ES2895133T3 - Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación - Google Patents

Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación Download PDF

Info

Publication number
ES2895133T3
ES2895133T3 ES17858425T ES17858425T ES2895133T3 ES 2895133 T3 ES2895133 T3 ES 2895133T3 ES 17858425 T ES17858425 T ES 17858425T ES 17858425 T ES17858425 T ES 17858425T ES 2895133 T3 ES2895133 T3 ES 2895133T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
acid
erythrocytes
reagent
hemagglutination
agglutinated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES17858425T
Other languages
English (en)
Inventor
Shino MURAMATSU
Daisuke Kato
Tomohiro Hattori
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Denka Co Ltd
Original Assignee
Denka Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Denka Co Ltd filed Critical Denka Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2895133T3 publication Critical patent/ES2895133T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/4044—Concentrating samples by chemical techniques; Digestion; Chemical decomposition
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/80—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood groups or blood types or red blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5002—Partitioning blood components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Un método de aglutinación de eritrocitos, comprendiendo el método añadir a una muestra de sangre una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0.

Description

DESCRIPCIÓN
Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación
Campo técnico
La presente invención se refiere a un método de aglutinación de eritrocitos, un método de separación de eritrocitos y un reactivo de hemaglutinación.
Antecedentes de la técnica
La sangre se usa en las determinaciones diagnósticas y terapéuticas de diversas enfermedades e incluye componentes celulares de la sangre tales como eritrocitos, leucocitos y plaquetas, y plasma como componente fluido. El plasma (componente fluido) contenido en la sangre, y el suero obtenido retirando los componentes celulares de la sangre, y la fibrina de la sangre contienen diversos componentes necesarios para el mantenimiento de las funciones en los organismos, tales como proteínas, sacáridos y lípidos, y se usan como muestras de análisis para ensayos bioquímicos para el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades viscerales y similares.
Sin embargo, en los casos en los que los componentes celulares de la sangre están presentes en una muestra de análisis durante un ensayo bioquímico, los componentes celulares de la sangre pueden alterar el ensayo. En particular, en los casos en los que se realiza un ensayo bioquímico usando análisis colorimétrico o similar, los eritrocitos pueden afectar al color y a la turbidez de la muestra y alterar el ensayo.
Por lo tanto, en los ensayos bioquímicos, se usa como muestra de análisis plasma o suero obtenido mediante la separación previa de componentes celulares de la sangre, tales como eritrocitos, de una muestra de sangre completa. Como método de separación de componentes celulares de la sangre y plasma o suero, se usa un método, que comprende extraer sangre de un paciente usando una aguja de extracción de sangre, poner la sangre en un tubo de recogida de sangre, colocar el tubo de recogida de sangre que contiene la sangre en una centrífuga y centrifugar la sangre. Sin embargo, un método de separación de este tipo usando una centrífuga tiene problemas tales como que requiere mucho tiempo y técnicas complicadas y, por lo tanto, se ha demandado un método de separación más sencillo.
Los métodos de separación distintos de la centrifugación incluyen métodos que usan un filtro especial, tal como una membrana de separación de células sanguíneas, un material de separación de células sanguíneas o una fibra hueca. Por ejemplo, se ha publicado un método de separación de eritrocitos de una muestra de sangre completa usando un filtro que comprende una partícula de soporte en fase sólida, una membrana de matriz de soporte en fase sólida y una hemaglutinina para formar plasma (Documento de Patente 1).
Sin embargo, cuando se usa un filtro de este tipo, la muestra de sangre filtrada permea y se extiende en el filtro, dando como resultado que en el filtro quedan plasma o suero. Por lo tanto, cuando se usa una pequeña cantidad de muestra de sangre, la cantidad de plasma o suero después de separar los eritrocitos es pequeña, lo que conduce al problema de que no puede garantizarse una cantidad suficiente de muestra de análisis para un ensayo bioquímico. Además, pueden producirse hemólisis y dispersión de la sangre en ocasiones incluso cuando se aplica una pequeña presión al filtro durante la operación de separación.
