ES2823733T3 - Composición que contiene extracto o fracción de una planta del género Justicia - Google Patents
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Abstract
Una composicion farmaceutica para usar en la prevencion o en el tratamiento de una enfermedad alergica, que comprende un extracto de una planta del genero Justicia o una fraccion del mismo, como principio activo, en donde la planta del genero Justicia es Justicia procumbens L; y el extracto es un extracto en disolvente organico.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición que contiene extracto o fracción de una planta del género Justicia
[Campo técnico]
La presente invención se refiere a una composición farmacéutica, composición alimentaria y composición cosmética para la prevención, tratamiento o mejora de una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
[Antecedentes de la técnica]
El género Justicia de la familia Acanthaceae es el género más grande de la familia Acanthaceae, consiste en aproximadamente 600 especies y se encuentra en zonas de clima pantropical y tropical. Las plantas pertenecientes a género Justicia son plantas o arbustos perennes y se reconocen fácilmente por su corola en forma de labio. Plantas típicas pertenecientes al género Justicia incluyen Justicia procumbens L., Justicia pectoralis Jacq., Justicia gendarussa Burm. f., Justicia anselliana, y Justicia adhatoda L, etc., pero las actividades fisiológicas de las plantas del género Justicia aún no han sido suficientemente estudiadas.
Justicia procumbens L. perteneciente al género Justicia de la Acanthaceae es una planta anual y se distribuye en Corea, Japón, China, India, etc. Justicia procumbens L. tiene una altura de aproximadamente 30 cm, y sus hojas son hojas opuestas, largas de forma ovalada, de 2-4 cm de largo y 1-2 cm de ancho. Además, ambos extremos de la hoja son puntiagudos y los bordes de la hoja son elípticos o tienen forma de onda. La flor de la planta es de color magenta claro, florece de julio a septiembre y fructifica de septiembre a octubre.
SAVITHRAMMA ET AL: "Ethnobotanical survey of plants used to treat asthma in Andhra Pradesh, India", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, ELSEVIER IRELAND LTD, IE, vol. 113, n.° 1, 21 de julio de 2007, páginas 54-61, ISSN: 0378-8741, se refiere al tratamiento del asma mediante decocción de hojas.
En 1963, Gell P.G.H. & Coombs R.R.A clasificaron en gran parte la hipersensibilidad, que ocurre en el cuerpo humano, en cuatro tipos: hipersensibilidad de tipo I que corresponde a reacciones alérgicas agudas, e hipersensibilidad de tipo II-IV que corresponden a reacciones no alérgicas tales como enfermedades autoinmunitarias (Gell PGH & Coombs RRA, et al. Oxford, Inglaterra: Blackwell, 1963).
La alergia se define como un fenómeno en el que un cuerpo vivo que entra en contacto con una sustancia extraña llamada alérgeno muestra respuestas anómalas a la sustancia. La alergia puede ser causada no solo por varios alérgenos, incluyendo el polen, fármacos, fibras vegetales, bacterias, alimentos, tintes para el cabello, sustancias químicas, etc., sino también por la humedad, temperatura, ejercicio, etc., y puede causar diversas enfermedades tales como rinitis alérgica, asma, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, otitis media alérgica, gastroenteritis alérgica, anafilaxia y urticaria.
Las reacciones alérgicas se caracterizan por depender principalmente del anticuerpo IgE, y las reacciones alérgicas mediadas por este anticuerpo IgE se denominan "atopia" (Mitsuyasu et al. Ile50Val variant of IL4Ra upregulates IgE synthesis and associates with atopic asthma. Nature genetics 19.2, 119-120, 1998). Los linfocitos Th2 activados mediante alérgenos secretan diversas sustancias fisiológicamente activas (citocinas) tales como la interleucina-4 (IL-4) o la interleucina-5 (IL-5), y estas sustancias fisiológicamente activas estimulan los linfocitos B para promover la secreción de anticuerpos IgE (SHIMODA et al. Lack of IL-4-induced Th2 response and IgE class switching in mice with disrupted State6 gene. Nature 380, 630-633, 1996). Los anticuerpos IgE secretados se unen a FceR1 en la superficie de células tales como mastocitos o basófilos para activar estas células. Se sabe que las células activadas se desgranulan para promover la secreción de diversas sustancias fisiológicamente activas, incluyendo histamina, leucotrieno, prostaglandina D2 o similares que causan diversas reacciones relacionadas con enfermedades alérgicas, tales como vasodilatación, contracción del músculo liso, secreción mucosa o similares, y diversas reacciones relacionadas con enfermedades respiratorias, tales como inflamación de las vías respiratorias, contracción de las vías respiratorias o similares (Bjorck, T., & Dahlen, S. E. Leukotrienes and histamine mediate IgE-dependent contractions of human bronchi: pharmacological evidence obtained with tissues from asthmatic and non-asthmatic subjects. Pulmonary pharmacology, 6(1), 87-96, 1993; Stone et al., IgE, mast cells, basophils, and eosinophils. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(2), S73-S80, 2010).
Además, se informó que las reacciones alérgicas pueden causar eosinofilia en la que aumenta el número de eosinófilos en sangre y que se asocia a rinitis alérgica y asma, dermatitis atópica, etc. (Mullarkey et al. Allergic and nonallergic rhinitis: their characterization with attention to the meaning of nasal eosinophilia. Journal of Allergy and Clinical Immunology 65.2 122-126, 1980; Humbles et al. Acritical role for eosinophils in allergic airways remodeling. Science 305.5691, 1776-1779, 2004; Grewe et al. A role for Th1 and Th2 cells in the immunopathogenesis of atopic dermatitis. Immunology today 19.8, 359-361, 1998). En particular, se sabe que un aumento en el número de eosinófilos en el tejido pulmonar es un factor importante que causa asma eosinófila y neumonía eosinófila y que la interleucina-5 y la eotaxina son sustancias que inducen un aumento en el número de eosinófilos en un tejido en particular (Van
Oosterhout et al., Effect of anti-IL-5 and IL-5 on airway hyperreactivity and eosinophils in guinea pigs American Review of Respiratory Disease 147.3, 548-552, 1993; Ying et al. Eosinophil chemotactic chemokines (eotaxin, eotaxin-2, RANTEs , monocyte chemoattractant protein-3 (MCP-3), and MCP-4), and CC chemokine receptor 3 expression in bronchial biopsies from atopic and nonatopic (Intrinsic) asthmatics. The Journal of Immunology 163.11, 6321-6329, 1999).
Según los estudios descritos anteriormente, ha habido esfuerzos constantes para inhibir la secreción de anticuerpos IgE, inhibir la desgranulación de mastocitos o basófilos y bloquear la entrada de células inflamatorias tales como eosinófilos, evitando, tratando o mejorando así una enfermedad alérgica.
Las enfermedades relacionadas con las alergias se clasifican, de acuerdo con la zona del cuerpo en la que se producen los síntomas, en rinitis alérgica, asma, neumonitis por hipersensibilidad, neumonía eosinófila, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, urticaria, angioedema, anafilaxia, conjuntivitis alérgica, gastroenteritis eosinófila, síndrome de alergia oral, etc. Además, las enfermedades relacionadas con las alergias se clasifican, de acuerdo con la causa, en asma ocupacional, rinitis ocupacional, dermatitis ocupacional, urticaria inducida por alimentos, anafilaxia dependiente de alimentos, anafilaxia que ocurre después de picaduras de insectos, erupción cutánea causada por el uso de guantes de goma, urticaria inducida por fármacos, anafilaxia que ocurre después del examen con vaso de medio de contraste, síndrome de Churg-Strauss, eosinofilia idiopática, etc.
