ES2893840T3 - Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20 - Google Patents
Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20 Download PDFInfo
- Publication number
- ES2893840T3 ES2893840T3 ES17714373T ES17714373T ES2893840T3 ES 2893840 T3 ES2893840 T3 ES 2893840T3 ES 17714373 T ES17714373 T ES 17714373T ES 17714373 T ES17714373 T ES 17714373T ES 2893840 T3 ES2893840 T3 ES 2893840T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cells
- cell
- seq
- car
- fusion protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 title claims abstract description 224
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 title claims abstract description 224
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 65
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 11
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 190
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 190
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 177
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 177
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 177
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 147
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 452
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 307
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 claims description 131
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 115
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 83
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 81
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 67
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 65
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 65
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 58
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 45
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 35
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 claims description 35
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 32
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 21
- 229950005751 ocrelizumab Drugs 0.000 claims description 19
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 15
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 13
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 claims description 5
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 claims description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000028564 B-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 4
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 3
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 3
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003791 MALT lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010029461 Nodal marginal zone B-cell lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008691 Precursor B-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010036711 Primary mediastinal large B-cell lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035416 Prolymphocytic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008244 anti-basement membrane glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000019069 chronic childhood arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013643 idiopathic inflammatory myopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 claims description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 2
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008158 rapidly progressive glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010062113 splenic marginal zone lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims 1
- 208000021605 Large-Cell Immunoblastic Lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 206010065857 Primary Effusion Lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 claims 1
- 208000026876 intravascular large B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 219
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 78
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 73
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 72
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 72
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 72
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 72
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 72
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 72
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 66
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 63
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 57
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 55
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 55
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 50
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 49
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 48
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 43
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 42
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 42
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 41
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 41
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 41
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 41
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 41
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 40
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 33
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 33
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 32
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 32
- -1 selected for high Substances 0.000 description 32
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 30
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 30
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 29
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 29
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 29
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 27
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 25
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 25
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 24
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 23
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 22
- 230000006870 function Effects 0.000 description 20
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 19
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 18
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 18
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 229950004593 ublituximab Drugs 0.000 description 18
- 229950000815 veltuzumab Drugs 0.000 description 18
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 17
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 14
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 14
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 13
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 13
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 13
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 101100356020 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) recA gene Proteins 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 11
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 11
- 101100042680 Mus musculus Slc7a1 gene Proteins 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 11
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 11
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 9
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 9
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 9
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 8
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 8
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 8
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 8
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 8
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 210000001915 nurse cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 7
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 7
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 6
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 6
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 6
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 6
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 6
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 6
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 6
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 5
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 5
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 5
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 238000011969 continuous reassessment method Methods 0.000 description 5
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 5
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 4
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 4
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 4
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 4
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000011469 lymphodepleting chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 3
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 3
- 102100027205 B-cell antigen receptor complex-associated protein alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 102100027203 B-cell antigen receptor complex-associated protein beta chain Human genes 0.000 description 3
- 101000840545 Bacillus thuringiensis L-isoleucine-4-hydroxylase Proteins 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 3
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 3
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 3
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102100024965 Caspase recruitment domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 101100503636 Danio rerio fyna gene Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 101150018272 FYN gene Proteins 0.000 description 3
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 102100031351 Galectin-9 Human genes 0.000 description 3
- 101100229077 Gallus gallus GAL9 gene Proteins 0.000 description 3
- 241001663880 Gammaretrovirus Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 3
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 3
- 102100029360 Hematopoietic cell signal transducer Human genes 0.000 description 3
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 3
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 3
- 101000914489 Homo sapiens B-cell antigen receptor complex-associated protein alpha chain Proteins 0.000 description 3
- 101000914491 Homo sapiens B-cell antigen receptor complex-associated protein beta chain Proteins 0.000 description 3
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101100383038 Homo sapiens CD19 gene Proteins 0.000 description 3
- 101000761179 Homo sapiens Caspase recruitment domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 3
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 101000990188 Homo sapiens Hematopoietic cell signal transducer Proteins 0.000 description 3
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 3
- 101001037256 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 description 3
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 description 3
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 3
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 3
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 3
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 description 3
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 101100226902 Mus musculus Fcrlb gene Proteins 0.000 description 3
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100268066 Mus musculus Zap70 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000005927 Myosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 102000007497 Patched-2 Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010071083 Patched-2 Receptor Proteins 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 3
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 101001037255 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 3
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100029215 Signaling lymphocytic activation molecule Human genes 0.000 description 3
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 101100215487 Sus scrofa ADRA2A gene Proteins 0.000 description 3
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 3
- 108010023649 Tripartite Motif Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 description 3
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 3
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 3
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 3
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 3
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 3
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 3
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 201000002077 muscle cancer Diseases 0.000 description 3
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 3
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 3
- 238000009101 premedication Methods 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000031212 Autoimmune polyendocrinopathy Diseases 0.000 description 2
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 2
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 101100364669 Caenorhabditis elegans lin-18 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 102000004039 Caspase-9 Human genes 0.000 description 2
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 2
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 2
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 2
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 2
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000034624 Leukocytoclastic Cutaneous Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 208000032514 Leukocytoclastic vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 101100364671 Mus musculus Ryk gene Proteins 0.000 description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 208000003670 Pure Red-Cell Aplasia Diseases 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 2
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 2
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 2
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 2
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 2
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 2
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 2
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 208000012804 lymphangiosarcoma Diseases 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 208000001611 myxosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 201000004071 non-specific interstitial pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 2
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 2
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229940068917 polyethylene glycols Drugs 0.000 description 2
- 108010026466 polyproline Proteins 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000011946 reduction process Methods 0.000 description 2
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 2
- 208000037922 refractory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 231100000004 severe toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 2
- BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[6-[3-[(2r)-2-amino-2-carboxyethyl]sulfanyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]hexanoyl-methylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]-methylamino]-3-methoxy-5-methylheptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-3-met Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H]1CCCN1C(=O)C[C@H]([C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CCCCCN1C(C(SC[C@H](N)C(O)=O)CC1=O)=O)C(C)C)OC)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BXTJCSYMGFJEID-XMTADJHZSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 1-n-(4-chlorophenyl)-6-methyl-5-n-[3-(7h-purin-6-yl)pyridin-2-yl]isoquinoline-1,5-diamine Chemical compound N=1C=CC2=C(NC=3C(=CC=CN=3)C=3C=4N=CNC=4N=CN=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=C(Cl)C=C1 KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010058566 130-nm albumin-bound paclitaxel Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol monoethoxylate Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033051 40S ribosomal protein S19 Human genes 0.000 description 1
- IDPUKCWIGUEADI-UHFFFAOYSA-N 5-[bis(2-chloroethyl)amino]uracil Chemical compound ClCCN(CCCl)C1=CNC(=O)NC1=O IDPUKCWIGUEADI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 9-anthroic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=CC2=C1 XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 208000007876 Acrospiroma Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010002412 Angiocentric lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000005034 Angiolymphoid Hyperplasia with Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010064539 Autoimmune myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010055128 Autoimmune neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 206010050245 Autoimmune thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 208000032568 B-cell prolymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061692 Benign muscle neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000035821 Benign schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003609 Bile Duct Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 208000033932 Blackfan-Diamond anemia Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000033386 Buerger disease Diseases 0.000 description 1
- 208000023611 Burkitt leukaemia Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000005236 CD8+ effector T cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000002829 CREST Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010007270 Carcinoid syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010008642 Cholesteatoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005262 Chondroma Diseases 0.000 description 1
- 201000009047 Chordoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 description 1
- 208000016216 Choristoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 208000010007 Cogan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 244000205754 Colocasia esculenta Species 0.000 description 1
- 235000006481 Colocasia esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 206010053138 Congenital aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 208000009798 Craniopharyngioma Diseases 0.000 description 1
- 201000005171 Cystadenoma Diseases 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 description 1
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000006313 Delayed Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 201000004449 Diamond-Blackfan anemia Diseases 0.000 description 1
- 206010051392 Diapedesis Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000007033 Dysgerminoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- 206010063045 Effusion Diseases 0.000 description 1
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- 108010043942 Ephrin-A2 Proteins 0.000 description 1
- 102100033919 Ephrin-A2 Human genes 0.000 description 1
- 102100023721 Ephrin-B2 Human genes 0.000 description 1
- 108010044090 Ephrin-B2 Proteins 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031969 Eye Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010016207 Familial Mediterranean fever Diseases 0.000 description 1
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000714174 Feline sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 206010053717 Fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000007569 Giant Cell Tumors Diseases 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 201000005618 Glomus Tumor Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005234 Granulosa Cell Tumor Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000035773 Gynandroblastoma Diseases 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000002927 Hamartoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002125 Hemangioendothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000006050 Hemangiopericytoma Diseases 0.000 description 1
- 201000004331 Henoch-Schoenlein purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010019617 Henoch-Schonlein purpura Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 208000002291 Histiocytic Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101100273713 Homo sapiens CD2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100166600 Homo sapiens CD28 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000846908 Homo sapiens Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101100495232 Homo sapiens MS4A1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101001024605 Homo sapiens Next to BRCA1 gene 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000603882 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 1 group I member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000738335 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 zeta chain Proteins 0.000 description 1
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010021067 Hypopituitarism Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031814 IgA Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009164 Islet Cell Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000011200 Kawasaki disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 1
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 1
- 239000002177 L01XE27 - Ibrutinib Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 201000010743 Lambert-Eaton myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001779 Leukocyte adhesion deficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000004462 Leydig Cell Tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010025130 Lupus encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010025219 Lymphangioma Diseases 0.000 description 1
- 208000004138 Lymphangiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000008095 Malignant Carcinoid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 1
- 208000010153 Mesonephroma Diseases 0.000 description 1
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101100381978 Mus musculus Braf gene Proteins 0.000 description 1
- 208000007727 Muscle Tissue Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010028424 Myasthenic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003926 Myelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 201000004458 Myoma Diseases 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 201000004404 Neurofibroma Diseases 0.000 description 1
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010029888 Obliterative bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000713747 Ovine lentivirus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010061332 Paraganglion neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 102100021768 Phosphoserine aminotransferase Human genes 0.000 description 1
- 241001440127 Phyllodes Species 0.000 description 1
- 208000007641 Pinealoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 208000007048 Polymyalgia Rheumatica Diseases 0.000 description 1
- 229920000037 Polyproline Polymers 0.000 description 1
- 206010036297 Postpartum hypopituitarism Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 206010036697 Primary hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 102100023884 Probable ribonuclease ZC3H12D Human genes 0.000 description 1
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000034541 Rare lymphatic malformation Diseases 0.000 description 1
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010038802 Reticuloendothelial system stimulated Diseases 0.000 description 1
- 241000712909 Reticuloendotheliosis virus Species 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 208000005678 Rhabdomyoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003274 Sertoli cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000002669 Sex Cord-Gonadal Stromal Tumors Diseases 0.000 description 1
- 201000009895 Sheehan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- 108010029157 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000001613 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 231100000168 Stevens-Johnson syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 206010072148 Stiff-Person syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 208000027522 Sydenham chorea Diseases 0.000 description 1
- 230000010782 T cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 102100037906 T-cell surface glycoprotein CD3 zeta chain Human genes 0.000 description 1
- 101001051488 Takifugu rubripes Neural cell adhesion molecule L1 Proteins 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 206010043540 Thromboangiitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010043781 Thyroiditis chronic Diseases 0.000 description 1
- 206010043784 Thyroiditis subacute Diseases 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 description 1
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040403 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 229940124674 VEGF-R inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 241000713325 Visna/maedi virus Species 0.000 description 1
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 description 1
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 1
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N [NH4+].[Cl-].[K] Chemical compound [NH4+].[Cl-].[K] PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N alpha-L-Fucp-(1->2)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](CO)OC(O)[C@@H]3O)O)O[C@@H]2CO)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O2)O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N 0.000 description 1
- 208000010029 ameloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 201000009431 angiokeratoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000252 angiomatosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 229940092738 beeswax Drugs 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 229960002707 bendamustine Drugs 0.000 description 1
- YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N bendamustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C1=CC=C2N(C)C(CCCC(O)=O)=NC2=C1 YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001119 benign fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000021592 benign granular cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003848 bronchiolitis obliterans Diseases 0.000 description 1
- 208000023367 bronchiolitis obliterans with obstructive pulmonary disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 208000005761 carcinoid heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011342 chemoimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 1
- 238000009104 chemotherapy regimen Methods 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 201000005217 chondroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000012085 chronic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 208000009060 clear cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002271 cobimetinib Drugs 0.000 description 1
- RESIMIUSNACMNW-BXRWSSRYSA-N cobimetinib fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.C1C(O)([C@H]2NCCCC2)CN1C(=O)C1=CC=C(F)C(F)=C1NC1=CC=C(I)C=C1F.C1C(O)([C@H]2NCCCC2)CN1C(=O)C1=CC=C(F)C(F)=C1NC1=CC=C(I)C=C1F RESIMIUSNACMNW-BXRWSSRYSA-N 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 229950005458 coltuximab ravtansine Drugs 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 201000010305 cutaneous fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000018261 cutaneous leukocytoclastic angiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000004921 cutaneous lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 208000002445 cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003568 cytokine secretion assay Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 229950004079 denintuzumab mafodotin Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 201000006569 extramedullary plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000012953 feeding on blood of other organism Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 206010016629 fibroma Diseases 0.000 description 1
- 201000008825 fibrosarcoma of bone Diseases 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 1
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 1
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000370 gamma-poly(glutamate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 201000008361 ganglioneuroma Diseases 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 201000005626 glomangioma Diseases 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003370 grooming effect Effects 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 231100000226 haematotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 201000005133 hidradenoma Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009379 histiocytoid hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 201000000284 histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 102000054189 human CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 201000006362 hypersensitivity vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 229960001507 ibrutinib Drugs 0.000 description 1
- XYFPWWZEPKGCCK-GOSISDBHSA-N ibrutinib Chemical compound C1=2C(N)=NC=NC=2N([C@H]2CN(CCC2)C(=O)C=C)N=C1C(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 XYFPWWZEPKGCCK-GOSISDBHSA-N 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 208000015446 immunoglobulin a vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000428 immunological synapse Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 229940050282 inebilizumab-cdon Drugs 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 201000002529 islet cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 1
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 238000009092 lines of therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 208000006116 lymphomatoid granulomatosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- GRPSNTXTTSBKGW-BVGHQBMWSA-J magnesium;potassium;sodium;(3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;triacetate;chloride Chemical compound [Na+].[Mg+2].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GRPSNTXTTSBKGW-BVGHQBMWSA-J 0.000 description 1
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 1
- 201000006812 malignant histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 210000000716 merkel cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000004197 mesenchymoma Diseases 0.000 description 1
- 208000011831 mesonephric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M methyl orange Chemical compound [Na+].C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M 0.000 description 1
- 229940012189 methyl orange Drugs 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 206010063344 microscopic polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940042472 mineral oil Drugs 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 1
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000001725 mucocutaneous lymph node syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004130 myoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009091 myxoma Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029986 neuroepithelioma Diseases 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 229960005419 nitrogen Drugs 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 208000004128 odontoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005963 oophoritis Diseases 0.000 description 1
- 201000005737 orchitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000008798 osteoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 208000022102 pancreatic neuroendocrine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 208000007312 paraganglioma Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 208000024724 pineal body neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004123 pineal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 208000017805 post-transplant lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000036544 posture Effects 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical class [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002106 pulse oximetry Methods 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012429 release testing Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010048628 rheumatoid vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000011450 sequencing therapy Methods 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 201000005671 spondyloarthropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000007497 subacute thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- PXQLVRUNWNTZOS-UHFFFAOYSA-N sulfanyl Chemical class [SH] PXQLVRUNWNTZOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000001644 thecoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 208000014754 thrombocytosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229960004066 trametinib Drugs 0.000 description 1
- LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N trametinib Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC(N2C(N(C3CC3)C(=O)C3=C(NC=4C(=CC(I)=CC=4)F)N(C)C(=O)C(C)=C32)=O)=C1 LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 125000004665 trialkylsilyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008243 triphasic system Substances 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 208000029387 trophoblastic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 229960001055 uracil mustard Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960000653 valrubicin Drugs 0.000 description 1
- ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N valrubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@](CC2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC(OC)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)(O)C(=O)COC(=O)CCCC)[C@H]1C[C@H](NC(=O)C(F)(F)F)[C@H](O)[C@H](C)O1 ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N 0.000 description 1
- 239000002525 vasculotropin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical group CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001124—CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464424—CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Polinucleótido aislado que codifica para una proteína de fusión capaz de unirse específicamente a CD20, en el que el polinucleótido: (a) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; (b) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (c) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; o (d) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47.
Description
DESCRIPCIÓN
Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20
Declaración de interés gubernamental
Esta invención se realizó con el apoyo del gobierno con la subvención CA154874 otorgada por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene ciertos derechos en la invención.
Antecedentes
La transferencia adoptiva de células T modificadas genéticamente ha surgido como una potente terapia para diversos tumores malignos. La estrategia empleada más ampliamente se ha la infusión de células T derivadas de pacientes que expresan receptores de antígenos quiméricos (CAR, por sus siglas en inglés) que seleccionan como diana antígenos asociados a tumores. Este enfoque tiene numerosas ventajas teóricas, incluyendo la capacidad de dirigir células T a cualquier antígeno de superficie celular, eludir la pérdida del complejo mayor de histocompatibilidad como mecanismo de escape tumoral y emplear un único constructo de vector para tratar a cualquier paciente, independientemente del haplotipo del antígeno leucocitario humano. Por ejemplo, los ensayos clínicos con CAR para el linfoma no Hodgkin de células B (LNH) tienen, hasta la fecha, antígenos CD19, CD20 o CD22 dirigidos que se expresan en células linfoides malignas así como en células B normales (Brentjens et al., Sci Transl Med 2013; 5(177):177ra38; Haso et al., Blood 2013; 121(7):1165-74; James et al., J Immunol 2008; 180(10):7028-38; Kalos et al., Sci Transl Med 2011; 3(95):95ra73; Kochenderfer et al., J Clin Oncol 2015; 33(6):540-9; Lee et al., Lancet 2015; 385(9967):517-28; Porter et al., Sci Transl Med 2015; 7(303):303ra139; Savoldo et al., J Clin Invest 2011; 121(5):1822-6; Till et al., Blood 2008; 112(6):2261-71; Till et al., Blood 2012; 19(17):3940-50; Coiffier et al., N Engl J Med 2002; 346(4):235-42). La mayoría de los investigadores que estudian terapias para tumores malignos linfoides han optado por seleccionar como diana CD19, ya que esta molécula se expresa en fases más tempranas de diferenciación de células B que CD20 o CD22. Por tanto, las células T CAR que se dirigen a CD19 pueden usarse para tratar una gama ligeramente más amplia de tumores malignos de células B, incluyendo la leucemia linfoblástica aguda, que surge en la fase de diferenciación de pro o pre-células B.
El CD20 sigue siendo un antígeno atractivo, sin embargo, debido a su extenso historial clínico como diana de inmunoterapia exitosa, tal como se demostró en ensayos que usaron rituximab, un anticuerpo monoclonal que selecciona como diana CD20 (Coiffier et al., N Engl J Med 2002; 346(4):235-42; Lenz et al., J Clin Oncol 2005; 23(9):1984-92; Marcus R, et al., J Clin Oncol 2008; 26(28):4579-86; Pfreundschuh et al., Lancet Oncol 2011; 12(11):1013-22). A diferencia de CD19, que se internaliza fácilmente tras la unión del anticuerpo (Pulczynski et al., Blood 1993; 81(6):1549-57), CD20 experimenta endocitosis mucho más lentamente después de la unión del anticuerpo (Press et al., Blood 1994; 83(5):1390-7; Pulczynski et al., Leuk Res 1994; 18(7):541-52). Teóricamente, esta estabilidad podría afectar a la calidad de la sinapsis inmunológica y la posterior activación de CAR y activación de células T. La pérdida de la expresión de CD19 en las células tumorales se ha descrito como un mecanismo de escape en pacientes tratados con células T dirigidas a CD19 (Grupp et al., N Engl J Med 2013; 368(16):1509-18). Aunque la pérdida de CD20 también se ha descrito tras la terapia con anticuerpos anti-CD20, las células T CAR específicas de CD20 proporcionan una diana alternativa que permitiría la terapia secuencial, o podrían usarse junto con células T CAR CD19 para seleccionar como diana múltiples antígenos simultáneamente, reduciendo el riesgo de escape inmunitario por pérdida de antígeno.
Una limitación potencial del CD20 como antígeno diana para los CAR es que los pacientes con linfoma con recidiva o que no responde al tratamiento que probablemente sean candidatos para los ensayos de terapia con células T CAR a menudo se habrán tratado recientemente con regímenes que contienen rituximab. Dado que el anticuerpo puede persistir en el suero durante meses, el rituximab residual teóricamente podría bloquear la unión de los CAR a CD20 y prevenir o debilitar la activación de las células T, haciendo que la terapia sea potencialmente ineficaz. En ensayos previos de células T CAR CD20 (Till et al., Blood 112:2261-71,2008; Till et al., Blood 119:3940-50, 2012), los criterios de elegibilidad excluyeron a los pacientes tratados recientemente con rituximab. Sin embargo, este enfoque tiene un impacto significativo en la acumulación y, en última instancia, limitaría la disponibilidad de esta terapia para los pacientes que más necesitan nuevas opciones de tratamiento.
Actualmente, existe una necesidad en el campo de la inmunoterapia de composiciones y métodos para inmunoterapias adicionales o alternativas dirigidas contra diversas enfermedades, incluyendo cáncer (por ejemplo, leucemia, linfoma). Las realizaciones divulgadas actualmente abordan esta necesidad y proporcionan otras ventajas relacionadas. Budde et al., 2013. PLoS One. 8(12):e82742 afirman que se han modificado genéticamente células T humanas con un vector lentiviral para expresar un CD20-CAR que contiene dominios coestimuladores tanto de CD28 como de CD137, un “gen suicida” que se basa en la activación inducible de la caspasa 9 (iC9) y un marcador seleccionable de CD19 truncado.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica para una proteína de fusión capaz de unirse
específicamente a CD20, en el que el polinucleótido:
(a) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO. 53-56;
(b) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO. 44-47;
(c) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO. 53-56; o
(d) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO. 44-47.
La presente invención también proporciona una proteína de fusión codificada por el polinucleótido de la presente invención.
La presente invención proporciona una célula huésped que comprende el polinucleótido de la presente invención que es capaz de expresar la proteína de fusión de la presente invención. La presente invención también proporciona una composición que comprende la célula huésped de la presente invención y una molécula de unión específica de CD20.
La presente invención proporciona un vector que comprende los polinucleótidos de la presente invención.
La presente invención también proporciona la célula huésped de la presente invención para su uso en un método de tratamiento de un sujeto que tiene o se sospecha que tiene cáncer.
En las reivindicaciones se proporcionan aspectos adicionales de la invención.
Breve descripción de los dibujos
Las figuras 1Ay 1B muestran diagramas esquemáticos de constructos de CAR específicos de CD20 que contienen scFv de diferentes anticuerpos anti-CD20 (Leu16, 1F5 y 1.5.3). (A) Muestra constructos de CAR específicos de CD20 y sus proteínas CAR maduras respectivas. (B) Muestra proteínas CAR específicas de CD20 maduras adicionales.
Las figuras 2A-2F muestran que rituximab y ofatumumab bloquean la unión a antígeno del anticuerpo usado para generar un scFv de CAR. Se incubaron células de Ramos (CD20+) con las concentraciones indicadas de rituximab (A-C) u ofatumumab (D-F) durante 30 minutos, seguido de incubación con anticuerpo anti-CD20 marcado con PE (clon Leu16) o control de isotipo a 4°C (A y D) o 37°C (B y E) durante 30 minutos. Se lavaron las células y se analizaron mediante citometría de flujo para determinar los sitios de unión a CD20 disponibles medidos mediante la intensidad de fluorescencia de PE. Los gráficos representados en la figura 2C y la figura 2F resumen la intensidad de fluorescencia media geométrica (IFM) a 4°C o 37°C en función de la concentración de rituximab u ofatumumab, respectivamente. Los datos son representativos de tres experimentos independientes.
Las figuras 3Ay 3B muestran el efecto de rituximab sobre la función de las células T CAR in vitro. Se irradiaron las líneas celulares LNH de células B indicadas y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente con concentraciones variables de rituximab (a 2 veces las concentraciones durante la incubación para producir las concentraciones finales indicadas después de la adición de células T). Se añadieron células T teñidas con CFSE que expresan el CAR específico de CD20 Leu16-28-BB-z-tEGFR a las células diana en un volumen y una razón de 1:1. (A) se analizó la proliferación de las células T 4 días después mediante citometría de flujo para la dilución de CFSE. El porcentaje de células T CD3+ divididas con relación a las células T no estimuladas se muestran en el eje izquierdo (barras rellenas). El tamaño celular de células T CD3+ determinado mediante la media geométrica de la dispersión directa (restando el tamaño de las células en los medios únicamente) se muestra en el eje derecho (barras en blanco). (B) La secreción de citocinas de estas células T se midió mediante el ensayo Luminex usando sobrenadantes de 24 horas después de la reestimulación. Las concentraciones de interleucina (IL)-2 se muestran en el eje y izquierdo y de interferón (IFN)-y y factor de necrosis tumoral (TNF)-a en el eje y derecho. Los datos mostrados son representativos de 3 experimentos independientes.
La figura 4 muestra el efecto de rituximab sobre la citotoxicidad mediada por células T CAR. Se preincubaron las células diana marcadas con 51Cr indicadas durante 30 minutos con rituximab (a 2 veces las concentraciones durante la incubación para producir las concentraciones finales indicadas después de la adición de células T), y luego se añadieron células T CD8+ que expresan el CAR Leu16-28-z en las razones E:T mostradas en un ensayo de liberación de cromo 51 durante 5 horas convencional. Se usaron células T transducidas de manera simulada y muestras con rituximab y células diana únicamente (“0:1”) como controles negativos. Se muestra el valor promedio de pocillos por duplicado, representando las barras de error la desviación estándar. Los datos son representativos de los resultados de 4 experimentos independientes.
Las figuras 5A-5C muestran que la sensibilidad al bloqueo de rituximab depende de la densidad del antígeno CD20 en las células diana. Se clonaron células K562 transducidas con CD80 y CD20 (“K80-20”) mediante dilución limitante, se seleccionaron por niveles altos, medios o bajos de expresión de CD20 (figura 10), y se usaron como células diana en ensayos para (figura 5A) proliferación y tamaño celular (dispersión directa media geométrica de células CD3+
reguladas menos el tamaño de las células en los medios únicamente) usando células T transducidas con CAR Leu16-28-z marcadas con CFSE tal como se describe en la figura 3; (figura 5B) secreción de citocinas de las células T transducidas con CAR Leu16-28-z a las 24 horas de la (figura 5A) anterior, medida mediante el ensayo Luminex; y (figura 5C) citotoxicidad usando células T CD8+ transducidas con CAR Leu16-28-z mediante el ensayo de liberación de 51Cr tal como se describe en la figura 4. Los datos son representativos de tres experimentos independientes. Los valores absolutos de la secreción de citocinas se muestran en la figura 11.
Las figuras 6A y 6B muestran proliferación y secreción de citocinas por células T que expresan un CAR anti-CD20. Se clasificaron y estimularon células T de donantes sanos usando perlas anti-CD3/28, seguido de transducción con vector lentiviral que codifica para el constructo de CAR 1F5-28-BB-z. (A) En el día 9 después de la estimulación, se marcaron células T CAR con c Fs E, se reestimularon o bien con células diana K562-CD80-CD20 (“K80-20”) o bien K562-CD80 (“K80”) que se habían irradiado y se midió la dilución de CFSE mediante citometría de flujo 4 días después para medir la proliferación de células T. Se muestra el porcentaje de células T CD3+ divididas en relación con las células T no estimuladas. Se usaron células T transducidas de manera simulada como control negativo. (B) se determinó la secreción de citocinas por las células T recogiendo muestras de sobrenadante de los cultivos anteriores a las 24 horas después de la reestimulación y analizando la concentración de citocinas indicada mediante el ensayo Luminex.
Las figuras 7A-7E muestran el efecto in vivo de rituximab sobre la función de las células T CAR CD20. Se les inyectaron a ratones Nod-SCID-y-'-(NSG) por vía intravenosa (i.v.) 5 x 105 células de linfoma Raji-ffLuc resistentes al rituximab, seguido de uno de los siguientes tratamientos: sin tratamiento, rituximab únicamente (25 |ig o 200 |ig) por vía intraperitoneal (i.p.) 5 días después, 107 células T CAR 1.5.3-NQ-28-BBz sólo 6 días después del tumor, o rituximab (25 |ig o 200 |ig) i.p. a los 5 días seguido de 107 células T CAR a los 6 días después del tumor. Se obtuvieron imágenes de los ratones dos veces a la semana para determinar la bioluminiscencia. (A) Esquema del experimento con ratones. (B) Carga tumoral promedio por grupo a lo largo del tiempo medida mediante bioluminiscencia corporal total. Se muestran los valores de luminiscencia media geométrica con intervalos de confianza del 95% y, para impedir fluctuaciones engañosas en los gráficos de volumen del tumor, se arrastró el último nivel de bioluminiscencia de cada ratón después de que se sacrificó hasta que no quedó ningún ratón en ese grupo. Las trazas de bioluminiscencia individuales se muestran en la figura 13. (C) Gráfico de Kaplan-Meier que muestra la supervivencia global de cada grupo de tratamiento. (D) Niveles séricos de rituximab el día de la infusión de células T (día 6) y 1 semana después de la infusión de células T (día 13). Las barras horizontales indican valores de mediana. (E) Niveles séricos de rituximab de pacientes con linfoma que se sometieron a quimioterapia de rescate que contenía rituximab en el plazo de los 4 meses anteriores. La línea de barra horizontal de color gris indica la mediana y las líneas de barra horizontal de color negro indican el intervalo intercuartílico (el 25-75%).
Las figuras 8A-8C muestran el efecto de ofatumumab sobre la función de las células T CAR CD20 in vitro. Se preincubaron células Rec-1 o Raji-ffLuc irradiadas o células Rec-1 marcadas con 51Cr no irradiadas durante 30 minutos con 2 veces las concentraciones indicadas de ofatumumab, seguido de experimentos para determinar la función de las células T que expresan el CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z, usando las metodologías descritas en las leyendas de las figuras 3 y 4. (A) Se muestra el porcentaje de células T CD3+ divididas con relación a las células T no estimuladas en el eje izquierdo (barras rellenas). Se muestra el tamaño celular de células T CD3+ determinado mediante la media geométrica de la dispersión directa (restando el tamaño de las células en los medios únicamente) en el eje derecho (barras en blanco). (B) La secreción de citocinas de estas células T se midió mediante el ensayo Luminex usando sobrenadantes de 24 horas después de la reestimulación. Las concentraciones de IL-2 se muestran en el eje y izquierdo y de IFN-y en el eje y derecho. (C) La citotoxicidad de las células T CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z se determinó usando un ensayo de liberación de 51Cr durante 4 horas convencional con células diana Rec-1. Se muestra el valor promedio de pocillos por duplicado, representando las barras de error la desviación estándar.
La figura 9 muestra la expresión de CD20 de K80-20bajo, K80-20med, K80-20alto según se determina mediante citometría de flujo. Los histogramas en blanco representan células teñidas con anticuerpo 1F5 conjugado con FITC (anti-CD20), y los histogramas rellenos representan células teñidas con un anticuerpo de control de isotipo Ac.
La figura 10 muestra las concentraciones absolutas de citocinas de los sobrenadantes de células T del experimento en la figura 5.
Las figuras 11A-11E muestran la proliferación, secreción de citocinas y citotoxicidad de células T CAR con scFv anti-CD20 completamente humano. Se estimularon células T de memoria central CD14-CD45RA-CD62L+ de donante sano usando perlas anti-CD3/28, seguido de transducción con un vector lentiviral que codifica para o bien el CAR 1.5.3-NQ-28-z o bien 1.5.3-NQ-28-BB-z. Se marcaron las células T CAR con CFSE y se reestimularon con células diana RajiffLuc irradiadas, Raji-ffLuc que no responden al tratamiento con rituximab (RR-Raji) o Rec-1. (A) Se evaluó la proliferación de células T 1.5.3-NQ-28-z analizando las células 4 días después mediante citometría de flujo para determinar la dilución de CFSE. Se muestra el porcentaje de células T CD3+ divididas en relación con las células T no estimuladas. (B) Se determinó la secreción de citocinas por células T 1.5.3-NQ-28-z recogiendo muestras de sobrenadante de los cultivos anteriores a las 24 horas después de la reestimulación y analizando las concentraciones de citocinas indicadas mediante el ensayo Luminex. Las concentraciones de IL-2 y TNF-a se muestran en el eje y izquierdo y las concentraciones de IFN-y se representan en el eje y derecho. (C) Secreción de citocinas por células T
1.5.3-NQ-28-BB-z determinada como en la parte B anterior. (D) La citotoxicidad de las células T CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z se determinó usando un ensayo de liberación de cromo 51 durante 5 horas convencional con las líneas celulares diana indicadas. (E) Secreción de citocinas por células T 1.5.3-NQ-28-BB-z como en la parte (A) anterior y estimuladas con células Granta, Rec-1, FL-18 o K80-20.