Como otro método de retirada de eritrocitos de la sangre completa, se publica un método que comprende poner en contacto una muestra de sangre completa con una solución que contiene ácidos seleccionados del grupo que consiste en ácido acético, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido láctico, ácido maleico, ácido málico y ácido malónico en condiciones eficaces para la aglutinación de eritrocitos, y después filtrar la muestra con un material fibroso (Documento de Patente 2).
El tensioactivo a base de ácido cólico, que es un tipo de tensioactivo, es un tensioactivo aniónico utilizado para la extracción y separación de proteínas de membrana. Por ejemplo, se publica que el tensioactivo a base de ácido cólico se usa como agente hemolítico cuando se mide la concentración de hemoglobina usando un aparato equipado con un biosensor (Documento de Patente 3). El documento WO92/08971 se refiere a soluciones a base de ácido cólico con pH 5-9 para la aglutinación de glóbulos rojos.
Documentos de la técnica anterior
DOCUMENTOS DE PATENTE
Documento de Patente 1: Patente de los EE.UU. N.° 5981294
Documento de Patente 2: Patente de los EE.UU. N.° 5118428
Documento de Patente 3: JP 2014-102143 A
Sumario de la invención
Problemas a resolver mediante la invención
Como se ha descrito anteriormente, los métodos convencionales de separación de eritrocitos usando centrifugación o filtros especiales tienen el problema de que son operaciones complejas que requieren mucho tiempo o provocan hemólisis o dispersión de la sangre. Además, el método de aglutinación de eritrocitos usando ácidos (Documento de Patente 2) da como resultado una separación incompleta de eritrocitos debido al tamaño fino de los eritrocitos aglutinados, lo que proporciona un reactivo analítico inadecuado para ensayos bioquímicos.
La presente invención se ha logrado en vista de las circunstancias anteriores, y el fin de la presente invención es proporcionar un método de aglutinación de eritrocitos, un método de separación de eritrocitos y un reactivo de hemaglutinación, que pueda aglutinar los eritrocitos instantáneamente en un tamaño suficiente en una muestra de sangre y separar los eritrocitos completamente de la muestra de sangre.
Medios para resolver los problemas
Los presentes inventores estudiaron exhaustivamente para encontrar que, en un método de aglutinación de eritrocitos en una muestra de sangre, la adición a la muestra de sangre de una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico junto con un ácido puede proporcionar eritrocitos aglutinados instantáneamente en un tamaño suficiente, en comparación con los métodos convencionales de aglutinación de eritrocitos en los que se añade el ácido solo, completando de este modo la presente invención.
Aunque los tensioactivos a base de ácido cólico son conocidos como agentes hemolíticos, es un hecho convencionalmente inesperado que añadiendo una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico en combinación con un ácido a una muestra de sangre durante la aglutinación de eritrocitos, los eritrocitos pueden aglutinarse instantáneamente en un tamaño suficiente sin provocar hemólisis.
Es decir, la presente invención proporciona un método de aglutinación de eritrocitos, que comprende añadir una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido a una muestra de sangre, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0. La presente invención también proporciona un método de separación de eritrocitos de la muestra de sangre, comprendiendo el método separar los eritrocitos aglutinados mediante el método de la presente invención descrito anteriormente. La presente invención proporciona además un reactivo de hemaglutinación que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0. La presente invención proporciona además el uso del reactivo de la presente invención como reactivo para aglutinar eritrocitos en una muestra de sangre.
Efecto de la invención
Mediante el uso del método y del reactivo de la presente invención, los eritrocitos de una muestra de sangre pueden aglutinarse instantáneamente en un tamaño suficiente, lo que permite la separación completa de los eritrocitos y la separación fácil y cómoda de los eritrocitos de los componentes, incluyendo el suero y el plasma, incluso sin usar un método de separación convencional usando centrifugación de larga duración o un filtro especial.
Breve descripción de los dibujos
La Fig. 1 muestra una fotografía que muestra los resultados de los ensayos de evaluación de la hemaglutinación realizados en el Ejemplo Comparativo 1-1, el Ejemplo comparativo 1-2 y el Ejemplo 1.
