CN106163511A - 含有稀有脂肪酸的抗炎剂 - Google Patents

含有稀有脂肪酸的抗炎剂 Download PDF

Info

Publication number
CN106163511A
CN106163511A CN201580005505.XA CN201580005505A CN106163511A CN 106163511 A CN106163511 A CN 106163511A CN 201580005505 A CN201580005505 A CN 201580005505A CN 106163511 A CN106163511 A CN 106163511A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cis
acid
hydroxyl
oxo
fatty acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201580005505.XA
Other languages
English (en)
Inventor
小川顺
岸野重信
河田照雄
高桥信之
后藤刚
菅原达也
米岛靖记
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nestor Co ltd
Kyoto University
Original Assignee
Nitto Pharmaceutical Industries Ltd
Kyoto University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nitto Pharmaceutical Industries Ltd, Kyoto University filed Critical Nitto Pharmaceutical Industries Ltd
Priority to CN202211463156.4A priority Critical patent/CN116440112A/zh
Publication of CN106163511A publication Critical patent/CN106163511A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/201—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having one or two double bonds, e.g. oleic, linoleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Abstract

本发明提供了含有稀有脂肪酸诸如羟基化脂肪酸或氧代脂肪酸的抗炎剂，且进一步提供了含有所述抗炎剂的食品、药品等。

Description

含有稀有脂肪酸的抗炎剂
技术领域
本发明涉及含有稀有脂肪酸的抗炎剂。更具体而言，本发明涉及抗炎剂，其利用稀有脂肪酸诸如氧代脂肪酸、羟基脂肪酸等的生理功能，例如，抑制体内炎症反应的作用。本发明还涉及含有所述抗炎剂的食品、药品、饲料等。
背景技术
炎症是当由细菌感染、理化因子的作用等损伤生物组织时观察到的活生物体的防御反应，其中由此去除导致损伤的物质和受损的组织。关于活生物体中的炎症反应，已知由M1巨噬细胞产生的一氧化氮(NO)充当介体。尽管NO充当生物防御因子，但当在炎症过程中大量产生时，其加剧炎症。例如，在肥胖状态的脂肪组织中，通过活化的M1巨噬细胞和脂肪细胞的相互活化促进炎症，并诱导疾病状态。因此，预期抑制M1巨噬细胞的NO产生的物质的抗炎作用。
作为显示抗炎作用的脂肪酸衍生物，已报道了脂氧合酶产生的羟基化脂肪酸。例如，当使用植物来源的脂氧合酶时，从亚油酸产生9-羟基-反-10,顺-12-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,反-11-十八碳二烯酸；与羟基过氧化物异构酶组合使用进一步产生13-羟基-10-氧代-反-11-十八碳烯酸、9-羟基-13-氧代-反-10-十八碳烯酸、9-羟基-10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、13-羟基-12-氧代-顺-9-十八碳烯酸，并且据报道这些羟基化的脂肪酸和氧代脂肪酸具有抗炎作用(专利文献1)。此外，作为哺乳动物中的内源性抗炎脂质介体，已经报道了ω3脂肪酸诸如二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等的环氧形式和羟基化形式，其通过氧化酶诸如脂氧合酶、单加氧酶等的作用而产生(专利文献2)。
作为稀有脂肪酸诸如羟基化脂肪酸、氧代脂肪酸等，由于已经报道番茄中含有的部分氧代脂肪酸诸如9-氧代-十八碳二烯酸、13-氧代-十八碳二烯酸等具有改善生活方式相关疾病的活性，诸如脂质代谢改善等(专利文件3，非专利文件1、2)，所以稀有脂肪酸的生理功能正在引起注意。
关于稀有脂肪酸诸如氧代脂肪酸、羟基化脂肪酸等的生产，已经报道了各自具有18个碳原子的C10-位羟基化脂肪酸和C10-位氧代脂肪酸的生产方法，其使用源自植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的水合脱水酶，并且由本发明人发现(专利文献4)。此外，也已经报道了关于这些C10-位羟基化脂肪酸和C10-位氧代脂肪酸的代谢改善作用(专利文献5)和肠道保护作用(专利文献6)。然而，这些羟基化脂肪酸、氧代脂肪酸以及各自具有除了18以外的碳原子数的羟基化脂肪酸和氧代脂肪酸或者在除了C10-位以外的位置处各自具有羟基、羰基的羟基化脂肪酸和氧代脂肪酸的除了代谢改善和肠道保护以外的生理功能，例如，生理功能诸如抗炎作用等是未知的。
[文献列表]
[专利文献]
专利文献1: JP-A-2005-008594
专利文献2: WO 2012/023254
专利文献3: JP-A-2011-184411
专利文献4: WO 2013/168310
专利文献5: WO 2014/069227
专利文献6: WO 2014/129384
[非专利文献]
非专利文献1: Kim Y-I, (2011), Mol. Nutr. Food Res., vol.55, p.585-593
非专利文献2: Kim Y-I, (2012), PLoS ONE, vol.7, no.2, e31317。
发明概述
本发明待解决的问题
本发明的一个目标是提供抑制炎症反应的含有稀有脂肪酸的新颖抗炎剂。
解决问题的方式
本发明人已经鉴于上述问题进行了深入研究，并且发现，由本发明人发现的稀有脂肪酸诸如使用源自植物乳杆菌的脂肪酸饱和酶组和化学氧化反应获得的具有18个碳原子的C10-位羟基化脂肪酸和具有18个碳原子的C10-位氧代脂肪酸以及使用源自嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的水合酶和化学氧化反应获得的具有18个碳原子的C13-位羟基化脂肪酸和具有18个碳原子的C13-位氧代脂肪酸等具有通常未知的基于抑制M1巨噬细胞的NO产生的作用的抗炎作用。此外，本发明人已经发现，上述稀有脂肪酸具有增加细胞对H2O2应激的抗性的效果和增加抗氧化酶HO-1 mRNA的表达的效果。此外，本发明人已经发现，上述稀有脂肪酸通过直接或间接诱导单核细胞和巨噬细胞分化为M2巨噬细胞而抑制单核细胞和巨噬细胞向M1巨噬细胞的分化。
已经基于以上发现完成了本发明。
因此，本发明提供以下：
[1] 包含以下脂肪酸的抗炎剂：
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(4) 具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸；
[2] [1]的抗炎剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，
(3) 饱和脂肪酸或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸；
[3] [2]的抗炎剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸；
[4] [2]的抗炎剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键且具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10,12-二羟基-十八烷酸、10-羟基-十八烷酸、10-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-反-11-十八碳烯酸、10-羟基-反-11,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-十八烷酸、10-氧代-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键且具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-13-羟基-十八烷酸、10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二氧代-十八烷酸、10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸、12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸、12-氧代-十八烷酸、12-氧代-顺-9-十八碳烯酸、12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸或12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸或15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸，
(5)具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸是10-羟基-十六烷酸或10-氧代-十六烷酸；
[5] [3]的抗炎剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键且具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键且具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸；
[6] [1]-[5]中任一项的抗炎剂，其用于预防或改善涉及巨噬细胞的炎性疾病；
[7] [1]-[5]中任一项的抗炎剂，其为食品或食品添加剂；
[8] [1]-[5]中任一项的抗炎剂，其为药品；
[9] [1]-[5]中任一项的抗炎剂，其为饲料或饲料添加剂；
[10] 包含以下脂肪酸的M1巨噬细胞抑制剂：
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(4) 具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸；
[11] [10]的抑制剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，
(3) 饱和脂肪酸或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基，或，
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸；
[12] [11]的抑制剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸；
[13] [11]的抑制剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键且具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10,12-二羟基-十八烷酸、10-羟基-十八烷酸、10-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-反-11-十八碳烯酸、10-羟基-反-11,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-十八烷酸、10-氧代-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键且具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-13-羟基-十八烷酸、10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二氧代-十八烷酸、10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸、12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸、12-氧代-十八烷酸、12-氧代-顺-9-十八碳烯酸、12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸或12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸或15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸，
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸是10-羟基-十六烷酸或10-氧代-十六烷酸；
[14] [12]的抑制剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键且具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键且具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸；
[15]用于预防或治疗炎性疾病的方法，其包括将有效量的[1]-[5]中任一项的脂肪酸施用于患者；
[16] [15]的方法，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病；
[17] [1]-[5]中任一项的脂肪酸，其用于预防或治疗炎性疾病；
[18] [17]的脂肪酸，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病；
[19] [1]-[5]中任一项的脂肪酸在生产炎性疾病的预防或治疗剂中的用途；
[20] [19]的用途，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病。
[发明效果]
在本发明中，发现羟基化脂肪酸诸如10-羟基-顺-12-十八碳烯酸和13-羟基-顺-9-十八碳烯酸，或氧代脂肪酸诸如10-氧代-顺-12-十八碳烯酸和13-氧代-顺-9-十八碳烯酸(以下也称为稀有脂肪酸衍生物)具有抗炎作用，这是通常未知的生理功能。
基于该功能，本发明提供了含有稀有脂肪酸衍生物诸如羟基化脂肪酸等的抗炎剂。
