-synthesis.com(电子版本,48卷))；J.F.W.McOmie,"有机 化学中的保护基团(Protective Groups in Organic Chemistry)",普莱南出版社(Plenum Press),伦敦和纽约1973,于T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"有机合成中 的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)",第三版,威利出版社 (Wiley),纽约1999,于"肽(The Peptides)"；第3卷(编者:E.Gross和J. Meienhofer),学术出版社(AcademicPress),London和New York 1981,于"有机 化学方法(Methoden der organischenChemie)",侯本·魏尔公司(Houben Weyl), 第4版,第15/I卷,乔治·蒂姆出版社,斯图加特1974,于H.-D.Jakubke和H. Jeschkeit,"氨基酸、肽、蛋白质(
Figure BDA0002333517370000401
Peptide,Proteine)",化学出版社 (Verlag Chemie),魏因海姆迪尔菲尔德海滩和巴塞尔1982,和，于Jochen Lehmann,"碳水化合物化学：单糖及其衍生物(Chemie der Kohlenhydrate:Monosaccharide und Derivate)",乔治·蒂姆出版社,斯图加特1974。保护基团的 特征是它们易于除去(即，在不发生不希望的次级反应的情况下)，例如通过溶 剂分解、还原、光解或在生理条件下(例如通过酶促裂解)除去。
具有至少一个成盐基团的本发明化合物的盐可以以本身已知的方式制备。 例如，具有酸基团的本发明化合物的盐可以例如通过采用如下物质处理所述化 合物来形成，例如，采用金属化合物，例如合适的有机羧酸的碱金属盐，例如 2-乙基己酸的钠盐，采用有机碱金属或碱土金属化合物(例如相应的氢氧化物， 碳酸盐或碳酸氢盐，例如氢氧化钠或氢氧化钾，碳酸钠或碳酸钾或碳酸氢钠或 碳酸氢钾，采用相应的钙化合物或采用氨或合适的有机胺，化学计量或仅小幅 过量的成盐剂是优选使用的。本发明化合物的酸加成盐以常规方式获得，例 如通过用酸或合适的阴离子交换试剂处理化合物。包含酸和碱性成盐基团(例 如游离羧基和游离氨基)的本发明化合物的内盐可以，例如，通过采用弱碱或用 离子交换剂处理，将盐(例如酸加成盐)中和至等电点来形成。
盐可以按常规方式转化为游离化合物；金属和铵盐可以例如通过用合适的 酸处理而转化，而酸加成盐可以例如通过用合适的碱性试剂处理而转化。
可按本身已知的方式将根据本发明获得的异构体的混合物分离为单独的 异构体；非对映异构体可例如通过以下方式分离：通过在多相溶剂混合物之间 分配，重结晶和/或色谱分离，例如在硅胶上或通过例如中压液相色谱法在反相 柱上进行分离，并且可以分离出外消旋物，例如通过用光学纯的成盐试剂形成 盐，并分离非对映异构体的混合物，例如可通过分步结晶或通过在光学活性柱 材料上的色谱法来获得。
中间体和终产物可根据标准方法，例如，使用色谱法，分配法，(重)结晶 等进行逐步处理和/或纯化。
实施例
通过以下实施例说明本发明，这些实施例不应构成限制。通常认为用于 证明式(I)化合物在这些测定中的功效的测定是对对象中功效的预测。
一般条件：
使用电喷雾离子化在LC-MS系统上运行质谱。这些是WATERS Acquity单 通道探测器。[M+H]+指单同位素分子量。
NMR光谱在开放式Varian 400或Varian 500NMR光谱仪上运行。光谱在 298K测量，并且使用溶剂峰作为参比。1H NMR的化学位移以百万分率(ppm) 表示。
质谱是在具有以下条件之一的LC-MS系统上运行的：
配备SQD检测器的Waters Acquity UPLC-H类系统。
柱：ACQUITY UPLC HSS C18(50*2.1)mm,1.8u。
柱温：环境温度。
流动相：A)水中的5mM醋酸铵+0.1％FA。
B)乙腈中的0.1％FA。
梯度：0.40分钟内5-5％溶剂B，0.80分钟内5-35％溶剂B，1.2分钟内35-55％ 溶剂B，
2.5分钟内55-100％溶剂B。
流速：0.55mL/分钟。
通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。
配备ZQ 2000检测器的Waters LCMS系统。
柱：X-BRIDGE C18(50*4.6)mm,3.5u。
柱温：环境温度。
流动相：A)水中的0.1％NH3。
B)乙腈中的0.1％NH3。
梯度：5.00分钟内5-95％溶剂B。
流速：1.0mL/分钟。
通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。
Waters ACQUITY UPLC系统且配备ZQ 2000MS系统。
柱：Kinetex，来自Phenomenex,2.6um,2.1 x 50mm。
柱温：50℃
梯度：1.29分钟时间段内2-88％(或00-45％或65-95％)溶剂B
流速：1.2mL/分钟。
通过Waters光电二极管阵列检测器检测化合物。
用以下色谱柱进行手性分离：
AD：ChiralPak AD-H,SFC 21x250mm
OD：ChiralPak OD-H,SFC 21x250mm
实施例1.1：
6-(叔丁基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[1.1-I]和[1.1-II]
Figure BDA0002333517370000421
步骤1：(7-甲氧基-2H-吲唑-3-基)甲醇[1.1a]
Figure BDA0002333517370000431
向7-甲氧基-2H-吲唑-3-羧酸甲酯(950mg，4.61mmol)添加THF(体积：25mL)， 冷却至0℃，然后添加LAH(THF中2M；3.46mL，6.91mmol)。使反应温热至室 温并搅拌2小时或直至LCMS完成。使反应在冰浴中冷却，然后通过滴加过量 的水(0.8ml)小心地淬灭，并随着盐形成加入硫酸镁，然后添加硫酸钠。将反 应物从冰浴中移出并搅拌1小时，通过硅藻土过滤，浓缩至残余物，得到所需 1.1a，假定按定量收率，原样使用。LC-MS(m/z)：179.1[M+H]+,0.48分钟。
步骤2：3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑[1.1b]
Figure BDA0002333517370000432
向1.1a(810mg，4.55mmol)添加DCM(体积：25mL)和咪唑(990mg， 14.55mmol)，并将混合物在室温搅拌5分钟。然后添加TBDMSC1(2055mg， 13.64mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。向反应添加10ml 甲醇，搅拌2-3分钟，并浓缩掉大部分溶剂。然后添加250ml乙酸乙酯，有机 层用饱和碳酸氢钠，水，饱和盐溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至 残余物，得到所需产物1.1b，假定按定量收率，其按原样使用。LC-MS(m/z): 293.3[M+H]+,1.15分钟。
步骤3：1-(3-((((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[1.1c]
Figure BDA0002333517370000441
向1.1b(1300mg，4.45mmol)添加DMF(体积：20mL)和碳酸锂(1314mg， 17.78mmol)，并将混合物在75-80℃下搅拌10分钟。然后在75-80℃向反应添 加1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮(1990mg，11.11mmol)，并将混合物在75-80℃搅拌15 小时或直至LCMS完成。向反应物添加150ml乙酸乙酯，将其用饱和碳酸氢钠， 水，饱和盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物质通过硅 胶柱色谱法纯化，使用0-30％EtOAC/庚烷。然后洗脱所需的位置异构体 (regio-isomer)，并浓缩至恒定质量，以30％的产率得到520mg的所需产物1.1c。LC-MS(m/z):391.3[M+H]+,1.31分钟。
步骤4：(2-(2-氨基-3,3-二甲基丁基)-7-甲氧基-2H-吲唑-3-基)甲醇[1.1d]
Figure BDA0002333517370000442
向1.1c(520mg，1.331mmol)添加MeOH(体积：8mL)，乙酸铵(1539mg， 19.97mmol)和氰基硼氢化钠(251mg，3.99mmol)。然后，反应在55℃下搅拌 40小时或直至LCMS完成。向该粗反应添加350ml的DCM和25ml的甲醇，用1:1 的(6M NaOH，饱和盐溶液)溶液萃取。用DCM反萃取水层。合并有机物， 用饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，通过1cm x 2cm硅藻土滤塞过滤，用DCM 用10％甲醇洗涤，浓缩至残余物，得到所需产物1.1d，假定按定量收率，原样 使用。LC-MS(m/z):278.3[M+H]+,0.51分钟。
步骤5：3-(叔丁基)-7-甲氧基-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[1.1e]
Figure BDA0002333517370000451
向1.1d(360mg，1.298mmol)添加DCM(体积：12mL)和二氧化锰(1128mg，12.98mmol)。然后，反应在室温搅拌2小时。然后，另添加二氧化锰(564mg， 6.49mmol)并搅拌过夜，总共20小时或直到LCMS完成。如果需要，可以另添 加二氧化锰。向粗产物添加30mlDCM，搅拌30分钟，然后通过1cm x 2cm硅 藻土滤塞过滤，用DCM冲洗并浓缩至残余物。将残余物溶于5ml DCM中，并 添加过量的TFA(0.300mL，3.89mmol)，在室温搅拌5-10分钟，然后浓缩至残余 物，得到所需产物1.1e，假定按定量收率，原样使用。LC-MS(m/z):258.3 [M+H]+,0.59分钟。
步骤6：6-(叔丁基)-10-甲氧基-2-氧代-2,6,7,13c-四氢-1H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.1f]
Figure BDA0002333517370000452
向1.1e(250mg，0.972mmol)添加乙醇(体积：8mL)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3- 氧代丁酸乙酯(543mg，2.91mmol)。然后将反应在85-90℃搅拌16小时或直至 LCMS完成。将反应浓缩至残余物，得到所需产物1.1f，假定按定量收率，原 样用于下一步骤。LC-MS(m/z):398.3[M+H]+,0.77分钟。
步骤7：6-(叔丁基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.1g-I]和[1.1g-II]
Figure BDA0002333517370000461
1.1g-I和1.1g-II
向1.1f(384mg，0.966mmol)添加DME(体积：7mL)，然后添加氯醌(238mg，0.966mmol)。反应在90-95℃搅拌90分钟或直至LCMS完成。将粗反应物浓 缩至残余物，并通过硅胶色谱法纯化，使用0-100％EtOAc(含25％乙醇)/庚烷。 将所需的级分浓缩至恒定质量，以37％的产率得到140mg的所需外消旋产物 1.1g。LC-MS(m/z):396.4[M+H]+,0.77分钟。
通过使用(OD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝75/25，276巴)的手性色谱 分离上述外消旋物质128mg，得到58mg产物1.1g-I(峰1，tR 4.40分钟)和55mg产 物1.1g-II(峰2,tR 6.69分钟)。
步骤8：6-(叔丁基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[1.1-I]和[1.1-II]
Figure BDA0002333517370000462
向1.1g-I(58mg，0.147mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)，MeOH(体 积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加NaOH 3M(0.147ml，0.440mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓缩 掉溶剂，将残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制备型LC纯化，并冻 干。将产物重新溶解在1:1ACN/水中，并再次冻干，以14％的收率得到10.0mg 的所需产物1.1-I，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.80分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,1H),7.20-7.32(m,2H),6.84(d, J＝7.6Hz,1H),5.12(br s,2H),4.97(br s,1H),3.96(s,3H),0.70(s,9H)。
向1.1g-II(55mg，0.139mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)，MeOH(体 积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加3M NaOH(0.139ml，0.417mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓 缩掉溶剂，将残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制备型LC纯化，并 冻干。将产物重新溶解在1:1的ACN/水中，并再次冻干，以35％的收率得到 23.8mg的所需产物1.1-II，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.80分钟。 1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,1H),7.21-7.33(m,2H),6.84(d,J＝7.6Hz,1H),5.12(br s,2H),4.96(br s,1H),3.96(s,3H),0.70(s,9H)
实施例1.2：
6-(叔丁基)-11-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[1.2-I]和[1.2-II]
Figure BDA0002333517370000471
1.2-I和1.2-II
步骤1～7：6-(叔丁基)-11-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.2g-I]和[1.2g-II]
Figure BDA0002333517370000472
1.2g-I和1.2g-II
由起始物质合成化合物1.2g；通过实施例1.1的方法，按照步骤1-7，用6- 甲氧基-2H-吲唑-3-羧酸甲酯形成所需产物1.2g，为外消旋物质。LC-MS(m/z): 396.3[M+H]+,0.79分钟。
通过使用AD柱的手性色谱法(SFC＝100ml/分钟，CO2/EtOH＝70/30，266巴) 分离上述外消旋物质(65mg)，以32mg得到产物1.2g-I(峰1，tR 2.11分钟)并以30 mg得到产物1.2g-II(峰2,tR 5.42分钟)。
步骤8：6-(叔丁基)-11-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[1.2-I]和[1.2-II]
Figure BDA0002333517370000481
向1.2g-I(32mg，0.081mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)，MeOH(体 积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加3M NaOH(0.081 ml，0.243mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓缩掉溶剂， 将残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制备型LC纯化，并冻干。将 产物重新溶解在1:1ACN/水中，并再次冻干，以22％的收率得到8.8mg的所需 产物1.2-I，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.81分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),8.06(d,J＝9.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.16(s,1H), 6.95-7.03(m,1H),5.01-5.15(m,2H),4.93(d,J＝4.5Hz,1H),3.85(s,3H),0.70(s,9H)
向1.2g-II(30mg，0.076mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)，MeOH(体 积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加3M NaOH(0.076 ml，0.228mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓缩溶剂， 将残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制备型LC纯化，并冻干。将 产物重新溶解在1:1的ACN/水中，并再次冻干，以20％的收率得到7.4mg的所需 产物1.2-II，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.81分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),8.06(d,J＝9.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.16(s,1H),6.99 (br d,J＝9.2Hz,1H),5.00-5.18(m,2H),4.93(d,J＝4.5Hz,1H),3.85(s,3H),0.70 (s,9H)
实施例1.3：
6-(叔丁基)-12-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[1.3-I]和[1.3-II]
Figure BDA0002333517370000491
1.3-I和1.3-II
步骤1～7：6-(叔丁基)-12-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.3g-I]和[1.3g-II]
Figure BDA0002333517370000492
1.3g-I和1.3g-II
由起始物质合成化合物1.3g；通过实施例1.1的方法，按照步骤1-7，用5- 甲氧基-2H-吲唑-3-羧酸甲酯形成所需产物1.3g，为外消旋体。LC-MS(m/z): 396.3[M+H]+,0.81分钟。
通过使用AD柱的手性色谱法(SFC＝100ml/分钟，CO2/EtOH＝85/15，236巴) 分离上述外消旋物质(148mg)，以56mg得到产物1.3g-I(峰1，tR 10.41分钟)并以 68mg得到产物1.3g-II(峰2，tR 12.55分钟)。
步骤8：6-(叔丁基)-12-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[1.3-I]和[1.3-II]
Figure BDA0002333517370000493
向1.3g-I(55mg，0.139mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)，MeOH(体 积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加3M NaOH(0.139 ml，0.417mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓缩溶剂，将 残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制备型LC纯化，并冻干。将产 物重新溶解在1:1ACN/水中，并再次冻干，以27％的收率得到18.7mg的所需产 物1.3-I，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.83分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.75(d,J＝9.2Hz,1H),7.42(s,1H),7.36(s,1H),7.10 (dd,J＝9.5,1.9Hz,1H),5.02-5.17(m,2H),4.94(d,J＝4.5Hz,1H),3.93(s,3H),0.70(s,9H)。向1.3g-II(67mg，0.169mmol)添加THF(体积：1.2ml，比率：12.00)， MeOH(体积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)，然后添加 3M NaOH(0.169ml，0.508mmol)。向(30mg,0.076mmol)添加THF(体积：1.2ml， 比率：12.00)，MeOH(体积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.8ml，比率：8.00)， 然后添加3M NaOH(0.076ml，0.228mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至 LCMS完成。浓缩溶剂，将残余物溶于含5％水的4ml DMSO中，通过反相制 备型LC纯化，并冻干。将产物重新溶解在1:1的ACN/水中，并再次冻干，以 36％的收率得到29.8mg的所需产物1.3-II，为TFA盐。LC-MS(m/z):368.3 [M+H]+,0.82分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.75(d,J＝9.2Hz,1H), 7.42(s,1H),7.36(s,1H),7.10(dd,J＝9.2,1.9Hz,1H),5.02-5.18(m,2H),4.94(d, J＝4.5Hz,1H),3.93(s,3H),0.70(s,9H)
实施例1.4：
6-(叔丁基)-13-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[1.4-I]和[1.4-II]
Figure BDA0002333517370000501
1.4-I和1.4-II
步骤1～7：6-(叔丁基)-13-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.4g-I]和[1.4g-II]
Figure BDA0002333517370000511
1.4g-I和1.4g-II
由起始物质合成化合物1.4g；通过实施例1.1的方法，按照步骤1-7，用4- 甲氧基-2H-吲唑-3-羧酸甲酯形成所需产物1.4g，为外消旋物质。LC-MS(m/z): 396.3[M+H]+,0.81分钟。通过使用OD柱的手性色谱法(SFC＝100ml/分钟， CO2/MeOH＝88/12，246巴)纯化上述外消旋物质(60mg)，得到30mg的富集外消 旋物质1.4g(峰1,tR 8.74分钟,25％和峰2,tR11.37分钟,75％)。
步骤8：6-(叔丁基)-13-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[1.4-I]和[1.4-II]
Figure BDA0002333517370000512
向上述富集外消旋物质1.4g(30mg，0.076mmol)添加THF(体积：0.5ml，比 率：5.00)，MeOH(体积：0.1ml，比率：1.000)，水(体积：0.3ml，比率：3.00)， 然后添加3M NaOH(0.076ml，0.228mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至 LCMS完成。浓缩溶剂，将残余物溶于含5％水的2ml DMSO中，通过反相制 备型LC纯化，并冻干，以49％收率得到18mg富集外消旋产物1.4，为TFA盐。 LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.77分钟。
通过手性色谱法，使用(AS柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/EtOH＝80/20，226 巴)进一步纯化上述富集物质(18mg)，以9％收率得到2.6mg产物1.4-I(峰1，tR 4.76 分钟)，并以27％收率得到7.7mg产物1.4-II(峰2,tR 9.41分钟)，均为游离碱。
1.4-I LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.82分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ: 8.90(br s,1H),7.89(br s,1H),7.30-7.43(m,2H),6.77(br d,J＝5.7Hz,1H), 4.99-5.18(m,2H),4.93(br s,1H),3.99(s,3H),0.71(s,9H)
1.4-II LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ: 8.91(br s,1H),7.90(br s,1H),7.29-7.42(m,2H),6.77(br d,J＝6.1Hz,1H), 5.02-5.17(m,2H),4.93(br s,1H),3.99(s,3H),0.71(s,9H)
实施例1.5：
6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸 [1.5-I]和[1.5-II]
Figure BDA0002333517370000521
1.5-I和1.5-II
步骤1～7：6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[1.5g-I]和[1.5g-II]
Figure BDA0002333517370000522
1.5g-I和1.5g-II
由起始物质合成化合物1.5g；通过实施例1.1的方法，按照步骤1-7，用2H- 吲唑-3-甲酸甲酯形成所需产物1.5g，为外消旋物质。LC-MS(m/z):366.3 [M+H]+,0.68分钟。通过使用AD柱的手性色谱法(SFC＝100ml/分钟， CO2/EtOH＝70/30，256巴)纯化上述外消旋物质(60mg)，以获得13mg产物 1.5g-I(峰1,tR 2.30分钟)和13mg产物1.5g-II(峰2,tR 3.97分钟)。
步骤8：6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑 -3-羧酸[1.5-I]和[1.5-II]
Figure BDA0002333517370000531
