ES2868774T3 - Composición que contiene extracto mixto de morera y corteza de poria cocos para prevenir, mejorar o tratar trastornos neurodegenerativos - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurológica degenerativa, que comprende un extracto mixto de morera y piel de Poria cocos como un ingrediente activo.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición que contiene extracto mixto de morera y corteza de poria cocos para prevenir, mejorar o tratar trastornos neurodegenerativos

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición que comprende el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos para prevenir, mejorar o tratar trastornos neurodegenerativos.

Técnica relacionada

La enfermedad neurológica degenerativa es una enfermedad en la que la función mental se deteriora debido a la pérdida gradual estructural y funcional de neuronas. La enfermedad neurológica degenerativa puede ir acompañada de síntomas como demencia, anomalía extrapiramidal, anomalía cerebelosa, alteración sensorial y trastorno del movimiento debido a la degeneración de las células nerviosas en áreas específicas del sistema nervioso. Además, pueden ocurrir síntomas complejos debido a múltiples anomalías al mismo tiempo. La enfermedad se diagnostica según la manifestación clínica del paciente. Sin embargo, los síntomas varían ampliamente y las diferentes enfermedades a menudo tienen síntomas clínicos comunes, lo que dificulta el diagnóstico (Soc. Sci. Med. Vol. 40. no.

6, págs. 847-858, 1995).

La enfermedad neurológica degenerativa es un síntoma de que la enfermedad se desarrolla lentamente y, a menudo, está provocada por el envejecimiento. Una vez que la enfermedad se ha desarrollado, la enfermedad progresa continuamente durante varios años o décadas hasta la muerte, y el tratamiento fundamental es difícil, por lo que la carga social es grande. Se sabe que es muy probable que las influencias genéticas, como los antecedentes familiares, sean la causa de la enfermedad, pero los factores adquiridos también juegan un papel importante. Los trastornos neurológicos degenerativos pueden clasificarse según sus síntomas clínicos, como demencia progresiva (enfermedad de Alzheimer, etc.), trastornos neurológicos (como enfermedad de Pick), trastornos de la postura y del movimiento (como enfermedad de Parkinson), ataxia progresiva, atrofia muscular y debilidad, trastornos sensoriales y motores, etc. (International Journal de Engineering and Technology, Vol. 2, No. 4, Agosto de 2010 Classification of Neurodegenerative Disorders Based on Major Risk Factors Employing Machine Learning Techniques).

^{La citotoxicidad de la placa A}p ^{y las marañas de tau hiperfosforilada está atrayendo la atención como causa directa} de la demencia de Alzheimer, una enfermedad cerebral degenerativa típica.

^{El A}p ^{se produce a partir del precursor APP y se produce por la acción de enzimas como la} p^{-secretasa y la} Y^{-secretasa, y se distribuye fuera de las células nerviosas. Cuando la concentración de A}p ^{es baja, está en estado disuelto, pero cuando está por encima de cierto nivel, las proteínas A}p ^{se unen entre sí para formar una placa senil insoluble. Esta} sustancia puede destruir las células nerviosas periféricas provocando inflamación y neurotoxicidad. Por ejemplo, se cree que la muerte neuronal y la microgranulosis observadas en pacientes con enfermedad de Alzheimer están asociadas con ^{la placa senil. Los resultados de las pruebas in vitro mostraron que A}p ^{podría inducir la activación de células microgliales} (macrófagos cerebrales). Esto respalda la hipótesis de que la microgranulosis y la inflamación cerebral que se encuentran en el cerebro de los pacientes con enfermedad de Alzheimer es una causa principal de enfermedad de Alzheimer inducida ^{por A}p^{. Hasta la fecha, no ha habido terapias ampliamente aceptadas o terapias que se espere que disuelvan notablemente A}p ^{una vez que se forma la placa senil, o que prevengan la formación de depósitos.}

La tau consta de cuatro partes: la parte que sobresale N-terminal, el dominio de agregación de prolina, el dominio de unión de micro-orgánulos y el C-terminal (Mandelkow et al., Acta. Neuropathol., 103, 26-35, 1996). Desempeña un papel en la conexión de los microtúbulos que forman la estructura física de las células nerviosas. Se sabe que las enfermedades degenerativas del cerebro, como la tauopatía, están provocadas por tau anormalmente hiperfosforilada o transformada en las células nerviosas del sistema nervioso central. La enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Pick, la demencia frontotemporal y el parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17), etc., son tauopatías típicas (Lee et al., Annu. Rev. Neurosci., 24, 1121-1159, 2001; Bergeron et al., J. Neuropathol. Exp. Neurol., 56, 726-734, 1997; Bugiani et al., J. Neuropathol. Exp. Neurol., 58, 667-677, 1999; Delacourte et al., Ann. Neurol., 43, 193-204, 1998; Ittner y Gotz, Nat. Rev. Neurosci., 12, 65-72, 2011).

En el estudio de Alzheimer de la década de 1980, se sugirió que los factores neurotróficos tenían potencial terapéutico para los trastornos neurológicos degenerativos (Nature. 3-9 de septiembre de 1987; 329 (6134): 65-8. Amelioration of cholinergic neuron atrophy and spatial memory impairment in aged rats by nerve growth factor). Los estudios han demostrado que las neuronas colinérgicas en el prosencéfalo basal, perdidas debido al envejecimiento, que se sabe que es una de las causas de la enfermedad de Alzheimer, se restauran mediante la administración del factor de crecimiento nervioso (NGF) al ventrículo lateral, lo que resulta en una mejora de la capacidad de memoria de los animales de experimentación. Por tanto, se han continuado los estudios para tratar las enfermedades neurológicas degenerativas utilizando factores neurotróficos. En un estudio posterior, se llevó a cabo un estudio para restaurar la función del nervio motor inyectando factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofina-3 (NT-3), neurotrofina-4 (NT-4) y factor neurotrófico ciliar (CNTF), que son la familia de factores neurotróficos en animales de experimentación que deterioraron la función del nervio motor al nodular el nervio facial y el nervio ciático, y se obtuvieron resultados positivos (Nature. 24-31 de diciembre de 1992; 360 (6406): 757-9. Brain-derived neurotrophic factor prevenís the death of motoneurons in newborn rats after nerve section.). Además, en el experimento en el que se utilizó un ratón recombinante (wobbler) con una enfermedad en la que el número y la función de las neuronas motoras se perdían gradualmente a medida que avanzaba el envejecimiento, se incrementó el número de neuronas motoras y se mejoró la función mediante la administración de BDNF y CNTF al ratón (Science. 19 de agosto de 1994; 265 (5175): 1107-10. Arrest of motor neuron disease in wobbler mice cotreated with CNTF and BDNF). Además, de los estudios mencionados anteriormente, se ha informado de que los factores neurotróficos mejoran la memoria, la cognición y los trastornos del comportamiento en animales de experimentación aumentando el número y la función de las neuronas en varios modelos neuropáticos sensoriales y motores.

