ES2898798T3 - Composiciones de múltiples dosis que contienen un conservante antimicrobiano de poliamida u octenidina - Google Patents

Composiciones de múltiples dosis que contienen un conservante antimicrobiano de poliamida u octenidina Download PDF

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Celine Loss-Dunod
Alexis Guy Andre Lucien Parisot
Pradeep Dahl
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Genzyme Corp
Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc
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Abstract

Procedimiento para preparar una formulación de múltiples dosis conservada, en el que la formulación es una composición inmunogénica en forma de una emulsión de aceite en agua, en el que dicho procedimiento comprende o consiste esencialmente en las siguientes etapas: (a) proporcionar al menos dos dosis que comprenden una cantidad eficaz de al menos un antígeno; (b) proporcionar entre aproximadamente 0,1 mg/ml y 5 mg/ml expresado como p/v de la formulación de un conservante no mercurial que es un polímero de poliamida antimicrobiano que tiene la siguiente estructura: en la que el peso molecular promedio en peso (WAMW) es de aproximadamente 1,0 kDa a aproximadamente 15,0 kDa, medido mediante cromatografía de exclusión por tamaño; (c) combinar el antígeno y el conservante no mercurial con un componente acuoso y/u oleoso para formar una formulación líquida de aceite en agua de múltiples dosis conservada; (d) opcionalmente proporcionar uno o más excipientes; (e) opcionalmente proporcionar un recipiente para contener la formulación líquida; (f) opcionalmente esterilizar y transferir la formulación líquida al recipiente; y (g) opcionalmente secar por congelación, liofilizar y/o vitrificar la formulación líquida, produciendo de este modo la formulación de múltiples dosis conservada; y en el que la formulación no contiene conservante mercurial.

Description

DESCRIPCIÓN
Composiciones de múltiples dosis que contienen un conservante antimicrobiano de poliamida u octenidina CAMPO DE LA INVENCIÓN
[0001] La divulgación se refiere a conservantes libres de timerosal para la formulación de múltiples dosis. Los conservantes incluyen poliamidas antimicrobianas y octenidina.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
[0002] Para las formulaciones de múltiples dosis, que incluyen vacunas, se requieren conservantes para minimizar la contaminación de la composición de dosis posteriores después de que se usó la primera dosis. El conservante debe permitir que la formulación de la vacuna pase las pruebas de eficacia o las pruebas de exposición antimicrobiana de acuerdo con la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) en los EE. UU., la Farmacopea Británica (BP) y la Farmacopea Europea (EP) en Europa.
[0003] El timerosal es un conservante de uso común en las vacunas. El timerosal es un compuesto mercurial que es potencialmente irritante y puede aumentar la posibilidad de reacciones alérgicas. El timerosal tampoco es deseable para el medio ambiente.
[0004] Por consiguiente, sería ventajoso encontrar conservantes nuevos y más seguros para las vacunas que reemplacen al timerosal. En esta solicitud, los solicitantes describen, entre otros, el uso de compuestos de poliamida antimicrobianos y octenidina como conservantes para vacunas. Los conservantes altamente efectivos no son irritantes y no contienen compuestos mercuriales.
CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN
[0005] En un aspecto, la presente invención proporciona un conservante seguro y eficaz sin timerosal para formulaciones de múltiples dosis, que incluyen vacunas, tal como se especifica en las reivindicaciones adjuntas. Los conservantes descritos en el presente documento pueden comprender poliamidas con funcionalidad amina, antimicrobianas, solubles en agua, que tienen la estructura general que se expone en las fórmulas I-V (a continuación). Estos polímeros se pueden producir usando los procedimientos descritos en los documentos US 2014/0275469 y US 9.326.994 B2 (de Genzyme).
Figure imgf000002_0001
en la que:
i) m es 0, 1,2 o 3;
ii) n es 0, 1,2 o 3;
iii) o es 0, 1,2 o 3;
iv) p es 0 o 1;
v) r es 0 o 1;
vi) q es un número entero de 1 a 400;
vii) Qx es NH, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9);
viii) Qy es NH-Rw, NH-CH2-Rw, alquilo (C1-C10), o arilo (C6-C14),
en el que Rw está ausente o es un alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14) o heteroarilo (C2-C9);
ix) Rx y Ry son cada uno independientemente un grupo terminal farmacéuticamente aceptable.
[0007] También se describe en el presente documento una poliamida que tiene la estructura de Fórmula (II):
Figure imgf000003_0001
en la que:
i) m es 0, 1,2 o 3;
ii) n es 0, 1,2 o 3;
iii) o es 0, 1,2 o 3;
iv) p es 0 o 1;
v) r es 0 o 1;
vi) q es un número entero de 1 a 400;
vii) Qx es NH, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9);
viii) Qy es NH-Rw, NH-CH2-Rw, alquilo (C1-C10) o arilo (C6-C14),
en el que Rw está ausente o es un alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14) o heteroarilo (C2-C9);
ix) Rx y Ry son cada uno independientemente un grupo terminal farmacéuticamente aceptable;
x) X- es cada uno independientemente un halógeno o cualquier anión farmacéuticamente aceptable;
xi) Y1 e Y2 son cada uno independientemente H o alquilo (C1-C10) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9), alquilamina (C1-C10), -S-O-alquilo (C1-C10), -O(O)C-alquilo (C1-C10), -alquil (C1-C1 ü)-COOH, cicloalquil (C3 -C1 ü)-COOH, -(O)CH3, -OH, amida, un grupo dihidroxi, representado por la Fórmula (D),
Figure imgf000003_0002
en la que d es un número entero de 0 a 25, o
un grupo polietilenglicol, representado por la Fórmula (E)
Figure imgf000003_0003
en la que e es un número entero de 1 a 25.
[0008] También se describe en el presente documento una poliamida que tiene la estructura de Fórmula (III):
Figure imgf000003_0004
en la que:
i) m es 0, 1, 2 o 3;
ii) n es 0, 1, 2 o 3;
iii) o es 0, 1, 2 o 3;
iv) p es 0 o 1;
v) r es 0 o 1;
vi) q es un número entero de 1 a 400;
vii) Qx es NH, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9);
viii) Qy es NH-Rw, NH-CH2-Rw, alquilo (C1-C10) o arilo (C6-C14),
en el que Rw está ausente o es un alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14) o heteroarilo (C2-C9);
ix) Rx y Ry son cada uno independientemente un grupo terminal farmacéuticamente aceptable;
x) X- es halógeno o cualquier anión farmacéuticamente aceptable;
xi) Y1 es H o alquilo (C1-C10) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9), alquilamina (C1-C10), -S-O-alquilo (C1-C10), -O(O)C-alquilo (C1-C10), -alquil (C1-C10)-COOH, cicloalquil (C3-C10)-COOH, -(O)CH3, -OH, amida, un grupo dihidroxi, representado por la Fórmula (D),
Figure imgf000004_0001
en la que d es un número entero de 0 a 25, o
un grupo polietilenglicol, representado por la Fórmula (E)
Figure imgf000004_0002
en la que e es un número entero de 1 a 25.
[0009] También se describe en el presente documento una poliamida que tiene la estructura de Fórmula (IV):
Figure imgf000004_0003
en la que:
i) u es 0, 1, 2 o 3;
ii) v es 0, 1,2 o 3;
iii) q es un número entero de 1 a 400;
iv) Qx es NH, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9);
v) Qy es NH-Rw, NH-CH2-Rw, alquilo (C1-C10) o arilo (C6-C14),
en el que Rw está ausente o es un alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14) o heteroarilo (C2-C9); vi) Rx y Ry son cada uno independientemente un grupo terminal farmacéuticamente aceptable;
[0010] También se describe en el presente documento una poliamida que tiene la estructura de Fórmula (V): en la que:
i) u es 0, 1, 2 o 3;
ii) v es 0, 1,2 o 3;
iii) q es un número entero de 1 a 400;
iv) Qx es NH, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9);
v) Qy es NH-Rw, NH-CH2-Rw, alquilo (C1-C10) o arilo (C6-C14),
en el que Rw está ausente o es un alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14) o heteroarilo (C2-C9);
vi) Rx y Ry son cada uno independientemente un grupo terminal farmacéuticamente aceptable;
x) X- es cada uno independientemente un halógeno o cualquier anión farmacéuticamente aceptable;
xi) Y1 e Y2 son independientemente H o alquilo (C1-C10) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (C6-C14), heteroarilo (C2-C9), alquilamina (C1-C10), -S-O-alquilo (C1-C10), -O(O)C-alquilo (C1-C10), -alquil (C1-C1q)-COOH, cicloalquil (C3-C10)-COOH, -(O)CH3, -OH, amida, un grupo dihidroxi, representado por la Fórmula (D),
Figure imgf000005_0001
en la que d es un número entero de 0 a 25, o
un grupo polietilenglicol, representado por la Fórmula (E)
Figure imgf000005_0002
en la que e es un número entero de 1 a 25.