向1.5g-I(12mg，0.033mmol)添加THF(体积：0.2ml，比率：1.000)，MeOH(体 积：0.2ml，比率：1.000)，然后添加3M NaOH(0.033ml，0.099mmol)。反应 在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。浓缩溶剂，将残余物溶于1.2ml DMSO 中，通过反相制备型LC纯化，并冻干。将产物重新溶解在1:1ACN/水中，并 再次冻干，以45％的收率得到6.8mg的所需产物1.5-I，为TFA盐。LC-MS(m/z): 338.3[M+H]+,0.68分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.99(s,1H),8.20(d,J＝8.5 Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.43-7.52(m,1H),7.33-7.41(m,2H),5.10-5.25 (m,2H),4.99(d,J＝4.7Hz,1H),0.71(s,9H)。向1.5g-II(12mg，0.033mmol)添 加THF(体积：0.2ml，比率：1.000)，MeOH(体积：0.2ml，比率：1.000)，然后 添加3M NaOH(0.033ml，0.099mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完 成。浓缩掉溶剂，将残余物溶于1.2mlDMSO中，通过反相制备型LC纯化， 并冻干。将产物重新溶解在1:1的ACN/水中，并再次冻干，以45％的收率得 到6.8mg的所需产物1.5-II，为TFA盐。LC-MS(m/z):338.3[M+H]+,0.68分钟。 1H NMR(DMSO-d6)δ:8.99(s,1H),8.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz, 1H),7.43-7.50(m,1H),7.31-7.41(m,2H),5.10-5.21(m,2H),4.99(d,J＝4.4Hz, 1H),0.71(s,9H)
实施例2.1：
6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.1-I]和[2.1-II]
Figure BDA0002333517370000532
2.1-I和2.1-II
步骤1：(7-(苄氧基)-2H-吲唑-3-基)甲醇[2.1a]
Figure BDA0002333517370000541
向7-(苄氧基)-2H-吲唑-3-羧酸甲酯(6000mg，21.25mmol)添加THF(体积：100mL)，并在室温下搅拌以使其溶解。然后将反应置于室温水浴中，并小心 地添加THF中的2M LAH(15.94mL，31.9mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至 LCMS完成。反应在冰浴中冷却，然后通过另添加THF(体积：100mL)之后滴 加过量的水(3.0mL)小心地淬灭。当形成盐时，添加硫酸镁，然后添加硫酸钠。 将反应物从冰浴中移出并搅拌55分钟，通过硅藻土过滤，浓缩至残余物，以90％ 的收率得到4850mg所需产物2.1a，原样使用。LC-MS(m/z):255.2[M+H]+,0.71分钟。
步骤2：7-(苄氧基)-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2H-吲唑[2.1b]
Figure BDA0002333517370000542
向2.1a(4850mg，19.07mmol)添加DCM(体积：100mL)和咪唑(4155mg， 61.0mmol)，室温下搅拌5分钟。然后添加TBDMSC1(8,624mg，57.2mmol)。 反应在室温搅拌15小时或直至LCMS完成。向反应添加10ml甲醇，搅拌2-3分 钟，并浓缩掉大部分溶剂。然后添加300ml乙酸乙酯，将其用饱和碳酸氢钠， 水，饱和盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物，得到所需产物2.1b， 假定按定量收率，原样使用。LC-MS(m/z):369.5[M+H]+,1.16分钟。
步骤3：1-(7-(苄氧基)-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2H-吲唑-2-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[2.1c]
Figure BDA0002333517370000551
向2.1b(6985，18.95mmol)添加DMF(体积：60mL)和碳酸锂(5602mg， 76mmol)，并使混合物在90℃搅拌10分钟。然后在90℃向反应添加1-溴-3,3- 二甲基丁-2-酮(8484mg，47.4mmol)，然后在90℃搅拌15小时或直到LCMS完成。 向冷却的反应物添加450ml乙酸乙酯，其用饱和碳酸氢钠，水，饱和盐溶液洗 涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物质通过硅胶柱色谱法纯化， 使用0-25％EtOAC/庚烷。然后洗脱所需的位置异构体，并浓缩至恒定质量， 以35％的收率得到3100mg的所需产物2.1c。LC-MS(m/z):467.4[M+H]+,1.30 分钟。
步骤4：(2-(2-氨基-3,3-二甲基丁基)-7-(苄氧基)-2H-吲唑-3-基)甲醇[2.1d]
Figure BDA0002333517370000552
向2.1c(3100mg，6.64mmol)添加MeOH(体积：29mL)，乙酸铵(7680mg， 100mmol)和氰基硼氢化钠(1252mg，19.93mmol)。然后，反应在55℃下搅拌 40小时或直至LCMS完成。向该粗反应添加350ml的DCM和25ml的甲醇，用 1:1的(6M NaOH，饱和盐溶液)溶液萃取。用DCM反萃取水层。合并有机 物，用饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，通过1cm x 2cm硅藻土滤塞过滤，用 DCM用10％甲醇洗涤，浓缩至残余物，得到所需产物2.1d(假定按定量收率)， 原样使用。LC-MS(m/z):354.3[M+H]+,0.73分钟。
步骤5：7-(苄氧基)-3-(叔丁基)-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[2.1e]
Figure BDA0002333517370000561
向2.1d(2340mg，6.62mmol)添加DCM(体积：45mL)和二氧化锰(5755mg，66.2mmol)。然后，反应在室温搅拌2小时。然后，另添加二氧化锰(2878mg， 33.1mmol)，并将混合物搅拌过夜共20小时或直至LCMS完成。如果需要，可 以另添加二氧化锰。向粗产物添加30ml DCM，搅拌30分钟，然后通过1cm x 2cm硅藻土滤塞过滤，用DCM冲洗并浓缩至残余物。将残余物溶于20ml DCM 中，并添加过量的TFA(1.530mL，19.86mmol)，并使该混合物在室温搅拌5-10 分钟，然后浓缩至残余物，得到所需产物2.1e(假定按定量收率)，原样使用。LC-MS(m/z):334.3[M+H]+,0.82分钟。
步骤6：10-(苄氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-2,6,7,13c-四氢-1H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.1f]
Figure BDA0002333517370000562
向2.1e(2200mg，6.60mmol)添加乙醇(体积：35mL)和(Z)-2-(乙氧基亚甲 基)-3-氧代丁酸乙酯(3686mg，19.79mmol)。然后将反应在85-90℃搅拌16小时 或直至LCMS完成。将反应浓缩至残余物，得到所需2.1f产物，假定按定量收 率，原样使用。LC-MS(m/z):474.6[M+H]+,0.92分钟。
步骤7：10-(苄氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并 [1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.1g]
Figure BDA0002333517370000571
向2.1f(3120mg，6.59mmol)添加DME(体积：40mL)，然后添加氯醌(1620mg，6.59mmol)。反应在90-95℃搅拌90分钟或直至LCMS完成。将反应冷却， 添加2ml水；搅拌5分钟，然后用350ml含2％乙醇的DCM稀释。添加饱和碳酸 氢钠(100ml)和150ml水，并将混合物搅拌5分钟。过滤反应物，并分离各层。 有机层用水2×，饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗 物质通过硅胶色谱法纯化，使用0-75％EtOAc(具有25％乙醇)/庚烷。将所需的 级分浓缩至恒定质量，以37％的产率得到1145mg的所需产物2.1g。LC-MS(m/z): 472.5[M+H]+,0.98分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.51(s,1H),7.48-7.57(m, 3H),7.30-7.45(m,3H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),6.81(s,1H), 5.27(s,2H),5.00-5.08(m,2H),4.69(br d,J＝3.0Hz,1H),4.22(q,J＝7.0Hz,2H), 1.26(t,J＝7.1Hz,3H),0.68(s,9H)。
步骤8：6-(叔丁基)-10-羟基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.1h]
Figure BDA0002333517370000572
用氩气向2.1g(1120mg，2.375mmol)冲灌，然后添加Pd-C(758mg， 0.713mmol)。然后在氩气下用注射器添加乙醇(体积：40mL)。向反应添加 氢气填充的气囊。将反应排空并用氢气重新填充5x，然后在室温下搅拌2小 时或直至LCMS完成。通过除去氢气囊并用氩气冲灌反应来终止反应。然 后添加100ml的THF，并将混合物搅拌30分钟。将反应通过1×2cm硅藻土塞过 滤，用THF冲灌并浓缩至残余物，以99％的收率得到900mg所需产物2.1h，其以原样使用。LC-MS(m/z):382.5[M+H]+,0.68分钟。
步骤9：6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.1i-I]和[2.1i-II]
Figure BDA0002333517370000581
2.1i-I和2.1i-II
向2.1h(425mg，1.114mmol)添加DMF(体积：10mL)和碳酸铯(1089mg， 3.34mmol)。将反应在室温搅拌10分钟，然后添加1-溴-3-甲氧基丙烷(341mg， 2.228mmol)，并将反应加热至50-55℃，搅拌2小时或直至LCMS完成。将反 应冷却，用含2％乙醇的225ml DCM稀释，用饱和碳酸氢钠，水，饱和盐溶液洗 涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物质通过硅胶色谱法纯化，使 用0-100％EtOAc(具有25％乙醇)/庚烷。将所需的级分浓缩至恒定质量，以86％ 的产率得到434mg的所需外消旋产物2.1i。LC-MS(m/z):454.5[M+H]+,0.82分 钟。1H NMR(<dmso>)δ:8.52(s,1H),7.50(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(t,J＝8.0Hz, 1H),6.74-6.83(m,2H),5.05-5.13(m,1H),4.98-5.05(m,1H),4.69(d,J＝4.5Hz, 1H),4.11-4.28(m,4H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.04(五峰,J＝6.3Hz, 2H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H),0.68(s,9H)。
通过使用OD柱的手性色谱法(SFC＝80ml/分钟，CO2/MeOH＝70/30，266巴) 分离上述外消旋物质434mg，得到170mg的产物2.1i-I(峰1,tR 3.93分钟)和172mg 的产物2.1i-II(峰2,tR 6.98分钟)。
步骤10：6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.1-I]和[2.1-II]
Figure BDA0002333517370000582
向2.1i-I(170mg，0.375mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体积： 5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(1.125ml，1.125mmol)。反应在室温搅拌 2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然 后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以96％的收率得到154mg的所需产物2.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):426.4[M+H]+,0.85分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ: 8.95(s,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.31(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H), 5.03-5.26(m,2H),4.95(d,J＝4.8Hz,1H),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.51(t,J＝6.3Hz, 2H),3.25(s,3H),2.04(五峰,J＝6.3Hz,2H),0.69(s,9H)。向2.1i-II(172mg， 0.379mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体积：5ml，比率：1.000)， 然后添加LiOH(1.138ml，1.138mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完 成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的 100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层，再次用含5％乙醇的 50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠 干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于1:1ACN/ 水中，并冻干，以94％的产率得到154mg的所需产物2.1-II，为游离碱。LC-MS (m/z):426.4[M+H]+,0.85分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.17-7.28(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.51(t,J＝6.2Hz,2H),3.25(s,3H),2.04 (五峰,J＝6.3Hz,2H),0.69(s,9H)
实施例2.2：
6-(叔丁基)-10-(2-甲氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.2-I]和[2.2-II]
Figure BDA0002333517370000591
2.2-I和2.2-II
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-甲氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.2aI]和[2.2a-II]
Figure BDA0002333517370000601
向2.1h(425mg，1.114mmol)添加DMF(体积：10mL)和碳酸铯(1089mg， 3.34mmol)。将反应在室温搅拌10分钟，然后添加1-溴-2-甲氧基乙烷(310mg， 2.228mmol)，并将反应加热至50-55℃，搅拌2小时或直至LCMS完成。将反 应冷却，用含2％乙醇的225ml DCM稀释，用饱和碳酸氢钠，水，饱和盐溶液洗 涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物质通过硅胶色谱法纯化，使 用0-100％EtOAc(具有25％乙醇)/庚烷。将所需的级分浓缩至恒定质量，以85％ 的产率得到414mg的所需外消旋产物2.2a。LC-MS(m/z):440.5[M+H]+,0.78 分钟。通过使用AD柱的手性色谱法(SFC＝100ml/分钟，CO2/EtOH＝75/25，226 巴)分离上述外消旋物质414mg，得到134mg产物2.2a-I(峰1，tR 3.55分钟)和 104mg产物2.2a-II(峰2,tR4.97分钟)。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-甲氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.2-I]和[2.2-II]
Figure BDA0002333517370000602
向2.2a-I(134mg，0.305mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体积： 5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(0.915ml，0.915mmol)。反应在室温搅拌2 小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然 后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1 ACN/水中，并冻干，以93％的收率得到117mg的所需产物2.2-I，为游离碱。LC-MS(m/z):412.4[M+H]+,0.80分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ: 8.94(s,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.15-7.30(m,2H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H), 5.05-5.22(m,2H),4.96(d,J＝4.6Hz,1H),4.24-4.34(m,2H),3.70-3.78(m,2H), 3.33(s,3H),0.69(s,9H)。向2.2a-II(104mg，0.237mmol)添加乙腈(体积：4ml， 比率：1.000)，水(体积：4ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(0.710ml，0.710mmol)。 反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸 化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。 分离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水， 饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至 残余物。将残余物溶于1:1 ACN/水中，并冻干，以95％的产率得到93mg的所 需产物2.2-II，为游离碱。LC-MS(m/z):412.4[M+H]+,0.80分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.32(m,2H),6.83(d, J＝7.6Hz,1H),5.03-5.29(m,2H),4.95(d,J＝4.6Hz,1H),4.23-4.32(m,2H), 3.68-3.79(m,2H),3.33(s,3H),0.69(s,9H)。
其中R1＝F的化合物的合成的说明性实施例
步骤1：5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮[1a]
Figure BDA0002333517370000611
Pd(OAc)2(8.16mg，0.036mmol)，叔丁醇钠(0.454g，4.72mmol)，二环己 基(2'-甲基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(32mg)，2,2-二甲基环戊酮(0.547ml，4.36mmol) 和4-溴-1-甲氧基-2-(3-甲氧基丙氧基)苯(1g，3.63mmol)在甲苯(4.0mL)中的混 合物在密封小瓶中于50℃加热18小时。将混合物用EtOAc稀释并过滤。浓 缩滤液，并将剩余的油通过硅胶柱色谱法纯化，使用EtOAC/庚烷5-50％，得到 产物(500mg，45％收率)。LC-MS(m/z):307.2[M+H]+.1HNMR(400MHz, CDCl3):7.72–7.28(m,1H),6.94–6.61(m,2H),4.10(m,2H),3.91–3.77(m,4H),3.65–3.49(m,2H),3.41–3.27(m,3H),2.36(d,J＝4.2Hz,1H),2.19–1.88 (m,4H),1.88–1.71(m,1H),1.21–1.11(m,3H),1.07(s,3H).
步骤2：5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺[1b]
Figure BDA0002333517370000621
向5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊酮(320mg，1.0mmol)在MeOH(3mL)中的混合物添加乙酸氨盐(1.6g，20.9mmol)和氰基硼氢化 钠(656mg，10.4mmol)。混合物在80℃搅拌8小时，然后在减压下浓缩。剩 余的物质用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。粗物质无 需进一步纯化即可用于下一步。LCMS(m/z):308.0[M+H]+。
步骤3：N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2二甲基环戊基)甲酰胺[1c]
Figure BDA0002333517370000622
向二噁烷(3ml)中的5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊胺(320mg，1.041mmol)混合物添加甲酸(0.160mL，4.16mmol)。将混合物在 100℃搅拌6小时。浓缩混合物，得到粗产物，其无需进一步纯化即可用于下 一步骤。LCMS(m/z):336.2[M+H]+。
步骤4：7-甲氧基-8-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-2,3,3a,9b-四氢-1H-环戊[c] 异喹啉[1d-I]和[1d-II]
Figure BDA0002333517370000623
向乙腈(1.8ml)中的N-(5-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苯基)-2,2-二甲基环戊基)甲酰胺(349mg，1.04mmol)混合物添加POCl3(140μl，1.50mmol)。混合 物在85℃搅拌2小时，然后浓缩。将残余物溶解在EtOAc中，并通过添加氢氧 化铵溶液碱化。分离相，用盐水洗涤有机层，在Na2SO4上干燥并浓缩。剩 余物质通过硅胶色谱法纯化，采用丙酮/庚烷5-50％，得到产物外消旋-1d-I和外 消旋-1d-II。
反式异构体外消旋-1d-II：(70mg,21％收率)。LCMS(m/z):318.3[M+H]+. 1H NMR(400MHz,CDCl3):8.22(s,1H),6.93-6.83(m,1H),6.70(s,1H),4.16(t, J＝6.4Hz,2H),3.94-3.83(m,3H),3.57(q,J＝4.7Hz,2H),3.35(d,J＝1.5Hz,4H), 2.84(s,2H),2.21-1.98(m,4H),1.84-1.70(m,3H),1.68-1.53(m,3H),1.22(s, 4H),1.06(s,4H)。
顺式异构体外消旋-1d-I：(54mg,16％收率)。LCMS(m/z):318.3[M+H]+. 1H NMR(400MHz,CDCl3):8.17(s,1H),6.75(s,1H),6.67(s,1H),4.14(t,J＝6.2 Hz,3H),3.92-3.83(m,3H),3.77(d,J＝10.3Hz,1H),3.57(t,J＝5.4Hz,3H),3.35 (d,J＝1.6Hz,3H),3.25(q,J＝9.4Hz,1H),2.42-2.21(m,2H),2.19-2.01(m,3H), 1.64(dd,J＝20.6,7.8Hz,4H),1.45(t,J＝8.0Hz,2H),1.24(d,J＝6.1Hz,4H),0.89 (s,4H)。
外消旋-1d-I和外消旋-1d-II的相对构型已通过核奥佛好塞效应(nuclearOverhauser effect，nOe)实验确认。
步骤5.8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代 -1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊[c]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸乙酯[1e-I]和[1e-II]
Figure BDA0002333517370000631
(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二氟-3-((三甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯酸乙酯
在氩气氛下，将Mg(3.69g，152mmol)和TMSC1(19.43mL，152mmol)的混 合物用超声辐照处理15分钟。在氩气气氛下于50℃向混合物添加 DMF(30mL)，滴加(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(4.56g， 19mmol)。反应混合物在50℃另搅拌3分钟。在真空中去除过量的TMCSC1后， 将粗混合物过滤并将滤出物(含有DMF)用于下一步而无需进一步纯化。
Figure BDA0002333517370000641
在50℃向无水MeCN(10mL)中的ZnI2(920mg，2.88mmol)和1d-I(915mg， 2.88mmol)悬浮液滴加干燥的DMF(30mL)中的粗制(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二 氟-3-((三甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯酸乙酯的溶液(5091mg，17.30mmol)，并使 反应混合物搅拌过夜。将反应混合物倒入10％HCl中，并用DCM萃取。有机 层用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤后，浓缩有机层，并且粗油通过硅胶 色谱法(0-10％MeOH/EtOAc)纯化，得到外消旋-1e(1.2g，2.53mmol，88％收率)， 为淡黄色固体。然后通过手性SFC(AD色谱柱，流速100ml/分钟，CO2/EtOH＝70/30，256巴)纯化该物质，以提供产物1e-1(tR 2.4分钟)和1e-2(tR 4.4 分钟，280mg)。LC-MS(m/z):474.2[M+H]+.
