ES2857860T3 - Edulcorante que contiene composición de estevia tratada con enzimas y que tiene dulzor mejorado - Google Patents

Edulcorante que contiene composición de estevia tratada con enzimas y que tiene dulzor mejorado Download PDF

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Abstract

Edulcorante, que satisface la relación (1) a continuación: **(Ver fórmula)** en la que RA representa una proporción (%) de rebaudiósido A no glicosilado en rebaudiósido A total, RAG1 representa una proporción (%) de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo y RAG2 representa una proporción (%) de rebaudiósido A que tiene dos grupos glicosilo unidos al mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Edulcorante que contiene composición de estevia tratada con enzimas y que tiene dulzor mejorado
Campo técnico
La presente invención se refiere a un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor mejorada y, más particularmente, a un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor mejorada, que incluye el 90% en peso o más de glicósido de esteviol.
Técnica anterior
De manera tradicional, el azúcar se ha usado ampliamente como edulcorante para alimentos. En particular, se usa una gran cantidad de azúcar para bebidas de café, incluyendo café en lata, o refrescos, tales como bebidas carbonatadas, y similares. Sin embargo, existe una reciente tendencia a reducir la cantidad de azúcar que provoca obesidad, diabetes y caries dental, o usar un edulcorante que tiene alto dulzor en lugar de azúcar, debido a las tendencias hacia una salud mejorada y un bajo consumo de calorías. Tales edulcorantes que tienen alto dulzor se ejemplifican representativamente por un edulcorante de estevia extraído de la estevia, una planta perenne de Asteraceae, procedente de Paraguay, América del Sur. El consumo mundial de edulcorante de estevia es del 30% en América del Norte, el 20% en Corea, el 15% en Japón, el 20% en China y el 15% en otros países. El edulcorante de estevia puede clasificarse principalmente en dos tipos, concretamente un extracto de estevia (glicósido de esteviol), que se prepara a través de extracción y purificación a partir de plantas, y estevia enzimáticamente modificada, que se prepara añadiendo glucosa al extracto de estevia usando una enzima y dextrina preparada a partir de almidón.
En el edulcorante de estevia consumido en Corea, la estevia enzimáticamente modificada (nombrada en el Código de Aditivos Alimentarios) representa aproximadamente el 95% o más basándose en la cantidad total del mismo. Entre los edulcorantes de estevia, la estevia enzimáticamente modificada tiene la ventaja de que © tiene cualidad de dulzor parecida al azúcar y no tiene sabor amargo, y tiene sustancialmente cero calorías debido a un dulzor tan alto como de 100 a 250 veces el del azúcar; @ es resistente al calor y a los ácidos y, por tanto, cambia menos en cuanto a dulzor durante el procesado y la conservación; @ es difícil que los microorganismos lo usen como fuente de nutrientes, y no provoca sustancialmente caries en la cavidad bucal; © no provoca ninguna reacción de Maillard, y no se tuesta fácilmente en el procesado de alimentos; © reduce el sabor a encurtido; © reduce la acidez; @ la disminución resultante del punto de congelación es baja; © no aumenta la presión de permeación; © tiene un efecto sinérgico con otros edulcorantes, que es eficaz en la reducción de los costes del edulcorante; y @ tiene una cualidad de dulzor refrescante y alivia el sabor espeso de un edulcorante de sacarina.
Sin embargo, a pesar de las ventajas anteriores y la mejora de la cualidad de dulzor mediante una reacción enzimática y un procedimiento de purificación en un extracto de hojas de estevia, la estevia enzimáticamente modificada tiene la desventaja de que el aumento del dulzor es lento en comparación con otros edulcorantes de sacarina (azúcar, fructosa, etc.) y el regusto dulce permanece un tiempo relativamente largo y, por tanto, el dulzor resultante se vuelve escaso. Además, aparte del dulzor, el esteviósido, que es abundante en el edulcorante de estevia, tiene desventajas en las que el regusto incluye un sabor astringente o sabor amargo distintivo y, por tanto, a menudo no es adecuado para su uso en bebidas de café, refrescos y bebidas alcohólicas.