La figura 12 muestra que Raji-ffLuc que no responden al tratamiento con rituximab tiene la misma expresión de CD20 que las células Raji-ffLuc parentales. Se tiñeron células Raji-ffLuc (histograma de línea continua) o Raji-ffLuc que no responden al tratamiento con rituximab (histograma de línea discontinua) con anticuerpos anti-CD20-PE o anti-CD20-APC y luego se analizaron mediante citometría de flujo. La expresión de CD20 relativa al anticuerpo de control de isotipo (histograma relleno) se muestra para cada línea celular.
Las figuras 13Ay 13B muestran trazas e imágenes bioluminiscentes de un modelo de ratón con tumor de xenoinjerto de la figura 7 tratado con células T CAR anti-CD20. (A) Trazas de carga tumoral bioluminiscente de ratón individual a lo largo del tiempo. Cada línea representa un ratón individual. La línea de color gris representa un ratón sin tumor, que define la autofluorescencia basal. (B) Imágenes de bioluminiscencia de ratón representativas.
Las figuras 14A-14C muestran la presencia de células T circulantes en ratones. Se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de muestras de sangre retroorbitaria tomadas el día 28 después de la inyección del tumor y se analizaron mediante citometría de flujo para determinar CD3 humano, CD45 de ratón y CD19 humano (como marcador de células T transducidas). (A) Se muestran gráficos de puntos representativos de las células T humanas circulantes (reguladas por linfocitos viables) en los paneles de la izquierda y se muestran células CAR+ (basadas en la expresión de CD19), reguladas por células T CD3+ humanas en los paneles de la derecha. (B) Resumen de la persistencia de las células T en el día 28. (C) Resumen de la expresión de CAR en las células T persistentes. Tanto para la figura 14B como para la figura 14C, la diferencia entre los grupos de CAR únicamente y CAR rituximab no fue estadísticamente significativa, según la prueba de la t bilateral para datos independientes.
Las figuras 15A-15D muestran la secreción de citocinas por diversos constructos de CAR in vitro. Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vivo. El día 14, se reestimularon las células con células Raji-ffLuc irradiadas (figura 15A y figura 15C), células Granta-519 (figura 15B) y células Jeko (figura 15D). El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos y se proporciona como control positivo. Se recogieron los sobrenadantes 24 horas más tarde y se analizaron mediante el ensayo Luminex para determinar los niveles de interferón (IFN)-y, IL-2 y factor de necrosis tumoral-a.
Las figuras 16A y 16B muestran la secreción de citocinas por las células T CAR CD20. (A) Se reestimularon células T CD4+ y CD8+ transducidas con el vector lentiviral 1.5.3-NQ-28-BB-z y expandidas ex vivo, con células de linfoma RajiffLuc CD20+ irradiadas. Se midió la secreción de las citocinas indicadas en los sobrenadantes celulares después de 24 horas mediante el ensayo Luminex. (B) Se descongelaron células T CAR CD20 CD4+ y CD8+ crioconservadas y se reestimularon con células K562 o células K562 que expresan CD20 y, a las 24 horas, se analizaron mediante tinción intracelular para IFN-y mediante citometría de flujo.
Las figuras 17A y 17B muestra la citotoxicidad in vitro de diversos constructos de CAR. Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vivo. El día 14, se usaron las células como efectoras en un ensayo de liberación de 51Cr durante 4 horas convencional, usando (figuras 17A y 17B) Raji-ffLuc y (figura 17B) células Jeko como dianas. El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos y se proporciona como control positivo. Se muestra la lisis de células diana específicas de cada población de células T CAR.
Las figuras 18A y 18B muestran la proliferación de células T CAR CD20. Se transdujeron células T CD8+ con el vector lentiviral 1.5.3-NQ-28-BB-z (o se transdujeron de manera simulada) y se expandieron ex vivo, y luego se crioconservaron. Luego, se descongelaron las células, se tiñeron con éster succinamidílico de carboxifluoresceína (CFSE) y se reestimularon con células de linfoma Raji-ffLuc CD20+ irradiadas, células K562 o células K562 que expresan CD20. Se analizaron las células mediante citometría de flujo 4 días después. (A) Se muestran la dilución de CFSE de células CAR+ (reguladas por CD3+/tCD19+). El histograma de línea discontinua muestra fluorescencia de CFSE de células T en medio de cultivo únicamente, y los histogramas de línea continua son células T coincubadas con células diana. (B) El porcentaje de células divididas se muestra para cada grupo.
Las figuras 19A y 19B muestran la actividad antitumoral in vivo de diversos constructos de CAR. Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vitro. El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos en el presente centro y se proporciona como control de referencia. Se les inyectaron a ratones NSG por vía i.v. células tumorales Raji-ffLuc, seguido 2 días más tarde mediante inyección i.v. de células T de memoria central (CD14‘ CD45RA'CD62L+) expandidas transducidas con el CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z, CAR 1.5.3-NQ-28-z, JCAR-014 (antiCD19-41BB-Q, o un vector vacío. (A) Carga tumoral a lo largo del tiempo según se evaluó mediante obtención de imágenes de bioluminiscencia; y (B) gráfico de Kaplan-Meier de supervivencia global.
La figura 20 muestra la actividad in vivo de células T CAR CD20 contra el linfoma de células del manto. Se transdujeron células T CAR CD20 CD4+ y CD8+ con el CAR 1.5.3-NQ-28-BBz y se usaron para tratar ratones NSG que se habían inoculado 7 días antes con células de linfoma de células del manto Granta-ffLuc por la vena de la cola. Gráfico de Kaplan-Meier de supervivencia global.
Las figuras 21A y 21B muestran la persistencia in vivo de células T CAR. Se obtuvieron muestras de sangre retroorbitaria en puntos de tiempo en serie después de la infusión de células T CAR CD20 o células T que expresan tCD19 de vector vacío en ratones NSG que portaban tumores diseminados Raji-ffLuc. Se cuantificaron las células T CAR CD20 que expresaron el marcador de transducción tCD19 mediante citometría de flujo en cada punto de tiempo como células CD3 humano+/negativas para CD45 de ratón/CD19 humano+. (figura 21A) Se muestran las células T tCD19+ en 3 puntos de tiempo posteriores a la infusión como porcentaje de las células nucleadas totales en la sangre (n = 9 inicialmente en el grupo de células T CAR). Se muestran células CD19+ truncadas de un ratón de vector vacío como referencia. (figura21B) En un experimento independiente, se muestran células tCD19+ de 2 ratones en cada grupo (vector vacío frente a células T CAR) longitudinalmente con mediciones semanales.
Las figuras 22A y 22B muestran datos comparativos para diversos constructos que tienen espaciadores de longitudes variables. Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vitro. Los 1F5-28-BB-z, IgG1mut tienen espaciadores de longitud completa. El sin ligador es casi de longitud completa pero le falta un ligador de 6 aminoácidos (aminoácido de unión), y el CH3 tiene un espaciador truncado, faltan los aminoácidos de unión y el dominio CH2. (A) El día 20, se reestimularon las células con células de linfoma Granta o Rec-1, y 24 horas después se recogieron los sobrenadantes y se analizaron mediante el ensayo Luminex para determinar las concentraciones de IL-2 (derecha) e IFN-y (izquierda). (B) Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/anti-CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vitro. El “ IgG1mut NQ” tiene un espaciador CH2CH3 de longitud completa, el CH3 sólo tiene una longitud intermedia tal como se comentó anteriormente, y Leu16 corta carece de los dominios CH2 y CH3. El día 20, se usaron las células como células efectoras en un ensayo de liberación de 51Cr durante 4 horas convencional, usando células Raji como dianas.
Las figuras 23A-23F muestran datos comparativos para diversos constructos que tienen espaciadores con diversas modificaciones. Se muestra un diagrama esquemático de un CAR con mutaciones de aminoácidos de unión a IgG2 (indicado como “ IgG1mut”) y N297Q (indicado como “NQ”) (figura 23A). Se tiñeron células T que expresan CAR con un espaciador de IgG1 de tipo natural, un espaciador mutante de IgG1 (aminoácidos de unión a IgG1 reemplazados por aminoácidos de unión a IgG2) o sin aminoácidos de unión (aminoácidos de unión a IgG1 eliminados), con CD64 soluble biotinilado (FcyRI) seguido por estreptavidina-PE y luego se analizaron mediante citometría de flujo, demostrando la unión del receptor Fc a espaciadores de tipo natural pero no modificados (figura 23B). Las células T que expresan los constructos de CAR indicados se incubaron conjuntamente con células K562 que expresaban CD64 (FcyRI) o K562 parental que carecen de receptores Fc. A las 24 horas después de la incubación conjunta, se evaluó la expresión de CD25 y CD69 de las células T mediante citometría de flujo como indicación de activación. Los gráficos de puntos representan células CD3+CD19+ (células T CAR+). La unión de los espaciadores de tipo natural a los receptores Fc condujo a la activación de las células T, mientras que los espaciadores modificados no lo hicieron (figura 23C). Se estimularon células T de memoria central (CD14'CD45RA'CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados, se expandieron in vitro y se inyectaron en ratones NSG 2 días después de la administración por vía i.v. de células Raji-ffLuc. (D y E) Datos de carga tumoral mediante bioluminiscencia para dos experimentos diferentes. (F) Curva de supervivencia de Kaplan-Meier del experimento en la parte (E) anterior.
La figura 24 muestra un diagrama de un esquema de tratamiento para un ensayo clínico que implica métodos de inmunoterapia y composiciones de la presente divulgación.
Las figuras 25Ay 25B muestran un diagrama de un método de formulación y modelo de administración de células T CAR anti-CD20 en un ensayo clínico.
Descripción detallada
En el presente documento se divulgan composiciones y métodos para reducir el número de células que expresan CD20 o tratar una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 (por ejemplo, reducir el número de células B o tratar una enfermedad o un trastorno asociado con la actividad aberrante de células B), que comprenden tratar a un sujeto con una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectado al componente extracelular por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20
y el componente intracelular comprende un dominio efector. Opcionalmente, el método puede comprender además una cantidad terapéuticamente eficaz de una molécula de unión específica de CD20 en combinación con la célula huésped que expresa la proteína de fusión específica de CD20. En determinadas realizaciones, la proteína de fusión es un receptor de antígeno quimérico (CAR). En todavía otras realizaciones, el CAR comprende un scFv de un anticuerpo anti-CD20 o un scTCR de un TCR específico para un antígeno CD20.
A modo de antecedentes, generalmente se cree que los niveles residuales de anticuerpos anti-CD20 podrían representar una limitación importante para las células T CAR dirigidas a CD20. Por ejemplo, estudios previos con otras dianas han demostrado que la secreción de citocinas y la citotoxicidad de las células T CAR que selecciona como diana el antígeno carcinoembrionario, el antígeno Y de Lewis o CD30 no se ven afectadas en gran medida en presencia de niveles de antígeno afín soluble de hasta 10 |ig/ml (Hombach et al., Gene Ther 2000; 7(12):1067-75; Hombach et al., Gene Ther 1999; 6(2):300-4; Nolan et al., Clin Cancer Res 1999; 5(12):3928-41; Westwood et al., J Immunother 2009; 32(3):292-301); se observó que niveles mayores que esto son potencialmente inhibidores (Hombach et al., Gene Ther 2000; 7(12):1067-75). En esta divulgación, se halló sorprendentemente que diversos anticuerpos anti-CD20 (por ejemplo, rituximab) en concentraciones clínicamente relevantes tampoco afectaban en gran medida a la actividad de las células T que expresan CAR anti-CD20 o bien in vitro o bien in vivo (véase también, Gall et al., Exp. Hematol.
33:452, 2005). Además, los experimentos con ratones de esta divulgación demuestran que los grupos que recibieron una terapia de combinación tuvieron resultados tan buenos o mejores que los ratones tratados con células T CAR solas.
Antes de exponer esta divulgación con más detalle, puede ser útil para comprender la misma proporcionar definiciones de determinados términos que van a usarse en el presente documento. Se establecen definiciones adicionales a lo largo de esta divulgación.
En la presente descripción, cualquier intervalo de concentración, intervalo de porcentaje, intervalo de razón o intervalo de números enteros debe entenderse que incluye el valor de cualquier número entero dentro del intervalo mencionado y, cuando sea apropiado, fracciones del mismo (tales como una décima y una centésima parte de una entero), a menos que se indique lo contrario. Además, debe entenderse que cualquier intervalo numérico mencionado en el presente documento relacionado con cualquier característica física, tal como subunidades de polímero, tamaño o grosor, incluye cualquier número entero dentro del intervalo mencionado, a menos que se indique lo contrario. Tal como se usa en el presente documento, el término “aproximadamente” significa 20% del intervalo, valor o estructura indicados, a menos que se indique lo contrario. Debe entenderse que los términos “un(o)” y “una” tal como se usan en el presente documento se refieren a “uno o más” de los componentes enumerados. Debe entenderse que el uso de la alternativa (por ejemplo, “o”) significa una, ambas, o cualquier combinación de las alternativas. Tal como se usa en el presente documento, los términos “ incluyen”, “tienen” y “comprenden” se usan como sinónimos, y los términos y variantes de los mismos están destinados a interpretarse como no limitativos.
“Opcional” u “opcionalmente” significa que el elemento, componente, acontecimiento o circunstancia descrito posteriormente puede producirse o no, y que la descripción incluye instancias en las que se produce el elemento, componente, acontecimiento o circunstancia e instancias en las que no.
Además, debe entenderse que los constructos individuales, o grupos de constructos, derivados de las diversas combinaciones de las estructuras y subunidades descritas en el presente documento, se divulgan en la presente solicitud en la misma medida que si se expusiese cada constructo o grupo de constructos individualmente. Por tanto, la selección de estructuras particulares o subunidades particulares está dentro del alcance de la presente divulgación.
El término “que consiste esencialmente en” limita el alcance de una reivindicación a los materiales o las etapas especificados, o a aquellos que no afectan materialmente a las características básicas de una invención reivindicada. Por ejemplo, un dominio, una región, un módulo o fragmento de una proteína (por ejemplo, un dominio de unión, una región bisagra, módulo de ligador o etiqueta) o una proteína (que puede tener uno o más dominios, regiones o módulos) “consiste esencialmente en” una secuencia de aminoácidos particular cuando la secuencia de aminoácidos de un dominio, una región, un módulo, fragmento o una proteína incluye inserciones, deleciones, sustituciones o una combinación de los mismos (por ejemplo, adición de aminoácidos en el extremo amino o carboxi-terminal, o entre dominios) que, en combinación, contribuyen como máximo al 20% (por ejemplo, como máximo al 15%, 10%, 8%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% o al 1%) de la longitud de un dominio, una región, un módulo, casete o una proteína y no afectan sustancialmente (es decir, no reduzca la actividad en más del 50%, tal como no más del 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% o el 1%) a la actividad del dominio(s), región/regiones, módulo(s), casete(s) o proteína (por ejemplo, la afinidad de unión a la diana de un dominio de unión).
Tal como se usa en el presente documento, “aminoácido” se refiere a aminoácidos que se producen de manera natural y sintéticos, así como a análogos de aminoácido y miméticos de aminoácido que funcionan de una manera similar a los aminoácidos que se producen de manera natural. Los aminoácidos que se producen de manera natural son los codificados por el código genético, así como los aminoácidos que se modifican posteriormente, por ejemplo, hidroxiprolina, y-carboxiglutamato y O-fosfoserina. Los análogos de aminoácido se refieren a compuestos que tienen la misma estructura química básica que un aminoácido que se produce de manera natural, es decir, un carbono a que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R, por ejemplo, homoserina, norleucina,
sulfóxido de metionina, metionina-metilsulfonio. Tales análogos tienen grupos R modificados (por ejemplo, norleucina) o cadenas principales peptídicas modificadas, pero conservan la misma estructura química básica que un aminoácido que se produce de manera natural. Los miméticos de aminoácido se refieren a compuestos químicos que tienen una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido, pero que funciona de manera similar a un aminoácido que se produce de manera natural.
Una “sustitución conservativa” se refiere a sustituciones de aminoácidos que no afectan ni alteran significativamente las características de unión de una proteína particular. Generalmente, las sustituciones conservativas son aquellas en las que un residuo de aminoácido sustituido se reemplaza por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Las sustituciones conservativas incluyen una sustitución hallada en uno de los siguientes grupos: grupo 1: alanina (Ala o A), glicina (Gly o G), serina (Ser o S), treonina (Thr o T); grupo 2: ácido aspártico (Asp o D), ácido glutámico (Glu o Z); grupo 3: asparagina (Asn o N), glutamina (Gln o Q); grupo 4: arginina (Arg o R), lisina (Lys o K), histidina (His o H); grupo 5: isoleucina (Ile o I), leucina (Leu o L), metionina (Met o M), valina (Val o V); y grupo 6: fenilalanina (Phe o F), tirosina (Tyr o Y), triptófano (Trp o W). Adicional o alternativamente, los aminoácidos se pueden agrupar en grupos de sustitución conservativos por función, estructura química o composición similar (por ejemplo, ácido, básico, alifático, aromático o que contiene azufre). Por ejemplo, una agrupación alifática puede incluir, con propósitos de sustitución, Gly, Ala, Val, Leu e Ile. Otros grupos de sustituciones conservativas incluyen: que contienen azufre: Met y cisteína (Cys o C); ácido: Asp, Glu, Asn y Gln; pequeños residuos alifáticos, apolares o ligeramente polares: Ala, Ser, Thr, Pro y Gly; residuos polares cargados negativamente y sus amidas: Asp, Asn, Glu y Gln; residuos polares cargados positivamente: His, Arg y Lys; residuos alifáticos apolares grandes: Met, Leu, Ile, Val y Cys; y residuos aromáticos grandes: Phe, Tyr y Trp. Puede hallarse información adicional en Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company.
Tal como se usa en el presente documento, “proteína” o “polipéptido” se refiere a un polímero de residuos de aminoácido. Las proteínas se aplican a polímeros de aminoácido que se producen de manera natural, así como a polímeros de aminoácido en los que uno o más residuos de aminoácido es un mimético químico artificial de un aminoácido que se produce de manera natural correspondiente y polímeros de aminoácido que se producen de manera no natural.
El “porcentaje de identidad de secuencia” se refiere a una relación entre dos o más secuencias, según se determina comparando las secuencias. Los métodos preferidos para determinar la identidad de secuencia están diseñados para proporcionar la mejor coincidencia entre las secuencias que se comparan. Por ejemplo, las secuencias se alinean con propósitos de comparación óptimos (por ejemplo, pueden introducirse huecos en uno o ambos de una primera y una segunda secuencias de aminoácidos o ácidos nucleicos para una alineación óptima). Además, las secuencias no homólogas pueden descartarse con propósitos de comparación. El porcentaje de identidad de secuencia al que se hace referencia en el presente documento se calcula a lo largo de la longitud de la secuencia de referencia, a menos que se indique lo contrario. Pueden hallarse métodos para determinar la identidad y similitud de secuencias en programas informáticos disponibles públicamente. Pueden realizarse alineaciones de secuencia y cálculos de porcentaje de identidad usando un programa BLAST (por ejemplo, BLAST 2.0, BLASTP, BLASTN o BLASTX). El algoritmo matemático usado en los programas BLAST puede hallarse en Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997. Dentro del contexto de esta divulgación, se entenderá que cuando se usa software de análisis de secuencias para el análisis, los resultados del análisis se basan en los “valores por defecto” del programa al que se hace referencia. “Valores por defecto” significa cualquier conjunto de valores o parámetros que se cargan originariamente con el software cuando se inicializa por primera vez.
“Molécula de ácido nucleico” o “polinucleótido” se refiere a un compuesto polimérico que incluye nucleótidos unidos covalentemente, que pueden estar formados por subunidades naturales (por ejemplo, bases de purina o pirimidina) o subunidades no naturales (por ejemplo, anillo de morfolina). Las bases de purina incluyen adenina, guanina, hipoxantina y xantina, y las bases de pirimidina incluyen uracilo, timina y citosina. Las moléculas de ácido nucleico incluyen ácido polirribonucleico (ARN), ácido polidesoxirribonucleico (ADN), que incluye ADNc, ADN genómico y ADN sintético, cualquiera de los cuales puede ser monocatenario o bicatenario. Si es monocatenario, la molécula de ácido nucleico puede ser la hebra codificante o no codificante (hebra antisentido). Una molécula de ácido nucleico que codifica para una secuencia de aminoácidos incluye todas las secuencias de nucleótidos que codifican para la misma secuencia de aminoácidos. Algunas versiones de las secuencias de nucleótidos también pueden incluir intrón/intrones en la medida en que el/los intrón/intrones se eliminaría a través de mecanismos de cotranscripcionales o postranscripcionales. Dicho de otro modo, diferentes secuencias de nucleótidos pueden codificar para la misma secuencia de aminoácidos como resultado de la redundancia o degeneración del código genético, o por corte y empalme.
También se contemplan variantes de moléculas de ácido nucleico de esta divulgación. Las moléculas de ácido nucleico variantes son idénticas en al menos el 70%, 75%, 80%, 85%, 90% y preferiblemente el 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o el 99,9% a una molécula de ácido nucleico de un polinucleótido definido o de referencia tal como se describe en el presente documento, o que se hibrida con un polinucleótido en condiciones de hibridación rigurosas de cloruro de sodio 0,015 M, citrato de sodio 0,0015 M a aproximadamente 65-68°C o cloruro de sodio 0,015 M, citrato de sodio 0,0015 M y formamida al 50% a alrededor de 42°C. Las variantes de moléculas de ácido nucleico conservan la capacidad de codificar para una proteína de fusión o un dominio de unión de la misma que tiene una funcionalidad
descrita en el presente documento, tal como la unión específica de una molécula diana (por ejemplo, CD20).
Una “variante funcional” se refiere a un polipéptido o polinucleótido que es estructuralmente similar o sustancialmente similar estructuralmente a un compuesto parental o de referencia de esta divulgación, pero difiere ligeramente en cuanto a composición (por ejemplo, una base, un átomo o grupo funcional es diferente, se añade o se elimina), de tal manera que el polipéptido o polipéptido codificado es capaz de realizar al menos una función del polipéptido parental codificado con al menos el 50% de eficiencia, preferiblemente al menos el 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o el 100% de nivel de actividad del polipéptido parental. Dicho de otro modo, una variante funcional de un polipéptido o polipéptido codificado de esta divulgación tiene “unión similar”, “afinidad similar” o “actividad similar” cuando la variante funcional muestra no más del 50% de reducción del rendimiento en un ensayo seleccionado en comparación con el polipéptido parental o de referencia, tal como un ensayo para medir la afinidad de unión (por ejemplo, tinción con Biacore® o tetrámero que mide una constante de asociación (Ka) o una de disociación (Kd)).
Tal como se usa en el presente documento, una “porción funcional” o “fragmento funcional” se refiere a un polipéptido o polinucleótido que comprende únicamente un dominio, una porción o un fragmento de un compuesto parental o de referencia, y el polipéptido o polipéptido codificado conserva al menos el 50% de la actividad asociada con el dominio, la porción o el fragmento del compuesto parental o de referencia, preferiblemente al menos el 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o el 100% del nivel de actividad del polipéptido parental, o proporciona un beneficio biológico (por ejemplo, función efectora). Una “porción funcional” o “fragmento funcional” de un polipéptido o polipéptido codificado de esta divulgación tiene “unión similar” o “actividad similar” cuando la porción o fragmento funcional no muestra más del 50% de reducción del rendimiento en un ensayo seleccionado en comparación con el polipéptido parental o de referencia (preferiblemente no más del 20% o el 10%, o no más de una diferencia logarítmica en comparación con el compuesto parental o de referencia con respecto a la afinidad), tal como un ensayo para medir la afinidad de unión o medir la función efectora (por ejemplo, liberación de citocinas).
Tal como se usa en el presente documento, “heterólogo” o “no endógeno” o “exógeno” se refiere a cualquier gen, proteína, compuesto, molécula de ácido nucleico o actividad que no es nativo para una célula huésped o un sujeto, o cualquier gen, proteína, compuesto, molécula de ácido nucleico o actividad nativo para una célula huésped o un sujeto que se ha alterado. Heterólogo, no endógeno o exógeno incluye genes, proteínas, compuestos o moléculas de ácido nucleico que se han mutado o alterado de otra manera, de tal manera que la estructura, actividad o ambas son diferentes entre los genes, proteínas, compuestos o genes nativos y alterados. moléculas de ácido nucleico. En determinados casos, genes, proteínas o moléculas de ácido nucleico heterólogos, no endógenos o exógenos (por ejemplo, receptores, ligandos, etc.) pueden no ser endógenos para una célula huésped o un sujeto, sino que en su lugar, los ácidos nucleicos que codifican para tales genes, proteínas o moléculas de ácido nucleico pueden haberse añadido a una célula huésped mediante conjugación, transformación, transfección, electroporación, o similar, en los que la molécula de ácido nucleico añadida puede integrarse en el genoma de una célula huésped o puede existir como material genético extracromosómico (por ejemplo, como plásmido u otro vector de autorreplicación). El término “homólogos” u “homólogo” se refiere a un gen, una proteína, un compuesto, una molécula de ácido nucleico o actividad que se encuentra o deriva de una célula huésped, especie o cepa. Por ejemplo, un polinucleótido o gen heterólogo o exógeno que codifica para un polipéptido puede ser homólogo a un polinucleótido o gen nativo y codificar para una actividad o un polipéptido homólogo, pero el polinucleótido o polipéptido puede tener una estructura, secuencia, nivel de expresión, o cualquier combinación de los mismos alterados. Un polinucleótido o gen no endógeno, así como el polipéptido o la actividad codificados, pueden ser de la misma especie, una especie diferente, o una combinación de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, el término “endógeno” o “nativo” se refiere a un polinucleótido, gen, una proteína, un compuesto, una molécula o actividad que normalmente está presente en una célula huésped o un sujeto.
“Expresión” se refiere a la transcripción o traducción de una molécula de ácido nucleico que está operativamente unida a una secuencia de control de expresión (por ejemplo, promotor).
Tal como se usa en el presente documento, el término “modificado por ingeniería”, “recombinante” o “no natural” se refiere a un organismo, microorganismo, una célula, molécula de ácido nucleico o un vector que incluye al menos una alteración genética o se ha modificado mediante la introducción de una molécula de ácido nucleico exógena, en los que tales alteraciones o modificaciones se introducen mediante ingeniería genética (es decir, intervención humana). Las alteraciones genéticas incluyen, por ejemplo, modificaciones que introducen moléculas de ácido nucleico expresables que codifican para proteínas, proteínas de fusión o enzimas, u otras adiciones, deleciones, sustituciones u otras alteraciones funcionales de moléculas de ácido nucleico del material genético de una célula. Las modificaciones adicionales incluyen, por ejemplo, regiones reguladoras no codificantes en las que las modificaciones alteran la expresión de un polinucleótido, gen u operón.
Tal como se usa en el presente documento, una “proteína de fusión” se refiere a una proteína que, en una única cadena, tiene al menos dos dominios distintos, en la que los dominios no se encuentran naturalmente juntos en una proteína. Puede construirse un polinucleótido que codifica para una proteína de fusión usando PCR, modificarse por ingeniería de manera recombinante o similar, o pueden sintetizarse tales proteínas de fusión. Una proteína de fusión puede contener además otros componentes, tales como una etiqueta, un módulo de ligador o un marcador de
transducción. Una proteína de fusión expresada o producida por una célula huésped (por ejemplo, una célula T) puede ubicarse en una superficie celular, en la que la proteína de fusión está anclada a la membrana celular (por ejemplo, a través de un dominio transmembrana) y comprende una porción extracelular (por ejemplo, que contiene un dominio de unión) y una porción intracelular (por ejemplo, que contiene un dominio de señalización, dominio efector, dominio coestimulador, o combinaciones de los mismos).
A los términos que entienden los expertos en la técnica de la tecnología de anticuerpos se les facilita a cada uno el significado adquirido en la técnica, a menos que se defina expresamente de manera diferente en el presente documento. El término “anticuerpo” se refiere a un anticuerpo intacto que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, así como una porción de unión a antígeno de un anticuerpo intacto que tiene o conserva el capacidad para unirse a una molécula diana. Los anticuerpos incluyen anticuerpos policlonales y monoclonales. Un anticuerpo puede ser que se producen de manera natural, producido de manera recombinante, modificado por ingeniería genética o modificado, e incluye formas modificadas de inmunoglobulinas, tales como, por ejemplo, intracuerpos, pepticuerpos, nanocuerpos, anticuerpos de dominio único, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, di-scFV en tándem, tri-scFv en tándem). “Porción de unión a antígeno”, “fragmento de unión a antígeno” o “dominio de unión a antígeno” de un anticuerpo se refiere a un “fragmento de anticuerpo” que comprende una parte de un anticuerpo intacto y contiene las regiones variables determinantes antigénicas o regiones determinantes complementarias de un anticuerpo. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv, Fab'-SH, F(ab')2, diacuerpos, anticuerpos lineales, anticuerpos monocatenarios, scFv (es decir, una proteína de fusión de las regiones pesada variable (VH) y ligera variable (VL) de una molécula de Ig, conectadas con un péptido ligado corto generalmente de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 aminoácidos), VHH, anticuerpos de dominio único (por ejemplo, sdAc, sdFv, nanocuerpo) y anticuerpos multiespecíficos que comprenden fragmentos de anticuerpo. Un anticuerpo monoclonal o una porción de unión a antígeno del mismo puede ser no humano, quimérico, humanizado o humano, preferiblemente humanizado o humano. La estructura y función de las inmunoglobulinas se revisan, por ejemplo, en Harlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Capítulo 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988). Un anticuerpo puede ser de cualquier clase o subclase, incluyendo las IgG y sus subclases (IgG-i, IgG2, IgG3 , IgG4 IgM, IgE, IgA e IgD.
Los términos “Vl” y “Vh” se refieren a la región de unión variable de una cadena ligera y pesada de anticuerpo, respectivamente. Las regiones de unión variables están formadas por subregiones discretas y bien definidas conocidas como “regiones determinantes de complementariedad” (CDR) y “regiones de entramado” (FR)).
Los términos “región determinante de complementariedad” (CDR) o “región hipervariable” (HVR) se conocen en la técnica para referirse a secuencias no contiguas de aminoácidos dentro de regiones variables de anticuerpo, que confieren especificidad antigénica o afinidad de unión. En general, hay tres CDR en cada región variable de cadena pesada (Hc Dr 1, HCDR2 y HCDR3) y tres CDR en cada región variable de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 y LCDR3).
Las “regiones de entramado” (FR), tal como se usa en el presente documento, se refieren a las porciones que no son CDR de las regiones variables de las cadenas pesada y ligera. En general, hay cuatro FR en cada región variable de cadena pesada de longitud completa (FR-H1, FR-H2, FR-H3 y FR-H4), y cuatro FR en cada región variable de cadena ligera de longitud completa (FR-L1, FR-L2, FR-L3 y FR-L4).
El término “CL” se refiere a una “región constante de cadena ligera de inmunoglobulina” o una “región constante de cadena ligera”, es decir, una región constante de una cadena ligera de anticuerpo. El término “CH” se refiere a una “región constante de cadena pesada de inmunoglobulina” o una “región constante de cadena pesada”, que es divisible adicionalmente, dependiendo del isotipo del anticuerpo en dominios CH1, CH2 y CH3 (IgA, IgD, IgG), o CH1, CH2, CH3 y CH4 (IgE, IgM).
Una región de “unión a antígeno de fragmento” (Fab) es una parte de un anticuerpo que se une a antígenos e incluye la región variable y CH1 de la cadena pesada unida a la cadena ligera mediante un enlace disulfuro intercatenario. Una región de “fragmento cristalizable” (Fc) es una parte de un anticuerpo que no es una región Fab, e incluye las regiones CH distintas de CH1 (por ejemplo, CH2 y CH3 de un anticuerpo IgG, IgA o IgD, o CH2, CH3 y CH4 de un anticuerpo IgE). A modo de antecedentes, una región Fc es responsable de las funciones efectoras de una inmunoglobulina, tales como la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC), la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y la fijación del complemento, la unión a receptores Fc (por ejemplo, CD16, c D32, FcRn), mayor semivida in vivo en relación con un polipéptido que carece de una región Fc, unión a proteína A y quizás incluso transferencia placentaria (véase Capon et al., Nature 337:525, 1989).