El nombre científico de la morera es Morus alba ( ^ Í S í )j y cuando el fruto de la morera de hoja caduca es magenta, se recoge, se seca y se utiliza como hierba medicinal. En la medicina oriental, se sabe que se usa para tratar mareos, tinnitus, sed y diabetes, etc. En Japón, tiene el efecto de tratar Yanghyulguopoong y Wind-Heat, y se sabe que se aplica a tratamientos como tónicos, analgésicos, insomnio, tinnitus, mareos, dolor de espalda y estreñimiento, etc. (Namba, T., The Encyclopedia of Wakan-Yaku with Color Pictures vol. 1 Hoikusha, Osaka, Japón, 1993). En Donguibogam, la morera trata la sed y beneficia a cinco órganos, y la morera tiene las fuerzas vitales de la morera (W ) (Comité de traducción al coreano de Donguibogam, Donguibogam, Namsandang, Seúl, Corea, 2000). En la farmacopea china (CP), también se prescriben medicamentos para el tratamiento de mareos, tinnitus, insomnio y sed, etc.

La morera tiene antocianina, ácido fenólico y flavonoide, etc., como componentes principales y se ha informado que el componente individual aislado y su extracto tienen actividad de disminución de glucosa en sangre, inhibidora de la MAO (monoaminooxidasa), efecto antioxidante y efecto protector de las células neuronales.

El nombre científico de Bokryeong (T^) es Pona cocos. Pona cocos es una planta de la clase Polyporaceae, en el orden Aphyllophorales, en la clase Eubasidiomycetes, Hymenomycetidae. Poria ^cocos es una clase de hongo perteneciente al bacilo, que es un hongo de pudrición parda, que es una clase de organismo saprófito del pino, pero también es parasitario de la raíz del pino vivo. El micelio crece mientras se ramifica a blanco y las hifas comienzan a crecer juntas. Cuando se mantienen las condiciones ambientales adecuadas, como la temperatura y la humedad, se forman grumos duros de esclerocios. Esto se llama bokryeong. Según el color del interior, el blanco es Poria cocos lobo, rosa rosa es Jeokbokryeong. La capa exterior de Poria cocos se llama piel de Poria cocos.

Los principales componentes del Poria cocos son ácido parquímico (C³³H⁵²O⁵), ácido pinicólico (C³⁰H¹⁸O³), ácido 3p-Hidroxi-lanosta-7.9(11),24-Trien-21-oico, ácido tumulósico (C³¹H⁵⁰O), ácido ebricoico (C³¹H⁵⁰O³) y similares. También contiene ácido purgimínico, ácido ebricoico, ácido polipoténico A, C y triterpenoides, etc. Y también contiene ergosterol, lecitina, adenina, colina, glucosa, fructosa y proteína, y una gran cantidad de sustancias inorgánicas.

Poria cocos es dulce y la naturaleza de Poria cocos es cálida, y su sabor y propiedades son todos ligeros, por lo que se dice que es una sustancia medicinal con propiedades frescas. En la literatura pasada, se describe que el Poria cocos puede aliviar la sed, descargar la orina sin problemas, eliminar la humedad, moderar la condición corporal y mejorar la energía al armonizar la función del sistema digestivo, al suavizar la cintura, la circulación de la sangre abdominal se alivia bien. Se utilizó principalmente para prescripciones relacionadas con la memoria. En artículos recientes, se han reportado efectos antidiabéticos y anticancerígenos de Poria cocos (Ling Hui, Evaluation of the chemotherapeutic and chemopreventive potential of triterpenoids from Poria cocos, Ling Hui, doctoral thesis of department of pharmacy, Universidad Nacional de Singapur, 2010).

La piel de Poria cocos es la capa exterior del esclerotio de Poria cocos perteneciente a las polyporaceae. Se conoce como una sustancia medicinal que tiene el efecto de moderar el edema al liberar agua. Especialmente, contiene de forma abundante ácido triterpénico poricoico a base de lorostano, y Donguibogam afirma que la piel de Poria cocos se utiliza como un componente de Opisan (cáscara de mandarina, pericarpio de arrecae, piel de jengibre, cáscara de morus alba) recetado para el edema. En estudios recientes, se ha informado que la piel de Poria cocos tiene efectos terapéuticos como diurético, estimulación urinaria y reducción del edema, etc. (Triterpenes from the Surface layer of Poria cocos, Takaaki tai, Phytochem, vol. 39, no. 5, 1995; Urinary metabonomic study of the Surface layer of Poria cocos as an effective treatment for chronic renal injury in rats, ying yong zhao et al, Journal of Ethnopharmacology, vol. 148, no. 2, s2013).

Con estos antecedentes, los inventores han realizado estudios para desarrollar materiales para la composición farmacéutica y la composición de alimentos para la prevención, mejora y tratamiento eficaces de enfermedades neurológicas degenerativas. Como resultado, los inventores de la presente invención confirmaron que estos extractos de hierbas muestran una actividad de recuperación de la memoria significativa en un modelo de neuropatía cerebral inducida por diversas lesiones cerebrales o fármacos inhibidores de la memoria durante un estudio de actividad neurosicológica de la morera y la piel de Poria cocos. Además, se ha demostrado que estos extractos de hierbas inhiben la producción de sustancias que provocan la muerte de las células neuronales en el cerebro y protegen las células nerviosas al promover la expresión de proteínas que promueven la regeneración y diferenciación de las células neuronales. Los presentes inventores han completado la presente invención confirmando que cuando se mezclan los extractos de hierbas de morera y piel de Poria cocos en una cierta proporción, muestran un efecto máximo, en comparación con el extracto de hierbas como un solo componente.

Descripción detallada de la invención

Problema técnico

Es un objeto de la presente invención proporcionar una composición farmacéutica para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas y una composición para usar en la prevención o mejora de una enfermedad neurológica degenerativa que comprende un extracto mixto de morera y piel de Poria ^cocos como un ingrediente activo.

También se describe un alimento funcional saludable para prevenir y mejorar las enfermedades neurológicas degenerativas, que contiene un extracto mixto de morera y piel de Poria cocos como un ingrediente activo.

Solución técnica

Para lograr el objeto anterior, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas, y una composición para usar en prevención o mejora de una enfermedad neurológica degenerativa que comprende un extracto mixto de morera y piel de Poria cocos como un ingrediente activo. También describe un alimento funcional saludable para prevenir y mejorar las enfermedades neurológicas degenerativas, que contiene un extracto mixto de morera y piel de Poria cocos.

Efecto ventajoso

Según la presente invención, el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos inhibe la producción de amiloide-p (Abeta) y la fosforilación de tau que puede provocar enfermedades cerebrales degenerativas al inducir la muerte neuronal, y muestra un efecto de protección de las células nerviosas al promover la producción de NGF, que es un factor que promueve la supervivencia y diferenciación de las células neurales. Además, muestra un efecto de inhibición de la acetilcolina esterasa (AChE) para aumentar la conducción nerviosa y mediar la acción de mejora de la memoria. Por tanto, el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos se puede usar eficazmente para el desarrollo de una composición farmacéutica para prevenir y tratar enfermedades neurológicas degenerativas, incluida la demencia, o para el desarrollo de alimentos saludables para prevenir y mejorar las enfermedades neurológicas degenerativas.

Breve descripción de los dibujos

Fig. 1 muestra los resultados obtenidos al inyectar un extracto mixto de hierbas, un extracto individual y un fármaco de control en un modelo que induce neurotoxicidad con beta amiloide y tinción con NeuN, un marcador de células neurales.