步骤6：(3aS,12bR)-8-氟-10-甲氧基-11-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-1,2,3,3a,7,12b-六氢环戊[C]吡啶并[2,1-a]异喹啉-6-羧酸[3.1]
Figure BDA0002333517370000642
向THF(1mL)中的1e-2(330mg，0.697mmol)添加NaOH(1.394mL， 1.394mmol)。反应混合物搅拌2小时，然后将反应物用1.5ml 1N HCl酸化并用 二氯甲烷萃取。有机层用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤并浓缩后，将所 得固体从热的EtOH/水(5ml；5ml)重结晶，并通过真空过滤收集固体。将该物 质从MeCN和水进一步冻干，得到产物(230mg，0.511mmol，73.3％)，为褐色固 体。LC-MS(m/z):446.4[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.82(s,1H),7.56(s,1H),7.20(s,1H),4.52(d,J＝5.5Hz,1H),4.20-4.06(m,2H),3.82(s,3H), 3.31(dd,J＝15.9,4.8Hz,2H),3.26(s,3H),3.18(d,J＝15.9Hz,1H),2.01(p,J＝6.3 Hz,2H),1.57-1.50(m,1H),0.87(d,J＝6.6Hz,3H),0.73(d,J＝6.7Hz,3H)。对 于每种式(I)化合物，优选在HBsAg测定中具有更大效价的对映异构体。通过 与认为在同一靶位点上结合的其它化合物进行类比，在每种情况下，认为 HBsAg测定中更有力的异构体具有与这些结构相对应的绝对立体化学构型：
Figure BDA0002333517370000651
其中虚线弧表示R7和R9一起形成如本文所示的某些式(I)化合物及其亚结 构所描述的环。
实施例2.3：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.3]
Figure BDA0002333517370000652
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.3a]
Figure BDA0002333517370000653
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应在室温搅拌5分钟，然后添加2-(2-溴乙氧基)-1,1,1-三氟乙 烷(21.71mg，0.105mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5mlDMF，然后通过0.45nM串联(in line)过滤器过滤。假 设定量收率，将具有所需产物2.3a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z): 508.5[M+H]+,0.88分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.3]
Figure BDA0002333517370000661
向已经处于1ml DMF中的2.3a(21.32mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以32％的收率得到8.2mg所需外消旋产物2.3，为TFA盐。LC-MS(m/z): 480.4[M+H]+,0.89分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.66(d,J＝8.5 Hz,1H),7.19-7.30(m,2H),6.84(d,J＝7.6Hz,1H),5.06-5.22(m,2H),4.95(d, J＝4.5Hz,1H),4.30-4.38(m,2H),4.20(q,J＝9.4Hz,2H),3.99-4.06(m,2H),0.69(s,9H)
实施例2.4：
6-(叔丁基)-10-((1-(甲氧基甲基)环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.4]
Figure BDA0002333517370000662
步骤1：6-(叔丁基)-10-((1-(甲氧基甲基)环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.4a]
Figure BDA0002333517370000671
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-(溴甲基)-1-(甲氧基甲基)环丁 烷(20.25mg，0.105mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5mlDMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.4a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):494.5 [M+H]+,0.96分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((1-(甲氧基甲基)环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.4]
Figure BDA0002333517370000672
向已经处于1ml DMF中的2.4a(20.73mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以16％的收率得到4.0mg所需外消旋产物2.4，为TFA盐。LC-MS(m/z): 466.5[M+H]+,1.00分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.63(d,J＝8.6Hz, 1H),7.19-7.27(m,2H),6.87(d,J＝7.6Hz,1H),5.17-5.25(m,1H),5.05-5.13(m, 1H),4.94(d,J＝4.9Hz,1H),4.05-4.18(m,2H),3.47(s,2H),3.25(s,3H),1.85-1.97 (m,6H),0.69(s,9H)
实施例2.5：
6-(叔丁基)-10-(二氟甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.5]
Figure BDA0002333517370000681
步骤1：6-(叔丁基)-10-(二氟甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.5a]
Figure BDA0002333517370000682
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(77mg，0.236 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴-3,3-二氟丙酸乙酯(41.0mg， 0.189mmol)。将反应加热至70℃并搅拌20小时或直至LCMS完成。使反应 冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率， 将具有所需产物2.5a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):432.5 [M+H]+,0.91分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(二氟甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.5]
Figure BDA0002333517370000683
向已经处于1ml DMF中的2.5a(20.28mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以3％的收率得到0.8mg所需外消旋产物2.5，为TFA盐。LC-MS(m/z): 404.4[M+H]+,0.88分钟。1H NMR(<cdcl3>)δ:8.58(s,1H),7.74(d,J＝8.5Hz, 1H),7.35(t,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.18(d,J＝1.4Hz,1H),6.81-7.17(m,1H), 5.22(d,J＝14.9Hz,1H),4.96(dd,J＝14.9,5.4Hz,1H),4.26(d,J＝5.2Hz,1H),0.85 (s,9H)
实施例2.6：
6-(叔丁基)-10-((S)-2-甲基丁氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡 嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.6]
Figure BDA0002333517370000691
步骤1：6-(叔丁基)-10-((S)-2-甲基丁氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.6a]
Figure BDA0002333517370000692
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加(S)-1-溴-2-甲基丁烷(15.84mg， 0.105mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.6a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):452.5[M+H]+, 1.01分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((S)-2-甲基丁氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.6]
Figure BDA0002333517370000701
向已经处于1ml DMF中的2.6a(18.97mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以26％的收率得到6.5mg所需外消旋产物2.6，为TFA盐。LC-MS(m/z): 424.5[M+H]+,1.05分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.62(d,J＝8.5 Hz,1H),7.18-7.28(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.16-5.24(m,1H),5.05-5.14 (m,1H),4.94(d,J＝4.8Hz,1H),3.88-4.10(m,2H),1.83-1.98(m,1H),1.50-1.66 (m,1H),1.20-1.33(m,1H),1.01(t,J＝6.6Hz,3H),0.92(t,J＝7.4Hz,3H),0.69(s,9H)
实施例2.7：
10-(仲丁氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.7]
Figure BDA0002333517370000702
步骤1：10-(仲丁氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.7a]
Figure BDA0002333517370000703
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg，0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴丁烷(14.37mg，0.105mmol)。 将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物2.7a 的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):438.5[M+H]+,0.92分钟。
步骤2：10-(仲丁氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.7]
Figure BDA0002333517370000711
向已经处于1ml DMF中的2.7a(18.97mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以27％的收率得到6.5mg所需外消旋产物2.7，为TFA盐。LC-MS(m/z): 410.5[M+H]+,0.95分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.60(dd,J＝8.5, 1.8Hz,1H),7.19-7.26(m,2H),6.82(dd,J＝7.7,3.0Hz,1H),5.14-5.23(m,1H), 5.04-5.13(m,1H),4.95(d,J＝4.8Hz,1H),4.66(dt,J＝12.5,6.2Hz,1H),1.58-1.83 (m,2H),1.31(dd,J＝10.9,6.0Hz,3H),0.89-0.99(m,3H),0.69(s,9H)
实施例2.8：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.8]
Figure BDA0002333517370000712
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.8a]
Figure BDA0002333517370000721
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加4-甲基苯磺酸(四氢呋喃-3-基)甲酯 (24.19mg，0.094mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5mlDMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.8a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):466.5 [M+H]+,0.79分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.8]
Figure BDA0002333517370000722
向已经处于1ml DMF中的2.8a(21.88mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯化， 并冻干，以13％的收率得到3.7mg所需外消旋产物2.8，为TFA盐。LC-MS(m/z): 438.4[M+H]+,0.83分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.64(d,J＝8.5 Hz,1H),7.18-7.30(m,2H),6.85(d,J＝7.5Hz,1H),5.04-5.24(m,2H),4.95(d, J＝4.8Hz,1H),4.00-4.21(m,2H),3.72-3.87(m,2H),3.57-3.71(m,2H),2.69-2.84 (m,1H),1.99-2.13(m,1H),1.65-1.77(m,1H),0.69(s,9H)
实施例2.9：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(三氟甲氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.9]
Figure BDA0002333517370000731
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(三氟甲氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.9a]
Figure BDA0002333517370000732
向2.1h(15mg，0.039mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(44.8mg，0.138 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-2-(三氟甲氧基)乙烷(18.97mg， 0.098mmol)。将反应加热至50℃并搅拌15分钟或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.9a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):494.6[M+H]+, 0.99分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(三氟甲氧基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.9]
Figure BDA0002333517370000733
向已经处于1ml DMF中的2.9a(19.25mg，0.039mmol)添加LiOH 1M水性溶 液(156μl，0.156mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外 的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以23％的收率得到5.3mg所需外消旋产物2.9，为TFA盐。LC-MS (m/z):466.4[M+H]+,0.92分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.69(d, J＝8.5Hz,1H),7.21-7.31(m,2H),6.87(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.28(m,2H),4.96 (d,J＝4.7Hz,1H),4.48(br dd,J＝18.4,4.9Hz,4H),0.69(s,9H)
实施例2.10：
6-(叔丁基)-10-(2,2-二氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.10]
Figure BDA0002333517370000741
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2,2-二氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.10a]
Figure BDA0002333517370000742
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2,2-二氟乙基三氟甲磺酸酯(25.3mg， 0.118mmol)。将反应加热至50℃并搅拌15分钟或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.10a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):446.4[M+H]+, 0.81分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2,2-二氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.10]
Figure BDA0002333517370000751
向已经处于1ml DMF中的2.10a(20.94mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以14％的收率得到3.6mg所需外消旋产物2.10，为TFA盐。LC-MS (m/z):418.4[M+H]+,0.84分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.72(d, J＝8.5Hz,1H),7.21-7.32(m,2H),6.92(d,J＝7.6Hz,1H),6.35-6.65(m,1H),5.05-5.27(m,2H),4.95(d,J＝4.7Hz,1H),4.51(td,J＝14.5,3.4Hz,2H),0.69(s, 9H)。
实施例2.11：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-丙氧基-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[2.11]
Figure BDA0002333517370000752
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-丙氧基-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.11a]
Figure BDA0002333517370000753
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴丙烷(14.51mg，0.118mmol)。将 反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.11a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):424.5[M+H]+,0.89分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-丙氧基-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.11]
Figure BDA0002333517370000761
向已经处于1ml DMF中的2.11a(19.90mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以22％的收率得到5.4mg所需外消旋产物2.11，为TFA盐。LC-MS (m/z):396.4[M+H]+,0.92分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.62(d, J＝8.5Hz,1H),7.18-7.29(m,2H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.22(m,2H),4.94 (d,J＝4.8Hz,1H),4.02-4.16(m,2H),1.75-1.88(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H),0.69(s,9H)
实施例2.12：
6-(叔丁基)-10-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.12]
Figure BDA0002333517370000762
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.12a]
Figure BDA0002333517370000771
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷 (21.60mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.12a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):484.5 [M+H]+,0.77分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.12]
Figure BDA0002333517370000772
向已经处于1ml DMF中的2.12a(22.73mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以24％的收率得到6.6mg所需外消旋产物2.12，为TFA盐。LC-MS (m/z):456.5[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.65(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.30(m,2H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.25(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.23-4.34(m,2H),3.79-3.88(m,2H),3.61(dd,J＝5.6,3.8Hz,2H),3.47(dd,J＝5.6,3.8Hz,2H),3.23(s,3H),0.69(s,9H)
实施例2.13：
6-(叔丁基)-10-(2,3-二甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.13]
Figure BDA0002333517370000781
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2,3-二甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.13a]
Figure BDA0002333517370000782
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-2,3-二甲氧基丙烷(21.60mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.13a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):484.5[M+H]+, 0.78分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2,3-二甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.13]
Figure BDA0002333517370000783
向已经处于1ml DMF中的2.13a(20.94mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以21％的收率得到5.6mg所需外消旋产物2.13，为TFA盐。LC-MS (m/z):456.5[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.65(d, J＝8.5Hz,1H),7.14-7.29(m,2H),6.84(dd,J＝7.6,4.0Hz,1H),5.03-5.25(m,2H), 4.95(d,J＝4.7Hz,1H),4.11-4.31(m,2H),3.76(br t,J＝4.5Hz,1H),3.47-3.62(m, 2H),3.40(d,J＝3.6Hz,3H),3.28(s,3H),0.69(s,9H)。
实施例2.14：
6-(叔丁基)-10-(3-乙氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.14]
Figure BDA0002333517370000791
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-乙氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.14a]
Figure BDA0002333517370000792
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-乙氧基丙烷(19.71mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.14a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):468.5[M+H]+, 0.86分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-乙氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.14]
Figure BDA0002333517370000801
向已经处于1ml DMF中的2.14a(21.98mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以23％的收率得到6.2mg所需外消旋产物2.14，为TFA盐。LC-MS (m/z):440.5[M+H]+,0.90分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.29(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.55(t,J＝6.3Hz,2H),3.42(q,J＝7.0Hz,2H),2.04(五峰,J＝6.3Hz,2H),1.09(t,J＝7.0Hz,3H),0.69(s,9H)
实施例2.15：
6-(叔丁基)-10-(2-异丙氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡 嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.15]
Figure BDA0002333517370000802
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-异丙氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.15a]
Figure BDA0002333517370000803
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-(2-溴乙氧基)丙烷(19.71mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.15a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):468.5[M+H]+, 0.87分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-异丙氧基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.15]
Figure BDA0002333517370000811
向已经处于1ml DMF中的2.15a(20.94mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以17％的收率得到4.5mg所需外消旋产物2.15，为TFA盐。LC-MS (m/z):440.5[M+H]+,0.91分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.64(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.28(m,2H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),5.06-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.5Hz,1H),4.21-4.30(m,2H),3.74-3.82(m,2H),3.66(dt,J＝12.2,6.1Hz,1H),1.11(d,J＝6.1Hz,6H),0.69(s,9H)。
实施例2.16：
6-(叔丁基)-10-异丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[2.16]
Figure BDA0002333517370000812
步骤1：6-(叔丁基)-10-异丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.16a]
Figure BDA0002333517370000821
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-2-甲基丙烷(16.17mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.16a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):438.5[M+H]+, 0.95分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-异丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.16]
Figure BDA0002333517370000822
向已经处于1ml DMF中的2.16a(20.56mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以21％的收率得到5.2mg所需外消旋产物2.16，为TFA盐。LC-MS (m/z):410.5[M+H]+,1.00分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.62(d, J＝8.5Hz,1H),7.14-7.29(m,2H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.29(m,2H),4.95 (d,J＝4.8Hz,1H),3.77-4.04(m,2H),2.12(dt,J＝13.3,6.6Hz,1H),1.02(dd,J＝6.5, 4.9Hz,6H),0.69(s,9H)。
实施例2.17：
6-(叔丁基)-10-(3-羟基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并 [1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.17]
Figure BDA0002333517370000831
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-羟基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.17a]
Figure BDA0002333517370000832
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-溴丙-1-醇(16.40mg，0.118mmol)。 将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应冷却，添加0.5ml DMF。粗反应物通过反相制备型LC纯化，收集所需的馏分，添加0.04ml的6M HCl并冻干，以42％的收率得到9.4mg所需外消旋产物2.17a，为HCl盐，原样使 用。LC-MS(m/z):440.5[M+H]+,0.70分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-羟基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.17]
Figure BDA0002333517370000833
将2.17a(9.4mg，0.021mmol)溶解于1ml DMF中，然后添加LiOH 1M水性溶 液(86μl，0.086mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外的 LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。通过反相制备型LC纯化粗产物，收集 所需的级分，添加0.04ml的6M HCl并冻干。将产物重新溶解在1:1ACN/水中， 再添加0.02ml 6M HCl，再次冻干。然后将样品再次重新溶于1:1ACN/水中， 并冻干，以31％的收率得到3.2mg所需外消旋产物2.17，为HCl盐。LC-MS (m/z):412.4[M+H]+,0.71分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.28(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.24(m,2H),4.95 (d,J＝4.8Hz,1H),4.22(t,J＝6.3Hz,2H),3.60(t,J＝6.2Hz,2H),1.95(五峰,J＝6.2 Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.18：
6-(叔丁基)-10-(2-羟基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并 [1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.18]
Figure BDA0002333517370000841
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-羟基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.18a]
Figure BDA0002333517370000842
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴乙醇(14.74mg，0.118mmol)。将 反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应冷却，添加0.5ml DMF。粗反应物通过反相制备型LC纯化，收集所需的馏分，添加0.04ml的6M HCl并冻干，以32％的收率得到7.0mg所需外消旋产物2.18a，为HCl盐，原样使 用。LC-MS(m/z):426.4[M+H]+,0.68分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-羟基乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.18]
