KR101746880B1 - 사포닌-함유 면역보강제를 포함하는 신규 백신 제형 - Google Patents

사포닌-함유 면역보강제를 포함하는 신규 백신 제형 Download PDF

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Abstract

본 발명은 박테리아 또는 바이러스 현탁액, 특별히 농축되고 비-정제된 (미정제 추출물) 또는 최소로 정제된 박테리아 또는 바이러스 현탁액의 존재하에 증가된 안정성을 갖는 신규 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다. 본 발명의 에멀젼은 하나 이상의 면역원 특히, 비활성화 병원체, 약독화 병원체, 서브유닛, 재조합 발현 벡터, 및 플라스미드 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역원을 포함하는 약학 조성물의 전달을 위한 비히클로서 작용할 수 있다.

Description

사포닌-함유 면역보강제를 포함하는 신규 백신 제형 {NEW VACCINE FORMULATIONS COMPRISING SAPONIN-CONTAINING ADJUVANTS}
본 발명은 수중유 에멀젼, 면역보강제로서의 이들의 용도, 및 상기를 포함하는 약학적, 면역학적 또는 백신 조성물에 관한 것이다.
인용참조
본 출원은 2009 년 9 월 10 일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 61/241,171 에 대한 우선권을 청구하고, 하기 특허 출원: 2008 년 2 월 7 일에 출원된 미국 특허 출원 번호 12/027,776, 2004 년 7 월 26 일에 출원된 미국 특허 출원 번호 10/899,181 (현재 미국 특허 7,371,395 로 승인됨) 및 2003 년 7 월 24 일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 60/490,345 를 추가로 참조한다. 하기 출원, 및 공소 동안 또는 그곳에 언급된 모든 문헌 ("출원 언급된 문헌") 및 출원 언급된 문헌 내의 언급된 또는 참조된 모든 문헌, 및 본원에 언급된 또는 참조된 모든 문헌 ("본원에 언급된 문헌"), 및 본원에 언급된 문헌 내의 언급된 또는 참조된 모든 문헌은, 본원에 언급된 임의의 제품에 대한 임의의 제조자의 지침, 설명, 제품 설명서 및 제품 시트 또는 본원에 참조에 의해 인용된 임의의 문헌과 함께, 참조로서 본원에 인용되고, 본 발명의 실시에 이용될 수 있다.
백신 내 면역보강제의 사용은 잘 알려져 있다. 면역보강제는 백신 항원과 조합되는 경우, 백신 항원 단독에 의해 유도되는 반응과 비교하여 백신 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 화합물이다. 항원 면역원성을 촉진하는 전략 중에는 백신 항원을 입자화 되도록 하는 것, 백신 항원을 중합 또는 유화시키는 것, 백신 항원을 캡슐화하는 방법, 숙주 선천적 사이토카인 반응을 증가시키는 방식, 백신 항원을 항원 제시 세포에 표적하는 방법이 있다 (Nossal, 1999, In: Fundamental Immunology . Paul (Ed.), Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa.; Vogel and Powell, 1995, In: Vaccine Design . The Subunit and Adjuvant Approach. Powell and Newman (Eds.), Plenum Press, NY, N.Y. p. 141). 백신 항원의 면역원성 증가에서 면역보강제의 필수적인 역할 때문에, 백신 제형에서의 면역보강제의 사용은 사실상 어디에나 존재한다 (Nossal, 1999, supra; Vogel and Powell, 1995, supra; 또한 PCT 공개 WO 97/18837 참조, 이의 교시는 참조로서 본원에 인용됨). 당업계에 잘 알려진 통상의 면역보강제는 자연에 널리 존재한다. 이들은 예를 들어, 수-불용성 무기 염, 리포좀, 마이셀 또는 에멀젼, 즉, 프로이드 (Freund) 면역보강제로 이루어질 수 있다. 기타 면역보강제는 상기 언급된 문헌 [Vogel and Powell, 1995] 에서 찾을 수 있다. 단일한 면역보강제 작용 메카니즘은 없지만, 필수적인 특징은 백신 항원 단독에 의해 유도된 반응과 비교하여 백신 항원에 대한 면역 반응을 유의하게 증가시키는 능력이다 (Nossal, 1999, supra; Vogel and Powell, 1995, supra). 이와 관련하여, 일부 면역보강제는 체액성 면역 반응 증대에 더욱 효과적이고; 다른 면역보강제는 세포-매개 면역 반응의 증가에 더욱 효과적이며 (Vogel and Powell, 1995, supra); 또다른 그룹의 면역보강제는 백신 항원에 대항하여 체액성 및 세포-매개 면역 반응을 모두 증가시킨다 (Vogel and Powell, 1995, supra).
일반적으로, 백신 제형에 사용되는 에멀젼은 오일, 수용액 및 계면활성제의 혼합물을 포함한다. 일부 에멀젼에는 친유성 계면활성제, 예컨대 SPAN 80® 및 친수성 계면활성제, 예컨대 TWEEN 80® 이 혼입된다.
그러나, 백신 면역보강제로서 사용된 에멀젼으로는, 특히 저장 또는 운송 동안 안정성 문제가 관찰될 수 있다. 이것은 상기 조성물이 농축된 면역원, 특별히 비-정제된 농축된 면역원을 포함하는 경우 특히 사실이다. 전형적으로, 이것은 비활성화된 (치사된) 백신에서 사용되는 면역보강제의 경우이다. 이 문제는 심지어 면역원이 동일 부피의 희석액에 더욱 농축되기 때문에 다가 백신 조성물의 경우 더욱 명백하다.
면역보강제 사용과 연관된 또다른 문제는 독성 또는 주사 부위에의 국소 염증과 같은 역반응 위험과 연결된다. 예를 들어, 주사 후 국소 염증 반응 및/또는 육아종이 야기될 수 있다. 이러한 역반응을 제한하기 위해, 에멀젼 중의 계면활성제 및 기타 성분은 감소될 수 있다; 그러나, 감소는 그 후 백신 조성물의 안정성의 감소를 야기할 수 있다. 그러므로, 증가된 안전성 및 안정성을 갖는 신규 면역보강제 및 상기 면역보강제를 함유하는 백신 조성물에 대한 필요성이 있다.
제 1 구현예에서 본 발명은 박테리아 또는 바이러스 현탁액, 특별히 농축되고 비-정제된 또는 약하게 정제된 박테리아 또는 바이러스 현탁액의 존재하에서 증가된 안정성을 갖는 신규 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다.
본 발명의 또다른 구현예는, 더욱 특히, 면역원일 수 있는 하나 이상의 유효 성분을 포함하는 약학 조성물의 전달을 위한 비히클로서 작용하는, 안정하고, 안전하며 쉽게 투여가능한, 특히 주사가능한 O/W 에멀젼을 제공한다.
본 발명의 또다른 구현예는 면역원에 의해 유도되는 면역 반응을 증가시키기 위한 면역보강제로서 작용하는 안정하고, 안전하며 주사가능한 O/W 에멀젼을 제공한다. 특히, 본 발명은 면역원을 함유하는 백신 조성물에 사용되는 경우 면역원에 대한 백신물 (vaccinate) 의 세포성 면역 반응, 체액성 면역 반응 또는, 바람직하게는, 둘 다를 증가시키는 신규 면역보강제를 제공한다.
본 발명의 또다른 구현예는 O/W 에멀젼을 포함하는 안정하고, 안정하며 면역원성인 조성물 또는 백신을 제공한다.
본 발명의 추가의 구현예는 본 발명의 면역보강제를 사용하는 백신 조성물의 제조 방법; 그렇게 수득된 백신 조성물; 및 이의 사용 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 또다른 구현예는 하나 이상의 바이알을 포함하는 키트를 제공한다. 하나의 구현예에서, 키트는 본 발명의 면역보강제 및 면역원 또는 기타 약학 제품을 함유하는 하나의 바이알을 포함한다. 또다른 구현예에서, 키트는 면역원 또는 기타 약학 제품을 제 1 바이알에, 본 발명에 따라 제조된 면역보강제를 제 2 바이알에 포함하며, 면역보강제는 사용전 면역원 또는 기타 백신 제품과 혼합되도록 디자인된다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 친수성 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 수산화알루미늄을 포함하는 선택적 수용액;
(4) 광유;
(5) 비이온성 친유성 계면활성제;
(6) 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르를 포함하는 낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제 (일반적으로 11 내지 13 의 HLB 값을 가짐).
또다른 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 친수성 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 광유;
(4) 비이온성 친유성 계면활성제;
(5) 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르를 포함하는 낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제 (일반적으로 11 내지 13 의 HLB 값을 가짐).
또다른 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 친수성 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 수산화알루미늄을 포함하는 선택적 수용액;
(4) 13 초과 40 미만, 특히 HLB≥13.5, 바람직하게는 HLB≥14 의 고 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제;
(5) 광유;
(6) 비이온성 친유성 계면활성제;
(7) 낮은 HLB 값 (약 9 내지 약 13 의 HLB 값) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제.
또다른 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 친수성 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 13 초과 40 미만, 특히 HLB≥13.5, 바람직하게는 HLB≥14 의 고 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제;
(4) 광유;
(5) 비이온성 친유성 계면활성제;
(6) 낮은 HLB 값 (약 9 내지 약 13 의 HLB 값) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제.
또다른 구현예에서, 본 발명은 백신물에서 면역학적 반응을 도출하는데 적합한 하나 이상의 면역원을 함유하는 신규 에멀젼을 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 본 발명은 추가로 에멀젼이 면역원에 의해 유도되는 면역 반응을 증가시키기 위한, 특히, 세포 반응, 체액 반응 또는 바람직하게는 둘 다를 증가시키기 위한 면역보강제로서 작용하는 그러한 조성물을 제공한다.
또다른 구현예에서 본 발명은 면역원, 특별히 예를 들어, 동결건조에 의해 또는 유리화에 의해 수득될 수 있는 건조 형태의 면역원, 또는 수용액으로의 면역원 (특별히 상기 건조 형태 또는 상기 수용액은 이온성 계면활성제, 예를 들어 사포닌을 부가적으로 포함하고, 임의로 수산화알루미늄을 부가적으로 포함함) 이 본 발명에 따른 면역보강제와 혼합된 백신 조성물의 제조 방법을 제공한다. 면역원은 비활성화 병원체, 약독화 병원체, 서브-유닛 항원, 정제된 항원, 비정제된 항원, 또는 박테리아, 효소, 식물, 곤충 또는 동물 세포, 플라스미드를 비롯한 발현 벡터 등을 사용하여 재조합적으로 제조된 항원으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다. 항원은 초여과, 초원심분리, 크기-배제 겔-여과, 이온-교환 크로마토그래피, 및 PEG-정제를 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 잘 공지된 수단에 의해 정제될 수 있다. 병원체는 박테리아, 바이러스, 원생동물, 또는 진균 기원일 수 있거나 면역원이 항독소를 구성할 수 있다.
또다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 백신 조성물을 백신물에 투여하는 것을 포함하는, 병원체에 대항하여 백신물에서 면역 반응을 유도하기 위한 방법을 제공한다.
또다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 정제된 면역원 및 에멀젼을 함유하는 단일 바이알을 포함하는 키트를 제공한다. 하나의 이러한 구현예에서, 단일 바이알 내에 함유된 면역원은 정제된 FMD 바이러스 항원을 포함한다.
또다른 구현예에서, 본 발명은 면역원, 특별히 건조 형태의 면역원, 또는 수성 배지 중의 수용액으로의 면역원 (특별히 상기 건조 형태 또는 상기 수용액은 이온성 계면활성제, 유리하게는 사포닌을 부가적으로 포함하고, 임의로 수산화알루미늄을 부가적으로 포함함) 을 제 1 바이알에, 및 본 발명에 따른 면역보강제 또는 에멀젼을 제 2 바이알에, 2 개 이상의 바이알을 포함하는 키트를 제공한다. 2 개 이상의 바이알을 포함하는 키트의 사용은 별개의 성분의 조합 (즉, 2 개 이상의 바이알의 내용물의 단일 바이알으로의 혼합물) 이 감소된 안정성의 백신 제형을 야기할 것인 경우에 특히 효과적이다.
본 명세서, 및 특히 청구항에서, "~ 을 포함하다", "~ 에 포함되다", "~ 를 포함하는" 등과 같은 용어는 미국 특허법에서 이러한 용어에 속하는 의미를 가질 수 있는데; 예를 들어, 이들은 "~ 이 포함되다", "~ 에 포함된", "~ 를 비롯한" 등을 의미하며; "~ 로 본질적으로 이루어지는" 및 "~ 로 본질적으로 이루어진다" 와 같은 용어는 미국 특허법에 의해 이들에 부여된 의미를 가질 수 있으며, 예를 들어 이들은 명쾌하게 언급되지 않은 요소를 허용하지만, 종래 기술에서 발견되거나 본 발명의 기본적인 또는 신규한 특성에 영향을 주는 요소는 배제한다는 것을 유념한다.