Fig. 2 muestra los resultados obtenidos de un extracto mixto, un extracto individual y un fármaco de control a un modelo inducido por neurotoxicidad con beta amiloide y tinción con FJB, un marcador de muerte celular.

Modo de la invención

A continuación, se describirá en detalle la presente invención.

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas, que comprende un extracto mixto de morera y la piel de Poria cocos como un ingrediente activo.

El extracto mixto de la presente invención se puede proporcionar según un método convencional para preparar un extracto de hierbas, pero específicamente significa un extracto en bruto obtenido usando agua, alcohol o una mezcla de agua y alcohol. El alcohol que es uno de los disolventes de extracción puede ser, pero no se limita a, un alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, preferiblemente metanol, etanol, butanol o alcohol espirituoso, más preferiblemente etanol. Aquí, el alcohol espirituoso significa etanol producido al fermentar la materia prima del almidón o la materia prima del sacárido y destilarlo. Además, la mezcla de disolvente de agua y alcohol no está particularmente limitada y puede mezclarse en cualquier proporción deseada.

En una realización de la presente invención, el extracto mixto de la morera y la piel de Poria cocos se puede extraer con etanol del 60 al 80% (v/v), etanol del 65 al 75% (v/v) o 70% (v/v), pero no se limita a ello.

En otra realización de la presente invención, la relación en peso de la morera y la piel de Poria cocos puede ser de 4 a 7: 1,4 a 6: 1 o 5: 1, pero no se limita a ello.

El extracto mixto de la presente invención incluye todas las formas de un extracto obtenido extrayendo una mezcla de morera y Poria cocos y un extracto obtenido extrayendo por separado morera y Poria cocos por separado y luego mezclando cada extracto. Específicamente, la morera y la piel de Poria cocos se mezclan y extraen en la proporción en peso, o la morera y la piel de Poria cocos se extraen respectivamente mediante métodos apropiados, y luego cada extracto se mezcla en la proporción en peso.

Más específicamente, el extracto mixto de la presente invención se puede obtener como sigue. Primero, la morera y la piel de Poria cocos se lavan y se secan, respectivamente, y luego se cortan las hierbas secas para obtener las hierbas cortadas. El corte seco de morera y piel de Poría ^cocos se mezclan en una proporción en peso de 0,1 a 10 veces el peso de la piel de Porta cocos, y preferiblemente, la mezcla se prepara mezclando en una proporción en peso de morera: piel de Porta cocos = 4 a 7: 1. Se añade agua, alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono o una mezcla de agua y el alcohol inferior, preferiblemente etanol al 70% (v/v), a la mezcla de morera y piel de Porta cocos en una cantidad de 1 a 20 veces (v/p), o preferiblemente de 5 a 10 veces (v/p) el peso de la mezcla. Luego, la mezcla se somete a extracción a una temperatura de 10°C a 100°C, preferiblemente a temperatura ambiente durante 1 hora a 72 horas, preferiblemente 48 horas según extracción con agua fría, extracción con agua caliente, extracción ultrasónica, extracción con enfriamiento por reflujo, extracción por calor o extracción supercrítica. Preferiblemente, la extracción se puede realizar mediante extracción con agua fría una vez y concentración a presión reducida para producir un extracto mixto de morera y piel de Porta cocos.

La composición que contiene el extracto mixto de morera y la piel de Porta cocos según la presente invención como un ingrediente activo puede usarse para el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas. En consecuencia, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas, que comprende un extracto mixto de morera y piel de Porta cocos como ingrediente activo y un uso de un extracto mixto de morera y piel de Porta cocos para la preparación de un agente terapéutico para enfermedades neurológicas degenerativas, y un método para tratar una enfermedad neurológica degenerativa que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del extracto mixto de morera y piel de Porta cocos.

Como se describió anteriormente, la enfermedad neurológica degenerativa según la presente invención significa una enfermedad degenerativa de la función mental causada por la pérdida gradual estructural y funcional de células nerviosas (neuronas). Específicamente, incluye enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, síndrome de Guilin-Barre, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Lou Gehrig, demencia progresiva causada por muerte neuronal gradual y ataxia progresiva, etc.

En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas que contiene el extracto mixto de morera y piel de Porta cocos como un ingrediente activo en una cantidad de 0,01 a 90 partes en peso, 0,1 a 90 partes en peso, 1 a 90 partes en peso o 10 a 90 partes en peso, basado en 100 partes en peso de la composición farmacéutica total, pero no se limita a ello, y puede variar dependiendo de la condición y el tipo y progreso de la enfermedad.

En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas que contiene el extracto mixto de morera y piel de Porta cocos como ingrediente activo puede formularse en preparaciones farmacéuticas para la prevención y el tratamiento de trastornos neurológicos degenerativos, incluidos vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Los ejemplos del vehículo, excipiente y diluyente incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma de acacia, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, metilhidroxibenzoato, propilhidroxibenzoato, talco, estearato de magnesio y aceite mineral.

La composición de la presente invención puede formularse en forma de preparaciones orales tales como polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas, suspensiones, emulsiones, jarabes, aerosoles y una forma de preparación externa, supositorio o solución inyectable esterilizada según un método convencional para prepararlos en forma de medicamentos. En general, en el caso de la formulación, se puede preparar usando un diluyente tal como una carga, un extensor, un aglutinante, un agente humectante, un desintegrante, un tensioactivo o un excipiente que se usa habitualmente. Las preparaciones en forma sólida para administración oral incluyen comprimidos, píldoras, polvos, gránulos, cápsulas y similares, que pueden contener al menos un excipiente tal como almidón, carbonato cálcico, sacarosa, lactosa, gelatina y similares. Además de los excipientes simples, también se pueden usar lubricantes como el estearato de magnesio y el talco. Las preparaciones líquidas para uso oral incluyen suspensiones, soluciones, emulsiones y jarabes. Además de los diluyentes simples comúnmente usados tales como agua y parafina líquida, se pueden incluir varios excipientes tales como humectantes, edulcorantes, fragancias, conservantes y similares. Las formulaciones para administración parenteral incluyen soluciones acuosas esterilizadas, soluciones no acuosas, suspensiones, emulsiones, preparaciones liofilizadas y supositorios. Los ejemplos del agente de suspensión incluyen propilenglicol, polietilenglicol, aceite vegetal como aceite de oliva, éster inyectable como oleato de etilo y similares. Los ejemplos de la base de supositorio incluyen witepsol, macrogol, tween 61, manteca de cacao, laurinum y glicerogelatina, etc.

La presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad neurodegenerativa, que comprende administrar una composición farmacéutica que contiene el extracto mixto de morera y piel de Porta cocos como un ingrediente activo a un mamífero, incluido un ser humano, en una cantidad terapéuticamente eficaz.

La dosificación de la composición farmacéutica para la prevención y el tratamiento de enfermedades neurológicas degenerativas que contiene el extracto mixto de morera y piel de Porta cocos como un ingrediente activo de la presente invención puede variar dependiendo de la edad, sexo y peso corporal del paciente. Generalmente, una cantidad de 0,1 a 100 mg/kg, preferiblemente de 1 a 30 mg/kg, se puede administrar de una vez a varias veces al día. La dosis también puede aumentarse o disminuirse dependiendo de la vía de administración, el grado de enfermedad, el sexo, el peso corporal, la edad, el estado de salud, la dieta, el tiempo de administración, el método de administración, la velocidad de excreción y similares. Por consiguiente, no se pretende que la dosis limite el alcance de la invención de ninguna manera.

