CN113584103A - 改善甜菊糖苷口感的酶转换方法 - Google Patents
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract
本发明公开了一种改善甜菊糖口感的酶转换方法，包括：将甜菊糖和麦芽糊精溶解于水中得到反应原料；加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；向第一次酶促反应产物中加入α淀粉酶或β淀粉酶进行第二次酶促转换反应；将第二次酶促转换反应产物降温后过滤，滤液浓缩后用滤棒过滤后干燥。本发明在不同的时间段分别加入纤维素酶、环糊精葡萄糖苷转移酶、α‑淀粉酶或β‑淀粉酶，利用复合酶改善甜菊糖口感，甜菊糖苷的所有成份都参与了转化反应，能够使得改良后的甜菊糖其口感更加接近蔗糖，ST与RA的转移率能够达到80％以上，口感较好的Glu1和Glu2占比达50‑80％，透光度≥90‑99％，残留低聚糖≤5％。
Description
技术领域
本发明涉及改善甜菊糖苷口感的方法，特别涉及改善甜菊糖苷口感的酶转换方法，属于改善甜菊糖苷口感的酶转换领域。
背景技术
甜菊糖是从菊科草本植物甜叶菊中精提的新型天然甜味剂。它具有高甜度、低热能的特点，其甜度是蔗糖的200-450倍，热值仅为蔗糖的1/300.经大量药物实验证明，甜菊糖无毒副作用，无致癌物，食用安全，经常食用可预防高血压、糖尿病、肥胖症、心脏病、龋齿等病症，是一种可替代蔗糖非常理想的甜味剂。甜菊糖可广泛用于食品、饮料、医药、日用化工、酿酒、化妆品等行业，并且较应用蔗糖可节省成本70％。甜菊糖色泽纯白，口感适宜，无异味，是发展前景广阔的新糖源。甜菊糖是目前世界已发现并经我国卫生部、轻工业部批准使用的最接近蔗糖口味的天然低热值甜味剂，甜菊糖还兼具药用价值，可以辅助治疗糖尿病、高血压、高血糖、预防动脉硬化、龋齿，也有消炎、抗菌、抗癌和增强免疫力等功效。我国已成为最大的甜菊糖生产国和出口国，占全球市场80％份额。
甜菊糖苷作为纯天然的甜味剂，具有高甜度、低热量、无毒、无副作用等优点，因此得到世界许多国家的认可。但是甜菊糖苷与蔗糖的甘甜、口味纯正度相比有较重的苦涩味，在一定程度上影响了应用效果，所以需要将其苦味去掉。甜菊糖苷是9种双萜糖苷的混合物，9种双萜糖甙为甜菊苷(Stevioside，ST)、甜菊双糖苷A(rebaudioside A,RA)、甜菊双糖苷B(rebaudiosideB,RB)、甜菊双糖苷C(rebaudioside C,RC)、甜菊双糖苷D(rebaudiosideD,RD)、甜菊双糖苷F(rebaudioside F,RF)、杜尔可苷A(dulcoside A,Dul-A)、甜茶苷(Rubusoside,Rub)、甜菊醇双糖苷(steviolbioside,SB)。其中ST和RA是甜叶菊中主要的甜菊糖甙成分，其不同种类的糖苷在甜度和味质上存在较大的差异，以蔗糖甜度为1作为参照，ST的甜度为200-300，RA的甜度为350-450，RB的甜度为300-350，RC的甜度为50-120，RD的甜度为250-450，RF的甜度为150-200，Dul-A的甜度为50-120，SB100-125味苦。ST带有一定的后苦涩味，且呈味比蔗糖慢。RA虽然口感最好甜度高且甜味纯正无后味，但是仍不能与蔗糖的口感相媲美。所以许多科技工作者致力于甜菊糖口感的改善。包埋法掩盖法混合法等等，最好的还是酶改良甜菊糖苷法。
甜菊糖的九种甜味成分含有同一苷源(甜菊醇，Steviol)，统称甜菊糖苷；因在其C13和C19位上连接不同数量的葡萄糖基或鼠李糖基，使得其甜度和味质差异很大。其中最主要的成分是甜菊苷和莱鲍迪苷A，含量共占甜菊糖的80％以上。RA的甜度相当于蔗糖的450倍，其甜味特性与蔗糖的最接近。Stevioside在甜菊糖中含量最高，在其C13位上比RA少一个葡萄糖基；但其后苦涩味严重影响甜菊糖的味质。通常认为，甜菊糖C13位接枝各类糖基与C19位接枝比例为2∶1或3∶1(葡萄糖基、果糖基或半乳糖基等)的产物具有更好的甜度和味质，故而可以通过酶促转糖基反应来改变甜菊糖的结构组成以改善其甜味特性，也有希望将Stevioside转化成甜味特性较好的Rebaudioside A，Rebaudioside D，Rebaudioside M。
现有报导的酶转化甜菊糖的资料很多，但是研究的方法各有不同。物料浓度、温度、PH、时间、酶的用量、淀粉与甜菊糖的物料比都千差万别。日本韩国都有成熟的酶转化甜菊糖的技术，鉴于技术保密无法详细了解。大概是环糊精葡萄糖基转移酶法、β-呋喃果糖苷酶法、半乳糖苷酶法、微生物糖基化法等。
在现有技术中，有用α-葡萄糖苷酶、α-葡萄糖基转移酶、环糊精葡萄糖转移酶、β-呋喃果糖苷酶、半乳糖苷酶提高其转化率的改进，况且不同的酶方法产品一般也没有可比性，总之，现有技术中利用酶改质后的甜菊糖的口感与蔗糖比较还略有一点点瑕疵。有的是配比不合理，采用的原料不合适或过量，或酶的选择不妥，或者缺少某个环节，导致产品转移率不高(50-70％)，残余低聚糖过多富含多余的热量，而且产品的透光度低(80-85％)。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种利用复合酶改善甜菊糖口感的方法，能够使得改良后的甜菊糖其口感更加接近蔗糖。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案包括：
一种改善甜菊糖口感的酶转换方法，包括：(1)将甜菊糖和麦芽糊精溶解于水中得到反应原料；(2)向反应原料中加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；(3)灭活纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶后，向第一次酶促反应产物中加入α淀粉酶或β淀粉酶进行第二次酶促转换反应；(4)灭活α淀粉酶或β淀粉酶，将第二次酶促转换反应产物降温后过滤，滤液浓缩后用滤棒过滤后干燥即得。