상기 및 기타 구현예가 기재되고, 또는 하기 상세한 설명에 의해 명백하고 이에 의해 포함된다.
당업자에게, 최적 방식을 비롯한 본 발명의 완전하고 가능한 명세가, 하기와 같은 첨부 도면에 대한 참조를 비롯하여 명세서의 나머지 부분에 더욱 특히 언급된다:
도 1 은 제 7, 22, 121, 및 330 일 (1 년 안정성 연구) 에 시험 1 & 2 의 백신 제형에 대한 전상 온도 (Phase Inversion Temperature :PIT) 측정 (전도성에 의해 측정됨) 그래프를 제공한다. PIT 측정은 백신 제형 안정성의 하나의 측정치이다.
도 2 는 제조 후 여러 날짜 (1 년 안정성 연구) 에 시험 3 & 4 의 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다;
도 3 은 제조 후 여러 날짜 (1 년 안정성 연구) 에 시험 5 & 6 의 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다;
도 4 는 제조 후 여러 날짜 (1 년 안정성 연구) 에 시험 7 & 8 의 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다;
도 5 는 제조 후 여러 날짜 (1 년 안정성 연구) 에 시험 9 의 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다;
도 6 은 본 발명에 따라 제조되고, 36 개월 동안 저장된 백신 제형 (시험 1-9 의) 에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다;
도 7 은 실시예 6 에 기재된 재료 및 방법에 따라 처리된 돼지의 직장 온도에서의 시간-의존적 변화를 나타내는 그래프를 제공한다;
도 8 은 실시예 6 에 기재된 재료 및 방법에 따라 처리된 돼지에 대해 관찰된 최대 온도 변화를 나타내는 그래프를 제공한다;
도 9 는 실시예 7 에 기재된 재료 및 방법에 따라 처리된 돼지에 대해 백신 효능 (PD50) 대 부과량 (㎍) 을 나타내는 그래프를 제공한다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 양상은 하기 상세한 설명에 기재되어 있거나, 이로부터 명백하다. 본 논의가 오직 예시적 구현예의 설명일 뿐이고, 본 발명의 가장 넓은 양상을 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 가장 넓은 양상은 예시적 구조에 포함되어 있는 것으로 당업자에 의해 이해된다. 사실, 본 발명의 범주 또는 취지로부터 벗어나지 않으면서 본 발명에 다양한 개질 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 하나의 구현예의 일부로서 설명된 또는 기재된 특징은 더욱 추가의 구현예를 산출하기 위한 또다른 구현예에서 사용될 수 있다. 특허청구범위 및 이의 등가의 범주 내에 있다면 본 발명이 이러한 개질 및 변형을 포함하는 것으로 의도된다. 모든 참조, 공개 특허, 및 본 출원을 통해 언급된 특허의 내용이 본원에 전체가 참조로서 인용된다.
편의를 위해, 명세서, 실시예, 및 특허청구범위에 사용되는 특정 용어를 하기에 모아놓았다.
본원에 사용되는 바와 같은, "동물" 이라는 용어는 인간을 비롯한 모든 척추 동물을 포함한다. 또한 배아 및 태아 단계를 비롯한 모든 발달 단계의 개개의 동물을 포함한다. 특히, "척추 동물" 이라는 용어에는 인간, 개류 (예를 들어, 개), 고양이류 (예를 들어, 고양이); 말류 (예를 들어, 말), 소류 (예를 들어, 젖소, 소), 돼지류 (예를 들어, 돼지) 뿐 아니라 조류가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 본원에 사용되는 바와 같은, "젖소" 또는 "소" 라는 용어는 임의의 연령의 소 기원의 동물을 말하는데 일반적으로 사용된다. 상호교환가능한 용어에는 "소", "송아지, "비육우", "황소", "어린암소", "젖소" 등이 포함된다. 상호교환가능한 용어에는 "새끼돼지", "암퇘지" 등이 포함된다. 본원에 사용되는 바와 같은, "조류" 는 닭 (육종, 육계 및 암탉), 칠면조, 오리, 거위, 메추라기, 꿩, 앵무새, 되새, 매, 까마귀 및 타조, 에뮤, 화식조를 비롯한 평흉류와 같은 그러나 이에 제한되는 것은 아닌 분류학적 계층 아바 (ava) 의 임의의 종 또는 아종을 말한다. "돼지" 또는 "새끼돼지" 라는 용어는 돼지류 기원의 동물을 의미하는 반면, "암퇘지" 는 생식 연령 및 능력이 있는 암컷을 말한다.
본원에 사용되는 바와 같은, "독성" 이라는 용어는 동물 숙주에 감염성인 능력을 보유하는 단리물을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은, "비활성화된 백신" 이라는 용어는 복제 또는 성장을 더 이상 할 수 없는 감염성 유기체 또는 병원체를 함유하는 백신 조성물을 의미한다. 병원체는 박테리아, 바이러스, 원생동물, 또는 진균 기원일 수 있다. 비활성화는 동결-해동, 화학적 처리 (예를 들어, 포르말린으로의 처리), 초음파분쇄, 방사선, 열 또는 유기체의 면역원성을 유지하면서 유기체의 복제 또는 성장을 억제하기에 충분한 임의의 통상적인 수단을 비롯한 다양한 방법에 의해 달성될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, "면역원성" 이라는 용어는 항원(들) 에 대항하는 숙주 동물에서의 면역 반응을 생성할 수 있다는 것을 의미한다. 상기 면역 반응은 특이적 감염성 유기체에 대항하는 백신에 의해 도출되는 방어 면역의 근거를 형성한다.
본원에 사용되는 바와 같은, "면역 반응" 이라는 용어는 동물에서 도출되는 반응을 말한다. 면역 반응은 세포성 면역 (cellular immunity: CMI); 체액성 면역을 말할 수 있거나 둘을 모두 수반할 수 있다. 본 발명은 또한 면역계의 일부에 제한되는 반응도 고려한다. 예를 들어, 본 발명의 백신 조성물은 증가된 감마 인터페론 반응을 특이적으로 유도할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, "항원" 또는 "면역원" 이라는 용어는 숙주 동물에서 특이적 면역 반응을 유도하는 성분을 의미한다. 항원은 전체 유기체, 치사된, 약독화된 또는 생; 유기체의 서브유닛 또는 일부; 면역원성 특성을 갖는 삽입체를 함유하는 재조합 벡터; 숙주 동물에 대해 제시시 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 의 조각 또는 절편; 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 에피토프, 합텐, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 대안적으로는, 면역원 또는 항원은 독소 또는 항독소를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, "다가" 라는 용어는 동일한 종으로부터 (즉, FMD 바이러스 혈청형의 상이한 단리물), 상이한 종으로부터 (즉, 파스퇴렐라 헤몰리티카 (Pasteurella haemolytica) 및 파스퇴렐라 뮬토시다 (Pasteurella multocida) 모두로부터의 단리물) 1 개 초과의 항원을 함유하는 백신, 또는 상이한 속으로부터의 항원의 조합을 함유하는 백신 (예를 들어, 파스퇴렐라 뮬토시다 (Pasteurella multocida), 살모넬라 (Salmonella), 대장균 (Escherichia coli), 하에모필러스 솜누스, (Haemophilus somnus) 및 클로스트리듐 (Clostridium) 으로부터의 항원을 포함하는 백신) 을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같은, "면역보강제" 라는 용어는 백신의 면역원성을 증가시키기 위해 백신에 첨가되는 물질을 의미한다. 면역보강제가 어떻게 작동하는지에 대한 메카니즘은 완전히 알려지지 않았다. 일부 면역보강제는 항원을 천천히 방출함으로써 면역 반응을 향상시키는 것으로 여겨지는 반면, 기타 면역보강제는 그 자체로 강하게 면역원성이고, 시너지적으로 작용하는 것으로 여겨진다. 공지된 백신 면역보강제에는 오일 및 물 에멀젼 (예를 들어, 완전 프로이드 면역보강제 및 불완전 프로이드 면역보강제), 코리네박테리움 파르붐 (Corynebacterium parvum), 바실러스 칼메테 구에린 (Bacillus Calmette Guerin), 수산화알루미늄, 글루칸, 덱스트란 술페이트, 산화철, 나트륨 알기네이트, Bacto-Adjuvant, 특정 합성 중합체, 예컨대 폴리 아미노산 및 아미노산의 공중합체, 사포닌, "REGRESSIN" (Vetrepharm, Athens, Ga.), "AVRIDINE" (N,N-디옥타데실-N',N'-비스(2-히드록시에틸)-프로판디아민), 파라핀 오일, 뮤라밀 디펩티드 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용되는 바와 같은, "에멀젼" 이라는 용어는 2 개 이상의 성분의 조합을 말하며, 첫번째 성분은 두번째 성분에 분산되어 있으며, 이곳에서 첫번째 성분은 불용성이다. 본 발명의 에멀젼의 하나의 예는 수상에 분산된 유상이다.
본원에 사용되는 바와 같은, "불완전 에멀젼" 이라는 용어는 하나 이상의 부가적인 구성성분이 "완전 에멀젼" 을 제조하기 위해 첨가되어야만 하는 조성물을 말한다. 본원에 사용되는 바와 같은, "완전 에멀젼" 이라는 용어는 본 발명의 "즉시 사용가능한" 면역학적 조성물에 상응하는 것으로 고려될 수 있다. 완전 에멀젼의 예는 본 발명의 방법에 따라 동물에게 투여하는 것으로 준비된 본 발명에 따른 면역학적 조성물이다.
본원에 사용되는 바와 같은, "약학적으로 허용가능한 담체" 및 "약학적으로 허용가능한 비히클" 이라는 용어는 상호교환적이며, 역효과 없이 숙주 내로 주입될 수 있는 백신 항원을 함유하기 위한 유체 비히클을 말한다. 당업계에 공지된 적합한 약학적으로 허용가능한 담체에는 멸균수, 식염수, 글루코오스, 덱스트로스 또는 완충 용액이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 담체에는 희석제, 안정화제 (즉, 당 및 아미노산), 방부제, 습윤제, 유화제, pH 완충화제, 점도 향상 첨가제, 착색제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 보조제가 포함될 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, "백신 조성물" 이라는 용어에는 숙주에서 면역 반응을 유도하는데 유용한 약학적으로 허용가능한 비히클 내 하나 이상의 항원 또는 면역원이 포함된다. 백신 조성물은 수령 동물의 연령, 성별, 체중, 종 및 상태, 및 투여 경로와 같은 인자를 고려하여, 투여량으로 그리고 의학 또는 수의학계의 당업자에게 잘 얼려진 기술에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로는 경피, 점막 투여 (예를 들어, 경구, 비강, 항문, 질) 를 통해 또는 비경구 경로 (피내, 근육내, 피하, 정맥내, 또는 복강내) 를 통해 이뤄질 수 있다. 백신 조성물은 단독으로 투여될 수 있거나, 또는 다른 치료 또는 요법과 공동-투여 또는 이어서 투여될 수 있다. 투여 형태에는 현탁액, 시럽 또는 엘릭시르, 및 비경구, 피하, 피내, 근육내 또는 정맥내 투여 (예를 들어, 주사 투여) 용 제제, 예컨대 멸균 현탁액 또는 에멀젼이 포함될 수 있다. 백신 조성물은 스프레이로서 투여되거나 식품 및/또는 물과 혼합되거나, 적합한 담체, 희석제 또는 부형제, 예컨대 멸균수, 생리학적 식염수, 글루코오스 등과의 혼련물로 전달될 수 있다. 조성물은 원하는 투여 경로 및 제제에 따라 보조 성분, 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 면역보강제, 젤화 또는 점성 향상 첨가제, 방부제, 풍미제, 착색제 등을 함유할 수 있다. 표준 약학 참조서, 예컨대 "Remington's Pharmaceutical Sciences," 1990 를 과도한 실험 없이 적합한 제제를 제조하기 위해 참조할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, "정제된" 이라는 용어는 절대적 순도를 필요로 하는 것은 아니며; 그보다는, 상대적인 용어로서 의도된다. 그러므로, 예를 들어, 정제된 면역원 제제, 예컨대 단백질 또는 비활성화 바이러스는, 면역원이 그의 자연 환경에 있는 것보다 면역원이 더욱 풍부한 것이다. 면역원 제제는 본원에서 면역원이 제제의 총 면역원 함량의 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 또는 98% 이상을 나타내는 것처럼 "정제된" 것으로서 광범위하게 언급된다. 최저 정도의 정제를 나타내는 "미정제 제제" 는 60% 미만, 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 또는 1% 미만 정도의 적은 면역원성 구성성분을 함유할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은 "고도로 정제된" 이라는 용어는 "중간정도로 정제된" 이라는 용어와 비교하면 "고도의 순도" 를 암시하는 것으로 의도된다. 상기 "고도의 순도" 에는 "고도로 정제된" 면역학적 제제 대 "중간정도로 정제된" 면역학적 제제 내 오염물의 감소된 백분율이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 본원에 논의된 바와 같은, "고도로 정제된" 면역학적 제제는 감소된 원하는 면역 반응, 증가된 원치않는 면역 반응 (예, 과민감성 반응), 또는 감소된 제형 안정성을 일으킬 수 있는 오염물의 비검출가능한 백분율에 대해 최저를 가질 수 있다. 유사하게는, "중간정도로 정제된" 면역학적 제제는 "최소로 정제된" 면역학적 제제에 비해 오염물의 비교적 감소된 백분율을 함유하고, 이것은 마찬가지로, "미정제 제제" 로서 지정된 제제에 비해 오염물의 감소된 백분율을 갖는다.