Tal como se usa en el presente documento, “porción de región Fc” se refiere al segmento de región constante de cadena pesada de un fragmento Fc de un anticuerpo, que puede incluir uno o más dominios constantes, tales como CH2, c H3, CH4, o cualquier combinación de los mismos. En determinados casos, una porción de región Fc incluye los dominios CH2 y CH3 de un anticuerpo IgG, IgA o IgD, o cualquier combinación de los mismos, o los dominios CH2, CH3 y CH4 de un anticuerpo IgM o IgE y cualquier combinación de los mismos. En casos adicionales, una estructura CH2CH3 o CH3CH4 tiene dominios de subregión del mismo isotipo de anticuerpo y son humanos, tales como IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE o IgM humanas (por ejemplo, CH2Ch 3 de IgG1 o IgG4 humana). En
determinados casos, una porción de región Fc que se encuentra en las proteínas de fusión de la presente divulgación será capaz de mediar en una o más de las funciones efectoras de una inmunoglobulina, será capaz de mediar en una o más funciones efectoras mejoradas, o carecerá de una o más o la totalidad de estas actividades mediante, por ejemplo, una o más mutaciones conocidas en la técnica.
Además, los anticuerpos tienen una secuencia bisagra que se sitúa normalmente entre la región Fab y Fc (pero una sección inferior de la región bisagra puede incluir una porción amino-terminal de la región Fc). A modo de antecedentes, una región bisagra de inmunoglobulina actúa como espaciador flexible para permitir que la región Fab se mueva libremente en el espacio. En contraposición a las regiones constantes, las regiones bisagra son estructuralmente diversas, variando tanto en secuencia como en longitud entre clases de inmunoglobulinas e incluso entre subclases. Por ejemplo, una región bisagra de IgG1 humana es flexible libremente, lo que permite que las regiones Fab roten alrededor de sus ejes de simetría y se muevan dentro de una esfera centrada en el primero de dos puentes disulfuro entre cadenas pesadas. En comparación, una región bisagra de IgG2 humana es relativamente corta y contiene una doble hélice de poli-prolina rígida estabilizada por cuatro puentes disulfuro entre cadenas pesadas, lo que restringe la flexibilidad. Una región bisagra de IgG3 humana se diferencia de las otras subclases por su región bisagra extendida única (aproximadamente cuatro veces más larga que la región bisagra de IgG1), que contiene 62 aminoácidos (incluyendo 21 prolinas y 11 cisteínas), que forman una doble hélice de poli-prolina inflexible y que proporcionan mayor flexibilidad porque las regiones Fab están relativamente lejos de la región Fc. Una región bisagra de IgG4 humana es más corta que la de IgG1 pero tiene la misma longitud que la de IgG2, y su flexibilidad es intermedia entre la de IgG1 e IgG2.
Una “célula T” es una célula del sistema inmunitario que madura en el timo y produce receptores de células T (TCR). Las células T pueden ser vírgenes (no expuestas al antígeno; expresión aumentada de CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD127 y CD45RA, y expresión disminuida de CD45RO en comparación con Tcm), células T de memoria (Tm) (en contacto con antígeno y de larga vida) y células efectoras (en contacto con antígeno, citotóxicas). Tm pueden dividirse adicionalmente en subconjuntos de células T de memoria central (Tcm, expresión aumentada de CD62L, CCR7, CD28, CD127, CD45RO y CD95, y expresión disminuida de CD54RA en comparación con las células T vírgenes) y las células T de memoria efectora (Tem, expresión disminuida de CD62L, CCR7, CD28, CD45RA y expresión aumentada de CD127 en comparación con las células T o Tcm vírgenes). Células T efectoras (Te) se refiere a linfocitos T citotóxicos CD8+ en contacto con antígeno que tienen una expresión disminuida de CD62L, CCR7, CD28 y son positivos para granzima y perforina en comparación con Tcm. Las células T cooperadoras (Th) liberan citocinas para ayudar en la señalización antigénica y, cuando maduran, expresan la proteína de superficie CD4 (son CD4+). Tal como se usa en el presente documento, “células T” o “ linfocitos T” son de cualquier mamífero, incluyendo primates, perros o caballos, preferiblemente humanos. En algunas realizaciones, las células T son autólogas, alogénicas o singénicas.
“Receptor de células T” (TCR) se refiere a una molécula que se encuentra en la superficie de las células T (o linfocitos T) que, en asociación con CD3, es generalmente responsable de reconocer antígenos unidos a moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH). El TCR tiene un heterodímero unido por enlaces disulfuro de las cadenas a y p altamente variables (también conocidas como TCRa y TCRp, respectivamente) en la mayoría de las células T. En un pequeño subconjunto de células T, el TCR está formado por un heterodímero de cadenas y y 8 variables (también conocidas como TCRy y TCR8, respectivamente). Cada cadena del TCR es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas y posee un dominio variable de inmunoglobulina N-terminal, un dominio constante de inmunoglobulina, una región transmembrana y una cola citoplasmática corta en el extremo C-terminal (véase, Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3a ed., Current Biology Publications, pág. 4:33, 1997). El TCR, tal como se usa en la presente divulgación, puede ser de varias especies animales, incluyendo humanos, ratones, ratas, gatos, perros, cabras, caballos u otros mamíferos. Los TCR pueden estar unidos a células (es decir, tienen una región o dominio transmembrana) o en forma soluble. Tal como se comenta en el presente documento, un dominio de unión según la presente divulgación puede comprender un TCR monocatenario (scTCR), que es análogo a un scFv derivado de una inmunoglobulina y comprende los dominios variables de las cadenas TCRa y TCRp unidas entre sí usando, por ejemplo, un ligador peptídico o no peptídico y, opcionalmente, mediante enlaces disulfuro.
Las “moléculas de complejo mayor de histocompatibilidad” (moléculas de CMH) se refieren a glicoproteínas que suministran antígenos peptídicos a la superficie celular. Las moléculas de CMH de clase I son heterodímeros que constan de una cadena a que atraviesa la membrana (con tres dominios a) y una microglobulina p2 asociada no covalentemente. Las moléculas de CMH de clase II están compuestas por dos glicoproteínas transmembrana, a y p, las cuales atraviesan la membrana. Cada cadena tiene dos dominios. Las moléculas de CMH de clase I suministran péptidos que se originan en el citosol a la superficie celular, donde CD8 reconoce un complejo péptido:CMH+ Células T. Las moléculas de CMH de clase II suministran péptidos que se originan en el sistema vesicular a la superficie celular, donde son reconocidos por células T CD4+. Una molécula de CMH puede ser de varias especies animales, incluyendo humanos, ratones, ratas, gatos, perros, cabras, caballos u otros mamíferos.
“Células de linaje de células T” se refiere a células que muestran al menos una característica fenotípica de una célula T, o un precursor o progenitor de la misma que distingue las células de otras células linfoides y células de los linajes eritroide o mieloide. Tales características fenotípicas pueden incluir la expresión de una o más proteínas específicas
para las células T (por ejemplo, CD3+, CD4+, CD8+), o una característica fisiológica, morfológica, funcional o inmunológica específica de una célula T. Por ejemplo, las células del linaje de células T pueden ser células progenitoras o precursoras comprometidas con el linaje de células T; células T inmaduras e inactivadas CD25+; células que se han comprometido con el linaje CD4 o CD8; células progenitoras de timocitos que son positivas doblemente CD4+CD8+; positivas de manera única CD4+ o CD8+; TCRap o TCR y8; o células T maduras y funcionales o activadas.
Tal como se usa en el presente documento, “enriquecido” o “reducido” con respecto a las cantidades de tipos de células en una mezcla se refiere a un aumento del número del tipo “enriquecido”, una disminución del número de células “reducidas”, o ambos, en una mezcla de células resultante de uno o más procesos o etapas de enriquecimiento o reducción. Así, dependiendo de la fuente de una población original de células sometidas a un proceso de enriquecimiento, una mezcla o composición puede contener el 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o el 99% o más (en número o recuento) de las células “enriquecidas”. Las células sometidas a un proceso de reducción pueden dar como resultado una mezcla o composición que contiene el 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% o el 1% por ciento o menos (en número o recuento) de las células “reducidas”. En determinadas realizaciones, se enriquecerán las cantidades de un determinado tipo de célula en una mezcla y se reducirán las cantidades de un tipo de célula diferente, tal como enriquecimiento de células CD4+ mientras se reducen las células CD8+, o enriquecimiento para células CD62L+ mientras se reducen células CD62L-, o combinaciones de las mismas.
“Tratar” o “tratamiento” o “mejorar” se refiere al manejo médico de una enfermedad, un trastorno o una afección de un sujeto (por ejemplo, un mamífero humano o no humano, tal como un primate, caballo, gato, perro, cabra, ratón o rata). En general, una dosis apropiada o un régimen de tratamiento que comprende una célula huésped que expresa una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector de esta divulgación y, opcionalmente, se administra un adyuvante en una cantidad suficiente para provocar un beneficio terapéutico o profiláctico. El beneficio terapéutico o profiláctico/preventivo incluye un desenlace clínico mejorado; disminución o alivio de los síntomas asociados con una enfermedad; disminución de la aparición de síntomas; calidad de vida mejorada; estado libre de enfermedad más prolongado; disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización del estado de enfermedad; retraso de la progresión de la enfermedad; remisión; supervivencia; supervivencia prolongada;, o cualquier combinación de los mismos. Tal como se describe adicionalmente en el presente documento, un régimen de tratamiento puede comprender una terapia de combinación en la que se administran una o más moléculas de unión específicas de CD20, tales como, por ejemplo, anticuerpos anti-CD20 antes, simultáneamente, de manera contemporánea o después de la administración de una o más terapias secundarias o complementarias. Los anticuerpos anti-CD20 a modo de ejemplo adecuados para su uso en los métodos terapéuticos descritos en el presente documento incluyen 1.5.3, 1F5, Leu16, rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab y ocrelizumab.
Una “cantidad terapéuticamente eficaz” o “cantidad eficaz” de una molécula de unión específica de CD20, una proteína de fusión o una célula huésped que expresa una proteína de fusión de esta divulgación (por ejemplo, CAR CD20) se refiere a una cantidad de moléculas de unión, proteínas de fusión o células huésped específicas de CD20 suficiente para dar como resultado un efecto terapéutico, incluyendo un desenlace clínico mejorado; disminución o alivio de los síntomas asociados con una enfermedad; disminución de la aparición de síntomas; calidad de vida mejorada; estado libre de enfermedad más prolongado; disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización del estado de enfermedad; retraso de la progresión de la enfermedad; remisión; supervivencia; o supervivencia prolongada de una manera estadísticamente significativa. Cuando se hace referencia a un principio activo individual o una célula que expresa un único principio activo, administrado solo, una cantidad terapéuticamente eficaz se refiere a los efectos de ese principio o célula que expresa ese principio solo. Cuando se hace referencia a una combinación, una cantidad terapéuticamente eficaz se refiere a las cantidades combinadas de principios activos o principio activo adyuvante combinado con una célula que expresa un principio activo que da como resultado un efecto terapéutico, ya sea administrado en serie o simultáneamente. Una combinación también puede ser una célula que exprese más de un principio activo, tal como dos CAR CD20 diferentes, o un CAR Cd 20 y TCR CD20, o CAR CD20 y otro agente terapéutico relevante.
El término “excipiente o portador farmacéuticamente aceptable” o “excipiente o portador fisiológicamente aceptable” se refiere a vehículos biológicamente compatibles, por ejemplo, solución salina fisiológica, que se describen con mayor detalle en el presente documento, que son adecuados para la administración a un humano u otro sujeto mamífero no humano y generalmente reconocidos como seguros o que no provocan un acontecimiento adverso grave.
Tal como se usa en el presente documento, “estadísticamente significativo” se refiere a un valor p de 0,050 o menos cuando se calcula usando la prueba de la t de Student e indica que es poco probable que un acontecimiento o resultado particular que está midiéndose haya surgido por casualidad.
Tal como se usa en el presente documento, el término “terapia inmunitaria adoptiva” o “ inmunoterapia adoptiva” se refiere a la administración de células inmunitarias específicas de antígeno de enfermedad que se producen de manera natural o modificadas por ingeniería genética (por ejemplo, células T). La inmunoterapia celular adoptiva puede ser autóloga (las células inmunitarias proceden del receptor), alogénica (las células inmunitarias proceden de un donante
de la misma especie) o singénica (las células inmunitarias proceden de un donante genéticamente idéntico al receptor).
Proteínas de fusión
En determinados aspectos, se divulgan en el presente documento proteínas de fusión que comprenden un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba.
Un “componente extracelular” comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20. Un “dominio de unión” (también denominado “región de unión” o “resto de unión”), tal como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula, tal como un péptido, oligopéptido, polipéptido o una proteína que posee la capacidad de asociarse, unirse o combinarse de manera no covalente y específica con una molécula diana (por ejemplo, CD20). Un dominio de unión incluye cualquier pareja de unión que se produce de manera natural, sintética, semisintética o producida de manera recombinante para una molécula biológica u otra diana de interés. En algunos casos, un dominio de unión es un dominio de unión a antígeno, tal como un anticuerpo o TCR, o un dominio de unión funcional o fragmento de unión a antígeno del mismo.
En determinados casos, un dominio de unión comprende un ligador de región variable (por ejemplo, scFv). Un “ ligador de región variable” se refiere específicamente a una secuencia de cinco aminoácidos a aproximadamente 35 aminoácidos que conecta una región variable de inmunoglobulina de cadena pesada (VH) a una región variable de inmunoglobulina de cadena ligera (VL), o conecta cadenas Va/p y Ca/p de TCR. por ejemplo, Va-Ca, Vp-Cp, Va-Vp) o conecta cada par Va-Ca, Vp-Cp, o Va-Vp con una región bisagra o dominio hidrófobo, lo que proporciona una función espaciadora y flexibilidad suficiente para la interacción de los dos subdominios de unión de modo que el polipéptido de cadena sencilla resultante retenga una afinidad de unión específica a la misma molécula diana que un anticuerpo o TCR.
En determinados casos, un ligador de región variable comprende desde aproximadamente diez aminoácidos hasta aproximadamente 30 aminoácidos o desde aproximadamente 15 aminoácidos hasta aproximadamente 25 aminoácidos. En casos particulares, un péptido ligador de región variable comprende de una a diez repeticiones de GlyXSery, donde x e y son independientemente un número entero de 0 a 10, siempre que x e y no sean ambos 0 (por ejemplo, Gly4Ser), GlypSer, Gly2Ser o (Gly3Ser)n(Gly4Ser)1, (Gly3Ser)n(Gly2Ser)n, (Gly3Ser)n(Gly4Ser)n o (Gly4Ser)n, donde n es un número entero de 1, 2, 3, 4, 5 ó 6) y donde las regiones variables ligadas forman un dominio de unión funcional similar a inmunoglobulina (por ejemplo, scFv o scTCR).
Los dominios de unión a modo de ejemplo incluyen regiones variables de anticuerpos monocatenarios (por ejemplo, anticuerpos de dominio, sFv, scFv o Fab), regiones de unión a antígeno de TCR, tales como TCR de cadena sencilla (scTCR) o polipéptidos sintéticos seleccionados por la capacidad específica de unirse a una molécula biológica.
Tal como se usa en el presente documento, “se une específicamente” se refiere a una asociación o unión de un dominio de unión, o una proteína de fusión del mismo, a una molécula diana con una afinidad o Ka (es decir, una constante de asociación de equilibrio de una interacción de unión particular con unidades de 1/M) igual a o mayor de 105 M'1, sin asociarse ni unirse significativamente con ninguna otra molécula o componente en una muestra. Los dominios de unión (o proteínas de fusión de los mismos) pueden clasificarse como dominios de unión de “alta afinidad” (o proteínas de fusión de los mismos) o dominios de unión de “baja afinidad” (o proteínas de fusión de los mismos). Los dominios de unión de “alta afinidad” (o proteínas de fusión de los mismos) se refieren a los dominios de unión (o proteínas de fusión de los mismos) con una Ka de al menos 107 M-1, al menos 108 M-1, al menos 109 M-1, al menos 1010M-1, al menos 1011 M-1, al menos 1012M_1 o al menos 1013M-1. Los dominios de unión de “baja afinidad” (o proteínas de fusión de los mismos) se refieren a los dominios de unión (o proteínas de fusión de los mismos) con una Ka de hasta 107 M-1, hasta 106 M-1, hasta 105 M-1.
Alternativamente, la afinidad puede definirse como una constante de disociación de equilibrio (Kd) de una interacción de enlace particular con unidades de M (por ejemplo, de 10'5 M a 10'13M). En determinados casos, un dominio de unión puede tener una “afinidad mejorada”, que se refiere a un dominio de unión seleccionado o modificado por ingeniería con una unión más fuerte a un antígeno diana que un dominio de unión de tipo natural (o parental). Por ejemplo, la afinidad mejorada puede deberse a una Ka (constante de asociación de equilibrio) para el antígeno diana que es mayor que para el dominio de unión de tipo natural, debido a una Kd (constante de disociación) para el antígeno diana que es menor que la del del dominio de unión de tipo natural, o debido a una velocidad de disociación (Koff) para el antígeno diana que es menor que la del del dominio de unión de tipo natural. Se conoce una variedad de ensayos para identificar dominios de unión de la presente divulgación que se unen específicamente a una diana particular, así como para determinar afinidades de dominio de unión o proteína de fusión, tales como análisis mediante inmunotransferencia de tipo Western, ELISA y Biacore® (véanse también, por ejemplo, Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; y las patentes estadounidenses n.os 5.283.173, 5.468,614, o un equivalente).
El análisis o el modelado informático de la estructura de aminoácidos primaria y secundaria de un dominio de unión para analizar la estructura terciaria de una proteína puede ayudar a identificar residuos de aminoácido específicos que pueden sustituirse, añadirse o delecionarse sin alterar significativamente la estructura y como consecuencia, potencialmente reduciendo significativamente la especificidad y la afinidad de unión de un dominio de unión.
En determinados casos, un dominio de unión comprende una región Vh. Por ejemplo, una región Vh en un dominio de unión de la presente divulgación puede derivar de o basarse en una Vh de un anticuerpo monoclonal conocido y puede contener uno o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) inserciones, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) deleciones, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) sustituciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones de aminoácidos conservativas o sustituciones de aminoácidos no conservativas), o una combinación de los cambios mencionados anteriormente, en comparación con la VH de un anticuerpo monoclonal conocido. Una inserción, deleción o sustitución puede ser en cualquier parte de la región Vh, incluso en el extremo amino-terminal, el extremo carboxi-terminal o en ambos extremos de la región, siempre que cada CDR comprenda cero cambios o como máximo uno, dos, tres o cuatro cambios de una CDR de la región Vh de un anticuerpo monoclonal conocido, y siempre que un dominio de unión que contenga la región Vh modificada se une específicamente a su diana con una afinidad similar a la del dominio de unión de tipo natural.
En determinados casos, un dominio de unión comprende una región Vl. Por ejemplo, una región Vl en un dominio de unión de la presente divulgación deriva de o se basa en una Vl de un anticuerpo monoclonal conocido y puede contener uno o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) inserciones, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) deleciones, una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10) sustituciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones conservativas de aminoácidos), o una combinación de los cambios mencionados anteriormente, en comparación con la Vl de un anticuerpo monoclonal conocido. Una inserción, deleción o sustitución puede ser en cualquier parte de la región Vl, incluso en el extremo amino, el extremo carboxi-terminal o en ambos extremos de la región, siempre que cada CDR comprenda cero cambios o como máximo uno, dos, tres o cuatro cambios de una CDR de la región Vl de un anticuerpo monoclonal conocido, y proporcionó un dominio de unión que contenía la región Vl modificada se une específicamente a su diana con una afinidad similar a la del dominio de unión de tipo natural.
En determinados casos, un dominio de unión comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, al menos el 99,5% o el 100% a una secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena ligera (Vl); por ejemplo, a una Vl de 1.5.3 (SEQ ID NO.:1), 1F5 (SEQ ID NO.: 3), Leu16 (SEQ ID NO.: 2), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab.
En casos adicionales, un dominio de unión comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, al menos el 99,5% o el 100% a una secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena pesada (Vh); por ejemplo, a una Vh de 1.5.3 (SEQ ID NO: 4), 1F5 (SEQ ID NO: 6), Leu16 (SEQ ID NO: 5), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab.
En todavía casos adicionales, un dominio de unión comprende (a) una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, al menos el 99,5% o el 100% a una secuencia de aminoácidos de una Vl; por ejemplo, a una Vl de 1.5.3 (SEQ ID NO:1), 1F5 (SEQ ID NO: 3), Leu16 (SEQ ID NO: 2), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab; y (b) una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos al 99%, al menos al 99,5% o el 100% a una secuencia de aminoácidos de una Vh; por ejemplo, a una Vh de 1.5.3 (SEQ ID NO: 4), 1F5 (SEQ ID NO: 6), Leu16 (SEQ ID NO: 5), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab. En cualquiera de los casos mencionados anteriormente, cada CDR de la VL, VH, o ambas comprenden cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios, en comparación con un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que un dominio de unión que contiene la Vl, Vh modificada, o ambas regiones se unen específicamente a CD20 con una afinidad similar a la del dominio de unión de tipo natural.
En determinados casos, un dominio de unión comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, al menos el 99,5% o el 100% a una secuencia de aminoácidos de un scFv, por ejemplo, un scFv de un anticuerpo de 1.5.3 (SEQ ID NO.:64), 1F5 (SEQ ID NO.:66), Leu16 (SEQ ID NO.:65), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab, donde cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios, en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a c D20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar a la del scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente.
En determinados casos, un dominio de unión está codificado por un polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de polinucleótido que codifica para una región variable de cadena ligera (Vl); por ejemplo, a un polinucleótido que codifica para Vl de 1.5.3 (SEQ ID NO.: 70), 1F5 (SEQ ID NO.: 72), Leu16 (SEQ ID NO.: 71), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab.
En casos adicionales, un dominio de unión comprende un polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de polinucleótido que codifica para una región variable de cadena pesada (Vh); por ejemplo, a un polinucleótido que codifica para Vh de 1.5.3 (SEQ ID NO.: 73), 1F5 (SEQ ID NO.: 75), Leu16 (SEQ ID NO.: 74), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab.
En todavía casos adicionales, un dominio de unión comprende (a) un polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de polinucleótido que codifica para una Vl; por ejemplo, a un polinucleótido que codifica para Vl de 1.5.3 (SEQ ID NO.: 70), 1F5 (SEQ ID NO.: 72), Leu16 (SEQ ID NO.: 71), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab; y (b) un polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de polinucleótido que codifica para una Vh; por ejemplo, a un polinucleótido que codifica para una Vh de 1.5.3 (SEQ ID NO.: 73), 1F5 (SEQ ID NO.: 75), Leu16 (SEQ ID NO.: 74), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab u ocrelizumab. En cualquiera de los casos mencionados anteriormente, los polinucleótidos que codifican para cada CDR de la Vl, Vh, o ambas comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un anticuerpo monoclonal parental o un fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que un dominio de unión que contiene la Vl, Vh modificado, o ambas regiones se unen específicamente a CD20 con una afinidad similar a la del dominio de unión de tipo natural.
En determinados casos, un dominio de unión comprende un polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de polinucleótido que codifica para un scFv, por ejemplo, un scFv codificado que comprende dominios variables de un anticuerpo de 1.5.3 (SEQ ID NO.:67), 1F5 (SEQ ID NO.:69), Leu16 (SEQ ID NO.:68), rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ublituximab, u ocrelizumab. En cada uno de los casos mencionados anteriormente, las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar a la del scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente.
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, un dominio de unión puede consistir, comprender, basarse o derivar de una Vh, una Vl, o ambas, de ublituximab (véase, por ejemplo el documento, US 2015/0290317), rituximab (véase, por ejemplo, el documento US 2014/0004037), ocrelizumab (véase, por ejemplo, el documento US 8,679,767), ofatumumab (véase, por ejemplo, el documento US 2009/0169550) o veltuzumab (véase, por ejemplo, el documento US 2009/0169550). Adicionalmente, en cualquiera de los métodos descritos en el presente documento, una molécula de unión a CD20 puede comprender rituximab, ofatumumab, veltuzumab u ocrelizumab, ublituximab, o cualquier combinación de los mismos.
Una proteína de fusión de la presente divulgación comprende un componente intracelular que comprende un dominio efector. Tal como se usa en el presente documento, un “dominio efector” es una porción o un dominio intracelular de una proteína de fusión o receptor que puede fomentar directa o indirectamente una respuesta biológica o fisiológica en una célula cuando recibe una señal apropiada. En determinados casos, un dominio efector es de o una porción de una proteína o un complejo proteico que recibe una señal cuando se une, o cuando la proteína o porción de la misma o el complejo proteico se une directamente a una molécula diana y desencadena una señal del dominio efector. Un dominio efector puede fomentar directamente una respuesta celular cuando contiene uno o más dominios o motivos de señalización, tales como un motivo de activación basado en tirosina de inmunorreceptor (ITAM), tal como se encuentra en moléculas coestimuladoras. Generalmente se sabe que una molécula coestimuladora o una porción de la misma que comprende ITAM es capaz de iniciar la señalización de activación de células T después del acoplamiento del ligando. En casos adicionales, un dominio efector fomentará indirectamente una respuesta celular al asociarse con una o más de otras proteínas que promueven directamente una respuesta celular.
En determinados casos, un dominio efector comprende un dominio de señalización del receptor de linfocitos (por ejemplo, CD3Q, comprende un polipéptido que tiene uno o más ITAM de una molécula coestimuladora (por ejemplo, CD28, 4-1BB (CD137), OX40 (CD134)), o combinaciones de los mismos. En todavía casos adicionales, un dominio efector comprende una porción citoplasmática que se asocia con una proteína de señalización citoplasmática, en la que la proteína de señalización citoplasmática es un receptor de linfocitos o un dominio de señalización del mismo, una proteína que comprende una pluralidad de ITAM, un factor coestimulador, o cualquier combinación de los mismos.
Los ejemplos de dominios efectores incluyen los de 4-1BB (CD137), CD3e, CD38, CD3^, CD25, CD27, CD28, CD79A, CD79B, CARD11, DAP10, FcRa, FcRp, FcRy, Fyn, HVEM, ICOS, Lck, LAG3, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, Wnt, OX40 (CD134), ROR2, Ryk, SLAMF1, Slp76, pTa, TCRa, TCRp, TRIM, Zap70, PTCH2, o cualquier combinación de los mismos.
En determinados casos, un dominio efector comprende una porción o un dominio de la molécula coestimuladora CD28, que puede incluir opcionalmente una mutación Ll ^ GG en las posiciones 186-187 de la proteína CD28 nativa (SEQ
ID NO.:15; véase Nguyen et al., Blood 102:4320, 2003). En casos adicionales, un dominio efector comprende CD3^ o una porción funcional del mismo (SEQ ID NO.:17) y una o más porciones o dominios de una molécula coestimuladora, tal como CD28 (SEQ ID NO.:15), 4-1BB (SEQ iD NO.:16), CD27 u OX40. En casos particulares, un dominio efector de una proteína de fusión de la presente divulgación comprende un dominio efector o una porción funcional del mismo de CD3C (SEQ ID NO.:17) y CD28 (SEQ ID NO.:15); CD3C (SEQ ID NO.:17) y 4-1BB (SEQ ID NO.:16); o CD3C (SEQ ID NO.:17), CD28 (SEQ ID NO.:15) y 4-1BB (SEQ ID NO.:16).
En determinados casos, un dominio efector comprende CD3^ o una porción funcional del mismo, que está codificado por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90 %, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 86. En casos adicionales, un dominio efector comprende una porción o un dominio de la molécula coestimuladora CD28, que está codificado por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 84. En todavía casos adicionales, un dominio efector comprende una porción o un dominio de la molécula coestimuladora 4-1BB, que está codificado por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 85.
Un dominio extracelular y un dominio intracelular de la presente divulgación están conectados por una porción hidrófoba. Una “porción hidrófoba”, tal como se usa en el presente documento, significa cualquier secuencia de aminoácidos que tenga una estructura tridimensional que sea termodinámicamente estable en una membrana celular y que tenga generalmente una longitud de desde aproximadamente 15 aminoácidos hasta aproximadamente 30 aminoácidos. La estructura de una porción hidrófoba puede comprender una hélice alfa, un barril beta, una lámina beta, una hélice beta, o cualquier combinación de los mismos. En determinados casos, una porción hidrófoba se compone de un “dominio transmembrana” de una proteína transmembrana conocida, que es una porción de la proteína transmembrana que puede insertarse en o atravesar una membrana celular. En algunos casos, una porción hidrófoba es un dominio transmembrana, tal como un dominio transmembrana de CD4, un dominio transmembrana de CD8, CD28 (por ejemplo, SEQ ID NO.:14), dominio transmembrana de CD27 y dominio transmembrana de 4-1BB. En determinados casos, una porción hidrófoba es un dominio transmembrana de CD28 (SEQ ID NO.:14). En casos adicionales, una porción hidrófoba es un dominio transmembrana de CD28, que está codificado por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 83.
Una proteína de fusión de la presente divulgación puede comprender además un módulo de ligador. Un “módulo de ligador” puede ser una secuencia de aminoácidos que tiene desde aproximadamente dos aminoácidos hasta aproximadamente 500 aminoácidos, que puede proporcionar flexibilidad y espacio para el movimiento conformacional entre dos regiones, dominios, motivos, fragmentos o módulos conectados por un ligador. En determinados casos, un módulo de ligador puede estar ubicado entre un dominio de unión y una región hidrófoba. En tales casos, un módulo de ligador puede situar un dominio de unión lejos de la superficie celular para permitir el contacto intercelular, la unión a antígenoy la activación adecuados (Patel et al., Gene Therapy 6: 412-419, 1999). La longitud del módulo de ligador puede variarse para maximizar el reconocimiento tumoral en función de la molécula diana seleccionada, el epítopo de unión seleccionado o el tamaño y la afinidad del dominio de unión a antígeno (véase, por ejemplo., Guest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005; publicación PCT n.° WO 2014/031687). Los módulos de ligador a modo de ejemplo incluyen aquellos que tienen un ligador de glicina-serina (Gly-Ser) que tiene desde una hasta aproximadamente diez repeticiones de GlyxSery, donde x e y son independientemente un número entero desde 0 hasta 10, siempre que x e y no sean ambos 0 (por ejemplo, (Gly4Ser)2, (Gly3Ser)2, Gly2Ser, o una combinación de los mismos, tal como (Gly3Ser)2Gly2Ser). En determinados casos, un módulo de ligador comprende una o más regiones constantes de cadena pesada de inmunoglobulina, tal como una CH3 sola, o una estructura CH2CH3, una estructura CH3CH4, una región bisagra de inmunoglobulina, o cualquier combinación de los mismos (por ejemplo, una estructura CH2CH3 junto con una región bisagra). En casos adicionales, un módulo de ligador comprende la totalidad o una parte de un dominio Fc seleccionado de: un dominio CH1, un dominio CH2, un dominio CH3, o combinaciones de los mismos (véase, por ejemplo, publicación PCT WO 2014/031687).
Los módulos de ligador a modo de ejemplo pueden variar en longitud, por ejemplo, desde aproximadamente cinco aminoácidos hasta aproximadamente 500 aminoácidos, desde aproximadamente diez aminoácidos hasta aproximadamente 350 aminoácidos, desde aproximadamente 15 aminoácidos hasta aproximadamente 100 aminoácidos, desde aproximadamente 20 aminoácidos hasta aproximadamente 75 aminoácidos, o desde aproximadamente 25 aminoácidos hasta aproximadamente 35 aminoácidos. En casos adicionales, un módulo de ligador puede comprender además una región bisagra, una etiqueta o ambas. Cada uno de estos componentes del módulo de ligador no es mutuamente excluyente.
En determinados casos, un módulo de ligador de una proteína de fusión de esta divulgación puede incluir una región CH2 de IgG1 con una mutación N297Q (SEQ ID NO.:10); una región CH2 de IgG4 (SEQ ID No .:11); una región CH3 de IgG1 (SEQ ID NO.:12); o una región Ch 3 de IgG4 (s Eq ID NO.:13). En determinados casos, un módulo de ligador puede incluir un ligador de glicina-serina (SEQ ID NO.: 20, que puede estar codificado por SEQ ID NO.: 89, o SEQ ID NO.: 21, que puede estar codificado por Se Q ID NO.: 90).
