ES2672221T3

ES2672221T3 - Anticuerpos anti IL-17

Info

Publication number: ES2672221T3
Application number: ES11192240.7T
Authority: ES
Inventors: Barrett Allan; Chi-Kin Chow; Lihua Huang; Ling Liu; Jirong Lu; Kingman Ng; Jonathan Wendell Tetreault; Andrew Gordon Werner
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2005-12-13
Filing date: 2006-12-05
Publication date: 2018-06-13
Anticipated expiration: 2026-12-05
Also published as: AU2006325860B2; NO340827B1; EP3366702B1; HRP20180941T1; EA014298B1; EP1963368A1; EP3808769A1; US20110027290A1; CA2631938A1; CY1113097T1; ES2389780T3; EP2481753B1; CY2016030I1; NO2017044I2; CN101326195B; SI1963368T1; BRPI0619792B1; EP1963368B3; KR20080068122A; LTPA2016026I1

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 humanizado, en la que dicho anticuerpo comprende un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 241 y un polipéptido de HCVR con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 118, y en la que el anticuerpo comprende adicionalmente una región constante de la cadena pesada de IgG4 humana.

Description

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DESCRIPCION

Anticuerpos anti IL-17 Campo de la invención

La presente invención se encuentra dentro del campo de la medicina, de forma particular en el campo de los anticuerpos monoclonales frente la IL-17 humana. La invención se refiere a la neutralización de anticuerpos monoclonales anti IL-17 que se unen con alta afinidad a un epítopo antigénico no lineal o conformacional de IL-17 que comprende los aminoácidos DGNVDYH. Los anticuerpos de la invención pueden ser anticuerpos quiméricos, humanizados o completamente humanos, inmunoconjugados de los anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, y son útiles como un medicamento para el tratamiento de trastornos autoinmunitarios, inflamatorios, proliferativos celulares y del desarrollo.

Antecedentes de la invención

La familia IL-17 de citocinas incluye actualmente a IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E e IL-17F. Todos los miembros de la familia IL-17 tienen cuatro restos de cisteína altamente conservados que están implicados en la formación de enlaces disulfuro intracatenarios y tienen dos o más restos de cisteína que pueden estar implicados en enlaces disulfuro intercatenarios. Los miembros de la familia IL-17 no tienen similitud de secuencia con otras citocinas conocidas. Sin embargo, se encontró un homólogo vírico de IL-17A en la fase de lectura abierta 13 del herpesvirus saimiri (Yao, Z. y col., Immunity, 3:811, 1995) y tiene el 72 % de identidad de restos de aminoácido con IL-17A humana. Se han informado múltiples funciones para los miembros de la familia IL-17, que principalmente causan la regulación de la respuesta inmunitaria.

La interleucina 17 (IL-17, también denominada IL-17A) es una glucoproteína homodimérica de 20-30 kD producida predominantemente por linfocitos T CD4+ activados y actúa como una citocina proinflamatoria. Cuando se hace referencia a un miembro de la familia de IL-17 simplemente como "IL-17", se entiende que el miembro de la familia al que se hace referencia es IL-17A. IL-17 es secretada por linfocitos T activados en los sitios de inflamación, no en la circulación sistémica. La IL-17 se une a un receptor transmembrana de tipo I denominado IL-17R, que es una proteína grande expresada de forma ubicua que no muestra una similitud de secuencia significativa con otros receptores de citocinas conocidos. La IL-17 tiene múltiples propiedades biológicas, que incluyen la regulación por incremento de moléculas de adhesión y la inducción de la producción de múltiples citocinas inflamatorias y quimiocinas de diversos tipos celulares, incluidos sinoviocitos, condrocitos, fibroblastos, células endoteliales, células epiteliales, queratinocitos y macrófagos. Además, IL-17 induce la incorporación de neutrófilos a un sitio de inflamación a través de la inducción de la liberación de quimiocinas, estimula la producción de prostaglandinas y metaloproteinasas, e inhibe la síntesis de proteoglucanos. Además, IL-17 desempeña un papel importante en la maduración de las células progenitoras hematopoyéticas. Se ha demostrado que la IL-17 tiene un papel de señalización en distintos órganos y tejidos, incluyendo pulmón, cartílago articular, del hueso, del cerebro, células hematopoyéticas, riñón, piel e intestino. Para una revisión de la bioactividad de IL-17 véase, por ejemplo, Kolls y Linden, Immunity 21:467-476, 2004, o Fossiez, y col. J. Immunol. 16:541, 1998.

Los niveles aumentados de IL-17 (es decir, IL-17A) se han asociado con varias afecciones, enfermedades o trastornos, incluyendo inflamación de las vías respiratorias, artritis reumatoide ("AR"), osteoartritis, erosión ósea, abscesos y adherencias intraperitoneales, enfermedad inflamatoria intestinal (EII), rechazo de aloinjertos, psoriasis, determinados tipos de cánceres, angiogénesis, ateroesclerosis y esclerosis múltiple ("EM") (para una revisión, véase Witkowski, y col., Cell. Mol. Life Sci. 61:567-579, 2004). Tanto iL-17 como IL-17R están regulados por incremento en el tejido sinovial de pacientes con AR. El bloqueo de una bioactividad de IL-17 uniendo un anticuerpo específico para IL-17 o un receptor soluble de IL-17, reduce la inflamación y la erosión ósea en diversos modelos animales de artritis. (Véase, por ejemplo, Lubberts y col., Arthritis & Rheumatism, 50:650-659, 2004). Además, IL-17 tiene efectos independientes de lL-1 p sobre la descomposición de la matriz de colágeno, y la inflamación y daño articular, mientras que IL-17 tiene sinergia con TNF-a para amplificar la inflamación.

Por lo tanto, dada su distribución localizada en el sitio de la inflamación, IL-17 parece ser una nueva diana para el tratamiento de la AR y otras enfermedades inflamatorias o autoinmunitarias, con un perfil de seguridad potencialmente mayor que los fármacos que se dirigen a la circulación sistémica de citocinas proinflamatorias, tales como TNF-a. Los bioproductos actuales aprobados por la FDA (ENBREL®, REMICADE® y hUmIRA®) que se unen y neutralizan a TNF-a han demostrado eficacia en la reducción de los signos y síntomas de la Ar y en la ralentización de la progresión de la enfermedad en un subconjunto de pacientes con AR. Sin embargo, no todos los pacientes con AR responden por igual a la inhibición de la bioactividad de TNF-a con estos bioproductos. De forma adicional, el ARNm de IL-17 está aumentado en lesiones de esclerosis múltiple y en células mononucleares en sangre y el líquido cefalorraquídeo de pacientes con EM, en particular durante el agravamiento clínico. Por consiguiente, existe una necesidad de composiciones que antagonicen o neutralicen la actividad de IL-17 para tratar trastornos, enfermedades o afecciones en las que la presencia de bioactividad de IL-17 provoca o contribuye a un efecto patológico no deseado, o en las que una disminución de la bioactividad de IL-17 contribuye a un efecto terapéutico conveniente, incluyendo los trastornos inflamatorios, trastornos proliferativos celulares y del desarrollo, y trastornos autoinmunitarios tales como AR y EM, e EII.

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Giavedoni, L D, Journal of Immunological Methods, Vol. 301, N.° I-2, 89-101, junio de 2005, describe la detección simultánea de múltiples citocinas y quimiocinas de primates no humanos utilizando la tecnología luminex. En la Tabla 1 se mencionan tres anticuerpos anti IL-17.

Moseley, T a, y col., Cytokine and Growth Factor Reviews, Vol. 14, N.° 2, 155 174, 2003 de abril, describe la familia de la interleucina-17 y los receptores de IL-17.

El documento WO 2004/106377 describe un procedimiento de obtención de un anticuerpo con una función deseada. Los anticuerpos C9 y D12 anti IL-17 se describen en la Tabla 4.

Hofstetter y col., Gellular Immunology, Vol. 237, N.° 2 123-130, octubre de 2005, describe la eficacia terapéutica de la neutralización de IL-17 en la encefalomielitis autoinmunitaria experimental murina. Se descubrió que la neutralización de IL-17 con un anticuerpo monoclonal mejora la evolución de la enfermedad. Existe la necesidad de un anticuerpo neutralizante anti IL-17 que se una específicamente a IL-17 de origen humano, así como a IL-17 de un mamífero no humano, permitiendo de este modo que el anticuerpo se use en estudios preclínicos y clínicos in vivo. Además, existe la necesidad de un anticuerpo específico para IL-17 que se una a IL-17 con una alta afinidad y/o tenga una constante de disociación lenta que permite minimizar la dosis terapéutica eficaz, dando como resultado una dosificación menos frecuente con tal anticuerpo que con un anticuerpo que se une a IL-17 con una afinidad menor (es decir, una mayor Kd) y/o tiene una constante de disociación más rápida. También es conveniente un anticuerpo específico para IL-17 con alta afinidad en cuanto a que puede permitir que el anticuerpo se administre a un paciente por vía subcutánea en lugar de por vía intravenosa. Además hay una necesidad de un anticuerpo específico para IL-17 con un bajo valor de CI50 en un ensayo de bioactividad de IL-17, para generar un anticuerpo anti IL-17 terapéutico con una dosis terapéutica eficaz mínima. Además es conveniente proporcionar un anticuerpo específico para IL-17, donde se reduzca al mínimo una respuesta inmunitaria frente al anticuerpo suscitada por un paciente que recibe el anticuerpo. La presente invención satisface estas necesidades y proporciona ventajas relacionadas.

Sumario de la invención

De acuerdo con la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 humanizado, en el que dicho anticuerpo comprende un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 241 y un polipéptido de HCVR con una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 118, y en la que el anticuerpo comprende adicionalmente una región constante de la cadena pesada de IgG4 humana.

Preferentemente, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención comprende adicionalmente un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Más preferentemente, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención comprende un anticuerpo que hace contacto con el péptido DGNVDYH (SEQ ID NO: 276) dentro del contexto de IL-17 humana de longitud completa.

La composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención es preferentemente para su uso en el tratamiento de una o más afecciones seleccionadas de artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis y esclerosis múltiple.

Los anticuerpos de la invención son anticuerpos monoclonales anti IL-17 quiméricos, humanizados o completamente humanos, y porciones de unión a antígeno de los mismos, que se unen a un epítopo no lineal que comprende los aminoácidos de IL-17 DGNVDYH (SEQ ID NO: 276) y antagonizan o neutralizar al menos una actividad biológica in vitro o in vivo asociada con IL-17, o una porción de la misma.

En una realización, los anticuerpos tienen una CI50 de menos de o igual a aproximadamente 1 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 600pM, 560 pM o 500 pM en un ensayo indicador de IL-8 in vitro, como se describe, por ejemplo, en el Ejemplo 6A en el presente documento, o de menos de o igual a 560 pM en un Ensayo Informador de GROa in vitro como se describe, por ejemplo, en el Ejemplo 6B en el presente documento.

En otra realización, los anticuerpos se caracterizan por una fuerte afinidad de unión (Kd) por IL-17 humana, es decir, de menos de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM, 6,0 pM, 5,5 pM, 5,0 pM, 4,5 pM o 4,0 pM. Como alternativa, los anticuerpos se caracterizan por una Kd para IL-17 humana de no más de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM, 6,0 pM, 5,5 pM, 5,0 pM, 4,5 pM o preferentemente de no más de aproximadamente 4,0 pM. Preferentemente, los anticuerpos de la invención se caracterizan adicionalmente por una constante koff de IL-17 humana de menos de 2 x 10'5 s-1. Un anticuerpo se caracteriza por unirse específicamente a IL-17 humana así como a IL-17 de mono cinomolgo, mientras no se une a IL-17 de ratón o rata a niveles mayores que el fondo. De forma adicional, un anticuerpo anti IL-17 de la invención se une a IL-17 humana (es decir, IL-17A) pero no se une a IL-17B humana, C, D, E o F. Un anticuerpo puede comprender un polipéptido de región variable de la cadena ligera ("LCVR") que comprende 3 secuencias de CDR que están presentes juntas en un Fab enumerado a continuación en la Tabla 3 y que están presentes en el anticuerpo de la invención en la misma posición de CDR que en el Fab enumerado en la Tabla 3. Preferentemente, un anti anticuerpo monoclonal anti IL-17 comprende un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las sEq ID NO: 178-243. Un anticuerpo puede comprender un polipéptido

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de región variable de la cadena pesada ("HCVR") que comprende 3 CDR que están presentes juntas en un Fab enumerado a continuación en la Tabla 2 y que están presentes en el anticuerpo de la invención en la misma posición de CDR que en el Fab enumerado en la Tabla 2. Preferentemente, un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención comprende un polipéptido de HCVR con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 56-121. Un anticuerpo anti IL-17 puede comprender un polipéptido de LCVr que comprende 3 CDR que están presentes juntas en un Fab enumerado en la Tabla 3 y que están presentes en el anticuerpo de la invención en la misma posición de CDR que en el Fab enumerado en la Tabla 3, y comprende adicionalmente un polipéptido de HCVR que comprende 3 CDR que están presentes juntas en un Fab enumerado en la Tabla 2 y que están presentes en el anticuerpo de la invención en la misma posición de CDR que en el Fab enumerado en la Tabla 2. Preferentemente, las 6 CDR de un anticuerpo de la invención, o fragmento funcional del mismo, existen juntas en un Fab enumerado a continuación en la Tabla 1 y están presentes en el anticuerpo de la invención en la misma posición de CDR que en el Fab enumerado en la Tabla 1. Un anti anticuerpo anti IL-17 puede comprender (i) un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 178-243 y (ii) un polipéptido de HCVR con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 56-121. En una realización más preferente, un anticuerpo de la invención comprende un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 178-243 comprende adicionalmente el polipéptido de HCVR seleccionado del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 56-121 que está presente en un Fab enumerado en la Tabla 1, que comprende la LCVR particular presente en el anticuerpo. Un anticuerpo anti IL-17 puede ser uno que puede competir por la unión a IL-17 humana, o una porción de IL-17 humana, con un anticuerpo competidor, en el que el anticuerpo competidor comprende dos polipéptidos con las secuencias de aminoácidos de la SEQ ID NO: 241 y 118. Un anticuerpo anti iL-17 puede comprender 1, 2 o 3 péptidos, preferentemente de 3 péptidos, seleccionados del grupo que consiste en los péptidos con una secuencia como se muestra en (a) las SEQ ID NO: 122-149; (b) las SEQ ID NO: 150-167, y (c) las SEQ ID NO: 168-177 (es decir, un péptido de (a), un péptido de (b) y un péptido de (c), para un anticuerpo que comprende 3 de dichos péptidos). Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 122-149, cuando está presente en un anticuerpo de la invención, está en CDRL1. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 150-167, cuando está presente en un anticuerpo de la invención, está en CDRL2. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 150-167, cuando está presente en un anticuerpo está en CDRL3. Una HCVR de un anticuerpo anti IL-17 puede comprender 1, 2 o 3 péptidos, preferentemente de 3 péptidos, seleccionados del grupo que consiste en los péptidos con una secuencia como se muestra en (a) las SEQ ID NO: 11-28; (b) las SEQ ID NO: 29-32, y (c) las SEQ ID NO: 33-55 y 261 (es decir, un péptido de (a), un péptido de (b) y un péptido de (c), para un anticuerpo que comprende 3 de dichos péptidos). Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 11-28, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH1. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 29-32, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH2. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 33-55 y 261, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH3. Se desvela adicionalmente un anticuerpo monoclonal anti IL-17 que comprende seis péptidos seleccionados del grupo que consiste en los péptidos con una secuencia como se muestra en (a) las SEQ ID NO: 122-149; (b) las SEQ ID NO: 150-167, (c) las SEQ ID NO: 168-177, (d) las SEQ ID NO: 11-28; (e) las SEQ ID NO: 29-32, y (f) las SEQ ID NO: 33-55 y 261 (es decir, un péptido de cada uno de (a-f)); preferentemente, los seis péptidos coexisten en un Fab enumerado en la Tabla 1 en el presente documento. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 122-149, cuando está presente en un anticuerpo de la invención, está en CDRL1. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 150-167, cuando está presente en un anticuerpo de la invención, está en CDRL2. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 150-167, cuando está presente en un anticuerpo de la invención, está en CDRL3. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 11-28, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH1. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 29-32, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH2. Un péptido con la secuencia mostrada en las SEQ ID NO: 33-55 y 261, cuando está presente en dicho anticuerpo, está en CDRH3. Se desvela adicionalmente un anticuerpo monoclonal anti IL-17 que comprende los seis péptidos con las secuencias como se muestra en las SEQ ID NO: 247, 248, 249, 244, 245 y 246. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 247 está en CDRL1. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 248 está en CDRL2. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 249 está en CDRL3. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 244 está en CDRH1. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 245 está en CDRH2. El péptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 246 está en CDRH3.

Un anticuerpo monoclonal anti IL-17 puede comprender o consistir en un anticuerpo intacto (es decir, de longitud completa), un anticuerpo sustancialmente intacto o una porción de unión a antígeno del mismo, por ejemplo, un fragmento Fab, un fragmento F(ab')2 o un fragmento Fv monocatenario. Además, un anticuerpo de la invención puede marcarse con un marcador detectable, inmovilizarse en una fase sólida y/o conjugarse con un compuesto heterólogo, por ejemplo, una enzima, una toxina o una molécula de polietilenglicol. Se desvela un procedimiento de preparación de un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención, que comprende mantener una célula hospedadora de la invención (es decir, célula hospedadora que se ha transformado, transducido o infectado con un vector (o vectores) de la invención que expresa anticuerpo de la invención) en condiciones apropiadas para la expresión de un anticuerpo monoclonal de la invención, mediante lo cual se expresa tal anticuerpo. El procedimiento puede comprender adicionalmente la etapa de aislar el anticuerpo monoclonal de la invención de la célula o, preferentemente, de los medios de cultivo en los que se cultiva la célula.

Se contemplan usos de diagnóstico para los anticuerpos monoclonales de la invención. En una aplicación de

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diagnóstico, la invención proporciona un procedimiento para determinar el nivel de proteína IL-17 en una muestra, que comprende exponer una muestra a analizar a un anticuerpo anti IL-17 de la invención en condiciones de unión y determinar la unión específica del anticuerpo a la muestra. Se puede usar un anticuerpo anti IL-17 de la invención para determinar los niveles de IL-17 en muestras de prueba, comparando los valores de las muestras de prueba con una curva patrón generada mediante la unión de dicho anticuerpo a muestras con cantidades conocidas de IL-17. La invención proporciona adicionalmente un kit que comprende un anticuerpo de la invención y, preferentemente, instrucciones para usar el anticuerpo para detectar la proteína IL-17 en una muestra.

La invención proporciona una composición, preferentemente una composición farmacéutica, que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención. La composición farmacéutica de la invención puede comprender adicionalmente un vehículo, excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. En dicha composición farmacéutica, el anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención es el único principio activo. Preferentemente, la composición farmacéutica comprende una población homogénea o sustancialmente homogénea de un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención. La composición para uso terapéutico es fisiológicamente compatible, estéril y puede estar liofilizada, y opcionalmente se suministra con un diluyente apropiado.

La invención proporciona un procedimiento para inhibir al menos una bioactividad de IL-17 en un animal, preferentemente un mamífero, más preferentemente un ser humano, que lo necesite, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz, o cantidad neutralizante de IL-17, de un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención a dicho animal. La invención proporciona adicionalmente un procedimiento para tratar una enfermedad o trastorno mejorado, neutralizando o antagonizando una bioactividad de IL-17, por ejemplo, la inhibición de la transducción de señales resultante de la unión de IL-17 a su receptor, que comprende administrar a un paciente (por ejemplo, un ser humano) que necesita tal tratamiento o prevención, una cantidad terapéuticamente eficaz de la cantidad neutralizante de IL-17 de un anticuerpo monoclonal de la invención.

La invención incluye un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención para su uso en la fabricación de un medicamento para la administración a un mamífero, preferentemente un ser humano, para el tratamiento de, por ejemplo, un trastorno autoinmunitario o un trastorno inflamatorio, o un trastorno de proliferación celular. Se desvela adicionalmente un artículo de fabricación que comprende un material de embalaje y un anticuerpo de la invención contenido dentro de dicho material de embalaje, en el que el material de embalaje comprende un prospecto de envase que indica que el anticuerpo neutraliza específicamente una actividad de IL-17 o disminuye el nivel de IL-17 funcional presente en el sistema. Se desvelan adicionalmente moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican un anticuerpo de la invención, o una cadena ligera o una cadena pesada del mismo; un vector (o vectores) que comprende dicho ácido nucleico, opcionalmente unida operativamente a secuencias de control reconocidas por una célula hospedadora transformada con el vector; una célula hospedadora que comprende el vector; un procedimiento de producción de un anticuerpo de la invención que comprende cultivar la célula hospedadora de forma que se exprese el ácido nucleico y, opcionalmente, recuperar el anticuerpo del medio de cultivo de la célula hospedadora.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 muestra el alineamiento de secuencias de aminoácidos de miembros de la familia de proteínas IL-17

humana (IL-17, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E y IL-17F).

La FIG. 2 muestra el alineamiento de secuencias de aminoácidos de IL-17 de ser humano, conejo, rata, mono

cinomolgo y especies murinas.

Descripción detallada, de la invención

El ámbito de la invención se define por las reivindicaciones.

Definiciones

La "interleucina 17", también denominada "IL-17" o "IL-17A", es una proteína homodimérica glucosilada de 20-30 kD. El gen de IL-17 humano codifica una proteína de 155 aminoácidos que tiene una secuencia señal de 19 aminoácidos y un segmento maduro de 136 aminoácidos. La IL-17 humana muestra una identidad de secuencia de aminoácidos del 62,5 % y el 58 % con las secuencias de aminoácidos de IL-17 de ratón y rata, respectivamente, como se muestra en la Figura 2. La IL-17 humana muestra una identidad de secuencia de aminoácidos del 97,4 % con IL-17 de mono cinomolgo.

Un anticuerpo de longitud completa tal como existe de forma natural es una molécula de inmunoglobulina compuesta por cuatro cadenas peptídicas, dos cadenas pesadas (H) (aproximadamente 50-70 kDa cuando es de longitud completa) y dos cadenas ligeras (L) (aproximadamente 25 kDa cuando es de longitud completa) interconectadas por enlaces disulfuro. La porción amino terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100110 o más aminoácidos, principalmente responsables del reconocimiento del antígeno. La porción carboxilo terminal de cada cadena define una región constante principalmente responsable de la función efectora.

Las cadenas ligeras se clasifican como kappa o lambda y se caracterizan por una región constante particular. Cada cadena ligera está compuesta por una región variable de la cadena ligera (en el presente documento "LCVR") N- terminal y una región constante de la cadena ligera compuesta de un dominio, CL. Las cadenas pesadas se

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clasifican como gamma, mu, alfa, delta o épsilon, y definen el isotipo de un anticuerpo como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente, y varios de estos se puede dividir adicionalmente en subclases (isotipos), por ejemplo, IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 y IgA2. Cada tipo de cadena pesada se caracteriza por una región constante particular. Cada cadena pesada está compuesta por una región variable de la cadena pesada (en el presente documento "HCVR") N terminal y una región constante de la cadena pesada. La región constante de la cadena pesada está compuesta por tres dominios (CH1, CH2 y CH3) para IgG, IgD y IgA; y 4 dominios (CH1, CH2, CH3 y CH4) para IgM e IgE.

Las regiones HCVR y LCVR se pueden subdividir adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad ("las CDR"), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco conservadas ("FR"). Cada HCVR y LCVR está compuesta por tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino al extremo carboxilo en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Para los anticuerpos de longitud completa de la invención, las cadenas ligeras comprenden preferentemente, corriente abajo de FR4, un polipéptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 277. Para los anticuerpos de longitud completa de la invención, las cadenas pesadas comprenden preferentemente, corriente abajo de FR4, un polipéptido con la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 278. En el presente documento, las 3 CDR de la cadena pesada se denominan "CDRH1, CDRH2 y CDRH3" y las 3 CDR de la cadena ligera se denominan "CDRL1, CDRL2 y CDRL3". Las CDR contienen la mayoría de los restos que forman interacciones específicas con el antígeno. La numeración y posicionamiento de los restos de aminoácido de CDR dentro de las regiones HCVR y LCVR están en conformidad con la convención de numeración de Kabat bien conocida.

El término "anticuerpo", en referencia a un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención (o simplemente "anticuerpo de la invención"), como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo monoclonal. Un "anticuerpo monoclonal" como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo de roedor, preferentemente un anticuerpo murino, a un anticuerpo quimérico, a un anticuerpo humanizado o a un anticuerpo completamente humano, a menos que se indique otra cosa en el presente documento. Los anticuerpos monoclonales de la invención se pueden producir usando, por ejemplo, técnicas de hibridomas bien conocidas en la técnica, así como tecnologías recombinantes, tecnologías de expresión en fagos, tecnologías sintéticas o recombinantes, o combinaciones de tales tecnologías conocidas en la técnica. La expresión "anticuerpo monoclonal", como se usa en el presente documento, no se limita a anticuerpos producidos a través de la tecnología de hibridoma. "Anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que procede de una única copia o clon, incluyendo, por ejemplo, un clon eucariota, procariota o de fago y no al procedimiento mediante el cual se produce. Un "anticuerpo monoclonal" puede ser un anticuerpo intacto (que comprende una región Fc completa o de longitud completa), un anticuerpo sustancialmente intacto, o una porción o fragmento de un anticuerpo que comprende una porción de unión a antígeno, por ejemplo, un fragmento Fab, fragmento Fab' o fragmento F(ab')2 de un anticuerpo murino, o de un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. El fragmento "Fab" contiene un dominio variable y uno constante de la cadena ligera y un dominio variable y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos de anticuerpo "F(ab')2" comprenden una pareja de fragmentos Fab que generalmente están unidos covalentemente entre ellos cerca de sus extremos carboxilo, mediante cisteínas de la bisagra. También son conocidos en la técnica otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo.

La región variable de cada pareja de cadenas ligera-pesada forma un sitio de unión a antígeno del anticuerpo. Por lo tanto, un anticuerpo IgG intacto tiene dos sitios de unión. Excepto en los anticuerpos bifuncionales o biespecíficos, los dos sitios de unión a antígeno del anticuerpo son los mismos. Como se usa en el presente documento, la "porción de unión a antígeno" o "región de unión a antígeno", o "dominio de unión a antígeno", se refiere indistintamente a la porción de una molécula de anticuerpo que contiene los restos de aminoácido que interactúan con un antígeno y confieren al anticuerpo su especificidad y afinidad para el antígeno. Esta porción de anticuerpo incluye los restos de aminoácidos del "armazón" necesarios para mantener la conformación apropiada de los restos de unión a antígeno. Preferentemente, las CDR de la región de unión a antígeno de los anticuerpos de la invención son total o sustancialmente de origen murino, opcionalmente con determinados restos de aminoácido modificados, por ejemplo, sustituidos por un resto de aminoácido distinto, (véanse, por ejemplo, las Tablas 2 y 3) para optimizar una propiedad particular del anticuerpo, por ejemplo, Kd, koff, CI50. Preferentemente, las regiones marco conservadas de los anticuerpos de la invención son de origen humano o de origen sustancialmente humano (al menos el 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de origen humano. Las regiones marco conservadas preferentes de los anticuerpos de la invención tienen las siguientes secuencias: Las SEQ ID NO: 262 (HCVR FR1), 263 (HCVR FR2), 264 (HCVR FR3), 265 (HCVR FR4), 266 (LCVR FR1), 267 (LCVR FR2), 268 (LCVR FR3), 269 (LCVR FR4) y siguen la numeración de Kabat. En otras realizaciones, la región de unión a antígeno de un anticuerpo para IL-17 de la invención puede proceder de otra especie no humana, incluyendo, pero sin limitación, conejo, rata o hámster. Como alternativa, la región de unión al antígeno puede proceder de una secuencia humana.

Además, un "anticuerpo monoclonal", como se usa en el presente documento, puede ser un fragmento Fv monocatenario que puede producirse uniendo el ADN que codifica una LCVR y el ADN que codifica una HCVR con una secuencia enlazadora. (Véase, Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, pág. 269-315, 1994). Se entiende que independientemente de si se especifican los fragmentos, el término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, incluye tales fragmentos así como formas monocatenarias. Siempre que la proteína conserve la capacidad de unirse de forma específica o preferencial a su diana prevista (es decir, epítopo o antígeno), está incluida dentro del término "anticuerpo". Los anticuerpos pueden o no estar glucosilados y aún estar dentro de los límites de la invención.

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Una población de "anticuerpos monoclonales" se refiere a una población de anticuerpos homogénea o sustancialmente homogénea (es decir, al menos aproximadamente el 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, más preferentemente, al menos aproximadamente el 97 % o 98 %, o muy preferentemente al menos el 99 % de los anticuerpos en la población competirían en un ensayo ELISA por el mismo antígeno o epítopo, o más preferentemente los anticuerpos son idénticos en secuencia de aminoácidos. Los anticuerpos pueden o no estar glucosilados y aún estar dentro de los límites de la invención. Los anticuerpos monoclonales pueden ser homogéneos si tienen una secuencia de aminoácidos idéntica, aunque pueden diferir en una modificación postraduccional, por ejemplo, en el patrón de glucosilación.

Un anticuerpo "variante", se refiere en el presente documento a una molécula que difiere en la secuencia de aminoácidos de una secuencia de aminoácidos de anticuerpo "parental" en virtud de la adición, deleción y/o sustitución de uno o más restos de aminoácido de la secuencia del anticuerpo parental. En una realización preferente, la variante de anticuerpo comprende al menos una adición, deleción y/o sustitución de aminoácido (por ejemplo, de una a aproximadamente diez, y preferentemente 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8), en las regiones CDR del anticuerpo parental. La identidad u homología con respecto a la secuencia de anticuerpo variante se define en el presente documento como el porcentaje de restos de aminoácido en la secuencia de anticuerpo variante que son idénticos a los restos del anticuerpo parental, después de alinear las secuencias e introducir huecos, si fuera necesario, para lograr el máximo porcentaje de identidad de secuencia. El anticuerpo variante conserva la capacidad de unirse al antígeno, o preferentemente, al epítopo, al cual el anticuerpo parental se une y preferentemente tiene al menos una propiedad o bioactividad que es superior a la del anticuerpo parental. Por ejemplo, el anticuerpo variante preferentemente tiene una afinidad de unión más fuerte, una constante de disociación más lenta, menor CI50 o una mayor capacidad de inhibir la bioactividad de un antígeno, que el anticuerpo original. Un anticuerpo variante de particular interés en el presente documento es uno que presenta una potenciación de al menos aproximadamente 2 veces, preferentemente al menos aproximadamente 5 veces, 10 veces o 20 veces de una propiedad o bioactividad, cuando se compara con el anticuerpo parental.

El anticuerpo "parental" en el presente documento es uno que está codificado por una secuencia de aminoácidos usada para la preparación de un anticuerpo variante. El anticuerpo parental puede tener una secuencia marco conservada de origen murino, pero preferentemente la secuencia marco conservada es total o sustancialmente de origen humano. El anticuerpo parental puede ser un anticuerpo murino, quimérico, humanizados o humano.

La expresión "se une específicamente" como se usa en el presente documento se refiere a la situación en la cual un miembro de una pareja de unión específica no se une de forma significativa a moléculas que no sean su compañero (o compañeros) de unión específico. La expresión también es aplicable cuando, por ejemplo, un dominio de unión a antígeno de un anticuerpo de la invención es específico para un epítopo particular que es portado por varios antígenos, en cuyo caso el anticuerpo específico que porta el dominio de unión a antígeno tendrá la capacidad de unirse a los diversos antígenos que portan el epítopo. Por consiguiente, un anticuerpo monoclonal de la invención se une de forma específica a IL-17 humana (es decir, IL-17A), aunque no se une de forma específica a IL-17B humana, IL-17C, IL-17D, IL-17E, IL-17F. Además, un anticuerpo monoclonal de la invención se une específicamente a IL-17 humana y IL-17 de mono cinomolgo, pero no se une específicamente IL-17 de rata o IL-17 murina. Además, un anticuerpo monoclonal de la invención se une específicamente a un epítopo de IL-17 humana no lineal o conformacional que comprende los aminoácidos DGNDYH, pero no se une a un epítopo de IL-17 humana que no comprende los aminoácidos DGNDYH.

La expresión "se une preferentemente", como se usa en el presente documento, se refiere a la situación en la que un anticuerpo se une a un antígeno específico al menos aproximadamente el 20% más, preferentemente al menos aproximadamente el 50 %, 2 veces, 20 veces, 50 veces o 100 veces más de lo que se une a un antígeno distinto medido por una técnica disponible en la técnica, por ejemplo, ELISA de competición o medición del Kd con un ensayo BIACORE o KINEXA. Un anticuerpo puede unirse preferentemente a un epítopo dentro de un antígeno por sobre un epítopo distinto dentro del mismo antígeno. Por consiguiente, un anticuerpo de la invención se une preferentemente a IL-17 humana por sobre IL-17 de conejo.