면역학적 제제 내 오염물에는 본 발명에 따른 면역학적 조성물에 부정적으로 기여하는 성분이 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 부정적으로 기여하는 오염물의 여러 예 중 하나는 동물에서 면역 반응을 도출하기 위한 본 발명의 면역학적 조성물의 능력을 감소시키는 오염물일 것이다.
순도 레벨의 다양화 (예, "고도로 정제된", "중간정도로 정제된", 등) 는 다양한 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 크로마토그래피 및 크기 배제 겔 여과의 조합은 "고도로 정제된" 또는 "중간정도로 정제된" 면역학적 제제를 산출할 수 있다. 면역원의 기원/유형의 차이, 뿐 아니라 정제 절차에서의 약간의 변형이 면역원 순도의 최종 정도에는 크게 영향을 줄 수 있다. 일반적으로, 본원에 사용되는 바와 같은, 최저 내지 최고 % 의 오염물을 갖는 면역학적 제제는 1) "고도로 정제된", 2) "중간정도로 정제된", 3) "최소로 정제된", 4) "미정제 제제"로서 각각 기재될 것이다. "고도로 정제된" 제제는 모든 유형의 오염물에 대해 최저 수준을 가질 것이다. "중간정도로 정제된" 제제는 대부분의 유형의 오염물의 비교적 적은 수준을 가질 것이나, 필적하는 "고도로 정제된" 제제에 대해 관찰되는 것보다는 높은 풍부도의 하나의 유형의 오염물을 가질 수 있다. 마찬가지로, "최소로 정제된 제제" 는 일부 유형의 오염물의 비교적 적은 수준을 가질 것이나, 필적하는 "중간정도로 정제된" 제제보다 높은 풍부도의 1 개 초과 유형의 오염물을 가질 수 있다. 예상되는 바와 같이, "미정제 제제" 는 본원에 논의된 다른 유형의 제제와 비교하여 모든 오염물 유형에 대해 최고 수준의 오염물을 갖는다.
본 발명은 하기를 포함하는, 신규 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 숙주에서 면역 반응을 유도할 수 있는 백신 항원 또는 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 비이온성 친수성 계면활성제;
(4) 광유;
하나의 구현예에서, 신규 수중유 (O/W) 에멀젼은 하기를 포함한다:
(1) 숙주에서 면역 반응을 유도할 수 있는 백신 항원 또는 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 13 초과 40 미만 (HLB>13, 특히 HLB≥13.5, 바람직하게는 HLB≥14) 의 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제;
(4) 광유;
(5) 비이온성 친유성 계면활성제; 및
(6) 낮은 HLB 값 (9 내지 13 의 HLB 값) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제.
또다른 구현예에서 본 발명은 하기를 포함하는, 신규 수중유 (O/W) 에멀젼을 제공한다:
(1) 숙주에서 면역 반응을 유도할 수 있는 백신 항원 또는 면역원을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌과 같은 이온성 계면활성제를 포함하는 수용액;
(3) 수산화알루미늄을 포함하는 선택적 수용액;
(4) 13 초과 40 미만 (HLB>13, 특히 HLB≥13.5, 바람직하게는 HLB≥14) 의 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제;
(5) 광유;
(6) 비이온성 친유성 계면활성제; 및
(7) 낮은 HLB 값 (9 내지 13 의 HLB 값) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제.
본 발명에 따라 제조된 일부 에멀젼은 4 개의 상이한 그룹의 계면활성제의 일원으로부터 선택된 4 개 이상의 계면활성제의 조합에 근거하며, 각 그룹에 속하는 하나 이상의 계면활성제를 사용하는 것이 가능하다. 상기 그룹 중 3 개는 비-이온성 계면활성제를 포함하고, 상기 그룹 중 1 개는 이온성 계면활성제, 예를 들어 사포닌을 포함한다.
여러 구현예 중 하나에서, 에멀젼 (본 명세서에서 다르게 언급되지 않는 경우 이것은 모든 구성성분을 포함하는 최종 에멀젼을 의미한다) 중 이온성 계면활성제 (2) 의 농도는 약 0.01% 내지 약 10% 이다.
여러 구현예 중 하나에서, 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 의 % 로서 표현되는, 에멀젼 (본 명세서에서 다르게 언급되지 않는 경우 이것은 모든 구성성분을 포함하는 최종 에멀젼을 의미한다) 중 비이온성 친수성 계면활성제 (7) 의 농도는 1% 내지 8%, 특히 1.5% 내지 6%, 바람직하게는 2% 내지 5%, 더욱 바람직하게는 2.5% 내지 4% 이다.
상기 그룹의 계면활성제는 낮은 HLB 값 (9 내지 13 의 HLB 값) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제를 포함한다. 상기 그룹에는 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르 (특히 5 개의 에톡실기) (예, 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트, 예컨대 TWEEN 81®, 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르, 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르 (특히 20 개의 에톡실기) (예, 에톡실화 소르비탄 트리올레에이트, 예컨대 TWEEN 85®), 에톡실화 소르비탄 트리스테아레이트, 예컨대 TWEEN 65®, 에톡실화 지방 알코올 (특히 5-10 개의 에톡실기) (예, BRIJ 76®, BRIJ 56®, BRIJ 96®), 에톡실화 지방산 (특히 5-10 개의 에톡실기) (예, Simulsol 2599®, MYRJ 45®), 에톡실화 피마자유 (특히 25-35 개의 에톡실기) (예, ARLATONE 650®, ARLATONE G®), 및 이들의 조합이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르 및 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르가 두 종류의 조합과 함께 바람직하다. 지방산은 바람직하게는, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 이소스테아레이트, 라우레이트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소르비탄의 바람직한 에톡실화 지방산 트리에스테르는 에톡실화 소르비탄 트리올레에이트, 예컨대 TWEEN 85®), 또는 에톡실화 소르비탄 트리스테아레이트, 예컨대 TWEEN 65® 을 포함한다.
여러 구현예 중 하나에서, 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 의 % 로서 표현되는, 비이온성 친수성 계면활성제 (4) 의 농도는 일반적으로 0.1% 내지 1.5%, 특히 0.2% 내지 1.4%, 바람직하게는 0.3% 내지 1.3%, 더욱 바람직하게는 0.4% 내지 1.2% 이다.
상기 제 2 그룹의 계면활성제는 높은 친수성-친유성 균형 (HLB) 값 (HLB>13, 특히 HLB≥13.5, 바람직하게는 HLB≥14) 을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제를 포함한다. 상기 그룹은 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르 (특히 20 개의 에톡실기) (예, 에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 예컨대 TWEEN 20®, 에톡실화 소르비탄 모노팔미테이트, 예컨대 TWEEN 40®, 에톡실화 소르비탄 모노스테아레이트 (예컨대 TWEEN 60®, 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트, 예컨대 TWEEN 80®, 에톡실화 지방 알코올 (특히 15-30 개의 에톡실기) (예, BRIJ 78®, BRIJ 98®, BRIJ 721®), 에톡실화 지방산 (특히 15-30 개의 에톡실기) (예, MYRJ 49®, MYRJ 51®, MYRJ 52®, MYRJ 53®), 비-이온성 블록-공중합체 (예, 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌 공중합체 (POE-POP), 예컨대 LUTROL F127®, LUTROL F68®), 및 이들의 조합을 포함한다.
비-이온성 블록-공중합체의 경우, % 는 낮을 수 있고 특히 0.1% 내지 0.5%, 더욱 특히 0.2% 내지 0.4% (에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v)) 일 수 있다.
바람직한 계면활성제 (4) 는 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르, 예컨대 상기 기재된 것들을 포함한다.
여러 구현예 중 하나에서, 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 의 % 로서 표현되는, 비이온성 친유성 계면활성제 (6) 의 농도는 0.1% 내지 2.5%, 특히 0.2% 내지 2%, 바람직하게는 0.2% 내지 1.5%, 더욱 바람직하게는 0.2% 내지 1.2% 이다.
상기 그룹의 계면활성제는 소르비탄의 지방산 에스테르 (예, 소르비탄 모노라우레이트, 예컨대 SPAN 20®, 소르비탄 모노팔미테이트, 예컨대 SPAN 40®, 소르비탄 모노스테아레이트, 예컨대 SPAN 60®, 소르비탄 트리스테아레이트, 예컨대 SPAN 65®, 소르비탄 모노올레에이트, 예컨대 SPAN 80®, 소르비탄 트리올레에이트, 예컨대 SPAN 85®, 소르비탄 모노이소스테아레이트, 예컨대 ARLACEL 987®, 소르비탄 이소스테아레이트, 예컨대 CRILL 6®), 만나이드의 지방산 에스테르 (예, MONTANIDE 80®, 만나이드 모노올레에이트 (예컨대 ARLACEL A®), 만나이드 디올레에이트, 만나이드 트리올레에이트, 만나이드 테트라올레에이트), 만나이드의 에톡실화 지방산 에스테르 (2, 3 또는 4 개의 에톡실기) (예, MONTANIDE 888®, MONTANIDE 103®, 에톡실화 만나이드 모노올레에이트, 에톡실화 만나이드 디올레에이트, 에톡실화 만나이드 트리올레에이트, 에톡실화 만나이드 테트라올레에이트), 및 이들의 조합을 포함한다.
지방산은 바람직하게는 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 이소스테아레이트, 라우레이트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직한 계면활성제 (6) 은 소르비탄의 지방산 에스테르, 특히 상기 기재된 것들, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 계면활성제는 동물 또는 식물 기원의 지방산을 가질 수 있다. 한 기원의 다른 것으로의 변화 (예를 들어 동물 TWEEN 80® 에서 식물 TWEEN 80® 로) 는 에멀젼의 제형에서 오직 약간만 조정하여 간단히 수행될 수 있을 것이다.
본 발명에 따른 에멀젼은 에멀젼의 부피에 대한 중량으로 1.2% 내지 10%, 특히 2% 내지 8%, 바람직하게는 3% 내지 7%, 더욱 바람직하게는 4% 내지 6% 의 계면활성제의 전체적인 농도를 가질 수 있다.
일반적으로, 본 발명에 따른 에멀젼은 ≥33℃ 인, 특히 33℃ 내지 65℃, 더욱 특히 36℃ 내지 60℃, 바람직하게는 37℃ 내지 55℃, 더욱 바람직하게는 38℃ 내지 50℃ 의 범위인 전상 온도 (PIT) 를 가질 수 있다.
PIT 는 유중수 에멀젼이 수중유 에멀젼 또는 탈-상 (에멀젼의 파괴 및 2 상의 분리) 으로 변하는 온도이다. PIT 값은 다양한 수단에 의해, 예를 들어 가시적 외양에 의해 (예, 실시예 2 참조) 또는 전도성에 의해 측정될 수 있다. 에멀젼을 에멀젼의 PIT 미만의 온도, 예를 들어 수조 내 약 25℃ 의 온도에 둔다. 온도를 점진적으로 증가시킨다. 에멀젼의 시각적 양상의 변화는 대조군 에멀젼과 비교하여, 현저하게 유동성, 점도, 2 상 분리, 표면으로의 유상의 이동으로 인한 표면 양상의 변화에서 관찰된다. 시각적 양상의 상기 변화가 관찰되는 온도가 에멀젼의 PIT 값이다. 대안적으로는, PIT 는 표면 근처에, 에멀젼 내에 위치한 탐침에 의해 측정된 약 5-8 밀리지멘스/센티미터 (mS/cm) 의 전도성 값 (수중유 에멀젼) 에서 약 0 mS/cm 의 값 (유중수 에멀젼) 까지의 빠른 통과에 의해 측정된다. 전이가 관찰된 온도가 에멀젼의 PIT 값이다. 당업자는 본 발명에 따른 에멀젼, 특히 상기 정의된 범위 내의 PIT 값을 갖는 에멀젼을 과도한 실험 없이 제조하기 위해, 계면활성제 및 오일의 각각의 농도를 비롯한, 계면활성제 및 오일의 조합을 결정할 수 있을 것이다.