En casos adicionales, un módulo de ligador de una proteína de fusión de esta divulgación puede incluir una región CH2 de IgG1 con una mutación N297Q, que está codificada por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 79. En casos adicionales, un módulo de ligador de una proteína de fusión de esta divulgación puede incluir una región CH2 de IgG4, que está codificada por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 80. En todavía casos adicionales, un módulo de ligador de una proteína de fusión de esta divulgación puede incluir una región CH3 de IgG1, que está codificada por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 81. En aún casos adicionales, un módulo de ligador de una proteína de fusión de esta divulgación puede incluir una región CH3 de IgG4, que está codificada por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 8 0 %, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad de secuencia con SEQ ID NO.: 82.
En determinados casos, un módulo de ligador comprende además una región bisagra. Tal como se usa en el presente documento, una “región bisagra” o una “bisagra” se refiere a (a) una secuencia bisagra de inmunoglobulina (formada por, por ejemplo, regiones superior y central), o un fragmento funcional o variante de la misma, (b) una región de interdominio (tallo) de C-lectina de tipo II, o un fragmento funcional o variante de la misma, o (c) un cúmulo de diferenciación (CD) de región de tallo de molécula, o una variante funcional del mismo. Tal como se usa en el presente documento, una “región bisagra de inmunoglobulina de tipo natural” se refiere a secuencias de aminoácidos de bisagra superior y media que se producen de manera natural interpuestas entre los dominios CH1 y CH2 que se encuentran en la cadena pesada de un anticuerpo y que conectando los mismos. En determinados casos, una región bisagra es humana y, en casos particulares, comprende una región bisagra de IgG humana. En casos adicionales, una región bisagra es una región bisagra de IgG4 alterada tal como se describe en la publicación PCT n.° WO 2014/031687. En casos particulares, una región bisagra de una proteína de fusión de esta divulgación puede ser una región bisagra de IgG1 (SEQ ID NO.: 7). En casos relacionados, una región bisagra de una proteína de fusión de esta divulgación puede ser una región bisagra de IgG1, que está codificada por un polinucleótido tal como se expone en SEQ ID NO.:76.
Una proteína de fusión de la presente divulgación puede comprender además aminoácidos de unión. “Aminoácidos de unión” o “residuos de aminoácido de unión” se refieren a uno o más (por ejemplo, aproximadamente 2-20) residuos de aminoácido entre dos dominios, motivos, regiones, módulos o fragmentos adyacentes de una proteína, tal como entre un dominio de unión y un módulo de ligador adyacente, entre un dominio hidrófobo y un dominio efector adyacente, o en uno o ambos extremos de un módulo de ligador que liga dos dominios, motivos, regiones, módulos o fragmentos (por ejemplo, entre un módulo de ligador y un dominio de unión adyacente o entre un módulo de ligador y una región bisagra adyacente). Los aminoácidos de unión pueden resultar del diseño del constructo de una proteína de fusión (por ejemplo, residuos de aminoácido resultantes del uso de un sitio de enzima de restricción durante la construcción de una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión). Por ejemplo, una porción hidrófoba de una proteína de fusión puede tener uno o más aminoácidos de unión en el extremo amino-terminal, extremo carboxi-terminal o ambos. Los ejemplos de aminoácidos de unión incluyen aminoácidos de unión de IgG2 (por ejemplo, SEQ ID NO.: 9, que puede estar codificada por SEQ ID NO.: 78). En algunos casos en los que una región bisagra es de IgG4, la región bisagra puede incluir aminoácidos de unión (por ejemplo, SEQ ID NO.: 8, que puede estar codificada por SEQ ID NO.: 77). En determinados casos, una porción hidrófoba es un dominio transmembrana de CD28 que tiene un aminoácido de SEQ ID NO.:14 en el que el dominio transmembrana de CD28 comprende un aminoácido de unión amino-terminal de, por ejemplo, metionina (véanse, por ejemplo, proteínas de fusión de SEQ ID NO.: 30, 31, 39 y 40). Por tanto, en determinados casos, un módulo de ligador comprende una región bisagra de IgG4, aminoácidos de unión de IgG4 e CH2-CH3 de IgG4. En algunos casos adicionales, un módulo de ligador comprende una región bisagra de IgG1, aminoácidos de unión de IgG2 y CH2-CH3 de IgG1.
En algunos casos, una proteína de fusión de la presente divulgación puede comprender además una etiqueta. Tal como se usa en el presente documento, “etiqueta” se refiere a una secuencia peptídica única fijada a, fusionada a o que forma parte de una proteína de interés, a la que una molécula de unión afín heteróloga o no endógena (por ejemplo, receptor, ligando, anticuerpo u otra pareja de unión) es capaz de unirse específicamente, en la que la propiedad de unión puede usarse para detectar, identificar, aislar o purificar, rastrear, enriquecer o dirigirse a una proteína marcada con etiqueta o células que expresan una proteína marcada con etiqueta. proteína, particularmente cuando una proteína marcada con etiqueta forma parte de una población heterogénea de proteínas u otro material, o cuando las células que expresan una proteína marcada con etiqueta forman parte de una población heterogénea de células (por ejemplo, una muestra biológica como sangre periférica). (Véase, por ejemplo, el documento WO 2015/095895.) En las proteínas de fusión proporcionadas, la capacidad de la(s) etiqueta(s) de unirse específicamente a la(s) molécula(s) de unión afín/afines es distinta de, o además de, la capacidad del/de los dominio(s) de unión para unirse específicamente a la(s) molécula(s) diana. Una etiqueta generalmente no es una molécula de unión a antígeno, por ejemplo, no es un anticuerpo o TCR o una porción de unión a antígeno de los mismos. Los ejemplos de etiquetas incluyen etiqueta Strep, etiqueta His, etiqueta Flag, etiqueta Xpress, etiqueta Avi, etiqueta de calmodulina, etiqueta de poliglutamato, etiqueta HA, etiqueta Myc, etiqueta Nus, etiqueta S, etiqueta X, etiqueta SBP, Softag, etiqueta V5, CBP, GST, MBP, GFP, etiqueta de tiorredoxina. En realizaciones particulares, una etiqueta Strep tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.:62 o SEQ ID NO.:63.
Una proteína de fusión de la presente divulgación puede comprender un péptido señal. Un “péptido señal” es una secuencia corta (por ejemplo, 5-30 aminoácidos) que se usa para seleccionar como diana la proteína de fusión para la expresión en la superficie celular. Los péptidos señal a modo de ejemplo incluyen el péptido de señalización del factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) (SEQ ID NO.:18, que puede estar codificado por SEQ ID NO.: 87) y el péptido señal kappa murino (SEQ ID NO.:19, que puede estar codificado por SEQ ID NO.: 88).
En determinados casos, una proteína de fusión es un receptor de antígeno quimérico. “Receptor de antígeno quimérico” (CAR) se refiere a una proteína de fusión de la presente divulgación diseñada para contener dos o más secuencias de aminoácidos que se producen de manera natural ligadas entre sí de una manera que no se produce de manera natural o no se produce de manera natural en una célula huésped, proteína de fusión que puede funcionar como receptor cuando está presente en la superficie de una célula.
En algunos casos, un CAR es completamente humano o humanizado. En determinados casos, un CAR tiene un scFv de un anticuerpo anti-CD20 o un scTCR de un TCR específico para un antígeno CD20. En casos particulares, un CAR comprende un scFv de 1.5.3, 1F5, Leu16, rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ocrelizumab, ublituximab, o cualquier combinación de los mismos. En casos particulares, un CAR comprende un módulo de ligador que comprende una región bisagra de IgG1, una región bisagra de IgG4, o cualquier combinación de las mismas. En casos adicionales, un CAR comprende un módulo de ligador que comprende una región CH2 de IgG1 con una mutación N297Q, una región CH2 de IgG4, una región CH3 de IgG1, una región CH3 de IgG4, o cualquier combinación de las mismas. En todavía casos adicionales, una porción hidrófoba de un CAR comprende un dominio transmembrana de CD28. En algunos casos, un CAR comprende un dominio intracelular que comprende una porción o un dominio de CD3^, 4-1BB, CD28, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los casos anteriores, un CAR comprende aminoácidos de unión entre dos dominios, motivos, regiones, módulos o fragmentos adyacentes.
En determinados casos, un CAR puede ser idéntico en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, al menos el 99,5% o el 100% a 1.5.3-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.:26); 1.5.3-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 27); 1.5.3-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 28); 1.5.3-NQ-z (SEQ ID NO.: 29); Leu16-28-BB-z (SEQ ID NO.: 30); Leu16-28-z (SEQ ID NO.: 31); 1F5-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 32); 1F5-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 33); o 1F5-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 34). En casos particulares, un CAR comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:26-34.
En determinados casos, un CAR puede ser idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.: 44-52. En casos particulares, un CAR está codificado por un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-52.
Los métodos para preparar proteínas de fusión, incluyendo los CAR, se conocen bien en la técnica y se describen, por ejemplo, en la patente estadounidense n.° 6.410.319; la patente estadounidense n.° 7.446.191; la publicación de patente estadounidense n.° 2010/065818; la patente estadounidense n.° 8.822.647; la publicación PCT n.° WO 2014/031687; la patente estadounidense n.° 7.514.537; y Brentjens et al., 2007, Clin. Cancer Res. 13:5426.
Células huésped, ácidos nucleicos y vectores
En determinados aspectos, en el presente documento se divulgan moléculas de ácido nucleico que codifican para una cualquiera o más de las proteínas de fusión descritas en el presente documento. Puede obtenerse o producirse un polinucleótido que codifica para una proteína de fusión deseada usando métodos recombinantes conocidos en la técnica usando técnicas convencionales, tales como cribado de bibliotecas de células que expresan una secuencia deseada o una porción de la misma, derivando una secuencia de un vector que se sabe que incluye la misma, o aislando una secuencia o una porción de la misma directamente de células o tejidos que la contienen. Alternativamente, puede producirse de manera sintética una secuencia de interés. Tales moléculas de ácido nucleico pueden insertarse en un vector apropiado (por ejemplo, vector viral o vector plasmídico no viral) para su introducción en una célula huésped de interés (por ejemplo, una célula inmunitaria, tal como una célula T).
Un “vector” es una molécula de ácido nucleico que es capaz de transportar otro ácido nucleico. En algunas realizaciones, los vectores contienen terminadores de la transcripción o traducción, secuencias de iniciación o promotores para la regulación de la expresión de una secuencia de ácido nucleico deseada. Los vectores pueden ser, por ejemplo, plásmidos, cósmidos, virus o fagos, o un sistema de transposones (por ejemplo, Sleeping Beauty, véase, por ejemplo, Geurts et al., Mol. Ther. 8:108, 2003; Mates et al., Nat. Genet. 41:753, 2009). Un “vector de expresión” es un vector que es capaz de dirigir la expresión de una proteína codificada por uno o más genes portados por un vector cuando está presente en el entorno apropiado.
Un vector que codifica para un virus de núcleo se denomina en el presente documento “vector viral”. Existe una gran cantidad de vectores virales disponibles adecuados para su uso con las composiciones de la presente divulgación, incluyendo los identificados para aplicaciones de terapia génica humana (véase Pfeifer y Verma, Ann. Rev. Genomics
Hum. Genet. 2:177, 2001). Los vectores virales adecuados incluyen vectores basados en virus de ARN, tales como vectores derivados de retrovirus.
Los “retrovirus” son virus que tienen un genoma de ARN, que se transcribe de manera inversa en ADN usando una enzima transcriptasa inversa, el ADN de transcriptasa inversa se incorpora luego en el genoma de la célula huésped. “Gamma-retrovirus” se refiere a un género de la familia Retroviridae. Los ejemplos de gamma-retrovirus incluyen virus de células madre de ratón, virus de leucemia murina, virus de leucemia felina, virus del sarcoma felino y virus de reticuloendoteliosis aviar. “Lentivirus” se refiere a otro género de retrovirus que son capaces de infectar células en división y no en división. Varios ejemplos de lentivirus incluyen el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH; incluyendo el VIH tipo 1 y el VIH tipo 2); virus de la anemia infecciosa equina; virus de inmunodeficiencia felina (VIF); virus de inmunodeficiencia bovina (BIV); y virus de inmunodeficiencia de simios (VIS).
En determinados casos, el vector viral puede ser un gamma-retrovirus, por ejemplo, vectores derivados del virus de la leucemia murina de Moloney (VLM). En otras realizaciones, el vector viral puede ser un vector derivado de retrovirus más complejo, por ejemplo, un vector derivado de lentivirus. Los vectores derivados del VIH-1 pertenecen a esta categoría. Otros ejemplos incluyen vectores de lentivirus derivados del VIH-2, VIF, virus de la anemia infecciosa equina, VIS y virus Maedi-Visna (lentivirus ovino). Se conocen en la técnica métodos para usar vectores virales retrovirales y lentivirales y células de empaquetamiento para transducir células huésped de mamíferos con partículas virales que contienen transgenes de CAR y se han descrito previamente, por ejemplo, en la patente estadounidense 8.119.772; Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011; Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005; Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003; Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010; Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009. También están disponibles comercialmente constructos de vectores y sistemas de expresión retrovirales y lentivirales. También pueden usarse otros vectores virales para el suministro de polinucleótidos, incluyendo vectores virales de ADN, que incluyen, por ejemplo, vectores basados en adenovirus y vectores basados en virus adenoasociados (VAA); vectores derivados de los virus del herpes simple (VHS), incluyendo los vectores de amplicón, VHS con replicación defectuosa y VHS atenuado (Krisky et al., Gene Ther. 5:1517, 1998).
También pueden usarse otros vectores desarrollados recientemente para usos de terapia génica con las composiciones y los métodos de esta divulgación. Tales vectores incluyen los derivados de baculovirus y virus a. (Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. págs. 209-40 en Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. Nueva York: Cold Spring Harbor Lab), o vectores plasmídicos (tales como Sleeping Beauty u otros vectores de transposón).
En determinados casos, se usa un vector viral para introducir un polinucleótido no endógeno que codifica para una proteína de fusión específica para una diana, tal como CD20. En tales casos, un vector viral puede ser un vector retroviral o un vector lentiviral. Un vector viral también puede incluir secuencias de ácido nucleico que codifican para un marcador para la transducción. Se conocen en la técnica marcadores de transducción para vectores virales e incluyen marcadores de selección, que pueden conferir resistencia a fármacos, marcadores detectables, tales como marcadores fluorescentes o proteínas de superficie celular que pueden detectarse mediante métodos tales como citometría de flujo.
En determinados casos, un vector viral comprende un marcador de transducción. Tal como se usa en el presente documento, puede incluirse un “marcador de transducción” en cualquiera de los constructos como una forma de controlar la eficiencia de transfección o para detectar células que expresan una proteína de fusión de interés. Los marcadores de transducción a modo de ejemplo de proteína fluorescente verde, un dominio extracelular de CD2 humana, un EGFR humano truncado (huEGFRt; SEQ ID NO: 25, que puede estar codificado por SEQ ID NO: 94; véase Wang et al., Blood 118:1255, 2011), o un CD19 truncado (s Eq ID NO.: 24, que puede estar codificado por SEQ ID NO.: 93). En determinadas formas de realización, un vector viral comprende un gen suicida, tal como iCasp9 (véase, por ejemplo, Gargett y Brown, Front. Pharmacol. 5:235, 2104) o TK de VHS (véase, por ejemplo, Fillat et al., Curr. Gene Ther. 3:13, 2003).
Cuando el genoma de un vector viral comprende una pluralidad de polinucleótidos que van a expresase en una célula huésped como transcriptos independientes, el vector viral también puede comprender secuencias adicionales entre los dos (o más) transcriptos que permitan la expresión bicistrónica o multicistrónica. Los ejemplos de tales secuencias usadas en vectores virales incluyen sitios internos de entrada al ribosomas (IRES), sitios de escisión de furina, péptido 2A viral, o cualquier combinación de los mismos. En determinados casos, un constructo de vector puede comprender un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible (por ejemplo, E2A (SEQ ID NO.:22, que puede estar codificado por SeQ ID NO.:91), T2A (s Eq ID NO.:23, que puede estar codificado por SEQ ID NO.:92), P2A (SEQ ID NO. :92) n O.:95, que puede estar codificado por SEQ iD n O.:97), o F2A (SEQ ID No .:96, que puede estar codificado por SEQ ID NO.:98)) de tal manera que la proteína de fusión madura no contiene un marcador de transducción o un gen suicida. En determinados casos, un vector de ácido nucleico puede codificar para un péptido de fusión de la presente divulgación, que contiene opcionalmente un marcador de transducción (tal como tCD19 o tEGFR). Las moléculas de ácido nucleico que codifican para una proteína de fusión de esta divulgación pueden someterse a optimización de codones para mejorar o maximizar la expresión en ciertos tipos de células, tal como las células T (Scholten et al., Clin. Immunol. 119:135-145, 2006), y pueden contener opcionalmente un marcador de transducción (tal como tCD19 o tEGFR).
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, un vector que contiene un polinucleótido que codifica para una proteína de fusión de esta divulgación también puede contener un polinucleótido que codifica para un marcador de transducción, que puede usarse para seleccionar como diana una célula huésped que expresa el marcador de transducción para ablación o muerte. Se ha demostrado que la persistencia de células T CAR que seleccionan como diana antígeno funcional puede provocar una reducción sostenida de las células sanas que expresan de manera endógena el antígeno (véase, por ejemplo, Paskiewicz et al., J. Clin. Invest., 126(11):4262-4272 (2016). Así, son deseables los mecanismos de control que permiten la regulación (por ejemplo, ablación, destrucción o producción de otro efecto citotóxico) de las células T transferidas después de lograr un efecto antitumoral deseado. Tal como se usa en el presente documento, el término “efecto citotóxico” abarca la ablación, la destrucción o el deterioro o la reducción de la capacidad de una célula para crecer, dividirse o sobrevivir. Los ejemplos no limitativos de efectos citotóxicos incluyen necrosis, lisis, apoptosis, hinchamiento, pérdida de la integridad de membrana, tasas o niveles reducidos de transcripción, tasas o niveles reducidos de traducción, tasas o niveles reducidos de producción de ATP, tasas o niveles aumentados de especies reactivas de oxígeno, función mitocondrial reducida, condensación nuclear, escisión aumentada del ADN de la célula, tasas reducidas de división o proliferación y reducción o pérdida de función celular específica (por ejemplo, la capacidad de un linfocito B para producir inmunoglobulinas). Un enfoque a modo de ejemplo es usar un marcador (por ejemplo, tEGFR) reconocible por un anticuerpo (por ejemplo, cetuximab) o conjugado anticuerpo-fármaco que, tras unirse al marcador, facilita respuestas citotóxicas mediadas por células dependientes de anticuerpos (ADCC) o citotóxicas dependientes del complemento (CDC), o suministra una molécula citotóxica, para someter a ablación, destruir o provocar de otro modo un efecto citotóxico sobre las células T transferidas. Por tanto, en determinados casos, un vector comprende un polinucleótido que codifica para una proteína de fusión y comprende un polinucleótido que codifica para un marcador de transducción. Un marcador de transducción que puede unirse específicamente por un anticuerpo citotóxico, un conjugado anticuerpo-fármaco u otro agente citotóxico se denomina en el presente documento “un marcador de transducción suicida”. En determinados casos, un método de tratamiento de una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped transformada a un sujeto según la presente divulgación, en el que la célula huésped transformada comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión y un polinucleótido heterólogo que codifica para un marcador de transducción suicida, en el que el método comprende opcionalmente administrar un anticuerpo citotóxico, conjugado anticuerpo-fármaco u otro agente citotóxico que se asocia específicamente con, se une a o forma un complejo con el marcador de transducción suicida. En algunas realizaciones, un marcador de transducción suicida comprende o consiste en un EGFR truncado (por ejemplo, SEQ ID NO.: 25), que se une específicamente a un anticuerpo anti-EGFR, tal como, por ejemplo, cetuximab. En casos adicionales, un marcador de transducción suicida comprende o consiste en un CD19 truncado (por ejemplo, SEQ ID NO.: 24), que se une específicamente a un anticuerpo anti-CD19 citotóxico o un conjugado anticuerpo-fármaco, tal como, por ejemplo, blinatumomab, coltuximab-ravtansina, MOR208, MEDI-551, denintuzumab-mafodotina, anticuerpo anti-CD19 patentado por Merck, taplutumomab-paptox, XmAb 5871, MDX-1342, SAR3419, SGN-19A o AFM11 (véase, por ejemplo, Naddafi y Davami, Int. J. Mol. Cell. Med., 4(3):143-151 (2015)).
Una proteína de fusión codificada de esta divulgación puede ser un CAR, tal como un CAR específico de CD20. En determinados casos, un CAR o un dominio de unión del mismo codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación es completamente humano o humanizado. En casos adicionales, un CAR codificado por un vector de esta divulgación tiene un scFv de un anticuerpo anti-CD20 o un scTCR de un TCR específico para un antígeno CD20. En todavía casos adicionales, un CAR codificado por un vector de esta divulgación comprende un scFv de 1.5.3, 1F5, Leu16, rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ocrelizumab, ublituximab, o cualquier combinación de los mismos. En casos particulares, un CAR codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación comprende un módulo de ligadorque comprende una región bisagra de IgG1, una región bisagra de IgG4, o cualquier combinación de las mismas. En casos adicionales, un CAR codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación comprende un módulo de ligadorque comprende una región CH2 de IgG1 con una mutación N297Q, una región CH2 de IgG4, una región CH3 de IgG1, una región CH3 de IgG4, o cualquier combinación de las mismas. En casos particulares, un módulo de ligador o un ligador de región variable de un CAR codificado por un vector de esta divulgación comprende un ligador de glicina-serina. En todavía casos adicionales, una porción hidrófoba de un CAR codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación comprende un dominio transmembrana de CD28. En algunos casos, un CAR codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación comprende un dominio intracelular que comprende una porción o un dominio de CD3^, 4-1BB, CD28, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, un CAR codificado por un polinucleótido contenido en un vector de esta divulgación comprende aminoácidos de unión entre dominios, motivos, regiones, módulos o fragmentos adyacentes.
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, un vector puede comprender un polinucleótido que codifica para un CAR que es idéntico en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos al 99%, al menos el al 99,5% o el 100% a 1.5.3-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 26); 1.5.3-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 27); 1.5.3-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 28); 1.5.3-NQ-z (SEQ ID NO.: 29); Leu16-28-BB-z (SEQ ID NO.: 30); Leu16-28-z (SEQ ID NO.: 31); 1F5-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 32); 1F5-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 33); o 1F5-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 34). En casos adicionales, un vector puede comprender un polinucleótido que codifica para un CAR que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:26-34.
En todavía casos adicionales, un CAR específico de CD20 está codificado por un polinucleótido contenido en un vector, en el que el polinucleótido tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.: 44-52. En casos relacionados, un CAR específico de CD20 está codificado por un polinucleótido contenido en un vector, en el que el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-52.
Opcionalmente, cualquier vector de esta divulgación que contenga un polinucleótido que codifique para un CAR de esta divulgación también puede codificar para un marcador de transducción (por ejemplo, tCD19), que también puede incluir un péptido autoescindible de modo que el marcador de transducción y el CAR se separen en moléculas independientes: un CAR y un marcador de transducción. En determinados casos, un vector puede comprender un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de CD20 y un marcador de transducción tCD19, polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a la secuencia de una molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61. En casos adicionales, un vector puede comprender un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de CD20 y un marcador de transducción tCD19 y que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61.
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, un polinucleótido aislado codifica para una proteína de fusión capaz de unirse específicamente a CD20, en el que el polinucleótido: (a) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56 ; (b) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (c) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; (d) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (e) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; o (f) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47.
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, una proteína de fusión está codificada por un polinucleótido aislado tal como se describe en el presente documento. En determinados casos, la proteína de fusión consta o comprende una secuencia de aminoácidos en la que la proteína de fusión: (a) es idéntica en al menos el 90% a una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29 y 35-38 y 32-34 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (b) se compone de una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (c) consiste en una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (d) es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:26 29; (e) se compone de una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:2629; (f) consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 2629.
En determinados casos, se proporciona una célula huésped que comprende un polinucleótido heterólogo tal como se divulga en el presente documento y es capaz de expresar la proteína de fusión codificada por el polinucleótido heterólogo.
En cualquiera de los casos divulgados en el presente documento, una célula huésped comprende un polinucleótido aislado que codifica para una proteína de fusión capaz de unirse específicamente a CD20, en la que el polinucleótido: (a) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO. : 53-56; (b) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (c) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; (d) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (e) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; o (f) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47.
En determinados casos, una célula huésped comprende una proteína de fusión que consiste en o comprende una secuencia de aminoácidos en la que la proteína de fusión: (a) es idéntica en al menos el 90% a una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29 y 35-38 y 32-34 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (b) se compone de una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (c) consiste en una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (d) es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:2629; (e) se compone de una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:2629; (f) consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26 29.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo tal como se divulga en el presente documento y es capaz de expresar la proteína de fusión codificada por el polinucleótido heterólogo.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un dominio de unión, en el que el dominio de unión es: (a) un scFv de 1.5.3 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 64, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente; (b) un scFv de 1.5.3 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 64; (c) un scFv de 1F5 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 66, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; (d) un scFv de 1F5 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 66; (e) un scFv de Leu16 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 65, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a c D20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; o (f) un scFv de Leu16 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 65.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un scFv, en el que el scFv está codificado por: (a) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID No .: 67, en el que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente; (b) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 67; (c) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 69, en el que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente; (d) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 69; (e) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 68, en el que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente; o (f) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 68.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión, en el que la proteína de fusión es un receptor de antígeno quimérico y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-3443.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende una porción hidrófoba, en la que la porción hidrófoba es un dominio transmembrana. En determinados casos, la porción hidrófoba es un dominio transmembrana de CD4, CD8, CD28 o CD27.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un dominio efector o una porción funcional del mismo, en la que el dominio efector o una porción funcional del mismo es un 4-1BB (CD137), CD3e, CD38, CD3^, CD25, CD27, CD28, CD79A, CD79B, CARD11, DAP10, FcRa, FcRp, FcRy, Fyn, HVEM, ICOS, Lck, LAG3, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, OX40 (CD134), ROR2, Ryk SLAMF1, Slp76, pTa, TCRa, TCRp, TRIM, Zap70, PTCH2, o cualquier combinación de los mismos.
En determinados casos, una célula huésped comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un componente intracelular, en la que el componente intracelular comprende: (a) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD28 o una porción funcional del
mismo y un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción del mismo; (b) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD28 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo; (c) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción del mismo; (d) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo; (e) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de CD28 o una porción del mismo; o (f) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo.
En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, un vector que contiene una proteína de fusión de esta invención se transduce en una célula huésped. “Transducción” se refiere a la introducción de una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, un vector que codifica para una proteína de fusión de la presente divulgación) en una célula huésped. Después de la transducción, una célula huésped puede portar un vector de manera extracromosómica o integrado en un cromosoma. La integración en el genoma de una célula huésped o vectores autorreplicativos generalmente da como resultado una herencia estable genéticamente de un vector transformado. Puede usarse cualquier método de transducción adecuado. Un vector puede transferirse a una célula huésped mediante medios físicos, químicos o biológicos. Una célula huésped que contiene una molécula de ácido nucleico transformada se denomina “modificada”, “recombinante” o “no natural”.
En determinadas realizaciones, una célula, tal como una célula T, obtenida de un sujeto puede convertirse en una célula modificada por ingeniería, no natural o recombinante (por ejemplo, una célula T modificada por ingeniería, no natural o recombinante) mediante la introducción de una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión localizada en la superficie celular de la invención, donde la célula expresa la proteína de fusión.
En determinadas realizaciones, una célula huésped transfectada para expresar una proteína de fusión de esta invención es una célula T funcional, tal como una célula T específica de virus, una célula T citotóxica específica de antígeno tumoral, una célula T virgen, una célula T madre de memoria, una célula T de memoria central o efectora, células T y8 o una célula T reguladora CD4+ CD25+. En realizaciones adicionales, se introduce una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión de esta invención en células T CD8+ en masa, células T CD8+ vírgenes, células Tcm CD8+, células CD8+ Tem, o cualquier combinación de las mismas. En todavía realizaciones adicionales, se introduce una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión de esta invención en células T CD4+ en masa, células T CD4+ vírgenes, células Tcm CD4+, células CD4+ Tem, o cualquier combinación de las mismas. En otras realizaciones, se introduce una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión de esta invención en una población de células T enriquecidas con células T CD8+ vírgenes y células Tcm CD8+. En todavía otras realizaciones, se introduce una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de fusión de esta invención en una población de células T enriquecidas con células T CD4+ vírgenes y células Tcm CD4+. En cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente, las células T contienen además una molécula de ácido nucleico que codifica para un TCR específico de CD20 modificado por ingeniería, un TCR de alta afinidad específico de CD20 modificado por ingeniería, un CAR específico de CD20, o cualquier combinación de los mismos.
En determinadas realizaciones, antes de la expansión y modificación genética de las células T con un constructo de proteína de fusión de esta invención, se obtiene una fuente de células T de un sujeto (por ejemplo, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), médula ósea, tejido de los ganglios linfáticos, sangre del cordón umbilical, tejido del timo, tejido de un sitio de infección, ascitis, derrame pleural o tejido del bazo), a partir de los cuales se aíslan las células T mediante métodos conocidos en la técnica. Pueden recogerse subconjuntos de células T específicas según técnicas conocidas y enriquecerse o reducirse mediante técnicas conocidas, tales como unión por afinidad a anticuerpos, citometría de flujo o selección inmunomagnética. Después de las etapas de enriquecimiento o reducción y la introducción de una proteína de fusión, puede llevarse a cabo una expansión in vitro de las células T modificadas deseadas según técnicas conocidas (incluyendo las descritas en la patente estadounidense n.° 6.040.177), o variaciones de las mismas que resultarán evidentes para los expertos en la técnica.
Por ejemplo, una población o subpoblación de células T deseada puede expandirse añadiendo una población de células T inicial a un medio de cultivo in vitro, y luego añadiendo células nodriza, tales como PBMC que no están en división, al medio de cultivo, (por ejemplo, de tal manera que la población resultante de células contiene al menos aproximadamente 5, 10, 20 o 40 o más células nodriza de PBMC por cada célula T en la población inicial que va a expandirse); e incubando el cultivo (por ejemplo, durante un tiempo suficiente para expandir el número de células T). Las células nodriza que no están en división pueden comprender células nodriza de PBMC irradiadas con radiación gamma. En algunas realizaciones, las PBMC se irradian con rayos gamma en el intervalo de aproximadamente 3000 a 3600 rads. El orden de adición de células T y células nodriza al medio de cultivo puede invertirse si se desea. Normalmente, un cultivo puede incubarse en condiciones de temperatura y similares que sean adecuadas para el crecimiento de células T. Para el crecimiento de linfocitos T humanos, por ejemplo, la temperatura será generalmente de al menos aproximadamente 25°C, preferiblemente al menos aproximadamente 30°C, más preferiblemente de aproximadamente 37°C.
Opcionalmente, los métodos de expansión pueden comprender además la adición de células linfoblastoides (LCL) transformadas con el virus de Epstein-Barr (VEB) que no están en división como células nodriza. Las LCL pueden irradiarse con rayos gamma en el intervalo de aproximadamente 6000 a 10.000 rads. Las células nodriza de LCL pueden proporcionarse en cualquier cantidad adecuada, tal como una razón de células nodriza de LCL con respecto a linfocitos T iniciales de al menos aproximadamente 10:1.
Después del aislamiento de los linfocitos T, tanto los linfocitos T citotóxicos CD8+ como los linfocitos T cooperadores CD4+ pueden clasificarse en subpoblaciones de células T vírgenes, de memoria y efectoras antes de modificarse genéticamente con una proteína de fusión y expandirse. En determinadas realizaciones, las células T que se modifican para expresar las proteínas de fusión de esta invención son células T en masa (por ejemplo, células T CD4+ en masa o células T CD8+ en masa), o son una subpoblación de células T, tal como las células T de memoria central (por ejemplo, células T de memoria central CD8+) o una combinación de células T de memoria central (Tcm) y vírgenes (Tn) (por ejemplo, células CD4+ Tcm + Tn).