La composición farmacéutica que contiene el extracto mixto de morera y piel de Poria ^cocos de la presente invención se puede administrar en diversas vías a mamíferos tales como ratas, ratones, ganado y seres humanos. Se pueden esperar todos los modos de administración, por ejemplo, por oral, rectal o inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea, intrauterina dural o intracerebral.

El extracto mixto de morera y piel de Poria cocos según la presente invención tiene poca toxicidad y efectos secundarios y por lo tanto puede usarse de manera segura para un uso a largo plazo con fines preventivos.

También se describe una composición alimenticia que comprende el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos. El extracto mixto de morera y piel de Poria cocos inhibe la producción de sustancias que provocan la muerte de las células neuronales en el cerebro y promueve la expresión de proteínas que promueven la regeneración y diferenciación de las células nerviosas para proteger las células nerviosas y puede usarse de manera eficaz para la producción de alimentos funcionales saludables y alimentos en general que pueden mostrar el efecto de prevenir y mejorar las enfermedades neurodegenerativas en particular.

Específicamente, el alimento funcional saludable descrito en la presente invención está definido por la "Ley de Alimentos Funcionales saludables 2002" recientemente definida como "la funcionalidad y seguridad del cuerpo humano ha sido suficientemente establecida y el Aviso de la Administración de Alimentos y Medicamentos 2004-12 del Reglamento sobre el reconocimiento de ingredientes de alimentos o ingredientes funcionales saludables prescrito en la Ley ".

La composición alimenticia que contiene el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos como se describe se puede usar de diversas maneras como alimento para el alivio de síntomas de enfermedades neurológicas degenerativas. Como alimento al que se puede agregar el extracto de hierbas de la presente invención, varios alimentos tales como bebidas, gomas de mascar, té, complejos vitamínicos, alimentos funcionales saludables y bebidas funcionales saludables, y se pueden usar en forma de píldoras, polvos, gránulos, infusiones, comprimidos, cápsulas o bebidas.

La cantidad de extracto mixto de morera y piel de Poria cocos en el alimento como se describe es generalmente de 0,1 a 15% en peso, preferiblemente de 0,2 a 10% en peso, y en el caso de la composición de bebida funcional saludable, de 0,1 a 30 g, preferiblemente de 0,2 a 5 g, basado en 100 ml, puede ser incluido.

Cuando la composición alimenticia descrita se prepara en forma de bebida, no existen restricciones particulares sobre los ingredientes líquidos distintos de los que contienen los extractos de hierbas como ingredientes esenciales en las proporciones indicadas. Además, se pueden añadir varios agentes aromatizantes o carbohidratos naturales como ingrediente adicional, como bebidas ordinarias.

Los ejemplos de los carbohidratos naturales mencionados anteriormente incluyen monosacáridos tales como glucosa y fructosa; disacáridos como maltosa, sacarosa; polisacáridos tales como dextrina, ciclodextrina y similares, o alcoholes de azúcar tales como xilitol, sorbitol y eritritol, etc. Como aromas naturales distintos de los mencionados anteriormente, se pueden usar ventajosamente agentes aromatizantes naturales (taumatina, extracto de estevia (por ejemplo, rebaudiósido A, glicirricina, etc.)) y aromas sintéticos (sacarina, aspartama, etc.). La proporción de carbohidratos naturales es generalmente de aproximadamente 1 a 20 g, preferiblemente de aproximadamente 5 a 12 g por 100 ml de la composición total de la presente invención.

Además de lo anterior, la composición alimenticia descrita puede contener además varios aditivos tales como diversos nutrientes, vitaminas, minerales (electrolitos), saborizantes tales como aromas sintéticos y aromas naturales, colorantes y espesantes, ácido péctico y sus sales, ácido algínico y sus sales, ácidos orgánicos, espesantes coloidales protectores, agentes de ajuste del pH, estabilizantes, conservantes, glicerina, alcoholes, agentes carbonatantes usados en bebidas carbonatadas y similares. Además, las composiciones de la presente invención pueden contener zumos de frutas naturales y pulpa para la producción de bebidas de zumos de frutas y bebidas vegetales. Estos componentes se pueden utilizar de forma independiente o combinados. La proporción de tales aditivos no está particularmente limitada, pero generalmente se selecciona en el intervalo de 0 a aproximadamente 20 partes en peso por 100 partes en peso de la composición alimenticia total como se describe. En otra realización, la presente invención es un método para su uso en la prevención, mejora o tratamiento de una enfermedad neurológica degenerativa, que comprende administrar una composición que contiene un ingrediente activo de una combinación del extracto mixto de morera y piel de Poria cocos. Alternativamente, la presente invención describe un uso del extracto mixto de morera y piel de Poria cocos para prevenir, mejorar o tratar una enfermedad neurológica degenerativa. La dosis, forma de dosificación, método de administración, etc. de la composición que contiene extracto mixto de morera y piel de Poria cocos para tal método o uso son los mencionados anteriormente.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se explicará en detalle con referencia a los siguientes ejemplos y experimentos. Sin embargo, los siguientes ejemplos y experimentos son solo para ilustrar la presente invención, y el alcance de la presente invención no se limita a ellos.

<Ejemplo 1> Preparación de extracto de piel de Poria ^cocos según la presente invención

Se compró morera seca y piel de Poria cocos en una tienda de hierbas medicinales en el mercado de Kyungdong y se eliminaron los contaminantes y se utilizaron hierbas bien secas para el experimento. La morera y la piel de Poria cocos cortadas con una máquina cortadora se mezclaron en una relación en peso de 5: 1 en una cantidad de 300 g. Y se añadieron 3 L de una solución acuosa de etanol al 70% (v/v) a la mezcla de hierbas y la mezcla se enfrió a temperatura ambiente durante 48 horas. Después de la filtración, la mezcla se concentró a presión reducida y luego se liofilizó para obtener un extracto de hierbas en bruto (extracto en bruto) para dar el Ejemplo 1 (Ver Tabla 1).

Tabla 1

<Ejemplo comparativo 1> Preparación de extracto de morera

Se prepararon 200 g de la misma materia prima botánica de morera que en el Ejemplo 1 según el mismo método del Ejemplo 1 para obtener un extracto en bruto de morera, que se usó como Ejemplo Comparativo 1 (Ver Tabla 2). <Ejemplo comparativo 2> Preparación de extracto de piel de Poria cocos

Se prepararon 200 g de la misma materia prima botánica de piel de Poria cocos como en el Ejemplo 1 según el mismo método del Ejemplo 1 para obtener un extracto en bruto de piel de Poria cocos como en el Ejemplo Comparativo 2 (ver Tabla 2).

Tabla 2

<Ejemplos comparativos 3 a 8> Preparación de extractos mixtos en bruto de morera y piel de Poria cocos

La misma materia prima botánica que la morera y la piel de Poria cocos usada en el Ejemplo 1 se usó en el experimento. La morera y la piel de Poria cocos se cortaron con una cortadora, la morera y la piel de Poria cocos se mezclaron como se muestra en la Tabla 3, y luego se añadió una solución acuosa de etanol al 70% que tiene un volumen de 10 veces el volumen de la mezcla de hierbas a la mezcla de hierbas, y la mezcla se extrajo en frío a temperatura ambiente durante 48 horas, después de la concentración a presión reducida, la mezcla se liofilizó para obtener un extracto de hierbas en bruto (extracto en bruto), que se utilizó como ejemplos comparativos 3 a 8.