Así, se proponen métodos para someter glicósido de esteviol, que se compone principalmente de rebaudiósido A, a a-adición con glucosa, en los que, durante la reacción enzimática, se forma glucosa de cadena larga a partir de la glucosa añadida al rebaudiósido A y, el dulzor del edulcorante que contiene a-glicosil rebaudiósido A así obtenido disminuye en cierta medida en comparación con el rebaudiósido A. En particular, existe un problema de que permanece el regusto dulce, dando como resultado de ese modo un dulzor fuerte o desagradable.
Por consiguiente, con el objetivo de resolver tales problemas, se ha llevado a cabo una investigación exhaustiva sobre las mejoras de la cualidad de dulzor de estevia enzimáticamente modificada y, los presentes inventores han determinado de este modo un método para preparar fácilmente una composición de estevia enzimáticamente modificada, que es superior en cuanto a cualidad de dulzor en comparación con los métodos existentes, culminando de este modo en la presente invención.
[Lista de referencias]
[Bibliografía de patentes]
(Documento de patente 1) Patente coreana n.° 10-1535427 (Título: Method of preparing enzymatically modified Stevia sweetener having superior sweetness quality, solicitante: Daepyung Co. Ltd., fecha de registro: 3 de julio de 2015)
(Documento de patente 2) Patente coreana n.° 10-1531202 (Título: Improvement in sweetness quality of stevia extract, solicitante: San-Ei Gen F.F.I. Inc., fecha de registro: 18 de junio de 2015)
(Documento de patente 3) Patente coreana n.° 10-0888694 (Título: Method of preparing enzymaticaNy modified stevia having superior sweetness quality, solicitante: Daepyung Co. Ltd., fecha de registro: 6 de marzo de 2009) (Documento de patente 4) Patente coreana n.° 10-0851610 (Título: Sweetener and Method of preparing the same, solicitante: DIC Corporation, fecha de registro: 5 de agosto de 2008)
Divulgación
Problema técnico
Por consiguiente, la presente invención está destinada a proporcionar un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor mejorada. Específicamente, la presente invención está destinada a proporcionar un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor mejorada, que comprende el 90% en peso o más de glicósido de esteviol. Una composición de estevia enzimáticamente modificada convencional preparada sometiendo un extracto de estevia o glicósido de esteviol a glicosilación a través de modificación enzimática tiene un sabor amargo reducido en comparación con antes de la modificación enzimática, pero tiene la desventaja de que el regusto dulce remanente se vuelve intenso al aumentar el número de grupos glicosilo que se unen al glicósido de esteviol, incluyendo rebaudiósido A. Sin embargo, en la presente invención, se diseña un método para aumentar al máximo la cantidad de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo mediante la recristalización de la composición de estevia enzimáticamente modificada en presencia de un alcohol después de la modificación enzimática, permitiendo de ese modo la producción de una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor notablemente mejorada.
Solución técnica
La presente invención proporciona un edulcorante, que satisface la siguiente relación (1).
15 > (RAG1+RAG2)/RA > 3 , 87 (1)
En este caso, RA representa la proporción (%) de rebaudiósido A no glicosilado en rebaudiósido A total, RAG1 representa la proporción (%) de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo y RAG2 representa la proporción (%) de rebaudiósido A que tiene dos grupos glicosilo unidos al mismo.
El edulcorante satisface preferiblemente la siguiente relación (2).
1 , 17 > (RA+RAG1+RAG2)/TRA > 0 , 8 (2)
En este caso, TRA representa la proporción (%) de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total.
Además, el edulcorante satisface la siguiente relación (3).
32 , 8 > RAG1/RAG2 > 7 , 2 (3)
Más preferiblemente, el edulcorante satisface todas de las relaciones (1), (2) y (3).
El edulcorante contiene el 90% en peso o más de glicósido de esteviol.
Además, la presente invención proporciona un método para preparar un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada. El método de la presente invención incluye un procedimiento de cristalización que usa un alcohol, que no se aplica en un método convencional para preparar una composición de estevia enzimáticamente modificada, produciendo de ese modo un edulcorante que satisface la relación (1), (2) o (3). En particular, en comparación con una composición de estevia enzimáticamente modificada preparada mediante el método convencional, puede prepararse una composición de estevia enzimáticamente modificada, en la que se maximiza la cantidad de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo. La composición de estevia enzimáticamente modificada preparada de ese modo disminuye notablemente en cuanto al regusto dulce remanente y, por tanto, puede funcionar como edulcorante que tiene cualidad de dulzor mejorada.