En cualquiera de los casos descritos en el presente documento, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un CAR que es idéntico en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos al 99%, al menos al 99,5% o el 100% a 1.5.3-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 26); 1.5.3-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 27); 1.5.3-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 28); 1.5.3-NQ-z (SEQ ID NO.: 29); Leu16-28-BB-z (SEQ ID NO.: 30); Leu16-28-z (SEQ ID NO.: 31); 1F5-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 32); 1F5-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 33); o 1F5-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 34). En casos adicionales, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un CAR que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:26-34. En cualquiera de estos casos, la célula huésped es una célula T, en la que las células T son células T CD4+ en masa, células T CD8+ en masa, células T de memoria central CD4+, células T de memoria central CD8+ o una combinación de células T de memoria central CD4+ (Tcm) y células T vírgenes CD4+ (Tn). las células T CD4+ modificadas con CAR y las células T CD8+ modificadas con CAR pueden mezclarse en una razón de 3:1 a 1:1 a 1:3 antes de la administración a un sujeto, o pueden administrarse a un sujeto por separado en las mismas razones o similares.
En todavía casos adicionales, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un CAR específico de CD20, en la que el polinucleótido tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90 %, al menos el 95% o el 100% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-52. En casos relacionados, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un CAR específico de CD20, en la que el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de una cualquiera de SEQ ID No .:44-52. En cualquiera de estos casos, la célula huésped es una célula T, en la que las células T son células T CD4+ en masa, células T CD8+ masivas, células T de memoria central CD4+, células T de memoria central CD8+ o una combinación de células T de memoria central CD4+ (Tcm) y células T vírgenes CD4+ (Tn). Las células T CD4+ modificadas con CAR y las células T CD8+ modificadas con CAR pueden mezclarse en una razón de 3:1 a 1:1 a 1:3 antes de la administración a un sujeto, o pueden administrarse a un sujeto por separado en las mismas razones o similares.
Opcionalmente, una célula huésped que comprende cualquier vector de esta divulgación que contiene un polinucleótido que codifica para un CAR de esta divulgación también puede codificar para un marcador de transducción (por ejemplo, tCD19), que también puede incluir un péptido autoescindible de modo que el marcador de transducción y el CAR se separen en moléculas independientes: un CAR y un marcador de transducción. En determinados casos, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de CD20 y un marcador de transducción tCD19, polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61. En casos adicionales, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de CD20 y un marcador de transducción tCD19 y comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61.
Si una célula T o una población de células T es positiva para un marcador de superficie celular particular puede determinarse mediante citometría de flujo usando tinción con un anticuerpo específico para el marcador de superficie y un anticuerpo de control de isotipo coincidente. Una población de células que es “negativa” para un marcador se refiere a la ausencia de tinción significativa de la población de células con un anticuerpo específico por encima de un control de isotipo, y “positiva” se refiere a una tinción uniforme de la población de células por encima de los niveles hallados en un control de isotipo. En algunas realizaciones, una disminución de la expresión de uno o más marcadores se refiere a una pérdida de 1 log10 en la IFM o una disminución porcentual de las células T que presentan el marcador de al menos el 20% de las células, el 25% de las células, el 30% de células, el 35% de células, el 40% de células, el 45% de células, el 50% de células, el 55% de células, el 60% de células, el 65% de células, el 70% de las células, el 75% de las células, el 80% de las células, el 85% de las células, el 90% de la célula, el 95% de las células o el 100%
de las células, o cualquier porcentaje entre el 20% y el 100% cuando se compara con una población de células T de referencia. En algunas realizaciones, una población de células T positiva para un marcador se refiere a un porcentaje de células que presentan el marcador, que puede ser al menos el 50% de las células, el 55% de las células, el 60% de las células, el 65% de las células, el 70% de las células, el 75% de las células, el 80% de las células, el 85% de las células, el 90% de las células, el 95% de las células o el 100% de las células, o cualquier porcentaje entre el 50% y el 100% cuando se compara con una población de células T de referencia.
También pueden usarse métodos de selección inmunomagnética para purificar subpoblaciones de células T usando conjugados de perlas de anticuerpos de grado clínico disponibles comercialmente usando un dispositivo CliniMACS (véanse, por ejemplo, Terakura et al., 2012, Blood 119:72-82; Wang et al., 2012, J. Immunother. 35:689-701). Por ejemplo, para aislar células Tcm CD8+ humanas, se retiran células CD4+, CD14+ y CD45RA+ de las células mononucleares de sangre periférica mediante la reducción con perlas paramagnéticas conjugadas con anticuerpos, y luego la fracción CD62L+ de las células restantes se selecciona positivamente con una perla marcada con anticuerpo anti-CD62L para enriquecerla para la subpoblación de Tcm CD45RO+, CD62L+, CD8+. La subpoblación de Tcm CD8+ enriquecida puede activarse con perlas anti-CD3/CD28 o con antígeno, modificarse con CAR específico del tumor usando vectores retrovirales o lentivirales, y expandirse para su uso en inmunoterapia celular (véase, por ejemplo, Terakura et al., citado anteriormente; Wang et al., citado anteriormente).
Alternativamente, pueden seleccionarse subconjuntos de células T usando fragmentos Fab de baja afinidad fusionados con la etiqueta Strep-tag II. Los monómeros Fab no tienen suficiente afinidad de unión para la unión estable a un antígeno diana en la superficie celular. Sin embargo, cuando se multimerizan en una perla StrepTactin, estos reactivos se unen de manera estable a una célula diana y permiten la selección basada en la especificidad del marcador de superficie celular. La unión de un multímero de Fab puede revertirse rápidamente mediante la adición de D-biotina en exceso, que tiene una mayor afinidad por StrepTactin y rompe la unión entre una etiqueta Strep en un fragmento Fab y una “estructura principal” de Strep-Tactin. Los monómeros de Fab no pueden mantener una unión estable a la célula. Esta tecnología “Fab-Streptamers” permite el enriquecimiento positivo en serie de células T basado en múltiples marcadores de superficie celular y puede usarse para seleccionar cualquier subconjunto de células T deseado (véase, por ejemplo, Stemberger et al., PloS One 7:e35798.2012).
Pueden obtenerse células T CD8+ en masa usando métodos convencionales. En algunas realizaciones, las células T CD8+ en masa se clasifican además en células T vírgenes, de memoria central y efectoras identificando ciertos marcadores de superficie celular que están asociados con cada uno de esos tipos de células T CD8+. En determinadas realizaciones, las células T de memoria están presentes en los subconjuntos CD62L+ y CD62L- de los linfocitos de sangre periférica CD8+. Por ejemplo, las Pb Mc pueden clasificarse en fracciones CD62L-CD8+ y CD62L+CD8+ después de la tinción con anticuerpos anti-CD8 y anti-CD62L. En algunas realizaciones, la expresión de marcadores fenotípicos de células T de memoria central c D8+ incluyen CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 o CD127 o son negativas para la granzima B. En algunas realizaciones, las células T de memoria central son células T CD45RO+, CD62L+, CD8+. En algunas realizaciones, las células T efectoras CD8+ son negativas o tienen una expresión reducida de CD62L, CCR7, CD28 o CD127, o son positivas o tienen una expresión aumentada de granzima B o perforina, en comparación con las células T de memoria central CD8+. En algunas realizaciones, las células T CD8+ vírgenes se caracterizan por la expresión de marcadores fenotípicos de células T vírgenes, incluyendo CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD127 o CD45RA.
Pueden obtenerse linfocitos CD4+ en masa mediante métodos convencionales. En algunas realizaciones, las células T CD4+ en masa se clasifican además en células vírgenes, de memoria central y efectoras identificando poblaciones de células que tienen ciertos marcadores de superficie celular. En algunas realizaciones, los linfocitos T CD4+ vírgenes son células T CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+. En algunas realizaciones, las células CD4+ de memoria central son positivas para CD62L y positivas para CD45RO. En algunas realizaciones, las células CD4+ efectoras son negativas para CD62L o CD45RO o tienen una expresión reducida de CD62L o CD45RO en comparación con las células CD4+ de memoria central.
Las poblaciones de CD4+ y CD8+ que tienen TCR que son específicos de antígeno pueden obtenerse estimulando con antígeno linfocitos T vírgenes o específicos de antígeno. Por ejemplo, pueden generarse clones de células T que tienen TCR específicos de antígeno contra, por ejemplo, antígenos de citomegalovirus aislando células T de sujetos infectados y estimulando las células in vitro con el mismo antígeno. Las células T vírgenes también pueden usarse exponiéndolas a antígenos peptídicos presentados en el contexto de una célula presentadora de antígeno o un complejo péptido-CMH. Puede utilizarse cualquier número de antígenos de células tumorales, células cancerosas o agentes patógenos. Los ejemplos de tales antígenos incluyen antígenos del VIH, antígenos del virus de la hepatitis C (VHC), antígenos del virus de la hepatitis B (VHB), antígenos de citomegalovirus (CMV), antígenos de VEB, antígenos parasitarios y antígenos tumorales, tales como receptor de tirosina quinasa huérfano ROR1, EGFR, EGFRvIII, GD2, GD3, E6 de VPH, E7 de VPH, Her2, L1-CAM, Lewis A, Lewis Y, MUC1, MUC16, PSMA, CD19, CD20, CD22, CD56, CD23, CD24, CD37, CD30, CD33, CD38, CD56, CD123, CA125, c-MET, FcRH5, WT1, receptor de folato a, VEGF-a, VEGFR1, VEGFR2, IL-13Ra2, IL-11Ra, MAGE-A1, PSA, efrina A2, efrina B2, ligandos de NKG2D, NY-ESO-1, TAG-72, mesotelina, CEA o similares. Tales células T que tienen TCR específicos de antígeno pueden modificarse adicionalmente para contener una proteína de fusión tal como se describe en el presente documento, en las que la proteína de fusión es específica para el mismo antígeno, específica para un epítopo diferente en el mismo antígeno o
específica para un antígeno diferente. En cualquiera de estas realizaciones, las células T CD4+ y las células T CD8+ contendrán CAR diferentes y, en particular, los componentes de señalización intracelular de los CAR serán distintos.
Se conocen en la técnica métodos para preparar y modificar células T para expresar proteínas de fusión de esta divulgación, confirmar la actividad de células T modificadas con proteínas de fusión, expandir poblaciones de células T modificadas con proteínas de fusión y se describen, por ejemplo, en Hollyman et al., 2009, J. Immunother. 32:169-180; la publicación PCT n.° WO 2012/079000; la patente estadounidense n.° 8.802.374; Brentjens et al., Blood 118:4817-4828, 2011; la publicación de patente estadounidense n.° US 2014/0271635.
Usos
En el presente documento se divulgan métodos de tratamiento de una enfermedad, afección o un trastorno en un sujeto que comprenden: administrar al sujeto cualquiera de las proteínas de fusión descritas en el presente documento. Los métodos de la presente divulgación incluyen métodos de reducción del número de células B o tratamiento de una enfermedad o un trastorno asociado con la actividad aberrante de células B en un sujeto. Otro aspecto proporciona un método de tratamiento de una enfermedad, afección o un trastorno de un sujeto que comprende analizar una muestra biológica del sujeto para detectar la presencia de un antígeno asociado con la enfermedad, afección o el trastorno y administrar una proteína de fusión descrita en el presente documento, en el que la proteína de fusión se une específicamente al antígeno. En algunos casos, el antígeno asociado con la enfermedad, afección o el trastorno es un antígeno asociado con tumores.
Las enfermedades, afecciones o los trastornos que pueden tratarse con composiciones y métodos tal como se describen en la presente divulgación incluyen cáncer y enfermedades inmunitarias (por ejemplo, autoinmunitarias). Por ejemplo, en determinados casos, una célula que expresa CD20 comprende células B. En casos adicionales, la enfermedad o el trastorno asociado con la expresión de CD20 se encuentra en las células B o en la actividad aberrante de células B, tal como los cánceres relacionados con células B. La terapia adoptiva inmunitaria y genética son tratamientos prometedores para diversos tipos de cáncer (Morgan et al., Science 314:126, 2006; Schmitt et al., Hum. Gene Ther. 20:1240, 2009; June, J. Clin. Invest. 117:1466, 2007).
Una amplia variedad de cánceres, incluyendo los tumores sólidos y las leucemias, son susceptibles de las composiciones y los métodos divulgados en el presente documento. Los tipos de cáncer a modo de ejemplo que pueden tratarse incluyen adenocarcinoma de mama, próstata y colon; todas las formas de carcinoma broncogénico de pulmón; leucemia mieloide; melanoma; hepatoma; neuroblastoma; papiloma; apudoma; coristoma; branquioma; síndrome carcinoide maligno; cardiopatía carcinoide; y carcinoma (por ejemplo, de Walker, basocelular, basoescamoso, de Brown-Pearce, ductal, tumor de Ehrlich, Krebs 2, células de Merkel, mucinoso, de pulmón de células no pequeñas, avenocelular, papilar, escirroso, bronquiolar, broncogénico, de células escamosas y de células de transición). Los tipos adicionales de cánceres que pueden tratarse incluyen trastornos histiocíticos; histiocitosis maligna; leucemia; enfermedad de Hodgkin; inmunoproliferativo pequeño; linfoma no Hodgkin; plasmacitoma; reticuloendoteliosis; melanoma; condroblastoma; condroma; condrosarcoma; fibroma; fibrosarcoma; tumores de células gigantes; histiocitoma; lipoma; liposarcoma; mesotelioma; mixoma; mixosarcoma; osteoma; osteosarcoma; cordoma; craneofaringioma; disgerminoma; hamartoma; mesenquimoma; mesonefroma; miosarcoma; ameloblastoma; cementoma; odontoma; teratoma; timoma; tumor trofoblástico. Además, los siguientes tipos de cánceres también se contemplan como susceptibles de tratamiento: adenoma; colangioma; colesteatoma; ciclindroma; cistadenocarcinoma; cistadenoma; tumor de células de la granulosa; ginandroblastoma; hepatoma; hidradenoma; tumor de células de los islotes; tumor de células de Leydig; papiloma; tumor de células de Sertoli; tumor de células de la teca; leimioma; leiomiosarcoma; mioblastoma; mioma; miosarcoma; rabdomioma; rabdomiosarcoma; ependimoma; ganglioneuroma; glioma; meduloblastoma; meningioma; neurilemoma; neuroblastoma; neuroepitelioma; neurofibroma; neuroma; paraganglioma; quimiodectoma. Los tipos de cánceres que pueden tratarse también incluyen angioqueratoma; hiperplasia angiolinfoide con eosinofilia; angioma esclerosante; angiomatosis; glomangioma; hemangioendotelioma; hemangioma; hemangiopericitoma; hemangiosarcoma; linfangioma; linfangiomioma; linfangiosarcoma; pinealoma; carcinosarcoma; condrosarcoma; cistosarcoma filoides; fibrosarcoma; hemangiosarcoma; leiomiosarcoma; leucosarcoma; liposarcoma; linfangiosarcoma; miosarcoma; mixosarcoma; carcinoma de ovario; rabdomiosarcoma; sarcoma; neoplasias; nerofibromatosis; y displasia de cuello uterino.
Como ejemplos de la variedad de trastornos hiperproliferativos susceptibles de las composiciones y los métodos divulgados en el presente documento se encuentran las enfermedades o los trastornos asociados con la expresión de CD20, tal como la actividad aberrante de células B, incluyendo los cánceres de células B, tales como los linfomas de células B (tales como diversas formas de enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (LNH) o linfomas del sistema nervioso central), leucemias (tales como leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia de células pilosas, transformación blástica de células B de la leucemia mieloide crónica) y mielomas (tales como mieloma múltiple). Otros cánceres de células B incluyen linfoma linfocítico pequeño (LLP), macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de células dendríticas CD37+, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de zona marginal esplénico, mieloma de células plasmáticas, plasmocitoma óseo solitario, plasmocitoma extraóseo, linfoma de células B de zona marginal extraganglionar de tejido linfoide asociado a mucosa (TLAM), linfoma de células B de zona marginal ganglionar, linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células B grandes mediastínico (tímico), linfoma linfoblástico de células B precursoras, linfoma
inmunoblástico de células grandes, linterna de células B grandes intravascular, linterna de efusión primaria, leucemia/linfoma de Burkitt, proliferaciones de células B de potencial maligno incierto, granulomatosis linfomatoide y trastorno linfoproliferativo postrasplante. Las composiciones y los métodos de esta divulgación pueden usarse para tratar enfermedades o trastornos que no implican a células B asociados con la expresión de CD20, incluyendo mieloma múltiple, melanoma, mieloma múltiple de células madre y melanoma de células madre.
Las enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias susceptibles a las composiciones y los métodos divulgados en el presente documento incluyen artritis, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, policondritis, artritis psoriásica, psoriasis, dermatitis, miopatía inflamatoria idiopática, polimiositis/dermatomiositis, miositis por cuerpos de inclusión, miositis inflamatoria, necrólisis epidérmica tóxica, esclerodermia sistémica y esclerosis, síndrome CREST, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enfermedad de Graves, colitis ulcerosa, síndrome de dificultad respiratoria, síndrome de dificultad respiratoria del adulto (SDRA), meningitis, encefalitis, uveítis, colitis, glomerulonefritis, afecciones alérgicas, eccema, asma, afecciones que involucran infiltración de células T y respuestas inflamatorias crónicas, aterosclerosis, miocarditis autoinmunitaria, deficiencia de adhesión leucocitaria, lupus eritematoso sistémico (LES), lupus eritematoso cutáneo subagudo, lupus discoide, mielitis lúpica, encefalitis lúpica, diabetes de comienzo en la juventud, esclerosis múltiple, encefalomielitis alérgica, neuromielitis óptica, fiebre reumática, corea de Sydenham, respuestas inmunitarias asociadas con hipersensibilidad aguda y retardada mediada por citocinas y linfocitos T, tuberculosis, sarcoidosis, granulomatosis incluyendo granulomatosis de Wegener y enfermedad de Churg-Strauss, agranulocitosis, vasculitis (incluyendo vasculitis/angitis por hipersensibilidad, ANCA y vasculitis reumatoide), anemia aplásica, anemia de Diamond Blackfan, anemia hemolítica inmunitaria incluyendo anemia hemolítica autoinmunitaria (AHAI), anemia perniciosa, aplasia pura de serie roja (APSR), deficiencia de factor VIII, hemofilia A, neutropenia autoinmunitaria, pancitopenia, leucopenia, enfermedades que implican diapédesis leucocitaria, trastornos inflamatorios del sistema nervioso central (SNC), síndrome de lesión multiorgánica, miastenia grave, enfermedades mediadas por complejos antígeno-anticuerpo, enfermedad por anticuerpos anti-membrana basal glomerular, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, neuritis alérgica, enfermedad de Behcet, síndrome de Castleman, síndrome de Goodpasture, síndrome miasténico de Lambert-Eaton, síndrome de Reynaud, síndrome de Sjorgen, síndrome de Stevens-Johnson, rechazo de trasplante de órgano sólido, enfermedad de injerto contra huésped (EICH), penfigoide ampolloso, pénfigo, poliendocrinopatías autoinmunitarias, espondiloartropatías seronegativas, enfermedad de Reiter, síndrome del hombre rígido, arteritis de células gigantes, nefritis por inmunocomplejos, nefropatía por IgA, polineuropatías por IgM o neuropatía mediada por IgM, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), púrpura trombocitopénica trombótica (PTT), púrpura de Henoch-Schonlein, trombocitopenia autoinmunitaria, enfermedad autoinmunitaria de los testículos y ovarios incluyendo orquitis y ooforitis autoinmunitarias, hipotiroidismo primario; enfermedades endocrinas autoinmunitarias incluyendo tiroiditis autoinmunitaria, tiroiditis crónica (tiroiditis de Hashimoto), tiroiditis subaguda, hipotiroidismo idiopático, enfermedad de Addison, enfermedad de Graves, síndromes poliglandulares autoinmunitarias (o síndromes de endocrinopatía poliglandular), diabetes mellitus tipo I, también conocida como diabetes mellitus insulinodependiente (DMID) y síndrome de Sheehan; hepatitis autoinmunitaria, neumonitis intersticial linfoide (VIH), bronquiolitis obliterante (no por trasplante), neumonía intersticial inespecífica (NII), síndrome de Guillain-Barré, vasculitis de vaso de gran tamaño (incluyendo polimialgia reumática y de células gigantes (Takayasu)), vasculitis de vaso de mediano tamaño (incluyendo enfermedad de Kawasaki y poliarteritis nudosa), poliarteritis nudosa (PAN) espondilitis anquilosante, enfermedad de Berger (nefropatía por IgA), glomerulonefritis de progresión rápida, cirrosis biliar primaria, celiaquía (enteropatía por gluten), crioglobulinemia, crioglobulinemia asociada con hepatitis, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), arteriopatía coronaria, fiebre mediterránea familiar, poliangeítis microscópica, síndrome de Cogan, síndrome de Whiskott-Aldrich y tromboangitis obliterante.
Los sujetos que pueden tratarse mediante la presente invención son, en general, humanos y otros primates, tales como monos y simios con propósitos de medicina veterinaria. Los sujetos pueden ser hombres o mujeres y pueden tener cualquier edad adecuada, incluyendo sujetos infantiles, juveniles, adolescentes, adultos y geriátricos.
Las proteínas de fusión de la presente divulgación pueden formularse para su administración de cualquier manera adecuada, tal como entienden los expertos en la técnica. Una proteína de fusión específica de CD20 (por ejemplo, un CAR) de esta divulgación (o una proteína de fusión específica para una diana diferente) puede administrarse a un sujeto en forma unida a la célula (por ejemplo, modificación ex vivo de una población de células diana (células T maduras (por ejemplo, células T c D8+ o CD4+) u otras células del linaje de células T)). En un aspecto particular, las células del linaje de células T que expresan proteínas de fusión específicas de CD20 de esta divulgación (o proteína de fusión específica para una diana diferente) administradas a un sujeto son células singénicas, alogénicas o autólogas para el sujeto. En algunos casos, se preparan células que comprenden proteínas de fusión de esta divulgación recogiendo células (de una muestra biológica, un tejido o medio de cultivo), lavando, concentrando y formulando en un sistema de recipiente y medio adecuado para la administración.
La presente divulgación proporciona composiciones que comprenden células que expresan proteínas de fusión tal como se divulga en el presente documento y un portador, diluyentes o excipiente farmacéuticamente aceptables. Los excipientes adecuados incluyen agua, solución salina, dextrosa, glicerol, o similar y combinaciones de los mismos. En aspectos, las composiciones que comprenden células que expresan proteínas de fusión tal como se divulgan en el presente documento comprenden además un medio de infusión adecuado. Los medios de infusión adecuados pueden ser cualquier formulación de medio isotónico, normalmente solución salina normal, Normosol R (Abbott) o Plasma-Lyte A (Baxter), dextrosa al 5% en agua, puede usarse lactato de Ringer. Un medio de infusión puede complementarse
con albúmina sérica humana u otros componentes del suero humano.
En otros casos, pueden administrarse proteínas de fusión específicas de CD20 de esta divulgación (o una proteína de fusión específica para una diana diferente) a un sujeto en forma soluble. Por ejemplo, se conocen en la técnica TCR solubles (véase, por ejemplo, Molloy et al., Curr. Opin. Pharmacol. 5: 438, 2005; la patente estadounidense n.° 6.759.243).
Las proteínas de fusión de esta divulgación, o células que incluyen las mismas, pueden administrarse de una manera apropiada para la enfermedad, afección o el trastorno que va a tratarse según lo determinen los expertos en la técnica médica. En cualquiera de los aspectos anteriores, una célula que comprende una proteína de fusión tal como se describe en el presente documento se administra por vía intravenosa, por vía intraperitoneal, por vía intratumoral, en la médula ósea, en un ganglio linfático o en el líquido cefalorraquídeo. En algunos casos, se suministran células que comprenden una proteína de fusión de la presente divulgación al sitio de un tumor.
La dosis apropiada, la duración adecuada y la frecuencia de administración de las composiciones estarán determinadas por factores tales como el estado del paciente; tamaño, tipo y gravedad de la enfermedad, afección o el trastorno; forma particular del principio activo; y el método de administración.
En cualquiera de los aspectos anteriores, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que expresa una proteína de fusión de la presente divulgación o una célula huésped que expresa una fusión de esta divulgación. Una cantidad terapéuticamente eficaz de células en una composición es al menos una célula (por ejemplo, una subpoblación de células T CD8+ modificada con proteína de fusión; una subpoblación de células T CD4+ modificada con proteína de fusión) o es más normalmente más de 102 células, por ejemplo, hasta 106, hasta 107, hasta 108 células, hasta 109 células, o más de 1010 células. En determinados casos, las células se administran en un intervalo de desde aproximadamente 106 hasta aproximadamente 1010 células/m2, preferiblemente en un intervalo de aproximadamente 105 a aproximadamente 109 células/m2. El número de células dependerá del uso final para el que está destinada la composición, así como del tipo de células incluidas en la misma. Por ejemplo, las células modificadas para contener una proteína de fusión específica para un antígeno particular comprenderán una población celular que contiene al menos el 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, el 95% o más de tales células. Para los usos proporcionados en el presente documento, las células están generalmente en un volumen de un litro o menos, 500 ml o menos, 250 ml o menos, o 100 ml o menos. En casos, la densidad de las células deseadas suele ser mayor de 104 células/ml y generalmente es mayor de 107 células/ml, generalmente 108 células/ml o más. Las células pueden administrarse como una única infusión o en múltiples infusiones a lo largo de un intervalo de tiempo. Un número clínicamente relevante de células inmunitarias puede distribuirse en múltiples infusiones que igualan de manera acumulada o superan las 106, 107, 108, 109, 1010 o 1011 células.
En algunos casos, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR de esta divulgación que es completamente humano o humanizado. En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que tiene un scFv de un anticuerpo anti-CD20 o un scTCR de un TCR específico para un antígeno CD20. En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende un scFv de 1.5.3, 1F5, Leu16, rituximab, ofatumumab, veltuzumab, ocrelizumab, ublituximab, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los aspectos anteriores, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende un módulo de ligadorque comprende una región bisagra de IgG1, una región bisagra de IgG4, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende un módulo de ligador que comprende una región CH2 de IgG1 con una mutación N297Q, una región CH2 de IgG4, una región CH3 de IgG1, una región CH3 de IgG4, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los aspectos de esta divulgación, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende un módulo de ligador de glicina-serina o un ligador de región variable de glicinaserina. En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende una porción hidrófoba que comprende un dominio transmembrana de CD28. En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar una célula huésped que expresa un CAR que comprende un dominio intracelular que comprende un dominio de CD3^, 4-1BB, CD28, o cualquier combinación de los mismos. En cualquiera de los aspectos anteriores, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar un CAR que comprende aminoácidos de unión entre dominios, motivos, regiones, módulos o fragmentos adyacentes.
En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de esta divulgación comprenden administrar a un sujeto una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector, en los que la proteína de fusión codificada (por ejemplo, CAR) es idéntica en al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%,
al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos al 99%, al menos al 99,5% o el 100% a 1.5.3-NQ-28-BB-Z (SEQ ID NO.: 26); 1.5.3-NQ-28-Z (SEQ ID NO.: 27); 1.5.3-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 28); 1.5.3-NQ-z (SEQ ID NO.: 29); Leu16-28-BB-z (SEQ ID NO.: 30); Leu16-28-z (SEQ ID NO.: 31); 1F5-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 32); 1F5-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 33); o 1F5-NQ-BB-z (SEQ ID NO.: 34). En casos adicionales, los métodos de la presente divulgación comprenden administrar a un sujeto una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector, en los que la proteína de fusión codificada (por ejemplo, CAR) comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-34. En cualquiera de estos casos, la célula huésped es una célula T, en la que las células T son células T CD4+ en masa, células T CD8+ en masa, células T de memoria central CD4+, células T de memoria central CD8+ o una combinación de células T de memoria central CD4+ (Tcm) y células T vírgenes CD4+ (Tn). las células T CD4+ modificadas con CAR y las células T CD8+ modificadas con CAR pueden mezclarse en una razón de 3:1 a 1:1 a 1:3 antes de la administración a un sujeto, o pueden administrarse a un sujeto por separado en las mismas razones o similares.
En todavía casos adicionales, los métodos de esta divulgación comprenden administrar a un sujeto una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector, en los que la proteína de fusión (por ejemplo, CAR) está codificada por un polinucleótido que tiene al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.: 44-52. En casos relacionados, los métodos comprenden administrar a un sujeto una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en los que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector, en los que la proteína de fusión (por ejemplo, CAR) está codificada por un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-52. En cualquiera de estos casos, la célula huésped es una célula T, en la que las células T son células T CD4+ en masa, células T CD8+ en masa, células T de memoria central CD4+, células T de memoria central CD8+ o una combinación de células T de memoria central CD4+ (Tcm) y células T CD4+ vírgenes (Tn). Las células T CD4+ modificadas con CAR y las células T CD8+ modificadas con CAR pueden mezclarse en una razón de 3:1 a 1:1 a 1:3 antes de la administración a un sujeto, o pueden administrarse a un sujeto por separado en las mismas razones o similares.
Opcionalmente, una célula huésped que comprende cualquier vector de esta divulgación que contiene un polinucleótido que codifica para una proteína de fusión de esta divulgación, para su uso en los métodos descritos en el presente documento, también puede codificar para un marcador de transducción (por ejemplo, TCD19), que también puede incluir un péptido autoescindible de modo que el marcador de transducción y el CAR se separen en moléculas independientes: un CAR y un marcador de transducción. En determinados casos, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de CD20 y un marcador de transducción tCD19, polinucleótido que es idéntico en al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80 %, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95% o el 100% a la secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61. En casos adicionales, una célula huésped (por ejemplo, célula T) comprende un vector que contiene un polinucleótido que codifica para un péptido autoescindible dispuesto entre un CAR específico de c D20 y un marcador de transducción tCD19 y comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-61.
Por consiguiente, en cualquiera de los métodos divulgados en el presente documento, una célula huésped comprende un polinucleótido aislado que codifica para una proteína de fusión capaz de unirse específicamente a CD20, en los que el polinucleótido: (a) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.: 53-56; (b) es idéntico en al menos el 80% a una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (c) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; (d) comprende una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47; (e) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID n O.:53-56; o (f) consiste en una secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47.
En determinados casos, la célula huésped usada en los métodos comprende una proteína de fusión que consiste en o comprende una secuencia de aminoácidos en la que la proteína de fusión: (a) es idéntica en al menos el 90% a una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29 y 35-38 y 32-34 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (b) se compone de una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (c) consiste en una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende una secuencia de aminoácidos de una
cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (d) es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:2629; (e) se compone de una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:2629; (f) consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 2629.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo tal como se divulga en el presente documento y es capaz de expresar la proteína de fusión.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un dominio de unión, en la que el dominio de unión es: (a) un scFv de 1.5.3 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos en un 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 64, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar a la del scFv de tipo natural o al anticuerpo correspondiente; (b) un scFv de 1.5.3 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 64; (c) un scFv de 1F5 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 66, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; (d) un scFv de 1F5 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 66; (e) un scFv de Leu16 que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 65, en la que cada CDR del scFv comprende cero cambios o como máximo uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis cambios en comparación con la CDR correspondiente de un anticuerpo monoclonal parental o fragmento o derivado del mismo que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; o (f) un scFv de Leu16 que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO.: 65.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un scFv, en la que el scFv está codificado por: (a) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID No .: 67, en la que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene uno o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; (b) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 67; (c) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 69, en la que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; (d) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 69; (e) un polinucleótido que tiene al menos el 80% de identidad con una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 68, en la que las secuencias de polinucleótido que codifican para cada CDR de un scFv comprenden cero cambios o como máximo de uno a seis cambios de nucleótidos, en comparación con un polinucleótido que codifica para un scFv parental de un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD20, siempre que el scFv que contiene una o más CDR modificadas se una específicamente a CD20 con una afinidad similar al scFv de tipo natural o el anticuerpo correspondiente; o (f) un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO.: 68.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión, en la que la proteína de fusión es un receptor de antígeno quimérico y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-43.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende una porción hidrófoba, en la que la porción hidrófoba es un dominio transmembrana. En determinados casos, la porción hidrófoba es un dominio transmembrana de CD4, CD8, CD28 o CD27.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un dominio efector o una porción funcional del mismo, en el que el dominio efector o la porción funcional del mismo es un 4-1BB (CD137), CD3e, CD38, CD3^, CD25, CD27, CD28, CD79A, CD79B, CARD11, DAP10, FcRa, FcRp, FcRy, Fyn, HVEM, ICOS, Lck, LAG3, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1,
NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, OX40 (CD134), ROR2, Ryk, SLAMF1, Slp76, pTa, TCRa, TCRp, TRIM, Zap70, PTCH2, o cualquier combinación de los mismos.