Figure BDA0002333517370000851
将2.18a(7.0mg，0.016mmol)溶解于1ml DMF中，然后添加LiOH 1M水性 溶液(0.066mL，0.066mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。通过反相制备型LC纯化粗产物， 收集所需的级分，添加0.04ml的6MHCl并冻干。将产物重新溶解在1:1ACN/ 水中，再添加0.02ml 6M HCl，再次冻干。然后将样品再次重新溶于1:1ACN/ 水中，并冻干，以29％的收率得到2.3mg所需外消旋产物2.18，为HCl盐。 LC-MS(m/z):398.4[M+H]+,0.69分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H), 7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.16-7.29(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.07-5.20(m, 2H),4.96(br d,J＝3.8Hz,1H),4.17(t,J＝4.9Hz,2H),3.81(br t,J＝4.9Hz,2H), 0.69(s,9H)
实施例2.19：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3-(三氟甲氧基)丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.19]
Figure BDA0002333517370000852
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3-(三氟甲氧基)丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.19a]
Figure BDA0002333517370000853
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-(三氟甲氧基)丙烷(24.42mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.19a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):508.6[M+H]+, 1.02分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3-(三氟甲氧基)丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.19]
Figure BDA0002333517370000861
向已经处于1ml DMF中的2.19a(23.85mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以37％的收率得到10.6mg所需外消旋产物2.19，为TFA盐。LC-MS (m/z):480.4[M+H]+,0.97分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.17-7.31(m,2H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.6Hz,1H),4.21-4.35(m,4H),2.22(br t,J＝6.2Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.20：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2-氧吡咯烷-1-基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.20]
Figure BDA0002333517370000862
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2-氧吡咯烷-1-基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.20a]
Figure BDA0002333517370000871
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-(2-溴乙基)吡咯烷-2-酮(22.66mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌7小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.20a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):493.5[M+H]+, 0.93分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(2-(2-氧吡咯烷-1-基)乙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.20]
Figure BDA0002333517370000872
向已经处于1ml DMF中的2.20a(23.15mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以27％的收率得到7.4mg所需外消旋产物2.20，为TFA盐。LC-MS (m/z):465.4[M+H]+,0.73分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.18-7.29(m,2H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),5.07-5.24(m,2H),4.95 (d,J＝4.2Hz,1H),4.28(t,J＝5.6Hz,2H),3.58-3.68(m,2H),3.47-3.55(m,2H),2.13-2.26(m,2H),1.90(五峰,J＝7.5Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.21：
6-(叔丁基)-10-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.21]
Figure BDA0002333517370000881
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.21a]
Figure BDA0002333517370000882
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-(2-甲氧基乙氧基)丙烷 (23.25mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌7小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.21a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):498.6 [M+H]+,0.88分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-(2-甲氧基乙氧基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.21]
Figure BDA0002333517370000883
向已经处于1ml DMF中的2.21a(23.39mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以44％的收率得到12.5mg所需外消旋产物2.21，为TFA盐。LC-MS (m/z):470.5[M+H]+,0.82分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.17-7.28(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.25(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.20(t,J＝6.3Hz,2H),3.59(t,J＝6.3Hz,2H),3.49-3.54(m,2H), 3.40-3.44(m,2H),3.21(s,3H),2.04(五峰,J＝6.2Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.22：
10-((1,4-二噁烷-2-基)甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.22]
Figure BDA0002333517370000891
步骤1：10-((1,4-二噁烷-2-基)甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.22a]
Figure BDA0002333517370000892
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加(1,4-二噁烷-2-基)甲磺酸甲酯 (23.15mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.22a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):482.4 [M+H]+,0.76分钟。
步骤2：10-((1,4-二噁烷-2-基)甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.22]
Figure BDA0002333517370000901
向已经处于1ml DMF中的2.22a(22.63mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干。将粗产物重新溶解于1ml DMF中，并通过反相制备型LC再次纯 化，并冻干，以22％的收率得到6.2mg所需外消旋产物2.22，为TFA盐。LC-MS (m/z):454.6[M+H]+,0.86分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.29(m,2H),6.83(d,J＝6.7Hz,1H),5.16-5.25(m,1H), 5.05-5.15(m,1H),4.95(d,J＝4.7Hz,1H),4.11-4.18(m,2H),3.91-4.04(m,1H), 3.82-3.91(m,1H),3.75-3.82(m,1H),3.61-3.71(m,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.23：
6-(叔丁基)-10-(羧基甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.23]
Figure BDA0002333517370000902
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-甲氧基-2-氧代乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.23a]
Figure BDA0002333517370000903
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴乙酸甲酯(16.04mg，0.105mmol)。将反应加热至50℃并搅拌1小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.23a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):454.4[M+H]+, 0.76分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(羧基甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.23]
Figure BDA0002333517370000911
向已经处于1ml DMF中的2.23a(19.05mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以36％的收率得到8.0mg所需外消旋产物2.23，为TFA盐。LC-MS (m/z):412.4[M+H]+,0.68分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:13.10(br s,1H),8.95 (s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.28(s,1H),7.22(t,J＝8.0Hz,1H),6.74(d,J＝7.6 Hz,1H),5.13(d,J＝2.3Hz,2H),4.96(br s,1H),4.89(s,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.24：
6-(叔丁基)-10-((1-((甲基磺酰基)甲基)环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.24]
Figure BDA0002333517370000912
步骤1：6-(叔丁基)-10-((1-(((甲基磺酰基)甲基)环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.24a]
Figure BDA0002333517370000921
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-(溴甲基)-1-((甲基磺酰基)甲基)环丙 烷(26.8mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5mlDMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.24a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):528.5 [M+H]+,0.85分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((1-((甲基磺酰基)甲基)环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.24]
Figure BDA0002333517370000922
向已经处于1ml DMF中的2.24a(24.80mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以8％的收率得到2.4mg所需外消旋产物2.24，为TFA盐。LC-MS (m/z):500.4[M+H]+,0.78分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.65(d, J＝8.6Hz,1H),7.17-7.29(m,2H),6.75(d,J＝7.6Hz,1H),5.17-5.28(m,1H),5.05-5.15(m,1H),4.96(br d,J＝4.8Hz,1H),4.26(d,J＝10.0Hz,1H),4.07(d, J＝9.9Hz,1H),3.01(s,3H),0.78-0.93(m,4H),0.70(s,9H)。
实施例2.25：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.25]
Figure BDA0002333517370000931
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.25a]
Figure BDA0002333517370000932
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-(溴甲基)四氢呋喃(19.47mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.25a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):466.5[M+H]+, 0.90分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.25]
Figure BDA0002333517370000933
向已经处于1ml DMF中的2.25a(21.88mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以29％的收率得到7.6mg所需外消旋产物2.25，为TFA盐。LC-MS (m/z):438.4[M+H]+,0.84分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.64(d, J＝8.5Hz,1H),7.14-7.30(m,2H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),5.03-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.5Hz,1H),4.20-4.33(m,1H),4.05-4.19(m,2H),3.80(qd,J＝7.1,3.5Hz,1H),3.64-3.74(m,1H),1.98-2.11(m,1H),1.78-1.97(m,2H),1.66-1.75(m,1H), 0.69(s,9H)。
实施例2.26：
6-(叔丁基)-10-(氧杂环丁-3-基氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.26]
Figure BDA0002333517370000941
步骤1：6-(叔丁基)-10-(氧杂环丁-3-基氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.26a]
Figure BDA0002333517370000942
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-溴氧杂环丁烷(16.16mg，0.118mmol)。 将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.26a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):438.5[M+H]+,0.81分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(氧杂环丁-3-基氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.26]
Figure BDA0002333517370000951
向已经处于1ml DMF中的2.26a(20.56mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以21％的收率得到5.4mg所需外消旋产物2.26，为TFA盐。LC-MS (m/z):410.4[M+H]+,0.74分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.70(d, J＝8.5Hz,1H),7.28(s,1H),7.20(t,J＝8.0Hz,1H),6.50(d,J＝7.5Hz,1H),5.48(br t,J＝5.4Hz,1H),5.06-5.24(m,2H),4.99(dt,J＝11.9,5.9Hz,3H),4.64(ddd, J＝11.6,7.0,5.1Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.27：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(哌啶-4-基氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.27]
Figure BDA0002333517370000952
步骤1：10-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.27a]
Figure BDA0002333517370000953
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加4-溴哌啶-1-羧酸叔丁酯(27.7mg， 0.105mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应冷 却，添加10ml乙酸乙酯，用水洗涤两次，过滤并浓缩至残余物，得到所需产物2.27a，将其原样用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):565.6[M+H]+,0.98 分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(哌啶-4-基氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.27b]
Figure BDA0002333517370000961
向2.27a(23.69mg，0.042mmol)添加DCM(体积：1.8mL，比率：3.60)， TFA(0.355mL，4.61mmol)，并在室温搅拌1小时或直至LCMS完成。将反应 浓缩至残余物，得到所需产物2.27b，其原样用于下一步，假定定量收率。 LC-MS(m/z):465.5[M+H]+,0.61分钟。
步骤3：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(哌啶-4-基氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.27]
Figure BDA0002333517370000962
向2.27b(19.51mg，0.042mmol)添加1ml DMF和LiOH 1M水性溶液 (0.294mL，0.294mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外 的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以14％的收率得到3.4mg所需外消旋产物2.27，为TFA盐。LC-MS (m/z):437.5[M+H]+,0.64分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.96(s,1H),8.50(br s, 2H),7.69(d,J＝8.5Hz,1H),7.15-7.31(m,2H),6.97(d,J＝7.7Hz,1H),5.12(br s, 2H),4.95(br s,1H),4.89-4.93(m,1H),3.12(br s,2H),2.17(br s,2H),1.83-1.97 (m,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.28：
6-(叔丁基)-10-(2,3-二羟基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡 嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.28]
Figure BDA0002333517370000971
步骤1：6-(叔丁基)-10-((2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4-基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.28a]
Figure BDA0002333517370000972
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加4-(溴甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷 (23.01mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5mlDMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.28a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):496.4 [M+H]+,0.84分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2,3-二羟基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.28]
Figure BDA0002333517370000973
向已经处于1ml DMF中的2.28a(23.29mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。 LC-MS(m/z):468.4[M+H]+,0.89分钟。额外的LiOH 1M水性溶液可以根据需 要添加。粗反应物通过使用含0.1％TFA的ACN/水的反相制备型LC纯化。 合并所需级分(在含0.1％TFA的ACN/水中)，并在室温下静置20小时，得到所需 的脱保护产物，然后进行LCMS。然后添加0.2ml的3M HCl溶液并冻干。将产 物重新溶于1:1ACN/水中，并再次冻干，以31％的收率得到7.0mg所需外消旋 产物2.28，为HCl盐。LC-MS(m/z):428.4[M+H]+,0.63分钟。1H NMR (DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.29(m,2H),6.82(d, J＝7.6Hz,1H),5.05-5.24(m,2H),4.96(br d,J＝4.5Hz,1H),4.17(dt,J＝9.8,3.6Hz, 1H),3.99-4.09(m,1H),3.90(br s,1H),3.49(br d,J＝5.6Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.29：
6-(叔丁基)-10-环丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[2.29]
Figure BDA0002333517370000981
步骤1：6-(叔丁基)-10-环丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.29a]
Figure BDA0002333517370000982
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加溴环丁烷(15.93mg，0.118mmol)。将 反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.29a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):436.4[M+H]+,0.91分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-环丁氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.29]
Figure BDA0002333517370000991
向已经处于1ml DMF中的2.29a(20.47mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以8％的收率得到2.0mg所需外消旋产物2.29，为TFA盐。LC-MS (m/z):408.4[M+H]+,0.94分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.62(d, J＝8.5Hz,1H),7.25(s,1H),7.20(t,J＝8.0Hz,1H),6.66(d,J＝7.5Hz,1H),5.04-5.20(m,2H),4.95(d,J＝4.5Hz,1H),4.89(五峰,J＝7.1Hz,1H),2.07-2.20(m, 2H),1.83(q,J＝10.2Hz,1H),1.61-1.75(m,1H),0.69(s,9H)。
实施例2.30：
6-(叔丁基)-10-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.30]
Figure BDA0002333517370000992
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.30a]
Figure BDA0002333517370000993
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-(甲基磺酰基)丙烷(23.72mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.30a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):502.4[M+H]+, 0.71分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.30]
Figure BDA0002333517370001001
向已经处于1ml DMF中的2.30a(23.57mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以40％的收率得到11.3mg所需外消旋产物2.30，为TFA盐。LC-MS (m/z):474.3[M+H]+,0.72分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.18-7.30(m,2H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.25(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.24-4.36(m,2H),3.30-3.35(m,2H),3.04(s,3H),2.18-2.32(m, 2H),0.69(s,9H)。
实施例2.31：
6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.31]
Figure BDA0002333517370001002
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.31a]
Figure BDA0002333517370001011
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-甲氧基丙烷(18.05mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.31a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):454.5[M+H]+, 0.82分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.31]
Figure BDA0002333517370001012
向已经处于1ml DMF中的2.31a(21.32mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以36％的收率得到9.3mg所需外消旋产物2.31，为TFA盐。LC-MS (m/z):426.4[M+H]+,0.83分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.13-7.30(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.26(m,2H),4.95 (d,J＝4.8Hz,1H),4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),2.04(t,J＝6.3Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.32：
10-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.32]
Figure BDA0002333517370001021
步骤1：10-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代 -6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.32a]
Figure BDA0002333517370001022
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-(溴甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯 (29.5mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。将 反应冷却，添加15ml乙酸乙酯，用水2x，饱和盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过 滤并浓缩至残余物，得到所需产物2.32a，其原样用于下一步，假定定量收率。 LC-MS(m/z):551.7[M+H]+,1.01分钟。
步骤2：10-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.32b]
Figure BDA0002333517370001023
向2.32a(26.0mg，0.047mmol)添加DCM(体积：2mL，比率：4.00)，三氟乙 酸(0.4mL，5.19mmol)，并在室温下搅拌30分钟或直至LCMS完成。将反应 浓缩至残余物。将粗产物溶于1ml DMF中，并通过反相制备型LC纯化，并冻 干，以64％的收率得到13.5mg所需产物2.32b，其原样用于下一步。LC-MS (m/z):451.4[M+H]+,0.61分钟。
步骤3：10-(氮杂环丁烷-3-基甲氧基)-6-(叔丁基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.32]
Figure BDA0002333517370001031
向2.32b(13.5mg，0.030mmol)添加1ml DMF和LiOH 1M LiOH水性溶液 (0.120mL，0.120mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额外 的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以40％的收率得到6.6mg所需外消旋产物2.32，为TFA盐。LC-MS (m/z):423.4[M+H]+,0.62分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.97(s,1H),8.71(br d,J＝15.6Hz,2H),7.70(d,J＝8.5Hz,1H),7.21-7.33(m,2H),6.88(d,J＝7.6Hz, 1H),5.12(br s,2H),4.96(br s,1H),4.37(br d,J＝6.6Hz,2H),4.11(br s,2H),3.91 (br d,J＝5.9Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.33：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((S)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.33-I]和[2.33-II]
Figure BDA0002333517370001032
2.33-I和2.33-II
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((S)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.33a]
Figure BDA0002333517370001033
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加(S)-5-(溴甲基)吡咯烷-2-酮(21.00mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.33a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):479.4[M+H]+, 0.71分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((S)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.33-I]和[2.33-II]
Figure BDA0002333517370001041