El método de preparación de la invención incluye preferiblemente una primera etapa de mezclar glicósido de esteviol que contiene el 80% en peso o más de rebaudiósido A no glicosilado con beta-ciclodextrina a una razón en peso de 1:1 —3 para dar una mezcla que luego se disuelve en agua en una cantidad de dos a cuatro veces el peso de materias primas total y se ajusta a un pH de 5,0 — 6,0, 60 — 80°C y 20 — 50 Brix; una segunda etapa de añadir 0,1 — 3 partes en peso de ciclodextrina glucanotransferasa, basándose en 100 partes en peso del glicósido de esteviol usado como la materia prima en la primera etapa, y llevar a cabo una reacción enzimática primaria durante 24 — 50 h; una tercera etapa de añadir 0,5 — 2 partes en peso de glucoamilasa, basándose en 100 partes en peso del glicósido de esteviol usado como la materia prima en la primera etapa, al producto de reacción obtenido a través de la reacción enzimática primaria, en condiciones de un pH de 4,0 — 5,0 y una temperatura de 55 — 65°C, y llevar a cabo una reacción enzimática secundaria durante 1 — 3 h; una cuarta etapa de calentar el producto de reacción obtenido a través de la reacción enzimática secundaria hasta 85 ~ 95°C durante 1 ~ 3 h para desactivar de ese modo la enzima, y realizar filtración, separación, concentración y secado, seguido por cristalización con agitación durante 2 - 3 h en presencia de un alcohol; y una quinta etapa de someter el producto cristalizado obtenido en la cuarta etapa a filtración, lavado, concentración, esterilización y secado.
La composición de estevia enzimáticamente modificada obtenida de ese modo contiene un contenido de glicósido de esteviol total del 90 - 99% en peso, y la proporción de rebaudiósido A total (incluyendo ambos de rebaudiósido A sin reaccionar que no tiene grupo glicosilo rebaudiósido A glicosilado) en el glicósido de esteviol total es del 80% en peso o más, y preferiblemente del 80 - 99% en peso.
El peso de materias primas total en la primera etapa designa el peso total de glicósido de esteviol y betaciclodextrina.
El rebaudiósido A total de la composición comprende el 10 - 25% de rebaudiósido A sin reaccionar que no tiene grupo glicosilo, el 60 - 85% de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo, el 2 - 10% de rebaudiósido A que tiene dos grupos glicosilo y el 0 - 10% de la parte restante. La parte restante puede incluir rebaudiósido A que tiene tres o más grupos glicosilo. En el método para preparar la composición según la presente invención, el rendimiento puede representar el 60% o más basándose en el glicósido de esteviol usado como la materia prima.
En este caso, el glicósido de esteviol usado como la materia prima se prepara de una manera en la que se recristaliza un extracto de estevia que contiene el 40 - 60% en peso de rebaudiósido A con metanol o etanol y se filtra para dar glicósido de esteviol que contiene el 80% en peso o más, y preferiblemente el 90% en peso o más de rebaudiósido A no glicosilado.
Cuando se mezclan el glicósido de esteviol y la beta-ciclodextrina en la primera etapa, puede usarse betaciclodextrina en forma cristalina.
En el método para preparar el edulcorante de la presente invención, la filtración y la separación en la cuarta etapa pueden realizarse a través de filtración con diatomita y luego ultrafiltración. La cuarta etapa puede incluir además la purificación de impurezas usando una resina adsorbente después de la filtración.
El alcohol usado en la cuarta etapa durante el método de preparación puede ser etanol o metanol, o alternativamente puede ser una disolución acuosa de alcohol al 85 - 95% (v/v).
La concentración en la cuarta etapa o la quinta etapa durante el método de preparación puede realizarse a través de concentración a presión reducida o concentración por ósmosis inversa.