Como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades alérgicas, se han utilizado principalmente fármacos antihistamínicos, fármacos antileucotrienos, fármacos esteroides y similares, pero su uso está limitado debido a sus efectos y efectos secundarios.
En concreto, se han utilizado fármacos antihistamínicos, descongestionantes, fármacos antileucotrienos y similares para tratar la rinitis alérgica. Sin embargo, los fármacos antihistamínicos pueden causar efectos secundarios tales como somnolencia, y los descongestionantes, tales como la pseudoefedrina, son componentes narcóticos que pueden causar dolor de cabeza o accidente cerebrovascular, y los fármacos antileucotrienos pueden causar efectos secundarios relacionados con la neuropsiquiatría, tal como depresión, impulso suicida o similar.
Más específicamente, los fármacos que se usan para tratar el asma incluyen fármacos antileucotrienos, fármacos esteroides, agonistas adrenérgicos beta-2, fármacos anti-IgE (Omalizumab) y similares. En el presente documento, en el caso de fármacos antileucotrienos, se utilizan principalmente como terapia leve o complementaria, porque estos causan los efectos secundarios descritos anteriormente y también tienen efectos insignificantes sobre el asma. Los agentes terapéuticos esteroides se utilizan principalmente para inhalación en lugar de administración oral debido a sus efectos secundarios y, por lo tanto, muestran un cumplimiento deficiente en comparación con los fármacos orales. Además, los agonistas adrenérgicos beta-2 también son fármacos para inhalación que alivian los síntomas del asma al inhibir eficazmente la broncoconstricción mediante la relajación local del músculo liso del pulmón, pero no cura radicalmente el asma y puede empeorar el asma con la administración a largo plazo (Salpeter, et al. Meta-analysis: effect of long-acting p-agonists on severe asthma exacerbations and asthma-related deaths. Annals of internal medicine 144.12 904-912, 2006). Los fármacos anti-IgE (Omalizumab) se utilizan para el asma intensa resistente a esteroides/agonistas adrenérgicos beta-2 y tienen excelentes efectos, pero tienen las desventajas de que son caros y se utilizan como formulaciones inyectables que no son fáciles de administrar.
Para el tratamiento de la dermatitis atópica, se utilizan fármacos esteroides, inmunosupresores/inmunomoduladores, fármacos antihistamínicos, etc. Los inmunosupresores, tales como el Tacrolimus, tienen excelentes efectos, pero puede causar efectos secundarios tales como hipertensión, función renal reducida o similares.
Tal como se ha descrito anteriormente, es obvio que los agentes que se utilizan actualmente para tratar enfermedades relacionadas con alergias tienen un uso limitado y, por tanto, existe una necesidad urgente de desarrollar nuevos agentes terapéuticos. Además, debido a los complejos mecanismos de acción asociados a la alergia, existe un interés creciente en los extractos de hierbas que tengan efectos sobre una combinación de varios mecanismos a través de varios componentes, en lugar de fármacos sintéticos de un solo componente que controlan principalmente dianas únicas. Sin embargo, los informes sobre extractos de hierbas que tienen excelentes efectos contra una combinación de diversas enfermedades alérgicas son aún insuficientes. En consecuencia, existe una necesidad urgente de desarrollar nuevos extractos vegetales a base de hierbas que sean seguros para usar in vivo y que puedan sustituir a los fármacos antialérgicos convencionales.
[Divulgación]
[Problema técnico]
Los presentes inventores han realizado estudios en una planta del género Justicia, y como resultado, han encontrado que un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo inhibe eficazmente la secreción de anticuerpos IgE e inhibe la desgranulación de mastocitos y basófilos, y muestra excelentes efectos antialérgicos en varios modelos animales de enfermedades alérgicas, completando de esta manera la presente invención.
Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un agente antialérgico que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición alimentaria para prevenir o mejorar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una composición cosmética para prevenir o mejorar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar el uso de un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.
[Solución técnica]
Para conseguir los objetivos anteriores, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, donde una planta del género Justicia es Justicia procumbens L.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde Justicia procumbens L. es una o más seleccionada del grupo que consiste en la planta completa, parte aérea, raíz, hoja y flor de Justicia procumbens L.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde el extracto es un extracto en disolvente orgánico.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde el disolvente orgánico es uno o más seleccionado del grupo que consiste en un alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, hexano, acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo y acetona.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde el alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono es uno o más seleccionado del grupo que consiste en metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y n-butanol.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde la fracción es una fracción en disolvente orgánico obtenida mediante fraccionamiento con un disolvente orgánico seleccionado del grupo que consiste en n-hexano, acetato de etilo y n-butanol saturado con agua. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde la fracción es una fracción en agua que excluye un disolvente orgánico.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde la enfermedad alérgica es una enfermedad respiratoria alérgica.
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica, en donde la enfermedad alérgica es una o más seleccionada del grupo que consiste en rinitis, asma, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, otitis media alérgica, gastroenteritis alérgica, anafilaxia y urticaria.
La presente invención también proporciona un agente antialérgico que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
La presente invención también proporciona una composición alimentaria para prevenir o mejorar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo. La presente invención también proporciona una composición alimentaria en donde el alimento es un alimento saludable funcional.
La presente invención también proporciona una composición cosmética para prevenir o mejorar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
La presente invención también proporciona el uso de un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.
[Efectos ventajosos]
Un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo de acuerdo con la presente invención la presente invención puede prevenir, tratar o mejorar eficazmente una enfermedad alérgica.
[Descripción de los dibujos]
La Figura 1 muestra los resultados de la confirmación de la reducción en el número de células inflamatorias en líquidos de lavado broncoalveolar, causada por extractos de Justicia procumbens de acuerdo con la presente invención.
[Mejor modo]
La presente invención proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
En la presente invención, "el género Justicia de la familia Acanthaceae" es el género más grande de la familia Acanthaceae, que consiste en aproximadamente 600 especies y es una planta que se encuentra en zonas de clima pantropical y tropical.
En la presente invención, "una planta del género Justicia" se refiere a una planta perteneciente al género Justicia de la familia Acanthaceae. En la presente invención, cualquier planta perteneciente al género Justicia de la familia Acanthaceae se puede utilizar sin limitación, siempre que un extracto de la misma o una fracción del extracto pueda exhibir efectos antialérgicos de modo que pueda usarse contra una enfermedad alérgica. J. procumbens L., "Justicia procumbens L., del género Justicia de la familia Acanthaceae " es una planta anual y se distribuye en Corea, Japón, China, India, etc. Tiene una altura de aproximadamente 30 cm, y sus hojas son hojas opuestas, largas de forma ovalada, de 2-4 cm de largo y 1-2 cm de ancho. Además, ambos extremos de la hoja son puntiagudos y los bordes de la hoja son elípticos o tienen forma de onda. La flor de una planta es de color magenta claro, florece de julio a septiembre y da frutos de septiembre a octubre. La planta entera de Justicia procumbens L. se cosecha en la temporada de otoño y se usa después del secado. Se informó que la planta entera de Justicia procumbens L. tiene efectos sobre la eliminación del calor, desintoxicación, eliminación de humedad, activación de la circulación sanguínea y alivio del dolor, y se puede usar contra la diarrea bacteriana, ictericia, edema de nefritis, dolor muscular y óseo, contusiones, etc. en la página web del Portal Korean Traditional Knowledge (http://www.koreantk.com/ktkp2014/medicine/medicineview. view?medCd=M0003175), con identificador de objeto digital (doi, por sus siglas en inglés) https://doi.org/10.20929/KTKP.MED.0000079719.