作为一种优选的具体实施方案，甜菊糖与麦芽糊精的质量比例优选为1：1-1.5。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(1)中还包括将反应原料进行精制处理，包括：将反应原料的浓度调整为20-40Brix，优选为30Brix；将调整浓度后的反应原料再依次进行过滤和树脂处理得到精制的反应原料；其中，所述的过滤处理优选为依次通过石英砂罐和10微米滤棒进行过滤处理；所述的树脂优选为阳离子树脂以及D941、HP20等。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(2)中将反应原料的pH值调整为5.5-6.5后加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；更优选的，将将反应原料的pH值调整为6.0后加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；所述的第一次酶促转换反应的反应温度优选为60-70℃，所述的反应时间优选为48-72小时。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(2)中所加入的纤维素酶用量优选为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.3-0.5wt％，所加入的环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的用量优选为麦芽糊精重量的0.5-1.0wt％。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(3)中所加入的α淀粉酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.1wt％。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(3)中第二次酶促转换反应的条件优选为：pH值为6.5-7.0，反应温度为60-65℃，反应时间为2-3小时。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(3)中测定ST或RA的转移率达到80％以上，透光度达到95％以上终止反应。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(3)中还可以向第二次酶促转换反应产物中再加入β淀粉酶或α淀粉酶进行第三次酶促转换反应。
作为一种优选的具体实施方案，步骤(4)中将第二次酶促转换反应产物降温到60-70℃时采用硅藻土过滤，将滤液依次采用膜浓缩及真空负压浓缩到48-50Brix后再用5-10微米滤棒过滤喷雾干燥。
本发明在不同的时间段分别加入纤维素酶、环糊精葡萄糖苷转移酶CGTase、α-淀粉酶或β-淀粉酶，利用复合酶改善甜菊糖口感，甜菊糖苷的所有成份都参与了转化反应，能够使得改良后的甜菊糖其口感更加接近蔗糖，酶改良后甜菊糖ST与RA的转移率能够达到80％以上，口感较好的Glu1和Glu2占比达50-80％，透光度≥90-99％，残留低聚糖≤5％。
附图说明
图1是RGF转移率(采用复合酶对甜菊糖进行酶转换后的产物液相色谱图)。
图2是RGF残留甜菊糖苷(采用复合酶对甜菊糖进行酶转换后的产物液相色谱图)。
图3是SF转移率(采用复合酶对甜菊糖进行酶转换后的产物液相色谱图)。
图4是SF残留甜菊糖苷(采用复合酶对甜菊糖进行酶转换后的产物液相色谱图)。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1采用复合酶对甜菊糖(卉菊N-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水4500升，投加1000公斤TSG85-90％RA20-30％的甜菊糖苷。
2.投加800-1300公斤的麦芽糊精，加温溶解，调整浓度为25-35Brix。
3.投加纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.3％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.5％；调整pH值5.0-6.5，温度60℃，搅拌反应72小时。快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
4.向第一次酶促转换反应产物中加入α淀粉酶，α淀粉酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.1％。调整pH值6.5-7.0，温度65℃，进行第二次酶促转换反应，反应2-3小时。测转移率达到80％以上，透光度达到95％以上终止反应。快速升温到92℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.降温到60℃后通过200目硅藻土过滤，膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥成粉剂或小颗粒。
表1为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表1酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