[附图简述]
图1显示通过Griess法的NO产生量的测量结果，其中Cont.显示阴性对照(乙醇添加)，Posi.显示阳性对照(IκBα磷酸化抑制剂添加)，且纵轴显示NO产生量。
图2显示相对于H2O2的细胞存活率的测量结果。A：各自以30 μM使用各种化合物(No. 11-No. 13)。B：以10、20、30 μM使用化合物No. 11。Nor.显示未经H2O2处理的细胞，Con.显示阴性对照，tBHQ显示阳性对照，且纵轴显示细胞存活率。
图3显示抗氧化酶HO-1 mRNA表达的测量结果。A：各自以30 μM使用各种化合物(No. 11-No. 13)。B：以10、30、60、90 μM使用化合物No. 11。Con.显示阴性对照，tBHQ显示阳性对照，且纵轴显示HO-1 mRNA的相对表达水平。
图4显示Western印迹图像和显示转录因子Nrf2的核内表达的测量结果的图。Con.显示阴性对照，tBHQ显示阳性对照，且纵轴显示核内Nrf2的相对表达水平。
图5显示转录因子Nrf2的转录活性的测量结果。Con.显示阴性对照，tBHQ显示阳性对照，且纵轴显示相对荧光素酶活性。
图6显示用于诱导小鼠骨髓来源的细胞分化为M2巨噬细胞的培养时间表。
图7显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图8显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图9显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图10显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图11显示精氨酸酶1 mRNA表达水平。
图12显示IL-1β mRNA表达水平。
图13显示用于诱导小鼠骨髓来源的细胞分化为M2巨噬细胞的培养时间表。
图14显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图15显示具有M2巨噬细胞的细胞表面抗原的细胞的比例。
图16显示精氨酸酶1 mRNA的表达水平。
图17显示IL-1β mRNA的表达水平。
图18显示IL-4表达水平。
图19显示MCP-1表达水平。
[实施方案的描述]
下面详细解释本发明。
在本发明中，“抗炎”是指对体内炎症的抑制。具体而言，“抗炎剂”意指，例如，炎症诸如由于变应性疾病导致的组织损伤(风湿病、动脉硬化等)、慢性炎症和神经炎症疾病的预防和/或抑制。
作为上述抗炎活性的指标，可以测量M1巨噬细胞的一氧化氮(NO)产生。尽管巨噬细胞是在针对生物暴露于从外部世界侵入的外来物质诸如致病细菌等的生物防御机制中发挥中心作用的一种免疫细胞，但当巨噬细胞被活化时，其变为M1巨噬细胞，并且产生炎性介体，包括NO，前列腺素E2，细胞因子诸如TNF-α等。这些炎性介体的提高的产生由慢性炎症而引起组织病症，并且诱导动脉硬化、风湿病等。因此，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否抑制脂多糖(LPS)活化的M1巨噬细胞的NO产生，并且当NO产生被抑制时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。作为一个实例，可以通过Griess法评估NO产生量，尽管所述方法不受限制。
而且，作为上述抗炎活性的指标，可以测量相对于H2O2的细胞存活率。作为活性氧的H2O2促进炎性细胞因子的产生，并且引起炎性疾病，如上述M1巨噬细胞。H2O2的氧化应激的减少提供抗炎作用。因此，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否增加培养细胞相对于H2O2的存活率，并且当存活率增加时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。
而且，作为上述抗炎活性的指标，也可以测量血红素加氧酶(HO-1)的表达的促进。HO-1是作为体内保护细胞免于氧化应激的防御机制的一种重要的酶。HO-1的缺乏促进由于氧化应激而导致的细胞损伤，促进炎症；另一方面，HO-1的提高的表达抑制氧化应激，并抑制由于细胞损伤而导致的炎症。因此，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否促进培养细胞中HO-1的表达，并且当促进HO-1表达时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。
或者，作为上述抗炎活性的指标，也可以测量核内转录因子Nrf2的表达的促进。亲电子物质、活性氧、内质网应激等促进和活化Nrf2的核内表达，并且在高等动物中，Nrf2控制氧化应激-适应性反应并抑制炎症。因此，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否促进培养细胞中Nrf2的核内表达，并且当促进Nrf2的核内表达时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。或者，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否促进培养细胞中Nrf2的转录活性，并且当促进Nrf2的转录活性时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。
或者，作为上述抗炎活性的指标，也可以测量M2巨噬细胞的表达标记。M1巨噬细胞在被细菌、病毒或真菌感染后活化，并且产生肿瘤坏死因子(TNF)、一氧化氮和细胞因子诸如IL-6、IFN、IL-1β等，其对于消除这样的病原体是重要的。另一方面，M2巨噬细胞参与寄生虫感染、过敏反应、脂肪代谢、创伤治疗、癌症转移等。已知巨噬细胞被分化为M1或M2，并且可以通过诱导分化为M2而减低M1的比例，作为其结果，炎症得到抑制。因此，证实下述本发明的稀有脂肪酸衍生物是否促进M2巨噬细胞中表达的细胞表面抗原的表达和M2巨噬细胞中表达的mRNA标记的表达，并且当它们得到促进时，可以判断所述稀有脂肪酸衍生物非常可能具有抗炎作用，或具有抗炎作用。
在本发明中，稀有脂肪酸衍生物是指可以使用源自植物乳杆菌的脂肪酸饱和酶组和化学氧化反应产生的稀有脂肪酸衍生物(下文有时缩写为“LP-稀有脂肪酸衍生物”)，可以使用源自嗜酸乳杆菌的水合酶和化学氧化反应产生的稀有脂肪酸衍生物(下文有时缩写为“LA-稀有脂肪酸衍生物”)，和通过蓖麻油酸的化学氧化反应产生的12-氧代-顺-9-十八碳烯酸。
本发明的LP-稀有脂肪酸衍生物是指具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸。如本文所使用，具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸是指具有18个碳原子和10-位处的羟基的羟基化脂肪酸(下文有时缩写为“10-羟基脂肪酸”)，或具有18个碳原子和10-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时缩写为“10-氧代脂肪酸”)。具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。当具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸是不饱和脂肪酸时，在11-位具有反式双键或在6-位、12-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是优选的。所述不饱和脂肪酸可以进一步在6-位或15-位具有顺式双键。
更具体地，尽管具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且在11-位具有反式双键或在6-位、12-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸(优选地，具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且在11-位具有反式双键或在6-位、12-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸)没有特别限制，但可以提及10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10,12-二羟基-十八烷酸、10-羟基-十八烷酸、10-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-反-11-十八碳烯酸、10-羟基-反-11,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代十八烷酸、10-氧代-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸等，优选地，可以提及10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸，更优选地，可以提及10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸。
本发明中的LA-稀有脂肪酸衍生物是指具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸，具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸，具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸，或具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸。
在本发明中，具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸是指具有18个碳原子和13-位处的羟基的羟基化脂肪酸(下文有时缩写为“13-羟基脂肪酸”)，或具有18个碳原子和13-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时缩写为“13-氧代脂肪酸”)。如本文所使用，具有18个碳原子和10-位和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸(下文有时缩写为“10,13-二羟基脂肪酸”或“10,13-二氧代脂肪酸”)和具有18个碳原子和13-位处的羟基和10-位处的羰基的脂肪酸(下文有时缩写为“10-氧代-13-羟基脂肪酸”)也涵盖于“13-羟基脂肪酸”或“13-氧代脂肪酸”的一个实施方案中。此外，具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。当具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸是不饱和脂肪酸时，在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是优选的，且在9-位具有顺式双键的不饱和脂肪酸是更优选的。
而且，在本发明中，具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸是指具有16个碳原子和10-位处的羟基的羟基化脂肪酸(下文有时缩写为“10-羟基脂肪酸”)，或具有16个碳原子和10-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时缩写为“10-氧代脂肪酸”)。此外，具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。
在本发明中，具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸是指具有20个碳原子和15-位处的羟基的羟基化脂肪酸(下文有时缩写为“15-羟基脂肪酸”)，或具有20个碳原子和15-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时缩写为“15-氧代脂肪酸”)。此外，具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。当其为不饱和脂肪酸时，在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是优选的。
在本发明中，具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸是指具有18或20个碳原子和12-位处的羟基的羟基化脂肪酸(下文有时缩写为“12-羟基脂肪酸”)，或具有18或20个碳原子和12-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时缩写为“12-氧代脂肪酸”)。此外，具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。当其为不饱和脂肪酸时，在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是优选的。此外，具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸也是优选的。
更具体地，尽管具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基且在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸没有特别限制，但可以提及13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-13-羟基-十八烷酸、10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二氧代-十八烷酸、10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸等，优选地，可以提及13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸或13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸，更优选地，可以提及13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸或13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸。
尽管具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸没有特别限制，但可以提及10-羟基-十六烷酸或10-氧代-十六烷酸等。
尽管具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基且在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸没有特别限制，但可以提及15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸或15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸等。