El término "epítopo" se refiere a la porción de una molécula que tiene la capacidad de ser reconocida por y de unirse a un anticuerpo, en una o más de las regiones de unión a antígeno del anticuerpo. A menudo los epítopos consisten en una agrupación superficial activa desde un punto de vista químico de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcares, y tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Por "epítopo inhibidor" y/o "epítopo neutralizante" se entiende un epítopo, que cuando se encuentra en el contexto de la molécula antigénica intacta y cuando está unido a un anticuerpo específico para el epítopo, da como resultado la pérdida o disminución de una actividad biológica de la molécula in vivo o in vitro, o en un organismo que contiene la molécula.

El término "epítopo", como se usa en el presente documento, se refiere adicionalmente a una porción de un polipéptido que tiene actividad antigénica y/o inmunogénica en un animal, preferentemente un mamífero, por ejemplo, un ratón o un ser humano. La expresión "epítopo antigénico", como se usa en el presente documento, se define como una porción de un polipéptido al que se puede unir específicamente un anticuerpo, determinado por cualquier procedimiento bien conocido en la técnica, por ejemplo, mediante inmunoensayos convencionales. Los epítopos antigénicos no necesitan necesariamente ser inmunogénicos, pero pueden ser inmunogénicos. Un "epítopo

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inmunogénico", como se usa en el presente documento, se define como una porción de un polipéptido que provoca una respuesta de anticuerpos en un animal, determinado por cualquier procedimiento conocido en la técnica. Un "epítopo no lineal" o "epítopo conformacional" comprende polipéptidos (o aminoácidos) no contiguos dentro de la proteína antigénica a la que se une un anticuerpo específico para el epítopo.

Las frases "propiedad biológica" o "característica biológica", o los términos "actividad" o "bioactividad", en referencia a un anticuerpo de la presente invención, se usan indistintamente en el presente documento e incluyen, aunque sin limitación, la afinidad y especificidad del epítopo/antígeno, la capacidad de neutralizar o antagonizar una actividad de IL-17 in vivo o in vitro, la CI50, la estabilidad in vivo del anticuerpo y las propiedades inmunogénicas del anticuerpo. Otras propiedades o características biológicas identificables de un anticuerpo reconocidas en la técnica incluyen, por ejemplo, la reactividad cruzada, (es decir, con homólogos no humanos del péptido diana o con otras proteínas o tejidos, en general), y la capacidad de conservar altos niveles de expresión de proteína en células de mamíferos. Se pueden observar las propiedades o características mencionadas anteriormente, medidas o evaluadas utilizando técnicas reconocidas en la técnica que incluyen, pero sin limitación, ELISA, ELISA competitivo, análisis por resonancia de plasmón superficial BIACORE o KINEXA, ensayos de neutralización in vitro o in vivo sin limitación, unión a receptor, producción y/o secreción de citocinas o factores de crecimiento, transducción de señales e inmunohistoquímica con cortes de tejidos de distintas fuentes, incluyendo de humano, primate, o cualquier otra fuente.

El término "inhibir" o "neutralizar", como se usa en el presente documento con respecto a una actividad de un anticuerpo de la invención, significa la capacidad de antagonizar, prohibir, prevenir, restringir, ralentizar, alterar, eliminar, detener o invertir sustancialmente, por ejemplo, la evolución o gravedad de lo que se está inhibiendo, incluyendo, pero sin limitación, una actividad biológica (por ejemplo, una actividad de iL-17) o propiedad, una enfermedad o afección. La inhibición o neutralización de una actividad de IL-17 que es el resultado de la unión de un anticuerpo de la invención a IL-17, es preferentemente al menos aproximadamente del 20%, 30%, 40%, 50%, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95% o mayor.

El término "aislado" cuando se usa en relación con un ácido nucleico o proteína (por ejemplo, un anticuerpo), se refiere a una proteína o molécula de ácido nucleico que se identifica, y separa de al menos un contaminante con el que está asociado normalmente en su fuente natural. Preferentemente, un "anticuerpo aislado" es un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen distintas especificidades antigénicas (por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden un anticuerpo aislado que se une a IL-17 de forma específica y está sustancialmente libre de anticuerpos que se unen de forma específica a antígenos que no son IL- 17).

Las expresiones "numeración de Kabat" y "etiquetado de Kabat" se usan indistintamente en el presente documento. Estas expresiones, que son reconocidas en la técnica, se refieren a un sistema de numeración de restos de aminoácidos que son más variables (es decir, hipervariables) que otros restos de aminoácidos en las regiones variables de la cadena pesada y ligera de un anticuerpo (Kabat, y col., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat, y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, publicación NIH n.° 91-3242 (1991)).

Un polinucleótido está "unido operativamente" a otro polinucleótido cuando se coloca en una relación funcional con el otro polinucleótido. Por ejemplo, un promotor o potenciador está operativamente unido a una secuencia codificante si afecta la transcripción de la secuencia. Un péptido está "unido operativamente" a otro péptido cuando los polinucleótidos que los codifican están unidos operativamente, preferentemente están en la misma fase de lectura abierta.

Los términos "individuo," "sujeto," y "paciente" usados indistintamente en el presente documento, se refieren a un mamífero, incluyendo, pero sin limitación, animales murinos, simios, seres humanos, animales mamíferos de granja, animales mamíferos para el deporte y mamíferos que son mascotas; preferentemente, los términos se refieren a seres humanos. En una determinada realización, el sujeto, preferentemente un mamífero, preferentemente un ser humano, se caracteriza adicionalmente con una enfermedad o trastorno, o afección, que se beneficiaría de una bioactividad disminuida de IL-17.

El término "vector" incluye una molécula de ácido nucleico que tiene la capacidad de transportar otro ácido nucleico al que se lo ha unido, incluyendo, pero sin limitación, plásmidos y vectores víricos. Determinados vectores tiene capacidad de replicación autónoma en una célula hospedadora en la que se introducen, mientras que otros vectores pueden integrarse en el genoma de una célula hospedadora tras la introducción en la célula hospedadora, y por lo tanto, se replican junto con el genoma del huésped. Además, determinados vectores tienen la capacidad de dirigir la expresión de genes a los cuales está unidos operativamente. Dichos vectores se denominan en el presente documento "vectores de expresión recombinante" (o simplemente "vectores de expresión") y los vectores ejemplares son bien conocidos en la técnica.

Como se usa en el presente documento, las expresiones "célula", "célula hospedadora", "línea celular", y "cultivo celular" se usan indistintamente e incluyen una célula individual o cultivo celular que es un receptor de cualquier polinucleótido aislado de la invención o cualquier vector (o vectores) recombinante que comprende una secuencia

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que codifica una HCVR, una LCVR o un anticuerpo monoclonal de la invención. Las células hospedadoras incluyen la progenie de una única célula hospedadora, y la progenie puede no ser de forma necesaria completamente idéntica (en morfología o en el complemento del ADN total) a la célula parental original, debido a una mutación y/o cambio natural, accidental o deliberado. Una célula hospedadora incluye células transformadas, transducidas o infectadas con un vector recombinante, o un polinucleótido que expresa un anticuerpo monoclonal de la invención, o una cadena ligera o cadena pesada del mismo. Una célula hospedadora que comprende un vector recombinante de la invención, ya sea incorporado de forma estable al cromosoma del hospedador o no, también se puede denominar "célula hospedadora recombinante". Las células hospedadoras preferentes para su uso en la invención son células CHO (por ejemplo, ATCC CRL-9096), células NS0, células SP2/0, células COS (ATCC, por ejemplo, CRL-1650, CRL-1651) y HeLa (ATCC CCL-2). Las células hospedadoras adicionales para su uso en la invención incluyen células vegetales, células de levadura, otras células de mamífero y células procariotas.

Caracterización de anticuerpos

La presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales aislados que se unen específicamente a IL-17 humana (es decir, IL-17A) con alta afinidad. El anticuerpo de la invención se define por las reivindicaciones. Los anticuerpos de la invención son preferentemente anticuerpos quiméricos, humanizados o humanos, o porciones de unión a antígeno de los mismos. Además, los anticuerpos de la invención neutralizan o antagonizan al menos una actividad biológica de IL-17 in vivo y/o in vitro. La unión específica de un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención (incluyendo porciones de unión a antígeno del mismo) a IL-17 permite que dicho anticuerpo se use como un producto terapéutico para enfermedades y trastornos asociados con IL-17, es decir, afecciones, enfermedades o trastornos que se benefician de la inhibición de una actividad biológica de IL-17.

El epítopo antigénico de IL-17 al que se unen los anticuerpos de la invención es un epítopo no lineal que comprende los aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID NO: 266), más preferentemente los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 267) de IL-17 humana. Los anticuerpos que se unen a dicho epítopo, se unen de forma específica y preferentemente a IL-17 humana e IL-17 de mono cinomolgo, en comparación con su unión a IL-17 murina o IL-17 de rata. Los anticuerpos monoclonales de la invención se unen a la IL-17 humana al menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 veces más (por ejemplo, mayor afinidad o mayor especificidad) que con lo que se unen a IL-17 murina o IL-17 de rata; más preferentemente, al menos 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550 o 600 veces más que con lo que se unen IL-17 murina o IL-17 de rata, incluso más preferentemente no se unen a IL-17 murina o IL-17 de rata a niveles mayores que los niveles de fondo determinados, por ejemplo, mediante ensayo ELISA, ensayo de ELISA de competición o por los valores de Kd en un ensayo BIACORE o KINEXA.

En una realización preferente, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal anti IL-17 que posee una fuerte afinidad de unión por IL-17 humana, es decir, se une a IL-17 humana, o una porción de la misma que comprende DGNVDYH (SEQ Id NO: 267) [es decir, el anticuerpo se pone en contacto con el polipéptido DGNVDYH], con una afinidad de unión (Kd) para IL-17 humana menor de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM o 6 pM, preferentemente de menos de aproximadamente 5,5 pM, 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente menor de aproximadamente 4 pM. Como alternativa, los anticuerpos de la invención se caracterizan por una Kd para IL-17 humana de no más de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM o 6 pM, preferentemente de no más de aproximadamente 5,5 pM, 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente de no más de aproximadamente 4 pM. Las afinidades de los anticuerpos se pueden determinar como se describe en los ejemplos a continuación, u con otros procedimientos disponibles en la técnica. Preferentemente, los anticuerpos anti IL-17 de la invención que poseen una fuerte afinidad de unión como se describe anteriormente también se unen a un epítopo de IL-17 humana no lineal que comprende los aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID NO: 266), más preferentemente los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 267), en el que el anticuerpo se pone en contacto con el polipéptido DGNVDYH.

En una realización, los anticuerpos de la invención tienen una constante de disociación (koff) para IL-17 humana menor de 5 x 10'5, 4 x 10'5, 3 x 10'5 o 2 x 10'5 s-1. En una realización preferente, los anticuerpos de la invención caracterizados por poseer una fuerte afinidad de unión para IL-17 humana como se describe anteriormente (Kd de menos de aproximadamente 7 pM o 6 pM, preferentemente menos de aproximadamente 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente menos de aproximadamente 4 pM) también tienen una constante de disociación (koff) para IL-17 humana de menos de 5 x 10'5, 4 x 10'5, 3 x 10'5 o 2 x 10'5 s-1, e incluso más preferentemente también se unen a un epítopo de IL-17 humana no lineal que comprende los aminoácidos ADGNVDYHMN (SEQ ID NO: 266), más preferentemente los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 267) de IL-17 humana.

En otra realización, los anticuerpos de la invención tiene una CI50 de menos de 1 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM o 500 pM en, por ejemplo, un ensayo indicador de IL-8 in vitro, o menos de aproximadamente 560 pM en un ensayo indicador de GROa (véase el Ejemplo 6). En una realización preferente, los anticuerpos de la invención se caracterizan por poseer una fuerte afinidad de unión para IL-17 humana como se describe anteriormente (Kd de menos de aproximadamente 7 pM o 6 pM, preferentemente menos de aproximadamente 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente menos de aproximadamente 4 pM) y también tienen una IC50 de menos de 1 nM, 900 pM, 800 pM, 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM o 500 pM en, por ejemplo, un ensayo indicador de IL-8 in vitro o menos de aproximadamente 560 pM en un ensayo informador de GROa, e incluso más preferentemente también tienen una constante de disociación (koff) para IL-17 humana de menos de 5 x 10'5, 4 x 10'5, 3 x 10'5 o 2 x 10'5 s-1, e incluso más preferentemente también se unen a un epítopo de IL-17 humana no lineal

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que comprende los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 267) de IL-17 humana, en el que el anticuerpo se pone en contacto con el polipéptido DGNVDYH.

La realización más preferente de la invención es un anticuerpo anti IL-17 que comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena ligera que consiste en la SEQ ID NO: 279 y una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada que consiste en la SEQ ID NO: 280. Preferentemente, este anticuerpo comprende dos cadenas ligeras idénticas y dos cadenas pesadas idénticas. Preferentemente, la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera como se muestra en SEQ ID NO: 279 está codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 281 (incluyendo la secuencia señal) o la SEQ ID NO: 283 (sin la secuencia señal). Preferentemente, la cadena pasada con la secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 280 está codificada por un ácido nucleico que comprende la secuencia mostrada en la SEQ ID NO: 282 (incluyendo la secuencia señal) o la SEQ ID NO: 284 (sin la secuencia señal).

Los anticuerpos monoclonales ("los Acm") pueden fabricarse usando el procedimiento de hibridoma ampliamente conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Kohler y col., Nature, 256:495, 1975) o pueden fabricarse mediante procedimientos de ADN recombinante (por ejemplo, como en la Patente de Estados Unidos N° 4.816.567). Generalmente, un hibridoma puede producirse fusionando una línea celular inmortal adecuada (por ejemplo, una línea celular de mieloma, tal como SP2/0) con células productoras de anticuerpos del animal inmunizado. La célula productora de anticuerpos, preferentemente las del bazo o de ganglios linfáticos, se obtienen de animales inmunizados con el antígeno de interés. Las células fusionadas (hibridomas) pueden aislarse usando condiciones de cultivo selectivas y clonarse mediante dilución limitante. El medio de cultivo en el cual crecen las células de hibridoma se ensaya en cuanto a la producción de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno. Preferentemente, la especificidad de unión de los Acm producidos por las células de hibridoma se determina mediante inmunoprecipitación o mediante un ensayo de unión in vitro, tal como radioinmunoensayo o ELISA. Las células que producen anticuerpos con las propiedades de unión deseadas se pueden seleccionar mediante un ensayo adecuado. Son bien conocidos en la técnica los procedimientos de aislamiento y exploración.

Se pueden usar otros procedimientos adecuados para producir o aislar anticuerpos de la invención, que incluyen anticuerpos humanos o artificiales, incluyendo, por ejemplo, procedimientos que seleccionan un anticuerpo recombinante (por ejemplo, un Fv o Fab monocatenario) de una biblioteca, o que se basan en la inmunización de animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que tengan la capacidad de producir un repertorio de anticuerpos humanos (véase, por ejemplo, Jakobovits y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551-2555, 1993; Jakobovits y col., Nature, 362:255-258, 1993; patentes de Estados Unidos números 5.545.806 y 5.545.807).

También se desvelan anticuerpos monocatenarios y anticuerpos quiméricos, humanizados o primatizados (injertados con CDR), así como anticuerpos monocatenarios injertados con CDR o quiméricos, y similares, que comprenden porciones procedentes de distintas especies. Las diversas porciones de estos anticuerpos se pueden unir químicamente mediante técnicas convencionales, de forma sintética, o se pueden preparar como una proteína contigua usando técnicas de ingeniería genética. Por ejemplo, pueden expresarse para producir una proteína contigua los ácidos nucleicos que codifican una cadena quimérica o humanizada. Véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos n.° 4.816.567; patente europea n.° 125.023 B1; la patente de Estados Unidos n.° 4.816.397; patente europea n.° 120.694 B1; documento WO 86/01533; patente europea n.° 194.276 B1; patente de Estados Unidos n.° 5.225.539; la patente europea N.° 239.400 B1 y las patentes de Estados Unidos N.° 5.585.089 y 5.698.762.

Además, también se pueden producir fragmentos funcionales de anticuerpos (es decir, fragmentos de unión a antígeno), que incluyen fragmentos de anticuerpos quiméricos, humanizados, primatizados o monocatenarios. Los fragmentos funcionales preferentes conservan una función de unión a antígeno de un correspondiente anticuerpo de longitud completa. Los fragmentos funcionales particularmente preferentes conservan la capacidad de inhibir una o más funciones o bioactividades características de una IL-17 de mamífero madura, preferentemente IL-17 humana, tal como una actividad de unión, una actividad de señalización y/o la estimulación o inhibición de una respuesta celular. Por ejemplo, en una realización, un fragmento funcional puede inhibir la interacción de IL-17 madura con su receptor y/o puede inhibir una o más funciones mediadas por receptor.

Los fragmentos Fab, Fab' y F(ab')2 se pueden producir por escisión enzimática o por técnicas recombinantes. Por ejemplo, la escisión de un anticuerpo intacto puede generar fragmentos Fab o F(ab')2, respectivamente. La digestión de anticuerpos con papaína produce dos fragmentos de unión a antígeno idénticos, llamados fragmentos "Fab", cada uno con un único sitio de unión a antígeno. El fragmento Fab contiene también el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. El tratamiento con pepsina produce un fragmento F(ab')2 que tiene dos sitios de combinación a antígeno y todavía tiene la capacidad de reticular un antígeno.

"Fv" es el mínimo fragmento de anticuerpo que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno y de unión a antígeno completo. Esta región consiste en un dímero de un dominio variable de la cadena pesada y un dominio variable de la cadena ligera en asociación estrecha no covalente. Es en esta configuración que las tres CDR de cada dominio variable interactúan para definir un sitio de unión a antígeno sobre la superficie del dímero Vh-Vl. En conjunto, las seis CDR confieren especificidad de unión a antígeno al anticuerpo. Para superar la tendencia de los dominios HCVR y LCVR no unidos covalentemente en el Fv a disociarse cuando se coexpresan en una célula

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hospedadora, se puede construir un fragmento Fv monocatenario (scFv) en que un polipéptido flexible y suficientemente largo une el extremo C del HCVR al extremo N del LCVR o el extremo C del LCVR al extremo N del HCVR. Un enlazador usado comúnmente es un péptido de 15 restos (Gly4Ser)3. Para una revisión de los sFv, véase Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, Nueva York, págs. 269-315 (1994). Además, los anticuerpos se pueden producir en una diversidad de formas truncadas, usando genes de anticuerpos en los cuales se han introducido uno o más codones de detención corriente arriba del sitio de detención natural. Por ejemplo, puede diseñarse un gen quimérico que codifica una porción de la cadena pesada de F(ab')2 para incluir secuencias de ADN que codifican el dominio CH1 y la región bisagra de la cadena pesada.

La selección de fragmentos de anticuerpos a partir de bibliotecas que usan tecnologías de enriquecimiento, tales como la presentación en fagos (Matthews DJ y Wells JA. Science. 260:1113-7, 1993), la presentación en ribosomas (Hanes, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:14130-5, 1998), la presentación en bacterias (Samuelson P., y col., Journal of Biotechnology. 96:129-54, 2002) o la presentación en levaduras (Kieke M.C., y col., Protein Engineering, 10:1303-10, 1997) han demostrado ser alternativas satisfactorias a la tecnología de hibridoma clásica (Review: Little M. y col., Immunology Today, 21:364-70, 2000).

Anticuerpos variantes

Puede ser un anticuerpo parental un anticuerpo monoclonal murino o un anticuerpo humano (producido, por ejemplo, en un ratón transgénico) generado frente a IL-17. Un anticuerpo parental puede modificarse adicionalmente para crear una forma quimérica o humanizada del anticuerpo, u otra forma variante del anticuerpo, usando procedimientos disponibles en la técnica, por ejemplo, mutagénesis por PCR. Dichos anticuerpos quiméricos, humanizados o de otra forma variantes, pueden servir como anticuerpos parentales para una variación o mutagénesis adicional. Los anticuerpos parentales de la invención pueden mutagenizarse, por ejemplo, dentro del dominio (o dominios) CDR (véanse, por ejemplo, las Tablas 2 y 3) para crear anticuerpos variantes que pueden explorarse en cuanto a la presencia de una propiedad de interés, por ejemplo, la afinidad de unión (menor Kd), la CI 50, especificidad, la unión preferencial, etc. Preferentemente, la propiedad de interés en el anticuerpo variante es una mejora con respecto a esa propiedad en el anticuerpo parental. Es preferente un anticuerpo variante de sustitución de aminoácidos, y tiene al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 restos de aminoácido eliminados de la molécula de anticuerpo parental y un resto distinto insertado en su lugar. El sitio de mayor interés para la mutagénesis de sustitución es una o más regiones de CDR, pero se contemplan también modificaciones de la FR. Son preferentes las sustituciones conservativas de aminoácidos; aunque, para cambios más substanciales, pueden introducirse cambios de aminoácidos no conservativos y los anticuerpos resultantes explorarse en cuanto a la propiedad de interés.

Una manera conveniente de generar variantes de sustitución de un anticuerpo parental es la maduración por afinidad utilizando presentación en fagos. En resumen, se muta una molécula de polinucleótido que codifica un anticuerpo parental, dentro de una o más regiones CDR, para generar todas las posibles sustituciones de aminoácidos en cada resto de aminoácido en que se desea una sustitución. Las variantes de anticuerpos así generadas se presentan de forma monovalente a partir de partículas de fagos filamentosos como fusiones con el producto del gen III de M13 empaquetadas dentro de cada partícula. Los anticuerpos variantes presentados en fagos se exploran después en cuanto a su actividad biológica (por ejemplo, afinidad de unión, especificidad, CI50). Para identificar los sitios candidatos de la región CDR para la modificación, se pueden realizar mutágenos por alanina para identificar restos de la región CDR que contribuyen significativamente a la unión al antígeno.

Como alternativa o de manera adicional, puede ser beneficioso analizar una estructura cristalina del complejo antígeno-anticuerpo para identificar puntos de contacto entre el anticuerpo e IL-17. Dichos restos de contacto y restos adyacentes son candidatos para la sustitución de acuerdo con las técnicas elaboradas en el presente documento o conocidas en la técnica. Como alternativa o de manera adicional, se puede realizar mutagénesis aleatoria o mutagénesis puntual en una o más moléculas de polinucleótidos que codifican al menos una CDR. La mutagénesis puede realizarse en una o más posiciones, cuando la CDR está unida operativamente a la región marco conservada dentro de la región variable o cuando la CDR es independiente de otra secuencia de región variable y después la CDR modificada se devuelve a la región variable usando tecnología de ADN recombinante. Una vez que se generan tales anticuerpos variantes, el panel de variantes se somete a la exploración de una propiedad o actividad de interés, y se pueden seleccionar anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes para un desarrollo adicional.

Puede sustituirse cualquier resto de cisteína no implicado en el mantenimiento de la conformación apropiada de un anticuerpo anti IL-17 de la invención, generalmente con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula e impedir la reticulación aberrante. Por el contrario, se puede añadir un enlace (o enlaces) de cisteína al anticuerpo para mejorar su estabilidad (en particular, cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo, tal como un fragmento Fv).

Otro tipo de variante de aminoácidos del anticuerpo modifica el patrón de glucosilación original del anticuerpo. Por modificación se entiende la deleción de una o más fracciones de hidrato de carbono encontradas en el anticuerpo y/o la adición de uno o más sitios de glucosilación que no están presentes en el anticuerpo parental. La glucosilación

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de anticuerpos es normalmente una unión a N o a O. Unión a N se refiere a la unión de la fracción de hidrato de carbono a la cadena lateral de un resto de asparragina. Las secuencias tripeptídica asparragina-X-serina y asparragina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática de la fracción de hidrato de carbono a la cadena lateral de asparragina. Por lo tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias tripeptídicas en un polipéptido crea un posible sitio de glucosilación. Glucosilación unida a O se refiere a la unión de uno de los azúcares N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, aunque también pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5- hidroxilisina.

La adición de sitios de glucosilación al anticuerpo se lleva a cabo convenientemente modificando la secuencia de aminoácidos de tal forma que contenga una o más de las secuencias tripeptídicas descritas anteriormente (para sitios de glucosilación unida a N). La modificación puede realizarse también mediante la adición de, o sustitución por, uno o más restos de serina o treonina a la secuencia del anticuerpo original (para sitios de glucosilación unidos a O).

Secuencia

Un anticuerpo monoclonal puede comprender una LCVR que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 178-243 y/o una HCVR que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 56-121. En una realización preferente, un anticuerpo comprende una LCVR que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 178-243 y comprende adicionalmente una HCVR que comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 56-121, en el que las HCVR y la LCVR presentes en un anticuerpo existen juntas en un Fab enumerado en la Tabla 1. Por ejemplo, un anticuerpo que comprende un

polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID nO: 178, preferentemente comprende

adicionalmente un polipéptido de HCVR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las sEq ID NO: 56, 60, 68-93 y 95. Además, un anticuerpo de la invención que comprende un

polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 241, preferentemente comprende

adicionalmente un polipéptido de HCVR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ iD NO: 118 y 106. El experto en la materia apreciará que los anticuerpos de la invención no se limitan a las secuencias específicas de la HCVR y la LCVR que se enumeran en la Tabla 1 en el presente documento, sino que también incluyen variantes de estas secuencias que, cuando están presentes en un anticuerpo anti IL-17, conservan o mejoran la capacidad de unión al antígeno y al menos otra propiedad funcional del anticuerpo parental, por ejemplo, la especificidad de epítopo, la capacidad de competir con el anticuerpo parental por la unión a IL-17, los valores de CI50 y/o los valores Kd o koff para la unión a IL-17 humana.

Además, un anticuerpo monoclonal es uno que se inhibe competitivamente la unión a IL-17 humana (o una porción de la misma que comprende DGNVDYH) mediante un anticuerpo monoclonal competidor, en el que el anticuerpo monoclonal competidor comprende dos polipéptidos con las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEQ ID NO: 241 (LCVR) y 118 (HCVR). Dicha inhibición competitiva entre anticuerpos puede medirse mediante ensayos de la técnica, por ejemplo, un ensayo ELISA de competición.

Preferentemente, un anticuerpo de la invención que compite con el anticuerpo competidor definido anteriormente se caracteriza adicionalmente por unirse específicamente a IL-17 humana, pero no unirse a IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL- 17E o IL-17F humanas. De forma adicional, el anticuerpo se caracteriza adicionalmente por unirse específicamente a IL-17 humana y a IL-17 de mono cinomolgo, pero no se une a IL-17 de rata o IL-17 ratón a niveles mayores que el fondo.

Más preferentemente, un anticuerpo de la invención que compite por la unión a IL-17 humana con un anticuerpo competidor que comprende las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEQ ID NO: 241 y 118, se caracteriza adicionalmente por la unión a un epítopo no lineal de IL-17 humana que comprende los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 276). Incluso más preferentemente, un anticuerpo de la invención que compite por la unión a IL-17 humana con un anticuerpo competidor que comprende las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEQ ID NO: 241 y 118 se caracteriza adicionalmente por tener una Kd para IL-17 humana de menos de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM o 6 pM, preferentemente de menos de aproximadamente 5,5 pM, 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente de menos de aproximadamente 4 pM y/o se caracteriza por una CI50, preferentemente en un ensayo informador de IL-8 in vitro, que es menor a 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM o 500 pM, o por una CI50 en un ensayo informador de GROa in vitro de menos de aproximadamente 560 pM, y/o tiene una constante de disociación (koff) para IL-17 humana de menos de 5 x 10'5, 4 x 10'5, 3 x 10'5 o 2 x 10'5 s-1.

En una realización, un anticuerpo anti IL-17 de la invención tiene una región variable de la cadena pesada y una región variable de la cadena ligera, en la que la región variable de la cadena pesada comprende regiones CDR con las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRH1 (SEQ ID NO: 244), CDRh2 (SEQ ID nO: 245) y CDRH3 (SEQ ID NO: 246); y/o en la que la región variable de la cadena ligera comprende regiones CDR con las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRL1 (SEQ ID NO: 247), CDRL2 (SEQ ID NO: 248) y CDRL3 (SEQ ID NO: 249). Preferentemente, las seis CDR de un anticuerpo de la invención existen juntas como en un Fab enumerado en la Tabla 1 en el presente documento. Incluso más preferentemente, las CDR de la cadena pesada están en el contexto de las siguientes secuencias de armazón: una FR1 con la SEQ ID NO: 262, una FR2 con la SEQ ID NO: 263, una FR3 con la SEQ ID NO: 264 y una FR4 con la SEQ ID NO: 265 y las CDR de la cadena ligera están en el contexto

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de las siguientes secuencias de armazón: una FR1 con la SEQ ID NO: 266, una FR2 con la SEQ ID NO: 267, una FR3 con la SEQ ID NO: 268 y una FR4 con la SEQ ID NO: 269, en las que el orden desde extremo amino es FR1- CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.

Se contempla adicionalmente que un anticuerpo anti IL-17 de la invención comprenda una HCVR que comprende una CDRH1 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 11-28 y/o una CDRH2 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 29-32 y/o una CDRH3 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 33-55 y 261. En otra realización, un anticuerpo anti IL-17 de la invención comprende una LCVR que comprende una CDRL1 que

comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 122-149 y/o una CDRL2 que

comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 150-167 y/o una CDRL3 que

comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 168-177. En una realización

preferente, un anticuerpo anti IL-17 de la invención comprende una HCVR que comprende una CDRH1 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 11-28 y/o una CDRH2 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 29-32 y/o una CDRH3 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 33-55 y 261, y comprende adicionalmente una LCVR que comprende una CDRL1 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 122-149 y/o una CDRL2 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 150-167 y/o una CDRL3 que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 168-177.

La composición que comprende una CDR de la invención será en general una secuencia de la cadena pesada o ligera de un anticuerpo o una parte sustancial de la misma, en que la CDR se emplaza en una ubicación coherente con la numeración de Kabat. Las tres regiones CDR para cada cadena, la pesada y la ligera, se proporcionan en una región marco conservada como una secuencia contigua representada por la siguiente fórmula: FR1-CDR1-FR2- CDR2-FR3-CDR3-FR4. FR1, FR2, FR3 y FR4 de la cadena pesada o ligera se combinan para formar la región marco conservada completa de un anticuerpo cuando se disponen como una secuencia contigua con las CDR en el orden establecido. Preferentemente, las regiones marco conservadas de un anticuerpo de la invención son de origen humano o de origen sustancialmente humano (es decir, mayor de aproximadamente el 80, 82, 85, 87, 90, 92, 95, 97 %).

En un anticuerpo humanizado para el uso terapéutico en seres humanos, la secuencia del armazón es preferentemente total o sustancialmente de origen humano. Preferentemente, la región marco conservada de la cadena ligera de un anticuerpo humanizado, humano o quimérico de la invención comprende una FR1 con la SEQ ID NO: 266, una FR2 con la SEQ ID NO: 267, una FR3 con la SEQ ID NO: 268 y una FR4 con la SEQ ID NO: 269. Preferentemente, la región marco conservada de la cadena pesada de un anticuerpo humanizado, humano o quimérico de la invención comprende una FR1 con la SEQ ID NO: 262, una FR2 con la SEQ ID NO: 263, una FR3 con la SEQ ID NO: 264 y una Fr4 con la SEQ ID NO: 265. Por ejemplo, una realización preferente de una LCVR del anticuerpo 126 de la invención, como se describe en las Tablas 1, 2 y 3 en el presente documento, comprende (polipéptidos en orden desde el extremo N) una FR1 con la SEQ ID NO: 266, una CDR1 con la SEQ ID NO: 131, una Fr2 con la SEQ ID NO: 267, una CDR2 con la SEQ ID NO: 167, una FR3 con la SEQ ID NO: 268, una CDR3 con la SEQ ID NO: 168 y una FR4 con la SEQ ID NO: 269. La secuencia completa de la LCVR, unida operativamente a una región constante kappa humana, es como se muestra en la SEQ ID NO: 274. Además, una realización preferente de la HCVR del anticuerpo 126 de la invención comprende (en orden desde el extremo N) una FR1 con la SEQ ID NO: 262, una CDR1 con la SEQ ID NO: 26, una FR2 con la SEQ ID NO: 262, una CDR2 con la SEQ ID NO: 30, una FR3 con la SEQ ID NO: 264, una CDR3 con la SEQ ID NO: 52 y una FR4 con la SEQ ID NO: 265. La secuencia completa de la HCVR, unida operativamente a una región Fc de IgG4, es como se muestra en la SEQ ID NO: 273.

En una realización, un anticuerpo anti IL-17 de la invención, en el que toda o una porción de la región variable se limita a una secuencia particular, como se muestra en una SEQ ID NO en el presente documento (véase, por ejemplo, las Tablas 1-3), se caracteriza adicionalmente por ser un anticuerpo quimérico, humanizado o completamente humano, o una porción de unión a antígeno del mismo, que antagoniza o neutraliza in vivo o in vitro al menos una actividad de IL-17 humana. Un anticuerpo para IL-17 de la invención, en el que toda o una porción de la región variable se limita a una secuencia particular, como se muestra en una SEQ ID NO en el presente documento, se caracteriza adicionalmente por unirse específicamente a IL-17 humana pero no por unirse a IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E o IL-17F humanas. De forma adicional, el anticuerpo se caracteriza adicionalmente por unirse específicamente a IL-17 humana y a IL-17 de mono cinomolgo, pero no se une a IL-17 de rata o IL-17 ratón a niveles mayores que el fondo.