일반적으로, 본 발명에 따른 에멀젼은 에멀젼의 부피에 대해 부피로, 3% 내지 55% 의 오일, 특히 5% 내지 50% 의 오일, 바람직하게는 10% 내지 40% 의 오일, 더욱 바람직하게는, 20% 내지 40% 의 오일을 함유할 수 있다. 정의에 의해, 본 명세서의 값 범위에는, 다르게 언급되지 않는 경우 범위의 제한이 언제나 포함된다.
사용된 오일은 파라핀 오일, 예컨대 이소파라핀 오일 및/또는 나프텐 오일, 스쿠알란, 프리스탄, 폴리이소부텐 오일, 수소화 폴리이소부텐 오일, 폴리데센 오일, 폴리이소프렌 오일, 폴리이소프로펜 오일 등이 포함되나 이에 제한되지 않는 광유일 수 있다. 본 발명에서 유용한 하나의 유리한 광유는 15 개 초과, 바람직하게는 15 내지 32 개의 탄소 원자수를 갖는 선형 또는 분지형 탄소 사슬을 포함하는 오일, 및 방향족 화합물이 없는 오일을 포함할 수 있다. 이러한 오일은 예를 들어, 상표명 "MARCOL 52®" 또는 "MARCOL 82®" (Esso, France 사제) 또는 "DRAKEOL 6VR®" 또는 "DRAKEOL 5®" "DRAKEOL 7®" (Penreco, USA 사제), "CLEAROL®" (Sonneborn, USA 사제), "Paraffin Oil Codex AAB2®" (Aiglon, France 사제), BLANDOL (Sonneborn, USA 사제), ONDINA 915 (Shell, UK 사제) 로 시판되는 것들일 수 있다.
오일은 또한 본원에 기재된 오일 중 선택된 2 개 이상의 오일을 임의의 비율로 포함하는 오일 혼합물일 수 있다. 오일 혼합물은 또한 상기 기재된 오일 중에서 선택된 하나 이상의 오일 및 하나 이상의 식물성 오일을 포함할 수 있고, 상기 식물성 오일은 유상의 약 0.1% 내지 약 33%, 바람직하게는 약 10% 내지 약 25% v/v 를 나타낸다. 상기 식물성 오일은 생분해성이고 바람직하게는 저장 온도 (약 +4℃) 에서 액체인 올레산이 풍부한 불포화 오일이거나, 적어도 상기 온도에서 액체인 에멀젼을 제공하는 것을 가능하게 하는 오일이다. 예를 들어, 식물성 오일은 땅콩유, 너트유, 해바라기유, 홍화유, 대두유, 달맞이꽃유 (onager oil) 등일 수 있다.
여러 구현예 중 하나에서, 친수성 계면활성제 (4) 및 (7) 에는 바람직하게는 분자의 동일한 친수성 부분을 갖는 계면활성제가 포함된다. 예를 들어, 각각의 친수성 계면활성제 (4) 및 (7) 에 대해 소르비탄의 에톡실화 지방산 에스테르를 사용한다. 예를 들어, TWEEN 85® 가 낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제로서 선택되는 경우, 높은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제는 유리하게는 에톡실화 소르비탄으로 구성된 친수성 부분을 가질 것이다 (예컨대 TWEEN 80®).
일반적으로, 본 발명은 멸균수, 생리학적 식염수, 글루코오스, 완충제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 적합한 수의학적으로 또는 약학적으로 허용가능한 비히클, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 수용액을 사용하는 것을 구상한다. 비히클, 부형제 또는 희석제에는 또한 폴리올, 글루시드 또는 pH 완충제가 포함될 수 있다. 비히클, 부형제 또는 희석제는 또한 예를 들어, 아미노산, 펩티드, 항산화제, 살박테리아제 및 세균발육억제 화합물을 포함할 수 있다. 수용액은 오일 및 계면활성제에 본 발명에 따른 에멀젼의 부피의 100% 를 수득하기 위한 양으로 첨가된다.
에멀젼의 친수성-친유성 균형 (HLB) 은 계면활성제의 친수성 또는 친유성 세기의 추정을 위해 허용된다. 양친매성 분자의 HLB 는 일반적으로 하기와 같이 계산된다:
Figure 112012028126411-pct00001
HLB 는 0 (최대 친유성 분자의 경우) 에서 20 (최대 친수성 분자의 경우) 까지의 범위의 값을 가질 수 있다. 계면활성제의 화학적 조성 (특히 예를 들어 에톡실기 또는 알켄 옥시드의 합) 에 따르면, 상기 추정은 변할 수 있고, HLB 값의 영역은 증가할 수 있다 (예를 들어, LUTROL F68® 은 29 의 HLB 를 갖는다). 계면활성제의 혼합물로는, 혼합물의 HLB 는 이의 중량비에 의해 균형이 맞춰진, 각각의 계면활성제의 HLB 의 합이다:
Figure 112012028126411-pct00002
본 발명에 따라 제조된 에멀젼의 하나의 구현예에서, 에멀젼의 최종 HLB 는 약 9 내지 약 12, 바람직하게는 약 9.5 내지 약 11.5, 더욱 바람직하게는 약 10 내지 약 11.5 이다.
본 발명은 파라핀 오일을 포함하는 에멀젼 (특히, 에멀젼의 부피 당 부피 (v/v) 로서 표현되는 약 10% 내지 약 40%, 바람직하게는 약 20% 내지 약 40% 의 농도); 소르비탄 지방산 모노에스테르 (비이온성 친유성 계면활성제로서), 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르 (낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제로서); 및 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르 (높은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제로서) 를 고려한다. 특히, 소르비탄 지방산 모노에스테르는 소르비탄 모노올레에이트 (특히, 에멀젼의 부피 당 중량 (w/v) 으로서 표현되는 0.2% 내지 1.5%, 바람직하게는 0.2% 내지 1.2% 의 농도) 이고, 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르는 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트 (특히 2% 내지 5%, 바람직하게는 2.5% 내지 4% (w/v) 의 농도) 이고, 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르는 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트 (특히 0.3% 내지 1.3%, 바람직하게는 0.4% 내지 1.2% (w/v) 의 농도) 이다. 예를 들어, 에멀젼은 파라핀 오일을 에멀젼의 부피 당 부피에 의해 약 29.3%, 소르비탄 모노올레에이트를 에멀젼의 부피 당 중량에 의해 0.6%, 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트를 에멀젼의 부피 당 중량에 의해 3.4%, 및 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트를 에멀젼의 부피 당 중량에 의해 0.75% 포함한다.
본 발명에 따른 제 2 구현예에서, 에멀젼은 파라핀 오일 (특히 10% 내지 40%, 바람직하게는 20% 내지 40% v/v 의 농도), 소르비탄 지방산 모노에스테르 (비이온성 친유성 계면활성제로서), 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르 (낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제로서), 및 비-이온성 블록-공중합체 (높은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제로서) 를 포함한다. 특히, 소르비탄 지방산 모노에스테르는 소르비탄 모노올레에이트 (특히 0.2% 내지 1.5%, 바람직하게는 0.2% 내지 1.2% w/v 의 농도) 이고, 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르는 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트 (특히 2% 내지 5%, 바람직하게는 2.5% 내지 4% w/v 의 농도) 이고, 비-이온성 블록-공중합체는 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌 중합체 (POE-POP) (특히 0.1% 내지 0.5%, 바람직하게는 0.2% 내지 0.4% w/v 의 농도) 이다. 예를 들어, 에멀젼은 파라핀 오일을 약 29.3% v/v, 소르비탄 모노올레에이트를 0.6% w/v, 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트를 3.4% w/v, 및 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트를 0.25% w/v 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼에 관한 것이다:
(1) 약물 또는 면역원, 바람직하게는 면역원과 같은 유효 성분을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌을 포함하는 수용액;
(3) 광유;
(4) 비이온성 친유성 계면활성제; 및
(5) 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르를 포함하는 낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제 (이것은 11 내지 13 의 HLB 값을 가질 수 있음).
또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼에 관한 것이다:
(1) 약물 또는 면역원, 바람직하게는 면역원과 같은 유효 성분을 포함하는 수용액;
(2) 사포닌을 포함하는 수용액;
(3) 수산화알루미늄을 포함하는 수용액;
(4) 광유;
(5) 비이온성 친유성 계면활성제; 및
(6) 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르를 포함하는 낮은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제 (이것은 11 내지 13 의 HLB 값을 가질 수 있음).
본 발명에 따른 에멀젼은 20 개 이하의 에톡시기를 함유할 수 있는 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르를 포함한다. 지방산은 동물 또는 식물 기원일 수 있고, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 이소스테아레이트, 라우레이트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 하나의 구현예에서, 에톡실화 지방산은 바람직하게는 올레에이트이다. 기타 성분 뿐 아니라, PIT 와 같은 에멀젼의 일반적인 특성은 상기 기재된 것과 동일한 특성을 가질 수 있다.
바람직하게는, 계면활성제 (6) 은 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르, 예컨대 에톡실화 소르비탄 디올레에이트, 에톡실화 소르비탄 디스테아레이트 또는 에톡실화 소르비탄 디이소스테아레이트, 에톡실화 소르비탄 디팔미테이트, 에톡실화 소르비탄 디라우레이트, 및 이들의 조합을 포함한다.
임의로, 명반; CpG 올리고뉴클레오티드 (ODN), 특히 ODN 2006, 2007, 2059, 또는 2135 (Pontarollo R.A. et al . , Vet . Immunol . Immunopath, 2002, 84: 43-59; Wernette CM . et al ., Vet . Immunol . Immunopath, 2002, 84: 223-236; Mutwiri G. et al ., Vet . Immunol . Immunopath, 2003, 91: 89-103); polyA-polyU ("Vaccine Design The Subunit and Adjuvant Approach", 편집 Michael F. Powell and Mark J. Newman, Pharmaceutical Biotechnology, 6: 03); 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드 (DDA) ("Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach", 편집 Michael F. Powell and Mark J. Newman, Pharmaceutical Biotechnology, volume 6: 157), N,N-디옥타데실-N',N'-비스(2-히드록시에틸) 프로판디아민 (예컨대 AVRIDINE®) (Ibid, p. 148), 카보머, 키토산 (예를 들어 미국 특허 일련 번호 5,980.912 호 참조) 을 포함하나 이에 제한되지 않는 기타 화합물이 보조-면역보강제로서 에멀젼에 첨가될 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 항원 또는 면역원 조성물 및 본 발명에 따라 제조된 면역보강제 또는 에멀젼을 포함하는 백신 조성물 또는 면역학적 조성물의 제조 방법을 제공한다. 항원 또는 면역원 조성물은 에멀젼 형성 동안 혼입될 수 있고 또는, 대안적인 구현예에서, 바람직하게는 사포닌을 부가적으로 포함하고, 임의로 수산화알루미늄을 부가적으로 포함하는 항원 또는 면역원 조성물이, 예를 들어, 사용 바로 직전과 같이 이후에 에멀젼에 첨가될 수 있다.
사용된 수용액의 전체 양은 처음 제조되는 에멀젼에 존재할 수 있다. 또는 상기 수용액의 오직 일부를 사용하여 에멀젼을 형성하고, 남은 양의 수용액을 면역원의 도입 후에 첨가할 수 있다. 면역원 또는 항원은 건조 형태일 수 있거나 일부 기타 적합한 고체 형태로 존재한 다음 에멀젼과 혼합되거나, 대안적으로는, 항원은 용액, 특히 수용액일 수 있고, 상기 용액을 에멀젼과 혼합할 수 있다.
계면활성제는 바람직하게는 이들의 용해도에 따라 오일 또는 수용액에 첨가된다. 예를 들어, 비이온성 친유성 계면활성제를 본 발명에 따른 오일에 첨가하면서 높은 HLB 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제를 수용액에 첨가한다.
유화는 당업자에게 공지된 통상의 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 하나의 구현예에서, 에멀젼은 에멀젼의 PIT 미만 온도, 특히 실온, 예를 들어 약 25℃ 에서 제조될 수 있다. 수상 및 유상을 기계적 진탕에 의해, 예를 들어 높은 전단력을 창출할 수 있는 회전자-고정자가 구비된 터빈으로 함께 혼합한다. 바람직하게는 진탕을 낮은 회전 속도에서 시작하고, 오일 중 수용액의 일반적으로 점진적인 첨가에 비례하여 점차 증가시킨다. 바람직하게는 수용액을 오일에 점진적으로 첨가한다. 오일/수용액의 비는 예를 들어, 약 40% 내지 약 55% 의 오일 (v/v) 의 농도의 유중수 (W/O) 에멀젼을 수득하기 위해 조정될 수 있다. 진탕이 중지되었을 때, 에멀젼은 O/W 에멀젼으로 점진적으로 변한다 (전상). 전상 후 필요한 경우, 수용액의 첨가에 의해 에멀젼을 희석하여 최종 에멀젼 내 원하는 농도의 오일을 수득한다. 에멀젼은 약 5℃ 에서 저장할 수 있다.