作为具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基且在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键不饱和脂肪酸(优选地，具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸)，可以提及12-羟基-十八烷酸、12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸、12-氧代-十八烷酸、12-氧代-顺-9-十八碳烯酸、12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸或12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸等，优选地，可以提及12-羟基-十八烷酸。
本发明中待使用的LP-稀有脂肪酸衍生物可以通过本发明人发现的PCT/JP2012/78747 (WO 2013/168310)的方法来制备。此外，10-羟基-顺-12-十八碳烯酸可以参考Biochemical and Biophysical Research Communications 416 (2011) p.188-193等来制备。此外，LA-稀有脂肪酸衍生物可以通过以下方法来制备。或者，作为12-羟基-十八烷酸等，可以使用市售可得的产品。12-氧代-顺-9-十八碳烯酸可以通过蓖麻油酸的市售可得的产品的化学氧化反应来制备。
作为本发明中待使用的LA-稀有脂肪酸衍生物，羟基化脂肪酸通过新颖脂肪酸水合酶(FA-HY)从具有16、18、20个碳原子的不饱和脂肪酸产生，且氧代脂肪酸可以通过经由酶反应或化学反应进一步氧化羟基化脂肪酸的羟基而产生。
上述新颖脂肪酸水合酶“FA-HY”是
(a) 由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的酶蛋白，
(b) 包含以下氨基酸序列且具有由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的酶蛋白所具有的酶活性的蛋白，在前述氨基酸序列中，在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列中缺失和/或取代和/或插入和/或添加了一个或多个氨基酸，或者
(c) 由以下碱基序列编码且具有由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的酶蛋白所具有的酶活性的蛋白，前述碱基序列在严格条件下杂交至由与SEQ ID NO:1中所示的碱基序列互补的链序列组成的核酸。
上述(b)的更具体实例包括含有以下氨基酸序列的蛋白：(i) 氨基酸序列，其为SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，其中缺失1-20、优选1-10、更优选1-几(5、4、3或2)个氨基酸，(ii) 氨基酸序列，其为SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，其中添加1-20、优选1-10、更优选1-几(5、4、3或2)个氨基酸，(iii) 氨基酸序列，其为SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，其中插入1-20、优选1-10、更优选1-几(5、4、3或2)个氨基酸，(iv) 氨基酸序列，其为SEQID NO:2中所示的氨基酸序列，其中1-20、优选1-10、更优选1-几(5、4、3或2)个氨基酸被其他氨基酸取代，或(v) 通过组合它们获得的氨基酸序列。当具有相似特性的氨基酸(例如，甘氨酸和丙氨酸，缬氨酸和亮氨酸和异亮氨酸，丝氨酸和苏氨酸，天冬氨酸和谷氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺，赖氨酸和精氨酸，半胱氨酸和甲硫氨酸，苯丙氨酸和酪氨酸等)被彼此取代等时，更大数目的取代等是可能的。
当氨基酸如上所述被缺失、取代或插入时，缺失、取代和插入的位置没有特别限制，只要维持上述酶活性。
在上述(c)中，所述“严格条件”是这样的条件，在所述条件下，具有高同一性，例如70、80、90、95或99%或更高的同一性的核苷酸序列彼此杂交，且具有低于该值的同一性的核苷酸序列不杂交；具体地，在对应于通常Southern杂交的洗涤条件(60℃，1×SSC，0.1％SDS，优选地，0.1×SSC，0.1％SDS，更优选地，68℃，0.1×SSC，0.1％SDS)中的那些盐浓度和温度的盐浓度和温度洗涤一次、更优选2-3次的条件，等等。
关于上述(b)或(c)，由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的酶蛋白所具有的酶活性没有特别限制，只要其具有以下中的至少一种、优选所有：(1) 能够将用作底物的具有18个碳原子和12-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸(下文有时简称为“顺-12不饱和脂肪酸”)转化为具有18个碳原子和13-位处的羟基的羟基化脂肪酸(13-羟基脂肪酸)(反应1)的酶活性，(2) 能够将用作底物的具有16个碳原子和9-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸(下文有时简称为“顺-9不饱和脂肪酸”)转化为具有16个碳原子和10-位处的羟基的羟基化脂肪酸(10-羟基脂肪酸)(反应2)的酶活性，(3) 能够将用作底物的具有20个碳原子和14-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸(下文有时简称为“顺-14不饱和脂肪酸”)转化为具有20个碳原子和15-位处的羟基的羟基化脂肪酸(15-羟基脂肪酸)(反应3)的酶活性，(4) 能够将用作底物的具有18或20个碳原子和11-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸(下文有时简称为“顺-11不饱和脂肪酸”)转化为具有18或20个碳原子和12-位处的羟基的羟基化脂肪酸(12-羟基脂肪酸)(反应4)的酶活性，能够将顺-4,顺-7,顺-10,顺-13,顺-16,顺-19-二十二碳六烯酸(DHA)转化为14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸(反应A)的酶活性，和能够将顺-9-十四碳烯酸(肉豆蔻脑酸)转化为10-羟基-十四烷酸(反应I)的酶活性。
上述“顺-12不饱和脂肪酸”、“顺-9不饱和脂肪酸”、“顺-14不饱和脂肪酸”和“顺-11不饱和脂肪酸”没有特别限制，只要它们分别是具有18个碳原子和12-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸、具有16个碳原子和9-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸、具有20个碳原子和14-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸、具有18或20个碳原子和11-位处的顺式双键的不饱和脂肪酸，并且，例如，可以提及一价不饱和脂肪酸、二价不饱和脂肪酸、三价不饱和脂肪酸、四价不饱和脂肪酸、五价不饱和脂肪酸等。在本说明书中，“脂肪酸”不仅涵盖游离酸，而且涵盖酯形式，与碱性化合物的盐等。“DHA”和“肉豆蔻脑酸”不仅还涵盖游离酸，而且涵盖酯形式，与碱性化合物的盐等。
上述FA-HY可以，例如，通过本身已知的蛋白分离和纯化技术，从菌体、嗜酸乳杆菌的培养基分离。或者，FA-HY可以以含有FA-HY的嗜酸乳杆菌的菌体或其菌体碎片的形式使用。含有FA-HY的嗜酸乳杆菌的菌体没有特别限制，只要其含有上述FA-HY，并且，例如，可以提及在2014年1月17日保藏于NITE专利微生物保藏中心(NPMD)的BP-01788等。或者，FA-HY还可以作为重组蛋白通过以下产生：分离编码FA-HY的基因，将其亚克隆入合适的载体，将其引入合适的宿主诸如大肠杆菌等并将其培养。FA-HY可以是纯化的或粗纯化的FA-HY。或者，水合酶可以在菌体诸如大肠杆菌(Escherichia coli)等中表达，并且可以使用菌体本身或可以使用其培养基。此外，所述酶可以是游离形式的，或通过各种载体固定化。
作为含有编码上述FA-HY的核酸的载体，可以根据目标(例如，蛋白表达)适当选择且可以使用一种合适于待引入载体的宿主细胞的载体。在表达载体的情况下，其含有与适当的启动子可操作连接的本发明的核酸，且优选在本发明的核酸的下游含有转录终止信号，即，终止子区。此外，其也可以含有用于选择转化体的选择标记基因(药物抗性基因、补足营养缺陷型突变的基因等)。此外，其可以含有编码可用于分离和纯化表达蛋白的标签序列等的序列。此外，所述载体可以整合入目标宿主细胞的基因组中。本发明的载体可以通过本身已知的转化方法诸如感受态细胞法、原生质体法、磷酸钙共沉淀法等引入目标宿主细胞。
在本说明书中，“宿主细胞”可以是任何细胞，只要其可以表达含有编码上述FA-HY的核酸的载体，且可以提及细菌、酵母、真菌、高等真核细胞等。细菌的实例包括革兰氏阳性细菌，诸如芽孢杆菌、链霉菌(Streptomyces)等，以及革兰氏阴性细菌，诸如大肠杆菌等。可以通过适合于宿主细胞的本身已知的方法培养引入了含有编码FA-HY的核酸的载体的重组细胞。
上述FA-HY的“纯化”可以通过本身已知的方法进行，例如，通过超声或玻璃珠等破碎通过离心等收集的菌体，通过离心等去除固体诸如细胞碎片等，以得到粗酶溶液，对所述粗酶溶液进行使用硫酸铵、硫酸钠等的盐析法，层析法诸如离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等、凝胶电泳等。
如上所述，上述FA-HY具有能够将用作底物的顺-12不饱和脂肪酸、顺-9不饱和脂肪酸、顺-14不饱和脂肪酸、顺-11不饱和脂肪酸、DHA、肉豆蔻脑酸分别转化为13-羟基脂肪酸、10-羟基脂肪酸、15-羟基脂肪酸、12-羟基脂肪酸、14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸、10-羟基-十四烷酸的酶活性。因此，本发明还提供：[1] 使用上述FA-HY通过水合反应从顺-12不饱和脂肪酸生产13-羟基脂肪酸的方法(生产方法1)，[2] 使用上述FA-HY通过水合反应从顺-9不饱和脂肪酸生产10-羟基脂肪酸的方法(生产方法2)，[3] 使用上述FA-HY通过水合反应从顺-14不饱和脂肪酸生产15-羟基脂肪酸的方法(生产方法3)，[4] 使用上述FA-HY通过水合反应从顺-11不饱和脂肪酸生产12-羟基脂肪酸的方法(生产方法4)，[A] 使用上述FA-HY通过水合反应从DHA生产14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸的方法(生产方法A)，和[I] 使用本发明的FA-HY通过水合反应从肉豆蔻脑酸生产10-羟基-十四烷酸的方法(生产方法I)。
上述生产方法1中的“顺-12不饱和脂肪酸”的实例包括顺-9,顺-12-十八碳二烯酸(亚油酸)、顺-6,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(γ-亚麻酸)、顺-9,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸(α-亚麻酸)、顺-6,顺-9,顺-12,顺-15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸，stearidonic acid))以及10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、顺-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(松油酸)、反-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(哥伦比亚酸，columbinic acid)，其现在可通过WO 2013/168310等产生。这些底物可以通过除了WO 2013/168310以外的方法来获得。
通过上述生产方法1生产的“13-羟基脂肪酸”的实例包括由顺-9,顺-12-十八碳二烯酸(亚油酸)诱导的13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、由顺-6,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(γ-亚麻酸)诱导的13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、由顺-9,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸(α-亚麻酸)诱导的13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、由顺-6,顺-9,顺-12,顺-15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸)诱导的13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、由10-羟基-顺-12-十八碳烯酸诱导的10,13-二羟基-十八烷酸、由10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸诱导的10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、由10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸诱导的10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、由10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸诱导的10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、由10-氧代-顺-12-十八碳烯酸诱导的10-氧代-13-羟基-十八烷酸、由10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸诱导的10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、由10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸诱导的10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、由10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸诱导的10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、由顺-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(松油酸)诱导的13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、由反-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(哥伦比亚酸)诱导的13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸等。