Más preferentemente, tal anticuerpo se caracteriza adicionalmente por unirse a un epítopo no lineal de IL-17 humana que comprende los aminoácidos DGNVDYH (SEQ ID NO: 276), en el que el anticuerpo se pone en contacto con el polipéptido con la SEQ ID NO: 276. Incluso más preferentemente, tal anticuerpo se caracteriza adicionalmente por tener una Kd para IL-17 humana de menos de aproximadamente 7 pM, 6,5 pM o 6 pM, preferentemente de menos de aproximadamente 5,5 pM, 5 pM o 4,5 pM, y muy preferentemente de menos de aproximadamente 4 pM y/o se caracteriza por una CI50, preferentemente en un ensayo informador de IL-8 in vitro, que es menor a 700 pM, 650 pM, 600 pM, 560 pM, 550 pM o 500 pM, o una CI50 en un ensayo informador de GROa in vitro de menos de aproximadamente 560 pM, y/o tiene una constante de disociación (koff) para IL-17 humana de menos de 5 x 10'5, 4 x

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10-5, 3 x 10-5 o 2 x 10-5 s-1 Expresión de anticuerpos

Además se desvelan líneas celulares que expresan un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención o una porción del mismo. La creación y aislamiento de líneas celulares que producen un anticuerpo monoclonal de la invención se pueden lograr usando técnicas convencionales conocidas en la técnica. Las líneas celulares preferentes incluyen COS, CHO, SP2/0, NS0 y levaduras (disponibles bancos públicos tales como la ATCC, Colección americana de cultivos tipo, Manassas, VA).

Se puede usar una amplia diversidad de sistemas de expresión hospedadores para expresar un anticuerpo de la presente invención, incluyendo sistemas de expresión procariotas y eucariotas (tales como en levadura, baculovirus, células vegetales, de mamífero y otras células animales, en animales transgénicos y células de hibridoma), así como sistemas de expresión de presentación en fagos. Un ejemplo de un vector de expresión bacteriano adecuado es pUC 119 y un vector de expresión eucariota adecuado es un vector pcDNA3.1 modificado con un sistema de selección por dhfr debilitado. Otros sistemas de expresión de anticuerpos también son conocidos en la técnica y se contemplan en el presente documento.

Un anticuerpo de la invención puede prepararse por expresión recombinante de los genes de las cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina en una célula hospedadora. Para expresar un anticuerpo de forma recombinante, se transforma, transduce, infecta, o similar, una célula hospedadora, con uno o más vectores de expresión recombinante que portan fragmentos de ADN que codifican las cadenas ligera y/o pesada de inmunoglobulina del anticuerpo, de modo que las cadenas ligera y/o pesada se expresan en la célula hospedadora. La cadena pesada y la cadena ligera pueden expresarse independientemente a partir de distintos promotores a los que están unidas operativamente en un vector o, como alternativa, la cadena pesada y la cadena ligera pueden expresarse independientemente a partir de distintos promotores a los que están unidas operativamente en dos vectores, uno que expresa la cadena pesada y otro que expresa la cadena ligera. Opcionalmente, la cadena pesada y la cadena ligera se pueden expresar en distintas células hospedadoras. Preferentemente, los anticuerpos recombinantes se secretan en el medio en que se cultivan las células hospedadoras, a partir del cual los anticuerpos se pueden recuperar o purificar. Se utilizan metodologías convencionales de ADN recombinante para obtener los genes de las cadenas pesada y ligera de anticuerpos, incorporar estos genes en vectores de expresión recombinantes e introducir los vectores en células hospedadoras. Dichas tecnologías convencionales de ADN recombinante se describen, por ejemplo, en Sambrook, Fritsch y Maniatis (Eds.), Molecular Cloning; A Laboratory Manual, segunda edición, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Ausubel, y col. (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, 1989.

Un ADN aislado que codifica una región HCVR puede convertirse en un gen de cadena pesada de longitud completa uniendo operativamente el ADN que codifica la HCVR con otra molécula de ADN que codifica regiones constantes de la cadena pesada (CH1, CH2 y CH3). Las secuencias de los genes de la región constante de la cadena pesada humana son conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Kabat, y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, publicación del NIH n.° 91-3242 (1991). Los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones se pueden obtener, por ejemplo, mediante amplificación por PCR convencional. La región constante de la cadena pesada puede ser una región constante de cualquier tipo, (por ejemplo, IgG, IgA, IgE, IgM o IgD), clase (por ejemplo, IgG-i, IgG2, IgG3 y IgG4) o subclase, y cualquier variante alotípica de la misma, como se describe en Kabat (citado anteriormente). Como alternativa, la porción de unión a antígeno puede ser un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab')2, un Fd o un Fv monocatenario (scFv). Para un gen de la cadena pesada de un fragmento Fab, el ADN que codifica la HCVR se puede unir operativamente a otra molécula de ADN que codifica solo una región constante de CH1 de la cadena pesada.

Un ADN aislado que codifica una región LCVR puede convertirse en un gen de la cadena ligera de longitud completa (así como en un gen de la cadena ligera de un Fab) ligando operativamente el ADN que codifica la LCVR con otra molécula de ADN que codifica una región constante de la cadena ligera, CL. Las secuencias de los genes de la región constante de la cadena ligera humana son conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Kabat, anteriormente citados. Los fragmentos de ADN que abarcan estas regiones se pueden obtener mediante amplificación por PCR convencional. La región constante de la cadena ligera puede ser una región constante kappa o lambda.

Para crear un gen de scFv, los fragmentos de ADN que codifican las HCVR y LCVR están unidos operativamente a otro fragmento que codifica un enlazador flexible, por ejemplo, que codifica la secuencia de aminoácidos (Gly4-Ser)3, de modo que las secuencias de las HCVR y LCVR se pueden expresar como una proteína monocatenaria contigua, con las regiones LCVR y HCVR unidas por el enlazador flexible. Véase, por ejemplo, Bird, y col., Science 242:423-6, 1988; Huston, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-83, 1988; McCafferty, y col., Nature 348:552-4, 1990.

En una realización, la invención proporciona un vector, preferentemente (pero sin limitación) un plásmido, un vector de expresión recombinante, un vector de expresión en levadura o un vector de expresión retrovírica que comprende un polinucleótido que codifica un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención. Como alternativa, un vector de la invención comprende un polinucleótido que codifica una LCVR y/o un polinucleótido que codifica una HCVR de la invención. Cuando están presentes en el mismo vector secuencias que codifican tanto la LCVR como la HCVR,

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pueden ser transcritas de forma independiente, cada una a partir de un promotor distinto, al que está unida operativamente. Si las secuencias que codifican la LCVR y la HCVR están presentes en el mismo vector y se transcriben a partir de un promotor al que ambas están unidas operativamente, la LCVR puede estar a 5' de la HCVR o la LCVR puede estar a 3' de la HCVR, además, la región codificante de las LCVR y HCVR en el vector puede estar separada por una secuencia enlazadora de cualquier tamaño o contenido, preferentemente tal enlazador, cuando está presente, es un polinucleótido que codifica un sitio interno de entrada al ribosoma.

Para expresar un anticuerpo de la invención, un ADN que codifica una cadena ligera y/o pesada de longitud parcial o completa, obtenido como se describe anteriormente, se inserta en un vector de expresión de manera que el gen esté unido operativamente a secuencias de control transcripcional y traduccional. El vector de expresión y las secuencias de control de la expresión se eligen para que sean compatibles con la célula hospedadora de expresión usada. El gen de la cadena ligera del anticuerpo y el gen de la cadena pesada del anticuerpo se pueden insertar en vectores distintos o, más normalmente, ambos genes se insertan en el mismo vector de expresión. Los genes de anticuerpo se insertan en el vector de expresión mediante procedimientos convencionales. De forma adicional, el vector de expresión recombinante puede codificar un péptido señal que facilite la secreción de la cadena ligera y/o pesada del anticuerpo monoclonal anti IL-17 a partir de una célula hospedadora. El gen de la cadena ligera y/o pesada del anticuerpo monoclonal anti IL-17 se puede clonar en el vector de manera que el péptido señal esté unido operativamente en fase con el extremo amino del gen de la cadena del anticuerpo. El péptido señal puede ser un péptido señal de inmunoglobulina o un péptido señal heterólogo.

Además del gene (o los genes) de la cadena pesada y/o ligera del anticuerpo, un vector de expresión recombinante de la invención porta secuencias reguladoras que controlan la expresión del gen (o los genes) del anticuerpo en una célula hospedadora. Se pretende que la expresión "secuencia reguladora" incluya promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación), según sea necesario, que controlen la transcripción y la traducción del gen (o genes) de las cadenas de anticuerpo. El diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de las secuencias reguladoras, puede depender de factores tales como la elección de la célula hospedadora a transformar, el nivel de expresión de proteína deseado. Las secuencias reguladoras preferentes para la expresión en células hospedadoras de mamífero, incluyen elementos víricos que dirigen altos niveles de expresión de proteínas en células de mamíferos, tales como promotores y/o potenciadores obtenidos de citomegalovirus (CMV), virus del simio 40 (SV40), adenovirus, (por ejemplo, el promotor tardío principal de adenovirus (AdMLP)) y poliomavirus.

Además de los genes de la cadena pesada y/o ligera del anticuerpo y de las secuencias reguladoras, los vectores de expresión recombinantes de la invención pueden portar secuencias adicionales, tales como secuencias que regulan la replicación del vector en las células hospedadoras (por ejemplo, orígenes de replicación) y uno o más genes marcadores seleccionables. El gen marcador seleccionable facilita la selección de las células hospedadoras en las que el vector se ha introducido. Por ejemplo, normalmente, el gen marcador seleccionable confiere resistencia a fármacos, tales como G418, higromicina o metotrexato, en una célula hospedadora en la que se ha introducido el vector. Los genes marcadores seleccionables preferentes incluyen el gen de la dihidrofolato reductasa (dhfr) (para su uso en células hospedadoras sin dhfr con selección/amplificación por metotrexato), el gen neo (para la selección con G418) y la glutamina sintasa (GS) en una línea celular negativa para GS (tal como NS0), para la selección/amplificación.

Para la expresión de las cadenas liviana y/o pesada, el vector (o vectores) de expresión que codifican las cadenas pesada y/o ligera se introduce en una célula hospedadora mediante técnicas convencionales, por ejemplo, electroporación, precipitación con fosfato de calcio, transfección por DEAE-dextrano, transducción, infección y similares. Aunque es teóricamente posible expresar los anticuerpos de la invención en células hospedadoras procariotas o eucariotas, son preferentes las células eucariotas y muy preferentemente las células hospedadoras de mamífero, debido a que es más probable que tales células ensamblen y secreten un anticuerpo plegado de forma adecuada y activo desde el punto de vista inmunológico. Las células hospedadoras de mamífero preferentes para expresar los anticuerpos recombinantes de la invención incluyen células de ovario de hámster chino (células CHO) [que incluyen células CHO negativas para dhfr, descritas en Urlaub y Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20, 1980, utilizadas con un marcador seleccionable DHFR, por ejemplo, como se describe en Kaufman y Sharp, J. Mol. Biol. 159:601-21, 1982], células de mieloma NS0, células cOs y células SP2/0. Cuando los vectores de expresión recombinantes que codifican genes de anticuerpos se introducen en células hospedadoras de mamífero, se producen los anticuerpos cultivando las células hospedadoras durante un periodo suficiente para permitir la expresión del anticuerpo en las células hospedadoras o, más preferentemente, la secreción del anticuerpo en el medio de cultivo en el que se hacen crecer las células hospedadoras en condiciones apropiadas conocidas en la técnica. Los anticuerpos pueden recuperarse a partir de la célula hospedadora y/o del medio de cultivo usando procedimientos de purificación convencionales.

Las células hospedadoras también pueden usarse para producir porciones, o fragmentos, de anticuerpos intactos, por ejemplo, fragmentos Fab o moléculas scFv, por técnicas que son convencionales. Un experto en la materia entenderá que las variaciones del procedimiento anterior están dentro del ámbito de la presente invención. Por ejemplo, puede ser conveniente transfectar una célula hospedadora con ADN que codifica la cadena ligera o la cadena pesada de un anticuerpo de la presente invención. La tecnología de ADN recombinante también puede usarse para eliminar parte o todo el ADN que codifica cualquiera de o ambas cadenas ligera y pesada que no sean

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necesarias para la unión a IL-17. Las moléculas expresadas a partir de tales moléculas de ADN truncadas también están abarcadas por los anticuerpos de la invención.

La invención proporciona una célula hospedadora que comprende una molécula de ácido nucleico de la presente invención. Preferentemente, una célula hospedadora de la invención comprende uno o más vectores, o construcciones, que comprenden una molécula de ácido nucleico de la presente invención. La célula huésped de la invención es una célula en la cual se ha introducido un vector de la invención, comprendiendo dicho vector un polinucleótido que codifica una LCVR de un anticuerpo de la invención y/o un polinucleótido que codifica una HCVR de la invención. La invención también proporciona una célula hospedadora en la cual se han introducido dos vectores de la invención; uno que comprende un polinucleótido que codifica una LCVR de un anticuerpo de la invención y uno que comprende un polinucleótido que codifica una HCVR presente en un anticuerpo de la invención, cada uno unido operativamente a una secuencia promotora. Los tipos de célula hospedadora incluyen células de mamífero, bacterianas, vegetales y levaduras. Preferentemente la célula hospedadora es una célula CHO, una célula COS, una célula SP2/0, una célula NS0, una célula de levadura o un derivado o progenie de cualquier tipo celular preferente.

En un sistema preferente para la expresión recombinante de un anticuerpo de la invención, se introduce un vector de expresión recombinante que codifica tanto la cadena pesada del anticuerpo como la cadena ligera del anticuerpo en células CHO sin dhfr mediante, por ejemplo, transfección mediada por fosfato de calcio. Dentro del vector de expresión recombinante, los genes de la cadena pesada y ligera del anticuerpo están unidos operativamente a los elementos reguladores potenciadores/promotores (por ejemplo, procedentes de SV40, CMV, adenovirus y similares, tal como un elemento regulador potenciador de CMV/promotor de AdMLP, o un elemento regulador potenciador de SV40/promotor de AdMLP), para impulsar altos niveles de transcripción de los genes. El vector de expresión recombinante también porta un gen dhfr, lo que permite la selección de células CHO que se han transfectado con el vector usando la selección/amplificación por metotrexato. Las células hospedadora transformantes seleccionadas se cultivan para permitir la expresión de las cadenas ligera y pesada del anticuerpo, y el anticuerpo intacto se recupera del medio de cultivo. Se usan técnicas convencionales de biología molecular para preparar el vector de expresión recombinante, transfectar las células hospedadoras, seleccionar los transformantes, cultivas las células hospedadoras y recuperar el anticuerpo del medio de cultivo. Los anticuerpos, o porciones de unión al antígeno de los mismos, de la invención, se puede expresar en un animal (por ejemplo, un ratón), que sea transgénico para genes de inmunoglobulina humana (véase, por ejemplo, Taylor, y col., Nucleic Acids Res. 20:6287-95, 1992).

Una vez expresados, los anticuerpos intactos, sus dímeros, las cadenas ligera y pesada individuales, u otras formas de inmunoglobulina de la presente invención, se pueden purificar de acuerdo con procedimientos convencionales de la técnica, incluyendo precipitación con sulfato de amonio, intercambio iónico, afinidad, fase inversa, columna de cromatografía de interacción hidrófoba, electroforesis en gel y similares. Son preferentes para usos farmacéuticos inmunoglobulinas sustancialmente puras de al menos aproximadamente el 90 %, 92 %, 94 % o 96 % de homogeneidad, y más preferentemente del 98 a 99 % o más de homogeneidad. Una vez purificados, parcialmente o hasta la homogeneidad según se desee, los péptidos se pueden usar después terapéutica o profilácticamente, como se indica en el presente documento.

Anticuerpo quimérico

Como se usa en el presente documento, la expresión "anticuerpo quimérico" incluye inmunoglobulinas monovalentes, divalentes o polivalentes. Un anticuerpo quimérico monovalente es un dímero formado por una cadena pesada quimérica asociada a través de puentes disulfuro con una cadena ligera quimérica. Un anticuerpo quimérico divalente es un tetrámero formado por dos dímeros de cadena pesada-cadena ligera asociados a través de al menos un puente disulfuro.

Una cadena pesada quimérica de un anticuerpo comprende una región de unión a antígeno precedente de la cadena pesada de un anticuerpo específico para IL-17 no humano, que está unido operativamente a al menos una porción de una región constante de la cadena pesada tal como CH1 o CH2, o preferentemente a una región constante de la cadena pesada de longitud completa, de ser humano, o sustancialmente de ser humano (o de una especie distinta de la que procede la región de unión al antígeno). Una cadena ligera quimérica de un anticuerpo para su uso en seres humanos comprende una región de unión a antígeno procedente de forma total, o substancialmente, de la cadena ligera de un anticuerpo específico para IL-17 no humano, unida operativamente a al menos una porción de una región constante de la cadena ligera (CL) o preferentemente a una región constante de la cadena ligera de longitud completa de ser humano, o sustancialmente de ser humano (o una especie distinta de la que procede la región de unión a antígeno). Los anticuerpos, fragmentos o derivados que tienen cadenas pesadas quiméricas y cadenas ligeras de la misma o distinta especificidad de unión a la región variable, también se pueden preparar por la asociación apropiada de las cadenas polipeptídicas individuales, de acuerdo con etapas del procedimiento conocido.

Con este enfoque, los hospedadores que expresan cadenas pesadas quiméricas se cultivan por separado a partir de hospedadores que expresan cadenas ligeras quiméricas, y las cadenas de inmunoglobulina se recuperan por separado y después se asocian. Como alternativa, los hospedadores pueden cocultivarse y dejar que las cadenas se asocien espontáneamente en el medio de cultivo, seguido de la recuperación de la inmunoglobulina o fragmento ensamblado. Se conocen en la técnica procedimientos para producir anticuerpos quiméricos (véanse, por ejemplo,

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las patentes de Estados Unidos N.°: 6.284.471, 5.807.715, 4.816.567 y 4.816.397).

Anticuerpos humanizados

Preferentemente, un anticuerpo de la invención a utilizar con fines terapéuticos tendría la secuencia del armazón y de la región constante (en la medida en que existan en el anticuerpo) procedentes del mamífero en el que se usaría como producto terapéutico, para disminuir la posibilidad de que el mamífero suscite una respuesta inmunitaria frente al anticuerpo terapéutico. Los anticuerpos humanizados son de particular interés dado que se consideran valiosos para la aplicación terapéutica y evitan la respuesta de anticuerpos humanos anti ratón, observada frecuentemente con los anticuerpos de roedor. De forma adicional, en los anticuerpos humanizados la porción efectora del anticuerpo es de origen humano, por lo que puede interactuar mejor con los otros componentes del sistema inmunitario humano (por ejemplo, destruir las células diana de forma más eficaz, mediante citotoxicidad dependiente del complemento o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos). Además, los anticuerpos humanizados inyectados pueden tener una semivida más similar a la de los anticuerpos humanos de origen natural que, por ejemplo, los anticuerpos murinos, permitiendo de este modo proporcionar dosis más pequeñas y menos frecuentes. La expresión "anticuerpo humanizado", como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo que comprende porciones de anticuerpos de distinto origen, en el que al menos una porción es de origen humano. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado puede comprender porciones procedentes de un anticuerpo de origen no humano con la especificidad requerida, tal como de un ratón, y de un anticuerpo de origen humano, unidas químicamente mediante técnicas convencionales (por ejemplo, sintéticas) o preparadas como un polipéptido contiguo usando técnicas de ingeniería genética.

Preferentemente, un "anticuerpo humanizado" tiene las CDR que se originan (o se originan sustancialmente) en un anticuerpo no humano (preferentemente un anticuerpo monoclonal de ratón), mientras que el armazón y la región constante, en la medida en que esté presente, (o una porción significativa o sustancial de la misma, es decir, al menos aproximadamente el 90 %, 92 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 %) están codificados por información de secuencias de ácido nucleico que se encuentra en la región de inmunoglobulinas de la estirpe germinal humana (véase, por ejemplo, la International ImMunoGeneTics Database) o en formas recombinadas o mutadas de los mismos, ya sea dichos anticuerpos se produzcan o no en células humanas.

Las CDR de un anticuerpo humanizado pueden modificarse u optimizarse a partir de las CDR del anticuerpo parental no humano del que se originaron, para generar las propiedades deseadas, por ejemplo, especificidad, afinidad y/o unión preferencial. Las CDR modificadas u optimizadas pueden tener sustituciones, adiciones y/o deleciones de aminoácidos, en comparación con las CDR parentales, de preferencia aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 en total dentro de los seis dominios CDR. Por ejemplo, las posiciones de aminoácidos de las CDR que están subrayadas y en negrita en las Tablas 2 y 3 son posiciones que se han modificado a partir de las CDR como se muestra en el Fab 1 de las Tablas 2 y 3. Como alternativa, el anticuerpo murino 2321 puede ser un anticuerpo parental para la comparación de las CDR de un anticuerpo de la invención.

Las formas humanizadas de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) incluyen un anticuerpo intacto, un anticuerpo sustancialmente intacto, una porción de un anticuerpo que comprende un sitio de unión a antígeno, o una porción de un anticuerpo que comprende un fragmento Fab, un fragmento Fab', uno F(ab')2 o un fragmento Fv monocatenario. Los anticuerpos humanizados contienen preferentemente una secuencia mínima procedente de una inmunoglobulina no humana. Los anticuerpos humanizados también pueden comprender restos que no se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en la CDR importada o en las secuencias de armazón. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todo de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en que todos o sustancialmente todos los aminoácidos de las regiones CDR corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todos o sustancialmente todos los aminoácidos de las regiones FR son los de la secuencia consenso de una inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprende de forma óptima al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), normalmente la de una inmunoglobulina humana. [Jones y col., Nature, 321:522-525, 1986; Riechmann y col., Nature, 332:323-329, 1988; y Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596, 1992.]

Los anticuerpos humanizados pueden someterse a mutagénesis in vitro usando procedimientos de uso rutinario en la técnica (o, cuando se usa un animal transgénico para las secuencias de Ig humanas, mutagénesis somática in vivo) y, por lo tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones marco conservadas de las regiones HCVR y LCVR de los anticuerpos recombinantes humanizados son secuencias que, aunque proceden de las relacionadas con las secuencias de HCVR y LCVR de la estirpe germinal humana, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de la estirpe germinal de anticuerpos humanos in vivo. Se contempla que tales secuencias de aminoácidos de las regiones marco conservadas de HCVR y LCVR de los anticuerpos recombinantes humanizados sean al menos el 90 %, 92 %, 94 %, 95 %, 96 %, 98 % o más preferentemente al menos el 99 % idéntico a una secuencia de estirpe germinal humana. Preferentemente, los restos de armazón del anticuerpo parental (por ejemplo, anticuerpo murino o generalmente el anticuerpo del que procede el anticuerpo humanizado) que mantienen o afectan las estructuras del sitio de combinación se conservarán. Estos restos pueden identificarse, por ejemplo, mediante cristalografía de rayos X del anticuerpo parental o del fragmento Fab, identificando de este modo la estructura tridimensional del sitio de unión a antígeno. Una estrategia para humanizar anticuerpos es elegir una secuencia de estirpe germinal humana con la mayor homología con el armazón del anticuerpo parental, como el

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armazón para recibir las CDR del donante. Este enfoque de estirpe germinal está basado en el mismo razonamiento que la estrategia de mejor ajuste, pero solo se buscan las secuencias de estirpe germinal en las bases de datos.

El anticuerpo humanizado de la presente invención puede comprender u obtenerse de un armazón de la cadena ligera de estirpe germinal humana. En realizaciones particulares, la secuencia de estirpe germinal de la cadena ligera se selecciona de las secuencias VK humanas que incluyen, pero sin limitación, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, O1 O11, 012, 014, 018, 02, 04 y 08. En determinadas realizaciones, este armazón de estirpe germinal humano de la cadena ligera se selecciona de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1- 19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 y V5-6.

En otras realizaciones, el anticuerpo humanizado de la presente invención puede comprender u obtenerse de un armazón de cadena pesada de estirpe germinal humana. En realizaciones particulares, este armazón de estirpe germinal humano de la cadena pesada se selecciona de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 y VH7-81. Para una descripción de las distintas secuencias de estirpe germinal véase el documento PCT WO 2005/005604.

En realizaciones particulares, la región variable de la cadena ligera y/o la región variable de la cadena pesada comprenden una región marco conservada o al menos una porción de una región marco conservada (por ejemplo, que contengan 2 o 3 subregiones, tales como FR2 y FR3). En determinadas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3 o FRL4 es completamente humana. En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3 o FRH4 es completamente humana. En algunas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3 o FRL4 es una secuencia de estirpe germinal (por ejemplo, estirpe germinal humana) o comprende secuencias consenso humanas para el armazón particular. En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3 o FRH4 es una secuencia de estirpe germinal (por ejemplo, estirpe germinal humana) o comprende secuencias consenso humanas para el armazón particular. En realizaciones preferentes, toda la región marco conservada es una región marco conservada humana.

En general, se pueden producir anticuerpos humanizados obteniendo secuencias de ácido nucleico que codifican las HCVR y LCVR de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo o anticuerpo murino producido por un hibridoma, que se une a un epítopo de IL-17 de la invención, identificando las CDR en dichas HCVR y LCVR (no humanas) e injertando tales secuencias de ácido nucleico que codifican CDR en secuencias de ácido nucleico que codifican el armazón humano seleccionado. Opcionalmente, una región CDR puede optimizarse mutagenizando aleatoriamente o en emplazamientos particulares, para sustituir uno o más aminoácidos en la CDR por un aminoácido distinto antes de injertar la región CDR en la región marco conservada. Como alternativa, una región CDR puede optimizarse después de la inserción en la región marco conservada humana, utilizando procedimientos disponibles para un experto en la materia. Preferentemente, las secuencias de aminoácidos del armazón humano se seleccionan de manera sea probable que el anticuerpo resultante sea adecuado para la administración in vivo a seres humanos. Esto se puede determinar, por ejemplo, basándose en el uso previo de anticuerpos que contienen tal secuencia de armazón humano. Preferentemente, la secuencia del armazón humano no será en si misma significativamente inmunogénica.

Como alternativa, las secuencias de aminoácidos de los armazones para el anticuerpo a humanizar se pueden comparar con las secuencias de armazones humanas conocidas, las secuencias armazón humanas a utilizar para el injerto de CDR y se seleccionan basándose en las secuencias que comprenden altamente similares a las del anticuerpo parental, por ejemplo, un anticuerpo murino que se une a lL-17 (por ejemplo, un anticuerpo que comprende una HCVR con la SEQ ID NO: 270 y que comprende adicionalmente una LcVr con la SEQ ID nO: 271). Se han aislado numerosas secuencias de armazón humano y sus secuencias se informan en la técnica. Esto aumenta la probabilidad de que el anticuerpo humanizado injertado con CDR resultante, que contiene las CDR del parental (por ejemplo, murinas) o las CDR optimizadas del anticuerpo parental injertado en armazones humanos seleccionados (y posiblemente también la región constante humana), conserve sustancialmente la estructura de unión al antígeno y conserve así la afinidad de unión del anticuerpo parental. Para conservar un grado significativo de afinidad de unión al antígeno, las regiones marco conservadas humanas seleccionadas serán, preferentemente, las que se espera que sean adecuadas para la administración in vivo, es decir, no inmunogénicas.

En cualquier procedimiento, se obtiene la secuencia de ADN que codifica las regiones HCVR y LCVR del anticuerpo anti IL-17 preferentemente murino. Se conocen en la técnica los procedimientos para la clonación de secuencias de ácidos nucleicos que codifican inmunoglobulinas. Tales procedimientos pueden, por ejemplo, implicar la amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de las secuencias que codifican inmunoglobulinas a clonar, utilizando cebadores apropiados. Se han informado en la bibliografía los cebadores adecuados para amplificar secuencias de ácido nucleico de inmunoglobulina y específicamente secuencias de HCVR y LCVR murinas. Después de haber clonado tales secuencias que codifican inmunoglobulinas, estas se secuenciarán mediante procedimientos bien conocidos en la técnica.

Después de que las secuencias que codifican las CDR se injertan en las secuencias que codifican el armazón humano seleccionadas, las secuencias de ADN resultantes que codifican las secuencias pesadas variables y ligeras

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variables "humanizadas" se expresan después para producir un Fv humanizado o anticuerpo humanizado que se une a IL-17. Las HCVR y LCVR humanizadas pueden expresarse como parte de una molécula de anticuerpo anti IL- 17 completa, es decir, como una proteína de fusión con secuencias de dominio constante humano cuyas secuencias de ADN codificante se han obtenido a partir de una biblioteca disponible en el mercado o que se han obtenido usando, por ejemplo, uno de los procedimientos descritos anteriormente para obtener secuencias de ADN, o que están en la técnica. Sin embargo, las secuencias de HCVR y LCVR también se pueden expresar en ausencia de las secuencias constantes, para producir un Fv anti IL-17 humanizado. No obstante, la fusión de secuencias constantes humanas en la región variable es potencialmente conveniente debido a que el anticuerpo anti IL-17 humanizado resultante puede poseer funciones efectoras humanas.

Los procedimientos para sintetizar ADN que codifica una proteína de secuencia conocida son bien conocidos en la técnica. Utilizando tales procedimientos, Las secuencias de ADN que codifican las secuencias de HCVR y LCVR humanizadas objeto (con o sin regiones constantes) se sintetizan y después se expresan en un sistema de vector adecuado para la expresión de anticuerpos recombinantes. Esto puede efectuarse en cualquier sistema de vector que proporcione las secuencias de HCVR y LCVR humanizadas objeto a expresar como una proteína de fusión con secuencias de dominio constante humano y a asociar para producir anticuerpos funcionales (unión a antígeno) o fragmentos de anticuerpo.

Las secuencias de dominio constante humano son conocidas en la técnica, y se han informado en la bibliografía. Las secuencias de la cadena ligera constantes humanas preferentes incluyen las secuencias de las cadenas ligeras constantes kappa y lambda. Las secuencias de las cadenas pesadas constantes humanas preferentes incluyen IgG1 humana, IgG2 humana, IgG3 humana, IgG4 humana (véase, por ejemplo, las SEQ ID NO: 257-260, respectivamente) y versiones mutadas de las mismas que proporcionan una función efectora modificada, por ejemplo, semivida in vivo potenciada, unión al receptor Fc reducida, perfil de desamidación alterado y similares.

Si están presente, las regiones marco conservadas humanas proceden preferentemente de una región variable de anticuerpo humano que tiene una similitud con secuencia con la región análoga o equivalente del donante de la región de unión a antígeno (es decir, el anticuerpo parental). Otras fuentes de regiones marco conservadas para porciones de origen humano de un anticuerpo humanizado incluyen secuencias consenso variables humanas (véase, por ejemplo, Kettleborough, C.A. y col. Protein Engineering 4:773-783 (1991); Carter y col., documento WO 94/04679. Por ejemplo, la secuencia del anticuerpo o de la región variable utilizada para obtener la porción no humana se puede comparar con secuencias humanas, como se describe en Kabat y col. Sequences of Proteins of Immunological Interest, quinta edición, NIH, U.S. Government Printing Office (1991). En una realización particularmente preferente, las regiones marco conservadas de una cadena de anticuerpo humanizado se obtienen de una región variable humana que tiene al menos aproximadamente el 60 % de identidad de secuencia global, preferentemente al menos aproximadamente el 70%, 80 % o 90 % de identidad de secuencia global, y más preferentemente al menos aproximadamente el 85% de identidad de secuencia global, con la región variable del donante no humano. Una porción humana también puede obtenerse de un anticuerpo humano que tiene al menos aproximadamente el 65 % de identidad de secuencia, y preferentemente al menos aproximadamente el 70 % de identidad de secuencia, dentro de la porción particular (por ejemplo, FR) que se está usando, cuando se compara con la porción equivalente (por ejemplo, FR) del donante no humano.

Las referencias que describen adicionalmente los procedimientos implicados en la humanización de un anticuerpo de ratón que pueden usarse son, por ejemplo, Queen y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2869, 1991; patente de Estados Unidos n.° 5.693.761; patente de Estados Unidos n.° 4.816.397; patente de Estados Unidos n.° 5.225.539; los programas informáticos ABMOD y ENCAD descritos en Levitt, M., J. Mol. Biol. 168:595-620, 1983; la humanización puede realizarse esencialmente siguiendo el procedimiento de Winter y colaboradores (Jones y col., Nature, 321:522-525, 1986; Riechmann y col., Nature, 332:323-327, 1988; Verhoeyen y col., Science, 239:1534- 1536, 1988).

