ES2887582T3

ES2887582T3 - Cámara de recolección de óvulos de FIV

Info

Publication number: ES2887582T3
Application number: ES18213148T
Authority: ES
Inventors: Robbie Hodgson; Alison Murdoch
Original assignee: LABMAN AUTOMATION Ltd; University of Newcastle, The; Newcastle University of Upon Tyne
Current assignee: LABMAN AUTOMATION Ltd; University of Newcastle, The; Newcastle University of Upon Tyne
Priority date: 2013-05-31
Filing date: 2014-05-30
Publication date: 2021-12-23
Anticipated expiration: 2034-05-30
Also published as: HK1221631A1; ES2725607T3; EP3498221B1; CN105392445A; CA2912287A1; RU2687822C2; NZ714091A; ZA201508676B; BR112015029695B1; BR112015029695A2; US10314616B2; US20160113680A1; WO2014191757A1; EP3498221A1; JP6611386B2; RU2015150387A; AU2014272888A1; JP2016526949A; KR102098101B1; DK3498221T3

Abstract

Una cámara (1) de óvulos que comprende; un recipiente que se puede hacer hermético, que comprende al menos una pared lateral, una pared (2) superior plana y una pared (3) inferior plana, siendo transparente al menos una porción de la pared superior y al menos una porción de la pared inferior es permeable a la luz; un filtro (4) con un tamaño de poro de más de 10 micrómetros, apropiado para la recolección de óvulos, y que está configurado para separar el recipiente en una primera cámara interna de recolección de óvulos y una segunda cámara interna, en el que en uso, la cámara de óvulos puede ser sostenida en una orientación de recolección donde el filtro está en un plano horizontal y una orientación de inspección donde el filtro está en un plano vertical, dicha cámara de óvulos comprende además una primera entrada (7) que se puede sellar y que se coloca en una pared superior o una pared lateral asociada con dicha primera cámara interna de recolección de óvulos, una primera salida (9) que puede sellarse y que está colocada en una pared lateral o una pared superior asociada con dicha segunda cámara interna, en la que dicho filtro está dispuesto dentro del recipiente entre dicha primera entrada y dicha primera salida, y en el que el filtro se extiende perpendicular a la pared inferior o en un ángulo de entre 45 ° y 90 ° grados desde la pared inferior.

Description

DESCRIPCIÓN

Cámara de recolección de óvulos de FIV

La presente invención se refiere a cámaras de óvulos para uso en la recolección, inspección y selección de óvulos para procedimientos de fertilización in vitro (FIV) y un sistema de bomba de fluidos de las mismas. La cámara de óvulos, en uso, proporciona un sistema efectivamente cerrado y lleno de líquido que minimiza los cambios ambientales a los que está expuesto un óvulo cosechado, maximizando así la viabilidad. El sistema de bomba de fluido proporciona un sistema semiautomático único y ventajoso que permite una recuperación eficiente y segura de los óvulos.

La fertilización in vitro (FIV) es un proceso en el que un óvulo o un gameto femenino se fertiliza fuera del cuerpo o fuera del organismo o animal en el que se encuentra naturalmente. La técnica se utiliza para el tratamiento de la fertilidad humana y las variaciones se utilizan para otros animales, ya sea con fines veterinarios o con otros fines comerciales. En los seres humanos, la FIV se utiliza principalmente como tratamiento para la infertilidad, pero también se lleva a cabo en parejas que portan una mutación genética, pero que no son infértiles (por ejemplo, diagnóstico genético preimplantacional). La FIV implica extraer uno o más óvulos (óvulos) de los ovarios de una mujer y luego combinarlos con el esperma en un líquido apropiado dentro de un laboratorio para permitir que se produzca la fertilización de los óvulos. Luego, uno o más de los óvulos fertilizados se transfieren nuevamente al útero de la mujer. Es típico que el proceso incluya una serie de pasos adicionales para tratar de maximizar las posibilidades de un embarazo exitoso, por ejemplo, hiperestimulación ovárica y técnicas de cultivo y selección específicas. Sin embargo, se aprecia que todavía existen aspectos del proceso que reducen las posibilidades de que ocurra un embarazo exitoso, algunos de los cuales ocurren durante la recolección de los óvulos. En particular, los expertos en la técnica entienden que exponer los óvulos a cambios ambientales o fisiológicos, como cambios de temperatura (Wang et al., 2001), O2 disuelto y pH (Wilding et al 1998; Daya et al., 1988; Cockburn et al 1973, o la exposición a compuestos orgánicos volátiles (COV) (Legro et al., 2010) puede ser perjudicial para la viabilidad del óvulo.

El número de pacientes que se someten a un tratamiento de FIV en el Reino Unido ha aumentado aproximadamente un 6.5 % cada año durante los últimos 5 años con 57,652 tratamientos realizados en 2010. A pesar del aumento de la experiencia, el número de bebés nacidos por tratamiento sigue siendo relativamente bajo con solo 25.2 %. La evidencia sugiere que esto se debe principalmente a la calidad de los embriones; generalmente considerado como un problema humano inherente e insuperable. Sin embargo, nuestra experiencia en el desarrollo y la utilización de un sistema controlado cerrado para fertilizar y cultivar embriones indica que se puede mejorar el número de bebés nacidos (aumento de la tasa de implantación del 19.8 % al 32.8 %) (Hyslop et al., 2012).

La calidad del óvulo es el principal determinante del resultado (Scott M. Nelson, Debbie A. Lawlor Predicting Live Birth, Preterm Delivery, and Low Birth Weight in Infants Born from In Vitro Fertilisation: A Prospective Study of 144,018 Treatment Cycles). El potencial de desarrollo del óvulo puede verse dañado muy fácilmente por el entorno de cultivo, por ejemplo, temperatura, pH y factores tóxicos en el aire. Los procesos actuales de FIV no proporcionan condiciones ambientales óptimas ya que exponen el óvulo/embrión al ambiente externo. Sin embargo, han sido aceptados en todo el mundo como la única opción práctica.

Las técnicas del estado de la técnica para obtener óvulos humanos durante el proceso de FIV implican la aspiración del líquido en los folículos ováricos mediante una aguja que atraviesa la parte superior de la vagina bajo guía ecográfica. En la Figura 3 se muestra un diagrama de este aparato de recolección de la técnica anterior. El complejo ovocito-cúmulo se extrae de la pared del folículo cuando se aspira el líquido a través de la aguja. La aspiración se controla mediante succión mediante un pedal. La aguja se conecta mediante un tubo a un tapón (que se muestra en la Figura 3), que se puede insertar en la parte superior de un tubo de ensayo. Durante un procedimiento de extracción de óvulos, es típico que se recolecten hasta 10 tubos de ensayo de líquido folicular. Cuando un tubo de ensayo está lleno, se quita el tapón y se transfiere al siguiente tubo de ensayo vacío, y el tubo de ensayo lleno sella con una tapa y se coloca en un bloque caliente. El procedimiento de recolección se realiza típicamente en el quirófano con el paciente bajo sedación. El líquido folicular que contiene los óvulos pasa del médico al embriólogo en el laboratorio de FIV (a menudo se transfiere a través de una escotilla cerrada) donde un embriólogo procesa los óvulos. En el laboratorio de FIV, esto implica transferir los tubos a una campana de flujo laminar o una campana de Clase II o un aislador. Las tapas se retiran del tubo de ensayo y el contenido se vierte en un recipiente de cultivo que se coloca en una platina de microscopio calentada. Luego, el plato se agita/hace girar y se observa a través del microscopio para identificar los óvulos. Los óvulos se recogen con una pipeta, se colocan en un medio para “enjuagarlos” y luego se colocan en un recipiente de cultivo que contiene medio de cultivo en aceite. Los recipientes de cultivo con los óvulos se mantienen en incubadoras especializadas de FIV bajo condiciones ambientales cuidadosamente controladas.

Existen varias limitaciones en el proceso actual para la recuperación de óvulos. En primer lugar, la pérdida de calor se produce cuando los óvulos se retiran del entorno a 37 °C del paciente, viajan a lo largo de la aguja y el tubo y se recogen en el tubo de ensayo. El bloque caliente en el que se almacenan los tubos de ensayo durante el procedimiento no alcanza una temperatura constante. Como se utilizan múltiples tubos de ensayo y el tapón simplemente se transfiere de un tubo de ensayo a otro durante el procedimiento, el aire ingresa a los tubos de ensayo. Como se usa el mismo tapón, esto también puede provocar contaminación cruzada y pérdida de calor (Figura 5). Se produce una mayor pérdida de calor cuando el embriólogo procesa los óvulos, es decir, cuando el líquido folicular se transfiere del tubo de ensayo al recipiente de cultivo, cuando se pasa la placa de cultivo para localizar los óvulos, durante el tiempo que tarda el embriólogo en identificar los óvulos, y durante el proceso de transferencia de los óvulos a un pocillo de cultivo bajo aceite.

La caída de temperatura desde el folículo hasta la placa de cultivo es de 2 °C a 3 °C. Esto se debe en parte al enfriamiento significativo relacionado con la evaporación (Figura 6). Es bien sabido que la temperatura es importante para mantener la capacidad de un óvulo de dividirse posteriormente, es decir, para la viabilidad del óvulo y para ser fertilizado.

En segundo lugar, como la vesícula de recolección es un tubo de ensayo, el líquido folicular se asienta en el tubo de ensayo que está cubierto con aire. Cuando un tubo de ensayo está lleno, se quita el tapón, exponiendo así el líquido folicular al aire e introduciendo un riesgo de contaminación, exposición a compuestos orgánicos volátiles y fluctuaciones en el pH a medida que el CO2 se equilibra con el aire atmosférico.

En tercer lugar, la identificación del óvulo por parte del embriólogo a menudo se ve obstaculizada por la presencia de células sanguíneas y coágulos de sangre en el líquido folicular. Esto puede aumentar el tiempo que los óvulos están expuestos al entorno ambiental. También puede atrapar el óvulo en un coágulo de sangre para que no se pueda identificar.

Finalmente, el procedimiento actual impone limitaciones a la proximidad física y la distancia en el tiempo del trabajo del médico y del embriólogo. Las tareas que realiza el médico y el embriólogo son independientes y secuenciales. Se lleva a una mujer al quirófano, se comprueba su identidad con el embriólogo y se realiza el procedimiento. El embriólogo tomará un tiempo variable para procesar el líquido folicular recolectado y esto generalmente toma más tiempo que el procedimiento quirúrgico. Para asegurarse de que no haya una identificación errónea de los óvulos, no se puede llevar a la siguiente mujer al quirófano hasta que se haya revisado todo el líquido folicular de la mujer anterior y se hayan colocado los óvulos en la incubadora. Así, actualmente existe un retraso de tiempo entre pacientes, ya que a pesar de que el tiempo operatorio es < 10 minutos, el retraso entre pacientes es de 30 minutos, comprometiendo así la eficiencia del personal.

El líquido folicular debe transferirse inmediatamente al laboratorio, lo que requiere vínculos físicos estrechos entre las instalaciones, lo que restringe el diseño y la flexibilidad de las instalaciones. Para reducir los riesgos para la viabilidad del óvulo descritos anteriormente, el embriólogo debe estar disponible para aislar los óvulos inmediatamente después del procedimiento para recuperar los óvulos, y el laboratorio del embriólogo a menudo se encuentra adyacente o contiguo a la clínica. Es ventajoso que exista un sistema que permita almacenar los óvulos recolectados hasta varias horas después de la recolección sin compromiso, de manera que el trabajo del embriólogo pueda realizarse independientemente del horario de la clínica.