上述生产方法2中的“顺-9不饱和脂肪酸”的实例包括顺-9-十六碳烯酸(棕榈油酸)等。
通过上述生产方法2生产的“10-羟基脂肪酸”的实例包括从顺-9-十六碳烯酸(棕榈油酸)诱导的10-羟基-十六烷酸等。
上述生产方法3中的“顺-14不饱和脂肪酸”的实例包括顺-11,顺-14-二十碳二烯酸、顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)、顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)、顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸、顺-5,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(金松酸，sciadonic acid)、顺-5,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸(juniperonic acid)等。
通过上述生产方法3生产的“15-羟基脂肪酸”的实例包括由顺-11,顺-14-二十碳二烯酸诱导的15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、由顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸诱导的15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)诱导的15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)诱导的15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸诱导的15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、由顺-5,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(金松酸)诱导的15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸(juniperonic酸)诱导的15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸等。
上述生产方法4中的“顺-11不饱和脂肪酸”的实例包括顺-11-十八碳烯酸(顺-异油酸，vaccenic acid)、顺-11,顺-14-二十碳二烯酸、顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)、顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸(蜜酒酸)、顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸、顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)等。
通过上述生产方法4生产的“12-羟基脂肪酸”的实例包括由顺-11-十八碳烯酸(顺-异油酸)诱导的12-羟基-十八烷酸、由顺-11,顺-14-二十碳二烯酸诱导的12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、由顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸诱导的12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)诱导的12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸(蜜酒酸)诱导的12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸诱导的12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)诱导的12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸等。
水合反应可以通过在合适的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液等)中，将作为底物的不饱和脂肪酸和上述FA-HY以合适的浓度混合且孵育混合物来进行。底物浓度为，例如，1-1000 g/L，优选10-500 g/L，更优选20-250 g/L。待添加的上述FA-HY的量为，例如，0.001-10 mg/mL，优选0.1-5 mg/mL，更优选0.2-2 mg/mL。
“辅因子”可用于水合反应(反应1-4，反应A或反应I)，并且例如，可以使用FAD等。添加的浓度可以是任意的，只要水合反应有效地进行。其优选为0.001-20 mM，更优选0.01-10 mM。
此外，“活化剂”可用于水合反应，并且例如，可以提及选自NADH和NADPH的1种或2种化合物。其添加浓度可以是任意的，只要水合反应有效地进行。其优选为0.1-20 mM，更优选1-10 mM。
水合反应期望地在对于上述FA-HY优选的温度和优选的pH范围内进行。例如，反应温度为5-50℃，优选20-45℃。反应混合物的pH为，例如，pH 4-10，优选pH 5-9。反应时间没有特别限制，并且其为，例如，10分钟-72小时，优选30分钟-36小时。
在本发明的一个优选实施方案中，将上述FA-HY以重组细胞(例如，大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、酵母、昆虫细胞、动物细胞等)的形式提供至反应体系，所述重组细胞引入了含有编码FA-HY的核酸的表达载体。在该情况下，水合反应也可以通过在适合于培养细胞且添加辅因子和底物且在必要时添加活化剂的液体培养基中培养细胞来进行。
此外，通过脱氢反应或使用铬酸的化学氧化，从在上述生产方法1-4、生产方法A、生产方法I中获得的13-羟基脂肪酸生产具有18个碳原子和13-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时简称为“13-氧代脂肪酸”)(反应5)，从10-羟基脂肪酸生产具有16个碳原子和10-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时简称为“10-氧代脂肪酸”)(反应6)，从15-羟基脂肪酸生产具有20个碳原子和15-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时简称为“15-氧代脂肪酸”)(反应7)，从12-羟基脂肪酸生产具有18或20个碳原子和12-位处的羰基的氧代脂肪酸(下文有时简称为“12-氧代脂肪酸”)(反应8)，从14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸生产14-氧代-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸(反应B)，并且从10-羟基-十四烷酸生产10-氧代-十四烷酸(反应II)。
因此，提供了[5] 生产13-氧代脂肪酸的方法，其包括使顺-12不饱和脂肪酸进行使用上述FA-HY的水合反应以诱导13-羟基脂肪酸，且使13-羟基脂肪酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法5)，[6] 生产10-氧代脂肪酸的方法，其包括使顺-9不饱和脂肪酸进行使用上述FA-HY的水合反应以诱导10-羟基脂肪酸，且使10-羟基脂肪酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法6)，[7] 生产15-氧代脂肪酸的方法，其包括使顺-14不饱和脂肪酸进行使用上述FA-HY的水合反应以诱导15-羟基脂肪酸，且使15-羟基脂肪酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法7)，[8] 生产12-氧代脂肪酸的方法，其包括使顺-11不饱和脂肪酸进行使用上述FA-HY的水合反应以诱导12-羟基脂肪酸，且使12-羟基脂肪酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法8)，[B] 生产14-氧代-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸的方法，其包括使DHA进行使用本发明的FA-HY的水合反应以诱导14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸，且使14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法B)，和[II] 生产10-氧代-十四烷酸的方法，其包括使肉豆蔻脑酸进行使用本发明的FA-HY的水合反应以诱导10-羟基-十四烷酸，且使10-羟基-十四烷酸进行脱氢反应或化学氧化(生产方法II)。
上述生产方法5-8中的“顺-12不饱和脂肪酸”、“顺-9不饱和脂肪酸”、“顺-14不饱和脂肪酸”、“顺-11不饱和脂肪酸”与上述生产方法1-4中的底物是相同的。
通过上述生产方法5生产的“13-氧代脂肪酸”的实例包括由顺-9,顺-12-十八碳二烯酸(亚油酸)诱导的13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、由顺-6,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(γ-亚麻酸)诱导的13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、由顺-9,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸(α-亚麻酸)诱导的13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、由顺-6,顺-9,顺-12,顺-15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸)诱导的13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、由10-羟基-顺-12-十八碳烯酸或10-氧代-顺-12-十八碳烯酸诱导的10,13-二氧代-十八烷酸、由10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸诱导的10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、由10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸诱导的10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、由10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸或10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸诱导的10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、由顺-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(松油酸)诱导的13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、由反-5,顺-9,顺-12-十八碳三烯酸(哥伦比亚酸)诱导的13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸等。
通过上述生产方法6生产的“10-氧代脂肪酸”的实例包括从顺-9-十六碳烯酸(棕榈油酸)诱导的10-氧代-十六烷酸等。
通过上述生产方法7生产的“15-氧代脂肪酸”的实例包括由顺-11,顺-14-二十碳二烯酸诱导的15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、由顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸诱导的15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)诱导的15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)诱导的15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸诱导的15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、由顺-5,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(金松酸)诱导的15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸(juniperonic acid)诱导的15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸等。
通过上述生产方法8生产的“12-氧代脂肪酸”的实例包括由顺-11-十八碳烯酸(顺-异油酸)诱导的12-氧代-十八烷酸、由顺-11,顺-14-二十碳二烯酸诱导的12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、由顺-11,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸诱导的12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14-二十碳三烯酸(二高-γ-亚麻酸)诱导的12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸(蜜酒酸)诱导的12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、由顺-8,顺-11,顺-14,顺-17-二十碳四烯酸诱导的12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、由顺-5,顺-8,顺-11,顺-14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)诱导的12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸等。