La Fig. 2 muestra una fotografía que muestra los resultados de los ensayos de evaluación de la hemaglutinación realizados en el Ejemplo Comparativo 2-1, el Ejemplo comparativo 2-2 y el Ejemplo 2.
La Fig. 3 muestra una fotografía que muestra los resultados de los ensayos de evaluación de la hemaglutinación realizados en el Ejemplo Comparativo 3-1, el Ejemplo comparativo 3-2 y el Ejemplo 3.
La Fig. 4 muestra una fotografía que muestra los resultados de los ensayos de evaluación de la hemaglutinación realizados en el Ejemplo Comparativo 4-1, el Ejemplo comparativo 4-2 y el Ejemplo 4.
Modo para realizar la invención
El método de aglutinación de eritrocitos de acuerdo con la presente invención se caracteriza porque se añade a una muestra de sangre una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0.
(Muestra de sangre)
La muestra de sangre, como se usa en el presente documento, se refiere a una muestra que contiene eritrocitos, obtenidos mediante extracción de sangre de un sujeto humano o animal. Como la muestra de sangre, puede usarse sangre completa recogida de sujetos tal cual o una muestra obtenida diluyendo la sangre completa recogida con solución salina fisiológica o similar. Para facilitar la operación, la sangre completa extraída de los sujetos se usa preferentemente tal cual. La cantidad de la muestra de sangre utilizada en la presente es por lo general de 10 |jl a 50 ml, preferentemente de 10 j l a 1 ml, más preferentemente de 10 j l a 100 jl.
(Tensioactivo a base de ácido cólico)
El tensioactivo a base de ácido cólico, como se usa en el presente documento, se refiere a un tensioactivo que tiene una estructura principal de esteroide en la molécula, específicamente, un tensioactivo que tiene una estructura de ácido cólico o un derivado de ácido cólico. Por derivado de ácido cólico se entiende cualquier compuesto derivado del ácido cólico, incluyendo específicamente compuestos deshidroxilados tales como el ácido desoxicólico y los compuestos amidados sustituidos tales como el ácido taurodesoxicólico.
El tensioactivo a base de ácido cólico, como se usa en el presente documento, se selecciona preferentemente del grupo que consiste en tensioactivos aniónicos, tales como ácido cólico, colato de sodio, ácido desoxicólico, desoxicolato de sodio, taurodesoxicolato de sodio, ácido quenodesoxicólico, quenodesoxicolato de sodio, ácido glicocólico, glicocolato de sodio, ácido glicodesoxicólico, glicodesoxicolato de sodio, ácido glicolitocólico, glicolitocolato de sodio, ácido litocólico, litocolato de sodio, ácido taurocólico, taurocolato de sodio, ácido tauroursodesoxicólico y tauroursodesoxicolato de sodio; tensioactivos no iónicos tales como polioxietileno colesteril éter y N,N-Bis(3-D-gluconamidopropil)colamida (BIGCHAPS); tensioactivos anfóteros tales como 3-((3-Colamidopropil)dimetilamonio)-1-propanosulfonato (CHAPS); e hidratos de los mismos. Estos tensioactivos a base de ácido cólico pueden usarse solos o en combinación de dos o más.
Entre ellos, el tensioactivo a base de ácido cólico es preferentemente un tensioactivo aniónico a base de ácido cólico, tal como colato de sodio, desoxicolato de sodio, taurodesoxicolato de sodio e hidratos de los mismos, en particular preferentemente taurodesoxicolato de sodio y un hidrato del mismo, desde el punto de vista de la tasa de aglutinación y de la separación más completa de eritrocitos.