Tabla 3

<Ejemplo experimental 1> Prueba de mejora de la memoria y efecto de protección de las células nerviosas de los extractos mixtos de hierbas

<1-1> Preparación de animales de experimentación

Modelo de deterioro de la memoria inducido por escopolamina

Se utilizaron ratones ICR de seis semanas para el experimento y cada grupo experimental consistió en 8 animales. Después de 30 minutos de administración oral del fármaco conductor (ejemplo), fármaco comparativo (ejemplo comparativo) y donepezilo (fármaco de control), se administró por vía intraperitoneal 1 mg/kg de escopolamina. A los animales normales se les inyectó la misma cantidad de solución salina fisiológica. Se realizaron estudios de comportamiento después de 30 minutos de administración de escopolamina.

Modelo de infusión de Ap

En el experimento se utilizaron ratones ICR de seis semanas de edad. Los animales se anestesiaron, se fijaron en un aparato estereotáxico (Stoelting) y se inyectaron con 3 pl de vehículo (SCF artificial) o Ap⁴² durante 6 minutos usando una microjeringa Hamilton (equipada con una aguja de calibre 26).

Animales tratados con Ap⁴² se dividieron aleatoriamente en grupos experimentales. A partir de 2 días después de la administración de Ap⁴², el fármaco experimental y el fármaco de control positivo se administraron una vez al día durante 11 días.

El fármaco liofilizado, el fármaco comparativo y el fármaco de control se suspendieron en una solución acuosa de HPMC al 3% y todos los fármacos se prepararon el día del experimento.

Medición de proteínas en el cerebro

Para examinar la eficacia de extractos de hierbas mezclados en la producción de inductores de muerte de células nerviosas o sustancias involucradas en la protección celular, se administró a ratones ICR de seis semanas de edad el fármaco experimental, el fármaco comparativo y el fármaco de control durante 5 días. El quinto día, 4 horas después de la administración, se sacrificaron los animales experimentales y se separó el cerebro. En el experimento se utilizaron partes excepto el cerebelo y el bulbo raquídeo.

<1-2> Tarea de evitación pasiva

Los experimentos de evitación pasiva se realizaron en dos cajas cuadradas iluminadas y oscuras separadas de forma independiente. Las áreas iluminadas (20 x 20 x 20 cm) se iluminaron con lámparas incandescentes de 50 W. Las áreas iluminadas y oscuras (20 x 20 x 20 cm) se separaron 1 cm y se instalaron varillas de acero inoxidable de 2 mm. En la fase de habituación, las dos secciones se separaron mediante una puerta de guillotina (5 x 5 cm), y la puerta de guillotina se abrió después de 30 segundos después de colocar los animales de experimentación en la sección iluminada. Se permitió que los animales navegaran libremente. Cuando llegaron al área oscura, se cerró la puerta de guillotina y se sacaron los animales después de 3 segundos.

Los ensayos de adquisición se llevaron a cabo 24 horas después. Después de 30 minutos de administración del fármaco, se administró por vía intraperitoneal 1 mg/kg de escopolamina y 30 minutos más tarde se realizó el experimento de comportamiento. Los ratones experimentales se colocaron inicialmente en la zona iluminada y la puerta entre las zonas se abrió después de 30 segundos. Cuando los ratones experimentales entraron en el área oscura, se cerró la puerta de guillotina y se aplicó inmediatamente una descarga eléctrica en el pie a través de una varilla de acero inoxidable durante 2 segundos a una intensidad de 0,5 mA, y los animales se sacaron después de 10 segundos. Se midió el tiempo que los animales entraron a la zona oscura.

Después de realizar las pruebas de adquisición y dar un período de descanso de 24 horas, los animales experimentales se colocaron en un área iluminada para medir la prueba de retención y se midió el tiempo hasta entrar en el área oscura. Tanto la prueba de adquisición como la prueba de retención se realizaron para determinar el tiempo que tarda el ratón en entrar en los cuatro pies en una habitación oscura desde una habitación iluminada.

Como resultado, como se muestra en las Tablas 4 y 5 posteriores, el efecto de mejora de la memoria se confirmó en cada uno de los modelos de pérdida de memoria por escopolamina y modelo de inducción de la demencia de Alzheimer inducida por Ap42. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son extractos individuales de morera y piel de Poria ^cocos, y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria ^cocos, la mezcla 5: 1 de morera, piel de Poria cocos mostró un efecto significativo de mejora de la memoria espacial. El extracto mixto del Ejemplo 1 mostró una eficacia igual o superior a 1 mg/kg de donepezilo (DPZ), que se conoce como inhibidor de la acetilcolinesterasa.

Tabla 4

Tabla 5

<1 -3> Prueba de laberinto en Y

El experimento del laberinto en Y se realizó para investigar el efecto de la memoria a corto plazo. Los animales se colocaron en un brazo del laberinto en Y y se les permitió moverse libremente durante 8 minutos. Se midieron la alternancia espontánea y el número total de entradas. Cuando los animales se introdujeron consecutivamente en tres brazos, se definieron como entrada de alternancia, y la relación se calculó mediante la siguiente ecuación 1.

Ecuación 1

Relación de alternancia espontánea (%) = [(número de cambios) / (número total de entrada en el brazo - 2)j x 100

Como resultado, como se muestra en las Tablas 6 y 7, confirmamos el efecto de mejora de la memoria en el modelo de disminución de la memoria por escopolamina y el modelo de inducción de la demencia de Alzheimer inducida por Ap42. En particular, en comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son los extractos individuales de morera y piel de Poria ^cocos, y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria ^cocos, mezcla 5: 1 de morera y piel de Poria cocos según el Ejemplo 1 mostró un efecto de mejora cognitivo y de memoria significativo. En particular, el extracto mixto del Ejemplo 1 mostró mejor eficacia que el Donepezilo (DPZ) 1 mg/kg, que se conoce como inhibidor de la acetilcolinesterasa.

Tabla 6

1

Tabla 7

<1-4> Tarea de reconocimiento de objetos novedosos (NOR)

Dentro de una caja negra de 45 cm de ancho, 45 cm de largo, 50 cm de alto, se colocaron dos objetos de plástico del mismo tamaño pero de diferentes formas. A los animales experimentales se les permitió moverse libremente durante 8 minutos y se midió el tiempo dedicado a cada objeto (sesión de entrenamiento) 24 horas después, los animales experimentales se colocaron en una caja con un objeto familiar y un objeto nuevo en la sesión de entrenamiento y se midió el tiempo empleado en cada objeto (sesión de prueba). Los valores registrados se calcularon utilizando la siguiente ecuación (2), que se expresa como un resultado del reconocimiento de un nuevo objeto.