El campo de la FIV está regulado por un organismo, cuyo Código de Práctica requiere que las clínicas tengan un sistema de testimonio eficaz para identificar y rastrear el movimiento de gametos y embriones durante los procesos clínicos/de laboratorio y para prevenir desajustes. A pesar de que el testimonio electrónico se ha convertido en una rutina en varios centros de fertilidad, rara vez se utiliza en el quirófano debido a que se deben utilizar varios tubos de ensayo por paciente. La cámara de óvulos permite etiquetar una placa por paciente y, por lo tanto, hace que la testificación electrónica sea más factible en el quirófano, lo que reduce el riesgo de identificación errónea de las muestras. El documento US5505716 divulga un recolector de embriones.

En algunos entornos, es ventajoso poder separar físicamente las ubicaciones en las que se lleva a cabo la parte clínica del trabajo y la parte del trabajo del embriólogo. Un ejemplo sería si se requiere un procedimiento anestésico más complejo para la mujer que necesitaría estar en un quirófano que se encuentra a distancia del laboratorio de embriología. Se realiza de forma rutinaria en la práctica de la 'FIV de transporte'. En estas circunstancias, los óvulos pueden permanecer en los tubos de ensayo durante más de una hora. Sería ventajoso un sistema que permita el almacenamiento de óvulos en un entorno que no comprometa el potencial de desarrollo.

La presente invención tiene como objetivo obviar o mitigar una o más de las limitaciones o problemas asociados con la técnica anterior.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona una cámara de óvulos que comprende; un recipiente que puede hacerse hermético al aire, que comprende al menos una pared lateral, una pared superior plana y una pared inferior plana, al menos una porción de la pared es transparente y al menos una porción de la pared inferior es permeable a la luz; una primera entrada que se puede sellar; una primera salida que se puede sellar; un filtro con un tamaño de poro de más de 10 micrómetros dispuesto dentro del recipiente entre la primera entrada y la primera salida, dicha cámara de óvulos se caracteriza porque el filtro se extiende perpendicular a la pared inferior o en un ángulo entre 45 ° y 90 ° grados desde la pared inferior y está configurado para separar el recipiente en una primera cámara de recolección de óvulos interna y una segunda cámara interna, en la que, en uso, la cámara de óvulos se puede mantener en una orientación de recolección donde el filtro está en un plano horizontal y una orientación de inspección donde el filtro está en un plano vertical.

La entrada y la salida se pueden proporcionar como puertos sellables.

La entrada y la salida se pueden sellar en puertos sellables, o se pueden sellar antes o después de la cámara, por ejemplo, mediante el sellado de la tubería adjunta. El sellado de los tubos puede ser, por ejemplo, mediante un tubo de sellado térmico que se une a la entrada o salida.

En una realización preferida, los puertos sellables son autosellantes.

En una realización alternativa, el recipiente se hace hermético al aire ocluyendo los tubos unidos al recipiente. La oclusión se puede lograr insertando un tapón, o pellizcando mecánicamente el tubo (por ejemplo, usando clips de tubo) o sellando con calor el tubo como se indicó anteriormente.

Ventajosamente, dado que la cámara de óvulos por sí sola es una sola unidad cerrada, esto permite que la cámara se llene de fluido por adelantado, por ejemplo, medio tamponado o solución salina y el proceso de recolección de óvulos se llevará a cabo en un ambiente sellado. Esto minimiza los cambios en las condiciones fisiológicas que pueden afectar la viabilidad de un óvulo. En particular, los óvulos permanecen en un entorno fluido cerrado en todo momento. Esto asegura la estabilidad de las concentraciones de gas, particularmente CO2 y O2, lo que permite mantener un pH estable. El fluido encerrado también minimiza el riesgo de contaminación y/o exposición a compuestos orgánicos volátiles (COV). Esto también permite que el proceso de recolección de óvulos sea continuo entre los folículos y cada ovario, eliminando la necesidad de utilizar múltiples cámaras de recolección por procedimiento. Si es apropiado, todo el líquido folicular se puede reemplazar con un medio tamponado o una alternativa apropiada. Los óvulos pueden ser visibles para el embriólogo bajo el microscopio a través de la cámara para su identificación inicial antes de que se abra la cámara y se transfieran los óvulos al medio de cultivo. El sistema cerrado también permite que los óvulos permanezcan en condiciones fisiológicas mientras se capacita al personal en los procedimientos de recolección de óvulos.

Opcionalmente, la cámara de óvulos está provista de un tubo desmontable unido a uno o más de los puertos sellables.

Opcionalmente, el tubo desmontable que conecta la aguja y la cámara, y el depósito y la cámara están aislados para minimizar la pérdida de calor.

Si los tubos están unidos a uno o más de los puertos sellables, los puertos estarán abiertos para permitir la entrada y salida de la cámara de óvulos. Una vez que se retiran los tubos, los puertos preferiblemente están cerrados o se cierran para mantener una cámara hermética sellada.

Preferiblemente, el filtro es plano.

Preferiblemente, el filtro está dispuesto entre la pared superior y la pared inferior.

Preferiblemente, el filtro se extiende perpendicular a la pared inferior.

Opcionalmente, el filtro se extiende en un ángulo de entre 25 ° y 90 ° desde la pared inferior. Alternativamente, el filtro se extiende en un ángulo entre 45 ° y 90 ° desde la pared inferior.

Preferiblemente, el filtro se extiende en un ángulo de 80 ° desde la pared.

Al proporcionar un filtro plano que se extiende entre las paredes superior e inferior de esta manera, esto asegura que cuando se recolectan los óvulos, la cámara de óvulos se puede mantener en una “orientación de recolección” donde el filtro está en un plano sustancialmente horizontal y las paredes superior e inferior se mantienen en un plano sustancialmente vertical. Esto permite que la gravedad ayude a extraer sangre y otros desechos fluidos a través del filtro hacia la segunda cámara mientras retiene el óvulo en la primera cámara. La cámara puede girarse entonces en un ángulo de sustancialmente 90 ° con respecto a la “orientación de inspección” donde el filtro está ahora en un plano sustancialmente vertical y las paredes superior e inferior están en planos sustancialmente horizontales, formando esencialmente una olla con tapa sellada. En esta “orientación de inspección”, la gravedad actuará de nuevo sobre los óvulos de manera que caigan del filtro hacia la superficie interior de la pared inferior.

Preferiblemente, el filtro tiene un tamaño de poro lo suficientemente pequeño como para que los óvulos humanos no puedan atravesarlo.

Preferiblemente, el filtro tiene un tamaño de poro lo suficientemente grande como para que puedan pasar las células sanguíneas.

Esto incluirá un filtro de entre 1 y 18 cm2 con un intervalo preferido de entre 4 y 10 cm2. El filtro tendrá un tamaño de poro de entre 20 y 100 pm con un intervalo preferido de entre 40 y 80 pm, para permitir que pasen las células sanguíneas, pero no los ovocitos. En realizaciones preferidas, el filtro tendrá un tamaño de poro entre 40 y 60 pm2 o menos. El filtro estará hecho de un material no tóxico, preferiblemente nailon y se probará usando una prueba de toxicidad de esperma y/o un ensayo de embriones.

En una realización, el filtro forma un ángulo con la base (modo de visualización). En esta realización, el filtro puede tener un reborde en el extremo superior para evitar que los óvulos se peguen.

En una realización, el filtro es plano. El filtro plano anima a los óvulos a moverse a la base (en el modo de visualización). El filtro plano también evita que los óvulos y los coágulos de sangre se acumulen en el punto más bajo del filtro en ángulo.

El filtro puede tener un reborde en el extremo superior para evitar que los óvulos se peguen.

Preferiblemente, la pared inferior es sustancialmente plana.

Preferiblemente, la pared superior es sustancialmente plana.

Opcionalmente, la pared inferior es completamente translúcida.

Opcionalmente, la pared inferior es completamente transparente.

Preferiblemente, la pared superiores completamente transparente.

Ventajosamente, una pared superior transparente y una pared inferior translúcida o transparente significa que la cámara de óvulos puede usarse como una unidad sellada en un microscopio y un embriólogo no necesita abrir el recipiente y alterar el equilibrio fisiológico en el mismo para examinar el contenido.

En una realización, la primera entrada se coloca en una pared lateral asociada con la primera cámara interna.

Alternativamente, la primera entrada podría colocarse en la pared superior (o tapa) asociada con la primera cámara interna.

Preferiblemente, la primera entrada se coloca de modo que esté en la parte superior de la cámara de óvulos cuando dicha cámara está en la “orientación de recolección”.

En una realización, la primera salida se coloca en una pared lateral asociada con la segunda cámara interna.

Preferiblemente, la primera salida se coloca de manera que esté más abajo en la cámara de óvulos cuando dicha cámara está en la “orientación de recolección”.

Preferiblemente, las paredes laterales pueden correr paralelas en una dirección desde la primera cámara interna hasta la segunda cámara interna. Alternativamente, las paredes laterales pueden estrecharse ambas en la dirección desde la primera cámara interna hasta la segunda cámara interna.

Preferiblemente, donde la pared inferior se encuentra con la pared lateral en la primera cámara interna, hay una pendiente.

Opcionalmente, la pendiente es una pendiente radial.

Opcionalmente, la cámara de óvulos comprende además un sensor de aire adaptado para detectar si se aspira aire a la primera cámara interna.

Cabe señalar que también es posible detectar visualmente aire en la cámara.

Preferiblemente, la cámara de óvulos comprende además un puerto de salida de aire.

Preferiblemente, el puerto de salida de aire está posicionado de manera que esté ubicado hacia la parte más superior de la cámara de óvulos cuando dicha cámara está en la “orientación de recolección”.

Es posible que se pueda aspirar aire al interior de la primera cámara interna durante la recolección de óvulos. Ventajosamente, esto debería ser visible durante el procedimiento de recolección en la 'orientación de recolección'. Ventajosamente, esto se puede detectar mediante un sensor de aire o se puede determinar visualmente. El aire recolectado se puede eliminar a través del puerto de salida de aire.

Opcionalmente, la pared inferior de la cámara superior puede estar provista de marcas visuales. Preferiblemente, las marcas visuales son una cuadrícula.

La ventaja de proporcionar un marcador visual en la pared inferior es que, cuando los óvulos se encuentran en la pared inferior durante la inspección; esto puede hacer que sea más fácil y rápido para un embriólogo identificar los óvulos antes de la transferencia sin necesidad de quitar la tapa o abrir la cámara de óvulos sellada. La pared inferior será idealmente de un grosor similar al de los recipientes de cultivo de FIV (entre 0.1 y 3 mm) que permitirá al embriólogo transferir ovocitos a otro recipiente de cultivo sin tener que cambiar el foco del microscopio.

Opcionalmente, se coloca un dispositivo de dirección de flujo (o dispositivo de restricción de flujo) en la cámara superior.

Una función de este dispositivo es reducir la turbulencia del fluido cuando entra en la cámara. Esto es para reducir el estrés físico de los óvulos y estimular el movimiento directo de las células sanguíneas a la cámara inferior. Una función de este dispositivo es también reducir la presión del fluido en el filtro. Esto reduce el riesgo de que el óvulo quede atrapado en el filtro. Una función de este dispositivo es también reducir el volumen de fluido que podría ser necesario para eliminar todas las células sanguíneas de la cámara. Una función es reducir el volumen total de líquido en la cámara de modo que, cuando el embriólogo extraiga la pared superior, el nivel de la superficie del fluido esté por debajo del nivel de la pared lateral (en 'orientación microscópica'). Una función es actuar como un punto de recolección de gotas de fluido cuando se levanta la tapa para que caigan de nuevo a la cámara. Una función es reducir el riesgo de que los óvulos vuelvan a ser succionados hacia el puerto de salida de aire.