[0011] El conservante puede también incluir octenidina. El diclorhidrato de octenidina es un tensioactivo catiónico (a pH neutro o fisiológico) y derivado de bis-(dihidropiridinil)-decano, y antes de esta divulgación, su uso principal era
Figure imgf000005_0003
[0012] En otro aspecto, la divulgación proporciona procedimientos de preparación de formulaciones de múltiples dosis conservados, incluyendo vacunas, utilizando los polímeros de poliamida descritos y octenidina.
[0013] Estas y otras realizaciones se describen o son evidentes a partir de y están abarcadas por la siguiente descripción detallada.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
[0014] A menos que se indique lo contrario, los términos técnicos se usan de acuerdo con el uso convencional. Las definiciones de términos comunes en biología molecular pueden encontrarse en Benjamin Lewin, Genes V. publicado por Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado por Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569­ 8).
[0015] El término "aproximadamente", tal como se usa en este documento, significa aproximadamente, en la región de, aproximadamente o alrededor. Cuando se usa el término "aproximadamente" junto con un intervalo numérico, modifica ese intervalo extendiendo los límites por encima y por debajo de los valores numéricos establecidos. En general, el término "aproximadamente" se usa en este documento para modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor establecido en una variación del 10%. En un aspecto, el término "aproximadamente" significa más o menos el 20% del valor numérico del número con el que se está utilizando. Por lo tanto, aproximadamente el 50% significa en el intervalo del 45% al 55%. Los intervalos numéricos enumerados en este documento por puntos finales incluyen todos los números y fracciones incluidos dentro de ese intervalo (por ejemplo, 1 a 5 incluye 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,90, 4 y 5).
[0016] El término "cantidad eficaz", tal como se usa en este documento, significa una cantidad de una composición según la presente invención, eficaz para producir el efecto veterinario deseado.
[0017] Los términos singulares "un", "una" y "el/la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De manera similar, la palabra "o" pretende incluir "y" a menos que el contexto indique claramente lo contrario. La palabra "o" significa cualquier miembro de una lista en particular y también incluye cualquier combinación de miembros de esa lista.
[0018] El término "animal" se utiliza en el presente documento para incluir todos los mamíferos, aves y peces. El animal, tal como se usa en este documento, puede seleccionarse del grupo que consiste en equino, canino, felino, bovino, porcino, ovino, caprino, camélidos, aviar, primate, humanos y peces. El término "animal" también incluye un animal individual en cualquier etapa de desarrollo, incluidas las etapas embrionaria y fetal. Tal como se usa en el presente documento, el término "cerdo" o "lechón" significa un animal de origen porcino, mientras que "cerda" se refiere a una hembra en edad y capacidad reproductiva.
[0019] Los términos "polipéptido" y "proteína" se utilizan indistintamente en este documento para referirse a un polímero de residuos de aminoácidos consecutivos.
[0020] El término "ácido nucleico", "nucleótido", y "polinucleótido" se usan indistintamente y se refieren a ARN, ADN, ADNc o ARNc y derivados de los mismos, tales como los que contienen cadenas principales modificadas. Debe entenderse que la presente invención proporciona polinucleótidos que comprenden secuencias complementarias a las descritas en el presente documento. El "polinucleótido" contemplado en la presente invención incluye tanto la hebra directa (5' a 3') como la hebra complementaria inversa (3' a 5'). Los polinucleótidos de acuerdo con la invención se pueden preparar de diferentes formas (por ejemplo, mediante síntesis química, mediante clonación de genes, etc.) y pueden tomar varias formas (por ejemplo, lineales o ramificados, monocatenarios o bicatenarios, o un híbrido de los mismos, cebadores, sondas, etc.).
[0021] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "antígeno" o "inmunógeno" significa una sustancia que induce una respuesta inmune específica en un animal huésped. El antígeno puede comprender un organismo completo, muerto, atenuado o vivo; una subunidad o porción de un organismo; un vector recombinante que contiene un inserto con propiedades inmunogénicas; un trozo o fragmento de ADN capaz de inducir una respuesta inmune al presentarse a un animal huésped; un polipéptido, un antígeno, un epítopo, un hapteno o cualquier combinación de los mismos. Alternativamente, el inmunógeno o antígeno puede comprender una toxina o antitoxina.
[0022] El término "proteína o péptido inmunogénico", tal como se usa en este documento, incluye polipéptidos que son inmunológicamente activos en el sentido de que una vez administrados al huésped, pueden evocar una respuesta inmune del tipo humoral y/o celular dirigida contra la proteína. Preferiblemente, el fragmento de proteína es tal que tiene sustancialmente la misma actividad inmunológica que la proteína total. Por tanto, un fragmento de proteína de acuerdo con la invención comprende o consiste esencialmente en o consiste en al menos un epítopo o determinante antigénico. Una proteína o polipéptido "inmunogénico", tal como se usa en este documento, incluye la secuencia de longitud completa de la proteína, análogos de la misma o fragmentos inmunogénicos de la misma. Por "fragmento inmunogénico" se entiende un fragmento de una proteína que incluye uno o más epítopos y, por tanto, provoca la respuesta inmunológica descrita anteriormente. Dichos fragmentos se pueden identificar usando cualquier conjunto de técnicas de mapeo de epítopos, bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, los epítopos lineales pueden determinarse, por ejemplo, sintetizando simultáneamente un gran número de péptidos sobre soportes sólidos, correspondiendo los péptidos a porciones de la molécula de proteína, y haciendo reaccionar los péptidos con anticuerpos mientras los péptidos todavía están unidos a los soportes. De manera similar, los epítopos conformacionales se identifican fácilmente determinando la conformación espacial de aminoácidos, tal como, por ejemplo, mediante cristalografía de rayos X y resonancia magnética nuclear bidimensional.
[0023] El término "proteína o péptido inmunogénico" contempla además deleciones, adiciones y sustituciones de la secuencia, siempre que el polipéptido funcione para producir una respuesta inmunológica, tal como se define en el presente documento. El término "variación conservadora" indica la sustitución de un residuo de aminoácido por otro residuo biológicamente similar, o la sustitución de un nucleótido en una secuencia de ácido nucleico de manera que el residuo de aminoácido codificado no cambia o es otro residuo biológicamente similar. A este respecto, las sustituciones particularmente preferidas serán generalmente de naturaleza conservadora, es decir, aquellas sustituciones que tienen lugar dentro de una familia de aminoácidos. Por ejemplo, los aminoácidos generalmente se dividen en cuatro familias: (1) ácidos: aspartato y glutamato; (2) básicos: lisina, arginina, histidina; (3) no polares: alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano; y (4) polares no cargados: glicina, asparagina, glutamina, cisteína, serina, treonina, tirosina. La fenilalanina, el triptófano y la tirosina a veces se clasifican como aminoácidos aromáticos. Entre los ejemplos de variaciones conservadoras se incluyen la sustitución de un residuo hidrofóbico, tal como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro residuo hidrofóbico, o la sustitución de un residuo polar por otro residuo polar, tal como la sustitución de arginina por lisina, ácido glutámico por ácido aspártico, o glutamina por asparagina y similares; o una sustitución conservadora similar de un aminoácido por un aminoácido estructuralmente relacionado que no tendrá un efecto importante sobre la actividad biológica. Las proteínas que tienen sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos que la molécula de referencia, pero que poseen sustituciones de aminoácidos menores que no afectan sustancialmente a la inmunogenicidad de la proteína están, por tanto, dentro de la definición del polipéptido de referencia. Todos los polipéptidos producidos por estas modificaciones se incluyen en este documento. El término "variación conservadora" también incluye el uso de un aminoácido sustituido en lugar de un aminoácido parental no sustituido siempre que los anticuerpos producidos contra el polipéptido sustituido también inmunorreaccione con el polipéptido no sustituido.