Un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo de acuerdo con la presente invención puede inhibir la secreción de anticuerpos IgE y la desgranulación de mastocitos y basófilos. En particular, es útil para la inhibición de la función inmunitaria Th2 y exhibe excelentes efectos antialérgicos. Por tanto, puede prevenir, tratar o mejorar una enfermedad alérgica.
Si el extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo de acuerdo con la presente invención es un extracto mixto o una fracción mixta, que comprende, como principio activo, un extracto de dos o más plantas del género Justicia o una fracción del extracto, puede ser un extracto mixto obtenido mediante la extracción de una mezcla de plantas o una fracción del extracto mixto, o un extracto mixto obtenido mediante la extracción de cada una de las plantas y la mezcla de los extractos, o una fracción del extracto mixto, pero no se limita a estos.
En la presente invención, una planta más preferida del género Justicia es, por ejemplo, Justicia procumbens L.
Una planta del género Justicia, que se usa en la presente invención, puede usarse comprada comercialmente o ser una planta cultivada sin limitación, y toda la planta, parte aérea, hoja, raíz, tallo, flor o similar de una planta puede incluirse sin limitación. De la manera más preferente, se puede utilizar toda la planta o la parte aérea de una planta.
El extracto de una planta del género Justicia de acuerdo con la presente invención puede ser un extracto en disolvente orgánico o agua. Preferentemente, puede ser un extracto en disolvente orgánico, un extracto bruto de disolvente orgánico, o un concentrado del mismo. El disolvente orgánico es preferentemente uno o más seleccionado del grupo que consiste en un alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, hexano, acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo y acetona. El alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono es preferentemente uno o más seleccionado del grupo que consiste en metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y n-butanol, y el alcohol inferior que tiene de 1 a 4 átomos de carbono puede comprender un alcohol anhidro o hidratado que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. El alcohol, por ejemplo, etanol o isopropanol, puede ser de 1 % a 100 % (v/v), preferentemente de 30 % a 100 % (v/v), más preferentemente de 70 % a 100 % (v/v), incluso más preferentemente 90 % (v/v), 95 % (v/v) o 100 % (v/v) alcohol. Cuando se utiliza butanol como disolvente de extracción, preferentemente es butanol saturado con
agua (una solución acuosa de butanol al 75 %-85 % (v/v)).
La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para prevenir o tratar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo, en donde la "fracción" puede ser una fracción (extracto secundario) obtenida mediante la concentración de un extracto bruto de Justicia procumbens L. y el fraccionamiento del concentrado mediante la adición de alcoholes inferiores que tienen de 1 a 4 átomos de carbono, soluciones acuosas de los mismos o disolventes no polares individualmente (o en combinación).
Los alcoholes inferiores que tienen de 1 a 4 átomos de carbono pueden seleccionarse preferentemente del grupo que consiste en etanol, metanol, propanol, isopropanol, butanol y n-butanol. Los disolventes no polares pueden seleccionarse del grupo que consiste en hexano, acetato de etilo, éter, diclorometano, cloroformo y butanol, y puede ser preferentemente n-hexano, acetato de etilo y n-butanol saturado con agua. Además, la fracción puede ser una fracción de agua que excluye cada capa de disolvente orgánico.
El extracto o fracción de la presente invención puede incluir no solo un extracto o fracción obtenida usando el disolvente de extracción descrito anteriormente, sino también un extracto o fracción sometida a un proceso de purificación convencional. Por ejemplo, fracciones obtenidas a través de varios métodos de purificación adicionales, tales como separación con una membrana de ultrafiltración que tiene un límite de peso molecular determinado, separación por varios sistemas de cromatografía (fabricados para la separación de acuerdo con tamaño, carga, hidrofobicidad o afinidad), también se incluyen en el alcance de la fracción de la presente invención.
El extracto o fracción de la presente invención se puede preparar en polvo mediante procesos adicionales tales como destilación al vacío y liofilización o secado por pulverización.
El extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo de acuerdo con la presente invención puede prepararse mediante un proceso que comprende las siguientes etapas, pero no se limita a ellas:
1) una etapa de trituración y secado al aire de una planta del género Justicia;
2) una etapa de extracción de la planta triturada del género Justicia para obtener un extracto; y
3) una etapa de filtrado del extracto, seguida de concentración a presión reducida.
La planta del género Justicia usada en la etapa 1) puede ser una planta cultivada o una planta disponible comercialmente.
La extracción en la etapa 2) puede ser por inmersión (extracción en frío o en caliente), extracción de agua caliente, extracción ultrasónica o extracción por enfriamiento por reflujo. Preferentemente, es extracción por reflujo. La extracción puede realizarse a una temperatura de 40 °C a 120 °C, preferentemente de 80 °C a 100 °C. La extracción se puede realizar durante 1 a 24 horas, preferentemente de 1 a 10 horas, y más preferentemente de 1 a 5 horas. Además, la extracción de la presente invención se puede realizar de 1 a 5 veces, preferentemente 2 o 3 veces, dependiendo de la eficacia de extracción, pero no se limita a esto.
Para obtener la fracción del extracto de la planta del género Justicia, puede añadirse agua purificada de 5 a 20 veces (v/p) al concentrado del extracto primario para suspender el concentrado en él, y luego los disolventes orgánicos seleccionados del grupo que consiste en hexano, acetato de etilo, butanol (incluyendo butanol saturado con agua), diclorometano y cloroformo pueden añadirse individualmente (o secuencialmente) a la suspensión para realizar la extracción, obteniendo así una fracción (extracto secundario). En el presente documento, la temperatura de extracción es de 40 °C a 120 °C, preferentemente de 60 °C a 90 °C, y el tiempo de extracción es de 2 a 24 horas, preferentemente de 4 a 12 horas. Además, la extracción de la presente invención se puede realizar de 1 a 5 veces, preferentemente 2 o 3 veces, dependiendo de la eficacia de extracción, pero no se limita a esto.
El extracto o fracción obtenida como se describió anteriormente puede prepararse en polvo mediante la eliminación del alcohol inferior y el disolvente orgánico restantes mediante el uso de un método de secado convencional, tal como el secado a presión reducida, secado por pulverización o liofilización de modo que sea adecuado para usar como materia prima para un fármaco médico.
Por otra parte, las enfermedades alérgicas en la presente invención pueden incluir varias enfermedades causadas por varios alérgenos sin limitación, e incluyen no solo síntomas patológicos atribuibles a reacciones antígeno-anticuerpo, sino también aquellas que son muy similares a las enfermedades que muestran reacciones antígeno-anticuerpo, pero no muestran reacciones antígeno-anticuerpo, o aquellas que tienen alta probabilidad de causar dichas reacciones, etc. La enfermedad alérgica incluye cualquier enfermedad que aparezca en el sistema respiratorio, el sistema digestivo, el sistema circulatorio o similar. Preferentemente, la enfermedad alérgica es una o más seleccionada del grupo que consiste en rinitis, asma, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, otitis media alérgica, gastroenteritis alérgica, anafilaxia y urticaria, o puede ser una enfermedad respiratoria alérgica.
Para el tratamiento de una enfermedad alérgica, un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo
puede usarse solo o en combinación con uno o más fármacos o extractos de hierbas que se sabe que son eficaces contra una enfermedad alérgica. En particular, cuando el extracto o fracción de la presente invención se va a utilizar en una mezcla con un extracto de otra planta, una planta puede extraerse después de mezclarla con una planta del género Justicia, o puede extraerse por separado y mezclarse con el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo.
Ejemplos de un extracto o una fracción del mismo, que es eficaz contra una enfermedad alérgica y se puede utilizar en combinación con un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo, incluyen una mezcla del extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo con un extracto de Andrographis paniculata o una fracción del mismo, una mezcla del extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo con un extracto de Sida rhombifolia o una fracción del mismo, una mezcla del extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo con un extracto de Chamaecrista nomame o una fracción del mismo, una mezcla del extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo con un extracto de Lagerstroemia indica L. o una fracción del mismo, etc. Además, el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo se puede utilizar en combinación con extractos o fracciones de los mismos de varias plantas, incluyendo Salvia plebeian, Mimosa pudica, Eclipta prostrate, Tussilago farara, corteza de Fraxini, hoja de Vitis vinifera, semen de Raphani, Tribulus terrestris L., semilla de Euryale, Rhenm undulatum L., Lindera strychnifolium, Fallopia japonica, Schijandra chinensis, etc., que se espera que muestren reacciones antialérgicas.
La composición de acuerdo con la presente invención puede formularse como una formulación farmacéutica usando un método bien conocido en la materia para proporcionar una liberación rápida, sostenida o retardada del principio activo después de su administración a mamíferos. En la preparación de una formulación, la composición de acuerdo con la presente invención se mezcla o diluye preferentemente con un vehículo o se encapsula en un vehículo en forma de cápsula.
En concreto, la composición farmacéutica de la presente invención puede formularse en forma de comprimido, píldora, polvo, gránulo, cápsula, suspensión, solución, emulsión, jarabe, aerosol, solución inyectable o similar de acuerdo con un método convencional bien conocido en la materia. Ejemplos de vehículos, excipientes y diluyentes que pueden estar contenidos en la composición farmacéutica de la presente invención incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidón, goma arábiga, alginato, gelatina, fosfato de calcio, silicato de calcio, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, hidroxibenzoato de metilo, hidroxilbenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio y aceite mineral, etc. La composición de la presente invención puede formularse con diluyentes o excipientes convencionales, tales como materiales de relleno, expansores, aglutinantes, agentes humectantes, disgregantes, tensioactivos, etc., que se utilizan generalmente.
Las formulaciones sólidas para administración oral incluyen comprimidos, píldoras, polvos, gránulos, cápsulas y similares, y dichas formulaciones sólidas pueden comprender al menos un excipiente, por ejemplo, almidón, carbonato de calcio, sacarosa, lactosa, gelatina o similares. Además de los excipientes simples, también se pueden usar lubricantes tales como estearato de magnesio o talco. Las formulaciones líquidas para la administración oral incluyen suspensiones, soluciones, emulsiones, y jarabe, y pueden incluir varios excipientes, por ejemplo, agentes humectantes, agentes aromatizantes, aromas y conservantes, además de agua y parafina líquida, que son diluyentes simples de uso frecuente.
Las formulaciones para administración parenteral pueden incluir soluciones acuosas estériles, soluciones no acuosas, suspensiones, emulsiones, preparaciones liofilizadas, supositorios, etc. Como disolventes no acuosos o agentes de suspensión, se pueden usar propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva, ésteres inyectables tales como oleato de etilo y similares.
La composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Tal como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad farmacéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para tratar enfermedades, con una relación beneficio/riesgo razonable aplicada a cualquier tratamiento médico. El nivel de dosificación eficaz de la composición puede determinarse por un experto en la materia dependiendo de varios factores, incluyendo un método de formulación, la dolencia del paciente, peso corporal, género y edad, la gravedad de la enfermedad, la forma del fármaco, la vía y duración de la administración, velocidad de excreción y sensibilidad de reacción. Como reconocen los expertos en la materia, la cantidad eficaz puede variar dependiendo de la vía de tratamiento, el uso de excipientes y la posibilidad de uso con otros fármacos.
La dosis o posología del extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo de acuerdo con la presente invención puede variar dependiendo del peso corporal, edad, género, condiciones de salud, dieta del paciente, el momento de la administración, el modo de administración, tasa de excreción y gravedad de la enfermedad. Sin embargo, el extracto o fracción de la presente invención se administra a una dosis de 0,001 mg/kg a 1000 mg/kg una o varias veces al día para adultos.
La composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse a través de varias vías a mamíferos, incluyendo ratones, ganado y seres humanos. Por ejemplo, puede administrarse por vía oral, parenteral, intravenosa, intradérmica o mediante inyección subcutánea.
La administración puede realizarse por vía oral, parenteral, intravenosa, intradérmica o mediante inyección subcutánea. Cuando el extracto o la fracción del mismo se va a administrar a un sujeto, puede administrarse en una cantidad eficaz necesaria para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica. Cuando el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo se administra a un sujeto, la secreción de anticuerpos IgE y la desgranulación de mastocitos y basófilos en el sujeto se pueden inhibir y, en particular, la inmunidad Th2 se puede inhibir eficazmente para que las reacciones alérgicas in vivo puedan inhibirse eficazmente. Las enfermedades alérgicas que pueden prevenirse o tratarse mediante la administración pueden incluir, sin limitación, diversas enfermedades causadas por varios alérgenos, e incluyen no solo síntomas patológicos atribuibles a reacciones antígeno-anticuerpo, sino también aquellas que son muy similares a las enfermedades que muestran reacciones antígeno-anticuerpo pero no muestran reacciones antígeno-anticuerpo, o aquellas que tienen alta probabilidad de causar dichas reacciones, etc. Las enfermedades alérgicas incluyen cualquier enfermedad que aparezca en la enfermedad respiratoria alérgica o en el sistema respiratorio, el sistema digestivo, el sistema circulatorio o similar. Preferentemente, la enfermedad alérgica es una o más seleccionada del grupo que consiste en rinitis, asma, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, otitis media alérgica, gastroenteritis alérgica, anafilaxia y urticaria.
El sujeto se refiere a un animal. En concreto, el sujeto es un mamífero en el que la prevención o el tratamiento con el extracto o fracción de la presente invención puede exhibir un efecto beneficioso. Los ejemplos preferidos del sujeto incluyen primates tales como seres humanos. Además, dichos sujetos incluyen todos los sujetos que tienen síntomas alérgicos o que están en riesgo de desarrollar dichos síntomas. Una cantidad eficaz para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica se refiere a una cantidad que proporciona, en dosis únicas o múltiples, sola o en combinación con una o más de otras composiciones (otros agentes terapéuticos contra enfermedades alérgicas), un resultado deseado o un beneficio para un sujeto.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un agente antialérgico que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición alimentaria para prevenir o aliviar una enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
Cuando el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo, que está contenido en la composición alimentaria, se administra junto con un alimento, puede inhibir la secreción de anticuerpos IgE y la desgranulación de mastocitos y basófilos, y en particular, puede inhibir eficazmente la inmunidad Th2. En consecuencia, puede exhibir excelentes efectos antialérgicos y, por lo tanto, puede prevenir o mejorar eficazmente una enfermedad alérgica.
La composición alimentaria puede ser un alimento funcional de acuerdo con el propósito de la presente invención. Por lo tanto, la presente invención proporciona una composición alimentaria para prevenir o mejorar una enfermedad alérgica, en donde el alimento es un alimento saludable funcional.
El alimento funcional es un alimento diseñado para ayudar a regular los biorritmos naturales del cuerpo. Es un alimento al que se le da un valor añadido mediante técnicas físicas, bioquímicas y de bioingeniería para que pueda actuar expresando las funciones de un alimento dado para un propósito particular. Este alimento funcional es un alimento procesado diseñado para proteger el organismo, ayudar a regular los biorritmos naturales del cuerpo, prevenir enfermedades y ayudar a una persona a recuperarse de enfermedades. Puede contener aditivos, edulcorantes o materiales funcionales aceptables para los alimentos.
Los ejemplos de la composición alimentaria de acuerdo con la presente invención incluyen varios alimentos, por ejemplo, bebidas, gomas, tés, complejos vitamínicos, alimentos complementarios para la salud, etc. Las bebidas incluyen zumo de frutas naturales, bebidas de zumo de frutas, bebidas vegetales, etc. La composición alimenticia de la presente invención se puede formular como comprimidos, gránulos, polvos, cápsulas, soluciones líquidas, píldoras o similares de acuerdo con métodos conocidos.
Además, la composición alimenticia de la presente invención puede comprender además varios aromatizantes convencionales, hidratos de carbono naturales, etc. Ejemplos de aromatizantes incluyen aromatizantes naturales tales como extractos de taumatina o estevia, y aromatizantes sintéticos tales como sacarina, aspartamo, etc. Ejemplos de hidratos de carbono naturales incluyen monosacáridos tales como glucosa o fructosa, disacáridos tales como maltosa o sacarosa, polisacáridos tales como dextrina o ciclodextrina, alcoholes del azúcar tales como xilitol, sorbitol o eritritol y similares. Además, la composición alimentaria de la presente invención puede comprender además aditivos alimentarios aceptables, incluyendo varios nutrientes, vitaminas, minerales (electrolitos), colorantes, ácidos pécticos y sus sales, ácido algínico y sus sales, ácidos orgánicos tales como ácido cítrico anhidro, espesantes coloidales protectores, agentes de ajuste del pH, estabilizantes, conservantes, glicerina, alcohol, agentes carbonizantes tales como los que se usan en bebidas carbonatadas, pulpa de frutas para la preparación de zumos de frutas naturales, bebidas de zumos de frutas o zumos de verduras, etc. Dichos aditivos pueden usarse solos o en combinación.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona una composición cosmética para prevenir o mejorar una
enfermedad alérgica que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo como principio activo.
En la presente invención, la composición cosmética puede formularse como una formulación seleccionada del grupo que consiste en crema suavizante, loción astringente, loción de leche, crema nutritiva, crema para masajes, esencia, crema para los ojos, esencia para los ojos, crema limpiadora, espuma limpiadora, agua limpiadora, envase, loción corporal, crema corporal, aceite corporal, esencia corporal, base de cosméticos, base de maquillaje, tintes para el cabello, champú, enjuagues y limpiadores corporales.
La composición cosmética de la presente invención puede prepararse como diversas formaciones utilizando el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo de acuerdo con métodos convencionales de preparaciones cosméticas, y puede comprender aditivos convencionales, tales como estabilizantes, solubilizantes, vitaminas, pigmentos y fragancias, que se utilizan generalmente en el campo de las composiciones cosméticas.
Si la composición cosmética de la presente invención se prepara en forma de producto cosmético, champú, loción capilar, crema para el cabello, gel para el cabello o similares, que comprende el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo, se puede usar después de diluir con una solución limpiadora, solución astringente o solución humectante.
La composición cosmética de la presente invención se prepara preferentemente en forma de suavizante, loción, crema o esencia para la piel.
En la composición cosmética de la presente invención, el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo puede añadirse a la composición cosmética en una cantidad de 0,1 % a 10 % en peso basado en el peso total del líquido. Además, el extracto o la fracción de una planta del género Justicia puede añadirse a la composición cosmética en una cantidad de 0,001 % a 5 % en peso, preferentemente de 0,01 % a 3 % en peso, basado en el peso seco total.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona el uso de un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo para la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.
En el presente documento, el extracto de una planta del género Justicia o la fracción del mismo, y la enfermedad alérgica, son como se ha descrito anteriormente.
Debe entenderse que los valores descritos en la memoria descriptiva incluyen equivalentes de los mismos a menos que se especifique lo contrario.
[Modo para la invención]
En lo sucesivo en el presente documento, se describirán ejemplos de preparación, ejemplos y ejemplos de formulación preferidos para una mejor comprensión de la presente invención. Debe entenderse, sin embargo, que estos ejemplos de preparación, ejemplos y ejemplos de formulación son únicamente con fines ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de la presente invención.
Ejemplo de preparación 1: Preparación de extracto de Justicia procumbens L.
La Justicia procumbens L. utilizada en el experimento se recogió en una región de Corea del Sur y se secó a la sombra. El origen de la planta se identificó por el Instituto Nacional de Recursos Biológicos del Ministerio de Medio Ambiente (Corea) (número de identificación de muestra: NIBRVP0000469673). Usando agua y disolventes orgánicos (etanol, isopropanol, metanol, n-butanol, n-hexano, acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo y acetona) como disolventes de extracción, se prepararon extractos de Justicia procumbens L.
Métodos específicos para preparar los extractos son los siguientes.
Ejemplo de preparación 1.1: Preparación de extractos en agua
Se dividió Justicia procumbens L. secada a la sombra en una planta entera, una parte aérea, una raíz, una hoja, una flor y similares, y luego se pulverizó con un pulverizador (KSP-35, Korea Medi Co., Ltd.). Se extrajeron a reflujo con precisión 5 g de cada parte de Justicia procumbens L. triturada con 50 ml de agua purificada en una incubadora a temperatura constante (B-09, Hyundai Science Co., Ltd) a 90 °C dos veces (primera extracción: 2 horas y segunda extracción: 1 hora). Cada uno de los extractos se filtró de manera natural a través de papel de filtro y cada uno de los filtrados se concentró con un evaporador de vacío (N-1100, EYELA) a una temperatura de 50 °C-60 °C, y luego se secó en un horno de vacío (OV-12, JEIO Tech) a 60 °C durante 12 horas, obteniendo así 1,05 g. Los extractos obtenidos se muestran en la Tabla 1 a continuación.
Tabla 1
Ejemplo de preparación 1.2: Preparación de extractos en etanol
Usando etanol como disolvente de extracción, se prepararon extractos en etanol de Justicia procumbens L. de la misma manera que se describe en el ejemplo de preparación 1.1. Cada una de toda la planta, parte aérea, raíz, hoja y flor de Justicia procumbens L. se extrajo para preparar un extracto en etanol de cada parte. Además, la parte aérea de Justicia procumbens L. se extrajo con etanol al 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % o 100 % (% v/v) para preparar extractos en etanol. Los extractos se obtuvieron en una cantidad de 0,16 a 1,04 g como se muestra en la Tabla 2 a continuación.
T l 2
Ejemplo de preparación 1.3: Preparación de extractos en isopropanol
Usando isopropanol como disolvente de extracción, se prepararon extractos en isopropanol de Justicia procumbens L. de la misma manera que se describe en el ejemplo de preparación 1.1. En concreto, se extrajeron 5 g de Justicia procumbens L. con isopropanol al 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, o 100 % (% v/v) para preparar extractos en isopropanol. Los extractos se obtuvieron en una cantidad de 0,19-1,01 g como se muestra en la Tabla 3 a continuación.
T l
Ejemplo de preparación 1.4: Preparación de extracciones con otros disolventes orgánicos
Usando varios disolventes orgánicos, incluyendo metanol, n-butanol, n-hexano, acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo y acetona, se prepararon extractos de Justicia procumbens L. En este ejemplo, a menos que se especifique de otro modo, el disolvente de extracción se utilizó con disolvente puro (100 % v/v). La extracción se realizó de la misma manera que se describe en el ejemplo de preparación 1.1, excepto que se utilizó un tipo diferente de disolvente de extracción. Para la preparación de un extracto en metanol, se utilizaron 3 l de metanol por 300 g de Justicia procumbens L. pulverizada. Los extractos se obtuvieron en una cantidad de 0,19 a 1,01 g como se muestra en la Tabla 4 a continuación.
T l 4
Ejemplo de preparación 2: Preparación de fracciones solubles en disolventes orgánicos de extracto en etanol al 95 % de Justicia procumbens L.
Aproximadamente 15 g de Justicia procumbens L. triturada con un pulverizador se extrajo a reflujo con 150 ml de etanol al 95 % dos veces (primera extracción: 2 horas y segunda extracción: 1 hora), en una incubadora a temperatura constante (B-09, Hyundai Science Co., Ltd) a 90 °C. El extracto se filtró a presión reducida y el filtrado se concentró en un evaporador de vacío (N-1100, EYELA) a una temperatura de 50 °C a 60 °C, y luego se secó en un horno de vacío (OV-12, JEIO Tech) a 60 °C durante 12 horas, preparando así un extracto en etanol al 95 % (1,1-1,7 g). El extracto en etanol al 95 % se suspendió en 65 ml de agua destilada en un embudo de decantación, y luego se añadieron 40 ml de cada uno de n-hexano, acetato de etilo y n-butanol saturado con agua, seguido de agitación. Después de que se confirmó la separación de capas del disolvente orgánico en el embudo de decantación, el disolvente orgánico se concentró a presión reducida. El proceso de extracción se repitió tres veces, preparando así una fracción de disolvente orgánico (0,1-0,14 g) y una fracción de capa de agua (0,25-0,34 g) que excluye la capa de disolvente orgánico. Las fracciones obtenidas se muestran en la Tabla 5 a continuación.
Tabla 5
Ejemplo 1: La capacidad del extracto de Justicia procumbens L. para inhibir la secreción de anticuerpos IqE
Para confirmar el efecto del extracto de Justicia procumbens L. sobre la inhibición de reacciones alérgicas, se midió la capacidad del extracto para inhibir la secreción de anticuerpos IgE utilizando células U266B1. Las células U266B1 utilizadas se adquirieron de American Tissue Cell Culture (ATCC n.° TIB-196). En concreto, se diluyeron células U266B1 en medio RPMI que contenía suero bovino fetal (f Bs , por sus siglas en inglés) al 15 % y antibióticos (100 U/ml de penicilina y 100 |jg/ml de estreptomicina) a una concentración de 2x 105 células/ml, y luego la dilución se dispensó en una placa de 24 pocillos a una concentración de 400 jl/pocillo y en una placa de 96 pocillos a una concentración de 100 jl/pocillo, y se incubó en una incubadora de CO2 al 5 % a 37 °C durante 72 horas.
Las células U266B1 se trataron con 5 mg/ml de cada uno de los extractos y fracciones de Justicia procumbens L. (preparados en los ejemplos de preparación 1 y 2 y mostrados en las Tablas 1 a 5). El medio de la placa de 24 pocillos se utilizó para medir la secreción de anticuerpos IgE, y el de la placa de 96 pocillos se utilizó para medir la citotoxicidad.
Para medir la secreción de anticuerpos IgE, se recogió el medio de la placa de 24 pocillos y se centrifugó a 125 xg durante 5 minutos para eliminar los residuos. Se diluyeron 100 p f del medio 10 veces, y luego se midió el grado de secreción de IgE usando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas de IgE (ELISA, Komabiotech Inc). La inhibición de la secreción de IgE por cada extracto se calculó utilizando la siguiente ecuación 1:
Ecuación 1
Inhibición (%) de la secreción de IgE = 100 - (concentración de IgE del grupo de prueba / concentración de IgE del grupo de control) x 100
Los resultados de la medición se muestran en las Tablas 6 a 8 a continuación.
(continuación)
T l 7
T l
(continuación)
Como se puede observar en las Tablas 6 a 8, los extractos en alcoholes inferiores y disolventes orgánicos de Justicia procumbens L. mostraron el efecto de inhibir significativamente la secreción de IgE de linfocitos B. Además, como se puede observar en la Tabla 7 anterior, los extractos en etanol de todas las partes de Justicia procumbens L. mostraron una inhibición de la secreción de IgE de aproximadamente un 25 %-40 %.
Como puede observarse en la Tabla 8 anterior, varias fracciones en disolventes orgánicos, que se muestran en la Tabla 5 y se obtuvieron mediante extracción secundaria del extracto bruto en etanol al 95 %, también exhibieron excelentes efectos inhibidores contra la secreción de IgE de linfocitos B. Por tanto, se puede ver que los extractos en disolvente orgánico de Justicia procumbens L. y fracciones de los mismos pueden inhibir eficazmente reacciones alérgicas mediante la inhibición de la secreción de IgE.
Además, se realizó un experimento de citotoxicidad usando una placa de 96 pocillos. La viabilidad celular de células cultivadas durante 72 horas se midió usando un kit de ensayo CCK-8 (Dojindo, Japón). Como resultado, se demostró que todos los extractos y fracciones de Justicia procumbens L. mostrados en las Tablas 6 a 8 mostraron una viabilidad celular del 80 % o más. Esto sugiere que los extractos en disolventes orgánicos de Justicia procumbens L. y fracciones de los mismos se pueden utilizar como sustancias seguras que no tienen citotoxicidad.
Ejemplo 2: Medición de la capacidad del extracto de Justicia procumbens L. para inhibir la desgranulación
Para medir las capacidades inhibidoras de la desgranulación de los extractos y fracciones de Justicia procumbens L. que se muestran en las Tablas 1 a 5 anteriores, se midió la secreción de p-hexosaminidasa de mastocitos y basófilos para determinar las capacidades inhibidoras de la desgranulación (de Haan et al. Lipid-rich enteral nutrition regulates mucosal mast cell activation via the vagal anti-inflammatory reflex. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology 305.5 G383-G391, 2013; Sewell et al. Induction of interleukin-4 and interleukin-5 expression in mast cells is inhibited by glucocorticoids. Clinical and diagnostic laboratory immunology 5.1 18-23, 1998).
Se adquirieron mastocitos de ratón MC/9 del American Tissue Cell Culture (ATCC n.° CRL-8306), y se adquirieron basófilos de rata RBL-2H3 del Korean Cell Link Bank (KCLB n.° 22256). Los mastocitos MC/9 y los basófilos RBL-2H3 se diluyeron a concentraciones de 2x 106 células/ml y 5x 105 células/ml, respectivamente, y se dispensaron 400 pl de cada una de las diluciones en cada pocillo de placas de 24 pocillos. Cada pocillo se trató previamente con 10 pg/ml o 20 pg/ml de cada uno de los extractos y fracciones (preparados en los ejemplos de preparación 1 y 2 y mostrados en las Tablas 1 a 5 anteriores) durante 30 minutos, y luego se indujo la desgranulación de las células con PMA 200 nM/A23187 10 mM durante 1 hora. Un grupo normal se trató con DMSO y un grupo de control se trató solo con PMA/A23187. Cada una de p-hexosaminidasa liberada al medio por desgranulación y p-hexosaminidasa en un lisado celular obtenido por lisis con Triton-X100 al 1 % se incubó con 4-p-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida (Sigma n.° N -9376) a 37 °C durante 1 hora, y luego se añadió glicina 0,2 M (pH 10,7) para detener la reacción. Se midió la absorbencia a 405 nm y se calculó la secreción de p-hexosaminidasa (%) utilizando la siguiente ecuación 2:
Ecuación 2
Secreción de p-hexosaminidasa (%) = {absorbencia del medio / (absorbencia del lisado celular absorbencia del medio)} x 100
Basado en la secreción de p-hexosaminidasa (%) obtenida usando la ecuación 2 anterior, la capacidad inhibidora de la desgranulación de cada uno de los extractos de Justicia procumbens L. se calculó utilizando la siguiente ecuación 3 (p-hexo: p-hexosaminidasa):
Ecuación 3
Capacidad inhibidora de la desgranulación (%) = {(% de secreción de p-hexo del grupo de prueba - % de secreción de p-hexo del grupo normal) / (% de secreción de p-hexo del grupo de control - % de secreción de p-hexo del grupo normal)} X 100
Los resultados del cálculo se muestran en las Tablas 9 a 11 a continuación.
T l 1
(continuación)
T l 11
Como puede observarse en las Tablas 9 a 11 anteriores, los extractos en alcoholes inferiores y los extractos en disolventes orgánicos de Justicia procumbens L. todos inhibieron la desgranulación de mastocitos y basófilos. Como puede observarse en la Tabla 10 anterior, el extracto en etanol de cada parte de Justicia procumbens L. mostró
una alta inhibición de la desgranulación de un 12 %-28 %. En particular, los extractos en etanol de la planta entera y la parte aérea mostraron una capacidad muy alta para inhibir la desgranulación de basófilos. Además, como se puede observar en la Tabla 11 anterior, las fracciones en disolvente orgánico, que se muestran en la Tabla 5 y se obtuvieron mediante extracción secundaria del extracto bruto en etanol al 95 %, también mostraron una excelente capacidad para inhibir la desgranulación de mastocitos y basófilos.
De los resultados descritos anteriormente, se puede observar que los extractos en disolventes orgánicos de Justicia procumbens L. y sus fracciones pueden producir reacciones alérgicas de forma eficaz mediante la inhibición de la desgranulación de mastocitos y basófilos.
Ejemplo 3: Examen de la inhibición de la secreción de IgE en modelos de rinitis en ratones Balb/c
Para confirmar si el extracto de Justicia procumbens L. de la presente invención puede realmente inhibir reacciones alérgicas en modelos animales, se examinó la inhibición de la secreción de IgE en modelos de rinitis en ratones Balb/c.
En concreto, se adquirieron ratones Balb/c de 5 semanas de edad y se aclimataron durante 1 semana. A los 0, 7 y 14 días de una semana de aclimatación, los ratones se sensibilizaron sistemáticamente mediante la inyección intraperitoneal de ovoalbúmina al 0,1 % (OVA: 1 mg/ml, Al(OH)3: 20 mg/ml) en una cantidad de 100 ^l/ratón. A partir de una semana después de la sensibilización sistémica final, se administraron por vía oral 200 mg/kg del extracto en etanol al 95 % preparado en el ejemplo de preparación 1 a los ratones por la mañana todos los días durante 1 semana. Como control positivo, se administró intraperitonealmente 3 mg/kg de dexametasona. Después de 1 hora, se vertió una solución de ovoalbúmina al 0,4 % en la cavidad nasal. Por la tarde, se vertió una vez más solución de ovoalbúmina al 0,4 % en la cavidad nasal. Después de 7 días de la administración del fármaco, se hizo una biopsia de los ratones y se tomaron muestras de sangre completa de la vena cava inferior y se centrifugó a 12000 rpm durante 10 minutos para separar el suero. La concentración de IgE en el suero separado se midió usando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA, Komabiotech Inc), y los resultados de la medición se muestran en la Tabla 12 a continuación. La inhibición (%) de la secreción de IgE se calculó utilizando la siguiente ecuación 4:
Ecuación 4
Inhibición (%) de la secreción = 100 - { (concentración en el grupo de prueba -concentración en el grupo normal) / (concentración en el grupo inducido con ovoalbúmina - concentración en el grupo normal)} x 100
Como puede observarse en la Tabla 12 anterior, el extracto de Justicia procumbens L. inhibió la secreción de IgE en los modelos de rinitis alérgica en aproximadamente un 60 % o más y, por tanto, mostró un efecto similar al de la dexametasona utilizada como control positivo. Por tanto, se encontró que el extracto de Justicia procumbens L. se puede utilizar como un posible agente terapéutico para la rinitis alérgica en lugar de la dexametasona. En particular, la dexametasona se prescribe solo para la rinitis alérgica intensa, mientras que se espera que Justicia procumbens L. también se pueda prescribir para la rinitis alérgica leve, porque es un extracto de hierbas.
Ejemplo 4: Examen de la capacidad para inhibir la anafilaxia
Para confirmar el efecto del extracto de Justicia procumbens L. sobre la inhibición de reacciones alérgicas, se examinó el efecto del extracto de Justicia procumbens sobre la inhibición de la muerte por choque en modelos de anafilaxia en ratón ICR.
En concreto, se agruparon ratones ICR (n = 10/grupo) de acuerdo con el peso corporal. Los ratones se mantuvieron en ayunas desde un día antes del experimento, y luego se administró el Compuesto 48/80 (Sigma n.° C2313) por vía intraperitoneal a los ratones a una concentración de 16 mg/kg para inducir anafilaxia. Una hora antes de la inducción de la anafilaxia, se administraron intraperitonealmente a los ratones cada uno de 100 mg/kg del extracto en etanol al 95 % de Justicia procumbens L., preparado en el ejemplo de preparación 1, y 200 mg/kg del control positivo DSCG (Cromoglicato disódico, Sigma n.° C0399). La mortalidad de los ratones se observó durante 20 minutos después de la
inducción de la anafilaxia y los resultados de la observación se muestran en la Tabla 13 a continuación. La inhibición (%) de la anafilaxia se calculó mediante la siguiente ecuación 5:
Ecuación 5
Inhibición (%) de anafilaxia = 100 (número de ratones muertos / número total (10 ratones) de ratones) x 100
T l 1
Como puede observarse en la Tabla 13 anterior, el extracto de Justicia procumbens L. inhibió la anafilaxia en aproximadamente un 90 %, lo que indica que tiene una excelente capacidad para inhibir la anafilaxia. Este efecto inhibidor del extracto de Justicia procumbens L. fue muy significativo en comparación con el efecto inhibidor del control positivo DSCG (una inhibición de aproximadamente un 60 %). Por tanto, se encontró que el extracto de Justicia procumbens L. puede inhibir eficazmente la muerte por choque anafiláctico debido a su excelente efecto sobre la inhibición de reacciones alérgicas.
Ejemplo 5: Efecto sobre la inhibición del asma en modelos de asma en ratones Balb/c
Usando el extracto en agua, el extracto en etanol al 95 % y el extracto en etanol al 100 % de Justicia procumbens L. preparados en el ejemplo de preparación 1, se midieron los cambios en varios marcadores asociados a la enfermedad del asma en modelos de asma en ratones Balb/c.
Se adquirieron ratones Balb/c de 5 semanas de edad y se aclimataron durante 1 semana. Los días 0 y 14 de 1 semana de aclimatación, los ratones se sensibilizaron sistemáticamente mediante la administración intraperitoneal de ovoalbúmina al 0,1 % (OVA: 1 mg/ml, Al(OH)3: 20 mg/ml) en una cantidad de 100 ^l/ratón. A partir de una semana después de la sensibilización sistemática final (21 días), 200 mg/kg de cada uno de los extractos en agua, extracto en etanol al 95 % y extracto en etanol al 100 % de Justicia procumbens L. preparados en el ejemplo de preparación 1 se administraron por vía oral a los ratones todos los días durante 10 días. Como control positivo, se administraron 3 mg/kg de dexametasona por vía intraperitoneal. Después de una hora, se pulverizó una solución de ovoalbúmina al 0,2 % y los ratones la inhalaron durante 1 hora mediante el uso de un nebulizador (PARI Boy SX, Germany GmbH). 5 horas después de la sensibilización final (30 días), se hizo una biopsia de los ratones y se tomaron muestras de sangre completa de los ratones y se centrifugaron a 12000 rpm durante 10 minutos para separar el suero. Además, el tejido pulmonar se aisló de cada ratón y se lavó abundantemente con 1 ml de solución salina tamponada con fosfato a través de una traqueostomía para recoger el líquido de lavado broncoalveolar (BALF, por sus siglas en inglés). El líquido de lavado broncoalveolar recogido se centrifugó a 3000 rpm durante 10 minutos, y el sobrenadante se utilizó para medir sustancias fisiológicamente activas (IL-4 e IL-5), y los sedimentos se utilizaron para medir el número de células inflamatorias.
La concentración de IgE en el suero separado se midió utilizando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas de IgE (ELISA, Komabiotech Inc.) y las sustancias fisiológicamente activas (interleucina-4 (IL-4) e interleucina-5 (IL-5)) en el líquido de lavado broncoalveolar aislado se midieron utilizando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA, IL-4: Enzo n.° ADI-900-043, IL-5: R&D system n.° M5000) correspondiente a cada sustancia. Los resultados de la medición se muestran en la Tabla 14 a continuación, y la capacidad de cada extracto para inhibir la secreción de IgE se calculó de la misma manera que la ecuación 4 mostrada en el ejemplo 3.
Además, los sedimentos de líquido de lavado broncoalveolar se volvieron a disolver en 0,5 ml de solución salina tamponada con fosfato y se añadieron 0,1 ml de la solución a cada pocillo de una placa de 96 pocillos y se centrifugaron a 800 rpm durante 5 minutos para unir las células al fondo ( 3 pocillos por muestra). A continuación, cada muestra se tiñó con solución de tinción Diff Quik (Sysmex) y se fotografió con un microscopio en 2-6 sitios aleatorios. Se contaron aproximadamente 200 células por muestra para calcular el porcentaje (%) de células inflamatorias de cada grupo. El número total de células inflamatorias se midió con un microscopio usando un hematocitómetro, y el número de basófilos se calculó usando el porcentaje (%) de cada célula inflamatoria, y se muestra en la Figura 1. El procesamiento estadístico se realizó utilizando un programa SPSS, y se realizó una prueba de Levene para una prueba de varianza igual, y la significación se probó mediante análisis de una vía (ANOVA).
Tabla 14
Tal como puede observarse en la Tabla 14 y la Figura 1, el extracto en etanol al 95 % y el extracto en etanol al 100 % de Justicia procumbens L. inhibieron significativamente la IgE sérica que es un marcador relacionado con el asma y mostraron una mejor capacidad para inhibir la secreción de IgE, en comparación con el control positivo dexametasona. Además, el extracto en etanol al 95 % y el extracto en etanol al 100 % de Justicia procumbens L. también redujeron la concentración de IL-4 en un grado similar al mostrado por el control positivo dexametasona, y redujeron significativamente el número de células inflamatorias en el líquido de lavado broncoalveolar. En particular, el extracto en etanol al 100 % mostró un efecto muy excelente de reducción del número de basófilos y el número total de células inflamatorias en comparación a los del grupo normal. De dichos resultados, se encontró que el extracto de Justicia procumbensL. tiene un efecto excelente en la inhibición de reacciones alérgicas y, por lo tanto, puede tratar eficazmente enfermedades alérgicas.
Ejemplo de formulación 1: Preparación de medicamentos
1.1: Preparación de polvo
Los componentes anteriores se mezclan entre sí y se introducen en un recipiente hermético para preparar el polvo.
1.2: Preparación de comprimido
Los componentes anteriores se mezclan entre sí y se comprimen de acuerdo con un método de preparación de comprimidos convencional para preparar un comprimido.
1.3: Preparación de cápsula
De acuerdo con un método de preparación de cápsulas convencional, los componentes anteriores se mezclan entre sí y se introducen en una cápsula de gelatina para preparar una cápsula.
1.4: Preparación de solución inyectable
De acuerdo con un método convencional para la preparación de una solución inyectable, los componentes anteriores se utilizan por ampolla (2 ml) para preparar una solución inyectable.
1.5: Preparación de formulación líquida
Se añade agua purificada hasta un volumen total de 1.000 ml. De acuerdo con un método convencional para la preparación de una formulación líquida, los componentes anteriores se mezclan entre sí y luego se introducen en una botella marrón y se esterilizan para preparar una formulación líquida.
Ejemplo de formulación 2: Preparación de alimentos
(continuación)
Aunque los contenidos de las vitaminas y la mezcla de minerales son preferentemente los adecuados para alimentos funcionales saludables, estos contenidos pueden modificarse opcionalmente. De acuerdo con un método convencional para la preparación de alimentos funcionales saludables, los componentes anteriores se mezclan entre sí y luego se preparan en un alimento funcional saludable (por ejemplo, un caramelo nutricional) de acuerdo con un método convencional.
Ejemplo de formulación 3: Preparación de Bebidas
Se añade agua purificada hasta un volumen total de 900 ml. De acuerdo con un método convencional para la preparación de una bebida funcional saludable, los componentes anteriores se mezclan entre sí y luego se agitan con calentamiento a 85 °C durante aproximadamente 1 hora. A continuación, la solución resultante se filtra y se recoge en un recipiente esterilizado de 2 litros. A continuación, se sella, esteriliza, almacena en frío y luego se utiliza en la preparación de la composición de bebida funcional saludable de la presente invención.
Aunque la composición anterior es un ejemplo preferible de componentes relativamente adecuados para bebidas favoritas, el contenido de la misma podrá modificarse opcionalmente de acuerdo con las preferencias regionales y nacionales, incluyendo características del consumidor, naciones consumidoras, el uso previsto, etc.
Ejemplo de formulación 4: Preparación de la composición cosmética
[Aplicabilidad industrial]
Tal como se ha descrito anteriormente, la composición que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo de acuerdo con la presente invención puede usarse para prevenir, tratar o mejorar una enfermedad alérgica.
Claims (10)
1. Una composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica, que comprende un extracto de una planta del género Justicia o una fracción del mismo, como principio activo, en donde la planta del género Justicia es Justicia procumbens L; y el extracto es un extracto en disolvente orgánico.
2. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la Justicia procumbens L. es una o más seleccionada del grupo que consiste en una planta completa, parte aérea, raíz, hoja y flor de Justicia procumbens L.
3. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el disolvente orgánico es uno o más seleccionado del grupo, que consiste en un alcohol inferior, que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, hexano, acetato de etilo, diclorometano, éter, cloroformo y acetona.
4. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el alcohol inferior, que tiene de 1 a 4 átomos de carbono, es uno o más seleccionado del grupo que consiste en metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol y n-butanol.
5. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la fracción es una fracción en disolvente orgánico obtenida mediante fraccionamiento con un disolvente orgánico, seleccionado del grupo que consiste en n-hexano, acetato de etilo y n-butanol saturado con agua.
6. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la fracción es una fracción en agua que excluye un disolvente orgánico.
7. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la enfermedad alérgica es una enfermedad respiratoria alérgica.
8. La composición farmacéutica para usar en la prevención o en el tratamiento de una enfermedad alérgica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la enfermedad alérgica es una o más seleccionada del grupo que consiste en rinitis, asma, dermatitis atópica, conjuntivitis alérgica, otitis media alérgica, gastroenteritis alérgica, anafilaxia y urticaria.
9. Una composición alimenticia para usar en la prevención o en la mejora de una enfermedad alérgica, que comprende un extracto de una planta del género Justicia o de una fracción del mismo, como principio activo, en donde la planta del género Justicia es Justicia procumbens L; y el extracto es un extracto en disolvente orgánico.
10. Una composición cosmética para usar en la prevención o en la mejora de una enfermedad alérgica, que comprende un extracto de una planta del género Justicia o de una fracción del mismo, como principio activo, en donde la planta del género Justicia es Justicia procumbens L.; y el extracto es un extracto en disolvente orgánico.
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