| 项目 | 24小时 | 48小时 | 72小时 | α酶 | 成品 | 残留甜菊糖苷 |
| 未知峰 | 5.18％ | 5.62％ | 6.58％ | 6.71％ | 6.82％ | Dul0.26％ |
| St | 62.21％ | 76.85％ | 80.61％ | 80.89％ | 80.78％ | St3.19％ |
| Glu1+glu2 | 38.27％ | 38.30％ | 39.37％ | 39.61％ | 39.66％ | RC0.34％ |
| RA | RA3.60％ | |||||
| Glu1+glu2 | ||||||
| PH | 6.10 | 5.76 | 5.43 | - | 6.85 | |
| 透光度 | 58.94％ | 79.68％ | 95.58％ | - | 95.9％ | |
| 7.39％ |
实施例2采用复合酶对甜菊糖(卉菊NF-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水4500升，投加960公斤TSG90％RA20-30％的甜菊糖苷。
2.再投加900公斤的麦芽糊精，加温溶解,调整浓度为25-35Brix。
3.过滤通过树脂精制原料。
4.投加纤维素酶，环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.5％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.75％(900*0.75％＝6.75公斤)。调整pH值5.0-6.5，温度60-70℃，搅拌反应36小时。测转移率达到80％以上，透光度达到90％以上后终止反应。调整pH3-4后，立即快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.降温到55-60℃投加β-淀粉酶1.86公斤(960+900＝1860*0.1％＝1.86公斤)。然后在55-60℃、pH5-6的条件下进行第二次酶促转换反应，反应5小时。测转移率达到80％以上，Glu1+Glu2≧50％。然后再升温80-85℃保持15分钟杀灭酶的活性，降温到60℃硅藻土过滤。膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥为粉剂或小颗粒。
表2为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表2酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
| 项目 | 24小时 | 48小时 | 63小时 | β酶 | 成品 | 残留甜菊糖苷 |
| 未知峰 | 6.93％ | 5.75％ | 7.18％ | 8.59％ | 9.63％ | Dul0.32％ |
| St | 77.21％ | 80.64％ | 80.71％ | 81.56％ | 80.10％ | St2.98％ |
| Glu1+glu2 | 36.44％ | 36.47％ | 38.10％ | 50.24％ | 51.45％ | RC0.72％ |
| RA | RA2.80％ | |||||
| Glu1+glu2 | ||||||
| PH | 5.86 | 5.62 | 5.50 | - | 5.60 | |
| 透光度 | 60.51％ | 82.67％ | 92.58％ | - | 95.9％ | |
| 6.82％ |
实施例3采用复合酶对甜菊糖(卉菊45S-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水4500升，投加1000公斤TSG90％RA35-45％的甜菊糖苷。
2.再投加1400公斤的麦芽糊精，加温溶解,调整浓度为25-35Brix。
3.过滤通过树脂精制原料。
4.投加纤维素酶，环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.4％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.75％(1400*0.75％＝10.5公斤)。调整pH值5.0-6.5，温度65℃，搅拌反应48小时。快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.向第一次酶促转换反应产物中加入α淀粉酶，α淀粉酶的用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.1％。调整pH值6.5-7.0，温度60-65℃，进行第二次酶促转换反应，反应2-3小时。测转移率达到80％以上，透光度达到99％以上终止反应。快速升温到92℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
降温到60℃后通过200目硅藻土过滤，膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥为粉剂或小颗粒。
表3为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表3酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
| 项目 | 18小时 | 43小时 | 67小时 | 成品 | 残留甜菊糖苷 |
| 未知峰 | 11.20％ | 5.55％ | 5.32％ | 5.42％ | Dul0.10％ |
| St | 75.19％ | 76.92％ | 80.17％ | 80.28％ | St3.87％ |