또다른 구현예에서, 에멀젼은 에멀젼의 PIT 초과 온도에서 제조될 수 있다. 제 1 단계에서, 수상 및 유상을 에멀젼의 PIT 초과의 온도에서 함께 혼합한다. 바람직하게는 수용액을 오일에 점진적으로 첨가한다. 오일/수용액의 비는 예를 들어 약 40% 내지 약 55% 의 오일 (v/v) 의 농도의 유중수 (W/O) 에멀젼을 수득하기 위해 조정될 수 있다. 유화는 전단력이 낮거나 없는 진탕에 의해, 예를 들어 정적 믹서 또는 마린 헬릭스로 또는 매우 낮은 회전 속도의 터빈으로 수행될 수 있다. 수득된 에멀젼은 유중수 (W/O) 에멀젼이다. 제 2 단계에서, 에멀젼을 PIT 미만으로 점진적으로 냉각시킨다. 상기 단계 동안, 에멀젼은 O/W 에멀젼으로 변한다 (전상). 전상 후 필요한 경우, 수용액의 첨가에 의해 에멀젼을 희석하여 최종 에멀젼 내 원하는 농도의 오일을 수득한다. 에멀젼은 약 5℃ 에서 저장할 수 있다.
에멀젼 내 액적의 크기는 약 100 nm 내지 약 500 nm 일 수 있다. 에멀젼은 백신 조성물 또는 약학 조성물을 제형화하기 위해 예를 들어, 면역보강제로서 사용될 수 있다. 에멀젼은 또한 건조된 제품, 특별히 예를 들어, 약독화 미생물 또는 생 재조합 벡터를 함유하는 건조 제품을 용해하기 위한 용매로서 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 예비-에멀젼은 수용액의 오직 일부로 제조된다. 상기 예비-에멀젼은 최종 조성물을 수득하기 위해 약물 또는 면역원, 바람직하게는 면역원과 같은 유효 성분의 현탁액의 첨가에 의해 희석될 수 있다. 대안적으로는, 예비-에멀젼은 수용액으로 희석되고 건조 제품과 같은 건조된 제품을 용해하는데 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 면역원 또는 항원은 비활성화 병원체, 약독화 병원체, 면역원성 서브유닛 (예, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 에피토프, 합텐), 또는 면역원성 삽입체를 갖는 플라스미드를 포함하는 재조합 발현 벡터로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 면역원은 비활성화된 또는 치사된 미생물이다. 본 발명의 또다른 구현예에서, 백신 조성물은 살모넬라 티피뮤리움 (Salmonella typhimurium), 살모넬라 엔테리티디스 (Salmonella enteritidis), 감염성 조류 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬 질환 바이러스 (NDV), 산란저하 증후군 바이러스 (EDS), 또는 감염성 점액낭병 바이러스 (IBDV), 조류 독감 바이러스, 등 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 조류 병원체 군으로부터 선택되는 면역원을 포함한다.
대안적으로는, 백신 조성물은 고양이 헤르페스바이러스 (FHV), 고양이 칼리시바이러스 (FCV), 고양이 백혈병 바이러스 (FeLV), 고양이 면역결핍 바이러스 (FIV), 광견병 바이러스, 등 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 고양이 병원체로부터 선택되는 면역원을 포함한다.
또다른 구현예에서, 본 발명의 백신 조성물은 광견병 바이러스, 개 헤르페스바이러스 (CHV), 개 파보바이러스 (CPV), 개 코로나바이러스, 렙토스피라 카니콜라 (Leptospira canicola), 렙토스피라 익테로하에모라지아에 (Leptospira icterohaemorragiae), 렙토스피라 그립포티포사 (Leptospira grippotyphosa), 보렐리아 부르그도르페리 (Borrelia burgdorferi), 보르데텔라 브론키셉티카 (Bordetella bronchiseptica) 등 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 개 병원체로부터 선택되는 면역원을 포함한다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 조성물은 말 헤르페스바이러스 (유형 1 또는 유형 4), 말 독감 바이러스, 파상풍, 서부 나일강 열바이러스, 등 또는 이들의 조합과 같은 말 병원체로부터 선택된 면역원을 포함한다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 조성물은 구제역 바이러스 (FMDV), 광견병 바이러스, 소 로타바이러스, 소 파라인플루엔자 바이러스 유형 3 (bPIV-3), 소 코로나바이러스, 소 바이러스성 설사 바이러스 (BVDV), 소 호흡기 세포융합 바이러스 (BRSV), 감염성 소 비기관염 바이러스 (IBR), 대장균 (Escherichia coli), 파스퇴렐라 뮬토시다 (Pasteurella multocida), 파스퇴렐라 하에몰리티카 (Pasteurella haemolytica) 등 및 이들의 조합과 같은 소 병원체로부터 선택된 면역원을 포함한다.
본 발명의 더욱 또다른 구현예에서, 조성물은 돼지 독감 바이러스 (SIV), 돼지 써코바이러스 유형 2 (PCV-2), 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 (PRRS), 가-광견병 바이러스 (PRV), 돼지 파보바이러스 (PPV), FMDV, 마이코플라즈마 하이프네우모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae), 에리시펠로트릭스 류시오파티아에 (Erysipelothrix rhusiopathiae), 파스퇴렐라 뮬토시다 (Pasteurella multocida), 보르데텔라 브론키셉티카 (Bordetella bronchiseptica), 대장균 (Escherichia coli) 등, 및 이들의 조합과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 돼지 병원체로부터 선택된 면역원을 포함한다.
본 발명의 또다른 구현예는 약학적으로 허용가능한 비히클 중 에멀젼 및 하나 이상의 면역원을 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 바이러스, 박테리아, 진균 등을 포함하는 면역원은 당업자에게 잘 알려진 적합한 배양 배지 또는 숙주 세포주 및 통상의 방법을 사용하는 시험관 내 배양 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, PRRS 는 적합한 세포주, 예컨대 MA-104 세포주 (이들 중에서, 미국 특허 일련 번호 5,587,164; 5,866,401; 5,840,563; 6,251,404 를 참조) 에서 배양될 수 있다. 유사한 방식으로, PCV-2 는 PK-15 세포주를 사용하여 배양될 수 있고 (미국 특허 일련 번호 6,391,314 참조); SIV 는 알 상에 배양될 수 있고 (미국 특허 일련 번호 6.048.537 참조); 마이코플라즈마 하이프네우모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae) 는 적합한 배양 배지에서 배양될 수 있다 (미국 일련 번호 5,968,525; US 5.338.543; Ross R. F. et al., Am . J. Vet . Res ., 1984, 45: 1899-1905 참조).
비활성화된 면역학적, 또는 백신 조성물을 수득하기 위해, 병원체는 바람직하게는 수확 후 비활성되고, 임의로 예를 들어, 포르말린 또는 포름알데히드, 베타-프로피오락톤, 에틸렌이민, 2진 에틸렌이민 (BEI) 을 사용하는 화학적 처리 및/또는 물리적 처리 (예를 들어, 열 처리 또는 초음파분쇄) 에 의해 정화에 적용된다. 비활성화를 위한 방법은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, FMD 바이러스는 에틸렌이민에 의해 (Cunliffe, HR, Applied Microbiology, 1973, p. 747-750) 또는 고압에 의해 (Ishimaru et al, Vaccine 22 (2004) 2334-2339) 비활성화될 수 있고, PRRS 바이러스는 베타-프로피오락톤 처리에 의해 (Plana - Duran et al., Vet . Microbiol, 1997, 55: 361-370) 또는 BEI 처리에 의해 (미국 특허 일련 번호 5,587,164) 비활성화될 수 있고; PCV-2 바이러스의 비활성화는 에틸렌이민 처리를 사용하여 또는 베타-프로피오락톤 처리에 의해 달성될 수 있고 (미국 특허 일련 번호 6,391,314); 돼지 독감 바이러스는 Triton 과 같은 세제를 사용하여, 또는 포름알데히드 처리에 의해 (미국 특허 일련 번호 6,048,537) 비활성화될 수 있고; 마이코플라즈마 하이프네우모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae) 박테리아는 포름알데히드 처리에 의해 (Ross R. F. supra), 에틸렌이민 또는 BEI 처리에 의해 (WO 91/18627 참조) 비활성화될 수 있다.
비활성화 병원체는 통상의 농축 기술, 특히 초여과에 의해 농축되고 및/또는 특히 겔-여과, 수크로오스 구배 상의 초원심분리, 또는 선택적 침전 (특히 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 의 존재하에서) 을 포함하나 이에 제한되지 않는 크로마토그래피를 사용하는 통상의 정제 수단에 의해 정제될 수 있다.
본 발명에 따른 백신 조성물에 유용한 면역원은 또한 발현 벡터를 포함한다. 이러한 벡터에는 생체 내 재조합 발현 벡터, 예컨대 폴리뉴클레오티드 벡터 또는 플라스미드 (EP-A2-1001025; Chaudhuri P, Res . Vet . Sci. 2001, 70: 255-6), 아데노바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터, 예컨대 계두 (fowlpox) (미국 특허 일련 번호 5,174,993; 5,505,941; 및 5,766,599) 또는 카나리폭스 벡터 (미국 특허 일련 번호 5,756,103) 와 같으나 이에 제한되지 않는 바이러스 벡터 또는 박테리아 벡터 (대장균 (Escherichia coli) 또는 살모넬라 종 (Salmonella sp .)) 가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 또한 다가 면역학적 조성물 또는 조합 백신 조성물의 제형을 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 제조된 조합 소 박테린에 유용한 항원에는 마이코플라즈마 보비스 (Mycoplasma bovis), 파스퇴렐라 종 (Pasteurella sp .), 특히 P. 뮬토시다 (P. multocida) 및 P. 하에몰리티카 (P. haemolytica), 하에모필러스 종 (Haemophilus sp .), 특히 H. 솜누스 (H. somnus), 클로스트리디움 종 (Clostridium sp .), 살모넬라 (Salmonella), 코리네박테리움 (Corynebacterium), 스트렙토코쿠스 (Streptococcus), 스타필로코쿠스 (Staphylococcus), 모라셀라 (Moraxella), 대장균 (E. coli) 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 추가로 숙주에게 본 발명에 따른 면역학적 조성물 또는 백신 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 숙주, 예를 들어, 동물에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 상기 방식으로 도출되는 면역 반응은 현저히는 항체 및/또는 세포성 면역 반응, 특히, 감마-인터페론 반응이다.
특히, 본 발명은 병원체성 유기체로의 동물의 감염 (예를 들어, 바이러스, 박테리아, 진균, 또는 원생동물 기생충에 의한 감염) 에 의해 야기되는 증상에 대항하여 면역화하기 위한, 또는 이에 대해 예방하기 위한 또는 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 인간, 개류 (예를 들어, 개), 고양이류 (예를 들어, 고양이); 말류 (예를 들어, 말), 소류 (예를 들어, 소) 및 돼지류 동물 (예를 들어, 돼지), 뿐 아니라 닭, 칠면조, 오리, 거위, 메추라기, 꿩, 앵무새, 되새, 매, 까마귀 및 평흉류 (타조, 에뮤, 화식조 등) 을 포함하나 이에 제한되지 않는 조류를 포함하나 이에 제한되지 않는 척추 동물에 유용하다.
발명의 특정 양상에서, 본 방법은 본 발명에 따라 제조된 백신 조성물을 투여함에 의한 출산 전 임신 암컷 (여성) 의 백신접종으로 이루어진다. 상기 방법에는 백신접종 프로토콜에 의해 도출된 방어 항체의 유도 및 백신접종된 임신 암컷 (여성) 으로부터의 상기 방어 항체를 이들의 자손으로의 이동을 추가로 포함한다. 이러한 모체 항체의 이동은 후속하여 자손을 질환으로부터 보호한다.
본 발명에 따라 제조되는 백신 조성물의 투여량은 백신접종되는 동물의 종, 종자, 연령, 크기, 백신접종 이력, 및 건강 상태에 따라 다를 것이다. 항원 농도, 부가적인 백신 구성성분, 및 투여 경로 (즉, 피하, 피내, 경구, 근육내 또는 정맥내 투여) 와 같은 다른 인자가 또한 유효 투여량에 영향을 줄 것이다. 투여되는 백신의 투여량은 백신의 항원 농도, 투여 경로, 및 백신접종되는 동물의 연령 및 상태에 근거하여 쉽게 결정된다. 각각의 배치의 항원을 개별적으로 검정할 수 있다. 대안적으로는, 상이한 투여량의 체계적인 면역원성 시험 뿐 아니라 LD50 연구 및 기타 스크리닝 절차는 본 발명에 따른 백신 조성물의 효과적인 투여량을 과도한 실험 없이 측정하는데 사용될 수 있다. 하기 제시되는 예로부터, 본원에 기재된 백신 조성물을 사용하기 위해 어느 정도의 적합한 투여량 및 어느 정도의 적합한 부피가 적합할 것인지가 명백할 것이다. 중요 인자는 투여분이, 자연적 감염과 연관된 사망률 및 이환률의 감소에 의해 증명되듯이, 자연적 감염에 대항하여 적어도 부분적 보호 효과를 제공한다는 것이다. 적합한 부피는 마찬가지로 당업자에 의해 쉽게 규명된다. 예를 들어, 조류 종에서, 투여 부피는 약 0.1 ml 내지 약 0.5 ml, 유리하게는, 약 0.3 ml 내지 약 0.5 ml 일 수 있다. 고양이류, 개류 및 말류 종의 경우, 투여 부피는 약 0.2 ml 내지 약 3.0 ml, 유리하게는 약 0.3 ml 내지 약 2.0 ml, 더욱 유리하게는, 약 0.5 ml 내지 약 1.0 ml 일 수 있다. 소류 및 돼지류 종의 경우, 투여 부피는 약 0.2 ml 내지 약 5.0 ml, 유리하게는 약 0.3 ml 내지 약 3.0 ml, 더욱 유리하게는 0.5 ml 내지 약 2.0 ml 일 수 있다.