上述生产方法5-8、生产方法B或生成方法II中待使用的脱氢酶没有特别限制，只要其为能够将用作底物的13-羟基脂肪酸、10-羟基脂肪酸、15-羟基脂肪酸、12-羟基脂肪酸、14-羟基-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸、10-羟基-十四烷酸分别转化为13-氧代脂肪酸、10-氧代脂肪酸、15-氧代脂肪酸、12-氧代脂肪酸、14-氧代-顺-4,顺-7,顺-10,顺-16,顺-19-二十二碳五烯酸、10-氧代-十四烷酸的酶，并且，例如，乳杆菌来源的羟基化脂肪酸-脱氢酶(CLA-DH)是优选的。更优选的是植物乳杆菌来源的CLA-DH，并且特别优选的是植物乳杆菌FERM BP-10549菌株来源的CLA-DH。CLA-DH可以通过JP-A-2007-259712中描述的方法、WO 2013/168310中描述的方法获得。脱氢酶可以是纯化的酶或粗纯化的酶。或者，脱氢酶可以在菌体诸如大肠杆菌等中表达，并且可以使用菌体本身或可以使用其培养基。此外，所述酶可以是游离形式的，或通过各种载体固定化。
脱氢反应通过在合适的缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液等)中，将作为底物的13-羟基脂肪酸、10-羟基脂肪酸、15-羟基脂肪酸、12-羟基脂肪酸和脱氢酶以合适的浓度混合且孵育混合物来进行。底物浓度为例如，0.01-100 g/L，优选0.05-50 g/L，更优选0.1-5 g/L。待添加的脱氢酶的量为例如，0.001-10 mg/mL，优选0.005-1mg/mL，更优选0.05-0.2 mg/mL。
“辅因子”可用于脱氢反应，并且例如，可以使用NAD+、NADP+等。其添加浓度可以是任意的，只要水合反应有效地进行。其优选为0.001-20 mM，更优选0.01-10 mM。
脱氢反应期望地在脱氢酶的优选温度和优选pH的范围内进行。例如，反应温度为5-50℃，优选20-45℃。反应混合物的pH为例如，pH 4-10，优选pH 5-9。反应时间没有特别限制，并且其为例如，10分钟-72小时，优选30分钟-36小时。
在本发明的一个实施方案中，脱氢酶以重组细胞(例如，大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母、昆虫细胞、动物细胞等)的形式进入反应体系，所述重组细胞引入含有编码所述脱氢酶的核酸的表达载体。在该情况下，氧化反应也可以通过在适合于培养细胞且添加底物且在必要时添加辅因子和活化剂的液体培养基中培养细胞来进行。
此外，通过以使用铬酸的化学氧化替代脱氢反应，可以通过化学方式获得与通过酶反应所得的相似的氧代脂肪酸。
作为化学氧化，可以提及本身已知的方法，例如，铬酸氧化，优选琼斯氧化等。作为铬酸，可以使用化合物诸如无水铬酸CrO3、铬酸H2CrO4和重铬酸H2Cr2O7的盐或络合物。
具体而言，将硫酸(2.3 ml)和水(7.7 ml)添加至到无水铬酸(2.67 g)，并且将丙酮(90 ml)添加至混合物以得到铬酸溶液。在Erlenmeyer烧瓶中添加2 g羟基化脂肪酸和40ml丙酮，并且逐滴添加上述铬酸溶液，同时在冰上在搅拌器中搅拌。当溶液从蓝色变为茶绿色时，停止滴添铬酸溶液，并且用异丙醇中止反应。通过滤纸过滤沉淀的沉淀物，将其置于分液漏斗中，添加乙醚(150 ml)和Milli-Q水(300 ml)，将混合物充分振荡，并将乙醚层用Milli-Q水洗涤几次。在洗涤之后，向乙醚层中添加适量的硫酸钠(无水)，搅拌混合物并去除残余水。通过滤纸滤出添加的无水硫酸钠，通过旋转蒸发器浓缩获得的乙醚层，并提取反应产物(氧代脂肪酸)和未反应的底物。
对通过使用无水铬酸的氧化反应获得的提取物(含有底物和所得产物(氧代脂肪酸)的混合物)进行中等压力色谱，将从柱中出来的溶液回收于级分中。通过LC/MS和气相色谱分析回收的各级分，收集仅含有氧代脂肪酸的级分并通过旋转蒸发器浓缩。将一部分获得的最终所得产物甲基酯化，通过气相色谱评估氧代脂肪酸的纯度，并且可以获得具有不低于98％的纯度的氧代脂肪酸。
含有本发明的稀有脂肪酸衍生物的抗炎剂可应用于预防或改善炎性疾病。“炎性疾病”没有限制，只要其伴随体内炎症反应，并且“涉及巨噬细胞的炎性疾病”是优选的。“炎性疾病”的实例包括痛风、动脉硬化、胃溃疡、肾炎(肾小球性肾炎、IgA肾病、糖尿病性肾病等)、牙周病(齿龈炎症、冠周炎等)、肝炎(酒精性肝炎、非酒精性肝炎等)、肝硬化、哮喘、支气管炎、脑梗塞、动脉瘤、迟发型变态反应、子宫内膜异位症、急性呼吸窘迫综合征、由于肾移植导致的病症、急性心肌梗塞、糖尿病、系统性红斑狼疮、克罗恩病、特应性皮炎、肺炎、关节炎(慢性类风湿关节炎等)、内毒素休克、由于感染的败血症、慢性溃疡性结肠炎、慢性支气管炎、膀胱炎、慢性骨髓炎、糜烂性食管炎、胆管炎、慢性胆囊炎、胃炎、慢性宫颈炎症、下文的神经炎症疾病、由炎症引起的癌症等。这些中，“涉及巨噬细胞的炎性疾病”包括，例如，肝炎、哮喘、系统性红斑狼疮、克罗恩病、特应性皮炎、关节炎、糖尿病性神经病和痴呆。
此外，含有本发明的稀有脂肪酸衍生物的抗炎剂也可应用于预防或改善神经炎症疾病。“神经炎症疾病”是指由神经炎症引起的疾病，并且所述抗炎剂也可用于预防或改善糖尿病性神经病、痴呆(阿尔茨海默型等)、多发性硬化症等。或者，含有本发明的稀有脂肪酸衍生物的抗炎剂也可应用于预防或改善由炎症引起的癌症。“由炎症引起的癌症”是由慢性炎症导致的癌症，并且所述抗炎剂也可用于预防或改善，例如，大肠癌、肺癌、膀胱癌、口腔癌、舌癌、皮肤癌、食道癌、黑色素瘤、胆管癌、大肠癌、胆囊癌、胃癌、宫颈癌、肝癌等。
此外，本发明的稀有脂肪酸衍生物也可用作M1巨噬细胞的抑制剂。活化的巨噬细胞变为M1巨噬细胞，产生炎性介体诸如一氧化氮(NO)、前列腺素E2、TNF-α等，并且引起慢性炎症。如下述实施例中所示，本发明的稀有脂肪酸衍生物具有抑制M1巨噬细胞的NO产生量和诱导巨噬细胞和单核细胞(这是其祖细胞)分化为M2巨噬细胞的效果。向M2巨噬细胞的分化也可以通过对分化之前的单核细胞或巨噬细胞的直接作用以及通过使肠道处于Th2细胞因子占优势的环境中的间接作用来诱导。因此，可以通过抑制M1巨噬细胞的NO产生和通过促进巨噬细胞和单核细胞分化为M2巨噬细胞而抑制向M1巨噬细胞的分化，而预防或改善涉及巨噬细胞的炎性疾病。
此外，本发明的稀有脂肪酸衍生物也可用作基于氧化应激的细胞死亡的抑制剂。氧化应激是由活性氧引起的应激，并且活性氧的实例包括H2O2、超氧化物、羟基自由基、氧等。活性氧促进炎性细胞因子的产生，并且引起炎性疾病。因此，可以通过减少氧化应激预防或改善炎性疾病。
或者，本发明的稀有脂肪酸衍生物也可用作HO-1表达的促进剂。HO-1是作为体内保护细胞免于氧化应激的防御机制的一种重要的酶。HO-1的缺乏促进由于氧化应激导致的细胞损伤并促进炎症。因此，可以通过促进HO-1表达预防或改善炎性疾病。
此外，本发明的稀有脂肪酸衍生物也可用作Nrf2的核内表达的促进剂。当Nrf2的核内表达得到促进时，Nrf2控制氧化应激-适应性反应并抑制炎症。因此，可以通过促进Nrf2的核内表达预防或改善炎性疾病。
含有本发明的稀有脂肪酸衍生物的抗炎剂(或M1巨噬细胞抑制剂，基于氧化应激的细胞死亡的抑制剂，HO-1表达促进剂或Nrf2核内表达促进剂)可以用作，例如，药品、食品、饲料、化妆品等，或者通过向其添加所述抗炎剂而使用。
药品的剂型包括分散剂、颗粒剂、丸剂、软胶囊、硬胶囊、片剂、咀嚼片剂、快速崩解片剂、糖浆、液体、混悬剂、栓剂、软膏、霜剂、凝胶、粘附剂、吸入剂、注射剂等。其制剂根据常规方法制备。由于稀有脂肪酸衍生物难溶于水，所以将它们溶解于非亲水性有机溶剂，诸如植物来源的油、动物来源的油等，或通过均化器(高压均化器)与乳化剂、分散剂、表面活性剂等一起分散或乳化于水溶液中，且使用。
可用于配制的添加剂的实例包括动物和植物油，诸如大豆油、红花油、橄榄油、胚芽油、葵花油、牛脂肪、沙丁鱼油等，多元醇，诸如聚乙二醇、丙二醇、甘油、山梨醇等，表面活性剂，诸如脂肪酸的脱水山梨醇酯、脂肪酸的蔗糖酯、甘油脂肪酸酯、脂肪酸的聚甘油酯等，赋形剂，诸如纯净水、乳糖、淀粉、结晶纤维素、D-甘露糖醇、卵磷脂、阿拉伯胶、山梨糖醇溶液、碳水化合物溶液等，甜味剂，着色剂，pH调节剂，香料等。液体制剂当使用时可以溶解或悬浮于水或其他合适的介质。此外，片剂和颗粒剂可以通过众所周知的方法进行包衣。
对于注射剂形式的施用，静脉内、腹膜内、肌内、皮下、经皮、关节内、滑膜内、鞘内、骨膜内、舌下、经口施用等是优选的，且静脉内施用或腹膜内施用是特别优选的。静脉内施用可以是点滴施用和大剂量施用中任一者。
当本发明的抗炎剂用作食品或食品添加剂时，食品的形式没有特别限制，只要其允许口服摄入，诸如溶液、悬浮液、粉末、固体形成的物品等。具体实例包括补充剂(粉末、颗粒、软胶囊、硬胶囊、片剂、可咀嚼片剂、快速崩解片剂、糖浆、液体等)，饮料(碳酸饮料、乳酸饮料、运动饮料、果汁饮料、蔬菜饮料、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、营养饮料、酒精饮料等)，甜食(橡皮糖、果冻、口香糖、巧克力、饼干、糖果、焦糖、日本甜食、零食等)，方便食品(方便面、蒸煮食品、罐头、微波食品、速溶汤、味噌汤、冻干食品等)，油，油脂食品(蛋黄酱、调味品、黄油、奶油、人造奶油等)，小麦粉制品(面包、面食、面条，蛋糕混合料、面包屑等)，调味品(酱汁、番茄加工的调味品、风味调味品、烹调混合物、汤等)，加工肉制品(肉火腿、香肠等)。
在必要时，上述食品可以含有各种营养素、各种维生素(维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K等)、各种矿物质(镁、锌、铁、钠、钾、硒等)、膳食纤维、分散剂、稳定剂诸如乳化剂等、甜味剂、调味组分(柠檬酸、苹果酸等)、调味剂、蜂王浆、蜂胶、落叶松蕈(Agaricus)等。
当本发明的抗炎剂用作饲料或饲料添加剂时，所述饲料为例如，宠物食品、畜牧业或水产业饲料添加剂等。
当本发明的抗炎剂用作化妆品或化妆品添加剂时，所述化妆品为例如，乳膏、凝胶、乳液、精华液、化妆水、微乳精华(microemulsion essence)、面膜、粉底、口红、眼影、洗发剂、护发素、沐浴添加剂等，并且可与香料等混合。
可以将仅一种稀有脂肪酸衍生物与本发明的药品、食品、饲料、化妆品等共混，或者可以组合使用其两种或更多种。
本发明的药品的剂量或本发明的食品的摄入量可以根据患者或其摄入者的年龄和体重、症状、施用时间、剂型、施用方法、药物的组合等来适当确定。例如，当经口施用本发明的药品时，作为活性成分的稀有脂肪酸衍生物的总量为对于成人每天0.02-100 mg/kg体重，优选0.2-50 mg/kg体重，或者，通过肠胃外施用，0.002 mg-50 mg/kg体重，优选0.02-50mg/kg体重，其可以每天一次或每天分几(2-5)部分施用。当其作为食品摄入时，可以将其添加至食品，使得作为活性成分的稀有脂肪酸衍生物的总摄入量为，对于成人每天，1-6000mg，优选10-3000 mg。本发明的饲料的摄入量和本发明的化妆品的使用量可以根据上述食品的摄入量和上述药品的剂量来各自适当确定。
本发明在下面通过参考实施例进行更详细解释。实施例仅仅是本发明的例举，且不以任何方式限制本发明的范围。
[实施例]
本发明中使用的以下稀有脂肪酸衍生物(No. 4-No. 23)根据上述方法制备，且其它脂肪酸(No. 1-No. 3、No. 24、LA、ALA、GLA)作为一般试剂购买。作为IκBα磷酸化抑制剂的BAY11-7082购自Cayman Chemical，且其它试剂购自Wako Pure Chemical Industries,Ltd.或Nacalai Tesque等。
No. 1：反-10,顺-12-十八碳二烯酸
No. 2：顺-9,反-11-十八碳二烯酸
No. 3：反-9,反-11-十八碳二烯酸
No. 4：10-羟基-顺-12-十八碳烯酸
No. 5：10-羟基-十八烷酸
No. 6：10-氧代-顺-12-十八碳烯酸
No. 7：10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸
No. 8：10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸
No. 9：10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸
No. 10：12-羟基-十八烷酸
No. 11：10-氧代-反-11-十八碳烯酸
No. 12：10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸
No. 13：10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸
No. 14：13-羟基-顺-9-十八碳烯酸
No. 15：13-氧代-顺-9-十八碳烯酸
No. 16：13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸
No. 17：13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸
No. 18：10,13-二羟基-十八烷酸
No. 19：13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸
No. 20：10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸
No. 21：10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸
No. 22：13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸
No. 23：10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸
No. 24：反-9,反-11,反-13-十八碳三烯酸
LA：亚油酸
GLA：γ-亚麻酸
ALA：α-亚麻酸
tBHQ：叔丁基氢醌。
实施例1 (通过Griess法评估NO产生量)
将源自小鼠的巨噬细胞样细胞系RAW264.7以1×105个细胞/孔接种于48孔板中。培养5小时之后，将源自大肠杆菌的脂多糖(LPS)经24小时添加至100 ng/mL以 活化RAW264.7细胞。与LPS同时，以10 μM添加各种化合物(No. 1-No. 17、LA、ALA)，并且测量培养基中作为由巨噬细胞活化产生的一氧化氮(NO)的氧化物的亚硝酸(NO2 -)的浓度。通过Griess法并参考Shan Lin等人, Molecular Nutrition and Food Research 57 (2013) p1135-1144,“Auraptene suppresses inflammatory responses in activated RAW264 macrophagesby inhibiting p38 mitogen-activated protein kinase activation”, 材料和方法部分，TNF-α、MCP-1和NO浓度的测量，定量培养基中的NO2的量。实际上如下进行定量。回收用LPS和各种化合物处理24小时的RAW264.7培养基。在临反应前以1:1共混0.2% N-(1-萘基)乙二胺和2％磺胺/10% H3PO4以得到Griess试剂，以1:1混合RAW264.7培养基和Griess试剂，并在室温下反应10分钟。反应完成之后，测量550nm处的吸光度。NaNO2用作NO2 -标准产物，并计算培养基中的NO2 -浓度。用乙醇调整样品的浓度。乙醇用作阴性对照，且作为IκBα磷酸化抑制剂的BAY11-7082 (5 μM)用作阳性对照。结果显示于图1中。
实施例2 (对H2O2的抗应激活性的评估)