La filtración y el lavado en la quinta etapa durante el método de preparación pueden realizarse a través de filtración centrífuga y luego lavado con alcohol, y la esterilización del mismo puede llevarse a cabo a través de esterilización UHT (esterilización a ultra-alta temperatura). En este caso, el secado en la cuarta etapa o la quinta etapa puede realizarse a través de un procedimiento seleccionado de entre secado por pulverización, secado por aire seco y secado por congelación. El alcohol usado para el lavado en la quinta etapa es preferiblemente el mismo que el alcohol usado en el procedimiento de cristalización.
En la presente invención, el glicósido de esteviol usado como la materia prima para la composición de estevia enzimáticamente modificada contiene un componente de glicósido de esteviol representado por la fórmula química 1 a continuación y mostrado en la tabla 1 a continuación.
[Fórmula química 1]
[Tabla 1]
Figure imgf000005_0001
El glicósido de esteviol anterior puede ser un glicósido de esteviol que contiene, entre los componentes de glicósido de esteviol, rebaudiósido A no glicosilado en una cantidad del 80% en peso o más, y preferiblemente del 90% en peso o más. El rebaudiósido A no glicosilado puede estar contenido en una cantidad de hasta el 99% en peso en el glicósido de esteviol.
Según la presente invención, el rebaudiósido A puede estar enzimáticamente modificado, obteniéndose de ese modo una composición de estevia enzimáticamente modificada en la que se maximiza la cantidad de rebaudiósido A con grupos glicosilo unidos, especialmente rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo.
En la presente invención, el edulcorante que contiene la composición de estevia enzimáticamente modificada preparada de ese modo puede usarse como alimento y aditivo alimentario y, por tanto, es posible proporcionar una composición alimenticia que incluya el edulcorante anterior.
Además, el alimento y aditivo alimentario pueden incluir bebidas, incluyendo bebidas de café, refrescos, bebidas de zumo, bebidas energéticas, productos lácteos y bebidas alcohólicas, golosinas o dulces.
Tal como se describió anteriormente, el edulcorante que tiene una cualidad de dulzor mejorada obtenido mediante el método de preparación de la presente invención puede usarse solo o en combinación con un edulcorante hipocalórico, cuyo dulzor es menor que el del azúcar, tal como sorbitol, maltitol, jarabe de almidón reducido, xilitol, trehalosa, eritritol y similares, y particularmente puede otorgar un dulzor más intenso sin afectar a las características del edulcorante usado con el mismo y, por tanto, puede convertirse en una formulación de edulcorante hipocalórico de alta calidad.
Además, el producto seco del edulcorante obtenido mediante el método de preparación de la presente invención es un polvo que muestra un color que varía de blanco a amarillo claro y que no tiene olor ni ningún ligero olor característico. Por tanto, el producto seco del edulcorante puede usarse solo o en combinación con, como diluyente, un edulcorante de sacarina, tal como azúcar, fructosa, glucosa, lactosa, azúcar isomerizado, jarabe de almidón y similares. Además, puede usarse de manera apropiada en combinación con un edulcorante distinto de sacáridos que tenga alto dulzor, tal como un extracto de regaliz, sacarina, aspartamo, acesulfamo de potasio, sucralosa y similares.
Por ejemplo, puede proporcionarse un edulcorante, que comprende el edulcorante de la presente invención, almidón, dextrina y azúcar adicional, que se mezclan juntos, y el azúcar adicional puede seleccionarse del grupo que consiste en sorbitol, maltitol, xilitol, trehalosa, eritritol, azúcar, fructosa, glucosa, lactosa, azúcar isomerizado, jarabe de almidón, extracto de regaliz, sacarina, aspartamo, acesulfamo de potasio y sucralosa.
Efectos ventajosos
La presente invención se refiere a un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada que tiene cualidad de dulzor mejorada, que comprende el 90% en peso o más de glicósido de esteviol, en el que sólo se lleva a cabo la glicosilación usando ciclodextrina como material de glicosilación de un extracto de estevia (glicósido de esteviol), sin ningún procedimiento de purificación usando una resina adsorbente porosa existente (de tipo aromática, estirénica), produciendo de ese modo estevia enzimáticamente modificada, que puede utilizarse como componente y reactivo para edulcorantes, potenciadores del sabor y modificadores del sabor para una variedad de dulces, bebidas (incluyendo bebidas alcohólicas), alimentos y productos alimenticios, proporcionando de ese modo un edulcorante de estevia enzimáticamente modificada y productos del mismo. Mientras tanto, los presentes inventores han continuado desarrollando técnicas para preparar un edulcorante de estevia enzimáticamente modificada tal como se da a conocer en las patentes coreanas n.os 10-1535427 y 10­ 0888694, haciendo posible preparar una composición de estevia que tiene cualidad de dulzor notablemente mejorada con alto contenido de glicósido de esteviol total mediante la subdivisión adicional del procedimiento de modificación enzimática en comparación con los métodos de preparación existentes.