[0024] Una "respuesta inmunológica" a una composición o vacuna es el desarrollo en el huésped de una respuesta inmune mediada por anticuerpos y/o células a una composición o vacuna de interés. Por lo general, una "respuesta inmunológica" incluye, pero no se limita a, uno o más de los siguientes efectos: la producción de anticuerpos, células B, células T auxiliares y/o células T citotóxicas, dirigidas específicamente a un antígeno o antígenos incluidos en la composición o vacuna de interés. Preferiblemente, el huésped presentará una respuesta inmunológica terapéutica o protectora de modo que se potenciará la resistencia a una nueva infección y/o se reducirá la gravedad clínica de la enfermedad. Dicha protección se demostrará mediante la reducción o la ausencia de los síntomas que normalmente presenta un huésped infectado, un tiempo de recuperación más rápido y/o cargas de patógenos disminuidas en el huésped infectado.
[0025] Los términos "recombinante" y "genéticamente modificado" se usan indistintamente y se refieren a cualquier modificación, alteración o diseño de un polinucleótido o proteína en su forma o estructura nativa, o cualquier modificación, alteración o diseño de un polinucleótido o proteína en su entorno nativo o sus alrededores. La modificación, alteración o diseño de un polinucleótido o proteína puede incluir, pero no se limita a, deleción de uno o más nucleótidos o aminoácidos, deleción de un gen completo, optimización de codones de un gen, sustitución conservadora de aminoácidos, inserción de uno o más polinucleótidos heterólogos.
[0026] Los términos "vacuna o composición polivalente", "vacuna o composición de combinación o combinada " y "vacuna o composición multivalente" se utilizan indistintamente para referirse a una composición o vacuna que contiene más de una composición o vacunas. La vacuna o composición polivalente puede contener dos, tres, cuatro o más composiciones o vacunas. La vacuna o composición polivalente puede comprender vectores virales recombinantes, virus de tipo salvaje activos o atenuados o muertos, subunidades (proteínas/antígenos), plásmidos de ADN o una mezcla de los mismos.
[0027] Tal como se usa en este documento, el término "vacuna inactivada" significa una composición de vacuna que contiene un organismo infeccioso o patógeno que ya no es capaz de replicación o crecimiento. El patógeno puede ser de origen bacteriano, viral, protozoario o fúngico. La inactivación se puede lograr mediante una variedad de procedimientos que incluyen congelación-descongelación, alta presión, tratamiento químico (por ejemplo, tratamiento con timerosal, formalina, (betapropiolactona), BEI (etilenimina binaria)) o cualquier otro agente químico, incluida la octenidina, sonicación, radiación, calor o cualquier otra convención significa suficiente para prevenir la replicación o el crecimiento del organismo mientras se mantiene su inmunogenicidad.
[0028] Los conservantes se usan habitualmente en formulaciones de múltiples dosis, incluidas las vacunas para animales, para prevenir el crecimiento bacteriano o fúngico en condiciones de campo y se emplean para minimizar la contaminación de las formulaciones durante punciones repetidas (no estériles) en el vial. Los conservantes deben pasar las pruebas de eficacia antimicrobiana (AET), tal como se describe en la farmacopea de Estados Unidos. Tal como se describe en el presente documento, los solicitantes realizaron las pruebas antimicrobianas de acuerdo con la Farmacopea de los Estados Unidos (USP), la Farmacopea Británica (BP) y la Farmacopea Europea (EP). Se utilizaron cuatro organismos de prueba: Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus y A. brasiliensis. Y mientras que el timerosal y el formol continúan desempeñando un papel importante en las vacunas veterinarias, las autoridades europeas fomentan el desarrollo de vacunas que estén libres de esos compuestos. Para superar las posibles amenazas futuras vinculadas a una posible prohibición, los solicitantes han identificado dos compuestos y han probado y confirmado la eficacia de los mismos como soluciones WFI en diferentes concentraciones para las pruebas de conservantes antimicrobianos de acuerdo con la Farmacopea. Tal como se describe en el presente documento, tanto los polímeros de poliamida antimicrobianos como la octenidina son conservantes de vacunas y agentes de inactivación bacteriana seguros y eficaces.
[0029] En un aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones conservantes para vacunas, que comprenden poliamidas solubles en agua, cn funcionalidad amina, antimicrobianas u octenidina. La poliamida antimicrobiana puede ser cualquier poliamida representada por la Fórmula I, II, III, IV o V. En una realización particular, la poliamida se selecciona de una de los veinticinco polímeros (A-Y) enumerados en la Tabla 1. Además de la especies de poliamidas antimicrobianas particularmente eficaces presentadas en este documento, un experto en la materia puede identificar miembros activos adicionales del género divulgado con la aplicación de experimentación no rutinaria.
[0030] Tal como se ilustra en los ejemplos siguientes, las poliamidas B y C son particularmente eficaces contra una amplia gama de patógenos contaminantes típicos, incluyendo S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans y A. brasiliensis, patógenos causantes de mastitis, en niveles USP y veterinariamente aceptables.
[0031] Es importante destacar que los valores de "PM" en la Tabla 1 indican el "peso molecular promedio en peso", determinado por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), que es la versión acuosa de GPC. Como tal, tal como se usa en este documento, por ejemplo, "polímero B" pretende abarcar composiciones que contienen polímero B que tiene un PM promedio en peso de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 kDa, de aproximadamente 5 a aproximadamente 12 kDa, de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 kDa, de aproximadamente 6 a aproximadamente 8,5 kDa, de aproximadamente 7,5 a aproximadamente 8 kDa, o de aproximadamente 7,76 kDa. Además, "PM" pretende significar "peso molecular promedio en peso", a menos que se indique expresamente lo contrario.
[0032] Tal como se indica en la Tabla 1, los polímeros B, C, y D tienen cada uno la misma estructura de repetición (definida en el presente documento como poli (ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-diaminopropano)), pero un PM promedio en peso diferente. Además, los datos de MIC muestran que los polímeros B, C y D tienden a ser comparativamente efectivos contra el panel de patógenos. Por tanto, el solicitante ha demostrado que un amplio intervalo de grados de PM de poli(ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-diaminopropano) son agentes antimicrobianos activos (es decir, grados de PM de al menos aproximadamente 2,5 g/mol a al menos aproximadamente 10,6 g/ml).
[0033] Tal como se usa en este documento, los polímeros contienen las siguientes unidades de repetición: A [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-4,4'-dipiperidina]; B-D [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoicodiaminopropano]; E [ácido 2,2'-bipirrolidina bispropanoico-penta diamina]; G [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-diaminopropano]; H [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-N(2-aminoetil)-diaminoetano]; I [ácido 4,4'-trimetilen dipiperidina bispropanoico-N(3-aminopropil) 1,3-propano diamina]; J [ácido 4,4'-trimetilen dipiperidina bispropanoico-3,3'-diamino-N-metil-dipropilamina; K [ácido 4,4'-dipiperidinbispropanoico-2,2'-diamino dietilamina]; L [ácido 4,4'-dipiperidina bispropanoico-2,2'-diamino N-metil dietilamina]; M [ácido 4,4'-dipiperidina bispropanoico-3,3'-diamino-dipropilamina]; N [4, Ácido 4,4'-dipiperidina bispropanoico-3,3'-diamino-N-metildipropilamina]; O [ácido 4,4'-trimetilen dipiperidin-1,3-diaminopropano-N,N'-di-3-propiónico]; P [ácido 4,4'-trimetilen dipiperidina bispropanoico-N,N'-dimetil-1,3-diaminopropano]; R [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-4,4'-dipiperidina]; S [ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-diaminopropano]; y T [ácido 4,4'-trimetilen dipiperidina bispropanoico-N-glicidol dietilen triamina].
[0034] En otro aspecto, la presente invención proporciona ampliamente formulaciones de múltiples dosis que comprenden ingredientes farmacéuticos activos (API), incluyendo fármacos de molécula pequeña (por ejemplo, incluyendo famotidina), y que incluye productos biológicos (por ejemplo, péptidos, incluyendo insulina). Al igual que las formulaciones de vacunas de múltiples dosis, las formulaciones de múltiples dosis que contienen API están sujetas a contaminación o inoculación con microorganismos tras repetidos pinchazos con agujas. Por tanto, en algunas realizaciones, la presente invención proporciona formulaciones conservadas que contienen API de múltiples dosis. Los API que se incluyen habitualmente en las formulaciones de múltiples dosis que contienen conservantes abarcan, pero sin limitación, los siguientes:
Agentes terapéuticos biológicos: Antivenin (Micrurus fulvius) (origen equino), Antivenin (Crotalidae) (origen equino), Antivenin (Latrodectus mactans), Inyección de calcitonina-salmón, Acetato de desmopresina, Etanercept, Epoetina alfa (recombinante), Epoetina alfa (recombinante), Inyección de folitropina alfa, Insulina aspart (recombinante), suspensión de insulina aspart protamina al 70%, inyección de insulina aspart al 30% (origen ADNr), inyección de insulina glargina [origen ADNr], inyección de insulina glulisina (origen ADNr), U-500 regular (concentrado) (origen USP [ADNr] de inyección de insulina humana), inyección de insulina Lispro (origen ADNr), suspensión de insulina Lispro protamina al 75% e inyección de insulina Lispro al 25% (origen de ADNr), interferón alfa-n3 (derivado de leucocitos humanos), interferón alfa-2b, recombinante, interferón alfa-2a, recombinante, inyección de acetato de leuprolida, Inyección de acetato de octreótido, peginterferón alfa-2a, inmunoglobulina Rho (D) (humana), inmunoglobulina Rho (D) (humana), sargramostim (recombinante), somatropina (origen ADNr), trastuzumab y derivado proteico purificado de tuberculina.