(Ácido)
Como el ácido utilizado en la presente invención, puede usarse cualquier sustancia que libere iones de hidrógeno (H+) en una solución acuosa. Los ejemplos específicos del ácido incluyen ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos, y sales de los mismos. Los ejemplos del ácido inorgánico incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido fosfórico y ácido nítrico. Los ejemplos del ácido orgánico incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido succínico, ácido glicólico, ácido esteárico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido malónico, ácido ascórbico, ácido pamoico, ácido maleico, ácido adípico, ácido algínico, ácido aspártico, ácido hidroximaleico, ácido fenilacético, ácido glutámico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido sulfanílico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido fumárico, ácido bencenosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido etanodisulfónico, ácido oxálico, ácido isetiónico, ácido glucoheptanoico, glicerofosfato, ácido hemisulfánico, ácido heptanoico, ácido hexanoico, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido pectínico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido pícrico, ácido piválico, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico, ácido butírico, ácido alcanfórico, ácido alcanforsulfónico, ácido diglucónico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido disulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etanosulfónico y ácido undecanoico. En la presente invención, los ácidos pueden usarse solos o en combinación de dos o más.
Los ácidos orgánicos se usan preferentemente como el ácido utilizado en la presente invención desde el punto de vista de la velocidad de aglutinación y de la separación más completa de eritrocitos. Entre ellos, preferentemente ácidos orgánicos seleccionados del grupo que consiste en ácido acético, ácido tartárico, ácido malónico, ácido málico y ácido cítrico, más preferentemente se usan ácidos policarboxílicos y en particular preferentemente ácido cítrico.
(Reactivo de hemaglutinación)
En la presente invención, se aglutinan eritrocitos añadiendo una solución que contiene el tensioactivo a base de ácido cólico y el ácido descrito anteriormente, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0, a una muestra de sangre. Una solución de este tipo que contiene el tensioactivo a base de ácido cólico y el ácido, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0, que ha de añadirse a una muestra de sangre puede usarse como reactivo para aglutinar eritrocitos (reactivo de hemaglutinación).
Una solución de este tipo que contiene el tensioactivo a base de ácido cólico y el ácido (en lo sucesivo en el presente documento denominado "reactivo de hemaglutinación") puede prepararse mediante un método que comprende añadir el tensioactivo a base de ácido cólico a una solución de ácido acuosa obtenida diluyendo el ácido con una solución salina fisiológica o similar. La concentración del ácido en el reactivo de hemaglutinación es por lo general de 1 mM a 1 M, preferentemente de 5 mM a 500 mM, más preferentemente de 10 mM a 200 mM, desde el punto de vista de la velocidad de aglutinación y de la separación más completa de eritrocitos. El pH del reactivo de hemaglutinación es de 2,5 a 4,0. El pH del reactivo de hemaglutinación puede medirse con un pH-ímetro disponible en el mercado mediante un método de electrodo de vidrio. El reactivo de hemaglutinación puede contener tensioactivos (por ejemplo, tensioactivos tales como Tween 20 y Emulgen A500), reactivos y similares, que no provoquen hemólisis, además del ácido, el tensioactivo a base de ácido cólico y la solución salina fisiológica.
La concentración del tensioactivo a base de ácido cólico en el reactivo de hemaglutinación es por lo general del 0,05 al 15,0 % en peso, preferentemente del 0,06 al 13,0 % en peso, más preferentemente del 0,075 al 8,0 % en peso, en particular preferentemente del 0,1 al 6,0 % en peso.
La relación (relación molar) del tensioactivo a base de ácido cólico y el ácido en el reactivo de hemaglutinación es por lo general de 1:7 a 1:2000, preferentemente de 1:8 a 1:1667, más preferentemente de 1:13 a 1:1333, en particular preferentemente de 1:17 a 1:1000, desde el punto de vista de la velocidad de aglutinación y de la separación más completa de eritrocitos. La cantidad del reactivo de hemaglutinación añadida a la muestra de sangre que ha de usarse (relación de volumen) es por lo general de 1:4 a 1:80, preferentemente de 1:8 a 1:20, más preferentemente de 1:10 a 1:13.