반복된 백신접종은 초기에 면역 반응을 향상시키기 위한 주기적인 시간 간격으로 또는 최종 투여 이래로 장시간이 경과했을 때 바람직할 수 있다. 본 발명의 하나의 구현예에서, 백신 조성물은 비경구 주사 (즉, 피하, 피내, 또는 근육내) 로서 투여된다. 조성물은 1 회 투여분으로서 투여될 수 있거나, 대안적인 구현예에서, 약 2 내지 약 6 주, 바람직하게는 약 2 내지 약 5 주의 간격으로 제공되는 약 2 내지 약 5 회 투여분의 반복 투여로 투여될 수 있다. 그러나, 당업자는 백신접종 사이의 투여 횟수 및 시간 간격은 백신접종된 동물의 연령; 동물의 상태; 면역화 경로; 투여분 당 이용가능한 항원의 양; 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 다수의 인자에 따라 다르다는 것을 인지할 것이다. 초기 백신접종의 경우, 기간은 일반적으로 주보다 길 것이며, 바람직하게는 약 2 내지 약 5 주 사이일 것이다. 미리 백신접종된 동물의 경우, 부스터 백신접종은, 임신 전 또는 동안, 약 1 년 간격으로 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 바늘없는 주사기, 예컨대 PIGJET®, AVIJET®, DERMOJET® 또는 BIOJECTOR® (Bioject, Oregon, USA) 를 사용하여 백신 조성물을 투여하는 것을 고려한다. 당업자는 백신접종되는 동물의 종; 동물의 연령 및 체중 등과 같은 인자와 관련하여 필요한 주사기의 세부사항을 과도한 실험 없이 조정할 수 있다.
본 발명의 하나의 구현예에서, 방법은 본 발명에 따른 에멀젼으로 제형화된 백신 조성물의 단일 투여를 포함한다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 백신 조성물은 비활성화된 FMD 바이러스 조성물인 반면, 대안적인 구현예는 비활성화된 PCV2 바이러스 조성물을 포함하는 백신을 제공한다. 기타 면역학적 조성물 또는 백신은 비활성화된 마이코플라즈마 하이프네우모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae), PRRS 및 SIV 을 포함하나 이에 제한되지 않는 단일 투여 섭생에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 추가로, 단백질 또는 펩티드, 비활성화된 또는 약독화된 바이러스, 항체, 알레르기 유발원, CpG ODN, 성장 인자, 사이토카인 또는 항생제, 특히 CpG ODN 또는 사이토카인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 면역원을 포함하고 본 발명에 따라 제조된 약학 조성물을 숙주에게 투여하는 것을 포함하는, 숙주, 예를 들어 동물의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 닭, 돼지, 젖소 또는 소와 같은 동물에서 성장능을 개선시키기 위해 사용될 수 있다.
본 발명은 추가로, 본 발명에 따라 제조된 에멀젼과 조합된 정제된 면역원과 같은 성분을 함유하는 단일 바이알을 포함하는 키트에 관한 것이다. 키트는 사포닌 및 수산화알루미늄과 조합된 면역원 또는 약학 조성물과 같은 성분을 함유하는 제 1 바이알, 및 본 발명에 따라 제조된 에멀젼을 함유하는 제 2 바이알을 대안적으로 포함할 수 있다. 면역원은 본원에 기재된 바와 같이 건조 형태, 건조된 형태이거나 수용액으로 있을 수 있다.
본 발명은 이제 하기 비-제한적인 실시예에 의해 추가로 기재될 것이다.
실시예 1
에멀젼 제조 방법
에멀젼을 전상 방법에 의해 제조하였다. 제 1 단계에서, 수상 및 유상을 +40℃ 에서 함께 혼합하였다. 제 2 단계에서, 에멀젼을 +5℃ 에서 PIT 미만으로 점차적으로 냉각시켜 O/W 에멀젼을 수득하였다. 전상 후, 최종 에멀젼 (즉, 백신 제형) 을 혼합하고, 이어서 +5℃ 에 저장하였다 (표 1 에 요약됨).
표 1
Figure 112012028126411-pct00003
소르비탄 모노올레에이트 (SPAN 80®) 및 소르비탄 트리올레에이트 (20 OE) (TWEEN 85®) 를 유상에 도입하였다. 소르비탄 모노올레에이트 (20 OE) (TWEEN 80®) 는 파라핀 오일과 혼화되지 않았다. TWEEN 80® 의 20% (w/v) 용액을 백신과 동일한 완충액에서, 예를 들어, 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 (pH 7.8) 에서 제조하였다. 진탕을 중지하였을 때, 에멀젼은 수중유 에멀젼으로 변했다. 에멀젼을 5℃ 냉 챔버에 4 시간 이상 동안 두었다. 본 단에서, 에멀젼은 50% 의 유상을 함유하는 예비-에멀젼이었다.
제 2 단계 : 수상 #2 를 120 ml 의 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 pH 7.8 과 면역원 (비활성화된 FMDV, 마이코플라즈마 하이프네우모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae) 면역원, 또는 PCV-2 면역원, 하기 기재되는 바와 같음), 사포닌, 및 수산화알루미늄으로 제조하였다. 제 1 단계에서 제조된 예비-에멀젼을 약 5℃ 로 냉각하고, 동일한 온도에서 수상 #2 의 부피의 절반을 첨가함으로써 희석하고, 자석 막대의 회전에 의해 1 분 동안 혼합하였다. TSAP 에멀젼 중의 최종 계면활성제 농도는 4.75% (w/v) 였다.
일반적으로, 본원에 기재된 백신 제형의 구성성분을 하기 순서대로 첨가하였다: 1) 5℃ 에서 Media 102, 2) 사포닌, 3) 수산화알루미늄, 4) 항원 및 5) 불완전 에멀젼 (즉, 유상 + 수상 #1 의 조합). 본원에서 제조된, TSAP 백신은 5℃ 에서 36 개월까지 안정하다.
동일한 제조 방법을 사용하여, 기타 에멀젼을 하기 실시예에서 기재되는 바와 같이 수득할 수 있다:
TSAP -2 에멀젼
TSAP-2 에멀젼은 33% 의 유상을 함유하는 O/W 에멀젼이다. 유상 (120 ml) 은 MARCOL 82® 88% v/v, SPAN 80® 1.8% w/v 및 TWEEN 85® 10.2% w/v 를 함유한다. 수상 #1 (120 ml) 은 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 (pH 7.8) 97.75% v/v, 및 LUTROL F127® 0.75% w/v 를 함유한다. 수상 #2 (120 ml) 은 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 (pH 7.8), 사포닌, 수산화알루미늄으로 구성되며, 임의로 면역원을 함유한다. TSAP-2 에멀젼 중의 최종 계면활성제 농도는 약 4.25% w/v 이다.
TSAP -3 에멀젼
TSAP-3 에멀젼은 50% 의 유상을 함유하는 O/W 에멀젼이다. 유상 (160 ml) 은 MARCOL 82® 92% v/v, SPAN 85® 1.8% w/v 및 BRIJ 96® 6.2% w/v 를 함유한다. 수상 #1 (160 ml) 은 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 (pH 7.8) 98.5% v/v, 및 LUTROL F127® 0.5% w/v, 사포닌, 수산화알루미늄을 함유하며, 임의로 면역원을 함유한다. TSAP-3 에멀젼 중의 최종 계면활성제 농도는 약 4.25% w/v 이다.
TSAP -4 에멀젼
TSAP-4 에멀젼은 10% 의 유상을 함유하는 O/W 에멀젼이다. 유상 (120 ml) 은 MARCOL 82® 60% v/v, SPAN 40® 17.2% w/v 및 ARLATONE 650® 22.8%) w/v 를 함유한다. 수상 #1 (120 ml) 은 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 (pH 7.8) 97.5% v/v 및 TWEEN 20® 2.5% w/v 를 함유한다. 수상 #2 는 400 ml 의 포스페이트 2나트륨 및 1칼륨 0.02M 등장성 완충액 pH 7.8, 사포닌, 수산화알루미늄으로 제조되고, 임의로 면역원을 함유한다. 100 ml 의 예비-에멀젼을 400 ml 의 수상 #2 로 희석하여 TSAP-3 에멀젼을 수득하였다. TSAP-4 에멀젼 중의 최종 계면활성제 농도는 4.25% w/v 이다.
실시예 2
에멀젼의 전상 온도 ( PIT ) 의 측정
10 ml 의 TSAP 에멀젼을 약 25℃ 의 온도의 수조에서 유리관 내에 두었다. TSAP 에멀젼은 백색 균질 에멀젼이었다. 수조 내 온도를 점진적으로 증가시켰다. 에멀젼 내 변화가 시각적으로 관찰되었다 (에멀젼은 황갈색 유상의 표면으로의 이동으로 인해 2 개의 분리된 상이 되었음). 상기 변화는 에멀젼의 파손의 특징이다. 상기 변화가 관찰되는 온도가 에멀젼의 PIT 값이다. TSAP 에멀젼의 경우, PIT 는 약 36℃~46℃ 의 범위이다. 도 1-5 는 본 발명에 따라 제조된 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다 (1 년 안정성 연구). 도 6 은 본 발명에 따라 제조되고 36 개월 동안 저장된 (3 년 안정성 연구) 백신 제형에 대한 PIT 측정 그래프를 제공한다.
실시예 3
연구 #1 : 실시예 1 에 따라 제조된 백신 제형의 안정성
본 표는 실시예 1 에 기재된 방법에 따라 제조된 백신 제형의 안정성 (즉, 제형이 수중유 에멀젼으로서 남아있는 시간 (개월)) 을 나타낸다. 제형은 표시된 구성 성분 (제형 1-13 참조) 으로 구성되고, 각각의 상기 제형에 대해 사용되는 항원은 중간정도로 ~ 고도로 정제된 것으로 고려되었던 비활성화된 FMD 바이러스 단리물로 구성되었다.
표 2 에서 나타나는 바와 같이, 수산화알루미늄의 존재는 특별히 최고 농도의 항원이 사용된 경우 증가된 백신 안정성 (제형 3, 5, 및 7 의 12 개월에서 비교적 감소된 안정성과 제형 9, 11, 및 13 의 향상된 안정성 비교) 을 제공한다. 평균적으로, 높은 항원-함유 제형 (즉, 제형 9, 11, 및 13) 중 수산화알루미늄의 존재는 유/수 안정성 시간을 약 3-6 개월 (즉, 제형 3, 5, 및 7 에 대해 관찰된 유/수 안정성) 에서 약 12 개월 (즉, 제형 9, 11 대해 관찰된 유/수 안정성), 또는 심지어 약 24 개월 (즉, 제형 13 에 대해 관찰된 유/수 안정성) 까지 증가시킨다.
표 2
Figure 112012028126411-pct00004
실시예 4
연구 #2: 실시예 1 에 따라 제조된 백신 제형의 안정성
백신 제형을 실시예 1 에 기재되고 표 3 에 나타내진 구성성분 양에 따라 제조하였다. 이전에 기재된 바와 같이, 구성성분의 첨가 순서는 다음과 같았다: 1) Media 102, 2) 사포닌, 3) 수산화알루미늄, 4) 정제된 항원, 및 5) 불완전 에멀젼 (불완전 에멀젼이 유상 + 수상 #1 로서 정의된 실시예 1 참조). 정제된 항원은 FMDV 항원 O1 Campos, A24 Cruzeiro, 및 C3 Indaial 이었다. 총 부피는 Media 102 (M102, 하기 나타내진 처방) 를 사용하여 조정하였다.
표 3
Figure 112012028126411-pct00005
표 4
Figure 112012028126411-pct00006
백신 안정성을 표 5 에 따라 측정하였다.