Vacunas: LEPTODOG®, RECOMBITEK® (vacuna inactivada contra la leptospirosis canina), vacunas antirrábicas, incluyendo ALURABIFFA® y RABISIN® (vacunas antirrábicas inactivadas con adyuvante), línea SYNTOXAN® (vacuna de clostridia), HYORESP® (vacuna inactivada para cerdos contra mycoplasma hyopneumoniae) , CIRCOVAC® (vacuna inactivada contra el circovirus porcino 2 (PCV2)), PARVORUVAX® (vacuna combinada contra el parvovirus porcino, reovirus y erysipelothrix), Vacunas inactivadas de aves (para pollos y pavos): gama BIGOPEST®, BINEWVAX®, COR2®, GUMBOPEST®, GUMBORIFFA®, IMOPEST®, TUR3®, FLUVAC®, GALLIMUNE® para reproductoras/ponedoras/pollos de engorde: vacunas contra la enfermedad de Newcastle (ND), bronquitis infecciosa (IBD), gripe H9N2, gripe H5N9, síndrome de caída de huevo (EDS), Síndrome de cabeza hinchada, REOvirus, rinotraqueítis aviar (ART), enfermedad de bursitis infecciosa (IB), Toxoides diftérico y tetánico y tos ferina acelular adsorbida, toxoides diftérico y tetánico y tos ferina acelular adsorbida, vacuna combinada contra la hepatitis B (recombinante) e inactivada contra poliovirus, toxoides diftérico y tetánico y vacuna antitosferínica acelular adsorbida, vacuna contra la hepatitis A inactivada y vacuna contra la hepatitis A inactivada y contra la hepatitis B (recombinante), Vacuna contra la hepatitis B (recombinante) y Vacuna antineumocócica polivalente.
Moléculas pequeñas: Inyección de clorhidrato de apomorfina, Enalaprilato, Inyección de enoxaparina sódica por vía intravenosa (estrógenos conjugados, USP) para inyección, Famotidina, Inyección de fulvestrant, Haloperidol, Fosfato de hidrocortisona sódica, Inyección de fosfato de hidrocortona, Inyección de clorhidrato de hidromorfona, bitartrato de metaraminol, clorhidrato de nalbufina, suspensión inyectable de acetato de metilprednisolona, USP, Clorhidrato de ondansetrón, Suspensión de penicilina G benzantina, Fitonadiona, Complejo de gluconato férrico de sodio en inyección de sacarosa, Inyección de enantato de testosterona USP, Vial de múltiples dosis, Suspensión inyectable de acetato de medroxiprogesterona, USP, suspensión inyectable de acetato de medroxiprogesterona y de cipionilato de estradiol, inyección de flumazenil, inyección de mesilato de dolasetrón e inyección de clorhidrato de cimetidina, sulfato de estreptomicina, USP.
[0035] La presente invención proporciona así composiciones de poliamida antimicrobianas novedosas y no obvias, y procedimientos de uso de los mismos para tratar y prevenir la mastitis en animales no humanos. Los procedimientos comprenden generalmente administrar a un animal infectado una cantidad eficaz de la composición veterinaria para eliminar o curar, completa o sustancialmente, el o los patógenos causantes de mastitis. Tal como se detalla a continuación, los compuestos de poliamida también son muy activos contra una amplia gama de otros patógenos humanos y animales importantes. Además, se ha demostrado que las poliamidas se toleran bien en ratones y ratas. Por ejemplo, la dosis máxima tolerada de ácido 4,4-trimetilen dipiperidina bispropanoico-co-1,3-diaminopropano fue de aproximadamente 5 mg/kg (IP) y 40 mg/kg (IV).
Tabla 1. Veinticinco poliamidas con funcionalidad de amina antimicrobianas. "PM" = pesos moleculares promedio en
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[0036] "Sustituido" significa la sustitución de un carbono en alquilo, grupos heterocíclicos o arilo por uno o más sustituyentes que no son carbono. Los sustituyentes que no son carbono se seleccionan entre nitrógeno, oxígeno y azufre.
[0037] "No sustituido" significa que el grupo está comprendido de sólo hidrógeno y carbono.
[0038] El término "polímero" significa una molécula que comprende unidades de repetición. El término "unidad repetida" o "monómero" significa un grupo en un polímero que se repite o aparece varias veces en un polímero. Un polímero puede ser un copolímero si las unidades repetidas o "comonómeros" son química y estructuralmente diferentes entre sí.
[0039] El término "anión farmacéuticamente aceptable" significa un anión que es adecuado para uso farmacéutico. Los aniones farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, haluros, carbonato, bicarbonato, sulfato, bisulfato, hidróxido, nitrato, cloruro, fosfato, persulfato, sulfito, acetato, ascorbato, benzoato, citrato, dihidrógeno citrato, hidrógeno citrato, oxalato, succinato, tartrato, taurocolato, glicocolato y colato.
[0040] El término "grupo terminal farmacéuticamente aceptable" significa un grupo terminal que es adecuado para uso farmacéutico. Ejemplos de grupos terminales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no están limitados, a H, alquilo (C1-C10), heteroalquilo (C2-C9), cicloalquilo (C3-C10), heterocicloalquilo (C2-C9), arilo (Cs-C-m), heteroarilo (C2-C9), alquilamina (C1-C10), -O(O)C-alquilo (C1-C10), alquil (Ci -Ciü)-COOH, cicloalquil (C3-C iü)-COOH, -(O)CH3, -OH, amida, un grupo guanidino, un grupo cloruro de guanidinio, un grupo guanidinobenceno, un grupo dihidroxi, y un grupo polietilenglicol.
[0041] El término "cantidad eficaz" de poliamidas con funcionalidad amina descritas es una cantidad suficiente para lograr un efecto terapéutico y/o profiláctico de la afección particular que se trata, tal como una cantidad que da como resultado la prevención o una disminución en los síntomas asociado con mastitis. La cantidad precisa de las poliamidas con funcionalidad amina descritas que se administra dependerá del tipo y gravedad de la mastitis o infección que se esté tratando y de las características del animal, tales como salud general, edad, peso corporal y tolerancia a los fármacos.
[0042] En una realización del procedimiento, una cantidad eficaz de la poliamida o de octenidina se añade a uno o más antígenos para formar una composición inmunológica estable.
[0043] De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un uso de una poliamida con funcionalidad amina antimicrobiana para conservar una formulación de vacuna.
Composiciones de vacunas conservadas
[0044] De acuerdo con la presente invención, la composición de vacuna conservada comprende un polímero de poliamida soluble en agua, antimicrobiano. Las poliamidas particularmente eficaces incluyen los polímeros B, C, D, U y T.
[0045] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "cantidad eficaz conservante" se refiere a una concentración de conservante suficiente para prevenir el crecimiento de microorganismos contaminantes en una formulación de vacuna multiusos.
[0046] La composición inmunogénica que contiene conservante de la presente invención puede ser resistente a varios patógenos, incluyendo E. coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Salmonella spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Shigella spp., Edwardsiella spp., Hafnia spp., Morganella spp., Providencia spp., Yersinia spp., Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp., Pseudomonas spp., Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus spp., Actomyne spp. spp., Mycobacterium spp., Prototheca spp., Mycoplasma spp., Erwinia spp., Lactobacillus spp., entre otros.
[0047] En una realización, la composición que contiene conservante comprende un extracto bacteriano de Borrelia burgdorferi (por ejemplo, antígenos descritos en cualquiera de los documentos US 5.523.089, US 5.582.990, US 5.688.512, US 5.777.095 y US 6.083.722, cada uno de Symbicom). En una realización, el antígeno comprende un vector de expresión que contiene OspA (por ejemplo, tal como se describe en 6.159.477 o US 6.368.603, ambos de Merial).