向已经处于1ml DMF中的2.33a(22.49mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。粗反应物使用Sunfire C18 OBD色 谱柱通过反相制备型LC纯化，用含0.1％TFA的ACN/水洗脱，以12％的收率得到 3.33mg所需产物2.33-I(峰1，tR 5.97分钟)，并以9％收率得到2.5mg产物 2.33-II(峰2，tR 6.16分钟)，均为TFA盐。2.33-I LC-MS(m/z):451.4[M+H]+, 0.70分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.30(m,2H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.21(m,2H),4.95(br d,J＝4.2 Hz,1H),4.12(d,J＝4.9Hz,2H),3.97(br dd,J＝7.5,4.5Hz,1H),2.30-2.40(m,1H), 2.08-2.26(m,2H),1.90-2.01(m,1H),0.69(s,9H)。2.33-II LC-MS(m/z): 451.4[M+H]+,0.71分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.96(s,1H)7.84(s,1H) 7.67(d,J＝8.51Hz,1H)7.20-7.30(m,2H)6.86(d,J＝7.58Hz,1H)5.07-5.22 (m,2H)4.95(br d,J＝4.55Hz,1H)4.06-4.18(m,2H)3.97(br dd,J＝7.51,4.77 Hz,1H)2.28-2.39(m,2H)2.08-2.23(m,2H)1.94(dt,J＝16.81,4.90Hz,1H) 0.69(s,9H)
实施例2.34：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((R)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.34-I]和[2.34-II]
Figure BDA0002333517370001051
2.34-I和2.34-II
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((R)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.34a]
Figure BDA0002333517370001052
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加(R)-5-(溴甲基)吡咯烷-2-酮(21.00mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.34a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):479.4[M+H]+, 0.70分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(((R)-5-氧吡咯烷-2-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.34-I]和[2.34-II]
Figure BDA0002333517370001053
向已经处于1ml DMF中的2.34a(22.49mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。粗反应物使用Sunfire C18 OBD色 谱柱通过反相制备型LC纯化，用含0.1％TFA的ACN/水洗脱，以15％的收率得到4.0mg所需产物2.34-I(峰1，tR 5.86分钟)，并以13％收率得到3.4mg产物 2.34-II(峰2，tR 6.09分钟)，均为TFA盐。2.34-I LC-MS(m/z):451.4[M+H]+, 0.70分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz, 1H),7.17-7.28(m,2H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),5.06-5.20(m,2H),4.95(br d,J＝4.2 Hz,1H),4.12(d,J＝4.9Hz,2H),3.97(br dd,J＝7.7,4.5Hz,1H),2.30-2.40(m,1H), 2.08-2.26(m,2H),1.89-2.01(m,1H),0.69(s,9H)。2.34-II LC-MS(m/z): 451.4[M+H]+,0.71分钟。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.96(s,1H),7.84(s,1H), 7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.19-7.33(m,2H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),5.03-5.24(m, 2H),4.95(d,J＝4.5Hz,1H),4.07-4.23(m,2H),3.97(brdd,J＝7.3,4.5Hz,1H), 2.29-2.39(m,1H),2.08-2.24(m,2H),1.86-2.00(m,1H),0.69(s,9H)
实施例2.35：
6-(叔丁基)-10-((1-甲氧基丙烷-2-基)氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.35-I]和[2.35-II]
Figure BDA0002333517370001061
2.35-I和2.35-II
步骤1：6-(叔丁基)-10-((1-甲氧基丙烷-2-基)氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.35a]
Figure BDA0002333517370001062
向2.1h(16mg，0.042mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(47.8mg， 0.147mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴-1-甲氧基丙烷(16.05mg， 0.105mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.35a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):454.5[M+H]+, 0.81分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((1-甲氧基丙烷-2-基)氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.35-I]和[2.35-II]
Figure BDA0002333517370001071
2.35-I和2.35-II
向已经处于1ml DMF中的2.35a(19.05mg，0.042mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(168μl，0.168mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。粗反应物使用Sunfire C18 OBD柱 通过反相制备型LC纯化，用含0.1％TFA的ACN/水洗脱，以13％的收率得到3.0 mg所需产物2.35-I(峰1，tR 5.50分钟)，并以13％收率得到3.0mg产物2.35-II(峰2， tR 5.67分钟)，均为TFA盐。2.35-I LC-MS(m/z):426.4[M+H]+,0.82分钟。 1H NMR(DMSO-d6)δ:8.93(s,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.28(m,2H),6.85-6.92(m,1H),5.13-5.22(m,1H),5.03-5.12(m,1H),4.94(br d,J＝4.7Hz,1H), 4.88-4.93(m,1H),3.49-3.61(m,2H),3.29(s,3H),1.28(d,J＝6.2Hz,3H),0.69(s, 9H)。2.35-IILC-MS(m/z):426.4[M+H]+,0.85分钟。1H NMR(DMSO-d6) δ:8.93(s,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,1H),7.18-7.27(m,2H),6.85-6.91(m,1H), 5.14-5.20(m,1H),5.05-5.13(m,1H),4.94(d,J＝4.6Hz,1H),4.87-4.93(m,1H), 3.49-3.61(m,2H),3.28(s,3H),1.30(d,J＝6.2Hz,3H),0.69(s,9H)。
实施例2.36：
6-(叔丁基)-10-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.36]
Figure BDA0002333517370001081
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.36a]
Figure BDA0002333517370001082
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加2-溴-N,N-二甲基乙酰胺(19.59mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.36a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):467.5[M+H]+, 0.70分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.36]
Figure BDA0002333517370001083
向已经处于1ml DMF中的2.36a(21.93mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以36％的收率得到9.7mg所需外消旋产物2.36，为TFA盐。LC-MS (m/z):439.4[M+H]+,0.70分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.65(d, J＝8.5Hz,1H),7.27(s,1H),7.21(t,J＝8.0Hz,1H),6.74(d,J＝7.6Hz,1H),5.08-5.19(m,2H),5.00(d,J＝1.7Hz,2H),4.96(br d,J＝2.2Hz,1H),3.03(s,3H), 2.85(s,3H),0.69(s,9H)。
实施例2.37：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.37]
Figure BDA0002333517370001091
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.37a]
Figure BDA0002333517370001092
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-溴四氢呋喃(17.81mg，0.118mmol)。 将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.37a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):452.4[M+H]+,0.75分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢呋喃-3-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.37]
Figure BDA0002333517370001093
向已经处于1ml DMF中的2.37a(21.22mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以29％的收率得到7.5mg所需外消旋产物2.37，为TFA盐。LC-MS (m/z):424.4[M+H]+,0.77分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.16-7.29(m,2H),6.80(dd,J＝7.5,4.8Hz,1H),5.25(br s,1H), 5.05-5.22(m,2H),4.95(d,J＝4.8Hz,1H),3.83-4.00(m,3H),3.78(tt,J＝8.4,4.3Hz,1H),2.23-2.37(m,1H),1.95-2.16(m,1H),0.69(s,9H)
实施例2.38：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.38]
Figure BDA0002333517370001101
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.38a]
Figure BDA0002333517370001102
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加4-溴四氢-2H-吡喃(19.47mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌20小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.38a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):466.5[M+H]+, 0.79分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.38]
Figure BDA0002333517370001111
向已经处于1ml DMF中的2.38a(21.88mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以31％的收率得到8.1mg所需外消旋产物2.38，为TFA盐。LC-MS (m/z):438.4[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.64(d, J＝8.5Hz,1H),7.16-7.29(m,2H),6.94(d,J＝7.7Hz,1H),5.05-5.25(m,2H),4.95 (d,J＝4.7Hz,1H),4.79-4.91(m,1H),3.89(ddt,J＝11.7,7.9,4.0Hz,2H),3.46-3.58(m,3H),2.06(br dd,J＝9.9,4.9Hz,2H),1.67(ddd,J＝13.1,9.1,3.7Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.39：
6-(叔丁基)-10-((3,3-二氟环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.39]
Figure BDA0002333517370001112
步骤1：6-(叔丁基)-10-((3,3-二氟环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.39a]
Figure BDA0002333517370001121
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-(溴甲基)-1,1-二氟环丁烷(21.83mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.39a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):486.4[M+H]+, 0.92分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((3,3-二氟环丁基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.39]
Figure BDA0002333517370001122
向已经处于1ml DMF中的2.39a(22.82mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以33％的收率得到9.1mg所需外消旋产物2.39，为TFA盐。LC-MS (m/z):458.4[M+H]+,0.94分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.66(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.32(m,2H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),5.05-5.29(m,2H),4.95 (d,J＝4.8Hz,1H),4.14-4.32(m,2H),2.61-2.86(m,3H),0.69(s,9H)。
实施例2.40：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3,3,3-三氟丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡 嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.40]
Figure BDA0002333517370001131
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3,3,3-三氟丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.40a]
Figure BDA0002333517370001132
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-溴-1,1,1-三氟丙烷(50.1mg， 0.283mmol)。将反应加热至85℃并搅拌40小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.40a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):478.4[M+H]+, 0.89分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-(3,3,3-三氟丙氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.40]
Figure BDA0002333517370001133
向已经处于1ml DMF中的2.40a(22.44mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以7％的收率得到2.0mg所需外消旋产物2.40，为TFA盐。LC-MS (m/z):450.3[M+H]+,0.91分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.69(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.34(m,2H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),5.06-5.24(m,2H),4.95 (br d,J＝4.7Hz,1H),4.41(t,J＝6.0Hz,2H),2.90(tt,J＝11.5,5.6Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.41：
6-(叔丁基)-10-(2-氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.41]
Figure BDA0002333517370001141
步骤1：6-(叔丁基)-10-(2-氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.41a]
Figure BDA0002333517370001142
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-2-氟乙烷(14.98mg，0.118mmol)。 将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.41a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):428.4[M+H]+,0.77分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(2-氟乙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.41]
Figure BDA0002333517370001143
向已经处于1ml DMF中的2.41a(20.09mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以39％的收率得到9.5mg所需外消旋产物2.41，为TFA盐。LC-MS (m/z):400.3[M+H]+,0.79分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.68(d, J＝8.5Hz,1H),7.12-7.34(m,2H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),5.06-5.25(m,2H),4.96 (d,J＝4.7Hz,1H),4.87-4.93(m,1H),4.72-4.81(m,1H),4.43-4.50(m,1H), 4.36-4.42(m,1H),0.69(s,9H)
实施例2.42：
6-(叔丁基)-10-乙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[2.42]
Figure BDA0002333517370001151
步骤1：6-(叔丁基)-10-乙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.42a]
Figure BDA0002333517370001152
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加溴乙烷(12.86mg，0.118mmol)。将 反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将具有所需产物 2.42a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):410.4[M+H]+,0.82分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-乙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.42]
Figure BDA0002333517370001153
向已经处于1ml DMF中的2.42a(19.25mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以29％的收率得到7.2mg所需外消旋产物2.42，为TFA盐。LC-MS (m/z):382.4[M+H]+,0.87分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.94(s,1H),7.62(d, J＝8.5Hz,1H),7.16-7.30(m,2H),6.80(d,J＝7.6Hz,1H),5.04-5.23(m,2H),4.95 (d,J＝4.6Hz,1H),4.20(q,J＝7.0Hz,2H),1.42(t,J＝6.9Hz,3H),0.69(s,9H)
实施例2.43：
6-(叔丁基)-10-(3-(二甲基氨基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.43]
Figure BDA0002333517370001161
步骤1：6-(叔丁基)-10-(3-(二甲基氨基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.43a]
Figure BDA0002333517370001162
向2.1h(22mg，0.058mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(56.4mg，0.173 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-溴-N,N-二甲基丙-1-胺(14.37mg， 0.087mmol)。将反应加热至50℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。粗反应物通过反相 制备型LC纯化，并冻干，以63％的产率得到17mg所需外消旋产物2.43a，为TFA 盐。LC-MS(m/z):467.5[M+H]+,0.62分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-(3-(二甲基氨基)丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.43]
Figure BDA0002333517370001171
To 2.43a(17mg,0.036mmol)was added 1ml of DMF and LiOH 1M aq (0.146mL,0.146mmol).向2.43a(17mg，0.036mmol)添加1ml DMF和LiOH 1M水性溶液 (0.146mL，0.146mmol)。The reaction was stirred at room temperature for 30minutes oruntil done by LCMS.反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。Additional LiOH 1Maq.can be added as needed.额外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。The crudereaction was purified by reverse phase prep LC and lyophilized to give 9.0mgof the desired racemic product 2.43 as TFA salt in 43％yield.将粗反应物通过反相制备型LC纯化，并冻干，以43％的收 率得到9.0mg所需外消旋产物2.43，为TFA盐。LC-MS(m/z):439.4[M+H]+,0.62分 钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:9.47(br s,1H),8.97(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.20-7.32 (m,2H),6.85(d,J＝7.6Hz,1H),5.11(br s,2H),4.96(br s,1H),4.25(br t,J＝5.4Hz,2H), 3.24-3.30(m,2H),2.84(d,J＝4.0Hz,6H),2.21(br dd,J＝9.2,6.1Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例2.44：
6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.44]
Figure BDA0002333517370001172
步骤1：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.44a]
Figure BDA0002333517370001173
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加4-(溴甲基)四氢-2H-吡喃(21.12mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM在线过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.44a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):480.4[M+H]+, 0.84分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-2-氧代-10-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.44]
Figure BDA0002333517370001181
向已经处于1ml DMF中的2.44a(22.54mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以32％的收率得到8.6mg所需外消旋产物2.44，为TFA盐。LC-MS (m/z):452.4[M+H]+,0.86分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H),7.63(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.30(m,2H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.16-5.24(m,1H),5.04-5.15(m,1H),4.95(d,J＝4.8Hz,1H),3.97-4.11(m,2H),3.89(br dd,J＝11.2,2.8Hz,2H),2.07-2.16(m,1H),1.72(br t,J＝14.6Hz,2H),1.31-1.46(m,2H),0.69 (s,9H)
实施例2.45：
6-(叔丁基)-10-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.45]
Figure BDA0002333517370001182
步骤1：6-(叔丁基)-10-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.45a]
Figure BDA0002333517370001191
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加3-(溴甲基)-3-甲基氧杂环丁烷 (19.47mg，0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。 使反应冷却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM在线过滤器过滤。假设定量 收率，将具有所需产物2.45a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):466.4 [M+H]+,0.79分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((3-甲基氧杂环丁-3-基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢 -2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.45]
Figure BDA0002333517370001192
向已经处于1ml DMF中的2.45a(21.88mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以4％的收率得到1.0mg所需外消旋产物2.45，为TFA盐。LC-MS (m/z):438.4[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.96(s,1H),7.67(d, J＝8.5Hz,1H),7.19-7.31(m,2H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),5.24(br d,J＝14.9Hz, 1H),5.09(br dd,J＝14.7,5.2Hz,1H),4.95(br d,J＝5.0Hz,1H),4.54(t,J＝5.5Hz, 2H),4.35(dd,J＝5.8,3.1Hz,2H),4.17-4.31(m,2H),1.42(s,3H),0.70(s,9H)。
实施例2.46：
6-(叔丁基)-10-((1-氰基环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.46]
Figure BDA0002333517370001201
步骤1：6-(叔丁基)-10-((1-氰基环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.46a]
Figure BDA0002333517370001202
向2.1h(18mg，0.047mmol)添加DMF(体积：0.5mL)和碳酸铯(53.8mg，0.165 mmol)。反应室温搅拌5分钟，然后添加1-(溴甲基)环丙腈(18.88mg， 0.118mmol)。将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。使反应冷 却，添加0.5ml DMF，然后通过0.45nM串联过滤器过滤。假设定量收率，将 具有所需产物2.46a的DMF溶液原样用于下一步。LC-MS(m/z):461.4[M+H]+, 0.80分钟。
步骤2：6-(叔丁基)-10-((1-氰基环丙基)甲氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.46]
Figure BDA0002333517370001203
向已经处于1ml DMF中的2.46a(21.64mg，0.047mmol)添加LiOH 1M水性 溶液(188μl，0.188mmol)。反应在室温搅拌30分钟或直至LCMS完成。额 外的LiOH 1M水性溶液可以根据需要添加。将粗反应物通过反相制备型LC纯 化，并冻干，以22％的收率得到5.8mg所需外消旋产物2.46，为TFA盐。LC-MS (m/z):433.4[M+H]+,0.82分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ:8.95(s,1H)7.70(d, J＝8.51Hz,1H)7.17-7.31(m,2H)6.79(d,J＝7.58Hz,1H)5.21-5.32(m,1H)5.06-5.18(m,1H)4.97(d,J＝4.99Hz,1H)4.10-4.33(m,2H)1.36-1.49(m,2 H)1.13-1.29(m,2H)0.70(s,9H)。
实施例2.47：
6-(叔丁基)-10-异丙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b] 吲唑-3-羧酸[2.47-I]和[2.47-II]
Figure BDA0002333517370001211
2.47-I和2.47-II
步骤1：6-(叔丁基)-10-异丙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[2.47aI]和[2.47a-II]
Figure BDA0002333517370001212
2.47a-I和2.47a-II
向2.1h(250mg，0.655mmol)添加DMF(体积：5mL)和碳酸铯(641mg， 1.966mmol)。反应室温搅拌10分钟，然后添加2-溴丙烷(161mg，1.311mmol)， 并将反应加热至70℃并搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应冷却，用含3％ 乙醇的100ml DCM稀释，用水3×、饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓 缩至残余物。粗物质通过硅胶色谱法纯化，使用0-85％EtOAc(具有25％乙醇)/ 庚烷。将所需的级分浓缩至恒定质量，以84％的产率得到234mg的所需外消 旋产物2.47a。LC-MS(m/z):424.6[M+H]+,0.94分钟。1H NMR(DMSO-d6)δ: 8.51(s,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(t,J＝8.0Hz,1H),6.79(t,J＝3.7Hz,2H), 5.04-5.12(m,1H),4.96-5.04(m,1H),4.87(dt,J＝12.1,6.0Hz,1H),4.69(d,J＝4.4 Hz,1H),4.22(q,J＝7.1Hz,2H),1.34(t,J＝6.4Hz,6H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H),0.69 (s,9H)。通过手性色谱法，使用(AD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝80/20，266巴)，分离外消旋物质2.47a，370mg，得到157mg产物2.47a-I(峰1，tR 3.72 分钟)和170mg产物2.47a-II(峰2，tR 5.63分钟)。
步骤2：6-(叔丁基)-10-异丙氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[2.47-I]和[2.47-II]
Figure BDA0002333517370001221