Anticuerpos humanos

Como alternativa a la humanización se pueden generar anticuerpos humanos. Se pueden producir anticuerpos humanos usando diversas técnicas conocidas en la técnica, incluyendo las bibliotecas de presentación en fagos (Hoogenboom y Winter, J. Mol. Biol., 227:381, 1991; Marks y col., J. Mol. Biol., 222:581, 1991). Las técnicas de Cole y col. y Boerner y col. también están disponibles para la preparación de anticuerpos monoclonales humanos (Cole y col., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, pág. 77 (1985) y Boerner y col., J. Immunol., 147:86- 95, 1991). De forma similar, los anticuerpos humanos pueden fabricarse introduciendo locus de inmunoglobulina humana en animales transgénicos, por ejemplo, ratones en los cuales los genes de inmunoglobulina endógenos se han inactivado parcialmente o por completo. Tras la inmunización, por ejemplo, con un antígeno que comprende una epítopo inmunogénico de la invención, se obtiene un repertorio completo de producción de anticuerpos humanos, que se asemeja mucho al observado en los humanos en todos los aspectos, incluyendo el reordenamiento génico, el ensamblaje y el repertorio de anticuerpos. Esta estrategia se describe, por ejemplo, en las patentes de EE.UU. n.° 5.545.807; 5.545.806; 5.569.825; 5.589.369; 5.591.669; 5.625.126; 5.633.425; 5.661.016 y en las siguientes publicaciones científicas: Marks y col., BioTechnology 10:779-783, 1992; Lonberg y col., Nature 368: 856-859, 1994; Morrison, Nature 368: 812-13, 1994; Fishwild y col., Nature Biotechnology 14:845-51, 1996; Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); Lonberg y Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995) y Jobkobovits y col., Proc.

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Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551, 1993.

Los genes de inmunoglobulina humana introducidos en el ratón, creando así ratones transgénicos que tienen la capacidad de responder frente a antígenos con anticuerpos que tienen secuencias humanas, también se describen en Bruggemann y col. (Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 86:6709-6713, 1989). Existen varias estrategias para la generación de mamíferos que producen anticuerpos humanos. En particular, existe el enfoque de "minilocus", en el cual se imita un locus de Ig exógeno a través de la inclusión de segmentos (por ejemplo, genes individuales) del locus de Ig (véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos N.° 5.545.807, 5.545.806, 5.625.825, 5.625.126, 5.633.425, 5.661.016, 5.770.429, 5.789.650 y 5.814.318, 5.612.205, 5.721.367, 5.789.215), la introducción por YAC de fragmentos grandes y sustancialmente de estirpe germinal de los locos de Ig (véase Mendez y col., Nature Genetics 15:146-156, 1997; Green y Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495, 1998) y la introducción de locus completos o sustancialmente completos a través del uso de la fusión de microcélulas (véase la solicitud de patente europea n.° EP 0 843 961 A1).

Cualquier ratón transgénico que tenga la capacidad de responder a la inmunización con anticuerpos que tengan secuencias humanas se puede usar para producir un anticuerpo anti IL-17 de la invención, cuando se usan procedimientos disponibles para un experto en la materia, por ejemplo, cuando tal ratón se inmuniza con un polipéptido que comprende un epítopo inmunogénico de la invención.

Usos

Los anticuerpos de la presente invención son útiles en aplicaciones terapéuticas, profilácticas, de diagnóstico y de investigación, como se describe en el presente documento. Se puede usar un anticuerpo de la invención para diagnosticar un trastorno o enfermedad asociada con la expresión de IL-17 humana. De manera similar, el anticuerpo de la invención se puede usar en un ensayo para controlar los niveles de IL-17 en un sujeto que se analiza en cuanto a una afección asociada a IL-17. Las aplicaciones de investigación incluyen procedimientos que utilizan el anticuerpo de la invención y un marcador para detectar IL-17 en una muestra, por ejemplo, en un fluido corporal humano o en una célula o extracto de tejido. Los anticuerpos de la invención pueden usarse con o sin modificación, y están marcados por unión covalente o no covalente de una fracción detectable. La fracción detectable puede ser cualquiera que sea capaz de producir, directa o indirectamente, una señal detectable. Por ejemplo, la fracción detectable puede ser un radioisótopo tal como, por ejemplo, 3H, 14C, 32P, 35S o 125I, un compuesto fluorescente o quimioluminiscente, tal como isotiocianato de fluoresceína, rodamina o luciferina; o una enzima, tal como fosfatasa alcalina, beta galactosidasa o peroxidasa de rábano picante. Se puede emplear cualquier procedimiento conocido en la técnica para conjugar por separado el anticuerpo con la fracción detectable, incluyendo los procedimientos descritos por Hunter, y col., Nature 144:945, 1962; David, y col., Biochemistry 13: 1014, 1974; Pain, y col., J. Immunol. Meth. 40: 219, 1981; y Nygren, J. Histochem. and Cytochem. 30: 407, 1982.

Se conocen en la técnica una diversidad de protocolos convencionales para medir IL-17, incluyendo, por ejemplo, los ELISA, los RIA y FACS, y proporcionan una base para diagnosticar niveles alterados o anómalos de expresión de IL- 17. Los valores de expresión normales o convencionales se establecen usando cualquier técnica conocida en la técnica, por ejemplo, combinando una muestra que comprende un polipéptido IL-17 con, por ejemplo, anticuerpos en condiciones adecuadas para formar un complejo antígeno:anticuerpo. El anticuerpo se marca directa o indirectamente con una sustancia detectable, para facilitar la detección del anticuerpo unido o no unido. Las substancias detectables incluyen diversas enzimas, grupos prostéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes y materiales radioactivos. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rebano picante, fosfatasa alcalina, la p-galactosidasa o acetilcolinesterasa; los ejemplos de complejos de grupos prostéticos adecuados incluyen estreptavidina/biotina y avidina/biotina; los ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina flouresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; un ejemplo de material luminiscente incluye luminol; y los ejemplos de un material radiactivo incluyen 125I, 131I, 35S o 3H. (Véase, por ejemplo, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)). La cantidad de complejo convencional formado se cuantifica por diversos procedimientos, tales como, por ejemplo, procedimientos fotométricos. Las cantidades de polipéptido de IL-17 expresadas en las muestras se comparan después con los valores patrón.

Por una cuestión de conveniencia, los anticuerpos de la presente invención se pueden proporcionar en un kit, una combinación de reactivos embalada en cantidades predeterminadas, con instrucciones para realizar el ensayo de diagnóstico. Cuando el anticuerpo está marcado con una enzima, el kit incluirá los sustratos y cofactores necesarios para la enzima (por ejemplo, un precursor de sustrato que proporciona el cromóforo o fluoróforo detectable). Además, pueden incluirse otros aditivos, tales como estabilizadores, tampones (por ejemplo, un tampón de bloqueo o tampón de lisis) y similares. Las cantidades relativas de los diversos reactivos pueden variarse ampliamente para proporcionar concentraciones en solución de los reactivos que optimicen sustancialmente la sensibilidad del ensayo. En particular, los reactivos pueden proporcionarse como polvo seco, habitualmente liofilizado, que incluyen excipientes que en disolución proporcionarán una solución de reactivo que tiene la concentración adecuada.

Usos terapéuticos para el anticuerpo

La IL-17 es una citocina proinflamatoria secretada por linfocitos T activados en los sitios de inflamación, no en la

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circulación sistémica; no es fácilmente detectable en el suero o los tejidos de una persona sana. La IL-17 regula por incremento moléculas de adhesión, induce la producción de múltiples citocinas inflamatorias y quimiocinas de diversos tipos celulares, incluyendo sinoviocitos, condrocitos, fibroblastos, células endoteliales, células epiteliales, induciendo de este modo la incorporación de neutrófilos a un sitio de inflamación, estimula la producción de prostaglandinas y metaloproteinasas, e inhibe la síntesis de proteoglucanos. Además, IL-17 desempeña un papel importante en la maduración de las células progenitoras hematopoyéticas. La IL-17 tiene un papel de señalización en distintos órganos y tejidos, incluyendo pulmón, cartílago articular, del hueso, del cerebro, células hematopoyéticas, riñón, piel e intestino. La IL-17 comparte el 15-27 % de homología de aminoácidos con IL-17 B, C y E y el 44-50 % de homología de aminoácidos con iL-17 D y F. IL-17 se une al receptor de IL-17 con baja afinidad (aproximadamente de 1 nM), mientras que otros miembros de la familia IL-17 no se unen al receptor de IL-17.

Los niveles aumentados de IL-17 (es decir, IL-17A) se han asociado con varias afecciones, incluyendo la inflamación de las vías respiratorias, AR, osteoartritis, erosión ósea, abscesos y adherencias intraperitoneales, EII, rechazo de aloinjertos, psoriasis, determinados tipos de cánceres, angiogénesis, ateroesclerosis y Em. Tanto IL-17 como IL-17R están regulados por incremento en el tejido sinovial de pacientes con AR. La IL-17 ejerce su papel en la patogenia de la AR a través de rutas dependientes e independientes de IL-1-p y TNF-a. La IL-17 estimula la secreción de otras citocinas y quimiocinas, por ejemplo, TNF-a, IL-1 p, IL-6, IL-8 y Gro-a. La IL-17 contribuye de forma directa a la evolución de la enfermedad en la RA. La inyección de IL-17 en las rodillas de un ratón estimula la destrucción articular, independientemente de la actividad deIL-1 p (Ann. Rheum. Dis. 59:529-32, 2000). El anticuerpo anti IL-1p no tiene efecto sobre la inflamación inducida por IL-17 y el daño articular (J. Immunol. 167:1004-1013, 2001). En un modelo murino de artritis inducida por PCE, IL-17 indujo la infiltración de células inflamatorias y el empobrecimiento de proteoglicanos en ratones de tipo silvestre, y genosuprimidos para IL-1 p y para TNF-a. Los ratones genosuprimidos para IL-17 son fenotípicamente normales en ausencia de exposición al antígeno, pero tienen una artritis notablemente reducida después de la inmunización con colágeno de tipo II (J. Immunol. 171:6173-6177, 2003).

La esclerosis múltiple ("EM") es una enfermedad autoinmunitaria caracterizada por una inflamación del sistema nervioso central ("SNC") que daña la vaina de mielina que rodea los axones. Una característica distintiva de la EM es que los linfocitos T se infiltran en el SNC. La EM afecta a más de 350.000 personas en los EE. UU. a 2, 5 millones en todo el mundo. Existen muchas formas y la más común es la enfermedad recurrente/remitente ("EMRR") seguida de una fase secundaria progresiva. La opción terapéutica actual consiste en interferón-p (AVONEX, BETASERON y REBIF), que reduce la tasa de recaída/agravamiento en el 31 % -34 %, pero puede producir síntomas de tipo gripal y/o síntesis de anticuerpos neutralizantes (por ejemplo, aproximadamente el 15% de los pacientes que reciben AVONEX producen anticuerpos neutralizantes en 18 meses). TYSABRI, aprobado por la FDA para la EMRR, se retiró posteriormente del mercado debido a problemas de inmunosupresión del SNC. Todavía existe una necesidad médica no satisfecha en el tratamiento de la EM. El ARNm de IL-17 está aumentado en lesiones de EM y en células mononucleares (CMN) en sangre, y el líquido cefalorraquídeo de pacientes con EM. Durante el agravamiento clínico de la EM se detectan números más elevados de CMN en sangre que expresan ARNm de IL-17, en comparación con la remisión (Multiple Sclerosis, 5:101-104, 1999). Además, la encefalomielitis autoinmunitaria experimental ("EAE"), un modelo animal preclínico para la EM, está significativamente suprimida en ratones genosuprimidos para IL-17.

Por lo tanto, una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la invención puede ser útil para el tratamiento o prevención de afecciones en las que la presencia de IL-17 provoca o contribuye a los efectos patológicos no deseados, o la disminución de la actividad de IL-17 tiene un beneficio terapéutico en mamíferos, preferentemente en seres humanos, incluyendo, pero sin limitación, inflamación de las vías respiratorias, asma, AR, osteoartritis, erosión ósea, abscesos y adherencias intraperitoneales, EII, rechazo de aloinjertos, psoriasis, determinados tipos de cánceres, angiogénesis, ateroesclerosis y EM, así como otros trastornos, afecciones, enfermedades o estados inflamatorios, incluyendo, pero sin limitación: los eritematosos, las respuestas a la exposición a alérgenos, la gastritis asociada Helicobacter pylori, asmas bronquial y rechazo de aloinjertos (por ejemplo, renal), lupus eritematoso sistémico (LES) y nefritis lúpica. Se contempla en el presente documento el uso de un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la presente invención para el tratamiento o la prevención de al menos uno de los trastornos mencionados anteriormente, en que la actividad de IL-17 es perjudicial o que se benefician de los niveles disminuidos de IL-17 bioactivo. De forma adicional, se contempla el uso de un anticuerpo monoclonal anti-IL- 17 de la presente invención para su uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de al menos uno de los trastornos mencionados anteriormente.

Como se usa en el presente documento, los términos "tratamiento", "que trata" y similares, se refieren a obtener un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico en términos de prevenir completa o parcialmente una enfermedad o un síntoma de la misma y/o puede ser terapéutico en términos de una cura parcial o completa para una enfermedad y/o un efecto adverso atribuible a la enfermedad. "Tratamiento", como se usa en el presente documento, incluye la administración de un compuesto de la presente invención para el tratamiento de una enfermedad o afección en un mamífero, particularmente en un ser humano, e incluye: (a) prevenir que se produzca la enfermedad en un sujeto que pueda tener predisposición a la enfermedad, pero al que aún no se le ha diagnosticado que la tenga; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; y (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de la enfermedad o trastorno, o aliviar los síntomas o complicaciones del mismo. Pueden ajustarse las pautas posológicas para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica). Por ejemplo, se puede administrar una única dosis embolada, se pueden administrar

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varias dosis divididas a lo largo del tiempo o se puede reducir o aumentar proporcionalmente la dosis como indiquen las exigencias de la situación terapéutica.

Composición farmacéutica

Un anticuerpo de la invención puede incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a un sujeto (véase, por ejemplo, el Ejemplo 14). Los compuestos de la invención pueden administrarse en solitario o en combinación con un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable, en dosis únicas o múltiples. Las composiciones farmacéuticas para la administración están diseñadas para ser apropiadas para el modo de administración seleccionado, y se utilizan según sea apropiado diluyentes, vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes de dispersión, tampones, tensioactivos, conservantes, agentes solubilizantes, agentes de isotonicidad, agentes estabilizantes y similares (véase, por ejemplo, el Ejemplo 14 en el presente documento). Dichas composiciones se diseñan en conformidad con técnicas convencionales tales como en, por ejemplo, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1995, que proporciona un compendio de técnicas de formulación, como es generalmente conocido por los profesionales.

Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 de la presente invención se puede administrar a un sujeto en riesgo o que presenta patologías, como se describe en el presente documento, usando técnicas de administración habituales que incluyen la administración oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o por supositorios.

Una composición farmacéutica de la invención es preferentemente una "cantidad terapéuticamente eficaz" o una "cantidad profilácticamente eficaz" de un anticuerpo de la invención. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para conseguir el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo puede variar de acuerdo con factores tales como la patología, la edad, el sexo y el peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo o porción de anticuerpo de suscitar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz es también una en que cualquier efecto tóxico o perjudicial del anticuerpo, está compensado por los efectos beneficiosos terapéuticos. Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para conseguir el resultado profiláctico deseado. Normalmente, dado que una dosis profiláctica se usa en sujetos antes de, en una fase temprana, de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz será menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.

Una cantidad terapéuticamente eficaz o profilácticamente eficaz es al menos la dosis mínima, pero menos que una dosis tóxica, de un agente activo, que es necesaria para conferir un beneficio terapéutico a un sujeto. Dicho de otro modo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención es una cantidad que, en mamíferos, preferentemente en seres humanos, disminuye una bioactividad de IL-17, por ejemplo, la unión a IL17R, en la que la presencia de IL-17 provoca o contribuye a efectos patológicos no deseados o a una disminución de los niveles de IL- 17 da como resultado un efecto terapéutico beneficioso en un mamífero, preferentemente un ser humano.

La vía de administración de un anticuerpo de la presente invención puede ser oral, parenteral, mediante inhalación o tópica. Preferentemente, los anticuerpos de la invención pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración parenteral. El término parenteral como se usa en el presente documento incluye la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, rectal, vaginal o intraperitoneal. Es preferente la administración sistémica periférica por inyección intravenosa o intraperitoneal, o subcutánea. Los vehículos adecuados en la técnica para tales inyecciones son simples.

La composición farmacéutica normalmente debe ser estéril y estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento en el recipiente proporcionado, incluyendo, por ejemplo, un vial sellado o jeringa. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas pueden esterilizarse por filtración después de hacer la formulación o hacerse microbiológicamente aceptables de otra forma. Una composición típica para infusión intravenosa puede tener un volumen de hasta 250-1000 ml de líquido, tal como solución de Ringer estéril, solución salina fisiológica, solución de dextrosa y solución de Hank, y una dosis terapéuticamente eficaz, (por ejemplo, de 1 a 100mg/ml, o más) de concentración de anticuerpo. La dosis puede variar dependiendo del tipo y gravedad de la enfermedad. Como se sabe en la técnica médica, las dosificaciones para un sujeto cualquiera depende de muchos factores, que incluyen el tamaño del paciente, el área de superficie corporal, la edad, el compuesto particular a administrar, el sexo, el tiempo y la vía de administración, el estado general de salud y otros fármacos que se estén administrando de forma concurrente. Una dosis típica puede estar, por ejemplo, en el intervalo de 0,001 a 1000 |jg; sin embargo, se prevén dosis por encima y por debajo de este intervalo ejemplar, teniendo en consideración especialmente los factores anteriormente mencionados. El pauta posológica parenteral diaria puede ser de aproximadamente 0,1 pg/kg a aproximadamente 100mg/kg de peso corporal total, preferentemente de aproximadamente 0,3 jg/kg a aproximadamente 10mg/kg y más preferentemente, de aproximadamente 1 jg/kg a 1 mg/kg, incluso más preferentemente de aproximadamente 0,5 a 10 mg/kg de peso corporal por día. El progreso puede controlarse mediante una evaluación periódica. Para administraciones repetidas a lo largo de varios días o un periodo mayor, dependiendo de la afección, el tratamiento se repite hasta que se produzca una supresión deseada de los síntomas de enfermedad. Sin embargo, pueden ser útiles y no están excluidas del presente documento otras pautas

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posológicas. La dosificación deseada puede administrarse mediante la administración de una única inyección embolada, mediante múltiples administraciones de inyecciones emboladas o mediante la administración de anticuerpos por infusión continua, dependiendo del patrón de descomposición farmacocinética que el profesional desee lograr.

Estas cantidades de anticuerpo sugeridas están sujetas en gran medida al criterio terapéutico. El factor clave para seleccionar una dosis adecuada y la programación es el resultado obtenido. Los factores para la consideración en este contexto incluyen el trastorno particular que se está tratando, el mamífero particular que se está tratando, la afección clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del anticuerpo, el tipo particular de anticuerpo, el procedimiento de administración, el programa de administración y otros factores conocidos para los facultativos.

Los agentes terapéuticos de la invención pueden congelarse o liofilizarse para el almacenamiento y reconstituirse en un vehículo estéril adecuado antes de su uso. La liofilización y la reconstitución pueden conducir a grados variables de pérdida de actividad del anticuerpo. Las dosificaciones pueden tener que ajustarse para compensar. Generalmente, es preferente un pH entre 6 y 8.

Artículo de fabricación.

Se desvela un artículo de fabricación que se proporciona, que contiene materiales útiles para el tratamiento o la prevención de los trastornos o afecciones descritos anteriormente. El artículo de fabricación comprende un recipiente y una etiqueta. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales, jeringas y tubos de ensayo. Los recipientes pueden estar formados de una diversidad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente contiene una composición de un anticuerpo de la invención que es eficaz para prevenir o tratar el trastorno o afección, y puede tener un orificio de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica). El agente activo de la composición es un anticuerpo anti IL-17 de la invención. La etiqueta en, o asociada con, el recipiente indica que la composición se usa para tratar la dolencia de afección de elección. El artículo de fabricación puede comprender adicionalmente un segundo recipiente que comprende un tampón farmacéuticamente aceptable, tal como solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir adicionalmente otros materiales convenientes desde un punto de vista comercial y de usuario, incluyendo otros tampones, diluyentes, filtros, agujas, jeringas y prospectos de envase con instrucciones para su uso.

Los siguientes ejemplos se ofrecen solo a fines ilustrativos y no se pretende que limiten en ningún modo el ámbito de la presente invención.

TABLA 1 NUMEROS SEQ ID

n.° de Fab: LCVR CDR1 ligera CDR2 ligera CDR3 ligera HCVR H-CDR1 H-CDR2 H-CDR3

1: 178 122 150 168 56 11 29 33

2: 179 122 150 169 57 11 29 34

3: 180 123 150 168 56 11 29 33

4: 181 124 150 168 58 11 29 35

5: 179 122 150 169 59 11 29 36

6: 182 124 150 169 60 11 29 37

7: 183 125 150 170 56 11 29 33

8: 184 124 150 171 61 11 29 38

9: 185 124 150 170 62 11 29 39

10: 178 122 150 168 60 11 29 37

11: 181 124 150 168 61 11 29 38

12: 186 124 150 172 63 11 29 40

13: 187 123 150 169 64 11 29 41

14: 188 123 150 173 65 11 29 42

15: 189 124 150 174 66 11 29 43

16: 181 124 150 168 62 11 29 39

17: 187 123 150 169 61 11 29 38

18: 181 124 150 168 67 11 29 44

19: 190 124 150 175 56 11 29 33

20: 178 122 150 168 68 12 29 33

21: 178 122 150 168 69 13 29 33

22: 178 122 150 168 70 14 29 33

23: 178 122 150 168 71 15 29 33

24: 178 122 150 168 72 16 29 33

25: 178 122 150 168 73 17 29 33

26: 178 122 150 168 74 18 29 33

27: 178 122 150 168 75 19 29 33

28: 178 122 150 168 76 20 29 33

29: 178 122 150 168 77 21 29 33

30: 178 122 150 168 78 22 29 33

31: 178 122 150 168 79 23 29 33

32: 178 122 150 168 80 24 29 33

33: 178 122 150 168 81 11 30
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34: 178 122 150 168 82 11 31 33

35: 178 122 150 168 83 11 32 33

36: 178 122 150 168 58 11 29 35

37: 178 122 150 168 84 11 29 45

38: 178 122 150 168 85 11 29 261

39: 178 122 150 168 86 11 29 47

40: 178 122 150 168 87 11 29 48

41: 178 122 150 168 88 11 29 49

42: 178 122 150 168 89 11 29 50

43: 178 122 150 168 90 11 29 51

44: 178 122 150 168 91 11 29 52

45: 178 122 150 168 92 11 29 53

46: 178 122 150 168 93 11 29 54

47: 191 125 150 168 56 11 29 33

48: 192 126 150 168 56 11 29 33

49: 193 127 150 168 56 11 29 33

50: 194 128 150 168 56 11 29 33

51: 195 129 150 168 56 11 29 33

52: 196 130 150 168 56 11 29 33

53: 197 131 150 168 56 11 29 33

54: 198 132 150 168 56 11 29 33

55: 199 133 150 168 56 11 29 33

56: 200 134 150 168 56 11 29 33

57: 201 135 150 168 56 11 29 33

58: 202 136 150 168 56 11 29 33

59: 203 137 150 168 56 11 29 33

60: 204 138 150 168 56 11 29 33

61: 205 139 150 168 56 11 29 33

62: 206 140 150 168 56 11 29 33

63: 199 133 150 168 56 11 29 33

64: 207 141 150 168 56 11 29 33

65: 208 142 150 168 56 11 29 33

66: 209 143 150 168 56 11 29 33

67: 210 144 150 168 56 11 29 33

68: 211 122 151 168 56 11 29 33

69: 212 122 150 176 56 11 29 33

70: 213 122 150 177 56 11 29 33

71: 214 145 150 168 94 25 29 46

72: 191 125 150 168 95 26 29 46

73: 215 146 150 168 96 26 29 55

74: 199 133 150 168 97 26 29 48

75: 178 122 150 168 95 26 29 46

76: 199 133 150 168 95 26 29 46

78: 178 122 150 168 98 26 29 47

79: 195 129 150 168 99 27 29 46

80: 195 129 150 168 97 26 29 48

82: 199 133 150 168 98 26 29 47

84: 199 133 150 168 100 26 29 52

85: 191 125 150 168 98 26 29 47

86: 191 125 150 168 95 26 29 46

87: 216 147 150 168 95 26 29 46

88: 199 133 150 168 94 25 29 46

89: 196 130 150 168 100 26 29 52

91: 195 129 150 168 97 26 29 48

92: 216 147 150 168 97 26 29 48

93: 195 129 150 168 101 27 29 48

94: 199 133 150 168 95 26 29 46

95: 217 130 152 168 98 26 29 47

96: 218 125 153 168 102 26 32 46

97: 219 145 154 168 97 26 29 48

98: 199 133 150 168 98 26 29 47

99: 199 133 150 168 95 26 29 46

100: 220 125 155 168 103 26 32 33

101: 221 133 156 168 95 26 29 46

102: 222 148 157 168 95 26 29 46

103: 223 130 158 168 104 26 32 46

104: 224 145 159 168 104 26 32 46

105: 225 130 150 169 105 26 32 47

106: 226 133 160 168 106 26 29 47

107: 227 130 161 169 107 25 32 48

108: 228 133 162 169 108 25 29 47

109: 229 130 163 168 109 27 32 46

110: 230 131 164 169 100 26 29 52

111: 231 146 165 168 95 26 29 46

112: 232 125 166 168 97 26 29 48

113: 199 133 150 168 110 27 29 47

114: 233 129 159 168 106 26 29 47

115: 234 133 167 168 106 26 29 47

116: 235 149 167 168 110 27 29 47

117: 236 125 167 168 111 28 32 53

118: 234 133 167 168 112 26 30 53

119: 237 122 167 168 100 26 29 52

120: 238 122 167 169 112 28 30 46

121: 239 147 167 169 113 28 32 46

122: 237 122 167 168 114 26 30 53

123: 236 125 167 168 115 26 29 53

124: 240 131 167 168 116 11 30 53

125: 178 122 150 168 117 26 32 52

126: 241 131 167 168 118 26 30 52

127: 241 131 167 168 106 26 29 47

128: 242 129 167 169 119 27 30 47

129: 236 125 167 168 120 26 30 52

130: 243 129 167 168 119 27 30 47

131: 236 125 167 168 117 26 32 52

132: 236 125 167 168 121 27 30 52

Tabla 2 Alineamientos de CDR de cadena pesada

n.°

de

Fab

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 11 12

13

14

15

16

17

18

CDR1

GYSFTDYNMN

imagen1

SEQ ID CDR2 NO

11

VINPNYGTTDYNQRFKG

imagen2

SEQ ID CDR3 SEQ ID

NO NO

29

YDYWTGTGGY

YDYATGTGAY

YDYWTGTGAY

YDYÁTGTGLY

YDYATGTGGY

YDYATGTGAY

YDYATGTGVY

YDYHTGTGGY

YDYATGTGGY

YDYATGTGVY

YDYATGTGTY

YDYFTGTGGY

YDYFTGTGPY

YDYYTGTGGY

YDYHTGTGGY

YDYATGTGVY

YDYSTGTGGY

imagen3

33

34 33

35

36

37 33

38

39 73

38

40

41

42

43

39 38

44

n.°

de

Fab

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

59

60

61

E11

04-

SE

NC

33

35

45

26

47

48

49

50

51

52

53

54

33

GYSFTDYNMN

GYSFTDYNIN

GYSFTDYNLN

GYSFGDYNMN

GYSFRDYNMN

GYSFTWYNMN

GYSFNDYNMN

GYSFTDYNMS

GYSFTDYNTN

GYSFPDYNMN

HYSFTDYNMN

GYHFTDYNMN

GYPFTDYNMN

GYSFTDFNMN

GYSFTDYNMN

SEQ ID CDR3 NC

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20 21 22

23

24 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11

VINPNYGTTDYNQRFKG

VINPMYGTTDYNQRFKG

VINPAYGTTDYNQRFKG

VINPEYGTTDYNQRFKG

VINPNYGTTDYNQRFKG

29

30

31

32 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29 29

YDYATGTGAY

YDYWTGTGAY

YDYSTGTGAY

YDAFTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYHTGTGAY

YDYLTGTGAY

YDYATSTGAY

YDYAPGTGAY

YDYFTGTGVY

YDYYTGTGVY

YDPATGTGAY

YDYATGTGAY

n.°

de

Fab

62

63

64

65

66

67

68

69

70

71

72

73

74

75

76

78

79

80

82

84

85

86

87

88

89

91

92

93

94

95

96

97

98

99

100

101

102

103

104

105

106

107

108

E11

04-

SE

NC

33

46

55

48

46

47

46

48

47

52

47

46

52

48

46

47

46

48

47

46

33

46

47

48

47

GYSFTDYNMN

GYSFTDYHLG

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHLG

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHLG

SEQ ID NC

11

25

26 26 26 26 26 26 27 26 26 26 26 26 26

25

26 26 26 27 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 26 25 25

VINPNYGTTDYNQRFKG

VINPEYGTTDYNQRFKG

VINPNYGTTDYNQRFKG

VINPEYGTTDYNQRFKG

VINPNYGTTDYNQRFKG

VINPEYGTTDYNQRFKG

VINPNYGTTDYNQRFKG

VINPEYGTTDYNQRFKG

VINPNYGTTDYNQRFKG

29

32

29

32

29

32

29

32

29

YDYATGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYHTGTGVY

YDYHTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYHTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGVY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYFTGTGVY

YDYHTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYHTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYATGTGAY

YDYFTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYHTGTGAY

YDYYTGTGAY

n.°

de

Fab

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

n.° de

Fab

1

2

3

4

5

E11

04-

SE

NC

46

52

46

48

47

53

52

46

53

52

47

52

47

52

SEC

NC

168

169

168

169

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHIS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYNMN

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

GYSFTDYHIH

GYSFTDYHMS

27 VINPEYGTTDYNQRFKG 32

26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

27 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

27 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

28 VINPEYGTTDYNQRFKG 32

26 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

28 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

28 VINPEYGTTDYNQRFKG 32

26 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

11 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32

26 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPNYGTTDYNQRFKG 29

27 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

27 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

26 VINPEYGTTDYNQRFKG 32

27 VINPMYGTTDYNQRFKG 30

YDYFTGTGAY

YDYFTGTGVY

YDYFTGTGAY

YDYHTGTGAY

YDYYTGTGAY

YDYYTGTGVY

YDYFTGTGVY

YDYFTGTGAY

YDYYTGTGVY

YDYFTGTGVY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGVY

YDYYTGTGAY

YDYFTGTGVY

Consenso:

SEQ ID NO: 244 X1YX3FX5X6X7XsXgX10 X1 es H o G X3 es S,H o P X5 es G,R,T,N o P X6 es D o W X7 es Y o F Xa es N o H X9 es M,T,L o I X10 es N,G,H o S

SEQ ID NO: 245 VINPX5YGTTDYNQRFKG X5 es N,A,M o E

SEQ ID NO: 246 YDX3X4X5X6TGX9Y X3 es Y,A o P X4 es Y,F,H,S,W,L o A X5 es T o P X6 es G o S Xg es A,G,L,V o T

Tabla 3 Alineamientos de CDR de cadena ligera

CDR1

RSSQSLVHSRGNTYLH

RSSQSLVHSHGNTYLH

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSRGNTYLH

SEQ ID NO:

122

123

124 122

CDR2

KVSNRFS

SEQ ID NO:

150

CDR3

SQSTHLPFT

SQSTHYPFT

SQSTHLPFT

SQSTHYPFT

n.° de Fab 6

7

8

9

10 11 12

13

14

15

16

17

18

19

20 21 22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48

CDR1

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSYGNTYLH

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSRGNTYLH

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSHGNTYLH

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSHGNTYLH

RSSQSLVHSNGNTYLH

RSSQSLVHSRGNTYLH

RSSKSLVHSRGNTYLH

RSSQSWHSRGNTYLH

SEQ ID NO:

124

125 124 124 122 124 124 123

123

124 124

123

124

124 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122 122

125

126

CDR2

KVSNRFS

SEQ ID NO:

150

CDR3

SQSTHYPFT

SQSTHIPFT

SQSLHVPFT

SQSTHIPFT

SQSTHLPFT

SQSTHEPFT

SQSTHYPFT

NQSTHVPFT

SQTTHVPFT

SQSTHLPFT

SQSTHYPFT

SQSTHLPFT

SQSMHVPFT

SQSTHLPFT

SEQ ID NO

169

170

171 170 168 168

172 169

173

174 168 169 168

175 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168

n.° de Fab

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

59

60 61 62

63

64

65

66

67

68

69

70

71

72

73

74

75

76

78

79

80 82

84

85

86

87

88 89

91

92

93

94

95

96

“«i i^QID

VSSQSLVHSRGNTYLH 127

RSSASLVHSRGNTYLH 128

RSSQSLKHSRGNTYLH 12g

RSSQSLRHSRGNTYLH 130

RSSRSLVHSRGNTYLH 131

RSHQSLVHSRGNTYLH 132

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSQSLVHNRGNTYLH -|34

RSSQSLVHSRGRTYLH 135

RSSQSLVHRRGNTYLH 136

RSSQSLVHSRGNTYTH 137

RSSQSLVHSRGNTYSH 133

RSSQSLVHSRGNTYHH i3g

RSSQSLVHARGNTYLH 140

RSSQSLVHSRGNTYFH 133

RSSQSLVHSRGNTWLH 141

RSSQSLVHSRGNVYLH 142

RSSQSLVHSRGKTYLH 143

RSSQSLVHLRGNTYLH 144

RSSQSLVHSRGNTYLH 122

RSSKSLVHSRGNTFLH 145

RSSKSLVHSRGNTYLH 125

RSSQSLRHSRGNTFLH 146

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSQSLVHSRGNTYLH 122

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSQSLVHSRGNTYLH 122

RSSQSLKHSRGNTYLH 129

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSKSLVHSRGNTYLH 125

RSSQSLKHSRGNTFLH 147

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSQSLRHSRGNTYLH 130

RSSQSLKHSRGNTYLH 129

RSSQSLKHSRGNTFLH 147

RSSQSLKHSRGNTYLH 129

RSSQSLVHSRGNTFLH 133

RSSQSLRHSRGNTYLH 130

RSSKSLVHSRGNTYLH 125

CDR2

KVSNRFS

KVSNRFJ_

KVSNRFS

KVSNRFH

KVANRFS

SEQ ID NO:

150

167

150

152

153

CDR3

SQSTHLPFT

SQTTHLPFT

SQSTSLPFT

SQSTHLPFT

SEQ ID NO 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168

176

177 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168 168

n.° c

Fab

97

98

99

100

101

102

103

104

105

106

107

108

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

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SEQ ID NO:

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125

133

148 130

145 130 133 130 133

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CDR2

KVSVRFS

KVSNRFS

KVSNNFS

KVDNRFS

KVTNRFS

KVSNIFS

KVSTRFS

KVSNRFS

KVRNRFS

KVPNRFS

KVSNRFV

KVSNRIS

KVSNRFT

KVSNRNS

KVHNRFS

KVSNRFS

KVSTRFS

KVSNRFJ_

KVSNRFj_

KVSNRFS

KVSNRFj_

KVSNRFI

SEQ ID NO:

154 150 150

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SQSTHLPFT

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Consenso:

SEQ ID NO: 247: SEQ ID NO: 248 SEQ ID NO: 249

X1SX3X4SX6X7HX9X10GX12X13X14X15H: X1VX3X4RX6X7 X.,QX3X4XsX6PFT

X1 es R o V: X3 es K o I X1 es S o N

X3 es S o H: X3 es S,A,D,T,R,H o P X3 es S o T

X4 es Q,K,R o A: X4 es N,V o T X4 es T,L o M

X6 es V o L: X5 es R,I o N X5 es H o S

X7 es R,V o K: X6 es F,I o N o X6 es L,I,V,E o Y

X9 es S,N,R,A o L: X7 es S,H,I,T o V

X10 es H,R,N o Y X12 es N,K o R X13 es T o V X14 es F,Y o W X15 es L,T,S,H o F

Ejemplos

Ejemplo 1 ELISA I: Unión de anticuerpos a IL-17 de diversas especies

Un ensayo de ELISA ejemplar para medir la unión de anticuerpos a IL-17 usa placas de microtitulación Costar 3366 selladas que se recubren durante una noche a 4 °C con 50 jl de IL-17 humana 1,0 jg/ml por pocillo (R & D Systems, #317-IL / CF) en tampón de recubrimiento de carbonato (50 mM de carbonato de sodio, pH 9,0). Como alternativa, se utiliza IL-17 de ratón, rata, conejo o mono cinomolgo. Se usa como antígeno de control IL-22 humana (R D Systems). La IL-17 de conejo y de mono cinomolgo no están disponibles en el mercado y, por lo tanto, requieren la clonación y expresión, o síntesis artificial, de acuerdo con los procedimientos conocidos en la técnica, haciendo uso de las secuencias de aminoácidos para IL-17 de las diversas especies proporcionadas en la Figura 2 (las SEQ ID NO: 9 y 10). Se muestran ejemplos de secuencias de nucleótidos que codifican IL-17 de las diversas especies en las SEQ ID NO: 250-254.