[0048] En otra realización, la formulación de múltiples dosis que contiene conservante comprende un toxoide de bacterina de E. Coli (por ejemplo, J-VAC® de Merial). En otras realizaciones, la formulación de múltiples dosis comprende uno o más de los antígenos en las siguientes composiciones de vacuna: LEPTODOG®, RECOMBITEK® (vacuna inactivada contra la leptospirosis canina), vacunas antirrábicas, incluyendo ALURABIFFA® y RABISIN® (vacunas antirrábicas inactivadas con adyuvante), Línea SYNTOXAN® (vacuna de clostridia), HYORESp® (vacuna inactivada para cerdos contra Mycoplasma hyopneumoniae), CIRCOVAC® (vacuna inactivada contra circovirus porcino 2 (PCV2)), PARVORUVAx ® (vacuna combinada contra parvovirus porcino, reovirus y erysipelianothrix) vacunas inactivadas de aves (para pollos y pavos): gama BIGOPEST®, BINEWVAX®, COR2®, Gu Mb OPEST®, GUMBORIFFA®, IMOPEST®, Tu R3®, FLUvAc ®, GALLIMUNE® para reproductoras/ponedoras/pollos de engorde: vacunas contra la enfermedad de Newcastle (ND), bronquitis infecciosa (IBD), gripe H9N2, gripe H5N9, síndrome de caída de huevo (EDS), Síndrome de cabeza hinchada, REOvirus, rinotraqueítis aviar (ART), enfermedad de bursitis infecciosa (IB).
[0049] En una realización, la composición es una composición de vacuna de múltiples dosis. En algunas realizaciones, la composición de vacuna de múltiples dosis es una composición monovalente. En otras realizaciones, la composición de vacuna de múltiples dosis es una composición de vacuna multivalente.
[0050] En realizaciones en las que la composición de múltiples dosis es una composición monovalente, el antígeno puede incluir un antígeno, incluyendo uno seleccionado de un antígeno presente en una de las siguientes vacunas: LEPTODOG®, RECOMBITEK® (vacuna inactivada contra la leptospirosis canina), vacunas antirrábicas, incluidas ALURABIFFA® y RABISIN® (vacunas antirrábicas inactivadas con adyuvante), línea SYNTOXAN® (vacuna de clostridia), HYORESP® (vacuna inactivada para cerdos contra Mycoplasma hyopneumoniae), CIRCOVAC® (vacuna inactivada contra circovirus porcino 2 (PCV2)) y PARVORUVAX® (vacuna combinada contra parvovirus porcino, reovirus y erysipelothrix).
[0051] En realizaciones en las que la composición de múltiples dosis es una composición multivalente, la composición contiene al menos dos antígenos, incluyendo antígenos seleccionados de entre los siguientes: moquillo canino vectorizado en virus de la viruela del canario, adenovirus tipo 2, parainfluenza, parvovirus (MLV), bacterina de Leptospira Canicola y bacterina de Leptospira icterohaemorrhagiae (por ejemplo, RECOMBITEK® C6 de Merial). En otra realización, la composición multivalente contiene: vacuna contra encefalomielitis-gripe, virus inactivo oriental y occidental, toxoide tetánico (es decir, EWTF EQUINA de Merial).
[0052] En vista de lo anterior, se observará que se consiguen los diversos objetos de la invención y otros resultados ventajosos. Como se podrían realizar varios cambios en las formulaciones, productos y procesos anteriores sin apartarse del alcance de la invención, se pretende que toda la materia contenida en la descripción anterior y mostrada en las tablas adjuntas se interprete como ilustrativa y no en un sentido limitante.
[0053] Cuando se introducen elementos de la presente invención o la realización o realizaciones preferidas de la misma, los artículos "un", "una", "el/la" y "dicho/a" pretenden significar que hay uno o más de los elementos. Los términos "que comprende", "que incluye" y "que tiene" pretenden ser inclusivos y significan que pueden haber elementos adicionales distintos de los elementos enumerados. Además, el término "que consiste esencialmente en" pretende significar que puede haber elementos adicionales distintos de los elementos enumerados, pero no los que se considerarían "ingredientes activos" (por ejemplo, excipientes no activos). Y finalmente, el término "que consiste en" pretende significar que solo se incluyen los elementos enumerados.
[0054] A menos que se indique lo contrario, los términos técnicos se usan de acuerdo con el uso convencional. Las definiciones de términos comunes en biología molecular pueden encontrarse en Benjamin Lewin, Genes V. publicado por Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado por Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569­ 8).
[0055] En un aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para conservar una formulación de múltiples dosis, incluidos los que contienen agentes biológicos terapéuticos, vacunas y moléculas pequeñas, que comprende mezclar las formulaciones de múltiples dosis con un conservante no mercurial, seleccionado de un polímero de poliamida y octenidina, para formar una formulación de múltiples dosis conservada, conservando así la formulación de múltiples dosis.
[0056] En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar una formulación de múltiples dosis conservada, en el que el procedimiento comprende, consiste esencialmente en, o consiste en las siguientes etapas: a) proporcionar al menos dos dosis efectivas de uno o más principios farmacéuticos activos (API); b) proporcionar una cantidad conservante eficaz de un conservante no mercurial seleccionado de uno o más polímeros de poliamida antimicrobianos, octenidina y combinaciones de los mismos; c) combinar el API y el conservante no mercurial con un componente acuoso y/u oleoso para formar una formulación líquida de múltiples dosis conservada; d) opcionalmente proporcionar uno o más excipientes; e) opcionalmente proporcionar un recipiente para contener la formulación líquida; f) opcionalmente esterilizar y transferir la formulación líquida al recipiente; y g) opcionalmente secar por congelación, liofilizary/o vitrificar la formulación líquida; produciendo de ese modo la formulación de múltiples dosis conservada; y en el que la formulación no contiene conservante mercurial.
[0057] Las etapas anteriores pueden ponerse en práctica en cualquier orden razonable. Por ejemplo, el o los conservantes no mercuriales, los API y el excipiente opcional pueden colocarse en un recipiente de mezcla que contenga un componente acuoso y/u oleoso. Una vez mezclada completamente en una solución, suspensión, suspoemulsión, emulsión o solución micelar, la formulación líquida conservada puede esterilizarse por filtración y transferirse asépticamente a recipientes estériles, incluidos los viales de vacuna. El excipiente puede incluir cualquier excipiente farmacéutica o veterinariamente aceptable, incluidos los que mejoran la solubilidad del conservante o conservantes no mercuriales. Además, se puede producir cualquier formulación líquida conservada adecuada.
[0058] En realizaciones particulares, la formulación líquida puede ser una solución acuosa, una solución micelar, una solución micelar hinchado, una emulsión de aceite en agua, una emulsión de agua en aceite o una emulsión en suspensión. En general, para formulaciones inmunológicas u otras formulaciones biológicas conservadas, el antígeno u otro producto biológico se disuelve dentro de la fase acuosa de una formulación líquida multifásica. Las emulsiones pueden ser microemulsiones o emulsiones "submicrométricas". Las emulsiones submicrométricas se denominan generalmente en el presente documento "nanoemulsiones".
[0059] Por otra parte, para el conservante a considerar que está presente en las formulaciones de múltiples dosis conservadas en una "cantidad conservante eficaz", las formulaciones deben protegerse de la inoculación con microorganismos descritos en el presente documento. Por ejemplo, si la cantidad de bacterias inoculadas en una formulación de múltiples dosis conservada disminuye con el tiempo, se considera que el conservante no mercurial está presente en una cantidad conservante eficaz. En otro ejemplo, el conservante está presente en una cantidad conservante eficaz cuando la formulación conservada pasa las pruebas detalladas en los Ejemplos 1, 2 y/o 3.
[0060] En otro aspecto, la invención proporciona una formulación de múltiples dosis conservada, en la que:
a) la formulación comprende al menos dos dosis eficaces de uno o más ingredientes farmacéuticos activos (API) y una cantidad conservante eficaz de un conservante no mercurial seleccionado entre uno o más polímero(s) de poliamida antimicrobiana, octenidina y combinaciones de los mismos; o
b) la formulación se produce de acuerdo con el procedimiento descrito para preparar una formulación de múltiples dosis conservada; y en la que la formulación no contiene conservante mercurial.
[0061] En algunas realizaciones, la formulación de múltiples dosis conservante comprende un polímero de poliamida seleccionado entre:
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y combinaciones de los mismos.