Preferiblemente, el dispositivo de dirección de flujo es un deflector. Este deflector se fija preferiblemente a la pared superior. Lo más preferiblemente, el deflector es integral a la pared superior y sobresale hacia abajo desde la tapa (superficie inferior de la pared superior) hacia la cámara en la configuración de visualización. Alternativamente, podría estar unido o integrado a la pared inferior o las paredes laterales, o cualquier combinación. Preferiblemente se retira con la pared superior cuando se abre la cámara para retirar los óvulos.

Preferiblemente, el deflector se coloca entre el puerto de entrada y el filtro.

Opcionalmente, el deflector es lineal y está en posición horizontal en la “orientación de recolección”. Preferiblemente, está a 90-95 ° de la parte adjunta de la cámara. Alternativamente, el deflector no está en la posición horizontal en la 'orientación de recolección'.

Preferiblemente, el deflector tiene forma de “V” de manera que la parte inferior de la V es la más baja en la orientación de recolección.

Preferiblemente, hay un espacio de aproximadamente 1-5 mm entre el deflector y la pared inferior.

Preferiblemente, hay un espacio de 0.5-3 mm entre cada extremo del deflector lineal y las paredes laterales.

Ventajosamente, el deflector lineal puede tener entre 1 mm y 8 mm de ancho. Preferiblemente, el deflector lineal puede tener 5 mm de ancho.

Preferiblemente, se coloca cerca del puerto de entrada en la parte superior de la cámara en “orientación de recolección”.

Alternativamente, se coloca en la parte inferior de la cámara superior en la “orientación de recolección”.

El deflector puede estar curvado o en ángulo.

Una opción alternativa para reducir el caudal cuando el fluido entra en la cámara es una variación (aumento) en el diámetro de la tubería antes de que entre en la cámara. Esto podría ser antes o después del puerto de entrada o estar integrado en la abertura del puerto. Una alternativa adicional sería aumentar la distancia entre la entrada y el deflector, sin embargo, esto es algo menos preferible ya que podría resultar en la necesidad de más reactivos.

El deflector estará hecho de un material no tóxico, preferiblemente poliestireno o vidrio e idealmente no causará una obstrucción importante de los óvulos mientras se observa bajo el microscopio.

La presencia de un deflector reduce el volumen de fluido necesario para eliminar las células sanguíneas de la cavidad central de > 200 ml a menos de 60 ml.

Preferiblemente, todas las esquinas donde se unen dos planos internos tendrán un radio > 0.05 mm y < 10 mm. Esto es para evitar que los óvulos y otros fluidos foliculares se acumulen en las esquinas de 90 grados.

Para que el operador pueda recuperar un óvulo, el recipiente necesita una tapa o un punto de acceso que se pueda quitar.

Una opción es tener una tapa del tipo de rosca que se pueda quitar.

Otra opción es tener una tapa de ajuste a presión por fricción. Otra opción es tener una tapa de ajuste de ubicación que se empuja mecánicamente sobre una junta y se mantiene en su lugar, comprimiendo la junta para hacer un sello. Otra opción es tener una tapa termosellable. Esto se puede combinar con la tapa de rosca o la tapa de ajuste por fricción.

Los bordes redondeados en los puntos de conexión de la tapa y la cámara aseguran que los óvulos no queden atrapados en la sombra de los puntos de conexión (es decir, los ángulos rectos tienden a ser un problema).

Ventajosamente, la tapa puede tener un grosor de entre 2 mm y 10 mm.

La tapa puede tener un reborde para cubrir el 5 - 25 % superior del filtro para evitar que los óvulos queden atrapados en esta área del filtro.

Preferiblemente, el recipiente tendrá medios visuales o mecánicos para ver si una unidad ha sido manipulada, utilizada o abierta.

Opcionalmente, esta sería una etiqueta adhesiva que forma un puente entre las partes de la unidad que se pueden separar. La etiqueta se rompería al comenzar a quitar la tapa.

Opcionalmente, podría ser una etiqueta que se presiona con calor sobre la cámara.

Alternativamente, puede ser una sección frangible que sirva de puente entre las partes de la unidad que se pueden separar.

Opcionalmente, se puede proporcionar una herramienta única para abrir la tapa. La herramienta única permite quitar la tapa con el menor riesgo de derrame.

Preferiblemente, cualquier puerto opcional requerido para eliminar el aire atrapado del recipiente incluirá un filtro con un tamaño de poro de entre 20 y 100 pm. Esto es para permitir que el aire y las células sanguíneas salgan de la cámara, pero no los óvulos.

Ventajosamente, un filtro cubre el puerto de salida en el lado interior de la cámara.

Preferiblemente, el filtro estará en la cara más interna donde la abertura del puerto se encuentra con la pared de la cámara. Opcionalmente, el filtro puede volver a colocarse en línea con la salida del filtro. Ventajosamente, los recipientes pueden apilarse para facilitar su almacenamiento.

De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un sistema de recolección de óvulos que comprende la cámara de óvulos del primer aspecto y una estación de bombeo; dicha cámara de óvulos conectada a través del primer puerto de entrada a un primer tubo y aguja y además conectada a un segundo tubo a través del puerto de salida; dicha estación de bombeo comprende una primera bomba de cebado asociada con un depósito de líquido estéril y el primer tubo y una segunda bomba de aspiración asociada con el segundo tubo y adaptada para extraer fluido a través de la aguja, a través de la cámara de óvulos al tubo de salida.

Preferiblemente, el segundo tubo está asociado con un depósito de desechos.

Preferiblemente, la bomba de cebado es una bomba peristáltica.

Lo más preferiblemente, tanto la bomba de cebado como las bombas de aspiración son bombas peristálticas.

Opcionalmente, la bomba de aspiración podría ser una bomba de vacío.

Preferiblemente, la cámara de óvulos se recibe dentro de una carcasa calentada.

Lo más preferiblemente, al menos parte de la carcasa calentado permite ver la cámara de óvulos.

Lo más preferiblemente, la carcasa calentada está adaptada para mantener la cámara de óvulos en la “orientación de recolección”.

De acuerdo con un tercer aspecto de la presente invención, se proporciona un método para recolectar óvulos o gametos femeninos de un animal, usando la cámara de recolección de óvulos del primer aspecto que comprende las etapas de;

obtener la cámara de óvulos con un primer tubo conectado a la cámara de óvulos a través del primer puerto de entrada, estando asociado el primer tubo con una aguja y un segundo tubo conectado a través del puerto de salida;

cebar la cámara de óvulos llenando la cámara de óvulos, el primer tubo, el segundo tubo y la aguja con un líquido;

aspirar líquido folicular a través de la aguja en la cámara de óvulos, de modo que el líquido se extraiga a través del filtro dispuesto dentro de la cámara de óvulos, reteniendo así los óvulos en la primera cámara interna de la cámara de óvulos.

De acuerdo con un cuarto aspecto de la presente invención, se proporciona un sistema de bomba de fluido para la recolección de óvulos por FIV, que comprende:

una primera bomba de fluido que tiene un primer puerto de entrada y un primer puerto de salida, dicho primer puerto de entrada está acoplado operativamente a un primer depósito a través de una primera conexión de fluido, dicho primer puerto de salida está acoplado operativamente a un puerto de extracción a través de una segunda conexión de fluido y a un segundo depósito a través de una tercera conexión de fluido, en el que dicho puerto de extracción y dicho segundo depósito están conectados a través de una cuarta conexión de fluido;

una segunda bomba de fluido que tiene un segundo puerto de entrada y un segundo puerto de salida, dicho segundo puerto de salida está acoplado operativamente a un tercer depósito a través de una quinta conexión de fluido, y dicho segundo puerto de entrada está acoplado operativamente a dicho segundo depósito a través de una sexta conexión de fluido;

una pluralidad de válvulas selectoras adaptadas para establecer comunicación fluida selectiva entre una cualquiera de dicha primera bomba de fluido, dicho puerto de extracción, dicho primer depósito, dicho segundo depósito, dicho tercer depósito y dicha segunda bomba de fluido, y

un controlador adaptado para accionar selectivamente una cualquiera de dicha pluralidad de válvulas selectoras.

Esto proporciona la ventaja de que el sistema de bomba de fluido puede cebarse por completo, es decir, llenarse de fluido, purgarse, ventilarse (extracción de aire) y operarse para recoger, por ejemplo, óvulo(s) de forma totalmente automática, controlada por un controlador programado, o al menos semiautomáticamente activando manualmente un modo de funcionamiento requerido en el controlador. Proporcionar un procedimiento de recolección de óvulos muy mejorado, eficiente y altamente repetitivo que minimiza los riesgos de dañar los óvulos recolectados durante la extracción.

Preferiblemente, dicha primera bomba de fluido y dicha segunda bomba de fluido pueden ser bombas peristálticas.

Ventajosamente, una primera válvula selectora y una segunda válvula selectora pueden estar acopladas operativamente dentro de dicha segunda conexión de fluido, dicha primera válvula selectora y una tercera válvula selectora pueden estar acopladas operativamente dentro de dicha tercera conexión de fluido, dicha segunda válvula selectora y dicha tercera válvula selectora puede acoplarse operativamente dentro de dicha cuarta conexión de fluido, y al menos una cuarta válvula selectora puede acoplarse operativamente dentro de dicha sexta conexión de fluido.

Incluso más ventajosamente, dicho segundo puerto de salida puede estar acoplado operativamente a dicho segundo depósito a través de una séptima conexión de fluido, en paralelo a dicha sexta conexión de fluido.

Preferiblemente, una quinta válvula selectora puede acoplarse operativamente dentro de dicha séptima conexión de fluido.

Ventajosamente, dicho controlador puede estar adaptado para ejecutar al menos una secuencia predeterminada de accionamiento de cualquiera o cualquier combinación de dicha pluralidad de válvulas selectoras y/o dicha primera bomba y/o dicha segunda bomba de fluido.

Opcionalmente, dicha secuencia predeterminada puede activarse mediante al menos un accionador externo. Preferiblemente, dicho al menos un accionador puede ser un interruptor de pedal. Preferiblemente, dicho puerto de extracción puede acoplarse a una aguja de recuperación adaptada para extraer líquido folicular.

Ventajosamente, el caudal de fluido proporcionado por dicha primera bomba de fluido y dicha segunda bomba de fluido puede ser ajustable de forma selectiva.

Preferiblemente, dicho controlador puede comprender además una interfaz de usuario adaptada para introducir comandos al controlador. Incluso más preferiblemente, dicha interfaz de usuario puede adaptarse además para mostrar el modo de funcionamiento de dicho sistema de bomba de fluido y/o al menos una propiedad física predeterminada dentro de dicho sistema de bomba de fluido.

Ventajosamente, una cualquiera o todos dichos primer, segundo y tercer depósito comprenden pueden acoplarse operativamente a una fuente de calor ajustable controlable por dicho controlador.

Preferiblemente, una cualquiera de dicha primera a séptima conexión de fluido puede formarse a partir de un tubo flexible.

Ventajosamente, una cualquiera de dicha pluralidad de válvulas selectoras puede ser una válvula de manguito adaptada para ser accionada por dicho controlador.

Preferiblemente, dicho segundo depósito puede ser una cámara de óvulos de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención.