표 5
Figure 112012028126411-pct00007
각각의 백신 제형에 대해, 전상 온도 (PIT) 를 실시예 2 에 기재된 바와 같이 측정하였다. 첨가된 항원의 양을 백신 투여분 당 "헤마글루티닌 단위 (hemagluttinin units)" (UH) 에 의해 표시한다. 표 6 은 PIT 데이터를 요약하고 PIT 가 36 개월까지 일반적으로 안정하게 남아있었다는 것을 나타낸다. 도 6 은 시험 1-10 의 백신 제형에 대한 전도성에 의한 PIT 측정의 그래프를 제공한다 (표 6 에 요약됨). 사포닌-면역보강제 제형 (즉, 시험 3, 4, 6, 7, 9, 및 10) 으로 관찰된 PIT 의 증가는 비-사포닌-면역보강제 제형 (즉, 시험 2, 5, 및 8) 에 비해 안정성과 관련하여 그 자체가 향상된 것으로 여겨진다.
표 6
Figure 112012028126411-pct00008
에멀젼의 입자 크기 분포 (표 7) 는 36 개월 시간 기간에 걸쳐 연구 범주에서 언급된 범위 내에 남아있었다.
표 7
Figure 112012028126411-pct00009
실시예 5
TSAP 에멀젼으로 면역보강된 구제역 ( FMD ) 바이러스 백신의 다중 투여분의 투여 후 혈청학 결과 - 소 연구.
재료 및 방법: 12 내지 14 개월 령의, 백신접종을 전혀 받지 않고, FMD 항체가 없는 90 마리의 소를 선택하고, 랜덤화하고, 백신접종되는 9 마리 동물의 10 개 그룹으로 분배하였다. 동물을 제 1 일에 표시된 백신 제형 (9807-9814) 으로 백신접종하였다. 표 8, 9, 10, 및 11 에 열거된 제형 각각은 실시예 1 에 따라 제조되었고, 실시예 1 에 언급된 구성성분을 모두 포함했으며, 사포닌 및 수산화알루미늄 양은 하기와 같이 다양했다: 사포닌의 양은 0, 0.7, 1.3, 또는 2.7 mg/투여분이고, Algel 수산화알루미늄의 양은 0% 또는 0.37% 이다. 8 개 그룹은 근육내 경로에 의해 백신접종하였고 (IM 그룹), 2 개 그룹은 피하 경로에 의해 백신접종하였다 (SC 그룹). IM 그룹의 각각의 동물을 제 56 일에 근육내 경로에 의해 그리고 제 84 일에 피하 경로에 의해 각각의 백신으로 백신접종시켰다. SC 그룹의 각각의 동물을 제 56 일 및 제 84 일에 피하 경로에 의해 각각의 백신으로 백신접종시켰다.
표 8 에 백신 제형의 안정성을 요약한다.
표 8
Figure 112012028126411-pct00010
근육내 경로에 의한 첫번째 백신접종 후 임의의 병반은 없었다. 근육내 경로에 의한 두번째 백신접종 후 일부 병반이 있었으나, 모든 상기 병반은 근육내 경로에 의한 두번째 백신접종 28 일 후에 희미해졌다. 표 9 에는 구체화된 데이터에 대한 동물 체중 측정에 의해 표시되는 바와 같은, 백신 제형의 안정성을 요약한다.
표 9
Figure 112012028126411-pct00011
결과: 표 10 에는 실험 동안 수집된 혈청학적 데이터를 요약한다. O1 Campos, A24 Cruzeiro, 및 C3 Indaial 은 FMD 바이러스의 3 가지 독립적 혈청형이고, O1, A24, 및 C3 항체의 존재는 백신 제형이 백신물에서 면역 반응을 도출했다는 양성 표지이다. "G1" 은 백신 제형이 근육내로 투여되었다는 것을 나타내고, "G2" 는 백신 제형이 피하로 투여되었다는 것을 나타낸다. 본 발명의 경우, 특히 FMD 바이러스 항원의 경우, 항체 적정농도 (즉, O1 Campos, A24 Cruzeiro, 및 C3 Indaial 의 혈청 수준) 와 동등 집단 보호 (Equivalent Population Protection: EPP) 수 사이에 강한, 직접 연관성이 있다. 간단히 언급하면, 항체 적정농도가 높은 경우, 백신물 동물은 바이러스 감염으로부터 상응하게 높게 보호된다.
놀랍게도, 수산화알루미늄의 존재는 투여 경로에 따라 다른, 면역 반응 중 유의한 차이와 연관된다. 제형 9812G1 및 9812G2 에서와 같이 수산화알루미늄이 존재하는 경우, 백신 제형이 피하로 투여되었을 때 항체 적정농도에 의해 측정되는 바와 같이 백신물 면역 반응에서의 유의한 증가가 있다. 수산화알루미늄을 함유하지 않는 상응하는 백신 제형, 즉 9811G1 및 9811G2 의 경우 투여 경로로 인해 효율에 유사한 유의한 차이는 없었다.
피하 투여 경로의 사용과 일치하는 수산화알루미늄의 존재로 인한 상기 향상된 면역 반응의 이유는 아직 알려지지 않았으나, 본 발명의 효과적인 구현예는 현행 및 향후 효능 (예, 항체 적정농도) 데이터에 따라 다르게 백신 투여 경로를 변형시키는 것을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
비-사포닌-면역보강제 대조군 백신 제형 (즉, 9807 & 9808) 과 비교하여, 사포닌-면역보강제 백신 제형은 연구 동물에서, 제 21 일에 사포닌-면역보강제 제형에 대한 높은 평균 항체 적정농도에 의해 표시되듯이 모든 3 개의 FMD 바이러스 항원에 대해 더욱 빠른 면역 반응을 도출한다. 취합하면, 증거는 본 발명이 개선된 안정성을 제공하고 비-사포닌 면역보강제 제형보다 더욱 빠른 면역 반응을 가능하게 한다는 것을 나타낸다.
표 10
Figure 112012028126411-pct00012
실시예 6
TSAP 에멀젼으로 면역보강된 구제역 ( FMD ) 바이러스 백신의 2 회 투여분의 투여 후 혈청학 결과 - 돼지 연구.
재료 및 방법: 백신접종을 전혀 받지 않고, FMD 항체가 없는 57 마리의 돼지를 선택하고, 랜덤화하고, 백신접종되는 6 마리 동물의 9 개 그룹 및 백신접종되지 않는 3 마리 동물의 1 개 그룹 (비-백신접종 동물) 으로 분배하였다. 동물을 제 1 일에 표시된 백신 제형 (A-I) 으로 백신접종하였다. 표 11 에 열거된 제형 각각은 실시예 1 에 따라 제조되었고, 실시예 1 에 언급된 구성성분을 모두 포함했으며, 사포닌 및 수산화알루미늄 양은 하기와 같이 다양했다: 사포닌의 양은 0, 0.7, 1.3, 또는 2.7 mg/투여분 이고, Algel 수산화알루미늄의 양은 0% 또는 0.37% 이다. 백신 제형 안정성을 백신접종에 대한 동물의 반응의 시각적 지표 및 직장 온도를 비롯한 여러 개의 파라미터의 측정을 통해 평가하였다.
표 11
Figure 112012028126411-pct00013
결과: 항원을 함유한 모든 백신 제형 (제형 B-I, 표 11 에 기재됨) 은 시험 동물에서 비 항원 대조군 (제형 I, 표 11 에 기재됨) 에 의해 유도되는 것보다 유의하게 큰 항체 반응을 유도하였다. 사포닌을 함유한 제형은 사포닌을 함유하지 않은 제형과 비교하여 비교적 큰 항체 반응을 유도하였다. 표 12 에는 항체 적정농도 데이터를 요약하고, 각각의 제형에 대한 항원, 사포닌, 및 수산화알루미늄의 양을 다시 언급한다. 특히, 항체 적정농도 데이터는 백신 제형 내 약 0.7 mg/투여분 내지 약 2.7 mg/투여분 사포닌의 존재가 사포닌을 함유하지 않은 백신 제형에 비해 항체 반응을 증가시킨다는 것을 나타낸다.
표 12
Figure 112012028126411-pct00014
실시예 7
돼지에서 3 개 실험 FMD 백신의 예방 투여분 50% (PD50) 의 측정
개관. 연구의 목적은 본 발명에 따른 3 개의 실험적 FMD 백신 제형의 돼지에서 FMD 독성 유발에 대항하는 효능을 시험하고자 하는 것이었다. 4 개의 백신 (A, B, C, 및 D) 을 각각 항원 없이 (A), 그리고 본 발명에 따른 면역보강제와 함께 제형화한, 다양한 투여분의 비활성화된 정제된 FMD O1 Manisa 항원 (백신 B, C, 및 D) 으로 제조하였다. 백신을 25 mL 까지 채워진 30 mL 바이알로서 제시하였고, 투여량은 투여 당 2 mL 이었다. 유발 균주는 FMD O1 Manisa, 449402 4D:911, 20-07-1994 (이것은 O1 Manisa Turkey 1/78 로서 본래 단리되었던 것임) 였고, 이차 돼지 신장 세포 내 적정농도는 7.67 log10 TCID50/mL 였다. 유발 균주에 대한 희석물은 표준 항생제가 있는 Hanks MEM, 2% 우태 혈청 (FBS) 이었다.
절차. FMDV 가 없고 FMD 에 대항하여 미리 백신접종되지 않은 돼지를 본 연구를 위해 사용하였다. 10 주령 (± 1 주) 의 47 마리 돼지 각각을 실험 절차 전 적어도 24 시간 동안 적응시켰다. 돼지는 방 당 2 내지 3 마리 동물로 거주시켰고, 표준 펠릿 식이를 먹였고 물을 자유롭게 섭취하게 하였다. 제 1 일 (D1) 에, 돼지 (성별 무관) 를 3 마리 동물의 15 개 그룹 및 2 마리 동물의 1 개 그룹으로 할당하였다. 각각의 그룹을 하나의 특정 방에 거주시키고, 각각의 방에서, 유발로부터 연구 완료시까지 나무 판자 (1.5M) 에 의해 동물을 개별적으로 분리하였다.
DO 에, 동물의 왼편 귀 뒤에, 근육내로 표 13 및 14 에 따른 각각의 주사기로, 백신접종시켰다. 백신접종 전에, 백신 바이알을 약 10 회 천천히 아래위로 흔들어 균질 현탁액을 확보하였다.
표 13 - 백신 조성물
Figure 112016125832721-pct00028
표 14 - 백신접종 요약
Figure 112012028126411-pct00016
유발. D28 에, FMD 유형 O 바이러스를 희석하여, 1 mL 당 100,000 TCID50 을 수득하였다 (바이러스 저장액을 2.67 log10, 또는 468 배 희석하였다). 동일한 날에, 모든 동물을 IM 경로에 의한 STRESSNIL (1 mL/20 kg) 및 KETAMINE (2 mL/20 kg) 의 투여에 의해 마취시키고, 왼쪽 뒷발의 바깥쪽 발톱의 뒤꿈치의 동그란 부분 내에 피내 경로에 의해 0.1 mL 로의 10,000 TCID50 의 바이러스로 유발시켰다. 동물의 일반적인 상태를 D0 에서 D28 까지 매일 체크하였다. 임의의 임상적 관찰 및 처리를 명시하였다. 유발 후, 동물을 7 일 동안 (D29 에서 D35 까지) 매일 관찰하였다. 관찰은 동일한 순서로 수행하였는데, 최고 투여량으로 백신접종된 동물이 있는 방에서 시작하여, 최저 투여량으로 백신접종된 동물이 있는 방으로 진행하고, 대조군 (그룹 A) 에서 종료하였다. 일반적인 상태를 매일 체크하였고, 코와 발 상의 FMD 의 징후에 대해서는 특별한 주의를 기울였다. 백신접종 전 (D1 또는 D0), 유발 전 D14, 및 D28 및 연구 종료시 각각의 동물로부터 혈액을 수집하였다. 샘플을 열-비활성화시켰고 (56℃, 30 분 동안), FMDV Ab 유형 O 적정농도를 VN 시험 (MERIAL R&D, Lelystad) 에 의해 모든 혈청에서 측정하였다.
D36 (관찰 기간 종료) 에, 동물을 안락사시키고 (50 kg IV T61 당 4 내지 6 mL), FMDV 의 징후에 대해 면밀히 검사하였다. 백신의 전체 투여분으로 백신접종된 그룹 (그룹 B1, C1, 또는 D1) 에서 발견된 임의의 병반이 샘플이었고, 추가 바이러스 유형화를 위해 -70℃ 에서 동결시켰다. 코, 입 및/또는 발 (접종된 발의 주 발톱을 제외하고는) 상의 병반의 존재가 FMD 의 증거로서 고려되었다. 시험은, 두 대조군 돼지가 FMD 임상적 징후를 보여야만 한다는 것을 언급한 범주를 충족하였으면 입증된 것으로 간주하였다. 각각의 백신의 PD50 은 Spearman Karber 방법에 의해 계산하였다.