向2.47a-I(157mg，0.371mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体 积：5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(1.112ml，1.112mmol)。反应在室温 搅拌16小时或直至LCMS完成。反应用15ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为 2-3，然后添加含2％乙醇的150ml DCM，并添加10ml饱和氯化钠溶液。分离 有机层，水层用含2％乙醇的1×75ml DCM再次萃取。合并有机层，用水4×75ml 洗涤，过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于10ml的1:1ACN/水中，过滤并冻 干，以92％的收率得到136.8mg所需产物2.47-I，为游离碱。LC-MS(m/z):396.3 [M+H]+,0.91分钟。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.82(s,1H)7.52(d, J＝8.46Hz,1H)7.26-7.36(m,2H)6.85(d,J＝7.58Hz,1H)5.09-5.19(m,1H) 5.02-5.09(m,1H)4.90-4.96(m,1H)4.76(d,J＝4.50Hz,1H)1.44(d,J＝6.06 Hz,6H)0.81(s,9H)。向2.47a-II(170mg，0.401mmol)添加乙腈(体积：5ml， 比率：1.000)，水(体积：5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(1.204ml，1.204mmol)。 反应在室温搅拌16小时或直至LCMS完成。反应用15ml水稀释，用1M HCl酸 化至pH为2-3，然后添加含2％乙醇的150ml DCM，并添加10ml饱和氯化钠溶液。 分离有机层，水层用含2％乙醇的1×75ml DCM再次萃取。合并有机层，用水 4×75ml洗涤，过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于10ml 1:1ACN/水中，过滤 并冻干，以89％的收率得到143.3mg所需产物2.47-II，为游离碱。LC-MS(m/z): 396.3[M+H]+,0.90分钟。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm:8.82(s,1H) 7.51(d,J＝8.46Hz,1H)7.26-7.38(m,2H)6.85(d,J＝7.63Hz,1H)5.10-5.18 (m,1H)5.03-5.09(m,1H)4.89-4.96(m,1H)4.76(d,J＝4.45Hz,1H)1.44(d, J＝6.06Hz,6H)0.80(s,9H)
实施例3.1：
6-(1-羟基-2-甲基丙烷-2-基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[3.1-I]和[3.1-II]
Figure BDA0002333517370001231
3.1-I和3.1-II
步骤1：4-(苄氧基)-1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮[3.1a]
Figure BDA0002333517370001232
向冷却至-78℃的MeOH(体积：700mL)中的4-(苄氧基)-3,3-二甲基丁-2-酮(48.17g，234mmol)中添加溴(13.23mL，257mmol)并搅拌至室温(rt)。添加饱和 碳酸氢钠直至溶液为碱性。将有机物萃取到DCM中，用硫酸钠干燥并浓缩以 得到pdt。粗产物通过硅胶色谱法使用庚烷-EtOAc(0-15％EtOAc，30分钟)纯化， 以49.9％的产率得到33.2g的3.1a。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.25-7.38 (m,5H)4.47-4.51(m,2H)4.23(s,2H)3.41-3.46(m,2H)1.23(s,6H)
步骤2：4-(苄氧基)-1-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基 -2H-吲唑-2-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[3.1b]
Figure BDA0002333517370001233
向DMSO(体积：124ml，比率：1.000)-水(体积：6.22ml，比率：.05)中的 1.1b(3.4g，11.63mmol)和3.1a(13.26g，46.5mmol)添加碳酸铯(22.73g，69.8mmol)，并在室温搅拌4小时。将粗产物萃取到DCM中并浓缩。添加EtOAc 并用盐水洗涤以除去任何DMSO，并通过硅胶色谱法使用庚烷 -EtOAc(0-20％EtOAc，23分钟梯度洗脱)纯化，以21.5％的收率得到1.24g的3.1b。. LC-MS(m/z):497.6[M+H]+,1.23分钟。
步骤3：(2-(2-氨基-4-(苄氧基)-3,3-二甲基丁基)-7-甲氧基-2H-吲唑-3-基)甲醇[3.1c]
Figure BDA0002333517370001241
向甲醇(体积：30ml)中的3.1b(1.6g，3.22mmol)添加乙酸铵(4.97g，64.4mmol) 和氰基硼氢化钠(2.024g，32.2mmol)，并在70℃搅拌3天。粗产物用DCM稀释， 并用饱和碳酸氢钠洗涤，并将有机物浓缩。含有3.1c的有机物无需进一步纯化 即可用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):384.4[M+H]+,0.74分钟。
步骤4：3-(1-(苄氧基)-2-甲基丙烷-2-基)-7-甲氧基-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[3.1d]
Figure BDA0002333517370001242
向DCM(体积：40mL)中的3.1c(1.6g，4.17mmol)添加二氧化锰(7.25g， 83mmol)，并在室温搅拌。在室温搅拌2小时后，反应停止。过滤粗产物，并 再次用二氧化锰(7.25g，83mmol)处理滤出物，并搅拌过夜。再次过滤粗反应 物并浓缩，得到粗产物3.1d，其原样用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z): 364.4[M+H]+,0.82分钟。
步骤5：6-(1-(苄氧基)-2-甲基丙-2-基)-10-甲氧基-2-氧代-1,6,7,13c-四氢-2H- 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[3.1e]
Figure BDA0002333517370001251
将3.1d(0.994g，2.73mmol)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(1.528g，8.20mmol)在EtOH(体积：17mL)中于120℃加热过夜。含有3.1e的粗产物经浓 缩并被用于进行下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):504.5[M+H]+,0.98分钟。
步骤6：6-(1-(苄氧基)-2-甲基丙-2-基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[3.1f]
Figure BDA0002333517370001252
向DME(体积：40ml)中的3.1e(1375mg，2.73mmol)添加氯胺-T(738mg， 3.00mmol)，并加热回流2小时。浓缩粗产物，并将其再溶解于DCM-甲醇(最小 量)中，并通过硅胶色谱纯化，首先使用庚烷-EtOAc(0-100％)除去所有非极性 SM/副产物，然后用DCM-甲醇(0-20％MeOH)纯化，在浓缩后以46％的收率得到 630mg的3.1f。LC-MS(m/z):502.4[M+H]+,0.96分钟。
步骤7：6-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[3.1g-I]和[3.1g-II]
Figure BDA0002333517370001253
3.1g-I和3.1g-II
向EtOH(体积：40mL)中的3.1f(630mg，1.256mmol)添加10％钯/碳(800mg，7.52mmol)，然后先用氮气吹扫，再用氢气吹扫。连接氢气囊，并将粗产物搅 拌4小时。需要密切监控反应，因为当脱苄基进行70-80％时会产生副产物。此 时将反应物过滤，并将粗产物浓缩。浓缩的粗产物通过硅胶色谱法使用含 25％EtOH的庚烷-EtOAc(0-100％)纯化，浓缩后以26.9％的收率得到139mg 3.1g， 用于手性纯化。LC-MS(m/z):412.4[M+H]+,0.65分钟。
通过手性色谱使用(OD柱，SFC＝80ml/分钟，CO2/MeOH＝75/25，266巴)分 离上述外消旋物质139mg，得到42mg产物3.1g-I(峰1，tR 5.17分钟)和43mg产物 3.1g-II(峰2，tR9.86分钟)。
步骤8：6-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[3.1-I]和[3.1-II]
Figure BDA0002333517370001261
向乙腈(体积：1，比率：1.000)-水(体积：1，比率：1.000)中的3.1g-I(42mg，0.102mmol)添加氢氧化锂(15mg，0.357mmol)并在室温搅拌。1小时后，粗产物 用100ml水中的1M硫酸酸化(至pH纸上呈红色)，然后萃取至DCM中并浓缩。将 有机物冻干，以79％的收率得到32.5mg的3.1-I。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.89(s,1H),7.44(d,J＝8.51Hz,1H),7.23-7.33(m,2H),6.74(d,J＝7.53Hz,1H), 5.17(d,J＝14.53Hz,1H),4.85-5.02(m,2H),4.07(s,3H),3.27-3.42(m,2H),1.03 (s,3H),0.36(s,3H).LC-MS(m/z):384.3[M+H]+,0.69分钟。向乙腈(体积：1， 比率：1.000)-水(体积：1，比率：1.000)中的3.1g-II(42mg，0.102mmol)添加氢 氧化锂(15mg，0.357mmol)并在室温搅拌。1小时后，粗产物用100ml水中的 1M硫酸酸化(至pH纸上呈红色)，然后萃取至DCM中并浓缩。将有机物冻干， 以79％的收率得到32.5mg的3.1-II。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.89(s,1H), 7.44(d,J＝8.46Hz,1H),7.21-7.33(m,2H),6.74(d,J＝7.48Hz,1H),5.17(br d, J＝14.48Hz,1H),4.85-5.02(m,2H),4.07(s,3H),3.27-3.41(m,2H),0.99-1.20(m, 3H),0.35(s,3H).LC-MS(m/z):384.3[M+H]+,0.69分钟。
实施例4.1：10-甲氧基-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-6,7-二氢-2H- 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[4.1-I]和[4.1-II]
Figure BDA0002333517370001271
4.1-I和4.1-II
步骤1：1-溴-4-甲氧基-3,3-二甲基丁-2-酮
Figure BDA0002333517370001272
向冷却至-78℃的200ml MeOH(体积：250mL)中的4-甲氧基-3,3-二甲基丁 -2-酮(9.81g，75mmol)中滴加50ml Br2(4.27mL，83mmol)并搅拌至室温过夜。 添加饱和碳酸氢钠直至溶液为碱性。将有机物萃取到DCM中，用硫酸钠干燥 并浓缩，得到假定定量产率的4.1a。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.24(s,2 H)3.35(s,2H)3.31(s,3H)1.21(s,6H)
步骤2：1-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁-2-酮[4.1b]
Figure BDA0002333517370001273
向DMSO(体积：47.9ml，比率：1.000)-水(体积：3.36ml，比率：0.07)中 的1.1b(1.5g，5.13mmol)和4.1a(2.7g，12.91mmol)添加碳酸铯(6.68g,20.52 mmol)，并在室温搅拌过夜。将粗产物萃取到DCM中并浓缩。然后将EtOAc 添加至粗产物，并用盐水洗涤以除去任何DMSO，并通过硅胶色谱法使用庚烷-EtOAc(0-50％EtOAc)纯化，在浓缩后以26.5％的收率得到572mg的4.1b(在ISCO 上更具极性)。LC-MS(m/z):421.4[M+H]+,1.26分钟。
步骤3：(2-(2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁基)-7-甲氧基-2H-吲唑-3-基)甲醇[4.1c]
Figure BDA0002333517370001281
向MeOH(体积：7)中的4.1b(572mg，1.360mmol)添加乙酸铵(1048mg， 13.60mmol)和氰基硼氢化钠(0.9g，14.32mmol)，并在70℃搅拌3天。粗产物用 DCM稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，并将有机物浓缩。含有4.1c的有机物无需 进一步纯化即可用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):308.4[M+H]+,0.53 分钟。
步骤4：7-甲氧基-3-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[4.1d]
Figure BDA0002333517370001282
向在DCM(体积：20mL)中的4.1c(0.418g，1.36mmol)中添加MnO2(4.3g， 49.5mmol)并搅拌过夜。粗产物通过硅藻土过滤，并将硅藻土用DCM洗涤。浓 缩有机层，并将含有4.1d的粗产物用于下一步，假设定量收率。LC-MS(m/z): 288.3[M+H]+,0.60分钟。
步骤5：10-甲氧基-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-1,6,7,13c-四氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[4.1e]
Figure BDA0002333517370001291
将4.1d(0.391g，1.36mmol)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(0.760g，4.08mmol)在EtOH(体积：6.80ml)中于100℃加热过夜。含有4.1e的粗产物经浓 缩并被用于进行下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):428.4[M+H]+,0.78分钟。
步骤6：10-甲氧基-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[4.1f-I]和[4.1f-II]
Figure BDA0002333517370001292
4.1f-I和4.1f-II
向DME(体积：20mL)中的4.1e(1210mg，2.83mmol)添加氯胺-T(834mg， 3.40mmol)，并加热回流2小时。浓缩粗产物，并将其再溶解于DCM-甲醇(最小 量)中，并通过硅胶色谱纯化，首先使用庚烷-EtOAc(0-100％)除去所有非极性 SM/副产物，然后用DCM-甲醇(0-20％MeOH)纯化，在浓缩后以10.8％的收率得 到130mg的4.1f。LC-MS(m/z):426.4[M+H]+,0.77分钟。通过手性色谱使用 (OD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝65/35，266巴)分离上述外消旋物质 130mg，得到38mg产物4.1f-I(峰1，tR 2.04分钟)和37mg的产物4.1f-II(峰2，tR4.47 分钟)。
步骤7：10-甲氧基-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[4.1-I]和[4.1-II]
Figure BDA0002333517370001301
向4.1f-I(38mg，0.089mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体积： 5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(11.24mg，0.268mmol)。反应在室温搅拌 2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然 后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以78％的收率得到29mg的所需产物4.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):398.4[M+H]+,0.79分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.69(s,1H),7.45(d,J＝8.46Hz,1H),7.17-7.36(m,2H),6.74(d,J＝7.53Hz,1H), 5.12(d,J＝14.92Hz,1H),4.91(dd,J＝5.45,14.94Hz,1H),4.73(d,J＝5.23Hz,1H), 4.07(s,3H),3.37(s,3H),3.02(d,J＝9.93Hz,1H),2.93(d,J＝9.93Hz,1H),1.03(s, 3H),0.36(s,3H)。向4.1f-II(37mg，0.087mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率： 1.000)，水(体积：5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(10.95mg，0.261mmol)。 反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1MHCl酸 化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。 分离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水， 饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至 残余物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以71.5％的产率得到26mg的 所需产物4.1-II，为游离碱。LC-MS(m/z):398.4[M+H]+,0.79分钟；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H),7.45(d,J＝8.46Hz,1H),7.17-7.36(m,2H),6.74(d, J＝7.53Hz,1H),5.12(d,J＝14.92Hz,1H),4.92(dd,J＝5.43,14.87Hz,1H),4.73(d, J＝5.18Hz,1H),4.07(s,3H),3.37(s,3H),3.02(d,J＝9.98Hz,1H),2.93(d,J＝9.93 Hz,1H),1.03(s,3H),0.36(s,3H)。
实施例5.1：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊 [5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[5.1-I]和[5.1-II]
Figure BDA0002333517370001311
5.1-I和5.1-II
步骤1：5-溴-2,2-二甲基环戊-1-酮[5.1a]
Figure BDA0002333517370001312
在碎冰温度，向MeOH(体积：446ml)中的2,2-二甲基环戊-1-酮(25g， 223mmol)添加溴(12.63ml，245mmol)，并搅拌过夜。粗产物用饱和碳酸氢钠 洗涤并萃取到DCM中，用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到5.1a，假定为定量收率。 1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.30(dd,J＝6.92,4.77Hz,1H)2.30-2.52(m, 1H)2.05-2.24(m,2H)1.74-1.88(m,1H)1.15-1.28(s,3H)1.07(s,3H)
步骤2：5-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-2,2-二甲基环戊-1-酮[5.1b]
Figure BDA0002333517370001313
向DMSO(体积：25ml，比率：0.833)-水(体积：1.5mL，比率：0.05)中的 5.1a(5.41g，28.3mmol)和1.1b(2.07g，7.08mmol)添加碳酸铯(13.84g，42.5mmol) 并在室温搅拌过夜。将粗产物萃取到DCM中并浓缩。添加EtOAc并用盐水洗 涤以除去任何DMSO，并通过硅胶色谱法使用庚烷-EtOAc(0-50％EtOAc)纯化， 浓缩后得到所需产物5.1b(1.14g，2.83mmol，40.0％收率)，其为约40-50％EtOAc 洗脱的更具极性的产物。LC-MS(m/z):403.5[M+H]+,1.30分钟。
步骤3：(2-(2-氨基-3,3-二甲基环戊基)-7-甲氧基-2H-吲唑-3-基)甲醇[5.1c]
Figure BDA0002333517370001321
向MeOH(体积：15ml)中的5.1b(1.14g，2.83mmol)添加乙酸铵(2.183g，28.3 mmol)和氰基硼氢化钠(0.9g，14.32mmol)，并在70℃搅拌3天。粗产物用DCM 稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，并将有机物浓缩。含有5.1c的有机物无需进 一步纯化即可用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):290.4[M+H]+,0.61 分钟。
步骤4：9-甲氧基-3,3-二甲基-2,3,3a,11a-四氢-1H-环戊[5,6]吡嗪并[1,2-b]吲唑[5.1d]
Figure BDA0002333517370001322
向在DCM(体积：30mL)中的5.1c(0.819g，2.83mmol)中添加MnO2(5.5g， 63.3mmol)并搅拌过夜。粗产物通过硅藻土过滤，并将硅藻土用DCM洗涤。浓 缩有机层，并将含有5.1d的粗产物用于下一步，假设定量收率。LC-MS(m/z): 270.3[M+H]+,0.61分钟。
步骤5：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,8,8a,14a-六氢-1H,7H-环戊 [5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[5.1e]
Figure BDA0002333517370001323
将5.1d(0.762g，2.83mmol)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(1.581 g，8.49mmol)在EtOH(体积：14.15ml)中于120℃加热过夜。含有5.1e的粗产 物经浓缩并被用于进行下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):410.4 [M+H]+,0.78分钟。
步骤6：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[5.1f-I]和[5.1f-II]
Figure BDA0002333517370001331
5.1f-I和5.1f-II
向DME(体积：30mL)中的5.1e(1159mg，2.83mmol)添加氯胺-T(834mg， 3.40mmol)，并加热回流2小时。浓缩粗产物，并将其再溶解于DCM-甲醇(最小 量)中，并通过硅胶色谱纯化，首先使用庚烷-EtOAc(0-100％)除去所有非极性 SM/副产物，然后用DCM-甲醇(0-20％MeOH)纯化，以在浓缩后以21％的收率得 到243mg的5.1f。LC-MS(m/z):408.4[M+H]+,0.86分钟。
通过手性色谱法使用(SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝70/30，246巴)分离上 述外消旋物质243mg，得到82mg产物5.1f-I(峰1，tR 3.58分钟)和66mg产物 5.1f-II(峰2，tR5.40分钟)。
步骤7：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[5.1-I]和[5.1-II]
Figure BDA0002333517370001332
向5.1f-I(82mg，0.201mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率：1.000)，水(体积：5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(25.3mg，0.604mmol)。反应在室温搅拌 2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然 后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以63.5％的收率得到51mg的所需产物5.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):380.4[M+H]+,0.83分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.51(s,1H),7.50(br d,J＝8.41Hz,1H),7.20-7.41(m,2H),6.75(br d,J＝7.29Hz, 1H),5.24(br s,1H),4.43(br d,J＝5.92Hz,1H),4.08(s,3H),3.23-3.44(m,1H), 2.53(br dd,J＝6.53,14.60Hz,1H),1.73-1.90(m,1H),1.51-1.73(m,1H),1.35(s, 3H),0.48(s,3H)。向5.1f-II(66mg，0.162mmol)添加乙腈(体积：5ml，比率： 1.000)，水(体积：5ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(20.39mg，0.486mmol)。 反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸 化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。 分离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水， 饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至 残余物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以82％的产率得到53mg的所 需产物5.1-II，为游离碱。LC-MS(m/z):380.3[M+H]+,0.82分钟；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),7.49(br d,J＝8.51Hz,1H),7.21-7.41(m,2H),6.75 (br d,J＝7.48Hz,1H),5.24(br t,J＝5.55Hz,1H),4.43(br d,J＝6.36Hz,1H),4.08 (s,3H),3.26-3.41(m,1H),2.53(br dd,J＝6.55,14.77Hz,1H),1.81(ddd,J＝5.40, 8.36,13.33Hz,1H),1.51-1.73(m,1H),1.35(s,3H),0.48(s,3H)。
实施例5.2：
12-氟-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[5.2-I]和[5.2-II]
Figure BDA0002333517370001341
5.2-I和5.2-II
步骤1～6：12-氟-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[5.2f-I]和[5.2f-II]
Figure BDA0002333517370001351
5.2f-I和5.2f-II
化合物5.2f由起始物质合成；3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-氟 -2H-吲唑(由7-氟-2H-吲唑-3-羧酸甲酯通过制备1.1b的方法制得)通过实施例5.1 的方法，遵循步骤1～6，以27.7％的收率得到310mg的5.2f，为外消旋物。LC-MS (m/z):396.5[M+H]+,0.91分钟。
通过手性色谱使用(OD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH 80/20，226巴)分 离上述外消旋物质(310mg)，得到110mg产物5.2f-I(峰1，tR 3.95分钟)和105mg 产物5.2f-II(峰2，tR 6.11分钟)。
步骤7：12-氟-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[5.2-I]和[5.2-II]
Figure BDA0002333517370001352
向5.2f-I(105mg，0.266mmol)添加乙腈(体积：4ml，比率：1.000)，水(体 积：4ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(33.4mg，0.797mmol)。反应在室 温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为 2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离 有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和 氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余 物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以6.8％的收率得到7mg的所需产 物5.2-I，为游离碱。LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.83分钟；1H NMR(400MHz, CDCl3)δppm 8.52(s,1H)7.73(d,J＝8.51Hz,1H)7.30-7.40(m,2H)7.13(dd, J＝10.78,7.56Hz,1H)5.16-5.37(m,1H)4.45(d,J＝6.50Hz,1H)3.21-3.41(m, 1H)2.54(dtd,J＝14.80,8.59,8.59,6.16Hz,1H)1.84(ddd,J＝13.61,8.72,5.06Hz, 1H)1.64(dt,J＝13.55,8.27Hz,1H)1.36(s,3H)0.48(s,3H)。向 5.2f-II(110mg，0.278mmol)添加乙腈(体积：4ml，比率：1.000)，水(体积：4ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(35mg，0.835mmol)。反应在室温搅拌2小时或 直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然后添加 含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层，再次用 含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶液洗涤， 经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将残余物溶 于1:1ACN/水中，并冻干，以6.5％的产率得到7mg的所需产物5.2-II，为游离碱。 LC-MS(m/z):368.3[M+H]+,0.83分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.51(s, 1H)7.73(d,J＝8.51Hz,1H)7.27-7.38(m,2H)7.07-7.25(m,1H)5.26(t, J＝5.75Hz,1H)4.43(d,J＝6.50Hz,1H)3.26-3.41(m,1H)2.45-2.64(m,1H) 1.84(ddd,J＝13.58,8.69,5.06Hz,1H)1.59-1.70(m,1H)1.36(s,3H)0.48(s,3 H)。
实施例6.1：
12-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a，14a-四氢-1H，7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[6.1-I]和[6.1-II]
Figure BDA0002333517370001361
6.1-I和6.1-II
步骤1～6：12-(苄氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊 [5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[6.1f]
Figure BDA0002333517370001362
化合物6.1f由起始物质合成；通过实施例5.1的方法，按照步骤1～6由2.1b 得到所需产物6.1f，为外消旋体。LC-MS(m/z):484.4[M+H]+,0.99分钟。
步骤7：12-羟基-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[6.1g]
Figure BDA0002333517370001371
往EtOH(体积：25ml)中的6.1f(315mg，0.651mmol)吹扫氮气，然后添加 10％Pd-C(350mg，0.329mmol)，并用氮气再次吹扫。然后连接氢气囊，并用 氢气吹扫反应混合物。粗物质搅拌1小时，并在硅藻土上过滤，并用DCM-乙 醇吹扫。浓缩粗产物以定量收率得到粗产物262mg 6.1g。LC-MS(m/z):394.4 [M+H]+,0.69分钟。
步骤8：12-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H- 环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[6.1hI]和[6.1h-II]
Figure BDA0002333517370001372
6.1h-I和6.1h-II
向DMF(体积：5mL)中的6.1g(150mg，0.381mmol)添加1-溴-3-甲氧基丙烷(0.083mL，0.763mmol)和碳酸铯(373mg，1.144mmol)并搅拌。过滤粗产物，并 用EtOAc冲洗，然后用饱和盐水洗涤以去除任何DMF。粗产物通过使用庚烷 -(EtOAc:EtOH＝75:25)(0-100％)的硅胶色谱法纯化，浓缩后以55.8％的产率得到 99mg的所需产物6.1h，将其用于手性纯化。LC-MS(m/z):466.5[M+H]+,0.84 分钟。
通过手性色谱使用(OD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH 75/25，246巴)分 离上述外消旋物质(99mg)，得到41mg产物6.1h-I(峰1，tR 5.24分钟)和38mg产 物6.1h-II(峰2，tR7.61分钟)。
步骤9：12-(3-甲氧基丙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H，7H- 环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[6.1-I]和[6.1-II]
Figure BDA0002333517370001381