Con el fin de proporcionar una mejor comprensión de la presente invención, ahora se describirán realizaciones no limitantes con referencia a las siguientes figuras en las que;

La Figura 1 es una vista en perspectiva de una cámara de óvulos de acuerdo con la presente invención; y

La Figura 2a muestra vistas en sección del cambio de la cámara de óvulos en la orientación de recolección (A) y la orientación de inspección (B); y

La Figura 2b muestra vistas en sección de otra realización de la cámara de óvulos en la orientación de recolección (A) y la orientación de inspección (B); y

La Figura 3 muestra un diagrama del sistema de la técnica anterior que usa un tubo de ensayo y un tapón; y La Figura 4 muestra un diagrama esquemático que muestra el sistema de cebado/sistema de lavado; y

La Figura 5 es un diagrama que muestra el efecto de los cambios de temperatura durante la recolección de ovocitos. El medio se aspiró en la cámara de recolección de ovocitos convencional (convencional) o en el prototipo de CHUMP1 (CHUMP1). La temperatura se registró a intervalos de 1 minuto. La pérdida de temperatura fue mayor con el sistema convencional al igual que el tiempo de recuperación (n = 7; P < 0.001). Se considera que esto se debe a una mayor evaporación utilizando el sistema convencional; y

La Figura 6 demuestra el enfriamiento que ocurre durante los procedimientos estándar de recolección de ovocitos y el beneficio potencial de un sistema cerrado. Los inventores llevaron a cabo 6 aspiraciones simuladas de ovocitos utilizando medio a temperatura de partida fisiológica utilizando el sistema convencional. La temperatura del medio aspirado se midió en el tubo de ensayo abierto durante un período de 5 minutos. Se observó un enfriamiento significativo (línea azul) en (A). A continuación, los inventores cubrieron el medio con aceite y mostraron que no se producía este enfriamiento. Esto confirmó que el enfriamiento resultó de la evaporación; y

La Figura 7 A-G es un diagrama del sistema que muestra el sistema de recolección de óvulos en uso. (A) Etapa 1: Cargue el recipiente de recolección en el bloque calentado. Una bolsa de solución salina y de desechos debe pasar a través de dos bombas periféricas y luego unirlas al recipiente de recolección a través de cierres luer. Se adjunta la aguja de recuperación de ovocitos. (B) Etapa 2: La bomba de solución salina se activa mediante un interruptor de pie que llena el recipiente de recolección con solución salina tibia. Continuar bombeando fluido una vez que el recipiente está lleno también cebará la aguja de recuperación. (C) Etapa 3: Una vez que la aguja está colocada en la ubicación correcta, se puede activar la bomba de desechos. Esto proporciona la succión para cosechar los embriones. (D) Etapa 4: Los desechos no deseados en el líquido folicular se eliminan de la muestra del recipiente de recolección a través de la bomba de desechos. (E) Etapa 5: Una vez que se completa la recolección, cualquier líquido folicular que quede en la aguja de recuperación se extrae a través de las líneas, asegurándose de que todos los embriones estén en el recipiente de recolección. (F) Etapa 6: Se bombea suficiente solución salina tibia al recipiente para expulsar el aire atrapado. (G) Etapa 7: El segmento del área calentada que contiene el recipiente de recolección se puede quitar para transportarlo a una estación de calefacción cercana. Esto no tendría “energía”, pero contendría suficiente calor latente para transportar el recipiente de recolección por una habitación o una incubadora; y

La Figura 8 es una vista en planta de un primer diseño de una cámara de óvulos de acuerdo con la presente invención; y

La Figura 9 es un segundo diseño preferido de una cámara de óvulos de acuerdo con la presente invención; y La Figura 10 es un diagrama de flujo que muestra el proceso de montaje de la cámara; y

La Figura 11 es un esquema simplificado del sistema de bomba de fluido de acuerdo con la tercera realización de la presente invención; y

La Figura 12 A-D es una ilustración del sistema (A) durante la secuencia de “Llenado de cámara”, (B) durante la secuencia de “Lavado”, (C) durante la secuencia de “Eliminación de aire” y (D) durante la secuencia de “Recolección de óvulos”, en la que los componentes del sistema ennegrecidos indican componentes del sistema activos; y

La Figura 13 ilustra un diagrama de flujo del proceso principal de alto nivel simplificado ejecutado por el controlador; y

La Figura 14A-E es un ejemplo ilustrativo de (A) la interfaz de usuario del controlador y la interfaz de usuario del controlador durante diferentes secuencias: (B) “Recolección de óvulos”, (C) “Descarga”, (D) “Alta presión” y (E) “Recolección de óvulos a alta presión”; y

La Figura 15 es un diseño de ejemplo ilustrativo del sistema de bomba de fluido visto (a) desde arriba, (b) vista en perspectiva, (c) desde el lateral y (d) desde el frente.

Una cámara 1 de óvulos se representa en general en la figura 1. La cámara 1 de óvulos tiene la forma de un recipiente cerrado con una pared 2 superior sustancialmente plana y una pared 3 inferior sustancialmente plana. El recipiente también tiene un número apropiado de paredes 8 laterales para formar un poliedro (se apreciaría que una o más paredes podrían ser curvas en lugar de planas como en la figura 1b). La sección superior de la cámara que incluye la pared 2 superior es separable o desmontable de la sección inferior de la cámara 1, sin embargo, en el uso normal durante la recolección y revisión de óvulos, la sección superior y las secciones inferiores de la cámara 1 de óvulos se combinan con un sello hermético a los líquidos y sustancialmente hermético al aire.

La cámara 1 de óvulos puede formarse, por ejemplo, mediante moldeo por inyección, moldeo por rotación, extrusión, formación al vacío, moldeo por compresión o por impresión tridimensional.

En una realización, la cámara 1 está hecha de un material termoendurecible de ablandamiento térmico. Ejemplos de plásticos termoendurecibles, incluyen acrilonitrilo butadieno estireno, poliamida (nailon), acetato (o celulosa), acrílico, polimetilmetacrilato, polipropileno, poliestireno, polietileno de baja o alta densidad, cloruro de polivinilo, policloroeteno, uPVC. Los ejemplos de plásticos termoendurecibles incluyen resina de poliéster, resinas epoxi y policarbonato. En una realización preferida, la cámara está hecha de poliestireno, sin embargo, en otra realización, la cámara está hecha de vidrio, preferiblemente vidrio purificado.

La cámara 1 puede recubrirse con una sustancia tal como un diamante nanocristalino. En una realización preferida, se recubre al menos la parte interior de la cámara superior.

La cámara 1 de óvulos contiene un filtro 4 que separa el recipiente en una primera cámara 5 (la cámara de recolección de óvulos) y una segunda cámara 6. El filtro 4 se extiende entre la pared 2 superior y la pared 3 inferior dividiendo efectivamente el recipiente. En esta realización, el filtro 4 es plano y se extiende sustancialmente perpendicularmente desde la pared 3 inferior. En una realización alternativa, el filtro podría ser curvo, sin embargo, esto es menos preferible ya que los coágulos de sangre y los óvulos podrían acumularse en el mismo lugar haciendo que los óvulos sean más difíciles de identificar en coágulos de sangre. El filtro 4 puede estar en un ángulo alternativo, por ejemplo, en un ángulo superior a 25 ° desde la pared 3 inferior, idealmente, en un ángulo entre 25 ° y 90 ° desde la pared 3 inferior, y preferiblemente 70 °. Opcionalmente, el ángulo puede estar entre 45 ° y 90 °. El tamaño de los poros del filtro se selecciona para permitir que la sangre y otros desechos pasen, pero no para que pase un óvulo. En una realización, el filtro tiene un tamaño de poro de 60 a 64 micrómetros. Como las células sanguíneas tienen entre 8 y 10 micrómetros, el filtro podría ser superior a 10 micrómetros, pero lo suficientemente pequeño como para retener un óvulo. Se prefiere que el tamaño de los poros sea menor que el que se utilizaría, por ejemplo, para un dispositivo de recolección de embriones.

La primera cámara 5 tiene un puerto 7 de entrada colocado en la pared lateral. Se prefiere que la entrada esté colocada de manera que cuando la cámara 1 de óvulos esté orientada para la recolección de tal manera que la primera cámara esté por encima de la segunda cámara y el filtro 4 esté sustancialmente horizontal, la entrada esté en el punto más alto. Se puede ver que, cuando están en esta orientación, las paredes laterales asociadas con la segunda cámara 6 se estrechan una hacia la otra para estimular el flujo de fluido hacia un puerto 9 de salida que está posicionado en la pared lateral de la segunda cámara 6. Cuando se orienta para colección las paredes laterales tienen forma de embudo.

Preferiblemente, el puerto de salida estará en la posición más baja en la “orientación de recolección” para permitir que la gravedad ayude a la eliminación de todas las células sanguíneas en el tubo de salida. Alternativamente, el puerto podría estar en una posición diferente en la pared lateral o en la pared superior.

Preferiblemente, el tamaño de la segunda cámara debe ser pequeño para reducir el volumen de fluido necesario para limpiar la cámara y dejarla libre de células sanguíneas.

Se coloca un dispositivo de dirección de flujo en la primera cámara. En la realización preferida, este dispositivo tiene la forma de un deflector, que puede ser lineal o curvo, que actúa para reducir la turbulencia del fluido cuando entra en la cámara. Esto es para reducir el estrés físico de los óvulos y estimular el movimiento directo de las células sanguíneas a la cámara inferior. En otra realización, el dispositivo de dirección de fluido está unido a la base de la cámara (en modo de visualización). También puede haber un mecanismo para reducir el nivel de líquido al retirar la tapa para reducir el riesgo de derrame de líquido. Esto podría lograrse, por ejemplo, incorporando el dispositivo de dirección de fluido en la tapa, de modo que el deflector se retire de la cámara junto con la tapa, reduciendo así el nivel de fluido.

Donde la pared 3 inferior se encuentra con el filtro 4, la superficie se estrecha ligeramente para proporcionar una inclinación 11 suave. Esto anima a que los óvulos se alejen del filtro 4 cuando la cámara 1 de óvulos está colocada en la orientación de visualización. Esto hace que los óvulos recolectados sean más fáciles de ver y menos probable que se escondan en las esquinas sombreadas de la primera cámara.

Tanto el puerto 7 de entrada como el puerto 9 de salida pueden ser puertos de cierre automático. Cuando los puertos se cierran, la cámara 1 de óvulos es un recipiente cerrado, hermético a los fluidos y hermético al aire. Los puertos son adecuados para su uso dentro de un aislador o una campana de clase 2.

En una realización, los puertos autosellantes son acoplamientos de tipo luero de conexión por torsión.

Es deseable que los puertos sean de grado médico y permitan una desconexión con una mano. Lo más preferiblemente, los puertos pueden estar provistos de una desconexión audible (clic) que alertará al usuario de que se ha producido la desconexión. Los puertos deben ser válvulas libres de fugas, antiderrames que incluyan mecanismos para proteger eventos de desconexión accidental. Los puertos deben permitir la rotación de los tubos conectados, ya que esto evita que se doblen. También se prefiere que los puertos tengan sellos elastoméricos. Los puertos y otros elementos de la cámara deben ser esterilizables con rayos gamma.

Idealmente, los puertos deberían permitir una ruta de flujo sin espacios que proporcione un mejor flujo y elimine las áreas de flujo estancadas.