将源自人肝癌的细胞系HepG2培养于D-MEM (10% FBS, 100 U/mL青霉素, 100 μg/mL链霉素)中，以3.0x104个细胞/孔接种于96孔板中，并在37℃, 5% CO2下培养24小时。将各种化合物(tBHQ, No. 11-No. 13)溶解于无血清D-MEM (100 U/mL青霉素, 100 μg/mL链霉素, 0.1% BSA, 0.3%乙醇)中以制备具有调整浓度的测试培养基。从96孔板去除上清液，以100 μL/孔添加上述测试培养基，并将细胞在37℃, 5% CO2下培养24小时。其后，再次从96孔板去除上清液，以100 μL/孔添加含有5 mM H2O2的D-MEM (100 U/mL青霉素, 100 μg/mL链霉素)，并将细胞在37℃, 5% CO2下培养30分钟。从96孔板去除上清液，以100 μL/孔添加含有WST-1试剂的D-MEM (7 μg/mL 1-Methosy PMS, 33 μg/mL WST-1)，将细胞在37℃, 5%CO2下培养2小时，并测量450nm处的吸光度。结果显示于图2A、B中。
实施例3 (对抗氧化酶HO-1 mRNA表达的影响)
以1.5x105个细胞/孔将HepG2细胞接种于24孔板中，并在37℃, 5% CO2下培养24小时。将各种化合物(tBHQ, No. 11-No. 13)溶解于无血清D-MEM (100 U/mL青霉素, 100 μg/mL链霉素, 0.1% BSA, 0.3%乙醇)中以制备具有调整浓度的测试培养基。从24孔板去除上清液，以500 μL/孔添加上述测试培养基，并将细胞在37℃, 5% CO2下培养6小时。其后，再次从24孔板去除上清液，将细胞用无菌PBS洗涤两次，并使用300 μL/孔Sepasol回收细胞。从回收的细胞提取RNA，并合成cDNA。使用作为模板的cDNA和SYBR Green进行实时PCR方法，并评估抗氧化酶HO-1 mRNA的表达。GAPDH用作内部标准品，并在PCR条件下进行在95℃ 15分钟的初始变性、在95℃ 15秒和在60℃ 30秒的43个循环的扩增反应。结果显示于图3A、B中。
实施例4 (对参与抗氧化反应的转录因子Nrf2的核内表达的影响)
以3.0x104个细胞/孔将HepG2细胞接种于12孔板中，并在37℃, 5% CO2下培养24小时。将各种化合物(tBHQ, No. 11-No. 13)溶解于无血清D-MEM (100 U/mL青霉素, 100 μg/mL链霉素, 0.1% BSA, 0.3%乙醇)中以制备具有调整浓度的测试培养基。从12孔板去除上清液，以1 mL/孔添加上述测试培养基，并将细胞在37℃, 5% CO2下培养24小时。其后，再次从12孔板去除上清液，将细胞用无菌PBS洗涤，并溶解于100 μL溶解缓冲液(10 mM HEPES-KOH, 250 mM蔗糖, 10 mM氯化钾, 1.5 mM氯化镁, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 蛋白酶抑制剂混合物, pH 7.6)中。将溶液在1,000xg, 4℃下离心5分钟，去除上清液，将细胞沉淀溶解于30 μL核提取缓冲液(20 mM HEPES-KOH, 100 mM氯化钠, 1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mMEGTA, 蛋白酶抑制剂混合物, pH 6.8)中，并将混合物在4℃振荡1小时。其后，将溶液在10,000×g, 4℃下离心15分钟，回收上清液以得到核蛋白级分。使用Bio-Rad DC蛋白测定试剂盒测量作为核蛋白级分回收的上述上清液的蛋白浓度，将其稀释至相同的蛋白量并用作样品。向上述样品中添加样品缓冲液和2-巯基乙醇，并将混合物在95℃煮沸5分钟。将上述煮沸样品以各20 μL施加至5％浓缩凝胶和10％电泳凝胶，并将混合物以20mA电泳20分钟且以150 V电泳60分钟。在15 V下持续35分钟将蛋白从凝胶转移至PVDF膜上，将转移后的PVDF膜浸入封闭缓冲液中，并静置过夜。然后，使PVDF膜与400倍稀释的抗人Nrf2兔抗体反应2小时，洗涤，并与500倍稀释的HRP标记的抗兔IgG反应1小时。使用Chemi-Lumi One Super，检测PVDF膜上的条带。结果显示于图4中。
实施例5 (对参与抗氧化反应的转录因子Nrf2的转录活性的影响)
在D-MEM (高葡萄糖, 15% HS, 5% FBS, 300 mg/mL潮霉素B)中培养并入荧光素酶基因表达载体的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞，所述荧光素酶基因表达载体含有连接至含有大鼠Nrf2的结合区的大鼠NQO1启动子区的荧光素酶基因。以5.0x104个细胞/孔将PC12细胞接种于96孔板中，并在37℃, 5% CO2下培养24小时。将各种化合物(tBHQ, No.11-No. 13)溶解于D-MEM (高葡萄糖, 15% HS, 5% FBS, 300 mg/mL潮霉素B, 0.3%乙醇)中以制备具有调整浓度的测试培养基。从96孔板去除上清液，以100 μL/孔添加上述测试培养基，并将细胞在37℃, 5% CO2下培养9小时。其后，再次从96孔板去除上清液，以50 μL/孔添加发光试剂，并测量发光强度。结果显示于图5中。
实施例6 (对巨噬细胞分化为M2巨噬细胞的影响)
通过颈椎脱位处死C57BL/6N小鼠(雄性, 6-至12-周龄) (SHIMIZU实验材料)，并分离股骨，包括膝关节和髋关节。将股骨转移至含有RPMI 1640培养基(nacalai tesque)的100mm皿(Thermo Fisher Scientific)中，并在所述皿上从股骨收集骨髓液。悬浮所述皿中的细胞聚集物，并置于50 mL离心管中。将悬浮的细胞聚集物以1500 rpm离心10分钟，去除上清液，将细胞沉淀悬浮于2 mL RBC裂解缓冲液(含有8.3 g/L氯化铵的0.01 M Tris-HCl缓冲液)，并将悬浮液静置3分钟。其后，添加培养基(8 mL)以通过稀释淬灭反应，将混合物以1500 rpm离心10分钟，并去除上清液。通过使用40 μm-细胞过滤器(BD Bioscience)从细胞沉淀制备骨髓来源的细胞的单细胞悬浮液。
通过使用台盼蓝染色溶液(nacalai tesque)计数上述骨髓来源的细胞中的活细胞，将其以1.2x106个细胞/皿的密度接种于100 mm皿中，并根据图6中描述的时间表培养于CO2培养箱中。作为细胞培养基，使用添加有10% FBS (Biowest)、1%青霉素/链霉素(nacalai tesque)、20%(v/v) L929条件培养基和55 μM β-巯基乙醇(Gibco)的RPMI 1640培养基。在培养的第6天，将IL-4 (20 ng/mL)和各种化合物(LA、GLA、ALA、No.1-3、7、8、9、14-24) (30 μM)添加至培养基。
(1)在M2巨噬细胞上表达的细胞表面抗原
证实添加IL-4和各种化合物(LA、GLA、ALA、No.1-3、7、8、9、14-24)后48小时M2巨噬细胞上表达的细胞表面抗原。首先，将细胞回收于4 mL Falcon管(BD Bioscience)中，并以1500rpm离心5分钟，以得到细胞沉淀。用FACS缓冲液(0.1% BSA (无脂肪酸) (nacalai tesque)洗涤细胞，并通过轻敲使细胞沉淀均一化。此外，添加BD pharmingenTM纯化的大鼠抗小鼠CD16/CD32 (BD Bioscience)，并将混合物轻敲并在4℃静置10分钟(Fc封闭)。为了检测M2巨噬细胞上表达的细胞表面抗原(CD206, F4/80)，添加荧光染料标记的单克隆抗体(抗小鼠CD206 Alexa Fluor 647 (BioLegend)，抗小鼠F4/80抗原FITC (eBioscience))，并将混合物轻敲并在4℃静置30分钟。其后，用FACS缓冲液洗涤细胞，通过轻敲使细胞沉淀均一化，并添加活力染料7-AAD (eBioscience)。通过BD AccuriTM C6流式细胞仪(BD Bioscience)测量细胞表面抗原。对于分析，使用FlowJoTM (Tomy Digital Biology)。结果显示于图7-10中。
(2)M2巨噬细胞的mRNA表达
添加IL-4和各种化合物(ALA、No.7、8、16、22、23)之后24小时，证实细胞的mRNA (精氨酸酶1，IL-1β)表达。首先，将细胞接种于孔中，添加700 μL Sepasol RNAIsuper (nacalaitesque)，并将混合物振摇30分钟。将细胞分散，并将分散物转移至1.5mL管中。向1.5mL管中添加150 μL氯仿(nacalai tesque)，通过颠倒混合，在室温放置5分钟，并在4℃, 15,000rpm下离心65分钟。将水层(350 μL)转移至另一个1.5mL管中，进一步添加350 μL异丙醇(nacalai tesque)。将所述管通过颠倒混合，在室温放置15分钟，并在4℃, 15,000 rpm下离心65分钟，并去除上清液。向沉淀中添加500 μL 75%乙醇(nacalai tesque)，并将混合物在4℃, 15,000 rpm下离心15分钟，并去除上层。该操作总共进行两次。将获得的沉淀(总RNA)风干约40分钟，溶解于20 μL超纯水(Invitrogen)中，并通过Nano Drop (Scrum)测量mRNA浓度。在冰上用超纯水将mRNA浓度调节至1000 ng/μL以得到RNA溶液。将寡聚dT引物(Gibco) (1 μL)和RNA溶液(10 μL) (1000 ng/μL)添加至0.2 mL 8-管中，在热循环仪中在70℃孵育10分钟以破坏RNA的高级结构。此外，将表1所示的试剂添加至0.2 mL 8-管，并将混合物在热循环仪(TAKARA)中在42℃孵育50分钟，并在70℃孵育15分钟。在冰上冷却之后，通过轻轻离心将反应混合物收集在管的底部，并且获得cDNA。
将获得的cDNA用超纯水稀释5倍。将待用作标准品的质粒溶液(5 μL)置于0.6 mL管中，并用超纯水(45 μL)稀释10倍。重复该操作，并产生稀释102-至109-倍的质粒溶液。每个样品在1.5 mL管中制备中表2中所示的试剂，并以各自12 μL分配至96孔板。以各自3 μL将作为阴性对照的超纯水、作为标准品的上述产生的各浓度的稀释溶液(103-108稀释度)和用于测量的样品的cDNA添加至板。将板设置于Light-CyclerTM (Roche)中，并进行PCR。以仅添加IL-4的细胞的精氨酸酶1 mRNA表达水平和IL-1β表达水平各自作为1，当同时添加IL-4和各种化合物时的精氨酸酶1 mRNA表达水平和IL-1β表达水平显示于图11、12中。
实施例7(单核细胞分化为M2巨噬细胞的影响)
认为在体内，炎性巨噬细胞以单核细胞状态释放于血液中，并且在全身循环之后，渗入外周组织，并根据外周组织的环境分化为组织特异性巨噬细胞。在本实施例中，研究在单核细胞分化为巨噬细胞的初始阶段中添加脂肪酸衍生物的各种化合物是否促进诱导单核细胞分化为M2巨噬细胞。
使用实施例6中制备的骨髓来源的细胞，并考虑培养的初始日至培养的第3日作为分化的初始阶段，根据图13中所述的时间表进行培养。作为细胞培养基，从培养的初始日至培养的第3日使用添加有10% FBS、1%青霉素/链霉素、5%(v/v) L929条件培养基和55 μM β-巯基乙醇(Gibco)、IL-4 (20 ng/mL)和各种化合物(ALA、No.7、8、16、22、23) (30 μM)的RPMI 1640培养基。在培养的第3天之后，使用添加有10% FBS、1%青霉素/链霉素、20%(v/v)L929条件培养基和55 μM β-巯基乙醇(Gibco)的RPMI 1640培养基。在培养的第7天回收细胞，并以与实施例6中相同的方式证实mRNA表达和细胞表面抗原。结果显示于图14-17中。
实施例8 (影响肠粘膜免疫系统，以使单核细胞分化为M2巨噬细胞)
已知外周组织中的各种环境因子诸如细胞因子等对于单核细胞分化为M2巨噬细胞是重要的。因此，研究肠道中是否可以由于免疫细胞和脂肪酸衍生物的各种化合物之间的相互作用而形成Th2细胞因子占优势的环境。
通过颈椎脱位处死BALB/c小鼠(♂, 6-至12-周龄)(淡水实验材料)，并分离肠系膜淋巴结和Peyer氏集结。将各组织切细，并用RPMI 1640 (5% FBS，含有1.0 mg/mL胶原酶)培养基在37℃处理30分钟。将组织用1 mL注射器的柱塞部分进一步捣碎以得到细胞悬浮液。将细胞悬浮液以1500 rpm离心10分钟，去除上清液，并使用40 μm-细胞过滤器，制备肠系膜淋巴结来源的细胞的单细胞悬浮液和Peyer氏集结来源的细胞的单细胞悬浮液。
此外，通过颈椎脱位处死BALB/c小鼠，并分离脾脏。将脾脏在100 mm皿上捣碎，以得到细胞悬浮液。悬浮所述皿中的细胞聚集物，并置于50 mL离心管中。将悬浮的细胞聚集物以1500 rpm离心10分钟，去除上清液，将细胞沉淀悬浮于2 mL RBC裂解缓冲液中，并将悬浮液静置3分钟。其后，添加培养基(8 mL)以通过稀释淬灭反应，将混合物以1500 rpm离心10分钟，并去除上清液。通过使用40 μm-细胞过滤器从细胞沉淀制备脾脏来源的细胞的单细胞悬浮液。
通过使用台盼蓝染色溶液计数上述肠系膜淋巴结来源的细胞、Peyer氏集结来源的细胞和脾脏来源的细胞各自中的活细胞，将其以1.0x106个细胞/孔接种于96孔板中，添加各种化合物(ALA、No.7、8、16、22、23)，并将细胞在淋巴细胞活化剂PMA和离子霉素存在的情况下培养18-24小时。培养之后，回收各上清液。作为用于培养的培养基，使用添加有10%FBS、1%青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基。
通过ELISA测量各回收的上清液中含有的IL-4和MCP-1的浓度。基本上，采用ELISAReady-SET-Go!(R) (eBioscience)的推荐方案。将捕获抗体用包被缓冲液稀释，以50 μL/孔添加至96孔板，并将板密封并在4℃放置过夜。将孔用250 μl/孔的洗涤缓冲液洗涤3次，将ELISA/ELISPOT稀释液以100 μL/孔添加至孔，并将混合物在室温放置1小时。将50 μL/孔的标准品和各上清液添加至孔，将孔在室温放置2-3小时，并用洗涤缓冲液以250 μL/孔洗涤3次。将检测抗体用ELISA/ELISPOT稀释液稀释，以50 μL/孔添加至孔，将孔在室温放置1小时，并用250 μL/孔的洗涤缓冲液洗涤3次。将抗生物素蛋白-HRP用ELISA/ELISPOT稀释液稀释，以50 μL/孔添加至孔，并将孔在室温放置15分钟，并用250 μL/孔的洗涤缓冲液洗涤6次。将TMB溶液以50 μL/孔添加至孔，并将孔在室温放置15分钟。将1 M H3PO4溶液以25 μL/孔添加至孔，以停止酶反应。通过酶标仪测量波长450nm处的吸光度。结果显示于图18、19中。
尽管本发明已经着重于优选的实施方案进行描述，但对于本领域技术人员显而易见的是，可以改变优选的实施方案。
本文引用的任何出版物中公开的内容，包括专利和专利申请，在此以其整体通过引用并入，达到其已在本文中公开的程度。
[产业实用性]
本发明已经阐明，稀有脂肪酸衍生物具有通常未知的抗炎作用作为其生理功能。含有稀有脂肪酸衍生物的抗炎剂应用于各种领域诸如药品、食品、饲料等中，且本发明在工业上极为有用。
本申请基于在日本提交的专利申请号2014-011866 (申请日：2014年1月24日)和2014-162982 (申请日：2014年8月8日)，其内容完全并入本文。