Descripción de los dibujos
La figura 1 es un diagrama de flujo que muestra el procedimiento para preparar un edulcorante que contiene una composición de estevia enzimáticamente modificada según la presente invención; y
la figura 2 muestra la fórmula química de rebaudiósido A, en la que un grupo glicosilo puede estar unido al grupo hidroxilo del mismo.
Mejor modo
Se proporcionará una mejor comprensión de la presente invención a través de los siguientes ejemplos. Sin embargo, la presente invención no se limita a los ejemplos, y puede realizarse de otras formas, y se proporciona con el fin de transferir suficientemente el espíritu de la presente invención a los expertos en la técnica de tal manera que el contenido presentado en los mismos será exhaustivo y completo.
<Ejemplo 1. Preparación de composición de estevia enzimáticamente modificada i>
Se preparó una composición de estevia enzimáticamente modificada de la siguiente manera. En este caso, se midieron los productos intermedios (indicación numérica) y un producto final para determinar la tasa de glicosilación. Específicamente, se mezclaron un extracto de estevia que contenía el 90% en peso de RA (rebaudiósido A no glicosilado) y beta-ciclodextrina a una razón en peso de 1:2, se disolvieron en agua en una cantidad tres veces el peso de materias primas total de los mismos y se ajustaron a pH 5,5, 70°C y 30 Brix. Para la reacción enzimática primaria, se añadió CGTasa (ciclodextrina glucanotransferasa) de tal manera que la cantidad de la misma fue de 1,6 g basándose en 100 g del extracto de estevia, y se dejó reaccionar1* durante 40 h.
A continuación, para la reacción enzimática secundaria, se añadió glucoamilasa de tal manera que la cantidad de la misma fue de 0,8 g basándose en 100 g del extracto de estevia en condiciones de pH 4,5 y 58°C y se dejó reaccionar2* durante 1 h y 40 min, seguido por desactivación de la enzima a 90°C. Se filtró el producto de reacción, en el que se desactivó la enzima, con diatomita, se sometió a separación3* por membrana a través de ultrafiltración, seguido por concentración a presión reducida y luego secado4* por pulverización, después de lo cual se disolvió el producto seco resultante a un máximo de 60°C en una disolución acuosa de etanol al 92% (v/v) en aun volumen tres veces el peso del mismo, se enfrió hasta 45°C y se cristalizó con agitación durante 2 ~ 3 h. Después de eso, se realizaron filtración centrífuga, lavado5 con una disolución acuosa de etanol al 92% (v/v), concentración a presión reducida, esterilización UHT (esterilización a ultra-alta temperatura) y luego secado6 por pulverización. En estos procedimientos, se midieron las composiciones obtenidas en las etapas1) a6) respectivas para determinar la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. Los resultados se muestran en la tabla 2 a continuación.
En la tabla 2 a continuación, RAG1 a RAG5 representan rebaudiósido A glicosilado, mostrando los números individuales el número de grupos glicosilo unidos. Específicamente, RAG1 significa que un grupo glicosilo está unido al rebaudiósido A y RAG5 significa que cinco grupos glicosilo están unidos al rebaudiósido A.
[Tabla 2]
Figure imgf000007_0001
En este caso, se realizó el análisis del contenido de rebaudiósido A (análisis de la proporción de RA y RAG1-G6) a través de HPLC (cromatografía de líquidos de alto rendimiento) en las siguientes condiciones.
[Tabla 3]
Figure imgf000007_0002
Proporción de RA total=% de suma de área de RA+ RA GT-G6
, , , , .... Proporción de RA total -Proporción de RA sin reaccionar (% de área) ...