La placa se bloquea posteriormente mediante la adición de 100 jl de tampón de bloqueo (Pierce n.° 37515). La placa se incuba durante 1 hora a 37 °C y después se lava tres veces en tampón de lavado (PBS pH 7,4 y Tween al 0,05 %). Después, se añaden a cada pocillo 50 jl de anticuerpo de muestra o de anticuerpo de control (diluido a diversas concentraciones en PBS pH 7,4, por ejemplo, 2, 0,4, 0,08, 0,016, 0,0032 y 0 jg/ml) y la placa se incuba adicionalmente durante 1 hora a 37 °C. La placa se lava después tres veces con tampón de lavado antes de añadir 50 jl por pocillo de kappa antihumana conjugada a fosfatasa alcalina diluida a 1:1000 en PBS, pH 7,4. Las muestras de prueba se incuban durante 1 hora a 37 °C. Después, la sal disódica de fosfato de p-nitrofenilo (PNPP, Pierce N.° 37620) se prepara en fresco disolviendo en tampón de sustrato de dietanolamina, de acuerdo con las instrucciones del fabricante, y se añaden 50 jl a cada pocillo. Se deja que el desarrollo de color proceda durante aproximadamente 10 minutos a temperatura ambiente, después se mide la señal de color a una absorbancia de 405 nm usando cualquier lector de placas de ELISA apropiado. El grado de unión es proporcional a la producción de señal de color.

Los anticuerpos de la invención se unen a IL-17 humana en un ensayo de ELISA como se describe en el presente documento, pero no IL-17 de rata o ratón. Se preveía, dados los datos de Biacore del Ejemplo 4 que demuestran que los anticuerpos de la invención se unen a iL-17 humana y de mono, que los anticuerpos de la invención también demostrarían la unión a IL-17 de mono en un ensayo de ELISA como se describe en el presente documento.

Ejemplo 2 ELISA II: Unión de anticuerpos a proteínas de la familia de IL-17

Se usa un ELISA para medir si los anticuerpos de la invención se unen de forma selectiva y/o preferencial a miembros de IL-17 humana particulares (por ejemplo, IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E o IL-17F) o IL-22 humana (control negativo).

En un ensayo ejemplar, Los pocillos de la placa ELISA (Nunc Immuno Maxisorp) se recubren con 100 jl (0,5 jg/ml en tampón de recubrimiento 1X (BioFx)) de las proteínas miembro de la familia IL-17 (R & D Systems), se sellan e incuban durante una noche a 4 °C. La solución del pocillo dando golpecitos a la placa y se añade tampón de bloqueo (200 jl de BSA al 1,5 % en PBS). Las placas se incuban en un agitador giratorio durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después, se añaden 100 jl por pocillo de un anticuerpo a analizar, a concentraciones variables (por ejemplo, 2, 0,4, 0,08, 0,016, 0,0032 y 0 pg/ml). Las placas se incuban otra vez durante una noche (4 °C) seguido de calentamiento en un agitador giratorio (60 minutos a temperatura ambiente). Después, cada pocillo de la placa se lava cinco veces con tampón (tampón Ish 1X, BioFX). Después del lavado, se añade un anticuerpo secundario conjugado con HRP adecuado (1:2000 en PBS con BSA al 1,5%) (100 jl/pocillo), disponible en el mercado. Las

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placas se vuelven a incubar en un agitador giratorio (60 minutos a temperatura ambiente), seguido de lavado con tampón (5X) como se describe anteriormente. La señal colorimétrica se desarrolla mediante la adición de TMB (100 pl/pocillo) hasta la saturación (aproximadamente 3-5 min.), después se finaliza el desarrollo añadiendo solución de detención (100 pl/pocillo, BioFX). La señal de color se mide como absorbancia a 450 nm usando cualquier lector de placas ELISA apropiado. El grado de unión es proporcional a la producción de señal de color. Los anticuerpos de la invención (por ejemplo, los Fab 103, 104, 118, 121, 126 y 131, como se describen en la Tabla 1) se unen específicamente a IL-17 humana (es decir, IL-17A), pero, en condiciones similares, no se unen a IL-17B humana, L- 17C humana, IL-17D humana, IL-17E humana, IL-17F humana, IL-17 murina o IL-22 humana, a niveles mayores a los del fondo.

Ejemplo 3 Aislamiento y activación de células para la clonación de IL-17

A. Esplenocitos de rata

Usando pinzas y tijeras estériles, retirar el bazo de una rata sacrificada mediante inhalación de CO2 y colocar el bazo en un tubo que contiene 5 ml de medio RPMI 1640 + suero fetal bovino al 10 % y penicilina/estreptomicina (solución de medio). Verter el contenido del tubo en una placa de Petri de 10 cm y retirar la grasa del bazo. Homogenizar suavemente el bazo usando un par portaobjetos de completamente de microscopía helados, previamente autoclavados. Retirar de los portaobjetos las células, utilizando solución de medio, pipetear unas pocas veces y filtrar las células a través del tamiz de células (Fisher Scientific). Lavar las células una vez con la solución de medio, recontar las células y resuspenderlas a una concentración final de 2 x 107 células/ml en 80 ml. Añadir la solución de células a un matraz T150, añadir Concanavalina A a una concentración final de 3 pg/ml e incubar a 37 °C durante aproximadamente 15 horas. Recoger las células, lavar con PBS, congelar el sedimento celular en hielo seco y proceder inmediatamente a procedimientos de aislamiento de ARN convencionales.

B. Células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de mono cinomolgo y de conejo

Cargar aproximadamente 7 ml de sangre entera de mono cinomolgo o 10 ml de sangre entera de conejo blanco de Nueva Zelanda en un sistema Vacutainer™ CPT™ de BD para la separación de células mononucleares de la sangre completa. Centrifugar el tubo de preparación de células CPT durante 20 minutos a 1500 x gravedad en un rotor de cesto oscilante horizontal. Recoger los linfocitos y monocitos de la interfaz, lavar dos veces con solución de medio, recontar y resuspender en solución de medio a una concentración final de 106 células/ml. Añadir Concanavalina A a una concentración final de 3 pg/ml e incubar a 37 °C durante aproximadamente 15 horas. Recoger las células, lavar con PBS, congelar el sedimento celular en hielo seco y proceder inmediatamente a procedimientos de aislamiento de ARN convencionales.

Ejemplo 4 Medición de las constantes cinéticas de unión

Para medir la cinética y afinidad de la unión antígeno-anticuerpo se usa un instrumento BIACORE® 2000. El instrumento utiliza las propiedades ópticas de resonancia de plasmón superficial para detectar la modificación de la concentración de proteínas de moléculas que interactúan dentro de una matriz biosensora de dextrano. Excepto que se indique lo contrario, todos los reactivos y materiales se adquieren en BIACORE® AB. Todas las mediciones se realizan a 25 °C. Las muestras se resuspenden en tampón HBS-EP hasta una concentración final de 2 pg/ml (cloruro de sodio 150 mM, EDTA 3 mM, tensioactivo P-20 al 0,005 % (p/v) y HEPES 10 mM, pH 7,4). Se inmoviliza proteína A en las celdas de flujo 1 a 4 de un chip sensor CM4 a un nivel de 500 unidades de respuesta, usando un kit de acoplamiento de aminas.

Se evalúa la unión usando múltiples ciclos analíticos. Cada ciclo se realiza a un caudal de 50 pl/minuto y consiste en las siguientes etapas: inyección de aproximadamente 20 pl de una composición de anticuerpo a 2 pg/ml con el objetivo de capturar 100-200 unidades de respuesta, inyección de 250 pl de IL-17 humana, IL-17 de mono cinomolgo, IL-17 de conejo blanco de Nueva Zelanda, IL-17 de rata o IL-17 de ratón (comenzando a 10 nM y usando diluciones seriadas a la mitad para cada ciclo), seguido de 20 minutos para la disociación y la regeneración usando 30 pl de clorhidrato de glicina 10 mM, pH 1,5. Las tasas de asociación y disociación para cada ciclo se evalúan usando un modelo de unión "1:1 con transferencia de masa" en el software BIAevaluation.

Los Acm de longitud completa 103, 104, 118, 121, 126 y 131 (véase la Tabla 1) que tienen una región Fc de IgG4, presentan una unión de alta afinidad a IL-17 humana y a IL-17 de mono, con una Kd menor de 5 pM, una Koff más lenta que 2 x 10'5s_1 y una Kon de al menos 5 x 106 M'V. La Kd y la koff están mejoradas (es decir, menos Kd, koff más lenta) en estos Acm variantes con respecto al Acm de Fab 2321 (Fab parental de, por ejemplo, Fab 103 y 104) que comprenden una región variable murina [las SEQ ID NO: 261 (VH de 2321), 262 (VL de 2321)], una región constante de cadena pesada de IgG4 humana (SEQ ID NO: 260) y regiones constantes de la cadena ligera kappa (SEQ ID NO: 272). Los anticuerpos de la invención presentan una unión no mayor que los niveles de fondo para IL- 17 de ratón o IL-17 de rata; no se detecta unión hasta 200 nM IL-17 de ratón y no se detecta unión alguna hasta 1 pM de IL-17 rata. Cuando se analizan los Acm de longitud completa 103, 104, 121 y 126, en las misma condiciones descritas anteriormente, en cuanto a la unión a IL-17 de mono cinomolgo e IL-17 de conejo; la unión a IL-17 de conejo es débil y bifásica, mientras que la unión a IL-17 de mono es similar a la unión a la de humano. Los valores específicos para determinados Acm (los valores se informan como la media ± error típico de la media) de la

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invención, cuando se analizaron en este ensayo, se enumeran en la Tabla 4 a continuación. Se contempla que las regiones Fc que no sean las de IgG4 no afectarían significativamente la Kd y la koff.

Tabla 4

IL-17 HUMANA: kon (M'1 s_1) koff(s-1) Kd (pM)

Acm 103: 11 (± 2) x 106 1,5 (± 0,7) x 10-5 1,4 (± 0,7)

Acm 104: 7,7 (± 0,6) x 106 1,1 (± 0,5) x 10-5 1,7 (± 0,9)

Acm 118: 5 x 106 2 x 10-5 3,9

Acm 121: 10 (± 0,9) x 106 1,5 (± 0,3) x 10-5 1,6 (± 0,4)

Acm 126: 7,5 (± 0,4) x 106 1,3 (± 0,2) x 10-5 1,8 (± 0,3)

Acm 131: 5,4 x 106 1,6 x 10-5 2,9

*Acm 2321 parental: 2,7 x 106 6 x 10-5 7

IL-17 DE CINOMOLGO: kon (M‘1 s_1) koff(s-1) Kd (pM)

Acm 103: 8,8 x 106 1,1 x 10-5 1,3

Acm 104: 9,4 x 106 0,5 x 10-5 0,5

Acm 121: 7,8 (± 0,3) x 106 0,7 (± 0,2) x 10-5 1,1 (± 0,04)

Acm 126: 7,9 (± 0,3) x 106 0,7 (± 0,6) x 10-5 0,8 (± 0,8)

IL-17a DE CONEJO: kon (M‘1 s_1) koff(s-1) Kd (pM)

Acm 103: 1,8 x 105 3,6 x 10-4 2

10,6 x 106: 19,2 x 10-2 18,1

Acm 104: 1,0 (± 0,1) x 105 1,8( ± 1,0) x 10-4 1,9 (± 1,3)

4,0 (± 2) x 106: 7,0 (± 2) x 10-2 20 (± 6)

Acm 121: 8 (± 6) x 105 4 (± 3) x 10-4 0,51 (± 0,13)

17 (± 11) x 106: 2,1 (± 0,2) x 10-2 1,5 (± 1,0)

Acm 126: 1,5 (± 0,6) x 105 1,7 (± 0,5) x 10-4 1,3 (± 0,6)

9 (± 3) x 106: 11 (± 2) x 10-2 14 (± 4,0)

a La unión es bifásica y el ajuste de datos con un modelo de unión a ligando heterogéneo que da como resultado dos afinidades.

Ejemplo 5 Estudios de competición a receptor de IL-17/unión de anticuerpo anti IL-17

Este ejemplo demuestra que los anticuerpos de la invención compiten por la unión a IL-17 con el receptor de IL-17.

Los estudios de unión de BIACORE se realizan usando la proteína de fusión receptor de IL-17 Fc (R & D n.° 177-IR). Para demostrar que la proteína de fusión receptor de IL-17 Fc se une a la IL-17 humana, se realiza un ensayo BIACORE en tampón de unión BIACORE (HBS-EP) + BSA 1 mg/ml a 25 °C en un instrumento BIACORE 2000. Se usa un chip CM4 con aproximadamente 600 unidades de respuesta de Proteína A inmovilizada en las celdas de flujo 1, 2 y 3 del chip. Se capturan en la celda de flujo 2 del chip aproximadamente 100 unidades de respuesta de la proteína de fusión receptor de IL-17 Fc. La IL-17 humana se expone después a las celdas de flujo 1 y 2 en concentraciones que varían de 600 nM a 9,4 nM. Después de cada inyección de 250 pl de IL-17 humana, se deja disociar el complejo durante aproximadamente 12 minutos haciendo correr el tampón a través del chip. Al final de la disociación, se usa una inyección de 20 pl de glicina 100 mM, pH 1,5 para regenerar el chip antes de que comience el siguiente ciclo de unión. La celda de flujo 1 se usa como celda de flujo de referencia. Los datos se ajustan usando el modelo de "analito bivalente" en el programa informático BIAevaluation versión 3.2. Los resultados indican que esta interacción tiene una constante de asociación de 1,06 x 105 M'V, una constante de disociación rápida de 20,3 s_1 y constante de disociación lenta de 1,63 x 10'4 s-1. Por lo tanto, esta interacción tiene una Kd o afinidad de unión de 1,5 nM y 0,19 mM, que es mucho más débil que las afinidades de unión a la IL-17 humana de los anticuerpos de la invención.

La unión para el experimento de competición también se mide en HBS-EP + BSA 1 mg/ml a 25 °C en un instrumento BIACORE 2000, con un chip CM4. Se inmovilizan aproximadamente 1000 unidades de respuesta de un anticuerpo de la invención en las celdas de flujo 2, 3 y 4 del chip; la celda de flujo 1 se deja en blanco. Usando un caudal de 50 pl/ml, se inyectan sobre las cuatro células de flujo 25 pl de IL-17 humana 500 nM, formando el complejo anticuerpo:antígeno en la superficie del chip. Después de que se completa la inyección y se forma el complejo, se inyectan sobre las cuatro células de flujo 250 pl de IL-17 humana 500 nM. Al final de esta inyección, se usa para regenerar el chip una inyección de 25 pl de glicina 100 mM, pH 1,5. El mismo experimento de unión se repite después usando una inyección de 250 pl de tampón, en lugar de la proteína de fusión receptor de IL-17 Fc.

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Los perfiles de unión tanto para la inyección del receptor sobre el complejo anticuerpo:antígeno como para la inyección de control de tampón sobre el complejo anticuerpo:antígeno son idénticos. Esto indica que no hay sitios de unión disponibles para que la IL-17 dimérica se una a su receptor una vez que se une a un anticuerpo de la invención. Este resultado también indica que, una vez que se forma el complejo, el receptor no tiene la capacidad de "alejar" a la IL-17 de ninguno de los anticuerpos. Estos anticuerpos pueden inhibir que la IL-17 humana se una a su receptor, neutralizando por lo tanto la actividad biológica de la IL-17 humana.

Ejemplo 6A Ensayo informador de IL-8 in vitro

Para analizar la capacidad de un anticuerpo de la invención de neutralizar o antagonizar una bioactividad de IL-17, se puede utilizar el ensayo informador de IL-8 descrito en el presente documento. Este enfoque también puede usarse para determinar la potencia de los Fab o los mAb de la invención, en un ensayo basado en células. La línea celular HS27 humana (ATCC n.° CRL-1634) secreta IL-8 en respuesta a IL-17. La secreción de IL-8 inducida por IL- 17 se inhibe mediante anticuerpos anti IL-17 neutralizantes (véase, por ejemplo, J. Imm. 155:5483-5486, 1995 o Cytokine 9:794-800, 1997). Por consiguiente, la secreción de IL-8 inducida por IL-17 debería proceder sin restricciones si se añade a las células HS27 IL-17 suficiente en ausencia de anticuerpo anti IL-17 neutralizante.

Las células HS27 se mantienen en medio de ensayo: medio DMEM con alta glucosa que carece de rojo fenol (Invitrogen n.° 31053-028) con suero bovino fetal al 10%, L-glutamina 4mM, piruvato de sodio 1 mM, penicilina G (100 U/500 ml) y estreptomicina (100 pg/500 ml). Las células se cultivan en matraces T150 hasta que están al 80- 90% de confluencia el día del ensayo. La IL-17 humana (R&D Systems, n.° 317-IL-050) se reconstituye en PBS estéril sin Ca2 y Mg 2 + se almacena congelada, se descongela de forma reciente para su uso y se diluye a 200 ng/ml en medio de ensayo. Se añade una alícuota de 50 pl de IL-17 diluida a cada pocillo de una placa de cultivo de tejidos de fondo plano de 96 pocillos (Falcon n.° 35-3072), dejando los pocillos externos vacíos. Los pocillos por duplicado se usan para un control de solo medio (100 pl/pocillo) y control solo de IL-17 (100 pl/pocillo). La prueba se lleva a cabo por duplicado o por triplicado. Las proteínas de Acm de longitud completa estériles se diluyen hasta una concentración máxima de 24 pg/ml en medio de ensayo. Se hacen diluciones en serie (normalmente 1:5) en una placa de ensayo distinta y se añaden 50 pl de las muestras de Fab a las diversas diluciones a los pocillos que contienen IL-17, después se incuban a 37 °C durante 1 hora. El medio de ensayo solo se usa como control negativo.

Se añaden células HS27 (normalmente, aproximadamente 20.000 células en 100 pl de medio de ensayo) a cada pocillo de la placa que contiene Fab + IL-17 (o controles), y se incuban durante aproximadamente 48 horas a 37 °C. Los sobrenadantes de los medios se recogen después de la centrifugación de las placas de 96 pocillos, durante 5 minutos a 500 veces la gravedad, y se diluyen 1:15 o 1:10 en medio de ensayo. El nivel de neutralización de IL-17 se mide mediante la determinación de las cantidades de IL-8 en sobrenadante, usando un kit ELISA comercial de acuerdo con las instrucciones del fabricante, excepto porque el medio de ensayo se sustituye por diluyente convencional y el volumen del sustrato es de 100 pl/pocillo (R&D Systems, ELISA D-8000C o R&D DuoSet ELISA n.° DY208hIL-8). Las mediciones del ELISA (450 nm) se hacen en un lector de microplacas. Las curvas de calibración se obtienen usando un ajuste logístico de 4 parámetros, con valores de IL-8 (pg/ml) determinados a partir de las curvas de calibración usando técnicas estadísticas convencionales. Los valores de CI50 se obtienen usando técnicas estadísticas convencionales.

Los Acm 103, 104, 121 y 126 de longitud completa de la invención (con región Fc de IgG4), cuando se analizan en el ensayo descrito (2-4 repeticiones), tienen un Ci 50 promedio (a base de un peso molecular estimado de 150 kD para cada Acm) de entre 450 y 500 pM, estando el intervalo de todos los valores medidos entre 365 y 618 pM.

Ejemplo 6B Ensayo informador de GROa in vitro

Para analizar la capacidad de un anticuerpo de la invención de neutralizar o antagonizar una bioactividad de IL-17, se puede utilizar el siguiente ensayo basado en células. La IL-17 puede estimular a las células epiteliales, y otras células, para secretar GROa. Se analiza en este ensayo la capacidad de un anticuerpo de la invención de neutralizar la secreción de GROa inducida IL-17 a partir de la línea de células epiteliales de adenocarcinoma colorrectal humano HT-29.

Para analizar si la IL-17 humana inducía de forma dependiente de la dosis la secreción de GROa a partir de células HT-29, se diluyó IL-17 recombinante (R&D Systems n.° 317-IL-050/CF; reconstituida en PBS de Dulbecco estéril sin Ca2+ y Mg2+ (D-PBS)) (a 4,5 pg/ml, 3 X la concentración de prueba más alta) en medio de ensayo/cultivo (5A de McCoy (Invitrogen); SfB al 10% (Invitrogen); penicilina G (100 U/500 ml) y estreptomicina (100 pg/500 ml). Adicionalmente se diluye IL-17 en serie (1:5) en medio de ensayo. Se dispensan diversas concentraciones de IL-17 (0,096 ng/ml - 1.500 ng/ml; 3,0 pM - 46.875 pM) (50 pl cada una) a los pocillos internos de una placa de 96 pocillos tratada para cultivo de tejidos. Se dispensa a 3 pocillos medio de ensayo (50 pl) para un tratamiento de "solo medio". El análisis se lleva a cabo por triplicado (3 pocillos por tratamiento). Se incuba la placa que contiene IL-17 en medio de ensayo durante aprox. 60-90 minutos a 37 °C, CO2 al 5 %, antes de la adición de células HT-29.

Para la evaluación de un anticuerpo de la invención, por ejemplo, el Acm 126 con una región Fc de IgG4, se usa una concentración de IL-17 (60 ng/ml) que proporciona aproximadamente el 70 % de secreción máxima GROa a partir

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de células HT-29. La IL-17 humana recombinante (R&D Systems) se diluye (a 240 ng/ml; concentración de trabajo 4X) en medio de ensayo/cultivo. La IL-17 diluida se dispensa (50 jl) en 60 pocillos internos distintos de placas de 96 pocillos tratadas para cultivo de tejidos (Becton Dickinson Falcon n.° 35-3072). Se dispensa a 3 pocillos medio de ensayo (50 jl) para un tratamiento de "solo medio".

El intervalo de dosificación de un anticuerpo de la invención a analizar es normalmente de 2,56 - 40.000 pM. En una placa de dilución distinta, el anticuerpo de la invención y el anticuerpo de control (estéril, en PBS 1X, pH 7,4) se diluyen a 160.000 pM en medio de ensayo. El anticuerpo de la invención y el anticuerpo de control se diluyen adicionalmente en serie (1:5) en medio de ensayo. Después se añade cada concentración de prueba del anticuerpo de la invención a analizar (50 jl) a los pocillos que contienen IL-17. Normalmente, el análisis se lleva a cabo por triplicado. El medio de ensayo solo (50 jl) se usa para los controles "solo medio" e "solo IL-17". Las placas que contienen las mezclas de IL-17 y de anticuerpos de la invención se incuban durante 60-90 minutos a 37 °C, CO2 al 5 %, antes de la adición de células HT-29.

Las células HT-29 (células epiteliales de adenocarcinoma colorrectal humano, ATCC n.° HTB-38) se mantienen en medio de cultivo/ensayo en matraces tratados para cultivo de tejidos, usando técnicas convencionales. Las células HT-29 se cultivan en matraces de cultivo de tejidos hasta que están al 50-80 % de confluencia el día del ensayo. En el día del ensayo, las células se enjuagan con HBSS (Cambrex n.° CC-5024) y se desprenden de los matraces de cultivo con tripsina + EDTA. La tripsina se inactiva con medio de ensayo completo. Después, las células HT-29 se centrifugan a 500Xg durante 5 min. a TA. Después, el sedimento celular se resuspende en medio de ensayo y se añaden 20.000 células HT-29 (en 100 jl) a cada pocillo de tratamiento de las placas de 96 pocillos. Se añade un volumen equivalente de D-PBS a cada uno de los pocillos de los bordes no utilizados (sin células) para reducir los efectos de los borde resultantes de la evaporación. Las placas de 96 pocillos se colocan en una incubadora de cultivo de tejidos (37 °C, CO2 al 5%) durante aproximadamente 48 horas.

Al final del ensayo, las placas se centrifugan (500 Xg durante 5 min. a temperatura ambiente), y el medio de cultivo celular se transfiere a placas de 96 pocillos de polipropileno. Los niveles de GROa se miden con un ELISA de tipo sándwich para GROa (R+D Systems DuoSet n.° DY275), según las instrucciones del fabricante, excepto porque: se utiliza medio de ensayo como el diluyente convencional, se utiliza tampón de lavado ELISA 1X de BioFX Labs, se utiliza volumen de una muestra y patrón de 50 jl por pocillo, se utiliza un sustrato de BioFX Labs (sustrato HRP, n.° TMBW-1000-01) y se utiliza una solución de detención de BioFX Labs (n.° LSTP-1000-01) (100 jl por pocillo). Al final de las reacciones de ELISA, las placas se leen a 450 nm en un lector de microplacas. Las curvas de calibración para GROa se obtienen realizando un ajuste logístico de 4 parámetros. Los valores de GROa (concentración en pg/ml) para las muestras se obtienen de las curvas de calibración. La línea de células epiteliales del adenocarcinoma colorrectal humano HT-29 secretó GROa cuando se estimuló con IL-17, de manera dependiente de la dosis (Tabla 5). El control de IgG4 humana no provocó una disminución en la secreción de GROa inducida por IL-17. Estos resultados (Tabla 6) demuestran que el Acm 126 tiene la capacidad de neutralizar completamente la secreción de GROa inducida por IL-17 humana a partir de células HT-29 in vitro, usando las condiciones descritas. En este ensayo, el valor de CI50 para el Acm 126 es de aproximadamente 560 pM.

Tabla 5

IL-17 humana (ng/ml): GROa PROM (pg/ml) DESVTIP

1.500,00: 2.420,4 311,8

300,00: 2.047,5 509,9

60,00: 1.556,0 209,0

12,00: 960,0 24,9

2,40: 502,5 12,3

0,48: 297,9 6,3

0,10: 205,8 4,8

0: 149,2 16,7

Abreviaturas: PROM =: promedio; DESVTIP = Desviación típica.

Tabla 6

Conc. de anticuerpos, pM: Acm 126 GROa PROM, pg/ml DESVTIP control negativo de IgG4 GROa PROM, pg/ml DESVTIP

40.000,0: 123,8 1,4 1.297,3 29,4

8.000,0: 134,1 6,4 1.419,9 133,4

1.600,0: 151,3 9,5 1.370,4 114,7

320,0: 1.170,6 56,0 1.388,6 54,1

64,0: 1.340,8 59,1 1.380,4 36,0

12,8: 1.362,0 21,1 1.346,2 81,6

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(continuación)

2,56: 1.280,9 56,1 1,243,4 118,3

0 (solo IL-17): 1.201,4 66,1

Solo medio: 117,2 10,0

Abreviaturas: conc. = concentración; PROM = promedio; DESVTIP = Desviación típica.

Ejemplo 7 Neutralización in vivo de IL-17h

La IL-17 humana tiene la capacidad de unirse y estimular al receptor IL-17 de ratón, lo que conduce a un incremento y posterior secreción de la quimiocina KC (CXCL1) de ratón. Se emprenden experimentos de variación del tiempo y de la dosis para identificar la dosis óptima de IL-17 humana y el tiempo óptimo para la inducción de KC de ratón. Estos experimentos indican que una dosis de IL-17 humana de 150 pg/kg y un tiempo de 2 horas después de la administración de IL-17 proporciona niveles máximos de KC en suero de ratón. Los anticuerpos de longitud completa de la presente invención (por ejemplo, Fab 126 o Fab 121 con la HCVR unida operativamente al Fc de IgG4 humana, SEQ ID NO:260 [o SEQ ID NO: 278] y la LCVR unida operativamente a una región constante de kappa humana, SEQ ID NO: 263 [o SEQ ID NO: 277]) se administran por vía intravenosa a ratones, a 1, 10, 100 y 1o00 pg/kg, una hora antes de una inyección subcutánea de IL-17 humana. A las dos horas después de la administración de IL-17 humana se sacrifican los ratones y se determinan los niveles de KC mediante ELISA, usando un kit disponible en el mercado de acuerdo con las instrucciones del fabricante (KC Quantikine, R&D). Los anticuerpos de isotipo coincidente se usan como controles negativos. Los anticuerpos bloquean la capacidad de IL-17 humana de estimular el receptor de IL-17 de ratón, lo que conduce a la inhibición de un incremento de KC de ratón, de una manera dependiente de la dosis. A una dosis de 20 pg/ratón en las condiciones descritas, el Acm126 (un anticuerpo de longitud completa que comprende el Fab 126) disminuye el nivel medio de KC aproximadamente cuatro veces, en comparación con un anticuerpo control que no tiene ningún efecto. El Acm 121, a una dosis de 20 pg/ratón en las condiciones descritas, disminuye el nivel medio de KC aproximadamente tres veces, en comparación con un anticuerpo control.