[0062] En algunas realizaciones, la formulación de múltiples dosis conservante comprende un polímero de poliamida que tiene la siguiente estructura:
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y en el que el peso molecular promedio en peso (WAMW) es de aproximadamente 1,0 kDa a aproximadamente 15,0 kDa, medido mediante cromatografía de exclusión por tamaño. En otras realizaciones, la poliamida puede tener un WAMW de aproximadamente 2,0 kDa a aproximadamente 10 kDa. En otras realizaciones, la poliamida puede tener un WAMW de aproximadamente 2,5 kDa a aproximadamente 7,76 kDa, o tiene un WAMW de aproximadamente 7,76 kDa.
[0063] En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición inmunogénica que comprende al menos un antígeno, y que comprende además al menos aproximadamente 0,01 mg/ml de polímero de poliamida o al menos aproximadamente 0,1 mg/ml de octenidina. En la composición inmunogénica, el polímero de poliamida u octenidina puede estar presente en una concentración de entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml o entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 0,25 mg/ml. En algunas realizaciones, el polímero de poliamida u octenidina está presente en una concentración de aproximadamente 0,1 mg/ml, aproximadamente 0,125 mg/ml o aproximadamente 0,25 mg/ml. Ahora que se ha descrito la invención, el experto en la materia puede realizar ajustes de rutina en las concentraciones de estos conservantes no mercuriales seguros y eficaces para lograr la eficacia conservante deseada.
[0064] En otras realizaciones, la composición inmunogénica comprende no menos de aproximadamente 0,1 mg/ml del polímero de poliamida. En algunas realizaciones, la composición comprende no menos de aproximadamente 0,1 mg/ml de octenidina.
[0065] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende además un adyuvante. Los adyuvantes adecuados para usar en la práctica de la presente invención son (1) polímeros de ácido acrílico o metacrílico, anhídrido maleico y polímeros derivados de alquenilo, (2) secuencias inmunoestimulantes (ISS), tales como secuencias de oligodesoxirribonucleótidos que tienen una o más unidades CpG no metiladas (Klinman et al., 1996; WO98/16247), (3) una emulsión de aceite en agua, tal como la emulsión SPT descrita en la página 147 de "Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" publicado por M. Powell, M . Newman, Plenum Press 1995, y la emulsión MF59 descrita en la página 183 del mismo trabajo, (4) lípidos catiónicos que contienen una sal de amonio cuaternario, por ejemplo, DDA (5) citocinas, (6) hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio, (7) saponina (incluida la de la corteza de Quillaja saponaria), (8) otros adyuvantes descritos en cualquier documento citado e incorporado por referencia en la presente solicitud, o (9) cualquier combinación o mezclas de los mismos.
[0066] La emulsión de aceite en agua (3), que es especialmente apropiada para vectores virales, puede estar basada en: aceite de parafina líquida ligera (tipo farmacopea europea), aceite isoprenoide, tal como escualano, escualeno, aceite resultante de la oligomerización de alquenos, por ejemplo, isobuteno o deceno, ésteres de ácidos o alcoholes que tienen un grupo alquilo de cadena lineal, tales como aceites vegetales, oleato de etilo, propilenglicol, di(caprilato/caprato), tri(caprilato/caprato) de glicerol y dioleato de propilenglicol, o ésteres de alcoholes o ácidos grasos ramificados, especialmente ésteres de ácido isoesteárico. El aceite se usa en combinación con emulsionantes para formar una emulsión. Los emulsionantes pueden ser tensioactivos no iónicos, tales como: ésteres de por un lado sorbitán, manida (por ejemplo, oleato de anhidromanitol), glicerol, poliglicerol o propilenglicol y por otro lado ácidos oleico, isoesteárico, ricinoleico o hidroxiesteárico, estando dichos ésteres opcionalmente etoxilados, o bloques de copolímeros de polioxipropileno-polioxietileno, tales como Pluronic, por ejemplo, L121.
[0067] Entre los polímeros adyuvantes de tipo (1), se prefieren los polímeros de ácido acrílico o metacrílico reticulados, especialmente reticulados por polialqueniléteres de azúcares o polialcoholes. Estos compuestos se conocen con el nombre de carbómero (Pharmeuropa, vol. 8, n° 2, junio de 1996). Un experto en la técnica también puede referirse a la Patente de Estados Unidos No. 2.909.462, que proporciona tales polímeros acrílicos reticulados por un compuesto polihidroxilo que tiene al menos tres grupos hidroxilo, preferiblemente no más de ocho de tales grupos, los átomos de hidrógeno de al menos tres grupos hidroxilo siendo reemplazados por radicales alifáticos insaturados que tienen al menos dos átomos de carbono. Los radicales preferidos son los que contienen de 2 a 4 átomos de carbono, por ejemplo, vinilos, alilos y otros grupos etilénicamente insaturados. Los radicales insaturados también pueden contener otros sustituyentes, tales como metilo. Los productos vendidos con el nombre Carbopol (BF Goodrich, Ohio, EE. UU.) son especialmente adecuados. Están reticulados por alil sacarosa o por alil pentaeritritol. Entre ellos, se hace referencia a Carbopol 974P, 934P y 971P.
[0068] En algunas realizaciones, la antigenicidad de la composición inmunogénica es estable durante no menos de 1 año, de 1,5 años, 2 años o 2,5 años.
[0069] En otras realizaciones, después de la inoculación de la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) con uno o más microorganismos, la concentración de dichos microorganismos se reduce con el tiempo debido a la presencia del conservante. Cuando se observa esta reducción, se considera que el conservante no mercurial está presente en una "cantidad conservante eficaz".
[0070] En algunas realizaciones, después de la inoculación con una o más cepas de bacterias, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) presenta una reducción de al menos 1,0 log del recuento inicial de microorganismos a las 24 horas, un reducción de al menos 3,0 log a los 7 días del valor medido anteriormente y no más de 0,5 log de aumento a los 28 días del valor medido anteriormente.
[0071] En otras realizaciones, después de la inoculación con cepas de una o más bacterias, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) presenta una reducción de al menos 2,0 log del recuento inicial calculado a las 6 horas después de la inoculación, una reducción de al menos 3,0 log a las 24 horas del valor medido anteriormente y sin recuperación a los 28 días.
[0072] En algunas realizaciones, el uno o más microorganismos se seleccionan de P. aeruginosa, S. aureus, E. coli y B. subtilis.
[0073] En otras realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) se inocula varias veces. Por ejemplo, una segunda inoculación se puede producir a las 6 horas después de una inoculación inicial, una tercera inoculación se puede producir a las 24 horas después de la inoculación inicial, una cuarta inoculación se puede producir a los 7 días después de la inoculación inicial y una quinta inoculación se puede producir a los 14 días después de la inoculación inicial.
[0074] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) puede comprender además uno o más de un tampón, un crioprotector, una sal, un catión divalente, un detergente no iónico, y un inhibidor de la oxidación con radicales libres.
[0075] En otro aspecto, la presente invención proporciona un vial que contiene una composición inmunogénica (u otra formulación conservada), tal como se describe en el presente documento.
[0076] En algunas realizaciones, el vial puede contener más de dos dosis de la composición inmunogénica (u otra formulación conservada).
[0077] En otro aspecto, la divulgación proporciona una formulación de múltiples dosis conservada fabricada de acuerdo con los procedimientos descritos.
[0078] En otro aspecto, la divulgación proporciona una composición inmunogénica que comprende al menos un antígeno, y al menos de aproximadamente 0,01 mg/ml a aproximadamente 0,25 mg/ml de polímero de poliamida o de al menos aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 1,0 mg/ml de octenidina.
[0079] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) comprende entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 5 mg/ml, o entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 0,25 mg/ml de polímero de poliamida o de la octenidina.
[0080] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) comprende entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 0,25 mg/ml de polímero de poliamida o de la octenidina.
[0081] En otras realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) comprende no menos de aproximadamente 0,1 mg/ml del polímero de poliamida.
[0082] En todavía otras realizaciones, la composición inmunogénica (u otra formulación conservada) comprende no menos de aproximadamente 0,1 mg/ml de la octenidina.
[0083] En algunas realizaciones, las soluciones tamponadas que contienen cantidades relativamente bajas de sales, particularmente incluyendo las sales de fosfato, se añaden a la composición inmunogénica, u otra formulación de múltiples dosis conservada, para mejorar la solubilidad de la octenidina. Esto se basa en el descubrimiento inesperado de los solicitantes de que la octenidina es menos soluble en la solución salina tamponada con fosfato (PBS) utilizada habitualmente. Para abordar el problema de la escasa solubilidad, los solicitantes probaron una variedad de modificaciones y, finalmente, determinaron que la sustitución del fosfato de sodio por bicarbonato de sodio proporcionaba la solubilidad requerida. Por tanto, en algunas realizaciones, las formulaciones de múltiples dosis que incluyen octenidina contienen menos fosfato que el PBS estándar. En consecuencia, en algunas realizaciones, el tampón puede contener por 100 litros aproximadamente 5 g de NaH2PO4 y aproximadamente 200 g de bicarbonato de sodio (en lugar de PBS estándar, que contiene aproximadamente una relación de 20:1 de Na2HPO4 a KH2PO4).