| Glu1+glu2 | 41.40％ | 44.37％ | 41.81％ | 43.10％ | RC0.67％ |
| RA | 66.28％ | 75.86％ | 80.12％ | 80.06％ | RA4.16％ |
| Glu1+glu2 | 42.08％ | 44.11％ | 43.11％ | 44.10％ | |
| PH | 6.48 | 6.13 | 5.84 | ||
| 透光度 | 60.6％ | 92.5％ | 99.1％ | 98.2％ | |
| 8.80％ |
实施例4采用复合酶对甜菊糖(卉菊SF-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水4500升，投加960公斤TSG90％RA40-50％的甜菊糖苷。
2.再投加1400公斤的麦芽糊精，加温溶解,调整浓度为25-35Brix。
3.过滤通过树脂精制原料。
4.投加纤维素酶，环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.5％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.75％(1400*0.75％＝10.5公斤)。调整pH值5.0-6.5，温度60-70℃，搅拌反应48小时。测转移率达到80％以上，透光度达到90％以上后终止反应。调整pH3-4后，立即快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.将第一次酶促转换反应的产物降温到55-60℃投加β-淀粉酶2.36公斤(960+1400＝2360*0.1％＝2.36公斤)。然后在55-60℃、pH5-6的条件下进行第二次酶促转换反应，反应5小时。测转移率达到80％以上，Glu1+Glu2≧50％。然后再升温80-85℃保持15分钟杀灭酶的活性，降温到60℃硅藻土过滤。
6.膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥为粉剂或小颗粒。
表4为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表4酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
实施例5采用复合酶对甜菊糖(卉菊REF-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水2500升，投加500公斤TSG95％RA80％的甜菊糖苷。
2.再投加450公斤的麦芽糊精，加温溶解,调整浓度为25-35Brix。
3.过滤通过树脂精制原料。
4.投加纤维素酶以及环糊精葡萄糖苷转移酶第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.5％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.5-1.0％(450*0.75％＝3.38公斤)，调整pH值5.0-6.5，温度60-70℃，搅拌反应54小时；调整pH3-4后，立即快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.将第一次酶促转换反应产物降温到55-60℃投加β-淀粉酶(500+450＝950*0.1％＝0.95公斤)。然后在55-60℃、pH5-6的条件下进行第二次酶促转换反应反应5小时；测转移率达到80％以上，Glu1+Glu2≧60％。然后再升温80-85℃保持15分钟杀灭酶的活性。
6.向第二次酶促转换反应产物中加入α淀粉酶进行第三次酶促转换反应，α淀粉酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.1％。调整pH值6.5-7.0，温度60-65℃。进行第三次酶促转换反应，反应2-3小时。测转移率达到80％以上，透光度达到99％以上终止反应。立即快速升温到92℃保持15分钟，杀灭酶的活性。降温到60℃后通过200目硅藻土过滤。膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥为粉剂或小颗粒。
表5为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表5酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
| 项目 | 22小时 | 40小时 | 62小时 | β酶α酶 | 成品 | 残留甜菊糖苷 |
| 未知峰 | 8.23％ | 8.27％ | 7.91％ | 8.50％ | 6.75％ | |
| St | St1.08％ | |||||
| Glu1+glu2 | ||||||
| RA | 71.58 | 76.96％ | 78.99％ | 81.09％ | 80.87％ | RA7.56％ |
| Glu1+glu2 | 43.34 | 44.16％ | 44.35％ | 60.76％ | 60.82％ | |
| PH | 6.03 | 4.89 | 4.83 | - | 5.65 | |
| 透光度 | 70.50％ | 86.6％ | 98.9％ | - | 98.5％ | |
| 8.64％ |
实施例6采用复合酶对甜菊糖(卉菊RGF-型)进行酶转换
1.搅拌反应罐加入去离子水2500升，投加500公斤RA95％的甜菊糖苷。
2.再投加700公斤的麦芽糊精，加温溶解,调整浓度为25-35Brix。
3.过滤通过树脂精制原料。