En determinados casos, una célula huésped usada en los métodos comprende un polinucleótido heterólogo que codifica para una proteína de fusión que comprende un componente intracelular, en el que el componente intracelular comprende: (a) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD28 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción del mismo; (b) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD28 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo; (c) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción del mismo; (d) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo; (e) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de CD27 o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de CD28 o una porción del mismo; o (f) un dominio efector de CD3^ o una porción funcional del mismo, un dominio coestimulador de 4-1BB (CD137) o una porción funcional del mismo y un dominio coestimulador de OX40 (CD134) o una porción del mismo.
Las composiciones de esta divulgación también pueden administrarse simultáneamente, antes o después de la administración de uno o más de otros agentes terapéuticos. Tal terapia de combinación incluye la administración de una formulación de dosificación única que contiene una proteína de fusión de esta divulgación y uno o más agentes activos adicionales, así como la administración de una proteína de fusión de esta divulgación y cada agente activo en su propia formulación de dosificación independiente. Por ejemplo, una proteína de fusión de esta divulgación y otro agente activo pueden administrarse a un sujeto juntos en una única composición de dosificación de infusión, o cada agente puede administrarse en formulaciones de dosificación de infusión independientes. Cuando se usan formulaciones de dosificación independientes, una proteína de fusión de esta divulgación y uno o más agentes activos adicionales pueden administrarse al mismo tiempo, es decir, simultáneamente, al mismo tiempo esencialmente, es decir, al mismo tiempo, o en momentos escalonados por separado, es decir, secuencialmente; se entiende que la terapia de combinación incluye todos estos regímenes.
La presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden moléculas de unión específicas de CD20, células que expresan proteínas de fusión tal como se divulga en el presente documento o ambas, y un portador, diluyentes o excipiente farmacéuticamente aceptables. En determinadas realizaciones, la molécula de unión específica de CD20 es un anticuerpo. En tales realizaciones, un anticuerpo específico de CD20 puede ser rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, obinutuzumab, ublituximab, veltuzumab, ibritumomab tiuxetan, tositumomab, o cualquier combinación de los mismos.
En determinados aspectos, un método de tratamiento de una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 comprende administrar a un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para un proteína de fusión, comprendiendo la proteína de fusión un componente extracelular y un componente intracelular conectados por una porción hidrófoba, en la que el componente extracelular comprende un dominio de unión que se une específicamente a CD20 y el componente intracelular comprende un dominio efector, y opcionalmente administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una molécula de unión específica de CD20, agente quimioterápico o inhibidor de un componente de inmunosupresión. En aspectos adicionales, el método reduce el número de células B o trata una enfermedad o un trastorno asociado con la actividad aberrante de células B.
Por tanto, en determinados aspectos, se proporcionan métodos para tratar una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20, que comprenden administrar a un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión compuesta por una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29 y 32-38, y 41-43, y opcionalmente administrar una molécula de unión específica de CD20, un agente quimioterápico, un inhibidor de un componente de inmunosupresión, o combinaciones de los mismos. En aspectos adicionales, el método reduce el número de células B o trata una enfermedad o un trastorno asociado con la actividad aberrante de células B.
En algunos casos, las composiciones descritas en el presente documento se administran con agentes quimioterápicos o inmunomoduladores (por ejemplo, inmunosupresores o inhibidores de componentes de inmunosupresión, tales como inhibidores de puntos de control inmunitarios). Los inhibidores de puntos de control inmunológico incluyen inhibidores de CTLA-4, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, IDO, KIR, LAG-3, PD-1, PD-L1, PD-L2, Tim-3, VISTA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, TGFR beta, CEACAM-1, CEACAM-3, CEACAM-5, CD244, o cualquier combinación de los mismos. Un inhibidor de una molécula de puntos de control inmunitario puede ser un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, una proteína de fusión, una molécula pequeña, una molécula de iARN (por ejemplo, ARNip, ARNhc o miARN), una ribozima, un aptámero o un oligonucleótido antisentido. un agente
quimioterápico puede ser un inhibidor de B-Raf, un inhibidor de MEK, un inhibidor de VEGF, un inhibidor de VEGFR, un inhibidor de tirosina cinasa, un agente antimitótico, o cualquier combinación de los mismos.
En cualquiera de los aspectos del presente documento, un método de tratamiento de una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 comprende administrar a un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión tal como se divulga en el presente documento, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de un componente de inmunosupresión, tal como un inhibidor de puntos de control inmunitario. En algunos casos, un inhibidor de puntos de control inmunitario es un inhibidor de CTLA-4, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, IDO, KIR, LAG-3, PD-1, PD-L1, PD-L2, Tim-3, VISTA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, TGFR beta, CEACAM-1, CEACAM-3, CEACAM-5, CD244, o cualquier combinación de los mismos.
Por consiguiente, en determinados aspectos, esta divulgación proporciona métodos para tratar una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20, que comprenden administrar a un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión que tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica en al menos el 90% a una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29 y 32-38, y 41-43, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de un componente de inmunosupresión, tal como un inhibidor de puntos de control inmunitario. En algunos casos, un inhibidor de puntos de control inmunitario es un inhibidor de CTLA-4, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, IDO, KIR, LAG-3, PD-1, PD-L1, PD-L2, Tim-3, VISTA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, TGFR beta, CEACAM-1, CEACAM-3, CEACAM-5, CD244, o cualquier combinación de los mismos. En algunos casos, un inhibidor de puntos de control inmunitario se selecciona de (a) un anticuerpo específico para PD-1, tal como pidilizumab, nivolumab o pembrolizumab; (b) un anticuerpo específico para PD-L1, tal como MDX-1105, BMS-936559, MEDI4736, MPDL3280A o MSB0010718C; o (c) un anticuerpo específico para CTLA4, tal como tremelimumab o ipilimumab.
En casos adicionales, esta divulgación proporciona métodos para tratar una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20, que comprenden administrar a un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión de CD20 una cantidad terapéuticamente eficaz de una célula huésped que comprende una molécula de ácido nucleico heteróloga que codifica para una proteína de fusión que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 26-29, 32-38 y 41-43, y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de puntos de control inmunitario, opcionalmente en los que el inhibidor de puntos de control inmunitario se selecciona de (a) un anticuerpo específico para PD-1, tal como pidilizumab, nivolumab o pembrolizumab; (b) un anticuerpo específico para p D-L1, tal como MDX-1105, Bm S-936559, MEDI4736, MPDL3280A o MSB0010718C; o (c) un anticuerpo específico para CTLA4, tal como tremelimumab o ipilimumab.
Los agentes quimioterápicos a modo de ejemplo incluyen agentes alquilantes (por ejemplo, cisplatino, oxaliplatino, carboplatino, busulfán, nitrosoureas, mostazas nitrogenadas tales como bendamustina, uramustina, temozolomida), antimetabolitos (por ejemplo, aminopterina, metotrexato, mercaptopurina, fluorouracilo, citarabina, gemcitabina), taxanos (por ejemplo, paclitaxel, nab-paclitaxel, docetaxel), antraciclinas (por ejemplo, doxorubicina, daunorubicina, epirubicina, idaruicina, mitoxantrona, valrubicina), bleomicina, mitomicina, actinomicina, hidroxiurea, inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, camptotecina, topotecán, irinotecán, etopósido, tenipósido), anticuerpos monoclonales (por ejemplo, ipilimumab, pembrolizumab, nivolumab, avelumab, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, gemtuzumab, panitumumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab), alcaloides de la vinca (por ejemplo, vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina), ciclofosfamida, prednisona, leucovorina, oxaliplatino, hialurodinasas, o cualquier combinación de los mismos. En determinados casos, un agente quimioterápico es vemurafenib, dabrafenib, trametinib, cobimetinib, sunitinib, erlotinib, paclitaxel, docetaxel, o cualquier combinación de los mismos. En algunos casos, primero se trata a un paciente con un agente quimioterápico que inhibe o destruye otras células inmunitarias seguido de una composición farmacéutica descrita en el presente documento. En algunos casos, la quimioterapia se puede evitar por completo.
En cualquiera de los aspectos descritos en el presente documento, los métodos de esta divulgación se aplican a un sujeto que se ha pretratado con una molécula de unión específica de CD20, en los que opcionalmente la molécula de unión específica de CD20 es rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, ublituximab, veltuzumab, o cualquier combinación de los mismos; o un agente quimioterápico (por ejemplo, un CHOP [Ciclofosfamida - Hidroxidaunorubicina - Oncovina -Prednisona], CHOP-R [R es rituximab], o régimen CHOEP o CHOEP-R [E es etopósido]); o un inhibidor de un componente de inmunosupresión (por ejemplo, un anticuerpo contra PD-1, PD-L1, CTLA4 o similar).
La administración de ciertos compuestos de esta divulgación (por ejemplo anticuerpos, agentes quimioterápicos o inmunomoduladores), o sus sales farmacéuticamente aceptables, en forma pura o en una composición farmacéutica apropiada, pueden llevarse a cabo usando cualquier modo de administración para agentes que tengan utilidades similares. Las composiciones farmacéuticas de esta divulgación pueden prepararse combinando un compuesto de esta divulgación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable apropiado, y pueden formularse en preparaciones en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, tales como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pomadas, disoluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes, geles, microesferas y aerosoles. Las vías de
administración a modo de ejemplo de tales composiciones farmacéuticas incluyen oral, tópica, transdérmica, por inhalación, parenteral, sublingual, bucal, rectal, vaginal e intranasal.
El término “parenteral” tal como se usa en el presente documento incluye inyecciones subcutáneas, técnicas de infusión o inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal. Las composiciones farmacéuticas de esta divulgación (por ejemplo, agentes quimioterápicos o inmunomoduladores) se formulan para permitir que los principios activos contenidos en ellas estén biodisponibles tras la administración de la composición a un paciente. Las composiciones que se administrarán a un sujeto o paciente adoptan la forma de una o más unidades de dosificación en las que, por ejemplo, un comprimido puede ser una única unidad de dosificación, y un recipiente de un compuesto de esta divulgación en forma de aerosol puede contener una pluralidad de unidades de dosificación. Los métodos reales de preparación de tales formas de dosificación se conocen, o resultarán evidentes, para los expertos en esta técnica (véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22a edición (Pharmaceutical Press, 2012). La composición que va a administrarse contendrá, en cualquier caso, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de esta divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para métodos terapéuticos según las enseñanzas de esta divulgación.
Como composición sólida para administración oral, la composición farmacéutica puede formularse en forma de polvo, gránulo, comprimido sometido a compresión, píldora, cápsula, chicle, oblea o forma similar. Las composiciones sólidas a modo de ejemplo pueden contener uno o más diluyentes inertes o portadores comestibles. Además, pueden estar presentes uno o más aditivos, incluyendo aglutinantes tales como carboximetilcelulosa, etilcelulosa, celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; excipientes tales como almidón, lactosa o dextrinas, agentes disgregantes tales como ácido algínico, alginato de sodio, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes tales como estearato de magnesio o Sterotex; deslizantes tales como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes tales como sacarosa o sacarina; un agente aromatizante tal como menta piperita, salicilato de metilo o aromatizante de naranja; o un agente colorante. Cuando una composición farmacéutica está en forma de cápsula, tal como una cápsula de gelatina, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un portador líquido tal como polietilenglicol o aceite, o combinaciones de los mismos.
La composición farmacéutica puede estar en forma de líquido, tal como un elixir, jarabe, disolución, emulsión o suspensión. En determinadas realizaciones, puede formularse una composición líquida para administración oral o para administración mediante inyección, como dos ejemplos. Cuando están destinadas a la administración oral, las composiciones a modo de ejemplo pueden contener adicionalmente, además de uno o más compuestos de esta divulgación, un agente edulcorante, conservante, tinte/colorante, potenciador del sabor, o cualquier combinación de los mismos. Las composiciones a modo de ejemplo destinadas a la administración mediante inyección pueden contener además un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, tampón, estabilizador, agente isotónico, o cualquier combinación de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas líquidas de esta divulgación, ya sean disoluciones, suspensiones u otras formas similares, pueden comprender además adyuvantes, incluyendo diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, preferiblemente solución salina fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites fijos tales como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir como disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético (EDTA); tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede incluirse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples compuestos por vidrio o plástico. La solución salina fisiológica es un adyuvante preferido. Una composición farmacéutica inyectable es preferiblemente estéril.
Una composición farmacéutica de esta divulgación puede estar destinada a la administración tópica, en cuyo caso el portador puede comprender una disolución, emulsión, pomada, base de gel adecuada, o cualquier combinación de las mismas. La base, por ejemplo, puede comprender vaselina, lanolina, polietilenglicoles, cera de abejas, aceite mineral, diluyentes tales como agua y alcohol, emulsionantes, estabilizadores, o cualquier combinación de los mismos. Los agentes espesantes pueden estar presentes en una composición farmacéutica de esta divulgación para administración tópica. Si está destinada a la administración transdérmica, la composición puede incluir un parche transdérmico o un dispositivo de iontoforesis.
Una composición farmacéutica de esta divulgación puede estar destinada a la administración rectal, en forma, por ejemplo, de un supositorio, que se fundirá en el recto y liberará el compuesto o compuestos activos. Una composición para administración rectal puede contener una base oleaginosa como excipiente no irritante adecuado. Las bases a modo de ejemplo incluyen lanolina, manteca de cacao, polietilenglicol, o cualquier combinación de los mismos.
Una composición farmacéutica de esta divulgación puede incluir diversos materiales que modifican la forma física de una unidad de dosificación sólida o líquida. Por ejemplo, una composición puede incluir materiales que formen una cubierta de recubrimiento alrededor del principio o principios activos. Los materiales a modo de ejemplo para formar una cubierta de recubrimiento pueden ser inertes, tales como azúcar, goma laca u otros agentes de recubrimiento entérico. Alternativamente, el/los principio(s) activo(s) puede revestirse en una cápsula de gelatina.
En determinados casos, los compuestos y las composiciones de esta divulgación pueden estar en forma sólida o líquida. Las formulaciones sólidas o líquidas a modo de ejemplo incluyen formas semisólidas, semilíquidas, en suspensión y en gel. Una composición farmacéutica de esta divulgación en forma sólida o líquida puede incluir además un agente que se una al compuesto de esta divulgación y, por tanto, ayude a la administración del compuesto. Los agentes adecuados que pueden desempeñar esta función incluyen un anticuerpo monoclonal o policlonal, una proteína o un liposoma.
Una composición farmacéutica de esta divulgación puede consistir en unidades de dosificación que pueden administrarse como aerosol. El término aerosol se usa para designar una variedad de sistemas que van desde los de naturaleza coloidal hasta sistemas que consisten en paquetes presurizados. La administración puede ser mediante un gas licuado o comprimido o mediante un sistema de bombas adecuado que dispensa los principios activos. Los aerosoles de los compuestos de esta divulgación pueden administrarse en sistemas monofásicos, bifásicos o trifásicos para administrar el/los principio(s) activo(s). La administración del aerosol incluye el recipiente necesario, activadores, válvulas, recipientes secundarios y similares, que juntos pueden formar un kit.
Pueden prepararse composiciones farmacéuticas de esta divulgación mediante una metodología bien conocida en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, puede prepararse una composición farmacéutica destinada a administrarse mediante inyección combinando un compuesto de esta divulgación con agua destilada estéril para formar una disolución. Puede añadirse un tensioactivo para facilitar la formación de una disolución o suspensión homogénea. Los tensioactivos son compuestos que interaccionan de manera no covalente con el compuesto de esta divulgación para facilitar la disolución o suspensión homogénea de un compuesto en un sistema de administración acuoso.
Los compuestos de esta divulgación, o sus sales farmacéuticamente aceptables, se administran en una cantidad terapéuticamente eficaz, que variará dependiendo de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado; la estabilidad metabólica y duración de acción del compuesto; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente; el modo y el momento de la administración; la tasa de excreción; la combinación de fármacos; la gravedad del trastorno o la afección particular; y el sujeto sometido a terapia. Después de la administración de terapias según las formulaciones y los métodos de esta divulgación, los sujetos de prueba presentarán una reducción de aproximadamente el 10% hasta aproximadamente el 99% en uno o más síntomas asociados con la enfermedad o el trastorno que está tratándose, en comparación con los tratados con placebo u otros sujetos de control adecuados.
Los compuestos de esta divulgación, o sus derivados farmacéuticamente aceptables, también pueden administrarse simultáneamente, antes o después de la administración de uno o más de otros agentes terapéuticos. Tal terapia de combinación incluye la administración de una única formulación de dosificación farmacéutica que contiene un compuesto de esta divulgación y uno o más agentes activos adicionales, así como la administración del compuesto de esta divulgación y cada agente activo en su propia formulación de dosificación farmacéutica independiente. Por ejemplo, un compuesto de esta divulgación y el otro agente activo pueden administrarse al paciente juntos en una única composición de dosificación oral tal como un comprimido o una cápsula, o administrarse cada agente en formulaciones de dosificación oral independientes. Cuando se usan formulaciones de dosificación independientes, los compuestos de esta divulgación y uno o más agentes activos adicionales pueden administrarse esencialmente al mismo tiempo, es decir, simultáneamente o en momentos escalonados por separado, es decir, secuencialmente; se entiende que la terapia de combinación incluye todos estos regímenes.
Los expertos en la técnica también apreciarán que en el procedimiento descrito en el presente documento, puede ser necesario proteger los grupos funcionales de los compuestos intermedios mediante grupos protectores adecuados. Tales grupos funcionales incluyen hidroxilo, amino, mercapto y ácido carboxílico. Los grupos protectores adecuados para hidroxilo incluyen trialquilsililo o diarilalquilsililo (por ejemplo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo o trimetilsililo), tetrahidropiranilo, bencilo, y similares. Los grupos protectores adecuados para amino, amidino y guanidino incluyen tbutoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, o similar. Los grupos protectores adecuados para mercapto incluyen C(O)R” (donde R” es alquilo, arilo o arilalquilo), p-metoxibencilo, tritilo, o similar. Los grupos protectores adecuados para ácido carboxílico incluyen ésteres de alquilo, arilo o arilalquilo. Los grupos protectores pueden añadirse o eliminarse según técnicas convencionales, que conocen los expertos en la técnica y tal como se describen en el presente documento. El uso de grupos protectores se describe con detalle en Green, T.W. y P.G.M. Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis (1999), 3a ed., Wiley. Tal como apreciaría un experto en la técnica, el grupo protector también puede ser una resina polimérica tal como una resina Wang, una resina Rink o una resina de cloruro de 2-clorotritilo.
Los expertos en la técnica también apreciarán, aunque tales derivados protegidos de los compuestos de esta divulgación pueden no presentar actividad farmacológica tal cual, pueden administrarse a un mamífero y después de eso metabolizarse en el cuerpo para formar compuestos de esta divulgación que son farmacológicamente activos. Por tanto, tales derivados pueden describirse como “profármacos”. En determinados casos, los compuestos de esta divulgación están en forma de profármaco.
Además, todos los compuestos de esta divulgación que existen en forma de base o ácido libre pueden convertirse en sus sales farmacéuticamente aceptables mediante tratamiento con la base o el ácido inorgánico u orgánico apropiado
mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica. Las sales de los compuestos de esta divulgación pueden convertirse en su forma de ácido o base libre mediante técnicas convencionales.
En el caso de células huésped transformadas que expresan una proteína de fusión según esta divulgación, la administración puede realizarse usando alícuotas individuales de las células. En determinados casos, las células huésped transformadas comprenden células T, que pueden comprender células T CD4+, células T CD8+, o ambas. En determinados casos, las células T comprenden un ácido nucleico heterólogo que codifica para un receptor de antígeno quimérico (CAR). En determinados casos, las células T se clasifican para proporcionar una razón 1:1 de células T CAR CD20 CD4+ y CD8+ para la administración al sujeto. Las células pueden administrarse por vía intravenosa a lo largo de aproximadamente 20-30 minutos a la dosis de células especificada para cada sujeto. Las dosis de células especificadas pueden determinarse mediante el nivel de expresión de un marcador de transducción que se expresa de manera coordinada con la proteína de fusión en el vector. Por ejemplo, en determinados casos, una célula T se transforma usando uno o más vectores que expresan de manera coordinada un marcador de transducción de CD19 truncado y un CAR. Los niveles de dosificación de células T CAR CD20 a modo de ejemplo para su uso en diversos casos de la presente divulgación se exponen en la tabla 1 a continuación.
Tabla 1. Formulación e infusión de células T CAR CD20
En determinados casos, las células se fabrican a partir de un producto de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) autólogas obtenido mediante leucocitaféresis no movilizada convencional del sujeto. Puede realizarse una selección inmunomagnética para enriquecer células CD8+ o células T CD4+. En determinados casos, se enriquecen células CD8+ y células T CD4+ por separado y cada subconjunto se estimula por separado, por ejemplo, con perlas paramagnéticas anti-CD3/CD28, seguido de transducción con un vector (por ejemplo, un vector lentiviral) que codifica para la proteína de fusión y, opcionalmente, un marcador de transducción tal como, por ejemplo, un marcador de transducción tCD19. Las células T transducidas pueden expandirse, luego volver a estimularse con una línea celular diana que expresa CD20 para estimular el crecimiento, expandirse adicionalmente ex vivo y luego formularse para lograr la dosis celular especificada para la infusión. Por ejemplo, pueden fabricarse células T CAR anti-CD20 (por ejemplo, 1.5.3-NQ-28-BB-z) según la presente divulgación de acuerdo con un método que comprende:
1. Enriquecimiento de células T CD4+ de una fracción del producto de leucocitaféresis o células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de sangre completa.
2. En paralelo con el enriquecimiento de células T CD4+, enriquecimiento de células T CD8+ del producto de leucocitaféresis o PBMC restantes.
3. Estimulación de las células CD4+ y CD8+ enriquecidas en cultivos independientes con perlas paramagnéticas recubiertas anti-CD3 y anti-CD28 de grado clínico (perlas anti-CD3/CD28) en medio RPMI 1640 complementado con glutamina, p-mercaptoetanol y suero bovino fetal (medio CTL FBS al 10%), 50 UI/ml de IL-2.
4. Transducción de las células CD4+ y CD8+ con el vector lentiviral 1.5.3-NQ-28-BB-z CAR el día 1 después de la estimulación con perlas anti-CD3/CD28.
5. Expansión de las células T CD4+ y CD8+ transducidas en medio CTL FBS al 10% y 50 UI/ml de IL-2.
6. Retirada 2 veces de las perlas anti-CD3/CD28 mediante reducción magnético el día 4 después de la estimulación con CD3/CD28.
7. Estimulación con una línea de células B CD20+ transformada, clínicamente calificada e irradiada (TM-LCL) el día 7 después de la estimulación con perlas anti-CD3/CD28. Esta etapa puede omitirse si los recuentos de células en proceso en el día 7 predicen una expansión celular suficiente sin la estimulación de TM-LCL.
8. Expansión de células CD4+ y CD8+ en matraces G-Rex con medio CTL FBS al 10% y 50 UI/ml de IL-2. 9. Recogida de células de cada subconjunto el día 15 (intervalo 13-17) después de la estimulación con perlas
anti-CD3/CD28 y formulación de un producto de células T CD4+/CD8+ combinado para crioconservación o infusión.
10. Recogida de muestras en puntos apropiados durante el procedimiento de fabricación a partir de cada una de las células T CD8+ y CD4+ para pruebas de liberación final y en proceso.
11. Administración al paciente mediante perfusión intravenosa a la dosis indicada en una razón 1:1 de células T tCD19+CD4+y tCD19+CD8+. Los sujetos se pretratarán con quimioterapia de linfodepleción y recibirán las infusiones de células T al menos 36 horas después de completarse la quimioterapia.
En determinados casos, las células generadas para un sujeto pueden administrarse como células frescas inmediatamente después de la fabricación, o pueden crioconservarse en primer lugar y almacenarse en un congelador de nitrógeno líquido, y luego las células descongeladas se lavan para eliminar el crioprotector residual y luego se formulan para infusión. El número total de células será suficiente para tener en cuenta la pérdida de células durante la recuperación de la descongelación y para alcanzar el nivel de dosis de células especificado en el protocolo clínico. En determinados casos que comprenden tanto células T CD4+ como CD8+, la razón total de células T CD4+ y CD8+ puede diferir de 1:1 debido a diferencias en la transducción de los subconjuntos individuales en sujetos individuales. Por este motivo, los subconjuntos pueden transducirse por separado para lograr una formulación deseada de las células T transducidas. Las células T CAR CD4 y CD8 han demostrado efectos sinérgicos en modelos animales (Sommermeyer et al., Leukemia 2015).
Las células transformadas pueden suspenderse en un medio de crioconservación apropiado (por ejemplo, CryoStor CS10®) para la crioconservación en un congelador de velocidad controlada. Las células crioconservadas pueden almacenarse en la fase de vapor de un congelador de nitrógeno líquido. Las células frescas o descongeladas pueden resuspenderse luego en Normosol HSA al 1% y transferirse a un paquete de transferencia al nivel de dosis de células total especificado en el protocolo clínico. El producto formulado puede almacenarse a 2-8°C y luego transferirse en condiciones apropiadas al sitio clínico para su administración.
Después de la leucocitaféresis, los sujetos pueden recibir quimioterapia citorreductora para controlar la enfermedad durante la producción de las células transformadas. Por ejemplo, en determinados casos, un sujeto puede recibir quimioterapia de baja intensidad (por ejemplo, lenalidomida, ibrutinib) después de la leucocitaféresis. Antes de administrar células transformadas según la presente divulgación, la quimioterapia o la terapia inmunomoduladora pueden ser apropiadas para proporcionar linfodepleción para facilitar la supervivencia de las células T transferidas y reducir la carga tumoral antes de la infusión de las células. Por ejemplo, los sujetos pueden recibir quimioterapia de linfodepleción durante un tiempo predeterminado antes de (por ejemplo, 36-96 horas) la infusión de las células. En determinadas realizaciones, un sujeto puede tratarse inicialmente con una dosis única de un agente de quimioterapia tal como ciclofosfamida (CY) por vía i.v. (por ejemplo, a 1 g/m2) inicialmente. Sin embargo, si se determina que la tasa de respuesta del sujeto es inadecuada, el régimen de linfodepleción puede cambiarse de modo que los pacientes posteriores reciban un segundo agente quimioterápico o inmunomodulador adicional (por ejemplo, CY fludarabina). Además, un sujeto puede, pero no necesita, recibir una premedicación antes de la administración de las células.
Pueden administrarse al sujeto una o más infusiones intravenosas de las células descritas en el presente documento después de completarse la quimioterapia de linfodepleción (por ejemplo, 36-96 horas después). La dosis de células administrada al sujeto puede determinarse según los niveles de dosis mostrados en la tabla 1, y puede ajustarse después de eso para aumentar, disminuir o cambiar de otro modo la cantidad, composición, razón o velocidad de las células administradas. En determinados casos, se administra una única infusión al sujeto. En realizaciones adicionales, puede administrarse una segunda infusión si la primera infusión no produce una respuesta completa (RC), o si la enfermedad presenta recidiva después de una RC. En todavía casos adicionales, puede administrarse una tercera, cuarta, quinta, sexta, séptima, octava, novena, décima infusión o adicional. En determinados casos, puede administrarse una infusión de células por vía intravenosa a lo largo de un periodo de tiempo seleccionado (por ejemplo, aproximadamente 20-30 minutos), ajustado según sea necesario para cumplir con las directrices para los límites de endotoxinas para fármacos parenterales (£ 5 UE/kg/hora). La velocidad de perfusión también puede ajustarse si los sujetos experimentan acontecimientos adversos leves relacionados con la perfusión (grado 2 o inferior).
Ejemplos
EJEMPLO 1
MATERIALES Y MÉTODOS
Líneas celulares
Se obtuvieron las líneas de células tumorales Raji, Daudi y Ramos (linfoma de Burkitt), Rec-1 (linfoma de células del manto) y K562 (leucemia eritroide negativa para CD20) de ATCC. Se obtuvo Granta-519 (linfoma de células del manto) de DSMz , y se obtuvo FL-18 (linfoma folicular transformado) del Dr. David Maloney (Centro de Investigación del Cáncer Fred Hutchinson). Se autenticó la expresión de CD20 mediante citometría de flujo en todas las líneas celulares
antes de los experimentos. Se cultivaron las líneas celulares en RPMI 1640 con HEPES 25 mM, suero bovino fetal (FBS) al 10%, penicilina/estreptomicina al 1% y L-glutamina al 1% y se incubaron a 37°C en el 5% de CO2. Se transdujeron células K562 con un vector retroviral para expresar CD20, y se transdujeron de nuevo algunas células con un vector lentiviral para expresar CD80 humano. Se obtuvieron líneas celulares K562-CD80 que expresan CD20 a bajo, medio y alto nivel mediante selección después de la clonación por dilución limitante. Se produjeron células Raji-ffLuc mediante transducción de células Raji con retrovirus que codifican para luciferasa de luciérnaga-Thy1.1-Neo y se seleccionaron con G418 tal como se describió previamente (James et al., Blood 2009; 114(27):5454-63). Se generaron células Raji-ffLuc que no responden al tratamiento con rituximab con ciclos repetidos e intermitentes de concentraciones crecientes de rituximab tal como se describió anteriormente (Czuczman et al., Clin Cancer Res 2008; 14(5):1561-70).
Citometría de flujo
Se incubaron líneas celulares de Ramos con concentraciones de rituximab que oscilaron desde 0 hasta 200 |ig/ml a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después del bloqueo de CD20, se añadió anticuerpo anti-CD20-PE (clon L27 [Leu16], BD Biosciences) y se incubaron las células o bien a 4°C o bien a 37°C durante 30 minutos. Se lavaron las células con tampón de FACS frío (suero bovino fetal al 0,5% y EDTA 2,5 mM en PBS) y se analizaron en un citómetro de flujo BD Canto 2. Se analizaron los datos usando FlowJo versión 7.6.1 (TreeStar). En un experimento independiente, se bloquearon células FL-18 con concentraciones variables de rituximab, se lavaron una vez con tampón de FACS y luego con anticuerpo anti-CD20-FITC (clon 1F5, producido internamente a partir de un hibridoma; Press et al., Blood 1987; 69(2):584-91) y se incubó con células bloqueadas durante 15 minutos a 4°C. Luego, se lavaron las células y se analizaron tal como se describió anteriormente. También se realizaron experimentos similares usando ofatumumab en lugar de rituximab.
Constructos vectoriales
Se generó el constructo Leu16-28-BB-z-tEGFR específica de CD20 (SEQ ID NO.: 57) amplificando el scFv de Leu16 (Wang et al., Hum Gene Ther 2007; 18(8):712-25; Wang et al., Mol Ther 2004; 9(4):577-86) mediante PCR y clonación en sitios Nhel y Rsríl de un vector lentiviral epHIV7 que codifica para un dominio Fc de IgG4, CD28 y 41BB, y un dominio de CD3^ (Hudecek et al., Clin Cancer Res 2013; 19(12):3153-64). Se generó el constructo Leu16-28-z (SEQ ID NO.: 49 ó 58) mediante PCR de solapamiento y empalme del vector Leu16-28-BB-z-tEGFR para eliminar el dominio 41BB y el EGFR truncado. El vector lentiviral que codifica el CAR 1F5-28-BB-z específico de CD20 se ha descrito previamente (Budde et al., PLoS One 2013; 8(12):e82742), pero se transfirió a la estructura principal de vector lentiviral de 3a generación de autoinactivación RRL.sin.cPPT.PGK.GFP.wpre basado en VIH-1 (Becker et al., Gene Ther 2010; 17(10):1244-52; del Dr. Hans-Peter Kiem, FHCRC). La región espaciadora Fc de este constructo se modificó para suprimir la unión a los receptores Fcy sustituyendo los aminoácidos de unión de IgG1 por los aminoácidos de unión de IgG2 (SEQ ID NO.: 9) y añadiendo una mutación N297Q (SEQ ID NO.:10) tal como se describió previamente (Hudecek et al., Cancer immunology research 2014; 3(2):125-35; Hombach et al., Gene Ther 2010; 17(10):1206-13), para crear el constructo 1F5-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 50 ó 59). Para generar el constructo de CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z (SEQ ID NO.: 44 ó 53), se produjo una nueva secuencia de scFv sintetizando las secuencias Vl y Vh del anticuerpo anti-CD20 completamente humano 1.5.3 (véase, por ejemplo, Bornstein et al., Invest New Drugs 2010; 28(5):561-74; la publicación PCT n.°WO 2006/130458) usando un algoritmo de optimización de codones (GenScript), separado por un ligador de glicina-serina de 15 aminoácidos (SEQ ID NO.:20), precedido por el péptido señal de GM-CSF (SEQ ID NO.:18). Se usó un fragmento solapante producido mediante PCR de solapamiento y empalme para reemplazar el dominio de scFv del constructo IF5-NQ-28-BB-z, clonándolo en sitios de restricción ^ge/SacII. El gen suicida de la caspasa 9 inducible y la secuencia 2A en sentido 3' (SEQ ID NO.: 22 ó 23) se eliminaron de este constructo mediante PCR de solapamiento y empalme. Se generó el constructo 1.5.3-NQ-28-z (SEQ ID NO.: 27) eliminando el dominio 41BB de 1.5.3-NQ-28-BB-z mediante PCR de solapamiento y empalme. Se confirmaron todos los constructos mediante secuenciación de Sanger. Se produjo lentivirus usando células 293T transfectadas de manera transitoria con los vectores de la cadena principal descritos, así como los vectores de empaquetamiento pCGHP-2, pCMV-Rev2 y pCMV-G, y se concentraron los sobrenadantes que contenían lentivirus empaquetados 100 veces mediante centrifugación.