Los ejemplos de puertos de cierre automático apropiados incluyen acoplamientos de la serie de policarbonato SMC (Colder Products Company), que son un acoplamiento de giro para conectar que proporciona una alternativa confiable y más segura a las conexiones de tipo luer. También permiten que el tubo gire libremente cuando está conectado. Otro ejemplo es el conector de diámetro pequeño SRC (Colder Products Company), que elimina la posibilidad de una conexión incorrecta con accesorios luer. Los acoplamientos NS4 de la serie ABS (Colder Products Company) cuentan con válvulas antiderrame en un tamaño compacto y material de grado médico.

Alternativamente, en lugar de los puertos de sellado automático, se podría usar una máquina de sellado de tubos, como CompoSeal® Universal (Fresenius Kabi) para sellar los tubos que están asociados con las entradas y salidas de la cámara para proporcionar una cámara hermética. En la realización mostrada, un puerto 10 de salida de aire también está asociado con la primera cámara. Nuevamente, esto está incluido en la pared lateral y permite que cualquier aire que pueda entrar al sistema durante el uso se elimine fácilmente. También puede haber un sensor en la primera cámara que apaga el sistema cuando se detecta aire y evita que entre más aire en el sistema.

La pared 2 superior del recipiente es transparente para permitir la inspección visual del contenido del recipiente sin abrir. En la realización mostrada, sustancialmente toda la pared superior es transparente, lo que se prefiere porque permite ver tanto la primera cámara 5 como la segunda cámara 6. Sin embargo, se entenderá que una alternativa es que solo una parte de la pared 2 superior sea transparente, siempre que permita la inspección visual de la primera cámara 5, que es la cámara de recolección de óvulos.

La pared 3 inferior del recipiente también es transparente en la realización representada. Esto asegura que, si la cámara 1 de óvulos se coloca en un microscopio óptico para la inspección visual de su contenido, la luz podrá entrar a través de la pared 3 inferior. Nuevamente se apreciará que una alternativa es que solo una parte de la pared 3 inferior es transparente, siempre que permita la inspección visual de la primera cámara 5, que es la cámara de recolección de óvulos.

Cuando la cámara 1 comprende material transparente y/o translúcido, el material es preferiblemente apirógeno y no tóxico. Lo más preferiblemente, el material pasa las pruebas de endotoxina, toxicidad espermática y embriotoxicidad. Preferiblemente, el material alcanza resultados de < 0.25 UE/ml, preferiblemente < 0.03 UE/ml en pruebas de endotoxinas bacterianas in vitro. Las pruebas de ejemplo incluyen métodos de coágulo de gel, turbidimétrico cinético y cromogénico (cuantitativo). El material también pasaría preferiblemente un ensayo de toxicidad de espermatozoides, como el ensayo de motilidad de espermatozoides (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10875871), y/o ensayos de células madre para determinar la toxicidad. El material también pasa preferiblemente un ensayo de embriotoxicidad. Los ensayos de ejemplo incluyen la prueba de células madre embrionarias (EST), la prueba de embriotoxicidad del pez cebra (ZET) y el cultivo de embriones completos posimplante de rata (WEC). Preferiblemente, el resultado de tal ensayo sería > 80 % de blastocitos expandidos a las 96 horas.

La cámara 1 debe cumplir con los requisitos de las pruebas de clase VI de la USP y puede esterilizarse de acuerdo con los estándares requeridos para los dispositivos médicos.

En una realización no mostrada pero contemplada por los inventores, la pared inferior podría estar provista de marcas de rejilla u otros índices visibles que ayudarán a ver y localizar los óvulos dentro de la primera cámara.

Las dimensiones de la cámara 1 de óvulos se eligen para que sean similares al equipo ya utilizado por médicos y embriólogos, por ejemplo, dimensiones similares a las de un plato de petrie típico o recipiente de recolección utilizado actualmente por un embriólogo. Las dimensiones también se seleccionan para permitir que la cámara 1 de óvulos sea adecuada para su visualización bajo un microscopio.

La cámara de óvulos tendrá entre 2 y 16 cm2, preferiblemente entre 4 y 10 cm2

La cámara estará hecha de un plástico no tóxico como poliestireno o vidrio.

La cámara 1 de óvulos es preferiblemente integrable con un sistema de recolección automatizado que comprende una bomba. El sistema se muestra en la Figura 7. La cámara 1 de óvulos está configurada para unirse a un tubo que une la cámara 1 a través de puertos a una aguja de recolección de óvulos, un depósito de líquido de lavado y una unidad de recolección de desechos. La cámara de óvulos está configurada para encajar dentro de un sistema de control de temperatura. En una realización, el sistema de control de temperatura comprende un bloque calentado, que está configurado para recibir la cámara de óvulos en una sola orientación. En otra realización, el tubo y la bomba están alojados dentro de un sistema de carcasa que tiene control de temperatura. El sistema de recolección automatizado comprende un mecanismo para conectar los tubos a la bomba en la configuración correcta, como clips numerados o codificados por colores, o tubos de diferentes longitudes. Tal mecanismo reduce o evita el error del operador al conectar el dispositivo al sistema de recolección automatizado.

La cámara 1 de óvulos se usa como sigue;

Una cámara 1 de óvulos está provista de un tubo 12 unido al puerto 7 de entrada. El extremo distal del tubo 12 (es decir, el extremo más alejado del recipiente) está unido a una aguja 13 de recolección. La cámara de óvulos también está provista de un segundo tubo 14 conectado al puerto de salida. Este segundo tubo 14 está asociado a un depósito de desechos en su extremo distal. El segundo tubo 14 también está asociado con una bomba de succión adaptada para extraer fluido a través del tubo desde la cámara 1 de óvulos hasta el depósito de desechos. Esta bomba puede accionarse mediante un pedal. En todos los casos, el tubo se mantiene lo más corto posible.

La cámara 1 de óvulos, junto con el tubo 12 y la aguja 13, se ceban llenándose con líquido estéril calentado, por ejemplo, solución salina. El tubo 12 entre la aguja y el puerto 7 de entrada está provisto de un grifo de tres vías 17 (mostrado en la figura 4) de modo que el tubo 12 también puede conectarse a un depósito 18 de líquido estéril caliente, así como a la aguja 13 y al puerto 7 de entrada de la cámara 1 de óvulos. Se pueden usar válvulas de manguito para abrir o cerrar las opciones de flujo de fluido según sea necesario. Se puede accionar una bomba peristáltica para empujar líquido estéril desde el depósito de líquido estéril a través del tubo 12 hacia la cámara 1 de óvulos y la aguja 13.

La cámara 1 de óvulos está completamente llena de líquido. También es preferible que la cámara 1 de óvulos se mantenga sobre una placa calentada, o dentro de una carcasa calentada, para mantener la cámara 1 a la temperatura corporal o cerca de ella. La placa o carcasa calentada se puede asociar con las bombas utilizadas para extraer líquido a través del sistema como parte de una unidad de bombeo más grande. Es preferible que el fluido se caliente a 36.8 ± 0.4 °C 37 °C.

Durante la recolección de óvulos, la cámara de óvulos se mantiene en la “orientación de recolección” donde el filtro 4 está sustancialmente horizontal dentro de la cámara. Esto promueve el efecto de la gravedad al aspirar el líquido folicular e intentar separar los óvulos o gametos femeninos de la sangre o los desechos dentro de la cámara 1.

La recolección de óvulos suele ser un procedimiento de un día con el paciente bajo sedación. La aguja 13 se pasa a través de la parte superior de la vagina de una paciente bajo guía ecográfica hasta el ovario. El líquido folicular y los óvulos asociados se aspiran extrayendo líquido a través del sistema. Se utiliza una bomba de aspiración para extraer el líquido de cebado a través del sistema hacia el depósito de desechos, que extrae el líquido folicular, incluidos los óvulos, a través de la aguja 13 y el tubo 12 hacia la cámara 1 de óvulos a través del puerto 7 de entrada. El líquido se extrae hacia adentro el recipiente a través del puerto de entrada y hacia la primera cámara 5, y luego extraído a través del filtro 4 hacia la segunda cámara 6. El deflector ralentiza el flujo de fluido que se extiende a lo largo del deflector. Luego fluye sobre el deflector como un flujo de “cortina” a una velocidad reducida. Los óvulos y las células sanguíneas pasan por el deflector y caen hacia el filtro. Dado que el tamaño de poro del filtro 4 de entre 10 - 100 pm, preferiblemente entre 20 - 60 pm se selecciona para que sea más pequeño que el de un óvulo/gameto femenino, los óvulos se retienen en la primera cámara 5 mientras que el líquido folicular, las células sanguíneas y otros más pequeños los desechos dimensionados pasan a través del filtro 4 a la segunda cámara 6 y finalmente se extraen del puerto 9 de salida al depósito de desechos. El tamaño de los poros permite que esta separación se produzca principalmente por gravedad, lo que requiere una presión de aspiración mínima a través del filtro. Esto da como resultado que los óvulos se retengan en la primera cámara 5 en un entorno fluido claro. Es importante que los óvulos se separen de esta manera de la sangre presente en el líquido folicular para evitar que se formen coágulos de sangre.

En particular, como todos los óvulos se recogen en un solo recipiente, y el líquido folicular se extrae a través del sistema en última instancia hacia el depósito de desechos, esto redujo la cantidad de líquido que un embriólogo debe buscar para identificar y seleccionar los óvulos/gametos femeninos.

La cámara sellada se mantiene en una incubadora hasta que el embriólogo esté listo para inspeccionarla y abrirla.

Es posible que se pueda colocar un óvulo dentro del tubo 12 después de la aspiración si aún no se ha extraído a través del puerto 7 de entrada. Al final de la recolección, el médico puede usar la bomba de cebado para asegurar que todo el fluido folicular se ha introducido líquido en la cámara 1 de óvulos y no quedan óvulos ni gametos femeninos en el tubo 12 sin darse cuenta.

Si existe la preocupación de que los óvulos puedan haber quedado retenidos en la aguja después de ser retirados de la mujer, la aguja puede insertarse en un fluido caliente estéril, por ejemplo, solución salina y enjuagada.

En una realización no mostrada, la cámara de óvulos también está provista de un sensor de aire que detecta si está entrando aire en la primera cámara durante la aspiración. Existe el riesgo de que, entre aire en el sistema durante la aspiración del folículo, lo que puede afectar el pH del líquido folicular o del líquido en el que se encuentran los óvulos o, en casos más importantes, puede provocar que el óvulo se seque. El sensor se colocaría en la parte superior de la primera cámara cuando la cámara esté orientada para la recolección. El puerto 10 de salida de aire podría abrirse luego para eliminar el aire y minimizar los cambios en las condiciones fisiológicas que rodean al óvulo recolectado (por ejemplo, cambios en el pH) y para evitar que el óvulo se seque. El puerto 10 de salida de aire también se puede utilizar sin que esté presente un sensor.

También es posible lavar la aguja si se bloquea durante el proceso de recolección. El tubo 12 entre la aguja y el puerto 7 de entrada puede estar provisto de un grifo 17 de tres vías (mostrado en la figura 4). El flujo entre la aguja y el puerto 7 de entrada se puede cerrar en el punto A, por ejemplo, usando una válvula de pinzamiento, y se puede abrir un flujo entre un depósito de líquido estéril y la aguja, por ejemplo, en el punto B. Una bomba, preferiblemente una bomba peristáltica, se utiliza para empujar el líquido estéril del depósito de líquido estéril hacia afuera a través de la aguja, desalojando cualquier cosa que pueda estar bloqueando el orificio de la aguja o el tubo asociado. Una vez que se completa el lavado, el flujo entre el depósito de líquido estéril y la aguja se puede cerrar de nuevo y el flujo entre la necesidad y el puerto 10 de entrada se puede volver a abrir. Durante el lavado, la bomba de aspiración asociada con la aspiración generalmente se detendrá.