(Método de aglutinación de eritrocitos)
En la presente invención, cuando el reactivo de hemaglutinación descrito anteriormente se añade directamente a una muestra de sangre a temperatura ambiente, los eritrocitos se aglutinan instantáneamente en un tamaño suficiente. Con el fin de permitir que la aglutinación progrese más completamente, la muestra de sangre se deja reposar preferentemente durante 5 a 30 segundos, preferentemente durante aproximadamente 5 segundos en el estado en donde muestra de sangre entra en contacto con el reactivo de hemaglutinación, y después se mezcla mediante mezcla de arriba hacia abajo varias veces. Aglutinando los eritrocitos de esta manera, puede obtenerse un aglutinado que tenga un tamaño suficiente.
Puesto que los eritrocitos aglutinados usando el método y el reactivo de la presente invención tienen un tamaño suficiente, pueden separarse fácil y cómodamente de la muestra de sangre. Los ejemplos del método de separación de los eritrocitos aglutinados incluyen un método en el que el sobrenadante se recupera después de precipitar los eritrocitos aglutinados, y un método de separación de los mismos por filtración con un papel de filtro. Puesto que el componente de suero y el componente de plasma del que se han separado los eritrocitos de esta manera están sustancialmente libres de eritrocitos, pueden usarse como muestras de análisis para ensayos bioquímicos.
Ejemplos
La presente invención se describirá ahora con más detalle basándose en los Ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a estos Ejemplos.
(Ejemplos 1 a 4 y Ejemplos Comparativos 1-1 a 4-2)
Hemaglutinación dependiente de la presencia de tensioactivo a base de ácido cólico y sal e intervalo de pH
A 71 ml de agua destilada, se les añadieron 10 ml de hidrato de taurodesoxicolato de sodio (TDOC) al 10% p/v, 10 ml de ácido cítrico 1 M y 9 ml de cloruro de sodio al 10 % p/v para preparar una solución que contenía ácido cítrico 100 mM, TDOC al 1% y cloruro de sodio al 0,9% como concentraciones finales (reactivo de hemaglutinación). También se preparó una solución de manera similar, excepto por que no se añadieron TDOC y/o cloruro de sodio (reactivo de hemaglutinación), y se compararon los efectos de la presencia y la ausencia del tensioactivo a base de ácido cólico y la sal y el intervalo de pH sobre la aglutinación de eritrocitos.
Después de añadir 60 pl de una muestra de sangre completa a 400 pl del reactivo de hemaglutinación, la tasa de aglutinación de eritrocitos se evaluó visualmente. La tasa de aglutinación se evaluó como ++, +, o ± en orden de rapidez basándose en los criterios que se describen a continuación. La hemólisis sin aglutinación se evaluó como -. ++: los eritrocitos se aglutinaron instantáneamente en un tamaño suficiente y los eritrocitos aglutinados precipitaron.
+: los eritrocitos comenzaron a aglutinarse después de dejarlos reposar durante unos segundos y los eritrocitos aglutinados precipitaron gradualmente.
: los eritrocitos se aglutinaron, pero los aglutinados eran muy pequeños y la aglutinación era incompleta.
±: solo se aglutinaron muy pocos eritrocitos.
-: los eritrocitos se hemolizaron sin estar aglutinados
Los resultados se muestran en la Tabla 1 a continuación.
El pH del reactivo de hemaglutinación se midió usando un pH-ímetro de sobremesa (HORIBA) (de forma similar a los siguientes Ejemplos y Ejemplos comparativos).
Figure imgf000005_0001
continuación
Figure imgf000006_0001
Como puede observarse a partir de los resultados de la Tabla 1, cuando el reactivo de hemaglutinación contenía el tensioactivo a base de ácido cólico y el ácido, la tasa de aglutinación se evaluó como "+++" dentro de un intervalo de pH de 2,5 a 5,0, independientemente de la existencia o no de NaCl, y se observó un excelente efecto de aglutinación. Por otro lado, cuando el reactivo de hemaglutinación no contenía el tensioactivo a base de ácido cólico y contenía solo el ácido, o solo el ácido y la sal, la tasa de aglutinación se evaluó como "-" o "+", lo que significa que se produjo hemólisis o que los eritrocitos se aglutinaron pero los aglutinados eran muy pequeños y la aglutinación era incompleta. Los resultados muestran que la presencia del tensioactivo a base de ácido cólico tiene un gran efecto sobre la aglutinación de eritrocitos.