Ejemplo 8 Mapeo de epítopos

Se usan dos de los anticuerpos anti IL-17 (Fab 126 y Fab 104) para determinar que la humanización y optimización del Fab murino parental (2321, las SEQ ID NO: 261 y 262) no modifica la capacidad de unión a epítopo de los Fab resultantes de la humanización y optimización del parental. Los Fab humanizados optimizados se unen al mismo epítopo que el Fab murino parental, como se determina mediante un ELISA competitivo convencional o mediante análisis de intercambio de H-D y de espectr. de masas para el mapeo de epítopos (véase, por ejemplo, Hoofnagle, A., y col., Methods Mol. Biol. 250:283-298, 2004; Hoofnagle, A., y col., Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 32:1-25, 2003; Baerga-Ortiz, A., y col., Protein Sci. 11:1300-8, 2002), por lo tanto, se esperaría que los Fab 1-132 de la invención obtenidos del mismo Fab parental se unan al mismo epítopo.

Usando el intercambio de H-D y el ensayo de espectr. de masas (H/DXMS) para mapear el epítopo, se determina que los aminoácidos entre 80 y 89 [ADGNVDYHMN (SEQ ID NO: 266)] de IL-17 humana (SEQ ID NO: 1) están comprendidos dentro del epítopo discontinuo al que se unen los anticuerpos de la invención. DGNVDYH (SEQ ID NO: 267) es una secuencia esencial comprendida dentro del epítopo discontinuo al que se unen los anticuerpos de la invención, a base de la comparación de la variación de la secuencia de IL-17 entre distintas especies y capacidad de unión. El cambio de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 267 en el contexto de la secuencia de IL-17 completa, da como resultado una unión no detectable a la IL-17 modificada por parte de un anticuerpo de la invención. Los anticuerpos de la invención no se unen a IL-17 de rata o ratón a niveles mayores que el anticuerpo de control.

El ensayo H/DXMS se usa para identificar las regiones de IL-17 a las que se unen los anticuerpos de la invención. La tasa de intercambio de hidrógeno de la amida es dependiente de la estructura y de la accesibilidad del disolvente del hidrógeno de la amida. IL-17 libre o IL-17: el complejo de anticuerpos en agua se mezcla con agua deuterada (D2O) para permitir el intercambio de protones de la amida por deuterio. Los grupos amida de la estructura que participan en la unión a proteínas están protegidos del intercambio y permanecen protonados. Después, estas regiones se identifican mediante proteólisis péptica, acoplada con CL y espectrometría de masas por ionización por electronebulización. La IL-17 humana que contiene una His C-terminal y una etiqueta Flag (IL-17-Flis) se expresa y se purifica a partir de células GS-CHO, usando una columna IMAC. Se transfieren dos alícuotas de 10 pg (7,7 pl) de solución de IL-17-Flis a 2 Microcon y se añaden en el Microcon 100 pg de Acm 104 o Acm 126 (relación molar de IL- 17/Acm = 1/2). Se transfieren a otro Microcon veinte pg de solución de IL-17-Flis y no se añade anticuerpo. Después se añade tampón de PBS 1x a cada Microcon hasta el volumen final de ~180 pl y se centrifuga a 14.000 g durante 14 min. Después, se añaden 150 ml de tampón de PBS 1x a cada Microcon y se centrifuga a 14.000 g durante 14 min. Estos pasos son necesarios para garantizar que el antígeno libre y el complejo antígeno:anticuerpo estén en condiciones de tampón idénticas.

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Se recoge la fracción proteica y el volumen final se ajusta a 50 |jl (complejo) u 80 |jl (solo IL-17-Flis) con PBS 1x. Se transfieren seis microlitros de IL-17-Flis o complejo de IL-17-Flis y complejo de Acm a un microvial de plástico, y se añaden en el 14 jl de D2O al 100 %, dando como resultado D2O al 70 % en la muestra. La solución se incuba a temperatura ambiente durante 10 min. El intercambio se inactiva inmediatamente, se digiere mediante la adición de 20 jl de solución de ácido fórmico al 1 % y 2 jl de solución de pepsina 2 mg/ml, y se incuba a temperatura ambiente durante 30 sec a 0 °C durante 10 min. El producto de digestión se inyecta inmediatamente en una columna de forma manual. Se utilizan para todos los ensayos HPLC 2795 y Micromass LTC Premierde Waters. La corriente de HPLC de la bomba HPLC se conecta a un tubo metálico (aproximadamente 1 ml), a un inyector manual, a una columna C18 Zorbax (2,1x50 mm) que funciona con estos ajustes (temperatura de columna: 0 °C; fase móvil C: ácido fórmico al 0,15 % en H2O, D: ácido fórmico al 0,12% en ACN; tiempo de ejecución: 23 min). La columna se equilibra con A al 98 % (solución acuosa de ácido fórmico al 0,15 %) y B al 2 % (ácido fórmico en acetonitrilo al 0,12 %) a un caudal de 0,2 ml/min. Se realiza una elución en gradiente de B del 2 % al 10 % durante 0,5 min, después en B al 40 % durante 14,5 min, después en B al 90 % durante 1 min con retención de 2 min, y después se regresa a B al 2 % en 1 min.). La muestra de la HPLC se analiza mediante un espectrómetro de masas operado con estos ajustes (Modo iónico: positivo; intervalo de exploración de masas: 300-2000; voltaje de cono de muestra: 80; flujo del gas de desolvatación (L/h): 700; temp. de desolvatación: 300 °C). El tubo metálico, el asa del inyector y la columna se sumergen en agua helada durante todo el ensayo. El espectro de masas de cada péptido péptico de IL-17 se obtiene después del intercambio de H/D, con o sin un Acm anti IL-17 probado. Para péptidos pequeños, la masa promedio de cada péptido se calcula a base de sus iones isotópicos e intensidades. Para péptidos más grandes, las masas promedio se obtienen a partir de espectros de masas desconvolucionadas después de la calibración interna.

Cuando el anticuerpo forma un complejo con IL-17, la región de unión (epítopo) de IL-17 está protegida del disolvente. Esto conduce a tasas de intercambio de hidrógeno de la amida más lentas, en comparación con las de IL-17 sola. Comparando la masa de péptidos de la libre y del complejo después del intercambio de deuterio, los péptidos protegidos por la formación del complejo deberían ser distintos del péptido correspondiente en la IL-17 libre. A continuación, la Tabla 7 enumera las diferencias de masa que se obtienen mediante H/DXMS para péptidos peptídicos de IL-17. Estos péptidos pépticos incluyen toda la secuencia de IL-17-Flis. Como demuestran los datos de la tabla, la diferencia de masa del péptido IL-17-Flis entre el complejo y ella misma es similar para los dos anticuerpos analizados, es decir, se unen al mismo epítopo. Se encuentra una gran diferencia de masa para el péptido péptico 24-87+117-133 (es decir, los aminoácidos 24 a 87 y 117 a 133 de IL-17) (estos dos péptidos están conectados a través de un enlace disulfuro) y 66-87+117-134, lo que sugiere que los restos dentro de estas regiones están involucrados en la unión. Dado que esos péptidos pépticos son bastante grandes, son necesarias otras digestiones enzimáticas para delimitar los restos de aminoácido específicos implicados en la unión. Además de estos datos, los anticuerpos de la invención no se unen a otro miembro de la familia IL-17 (IL-17 B, C, D, E y F) y tampoco se unen a IL-17 de ratón o de rata. Estos datos, junto con la comparación de secuencias y el examen del modelo estructural de homología de IL-17, sugieren que los restos 80-89 están comprendidos dentro de un epítopo de IL-17 no lineal, al que se unen los anticuerpos de la invención.

Tabla 7

: IL-17-Flis + Acm 104 IL-17-Flis + Acm 126

Péptido péptico: Prom. (n=3) DT Prom. (n=3) DT

1-23+98-116: -0,36 0,61 -0,78 0,59

24-43: -0,79 0,13 -0,44 0,65

27-42: -0,56 0,17 -0,56 0,38

24-65: -1,32 0,54 -1,17 0,19

54 a 65: -0,17 0,37 -0,53 0,25

24-87+117-133: -3,60 0,38 -4,09 0,29

66-87+117-134*: -1,94 -2,38

88-97: -0,30 0,08 -0,29 0,14

111-116: -0,08 0,07 -0,17 0,08

135-151: -0,14 0,03 -0,12 0,12

Nota: la delta de masa se obtiene restando una masa de péptido péptico de IL-17-Flis promedio solo de la masa de péptido de IL-17-Flis promedio correspondiente y del complejo de anticuerpo.

* Estos datos son de una digestión de 10 min a 0 °C (n=1). Todos los demás son de digestión ambiental durante 0,5 min.

Ejemplo 9 Expresión de IL-17 en tejidos cancerosos

Se analizan diversos lisados celulares no cancerosos y cancerosos humanos para analizar la presencia de la proteína IL-17. Los tejidos (trozos de aproximadamente 50-100 mg) se congelan instantáneamente en hielo seco, se descongelan en hielo y se lisan en 350 jl de tampón TPER (Pierce n.° 78510), que incluye inhibidores de proteasas (Pierce n.° 78410) e inhibidores de fosfatasas, en tubos que contienen perlas de lisis cerámicas (Qbiogene n.° 6913-

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050; perlas de cerámica de 1,4 mm en tubos de 2,0 ml). Los tubos se colocan en hielo durante 5-10 min y después se centrifugan a 13.000 x gravedad durante 10 min a 4 °C, y el material se transfiere a tubos nuevos para eliminar los residuos. Se vuelve a centrifugar como se ha descrito y transfiere a un tubo nuevo. La concentración de proteína se determina usando el procedimiento con BSA convencional. Las muestras se analizan en cuanto a IL-17 usando un kit de ELISA para IL-17 comercial, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (R&D n.° DY317, usando el tampón de lavado, la solución de sustrato y la solución de detención de BioFX Labs). Los niveles de IL-17 se normalizan con respecto a la concentración de proteína total. Los niveles de IL-17 aumentan entre dos y tres veces en el tejido de colon canceroso (60 muestras analizadas), en comparación con el tejido de colon normal (63 muestras analizadas). Los niveles de IL-17 aumentan en promedio tres a cuatro veces en el tejido de riñón canceroso (21 muestras analizadas), en comparación con el tejido de riñón normal (21 muestras analizadas). Los niveles de IL-17 en tejido de próstata canceroso (44 muestras analizadas) aumentan en comparación con el tejido de próstata normal (7 muestras analizadas). Los niveles de IL-17 no ascendieron en otros tipos de tejido tumoral analizados, incluyendo de mama, cuello, pulmón, laringe, tiroides, lengua, ovario y cerebro.

Ejemplo 10 Activación de IL-17 de microgliocitos

La IL-17 induce que una línea de microgliocitos de cerebro murino (BV-2) secrete IFN e IL-12p70. La línea de microgliocitos murinos BV-2 [obtenida de Scios, con permiso de Elisabeta Blasi (Microbiology University of Perugia, Italia) quien las aisló originalmente (E. Blasi y col., J. Immunology 1990, 27:229-237)], se cultivaron en matraces de cultivo de tejidos recubiertos de poli-D-lisina, hasta no más del 60 % de confluencia en DMEM con alta glucosa (Invitrogen n.° 31053-028) con L-glutamina 2 mM (Invitrogen/GIBCO n.° 25030-081), SFB al 10% (inactivado por calor; Invitrogen/GIBCO n.° 10082-147), piruvato de sodio 1 mM (Invitrogen/GIBCO n.° 11360-070), Normocina 100 |jg/ml (InvivoGen) a 37 °C, CO2 al 5 %.

El día 0 del ensayo, las células BV-2 se enjuagaron (PBS de Dulbecco sin Ca2+ y Mg2+; Invitrogen), se desprendieron (tripsina al 0,25 % + EDTA), seguido de la inactivación de la tripsina, después se centrifugó (500 Xg durante 5 min. a TA). El sedimento celular resultante se vuelve a suspender a una densidad celular de D7.000 células/100 |jl de medio de cultivo. Se dispensan 100 jl de suspensión celular en 60 pocillos internos distintos de placas de 96 pocillos tratadas para cultivo de tejidos recubiertas con poli-D-lisina. Las placas se incuban como se describe, durante aprox. 48 h antes del tratamiento con IL-17.

El día 2 del ensayo, la IL-17 de ratón recombinante (IL-17r) (sin vehículo; R&D Systems); reconstituida en PBS de Dulbecco estéril sin Ca2 + y Mg2 +, se diluye a 1,5 jg/ml (la concentración de prueba más alta) en medio de cultivo en una placa de polipropileno. La IL-17 de ratón se diluye adicionalmente en serie en la placa de polipropileno. Un control positivo es LPS diluido en medio de cultivo a 1 jg/ml (la concentración de prueba más alta). El medio de ensayo se usa como control negativo. El medio se aspira de las células suavemente antes de añadir los tratamientos (150 jl/pocillo). El análisis se lleva a cabo por triplicado (3 pocillos por tratamiento). Las distintas placas por duplicado se incuban durante 24 h o 48 h a 37 °C, CO2 al 5 %.

En el día 3 y en el día 4 del ensayo se centrifugan las placas (500 Xg durante 5 min. a TA), después, los medios de cultivo celular se transfieren a placas de polipropileno de 96 pocillos, que se sellan y congelan (-80 °C). Las muestras de medio se descongelan y se someten a ensayo en cuanto a los niveles de citoquinas y quimiocinas, con un kit múltiple murino para 22 determinaciones (Linco), según las instrucciones del fabricante (excepto porque: una placa de filtro de policarbonato de pared negra (Millipore) reemplaza la placa de filtro incluida en el kit). La fluorescencia se lee en un instrumento Luminex® (50 cuentas por conjunto de cuentas, ajuste de ganancia de RP1 bajo). Los datos se muestran a continuación en la Tabla 8.

Las curvas patrón se obtienen usando un ajuste logístico de cuatro o cinco parámetros. Los valores de IFNy e IL- 12p70 (pg/ml) se determinan a partir de las curvas patrón, usando técnicas estadísticas convencionales.

Tabla 8

24 horas después del tratamiento con IL-17

conc. de IL-17r, jg/ml: PROM. IFNy, pg/ml PROM. IL-12p70, pg/ml

1,5: 125,87 65,58

0,375: 123,89 59,63

0,0938: 125,61 67,87

0,0059: 58,91 38,12

0,0015: 18,78 12,34

control de solo medio: por debajo del límite de detección por debajo del límite de detección

LPS, 1 jg/ml: 5,11 51,11

LPS, 0,25 jg/ml: 5,07 49,00

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(continuación)

48 horas después del tratamiento con IL-17

conc. de IL-17r, pg/ml: PROM. IFNy, pg/ml PROM. IL-12p70, pg/ml

1,5: 134,38 61,48

0,375: 124,99 58,65

0,0938: 119,96 58,15

0,0059: 47,07 27,87

0,0015: 13,97 9,44

LPS, 1 pg/ml: 5,20 46,37

LPS, 0,25 ng/ml: 4,30 36,36

Ejemplo 11 Modelo de inducción con DSS del trastorno del colon irritable

La EII es una enfermedad inflamatoria crónica que incluye la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa. Los niveles de proteína de IL-17 están significativamente elevados en los sueros y en los tejidos de colon tanto en la colitis ulcerosa como en los pacientes con enfermedad de Crohn. Sin embargo, la IL-17 no es detectable en los sueros de individuos normales o de pacientes con colitis infecciosa o colitis isquémica. El modelo de DSS (dextrano sulfato de sodio) es uno de los modelos preclínicos más antiguos y representativos de la enfermedad del colon irritable (ECI). En el modelo de DSS (véase, por ejemplo, FASEB Journal. 2004;18:1550-1552) se inducen lesiones inflamatorias agudas y crónicas. Los ratones tienen un alto grado de uniformidad de las lesiones, con pérdida de peso corporal y de la longitud del colon. Es reproducible con respecto a la evolución temporal y la gravedad entre ratones individuales. Para la inducción de la enfermedad, los ratones reciben DSS de 30-40 Kd al 5 % en el agua para beber durante 7 días. Se observan alrededor del día 8 el índice de actividad de enfermedad (DAI, por sus siglas en inglés, disease activity index), incluyendo hemoccult positivo o hemorragia rectal, heces sueltas y pérdida de peso corporal (5-8 %). Los pesos corporales de los ratones se controlan todos los días durante 2 semanas. Los ratones se sacrifican desde aproximadamente el día 12 hasta aproximadamente el día 15. La proteína IL-17 está significativamente aumentada en el colon tratado con DSS frente al colon no tratado. El tratamiento con anticuerpo frente a IL-17 puede reducir el índice de actividad de enfermedad.

Ejemplo 12 Modelo de EAE para esclerosis múltiple

La EAE es una enfermedad desmielinizante mediada por linfocitos T CD4+ del sistema nervioso central (SNC) que sirve como modelo para la EM en seres humanos. Los mecanismos patogénicos del desarrollo de la EAE incluyen la activación de linfocitos T específica de antígeno y la diferenciación Th1, seguido de la infiltración de linfocitos T y macrófagos en el SNC. La IL-17 contribuye a la patología de la esclerosis múltiple (EM). El análisis por micromatrices de lesiones de EM de pacientes humanos ha demostrado un aumento de iL-17 (Lock, y col. Nat. Med. 8:500-508, 2002). Las células mononucleares (CMN) que expresan ARNm de IL-17 en sangre y líquido cefalorraquídeo están significativamente elevadas en número en pacientes con EM y han detectado números mayores de CMN en sangre que expresan ARNm de IL-17 durante agravamiento clínico de la EM, en comparación con la remisión (Matusevicius, y col. Multiple Sclerosis. 5:1-1-104, 1999). La EAE se suprime significativamente en ratones genosuprimidos para IL-17 (Nakae y col., J. Immun. 171:6173-6177).

El ejemplo descrito en este caso demuestra que la proteína IL-17 está aumentada en la médula espinal de ratones con EAE y que el tratamiento con un anticuerpo anti IL-17 murina reduce la puntuación de la EAE en el modelo de EAE activa. Para la inducción de la enfermedad, se inmunizaron por vía subcutánea ratones C57BL/6 de 8-9 semanas en el día 0 con (i) 200 pl de toxina pertussis (TP) 5 mg/ml y adyuvante completo de Freund (ACF) o (ii) TP, ACF y MOG35-55 (glucoproteína de mielina de oligodendrocitos emulsionada en ACF que contiene Mycobacterium tuberculosis inactivado por calor 5 mg/ml) 300 pg/200. El día 2 los ratones se tratan otra vez con TP. Los ratones se puntúan a lo largo del estudio en cuanto a los niveles de parálisis. La enfermedad se espera en el grupo que recibe GMO. Se administra a los ratones un anticuerpo monoclonal IgG1 de rata anti IL-17 murina o un anticuerpo de control de isotipo, en los días 1, 7 y 15 (BD Biosciences para anticuerpo anti IL-17 de rata anti murino). Los ratones que reciben gMo se sacrifican cuando la puntuación clínica llega a entre 1-3 (en una escala de 0-4); esto es entre los días 14-31 para el estudio 1, en la Tabla 9 a continuación, y entre los días 14-16 para el estudio 2, en la Tabla 10 a continuación. Los signos clínicos de la enfermedad se desarrollan alrededor del día 10. Al menos 2 examinadores puntúan a los animales individuales de forma independiente y con ocultación de la identidad de los grupos de tratamiento, de acuerdo con la gravedad clínica de la enfermedad del SNC. El grado 0 es normal; el grado 1 es cola completamente floja; el grado 2 es debilidad parcial unilateral de extremidad trasera; el grado 3 es parálisis completa de extremidad trasera y el grado 4 es moribundo. (véase J. Exp. Med. 194: 873-881,2001). Un ratón de control se sacrifica el mismo día que un ratón tratado con GMO. Las médulas espinales se aíslan en el momento del sacrificio y se congelan rápidamente para usarlas para el análisis de la proteína IL-17 mediante ELISA. El grupo de tratamiento con anticuerpo frente a IL-17 tiene puntuaciones de enfermedad significativamente menores, en comparación con el grupo de control de isotipo.

Los lisados de cada médula espinal completa se preparan en 1 ml (estudio 1, en la Tabla 9 a continuación) o 0,4 ml (estudio 2 en la Tabla 7 a continuación) de reactivo de extracción de proteínas TPER (Pierce n.° 78510) con inhibidores de proteasa completos (Roche Applied Science n.° 11697498), en tubos de 2 ml que contienen perlas de cerámica (matriz de lisis D, QBiogene n.° 6913050) y un instrumento FastPrep (Bio101) durante 30 segundos, a una 5 escala de 5,5. Después de la lisis, la muestras se centrifugan (5 min. a 14.000 rpm en una microcentrífuga) para eliminar los residuos. Los sobrenadantes se transfieren a tubos de microcentrífuga nuevos. La concentración de proteína total en cada lisado se determina con un kit de ensayo de proteína BCA (Pierce n.° 23225), usando el protocolo de microplaca del fabricante. Los lisados se congelan y almacenan a -80 °C.

Después de descongelar los lisados en hielo y de clarificar por centrifugación, los niveles de IL-17 de los ratones se 10 miden en muestras no diluidas mediante ELISA (R&D Quantikine n.° M1700), según las instrucciones del fabricante. Las curvas patrón se obtienen usando un ajuste logístico de cuatro parámetros. Los valores de IL-17 se determinan a partir de las curvas patrón, usando técnicas estadísticas convencionales. En las Tablas 9 y 10 a continuación, los niveles de IL-17 se normalizan con respecto a la concentración de proteínas en cada muestra y se expresan como pg de IL-17/ml de proteína total en cada lisado. Como demuestran los datos de las tablas, En los ratones con EAE 15 se detectaron niveles aumentados de IL-17.

Tabla 9

ESTUDIO 1

GRUPO: INTERVALO DE VALORES DE IL-17r, pg/mg IL-17r PROM., pg/mg (+/- DT) INTERVALO DE PUNTUACIONES CLÍNICAS EN EL MOMENTO DEL SACRIFICIO PUNT. CLÍNIC. PROM. EN EL MOMENTO DEL SACRIFICIO (+/- DT)

Sin tratamiento previo (n=7): 3,63 -10,06 5,19 +/- 0,87 N/E N/E

AFC (n=14): 3,16 -7,51 4,31 +/- 0,33 N/E N/E

AFC+GMO (n=14): 4,12 -16,62 8,57 +/-1,01 0,9 -3,0 1,74 +/- 0,20

Todos los valores del ELISA de IL-17 estaban dentro del intervalo de detección del ELISA, promedio de los duplicados

Tabla 10

ESTUDIO 2

AFC (n=6): 1,88 -2,78 2,24 +/- 0,14 N/E N/E

AFC+GMO (n=8): 1,78 -5,42 3,34 +/- 0,45 2,75 -3,20 2,94 +/- 0,06

20 Todos los valores del ELISA de IL-17 estaban dentro del intervalo de detección del ELISA, promedio de los duplicados

Ejemplo 13 Modelo de artritis inducida por colágeno

La artritis inducida por colágeno (AIC) es un modelo de roedor ampliamente utilizado para la artritis reumatoide ("AR") y tiene características histopatológicas en común con la AR humana. La artritis experimental, inducida en 25 ratones DBA/1 mediante la inmunización y refuerzo con emulsiones de colágeno tipo II, es una enfermedad poliartrítica caracterizada por la inflamación de las articulaciones pequeñas y la erosión progresiva del cartílago y el hueso (Trentham, D, y col., J. Exp. Med. 146:857-858, 1977). Recientemente, Lubberts, y col., (arthritis & Rheumatism, 50:650-659, 2004; incorporado en el presente documento) demostraron que el anticuerpo policlonal de conejo anti IL-17 murina, administrado al inicio o en una fase posterior de la AIC murina, mejora los signos clínicos 30 de la artritis.

En el modelo de AIC, los ratones a los que se proporciona una única inyección de Acm IgG2a de rata anti IL-17 murina por vía intraperitoneal (8 mg/kg de R&D, MAB421 clon 50104.11) muestran puntuaciones clínicas significativamente más bajas que los ratones a los que se les inyecta 16 mg/kg de IgG2a de rata de control. El

5

10

15

20

25

30

35

40

45

reactivo de fase aguda, la Proteína reactiva con (RPC), es un índice aceptado de actividad de enfermedad en pacientes con AR. De forma similar a ña PRC, la proteína amiloide sérica (PAS) murina sirve como un indicador de enfermedad en el modelo de AIC murino (Bliven, M., y col., Arthritics & Rheumatism, 29:1131-1138, 1986). En animales tratados con 8 mg/kg de anti IL-17 murina, los niveles de PAS fueron significativamente menores que en aquellos tratados con anticuerpo de control. Además, la disminución en las puntuaciones clínicas y los valores de pAs son comparables a un grupo anti IL-1p de ratón (8 mg/kg), usado como control positivo. Para finalizar, está presente una reducción significativa de la inflamación sinovial con anticuerpo 8 mg/kg y la reabsorción ósea con anticuerpo 16 mg/kg, en comparación con la de los ratones tratados con anticuerpo de control. En el modelo AIC se puede llevar a cabo un estudio de respuesta a la dosis con anticuerpo anti IL-17 murina (por ejemplo, a 0,1, 1 y 8 mg/kg). Las puntuaciones clínicas para el anti IL-17 murina de rata presentan una tendencia del grado de respuesta a la dosis. Se puede realizar un ensayo similar en monos cinomolgos como modelo para AR, usando un anticuerpo de la invención.

Ejemplo 14 Purificación de Acm anti IL-17

Se incorpora de forma estable un vector que expresa un Acm de la invención en una célula hospedadora apropiada, (por ejemplo, células CHO DG44 (dhfr-) (Chasin) o células NSO), usando procedimientos convencionales, y se purifica usando una columna de afinidad de Proteína A. En resumen, se aplica medio condicionado clarificado a una columna HiTrap rProtein A Sepharose FF de 5 ml (Amersham Biosciences) que se ha equilibrado con PBS (pH 7,4). La columna se lava con 5 volúmenes de columna de tampón de equilibrado a un caudal de 110 cm/h, para lavar los componentes de unión no específicos. El anticuerpo unido se eluye usando un gradiente de pH lineal (tampón de fosfato de sodio 0,1 M, pH 6,8 a tampón de citrato de sodio 0,1 M, pH 2,5). Se recoge el pico de proteína principal de la elución y se ajusta a pH neutro con tampón Tris 1 M (pH 8,5). El conjunto de proteína se concentra a 1-2 mg/ml, usando una membrana Vivaspin 10K (Vivasciences) y se esteriliza por filtración (0,45 pm) antes del almacenamiento a 4 °C.

Para preparaciones grandes de un Acm de la invención, el concentrado sin células se purifica mediante tres columnas de cromatografía secuenciales (de Proteína A, de intercambio de aniones y de cromatografía de interacción hidrófoba). La pureza del Acm después de estas etapas de cromatografía es mayor al 99 %, según se evalúa mediante cromatografía analítica de exclusión por tamaño. El Acm se intercambia en un tampón, como se enumera a continuación, dependiendo de la concentración del anticuerpo. Los resultados de estabilidad química indican un pH preferente de entre 6,0 y 7,0 (incluidos); aunque para preparaciones de 20 mg/ml el pH puede ser de entre 5,5 y 7,0 (incluidos, por ejemplo, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6., o 7,0). Para productos liofilizados, es preferente un nivel de cloruro de sodio de 90-30 mM (90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 o 30 mM, o cualquier valor entre 30 y 90 mM), mientras que para una formulación líquida (por ejemplo, para administrarse por vía subcutánea) es preferente un nivel de cloruro de sodio de 100 - 150 mM (100, 110, 120, 130, 140 o 150 mM, o cualquier valor entre 100 y 150 mM). Después, el producto se concentra a una concentración final de aproximadamente 10, 20 o 25 mg/ml (alternativamente mayor, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 mg/ml o mayor), y se esteriliza por filtración. El producto filtrado se puede congelar inmediatamente a -70 °C o se puede liofilizar. Para una formulación liofilizada estable, se requiere una proporción de pesos mínima del anticuerpo con respecto al lioprotector (por ejemplo, sacarosa o trehalosa) de 1:2, pero no se requiere para una formulación líquida. De forma adicional, se añade tensioactivo, es decir, polisorbato-80, al 0,02 % (p/v), a las formulaciones en solución y a las soluciones a liofilizar. Antes de la administración, el material liofilizado se resuspende en agua estéril para inyección o en cloruro de sodio al 0,9 % estéril.

Tabla 11

conc. de Acm: Tampón pH NaCl (mM)

10 mg/ml: citrato (Na) 10 mM 6,0 30,50-150

20 mg/ml: citrato 10 mM 5,5 50-150

20 mg/ml: citrato 10 mM 6,0 50-150

20 mg/ml: citrato 10 mM 6,5 50-150

20 mg/ml: citrato 10 mM 7,0 50-150

20 mg/ml: histidina 10 mM 6,5 150

>50 mg/ml: citrato 10 mM 5,5 50-150

>50 mg/ml: citrato 10 mM 6,0 50-150

>50 mg/ml: citrato 10 mM 6,5 50-150

>50 mg/ml: histidina 10 mM 6,5 150

Ejemplo 15 Semivida de los anticuerpos in vivo

La farmacocinética sérica de los anticuerpos de la invención (por ejemplo, los Acm 126 y 121 [región Fc de IgG4 con Fab 126 o 121, respectivamente]) se determinan después de la administración intravenosa o subcutánea en monos cinomolgo macho. Las concentraciones de los anticuerpos en el suero se determinan usando un antígeno de ELISA de captura de ensayo convencional, en el cual las placas se recubren con IL-17 humana y se detectan el anticuerpo

5

10

15

20

25

30

35

sérico unido usando un anticuerpo secundario anti IgG4. Después de la administración intravenosa de 1 mg/kg, el Acm 126 se elimina con una semivida media de 6,5 días y el Acm 121 se elimina con una semivida media de aproximadamente 11 días. Después de la administración subcutánea de 1 mg/kg, el Acm 126 tiene una semivida media de eliminación de 10,3 días y el Acm 121 tiene una semivida de eliminación media de 13 días.

Ejemplo 16 Modelo de xenoinjerto de tumor

Para establecer modelos de xenoinjertos tumorales con los que probar la actividad antitumoral de los anticuerpos anti IL-17 de la invención, se mezclan 5 millones de células de carcinoma colorrectal HCT116 con Matrigel y se inyectan por vía subcutánea en el flanco izquierdo de ratones hembra atímicos (nu/nu) de 56 semanas (Charles River Laboratories, Wilmington. MA). Los ratones se tratan mediante inyección subcutánea cada 7 días con anticuerpos de control (por ejemplo, IgG4 humana e IgG1 de ratón), anti IL-17 humana 4 mg/kg, anti IL-17 de ratón 8 mg/kg o una combinación de anti IL-17 humana 4 mg/kg y anti IL-17 de ratón 8 mg/kg, durante 4 semanas. La primera administración de anticuerpos comienza un día antes de implantar las células. Los tumores se miden dos veces por semana con un calibrador y el peso corporal se controla dos veces por semana. Se recoge plasma de cada ratón en el día 34 y se miden los niveles de KC usando un kit de ELISA para KC, de acuerdo con las instrucciones del fabricante (R&D System). En comparación con los ratones inyectados con IgG de control, los ratones tratados con la combinación de anticuerpo anti IL-17 humana y anticuerpo anti IL-17 de ratón han reducido significativamente el volumen tumoral. Además, los ratones tratados tanto con anticuerpo anti IL17 humana como con anticuerpo anti IL17 murina han disminuido drásticamente la KC plasmática. Los ratones tratados con anticuerpo anti IL17 humana 4 mg/kg o anticuerpo anti IL17 de ratón 8 mg/kg no mostraron una reducción significativa de los volúmenes tumorales y de los niveles plasmáticos de KC. Los datos se muestran en las Tablas 12 y 13 en el presente documento.

Para medir en los tumores el nivel de IL17, los tumores de los modelos de xenoinjerto de ratón se preparan principalmente como se describe en el Ejemplo 9. Para la medición de proteínas, los lisados tumorales se diluyen 1:10 en TPER + Halt 1X en una placa de polipropileno de 96 pocillos de dilución. La concentración de proteína se determina usando el protocolo de microplaca del ensayo de proteínas Coomassie Plus (Pierce n.° 23236). El patrón de BSA se diluye en TPER + Halt. Los niveles de proteína IL-17 se determinan usando kits de ELISA para IL-17 humana y de ratón de R&D System, según las instrucciones del fabricante (DuoSet ELISA para IL-17 humana, R+D Systems, N.° Cat. DY317; ELISA de IL-17 de ratón, R+D System, N.° Cat. 421). Tanto la iL-17 humana como la de ratón aumentaron en los tumores de los modelos de xenoinjerto de tumor de colon HCT116 y HT29, en comparación con el modelo de xenoinjerto de tumor de pulmón H460.