Aislamiento y transducción de células T
Se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) o bien mediante aféresis de donantes sanos con consentimiento según los protocolos de investigación aprobados por la Junta de Revisión Institucional (IRB) del FHCRC o de filtros de leucocitos Pall usados adquiridos en el Centro de Transfusiones de Puget Sound. Las PBMC aisladas mediante centrifugación con medio de gradiente de densidad Ficoll-Paque se sometieron a lisis celular de glóbulos rojos con tampón de cloruro de amonio-potasio (ACK) y se crioconservaron en El 10% de DMSO y el 90% de FBS. Para los experimentos in vitro, se seleccionaron negativamente células T a partir de PMBC descongeladas mediante MACS usando un kit de aislamiento de células T Pan II (Miltenyi Biotec). Para experimentos de citotoxicidad, se seleccionaron positivamente células T CD8+ a partir de PBMC de aféresis de donantes sanos mediante MACS usando perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD8 (Miltenyi Biotec) antes de la crioconservación. Para algunos experimentos, se aislaron células T de memoria central (Tcm) de PBMC de aféresis de donantes sanos antes de la crioconservación mediante selección negativa usando un dispositivo AutoMACS después de la incubación con perlas
CliniMACS anti-CD14 y anti-CD45RA (Miltenyi Biotec), seguido de selección positiva con perlas CliniMACS CD62L. En otros experimentos, se enriquecieron células CD4 y CD8 mediante selección inmunomagnética positiva usando perlas anti-CD4 o anti-CD8 (Miltenyi Biotec). Se estimularon las células T seleccionadas con perlas Human T-Expanser recubiertas con Ac aCD3/aCD28 (Invitrogen) en una razón de perlas:células T de 3:1. Se sometieron las células T activadas a transducción por centrifugación (2100 rpm durante 60 minutos a 32°C) al día siguiente con un vector lentiviral que codifica para uno de los constructos de CAR CD20 (multiplicidad de infección de 2-6) más Polybrene 4 8 |ig/ml. Se cultivaron las células T transducidas en medio que contenía 50 Ul/ml de interleucina 2 humana recombinante (rhIL-2) con o sin rhIL-15 10 ng/ml (Miltenyi Biotec), se incubaron durante 4-5 días después de la estimulación antes de la retirada magnética de perlas de aCD3/aCD28 y se analizaron mediante citometría de flujo para confirmar la expresión de CAR. Se usaron células T CAR+ en ensayos funcionales.
Para experimentos con ratones in vivo, descongelaron, se activaron y transdujeron células Tcm o T enriquecidas con CD4 y CD8 al día siguiente con sobrenadante lentiviral concentrado que codifica para el constructo indicado en cada experimento. Se retiraron las perlas de CD3/CD28 el día 5, se expandieron las células en 50 Ul/ml de rhIL-2, se reestimularon el día 7-10 con LCL CD20+ irradiados en una razón de respondedor:estimulador de 1:1, y se inyectaron en ratones 8-11 días después de la reestimulación con LCL.
Ensayos de proliferación y secreción de citocinas
Se cultivaron conjuntamente luego células T (2 x 105 células totales) teñidas con éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE) 5|iM en razones 1:1 con líneas diana tumorales que se habían irradiado con 8000-10000 cGy. En los experimentos de bloqueo de rituximab, se incubaron las células diana irradiadas durante 30 minutos a temperatura ambiente con diversas concentraciones de rituximab antes de la coincubación con células T. Se recogió el sobrenadante 24 horas después de la siembra en placa y se almacenó a -20°C hasta el posterior análisis de citocinas mediante el ensayo Luminex tal como se describió previamente (Till et al., Blood 2012; 119(17):3940-50) para cuantificar interferón-gamma (IFN-y), interleucina-2 (IL-2) y TNF-a. Después de 4-5 días, se tiñeron las células con anticuerpo anti-CD3-APC (BioLegend) y se determinó la dilución de CFSE de linfocitos regulados por CD3 como medida de la proliferación mediante citometría de flujo. Se determinó el tamaño celular como otra medida de activación mediante citometría de flujo usando la media geométrica del parámetro de dispersión directa (FSC-A) y restando el tamaño celular de las células T en reposo. Se analizaron los datos de citometría de flujo usando el software FlowJo (v7.6.1; Treestar, Ashland, OR). En algunos experimentos, se sustituyó el ofatumumab por rituximab.
La evaluación de la secreción de citocinas también se determinó mediante tinción intracelular de IFN-y. Se cultivaron conjuntamente células T CD4+ o CD8+ CAR+ CD20 con células K562 o K562-CD20 irradiadas durante 24 horas. Para la tinción intracelular, se fijaron las células, se permeabilizaron con el kit BD Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences) durante 15 minutos en hielo. Luego, se tiñeron las células con anticuerpo anti-IFN-y (Biolegend) durante 1 hora en hielo después de la fijación y se permeabilización. Se analizaron los datos en BD FACSCanto (BD Biosciences). Se usó el software FlowJo para analizar los datos.
Ensayos de citotoxicidad
Se realizaron ensayos de liberación de 51Cr convencionales mediante la incubación conjunta de células T CD8+ CAR CD20 con líneas de células diana marcadas con 51Cr durante 4-5 horas tal como se describió previamente. (Véase, Wang et al. Hum Gene Ther. 2007; 18:712-725). Se determinó la liberación máxima de 51Cr midiendo directamente el contenido de 51Cr de los sobrenadantes de células marcadas lisadas con IGEPAL CA-630 al 5%. Se recogieron los sobrenadantes en placas Lumaplates de 96 pocillos, se secaron al aire durante la noche y se sometieron a ensayo los recuentos con un instrumento TopCount (PerkinElmer). El porcentaje de citotoxicidad se calculó mediante la ecuación: [Muestra - Mín.promedioMMáx.promedio- Mín.promedio]*100.
Para experimentos de bloqueo de rituximab, se incubaron líneas de células diana marcadas con 51Cr a diversas concentraciones de rituximab (que oscilaron desde 0 hasta 200 |ig/ml) durante 30 minutos (al doble de la concentración final durante la incubación inicial para producir concentraciones finales de 10, 25, 50, 100 y 200 |ig/ml) antes de la adición de células T CAR+CD8+ en diversas razones de efector con respecto a diana (E:T). Se cultivaron las células por duplicado a 37°C durante 5 horas en medio que contenía FBS inactivado por calor, con células diana bloqueadas con rituximab marcadas con 51Cr en placas de 96 pocillos con fondo en U. Los pocillos de control contenían células diana incubadas en medio que contenía rituximab sin células T (indicadas en las figuras como relación E:T “0:1”) para excluir la posibilidad de CDC inducida por rituximab. En algunos experimentos se usó ofatumumab en lugar de rituximab.
Evaluación in vivo del efecto de rituximab sobre la eficacia de las células T CAR
Se inocularon grupos de 5-10 ratones NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjl/ SzJ (NOD/SCID/yA [NSG]) de 6-10 semanas de edad (Laboratorio Jackson) con 5 x 105 células de linfoma Raji-ffLuc o Granta-519 resistentes a rituximab 2-7 días por la vena de la cola. 2-7 días después (tal como se indica en cada experimento), se inyectaron 107 células T CAR c D20 (tCD19+) o células T de vector vacío por la vena de la cola. En el experimento de bloqueo de rituximab, se administraron
25 o 200 |ig de rituximab por vía intraperitoneal (i.p.) 5 días después de la inoculación del tumor y 1 día antes de la administración de células T CAR. Se obtuvieron imágenes de bioluminiscencia para determinar el crecimiento tumoral usando métodos conocidos (véanse, James et al., Blood 2009; 114(27):5454-63; Rufener et al., Cancer Immunol Res.
2016; 4:509-519). Se ajustaron el agolpamiento de píxeles y la exposición para lograr la máxima sensibilidad sin provocar la saturación de la imagen. Se generaron curvas de supervivencia usando el método de Kaplan-Meier con el software GraphPad Prism 6.
Para someter a prueba la persistencia de las células T transferidas adoptivamente, se lisó la sangre completa recogida en diversos puntos de tiempo mediante hemorragia retroorbitaria con tampón de lisis ACK (Quality Biological). Se obtuvo suero de ratón mediante centrifugación de muestras de sangre coagulada del plexo retroorbitario los días 6 y 13 después de la inoculación del tumor, y se midieron los niveles séricos de rituximab usando un ensayo ELISA para determinar las concentraciones de rituximab tal como se describió previamente (véase, Gopal AK, et al., Blood 2008; 112(3):830-5; Maloney DG, et al., Blood 1997; 90(6):2188-95). Se bloquearon los receptores Fc de células aisladas con inmunoglobulina intravenosa (IGIV) y se tiñeron las células con anticuerpos monoclonales (Acm) para mCD45 (30-F11, Biolegend), hCD3 (HTT3a, Biolegend) y hCD19 (HIB19, BD Bioscience). Se recopilaron datos con un instrumento BD Canto 2 y se analizaron en el software FlowJo (Treestar). Los estudios con ratones fueron aprobados por el Comité Institucional de Uso y Cuidado de Animales del FHCRC.
Muestras de suero de pacientes
Pacientes con linfoma de células B proporcionaron muestras de suero humano tras la aprobación de la IRB y el consentimiento informado se obtuvo según la Declaración de Helsinki. Se recogieron muestras de suero en el plazo de los 4 meses posteriores a la quimioinmunoterapia de rescate que contenía rituximab. Se determinaron las concentraciones séricas de rituximab tal como se publicó previamente (Maloney et al., Blood 1997; 90(6):2188-95).
EJEMPLO 2
EFECTO DE RITUXIMAB SOBRE LA UNIÓN DE CD20 POR CAR QUE CONTIENE SCFV ANTI-CD20
Se sometieron a prueba previamente CAR dirigidos por CD20 usando scFv derivados de dos anticuerpos monoclonales murinos diferentes, o bien anticuerpos Leu16 (L27; véase, Till et al., Blood 2008; 112(6):2261-71; Till et al., Blood 2012; 119(17):3940-50) o bien 1F5 (véase, Wang J et al., Hum Gene Ther 2007; 18(8):712-25; Budde et al., PLoS One 2013; 8(12):e82742), cada uno de los cuales se une a epítopos en el bucle extracelular grande de la molécula de CD20, (véase, Polyak et al., Blood 2002; 99(9):3256-62). Estos epítopos de CD20 se solapan con el epítopo de rituximab (véase, Polyak et al., Blood 2002; 99(9):3256-62) y, por tanto, se esperaría que el rituximab bloqueara la unión de estos CAR. Usando citometría de flujo, se evaluó la capacidad de concentraciones variables de rituximab para bloquear la unión del anticuerpo anti-CD20 Leu16 a CD20 expresado en células de linfoma de Ramos preincubando estas células con rituximab antes de la incubación con el Ac Leu16. Se observó un bloqueo de CD20 dependiente de la dosis, con un bloqueo casi completo a 50 |ig/ml de rituximab a 4°C. Pero, cuando se incubó anticuerpo anti-CD20-PE (Leu16) a la temperatura fisiológicamente relevante de 37°C, se produjo una unión de CD20 de bajo nivel incluso a 200 |ig/ml de rituximab (figuras 2A-2F). Se observaron hallazgos similares en experimentos que usaron el anticuerpo anti-CD20 1F5 en células FL-18 (datos no mostrados). Por tanto, el rituximab se une a epítopos solapantes con los CAR anti-CD20 de esta divulgación y tiene el potencial de interferir con la actividad de las células T c Ar frente a células diana CD20+.
EJEMPLO 3
EFECTO DE RITUXIMAB SOBRE LA FUNCIÓN IN VITRO DE LAS CÉLULAS T CAR
El impacto del bloqueo de CD20 por rituximab en la función de las células T CAR CD20 se evaluó midiendo la proliferación, la secreción de citocinas y la citotoxicidad usando cinco constructos lentivirales CAR CD20 diferentes después de la incubación con una variedad de CD20+ Líneas de células B LNH. Los constructos CAR (Figs. 1A y 1B) fueron las 3rd-generación Leu16-28-BB-z-tEGFR y constructos 1F5-28-BBz (véase, Budde et al., PLoS One 2013; 8 (12):e82742), el 2Dakota del N-generación Leu16-28-z, y dos CD20 CAR (1.5.3-NQ-28-BB-z y 1.5.3-NQ-28-z) derivados del 1.5.3 anti-CD20 Ab completamente humano, que también se une a un epítopo superpuesto con rituximab (véase, Bornstein et al., Invest New Drugs 2010; 28 (5):561-74). La expresión de CAR se logró normalmente en el 40-80% de las células T (datos no mostrados).
La proliferación de células T CAR marcadas con CFSE no se vio afectada en gran medida cuando se cultivaron con varias líneas de células diana LNH (Raji, Daudi, Rec-1 y FL-18) en presencia de rituximab. Las células T CAR estimuladas con células diana en presencia de rituximab a concentraciones de hasta 200 |ig/ml exhibieron> 96% de la proliferación observada después de la estimulación en ausencia de rituximab (figura 3A). El tamaño de las células es otra medida de la activación de las células T (véase, Grumont et al., Immunity 2004; 21 (1):19-30). CAR+ Las células T se analizaron mediante citometría de flujo para la dispersión directa como una estimación del tamaño celular y se encontró que después de la estimulación con células tumorales Raji, Daudi o Rec-1 preincubadas con rituximab, las células T CAR exhibieron un tamaño medio> 85% del tamaño de las células de control no expuestas a rituximab (figura
3A). Las células T incubadas con células FL-18 exhibieron una reducción ligeramente más pronunciada, pero todavía modesta, en el tamaño de las células después de la incubación con rituximab (73% del tamaño de las células de control a 200 |ig/ml).
En contraste con la proliferación, se encontró que la secreción de citocinas por las células T CAR disminuía en presencia de niveles crecientes de rituximab (figura 3B). Sin embargo, incluso a 100 |ig/ml de rituximab, las citocinas IFN-y, IL-2 y TNF-a se produjeron al 34-51%, 70-92% y 79-108% de los niveles basales, respectivamente. Se observaron hallazgos similares usando células K562 modificadas genéticamente para expresar CD80 y CD20 como dianas, con células K562-CD80 negativas para CD20 como control para demostrar la especificidad antigénica de la actividad de las células T CAR CD20 (figuras 6A y 6B).
El impacto de rituximab sobre la actividad citolítica de CAR+ Células T contra varios CD20+ También se examinaron las líneas de células diana de LNH. Usando convencional 51Ensayos de liberación de Cr con CAR+/ CD8+ Los linfocitos T como efectores y Raji, FL-18, Granta o Rec-1 como dianas, se encontró que la citotoxicidad estaba mínimamente afectada a concentraciones de rituximab de hasta 50 |ig/ml (figura4) y> 65% de la actividad citolítica basal. se retuvo en concentraciones de rituximab de 100 |ig/ml frente a todas las líneas celulares diana ensayadas.
los in vitro Se ensayó la funcionalidad de las células T CAR completamente humanas 1.5.3-NQ-28-z y 1.5.3-NQ-28-BB-z en presencia de rituximab. Al igual que con los CAR Leu16 y 1F5, se observó una modesta disminución dependiente de la dosis en la secreción de citocinas y la citotoxicidad contra las células diana pretratadas con rituximab, pero no proliferación.
EJEMPLO 4
EFECTO DE LOS NIVELES DE EXPRESIÓN DE CD20 EN LA SENSIBILIDAD DE LA CÉLULA T DE CAR A ANTI-CD20
Para examinar si el nivel de expresión de CD20 en las células tumorales podría afectar la sensibilidad al bloqueo de rituximab, se seleccionaron para las pruebas las líneas celulares K562-CD80 con niveles bajos, medios y altos de expresión de CD20 después de la clonación por dilución limitante (figura 10). los in vitro La función de las células T c Ar se evaluó de nuevo en presencia de concentraciones variables de rituximab. Al igual que con las líneas celulares LNH, la proliferación de células T CAR estaba completamente intacta independientemente del nivel de expresión de CD20 en las células diana (figura 5A). El tamaño de la celda no disminuyó cuando CD20alto se usaron células como dianas, aunque se encontró una reducción modesta en el tamaño de las células para las células que expresan niveles más bajos de CD20. En contraste con la proliferación y el tamaño celular, la secreción de citocinas se vio significativamente afectada por la estimulación con CD20.bajo células diana, con niveles de IFN-y, IL-2 y TNF-a tan bajos como 5%, 17% y 22% de los valores iniciales, respectivamente, a 100-200 |ig/ml de rituximab (figura 5B; Fig.11A-11E), mientras que las células T estimuladas con CD20alto los dianas retuvieron> 75% de la actividad inicial a concentraciones de rituximab de 100 |ig/ml.
El impacto de la densidad del antígeno CD20 sobre la inhibición mediada por rituximab de la actividad citolítica de las células T CAR se muestra en la figura 5C. La destrucción de células T de células diana que expresan altos niveles de CD20 fue mínimamente afectada por rituximab, incluso a bajas razones E:T. Sin embargo, hubo una disminución dependiente de la dosis en la citotoxicidad de las células T contra CD20.bajo y CD20medio Dianas K562-CD80, que fue más pronunciado en razones de efector a diana más bajas (E:T). Actividad citolítica contra CD20bajo los dianas se mantuvieron al 47% de la línea de base en una razón de E:T de 50:1 a 200 |ig/ml de rituximab, pero fue sólo el 16% de la línea de base en una razón de E:T de 2:1.
EJEMPLO 5
IN VIVO ACTIVIDAD ANTITUMORAL DE CÉLULAS CAR T CD20 EN PRESENCIA DE RITUXIMAB RESIDUAL
los in vitro Los experimentos anteriores indicaron que las células T CAR CD20 conservan una funcionalidad significativa contra CD20+ tumores a pesar de la presencia de niveles moderados de rituximab. Para evaluar cómo estas observaciones se traducirían en in vivo En el entorno, se examinó el impacto del rituximab residual sobre la actividad de las células T CAR en un modelo de linfoma de ratón.
A modo de antecedente, el rituximab como agente único tiene una actividad antitumoral significativa contra las células Raji en modelos de xenoinjerto de ratón inmunodeprimidos (véase, Hernandez-Ilizaliturri FJ, et al., Clin Cancer Res 2003; 9 (16 Pt 1):5866-73). Para superar un posible efecto terapéutico de confusión del rituximab en experimentos de terapia de combinación, se generó una línea celular Raji resistente al rituximab (RR-Raji) usando los métodos descritos anteriormente (véase, Czuczman MS, et al., Clin Cancer Res 2008; 14 (5):1561-70), y se encontró que la expresión de CD20 se retenía en esta línea celular (figura 12).
Se inocularon ratones NSG por vía i.v. con células RR-Raji y algunos grupos fueron tratados con rituximab en dosis
alta o baja una vez que los tumores se establecieron 5 días después de la inoculación, y luego con CAR CD20+ Las células T se administraron por vía i.v. al día siguiente (figura 7A). Los ratones que recibieron rituximab solo demostraron un efecto antitumoral transitorio y modesto, pero todos murieron por progresión del tumor el día 24, mientras que los ratones tratados con células T CAR sólo tuvieron una regresión tumoral significativa, con erradicación del tumor en el 40% de los ratones y una duplicación del mediana de supervivencia (52 días). Los ratones que recibieron rituximab el día anterior a la infusión de células T no presentaron alteraciones in vivo Actividad de las células T CAR en comparación con ratones que recibieron células T CAR solas; todos menos un ratón del grupo de rituximab de 25 |ig/ml y todos los ratones del grupo de rituximab de 200 |ig/ml demostraron la erradicación del tumor (figuras 7B y 7C; figuras 13A y 13B).
Para confirmar que estas remisiones tumorales ocurrieron en presencia de niveles séricos fisiológicamente relevantes de rituximab, se recogió suero de ratones tratados con rituximab el día de la infusión de células T y una semana después y se midieron los niveles séricos de rituximab. Los ratones que recibieron 200 |ig/ml de rituximab tuvieron una concentración sérica media inicial de rituximab de 138,5 |ig/ml (intervalo 54,5-173,6) y 39,7 |ig/ml (intervalo 1,6 51,9) una semana después, y los ratones que recibieron 25 |ig/ml de rituximab tuvieron una concentración media de 11,7 |ig/ml (intervalo 2,8-17,8) al inicio y 0 |ig/ml 1 semana después de la infusión de células T (figura 7D).
Además, los niveles de células T CAR circulantes se cuantificaron mediante citometría de flujo 28 días después de la inyección del tumor. No hubo diferencias significativas en los niveles de células T CAR entre ratones que recibieron células T CAR solas o rituximab más células T CAR, lo que indica que la presencia de rituximab no afectó la in vivo persistencia de células T CAR (Figs. 14A-14C).
EJEMPLO 6
CONCENTRACIONES EN SUERO DE RITUXIMAB DE PACIENTES TRATADOS CON REGÍMENES QUE CONTIENEN RITUXIMAB DE SALVAGO
Para ubicar los resultados mencionados anteriormente en un contexto clínico, se consultó un intervalo clínicamente relevante de niveles residuales de rituximab en suero en la población de pacientes prevista en una base de datos de pacientes con LNH de células B que se sometieron a un autotrasplante de células madre en protocolos de investigación y tenían un medición de rituximab sérico antes del trasplante disponible (véase, Gopal et al., Blood 2008; 112 (3):830-5). Se identificaron un total de 103 pacientes que recibieron un régimen de quimioterapia que contenía rituximab en los 4 meses posteriores a la extracción de sangre (intervalo 0,5-3,8 meses, mediana 1,8), y la concentración media de rituximab en estos pacientes fue 38,3 |ig/ml, con una intervalo intercuartílico de 19,1-71,7 |ig/ml (Figs. 7E). La concentración de rituximab fue de 100 |ig/ml o menor en el 86% de los pacientes.
EJEMPLO 7
EFECTO DE OFATUMUMAB EN LA FUNCIÓN DE CÉLULA T DE CAR CD20
Para determinar la importancia de la ubicación del epítopo sobre el efecto de los anticuerpos anti-CD20 en la función CAR, el in vitro Los ensayos se repitieron con ofatumumab, un anticuerpo anti-CD20 que se une a un epítopo distinto del rituximab, que involucra un bucle extracelular más pequeño de CD20, así como un área diferente del bucle grande (véase, Du et al., Mol Immunol 2009; 46 (11-12):2419-23; Teeling et al., J Immunol 2006; 177 (1):362-71La capacidad de ofatumumab para bloquear la unión del anticuerpo anti-CD20 Leu16 se evaluó en primer lugar mediante citometría de flujo, que mostró que, a pesar del epítopo diferente, ofatumumab bloqueaba profundamente la unión del segundo anticuerpo. Además, el bloqueo de la unión se produjo a concentraciones incluso más bajas que el rituximab (Figs.
2D-F). Luego in vitro Se realizaron ensayos funcionales en células de linfoma Rec-1 y Raji-ffLuc que se habían preincubado con concentraciones variables de ofatumumab (figuras 8A-8C). Los resultados fueron similares a los del rituximab, en que la proliferación y el tamaño de las células se vieron mínimamente afectados, pero la producción de citocinas se vio más afectada, de una manera dependiente de la dosis. En comparación con rituximab, la citotoxicidad se vio más profundamente afectada en presencia de ofatumumab. Estos hallazgos indicaron que el efecto inhibidor del anticuerpo anti-CD20 se debe a la inhibición estérica y no al bloqueo directo del epítopo de unión a CAR. Por tanto, el efecto inhibidor más fuerte de ofatumumab resultó de una tasa de inactividad más lenta en comparación con rituximab. Esto fue apoyado por estudios competitivos de citometría de flujo de unión a células a 4°C o 37°C (Figs. 2D-F), que confirmaron una disociación mucho menor de ofatumumab, consistente con los datos reportados previamente (véase, Teeling et al., Blood 2004; 104 (6):1793-800).
EJEMPLO 8
SECRECIÓN DE CITOCINAS POR DIVERSOS CONSTRUCTOS DE CAR IN VITRO
Se estimularon células T de memoria central (CD14-CD45RA-CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vivo. El día 14, se reestimularon las células con células Raji-ffLuc irradiadas (figura 15A
y Fig. 15C), células Granta-519 (figura 15B) y células Jeko (figura 15D). El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos y se proporciona como control positivo. Se recogieron los sobrenadantes 24 horas más tarde y se analizaron mediante el ensayo Luminex para determinar los niveles de interferón (IFN)-y, IL-2 y factor de necrosis tumoral-a.
EJEMPLO 9
SECRECIÓN DE CITOCINAS POR CÉLULAS T CAR CD20
CD4+y CD8+Las células T transducidas con el vector lentiviral 1.5.3-NQ-28-BB-z y expandidas ex vivo fueron reestimuladas con Raji-ffLuc CD20 irradiado.+ células de linfoma. Se midió la secreción de las citocinas indicadas en los sobrenadantes celulares después de 24 horas mediante el ensayo Luminex. (figura 16A). Se descongelaron células T CAR CD20 CD4+ y CD8+ crioconservadas y se reestimularon con células K562 o células K562 que expresan CD20 y, a las 24 horas, se analizaron mediante tinción intracelular para IFN-y mediante citometría de flujo. (figura 16B). EJEMPLO 10
IN VITRO CITOTOXICIDAD DE DIVERSOS CONSTRUCTOS DE CAR
Se estimularon células T de memoria central (CD14-CD45RA-CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vivo. El día 14, las células se usaron como efectoras en un ensayo de liberación de 51Cr durante 4 horas convencional, usando (figuras 17A y 17B) Raji-ffLuc y (figura 17B) células Jeko como dianas. El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos y se proporciona como control positivo. Se muestra la lisis de células diana específicas de cada población de células T CAR.
EJEMPLO 11
PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS T DE CAR CD20
CD8+ Las células T se transdujeron con el vector lentiviral 1.5.3-NQ-28-BB-z (o se transdujeron de manera simulada) y se expandieron ex vivo, y luego se crioconservaron. A continuación, las células se descongelaron, se tiñeron con éster succinamidílico de carboxifluoresceína (CFSE) y se reestimularon con células de linfoma Raji-ffLuc CD20+ irradiadas, células K562 o células K562 que expresan CD20. Se analizaron las células mediante citometría de flujo 4 días después. (figura 18A) Dilución CFSE de c Ar+ células (controladas por CD3+/ tCD19+) se muestra. El histograma de línea discontinua muestra fluorescencia CFSE de células T en medio de cultivo únicamente, y los histogramas de línea continua son células T co-incubadas con células diana. (figura 18B) Se muestra el porcentaje de células divididas para cada grupo.
EJEMPLO 12
IN VIVO ACTIVIDAD ANTITUMORAL DE DIVERSOS CONSTRUCTOS DE CAR
Se estimularon células T de memoria central (CD14-CD45RA-CD62L+) con perlas recubiertas de anticuerpo anti-CD3/CD28, se transdujeron 24 horas después con vectores lentivirales que codificaban para los constructos de CAR indicados y se expandieron in vivo. El constructo “19-BB-z” es un CAR dirigido a CD19 de grado clínico que se usa en ensayos clínicos en nuestro centro y se proporciona como un control de referencia. Se les inyectaron a ratones nSG por vía i.v. células tumorales Raji-ffLuc, seguido 2 días más tarde por i.v. inyección de memoria central ampliada (CD14- CD45RA-CD62L+) Células T transducidas con el CAR 1.5.3-NQ-28-BB-z, CAR 1.5.3-NQ-28-z, JCAR-014 (anti-CD 19-41BB-Q, o un vector vacío. (figura 19A) Carga tumoral a lo largo del tiempo según se evaluó mediante formación de imágenes de bioluminiscencia; y (figura 19B) gráfico de Kaplan-Meier de supervivencia global.
EJEMPLO 13
IN VIVO ACTIVIDAD DE LAS CÉLULAS CAR T CD20 CONTRA EL LINFOMA DE CÉLULAS MASCULINAS CD4+ y CD8+ Se transdujeron células T CAR CD20 con el CAR 1.5.3-NQ-28-BBz y se usaron para tratar ratones NSG que habían sido inoculados 7 días antes con células de linfoma de células del manto Granta-ffLuc por la vena de la cola. En la figura 20 se muestra un gráfico de Kaplan-Meier de supervivencia general.
EJEMPLO 14
IN VIVO PERSISTENCIA DE LAS CÉLULAS CART Y EFECTOS FISIOLÓGICOS RELACIONADOS
Se obtuvieron muestras de sangre retroorbital en puntos de tiempo seriados después de la infusión de linfocitos T CAR CD20 o linfocitos T que expresan el vector tCD19 vacío en ratones NSG que portaban tumores diseminados RajiffLuc. Las células T CAR CD20 que expresan el marcador de transducción tCD19 se cuantificaron mediante citometría de flujo en cada punto de tiempo como CD3 humano+/ CD45 negativo de ratón/CD19 humano+ células. (figura 21A) tCD19+ Se muestran las células T en 3 puntos de tiempo posteriores a la infusión como porcentaje del total de células nucleadas en la sangre (n = 9 inicialmente en el grupo de células T CAR). CD19 truncado+ las celdas de un ratón de vector vacío se muestran como referencia. (figura21B) En un experimento independiente, el tCD19+ las células de 2 ratones en cada grupo (vector vacío frente a células T CAR) se muestran longitudinalmente con mediciones semanales.
Además, los ratones tratados con células T CAR CD20 fueron monitoreados para detectar signos de toxicidad basados en el peso, el comportamiento y la apariencia general, la actividad física, la postura, los hábitos de aseo, el color de la piel, la presencia de diarrea, los signos de inflamación de los ojos, la boca o la piel, letargo, o signos de anemia grave (pabellón auricular o pies o membranas mucosas pálidos). No se observaron signos de toxicidad relacionada con las células T en ningún ratón durante 11 experimentos con células T CAR CD20, con la excepción del hallazgo de la enfermedad xenogénica de injerto contra huésped que se desarrolló en algunos ratones en momentos tardíos. Este hallazgo se produjo tanto en ratones que recibieron células T CAR CD20 como en ratones que recibieron células vector vacías y, por tanto, no está asociado con el vector CAR sino que es una consecuencia conocida de la transferencia de células T xenogénicas. En cada experimento, el peso de cada ratón se registró al menos 3 veces a la semana y fue generalmente estable excepto en los ratones que experimentaron una progresión terminal del tumor, en los que se produjo una pérdida de peso durante los últimos días de vida (datos no mostrados).
Finalmente, se tomaron muestras de sangre de un subconjunto de ratones en dos experimentos para determinar la función fisiológica de los animales. En el primer experimento, los ratones con tumores de linfoma de células del manto de Granta se trataron con células T no transducidas o con células T CAR CD20 que no habían sido reestimuladas con CD20+ Células TM-LCL, o células T CAR CD20 que habían sido reestimuladas con células TM-LCL (recién infundidas o crioconservadas primero, luego descongeladas e infundidas). La función renal se midió con nitrógeno ureico en sangre (BUN) y creatinina, la función hepática se midió con alanina y aspartato aminotransferasas (ALT y AST) y la función de la médula ósea se midió mediante recuento de glóbulos blancos (WBC), hemoglobina y recuento de plaquetas en retroorbital. muestras de sangre en ratones tratados (datos no mostrados). En comparación con los ratones no tratados, no se observaron aumentos de BUN o creatinina o cambios significativos en la función hepática en los ratones tratados con células T CAR. Los ratones tratados con células T CAR que no habían sido reestimuladas con células TM-LCL tuvieron una caída en WBC en comparación con los ratones no tratados, pero esto no se observó en ratones tratados con células T que habían sido reestimuladas con TM-LCL. Se observó una pequeña caída en el hematocrito, pero no en la hemoglobina, en ratones tratados con células T CAR reestimuladas con TM-LCL, aunque esto no se observó en ratones que recibieron células T CAR no reestimuladas. El recuento de plaquetas aumentó en los ratones que recibieron células T CAR no reestimuladas, pero no se observaron cambios significativos en los ratones que recibieron células T CAR reestimuladas.