向6.1h-I(41mg，0.088mmol)添加乙腈(体积：2ml，比率：1.000)，水(体积： 1ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(11.09mg，0.264mmol)。反应在室温搅 拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3， 然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以46.8％的收率得到19mg的所需产物6.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):438.4[M+H]+,0.88分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.48(s,1H),7.40-7.57(m,1H),7.25-7.34(m,2H),6.78(d,J＝7.58Hz,1H),5.23(t, J＝5.70Hz,1H),4.29-4.44(m,3H),3.55-3.71(m,2H),3.29-3.40(m,4H), 2.38-2.64(m,1H),2.24(五峰,J＝6.32Hz,2H),1.81(ddd,J＝5.14,8.66,13.60Hz, 1H),1.53-1.68(m,1H),1.34(s,3H),0.48(s,3H)。向6.1h-II(38mg，0.082mmol) 添加乙腈(体积：2ml，比率：1.000)，水(体积：1ml，比率：1.000)，然后添 加LiOH(10.28,0.245mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应 用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM， 并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃 取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫 酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻 干，以50.5％的产率得到19mg的所需产物6.1-II，为游离碱。LC-MS(m/z):438.4 [M+H]+,0.89分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.49(s,1H),7.47(d,J＝8.56Hz, 1H),7.24-7.34(m,2H),6.78(d,J＝7.58Hz,1H),5.23(t,J＝5.89Hz,1H),4.28-4.44 (m,3H),3.53-3.74(m,2H),3.29-3.40(m,4H),2.38-2.65(m,1H),2.24(五峰, J＝6.32Hz,2H),1.81(ddd,J＝5.23,8.66,13.60Hz,1H),1.54-1.68(m,1H),1.34(s, 3H),0.48(s,3H)
实施例6.2
12-(2-甲氧基乙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a，14a-四氢-1H，7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[6.2-I]和[6.2-II]
Figure BDA0002333517370001391
6.2-I和6.2-II
步骤1:12-(2-甲氧基乙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[6.2h-I]和[6.2h-II]
Figure BDA0002333517370001392
6.2h-I和6.2h-II
向DMF(体积：3mL)中的6.1g(150mg，0.381mmol)添加1-溴-2-甲氧基乙烷(0.076mL，0.763mmol)和碳酸铯(373mg，1.144mmol)并搅拌。过滤粗产物，并 用EtOAc冲洗，然后用饱和盐水洗涤以去除任何DMF。粗产物通过使用庚烷 -(EtOAc:EtOH＝75:25)(0-100％)的硅胶色谱法纯化，浓缩后以35.4％的收率得到 61mg的6.2h。LC-MS(m/z):452.4[M+H]+,0.80分钟。
通过使用(AD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝70/30，236巴)的手性色谱 法分离上述外消旋物质(61mg)，以得到28mg的产物6.2h-I(峰1，tR 2.93分钟)和 29mg的产物6.2h-II(峰2，tR 4.91分钟)。
步骤2：12-(2-甲氧基乙氧基)-3,3-二甲基-7-氧代-2,3,3a,14a-四氢-1H,7H-环戊[5,6]吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[6.2-I]和[6.2-II]
Figure BDA0002333517370001401
向6.2h-I(28mg，0.062mmol)添加乙腈(体积：2ml，比率：1.000)，水(体 积：1ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(7.81mg，0.186mmol)。反应在室温 搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3， 然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以54.3％的收率得到15mg的所需产物6.2-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):424.4[M+H]+,0.82分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.48(s,1H),7.42-7.55(m,1H),7.25-7.33(m,2H),6.77(d,J＝7.63Hz,1H),5.23(t, J＝5.70Hz,1H),4.30-4.48(m,3H),3.86-3.99(m,2H),3.49(s,3H),3.21-3.43(m, 1H),2.51(dt,J＝8.46,14.77Hz,1H),1.80(ddd,J＝5.16,8.68,13.60Hz,1H), 1.49-1.68(m,1H),1.34(s,3H),0.47(s,3H)。向6.2h-II(29mg，0.064mmol)添 加乙腈(体积：2ml，比率：1.000)，水(体积：1ml，比率：1.000)，然后添加 LiOH(8.09mg，0.193mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反 应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM， 并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃 取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫 酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻 干，以52.4％的产率得到15mg的所需产物6.2-II，为游离碱。LC-MS(m/z):424.4 [M+H]+,0.82分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.48(s,1H),7.48(d,J＝8.51Hz, 1H),7.25-7.34(m,2H),6.76(d,J＝7.58Hz,1H),5.23(br t,J＝5.77Hz,1H), 4.32-4.48(m,3H),3.84-4.01(m,2H),3.49(s,3H),3.24-3.42(m,1H),2.51(br dd, J＝6.24,14.79Hz,1H),1.80(ddd,J＝5.14,8.68,13.57Hz,1H),1.63-1.71(m,1H), 1.33(s,3H),0.46(s,3H)。
实施例7.1
6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[7.1-I]和[7.1-II]
Figure BDA0002333517370001411
7.1-I和7.1-II
步骤1：1-(7-(苄氧基)-3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2H-吲唑-2-基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁-2-酮[7.1b]
Figure BDA0002333517370001412
向DIPEA(35.5ml，204mmol)中的2.1b(7.5g，20.35mmol)添加4.1a(14.44g，69.1mmol)，并在110℃加热搅拌4小时。将粗产物溶解在20ml DCM中，并用 水中的0.723ml硫酸洗涤，并将有机物浓缩。有机物通过硅胶色谱法，使用庚 烷-EtOAc(0-50％)纯化。然后洗脱所需的位置异构体并浓缩，以57.3％的收率 得到5.503g的所需产物7.1b。LC-MS(m/z):497.5[M+H]+,1.32分钟。
步骤2：(2-(2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁基)-7-(苄氧基)-2H-吲唑-3-基)甲醇[7.1c]
Figure BDA0002333517370001413
向MeOH(体积：40ml)中的7.1b(5.5g，11.07mmol)添加乙酸铵(10.5g，136mmol)和氰基硼氢化钠(3.48g，55.4mmol)，并在70℃搅拌3天。粗产物用 DCM稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，并将有机物浓缩。含有7.1c的有机物无需 进一步纯化即可用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):384.5[M+H]+, 0.70分钟。
步骤3：7-(苄氧基)-3-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[7.1d]
Figure BDA0002333517370001421
向DCM(体积：50ml)中的7.1c(4.25g，11.07mmol)添加MnO2(9.62g， 111mmol)，并在室温搅拌过夜。过滤粗产物，并用DCM冲洗收集的MnO2并 浓缩，得到粗物质7.1d，其按原样使用，假定定量收率。LC-MS(m/z):364.5 [M+H]+,0.91分钟。
步骤4：10-(苄氧基)-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-1,6,7,13c-四氢-2H- 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[7.1e]
Figure BDA0002333517370001422
将7.1d(4.02g，11.07mmol)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(8.25 g，44.3mmol)在EtOH(体积：55ml)中于120℃加热过夜。含有7.1e的粗产物经 浓缩并原样用于进行下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):504.5[M+H]+,0.95 分钟。
步骤5：10-(苄氧基)-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[7.1f]
Figure BDA0002333517370001431
向7.1e(5.57g，11.07mmol)添加DME(体积：80mL)，然后添加碘(8.43g，33.2mmol)。将反应在35-40℃搅拌过夜。反应用400ml DCM稀释，小心地用 饱和碳酸氢钠溶液处理以避免产热和产CO2，用饱和亚硫酸氢钠处理以除去残 留的碘/HI和饱和盐溶液。分离有机物，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至残 余物。残余物通过硅胶色谱法使用0-100％庚烷/EtOAc-EtOH(75:25)纯化，浓缩 至残余物，以收率27.2％得到1.51g 7.1f。LC-MS(m/z):502.5[M+H]+,0.95分 钟。
步骤6：10-羟基-6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[7.1g]
Figure BDA0002333517370001432
向MeOH(体积：30.1ml)中的7.1f(1.51g，3.01mmol)吹扫氮气，然后添加 Degussa10％Pd-C(1.5g，1.410mmol)，并再用氮气吹扫。然后连接氢气囊， 并用氢气吹扫反应混合物。粗物质搅拌1小时，并在硅藻土上过滤，然后用 DCM-乙醇冲洗。浓缩粗产物，以84％的收率得到1.04g的7.1g，其无需进一步 纯化即可用于下一步。LC-MS(m/z):412.4[M+H]+,0.66分钟。
步骤7：6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[7.1h-I]和[7.1h-II]
Figure BDA0002333517370001441
7.1h-I和7.1h-II
向DMF(体积：8750μl)中的7.1g(900mg，2.187mmol)添加1-溴-3-甲氧基丙 烷(478μl，4.37mmol)和碳酸铯(2138mg，6.56mmol)并搅拌。粗产物通过硅胶 色谱法纯化，使用0-100％庚烷-(EtOAC/EtOH:75/25)，浓缩后以63％的产率得到 667mg的7.1h。LC-MS(m/z):484.5[M+H]+,0.79分钟。
通过使用(AD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/MeOH＝75/25，236巴)的手性色谱 分离上述外消旋物质(667mg)，得到279mg产物7.1h-I(峰1，tR 2.71分钟)和279 mg产物7.1h-II(峰2，tR 5.07分钟)。
步骤8：6-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[7.1-I]和[7.1-II]
Figure BDA0002333517370001442
向7.1h-I(279mg，0.577mmol)添加乙腈(体积：20ml，比率：1.000)，水(体 积：20ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(72.6mg，1.731mmol)。反应在室温 搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3， 然后添加含5％乙醇的100mlDCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以85％的收率得到234mg的所需产物7.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):456.5[M+H]+,0.82分钟。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δppm8.76(s,1H)7.63(br d,J＝8.41Hz,1H)7.12-7.34(m,2H) 6.82(br d,J＝7.63Hz,1H)5.12-5.24(m,1H)4.95-5.12(m,2H)4.20(br t, J＝6.38Hz,2H)3.45-3.63(m,2H)3.25(s,3H)2.95-3.09(m,4H)2.81(br d, J＝9.93Hz,1H)1.87-2.13(m,2H)0.88(s,3H)0.36(s,3H)。向7.1h-II(279 mg，0.577mmol)添加乙腈(体积：20ml，比率：1.000)，水(体积：20ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(72.6mg，1.731mmol)。反应在室温搅拌2小时或直至 LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3，然后添加含5％ 乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层，再次用含5％ 乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶液洗涤，经 硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将残余物溶于 1:1ACN/水中，并冻干，以87％的产率得到242mg的所需产物7.1-II，为游离碱。LC-MS(m/z):456.5[M+H]+,0.82分钟；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.69 (s,1H)7.43(d,J＝8.51Hz,1H)7.27-7.33(m,2H)6.77(d,J＝7.58Hz,1H)5.15 (d,J＝14.87Hz,1H)4.90(dd,J＝14.89,5.31Hz,1H)4.72(d,J＝5.38Hz,1H)4.33 (t,J＝6.65Hz,2H)3.62(t,J＝5.82Hz,2H)3.37(s,6H)3.02(d,J＝9.93Hz,1H) 2.93(d,J＝9.98Hz,1H)2.25(五峰,J＝6.32Hz,2H)1.04(s,3H)0.37(s,3H)。
实施例8.1
6-(叔丁基)-1-氟-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[8.1-I]和[8.1-II]
Figure BDA0002333517370001451
8.1-1和8.1-II`
步骤1：(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4-二氟-3-((三甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯酸乙酯[8.1a]
Figure BDA0002333517370001452
在氩气氛下，将镁粉(1.214g，50mmol)和三甲基甲硅烷基氯(6.34mL， 50mmol)的混合物超声处理，然后反应15-20分钟。然后在50℃氩气氛下于5-6 分钟内滴加干燥DMF(3ml)中的(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4,4,4-三氟-3-氧代丁酸乙 酯(1.5g，6.25mmol)。反应混合物在50℃另搅拌30分钟。然后将粗混合物 通过带有聚乙烯玻璃料的一次性过滤漏斗过滤。产生的具有所需产物8.1a的 DMF溶液，假定定量产率，按原样使用。
步骤2：10-(苄氧基)-6-(叔丁基)-1-氟-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[8.1b]
Figure BDA0002333517370001461
从上方向2.1e(420mg，1.260mmol)添加粗制8.1a(1.513g，6.30mmol)。然 后添加乙腈(体积：5mL)和碘化锌(402mg，1.260mmol)，并使粗物质在50-60℃ 回流过夜。粗物质通过硅胶色谱法使用0-100％庚烷-(EtOAc:EtOH＝75:25)纯 化，将所需的级分浓缩，并34％的收率得到210mg的所需产物8.1b。LC-MS(m/z): 490.4[M+H]+,1.00分钟。
步骤3：6-(叔丁基)-1-氟-10-羟基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪 并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[8.1c]
Figure BDA0002333517370001462
向乙醇(体积：20mL)中的8.1b(210mg，0.429mmol)吹扫氮气，然后添加10％ Pd-C(210mg，1.973mmol)。然后伴着排气使氢气鼓泡通过溶液，随后连接氢 气囊并使反应搅拌2小时。粗物质经硅藻土过滤并浓缩，得到粗物质8.1c，其 无需进一步纯化即可用于下一步，假定定量收率。LC-MS(m/z):400.4[M+H]+, 0.67分钟。
步骤4：6-(叔丁基)-1-氟-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-羰基-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[8.1d-I]和[8.1d-II]
Figure BDA0002333517370001471
8.1d-I和8.1d-II
向DMF(体积：1mL)中的8.1c(103mg，0.258mmol)添加1-溴-3-甲氧基丙烷(0.056mL，0.516mmol)和碳酸铯(252mg，0.774mmol)并搅拌。通过硅胶色谱法 使用0-100％庚烷-(EtOAC/EtOH:75/25)纯化粗产物。浓缩所需的级分，以66％ 的产率得到81mg的所需外消旋产物8.1d。LC-MS(m/z):472.5[M+H]+,0.83分 钟。通过使用(AD柱，SFC＝100ml/分钟，CO2/乙醇＝70/30，237巴)的手性色 谱分离上述外消旋物质(81mg)，得到24mg产物8.1d-I(峰1，tR 2.77分钟)和24mg 产物8.1d-II(峰2，tR 5.52分钟)。
步骤5：6-(叔丁基)-1-氟-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[8.1-I]和[8.1-II]
Figure BDA0002333517370001472
向8.1d-I(24mg，0.051mmol)添加乙腈(体积：3ml，比率：1.000)，水(体 积：3ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(6.41mg，0.153mmol)。反应在室温 搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1M HCl酸化至pH为2-3， 然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分离有机层， 再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱和氯化钠溶 液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残余物。将 残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以46.3％的收率得到11mg的所需产物8.1-I， 为游离碱。LC-MS(m/z):444.4[M+H]+,0.87分钟。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ8.58(s,1H),7.55(dd,J＝4.77,8.63Hz,1H),7.18-7.34(m,1H),6.76(d,J＝7.58 Hz,1H),5.26(d,J＝14.87Hz,1H),4.95(dd,J＝5.14,14.87Hz,1H),4.25-4.42(m, 3H),3.63(t,J＝5.99Hz,2H),3.38(s,3H),2.25(五峰,J＝6.27Hz,2H),0.78-0.85 (m,9H)。向8.1d-II(24mg，0.051mmol)添加乙腈(体积：3ml，比率：1.000)， 水(体积：3ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(6.41mg，0.153mmol)。反应 在室温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用20ml水稀释，用1MHCl酸化至 pH为2-3，然后添加含5％乙醇的100ml DCM，并添加15ml饱和氯化钠溶液。分 离有机层，再次用含5％乙醇的50ml DCM萃取水层。合并有机层，用水，饱 和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，通过硫酸钠塞1cm×1.5cm过滤并浓缩至残 余物。将残余物溶于1:1ACN/水中，并冻干，以46.3％的产率得到11mg的所 需产物8.1-II，为游离碱。LC-MS(m/z):444.4[M+H]+,0.87分钟。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),7.55(dd,J＝4.77,8.68Hz,1H),7.18-7.34(m,1H), 6.76(d,J＝7.58Hz,1H),5.25(br d,J＝14.77Hz,1H),4.95(br dd,J＝3.99,14.75Hz, 1H),4.27-4.40(m,3H),3.63(t,J＝5.99Hz,2H),3.38(s,3H),2.25(五峰,J＝6.27 Hz,2H),0.81(s,9H)。
实施例9.1：
(R)-6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4] 吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[9.1]
Figure BDA0002333517370001481
步骤1：(R)-7-(苄氧基)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁基)-2H-吲唑-3-羧酸甲酯[9.1a]
Figure BDA0002333517370001482
向7-(苄氧基)-2H-吲唑-3-羧酸甲酯(18.5g，65.5mmol)添加三苯基膦(20.63 g，79mmol)，(R)-(1-羟基-3,3-二甲基丁-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(17.80g，82 mmol)并溶于THF(体积：185mL)。将反应物置于水浴中，并分批添加(E)-二 氮杂-1,2-二羧酸二叔丁基酯(18.11g，79mmol)，以保持内部温度低于22℃。混 合物在室温搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应浓缩至残余物。将粗制残 余物溶于含20％庚烷的乙酸乙酯中，用0.5M HCl，水，碳酸氢钠，水，饱和盐 溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗产物通过硅胶色谱法使 用庚烷中的0-25％EtOAc纯化，其中所需的位置异构体首先在硅胶上洗脱。将 所需的级分浓缩至恒定质量，以87％的收率得到27.3克所需的产物9.1a。 LC-MS(m/z):482.4[M+H]+,1.15分钟。
步骤2：(R)-2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁基)-7-羟基-2H-吲唑-3-羧酸甲酯[9.1b]
Figure BDA0002333517370001491
向9.1a(27.3g，56.7mmol)添加THF(体积：350mL)，并用氮气冲洗。然后 小心地添加Pd-C(3.02g，2.83mmol)。然后向反应添加氢气囊。将反应排空 并用氢气重新填充7x，然后在室温搅拌90分钟，或直到LCMS完成。向反应 物添加100ml DCM，用氮气冲洗，通过硅藻土塞过滤，并用THF冲洗。溶剂 浓缩至恒定质量，以产生所需产物9.1b，其原样用于下一步，假定定量产率。 LC-MS(m/z):392.3[M+H]+,0.91分钟。
步骤3：(R)-2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二甲基丁基)-7-(3-甲氧基丙氧基)-2H-吲唑-3-羧酸甲酯[9.1c]
Figure BDA0002333517370001492
向9.1b(22.2g，56.7mmol)添加DMF(体积：3mL)和碳酸铯(37.0g，113mmol)。 反应室温搅拌5分钟，然后添加1-溴-3-甲氧基丙烷(13.02g，85mmol)，然后使反 应室温搅拌3小时或直至LCMS完成。向反应混合物添加含20％庚烷的800ml 乙酸乙酯，用水3x，饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。 粗物质通过硅胶色谱法使用0-45％乙酸乙酯和庚烷纯化。将所需的级分浓缩 至恒定质量，以88％的产率得到23.2g所需产物9.1c，为游离碱。LC-MS(m/z): 464.4[M+H]+,1.03分钟。
步骤4：(R)-(1-(3-(羟甲基)-7-(3-甲氧基丙氧基)-2H-吲唑-2-基)-3,3-二甲基丁 -2-基)氨基甲酸叔丁基酯[9.1d]
Figure BDA0002333517370001501
向9.1c(23.2g，50.0mmol)添加THF(体积：140mL)，然后添加硼氢化钠(5.68g，150mmol)。在搅拌下将反应加热至60-65℃。然后在30-35分钟内缓慢添加 甲醇，并使反应在70-75℃搅拌3小时或直至LCMS完成。将反应冷却至室温， 并置于水浴中冷却。然后小心添加140ml饱和氯化铵溶液，然后在室温下搅 拌45分钟。然后添加750ml乙酸乙酯和70ml水，萃取，有机层用饱和碳酸氢 盐溶液，水，饱和盐溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至恒定质量，以98％ 的收率得到21.4克所需产物9.1d，其为游离碱，原样使用。LC-MS(m/z):436.4 [M+H]+,0.83分钟。
步骤5：(R)-(1-(3-甲酰基-7-(3-甲氧基丙氧基)-2H-吲唑-2-基)-3,3-二甲基丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁基酯[9.1e]
Figure BDA0002333517370001502
向9.1d(21.4g，49.1mmol)添加DCM(体积：150mL)，然后添加碘苯二乙酸(22.16g，68.8mmol)。然后添加TEMPO(0.768g，4.91mmol)，反应室温搅拌3 小时或直至通过LCMS进行。然后添加700ml乙酸乙酯，用硫代硫酸钠，碳酸 钠溶液，水，饱和盐溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物 质通过硅胶色谱法使用0-50％乙酸乙酯和庚烷纯化。将所需级分浓缩至恒定 质量，以68％的产率得到14.55克所需产物9.1e，其为游离碱，按原样使用。 LC-MS(m/z):434.4[M+H]+,0.96分钟。
步骤6：(R)-3-(叔丁基)-7-(3-甲氧基丙氧基)-3,4-二氢吡嗪并[1,2-b]吲唑[9.1f]
Figure BDA0002333517370001511
向9.1e(14.55g，33.6mmol)添加DCM(体积：180mL)，然后添加TFA(38.8mL，503mmol)。反应室温搅拌1小时或直到LCMS完成。将反应浓缩至残余物， 得到所需9.1f产物，假定按定量收率，原样使用。LC-MS(m/z):316.3[M+H]+, 0.66分钟。
步骤7：(6R)-6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-2,6,7,13c-四氢-1H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[9.1g]
Figure BDA0002333517370001512
向9.1f(10.59g，33.6mmol)添加乙醇(体积：110mL，比率：10.00)，水(体 积：11mL，比率：1.000)和(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(21.88g，118 mmol)。然后将反应在90-95℃搅拌16小时或直至LCMS完成。将反应浓缩 至残余物，得到所需9.1g产物，假定按定量收率，原样使用。LC-MS(m/z): 456.3[M+H]+,0.78分钟。
步骤8：(R)-6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸乙酯[9.1h]
Figure BDA0002333517370001521
向9.1g(15.3g，33.6mmol)添加DME(体积：190mL)，然后添加碘(36.7g， 144mmol)。反应在35-40℃搅拌5小时或直至LCMS完成。反应用800ml DCM 稀释，用亚硫酸氢钠溶液2x，水，碳酸钠溶液，水，饱和盐溶液洗涤，用硫酸 钠干燥，过滤并浓缩至残余物。粗物质通过硅胶色谱法使用0-95％(含25％乙 醇的乙酸乙酯)和庚烷纯化。将所需级分浓缩至恒定质量，得到所需的粗产物。 向残余物添加含1％乙醇的100ml乙醚，并搅拌加热至回流5分钟，然后冷却至室 温1小时。过滤收集固体，用乙醚洗涤并干燥至恒定质量。粗产物需要通过 硅胶色谱法使用0-60％(含10％乙醇的DCM)和DCM进一步纯化，将所需级分浓 缩至恒定质量，以51％的收率得到7.71克的所需产物9.1h，为游离碱，按原样使 用。LC-MS(m/z):454.3[M+H]+,0.80分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.52(s,1H)7.50(d,J＝8.51Hz,1H)7.17(t,J＝8.00Hz,1H)6.72-6.85(m,2 H)5.06-5.12(m,1H)4.98-5.05(m,1H)4.69(d,J＝4.50Hz,1H)4.14-4.28(m, 4H)3.51(t,J＝6.28Hz,2H)3.25(s,3H)2.04(五峰,J＝6.36Hz,2H)1.26(t,J＝7.09Hz,3H)0.68(s,9H)。
步骤9：(R)-6-(叔丁基)-10-(3-甲氧基丙氧基)-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-3-羧酸[9.1]
Figure BDA0002333517370001522
向9.1h(7.71g，17.00mmol)添加乙腈(体积：120ml，比率：1.000)，水(体 积：120ml，比率：1.000)，然后添加LiOH(51.0ml，51.0mmol)。反应在室 温搅拌2小时或直至LCMS完成。反应用400ml水稀释，用1M HCl酸化至pH 为2-3，然后添加含3％乙醇的800mlDCM，并添加200ml饱和氯化钠溶液。分 离有机层，水层用含2％乙醇的1×150ml DCM再次萃取。合并有机层，用水 4×150ml洗涤，过滤并浓缩至恒定质量，以99％的产率得到7.1克所需产物9.1， 为游离碱。通过手性色谱法使用AD柱，SFC＝5mL/分钟，CO2/EtOH＝75/25(对映体混合物在Rt 1.53分钟和Rt 2.21分钟分离)确定对映体过量(e.e.)，在Rt 2.20 分钟以99％e.e.得到所需产物9.1。LC-MS(m/z):426.3[M+H]+,0.81分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.95(s,1H)7.63(d,J＝8.46Hz,1H)7.15- 7.32(m,2H)6.82(d,J＝7.58Hz,1H)5.14-5.24(m,1H)5.04-5.13(m,1H) 4.95(d,J＝4.70Hz,1H)4.20(t,J＝6.41Hz,2H)3.51(t,J＝6.26Hz,2H)3.25(s,3 H)2.01-2.08(m,2H)0.69(s,9H)。可通过如下操作将产物9.1转化为三(羟甲 基)氨基甲烷(TRIS)盐。向9.1(11.05g，26.0mmol)添加乙腈(体积：185ml，比率：9.25)，50℃搅拌1小时直至完全溶解。然后添加2-氨基-2-(羟甲基)丙烷 -1,3-二醇(3.15g，26.0mmol)，并在50℃搅拌3小时。1小时后，另添加乙腈(体 积：20ml，比率：1.000)以协助搅拌，并在50℃继续满3小时。然后将溶液 冷却至室温，并在室温搅拌18小时。通过过滤收集固体，用ACN洗涤，在40℃ 真空干燥24小时，以89％的收率得到12.82g所需产物9.1，为TRIS盐。LC-MS (m/z):426.3[M+H]+,0.80分钟。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.93(s, 1H),7.63(d,J＝8.5Hz,1H),7.25(s,1H),7.22(d,J＝8.1Hz,1H),6.82(d,J＝7.6Hz,1H),5.15-5.22(m,1H),5.05-5.13(m,1H),4.94(d,J＝4.7Hz,1H),4.34(br s,3H), 4.20(t,J＝6.4Hz,2H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.25(s,3H),3.21(s,6H),2.04(五峰, J＝6.3Hz,2H),0.69(s,9H)。
实施例10.1：
12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-1,3,3a,14a-四氢-7H-呋喃并[3',4':5,6]吡啶并 [2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[10.1-I]和[10.1-II]
Figure BDA0002333517370001531
10.1-I和10.1-II
步骤1：1-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-3-羟基-3-甲基丁-2-酮[10.1a]
Figure BDA0002333517370001541
向DMSO(体积：19.89ml，比率：16)中的1.1b(1.65g，5.64mmol)和碳酸铯 (7.35g，22.57mmol)的混合物添加水(体积：1.243ml，比率：1.000)。混合物搅 拌10分钟，然后添加1-溴-3-羟基-3-甲基丁-2-酮(2.043g，11.28mmol)。30分钟 后，添加100ml EtOAc，并将有机物用水，盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并 浓缩。该物质在SiO2(0-60％EtOAC/Hep)上纯化，在从极性更强的峰(经LC-MS 具有正确m/z)浓缩后得到所需产物10.1a(0.8g，2.038mmol，36.1％产率)。 LC-MS(m/z):393.4[M+H]+,1.09分钟。