Ecuación 2

Tasa de reconocimiento de nuevos objetos (%) = Tiempo empleado en nuevos objetos / (Tiempo empleado en nuevos objetos Tiempo empleado en objetos experimentados)x100

Como resultado, como se muestra en las Tablas 8 y 9, confirmamos el efecto de mejora de la memoria en cada uno de los modelos de disminución de la memoria inducida por escopolamina y los modelos de Alzheimer inducidos por Ap42. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son extractos individuales de morera y piel de Poria cocos, y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos, la mezcla 5: 1 de morera, piel de Poria cocos mostró una mejora significativa cognitiva y de la memoria. En comparación con el Donepezilo (DPZ) 1 mg/kg, que se conoce como el inhibidor de la acetilcolinesterasa, el extracto mixto del Ejemplo 1 mostró el efecto de mejora cognitiva y de memoria equivalente en el modelo de inhibición de la formación de la memoria inducida por escopolamina, y mostró un efecto de mejora cognitiva y de memoria igual o superior al del modelo de administración de Ap42.

Tabla 8

Tabla 9

<1-5> Tinción inmunohistoquímica

Para la tinción inmunohistoquímica, el animal de infusión de Ap descrito en el Ejemplo Experimental 1 -1 se perfundió con 1 x PBS (solución salina tamponada con fosfato), se fijó con paraformaldehído al 4% y se extrajo el cerebro. Este se fijó en la misma solución durante un día y se almacenó en una solución de sacarosa al 30% y la solución se cambió cada dos días hasta que se congeló a 4°C. Después de eso, el tejido cerebral se congeló suficientemente a -20°C dejando caer el compuesto OCT (temperatura de corte óptima) en un criostato, y luego se convirtió en una sección de 30 qm de espesor y se almacenó a 4°C en una solución conservante. La tinción inmunohistoquímica se realizó con la porción del hipocampo. Los tejidos lavados con PBS se trataron con H²O² al 1 % durante 15 minutos. Después de eso, los tejidos se trataron con PBS 0,05 M, suero de cabra normal al 1,5%, albúmina de suero bovino 0,5 mg/ml, Triton X-100 al 0,3% y anticuerpo primario NeuN de cabra (1: 500) y se hicieron reaccionar a 4°C durante 24 horas para evitar reacciones no específicas. Después de que se eliminó el anticuerpo primario, el tejido se hizo reaccionar con un anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa (1: 200) durante 90 minutos, y el ABC se diluyó en el tampón y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. Después de lavar tres veces con PBS, el tejido se desarrolló con DAB al 0,02% y H²O² al 0,01 % y se sometió a deshidratación con etanol y xileno para preparar muestras de portaobjetos.

Para la tinción con FJB (Fluoro-Jade-B), las secciones de tejido se fijaron con PBS que contenía paraformaldehído al 4% durante 5 minutos y se almacenaron a -70°C. Al día siguiente, los portaobjetos secados durante 3 horas se sumergieron en una solución de nitrato de potasio y permanganato al 0,06% durante 10 minutos. Después de enjuagar con agua, los portaobjetos se empaparon en ácido acético al 0,1% y solución de FJB al 0,0004% (Calbiochem, San Diego, California, EE.Uu .) durante 20 minutos. Los portaobjetos se lavaron tres veces con agua destilada y se secaron a 55°C durante 10 minutos. Se utilizó un microscopio multifocal (Olympus, Japón) para la obtención de imágenes y las

1

fotografías se tomaron con una cámara de video con sistema de imágenes blandas.

Como resultado, como se muestra en la Fig. 1, la expresión de NeuN como un marcador de células neuronales fue mayor que la del grupo de control mediante la administración de extracto mixto de materias primas botánicas. Esto significa que la reducción de células neuronales se suprimió en el grupo de administración de extracto mixto de hierbas. Los extractos de morera y la piel de Poria ^cocos individuales tuvieron un efecto protector sobre las neuronas, pero su eficacia fue más débil que los extractos de hierbas mixtas. Donepezilo, el fármaco de control, no mostró efectos neuroprotectores.

Como se muestra en la FIG. 2, la expresión de FJB, un marcador de apoptosis, se disminuyó por el extracto mixto de hierbas en comparación con el control. Este resultado implica que el aumento en el número de células nerviosas identificadas en la Fig. 1 está mediado por la inhibición de la muerte de las células neuronales inducida por la agregación de beta amiloides.

<1-6> Medición de la producción de beta amiloide en el cerebro

Se llevaron a cabo experimentos ELISA para investigar el efecto inhibidor de extractos mixtos de hierbas en la producción de beta amiloide, que se sabe que es una de las principales causas de la enfermedad de Alzheimer.

Se extrajo el cerebro de animales normales en el Ejemplo Experimental <1-1> y luego se separó la región del hipocampo y se añadió tampón RIPA y se homogeneizó mecánicamente. Después de la centrifugación, se tomó el sobrenadante y se midió la concentración de beta amiloide (IBL). Se midió la cantidad de expresión de Ap40 en 1 mg de proteína.

Como resultado, como se muestra en la siguiente Tabla 10, se confirmó que la producción de beta amiloide se disminuyó notablemente mediante la administración del extracto mixto de hierbas. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son extractos individuales de morera y piel de Poria cocos, y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos, la mezcla 5: 1 de morera y piel de Poria cocos mostró un mayor efecto inhibidor en la formación de beta amiloide. Los extractos de hierbas individuales también mostraron actividad reductora de beta amiloide. Entre ellos, el extracto de morera mostró un efecto inhibidor relativamente fuerte en la formación de p-amiloide, y el efecto reductor de beta-amiloide se aumentó en el extracto mixto de materias primas botánicas cuando la proporción en peso de la morera era alta.

Donepezilo (DPZ), un inhibidor de la acetilcolinesterasa utilizado en la enfermedad de Alzheimer, no afectó la producción de beta amiloide a una dosis de 1 mg/kg.

Tabla 10

<1-7> Medición del nivel de NGF (factor de crecimiento nervioso)

Se llevaron a cabo experimentos ELISA para confirmar la eficacia de los extractos mixtos en la producción de NGF, conocida por ser una actividad de regeneración y diferenciación neuronal. Después de que se extrajeron los cerebros de animales normales en el Ejemplo Experimental <1-1>, se separó la región del hipocampo y se añadió tampón RIPA a la misma y se homogeneizó mecánicamente. Para la medición de NGF, se añadió y se homogeneizó mecánicamente un tampón de alto contenido en sal y en detergente correspondiente al peso de cada cerebro. Después de añadir 10 gl de HCl 4N y dejar reposar durante 15 minutos, el NGF unido al receptor se disoció, se añadió NaOH 4N y la mezcla se dejó reposar durante otros 15 minutos. El sobrenadante se extrajo mediante centrifugación y se midió la concentración de NGF en el cerebro usando un kit de medición de NGF (Millipore). La cantidad de NGF producida en 1 mg de proteína se muestra en la tabla.

Como resultado, como se muestra en la siguiente Tabla 11, se confirmó que la producción de NGF se aumentó significativamente mediante la administración del extracto mixto de hierbas. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son extractos individuales de morera y piel de Poria ^cocos, y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos. En el ejemplo 1 según la presente invención, una mezcla de morera y piel de Poria cocos 5: 1 mostró una mayor actividad promotora de la producción de NGF. Los extractos de hierbas individuales también estimularon la producción de NGF. Entre ellos, el extracto de piel de Poria cocos mostró un efecto promotor relativamente fuerte en la producción de NGF. En el extracto mixto de materias primas botánicas, cuando la relación en peso de piel de Poria cocos fue alta, el efecto promotor de la producción de NGF fue grande.