Tasa de glicosiladón de RA(%) = — ------------------------------------------------------------------------ -------------- - x 100
Proporción de RA total
^ Proporción de cada componente (% de área) ,
Proporción de cada componente (% ) = -----1------------------------------1-----------------------------x 100
Proporción de RA total
En las ecuaciones anteriores, el % de área se determina midiendo el área de un pico de HPLC de cada uno de los componentes de RA.
Se determinó el contenido de glicósido de esteviol total combinando el contenido de glicósido de esteviol (%) después del tratamiento con glucoamilasa de la estevia enzimáticamente modificada adsorbida según el ensayo de glicósido de esteviol del ensayo de estevia enzimáticamente modificada con la cantidad (%) de residuo de a-glicosilo aislado después del tratamiento con glucoamilasa. Las condiciones de funcionamiento de un analizador para confirmar la cantidad de glicósido de esteviol son las siguientes.
[Tabla 4]
Figure imgf000008_0001
<Ejemplo 2. Preparación de composición de estevia enzimáticamente modificada ii>
Se preparó una composición de estevia enzimáticamente modificada de la misma manera que en el ejemplo 1, con la excepción de que se realizó la cristalización con etanol (a 25°C, sin calentamiento) usando una disolución acuosa de metanol al 90% (v/v) a temperatura ambiente, y se realizó el lavado con una disolución acuosa de metanol al 90% (v/v) después de la filtración centrífuga. En este caso, en las mismas etapas que en el ejemplo 1, se midieron la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. Los resultados se muestran en la tabla 5 a continuación.
[Tabla 5]
Figure imgf000009_0001
<Ejemplo 3. Preparación de composición de estevia enzimáticamente modificada iii>
Se realizaron reacción enzimática primariâ , reacción enzimática secundaria2), filtración con diatomita, separación por membrana, concentración y secado3) por pulverización del extracto de estevia de la misma manera que en el ejemplo 1, después de lo cual se trató el polvo obtenido a través del secado por pulverización con una disolución acuosa de metanol al 85% (v/v), una disolución acuosa de metanol al 90% (v/v) o una disolución acuosa de metanol al 95% (v/v) en un volumen tres veces el peso del mismo, y se cristalizó con agitación durante 2 ~ 3 h. Después de eso, se realizaron filtración centrífuga, lavado5) con el mismo alcohol que en la cristalización, concentración, esterilización UHT (esterilización a ultra-alta temperatura) y luego secado6) por pulverización. En tales procedimientos, se midieron la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. Los resultados se muestran en la tabla 6 a continuación.
[Tabla 6]
Figure imgf000010_0001
<Ejemplo 4. Preparación de composición de estevia enzimáticamente modificada iv>
Se preparó una composición de estevia enzimáticamente modificada de la misma manera que en el ejemplo 1, con la excepción de que se realizó cristalización con etanol usando una disolución acuosa de etanol al 90% (v/v) o una disolución acuosa de etanol al 95% (v/v), y se realizó lavado después de la filtración centrífuga usando la misma disolución acuosa de etanol que en la cristalización. En tales procedimientos, se midieron la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. Los resultados se muestran en la tabla 7 a continuación.
[Tabla 7]
Figure imgf000011_0001
<Ejemplo comparativo 1. Preparación de composición de estevia enzimáticamente modificada purificada en columna>
Se realizaron reacción enzimática primaria1), reacción enzimática secundaria2) y filtración con diatomita del extracto de estevia de la misma manera que en el ejemplo 1, después de lo cual se llevó a cabo una reacción de adsorción usando dos columnas. Específicamente, se hizo pasar el filtrado obtenido a través de filtración con diatomita a través de una primera columna empaquetada con una resina adsorbente y se adsorbió el líquido que se hizo pasar a través de una segunda columna empaquetada con la misma resina adsorbente. Después del procedimiento de adsorción, se eluyeron3) las dos columnas con una disolución acuosa de etanol al 50% (v/v) y se sometió la disolución de elución obtenida de ese modo a concentración, esterilización UHT (esterilización a ultra-alta temperatura) y luego secado4) por pulverización. En tales procedimientos, se midieron la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. Los resultados se muestran en la tabla 8 a continuación.