[0084] En algunas realizaciones, el tampón puede contener relativamente menos NaCl, con una osmolalidad mantenida por la adición compensatoria de una cantidad apropiada de glucosa. El tampón se puede complementar adicionalmente con iones divalentes adicionales, CaCh y MgCh.
[0085] En algunas realizaciones, la cantidad de fosfato se reduce generalmente 50 veces, en comparación con PBS estándar, con sustitución de bicarbonato por fosfato.
[0086] En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un adyuvante.
[0087] En una realización de la composición inmunogénica, la antigenicidad de la composición inmunogénica es estable durante no menos de 1 año, 1,5 años, 2 años o 2,5 años.
[0088] En general, una formulacion de múltiples dosis "estable" no exhibe niveles inaceptables de crecimiento microbiano, y sustancialmente ninguna o ninguna descomposición o degradación del componente biológico activo o de molécula pequeña. Tal como se usa en el presente documento, una "composición inmunogénica estable" es una formulación conservada que sigue siendo capaz de provocar una respuesta inmunológica deseada cuando se administra a un animal diana. Las composiciones inmunogénicas estables incluyen a menudo aquellas que no pierden más de la mitad de un logaritmo de actividad durante algún intervalo de tiempo especificado. Por ejemplo, "estable durante al menos un año" significa que una composición inmunogénica con un título inicial de aproximadamente X Log 10 CCID50/dosis de actividad retendrá al menos aproximadamente (X-0,5) Log 10 CCID50/dosis de actividad durante al menos un año después de que se haya preparado la composición inmunogénica conservada (por ejemplo, colocada en su recipiente estéril; o resuspendida de una pastilla liofilizada contenida dentro de un vial estéril).
[0089] En realizaciones particulares, las formulaciones de usos múltiples conservadas, incluyendo composiciones inmunogénicas conservadas, permanecen estables durante el tiempo especificado con numerosas inoculaciones/inserciones repetidas en los recipientes de múltiples dosis. En tales casos, se puede utilizar un término tal como "estable durante al menos un año con hasta diez usos" para describir una formulación conservada, que está contenida dentro de un recipiente de múltiples dosis. En algunas realizaciones preferidas, las formulaciones de múltiples dosis permanecen estables incluso con 10, 15, 20, 30, 40, 50 o incluso 100 inoculaciones/inserciones.
[0090] En una realización, después de la inoculación de la composición inmunogénica con uno o más microorganismos, la concentración de dichos microorganismos se reduce con el tiempo. Tal como se usa en este documento, "inoculación de la composición" se refiere generalmente a la introducción en la composición de un objeto extraño (por ejemplo, una aguja hipodérmica), que puede contener microorganismos potencialmente contaminantes. Un ejemplo de inoculación es la introducción repetida de agujas en un vial que contiene una formulación de vacuna de múltiples dosis. Otro ejemplo es la introducción repetida de agujas en un vial que contiene una formulación de vacuna de múltiples dosis. Cada uno de los anteriores son ejemplos de "inoculación", tal como se usa en este documento.
[0091] En algunas realizaciones, después de la inoculación de la composición inmunogénica con cepas de una o más bacterias, la composición presenta una reducción de al menos 1,0 log del recuento inicial de microorganismos a las 24 horas, un reducción de al menos 3,0 log a los 7 días del valor medido anteriormente y no más de 0,5 log de aumento a los 28 días del valor medido anteriormente.
[0092] En otras realizaciones, después de la inoculación de la composición inmunogénica, la composición presenta una reducción de al menos 2,0 log del recuento inicial calculado a las 6 horas después de la inoculación, una reducción de al menos 3,0 log a las 24 horas del valor medido anteriormente y sin recuperación a los 28 días. En algunas realizaciones, el uno o más microorganismos se seleccionan del grupo que consiste en P. aeruginosa, S. aureus, E. coli y B. subtilis.
[0093] En algunas realizaciones, la composición se inocula varias veces, incluyendo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ,20 o más veces. Los solicitantes prevén cualquier número de inoculaciones por encima de 1.
[0094] En algunas realizaciones, una segunda inoculación se produce a las 6 horas después de una inoculación inicial, tercera inoculación se produce a las 24 horas después de la inoculación inicial, una cuarta inoculación se produce a los 7 días después de la inoculación inicial y se produce una quinta inoculación a los 14 días después de la inoculación inicial.
[0095] En otras realizaciones, la composición inmunogénica comprende uno o más de un tampón, un crioprotector, una sal, un catión divalente, un detergente no iónico, y un inhibidor de la oxidación de radicales libres.
[0096] En una realización, la divulgación proporciona un vial que contiene la composición inmunogénica multidosis u otra composición que contiene un agente activo.
[0097] En una realización, el vial contiene más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 dosis de la composición inmunogénica.
[0098] En una realización, la divulgación proporciona un dispositivo de administración de vacuna precargado que comprende una formulación de múltiples dosis que comprende ingredientes activos biológicos o de molécula pequeña. En algunas realizaciones, el dispositivo comprende una jeringa. En otras realizaciones, el dispositivo comprende una jeringa de cámara doble o múltiple o viales o combinaciones de los mismos. En aún otras realizaciones, el dispositivo de administración de vacuna precargado comprende una composición inmunogénica multivalente que se formula para inyección intramuscular o subcutánea.
[0099] En una realización, el recipiente comprende dos dosis o más de la composición inmunógena multivalente de la reivindicación 7, en el que cada dosis comprende de 0,1 a 2 ml de la composición. En algunas realizaciones, la composición comprende polímero de poliamida a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/dosis y aproximadamente 0,25 mg/dosis o entre aproximadamente 0,05 mg/dosis y aproximadamente 0,125, en la que la dosis es una dosis de 0,5 ml.
[0100] Los siguientes ejemplos están destinados simplemente a ilustrar y explicar adicionalmente la presente invención. Por lo tanto, los ejemplos no deben considerarse como limitantes del alcance de la invención o de la manera en que se pueden poner a la práctica.
EJEMPLOS
[0101] Tal como se describe a continuación, se probaron tanto los polímeros de poliamida antimicrobianos y la octenidina y demostraron ser agentes privativos de vacuna eficaz. La Tabla 2 presenta una comparación de los requisitos de USP y EP para las pruebas de eficacia antimicrobiana para agentes conservantes de vacunas.
T l 2. R i i P EP r l r fi i n imi r i n
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0002
[0102] Las Tablas 3 y 4 presentan los criterios de aceptación/Farmacopea europea (§ 5.1.3) y Farmacopea europea para vacunas para uso veterinario.
Tabla 3. Criterios de ace tación/Farmaco ea euro ea Sec. 5.1.3
Figure imgf000018_0003
Figure imgf000018_0004
Ejemplo 1. Estudio de conservantes de poliamida
[0103] Meyer et al. (J. Pharm. Sc. 96 (12): 3155-67; 2007) indicaron los siguientes datos de concentración inhibitoria mínima (MIC) para timerosal: 4-8 jg/m l (E. coli, Pseudomonas aeruginosa); 0,2 jg/m l (Staphylococcus aureus); 32 |jg/ml (Candida albicans); 128 jg/m l (Aspergillus niger). Además, la concentración de timerosal en varias vacunas veterinarias de Merial es de aproximadamente 0,005 % a aproximadamente 0,01 % (= aproximadamente 50 a aproximadamente 100 jg/ml). En base a lo anterior, se seleccionaron tres dosis diferentes del polímero de poliamida como punto de partida (0,1, 1 y 10 mg/ml). Los solicitantes no pudieron predecir de antemano si estas concentraciones serían efectivas.
Figure imgf000018_0001
Polímero "B"; PM = 7,6 kDa (ver Tabla 1)
T l . Efi i n rv n l lím r li mi A B n ri ri l f rm r
Figure imgf000018_0005
[0104] Se obtuvieron Vet y USP satisfactorios con las tres dosis. No se observó ningún efecto a dosis baja, lo que indica que la dosis óptima probablemente sea inferior a 100 jg/ml.