En el segundo experimento, los ratones que tenían tumores Raji-ffLuc se trataron con dosis bajas (1 x 106 CAR células/ratón) o dosis alta (5 x 106 CAR células/ratón) y se evaluó la función renal y hepática. Se observó una tendencia hacia un BUN más alto en los ratones que recibieron células T, pero no hubo cambios en la creatinina sérica (datos no mostrados). No se observó elevación de las transaminasas hepáticas.
EJEMPLO 15
ESTUDIO CLÍNICO DE LA TERAPIA DEL CAR ANTI-CD20
Se diseñó un estudio de fase I/II para evaluar la seguridad y la dosis máxima tolerada (MTD) de la terapia de células T adoptivas con una mezcla 1:1 de células T CD4+ y CD8+ autólogas transducidas para expresar un CAR específico de CD20, 1.5.3-NQ-28-BB-z. El vector lentiviral auto-inactivante (SIN) que lleva este constructo usado para transducir células T en este estudio es un 3rdlentivirus derivado del VIH-1, que codifica para un scFv del anticuerpo monoclonal completamente humano 1.5.3 que reconoce un epítopo en el bucle extracelular grande de CD20 humano, y que está vinculado a una región bisagra/espaciadora de IgG1 humana modificada, humana Los dominios transmembrana e intracelular de CD28 y los dominios de señalización 4-1BB y CD3^ humanos (figura 1A). El vector también codifica para un CD19 humano de superficie celular truncado no funcional (tCD19) separado del casete CAR por un elemento E2A autoescindible, que facilita el seguimiento de las células T CAR. in vivo. El truncamiento de CD19 acorta el dominio intracelular a 19 aminoácidos, eliminando todos los residuos de tirosina que sirven como sitios de fosforilación, pero conserva los epítopos extracelulares reconocidos por los anticuerpos anti-CD19. El tCD19 también puede usarse como diana para anticuerpos dirigidos a CD19 o conjugados de anticuerpo-fármaco para eliminar las células T CAR, por ejemplo, en el caso de la aplasia prolongada de células B.
Los esfuerzos previos para investigar las terapias anti-CD20 CAR T mostraron cierto éxito, pero la baja eficiencia de transfección (<0,1%) requirió la selección de antibióticos y una prolongada ex vivo crecimiento, lo que resulta en una baja expresión de CAR y la reducción de las células T (véase, por ejemplo, Till et al., Blood 119 (17):3940-3950, 2012; véase también Till et al., Blood 112 (6):2261-2271, 2008; Wang et al., J. Clin. Immunol. 155 (2):160-75, 2014; da Silva et al., Blood ASH Annual Meeting Abstracts:Abstract # 1851, 2016).
El ensayo clínico inscribirá a 30 sujetos con linterna no Hodgkin de células B, incluyendo linterna de células del manto, folicular, linfoplasmocítico, de zona marginal, linterna de células B indolentes transformadas (incluyendo LLC transformada) o linterna difuso de células B grandes que ha recaído después de una respuesta. a al menos un régimen de terapia anterior o es refractario a la terapia anterior. Los criterios críticos de elegibilidad incluyen:18 años o más (de cualquier género, raza o etnia); enfermedad medible con evidencia de expresión de CD20; las participantes femeninas no pueden estar embarazadas o amamantando; función hepática, renal, pulmonar, cardíaca y hematológica adecuada según se define en el protocolo clínico; sin metástasis activas del sistema nervioso central o patología del sistema nervioso central clínicamente relevante en el pasado/actual; sin VIH, infección activa no controlada o enfermedad autoinmunitaria activa que requiera terapia inmunosupresora sistémica.
Pacientes con de novo DLBCL debe cumplir con uno de los siguientes criterios:
• Enfermedad refractaria probada por biopsia después de un régimen de primera línea que contiene tanto una antraciclina como rituximab u otro anticuerpo anti-CD20 (es decir, “refractario primario”), donde cualquier enfermedad que reaparezca dentro de los 3 meses posteriores a la finalización del régimen se considera refractaria.
• Enfermedad recidivante o resistente al tratamiento después de al menos uno de los siguientes:
o Al menos 2 líneas de terapia (incluyendo al menos una con una antraciclina y un anticuerpo anti-CD20) Autotrasplante de células madre
o Trasplante alogénico de células madre
En la figura 24 se proporciona un diagrama del esquema de tratamiento general, y en las figuras 25A y 25B se proporciona una representación esquemática de la formulación y el modelo de administración de las células T CAR.
A cada paciente se le realizará una leucocitaféresis para obtener células mononucleares de sangre periférica. Los pacientes que no son elegibles para una aféresis vena a vena pueden optar por que se les coloque un catéter venoso central percutáneo para permitir esta recolección. Los pacientes no aptos para la aféresis que tienen un hematocrito de al menos el 38% y un recuento total de linfocitos no malignos (normales)> 2000/mcl pueden someterse a una flebotomía de 400 ml de sangre para obtener las PBMC necesarias para la generación de las células T CAR. Este enfoque sólo se tomaría en pacientes que se inscribieran en niveles de dosis 0 (1 x 105tCD19 células/kg), 1 (3,3 x 105 tCD19+ células/kg) y 2 (1 x 106 tCD19+ células/kg). Los participantes se someterán a una biopsia del tumor antes de la leucocitaféresis. La PET CT puede realizarse antes o después de la biopsia del tumor y la leucocitaféresis, según la accesibilidad del ganglio linfático.
Los linfocitos CAR T se fabrican a partir de un producto de células mononucleares de sangre periférica autóloga (PBMC) obtenido mediante leucocitaféresis convencional no movilizada para cada paciente. Las PBMC se someten a una selección inmunomagnética para enriquecer las células T CD8+ y CD4+ por separado, y cada subconjunto se estimula por separado con perlas paramagnéticas anti-CD3/CD28, seguido de la transducción con el vector lentiviral 1 5 S-NQ-28-BB-^ que codifica el virus completamente humano. Marcador de transducción tCD19 y CAR específico de CD20 de tercera generación. Las células T transducidas se expanden, luego se vuelven a estimular con una línea celular diana que expresa CD20 para estimular el crecimiento, se expanden más ex vivo y luego se formulan en una razón de CD4/CD8 1:1 para lograr la dosis celular especificada para infusión. Los productos celulares se pueden infundir nuevos o crioconservados y luego descongelar, lavar e infundir.
El producto de células T CAR CD20 consistirá en una razón 1:1 de tCD19+ CD4+ y tCD19+ CD8+ Células T, donde tCD19 es un marcador de transducción que se coexpresa con el CAR e identifica al CAR+ células. El producto de células T CAR CD20 generado para cada paciente puede administrarse como células frescas inmediatamente después de la fabricación, o puede primero crioconservarse y almacenarse en un congelador de nitrógeno líquido, y luego las células descongeladas lavarse para eliminar el crioprotector residual y luego formularse para infusión. El número total de células será suficiente para tener en cuenta la pérdida de células durante la recuperación de la descongelación y para alcanzar el nivel de dosis de células especificado en el protocolo clínico. La razón total de CD4+ y CD8+ Las células T pueden diferir de 1:1, porque la transducción de los subconjuntos individuales es similar pero no idéntica en pacientes individuales. Por esta razón, los subconjuntos se transducen por separado, lo que permite una formulación precisa de las células T transducidas. El fundamento de esta relación se basa en trabajos publicados que demuestran la sinergia entre las células T CAR CD4 y CD8 en modelos animales (Sommermeyer et al., Leucemia 2015) y nuestro objetivo de proporcionar un producto celular uniforme a todos los pacientes para ayudar a evaluar la toxicidad y la eficacia, lo cual es difícil si cada paciente recibe una composición diferente.
Las células CD20 CAR T se suspenderán en CryoStor CS10® u otro medio de crioconservación apropiado para la crioconservación en un congelador de velocidad controlada. Las células crioconservadas se almacenarán en la fase de vapor de un congelador de nitrógeno líquido. Las células CD20 CAR T frescas o descongeladas se resuspenderán en Normosol HSA al 1% y se transferirán a un paquete de transferencia al nivel de dosis celular total especificado
en el protocolo clínico. El producto formulado se almacenará a 2-8°C y luego se transferirá en paquetes de gel refrigerados al sitio clínico en la Universidad de Washington o Seattle Cancer Care Alliance para su administración. El producto será lanzado por la instalación de procesamiento de células FHCRC. El producto celular debe infundirse en el participante de la investigación dentro de las 6 horas posteriores a la formulación. La instalación de procesamiento de células FHCRC será responsable de documentar la dispensación y devolución (cuando corresponda) del producto en investigación.
Los pacientes recibirán quimioterapia de depleción linfoide 36-96 horas antes de la infusión de células T CAR CD20. Debe haber un intervalo de al menos 36 horas entre la última dosis de quimioterapia y la infusión de células T. Los dianas de la administración de quimioterapia son proporcionar linfodepleción para facilitar la supervivencia de las células T transferidas y reducir la carga tumoral antes de la infusión de células T CAR CD20. Tal como se describe en las consideraciones estadísticas del protocolo, los pacientes serán tratados inicialmente con una dosis única de ciclofosfamida (CY) por vía i.v. 1 g/m2 inicialmente. Sin embargo, si la tasa de respuesta es inadecuada, se cambiará el régimen de linfodepleción para que los pacientes posteriores reciban CY fludarabina.
Antes de recibir células T CAR CD20, se evaluará a los participantes para asegurarse de que no hayan desarrollado ninguna toxicidad pulmonar, cardiovascular, hepática, renal o neurológica prohibida por el protocolo; no ha desarrollado una infección incontrolada, activa y grave; y no han recibido tratamiento con otros agentes en investigación dentro de los 30 días posteriores a la infusión de células T.
No se requieren medicamentos previos antes de la administración del producto de células T CAR CD20. Las premedicaciones convencionales pueden usarse a discreción del investigador.
Cada paciente recibirá una única infusión intravenosa de linfocitos T con CAR CD20 entre 36 y 96 horas después de la finalización de la quimioterapia linfodeplectora. La dosis de linfocitos T CAR CD20 administrada a cada paciente se determinará según el diseño estadístico descrito en el protocolo clínico. Los niveles de dosis se muestran en la tabla 2 a continuación. Puede administrarse una segunda infusión de células T CAR CD20 si la primera infusión no produce una RC o si la enfermedad recae después de una RC. Para ello, los pacientes deben cumplir los criterios especificados en el protocolo clínico a continuación.
Administración celular: Se administrará por vía intravenosa un producto de una única célula, combinado de alícuotas individuales de linfocitos T CAR CD4+ y CD8+ CD20 en una razón 1:1 durante aproximadamente 20-30 minutos a la dosis celular especificada para cada sujeto. La dosis de linfocitos T especificada se refiere a linfocitos T CAR determinados por la expresión del marcador de transducción CD19 truncado, que se expresa de manera coordinada con el CAR en el vector. Los niveles de dosis previstos para la administración según el protocolo propuesto son los siguientes:
Tabla 2. Formulación e infusión de células T CAR CD20
Todos los pacientes serán monitoreados durante cada infusión de células T. Los signos vitales (incluyendo la saturación de oxígeno) deben registrarse antes y durante la infusión y aproximadamente cada hora durante 2 horas después de la infusión. La saturación de oxígeno debe controlarse con pulsioximetría continua durante la infusión de células T y durante 2 horas después de la infusión de células T. Los sujetos permanecerán en la unidad de infusión celular durante un mínimo de 2 horas después de la infusión, o hasta que se resuelva cualquier toxicidad relacionada con la infusión que se considere que representa un riesgo significativo para el sujeto del estudio como paciente ambulatorio.
Tasa de infusión: Cada infusión de células debe administrarse por vía intravenosa durante aproximadamente 20-30 minutos, ajustada según sea necesario para cumplir con las pautas para los límites de endotoxinas para medicamentos parenterales (£ 5 UE/kg/hora). La velocidad de perfusión también se puede ajustar si los sujetos experimentan acontecimientos adversos leves relacionados con la perfusión (grado 2 o inferior).
El objetivo principal de este estudio es estimar la dosis máxima tolerada (MTD) de células T CAR. La MTD para estos
fines se definirá como una tasa de toxicidad limitante de dosis real del 25%, donde la DLT se define como toxicidad no hematológica de Grado 3 o superior atribuible a la infusión de linfocitos T con CAR que ocurre dentro de los 28 días de la infusión, que dura al menos 4 días y no responde a tocilizumab, dexametasona u otros fármacos antiinflamatorios. Se usará una modificación del método de reevaluación continua (CRM) para estimar el MTD. Las modificaciones incluyen tratar a los pacientes en grupos de dos (en lugar de uno) y permitir un aumento máximo de un nivel de dosis entre los grupos. Los pacientes recibirán una única infusión intravenosa de linfocitos T CAR CD20 en uno de los cuatro niveles de dosis en aumento comenzando con el nivel de dosis 1 para el primer grupo de dos pacientes. El algoritmo CRM determina el aumento o disminución de la dosis, teniendo en cuenta el número de pacientes que experimentan una toxicidad grave en cada nivel de dosis (véase más arriba).
El tratamiento de los pacientes en los grupos de aumento/disminución de la dosis se escalonará de tal manera que se requiera un intervalo mínimo de 28 días después de la infusión entre cada grupo de 2 pacientes antes de pasar al siguiente nivel de dosis. Estos niveles de dosis se evaluarán inicialmente en combinación con CY solo, evaluando la tasa de RC para determinar si CY solo tiene actividad suficiente o si se añadirá fludarabina (CY/gripe). Si se cumple algún criterio para cambiar a CY/gripe, el CRM se reiniciará a partir de un nivel de dosis por debajo de la dosis provisional recomendada (solo con CY) en combinación con CY/gripe. La dosis interina recomendada se definirá como la dosis más baja entre la dosis máxima evaluada hasta la fecha o la siguiente dosis que se habría seleccionado en función del mCRM después del octavo, decimosexto o vigésimo paciente para el 1.S *, 2Dakota del Ny 3rd análisis intermedios. Esta evaluación continuará hasta un total de 30 pacientes. Si no se cumple ninguno de estos criterios, el enfoque de CRM continuará con CY solo en 10 pacientes adicionales (para llegar a un total de 30 pacientes). Para los pacientes que reciben una segunda infusión, la DLT y los resultados de eficacia se evaluarán en función de la dosis de su infusión primaria.
Los pacientes que reciben linfocitos T CAR CD20 pueden desarrollar toxicidad grave debido a la activación, proliferación y secreción de citocinas de los linfocitos T después del encuentro con el antígeno tumoral. El síndrome de liberación de citocinas, la activación de macrófagos y la neurotoxicidad pueden ocurrir y requerir apoyo de cuidados intensivos, y no se considerarán DLT si se consideran debido al reconocimiento de células T del tumor, a menos que estas toxicidades no sean reversibles después de 4 días consecutivos de tratamiento con corticosteroides y/o tocilizumab.
Si alguna vez existe evidencia suficiente que sugiera que la verdadera probabilidad de muerte relacionada con el tratamiento para el día 100 excede el 20% (independientemente de la dosis), la inscripción de pacientes se suspenderá en espera de una revisión detallada por parte del IP, el monitor del estudio, el estadístico y el DSMB. Se definirá evidencia suficiente para este propósito como cualquier resultado observado cuyo límite inferior de confianza del 80% supere el 20%.
También se realizarán evaluaciones para proporcionar una evaluación preliminar de la eficacia. Los objetivos secundarios del estudio incluyen un examen de la eficacia (en términos de tasa de remisiones, supervivencia libre de progresión y persistencia in vivo de las células T). Estos análisis se realizarán usando pacientes tratados con todas las dosis combinadas con el régimen de linfodepleción final (ya sea CY solo o CY/fludarabina), modelando los resultados en función de la dosis. Se usará un modelo de regresión logística para evaluar los resultados binarios (CR y CR/PR). Se usará un modelo de riesgos proporcionales de Cox para evaluar los resultados del tiempo transcurrido hasta el acontecimiento (PFS, OS). No se probarán hipótesis estadísticas formales con respecto a estos criterios de valoración; más bien, las estimaciones y los intervalos de confianza asociados se proporcionarán de manera descriptiva.
Los objetivos secundarios adicionales son evaluar la duración de la persistencia de las células T CAR CD20 T transferidas adoptivamente y la migración de las células T CAR CD20 transferidas adoptivamente. Para evaluar la persistencia de las células T CAR, se estimará el área bajo la curva (AUC) a nivel del paciente y se evaluarán las estadísticas resumidas de las AUC. La migración (si las células T CAR están presentes después del tratamiento), se define como la presencia de células T CAR en el tumor en el día 10-16 y, si corresponde, la MO en el día 28. La asociación entre el AUC y la migración con los resultados clínicos principalmente de naturaleza descriptiva, incluyendo la presentación gráfica.
Para evaluar los objetivos secundarios asociados con la evaluación de las causas biológicas de la resistencia al tratamiento, se realizarán los siguientes análisis. Se usará una prueba t pareada para comparar los perfiles de biomarcadores entre los tumores basales y los tumores posteriores al tratamiento con la transformación adecuada si es necesario. Se usará un modelo de regresión logística para evaluar la asociación entre los valores de los biomarcadores de referencia y la respuesta. Un análisis de referencia entre los pacientes que lograron una RC o una RP al mes, midiendo los tiempos de supervivencia (SLP y SG) desde el tiempo de referencia, usando un modelo de regresión de riesgos proporcionales de Cox para evaluar la asociación de correlatos medidos en el momento de la RC/RP para los pacientes en quien se adquiere una biopsia en ese momento. Los modelos incluirán valores para todos los pacientes/niveles de dosis e incluirán una variable para el nivel de dosis.
El desarrollo de respuestas antitumorales endógenas y la propagación de epítopos también se evaluarán de una manera en gran parte exploratoria. Los datos de cada momento se resumirán y, con datos suficientes, se usará un
Claims (15)
- REIVINDICACIONESi . Polinucleótido aislado que codifica para una proteína de fusión capaz de unirse específicamente a CD20, en el que el polinucleótido:(a) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56;(b) comprende la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47;(c) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:53-56; o(d) consiste en la secuencia de polinucleótido de una cualquiera de SEQ ID NO.:44-47.
- 2. Proteína de fusión codificada por el polinucleótido según la reivindicación 1.
- 3. Proteína de fusión según la reivindicación 2, en la que la proteína de fusión:(a) se compone de una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado;(b) consiste en una proteína de fusión madura, en la que la proteína de fusión madura comprende la secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.: 35-38 con el marcador de transducción tCD19 eliminado; (c) se compone de una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO.:26-29; o(d) consiste en una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO. : 26-29.
- 4. Célula huésped que comprende el polinucleótido según la reivindicación 1 y capaz de expresar la proteína de fusión según la reivindicación 2 o la reivindicación 3.
- 5. Célula huésped según la reivindicación 4, en la que la célula huésped es una célula T o una célula T autóloga de un sujeto.
- 6. Célula huésped según la reivindicación 5, en la que la célula T es una célula T CD8+, una célula T CD4+, o ambas.
- 7. Composición que comprende la célula huésped según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y una molécula de unión específica de CD20.
- 8. Composición según la reivindicación 7, en la que la molécula de unión específica de CD20 es un anticuerpo.
- 9. Composición según la reivindicación 8, en la que el anticuerpo es rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, o cualquier combinación de los mismos.
- 10. Célula huésped según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, para su uso en un método de tratamiento de un sujeto que tiene o se sospecha que tiene un linfoma o una leucemia de células B, tal como linfoma no Hodgkin de células B (LNH) (incluyendo linfoma de Burkitt), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico pequeño (LLP), linfoma difuso de células B grandes, linfoma folicular, linfoma inmunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico de células B precursoras y linfoma de células del manto), leucemia de células pilosas, macroglobulinemia de Waldenstrom, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma de células dendríticas CD37+, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de zona marginal esplénico, linfoma de células B de zona marginal extraganglionar de tejido linfoide asociado a mucosa (TLAM), linfoma de células B de zona marginal ganglionar, linfoma de células B grandes mediastínico (tímico), linfoma de células B grandes intravascular y linfoma de efusión primaria; una enfermedad caracterizada por la producción de autoanticuerpos tal como miopatía inflamatoria idiopática, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, miastenia grave, enfermedad de Graves, diabetes mellitus tipo I, enfermedad por anticuerpos anti-membrana basal glomerular, glomerulonefritis de progresión rápida, enfermedad de Berger (nefropatía por IgA), lupus eritematoso sistémico (LES) enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, neuromielitis óptica, esclerosis múltiple, una enfermedad autoinmunitaria, dermatomiositis, polimiositis o acroglobinemia de Waldenstrom; una enfermedad caracterizada por una estimulación inapropiada de células T asociada con una ruta de células B; o melanoma, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la célula huésped, en la que, opcionalmente:(i) la célula huésped es una célula T o una célula T autóloga para el sujeto, en la que, además, opcionalmente, la célula T es una célula T CD8+, una célula T CD4+, o ambas; y/o(ii) el método reduce el número de células B o trata una enfermedad o un trastorno asociado con la actividad aberrante de células B.
- 11. Vector que comprende el polinucleótido según la reivindicación 1, en el que, opcionalmente, el vector es un vector viral, en el que, además, opcionalmente, el vector viral es un vector lentiviral.
- 12. Polinucleótido aislado según la reivindicación 1, en el que el polinucleótido comprende la secuencia de polinucleótido de SEQ ID NO: 44.
- 13. Proteína de fusión de la reivindicación 2, en la que la proteína de fusión comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 26.
- 14. Célula huésped que comprende el polinucleótido según la reivindicación 12 o que expresa la proteína de fusión según la reivindicación 13, en la que, opcionalmente, la célula huésped es una célula T.
- 15. Célula huésped según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 ó 14, para su uso en un método de tratamiento de:(a) un sujeto que tiene o se sospecha que tiene linfoma no Hodgkin (LNH) y/o leucemia linfocítica crónica (LLC);(b) un sujeto que tiene o se sospecha que tiene un cáncer;(c) un sujeto que tiene o se sospecha que tiene un cáncer asociado con la actividad aberrante de células B; o(d) un sujeto que tiene o se sospecha que tiene un linfoma no Hodgkin (LNH) y/o una leucemia.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662310541P | 2016-03-18 | 2016-03-18 | |
US201662320327P | 2016-04-08 | 2016-04-08 | |
PCT/US2017/023098 WO2017161353A1 (en) | 2016-03-18 | 2017-03-17 | Compositions and methods for cd20 immunotherapy |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2893840T3 true ES2893840T3 (es) | 2022-02-10 |
Family
ID=58448653
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES17714373T Active ES2893840T3 (es) | 2016-03-18 | 2017-03-17 | Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10875927B2 (es) |
EP (2) | EP3939994A3 (es) |
JP (2) | JP7065782B2 (es) |
KR (2) | KR102366611B1 (es) |
CN (1) | CN108884144B (es) |
AU (1) | AU2017235657B2 (es) |
BR (1) | BR112018067977A8 (es) |
CA (1) | CA3015369A1 (es) |
DK (1) | DK3430038T3 (es) |
ES (1) | ES2893840T3 (es) |
IL (1) | IL261316B2 (es) |
MX (1) | MX2018010415A (es) |
WO (1) | WO2017161353A1 (es) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105985444B (zh) * | 2015-02-05 | 2024-02-13 | 博生吉安科细胞技术有限公司 | 一种嵌合抗原受体、以及快速构建嵌合抗原受体的方法及应用 |
CN108395482B (zh) | 2017-02-08 | 2021-02-05 | 西比曼生物科技(香港)有限公司 | 一种靶向cd20抗原嵌合抗原受体的构建及其工程化t细胞的活性鉴定 |
CN111542596A (zh) * | 2017-11-01 | 2020-08-14 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 产生工程化细胞的治疗性组合物的方法 |
US20230158070A1 (en) * | 2018-01-30 | 2023-05-25 | Cellectis | Combination comprising allogeneic immune cells deficient for an antigen present on both t-cells and pathological cells and therapeutic antibody against said antigen |
CN109293781A (zh) * | 2018-09-12 | 2019-02-01 | 中国人民解放军总医院 | 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、cd19-cd20双靶向性的t细胞及其应用 |
WO2020081764A1 (en) * | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Synerk Inc. | Compositions and methods for inhibiting tigit gene expression |
US11793834B2 (en) | 2018-12-12 | 2023-10-24 | Kite Pharma, Inc. | Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use |
GB201906685D0 (en) * | 2019-05-13 | 2019-06-26 | Ultrahuman Six Ltd | Activatable protein constructs and uses thereof |
AU2020291922A1 (en) * | 2019-06-14 | 2022-02-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
WO2021087305A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Precision Biosciences, Inc. | Cd20 chimeric antigen receptors and methods of use for immunotherapy |
CN111944062B (zh) * | 2019-12-09 | 2023-11-07 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种识别Fc片段的嵌合抗原受体及其应用 |
CN115551891A (zh) * | 2020-03-02 | 2022-12-30 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗癌症的嵌合抗原受体及相关方法和组合物 |
US20230190780A1 (en) * | 2020-05-15 | 2023-06-22 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for immunotherapy |
WO2021231959A1 (en) * | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Precision Biosciences, Inc. | Methods for immunotherapy |
CN114774364B (zh) * | 2022-04-26 | 2024-04-26 | 深圳市体内生物医药科技有限公司 | 一种嵌合抗原受体t细胞及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5283173A (en) | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
US5827642A (en) | 1994-08-31 | 1998-10-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes |
US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
US6410319B1 (en) | 1998-10-20 | 2002-06-25 | City Of Hope | CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies |
US7070995B2 (en) | 2001-04-11 | 2006-07-04 | City Of Hope | CE7-specific redirected immune cells |
US7514537B2 (en) | 2001-04-30 | 2009-04-07 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas |
KR20080031001A (ko) | 2005-06-02 | 2008-04-07 | 아스트라제네카 아베 | Cd20에 대한 항체 및 그의 용도 |
US8119772B2 (en) | 2006-09-29 | 2012-02-21 | California Institute Of Technology | MART-1 T cell receptors |
AU2008342956A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-07-09 | Genentech, Inc. | Therapy of rituximab-refractory rheumatoid arthritis patients |
KR101319499B1 (ko) | 2008-02-22 | 2013-10-17 | 엘지디스플레이 주식회사 | 화학적 자기조립 방법을 이용한 나노선 혹은탄소나노튜브의 적층 및 패턴형성 방법과, 이를 적용한액정표시장치의 제조방법 |
EP2331566B1 (en) | 2008-08-26 | 2015-10-07 | City of Hope | Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells |
EP3527585B1 (en) | 2009-11-03 | 2022-02-16 | City of Hope | Truncated epiderimal growth factor receptor (egfrt) for transduced t cell selection |
KR20230133410A (ko) | 2010-12-09 | 2023-09-19 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도 |
BR112013024395B1 (pt) * | 2011-03-23 | 2021-10-26 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Composições adotivas de imunoterapia celular e método para fabricação da dita composição |
CA2833212C (en) | 2011-05-12 | 2020-06-09 | Genentech, Inc. | Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides |
US20140004037A1 (en) | 2012-01-19 | 2014-01-02 | Therapeutic Proteins, Inc. | Stabilization of the anti-cd20 antibody rituximab |
KR102135239B1 (ko) | 2012-08-20 | 2020-07-17 | 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 | 세포 면역요법을 위한 방법 및 조성물 |
SG11201503393SA (en) | 2012-11-02 | 2015-06-29 | Tg Therapeutics Inc | Combination of anti-cd20 antibody and pi3 kinase selective inhibitor |
TWI654206B (zh) | 2013-03-16 | 2019-03-21 | 諾華公司 | 使用人類化抗-cd19嵌合抗原受體治療癌症 |
CN105143269B (zh) * | 2013-09-25 | 2020-05-22 | 北京安保康生物医药科技有限公司 | 抗cd20的全人源单克隆抗体及其应用 |
DK3083671T3 (da) | 2013-12-20 | 2020-12-07 | Hutchinson Fred Cancer Res | Mærkede kimære effektormolekyler og receptorer deraf |
CN112481283A (zh) * | 2014-07-21 | 2021-03-12 | 诺华股份有限公司 | 使用cd33嵌合抗原受体治疗癌症 |
CN105330750B (zh) * | 2015-11-20 | 2019-02-01 | 上海细胞治疗研究院 | 一种快速中止car-t细胞杀伤作用的分子刹车及其用途 |
-
2017
- 2017-03-17 DK DK17714373.2T patent/DK3430038T3/da active
- 2017-03-17 US US16/086,290 patent/US10875927B2/en active Active
- 2017-03-17 MX MX2018010415A patent/MX2018010415A/es unknown
- 2017-03-17 CN CN201780018083.9A patent/CN108884144B/zh active Active
- 2017-03-17 EP EP21179474.8A patent/EP3939994A3/en active Pending
- 2017-03-17 WO PCT/US2017/023098 patent/WO2017161353A1/en active Application Filing
- 2017-03-17 EP EP17714373.2A patent/EP3430038B1/en active Active
- 2017-03-17 CA CA3015369A patent/CA3015369A1/en active Pending
- 2017-03-17 KR KR1020187026926A patent/KR102366611B1/ko active IP Right Grant
- 2017-03-17 ES ES17714373T patent/ES2893840T3/es active Active
- 2017-03-17 KR KR1020227005550A patent/KR102499191B1/ko active IP Right Grant
- 2017-03-17 IL IL261316A patent/IL261316B2/en unknown
- 2017-03-17 JP JP2018548420A patent/JP7065782B2/ja active Active
- 2017-03-17 BR BR112018067977A patent/BR112018067977A8/pt unknown
- 2017-03-17 AU AU2017235657A patent/AU2017235657B2/en active Active
-
2020
- 2020-11-24 US US17/103,762 patent/US11834511B2/en active Active
-
2021
- 2021-10-22 JP JP2021172976A patent/JP7397840B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2022002550A (ja) | 2022-01-11 |
RU2018134300A (ru) | 2020-04-20 |
WO2017161353A1 (en) | 2017-09-21 |
JP7397840B2 (ja) | 2023-12-13 |
JP7065782B2 (ja) | 2022-05-12 |
US10875927B2 (en) | 2020-12-29 |
MX2018010415A (es) | 2018-11-29 |
EP3430038A1 (en) | 2019-01-23 |
EP3939994A2 (en) | 2022-01-19 |
CA3015369A1 (en) | 2017-09-21 |
KR20220030307A (ko) | 2022-03-10 |
US11834511B2 (en) | 2023-12-05 |
IL261316B1 (en) | 2024-01-01 |
CN108884144B (zh) | 2023-03-14 |
IL261316B2 (en) | 2024-05-01 |
IL261316A (en) | 2018-10-31 |
AU2017235657A1 (en) | 2018-09-06 |
BR112018067977A8 (pt) | 2023-04-11 |
EP3430038B1 (en) | 2021-06-16 |
RU2018134300A3 (es) | 2020-07-15 |
AU2017235657B2 (en) | 2022-07-21 |
DK3430038T3 (da) | 2021-09-13 |
BR112018067977A2 (pt) | 2019-02-05 |
CN108884144A (zh) | 2018-11-23 |
EP3939994A3 (en) | 2022-04-27 |
US20210147569A1 (en) | 2021-05-20 |
JP2019515652A (ja) | 2019-06-13 |
KR102499191B1 (ko) | 2023-02-13 |
US20190106501A1 (en) | 2019-04-11 |
KR20180127348A (ko) | 2018-11-28 |
KR102366611B1 (ko) | 2022-02-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2893840T3 (es) | Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20 | |
ES2949364T3 (es) | Terapias de combinación para el tratamiento de cánceres y trastornos autoinmunitarios relacionados con BCMA | |
ES2923397T3 (es) | Tratamiento del cáncer utilizando un receptor de antígeno quimérico anti-CD19 humanizado | |
ES2891332T3 (es) | Direccionamiento a células citotóxicas con receptores quiméricos para la inmunoterapia adoptiva | |
US20220135678A1 (en) | Methods and compositions to improve the safety and efficacy of cellular therapies | |
ES2837856T3 (es) | Moléculas efectoras quiméricas etiquetadas y receptores de las mismas | |
US20210137977A1 (en) | Diverse antigen binding domains, novel platforms and other enhancements for cellular therapy | |
US20190151365A1 (en) | Combination therapies of chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors | |
US20200113940A1 (en) | Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment | |
AU2017306267A1 (en) | Treatment of cancer using a chimeric antigen receptor in combination with an inhibitor of a pro-M2 macrophage molecule | |
US20200262894A1 (en) | Strep-tag specific binding proteins and uses thereof | |
RU2782699C2 (ru) | Композиции и способы иммунотерапии против cd20 |