La cámara 1 de óvulos se puede desprender y desconectar del tubo 12 asociado con la aguja 13 y también del segundo tubo 14. Como los puertos 7, 9, 10 son sellables (preferiblemente autosellante) y no gotean, esto resulta en la cámara que tiene un ambiente sellado para los óvulos recolectados. Durante todo el proceso de recolección, la cámara 1 de óvulos se mantiene en un bloque caliente para garantizar que la cámara 1 de óvulos y su contenido se mantengan a la temperatura corporal, 37 °C, o a la temperatura deseada por el embriólogo (en algunos casos, los embriólogos prefieren mantener los óvulos a una temperatura ligeramente superior o inferior a la temperatura corporal). La cámara se puede mantener a una temperatura constante, como la temperatura corporal, y los óvulos/gametos femeninos se pueden mantener en la cámara durante algún tiempo si es necesario.

Una vez que se recogen los óvulos, la siguiente etapa es para que un embriólogo inspeccione y seleccione los óvulos/gametos femeninos más viables para su uso posterior en el procedimiento. Como se muestra mejor en la figura 2, la cámara 1 de óvulos se mueve/reorienta en un ángulo de aproximadamente 90 ° desde la “orientación de recolección” donde el filtro 4 está en un plano sustancialmente horizontal dentro de la cámara, hasta la “orientación de inspección” donde la pared 3 inferior es ahora la superficie inferior y el filtro 4 está en un plano sustancialmente vertical. Este cambio de orientación permite al embriólogo colocar la cámara 1 de óvulos todavía sellada en un microscopio, estando la cámara de óvulos ahora en la orientación de inspección, para su visualización. Ventajosamente, esta orientación también permite un fácil almacenamiento y tránsito de la cámara 1 de óvulos. La pared 3 inferior es transparente y permite que la luz entre en la cámara, lo cual es particularmente útil cuando se usa un microscopio con una fuente de luz en la posición más baja (es decir, una fuente de luz es colocado debajo de la cámara 1 de óvulos). Todos los óvulos/gametos femeninos que estén presentes se mantienen en la primera cámara 5 y, como la cámara 1 de óvulos está en la orientación de visualización, estarán descansando en el piso de la cámara que ahora es la superficie interior de la pared 3 inferior. El Los óvulos/gametos femeninos se alejan de los bordes de la primera cámara, particularmente lejos del filtro, que es donde probablemente se habrían ubicado cuando la cámara 1 de óvulos estaba en la orientación de recolección, proporcionando una superficie inclinada 11 o bordes de radio donde la pared 3 inferior se encuentra con el filtro 4 y/o donde la pared 3 inferior se encuentra con una o más paredes 8 laterales. Como la pared 2 superior también es transparente, el embriólogo puede ver el contenido de la cámara 1 de óvulos sin tener que abrirla o abra la unidad. La orientación de la cámara también asegura que el filtro no oscurezca la vista del embriólogo. La pared inferior puede estar provista de marcas o índices, por ejemplo, un patrón de cuadrícula, para ayudar al embriólogo a localizar óvulos o gametos femeninos. Hasta este punto, los óvulos/gametos femeninos se habrán retenido en un entorno fluido esencialmente sellado (y más preferiblemente líquido) con cambios mínimos o nulos en la temperatura o el pH y una entrada mínima o nula de aire.

Se apreciará que, aunque toda la pared superior es transparente en esta realización, una realización alternativa podría tener solo una porción de ventana de la pared superior transparente, siempre que sea de un tamaño suficiente para permitir que el embriólogo vea el contenido de la primera cámara. También es beneficioso poder visualizar el contenido de la segunda cámara ya que, durante la recolección, el médico a menudo deseará ver si se extrae una cantidad significativa de sangre del folículo. Las paredes o secciones restantes del recipiente también pueden ser opcionalmente transparentes o translúcidas para permitir la visualización del fluido aspirado desde cualquier ángulo.

Una vez que el embriólogo ha inspeccionado los óvulos e identificado los que parecen más viables, puede retirar la porción 15 de tapa de la cámara 1 de óvulos, comprendiendo la porción 15 de tapa al menos una parte de la pared 2 superior, y en la realización representada en la Figura 1, toda la pared 2 superior. La parte de la tapa puede estar provista de una sección 19 saliente que el usuario puede agarrar para facilitar la extracción de la parte la porción 15 de tapa para evitar oscurecer la vista hacia el interior de la cámara. En una realización, la tapa se retira girando (girando) mientras que en otras la porción 15 de tapa puede simplemente levantarse de la porción 16 base. Preferiblemente se requiere menos de 20 grados de rotación para quitar la tapa, más preferiblemente menos de 10 grados. La tapa puede ser circular o no circular. Hasta este punto, la porción 15 de tapa ha sido sellada con un sello hermético a los líquidos y al aire a la porción 16 base de la cámara 1 de óvulos. Esto ha asegurado que la cámara de óvulos haya sido completamente hermética al aire y a los fluidos después de la aspiración para evitar la aspiración fisiológica y cambios ambientales como cambios de pH y temperatura o entrada de aire u oxígeno o contacto con contaminantes. Se prefiere que este sea un sello térmico, cinta a prueba de manipulaciones o un sello de silicona que una vez roto no se puede sellar. Esto aseguraría que la cámara de óvulos sea de un solo uso y a prueba de manipulaciones. En una realización, la tapa 15 se sella a la porción 16 base usando un anillo 17 de retención como se muestra en la figura 1b. El anillo de retención es preferiblemente de un solo uso y está adaptado para romperse cuando la tapa 15 se retira de la base 16. El anillo 17 de retención puede estar provisto de una porción 18 con lengüeta que se extiende hacia fuera de la cámara para facilitar la extracción del anillo 17 de retención de la cámara cuando sea necesario. Una cámara de un solo uso también permite un seguimiento más fácil del paciente, ya que la cámara 1 de óvulos puede estar provista de un identificador de paciente. El identificador del paciente puede ser un identificador permanente. Con la porción 15 de tapa retirada, el embriólogo puede retirar los óvulos seleccionados utilizando una pipeta utilizando técnicas conocidas. Los óvulos o gametos femeninos recolectados se pueden utilizar posteriormente.

Una realización de una tapa es una tapa de ajuste por compresión. Aquí se proporciona una herramienta para quitar la tapa. En una realización, la herramienta es una llave que, cuando se inserta en la tapa y se gira, permite retirar la tapa. En una realización, el área de recepción de la herramienta (ojo de cerradura) está ubicada en el área de la tapa que incorpora el dispositivo de dirección del flujo.

Con referencia a las Figuras 8 y 9, se divulgan dos diseños ligeramente diferentes de la cámara de óvulos. En la Figura 9, que divulga el diseño preferido, los lados de la cámara 5 superior son rectos y no ahusados como en el diseño que se muestra en la Figura 8. Además, el deflector forma una V y está unido a la parte inferior de la tapa 15 y la forma de la tapa 15 coincide con la forma de la cámara 5 superior (es decir, fondo plano, lados paralelos que se convierten en un arco curvo). La parte inferior de la tapa 15 también puede estar engrosada para sobresalir dentro de la cámara 5 y desplazar el líquido en la cámara 5 de manera que haya menos riesgo de derrame cuando se retire la tapa 15. El grosor de la tapa 15 puede disminuir hacia el filtro 4, es decir, en ángulo, permitiendo que todo el filtro 4 sea visible. Además, la tapa 15 puede cubrirse con un sello anular de poliestireno (no mostrado), que debe quitarse para quitar la tapa 15.

También puede situarse una lengüeta de refuerzo en alguna posición de la pared lateral exterior de la cámara 5 superior, preferiblemente en la parte superior en el modo de recolección de óvulos. Una herramienta puede descansar sobre la lengüeta de refuerzo para romper el sello, lo que permite que el sello se levante. Una vez roto, el anillo de sello se puede quitar. El anillo de sello puede ser rígido (y quebradizo) por lo que se desprende en una sola pieza. Cuando la lengüeta de refuerzo está en el punto más alto de la cámara (en modo de recolección), la salida de aire se puede colocar preferiblemente en la parte más superior de la cámara, debajo de la lengüeta de refuerzo (en modo de visualización).

Además, la superficie superior de la tapa 15 puede comprender una lengüeta que funciona como un asa para retirar la tapa 15. La lengüeta se puede colocar preferiblemente de modo que no bloquee la vista de la cámara 5, por ejemplo, directamente encima del deflector (modo de visualización). También podría colocarse en el área de la cámara 5 superior por encima del deflector (en modo de recolección), preferiblemente a la derecha o izquierda del centro.

Ventajas de la cámara de óvulos

La cámara de óvulos tiene una serie de ventajas en comparación con la técnica anterior;

■ La temperatura del óvulo está controlada en todo momento (mayor viabilidad celular)

■ Los óvulos permanecen en un ambiente fluido cerrado en todo momento, lo que permite mantener un pH estable y minimizar el riesgo de contaminación y/o exposición a compuestos orgánicos volátiles (COV).

■ El proceso de recolección de óvulos es continuo, es decir, no es necesario pasar de un tubo de ensayo a otro. Todos los óvulos se recogen en una cámara cerrada. (menos mano de obra, minimiza el riesgo de contaminación, evita la pérdida de calor)

■ Los óvulos se limpian automáticamente (se separan de la sangre en el líquido folicular) dentro de la cámara y se presentan al embriólogo en un líquido transparente, por lo que se pueden identificar fácilmente. (Ahorra tiempo al embriólogo, menos enfriamiento, minimiza el riesgo de contaminación).

■ La cámara solo se abre una vez en el laboratorio de embriología (idealmente dentro de un aislador), cuando el embriólogo está listo para sacar los óvulos y colocarlos en medio de cultivo bajo aceite (minimiza el riesgo de contaminación).

■ Los óvulos se pueden mantener en la cámara hermética cerrada en una incubadora después de la recuperación.

Así, el procedimiento clínico de recolección de óvulos y el proceso embriológico de identificación de los óvulos se vuelven independientes. Este es un uso más eficiente del tiempo tanto del médico como del embriólogo y permite flexibilidad en la ubicación del laboratorio y la clínica.

■ La cámara se puede usar para reemplazar el líquido folicular con un medio tamponado (o solución salina) que proporciona un ambiente osmótico y de pH estable para los óvulos.

Desde la perspectiva del médico, el sistema funciona de la misma manera que el sistema actual, es decir, se puede usar la colección de tubos y agujas existentes, la cámara puede ser transparente y el líquido aspirado puede ser visible en el nuevo sistema de manera muy similar a esta en la corriente.

Desde la perspectiva del embriólogo, se usa el equipo existente (microscopios, campana, etc.), y el plato es de un tamaño similar al que ya se usó. En algunas realizaciones, los óvulos pueden asentarse sobre una base diferente a la del método existente, pero parecerán iguales bajo el microscopio y serán fáciles de identificar.

La placa puede ser similar en tamaño/forma a las placas de Petri actuales utilizadas durante la selección y limpieza de ovocitos, y lo suficientemente grande para proporcionar un área de filtrado óptima.

Además, la cámara de óvulos puede tener aplicación en el mercado de FIV veterinaria. Dado que la FIV veterinaria a menudo se lleva a cabo en un entorno mal controlado, las ventajas de la cámara de óvulos serían extremadamente deseables.