(Ejemplos 5 a 7)
Hemaglutinación dependiente de tensioactivo a base de ácido cólico y ácido
Se añadieron diversos tensioactivos a base de ácido cólico (1 % en peso) y ácido cítrico (100 mM) a una solución salina fisiológica para preparar reactivos de hemaglutinación (pH3,0) y se compararon sus capacidades para aglutinar eritrocitos.
Después de añadir 60 pl de una muestra de sangre completa a 400 pl del reactivo de hemaglutinación, se evaluó la tasa de aglutinación de eritrocitos. La tasa de aglutinación se evaluó como ++, +, o ± en orden de rapidez basándose en los criterios que se describen a continuación. La hemólisis sin aglutinación se evaluó como -. Los siguientes criterios fueron los mismos que aquellos en los Ejemplos 1 a 4 y los Ejemplos Comparativos 1-1 a 4-2. ++: Los eritrocitos se aglutinaron instantáneamente en un tamaño suficiente y los eritrocitos aglutinados precipitaron.
+: Los eritrocitos comenzaron a aglutinarse después de dejarlos reposar durante unos segundos y los eritrocitos aglutinados precipitaron gradualmente.
: Los eritrocitos se aglutinaron, pero los aglutinados eran muy pequeños y la aglutinación era incompleta.
±: Solo se aglutinaron muy pocos eritrocitos.
-: Los eritrocitos se hemolizaron sin estar aglutinados.
Los resultados se muestran en la Tabla 2 a continuación.
Figure imgf000006_0002
Los resultados de la Tabla 2 muestran que cuando los reactivos de hemaglutinación contenían diversos tensioactivos a base de ácido cólico en combinación con el ácido, las tasas de aglutinación se evaluaron como "++" o "+++" y se observaron efectos de aglutinación excelentes. En particular, el efecto del hidrato de taurodesoxicolato de sodio (TDOC) sobre la hemaglutinación fue el más significativo.
(Ejemplo 8)
Hemaglutinación dependiente de la concentración de tensioactivo a base de ácido cólico
Se añadieron hidrato de taurodesoxicolato de sodio (TDOC) y ácido cítrico (100 mM) a una solución salina fisiológica para preparar reactivos de hemaglutinación (pH3,0) y se compararon sus capacidades para aglutinar eritrocitos en el intervalo de concentración de TDOC que se muestra en la tabla a continuación.
Después de añadir 60 |jl de una muestra de sangre completa a 400 |jl del reactivo de hemaglutinación, se evaluó la tasa de aglutinación de eritrocitos. La tasa de aglutinación se evaluó como ++, +, o ± en orden de rapidez basándose en los criterios a continuación. La hemólisis sin aglutinación se evaluó como -. Los siguientes criterios fueron los mismos que aquellos en los Ejemplos 1 a 7 y los Ejemplos Comparativos 1-1 a 4-2.
++: Los eritrocitos se aglutinaron instantáneamente en un tamaño suficiente y los eritrocitos aglutinados precipitaron.
+: Los eritrocitos comenzaron a aglutinarse después de dejarlos reposar durante unos segundos y los eritrocitos aglutinados precipitaron gradualmente.
: Los eritrocitos se aglutinaron, pero los aglutinados eran muy pequeños y la aglutinación era incompleta.
±: Solo se aglutinaron muy pocos eritrocitos.
-: Los eritrocitos se hemolizaron sin estar aglutinados.
Los resultados se muestran en la Tabla 3 a continuación.
T l 1
Figure imgf000007_0001
Los resultados de la Tabla 3 muestran que cuando la concentración de tensioactivo a base de ácido cólico era del 0,1 al 6,0 % en peso, la tasa de aglutinación se evaluó como "+++" y se observó un efecto de aglutinación excelente. En los Ejemplos 1 a 4 descritos anteriormente, después de que precipitaran los eritrocitos aglutinados, el sobrenadante se separó y se añadió gota a gota a un kit de ensayo inmunocromatográfico (Quick Navi® -Ébola). Cuando se observó el movimiento en una membrana, la membrana no estaba coloreada de rojo. Estos resultados también respaldaron el hecho de que el sobrenadante separado mencionado anteriormente no contenía sustancialmente eritrocitos y es adecuado como muestra de análisis para ensayos bioquímicos.