Tabla 12 Volumen tumoral

(n=10)

Tiempo, días (posimplantación de células HCT-116): controles de isotipo de IgG1 de rata + IgG4 humana (MEDIA +/- DT) anti IL-17 de ratón + anti IL-17 humana (MEDIA +/- DT)

8: 101,4 +/- 6,7 91,5 +/- 9,4

14: 149,2 +/- 9,2 123,9 +/-16,2

17: 162,1 +/-12,4 134,6 +/-14,7

20: 177,7 +/-17,1 152,8 +/-18,7

24: 279,2 +/- 22,8 222,4 +/- 35,4

28: 323,3 +/- 22,5 244,6 +/- 32,8

31: 405,8 +/- 33,4 275,1 +/- 36,6

34: 537,7 +/- 50,7 339,8 +/- 46,3

El volumen tumoral se calcula utilizando el procedimiento LogVol,AR

Tabla 13 Niveles plasmáticos de quimiocina KC 35 días posimplantación

(n=10)

GRUPO: INTERVALO DE VALORES DE KC, pg/ml PROM. KC, pg/ml (+/- DT)

IgG1 de rata + humana: 76,3 - 168,4 112,5 +/-10,0

Controles de isotipo de IgG4

Anti IL-17 de ratón + anti IL-17 humana: 55,6 -110,5 84,7 +/- 5,7

PROM. PORCENTUAL DIFERENCIA DE KC (grupo de anti IL-17 en comparación con el grupo de control de isotipo): - 24,7 %

10

15

20

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Eli Lilly and Company

<120> ANTICUERPOS ANTI IL-17

<130> X17062A EP

<150> 06846464.3 <151>

<150> 60/801.948 <151>

<150> 60/749.953 <151>

<160> 284

<170> PatentIn versión 3.5

<210> 1 <211> 155 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 1

Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser 15 10 15

Leu Glu Ala lie Val Lys Ala Gly lie Thr lie Pro Arg Asn Pro Gly 20 25 30

Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn 35 40 45

Leu Asn lie His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser 50 55 60

Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu 65 70 75 80

Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val lie Trp Glu Ala Lys Cys Arg His 85 90 95

Leu Gly Cys lie Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser 100 105 110

Val Pro lie Gln Gln Glu lie Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His 115 120 125

Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys lie Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140

Thr Cys Val Thr Pro lie Val His His Val Ala 145 150 155

<210> 2 <211> 178 <212> PRT

<213> Homo sapiens <400>2

Met Asp Trp Pro His Asn Leu Leu Phe Leu Leu Thr He Ser He Phe 15 10 15

Leu Gly Leu Gly Pro Trp Pro Lys Trp Lys Arg Lys Gly Gln Gly Arg 20 25 30

Pro Gly Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Gln Val Pro Leu Asp Leu Val 35 40 45

Ser Arg Met Lys Pro Tyr Ala Arg Met Glu Glu Tyr Glu Arg Asn lie 50 55 60

Glu
Glu: Met Val Al a Gln Leu Arg Asn Ser Ser Glu Leu Al a Gln Arg

65: 70 75 80

Lys: cys Glu Val Asn Leu Gln Leu T rp Met Ser Asn Lys Arg Ser Leu




: 85 90 95

Ser: Pro T rp Gly Tyr Ser lie Asn Hi s Asp Pro Ser Arg lie Pro Val

100 105 110

Asp: Leu Pro Glu Al a Arg Cys Leu Cys Leu Gly Cys Val Asn Pro Phe


: 115 120 12 5

Thr: Met T rp Glu Asp Arg Ser Met Val Ser Val Pro Val Phe Ser Gln

: 130 135 140

Val: Pro Val Arg Arg Arg Leu Cys Pro Pro Pro Pro Arg Thr Gly Pro

145: 150 155 160

Cys: Arg Gln Arg Al a Val Met Glu Thr lie Al a Val Gly Cys Thr
Cys


: 165 170 175

lie Phe

5 <210>3

<211> 196 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 3

5

Met Thr Leu Leu Pro Gly Leu Leu 1 5

Leu Ala His His Asp Pro Ser Leu 20

Thr Pro His Cys Tyr Ser Ala Glu 35 40

His Leu lie Ala Arg Gly Ala Lys 50 55

Leu Val Ser Ser Leu Glu Ala Ala 65 70

Pro Ser Ala Thr Thr Gin Cys Pro 85

Glu Ala Asp Thr His Gin Arg Ser 100

Asp Thr Asp Glu Asp Arg Tyr Pro 115 120

Leu Cys Arg Gly Cys lie Asp Ala 130 135

Leu Asn Ser Val Arg Leu Leu Gin 145 150

Pro Cys Ser Arg Asp Gly Ser Gly 165

Phe His Thr Glu Phe lie His Val 180

Pro Arg Ser Val 195

Phe Leu Thr Trp Leu His Thr 10 15

Arg Gly His Pro His Ser His 25 30

Glu Leu Pro Leu Gin Ala Pro 45

Trp Gly Gin Ala Leu Pro Val 60

Ser His Arg Gly Arg His Glu

75

Val: Leu Arg Pro Glu Glu
Val

: 90 95

He: Ser Pro T rp Arg Tyr Arg

105: 110

Gln: Lys Leu Al a Phe Al a Glu



: 12 5

Arg: Thr Gly Arg Glu Thr Al a



: 140

Ser: Leu Leu Val Leu Arg Arg


: 155

Leu: Pro Thr Pro Gly Al a Phe

: 170 175

Pro: Val Gly Cys Thr Cys Val

185: 190

<210>4 <211> 202 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 4

Cys

Gly

Pro

Al a

Arg

80

Leu

Val

Cys

Al a

Arg

160

Al a Leu

35

Al a: Gly Phe Leu Leu Al a Leu Pro Pro Ser T rp

: 5 10

Arg: Al a Gly Arg Arg Pro Al a Arg Pro Arg Gly

20: 25 30

Glu
Glu: Leu Leu Glu Gln Leu Tyr Gly Arg Leu

15

40

45

65

Val 50: Leu Ser Al a Phe Hi s 55 Hi S Thr Leu Gln Leu 60

Al a: Arg Asn Al a Ser cys Pro Al a Gly Gly Arg

70

75

80

Arg Phe Arg Pro Pro Thr Asn Leu Arg Ser Val Ser Pro Trp Ala Tyr

85

90

95

115

Tyr 100: Asp Pro Al a Arg Tyr 105 Pro Arg Tyr Leu Pro 110

Cys: Arg Gly Cys Leu Thr Gly Leu Phe Gly Glu

120

12 5

Val Arg Phe Arg Ser Ala Pro Val Tyr Met Pro Thr Val Val Leu Arg

130

135

140

Arg 145: Thr Pro Al a Cys Al a 150 Gly Gly Arg Ser Val 155 Tyr Thr Glu Al a Tyr 160

Val: Thr He Pro Val Gly Cys Thr Cys Val Pro Glu Pro Glu Lys Asp

165

170

175

Ala Asp Ser lie Asn Ser Ser lie Asp Lys Gln Gly Ala Lys Leu Leu

180

185

190

Leu Gly Pro Asn Asp Ala Pro Ala Gly Pro

195

200

<210>5 <211> 177 <212> PRT

5 <213> Homo sapiens

<400>5

Met 1: Arg Glu Arg Pro 5 Arg Leu Gly Glu Asp 10 Ser Ser Leu lie Ser 15

Phe: Leu Gln Val Val Al a Phe Leu Al a Met Val Met Gly Thr Hi S

Leu

Thr

20

25

30

Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser 35 40 45

Glu

Al a 65

Glu 50: Leu Leu Arg T rp Ser 55 Thr Val Pro Val Pro 60

Arg: Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Al a

70

75

Pro Leu Glu Pro

Ser Glu Asp Gly 80

Pro Leu Asn Ser

Asp Leu Asn Arg 100

Arg 85: Al a lie Ser Pro Trp 90 Arg Tyr Glu Leu Asp 95

Leu: Pro Gln Asp Leu Tyr Hi s Al a Arg Cys
Leu

105

110

Arg

Cys

Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly 115 120 125

Asn

Cys

145

Leu

Ser: Glu Leu Leu Tyr Hi s Asn Gln Thr Val Phe

130: 135 140

Hi S: Gly Glu Lys Gly Thr Hi s Lys Gly Tyr Cys




: 150 155

Tyr: Arg Val Ser Leu Al a Cys Val Cys Val Arg



: 165 170

Tyr Arg Arg Pro

Leu Glu Phe Phe 160

Pro Arg Val Met 175

Gly

<210>6 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>6

Met Val Lys Tyr 1

Gl u Al a Al a Al a

Leu 5: Leu Leu Ser lie Leu 10 Gly Leu Al a Phe Leu 15

Arg: Lys lie Pro Lys Val Gly Hi s Thr Phe Phe

Ser

Gln

5

10



: 20 25 30

Lys: Pro Gl u Ser Cys Ser Met Ser Arg Asn lie Gl U Ser Arg Ser Thr

: 35 40 45

Ser: Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro
Ser

: 50 55 60

Glu: Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys lie Asn Ala Gln

65: 70 75 80

Gly: Lys Glu Asp lie Ser Met Asn Ser Val Pro lie Gln Gln Glu Thr

: 85 90 95

Leu: Val val Arg Arg Lys His Gln Giy cys Ser val Ser Phe Gln
Leu



: 100 105 110

Gl u: Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val lie

: 115 120 12 5

His His Val Gln 130

<210>7 <211> 158 <212> PRT <213> Mus sp.

<400>7

Met Ser Pro Gly Arg Ala Ser Ser Val Ser Leu Met Leu Leu Leu Leu 15 10 15

Leu Ser Leu Ala Ala Thr Val Lys Ala Ala Ala He He Pro Gln Ser 20 25 30

Ser Ala Cys Pro Asn Thr Glu Ala Lys Asp Phe Leu Gln Asn Val Lys 35 40 45

Val: Asn Leu Lys Val Phe Asn Ser Leu Gly Al a Lys Val Ser Ser Arg

: 50 55 60

Arg: Pro Ser Asp Tyr Leu Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His

65: 70 75 80

Arg: Asn Gl u Asp Pro Asp Arg Tyr Pro Ser Val lie Trp Gl u Al a Gln

85 90 95

Cys Arg His Gln Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys Leu Asp His His 100 105 110

Met Asn ser val Leu lie Gln Gln Glu lie Leu val Leu Lys Arg Glu 115 120 125

Pro Glu Ser Cys Pro Phe Thr Phe Arg Val Glu Lys Met Leu Val Gly 130 135 140

Val Gly Cys Thr Cys Val Ala Ser lie Val Arg Gln Ala Ala 145 150 155

<210>8 <211> 158 <212> PRT <213> Rattus rattus

Met

1

Ser Pro Arg Arg lie 5

Pro Ser Met Cys Leu Met 10

Leu

Leu Leu Leu 15

Leu Asn

Leu Glu 20

Ala Thr Val Lys Ala Ala Val Leu

25

lie

Pro Gln Ser 50

Ser Val

Cys Pro

55

Asn Ala Glu Ala Asn Asn Phe Leu 40

Gln

45

Asn Val Lys

Val Asn Leu Lys Val lie

50

Asn Ser Leu Ser Ser Lys 55 60

Ala Ser Ser Arg

Arg

65

Pro Ser Asp Tyr

Leu

70

Asn Arg Ser Thr Ser Pro 75

T rp

Thr Leu Ser 80

Arg Asn Glu Asp Pro Asp 85

Arg Tyr Pro Ser Val lie 90

T rp

Gl u Al a Gl n 95

Cys Arg

His Gln 100

Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys 105

Leu

Asp His His 110

Met Asn

Ser Val 115

Leu lie Gln Gln Glu lie Leu Val 120

Leu 12 5

Lys Arg Glu

Pro Glu Lys Cys Pro Phe 150

Thr Phe Arg Val Glu Lys 155 140

Met Leu Val Gly

Val

145

Gly Cys Thr Cys

Val

150

Ser Ser lie Val Arg His Ala Ser 155

<210>9 <211> 153 <212> PRT

<213> Oryctolagus cuniculus <400>9

Met: Ser Leu Gly Arg lie Ser Ser Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Cys

1: 5 10 15

Leu: Val Al a Thr Val Lys Asn Gly lie Al a Met Pro Arg Asn Pro Gly



: 20 25 50

Cys: Pro Asn Al a Glu Asp Lys Asn Phe Pro Gln Asn Val Lys Val Ser

55

40

45

Leu Asn lie Leu Asn Lys Ser Val Asn Ser Arg Arg Pro Ser Asp Tyr 50 55 60

Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His Arg Asn Glu Asp Arg 65 70 75 80

Glu

Cys

lie

Hl S

Arg: Tyr Pro Ser Val lie T rp Glu Al a Lys Cys Arg Hi s Leu



: 85 90 95

Val: Asn Al a Glu Gly Asn Glu Asp Hi S Hi S Met Asn Ser
Val


: 100 105 110

Gln
Gln: Glu lie Leu Val Leu Arg Arg Glu Ser Gln Hi s Cys

: 115 120 12 5

Ser: Phe Arg Leu Glu Lys Met Leu val Al a val Gly Cys Thr

150

155

Gly

Pro

Cys

Val Thr Pro lie lie His His Met Ala 145 150

5

10

15

<211> 155 <212> PRT

<213> Macaca fascicularis <400> 10

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Leu Glu Ala lie Val Lys Ala Gly lie Ala lie Pro Arg Asn Ser Gly 20 25 30

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Leu Asn lie His Asn Arg Asn Thr Ser Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser 50 55 60

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Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val lie Trp Glu Ala Lys Cys Arg His 85 90 95

Leu Gly Cys Val Lys Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser 100 105 110

Val Pro lie Gln Gln Glu lie Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Arg His 115 120 125

Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys lie Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140

Thr Cys Val Thr Pro lie Val His His Val Ala 145 150 155

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<220>

<223> construcción sintética <400> 11

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5

10

15

20

25

30

35

40

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<220>

<223> construcción sintética

<400> 13

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<220>

<223> construcción sintética

<400> 14

Gly Tyr Ser Phe Gly Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 15

Gly Tyr Ser Phe Arg Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

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<220>

<223> construcción sintética

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5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

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<223> construcción sintética <400> 19

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<220>

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<220>

<223> construcción sintética

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His Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn 15 10

<210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

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5

10

15

20

25

30

35

40

<223> construcción sintética <400> 23

Asn

10

<210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 24

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Phe Asn Met 1 5

Asn

10

<210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 25

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Leu 1 5

Gly

10

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<220>

<223> construcción sintética

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Hi S 10

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<220>

<223> construcción sintética

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Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr His Met Ser 15 10

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5

10

15

20

25

30

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<220>

<223> construcción sintética <400> 29

Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 30 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 30

Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 31 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 31

Val lie Asn Pro Ala Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 32

Val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

Gl y '

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

<223> construcción sintética

<400> 33

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 34

<210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 35

Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 36

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Leu Tyr 15 10

<210> 37 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 37

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

<210> 38 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

<223> construcción sintética <400> 38

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Val Tyr 15 10

<210> 39 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 39

Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

<210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 40

Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Thr Tyr 15 10

<210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 41

Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

<210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 42

Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Pro Tyr 15 10

<210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

5

10

15

20

25

30

35

40

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

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<220>

<223> construcción sintética <400> 44

Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Gly Tyr 15 10

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<220>

<223> Construcción sintética

<400> 45

Tyr Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

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<220>

<223> construcción sintética

<400> 46

Tyr Asp Ala Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

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<220>

<223> construcción sintética

<400> 47

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

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Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

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Tyr Asp Tyr Leu Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

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<220>

<223> Construcción sintética <400> 50

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<220>

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Tyr Asp Tyr Ala Pro Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

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<220>

<223> Construcción sintética

<400> 52

Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr 15 10

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<220>

<223> Construcción sintética <400> 53

Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr 15 10

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5

10

15

20

25

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 54

Tyr Asp Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 55

Tyr

1

Asp Tyr His

Thr

5

Gly Thr Gly Val

Tyr

10

<210> 56 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 56

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 57 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 57

5

10

Gln Val Gln Leu Val Gl n Ser Gly Ala Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Trp Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 58 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 58

Gl n 1

Ser

Asn

Gly

Lys

65

Met Al a Thr

val: Gl n Leu Val Gl n Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser



: 5 10 15

val: Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 20 25 30

Met: Asn T rp val Arg Gln Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Gl u T rp
Met

: 35 40 45

val: lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

50: 55 60

Gly: Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr



: 70 75 80

Gl u: Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys



: 85 90 95

Arg: Tyr Asp Tyr T rp Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n Gly


: 100 105 110

Leu: Val Thr Val Ser Ser

: 115

<210> 59 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

5

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 59

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val

1: 5 10

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr



: 20 25

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln


: 35 40

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp

: 50 55

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser

65: 70 75

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr




: 85 90

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Leu



: 100 105

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser

115

Lys Lys Pro Gly Ser 15

Ser Phe Thr Asp Tyr 30

Gly Leu Glu Trp Met 45

Tyr Asn Gln Arg Phe 60

Thr Ser Thr Ala Tyr 80

Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Tyr Trp Gly Gln Gly 110

<210> 60 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 60

Gln Val Gln Leu Val Gl n 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys 20

Asn Met Asn Trp Val Arg 35

Gly Val lie Asn Pro Asn 50

Lys Gly Arg Val Thr lie 65 70

Met Glu Leu Ser Ser Leu 85

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala 100

Ser: Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly
Ser



: 10 15

Lys: Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 25 30

Gl n: Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Gl u T rp Met

: 40 45

Tyr: Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

55: 60

Thr: Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr



: 75 80

Arg: Ser Gl u Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys



: 90 95

Thr: Gly Thr Gly Gly Tyr T rp Gly Gl n Gly


: 105 110

Ser

10

15

<210> 61 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 61

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn Trp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu Trp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl U Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 62 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 62

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

10

15

<210> 63 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 63

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Thr Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 64

Gln Val Gln Leu Val Gln 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys 20

Asn Met Asn Trp Val Arg 35

Gly Val lie Asn Pro Asn 50

Lys 65: Gly Arg Val Thr lie 70

Met: Glu Leu Ser Ser Leu

Ser: Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly
Ser



: 10 15

Lys: Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 25 30

Gln: Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

: 40 45

Tyr: Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

55: 60

Thr: Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr



: 75 80

Arg: Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys

10

15

85 90 ' " 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 65 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 65

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 20 25 30

Asn: Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gl n Gly Leu Gl u Trp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Pro Tyr T rp Gly Gln Gly


: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 66 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 66

Gl n: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Gl U Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: val Lys val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Al a val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Gly Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu val Thr val Ser Ser

10

15

<210> 67 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 67

Gln 1: Val Gln

Ser: Val Lys

Asn: Met Asn 35

Gly: Val 50 He

Lys 65: Gly Arg

Met: Gl u Leu

Al a: Arg Tyr

Thr: Leu Val 115

Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 5 10 15

Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 40 45

Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 55 60

Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 70 75 80

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Asp Tyr Ser Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Val Ser Ser

<210> 68 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

5

10

15

Asn: lie Asn T rp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 69 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 69

Gl n: Val Gl n Leu Val Gl n Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Leu Asn T rp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 70 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 70

5

10

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Gly Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 71 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 71

Gl n 1: Val Gln Leu Val 5 Gln Ser Gly Al a Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Arg Asp

Ser

Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl U Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

<210> 72 <211> 119

10

15

<220>

<223> construcción sintética <400> 72

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Trp Tyr


: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val He Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

50: 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr He Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr T rp Gly Gln Gly


: 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 73 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 73

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Asn Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gl n Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val He Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50: 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr He Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Ala: Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly



: 100 105 110

: Thr Leu Val Thr Val Ser Ser ■ --



: 115

<210> 74 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys 20

Asn Met Ser Trp Val Arg 35

Gly Val lie Asn Pro Asn 50

Lys: Gly Arg Val Thr He

65: 70

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu




: 85

Al a: Arg Tyr Asp Tyr
Al a



: 100

Thr: Leu Val Thr Val Ser

115

5 <210> 75

<211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

10 <223> Construcción sintética

<400> 75

Gln Val Gln Leu Val Gln 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys 20

Asn Thr Asn Trp Val Arg 35

Gly Val lie Asn Pro Asn 50

Lys Gly Arg Val Thr lie 65 70

Met Glu Leu Ser Ser Leu

Ser: Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly
Ser



: 10 15

Lys: Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 25 30

Gln: Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

: 40 45

Tyr: Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

55: 60

Thr: Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr



: 75 80

Arg: Ser Gl u Asp Thr Al a val Tyr Tyr cys



: 90 95

Thr: Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln Gly


: 105 110

Ser

Ser: Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly
Ser



: 10 15

Lys: Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 25 30

Gln: Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

: 40 45

Tyr: Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

55: 60

Thr: Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr



: 75 80

Arg: Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys

85 90 ' ~ 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 76 <211> 119 <212> PRT

5 <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

10 <210> 77

<211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

15 <223> construcción sintética

<400> 77

5

10

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser His Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 78 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 78

Gln val Gln Leu val Gln 1 5

Ser val Lys val ser cys 20

Asn Met Asn Trp val Arg 35

Gly val lie Asn Pro Asn 50

Lys Gly Arg val Thr lie 65 70

Ser: Gly Al a Glu val Lys Lys Pro Gly



: 10 15

Lys: Al a ser Gly Tyr Hi S Phe Thr Asp


: 25 30

Gln: Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

: 40 45

Tyr: Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg

55: 60

Thr: Al a Asp Glu ser Thr ser Thr Al a

75

Ser

Tyr

Met

Phe

Tyr

80

Met

Al a

Thr

Gl U: Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl U Asp Thr Al a Val Tyr Tyr



: 85 90 95

Arg: Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n


: 100 105 110

Leu: val Thr Val Ser ser

: 115

Cys

Gly

<210> 79 <211> 119

10

<220>

<223> construcción sintética <400> 79

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 80 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 80

Gln: Val Gl n Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Phe



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl U Asp Thr Al a val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Al a Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu val Thr Val Ser Ser


: 115

74

10

15

<210> 81 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 81

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 82

Gln Val Gln Leu Val Gl n Ser Gly Ala Glu Val 15 10

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 20 25

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln 35 40

Gly Val lie Asn Pro Ala Tyr Gly Thr Thr Asp

50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser 65 70 75

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr 85 90

Ala Arg Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Ala 100 105

Lys Lys Pro Gly Ser 15

Ser Phe Thr Asp Tyr 30

Gly Leu Glu Trp Met 45

Tyr Asn Gln Arg Phe 60

Thr Ser Thr Ala Tyr 80

Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Tyr Trp Gly Gln Gly 110

10

15

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<220>

<223> construcción sintética <400> 83

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr


: 20 25 30

Asn: Met Asn Trp Val Arg Gl n Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met


: 35 40 45

Gly: Val He Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Ala: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 84 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 84

Gl n: val Gl n Leu val Gl n ser Gly Al a Gl U val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: val Lys val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn Trp val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Gl U T rp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Ala val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr ser Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

: Thr Leu Val Thr Val Ser Ser --



: 115

<210> 85

10

15

<211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 85

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gl y Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val He Asn Pro Asn Tyr Gl y Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr He Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Se r Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gl y Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 86 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 86

Gln Val Gln Leu

1

Ser Val Lys Val 20

Asn Met Asn Trp 35

Gly Val lie Asn 50

Lys Gly Arg Val 65

Met Glu Leu Ser

Val: Gl n Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly

5: 10 15

Ser: Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp




: 25 30

Val: Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp


: 40 45

Pro: Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg


: 55 60

Thr: lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a

: 70 75

Ser: Leu Arg Ser Gl U Asp Thr Al a Val Tyr Tyr

10

15

85 90 ' ~ 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 87 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 87

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 88 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 88

5

10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Leu Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 89 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 89

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn Trp val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu Trp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl U Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Ser Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 90 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 90

Gl n Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr He

65: 70

Met: Glu Leu Ser Ser Leu




: 85

Al a: Arg Tyr Asp Tyr
Al a



: 100

Thr: Leu Val Thr Val Ser


: 115

Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 75 80

Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

Pro Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 105 110

Ser

<210> 91 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

10

<220>

<223> construcción sintética

<400> 91

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

5

10

15

<210> 92 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 92

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 93 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 93

5

10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 94 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 94

Gln val Gln Leu val Gln ser 1 5

ser val Lys val ser cys Lys 20

His Leu Gly Trp Val Arg Gln 35

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr

50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr 65 70

Gly: Al a Gl U val Lys Lys Pro
Gly


: 10 15

Al a: ser Gly Tyr ser Phe Thr Asp

: 25 30

Al a: Pro Gly Gln Gly Leu Gl U T rp

40: 45

Gly: Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg




: 60

Al a: Asp Gl u Ser Thr Ser Thr
Al a

75

Ser

Tyr

Met

Phe

Tyr

80

Met

Al a

Thr

Glu: Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Al a val Tyr Tyr



: 85 90 95

Arg: Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n


: 100 105 110

Leu: Val Thr Val Ser Ser

: 115

Cys

Gly

<210> 95 <211> 119

<212> PRT <213> Artificial

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 95

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 20

His lie His Trp Val Arg Gln 35

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr 50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr 65 70

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg 85

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr 100

Thr Leu Val Thr Val Ser 115

Gly: Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser


: 10 15

Al a: Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

: 25 30

Al a: Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

40: 45

Gly: Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe




: 60

Al a: Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr


: 75 80

Ser: Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys


: 90 95

Gly: Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln
Gly

: 105 110

Ser

<210> 96 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 96

Gl n: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: lie Hi S T rp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Gl u Trp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr ser Thr Al a Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

10

15

<210> 97 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 97

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr His Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 98 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 98

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg val Thr lie Thr Ala Asp Glu ser Thr ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

<210> 99

10

<211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 99

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 100 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 100

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 101 <211> 119 <212> PRT

5 <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

5

10

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Hi s Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 102 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 102

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: lie Hi S T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 103 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

5

10

<220>

<223> construcción sintética <400> 103

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu

1: 5 10

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly



: 20 25

Hi s: He Hi S T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly


: 35 40

Gly: Val He Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr

: 50 55

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu

65: 70

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp




: 85 90

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Al a Thr Gly Thr Gly



: 100 105

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

Val Lys Lys Pro Gly Ser 15

Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 30

Gln Gly Leu Glu Trp Met 45

Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 60

Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 75 80

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 110

<210> 104 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 104

Gln: val Gl n Leu val Gln Ser Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: lie Hi S T rp val Arg Gl n Al a Pro Gly Gln Gly Leu Gl u Trp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gl u Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Al a Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 105 <211> 119

10

<212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 105

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 20

His lie His Trp Val Arg Gln 35

Gly Val lie Asn Pro Glu Tyr 50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr 65 70

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg




: 85

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr



: 100

Thr: Leu Val Thr val Ser Ser

115

<210> 106 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 106

Gly: Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser


: 10 15

Al a: Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

: 25 30

Al a: Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

40: 45

Gly: Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe




: 60

Al a: Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr


: 75 80

Ser: Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys


: 90 95

Gly: Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gln
Gly

: 105 110

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 20

His lie His Trp Val Arg Gln 35

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr 50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr 65 70

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg 85

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr 100

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 107 <211> 119 <212> PRT

5 <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 107

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys 20

His Leu Gly Trp Val Arg Gln 35

Gly Val lie Asn Pro Glu Tyr 50 55

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr 65 70

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg




: 85

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Hi s Thr



: 100

Thr: Leu Val Thr val Ser Ser

Gly: Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser


: 10 15

Al a: Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

: 25 30

Al a: Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

40: 45

Gly: Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe




: 60

Al a: Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

75 80

Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 105 110

Gly: Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser


: 10 15

Al a: Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

: 25 30

Al a: Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

40: 45

Gly: Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe




: 60

Al a: Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

75 80

Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 105 110

10

15

<210> 108 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 108

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 ' ^95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 109 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética <400> 109

Gl n: Val Gl n Leu Val Gln Ser Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

His: Met Ser T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Gl u Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 110 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

5 <220>

<223> construcción sintética

<400> 110

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 111 10 <211> 119

<212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética 15 <400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 112 <211> 119 <212> PRT

20 <213> Artificial

<220>

<223> construcción sintética

5

10

<400> 112

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Hi S: lie Ser Trp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n


: 35 40

Gly: Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp

: 50 55

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser

65: 70 75

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

85

90

Gly Leu Glu Trp Met 45

Tyr Asn Gl n Arg Phe 60

Thr Ser Thr Ala Tyr 80

Ala Val Tyr Tyr Cys 95

Al a: Arg Tyr Asp 100 Tyr Tyr

Thr: Leu Val 115 Thr Val Ser

Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gl n Gly 105 110

Ser

<210> 113 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 113

Gl n: Val Gl n Leu Val Gl n Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: lie Ser Trp Val Arg Gl n Al a Pro Gly Gl n Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Al a Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu val Thr Val Ser Ser


: 115

10

15

<210> 114 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 114

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: lie Hi S Trp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gl n Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr T rp Gly Gln Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 115 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 115

Gln Val Gln Leu Val 1 5

Ser Val Lys Val Ser 20

His lie His Trp Val 35

Gly Val lie Asn Pro 50

Lys Gly Arg Val Thr 65

Met Glu Leu Ser Ser 85

Ala Arg Tyr Asp Tyr 100

Thr Leu Val Thr Val 115

Gln: Ser Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser




: 10 15

cys: Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 25 30

Arg: Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met

: 40 45

Asn: Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 55 60

lie: Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

70: 75 80

Leu: Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 90 95

Tyr: Thr Gly Thr Gly Val Tyr T rp Gly Gln Gly



: 105 110

Ser Ser

10

15

<210> 116 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 116

Gln: val Gln Leu val Gln Ser Gly Al a Gl u Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Asn: Met Asn T rp val Arg Gl n Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met


: 35 40 45

Gly: val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr lie Thr Al a Asp Gl u Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Gl u Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a val Tyr Tyr cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr val Ser Ser


: 115

<210> 117 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His lie His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Glu Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

10

15

<210> 118 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 118

Gln: Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Al a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1: 5 10 15

Ser: Val Lys Val Ser Cys Lys Al a Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr



: 20 25 30

Hi s: He Hi S T rp Val Arg Gln Al a Pro Gly Gln Gly Leu Glu T rp Met


: 35 40 45

Gly: Val He Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe

: 50 55 60

Lys: Gly Arg Val Thr He Thr Al a Asp Glu Ser Thr Ser Thr Al a Tyr

65: 70 75 80

Met: Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Al a Val Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Al a: Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr T rp Gly Gl n Gly



: 100 105 110

Thr: Leu Val Thr Val Ser Ser


: 115

<210> 119 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 119

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

10

85

90

95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 120 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 120

Gln 1: Val Gln

Ser: Val Lys

Hi s: lie Hi S 35

Gly: Val 50 lie

Lys 65: Gly Arg

Met: Glu Leu

Al a: Arg Tyr

Thr: Leu Val 115

Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 5 10 15

Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 40 45

Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 55 60

Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 70 75 80

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Val Ser Ser

<210> 121 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 121

5

10

15

20

25

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Met Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 122 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 122

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 123 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 123

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser His Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 124 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 124

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

5

10

15

20

25

30

35

40

<210> 125 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 125

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 126 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 126

Arg Ser Ser Gln Ser Val Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 127 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 127

Val Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 128 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 128

Arg Ser Ser Ala Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 129 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 129

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 130 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 130

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 131 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 131

Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 132 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 132

Arg Ser His Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 133 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 133

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 134 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 134

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 135 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

5

10

15

20

25

30

35

40

Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Val His Ser Arg Gly Arg Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 136 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 136

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 137 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 137

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Thr His 15 10 15

<210> 138 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 138

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Ser His 15 10 15

<210> 139 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 139

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr His His 15 10 15

<210> 140 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 140

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

<223> Construcción sintética <400> 141

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Trp Leu His 15 10 15

<210> 142 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 142

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Val Tyr Leu His 15 10 15

<210> 143 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 143

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Arg Gly Lys Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 144 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 144

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Leu Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 145 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 145

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 146 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 146

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 147 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 147

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 148 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 148

Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser Arg Gly Asn Thr Phe Leu His 15 10 15

<210> 149 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 149

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser His Gly Asn Thr Tyr Leu His 15 10 15

<210> 150 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 150

<210> 151 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5

5

10

15

20

25

30

35

40

<210> 152 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 152

Lys Val Ser Asn Arg Phe His 1 5

<210> 153 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 153

Lys Val Ala Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 154 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 154

Lys Val Ser Val Arg Phe Ser 1 5

<210> 155 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 155

Lys Val Ser Asn Asn Phe Ser 1 5

<210> 156 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 156

Lys Val Asp Asn Arg Phe Ser 1 5

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

<223> Construcción sintética <400> 157

Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 158 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 158

Lys Val Ser Asn lie Phe Ser 1 5

<210> 159 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 159

Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser 1 5

<210> 160 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 160

Lys Val Arg Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 161 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 161

Lys Val Pro Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 162 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 162

Lys Val Ser Asn Arg Phe Val 1 5

<210> 163 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 163

Lys Val Ser Asn Arg lie Ser 1 5

<210> 164 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 164

Lys Val Ser Asn Arg Phe Thr 1 5

<210> 165 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 165

Lys Val Ser Asn Arg Asn Ser 1 5

<210> 166 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 166

Lys Val His Asn Arg Phe Ser 1 5

<210> 167 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 167

5

10

15

20

25

30

35

40

<210> 168 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 168

Ser Gln Ser Thr His Leu Pro Phe Thr 1 5

<210> 169 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 169

Ser Gln Ser Thr His Tyr Pro Phe Thr 1 5

<210> 170 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 170

Ser Gl n Ser Thr His lie Pro Phe Thr 1 5

<210> 171 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 171

Ser Gln Ser Leu His Val Pro Phe Thr 1 5

<210> 172 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 172

Ser Gln Ser Thr His Glu Pro Phe Thr 1 5

<210> 173

5

10

15

20

25

30

35

40

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 173

Asn Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr 1 5

<210> 174 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 174

Ser Gln Thr Thr His Val Pro Phe Thr 1 5

<210> 175 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 175

Ser Gln Ser Met His Val Pro Phe Thr 1 5

<210> 176 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 176

Ser Gln Thr Thr His Leu Pro Phe Thr 1 5

<210> 177 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 177

<210> 178 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

Ser Gln Ser Thr Ser Leu Pro Phe Thr 1 5

<400> 178

Asp lie Val Met Thr Gln 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu 35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr 50