Claims (20)

1.包含以下脂肪酸的抗炎剂：
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(4) 具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸。
2.根据权利要求1的抗炎剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，
(3) 饱和脂肪酸或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸。
3.根据权利要求2的抗炎剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸。
4.根据权利要求2的抗炎剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10,12-二羟基-十八烷酸、10-羟基-十八烷酸、10-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-反-11-十八碳烯酸、10-羟基-反-11,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-十八烷酸、10-氧代-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基且在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-13-羟基-十八烷酸、10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二氧代-十八烷酸、10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基且在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸、12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸、12-氧代-十八烷酸、12-氧代-顺-9-十八碳烯酸、12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸或12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸或15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸，
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸是10-羟基-十六烷酸或10-氧代-十六烷酸。
5.根据权利要求3的抗炎剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基且在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸。
6.根据权利要求1-5中任一项的抗炎剂，其用于预防或改善涉及巨噬细胞的炎性疾病。
7.根据权利要求1-5中任一项的抗炎剂，其为食品或食品添加剂。
8.根据权利要求1-5中任一项的抗炎剂，其为药品。
9.根据权利要求1-5中任一项的抗炎剂，其为饲料或饲料添加剂。
10.包含以下脂肪酸的M1巨噬细胞抑制剂：
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的脂肪酸，
(4) 具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的脂肪酸，或
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的脂肪酸。
11.根据权利要求10的抑制剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，
(3) 饱和脂肪酸或在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基，或，
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸。
12.根据权利要求11的抑制剂，其包含以下脂肪酸：
(1) 饱和脂肪酸或具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基，
(2) 饱和脂肪酸或在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸，其具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸。
13.根据权利要求11的抑制剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且具有11-位处的反式双键或6-位、12-位、15-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10,12-二羟基-十八烷酸、10-羟基-十八烷酸、10-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-反-11-十八碳烯酸、10-羟基-反-11,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、10-氧代-十八烷酸、10-氧代-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11,顺-15-十八碳三烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基且在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-13-羟基-十八烷酸、10-氧代-13-羟基-顺-6-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-15-十八碳烯酸、10-氧代-13-羟基-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-反-5,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9,顺-15-十八碳三烯酸、10,13-二氧代-十八烷酸、10,13-二氧代-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-15-十八碳烯酸、10,13-二氧代-顺-6,顺-15-十八碳二烯酸、13-氧代-顺-5,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-反-5,顺-9-十八碳二烯酸，
(3) 具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18或20个碳原子和12-位处的羟基或羰基且在5-位、8-位、9-位、14-位、17-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸、12-羟基-顺-14-二十碳烯酸、12-羟基-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-羟基-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸、12-羟基-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸、12-氧代-十八烷酸、12-氧代-顺-9-十八碳烯酸、12-氧代-顺-14-二十碳烯酸、12-氧代-顺-14,顺-17-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-5,顺-8-二十碳二烯酸、12-氧代-顺-8,顺-14,顺-17-二十碳三烯酸或12-氧代-顺-5,顺-8,顺-14-二十碳三烯酸，
(4) 在5-位、8-位、11-位、17-位具有至少一个顺式双键且具有20个碳原子和15-位处的羟基或羰基的不饱和脂肪酸是15-羟基-顺-11-二十碳烯酸、15-羟基-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸、15-羟基-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-11-二十碳烯酸、15-氧代-顺-11,顺-17-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11-二十碳二烯酸、15-氧代-顺-5,顺-8,顺-11-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-8,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸、15-氧代-顺-5,顺-11-二十碳二烯酸或15-氧代-顺-5,顺-11,顺-17-二十碳三烯酸，
(5) 具有16个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸是10-羟基-十六烷酸或10-氧代-十六烷酸。
14.根据权利要求12的抑制剂，其中
(1) 具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和10-位处的羟基或羰基且具有11-位处的反式双键或6-位、12-位处的至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷酸、10-氧代-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-羟基-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-12,顺-15-十八碳二烯酸、10-氧代-顺-6,顺-12-十八碳二烯酸、10-氧代-反-11-十八碳烯酸、10-氧代-反-11,顺-15-十八碳二烯酸或10-氧代-顺-6,反-11-十八碳二烯酸，
(2) 具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基的饱和脂肪酸，或具有18个碳原子和13-位处的羟基或羰基且在6-位、9-位、15-位具有至少一个顺式双键的不饱和脂肪酸是13-羟基-顺-9-十八碳烯酸、13-羟基-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸、13-羟基-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸、10,13-二羟基-十八烷酸、10,13-二羟基-顺-6-十八碳烯酸、10,13-二羟基-顺-15-十八碳烯酸、13-氧代-顺-9-十八碳烯酸、13-氧代-顺-6,顺-9-十八碳二烯酸或13-氧代-顺-9,顺-15-十八碳二烯酸，或
(3) 具有18个碳原子和12-位处的羟基的饱和脂肪酸是12-羟基-十八烷酸。
15.用于预防或治疗炎性疾病的方法，其包括将有效量的权利要求1-5中任一项的脂肪酸施用于患者。
16.根据权利要求15的方法，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病。
17.根据权利要求1-5中任一项的脂肪酸，其用于预防或治疗炎性疾病。
18.根据权利要求17的脂肪酸，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病。
19.根据权利要求1-5中任一项的脂肪酸在生产炎性疾病的预防或治疗剂中的用途。
20.根据权利要求19的用途，其中所述炎性疾病是涉及巨噬细胞的炎性疾病。
CN201580005505.XA 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂 Pending CN106163511A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211463156.4A CN116440112A (zh) 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014-011866 2014-01-24
JP2014011866 2014-01-24
JP2014162982 2014-08-08
PCT/JP2015/051844 WO2015111701A1 (ja) 2014-01-24 2015-01-23 希少脂肪酸を含む抗炎症剤
JP2014-162982 2018-08-28