[Tabla 8]
Figure imgf000011_0002
< Ejemplo comparativo 2. Preparación existente de composición de estevia enzimáticamente modificada>
Se preparó una composición de estevia enzimáticamente modificada mediante el método del ejemplo 1 dado a conocer en la patente coreana n.° 10-1535427 (solicitante: Daepyung Co. Ltd.). Específicamente, se mezclaron un extracto de estevia y beta-ciclodextrina, se ajustaron a pH 5,5, 70°C y 30 Brix y se sometieron a reacción enzimática primaria, como en la presente invención, después de lo cual se calentó la disolución de reacción hasta 90°C durante 1 h para desactivar de ese modo la enzima, después de lo cual se secó por pulverización la disolución desactivada sin cambio.
< Ejemplo comparativo 3. Preparación de composición de estevia usando alfa-amilasa en lugar de glucoamilasa> Se preparó una composición de estevia de la misma manera que en el ejemplo 1, con la excepción de que se usó alfa-amilasa en lugar de glucoamilasa tras la reacción enzimática secundaria.
Se midió el polvo obtenido de ese modo para determinar la tasa de glicosilación de RA, la proporción de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total y la proporción de cada componente de RA en el rebaudiósido A total. La proporción de RA final fue menor del 60%, y se juzgó que la tasa de aumento de G1 era inadecuada para obtener una composición de estevia enzimáticamente modificada.
<Ejemplo de prueba 1. Prueba sensorial de la cualidad de dulzor>
Ejemplo de prueba 1-1. Comparación del contenido de azúcar
Se realizó la prueba sensorial de dulzor y cualidad de dulzor de una disolución acuosa obtenida disolviendo el edulcorante del ejemplo 1 en una concentración del 0,05% a través de comparación de la cualidad de dulzor a diferentes concentraciones del edulcorante del ejemplo comparativo 1. Se sometió a prueba el dulzor usando una disolución acuosa al 0,05% del edulcorante del ejemplo 1, preparado mediante el método de preparación de la presente invención, y disoluciones acuosas al 0,04 ~ 0,07% del edulcorante de estevia enzimáticamente modificada típico del ejemplo comparativo 1, ajustado para tener casi el mismo dulzor mediante la prueba previa. Un total de 50 personas evaluaron la intensidad del dulzor de la disolución acuosa al 0,05% del edulcorante del ejemplo 1 según la presente invención basándose en la disolución acuosa a diferentes concentraciones del ejemplo comparativo 1. La tabla 9 muestra el número de personas para la evaluación del dulzor para las concentraciones respectivas en tres niveles de fuerza, consistencia y debilidad.
[Tabla 9]
Figure imgf000012_0001
Ejemplo de prueba 1-2. Análisis de calidad
Un grupo 50 personas evaluaron la disolución acuosa obtenida disolviendo el edulcorante del ejemplo 1 en una concentración del 0,05% y la disolución acuosa obtenida disolviendo el edulcorante del ejemplo comparativo 1 en una concentración del 0,06% para determinar el sabor amargo, la cualidad de sabor dulce y la cualidad de sabor total. Los resultados se muestran en la tabla 10 a continuación.
Basándose en los resultados anteriores, puede confirmarse que la composición de estevia de la presente invención mostró altas proporciones de rebaudiósido A total y rebaudiósido A-G1 y alto contenido de glicósido de esteviol, en comparación con la composición de estevia preparada mediante el método existente y, por tanto, fue adecuada para su uso como edulcorante.
[Tabla 10]
Figure imgf000013_0001
Aunque no se muestra en la tabla 10, se evaluó la disolución acuosa del ejemplo comparativo 2 tal como antes, y el número de personas que notaron el gusto dulce remanente fue ligeramente mayor, 1,5 veces, para la disolución acuosa del ejemplo comparativo 2 que para la disolución acuosa del ejemplo 1. Se sabe que un sabor artificial o sabor desagradable y oleaginoso de un edulcorante sintético aumenta cuando el sabor dulce permanece intenso. Por tanto, puede juzgarse que la cualidad del sabor de la composición de estevia enzimáticamente modificada se mejora a través del método de la presente invención.