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser

65: 70

Ser: Arg Val Glu Al a Glu



: 85

Thr: Hi s Leu Pro Phe
Thr

100

5 <210> 179

<211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

10 <223> Construcción sintética

<400> 179

Asp lie Val Met Thr Gln 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu 35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr 50

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser

65: 70

Ser: Arg Val Glu Al a Glu



: 85

Thr: Hi s Tyr Pro Phe
Thr

100

Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 10 15

Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 25 30

His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 55 60

Gly: Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He




: 75 80

Asp: Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser



: 90 95

Phe: Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gl u He Lys


: 105 110

Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 10 15

Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 25 30

His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 55 60

Gly: Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie




: 75 80

Asp: Val Gly Val Tyr Tyr cys Ser Gln Ser



: 90 95

Phe: Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 105 110

10

15

<210> 180 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 180

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Hi s: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100 105 110

<210> 181 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 181

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

ser Arg val Glu Ala Glu Asp val Gly val Tyr Tyr cys ser Gln ser 85 90 95

<210> 182

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 182

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Asn: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys

imagen4

<210> 183 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 183

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro

15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His 20 25 50

Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 55 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys val ser Asn Arg Phe ser Gly val 50 55 60

Asp: Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys

65: 70 75

Ser: Arg val Glu Al a Glu Asp val Gly val Tyr Tyr cys ser Gln



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He


: 100 105 110

Gl y

Ser

Pro

He

80

Ser

Lys

10

15

<210> 184 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 184

Asp lie Val Met Thr 1 5

Gln Pro Ala Ser lie 20

Asn Gly Asn Thr Tyr 35

Pro Gln Leu Leu lie 50

Asp Arg Phe Ser Gly 65

Ser Arg Val Glu Ala 85

Thr His Tyr Pro Phe 100

Gln: Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly




: 10 15

Ser: Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S
Ser

: 25 30

Leu: Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 40 45

Tyr: Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

: 55 60

Ser: Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

70: 75 80

Glu: Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser




: 90 95

Thr: Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys



: 105 110

<210> 185 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 185

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

10

15

<210> 186 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 186

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Asn: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 187 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 187

Asp lie Val 1

Gln Pro Ala

His Gly Asn 35

Pro Gln Leu 50

Asp Arg Phe 65

Ser Arg Val

Thr His Tyr

Met: Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

: 5 10 ■ 15

Ser: lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi s
Ser

20: 25 30

Thr: Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser




: 40 45

Leu: lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro



: 55 60

Ser: Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie


: 70 75 80

Gl u: Al a Gl u Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

: 85 90 95

Pro: Phe Thr Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100: 105 110

<210>188

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 188

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Hi s: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gl u He Lys

100 105 110

<210> 189 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 189

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Gl u Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

<210> 190 <211> 112

<212> PRT <213> Artificial

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 190

Asp lie Val Met 1

Gln Pro Ala Ser 20

Asn Gly Asn Thr 35

Pro Gln Leu Leu 50

Asp Arg Phe Ser 65

Ser Arg Val Glu

Thr His Tyr Pro 100

Thr 5: Gln Thr Pro

lie: Ser Cys Arg

Tyr: Leu Hi S T rp 40

lie: Tyr Lys 55 Val

Gly: Ser 70 Gly Ser

Al a 85: Glu Asp Val

Phe: Thr Phe Gly

Leu Ser Leu Ser Val 10

Ser Ser Gln Ser Leu 25

Tyr Leu Gln Lys Pro 45

Ser Asn Arg Phe Ser 60

Gly Thr Asp Phe Thr

75

Gly Val Tyr Tyr Cys 90

Gln Gly Thr Lys Leu 105 110

Thr: Pro Gly

: 15

Val: Hi S Ser

30

Gly: Gln Ser

Gly: Val Pro

Leu: Lys lie


: 80

Ser: Gln
Ser

: 95

Glu: lie Lys

<210> 191 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 191

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser 20

Arg Gly Asn Thr

35

Pro Gln Leu Leu 50

Asp Arg Phe Ser 65 70

lie: Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val Hi s Ser



: 25 30

Tyr: Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 40 45

lie: Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro


: 55 60

Gly: Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

75

80

Ser: Arg Val Glu Al a 85 Glu Asp Val Gly Val 90

Thr: Hi s Tyr Pro 100 Phe Thr Phe Gly Gln 105 Gly

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 95

10

15

<210> 192 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 192

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

<210> 193 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 193

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Val Ser Ser GÍn Ser Leu VaT" Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

10

15

<210> 194 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 194

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser cys Arg Ser Ser Al a Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

<210> 195 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 195

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys Hi S Ser



: 20 25 30 "

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 196

10

15

<220>

<223> Construcción sintética <400> 196

Asp: He Val Met Thr Gl n Thr Pro

1: 5

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg



: 20

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi s T rp


: 35 40

Pro: Gl n Leu Leu lie Tyr Lys Val

: 50 55

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

65: 70

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val




: 85

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly

100

Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 10 15

Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser 25 30

Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45

Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 60

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 75 80

Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 90 95

Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 105 110

<210> 197 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 197

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Ser 20 25 30

5

10

15

Arg: Gly Asn


: 35

Pro: Gln Leu

: 50

Asp: Arg Phe

65

Ser: Arg Val

Thr: Hi s Tyr

Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 70 75 80

Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 198 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 198

Asp 1: He Val

Gln: Pro Al a

Arg: Gly Asn 35

Pro: Gln 50 Leu

Asp 65: Arg Phe

Ser: Arg Val

Thr: Hi s Tyr

Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 5 10 15

Ser lie Ser Cys Arg Ser His Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 70 75 80

Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 199 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 199

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

<210> 200 <211> 112 <212> PRT

5 <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 200

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

<220>

<223> Construcción sintética <400> 201

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Arg Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gl'n Lys Pro Gly" Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

5 100 105 110

<210> 202 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

10 <220>

<223> Construcción sintética

<400> 202

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Gl u Ala Gl u Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

5

10

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 203

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Thr His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 ' 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 204 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 204

Asp: lie val Met Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Ser Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys val Ser Asn Arg Phe Ser Gly val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg val Gl u Al a Gl u Asp val Gly val Tyr Tyr cys Ser Gln
Ser




: 85 90 95

Thr: Hi S Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

10

15

<210> 205 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 205

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Hi s Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 206 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 206

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

10

15

<220>

<223> Construcción sintética <400> 207

Asp: lie Val Met Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr T rp Leu Hi S T rp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser

: 35 40 45

Pro: Gl n Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Gl u Al a Gl U Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gl n
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100 105 110

<210> 208 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 208

<210> 209 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

Asp: lie Val Met Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Val Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser

: 35 40 45

Pro: Gl n Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gl n
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Gl u lie Lys


: 100 105 110

5

10

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 209

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

<210> 210 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 210

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Leu



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys


: 100 105 110

10

15

<210> 211 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 211

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr lie Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 65 70 75

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr 85 90

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr 100 105

60

Phe: Thr Leu Lys lie



: 80

Tyr: cys Ser Gl n Ser



: 95

Lys: Leu Glu lie
Lys


: 110

<210> 212 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 212

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

5

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 213

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

65: 70 75

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys




: 85 90

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu

100 105

Leu Lys lie 80

Ser Gln Ser 95

Glu lie Lys 110

<210> 214 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 214

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser

1: 5 10

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser



: 20 25

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi s T rp Tyr Leu Gl n Lys


: 35 40

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

65: 70 75

Ser: Arg Val Gl u Al a Gl u Asp Val Gly Val Tyr Tyr




: 85 90

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

100 105

Val Thr Pro Gly 15

Leu Val His Ser 30

Pro Gly Gln Ser 45

Ser Gly Val Pro

Thr: Leu Lys <u i— o H OO

Cys: Ser Gl n 95 Ser

Leu: Gl u 110 lie Lys

<210> 215 <211> 112

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 215

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 216 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 216

Asp lie Val Met Thr Gln 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu 35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr 50

Asp Arg Phe Ser Gly Ser 65 70

Ser Arg Val Gl u Ala Gl u 85

Thr: Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly



: 10 15

cys: Arg Ser Ser Gl n ser Leu Lys Hi S Ser

: 25 30

Hi S: T rp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser

: 40 45

Lys: Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

55: 60

Gly: Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie




: 75 80

Asp: Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser



: 90 95

Phe: Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Gl u lie Lys


: 105 110

10

15

<220>

<223> Construcción sintética <400> 217

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Hi S Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu "Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 218 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 218

Asp lie Val Met 1

Gln Pro Ala Ser 20

Arg Gly Asn Thr 35

Pro Gln Leu Leu 50

Asp Arg Phe Ser 65

Ser Arg Val Glu

Thr 5: Gln Thr Pro Leu Ser 10 Leu Ser Val Thr Pro 15 Gly

lie: Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val Hi S Ser

25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

lie Tyr Lys Val Ala Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 55 60

Gly: Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

: 70 75 80

Al a: Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85: 90 95

Phe: Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys




: 105 110

<210> 219 <211> 112

10

<212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 219

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Ara ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Val Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 220 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 220

Asp lie Val Met 1

Gln Pro Ala Ser 20

Arg Gly Asn Thr

35

Pro Gln Leu Leu 50

Asp Arg Phe Ser 65

Ser Arg Val Glu

Thr: Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser val Thr Pro Gly

5: 10 15

lie: Ser Cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Val Hi S Ser


: 25 30

Tyr: Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser



: 40 45

lie: Tyr Lys Val Ser Asn Asn Phe Ser Gly Val Pro

: 55 60

Gly: Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

: 70 75 80

Al a: Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr cys Ser Gln Ser

85: 90 95

Phe: Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys




: 105 110

10

15

<210> 221 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 221

Asp: He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Phe Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Asp Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi S Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gl u lie Lys


: 100 105 110

<210> 222 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 222

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Phe Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Thr Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gl u lie Lys


: 100 105 110

10

15

<210> 223 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 223

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn lie Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 224 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 224

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Gl u Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 225

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100 105 110

<210> 226 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 226

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro

15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His 20 25 50

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln 55 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys val Arg Asn Arg Phe ser Gly val 50 55 60

Asp: Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys

65: 70 75

Ser: Arg val Glu Al a Glu Asp val Gly val Tyr Tyr cys ser Gln



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie


: 100 105 110

Gl y

Ser

Pro

He

80

Ser

Lys

10

15

<210> 227 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 227

Asp: lie Val Met Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gl n: Pro Al a Ser lie Ser cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser

: 35 40 45

Pro: Gl n Leu Leu lie Tyr Lys Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gl n
Ser




: 85 90 -- “95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100 105 110

<210> 228 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 228

Asp lie Val Met Thr 1 5

Gl n Pro Ala Ser lie 20

Arg Gly Asn Thr Phe 35

Pro Gln Leu Leu lie 50

Asp Arg Phe Ser Gly 65

Ser Arg Val Glu Ala 85

Gl n: Thr Pro Leu Ser Leu Ser val Thr Pro Gly




: 10 15

Ser: cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Val Hi S
Ser

: 25 30

Leu: Hi S Trp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser


: 40 45

Tyr: Lys Val Ser Asn Arg Phe Val Gly Val Pro

: 55 60

Ser: Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

70: 75 80

Glu: Asp val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gl n Ser




: 90 95

Thr: Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys



: 105 110

10

15

<210> 229 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 229

Asp: lie Val Met Thr Gl n Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gl n Ser Leu Arg Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi s T rp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser

: 35 40 45

Pro: Gl n Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg lie Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Gl u Asp val Gly Val Tyr Tyr cys Ser Gl n
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi S Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gl n Gly Thr Lys Leu Gl u lie Lys


: 100 105 110

<210> 230 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 230

Asp lie Val Met Thr Gln 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu 35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr 50

Asp Arg Phe Ser Gly Ser 65 70

Ser Arg Val Glu Ala Glu 85

Thr His Tyr Pro Phe Thr 100

Thr: Pro Leu Ser 10 Leu

Cys: Arg Ser 25 Ser Arg

Hi S: T rp 40 Tyr Leu Gln

Lys 55: Val Ser Asn Arg

Gly: Ser Gly Thr Asp 75

Asp: Val Gly Val 90 Tyr

Phe: Gly Gln 105 Gly Thr

Ser Val Thr Pro Gly 15

Ser Leu Val His Ser 30

Lys Pro Gly Gln Ser 45

Phe Thr Gly Val Pro 60

Phe Thr Leu Lys lie 80

Tyr Cys Ser Gln Ser 95

Lys Leu Glu lie Lys 110

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 231

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Arg His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asn Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 232 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 232

<210> 233 <211> 112 <212> PRT

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Hi s Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

5

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 233

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Thr Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gl u" II e Lys

100 105 110

<210> 234 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 234

Asp He Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 235

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Ara Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser 20 25 30

His Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

100 105 ' 110

<210> 236 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 236

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Ara Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

10

15

<210> 237 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 237

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 238 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 238

Asp lie Val Met Thr Gln Thr 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His

35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys 50 55

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly

65: 70

Ser: Arg Val Gl u Al a Gl u Asp




: 85

Thr: His Tyr Pro Phe Thr Phe


: 100

<210> 239 <211> 112

Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 10 15

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 25 30

Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 40 45

Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 60

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

75 80

Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 90 95

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 105 110

10

<220>

<223> Construcción sintética <400> 239

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Phe Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys


: 100 105 110

<210> 240 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 240

Asp He Val Met Thr Gln Thr 1 5

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys 20

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His 35

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys

50 55

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly

65: 70

Ser: Arg Val Gl u Al a Gl u Asp



: 85

Thr: Hi S Tyr Pro Phe Thr Phe


: 100

Pro: Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly


: 10 15

Arg: Ser Ser Arg Ser Leu Val Hi S Ser

25: 30

T rp: Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gln Ser

40: 45

Val: Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro



: 60

Ser: Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie



: 75 80

Val: Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser


: 90 95

Gly: Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys

: 105 110

10

15

<210> 241 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 241

Asp: lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1: 5 10 15

Gln: Pro Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val Hi S Ser



: 20 25 30

Arg: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

: 35 40 45

Pro: Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys



: 100 105 110

<210> 242 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 242

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

5

10

15

20

25

30

<220>

<223> Construcción sintética <400> 243

Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 15 10 15

Gln Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Lys His Ser 20 25 30

Arg Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45

Pro Gln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe lie Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

<210> 244 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (1)..(1)

<223> X es G o H

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (3)..(3)

<223> X es S, H o P

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X es T, G, R, N o P

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (6)..(6)

<223> X es D o W

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (7)..(7)

<223> X es Y o F

5

10

15

20

25

30

35

40

45

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (8)..(8)

<223> X es N o H

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (9)..(9)

<223> X es M, I, L o T

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (10)..(10)

<223> X es N, S, G o H

<400> 244

Xaa Tyr Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 10

<210> 245 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X es N, M, A o E

<400> 245

Val lie Asn Pro Xaa Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 246 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (3)..(3)

<223> X es Y, A o P

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (4)..(4)

<223> X es A, S, F, L. H, Y o W <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X es T o P

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (6)..(6)

<223> X es G o S

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (9)..(9)

<223> X es P, A, V, G, L o T <400> 246

Tyr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Gly Xaa Tyr 15 10

<210> 247 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1)

<223> X es R or V

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (3)..(3)

<223> X es S o H

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (44)..(4)

<223> X es Q, K, A o R

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (6)..(6)

<223> X es L o V

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (7)..(7)

<223> X es V, K o R

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (9)..(9)

<223> X es S, N, A, R o L

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (10)..(10)

<223> X es R, H, N o Y

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (12)..(12)

<223> X es N, R o K

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (13)..(13)

<223> X es T o V

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (14)..(14)

<223> X es Y, F o W

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<221 > MISC_FEATURE <222> (15)..(15)

<223> X es L, T, S, H o F

<400> 247

Xaa Ser Xaa Xaa Ser Xaa Xaa His Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa His 15 10 15

<210> 248 <211>7 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (1)..(1)

<223> X es K o I

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (3)..(3)

<223> X es T, D, S, A, R, P o H <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (4)..(4)

<223> X es N, V o T

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X es R, N o I

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (6)..(6)

<223> X es F, N o I

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (7)..(7)

<223> X es S, H, V, T o I

<400> 248

Xaa Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5

<210> 249 <211>9 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (1)..(1)

<223> X es S o N

<220>

<221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3)

5

10

15

20

25

<223> X es S o T

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (44) .. (4)

<223> X es T, M o L

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (5)..(5)

<223> X es H o S

<220>

<221 > MISC_FEATURE <222> (6)..(6)

<223> X es L, Y, I, V o E

<400> 249

Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Phe Thr 1 5

<210> 250 <211> 468 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 250

atgactcctg: ggaagacctc attggtgtca ctgctactgc tgctgagcct ggaggccata 60

gtgaaggcag: gaatcacaat cccacgaaat ccaggatgcc caaattctga ggacaagaac 120

ttcccccgga: ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccaa taccaatccc 180

aaaaggtcct: cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag 240

gaccctgaga: gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaagt gccgccactt gggctgcatc 300

aacgctgatg: ggaacgtgga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg 360

gtcctgcgca: gggagcctcc acactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg 420

tccgtgggct: gcacctgtgt caccccgatt gtccaccatg tggcctaa 468

<210> 251 <211> 462 <212> ADN

<213> Oryctolagus cuniculus <400> 251

atgtcgcttg ggaggatttc atctgtgtca ctgctgctgc tgctgtgttt ggtggctact 60

gtgaagaatg gaatagcaat gccgcgaaat ccaggatgtc caaatgctga ggacaagaac 120

ttcccccaga atgtaaaagt cagcctgaac atccttaaca agagtgtaaa ttcccgaagg 180

ccttcagact actacaatcg atctacttca ccttggactc tccaccgcaa^cgaggatcgt 240

gagagatatc cctctgtgat ctgggaggcc aagtgccgcc acttgggctg tgtcaatgct 300

gaagggaatg aggaccacca catgaactct gtcccaatcc agcaagagat cctggtccta 360

cgcagggagt cccagcactg cccacactca ttccggctgg agaagatgct ggtggctgta 420

ggatgcacct gtgtaacccc catcatccat cacatggcct aa 462

<210> 252

<211> 477 <212> ADN <213> Rattus rattus

5

10

15

<400> 252

atgagtcccc: ggagaattcc atccatgtgc ctgatgctgt tgctgctact gaacctggag 60

gctacagtga: aggcagcggt actcatccct caaagttcag tgtgtccaaa cgccgaggcc 120

aataactttc: tccagaacgt gaaggtcaac ctgaaagtcc tcaactccct tagctcaaaa 180

gcgagctcca: gaaggccctc agactacctc aaccgttcca cttcaccctg gactctgagc 240

cgcaatgagg: accctgatag atatccttct gtgatctggg aggcacagtg ccgccaccag 300

cgctgtgtca: acgctgaggg gaagttggac caccacatga attctgttct catccagcaa 360

gagatcctgg: tcctgaagag ggagcctgag aagtgcccct tcactttccg ggtggagaag 420

atgctggtgg: gcgtgggctg cacctgcgtt tcctctattg tccgccatgc gtcctaa 477

<210> 253 <211>468 <212> ADN

<213> Macaca fascicularis

<400> 253

atgactcctg: ggaagacctc attggtgcta ctgctgctgc tgctgagcct ggaggccata 60

gtgaaggcag: gaatagcaat cccacgaaat tcaggatgcc caaattctga ggacaagaac 120

ttcccccgga: ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccag taccaatccc 180

aaaaggtcct: cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag 240

gaccctgaga: gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaaat gccgccactt aggctgcgtc 300

aaggctgatg: ggaacgtaga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg 360

gtcctgcgca: gggagcctcg gcactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg 420

tccgtgggct: gcacctgtgt cacccccatt gtccaccatg tagcctaa 468

<210> 254 <211>477 <212> ADN <213> Mus sp.

<400> 254

atgagtccag: ggagagcttc atctgtgtct ctgatgctgt tgctgctgct gagcctggcg 60

gctacagtga: aggcagcagc gatcatccct caaagctcag cgtgtccaaa cactgaggcc 120

aaggacttcc: tccagaatgt gaaggtcaac ctcaaagtct ttaactccct tggcgcaaaa 180

gtgagctcca: gaaggccctc agactacctc aaccgttcca cgtcaccctg gactctccac 240

cgcaatgaag: accctgatag atatccctct gtgatctggg aagctcagtg ccgccaccag 300

cgctgtgtca: atgcggaggg aaagctggac caccacatga attctgttct catccagcaa 360

gagatcctgg: tcctgaagag ggagcctgag agctgcccct tcactttcag ggtcgagaag 420

atgctggtgg gtgtgggctg cacctgcgtg gcctcgattg tccgccaggc^agcctaa

10

<210> 255 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 255

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 15 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

<210> 256 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 256

Gln: Pro Lys Al a Al a Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1: 5 10 15

Glu: Leu Gln Al a Asn Lys Al a Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe



: 20 25 30

Tyr: Pro Gly Al a Val Thr Val Al a T rp Lys Al a Asp Ser Ser Pro Val


: 35 40 45

Lys: Al a Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
Lys

50: 55 60

Tyr: Al a Al a Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

65: 70 75 80

Hi S: Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr Hi s Glu Gly Ser Thr Val Glu


: 85 90 95

Lys: Thr Val Al a Pro Thr Glu Cys Ser


: 100 105

<210> 257

<211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 257

Al a: Ser Phe Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Al a Pro Ser Ser Lys

1: 5 10 15

Ser: Thr Ser Gly Gly Thr Al a Al a Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr



: 20 25 30

Phe: Pro Glu Pro Val Thr Val Ser T rp Asn Ser Gly Al a Leu Thr Ser


: 35 40 45

Gly: Val Hi S Thr Phe Pro Al a Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

: 50 55 60

Leu: Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65: 70 75 80

Tyr: He cys Asn Val Asn Hi s Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys




: 85 90 95

Lys: Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr Hi s Thr Cys Pro Pro Cys



: 100 105 110

Pro: Al a Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
Pro
Pro


: 115 120 12 5

Lys: Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

: 130 135 140

Val
Val
Val: Asp Val Ser Hi S Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn T rp

145: 150 155 160

Tyr: Val Asp Gly Val Glu Val Hi s Asn Al a Lys Thr Lys Pro Arg Glu




: 165 170 175

Glu: Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu


: 180 185 190

Hi S: Gln Asp T rp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn


: 195 200 205

Lys: Al a Leu Pro Al a Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys Al a Lys Gly

: 210 215 220

Gln: Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225: 2 30 235 240

Met: Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr



: 245 250 255

Pro: Ser Asp He Al a Val Glu T rp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn


: 260 265 270

Asn: Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Glu T rp Glu Thr T rp Arg Arg


: 275 280 285

Leu: Tyr T rp Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg T rp Gln Gln Gly Asn

: 290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330

<210> 258 <211> 325 <212> PRT

5 <213> Homo sapiens

<400> 258

Al a: Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Al a Pro cys Ser Arg

1: 5 10 15

Ser: Thr Ser Glu Ser Thr Al a Al a Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr



: 20 25 30

Phe: Pro Glu Pro Val Thr Val Ser T rp Asn Ser Gly Al a Leu Thr Ser


: 35 40 45

Gly: Val Hi S Thr Phe Pro Al a Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

: 50 55 60

Leu: Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr

65: 70 75 80

Tyr: Thr Cys Asn Val Asp Hi s Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys




: 85 90 95

Thr: Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Al a Pro



: 100 105 110

Pro: Val Al a Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp


: 115 120 12 5

Thr: Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

: 130 135 140

Val: Ser Hi S Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn T rp Tyr Asp Gly
Val

145: 150 155 160

Glu: Val Hi S Asn Al a Lys Thr Lys Pro Arg Gl u Glu Gln Phe Asn Ser




: 165 170 175

Thr: Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val Hi S Gln Asp T rp Leu


: 180 185 190

Asn: Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Al a


: 195 200 205

Pro: lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
Pro

: 210 215 220

Gln: Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Gl u Met Thr Lys Asn
Gln

225: 2 30 235 240

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 245 250 255

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 260 265 270

Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 275 280 285

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 290 295 300

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 305 310 315 320

Leu Ser Pro Gly Lys 325

<210> 259 <211> 377 <212> PRT

5 <213> Homo sapiens

<400> 259

Al a: Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Al a Pro Cys Ser Arg

1: 5 10 15

Ser: Thr Ser Gly Gly Thr Al a Al a Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr



: 20 25 30

Phe: Pro Glu Pro val Thr val Ser Trp Asn Ser Gly Al a Leu Thr Ser


: 35 40 45

Gly: val Hi S Thr Phe Pro Al a val Leu Gl n ser ser Gly Leu Tyr ser

: 50 55 60

Leu: Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gl n Thr

65: 70 75 80

Tyr: Thr Cys Asn Val Asn Hi S Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys




: 85 90 95

Arg: Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr Hi s Thr Cys Pro


: 100 105 110

Arg: cys Pro Glu Pro Lys Ser cys Asp Thr Pro Pro Pro cys Pro
Arg


: 115 120 125

Cys: Pro Gl u Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
Cys

: 130 135 140

Pro: Glu Pro Lys Ser cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg cys
Pro

145: 150 155 160

Al a: Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys




: 165 170 175

Pro: Lys Asp Thr Leu Met lie ser Arg Thr Pro Glu val Thr Cys val



: 180 185 190

Val
Val: Asp Val Ser Hi s Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys T rp Tyr


: 195 200 205

Val: Asp Gly Val Glu Val Hi s Asn Al a Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

: 210 215 220

Gln: Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Hi s

225: 2 30 235 240

Gln: Asp T rp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys




: 245 250 255

Al a: Leu Pro Al a Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gln



: 260 265 270

Pro: Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

: 275 280 285

Thr: Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

: 290 295 300

Ser: Asp lie Al a Val Glu T rp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305: 310 315 320

Tyr: Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu



: 325 330 335

Tyr: Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg T rp Gln Gln Gly Asn lie



: 340 345 350

Phe: Ser Cys Ser Val Met Hi S Glu Al a Leu Hi s Asn Arg Phe Thr Gln


: 355 360 365

Lys: Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

: 370 375

<210> 260 <211> 326 <212> PRT

5 <213> Homo sapiens

<400> 260

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 50

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 55 40 45

Gly val His Thr Phe Pro Ala val Leu Gln ser ser Gly Leu Tyr ser 50 55 60

Leu ser ser val val Thr val Pro ser ser ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr: Thr Cys Asn Val Asp Hi S Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vaí Asp Lys




: 85 90 95

Arg: Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Al a Pro


: 100 105 110

Glu: Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys


: 115 120 12 5

Asp: Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130: 135 140

Asp: Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn T rp Tyr Val
Asp

145: 150 155 160

Gly: Val Glu Val Hi s Asn Al a Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe




: 165 170 175

Asn: Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Hi s Gln Asp



: 180 185 190

T rp: Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu


: 195 200 205

Pro: Ser Ser He Glu Lys Thr He Ser Lys Al a Lys Gly Gln Pro Arg

: 210 215 220

Glu: Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225: 2 30 235 240

Asn: Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp




: 245 250 255

He: Al a Val Glu T rp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys



: 260 265 270

Thr
Thr: Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser


: 275 280 285

Arg: Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg T rp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290: 295 300

Cys: Ser Val Met Hi s Glu Al a Leu Hi s Asn Hi s Tyr Thr Gln Lys Ser

305: 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325

<210> 261 <211> 10 <212> PRT

5 <213> Artificial

<220>

5

10

15

20

25

30

35

<223> Construcción sintética <400> 261

Tyr Asp Ala Phe Thr Gly Thr Gly Ala Tyr 15 10

<210> 262 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 262

imagen5

<210> 263 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 263

Trp Val Arg Gl n Ala Pro Gly Gl n Gly Leu Gl u Trp Met Gly 15 10

<210> 264 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 264

imagen6

<210> 265 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 265

Trp Gly Gl n Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 15 10

<210> 266 <211> 23

5

10

15

20

25

30

35

<212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 266

imagen7

<210> 267 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 267

Trp Tyr Leu Gl n Lys Pro Gly Gl n Ser Pro Gl n Leu Leu lie Tyr 15 10 15

<210> 268 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética <400> 268

imagen8

<210> 269 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Construcción sintética

<400> 269

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 15 10

<210> 270 <211> 119 <212> PRT <213> Mus sp.

<400> 270

5

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Arg Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 50

Asn Met Asn Trp val Lys Gln ser Asn Gly Lys ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Val lie Asn Pro Asn Tyr Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr val Asp Gln ser ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val lie Tyr Asp Tyr Ala Thr Gly Thr Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Ser Pro Leu Thr val ser ser 115

<210> 271 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp.

<400> 271

Asp: Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1: 5 10 15

Asp: Gln Al a Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Hi S Ser


: 20 25 30

Asn: Gly Asn Thr Tyr Leu Hi S T rp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser


: 35 40 45

Pro: Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
Pro

: 50 55 60

Asp: Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie

65: 70 75 80

Ser: Arg Val Glu Al a Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln
Ser



: 85 90 95

Thr: Hi s Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys



: 100 105 110

<210> 272 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 272

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 15 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 ' ~ 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

<210> 273 <211> 445 <212> PRT

5 <213> Homo sapiens

<400> 273

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal anti IL-17 humanizado, en la que dicho anticuerpo comprende un polipéptido de LCVR con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 241 y un polipéptido de HCVR con una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 118, y en la que el anticuerpo comprende

5 adicionalmente una región constante de la cadena pesada de IgG4 humana.
2. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende adicionalmente un vehículo, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable.
3. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el anticuerpo hace contacto con el péptido DGNVDYH (SEQ ID NO: 276) dentro del contexto de IL-17 humana de longitud

10 completa.
4. Una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para su uso en el tratamiento de una o más afecciones seleccionadas de artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis y esclerosis múltiple.

IL-17

IL-17B

IL-17C

IL-17D

IL-17E

IL-17F

1

MTPGKTSLVS

---MDWPHN

---MTLLPG

-------MLV

MRERPRLGED —MVKYLLLS

LLLLLSLEAI

LLFLLTISIF

LLFLTWLHTC

AGFLLALPPS

SSLISLFLQV

ILGLAFLSEA

VKAGITIPR-

LGLG1P4WP-

LAHHDPSLRG

WAAGAPRAGR

VAFLAMVMGT

AARKIPKVG-

NPGCPNSEDK

KWKRKGQGRP

HPHSHGTPHC

RPARPRGCAD

HTYSHWPSCC

HTFFQKPESC

IL-17

IL-17B

IL-17C

IL-17D

IL-17E

IL-17F

41 80

NFPRTVMVNL NIHNRNTNTN P--------- ----------

GPLAPGPHQV PLDLVSRMKP YARMEEYERN IEEMVAQLRN YSAEELPLQA PPHLIARGAK WGQALPVALV SSLEAASHRG RPEELLEQLY GRLAAGVLSA FHHTLQLGPR EQARNASCPA PSKGQDTSEE LLRWSTVPVP PLEPARPNRH PESCRAS--

81 ***** 120

IL-17 KR SSDYYNRSTS PWNLHRNEDP

IL-17B SSELAQRKCE VN LQ LWMSNKRSLS PWGYSINHDP

IL-17C RHERPSATTQ CPVLRPEEVL EADTHQRSIS PWRYRVDTDE

IL-17D GGRPADR--- --------RF RPPTNLRSVS PWAYRISYDP

IL-17E ---------- E DGPLNSRAIS PWRYELDRDL

IL-17F ----------- SM SRNIESRSTS PWNYTVTWDP

IL-17

IL-17B

IL-17C

IL-17D

IL-17E

IL-17F

121 * ERYPSVIWEA SRIPVDLPEA DRYPQKLAFA ARYPRYLPEA NRLPQDLYHA NRYPSEWQA

KCRHLGCINA

RCLCLGCVNP

ECLCRGCIDA

YCLCRGCLTG

RCLCPHCVSL

QCRNLGCINA

D—GNVDYHM FT-MWEDRSM RT-GRETAAL LF-GEEDVRF QTGSHMDPRG Q—GKEDISM

NSVPIQQEIL

VSVPVFSQVP

NSVRLLQSLL

RSAPVYMPTV

NSELLYHNQT

NSVPIQQETL

161 * *

IL-17 VLRREPPHCP NS-- -FRLEKILVS

IL-17B VRRRLCPPPP RTG----PC RQRAVMETIA

IL-17C VLRRRPCSRD GSGLPTPGAF AFHTEFIHVP

IL-17D VLRRTPACAG GRS- VYTEAYVTIP

IL-17E VFYRRPCHGE KGTHKG---Y CLEFFLYRVS

IL-17F WRRKHQGCS VS-- -FQLEKVLVT

200

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IL-17

IL-17B

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201

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228

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IL-17E

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IL-17F

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Figura 2

IL-17

ratón rata conejo ser humano mono

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ratón rata conejo ser humano mono

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ID NO: 7)

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ID NO: 10