Donepezilo (DPZ), un inhibidor de la acetilcolinesterasa utilizado en la enfermedad de Alzheimer, no afectó la producción de NGF a una dosis de 1 mg/kg.

Tabla 11

<Ejemplo experimental 2> Identificación del efecto protector de células nerviosas de extractos de mezcla de morera y piel de Poria cocos in vitro.

<2-1> Medición de la actividad de la acetilcolinesterasa (AChE) en líneas de células nerviosas

Los inhibidores de la acetilcolinesterasa se han desarrollado y utilizado para varios inhibidores de la acetilcolinesterasa porque mejoran la capacidad de memoria y mejoran la demencia activando las neuronas colinérgicas al aumentar la concentración de acetilcolina en el neurotransmisor ganglionar. Se midió la actividad de la acetilcolinesterasa para confirmar el efecto inhibidor de la acetilcolinesterasa del extracto mixto de hierbas. Las células SH-SY5Y, una línea celular neuronal, se adquirieron de KCLB (Korean Cell Line Bank). Se inocularon células SH-SY5Y (1 x 106 células/pocillo) en placas de cultivo de 6 pocillos y se cultivaron en medio DMEM/F12 (medio Eagle modificado por Dulbecco) que contenía suero bovino fetal al 10% durante 48 horas. Después de 5 días de diferenciación usando medio DMEM/F12 que contiene ácido retinoico 10 gM y FBS al 3%, los Ejemplos, el Ejemplo Comparativo (10 gg/ml)

1

y el fármaco de control (donepezilo 10 pM), se trató Ap42. La lisis celular se realizó usando tampón RIPA (NaCI 150 mM, Triton X-100 al 0,5%, Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, NaF 25 mM, EGTA 20 mM, DTT 1 mM, Na3VO4 1 mM, cóctel inhibidor de proteasa), y el contenido de proteína se cuantificó con el reactivo BCA adquirido de Pierce. La actividad de la enzima acetilcolinesterasa se determinó mediante acetilcolina como sustrato según el método de Ellman. La tiocolina resultante producida por la acetilcolinesterasa se hizo reaccionar con DTNB y el 5-tio-2-nitrobenzoato resultante se determinó midiendo el cambio de absorbancia a 405 nm.

Como resultado, como se muestra en la Tabla 12 posterior, se confirmó que la actividad de la acetilcolinesterasa aumentada por el tratamiento con beta amiloide se normalizó mediante la administración del extracto mixto de hierbas. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son los extractos individuales de morera y piel de Poria cocos y los ejemplos comparativos 3 a 8 que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos. La mezcla de morera y piel de Poria cocos 5: 1 del Ejemplo 1 según la presente invención mostró una excelente actividad inhibidora de la actividad de la acetilcolinesterasa. Los extractos de hierbas individuales de los ejemplos comparativos 1 y 2 mostraron una ligera acción inhibidora de la acetilcolinesterasa, pero ambos extractos de hierbas individuales mostraron una eficacia menor que los extractos mixtos de hierbas. El efecto inhibidor de los extractos de hierbas fue similar al del Donepezilo (DPZ) 10 pM, que es un inhibidor de la acetilcolinesterasa y se usa en la enfermedad de Alzheimer.

Tabla 12

<2-2> Efecto de protección celular en la línea de células nerviosas

El efecto citoprotector de los extractos mixtos de hierbas se midió utilizando un ensayo MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) en un modelo que causa toxicidad en las líneas de células nerviosas mediante Ap42 agregado artificialmente. Se inocularon células SH-SY5Y (1x104 células/pocillo) en placas de cultivo de 96 pocillos y se cultivaron en DMEM/F12 (medio de Eagle modificado por Dulbecco: mezcla de nutrientes F-12) que contenía suero bovino fetal al 10% durante 48 horas. Después de 5 días de diferenciación usando medio DMEM/F12 que contiene ácido retinoico 10 pM y FBS al 3%, 6 horas después del tratamiento de los Ejemplos, el Ejemplo Comparativo y el fármaco de control (donepezilo 10 pM), Ap42 se trató durante un total de 48 horas, y después de 4 horas de tratamiento con 2 mg/ml de MTT, se disolvió formazona en DMSO y se midió la absorbancia a 590 nm.

Como resultado, se confirmó que la citotoxicidad inducida por el tratamiento con beta amiloide fue inhibida por la administración de extracto mixto de hierbas como se muestra en la Tabla 13 posterior. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son únicamente extractos de morera y piel de Poria cocos y los ejemplos comparativos 3 a 8 que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos, la mezcla 5: 1 de morera, piel de Poria cocos mostró un excelente efecto citoprotector. Donepezilo (DPZ), un inhibidor de la acetilcolinesterasa utilizado en la enfermedad de Alzheimer, mostró un bajo nivel de actividad citoprotectora a una dosis de 10 pM.

1

Tabla 13

<2-3> Medición de tau fosforilada en líneas celulares neuronales

Se midieron los niveles de tau fosforilada para confirmar el efecto inhibidor de extractos de hierbas en bruto en la hiperfosforilación de tau. Se sembraron células SH-SY5Y (1 x 106 células/pocillo) en placas de cultivo de 6 pocillos y se cultivaron en medio DMEM/F12 (medio Eagle modificado por Dulbecco) que contenía FBS al 10% (suero bovino fetal) durante 48 horas. Después de 5 días de diferenciación usando medio DMEM/F12 que contiene ácido retinoico 10 pM y FBS al 3%, después de 6 horas de tratamiento con el ejemplo, ejemplo comparativo (10 pg/ml) y un fármaco de control (donepezilo 10 pM), Ap42 fue tratado y cultivado durante un total de 48 horas. Después de la lisis celular usando tampón RIPA, se cuantificó el contenido de proteína con reactivo BCA adquirido de Pierce. La tau fosforilada se midió usando el kit de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA) de Tau humana [pS199] adquirido de Invitrogen.

Como resultado, se confirmó que el aumento de la fosforilación de tau inducido por el tratamiento con beta amiloide fue suprimido por el extracto mixto de hierbas como se muestra en la Tabla 14 posterior. En comparación con los ejemplos comparativos 1 y 2, que son extractos individuales de morera y piel de Poria ^cocos , y los ejemplos comparativos 3 a 8, que son extractos mixtos de morera y piel de Poria cocos, el efecto inhibidor de la fosforilación de tau fue excelente en la mezcla del Ejemplo 1 morera y piel de Poria cocos 5: 1. En particular, el efecto de inhibir la fosforilación de tau aumentó significativamente por los extractos mixtos en comparación con los extractos individuales de morera y piel de Poria cocos. Donepezilo (DPZ), un inhibidor de la acetilcolinesterasa utilizado en la enfermedad de Alzheimer, no mostró ningún efecto inhibidor en la fosforilación de tau a una dosis de 10 pM.