Los edulcorantes de los ejemplos 1 a 4 satisfacen todas de las relaciones (1) ~ (3) según la presente invención y se usan muy eficazmente como edulcorante de alta calidad porque la proporción de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo es significativamente alta. Sin embargo, el edulcorante del ejemplo comparativo 1 no satisface ninguna de las relaciones (1) y (2), y la composición de la etapa 4, que es el producto intermedio al preparar el edulcorante del ejemplo 1 ó 2, que se consideró muy similar al edulcorante del ejemplo comparativo 2, no satisface la relación (1) ni (2). Por tanto, es posible preparar la composición de estevia enzimáticamente modificada que tenga una proporción aumentada de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo según la presente invención en comparación con el edulcorante del ejemplo comparativo 2.

Claims (10)

  1. REIVINDICACIONES
    i. Edulcorante, que satisface la relación (1) a continuación:
    15 > (RAG1+RAG2)/RA > 3 , 87 (1)
    en la que RA representa una proporción (%) de rebaudiósido A no glicosilado en rebaudiósido A total, RAG1 representa una proporción (%) de rebaudiósido A que tiene un grupo glicosilo unido al mismo y RAG2 representa una proporción (%) de rebaudiósido A que tiene dos grupos glicosilo unidos al mismo.
  2. 2. Edulcorante según la reivindicación 1, que satisface la relación (2) a continuación:
    1 , 17 > (RA+RAG1+RAG2)/TRA > 0 , 8 (2)
    en la que TRA representa una proporción (%) de rebaudiósido A total en glicósido de esteviol total.
  3. 3. Edulcorante según la reivindicación 1, que satisface la relación (3) a continuación:
    3 2 , 8 > RAG1/RAG2 > 7 , 2 (3)
  4. 4. Edulcorante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el edulcorante contiene el 90% en peso o más de glicósido de esteviol.
  5. 5. Método para preparar el edulcorante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende:
    una primera etapa de mezclar glicósido de esteviol que contiene el 80% en peso o más de rebaudiósido A no glicosilado con beta-ciclodextrina a una razón en peso de 1:1 —3 para dar una mezcla, que luego se disuelve en agua en una cantidad de dos a cuatro veces el peso de materias primas total y se ajusta a un pH de 5,0 — 6,0, 60 — 80°C y 20 — 50 Brix;
    una segunda etapa de añadir 0,1 — 3 partes en peso de ciclodextrina glucanotransferasa, basándose en 100 partes en peso del glicósido de esteviol usado como la materia prima en la primera etapa, y llevar a cabo una reacción enzimática primaria durante 24 — 50 h;
    una tercera etapa de añadir 0,5 — 2 partes en peso de glucoamilasa, basándose en 100 partes en peso del glicósido de esteviol usado como la materia prima en la primera etapa, a un producto de reacción obtenido a través de la reacción enzimática primaria, en condiciones de un pH de 4,0 — 5,0 y una temperatura de 55 — 65°C, y llevar a cabo una reacción enzimática secundaria durante 1 — 3 h;
    una cuarta etapa de calentar un producto de reacción obtenido a través de la reacción enzimática secundaria hasta 85 — 95°C durante 1 — 3 h para desactivar de ese modo la enzima, y realizar filtración, separación, concentración y secado, seguido por cristalización con agitación durante 2 — 3 h en presencia de un alcohol; y
    una quinta etapa de someter un producto cristalizado obtenido en la cuarta etapa a filtración, lavado, concentración, esterilización y secado.
  6. 6. Método según la reivindicación 5, en el que el alcohol en la cuarta etapa es etanol o metanol.
  7. 7. Método según la reivindicación 5, en el que la filtración y la separación en la cuarta etapa se realizan a través de filtración con diatomita y luego ultrafiltración.
  8. 8. Método según la reivindicación 5, en el que la filtración y el lavado en la quinta etapa se realizan a través de filtración centrífuga y lavado con alcohol, y la esterilización se realiza a través de esterilización UHT (esterilización a ultra-alta temperatura).
  9. 9. Composición alimenticia, que comprende el edulcorante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
  10. 10. Edulcorante, que comprende el edulcorante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, almidón, dextrina y azúcar adicional, que se mezclan juntos.
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