[0105] Metodología. Para cada concentración de polímero de poliamida, se llevó a cabo la neutralización por dilución inoculando 10 ml del producto de prueba con 100 jL de cada cepa de prueba. Los recuentos se realizaron en Do, 6 h (solo bacterias), 24 h (solo bacterias), D7, D14 y D28. Para cada conteo se neutralizó 1 mL de la muestra en 9 mL de solución neutralizante (10 minutos), para S. aureus, una segunda dilución 1:10 en la misma solución. Luego se transfirió 1 mL de la mezcla a placas Petri y se cubrió con 15 mL de medio de agar (Trypcase Soy Agar para bacterias y Sabouraud Dextrosed Agar para levaduras y mohos). Los recuentos se realizaron después de 24-48 horas de incubación a 32,5 ° C ± 2,5 ° C para las bacterias y 48-72 horas a 22,5 ° C ± 25 ° C para las levaduras y mohos. Los microorganismos de prueba incluyeron Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans y Aspergillus brasiliensis. Finalmente, la solución de neutralización contenía: Tween 80 (10%), lecitina (2%), saponina (2%), tiosulfato de sodio (0,5%) y solución tamponada de cloruro. La saponina era de la corteza de Quillaja saponaria.
Figure imgf000019_0001
T l 7. Efi i n rv n l lím r li mi 1 m ml
Figure imgf000019_0002
T l . Efi i n rv n l lím r li mi 1 m ml
Figure imgf000019_0003
Ejemplo 2. Estudio de conservante de octenidina
[0106] Metodología. Para cada concentración de octenidina, se llevó a cabo la neutralización por dilución, tal como se describe en el Ejemplo 1.
T l . Efi i n rv n i l rhi r ni in 1 m ml
Figure imgf000019_0004
T l 1. Efi i n rv n i l rhi r ni in 1 m ml
Figure imgf000020_0001
T l 11. Efi i n rv n i l rhi r ni in 1 m ml
Figure imgf000020_0002
T l 12. Efi i n rv n i l rhi r ni in 1 m ml
Figure imgf000020_0003
Tabla 13. Resumen de la eficacia conservante de octenidina
Figure imgf000020_0004
Figure imgf000021_0001
T l 14. R m n^ lím r ni in m n rv n r v n
Figure imgf000021_0002
Ejemplo 3. Estudio de conservantes en emulsión de aceite en agua
[0107] Metodología. Para cada concentración de conservante (o combinación de conservantes), se llevó a cabo la neutralización por dilución y otras pruebas, tal como se describe en el Ejemplo 1. La formulación "TS6" es una emulsión de aceite en agua, descrita en el documento US 7.371.395 B2 (de Merial, Inc.; ver especialmente el Ejemplo 1). Para cada formulación (ver Tabla 15), el componente de antígeno TS6 consistió en partículas similares al virus (VLP) del circovirus porcino 2 (PCV2) y Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo) inactivado (ver US 7.371.395 B2, Ejemplos 3 y 5).
T l 1 . R m n l n i i n r r l
Figure imgf000021_0003
[0108] Tomados en conjunto, los datos presentados en los Ejemplos 1 a 3 (ya lo largo de esta divulgación) indican que tanto el polímero de poliamida como la octenidina son conservantes de vacuna seguros y eficaces. Finalmente, el Ejemplo 3 demuestra que los polímeros de poliamida y la octenidina son conservantes eficaces en un entorno de vacuna significativamente desafiante: emulsión de aceite en agua. Por ejemplo, este complicado sistema de formulación presenta muchas oportunidades para interacciones no deseadas con proteínas y tensioactivos, que podrían haber deteriorado la eficacia conservante de los polímeros de poliamida y/o la octenidina. De hecho, en un experimento anterior, los solicitantes demostraron que 100 pg/ml del polímero de poliamida o de la octenidina sola no mostraron una eficacia conservante satisfactoria en este entorno oleoso de la vacuna. Por consiguiente, fue bastante inesperado observar los resultados positivos resumidos en la tabla 15. Y finalmente, los polímeros de poliamida antimicrobianos demostraron una eficacia superior inesperada sobre la octenidina y el conservante mercurial, tiomersal, en el entorno de vacuna oleoso.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para preparar una formulación de múltiples dosis conservada, en el que la formulación es una composición inmunogénica en forma de una emulsión de aceite en agua, en el que dicho procedimiento comprende o consiste esencialmente en las siguientes etapas:
(a) proporcionar al menos dos dosis que comprenden una cantidad eficaz de al menos un antígeno;
(b) proporcionar entre aproximadamente 0,1 mg/ml y 5 mg/ml expresado como p/v de la formulación de un conservante
Figure imgf000022_0001
en la que el peso molecular promedio en peso (WAMW) es de aproximadamente 1,0 kDa a aproximadamente 15,0 kDa, medido mediante cromatografía de exclusión por tamaño;
(c) combinar el antígeno y el conservante no mercurial con un componente acuoso y/u oleoso para formar una formulación líquida de aceite en agua de múltiples dosis conservada;
(d) opcionalmente proporcionar uno o más excipientes;
(e) opcionalmente proporcionar un recipiente para contener la formulación líquida;
(f) opcionalmente esterilizar y transferir la formulación líquida al recipiente; y
(g) opcionalmente secar por congelación, liofilizar y/o vitrificar la formulación líquida,
produciendo de este modo la formulación de múltiples dosis conservada; y
en el que la formulación no contiene conservante mercurial.
2. Formulación de múltiples dosis conservada, en la que:
(a) la formulación es una composición inmunogénica en forma de una emulsión de aceite en agua, comprendiendo dicha composición inmunogénica al menos dos dosis que comprenden una cantidad eficaz de al menos un antígeno y entre aproximadamente 0,1 mg/ml y 5 mg/ml expresado como p/v de la formulación de un conservante no mercurial que es un polímero de poliamida que tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000022_0002
en la que el peso molecular promedio en peso (WAMW) es de aproximadamente 1,0 kDa a aproximadamente 15,0 kDa, medido mediante cromatografía de exclusión por tamaño; o
(b) la formulación se produce según el procedimiento de la reivindicación 1; y
en la que la formulación no contiene conservante mercurial.
3. Formulación de múltiples dosis conservada de la reivindicación 2, en la que el polímero de poliamida tiene un WAMW de aproximadamente 2,0 kDa a aproximadamente 10 kDa.
4. Formulación de múltiples dosis conservada de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en la que el polímero de poliamida tiene un WAMW de aproximadamente 2,5 kDa a aproximadamente 7,76 kDa, o tiene un WAMW de aproximadamente 7,76 kDa.
5. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en la que la formulación comprende el polímero de poliamida antimicrobiano a una concentración de entre aproximadamente 0,1 mg/ml y aproximadamente 0,25 mg/ml de formulación.
6. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en la que la formulación comprende el polímero de poliamida antimicrobiano a una concentración de aproximadamente 0,25 mg/ml de formulación.
7. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en la que la formulación comprende además un adyuvante.
8. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, en la que la antigenicidad de la formulación inmunogénica es estable durante no menos de 1 año, 1,5 años, 2 años o 2,5 años; y
en la que la formulación de múltiples dosis permanece estable a pesar de al menos diez usos.
9. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en la que, después de la inoculación de la formulación con uno o más microorganismos, la concentración de dichos microorganismos se reduce con el tiempo, preferiblemente en la que la formulación presenta una reducción de al menos 1,0 log del recuento inicial de microorganismos a las 24 horas, una reducción de al menos 3,0 log a los 7 días del valor medido anteriormente y un aumento de no más de 0,5 log a los 28 días del valor medido anteriormente.
10. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 9, en la que, después de la inoculación con uno o más microorganismos, la formulación presenta una reducción de al menos 2,0 log del recuento calculado inicial a las 6 horas después de la inoculación, una reducción de al menos 3,0 log a las 24 horas del valor medido anteriormente y sin recuperación a los 28 días.
11. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10, en la que uno o más microorganismos se seleccionan entre P. aeruginosa, S. aureus, E. coli, B. subtilis y combinaciones de los mismos.
12. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11, en la que la formulación comprende además uno o más de un tampón, un crioprotector, una sal, un catión divalente, un detergente no iónico y un inhibidor de la oxidación con radicales libres.
13. Formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 12, en la que la formulación está contenida dentro de un vial.
14. Dispositivo de administración de vacunas precargado que comprende la formulación de múltiples dosis conservada de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 13.
15. Dispositivo de administración de vacunas precargado de la reivindicación 14, en el que el dispositivo es una jeringa y la formulación de múltiples dosis conservada se formula para inyección intramuscular o subcutánea.
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