Tabla 14

<2-4> Medida del nivel del factor de crecimiento nervioso (NGF) en líneas de células nerviosas

Se midieron los niveles de NGF para determinar el mecanismo de mejora cognitiva de los extractos mixtos de hierbas. Se inocularon células SH-SY5Y (1 x 106 células/pocillo) en placas de cultivo de 6 pocillos y se cultivaron en medio DMEM/F12 (medio Eagle modificado por Dulbecco) que contenía suero bovino fetal al 10% durante 48 horas. Después de 5 días de diferenciación usando medio DMEM/F12 que contenía ácido retinoico 10 pM y FBS al 3%, a esto, se trató el ejemplo, el ejemplo comparativo (10 pg/ml) y el fármaco de control (donepezilo 10 pM). Las células se lisaron usando tampón RIPA y el contenido de proteínas se cuantificó con reactivo BCA adquirido de Pierce. Los niveles de NGF se midieron usando un kit de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas humanas (ELISA) del factor de crecimiento del nervio beta adquirido de Abcam.

Como resultado, como se muestra en la Tabla 15, se confirmó que el extracto de mezcla de hierbas aumentó la producción de NGF. En este momento, el beta amiloide no afectó a la producción de NGF. Como resultado de comparar la acción de la producción de NGF de extractos de hierbas individuales, la eficacia del extracto de piel de Poria ^cocos fue alta. Entre los extractos de mezcla de hierbas, la combinación 5: 1 fue la más eficaz.

Donepezilo (DPZ), que se usa como un inhibidor de la acetilcolinesterasa en la enfermedad de Alzheimer, no mostró el efecto de promover la producción de NGF a una dosis de 10 pM.

Tabla 15

1

Como se describió anteriormente, el extracto de morera, que es el material del extracto mixto de hierbas de la presente invención, parece promover la supervivencia de la neurona y activar su función eliminando el beta amiloide, que se considera que es una causa principal de la demencia de Alzheimer. Se cree que el extracto de piel de Poria ^cocos, otro material, es superior a la eficacia de protección de las células nerviosas a través de la promoción de la producción de NGF, especialmente, conocido como factor protector neuronal. Además, cada extracto de hierbas no mostró una alta eficacia para inhibir el efecto inhibidor de la acetilcolinesterasa, que actualmente es el principal mecanismo de acción de los medicamentos para la demencia de Alzheimer. Sin embargo, cuando se mezclaron, se incrementó la eficacia. Estos resultados sugieren que los extractos de morera y piel de Poria cocos protegen las neuronas y aumentan sinérgicamente su capacidad de memoria mediante diferentes mecanismos. Especialmente, cuando se mezclan en una relación en peso de 5: 1, se considera que la eficacia es excelente.

Por lo tanto, el extracto mixto de hierbas según la presente invención inhibe la aparición o el progreso de la enfermedad al inhibir la producción de beta amiloide y la fosforilación de tau, que provocan enfermedades cerebrales degenerativas al provocar la muerte de las células neuronales, y mejora la capacidad de memoria al inhibir la acetilcolina esterasa. También promueve la producción de NGF, que promueve la protección neuronal y la diferenciación neuronal. Por lo tanto, se puede utilizar de forma útil para la prevención, la mejora y el tratamiento de la demencia progresiva debida a la muerte gradual de neuronas, como la demencia de Alzheimer y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, la enfermedad de Huntington, la esclerosis múltiple, el síndrome de Guilin-Barre, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Lou Gehrig. También puede ser útil para la prevención, mejora y tratamiento de trastornos neurológicos degenerativos que incluyen trastornos de la postura y del movimiento, ataxia progresiva, atrofia y debilidad muscular, trastornos sensoriales y motores, etc.

A continuación, se describirá un ejemplo de preparación de una composición que contiene un extracto de fármaco en bruto del Ejemplo 1 de la presente invención. Sin embargo, debería entenderse que la presente invención no pretende estar limitada a los mismos, sino que se describe específicamente.

Ejemplo de preparación 1: preparación de inyecciones

Ejemplo 1 Extracto................................ 100 mg

Metabisulfito de sodio............................. 3,0 mg

Metilparabeno................................... 0,8 mg

Propilparabeno.................................. 0,1 mg

Agua destilada esterilizada para inyección.............. Cantidad adecuada

Los ingredientes anteriores se mezclan y se convierten en 2 ml mediante un método de preparación de inyección habitual, luego se rellenan en una ampolla de 2 ml y se esterilizan para preparar una inyección.

Ejemplo de preparación 2: preparación de comprimidos

Ejemplo 1 Extracto..... 200 mg

Lactosa......................... 100 mg

Almidón........................ 100 mg

Estearato de magnesio Cantidad adecuada

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Los componentes anteriores se mezclan y los comprimidos se preparan formando comprimidos según el método de preparación de comprimidos convencional.

Ejemplo de preparación 3: preparación de cápsulas

Ejemplo 1 Extracto..... 100 mg

Lactosa ....................... 50 mg

Almidón........................ 100 mg

Talco............................. 2 mg

Estearato de magnesio Cantidad adecuada

Los componentes anteriores se mezclan y rellenan en cápsulas de gelatina según el método de preparación convencional de cápsulas para preparar cápsulas.

Ejemplo de preparación 4: preparación de agente líquido

Ejemplo 1 Extracto de etanol ..................... 1000 mg azúcar........................................... 20 g

Maíz con alto contenido de fructosa ............................... 20 g

Incienso de limón ................................ Cantidad adecuada Después de agregar agua purificada, el volumen total de líquido 100 Me

Los componentes anteriores se mezclan según el método habitual para producir una preparación líquida, se rellenan en 100 ml de una botella marrón y se esterilizan para preparar una preparación líquida.

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Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurológica degenerativa, que comprende un extracto mixto de morera y piel de Poria ^cocos como un ingrediente activo.

2. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que la enfermedad neurológica degenerativa se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, síndrome de Guilin-Barre, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Lou Gehrig, demencia progresiva provocada por muerte neuronal gradual y ataxia progresiva.

3. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos se extrae con agua, un alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono o una mezcla de los mismos.

4. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos se extrae con 60 a 80% (v/v) de etanol.

5. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que la relación en peso de la morera y la piel de Poria cocos es de 4 a 7: 1.

6. La composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 1, en la que la relación en peso de la morera y la piel de Poria cocos es 5: 1.

7. Una composición para su uso en la prevención o mejora de una enfermedad neurológica degenerativa que comprende un extracto mixto de morera y piel de Poria cocos como un ingrediente activo.

8. La composición para su uso según la reivindicación 7, en la que la enfermedad neurológica degenerativa se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, síndrome de Guilin-Barré, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Lou Gehrig, demencia progresiva provocada por muerte neuronal gradual y ataxia progresiva.

9. La composición para su uso según la reivindicación 7, en la que el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos se extrae con agua, un alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono o una mezcla de los mismos.

10. La composición para su uso según la reivindicación 7, en la que el extracto mixto de morera y piel de Poria cocos se extrae con 60 a 80% (v/v). de etanol.

11. La composición para su uso según la reivindicación 7, en la que la relación en peso de la morera y la piel de Poria cocos es de 4 a 7: 1.

12. La composición para su uso según la reivindicación 7, en la que la relación en peso de la morera y la piel de Poria cocos es 5: 1.

13. La composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, en la que la composición es un alimento funcional saludable o una bebida funcional saludable.

14. La composición farmacéutica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o la composición para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, que se va a administrar por vía oral, intrarrectal, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intrauterina dural o intracerebral.