Claims (6)

REIVINDICACIONES
1. Un método de aglutinación de eritrocitos, comprendiendo el método añadir a una muestra de sangre una solución que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido, en donde la solución tiene un pH de 2,5 a 4,0.
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho tensioactivo a base de ácido cólico es hidrato de taurodesoxicolato de sodio.
3. Un método de separación de eritrocitos de una muestra de sangre, comprendiendo el método separar eritrocitos aglutinados mediante el método de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2.
4. Un reactivo de hemaglutinación, que contiene un tensioactivo a base de ácido cólico y un ácido, en donde dicho reactivo tiene un pH de 2,5 a 4,0.
5. El reactivo de acuerdo con la reivindicación 4, en donde dicho tensioactivo a base de ácido cólico es hidrato de taurodesoxicolato de sodio.
6. Uso del reactivo de acuerdo con las reivindicaciones 4 o 5 como reactivo para aglutinar eritrocitos en una muestra de sangre.
ES17858425T 2016-10-05 2017-10-04 Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación Active ES2895133T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016196963A JP6889535B2 (ja) 2016-10-05 2016-10-05 赤血球の凝集方法及び分離方法並びに赤血球凝集用試薬
PCT/JP2017/036087 WO2018066588A1 (ja) 2016-10-05 2017-10-04 赤血球の凝集方法及び分離方法並びに赤血球凝集用試薬

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2895133T3 true ES2895133T3 (es) 2022-02-17

Family

ID=61832155

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES17858425T Active ES2895133T3 (es) 2016-10-05 2017-10-04 Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11320350B2 (es)
EP (1) EP3524978B1 (es)
JP (1) JP6889535B2 (es)
KR (1) KR102363109B1 (es)
CN (1) CN110073211B (es)
ES (1) ES2895133T3 (es)
MY (1) MY197112A (es)
WO (1) WO2018066588A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111568938B (zh) * 2020-03-02 2023-09-08 九江学院 有机酸在促进旱莲草提取物止凝血活性中的应用
KR20220151158A (ko) * 2020-03-11 2022-11-14 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 백혈구 농축 분리 디바이스, 혈액 채취 용기 및 백혈구의 분리 방법
JPWO2022259990A1 (es) * 2021-06-07 2022-12-15
WO2023048112A1 (ja) 2021-09-21 2023-03-30 日東紡績株式会社 分析用血球分離剤及び血球分離方法
CN118076891A (zh) 2021-09-21 2024-05-24 日东纺绩株式会社 血细胞分离剂及使用其的血细胞分离方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4299726A (en) * 1979-05-07 1981-11-10 Coulter Electronics, Inc. Process for preparing whole blood reference controls having long term stability, preconditioning diluent and media therefor
US4987154A (en) * 1986-01-14 1991-01-22 Alliance Pharmaceutical Corp. Biocompatible, stable and concentrated fluorocarbon emulsions for contrast enhancement and oxygen transport in internal animal use
JPH0726960B2 (ja) * 1988-04-05 1995-03-29 富士写真フイルム株式会社 乾式全血分析要素
US5185264A (en) * 1990-11-09 1993-02-09 Abbott Laboratories Diluent buffer and method for diluting an assay component
US5118428A (en) 1990-11-13 1992-06-02 Quidel Method to remove red blood cells from whole blood samples
JPH05172816A (ja) * 1991-05-13 1993-07-13 Denka Seiken Co Ltd 抗原の測定方法
BR9305960A (pt) 1992-02-24 1997-10-21 Coulter Corp Produto de controle de hematologia e processo para utilizar meio de suspensão de célula
US5981294A (en) 1995-11-29 1999-11-09 Metrika, Inc. Device for blood separation in a diagnostic device
US6033866A (en) * 1997-12-08 2000-03-07 Biomedix, Inc. Highly sensitive amperometric bi-mediator-based glucose biosensor
CN1243251A (zh) * 1998-07-28 2000-02-02 华美生物工程公司郑州分公司 全血免疫检测试剂中红细胞和血清的分离方法