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211463156.4A Division CN116440112A (zh) 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106163511A true CN106163511A (zh) 2016-11-23

Family

ID=53681498

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580005505.XA Pending CN106163511A (zh) 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂
CN202211463156.4A Pending CN116440112A (zh) 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211463156.4A Pending CN116440112A (zh) 2014-01-24 2015-01-23 含有稀有脂肪酸的抗炎剂

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20170000752A1 (zh)
EP (1) EP3097910B1 (zh)
JP (2) JP6609850B2 (zh)
CN (2) CN106163511A (zh)
DK (1) DK3097910T3 (zh)
ES (1) ES2810323T3 (zh)
WO (1) WO2015111701A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108640831A (zh) * 2018-04-13 2018-10-12 江南大学 一种乳酸菌源10-羟基十八碳烯酸的分离、制备及应用
CN112168812A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 瑞微（深圳）生物科技有限公司 棕榈油酸用于制备预防或治疗炎症性疾病的组合物的用途

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102487937B1 (ko) * 2014-10-17 2023-01-13 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 10-하이드록시스테아르산을 포함하는 화장품 조성물의 용도
WO2016184591A1 (en) * 2015-05-20 2016-11-24 Oslo Universitetssykehus Hf Composition for renal protection in renal transplant recipients
WO2018168407A1 (ja) * 2017-03-17 2018-09-20 日東薬品工業株式会社 フタロシンまたはフタロシン誘導体を経由するメナキノン合成経路を備える細菌の増殖抑制用組成物
US11130974B2 (en) 2017-08-31 2021-09-28 Kyoto University Hydroxylated fatty acid homopolymer and production method thereof
KR102577431B1 (ko) * 2022-05-18 2023-09-11 제주대학교 산학협력단 (9z,11e)-13-옥소옥타데카-9,11-디엔산을 포함하는 항염증용 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999016435A1 (en) * 1997-09-29 1999-04-08 Menarini Ricerche S.P.A. Pharmaceutical compositions containing ricinoleic acid and their use in anti-inflammatory and analgesic therapy
CN101528218A (zh) * 2006-07-19 2009-09-09 雷索维克斯药品公司 治疗粘膜炎的组合物和方法
CN102458391A (zh) * 2009-04-29 2012-05-16 尊贵科学有限公司 多不饱和脂肪酸类用于治疗皮肤炎症的用途

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4908384A (en) * 1986-08-29 1990-03-13 Mcneilab, Inc. Fatty acid leukotriene synthesis inhibitors
US5648380A (en) * 1991-03-01 1997-07-15 Warner-Lambert Company Anti-inflammatory wound healing compositions and methods for preparing and using same
WO1993010776A1 (en) * 1991-11-26 1993-06-10 Warner-Lambert Company Wound healing compositions containing a pyruvate, an antioxidant and a mixture of fatty acids
US5260336A (en) * 1992-04-30 1993-11-09 New England Deaconess Hospital Corporation Monounsaturated fat as dietary supplement to minimize the effects of catabolic illness
JP3103274B2 (ja) * 1994-06-01 2000-10-30 花王株式会社 皮脂分泌抑制剤
JP2003073329A (ja) * 2001-09-04 2003-03-12 Kagome Co Ltd アルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤
WO2004002234A1 (en) * 2002-06-27 2004-01-08 Salov, S.P.A. Dietary extra-virgin olive oil with omega-3 fatty acids and relevant production technique
US7612111B2 (en) * 2003-03-20 2009-11-03 Imagenetix, Inc. Esterified fatty acid composition
JP2005008594A (ja) 2003-06-20 2005-01-13 Tamanoi Vineger Co Ltd 抗炎症剤及び一酸化窒素産生抑制剤
US7722906B2 (en) * 2004-03-26 2010-05-25 Biopharm Research & Development Corporation Limited Polyunsaturated fatty acid fractions of Nigella sativa L. seeds
JP2009051732A (ja) * 2005-12-13 2009-03-12 Meiji Seika Kaisha Ltd Ｐｐａｒリガンド活性を有する組成物
EP1983977A4 (en) * 2006-01-31 2011-11-30 Martek Biosciences Corp OXYLIPINES FROM STEARIDONIC ACID AND GAMMA-LINOLIC ACID AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
JP2007259712A (ja) 2006-03-27 2007-10-11 Asahi Kasei Pharma Kk 共役脂肪酸の製造方法
WO2008025068A1 (en) * 2006-08-29 2008-03-06 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Synthesis of fatty acids
KR100793081B1 (ko) * 2006-11-20 2008-01-10 제주대학교 산학협력단 꼬시래기 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물
EP2120920A4 (en) * 2007-02-20 2011-06-15 Martek Biosciences Corp OXYLIPINES OF LONG-CHAIN MULTIPLE-UNSATURATED FATTY ACIDS AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE
CN101611894A (zh) * 2008-06-26 2009-12-30 威海清华紫光科技开发有限公司 深海鱼油的提纯方法及深海鱼油降脂保健品
WO2010039529A2 (en) * 2008-09-23 2010-04-08 Resolvyx Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treament of inflammatory disease
JP5728726B2 (ja) 2010-03-11 2015-06-03 国立大学法人京都大学 トマト抽出物を含有する生活習慣病改善剤
WO2012023254A1 (ja) 2010-08-19 2012-02-23 国立大学法人 東京大学 オメガ３系脂肪酸由来の新規抗炎症性代謝物
EP2726086A4 (en) * 2011-06-30 2015-04-29 Nitromega Corp COMPOSITIONS CONTAINING FATTY NITROACIDS
US9719115B2 (en) 2012-05-10 2017-08-01 Kyoto University Method for producing oxo fatty acid and rare fatty acid
JP6340523B2 (ja) * 2012-10-29 2018-06-13 国立大学法人京都大学 希少脂肪酸を含む代謝改善剤
KR101281470B1 (ko) * 2012-12-31 2013-07-03 전상문 피마자를 헥산으로 추출한 피마자유, 운데실렌산, 프로필알코올, 프로필렌글리콜 및 물을 함유하는 무좀 예방 또는 치료용 피부 외용제 조성물
ES2738496T3 (es) 2013-02-21 2020-01-23 Univ Kyoto Agente protector del tracto intestinal que comprende un ácido graso hidroxilado

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999016435A1 (en) * 1997-09-29 1999-04-08 Menarini Ricerche S.P.A. Pharmaceutical compositions containing ricinoleic acid and their use in anti-inflammatory and analgesic therapy
CN101528218A (zh) * 2006-07-19 2009-09-09 雷索维克斯药品公司 治疗粘膜炎的组合物和方法
CN102458391A (zh) * 2009-04-29 2012-05-16 尊贵科学有限公司 多不饱和脂肪酸类用于治疗皮肤炎症的用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MICHAEL J. HAAS ET AL: "Simplifying biodiesel production: The direct or in situ transesterification of algal biomass", 《EUR. J. LIPID SCI. TECHNOL. 》 *
SHIGENOBU KISHINO ET AL: "Polyunsaturated fatty acid saturation by gut lactic acid bacteria affecting host lipid composition", 《PNAS EARLY EDITION》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108640831A (zh) * 2018-04-13 2018-10-12 江南大学 一种乳酸菌源10-羟基十八碳烯酸的分离、制备及应用
CN112168812A (zh) * 2019-07-02 2021-01-05 瑞微（深圳）生物科技有限公司 棕榈油酸用于制备预防或治疗炎症性疾病的组合物的用途
CN112168812B (zh) * 2019-07-02 2022-07-08 瑞微（深圳）生物科技有限公司 棕榈油酸用于制备预防或治疗炎症性疾病的组合物的用途

Also Published As

Publication number Publication date
US20170000752A1 (en) 2017-01-05
DK3097910T3 (da) 2020-07-27
CN116440112A (zh) 2023-07-18
JP6609850B2 (ja) 2019-11-27
JP6940854B2 (ja) 2021-09-29
EP3097910A4 (en) 2017-11-22
EP3097910A1 (en) 2016-11-30
JP2020097565A (ja) 2020-06-25
WO2015111701A1 (ja) 2015-07-30
JPWO2015111701A1 (ja) 2017-03-23
ES2810323T3 (es) 2021-03-08
EP3097910B1 (en) 2020-05-13
US20210069141A1 (en) 2021-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106163511A (zh) 含有稀有脂肪酸的抗炎剂
US20210163878A1 (en) Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria
Guedes et al. Fatty acid composition of several wild microalgae and cyanobacteria, with a focus on eicosapentaenoic, docosahexaenoic and α-linolenic acids for eventual dietary uses
US8945886B2 (en) Methods for producing polyunsaturated fatty acid and lipid containing polyunsaturated fatty acid
US9707200B2 (en) Metabolism-improving agent comprising rare fatty acid
JP6715252B2 (ja) スラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属の微細藻類のバイオマスをＤＨＡで、かつアミノ酸ＡＲＧ及びＧＬＵで富化するプロセス
US20210236448A1 (en) Metabolism-improving agent comprising rare fatty acid
US20170022526A1 (en) Method for producing rare fatty acid using novel enzyme, and novel rare fatty acid
EP2935600A2 (en) Process for producing conjugated linolenic acid from linolenic acid employing bifidobacterium breve, bifidobacterium bifidum, or lactobacillus oris strains
US20160281054A1 (en) High density production of biomass and oil using crude glycerol
CUIa et al. TARIQ AZIZ ab, ABID SARWAR c, ZUBAIDA DAUDZAI d, JASRA NASEEB c, JALAL UD DIN c, UROOJ AFTAB b, AHSAN SAIDAL b, MUSTAJAB GHANI b, AYAZ ALI KHAN e, SUMAIRA NAZ f, MUHAMMAD SHAHZAD b
Bhosale et al. Freshwater algae as potential source of polyunsaturated fatty acids
IE20080790U1 (en) Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria
IES20080790A2 (en) Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210917

Address after: Kyoto City, Kyoto, Japan

Applicant after: KYOTO University

Applicant after: Nestor Co.,Ltd.

Address before: Kyoto City, Kyoto, Japan

Applicant before: KYOTO University

Applicant before: NITTO PHARMACEUTICAL INDUSTRIES, Ltd.

RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20161123