Fabricación de la cámara de óvulos

En un método de fabricación preferido, una cámara de óvulos está hecha de los siguientes componentes;

■ Primera cámara interna: poliestireno moldeado por inyección

■ Segunda cámara interna: poliestireno moldeado por inyección

■ Tapa: poliestireno moldeado por inyección

■ Anillo de retención: poliestireno moldeado por inyección

■ Conector de salida de aire: poliestireno mecanizado o moldeado por inyección

■ Conectores de entrada y salida: poliestireno moldeado por inyección

■ Malla del filtro principal: malla de nailon de 60 pm

■ Malla de filtro de salida de aire: malla de nailon de 60 pm

■ Junta: material de junta de silicona

La primera cámara interna, la segunda cámara interna, la tapa y el anillo de retención están fabricados con poliestireno Luran HD-20 suministrado por BASF. El propósito de la primera cámara interna es recolectar ovocitos durante un procedimiento de recolección de óvulos. También proporciona un recipiente para que los embriólogos seleccionen y limpien los ovocitos una vez que se complete el procedimiento de recolección. La primera cámara interna es el primer componente del procedimiento de montaje. Todos los demás componentes se acoplan a esta cámara, la segunda cámara interna (o cámara de la boquilla) se ubica en la parte delantera, la junta, la tapa y el anillo de retención se encuentran en la parte superior y los conectores de entrada y aire se ubican en los puertos de la pared posterior. La primera cámara interna tiene las siguientes características;

Base ópticamente transparente para usar bajo un microscopio;

Cordón de soldadura de sacrificio alrededor de la parte superior de la cámara;

Un borde de la carcasa de la junta cerca de la parte superior de las paredes laterales;

Ajuste deslizante/de ubicación con la tapa y los componentes de la junta;

Ajuste a presión con el saliente del filtro en el segundo componente interno de la cámara/boquilla;

Ajuste a presión con las conexiones de entrada y de aire;

Superficie lisa alrededor del frente para brindar un buen contacto al soldar con el segundo componente interno de la cámara/boquilla.

Los canales de esta segunda cámara interna fluyen desde la primera cámara interna a través de una conexión de salida. Se conecta con la cámara principal a través de una extrusión de saliente que tiene un ajuste a presión en la cámara principal. La extrusión de saliente proporciona una superficie de soldadura para montar la malla del filtro principal. Una vez introducido en la cámara principal, se utiliza una soldadura ultrasónica para sellarlos ambos. La segunda cámara interna tiene las siguientes características clave:

■ Saliente en ángulo proporciona una superficie de soldadura para la malla del filtro y ajusta en la ubicación con la primera cámara interna;

■ Cordón de soldadura de sacrificio alrededor de la entrada hasta la segunda cámara interna/cámara de boquilla para soldar con la malla del filtro;

■ Cordón de soldadura de sacrificio alrededor de la base de la saliente extruida para soldar con la primera cámara;

■ Ajuste a presión con el conector de salida;

■ Área de contacto plana alrededor del orificio del conector de salida que permite el acceso al sonitrodo de soldadura.

La tapa se inserta en la parte superior de la cámara principal para intercalar la junta y hacer un dispositivo sellado. Cerca de la parte posterior de la tapa hay un deflector. Esto se utiliza para reducir la turbulencia en el flujo y ayudar a la distribución a través de la malla del filtro. El deflector tiene un ligero ángulo con el centro de la cámara que actúa como un canal para la 'captura de goteo' cuando se quita la tapa. La tapa es un componente seccionado particularmente grueso que sobresale profundamente en la cámara principal. Esta protuberancia reduce el volumen de líquido de la cámara principal, dejando un volumen de líquido de trabajo deseable una vez que se retira la tapa. Una pestaña sobresale de la parte superior de la tapa que proporciona un punto de recolección que permite a los usuarios levantar la tapa de la cámara principal.

El componente de la tapa tiene las siguientes características clave:

■ Ubicación adecuada a la cámara principal;

■ Acabado de superficie liso y plano para intercalar la junta, formando un sello;

■ Ópticamente transparente para permitir a los usuarios ver el contenido de la cámara;

■ Un espacio libre de al menos 1 mm entre la parte inferior del deflector y la base de la cámara.

El anillo de retención debe proporcionar una soldadura de retención con la parte superior de la cámara principal para intercalar la junta de silicona y generar un dispositivo sellado. El anillo tiene un reborde de ubicación alrededor de su borde que lo coloca sobre la cámara principal, alineándolo con el cordón de soldadura de sacrificio.

El anillo de retención tiene las siguientes características clave:

■ Ajuste deslizante con la cámara principal;

■ Integridad estructural para comprimir la junta de silicona.

El conectar de salida de aire se mecaniza preferiblemente a partir de Polystyrene Rexolite 1422. Este podría moldearse por inyección a partir de Polystyrene Luran HD-20.

El conector de salida de aire debe tener dos cordones de soldadura de sacrificio, uno para soldar una malla de filtro y el segundo para soldar el conector en la primera cámara interna. Este conector de salida de aire proporciona una interfaz con los componentes de la tubería que conectan las bombas, las válvulas y la aguja a la cámara. La tubería se ubica y se fuerza sobre el conector de tubería macho para hacer un sello.

El conector de salida de aire tiene las siguientes características clave:

■ Conector de tubería (deslizante dentado o micro luer) para sellar con material de tubería estándar como se usa en la industria de FIV;

■ Conector de tubería para sellar con tubería de 1 mm de DI y 2 mm de DE;

■ Ajuste a presión con la primera cámara interna;

■ Cordón de soldadura de sacrificio para soldar una malla de filtro sobre el conector;

■ Cordón de soldadura de sacrificio para soldar el conector en la primera cámara interna.

El conector de entrada/salida debe tener un cordón de soldadura de sacrificio para soldar el conector en la primera cámara interna (entrada) y la segunda cámara interna (salida). Este conector de entrada/salida proporciona una interfaz con los componentes de la tubería que conectan las bombas, las válvulas y la aguja a la cámara. La tubería se ubica y se fuerza sobre el conector de tubería macho para hacer un sello.

El conector de entrada/salida tiene las siguientes características clave:

■ Conector de tubería (deslizante dentado o micro) para sellar con material de tubería estándar como se usa en la industria de FIV;

■ Conector de tubería para sellar con tubería de 1 mm de DI y 2 mm de DE;

■ Ajuste a presión con las cámaras principal y de la boquilla;

■ Cordón de soldadura de sacrificio para soldar el conector en la primera y segunda cámaras internas.

Los conectores de entrada/salida se mecanizan preferiblemente a partir de Polystyrene Rexolite 1422. Estos podrían moldearse por inyección en Polystyrene Luran HD-20 individualmente o como parte de la primera cámara interna y cámara de boquilla.

La malla del filtro de salida de aire se fabrica a partir de una malla de nailon suministrada por Millipore con un tamaño de poro de 60 pm. La malla del filtro de salida de aire proporciona un área de filtración de 1.13 mm2. El filtro se suelda al conector de entrada de aire que luego se suelda en la cámara principal para crear un sello. Este filtro actúa a prueba de fallos para evitar que los óvulos se escapen por la salida de aire.

La malla del filtro de salida de aire tiene las siguientes características clave:

■ Fabricado con nailon;

■ Tamaño de poro del filtro de 60 pm.

La junta de silicona se fabrica a partir de silicona de grado médico y se coloca sobre la parte que sobresale del componente de la tapa. A medida que la tapa se inserta en la cámara principal, la junta se intercala. A medida que el anillo de retención se suelda en su lugar, la junta se comprime y genera un sello en la cámara principal.

La junta de silicona tiene las siguientes características clave:

■ La ubicación encaja con la parte que sobresale del componente de la tapa;

■ Espesor de 0.5 a 1 mm para proporcionar la compresión necesaria para hacer un sello.

Los componentes se fabrican en lotes en maquinaria de moldeo por inyección o CNC. Cada componente moldeado por inyección tiene su propio molde individual que se coloca en la máquina de moldeo. El poliestireno Luran HD-20 suministrado por BASF en forma granulada a granel se alimenta a la tolva de entrada de la máquina. A continuación, se aplican los parámetros de moldeo para los componentes individuales y el proceso se ejecuta automáticamente, los componentes terminados se expulsan de la máquina y se recogen en contenedores a granel antes de embolsarse individualmente. Cada componente mecanizado por CNC se fabrica con un programa de mecanizado establecido, los componentes terminados se recogen, se lavan con ultrasonidos y se embolsan. Luego, cada componente individual llega a un área de ensamblaje y se ensambla como se muestra en la figura 10.

Se utiliza soldadura ultrasónica de componentes para ensamblar las cámaras. Esto niega la necesidad de utilizar disolventes nocivos al unir componentes. Se utiliza un soldador ultrasónico estándar con una gama de sonitrodos de acuerdo con la geometría requerida de la soldadura.

El proceso de fabricación se lleva a cabo en un entorno de sala limpia de grado 7 mínimo siempre que sea posible.

Sistema de bomba de fluido

Se describe un sistema 100 de bomba de fluido adecuado para la recolección de óvulos por FIV con referencia a las Figuras 7 y 11 a 15. La Figura 11 muestra un esquema de una realización preferida del sistema de bomba de fluido del sistema de recolección de óvulos descrito en la Figura 7 A-G. La realización preferida del sistema 100 de bomba de fluido comprende una primera bomba 102 peristáltica, una segunda bomba 104 peristáltica, un depósito 106 de solución salina calentada, un depósito 108 de desechos, una cámara 110 de recolección de óvulos con una etapa calentada, un puerto 112 de extracción acoplable a, por ejemplo, una aguja 114 y un controlador (no mostrado en el esquema).

El sistema 100 de bomba de fluido puede contener un recipiente extraíble (cámara de alojamiento) para alojar la cámara. El lado trasero de la carcasa de la cámara que hace la mayor parte del contacto con el sistema 100 de bomba de fluido puede estar hecho de aluminio; esto es para permitir la conducción térmica de calor desde la etapa calentada en la bomba hasta la cámara. El frente de la cámara de alojamiento puede tener una tapa hecha de material Perspex transparente para permitir que el operador inspeccione visualmente la acumulación de líquido en la cámara. La cámara encaja en la carcasa de la cámara y la tapa de Perspex está cerrada. La carcasa de la cámara se desliza en dos bordes del sistema 100 de bomba de fluido con fines operativos.

El puerto 116 de entrada de la primera bomba 102 peristáltica está conectado de manera fluida al depósito 106 de solución salina calentada a través de un primer tubo 118, y el puerto 120 de salida está conectado de manera fluida a una unión 122 de fluido a través de un segundo tubo 124. El puerto 112 de extracción (y la aguja 114) está conectada de forma fluida a la unión 122 de fluido a través de un tercer tubo 126 y la unión 122 de fluido está además conectada de forma fluida a un puerto 128 de entrada de la cámara 110 de recolección de óvulos a través de un cuarto tubo 130. El puerto 132 de salida de la segunda bomba 104 peristáltica está conectada de forma fluida al depósito 108 de desechos a través de un quinto tubo 134. El puerto 136 de entrada de la segunda bomba 104 peristáltica está conectado de forma fluida a un primer puerto 138 de salida de la cámara 110 de recolección de óvulos a través de un sexto tubo 140 y a un segundo puerto de salida 142 de la cámara 110 de recolección de óvulos a través de un séptimo tubo 144.

Una primera válvula 202 selectora activa está acoplada operativamente al segundo tubo 124, una segunda válvula 204 selectora activable está acoplada operativamente al cuarto tubo 130, una tercera válvula 206 selectora activable está acoplada operativamente al tercer tubo 126, una cuarta válvula 208 selectora accionable está operativamente acoplada al séptimo tubo 144 y una quinta válvula 210 selectora accionable está operativamente acoplada al sexto tubo 140.