4.投加纤维素酶，环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；其中，纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.4％，环糊精葡萄糖苷转移酶CGT的量为麦芽糊精重量的0.75(700*0.75％＝5.25公斤)。调整pH值5.0-6.5，温度65℃，搅拌反应48小时。调整pH3-4后，立即快速升温到97-98℃保持15分钟，杀灭酶的活性。
5.将第一次酶促转换反应的产物降温到55-60℃投加β-淀粉酶1.2公斤(500+700＝1200*0.1％＝1.2公斤)。然后在55-60℃、pH5-6的条件下进行第二次酶促转换反应，反应5小时。测转移率达到80％以上，Glu1+Glu2≧80％。然后再升温80-85℃保持15分钟杀灭酶的活性。
6.向第二次酶促转换反应的产物中加入α淀粉酶进行第三次酶促转换反应；其中，α淀粉酶的用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.1％，在pH值6.5-7.0，温度60-65℃的条件下进行第三次酶促转换反应，反应2-3小时。测转移率达到80％以上，透光度达到99％以上终止反应。立即快速升温到92℃保持15分钟，杀灭酶的活性。降温到60℃后通过200目硅藻土过滤。
7.膜浓缩及70℃以下负压浓缩到40-50Brix，10微米滤芯过滤后喷雾干燥为粉剂或小颗粒。
表6为本实施例的酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量等测定数据。
表6酶促改良产物的Glu1和Glu2占比，透光度，残留低聚糖含量以及RA、St含量测定
| 项目 | 20小时 | 40小时 | 60小时 | β酶α酶 | 成品 | 残留甜菊糖苷 |
| 未知峰 | 8.85％ | 5.56％ | 5.73％ | 9.45％ | ||
| St | St0.09％ | |||||
| Glu1+glu2 | ||||||
| RA | 82.89％ | 82.19％ | 83.63％ | 84.05％ | RA4.86％ | |
| Glu1+glu2 | 43.32％ | 43.97％ | 55.09％ | 56.20％ | ||
| PH | 5.50 | 5.39 | - | 5.80 | ||
| 透光度 | 96.3％ | 98.4％ | - | 98.5％ | ||
| 4.95％ |
Claims (10)
1.一种改善甜菊糖口感的酶转换方法，其特征在于，包括：
(1)将甜菊糖和麦芽糊精溶解于水中得到反应原料；
(2)向反应原料中加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；
(3)灭活纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶后，向第一次酶促反应产物中加入α淀粉酶或β淀粉酶进行第二次酶促转换反应；
(4)灭活α淀粉酶或β淀粉酶，将第二次酶促转换反应产物降温后过滤，滤液浓缩后用滤棒过滤后干燥即得。
2.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，甜菊糖与麦芽糊精的质量比例为1：1-1.5。
3.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(1)中还包括将反应原料进行精制处理，包括：将反应原料的浓度调整为20-40Brix，优选为30Brix；将调整农浓度后的反应原料再依次进行过滤和树脂处理得到精制的反应原料；其中，所述的过滤处理优选为依次通过石英砂罐和10微米滤棒进行过滤处理；所述的树脂优选为阳离子树脂以及D941、HP20树脂。
4.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(2)中将反应原料的pH值调整为5.5-6.5后加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；优选的，将反应原料的pH值调整为6.0后加入纤维素酶和环糊精葡萄糖苷转移酶进行第一次酶促转换反应；所述的第一次酶促转换反应的反应温度为60-70℃，所述的反应时间优为48-72小时。
5.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(2)中所加入的纤维素酶用量为甜菊糖和麦芽糊精总重量的0.3-0.5wt％，所加入的环糊精葡萄糖苷转移酶的用量为麦芽糊精重量的0.5-1.0wt％。
6.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(3)中所加入的α淀粉酶用量为多糖重量的0.1wt％。
7.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(3)中第二次酶促转换反应的条件为：pH值为6.5-7.0，反应温度为60-65℃，反应时间为2-3小时。
8.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(3)中测定转移率达到80％以上，透光度达到95％以上终止反应。
9.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(3)中还包括向第二次酶促转换反应产物中加入β淀粉酶或α淀粉酶进行第三次酶促转换反应。
10.按照权利要求1的酶转换方法，其特征在于，步骤(4)中将第二次酶促转换反应产物降温到60-70℃时采用硅藻土过滤，将滤液依次采用膜浓缩及真空负压浓缩到48-50Brix后再用5-10微米滤棒过滤喷雾干燥。
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