步骤2：4-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-2,2-二甲基呋喃-3(2H)-酮[10.1b]
Figure BDA0002333517370001542
将10.1a(800mg，2.038mmol)溶于甲苯(体积：2mL)。添加Bredereck试 剂(0.514mL，2.242mmol)。该烧瓶装有回流冷凝器，并加热至100℃。在 1小时，通过LC-MS判断反应完成。将混合物冷却至室温，并在硅藻土上浓缩。 粗物质在24g SiO2柱上纯化(庚烷中的0->50％EtOAc溶液)，浓缩后提供来自主 峰的所需产物10.1b(600mg，1.490mmol，产率73.1％)，其为黄色油状物。 LC-MS(m/z):403.5[M+H]+,1.28分钟。
步骤3：4-(3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-7-甲氧基-2H-吲唑-2-基)-2,2-二甲基二氢呋喃-3(2H)-酮[10.1c]
Figure BDA0002333517370001551
在4mL小瓶中装入10.1b(600mg，1.49mmol)和THF(体积：7450μl)。在 冰/盐水浴中将小瓶冷却至-10℃。逐滴添加三异丁基硼氢化锂 L-Selectride(1639μl，1.639mmol)。通过LC-MS在20分钟时认为反应完成，反 应用氯化铵淬灭，用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗物质在 SiO2(0-60％EtOAC/Hep)上纯化，浓缩后得到所需产物10.1c(500mg，1.236mmol， 83％产率)，为油。LC-MS(m/z):405.4[M+H]+,1.21分钟。
步骤4：9-甲氧基-3,3-二甲基-1,3,3a,11a-四氢呋喃并[3',4':5,6]吡嗪并[1,2-b] 吲唑[10.1d]
Figure BDA0002333517370001552
向乙醇(体积：3mL)中的10.1c(230mg，0.568mmol)添加乙酸铵(657mg，8.53mmol)。将小瓶密封并使混合物在60℃搅拌1小时。添加氰基硼氢化钠 (35.7mg，0.568mmol)，并继续搅拌1小时。在接下来的两个小时内再添加两 份氰基硼氢化钠。粗混合物用DCM稀释，并用6N NaOH洗涤，得到粗胺 (420mg，50％纯度)。将该物质溶解在THF(6mL)中，并添加THF中的 TBAF(1.2mL，1.2mmol)。在30分钟时，反应用1N NaOH稀释并用DCM萃取。合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到羟胺，为棕色油。LC-MS(m/z): 292.3[M+H]+,0.66分钟。将羟胺吸收在DCM(8.5mL)中，并添加MnO2(950mg， 10.8mmol)。将混合物搅拌20小时，用DCM稀释，并通过硅藻土塞。将溶 液浓缩并使物质在12g SiO2(0->60％EtOAC/庚烷)上纯化。将始于30％EtOAc 的峰分离为所需产物10.1d(120mg，51％收率)，为白色固体。LC-MS(m/z): 272.3[M+H]+,0.68分钟。
步骤5：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-1,3,3a,14a-四氢-7H-呋喃并[3',4':5,6] 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸乙酯[10.1e]
Figure BDA0002333517370001561
向4mL小瓶添加水(1.8ml)中的10.1d(120mg，0.44mmol)。添加(E)-2-(乙 氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(165mg，0.89mmol)。将小瓶密封，用N2吹扫， 并加热至80℃过夜。混合物用DCM萃取，合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤 并浓缩以提供油。将油收集在DME(1.8mL)中，并添加对四氯苯醌(p-chloroanil， 217mg)。将混合物在100℃加热90分钟。在室温冷却后，在氮气流下除去 溶剂，以提供所需产物10.1e，为棕色固体，其无需进一步纯化即可使用，假定 定量收率。LC-MS(m/z):410.5[M+H]+,0.77分钟。
步骤6：12-甲氧基-3,3-二甲基-7-氧代-1,3,3a,14a-四氢-7H-呋喃并[3',4':5,6] 吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-b]吲唑-6-羧酸[10.1-I]和[10.1-II]
Figure BDA0002333517370001562
向THF(0.9mL)中的粗制10.1e(120mg，0.29mmol)添加水性LiOH(1mL， 1.0mmol)并搅拌1小时。通过添加4.0N HCl(水性)将溶液酸化至pH 1，并用 DCM萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到褐色固体，其首先通过 非手性色谱法纯化(Sunfire柱B-9m-1050，H2O/MeCN中的0.1％TFA，75mL/分 钟)，以51％的收率得到59.9mg的外消旋产物10.1。382.5[M+H]+,0.88分钟。 通过手性色谱法(AS柱，SFC-UV15＝5mL/分钟，CO2/EtOH＝75/25，MeOH+二乙 胺中的粗物质)纯化上述外消旋产物，以提供白色固体状的10.1-I(17.7mg，在1.79分钟保留时间)，和白色固体状的10.1-II(13.6mg，在3.24分钟保留时间)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.87(s,1H),7.74(d,J＝8.5Hz,1H),7.38(s,1 H),7.32(dd,J＝8.3,7.6Hz,1H),6.89(d,J＝7.6Hz,1H),5.55(dd,J＝6.9,3.3Hz, 1H),5.50(d,J＝6.6Hz,1H),4.88(d,J＝10.2Hz,1H),4.42(dd,J＝10.9,3.8Hz), 3.98(s,3H),1.47(s,3H),0.56(s,3H)。LC-MS(m/z):382.5[M+H]+,0.88分钟。
生物学实施例
HBV细胞系
HepG2-Clone42，一种Tet诱导型HBV表达性细胞系，其具有稳定整合HBV ayw株的1.3mer拷贝，基于具有轻度修饰的Tet-诱导型HepAD38细胞系而产生。 Ladner SK等,Antimicrobial Agents and Chemotherapy.41(8):1715-1720(1997)。 HepG2-Clone42细胞在补充有10％胎牛血清(生物技术公司(Life Technologies))、 终浓度为0.5mg/mL的G-418(康宁公司(Corning)，美国弗吉尼亚州马纳萨斯)和5 μg/mL强力霉素(西格玛公司(Sigma)，美国密苏里州圣路易斯)的 DMEM/F-12+GlutamaxTM(生物技术公司(LifeTechnologies)，美国加利福尼亚州 卡尔斯巴德)中培养，并保持在37℃、5％CO2中。
HBsAg测定
将HepG2-Clone42细胞以6.0×104个细胞/孔的浓度接种至黑色透明底96孔 板中。接种后24小时，细胞用200μl/孔的培养基处理，该培养基中含有DMSO 中的5倍连续化合物稀释液。DMSO单用作为无药物对照。所有孔中的最终 DMSO浓度为0.5％。
采用HBsAg ELISA试剂盒(阿尔法诊断国际公司(Alpha DiagnosticInternational)，美国德克萨斯州圣安东尼奥，目录号4110)来确定分泌的HBV sAg 的水平(半定量)。按照制造商的说明进行HBSAg ELISA分析。
步骤1.分别将100μL化合物或DMSO处理的样品吸移至HBsAg ELISA板 中。密封板并在室温孵育60分钟。
步骤2.吸出样品并用洗涤缓冲液洗涤3次。将100μL抗体-HRP偶联物分配 到每个孔中。在室温孵育30分钟。
步骤3.吸出样品并用洗涤缓冲液洗涤3次。向所有孔添加100μL TMB底 物，并在室温孵育15分钟。
步骤4.将100μL终止溶液分配到每个孔中。测量ELISA板在450nm处的吸 光度。
剂量反应曲线
产生剂量-反应曲线，且EC50值定义为与DMSO对照相比使HBsAg分泌减少 50％的化合物浓度。
EC50值如下确定：
确定HBsAg分泌抑制的百分比。使用以下公式计算对HBsAg分泌抑制的 抑制百分比：
100×(XC–MB)/(MD–MB)
其中XC是来自经化合物处理的孔的吸光度信号；MB是第12列(无细胞+ HBsAgELISA样品缓冲液)的平均吸光度信号(背景信号)，MD是来自经DMSO处 理的孔的平均吸光度信号。然后使用四参数曲线逻辑斯谛方程通过非线性回 归计算EC50值。
所采用的曲线拟合模型是XLFit剂量反应单点模型204： y＝(A+((B-A)/(1+(10^((C-x)*D)))))，其中A是最小y值，B是最大y值，C为logEC50值，D为斜率因子。下表中，+≥100nM；100nM>++≥1nM；1nM>+++
表1：所选式(I)化合物的体外活性。
Figure BDA0002333517370001581
Figure BDA0002333517370001591
Figure BDA0002333517370001601
Figure BDA0002333517370001611

Claims (19)

1.一种下式化合物：
Figure FDA0003987894140000011
其中：
R1是H或卤素；
R2在每次出现时独立地选自卤素，-OR3和-N(R)R3；
R3是
C1-C4烷基，其任选地被选自下组的1-3个基团取代：卤素，C1-C3卤代烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3卤代烷氧基，氧代，-NH(C1-C3烷基)，-N(C1-C3烷基)2，-COOR，-CONR2，C3-C5环烷基和4-6元环醚；或者
C3-C5环烷基或4-6元环醚，其中，所述C3-C5环烷基或4-6元环醚各自任选地被选自下组的1～3个基团取代：卤素，C1-C3烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3卤代烷氧基，C1-C3卤代烷基，-NH2，-NH(C1-C3烷基)和-N(C1-C3烷基)2；
n是0、1或2；
R4是H；
R7是H；
R9是叔丁基；
R在每次出现时独立地选自H和C1-C3烷基；
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R1为H或F。
3.如权利要求1或2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R2是–OR3。
4.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中R3为C3-C5环烷基或4-6元环醚，其中，所述C3-C5环烷基或4-6元环醚各自任选地被选自下组的1或2个基团取代：卤素，-OH，C1-C3烷氧基或C1-C3烷基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中n是1；
或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求1所述的化合物，其具有下式：
Figure FDA0003987894140000021
其中R9为叔丁基，且其中，R1、R2、R4和n如权利要求1中所限定；
或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求6所述的化合物，其具有下式：
Figure FDA0003987894140000022
其中，R1、R2、R4和R9如权利要求6中所限定；
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求5所述的化合物，其中所述化合物具有下式：
Figure FDA0003987894140000023
其中，R1、R2、R4、R7和R9如权利要求5中所限定；
或其药学上可接受的盐。
9.选自下式之一的化合物：
Figure FDA0003987894140000031
或其药学上可接受的盐，其中：
R为CH3；
R1为H；
R2为F或OR3；
R3为任选被C1-C3烷氧基取代的C1-C3烷基；以及
R4为H。
10.如权利要求1所述的化合物，其选自：
Figure FDA0003987894140000032
Figure FDA0003987894140000041
Figure FDA0003987894140000051
Figure FDA0003987894140000061
Figure FDA0003987894140000071
2.35-I和2.35-II及其个体对映异构体,
Figure FDA0003987894140000072
Figure FDA0003987894140000081
或其药学上可接受的盐。
11.如权利要求10所述的化合物，其中2.35-I和2.35-II的个体对映异构体选自下组：
Figure FDA0003987894140000091
12.一种药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的运载体混合的权利要求1-11中任一项所述的化合物。
13.权利要求1-11中任一项所述的化合物或权利要求12所述的药物组合物在制备用于治疗患有乙肝感染的对象的产品中的用途。
14.如权利要求13所述的用途，其中权利要求1-11中任一项所述的化合物或权利要求12所述的药物组合物与选自下组的其他治疗剂组合适用：干扰素，HBV聚合酶抑制剂，病毒进入抑制剂，病毒成熟抑制剂，衣壳组装抑制剂，HBV核调节剂，逆转录酶抑制剂，TLR激动剂或免疫调节剂。
15.权利要求1-11中任一项所述的化合物在制备用于通过使乙肝病毒在体外或体内与所述化合物接触来抑制乙肝病毒复制的产品中的用途。
16.一种药物组合，其包含权利要求1-11中任一项所述的化合物和至少一种其它治疗剂。
17.如权利要求1-11中任一项所述的化合物在制备用于治疗乙肝病毒感染的药物中的用途。
18.如权利要求14所述的用途，其中，所述干扰素为聚乙二醇干扰素。
19.如权利要求9所述的化合物，其选自：
Figure FDA0003987894140000101
Figure FDA0003987894140000102
以及
Figure FDA0003987894140000103
CN201880042367.6A 2017-04-27 2018-04-27 作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物 Active CN110831942B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762490890P 2017-04-27 2017-04-27
US62/490,890 2017-04-27
PCT/IB2018/052921 WO2018198079A1 (en) 2017-04-27 2018-04-27 Fused indazole pyridone compounds as antivirals

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110831942A CN110831942A (zh) 2020-02-21
CN110831942B true CN110831942B (zh) 2023-04-04

Family

ID=62148437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880042367.6A Active CN110831942B (zh) 2017-04-27 2018-04-27 作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物

Country Status (9)

Country Link
US (3) US10301312B2 (zh)
EP (2) EP3615533B1 (zh)
JP (1) JP7290573B2 (zh)
CN (1) CN110831942B (zh)
AR (1) AR111419A1 (zh)
ES (1) ES2899922T3 (zh)
TW (1) TWI810182B (zh)
UY (1) UY37699A (zh)
WO (1) WO2018198079A1 (zh)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016183266A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Ehpatitis b antiviral agents
WO2017155844A1 (en) 2016-03-07 2017-09-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
CN110066278B (zh) 2017-06-01 2021-06-08 广东东阳光药业有限公司 稠合三环类化合物及其在药物中的应用
IL272941B2 (en) 2017-08-28 2023-03-01 Enanta Pharm Inc Antiviral agents for viral hepatitis b
JP2021507906A (ja) * 2017-12-20 2021-02-25 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス剤としての融合三環式ピラゾロ−ジヒドロピラジニル−ピリドン化合物
WO2019143902A2 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US11702427B2 (en) 2018-03-12 2023-07-18 Arbutus Biopharma Corporation Substituted 2-pyridone tricyclic compounds, analogues thereof, and methods using same
WO2019191166A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
WO2020043080A1 (en) 2018-08-28 2020-03-05 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Fused tricyclic compounds and uses thereof in medicine
UY38383A (es) 2018-09-21 2020-04-30 Enanta Pharm Inc Heterociclos funcionalizados como agentes antivirales
CA3111046A1 (en) 2018-09-30 2020-04-02 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Fused tetracyclic compounds and uses thereof in medicine
JP7536761B2 (ja) 2018-11-21 2024-08-20 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 抗ウイルス剤としての官能化複素環
TW202033523A (zh) * 2019-01-17 2020-09-16 美商愛彼特生物製藥股份有限公司 經取代的多環羧酸、其類似物及使用其之方法
WO2020247444A1 (en) 2019-06-03 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
US11760755B2 (en) 2019-06-04 2023-09-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
WO2020247575A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
WO2021007488A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
CN112300161B (zh) * 2019-07-30 2021-10-29 上海挚盟医药科技有限公司 一类用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染的化合物及其制备方法和应用
WO2021055425A2 (en) 2019-09-17 2021-03-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
US11802125B2 (en) 2020-03-16 2023-10-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents
WO2024077024A2 (en) * 2022-10-04 2024-04-11 Bluejay Therapeutics, Inc. Indazole pyridone compounds and uses thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015113990A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2015173164A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017140821A1 (en) * 2016-02-19 2017-08-24 Novartis Ag Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) * 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2018073753A1 (en) * 2016-10-18 2018-04-26 Novartis Ag Fused tetracyclic pyridone compounds as antivirals

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2116183B (en) 1982-03-03 1985-06-05 Genentech Inc Human antithrombin iii dna sequences therefore expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby a process for expressing human antithrombin iii and pharmaceutical compositions comprising it
ES2308787T3 (es) 1996-08-16 2008-12-01 Schering Corporation Antigenos de superficie de celular de mamiferos; reactivos relacionados.
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
AU1102399A (en) 1997-10-21 1999-05-10 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor-like proteins tr11, tr11sv1, and tr11sv2
JP2002502607A (ja) 1998-02-09 2002-01-29 ジェネンテク・インコーポレイテッド 新規な腫瘍壊死因子レセプター相同体及びそれをコードする核酸
JP2003504343A (ja) 1999-07-12 2003-02-04 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍壊死因子リガンド／レセプター相同体による血管形成及び心血管形成の促進と抑制
WO2004078163A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
JP2005529850A (ja) 2002-02-19 2005-10-06 ファルマシア・イタリア・エス・ピー・エー 三環系ピラゾール誘導体、その製造方法および抗腫瘍剤としてのその使用
CN101899114A (zh) 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
JP4638876B2 (ja) 2003-05-23 2011-02-23 ワイス Ｇｉｔｒリガンド及びｇｉｔｒリガンド関連分子及び抗体及びその使用
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
EP1692318A4 (en) 2003-12-02 2008-04-02 Genzyme Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF LUNG CANCER
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
US20060002932A1 (en) 2004-06-04 2006-01-05 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
US7812135B2 (en) 2005-03-25 2010-10-12 Tolerrx, Inc. GITR-binding antibodies
US8008449B2 (en) 2005-05-09 2011-08-30 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
CA3201163A1 (en) 2005-07-01 2007-01-11 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
US20110212086A1 (en) 2006-01-19 2011-09-01 Genzyme Corporation GITR Antibodies For The Treatment of Cancer
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
WO2009009116A2 (en) 2007-07-12 2009-01-15 Tolerx, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
DK2242773T3 (en) 2008-02-11 2017-09-25 Cure Tech Ltd Monoclonal antibodies for tumor treatment
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
EP2310508A1 (en) 2008-07-02 2011-04-20 Emergent Product Development Seattle, LLC Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CN104740610A (zh) 2008-08-25 2015-07-01 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂及其使用方法
CN102203132A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂的组合物和使用方法
WO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2010-03-18 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
EP2393835B1 (en) 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
US8288396B2 (en) * 2009-02-25 2012-10-16 Msdkk Pyrimidopyrimidoindazole derivative
US8709424B2 (en) 2009-09-03 2014-04-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-GITR antibodies
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
CN102958942A (zh) 2009-12-29 2013-03-06 新兴产品开发西雅图有限公司 异二聚体结合蛋白及其应用
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
SG11201402603WA (en) 2011-11-28 2014-06-27 Merck Patent Gmbh Anti-pd-l1 antibodies and uses thereof
KR101939710B1 (ko) 2011-12-21 2019-01-17 노비라 테라퓨틱스, 인코포레이티드 B형 간염의 항바이러스성 제제
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
ES2714110T3 (es) 2014-03-07 2019-05-27 Hoffmann La Roche Heteroarildihidropirimidinas 6-fusionadas novedosas para el tratamiento y profilaxis de la infección por el virus de la hepatitis B
EP3180319B1 (en) 2014-08-14 2018-10-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Novel pyridazones and triazinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
US9637485B2 (en) 2014-11-03 2017-05-02 Hoffmann-La Roche Inc. 6,7-dihydrobenzo[a]quinolizin-2-one derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infection
EP3256471B1 (en) 2015-02-11 2018-12-12 F. Hoffmann-La Roche AG Novel 2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017016921A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag New crystalline forms of (6s)-10-methoxy-6-isopropyl-9-(3-methoxypropoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid
WO2017016960A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of (6s)-6-alkyl-10-alkoxy-9-(substituted alkoxy)-2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid analogues
EP3328855B1 (en) 2015-07-27 2019-05-15 H. Hoffnabb-La Roche Ag Novel tetracyclic 4-oxo-pyridine-3-carboxylic acid derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017102648A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and a nucleos(t)ide analogue
WO2017108630A1 (en) 2015-12-21 2017-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and an hbv capsid assembly inhibitor
WO2017114812A1 (en) 2015-12-29 2017-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of an hbsag inhibitor and an interferon
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2018047109A1 (en) 2016-09-09 2018-03-15 Novartis Ag Polycyclic pyridone compounds as antivirals
CN106928245B (zh) 2017-03-06 2019-06-11 河南春风医药科技有限公司 一种喹嗪酮类化合物及其制备方法和应用
CN106928215B (zh) 2017-03-06 2019-03-22 河南春风医药科技有限公司 一种喹嗪酮类化合物的制备方法
AR111419A1 (es) * 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015113990A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2015173164A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017140821A1 (en) * 2016-02-19 2017-08-24 Novartis Ag Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) * 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2018073753A1 (en) * 2016-10-18 2018-04-26 Novartis Ag Fused tetracyclic pyridone compounds as antivirals

Also Published As

Publication number Publication date
US20190300530A1 (en) 2019-10-03
EP3998269A1 (en) 2022-05-18
JP7290573B2 (ja) 2023-06-13
US20200270252A1 (en) 2020-08-27
UY37699A (es) 2018-11-30
TW201841919A (zh) 2018-12-01
EP3615533A1 (en) 2020-03-04
TWI810182B (zh) 2023-08-01
EP3615533B1 (en) 2021-09-08
US20180312507A1 (en) 2018-11-01
WO2018198079A1 (en) 2018-11-01
CN110831942A (zh) 2020-02-21
AR111419A1 (es) 2019-07-10
US10975078B2 (en) 2021-04-13
JP2020517667A (ja) 2020-06-18
US10301312B2 (en) 2019-05-28
ES2899922T3 (es) 2022-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110831942B (zh) 作为抗病毒药的稠合吲唑吡啶酮化合物
US11234977B2 (en) Fused tricyclic pyrazolo-dihydropyrazinyl-pyridone compounds as antivirals
AU2017219216B2 (en) Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216685A1 (en) Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
WO2018047109A1 (en) Polycyclic pyridone compounds as antivirals
WO2019166951A1 (en) Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
EP3710455A1 (en) Novel dihydroisoxazole compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2018073753A1 (en) Fused tetracyclic pyridone compounds as antivirals
EP4225446A1 (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant