ES2692723T3 - Agente mejorador del metabolismo, que comprende un ácido graso raro - Google Patents

Abstract

Un hidroxiácido graso y/o un oxoácido graso para su uso en la profilaxis o el tratamiento de al menos una condición seleccionada entre el grupo que consiste en obesidad, diabetes, hiperlipidemia e hígado graso, en donde el hidroxiácido graso es al menos un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en ácido 10-hidroxi-cis-12- octadecenoico, ácido 10-hidroxi-cis-12, cis-15-octadecadienoico, ácido 10-hidroxi-cis-6, cis-12-octadecadienoico, ácido 10-hidroxi-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico, ácido 10,12-dihidroxioctadecanoico, ácido 10-hidroxi-cis-15- octadecenoico, ácido 10-hidroxi-cis-6-octadecenoico, ácido 10-hidroxi-cis-6, cis-15-octadecadienoico, ácido 10- hidroxi-trans-11-octadecenoico, ácido 10-hidroxi-trans-11, cis-15-octadecadienoico, ácido 10-hidroxi-cis-6, trans-11- octadecadienoico, y ácido 10-hidroxi-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico, y el oxoácido graso es al menos un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en ácido 10-oxo-cis-12-octadecenoico, ácido 10-oxo-cis-12, cis- 15-octadecadienoico, ácido 10-oxo-cis-6, cis-12-octadecadienoico, ácido 10-oxo-cis-6, cis-12, cis-15- octadecatrienoico, ácido 10-oxo-octadecanoico, ácido 10-oxo-cis-6-octadecenoico, ácido 10-oxo-cis-15- octadecenoico, ácido 10-oxo-cis-6, cis-15-octadecadienoico, ácido 12-oxo-octadecanoico, ácido 10-oxo-trans-11- octadecenoico, ácido 10-oxo-cis-6, trans-11-octadecadienoico, ácido 10-oxo-trans-11, cis-15-octadecadienoico, ácido 10-oxo-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico, y ácido 12-oxo-cis-9-octadecenoico

Description

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DESCRIPCION

Agente mejorador del metabolismo, que comprende un acido graso raro Campo tecnico

La presente invencion se refiere a un agente mejorador del metabolismo que contiene un acido graso raro. Mas concretamente, la presente invencion se refiere a un agente mejorador del metabolismo que utiliza la funcion fisiologica, por ejemplo el efecto de mejorar el metabolismo de lfpidos, azucar y energfa, de acidos grasos raros tales como oxo acido graso, hidroxi acido graso y similares. La presente invencion tambien se refiere a un alimento, un producto farmaceutico, un pienso y similares que contienen el agente.

Fundamento de la tecnica

En los ultimos anos, la obesidad debida a la sobrealimentacion, la falta de ejercicio y similares, en particular la enfermedad relacionada con el estilo de vida que acompana a la acumulacion de grasa visceral, se ha convertido en un problema social. El smdrome metabolico se refiere a una condicion en la que se complican al menos dos entre las enfermedades de hiperglucemia, hipertension y trastorno de los lfpidos, y la arteriosclerosis se desarrolla facilmente debido a la obesidad de la grasa visceral. En la poblacion japonesa entre los 40 y los 74 anos de edad, se estima que uno de cada dos varones y una de cada cinco hembras tienen, o posiblemente tienen, smdrome metabolico. Por tanto, se ha propuesto la importancia del ajuste de la ingesta de calonas mediante la terapia dietetica con el fin de prevenir o resolver el progreso de la acumulacion de lfpidos en el smdrome metabolico.

Hay un interes considerable en la ingestion, en la comida, de lfpidos funcionales que tienen un efecto mejorador del metabolismo lipfdico, un efecto mejorador de la diabetes y similares, incluyendo acidos grasos conjugados tales como acido linoleico conjugado y similares (documento no de patente 1), acidos grasos poliinsaturados u>3 tales como acido eicosapentaenoico, acido docosahexaenoico y similares (documento de patente 1), acido graso de cadena media (documento de patente 2), y similares.

El documento JP 2009-51732 (WO 2007/069758) describe ligandos PPAR-a o -y para su uso en el tratamiento de la obesidad, la diabetes y la hiperlipidemia. En particular, dicha referencia describe composiciones farmaceuticas que comprenden hidroxiacidos grasos para su uso en el tratamiento de la obesidad, la diabetes y la hiperlipidemia (vease Resumen; reivindicacion 12a). Los hidroxiacidos grasos incluyen acido 10-hidroxiestearico (acido 10-hidroxi- octadecanoico) y acido 12-hidroxiestearico (acido 12-hidroxioctadecanoico). Las composiciones pueden presentarse como productos alimenticios, como farmacos o como productos para aplicacion topica. Se dice que los compuestos son activos como ligandos PPAR-a o -y.

Ademas, se ha informado en los ultimos anos que una parte de los oxo acidos grasos, como el acido 9-oxo- octadecadienoico, el acido 13-oxo-octadecadienoico y similares, contenidos en el tomate tienen actividad para mejorar las enfermedades relacionadas con el estilo de vida, tales como la mejora del metabolismo lipfdico y similares (documento de patente 3, documentos no de patente 2, 3). Por tanto, las funciones fisiologicas de acidos grasos raros tales como oxo-acido graso, hidroxi-acido graso y similares tambien reclaman atencion.

Sin embargo, no se conoce una funcion fisiologica mas detallada de diversos acidos grasos raros existentes.

[Lista de documentos]

[documentos de patente.]

documento de patente 1: JP-A-2006-521368

documento de patente 2: WO 2009/096570

documento de patente 3: JP-A-2011-184411

[documentos no de patente]

documento no de patente 1: Nagao K, (2005), J. Biosci. Bioeng., Vol. 100, n° 2, p. 152-157 documento no de patente 2: Kim Y-I, (2011), Mol. Nutr. Food Res., Vol. 55, p. 585 - 593 documento no de patente 3: Kim Y-I, (2012), PLoS ONE, vol. 7, no. 2, e31317 Compendio de la invencion Problemas tecnicos

Un objeto de la presente invencion es proporcionar un nuevo agente farmaceutico para su uso de la forma siguiente:

1. Un hidroxiacido graso y/o un oxoacido graso para su uso en la profilaxis o el tratamiento de al menos un tipo

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seleccionado entre el grupo que consiste en obesidad, diabetes, hiperlipidemia e tngado graso, en donde el hidroxiacido graso es al menos un tipo seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-hidroxi-cis-12- octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-12, cis-15-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico, acido 10,12-dihidroxioctadecanoico, acido 10-hidroxi-cis-15- octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-6-octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-15-octadecadienoico, acido 10- hidroxi-trans-11-octadecenoico, acido 10-hidroxi-trans-11-cis-15-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6,trans-11- octadecadienoico, y acido 10-hidroxi-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico, y el oxoacido graso es al menos un tipo seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-12, cis-15- octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico, acido 10-oxo-octadecanoico, acido 10-oxo-cis-6-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-15-octadecenoico, acido 10-oxo-cis- 6, cis-15-octadecadienoico, acido 12-oxo-octadecanoico, acido 10-oxo-trans-11-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-6, trans-11-octadecadienoico, acido 10-oxo-trans-11, cis-15-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, trans-11, cis-15- octadecatrienoico, y acido 12-oxo-cis-9-octadecenoico.

2. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para uso de acuerdo con [1], en donde el hidroxiacido graso es al menos un tipo seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-hidroxi-cis-12-octadecenoico y acido 10-hidroxi- cis-6, cis-12-octadecadienoico, y el oxoacido graso es al menos un tipo seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-12, cis-15-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12, cis- octadecadienoico y acido 12-oxo-octadecanoico.

3. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para el uso de acuerdo con uno cualquiera de los apartados [1] a [3], en donde el hidroxiacido graso es 10-hidroxi-cis-12-octadecenoico, y el oxoacido graso es 10-oxo-cis-12- octadecenoico.

4. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para el uso de acuerdo con uno cualquiera de los apartados [1] a [3] en forma de producto farmaceutico.

5. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para el uso de acuerdo con uno cualquiera de los apartados [1] a [3] en forma de alimento o aditivo para alimentos.

6. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para el uso de acuerdo con uno cualquiera de los apartados [1] a [3] en forma de cosmetico o de aditivo para cosmetico.

En la presente invencion, "y/o" se usa para indicar cualquiera de ellos o ambos.

Efecto de la invencion

En la presente invencion, se encontro que los oxoacidos grasos o los hidroxiacidos grasos tales como KetoA o HYA (en adelante denominado tambien oxoacido u oxacido graso) teman funciones fisiologicas convencionalmente desconocidas, por ejemplo, una accion activadora de PPAR (receptores activados por proliferadores de peroxisomas), una accion supresora del aumento del nivel de glucosa en sangre, una accion de disminucion de la grasa neutra en sangre, una accion de mejora de la tolerancia a la glucosa, y una accion promotora del metabolismo de la energfa. Ademas, tambien se ha encontrado que estos oxoacidos grasos tienen una fuerte accion supresora de la smtesis de lfpidos debido a una accion antagonista sobre LXR.

Basandose en tales funciones, la presente invencion proporciona un agente mejorador del metabolismo que contiene oxoacidos grasos raros. Como el agente se puede usar en diversos campos, tales como productos farmaceuticos, alimentos y piensos, la presente invencion es extraordinariamente util desde el punto de vista industrial.

Breve descripcion de los dibujos

La Fig. 1 muestra los resultados de la actividad de reportero de PPARa/Y de KetoA o HYA, en donde “cont.” indica el control negativo (adicion de etanol), “Posi” indica el control positivo (adicion de agonista de PPAR) y el eje vertical indica la actividad relativa de luciferasa.

La Fig. 2 muestra los cambios en el peso corporal del raton despues de administrarle KetoA o HYA, en donde el eje vertical indica el peso corporal (g), y el eje horizontal muestra el tiempo transcurrido (semanas).

La Fig. 3 muestra los cambios en el nivel de glucosa en sangre del raton despues de alimentarlo con KetoA o HYA, en donde el eje vertical muestra la concentracion de glucosa en plasma (mg/dL) y el eje horizontal muestra el tiempo transcurrido (semanas).

La Fig. 4 muestra el consumo de oxfgeno del raton despues de ingerir KetoA o HYA, en donde el eje vertical muestra la cuantfa del consumo de oxfgeno (mL/kg/h), “oscuridad” indica el valor medido del penodo oscuro y “luz“indica el valor medido del penodo luminoso.

La Fig. 5 muestra la temperatura rectal despues de alimentar el raton con KetoA o HYA, en donde el eje vertical muestra la temperatura rectal (°C).

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La Fig. 6 muestra el peso de la grasa blanca despues de alimentar al raton con KetoA o HYA, en donde el eje vertical muestra el peso de la grasa blanca intraperitoneal (mg).

La Fig. 7 muestra grasas neutras despues de alimentar al raton con KetoA o HYA, en donde el eje vertical muestra la concentracion de trigliceridos en el plasma (mg/dL).

La Fig. 8 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la expresion de ARNm de SREBP-1c inducida por el agonista LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa del ARNm de SREBP-1c.

La Fig. 9 muestra la influencia de KetoA o HYA en la expresion de SREBP-1 inmaduro inducida por el agonista LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa de SREBP-1c inmaduro, y el grafico superior muestra imagenes de transferencia Western.

La Fig. 10 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la expresion de SREBP-1 maduro inducida por el agonista de LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa de SREBP-1c maduro, y el grafico superior muestra imagenes de transferencia Western.

La Fig. 11 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la expresion de ARNm de SCD-1 inducida por el agonista de LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa del ARNm de SCD-1.

La Fig. 12 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la expresion de ARNm de FAS inducida por el agonista de LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa del ARNm de FAS.

La Fig. 13 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la expresion de ARNm de ACC1 inducida por el agonista de LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa del ARNm de ACC1.

La Fig. 14 muestra la influencia de KetoA o HYA en la expresion de ARNm de ACC2 inducida por el agonista de LXR, en donde el eje vertical muestra la expresion relativa del ARNm de ACC2.

La Fig. 15 muestra la influencia de KetoA o HYA sobre la acumulacion de triacilglicerol por el agonista LXR, en donde el eje vertical muestra el nivel de triacilglicerol (pg/mg de protema).

La Fig. 16 muestra la evaluacion de la accion antagonista sobre LXR mediante ensayo de luciferasa, en donde el eje vertical muestra la actividad relativa de luciferasa.

Descripcion de formas de realizacion

La presente invencion se explica a continuacion con detalle.

En la presente invencion, la “mejora del metabolismo” significa que se mejora el metabolismo de los lfpidos y/o del azucar y/o de la energfa. Espedficamente, por ejemplo, la mejora del metabolismo de los lfpidos significa promover la descomposicion de los lfpidos presentes en el tejido corporal, la sangre o el tejido linfatico, la supresion de la smtesis de lfpidos, la prevencion y/o supresion de la acumulacion de lfpidos en tejidos corporales tales como el tejido adiposo, o la reduccion de lfpidos acumulados en el tejido corporal. El "lfpido" es triglicerido y/o colesterol, que incluyen acido graso.

La mejora del metabolismo del azucar significa la supresion del aumento del azucar y/o la hemoglobina glicosilada (HbA1c) presente en la sangre, del nivel de azucar en sangre en ayunas o promocion del metabolismo post-prandial del azucar. Ademas, la mejora del metabolismo del azucar tambien incluye la mejora de la tolerancia a la glucosa alterada (patologfa no incluida en el tipo normal o tipo de diabetes, y prediabetica). El "azucar" se refiere a monosacaridos, disacaridos o polisacaridos.

La mejora del metabolismo energetico significa llevar el estado del equilibrio anormal del nivel de energfa ingerido y liberar el nivel de energfa, o el estado del control inalcanzable del equilibrio del nivel de energfa ingerido y liberar el nivel de energfa, a un estado normal o mas proximo a un estado normal.

Como mdice de la mejora del metabolismo antes mencionada, puede medirse la actividad de PPAR. Se sabe que PPAR incluye al menos 3 tipos de subtipos: PPARa, PPAR8 (igual que p) y PPARy. PPARa se expresa principalmente en el hugado, el corazon, rinon, musculo esqueletico, adipocitos marrones y similares, y esta implicado en el control de muchos genes relacionados con la oxidacion p de acidos grasos. El PPAR8 se expresa en comparativamente todo el cuerpo (cerebro, tejido adiposo, piel). El PPARy tiene al menos 3 tipos de isoformas, se expresa principalmente en adipocitos blancos y macrofagos, y esta implicado en la diferenciacion de adipocitos y similares. Cuando se confirma la presencia o ausencia de actividad de ligando (agonista, antagonista) para al menos un tipo de estos PPARs y se encuentra una actividad agonista, se considera que la posibilidad de tener un efecto mejorador del metabolismo es alta, o que esta presente un efecto que mejora el metabolismo. Como ejemplo, se puede realizar el ensayo del PPAR reportero descrito en FEBS Letters 514 (2002) p. 315 - 322.

Alternativamente, se pueden administrar oxoacidos grasos y similares a un modelo animal de obesidad o diabetes, se miden el peso corporal, el peso del organo, el nivel de glucosa en sangre, el mdice de grasas neutras, el nivel de

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consumo de oxfgeno, la temperatura rectal y similares, y puede confirmarse la presencia o ausencia de los cambios en los mismos. El modelo animal de obesidad o diabetes no esta limitado siempre y cuando sea un animal que muestre las propiedades. Por ejemplo, como modelo animal mencionado anteriormente cabe citar el raton KKAy, el raton NOD, el raton NSY, el raton TSOd, la rata ZDF/Crl-Leprfa, la rata SDT/Jcl y similares, disponibles comercialmente. El peso corporal, el peso del organo, el nivel de glucosa en sangre, el mdice de grasas neutras, el nivel de consumo de oxfgeno, la temperatura rectal y similares se pueden medir mediante un metodo conocido. Utilizando estos como indices, cuando se observa una disminucion del peso corporal o del organo, o del nivel de glucosa en sangre, se observa el mdice de grasas neutras, o cuando se observa un aumento en el nivel de consumo de oxfgeno o de la temperatura rectal, se considera que es alta la posibilidad de tener un efecto de mejora del metabolismo, o que hay un efecto de mejora del metabolismo.

Alternativamente, como se describe en los Ejemplos que siguen, se puede confirmar si una accion de promocion de la smtesis de lfpidos inducida por el agonista de LXR se suprime por la adicion de oxoacido graso. Como metodo para ello, por ejemplo, cabe mencionar el Journal of Lipid Research 47 (2006) 2712 - 2717. El metodo descrito en el documento mencionado anteriormente incluye anadir un agonista de LXR y (1) medir el nivel de expresion de ARNm y/o protema de factores relacionados con la smtesis de lfpidos, por ejemplo, SREBP-1c, SREBP-1 maduro e inmaduro, SCD-1, FAS, ACC1 y/o ACC2 maduro e inmaduro, (2) medir el nivel de triacilglicerol intracelular, o (3) realizar un ensayo de luciferasa usando una secuencia que responde a LXR. Los ejemplos del agonista de LXR incluyen, pero sin limitarse a ellos, T0901317, 22(R)-hidroxicolesterol, 24(S)-hidroxicolesterol y similares. Cuando disminuye el nivel de expresion y similares del ARNm y/o protema del factor relacionado con la smtesis de lfpidos, se considera que la smtesis de lfpidos se ha suprimido, y que la posibilidad de tener un efecto mejorador del metabolismo es alta, o que existe un efecto de mejora del metabolismo.

En la presente descripcion, el oxoacido graso es un oxoacido graso que tiene 18 atomos de carbono y un grupo carbonilo en la posicion 10 o 12 (en lo sucesivo se abrevia a veces como "10-oxo-acido graso" o "12-oxo-acido graso"). Incluye ademas un grupo carbonilo en la posicion 10 y un doble enlace cis en la posicion 12 (en lo sucesivo abreviado a veces como "10-oxo, cis-12-acido graso"), un oxoacido graso que tiene 18 atomos de carbono, un grupo carbonilo en la posicion 10 y un doble enlace trans en la posicion 11 (de aqrn en adelante abreviado como "10-oxo-trans-11- acido graso "), y un acido graso oxo que tiene 18 atomos de carbono y un grupo carbonilo en la posicion 10 y que no tiene un doble enlace en las posiciones 11 y 12 (en lo sucesivo abreviado algunas veces como "10-oxo-acido graso 11,12-saturado"). Mas espedficamente, de acuerdo con la presente invencion, estos oxoacidos grasos se eligen entre acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico (KetoA), acido 10-oxo-cis-12,cis-15-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "aKetoA"), acido 10-oxo-cis-6, cis-12-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "YKetoA"), acido 10-oxo-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sKetoA"), acido 10-oxo- octadecanoico (en lo sucesivo tambien denominado "KetoB"), acido 10-oxo-cis-6-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "YKetoB"), acido 10-oxo-cis-15-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "aKetoB"), acido 10-oxo-cis-6, cis-15-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sKetoB"), acido 12-oxo- octadecanoico (en lo sucesivo, tambien denominado como "rKetoB"), acido 10-oxo-trans-11-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "KetoC"), acido 10-oxo-cis-6, trans-11-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "YKetoC"), acido 10-oxo-trans-11, cis-15-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "aKetoC"), acido 10-oxo-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sKetoC"), y acido 12-oxo-cis-9-octadecanoico (en lo sucesivo tambien denominado "KetoRA").

De acuerdo con la presente descripcion, hidroxiacido graso se refiere a un hidroxiacido graso que tiene 18 atomos de carbono y un grupo hidroxilo en la posicion 10 (en adelante abreviado a veces como "10-hidroxi acido graso"), o un hidroxiacido graso que tiene 18 atomos de carbono y un grupo hidroxilo en la posicion 12 (de aqrn en adelante se abreviara a veces como "12-hidroxi acido graso"). Aqrn, un "10,12-dihidroxi acido graso" que tiene un grupo hidroxilo en las posiciones 10 y 12 tambien se incluye como una realizacion de "10-hidroxi acido graso", "12-hidroxi acido graso". Ademas, un hidroxiacido graso que tiene 18 atomos de carbono, un grupo hidroxi en la posicion 10 y un doble enlace cis en la posicion 12 (en lo sucesivo abreviado a veces como "10-hidroxi acido graso cis-12"), hidroxiacido graso que tiene 18 atomos de carbono, un grupo hidroxilo en la posicion 10 y un doble enlace trans en la posicion 11 (en adelante abreviado como "10-hidroxi acido graso, trans-11") y un hidroxi acido graso que tiene 18 atomos de carbono y un grupo hidroxilo en la posicion 10 y libre de doble enlace en las posiciones 11 y 12 (de aqrn en adelante a veces abreviado como "10-hidroxi acido graso 11,12-saturado") tambien estan comprendidos. Mas espedficamente, de acuerdo con la presente invencion, estos hidroxiacidos grasos se seleccionan entre acido 10-hidroxi-cis-12- octadecenoico (hYa), acido 10-hidroxi-cis-12, cis-15-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien se hara referencia al mismo como "aHYA"), acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "yHYA"), acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sHYA"), acido 10,12- dihidroxioctadecanoico (en lo sucesivo tambien denominado "rHYA"), acido 10-hidroxi-cis-15-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "aHYB"), acido 10-hidroxi-cis-6-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "YHYB"), acido 10-hidroxi-cis-6, cis-15-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sHYB"), acido 10- hidroxi-trans-11-octadecenoico (en lo sucesivo tambien denominado "HYC"), acido 10-hidroxi-trans-11, cis-15- octadecadienoico (en lo sucesivo, tambien se denomina "aHYC"), acido 10-hidroxi-cis-6,trans-11-octadecadienoico (en lo sucesivo tambien denominado "yHYC"), y acido 10-hidroxi-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico (en lo sucesivo tambien denominado "sHYC").

El oxoacido graso y el hidroxiacido graso para uso en la presente invencion pueden prepararse por el metodo descrito

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en la solicitud de patente japonesa No. 2012-108928, y HYA puede prepararse por referencia a Biochemical and Biophysical Research Communications 416 (2011) p. 188 - 193. KetoRA, rKetoB pueden prepararse utilizando la oxidacion de acido cromico que sigue.

El metodo espedfico descrito en la solicitud de patente japonesa n° 2012-108928 es como sigue.

(reaccion 1)

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El acido graso 10-oxo se produce a partir de un acido graso insaturado que tiene 18 atomos de carbono y un doble enlace cis en la posicion 9 (en lo sucesivo abreviado a veces como "acido graso insaturado cis-9") mediante una reaccion en dos etapas. En la primera reaccion (reaccion 1), se produce 10-hidroxiacido graso a partir de acido graso insaturado cis-9 mediante una reaccion de hidratasa.

El sustrato en la "reaccion 1" no esta particularmente limitado siempre y cuando sea un acido graso insaturado que tiene 18 atomos de carbono y un doble enlace cis en la posicion 9, y los ejemplos del mismo incluyen acido monoenoico (18:1), acido dienoico (18:2), acido trienoico (18:3), acido tetraenoico (18:4) y acido pentanoico (18:5). Mas preferidos son el acido dienoico, acido trienoico y acido tetraenoico, y son particularmente preferidos los acidos dienoicos y los acidos trienoicos. En la presente memoria descriptiva, "acido graso" comprende no solo acidos libres sino tambien la forma ester, sal con un compuesto basico.

Los ejemplos del acido monoenoico incluyen acido oleico y acido ricinoleico.

Los ejemplos de acido dienoico incluyen acido linoleico y acido cis-9, trans-11-octadecadienoico.

Un ejemplo de acido trienoico es el acido a-linolenico y el acido Y-linolenico.

Un ejemplo de acido tetraenoico incluye acido estearidonico.

Aunque la hidratasa que cataliza la reaccion 1 no esta particularmente limitada siempre y cuando sea una enzima capaz de utilizar el acido graso cis-9 insaturado mencionado anteriormente como sustrato y capaz de convertirse en 10-hidroxi acido graso, por ejemplo, es preferible la hidratasa de acido graso derivada de bacterias acidolacticas (CLA- HY). Mas preferida es CLA-HY derivada de Lactobacillus plantarum, y es particularmente preferida CLA-HY derivada de la cepa FERM BP-10549 de L. plantarum. CLA-HY puede obtenerse por el metodo descrito en el documento JP- A-2007-259712.

La cantidad de hidratasa a anadir es, por ejemplo, de 0,001 - 0,10 mg/ml, preferiblemente de 0,1 - 5 mg/ml, mas preferiblemente de 0,2 - 2 mg/ml.

Puede usarse un "cofactor" para la reaccion 1 y, por ejemplo, se puede usar NADH, NADPH y FADH2. La concentracion de la adicion puede ser cualquiera siempre y cuando la reaccion de hidratacion tenga lugar eficientemente. Es preferiblemente 0,001 - 20 mM, mas preferiblemente 0,01 -10 mM.

Ademas, se puede usar un "activador" para la reaccion enzimatica y, por ejemplo, cabe mencionar uno o mas compuestos elegidos entre el grupo que consiste en molibdato potasico, molibdato disodico (VI) anhidrato, molibdato disodico (VI) dihidrato, ortovanadato sodico (V), metavanadato sodico (V), wolframato potasico (VI), wolframato sodico (VI) anhidrato y wolframato sodico (VI) dihidrato. La concentracion de adicion de la misma puede ser cualquiera siempre y cuando la reaccion de hidratacion tenga lugar de manera eficiente. Es preferiblemente 0,1 - 20 mM, mas preferiblemente 1 - 10 mM.

Por ejemplo, se puede obtener rHYA anadiendo tampon de fosfato potasico 100 mM (pH 6,5) que contiene enzima de hidratacion (peso corporal de las bacterias humedas de 0,7 g) expresada en Escherichia coli, NADH (33 mg), FAD (0,8 mg), acido ricinoleico (1 g), BSA (0,2 g) a RA hasta una cantidad total de 10 ml, y realizando una reaccion de agitacion anaerobicamente a 37°C durante 63 horas, a 225 rpm.

Por otra parte, se puede obtener 12-hidroxi acido graso, por ejemplo, mediante hidrolisis de aceite natural que contiene, como componente principal, ester de triglicerido que contiene 12-hidroxiacido graso como acido graso constituyente.

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(reaccion 2)

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En la segunda reaccion (reaccion 2), se produce 10-oxo-acido graso a partir de 10-hidroxi acido graso mediante una reaccion de deshidrogenasa u oxidacion qmmica usando acido cromico.

Aunque la deshidrogenasa que cataliza la reaccion 2 no esta particularmente limitada siempre y cuando sea una enzima capaz de utilizar 10-hidroxi acido graso como sustrato y capaz de convertirse en 10-oxo acido graso, por ejemplo, es preferible una hidroxi acido graso-deshidrogenasa derivada de bacterias acidolacticas (CLA-DH). Mas preferida es CLA-DH derivada de Lactobacillus plantarum, y particularmente preferida es CLA-DH derivada de la cepa FERN BP-10549 de L. plantarum. La CLA-DH puede obtenerse mediante el metodo descrito en el documento JP-A- 2007-259712.

La cantidad de deshidrogenasa a anadir es, por ejemplo, de 0,001 -10 mg/ml, preferiblemente de 0,1 - 5 mg/ml, mas preferiblemente de 0,2 - 2 mg/ml.

Se puede usar un "cofactor" para la reaccion 2 y, por ejemplo, se pueden usar NAD, NADP y FAD. La concentracion de la adicion puede ser cualquiera siempre y cuando la reaccion de oxidacion tenga lugar de manera eficiente. Es preferiblemente de 0,001 - 20 mM, mas preferiblemente de 0,01 -10 mM.

Ademas, se puede usar un "activador" para la reaccion enzimatica y, por ejemplo, se pueden usar compuestos similares a los citados como ejemplos en la reaccion 1 mencionada anteriormente a una concentracion de adicion similar.

La segunda reaccion puede realizarse mediante oxidacion qmmica.

Como oxidacion qmmica, pueden mencionarse los metodos conocidos per se, por ejemplo la oxidacion con acido cromico, preferiblemente la oxidacion de Jones y similares. Como acido cromico se pueden usar sales y complejos del compuesto tales como acido cromico anhidro CrO3, acido cromico H2CrO4 y acido dicromico H2Cr2O7.

De manera similar, se puede obtener 12-oxo-acido graso a partir de 12-hidroxi acido graso. Por ejemplo, puede obtenerse KetoRA mediante el metodo siguiente.

Concretamante, se anaden acido sulfurico (2,3 ml) y agua (7,7 ml) al acido cromico anhidro (2,67 g), y se anade acetona (90 ml) a la mezcla para dar una solucion de acido cromico. Se agregan 5 g de RA y 100 ml de acetona en un matraz Erlenmeyer, y la solucion de acido cromico mencionada anteriormente se anade a gotas mientras se agita en un agitador sobre hielo. Cuando la solucion cambia de verde azulado a naranja palido, se detiene la adicion gota a gota de la solucion de acido cromico, y la reaccion se interrumpe con alcohol isopropflico. El sedimento precipitado se elimina por centrifugacion, y el sobrenadante centrifugado obtenido se coloca en un embudo de separacion y se mezcla bien con hexano (100 ml) y agua Milli-Q (100 ml). La capa de hexano se recupera por centrifugacion, se lava varias veces con agua Milli-Q, y se concentra mediante un evaporador rotatorio para extraer el producto de reaccion y los sustratos no reaccionados. Se puede confirmar que aproximadamente el 98% del extracto es KetoRA. Gel de sflice (Wakogel (r)C-100) en un peso de 20 a 30 veces el peso del extracto (mezcla que contiene KetoRA) se hincha con hexano, se empaqueta en una columna de vidrio, y se pone sulfato sodico (anhidro) sobre el mismo. El extracto obtenido anteriormente (mezcla que contiene KetoRA) se suspende en eluyente de hexano:eter dietilico 8:2 y se aplica a la columna. El eluyente se deja fluir a un caudal de aproximadamente 2 ml y la solucion descargada de la columna se fracciona y se recupera. Cada fraccion recuperada se analiza mediante LC/MS y cromatograffa de gases. Las fracciones que contienen solo KetoRA se recogen y se concentran mediante un evaporador rotatorio para dar KetoRA que tiene una pureza de no menos del 99%.

Tambien, se puede obtener rKetoB por oxidacion con acido cromico de la misma manera que en rHYB.

(reaccion 3)

imagen3

El acido graso 10-oxo, trans-11 se produce a partir de un oxo acido graso que tiene 18 atomos de carbono, un grupo carbonilo en la posicion 10 y un doble enlace cis en la posicion 12 mediante una reaccion de isomerasa (reaccion 3).

El "sustrato" de la reaccion 3 no esta particularmente limitado siempre y cuando sea 10-oxo acido graso, cis-12 inducido a partir de un acido graso insaturado que tenga 18 atomos de carbono y un doble enlace cis en las posiciones 9 y 12, por las reacciones 1 y 2 mencionadas anteriormente. Los ejemplos de las mismas incluyen KetoA inducido a partir de acido linoleico, aKetoA inducido a partir de acido a-linolenico, YKetoA inducido a partir de acido Y-linolenico, 5 y sKetoA inducido a partir de acido estearidonico. El sustrato se puede obtener por un metodo distinto de las reacciones 1 y 2.

Aunque la isomerasa que cataliza la reaccion 3 no esta particularmente limitada siempre que sea una enzima capaz de utilizar el 10-oxo acido graso, cis-12 mencionado anteriormente como sustrato y capaz de convertirse en 10-oxo, acido graso trans-11, por ejemplo, es preferible la oxo-acido-isomerasa derivada de bacterias acidolacticas (CLA-DC). 10 Mas preferido es CLA-DC derivado de Lactobacillus plantarum, y particularmente preferido es CLA-DC derivado de la cepa FERM BP-10549 de L. plantarum. CLA-DC puede obtenerse mediante el metodo descrito en el documento JP- A-2007-259712.

La cantidad de isomerasa a anadir es, por ejemplo, de 0,001 - 10 mg/ml, preferiblemente de 0,1-5 mg/ml, mas preferiblemente de 0,2 - 2 mg/ml.

15 Se puede usar un "activador" para la reaccion de isomerasa y, por ejemplo, se pueden usar compuestos similares a los citados como ejemplos en la reaccion 1 anteriormente mencionada, a una concentracion de adicion similar.

(reaccion 4)

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El 10-Oxo, acido graso saturado 11,12 se produce a partir de un oxo acido graso que tiene 18 atomos de carbono, un 20 grupo carbonilo en la posicion 10 y un doble enlace trans en la posicion 11 (10-oxo acido graso, trans-11) mediante una reaccion de saturasa (reaccion 4).

El "sustrato" de la reaccion 4 no esta particularmente limitado siempre que sea 10-oxo acido graso, trans-11 producido por la reaccion 3 mencionada anteriormente. Los ejemplos de los mismos incluyen KetoC inducido a partir de KetoA, aKetoC inducido a partir de aKetoA, YKetoC inducido a partir de YKetoA, sKetoC inducido a partir de sKetoA. El sustrato 25 puede obtenerse por un metodo distinto al de la reaccion 3.

Aunque la saturasa que cataliza la reaccion 4 no esta particularmente limitada siempre y cuando sea una enzima capaz de utilizar el acido graso 10-oxo, trans-11 mencionado anteriormente como sustrato y capaz de convertirse en acido graso 10-oxo, 11,12-saturado, por ejemplo, es preferible oxo acido graso-enona reductasa (CLA-ER) derivada de bacterias acidolacticas. Mas preferido es CLA-ER derivada de Lactobacillus plantarum, y es particularmente 30 preferido CLA-ER derivada de la cepa FERM BP-10549 de L. plantarum.

La enzima "CLA-ER" anteriormente mencionada es

(a) una protema enzimatica que consiste en la secuencia de aminoacidos mostrada en SEQ ID NO: 2,

(b) una protema que comprende una secuencia de aminoacidos que es la secuencia de aminoacidos mostrada en SEq ID N°: 2 en la que uno o varios aminoacidos estan borrados y/o sustituidos y/o insertados, y tienen la actividad

35 enzimatica de catalizar la reaccion 4 mencionada anteriormente, o

(c) una protema codificada por una secuencia de bases que hibrida con un acido nucleico que consiste en una secuencia de cadena complementaria de la secuencia de bases mostrada en la SEQ ID NO: 1 bajo condiciones rigurosas, y que tiene una actividad enzimatica para catalizar la reaccion 4 mencionada anteriormente.

Ejemplos mas espedficos de los (b) mencionados anteriormente incluyen una protema que contiene (i) una secuencia 40 de aminoacidos que es la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 2, en donde se eliminan de 1a 20, preferiblemente de 1 a 10, mas preferiblemente de 1 a varios (5, 4, 3 o 2) aminoacidos, (ii) una secuencia de aminoacidos que es la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID N°: 2, en la que se anaden de 1a 20, preferiblemente de 1 a 10, mas preferiblemente de 1 a varios aminoacidos (5, 4, 3 o 2), (iii) una secuencia de aminoacidos que es la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID N°: 2, en la que se insertan de 1a 20, 45 preferiblemente de 1 a 10, mas preferiblemente de 1 a varios (5, 4, 3 o 2) aminoacidos, (iv) una secuencia de aminoacidos que es la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID N°: 2, en donde de 1 a 20, preferiblemente de 1 a 10, mas preferiblemente de 1a varios (5, 4, 3 o 2) aminoacidos estan sustituidos por otros aminoacidos, o (v) una secuencia de aminoacidos obtenida combinandolos. Cuando aminoacidos con propiedades similares (p. ej. glicina y alanina, valina y leucina e isoleucina, serina y treonina, acido aspartico y acido glutamico, asparagina y glutamina, 50 lisina y arginina, cistema y metionina, fenilalanina y tirosina) se intercambian entre ellos, es posible un mayor numero de sustituciones.

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Cuando los aminoacidos se borran, se sustituyen o se insertan como se menciono anteriormente, las posiciones de delecion, sustitucion e insercion no estan particularmente limitadas siempre que se mantenga la actividad enzimatica mencionada anteriormente.

En la (c) mencionada anteriormente, las "condiciones rigurosas" son condiciones bajo las cuales las secuencias de nucleotidos que tienen una identidad elevada, por ejemplo, identidad de 70, 80, 90, 95 o 99% o mas, se hibridan entre sf y las secuencias de nucleotidos que tienen una identidad menor que esa no se hibridan; espedficamente, condiciones de lavado una vez, mas preferiblemente 2-3 veces, a la concentracion de sal y a la temperatura correspondientes a las condiciones de lavado de hibridacion Southern general (60°C, 1 x SSC, 0,1% SDS, preferiblemente, 0.1 x SSC, 0,1% SDS, mas preferiblemente, 68°C, 0,1 * SSC, 0,1% SDS).

La CLA-ER puede aislarse, por ejemplo, del hongo y medio de cultivo de la cepa FERM BP-10549 de L. plantarum mediante una tecnica de separacion y purificacion de protemas conocida per se, por ejemplo, usando como mdice la actividad enzimatica que cataliza la reaccion 4 mencionada anteriormente. Alternativamente, tambien puede producirse por recombinacion sintetizando la secuencia de bases total de la region de codificacion de cLA-ER basandose en la informacion de la secuencia de bases mostrada en la SEQ ID N°: 1, o disenando un cebador capaz de amplificar el segmento genico CLA-ER que contiene la region codificante, realizando PCR usando ADNc o ADN genomico preparado a partir de la cepa mencionada anteriormente como molde, clonando el fragmento de amplificacion obtenido en un vector de expresion adecuado e introduciendo al mismo en una celula huesped, y cultivando la celula.

Como vector que contiene un acido nucleico que codifica la CLA-ER mencionada anteriormente, se puede seleccionar apropiadamente uno adecuado para que una celula hospedadora se introduzca con el vector de acuerdo con el objeto (por ejemplo, expresion de protema), y puede ser usado. El vector de expresion puede contener un promotor apropiado, una senal de terminacion de la transcripcion y un gen marcador de seleccion (gen de resistencia a un farmaco, gen que complementa la mutacion auxotrofica). Ademas, puede contener una secuencia que codifica una secuencia etiqueta util para la separacion y purificacion de la protema expresada. Alternativamente, el vector puede incorporarse en el genoma de una celula huesped diana. El vector puede introducirse en una celula huesped diana mediante un metodo de transformacion conocido per se, tal como un metodo de celula competente, un metodo de protoplasto, un metodo de coprecipitacion de fosfato de calcio.

La "celula huesped" mencionada anteriormente puede ser cualquier celula, siempre y cuando pueda expresar un vector que contiene un acido nucleico que codifica la CLA-ER mencionado anteriormente, y pueden mencionarse bacterias, levaduras, hongos, y celulas eucarioticas superiores. Los ejemplos de bacteria incluyen bacterias gram- positivas tales como bacilos, Streptomyces y similares y bacterias gram-negativas tales como Escherichia coli. Puede cultivarse una celula recombinante introducida con un vector que contiene un acido nucleico que codifica CLA-ER, mediante un metodo conocido per se que sea adecuado para la celula huesped.

La "purificacion" de la CLA-ER anteriormente mencionada puede realizarse mediante un metodo conocido per se, por ejemplo hongos recogidos por centrifugacion se rompen mediante ultrasonicacion o perlas de vidrio, y solidos tales como restos celulares se eliminan por centrifugacion, para dar una solucion de enzima cruda que se somete a un procedimiento de precipitacion salina usando sulfato de amonio, sulfato sodico, cromatograffas tales como cromatograffa de intercambio ionico, cromatograffa de filtracion en gel, cromatograffa de afinidad, electroforesis en gel.

La cantidad de saturasa a anadir es, por ejemplo, de 0,001 a 10 mg/ml, preferiblemente de 0,1 a 5 mg/ml, mas preferiblemente de 0,2 a 2 mg/ml.

Se puede usar un "cofactor" para la reaccion 4 y, por ejemplo, puede usarse NADH. La concentracion de adicion puede ser cualquiera siempre que la reaccion de oxidacion tenga lugar de manera eficiente. Es preferiblemente de 0,001 a 20 mM, mas preferiblemente de 0,01 a 10 mM.

Ademas, se puede usar un "activador" para la reaccion enzimatica y, por ejemplo, compuestos similares a los citados como ejemplos en la reaccion 1 mencionada anteriormente pueden usarse a una concentracion de adicion similar.

(reaccion 5)

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(reaccion 6)

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El 10-hidroxi acido graso, trans-11 se produce a partir de un oxo acido graso que tiene 18 atomos de carbono, un grupo carbonilo en la posicion 10 y un doble enlace trans en la posicion 11 (10-oxo acido graso trans-11) mediante una reaccion de deshidrogenasa (reaccion 5) o 10-hidroxi-acido graso, 11,12 saturado se produce a partir de un oxo acido graso que tiene 18 atomos de carbono y un grupo carbonilo en la posicion 10 y que no tiene doble enlace en las posiciones 11 y 12 (acido graso 10-oxo, 11,12-saturado) mediante una reaccion con deshidrogenasa (reaccion 6).

El “sustrato” de la reaccion 5 no esta particularmente limitado siempre y cuando sea acido graso 10-oxo, trans-11 producido por la reaccion 3 mencionada anteriormente. Los ejemplos de esto incluyen KetoC inducido a partir de KetoA, aKetoC inducido a partir de aKetoA, YKetoC inducido a partir de YKetoA, sKetoC inducido a partir de sKetoA. El sustrato se puede obtener por un metodo distinto de la reaccion 3.

Por otra parte, el "sustrato" de la reaccion 6 no esta particularmente limitado siempre que sea acido graso 10-oxo- 11,12- saturado producido por la reaccion 4 mencionada anteriormente. Los ejemplos de los mismos incluyen KetoB inducido por KetoC, aKetoB inducido a partir de aKetoC, YKetoB inducido a partir de YKetoC, sKetoB inducido a partir de sKetoC y similares. El sustrato puede obtenerse por un metodo diferente a la reaccion 4.

Aunque la deshidrogenasa que cataliza la reaccion 5 o la reaccion 6 no esta particularmente limitada siempre y cuando sea una enzima capaz de utilizar 10-oxoacido graso trans-11 o 10-oxo-acido graso, 11,12 saturado como sustrato y capaz de convertirse en 10-hidroxiacido graso trans-11 o 10-hidroxiacido graso saturado 11,12, por ejemplo, es preferible hidroxiacido derivado de bacterias acidolacticas - deshidrogenasa (CLA-DH). Mas preferido es CLA-DH derivado de Lactobacillus plantarum, y particularmente preferido es CLA-DH derivado de cepa FERM BP-10549 de L. plantarum. Aunque CLA-Dh cataliza la reaccion de oxidacion en la reaccion 2 mencionada anteriormente, tambien puede catalizar la reaccion de reduccion en la reaccion 5 o reaccion 6 como reaccion inversa.

La cantidad de deshidrogenasa a anadir es, por ejemplo, 0,001 - 10 mg/ml, preferiblemente 0,1 - 5 mg/ml, mas preferiblemente 0,2 - 2 mg/ml.

Se puede usar un "cofactor" para la reaccion 5 y la reaccion 6 y, por ejemplo, NADH, NADPH, FADH2 y similares. La concentracion de adicion puede ser cualquiera siempre y cuando la reaccion de reduccion proceda de manera eficiente. Es preferiblemente de 0,001 a 20 mM, mas preferiblemente de 0,01 a 10 mM.

Ademas, se puede usar un "activador" para la reaccion enzimatica y, por ejemplo, se pueden usar compuestos similares a los citados como ejemplos en la reaccion 1 anteriormente mencionada a una concentracion de adicion similar.

En cada una de las reacciones mencionadas anteriormente, las enzimas (hidratasa, deshidrogenasa, isomerasa, saturasa) se someten al sistema de reaccion en forma de celulas recombinantes (p. ej. Escherichia coli, Bacillus subtilis, levadura, celulas de insectos, celulas animales) introducidas con un vector de expresion que contiene un acido nucleico que las codifica. En este caso, la reaccion tambien se puede realizar cultivando las celulas en un medio lfquido adecuado para el cultivo de las celulas y anadiendo un sustrato y, cuando sea necesario, un cofactor y un activador. Ademas, cualquiera de las enzimas mencionadas anteriormente puede ser una enzima purificada o una purificada groseramente. Alternativamente, la hidratasa se puede expresar en hongos tales como Escherichia coli y similares, y se puede usar el propio hongo o se puede usar un medio de cultivo del mismo. Ademas, la enzima puede ser de tipo libre o inmovilizada por diversos vehnculos.

El agente mejorador del metabolismo que contiene oxoacidos grasos y/o los hidroxiacidos grasos puede aplicarse al tratamiento de las enfermedades relacionadas con el estilo de vida. La "enfermedad relacionada con el estilo de vida" es la obesidad, tal como la obesidad adulta y la obesidad infantil.

El agente mejorador del metabolismo puede usarse para la profilaxis o mejora de la diabetes (diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, diabetes del embarazo), hiperlipidemia e hngado graso. De acuerdo con la presente invencion, el agente mejorador del metabolismo se puede usar para la profilaxis o el tratamiento de al menos un tipo seleccionado entre el grupo que consiste en obesidad, diabetes, hiperlipidemia e hngado graso, mediante administracion a seres humanos, o a un animal no humano (p. ej., perro, gato, raton, rata, hamster, conejo de Indias, conejo, cerdo, bovino, pollo, periquito, pajaro mina de monte, cabra, caballo, oveja, mono).

El agente mejorador del metabolismo de la presente invencion que contiene los oxo acidos grasos y/o los hidroxi acidos grasos se puede usar, por ejemplo, como producto farmaceutico, alimento, pienso o cosmetico, o anadiendole el agente.

La forma de dosificacion del producto farmaceutico incluye dispersion, granulos, pfldoras, capsulas blandas, capsulas duras, comprimidos, comprimidos masticables, comprimidos de integracion rapida, jarabes, lfquidos, suspension, supositorios, pomadas, cremas, gel, adhesivos, inhalante e inyeccion. Una preparacion de los mismos se prepara de acuerdo con un metodo convencional. Dado que el oxo acido graso es poco soluble en agua, se disuelve en un 5 disolvente organico no hidrofilo tal como aceite derivado de plantas, aceite derivado de animales, o se dispersan o emulsionan en una solucion acuosa junto con un emulsionante, un agente dispersante, un agente tensioactivo mediante un homogeneizador (homogeneizador de alta presion) y se utilizan.

Los ejemplos de aditivos que pueden usarse para formulacion incluyen aceites animales y vegetales tales como aceite de soja, aceite de cartamo, aceite de oliva, aceite de germen, aceite de girasol, grasa de vacuno, aceite de sardina, 10 polialcoholes tales como polietilenglicol, propilenglicol, glicerol, sorbitol, agentes tensioactivos tales como ester de sorbitan de acido graso, ester de sacarosa de acido graso, ester de glicerina de acido graso, ester de poliglicerol de acido graso, excipientes tales como agua purificada, lactosa, almidon, celulosa cristalina, D-manitol, lecitina, goma arabiga, solucion de sorbitol, solucion de carbohidratos, edulcorante, colorante, agente de ajuste del pH, y agente saborizante. Un preparado lfquido puede disolverse o suspenderse en agua u otro medio adecuado cuando se usa. 15 Ademas, el comprimido y los granulos pueden estar recubiertos por un metodo bien conocido.

Para la administracion en forma de inyeccion, son preferibles las administraciones intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutanea, transdermica, intraarticular, intrasinovial, intratecal, intraperiostica, sublingual, oral, y es preferible en particular la administracion intravenosa o la administracion intraperitoneal. La administracion intravenosa puede ser administracion por goteo y administracion en bolo.

20 Cuando el agente mejorador del metabolismo se usa como alimento o como aditivo alimentario, la forma del alimento no esta particularmente limitada siempre que permita la ingestion oral, tal como una solucion, suspension, polvo, artfculo solido conformado. Los ejemplos espedficos incluyen suplementos (polvo, granulos, capsulas blandas, capsulas duras, comprimidos, comprimidos masticables, comprimidos de integracion rapida, jarabe, lfquido), bebidas (bebidas de acido carbonico, bebidas de acido lactico, bebidas deportivas, bebidas con zumos de fruta, bebidas 25 vegetales, bebidas de leche de soja, cafe, te, bebidas en polvo, bebidas concentradas, bebidas nutritivas, bebidas alcoholicas), confitena (dulces de goma, jaleas, chicles, chocolates, galletas, caramelos, confitena japonesa, snacks), comida rapida (fideos instantaneos, comida retorta, latas, alimentos para microondas, sopa instantanea, sopas miso, comida liofilizada), aceite, alimentos con grasas y aceites (mayonesa, alinos, mantequilla, crema, margarina), productos de trigo en polvo (pan, pasta, fideos, mezcla para pasteles, pan rallado), condimentos (salsa, condimento 30 para el procesamiento del tomate, sazonador de sabor, mezcla para cocinar, sopa), productos carnicos procesados (jamon, salchichas).

Los alimentos antes mencionados pueden contener, en caso necesario, varios nutrientes, varias vitaminas (vitamina A, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B6, vitamina C, vitamina D, vitamina E, vitamina K, etc.), varios minerales (magnesio, zinc, hierro, sodio, potasio, selenio), fibra dietetica, agente dispersante, estabilizante tal como 35 emulsionante, edulcorante, componentes aromatizantes (acido dtrico, acido malico), saborizante, jalea real, propoleo, Agaricus.

Cuando el agente mejorador del metabolismo de la presente invencion se usa como pienso o aditivo para piensos, el pienso es, por ejemplo, pienso para mascotas, cna de ganado o aditivo para piensos de acuicultura.

Cuando el agente mejorador del metabolismo de la presente invencion se usa como cosmetico o aditivo para 40 cosmeticos, el cosmetico es, por ejemplo, crema, gel, leche para la piel, suero, toner, esencia de microemulsion, mascara facial, base, barra labial, sombra de ojos, champu, acondicionador y aditivo para el bano, y se puede mezclar con el mismo un sabor.

Puede mezclarse solo un tipo de oxo acido graso con el producto farmaceutico, alimento, pienso y cosmetico, o pueden usarse en combinacion dos o mas tipos de los mismos.

45 La dosis del producto farmaceutico o la cantidad de ingestion de alimento pueden determinarse apropiadamente de acuerdo con la edad y el peso corporal de los pacientes o de aquellos que ingieren dicho alimento, los smtomas, el tiempo de administracion, la forma de dosificacion, el metodo de administracion y la combinacion de medicamentos. Por ejemplo, cuando el producto farmaceutico se administra por via oral, la cantidad total de oxo acido graso como ingrediente activo es de 0,02 a 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente de 0,2 a 50 mg/kg de peso corporal, por 50 dfa para un adulto, o de 0,002 mg a 50 mg/kg de peso corporal, preferiblemente de 0,02 a 5,0 mg/kg de peso corporal, por administracion parenteral, que se puede administrar una vez al dfa o en varias porciones (2 - 5) diarias. Cuando se ingiere como un alimento, se puede anadir a un alimento de manera que la cantidad total de ingesta de oxoacido graso como ingrediente activo sea de 1 a 6000 mg, preferiblemente de 10 a 3000 mg, por dfa para un adulto. La cantidad de ingestion de pienso y la cantidad de uso del cosmetico se pueden determinar apropiadamente de acuerdo 55 con la cantidad de ingestion del alimento mencionada anteriormente y la dosis anteriormente mencionada del producto farmaceutico.

La presente invencion se explica con mas detalle a continuacion haciendo referencia a los ejemplos. Los ejemplos son meras ejemplificaciones de la presente invencion.

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Ejemplos

Los acidos grasos raros tales como KetoA, HYA, yHYA, YKetoA y rHYA usados en la presente invencion se prepararon basandose en el metodo mencionado anteriormente (el metodo descrito en la solicitud de patente japonesa No. 2012108928). Se preparo KetoRA a partir de acido ricinoleico (RA) basandose en el metodo mencionado anteriormente. Se adquirieron GW7647 (agonista de PPARa) y Troglitazone (agonista de PPARy) de Sigma-Aldrich, T0901317 (agonista de LXR) se adquirio de Cayman Chemical, RA se adquirio de NU-CHEK pReP, INC. (EE. UU.) (numero de producto: U-50-A), EPA se adquirio de NU-CHEK PREP, INC. (EE. UU.) (numero de producto: U-99-A), se adquirio LA de Sigma-Aldrich (numero de producto: L1376) y se adquirieron otros reactivos de Wako Pure Chemical Industries, Ltd. o Nacalai Tesque.

[Ejemplo 1]

Medida de la actividad de ligando PPARa, y.

Para evaluar la funcion del hidroxi acido graso u oxo acido graso, se midio primero la accion PPARa, y -activadora. La medida se realizo en referencia a Nobuyuki Takahashi et al., FEBS Letters 514 (2002) p. 315 - 322, "Dual action of isoprenols from herbal medicines on both PPARy y PPARa in 3T3-L1 adipocytes and HepG2 hepatocytes”, la seccion de Materiales y Metodos “Reporter plasmids and luciferase assays”. Para ser espedfico, un plasmido que contiene ADN que codifica una protema fusionada de la region de union del ligando PPARa, y y la region de union al ADN GAL4 (pM-hPPARa o pM-hPPARY), un plasmido reportero que contiene la secuencia de ADN de union de GAL4 ligada a luciferasa (p4xUASg-tk-luc), y el control interno (pRL-CMV) para estandarizar la eficacia de la transfeccion, se introdujeron en celulas CV-1 derivadas del rinon del mono verde africano. El ligando descrito mas adelante fue anadido a las celulas y, despues de la incubacion durante 24 horas, se midio la actividad de la luciferasa. Como ligando, se anadieron KetoA y HYA a razon de 30 pM.

La concentracion de la muestra se ajusto con etanol. Se uso etanol como control negativo, se uso PPARa como control positivo y GW7647 (10 nM) y Troglitazona (5 pM) como agonistas y. Los resultados se muestran en la fig. 1.

De la Fig. 1, se encontro una fuerte actividad agonista de PPARa y y en KetoA, y se encontro actividad agonista de PPARa y algo de actividad agonista de PPARy en HYA.

Por un metodo similar, tambien se midio la actividad de luciferasa para aKetoA, YKetoA, sKetoA, KetoB, YKetoB, aKetoB, sKetoB, rKetoB, KetoC, YKetoC, aKetoC, sKetoC, KetoRA, aHYA, yHYA, sHYA, rHYA, aHYB, yHYB, sHYB, HYC, aHYC, yHYC y sHYC. Como resultado, KetoC, aKetoC, KetoRA y YKetoC mostraron actividad agonista de PPARa y Y, KetoB, aHYA, yHYA, rKetoB y rHYA mostraron actividad agonista de PPARa, y aKetoA y YKetoA mostraron actividad agonista de PPARy.

[Ejemplo 2]

Efecto en ratones modelo de obesidad o diabetes.

(1) Usando el raton KKAy como raton modelo de obesidad o diabetes, se evaluo el efecto de KetoA, HYA. Ratones KKAy (KKAy/TaJcl, macho, de 4 semanas de edad, adquiridos de CLEA Japon, Inc. y criados individualmente) se criaron preliminarmente en una dieta normal (ND) comercial durante 1 semana, divididos en 5 grupos, y cada grupo fue criado en una dieta alta en grasas (HFD) como alimento basico y se le dio un alimento sin adicion (grupo de control), o un alimento al que se anadio diferentes cantidades de KetoA y HAY, durante 4 semanas. El alimento con adicion de KetoA, HYA se preparo anadiendo KetoA, HYA a HFD de modo que la cantidad a anadir fuera 0,05% (p/p) (grupo de 0,05%) o 0,1% (p/p) (grupo de 0,1%).

(2) Se midio el perfil del peso corporal y el nivel de glucosa en sangre del raton KKAy. Despues del comienzo de la cna de alimentacion de prueba, se midio el nivel de consumo de oxfgeno el dfa 16 -19, se realizo una prueba de carga oral de glucosa el dfa 24 y se midio la temperatura rectal el dfa 26. El siguiente dfa de la finalizacion de la crianza experimental, se sometio a diseccion el raton KKAy, y se midieron el peso del organo y el nivel de grasa neutro en el plasma.

(3) El perfil del peso corporal del raton KKAy se muestra en la Fig. 2. En el grupo de alimentacion al que se ha anadido KetoA, se encontro una tendencia a la supresion del aumento de peso corporal en el grupo del 0,05%, y se encontro una supresion significativa del aumento del peso corporal en el grupo del 0,1%. En el grupo de alimentacion al que se ha anadido HYA, se encontro una supresion significativa del aumento de peso corporal en el grupo del 0,05%. En la Figura, la senal * indica P < 0,05, y la senal ** indica P < 0,01 (en adelante lo mismo para las Figuras 3 a 7).

El perfil del nivel de glucosa en sangre del raton KKAy se muestra en la Fig. 3. A las 4 semanas de la ingestion de la dieta de prueba, se encontro una tendencia a la supresion del aumento de glucosa en sangre en el grupo KetoA del 0,05% en comparacion con el grupo de control. Ademas, se encontro una accion hipoglucemiante mas fuerte y significativa en el grupo del 0,1% de KetoA. Por otra parte, el grupo HYA mostro una tendencia a la supresion del aumento del nivel de glucosa en sangre, a pesar de que no se encontro una diferencia significativa. El nivel de consumo de oxfgeno del raton KKAy se muestra en la Fig. 4. Ademas, los resultados de la temperatura rectal del raton KKAy se

muestran en la Fig. 5. En comparacion con el grupo de control, se encontro un aumento del nivel de consumo de ox^geno en el grupo KetoA, y tambien se encontro un aumento de la temperature rectal. Los resultados muestran que la generacion de calor se promueve en el grupo KetoA. Los resultados del peso del organo (peso de grasa blanca intraperitoneal) del raton KKAy se muestran en la Fig. 6, y los resultados de las grasas neutras en plasma se muestran 5 en la Fig. 7. Se confirmo una disminucion significativa tanto del peso de la grasa blanca intraperitoneal como del nivel de grasa neutra en el plasma, en el grupo del 0,1% KetoA.

(4) De los resultados anteriores, la anormalidad del metabolismo asociada con la obesidad mejoro en el grupo de ingestion de KetoA. Como se encontro un aumento en el nivel de consumo de oxfgeno y una elevacion de la temperatura rectal, se considera que la generacion de calor promovida contribuye a la mejora de la anormalidad del 10 metabolismo mediante KetoA.

[Ejemplo 3]

Efecto sobre la induccion de la smtesis de acidos grasos por el agonista de LXR.

Usando celulas HepG2 derivadas de cancer de Imgado humano (celula n° JCRB1054, Health Science Research Resources Bank), se evaluo el efecto supresor sobre la promocion de la smtesis de acidos grasos inducida por el 15 agonista de LXR mediante referencia al metodo de Zaima et al. (Journal of Lipid Research 47, 2712 - 2717, 2006).

Se cultivaron celulas HepG2 (2,0 x 105 celulas/ml) en medio DMEM que contema 10% de FES durante 24 horas, y el medio se intercambio con medio DMEM que contiene 0,1% BSA que contiene 10 nM de agonista de LXR T0901317 (Cayman Chemicals) y 60 pM de diversos acidos grasos. Despues de cultivar durante 24 horas, se recuperaron las celulas, y se extrajo el ARN total usando reactivo Sepasol (Nacalai Tesque). Despues del tratamiento con ADNasa, se 20 realizo la transcripcion inversa usando SuperScriptll (Invitrogen) para dar una solucion de ADNc. Utilizando SYBR Green Mix (Bio-Rad, Richmond, California) y cebador espedfico del gen (Tabla 1), se realizo la PCR en tiempo real del modo que sigue.

Tabla 1

mRNA

secuencia de bases del cebador referencia

SREBP-1c

5'-GGAGGGGTAGGGCCAACGGCCT-3' (SEQ ID NO: 3) 5'-CATGTCTTCGAAAGTGCAATCC-3' (SEQ ID NO: 4) Field et al., 2002 *

SCD-1

5'-TGGTTTCACTTGGAGCTGTG-3' (SEQ ID NO: 5) 5'-GGCCTTGGAGACTTTCTTCC-3' (SEQ ID NO: 6) NM_005063

FAS

5'-ACAGGGACAACCTGGAGTTCT-3' (SEQ ID NO: 7) 5'-CTGTGGTCCCACTTGATGAGT-3 '(SEQ ID NO: 8) Field et al., 2002

ACC1

5'-ATCCCGTACCTTCTTCTACTG-3 (SEQ ID N°: 9) 5'-CCCAAACATAAGCCTTCACTG-3 '(SEQ ID N°: 10) NM_198834

ACC2

5'-CTCTGACCATGTTCGTTCTC-3' (SEQ ID N°: 11) 5'-ATCTTCATCACCTCCATCTC-3 '(SEQ ID N°: 12) NM_001093

18S

5'-TAAGTCCCTGCCCTTTGTACACA-3 '(SEQ ID NO: 13) 5'-GATCCGAGGGCCTCACTAAAC-3' (SEQ ID NO: 14) Field et al., 2002

* Field et al., 2002; Biochem J. 368: 855 - 864.

25 1. Reaccion a 96°C, 15 minutos, 2. reaccion a 96°C, 15 s, 3. reaccion a 60°C durante 30 s, 4. medida de la

fluorescencia, 5. 2 - 4 se repitieron 40 veces, 6. la curva de fusion se midio de 65°C a 95°C en intervalos de 0,4°C. Como patron interno se utilizo el ARNr 18S. Los genes implicados en la smtesis de acidos grasos medidos fueron protema-1c de union al elemento regulador de esterol (SREBP-1c), estearoil coenzima A desaturasa-1 (SCD-1), sintasa de acidos grasos (FAS) y acetil CoA carboxilasa-1 y -2 (ACC-1,2). En cuanto a la cantidad de TG intracelular 30 acumulado, el lfpido se extrajo con cloroformo-metanol y se cuantifico mediante E Test Wako de trigliceridos (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).

Ademas, se midio el nivel de expresion de protema de SREBP-1c inmaduro y maduro. Las celulas tratadas como se menciona anteriormente se dispersaron en tampon A (sacarosa 250 mM, HEpES-KOH 10 mM, KCl 10 mM, MgCh 1,5 mM, EDTA-Na 1 mM, EGTA-Na 1 mM, pH 7,6) que contiene un inhibidor de proteasa, se pasaron 20 veces a traves 35 de una aguja de inyeccion de calibre 23 y se centrifugaron (1000 x g, 4°C, 5 min) para separarse en sobrenadante 1 y

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

precipitado 1. El precipitado 1 se re-disolvio en tampon B (HEPES-KOH 20 mM, NaCI 0,42 M, 2,5% de glicerol, MgCl2 1,5 mM, EDTA-Na 1 mM, EGTA-Na 1 mM, pH 7,6) y se centrifugo (105 x g, 4°C, 15 min). El sobrenadante 2 obtenido se uso como fraccion nuclear (que incluye la forma madura). El sobrenadante 1 se siguio centrifugando (105 x g, 4°C, 15 min) y el precipitado 2 obtenido se disolvio en lisado celular (Tris-HCl 10 mM, NaCl 100 mM, SDS 1%, EDTA-Na 1 mM), EGTA-Na 1 mM) y se uso como fraccion de membrana (incluyendo la forma inmadura). Usando esto como muestras, la medida se realizo por el metodo de transferencia Western usando anticuerpo policlonal anti-SREBP-1 (Santa Cruz). Utilizando el sistema de luciferasa Dual (Promega), se evaluo la accion antagonista en LXR mediante un ensayo de luciferasa. Se introdujeron p3xIR1-tk-Luc, pCMX-hLXRa, pRL-CMX en la celula HepG2. Despues del cultivo en un medio libre de suero que contiene BSA al 0,1% que contiene diversos acidos grasos y T0901317 durante 24 horas, se midio la actividad de la luciferasa.

La Fig. 8 muestra la variacion de la expresion del ARNm de SREBP-1c. T0901317 aumento la expresion a aproximadamente 7 veces, pero se encontro una fuerte accion supresora en HYA y KetoA. Los resultados de la transferencia Western tambien muestran que HYA y KetoA suprimieron fuertemente la promocion de la expresion de SREBP-1 maduro e inmaduro inducido por T0901317 (Figuras 9, 10). Tambien se demostro que los genes relacionados con la smtesis de lfpidos (SCD-1, FAS, ACC1, 2) bajo regulacion transcripcional mediante SREBP-1c tambien muestran una regulacion a la baja por estos acidos grasos (Figuras 11 a 14). Aunque el nivel de triacilglicerol intracelular tambien fue aumentado por T0901317 (Figura 15), el aumento fue reprimido significativamente por la presencia conjunta de estos acidos grasos. Se examino una accion antagonizante sobre el receptor nuclear LXR que regula SREBP-1c mediante un ensayo de luciferasa para encontrar que estos acidos grasos suprimen significativamente la accion de T0901317, antagonizando asf a LXR (Figura 16).

En las Figs. 8 a 16, la senal * indica P < 0,05, la senal ** indica P < 0,001, y la senal *** indica P < 0,0001 (frente a la adicion T0901317, no adicion de acidos grasos).

Por un metodo similar, se midieron tambien aKetoA, YKetoA, sKetoA , KetoB, YKetoB, aKetoB, sKetoB, rKetoB, KetoC, KKetoC, aKetoC, sKetoC, KetoRA, aHYA, yHYA, sHYA, rHYA, aHYB, yHYB, sHYB, rHYB, RA, HYC, aHYC, yHYC y sHYC para SREBP-1c, expresion madura e inmadura de SREBP-1, SCD-1, FAS, ACC1, 2, nivel de triacilglicerol intracelular y accion antagonista sobre LXR mediante ensayo de luciferasa. Como resultado, yHYA, YKetoA, aKetoA, rKetoB tambien mostraron una accion supresora de la smtesis de lfpidos por la accion antagonizante sobre LXR.

De los resultados anteriores, se demostro que HYA y KetoA de los acidos grasos examinados en este momento tienen una fuerte accion supresora de la smtesis de lfpidos por una accion antagonizante en LXR. De manera similar, se ha demostrado tambien que acidos grasos raros tales como yHYA, YKetoA, aKetoA y rKetoB tienen una accion supresora de la smtesis de lfpidos.

Aplicabilidad industrial

La presente invencion ha dejado claro que oxoacidos grasos y/o hidroxiacidos grasos espedficos tienen un efecto de mejora del metabolismo de los lfpidos y/o del azucar y/o de la energfa convencionalmente desconocido como una funcion fisiologica de los mismos. Un agente mejorador del metabolismo de lfpidos y/o azucar y/o energfa que contiene el oxoacido graso es aplicable a diversos campos tales como productos farmaceuticos, alimentos y piensos, y la presente invencion es de una gran utilidad industrial.

Listado de secuencias

<110> Kyoto University

Nitto Pharmaceutical Industries, Ltd.

<120> Agente mejorador del metabolismo que comprende acidos grasos raros

<130> 092100

<150> JP 2012-237933 <151> 2012-10-29

<160> 14

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1 <211> 654 <212> ADN

<213> Lactobacillus plantarum

<220>

<221> CDS <222> (1)..(654)

<400> 1

atg

tea gaa gca gtg aaa aat ttg gtg aac aat gat tta gca gac gtg

Met

Ser Glu Ala Val Lys Asn Leu Val Asn Asn Asp Leu Ala Asp Val

1

5 10 15

atg

ttt aac ege cat tea gtt egg cag ttt gac ccg aac gtt aaa att

Met

Phe Asn Arg His Ser Val Arg Gin Phe Asp Pro Asn Val Lys He

20 25 30

gga

cgt gat gag tta caa aag atg att gcg gaa gca gcc acc gcg cca

Gly

Arg Asp Glu Leu Gin Lys Met lie Ala Glu Ala Ala Thr Ala Pro

35 40 45

teg

gca tgt aat tta cag tea tgg cac ttt gtc gtc gtg gat acc ccc

Ser

Ala Cys Asn Leu Gin Ser Trp His Phe Val Val Val Asp Thr Pro

50 55 60

gag

gca aag get aag ttc aaa caa gcc gtg atg aaa ttc aac tac cca

Glu

Ala Lys Ala Lys Phe Lys Gin Ala Val Met Lys Phe Asn Tyr Pro

65

70 75 80

cag

gtc gac agt gca teg gcc ate gtc ttt att gcc ggt gac acc

cag

Gin

Val Asp Ser Ala Ser Ala lie Val Phe lie Ala Gly Asp Thr

Gin

85 90 95

teg

cat tat gtt tat ege gat gtc tgg aac aaa gtt tat gag gat ggg

Ser

His Tyr Val Tyr Arg Asp Val Trp Asn Lys Val Tyr Glu Asp Gly

100 105 110

aat

att acg aag gaa ege ttg gat cag att ctg gga acc ttc tta cca

Asn

He Thr Lys Glu Arg Leu Asp Gin lie Leu Gly Thr Phe Leu Pro

115 120 125

tta tat gaa aat gcc aca cca gat ttc ttg aaa ttc gat gcg acg att Leu Tyr Glu Asn Ala Thr Pro Asp Phe Leu Lys Phe Asp Ala Thr lie 130 135 140

48

96

144

192

240

288

336

384

432

gat

tgt tcc gtt gtc ggg atg cag ttg ctg eta gtg gca egg get cat

Asp

Cys Ser Val Val Gly Met Gin Leu Leu Leu Val Ala Arg Ala His

145

150 155 160

ggg

tat gat gcc aat gcg ttc tcc gga att gac ttt gaa aag atg att

Gly

Tyr Asp Ala Asn Ala Phe Ser Gly lie Asp Phe Glu Lys Met He

165 170 175

ccg

acg ctg ggt ett gat cct aaa ega tac gtg cca gta atg ggg ate

Pro

Thr Leu Gly Leu Asp Pro Lys Arg Tyr Val Pro Val Met Gly He

180 185 190

gca

ate ggg aaa gca gcg caa gaa ccg etc cat acg act egg tac gat

Ala

lie Gly Lys Ala Ala Gin Glu Pro Leu His Thr Thr Arg Tyr Asp

195 200 205

gcc

aaa aca cag act gat ttc tta gcc taa

Ala

Lys Thr Gin Thr Asp Phe Leu Ala

210 215

480

528

576

624

654

5 <210>2

<211> 217 <212> PRT

<213> Lactobacillus plantarum <400> 2

imagen7

Asp Cys Ser Val Val Gly Met Gin Leu Leu Leu Val Ala Arg Ala His 145 150 155 160

Gly Tyr Asp Ala Asn Ala Phe Ser Gly lie Asp Phe Glu Lys Met lie 165 170 175

Pro Thr Leu Gly Leu Asp Pro Lys Arg Tyr Val Pro Val Met Gly lie 180 185 190

Ala lie Gly Lys Ala Ala Gin Glu Pro Leu His Thr Thr Arg Tyr Asp 195 200 205

Ala Lys Thr Gin Thr Asp Phe Leu Ala 210 215

<210>3 5 <211> 22

<212> ADN <213> Cebador

<400> 3

ggaggggtag ggccaacggc ct 22

10 <210> 4

<211> 22 <212> ADN <213> Cebador

<400> 4

15 catgtcttcg aaagtgcaat cc 22 <210> 5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<211> 20 <212>ADN <213> Cebador

<400> 5

tggtttcact tggagctgtg 20

<210>6 <211> 20 <212> ADN <213> Cebador

<400> 6

ggccttggag actttcttcc 20

<210>7 <211> 21 <212> ADN <213> Cebador

<400> 7

acagggacaa cctggagttc t 21

<210>8 <211> 21 <212> ADN <213> Cebador

<400> 8

ctgtggtccc acttgatgag t 21

<210>9 <211> 21 <212> ADN <213> Cebador

<400> 9

atcccgtacc ttcttctact g 21

<210> 10 <211> 21 <212> ADN <213> Cebador

<400> 10

cccaaacata agccttcact g 21

<210> 11 <211> 20 <212> ADN <213> Cebador

<400> 11

ctctgaccat gttcgttctc 20

<210> 12 <211> 20 <212> ADN <213> Cebador

<400> 12

atcttcatca cctccatctc 20

<210> 13 <211> 23 <212> ADN <213> Cebador

<400> 113

taagtccctg ccctttgtac aca

<210> 14 <211> 21 <212>ADN 5 <213> Cebador

<400> 14

gatccgaggg cctcactaaa c

23

21

Claims (6)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   REIVINDICACIONES

   1. Un hidroxiacido graso y/o un oxoacido graso para su uso en la profilaxis o el tratamiento de al menos una

   condicion seleccionada entre el grupo que consiste en obesidad, diabetes, hiperlipidemia e hngado graso, en donde el hidroxiacido graso es al menos un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-hidroxi-cis-12- octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-12, cis-15-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12, cis-15-octadecatrienoico, acido 10,12-dihidroxioctadecanoico, acido 10-hidroxi-cis-15- octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-6-octadecenoico, acido 10-hidroxi-cis-6, cis-15-octadecadienoico, acido 10- hidroxi-trans-11-octadecenoico, acido 10-hidroxi-trans-11, cis-15-octadecadienoico, acido 10-hidroxi-cis-6, trans-11- octadecadienoico, y acido 10-hidroxi-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico, y el oxoacido graso es al menos un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-12, cis- 15-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12, cis-15-

   octadecatrienoico, acido 10-oxo-octadecanoico, acido 10-oxo-cis-6-octadecenoico, acido 10-oxo-cis-15- octadecenoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-15-octadecadienoico, acido 12-oxo-octadecanoico, acido 10-oxo-trans-11- octadecenoico, acido 10-oxo-cis-6, trans-11-octadecadienoico, acido 10-oxo-trans-11, cis-15-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, trans-11, cis-15-octadecatrienoico, y acido 12-oxo-cis-9-octadecenoico.
2. 2. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para uso segun la reivindicacion 1, en donde el hidroxiacido graso es al menos un compuesto seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-hidroxi-cis-12-octadecenoico y acido 10-hidroxi-cis-6, cis-12-octadecadienoico, y el oxoacido graso es al menos un tipo seleccionado entre el grupo consistente en acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico, acido10-oxo-cis-12, cis-15-octadecadienoico, acido 10-oxo-cis-6, cis-12-octadecadienoico y acido 12-oxo-octadecanoico.
3. 3. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para su uso segun la reivindicacion 1, en donde el hidroxiacido graso es acido 10-hidroxi-cis-12-octadecenoico, y el oxoacido graso es acido 10-oxo-cis-12-octadecenoico.
4. 4. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en forma de producto farmaceutico.
5. 5. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en forma de pienso o aditivo para pienso.
6. 6. El hidroxiacido graso y/o el oxoacido graso para el uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en forma de cosmetico o de aditivo para cosmetico.