JP4458802B2 (ja) * 2003-10-02 2010-04-28 パナソニック株式会社 血液中のグルコースの測定方法およびそれに用いるセンサ
JP4671441B2 (ja) * 2005-04-06 2011-04-20 日本化薬株式会社 血漿または血清の採取方法
EP2096440B1 (en) * 2006-12-21 2012-04-18 Sekisui Medical Co., Ltd. Method for stabilizing alpha-thrombin in thrombin-containing solution
WO2013147307A1 (ja) * 2012-03-30 2013-10-03 積水メディカル株式会社 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法
WO2014033208A1 (en) * 2012-08-30 2014-03-06 Qiagen Gmbh A method for obtaining blood plasma from a whole blood sample
JP6036212B2 (ja) 2012-11-20 2016-11-30 ニプロ株式会社 ヘモグロビン測定装置およびヘモグロビン測定方法

Also Published As

Publication number Publication date
US11320350B2 (en) 2022-05-03
EP3524978A4 (en) 2020-06-17
KR102363109B1 (ko) 2022-02-15
KR20190065320A (ko) 2019-06-11
EP3524978A1 (en) 2019-08-14
JP2018059791A (ja) 2018-04-12
EP3524978B1 (en) 2021-09-22
US20190226952A1 (en) 2019-07-25
CN110073211A (zh) 2019-07-30
WO2018066588A1 (ja) 2018-04-12
JP6889535B2 (ja) 2021-06-18
CN110073211B (zh) 2021-06-08
MY197112A (en) 2023-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2895133T3 (es) Método para aglutinar eritrocitos, método para separar eritrocitos y reactivo de hemaglutinación
Bordier Phase separation of integral membrane proteins in Triton X-114 solution.
Laurell Preliminary data on the composition and certain properties of human chylomicrons
ES2368167T3 (es) Método para la extracción y cuantificación de tacrolimus usando detergentes acuosos.
EP3595791B1 (en) Phase separation behavior modifying agent dextran for aqueous two-phase separation within porous fibreglass material
Cohen et al. Bile salt hydrophobicity controls vesicle secretion rates and transformations in native bile
Nakayama et al. Bile composition: Sweden versus Japan: Its possible significance in the difference in gallstone incidence
JP4105768B2 (ja) タンパク質の抽出方法
Sakagami et al. Separation of dog serum lipoproteins by ultracentrifugation, dextran sulfate precipitation, and paper electrophoresis
Wróbel et al. Progress with the speciation of aluminium and silicon in serum of chronic renal patients using atomic spectroscopic techniques
RU2547573C2 (ru) Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов
Arimura et al. Dynamics of claudins expression in colitis and colitis-associated cancer in rat
RU2665171C2 (ru) Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов
Weber‐Fishkin et al. Erythrocyte aggregation in sudden flow arrest is linked to hyperthermia, hypoxemia, and band 3 availability
Irsigler et al. Studies on Tissue Thromboplastin II. Species Specificity*
RU2701520C1 (ru) Способ оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов
CN102944682A (zh) 蟹类抗体谱检测试剂盒
RU2530627C2 (ru) Экспресс-способ определения холестерина в иммунных комплексах
Jüngst et al. Solubility of cholesterol in the crystal-free gallbladder bile of gallstone patients
Schlösser et al. Mode of hemolytic action of the antifungal polyene antibiotic filipin
US20180185472A1 (en) Method of painting microvesicles
Kahn The Kahn precipitation test for syphilis
US20220163520A1 (en) Apparatus, method and kit for detection of von willebrand factor and factor viii
Belden Jr et al. Detection of early changes in cockroach hemocytes during coagulation with 8-Anilino-1-naphthalene sulfonic acid
López-Rodríguez et al. Protein and lipid fingerprinting of native-like membrane complexes by combining thin layer chromatography and protein electrophoresis: the example of lung surfactant