결과. 효능 대 부과량을 도 9 에 제시하고, 관련 연구 데이터는 하기 표 15 및 16 에 수치로 요약한다.
표 15
Figure 112012028126411-pct00017
표 16
Figure 112012028126411-pct00018

Claims (20)

  1. 하기를 포함하는, 주사용 수중유 (O/W) 에멀젼을 포함하는 백신 조성물:
    (i) 하나 이상의 면역원을 포함하는 수용액으로서, 상기 면역원이 비활성화 구제역 (Foot-and-Mouth disease: FMD) 바이러스, 비활성화 돼지 써코바이러스 유형 2 (PCV-2) 바이러스, 또는 비활성화 마이코플라즈마 하이프뉴모니아에 (Mycoplasma hyopneumoniae) 박테리아인 수용액;
    (ii) 0.35 mg/투여분 내지 3.0 mg/투여분 함량의 사포닌을 포함하는 수용액;
    (iii) 수산화알루미늄을 포함하는 수용액으로서, 상기 수산화알루미늄의 농도가 0.065% 내지 1.0% (w/v) 인 수용액;
    (iv) 광유;
    (v) 비이온성 친유성 계면활성제;
    (vi) 13 내지 40 사이의 높은 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제; 및
    (vii) 9 내지 13 사이의 낮은 친수성-친유성 균형 (HLB) 값을 갖는 비이온성 친수성 계면활성제.
  2. 제 1 항에 있어서, 높은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제가 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 으로서 표현되는 0.1 내지 1.5% 의 농도로 존재하고, 계면활성제의 전체 농도가, 에멀젼의 부피에 대한 중량으로 4% 내지 8% 인 백신 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 낮은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제가 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 으로서 표현되는 1% 내지 8% 의 농도로 존재하는 백신 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 비이온성 친유성 계면활성제가 에멀젼의 부피에 대한 중량 (w/v) 으로서 표현되는 0.1% 내지 2.5% 의 농도로 존재하는 백신 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 광유가 20% 내지 40% (v/v) 의 농도로 존재하고, 에멀젼이 33℃ 내지 66℃ 의 전상 온도 (PIT) 를 갖는 백신 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 낮은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제가 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르, 소르비탄의 에톡실화 지방산 디에스테르, 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르, 에톡실화 지방 알코올, 에톡실화 지방산, 에톡실화 피마자유 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 지방산이 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 이소스테아레이트, 라우레이트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 백신 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서, 비이온성 친유성 계면활성제가 소르비탄의 지방산 에스테르, 만나이드의 지방산 에스테르, 만나이드의 디-에톡실화 지방산 에스테르, 만나이드의 트리-에톡실화 지방산 에스테르, 만나이드의 테트라-에톡실화 지방산 에스테르 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 지방산 에스테르의 에스테르가 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 이소스테아레이트, 라우레이트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 백신 조성물.
  8. 제 1 항에 있어서, 광유가 파라핀 오일, 스쿠알란, 프리스탄, 폴리이소부텐 오일, 수소화 폴리이소부텐 오일, 폴리데센 오일, 폴리이소프렌 오일, 폴리이소프로펜 오일 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 백신 조성물.
  9. 제 1 항에 있어서, 광유로서 파라핀 오일, 비이온성 친유성 계면활성제로서 소르비탄 지방산 모노에스테르, 낮은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제로서 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르 및 높은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제로서 비-이온성 블록-공중합체를 포함하는 백신 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서, 높은 HLB 비이온성 친수성 계면활성제가 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르, 에톡실화 지방 알코올, 에톡실화 지방산, 비-이온성 블록-공중합체, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 소르비탄의 에톡실화 지방산 모노에스테르가 에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 에톡실화 소르비탄 모노팔미테이트, 에톡실화 소르비탄 모노스테아레이트, 에톡실화 소르비탄 모노올레에이트, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 백신 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서, 소르비탄 지방산 모노에스테르가 소르비탄 모노올레에이트이고, 소르비탄의 에톡실화 지방산 트리에스테르가 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트이고, 비-이온성 블록-공중합체가 폴리옥시에틸렌/폴리옥시프로필렌 중합체 (POE-POP) 인 백신 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 광유는 파라핀 오일이고, 파라핀 오일이 10% 내지 40% v/v 의 농도로 존재하고, 소르비탄 모노올레에이트가 0.2% 내지 1.5% w/v 의 농도로 존재하고, 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트가 2% 내지 5% w/v 의 농도로 존재하고, POE-POP 가 0.1% 내지 0.5% w/v 의 농도로 존재하거나; 또는
    파라핀 오일이 29.3% v/v 의 농도로 존재하고, 소르비탄 모노올레에이트가 0.6% w/v 의 농도로 존재하고, 소르비탄의 에톡실화 트리올레에이트가 3.4% w/v 의 농도로 존재하고, POE-POP 가 0.25% w/v 의 농도로 존재하는 백신 조성물.
  13. 제 11 항에 있어서, 병원체에 대항해 동물에서 면역학적 반응을 유도하기 위하여 사용되는 백신 조성물.
  14. 제 13 항에 있어서, 백신 조성물의 투여가 근육내 (IM), 피내 (ID) 또는 피하 (SC) 주사이고, 또는 투여가 바늘없는 주사기로 수행되는 백신 조성물.
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Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2762587C (en) * 2009-05-19 2017-11-28 Bioproperties Pty Ltd A temperature sensitive vaccine strain of mycoplasma hyopneumoniae and uses thereof
CN102648003B (zh) * 2009-10-09 2016-01-13 儿童医疗中心有限公司 选择性裂解的全细胞疫苗
CN102226153B (zh) * 2011-05-10 2012-12-05 黑龙江大学 用于生成污染菌抗血清的免疫原的制备方法
JP6417217B2 (ja) * 2011-06-28 2018-10-31 ロイコケア・アクチェンゲゼルシャフト ウイルスまたは細菌の新規な安定化方法
HUE033858T2 (en) 2012-02-14 2018-01-29 Merial Inc Rotavirus unit vaccines and method for their preparation and use
RU2521513C1 (ru) * 2013-04-09 2014-06-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины
WO2014182872A1 (en) * 2013-05-08 2014-11-13 Protatek International, Inc. Vaccine for pcv2 and mycoplasma
US9713639B2 (en) 2014-05-19 2017-07-25 Merial, Inc. Recombinant spike protein subunit based vaccine for porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)
PT3244920T (pt) * 2015-01-16 2023-07-28 Zoetis Services Llc Vacina contra a febre aftosa
CN104803850A (zh) * 2015-04-29 2015-07-29 天津大学 一种酯类糖基相选择性亲油凝胶因子及其制备方法以及在油品胶凝中的应用
KR20180021816A (ko) 2015-06-26 2018-03-05 메리얼 인코포레이티드 불활성화된 개 인플루엔자 백신 및 이의 제조 방법 및 용도
MX2018004221A (es) 2015-10-08 2019-11-08 Pasteur Institut Vacuna heterologa atenuada viva para leptospira.
KR102153303B1 (ko) 2015-11-23 2020-09-09 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 Fmdv 및 e2 융합 단백질 및 이의 용도
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
WO2017176950A2 (en) 2016-04-07 2017-10-12 Merial, Inc. Heartworm vaccine, methods and uses thereof
JOP20190088A1 (ar) 2016-10-21 2019-04-21 Us Agriculture نواقل مؤتلفة للتعبير عن مولدات مضاد فيروس انفلونزا الطيور و استخداماتها
EP3554536B1 (en) 2016-12-14 2022-10-26 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant hvt vectors expressing multiple antigens of avian pathogens, and vaccines comprising them
AU2018275672A1 (en) 2017-05-31 2020-01-16 Texas Tech University System Methods and devices for the treatment of food allergies
CN109806391A (zh) * 2017-11-22 2019-05-28 西北民族大学 一种兽用疫苗免疫水溶性复合佐剂的制备方法及其应用
CN108853493A (zh) * 2018-07-26 2018-11-23 中国人民解放军陆军军医大学 麦冬皂苷d及其纳米乳在制备疫苗佐剂中的应用
CN111658611B (zh) * 2020-04-13 2021-06-01 四川大学 一种基于微乳的疫苗递送系统及其制备方法和应用
BR102021012953A2 (pt) * 2021-06-29 2023-01-10 Fabp Biotech Desenvolvimento Em Biotecnologia Ltda. Composição de vacina veterinária contra helmintos, método para tratamento e prevenção de infecção causada por helmintos e uso
US12036318B2 (en) * 2022-02-16 2024-07-16 Chemical & Schutz High Performance Lubricants, S.A. De C.V. Self-emulsionable mineral oil as a vehicle in vaccines for poultry
CN117281899B (zh) * 2022-06-24 2024-09-17 江苏瑞科生物技术股份有限公司 一种佐剂系统及其制备方法和应用
CN116983396B (zh) * 2023-08-09 2024-05-07 浙江省农业科学院 兔支气管败血波氏杆菌灭活疫苗乳剂及其制备和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005009462A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-03 Merial Limited Vaccine formulations comprising an oil-in-water emulsion

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2777608A (en) 1953-09-18 1957-01-15 Sheffler James Soap powder dispenser attachment
GB1143545A (en) * 1965-03-25 1969-02-26 Wellcome Found Injectable vaccine emulsions
US3919411A (en) * 1972-01-31 1975-11-11 Bayvet Corp Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant
US5505941A (en) 1981-12-24 1996-04-09 Health Research, Inc. Recombinant avipox virus and method to induce an immune response
US5174993A (en) 1981-12-24 1992-12-29 Health Research Inc. Recombinant avipox virus and immunological use thereof
CA1331443C (en) * 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US5057540A (en) * 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
WO1991018627A1 (en) 1990-05-29 1991-12-12 Smithkline Beecham Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
KR100242671B1 (ko) 1991-03-07 2000-03-02 고돈 에릭 유전학적으로 처리한 백신 균주
DE69229779T2 (de) * 1991-04-19 1999-12-23 Lds Technologies, Inc. Konvertierbare mikroemulsionsverbindungen
US5846805A (en) 1991-08-26 1998-12-08 Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells
JP3723231B2 (ja) * 1991-12-23 2005-12-07 ディミナコ アクチェンゲゼルシャフト アジュバント
US5338543A (en) 1992-02-27 1994-08-16 Ambico, Inc. Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine
US5695766A (en) 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
AU681874B2 (en) 1993-02-08 1997-09-11 Bayer Corporation Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
FR2723740B1 (fr) 1994-08-16 1996-11-08 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'antigenes du virus grippal, antigenes obtenus et leurs applications
AUPM873294A0 (en) * 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
GB9513261D0 (en) * 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5997881A (en) 1995-11-22 1999-12-07 University Of Maryland, Baltimore Method of making non-pyrogenic lipopolysaccharide or A
US5866401A (en) 1996-03-01 1999-02-02 Schering Corporation Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US5980912A (en) 1997-03-25 1999-11-09 Zonagen, Inc. Chitosan induced immunopotentiation
ES2500490T3 (es) * 1997-08-29 2014-09-30 Antigenics Inc. Composiciones que comprenden el adyuvante QS-21 y polisorbato o ciclodextrina como excipiente
DE69815692T2 (de) * 1997-09-05 2004-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Öl in wasser emulsionen mit saponinen
US6391314B1 (en) * 1997-10-03 2002-05-21 Merial Porcine circoviruses vaccines diagnostic reagents
ATE375803T1 (de) 1998-05-07 2007-11-15 Corixa Corp Adjuvanszusammensetzung und methoden zu deren verwendng
TWI224107B (en) 1998-10-22 2004-11-21 Pfizer Prod Inc Novel proteins from actinobacillus pleuropneumoniae
NZ513289A (en) * 1998-12-22 2003-04-29 Pfizer Prod Inc Infectious cDNA clone of north american procine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof
US6943152B1 (en) * 1999-06-10 2005-09-13 Merial DNA vaccine-PCV
GB0009735D0 (en) * 2000-04-19 2000-06-07 Zeneca Ltd Formulation
MY129765A (en) * 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
DE10113284A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Heinrich Exner Adjuvans-Emulsion und Verfahren zu deren Verwendung
EP1528937B1 (en) * 2001-06-05 2016-08-10 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
GB0118249D0 (en) * 2001-07-26 2001-09-19 Chiron Spa Histidine vaccines
US6642178B2 (en) * 2001-11-14 2003-11-04 North Dakota State University Adjuvant blend for enhancing efficacy of pesticides
US7378101B2 (en) * 2001-12-21 2008-05-27 Pfizer, Inc. Vaccine for periodontal disease
US7691368B2 (en) * 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
CN102698263B (zh) * 2005-12-29 2016-07-06 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 多价pcv2免疫原性组合物和制备此类组合物的方法
SG177887A1 (en) * 2006-12-15 2012-02-28 Schering Plough Ltd Method for replicating influenza virus in culture

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005009462A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-03 Merial Limited Vaccine formulations comprising an oil-in-water emulsion

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