El controlador (no mostrado) está acoplado operativamente a al menos las válvulas 202, 204, 206, 208 y 210 selectoras accionables, y a la primera y segunda bombas 102 y 104 peristálticas. El controlador (no mostrado) también puede ser acoplado operativamente a cualquier calentador controlable (no mostrado) de la cámara 110 de recolección de óvulos y el depósito 106 de solución salina calentada. Además, el controlador (no mostrado) también puede acoplarse operativamente a cualquier sensor integrado dentro del sistema 100 de bomba de fluido. Los sensores pueden adaptarse para determinar las propiedades físicas dentro del sistema 100 de bomba de fluido, como, por ejemplo, el caudal de fluido, la temperatura del fluido y/o la temperatura ambiente.

El controlador puede programarse para ejecutar secuencias predeterminadas de activación y operación de la válvula 202 a 210 selectora de la primera y segunda bomba 102 y 104 de fluido peristáltico. Por ejemplo, el controlador (no mostrado) puede configurarse para ejecutar primero una secuencia “Llene la cámara” como se muestra en la Figura 12A. Aquí, las válvulas 206, 208 selectoras tercera y cuarta se accionan (es decir, se cierran) para formar un camino de fluido desde el depósito 106 de solución salina calentada a través de la cámara 110 de recolección de óvulos a través del sexto tubo 140 y la segunda bomba 104 peristáltica hasta el depósito 108 de desecho. Ambas bombas 102 y 104 se activan para mover fluido desde el depósito 106 de solución salina calentada a la cámara 110 de recolección de óvulos y hasta el depósito 108 de desechos, llenando la cámara 110 de recolección de óvulos con fluido salino calentado en el proceso.

Después de la secuencia de “ llenado de la cámara”, el controlador ejecuta la secuencia de “ lavado” como se muestra en la figura 12B. En esta secuencia, las válvulas 204, 208, 210 selectoras segunda, cuarta y quinta se cierran formando un camino de fluido desde el depósito de solución salina calentada hasta el puerto 112 de extracción y la aguja 114. La primera bomba 102 peristáltica se activa para eliminar el fluido salino del puerto 112 de extracción y la aguja 114. La conexión de fluido a la cámara 110 de recolección de óvulos está bloqueada.

Después de que se haya lavado el sistema, el controlador puede ejecutar una secuencia de “Eliminar aire” ya sea automáticamente después de la secuencia de “Enjuague” o una vez activada manualmente por, por ejemplo, un actuador externo (por ejemplo, un pedal). Como se muestra en la Figura 12C, la tercera y cuarta válvula 206, 208 selectora está cerrada formando un camino de fluido desde el depósito 106 de solución salina calentada a través de la cámara 110 de recolección de óvulos y hacia el sexto tubo 140. La primera bomba 102 peristáltica se activa para agregar una cantidad controlada de líquido salino que se añadirá a la cámara de recolección de óvulos para eliminar cualquier desecho de aire que pueda haber quedado atrapado en la cámara 110 de recolección de óvulos durante la secuencia de llenado de la cámara.

El sistema de bomba de fluido está ahora “cebado” y el controlador inicia la secuencia “Recoger óvulos”, ya sea automáticamente o cuando se activa manualmente mediante un actuador externo (no mostrado), como, por ejemplo, un pedal. Como se muestra en la Figura 12D, la primera y la quinta válvulas 202, 210 selectoras están cerradas formando un camino de fluido desde el puerto 112 de extracción y la aguja 114 hacia la cámara 110 de recolección de óvulos, y un camino de fluido desde la cámara 110 de recolección de óvulos hacia el depósito 108 de desechos a través de la segunda bomba 104 peristáltica. La segunda bomba 104 peristáltica se activa para mover fluido desde la aguja a través de la cámara de recolección de óvulos. Cualquier óvulo extraído será capturado en la cámara 110 de recolección de óvulos. El exceso de fluido se mueve al depósito 108 de desechos. Como se discutió anteriormente, la cámara de recolección de óvulos está configurada para no permitir que ningún óvulo sea movido al depósito 108 de desechos.

Una función de “alta presión” ejecutable por el controlador permite operar, por ejemplo, la secuencia de “enjuague” y la secuencia de “recolección de óvulos” con las bombas 102, 104 funcionando a un caudal más alto. Sin embargo, las velocidades a las que funciona cada una de las dos bombas 102, 104 pueden ajustarse a cualquier velocidad adecuada.

Con referencia ahora a la Figura 13, un esquema de flujo de proceso principal de alto nivel muestra la estructura de orden y secuencia del sistema 100 de bomba de fluido ejecutable a través del controlador (no mostrado). Una vez que se enciende el sistema 100, se ejecuta una secuencia de inicialización automática, donde el controlador establece comunicación con todos los actuadores (es decir, válvulas selectoras, bombas) y sensores (si están disponibles) así como la interfaz de usuario y el hardware de control del controlador.

En la Figura 14A-E se muestra una interfaz 300 de usuario típica del controlador. La interfaz de usuario puede ser una pantalla táctil que permite al usuario acceder a todos los modos de funcionamiento. Después del encendido inicial, se puede mostrar al usuario un diseño de pantalla como el que se muestra en la Figura 14A. En este estado, el procesador del controlador ejecuta un bucle de espera hasta que el usuario selecciona una función. La interfaz de usuario que se muestra en la Figura 14A también proporciona información sobre las temperaturas actuales medidas en el depósito 106 de solución salina calentada y la cámara 110 de recolección de óvulos.

Las Figuras 14B-E muestran la pantalla de la interfaz de usuario en las diferentes secuencias. Cada secuencia puede iniciarse a través de un actuador externo (por ejemplo, pedal) o, alternativamente, las secuencias pueden ser ejecutadas automáticamente por el controlador preprogramado. Preferiblemente, la interfaz de usuario está “bloqueada” hasta que se completa cada secuencia.

Además, se pueden usar diferentes colores de fondo para indicar el estado actual de funcionamiento del sistema 100 de bomba de fluido. Por ejemplo, durante la secuencia de inicio, el fondo de la pantalla puede ser azul, durante la secuencia “Recoger óvulos”, la pantalla el fondo puede ser verde, durante la secuencia “Enjuague”, el fondo de la pantalla puede ser naranja y la secuencia “Elevar Presión” puede estar indicada por un fondo de pantalla rojo.

La figura 15 representa un ejemplo de un diseño del sistema 100 de bomba de fluido en diferentes vistas, es decir (a) vista superior, (b) vista en perspectiva, (c) vista lateral y (d) vista frontal. En esta realización, el sistema 100 de bomba de fluido está acoplado a una mesa 400 mediante un brazo 402 móvil. El panel 404 frontal comprende la cámara 110 de recolección de óvulos, el depósito 106 de solución salina y una pantalla 300 de interfaz de usuario.

Los expertos en la técnica apreciarán que las realizaciones anteriores se han descrito solo a modo de ejemplo y no en ningún sentido limitativo, y que son posibles diversas alteraciones y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una cámara (1) de óvulos que comprende; un recipiente que se puede hacer hermético, que comprende al menos una pared lateral, una pared (2) superior plana y una pared (3) inferior plana, siendo transparente al menos una porción de la pared superior y al menos una porción de la pared inferior es permeable a la luz; un filtro (4) con un tamaño de poro de más de 10 micrómetros, apropiado para la recolección de óvulos, y que está configurado para separar el recipiente en una primera cámara interna de recolección de óvulos y una segunda cámara interna, en el que en uso, la cámara de óvulos puede ser sostenida en una orientación de recolección donde el filtro está en un plano horizontal y una orientación de inspección donde el filtro está en un plano vertical, dicha cámara de óvulos comprende además una primera entrada (7) que se puede sellar y que se coloca en una pared superior o una pared lateral asociada con dicha primera cámara interna de recolección de óvulos, una primera salida (9) que puede sellarse y que está colocada en una pared lateral o una pared superior asociada con dicha segunda cámara interna, en la que dicho filtro está dispuesto dentro del recipiente entre dicha primera entrada y dicha primera salida, y en el que el filtro se extiende perpendicular a la pared inferior o en un ángulo de entre 45 ° y 90 ° grados desde la pared inferior.

2. Una cámara de óvulos como en la reivindicación 1, en la que la entrada y la salida son autosellantes y/o en la que la cámara de óvulos está provista de un tubo desmontable unido a una de las entradas o salidas.

3. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el filtro se extiende en un ángulo entre 70 ° y 90 ° desde la pared inferior.

4. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que el filtro tiene un tamaño de poro de entre 20 y 100 pm con un rango preferido de entre 40 y 80 pm, para permitir que las células sanguíneas pasen pero no los óvulos, más preferiblemente entre 40 y 60 pm o menos.

5. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el filtro tiene un reborde en el extremo superior para evitar que los óvulos se peguen.

6. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que las paredes laterales se estrechan ambas en la dirección desde la primera cámara interna hasta la segunda cámara interna y/o en la que cuando la pared inferior se encuentra con la pared lateral en la primera cámara interna, se presenta una pendiente.

7. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la cámara de óvulos comprende además un sensor de aire adaptado para detectar si se aspira aire en la primera cámara interna y/o en la que la cámara de óvulos comprende además un puerto de salida de aire.

8. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la cámara de óvulos comprende además un deflector colocado en la primera cámara interna de recolección de óvulos entre el puerto de entrada y el filtro, el deflector se adapta para reducir la turbulencia del fluido cuando el fluido entra en la primera cámara interna colectora de óvulo, en la que opcionalmente el deflector está unido a la pared superior y/o en el que el deflector es integral a la pared superior y sobresale hacia abajo desde la tapa (superficie inferior de la pared superior) hacia la cámara en una configuración de visualización.

9. Una cámara de óvulos como en la reivindicación 8, en la que el deflector tiene forma de V.

10. Una cámara de óvulos como en la reivindicación 8, en la que el deflector es lineal y preferiblemente de entre 1 mm y 5 mm de ancho o en el que el deflector está a 90-95 ° de la parte de la cámara a la que está unido.

11. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en la que hay un espacio de aproximadamente 1-5 mm entre el deflector y la pared inferior, preferiblemente en el que hay un espacio de 1 mm a 3 mm entre cada extremo del deflector lineal y las paredes laterales.

12. Una cámara de óvulos como en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que otro filtro cubre el puerto de salida en el lado interior de la cámara.

13. Un sistema de recolección de óvulos que comprende la cámara de óvulos de cualquiera de las reivindicaciones anteriores y una estación de bombeo; dicha cámara de óvulos conectada a través del primer puerto de entrada a un primer tubo y aguja y además conectada a un segundo tubo a través del puerto de salida; dicha estación de bombeo comprende una primera bomba de cebado asociada con un depósito de líquido estéril y el primer tubo y una segunda bomba de aspiración asociada con el segundo tubo y adaptada para extraer fluido a través de la aguja, a través de la cámara de óvulos al tubo de salida.

14. Un sistema de recolección de óvulos como en la reivindicación 13, en la que la bomba de cebado es una bomba peristáltica y la bomba de aspiración es una bomba peristáltica o una bomba de vacío.

15. Un sistema de recolección de óvulos como en las reivindicaciones 13 o 14, en el que la cámara de óvulos se aloja dentro de una carcasa calentada y preferiblemente en el que al menos parte de la carcasa calentada permite ver la cámara de óvulos y/o en el que la carcasa calentada está adaptada para contener la cámara de óvulos en la “orientación de recolección”.