ES2645567T3

ES2645567T3 - Modificaciones cristalinas de N-alfa-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonil-piperazida y/o sales de la misma

Info

Publication number: ES2645567T3
Application number: ES05808401.3T
Authority: ES
Inventors: Alfons Grunenberg; Jana Lenz
Original assignee: Wilex AG
Current assignee: Heidelberg Pharma AG
Priority date: 2004-11-26
Filing date: 2005-11-24
Publication date: 2017-12-05
Anticipated expiration: 2025-11-24
Also published as: RU2007123712A; CA2581959C; KR101311329B1; DK1833810T3; WO2006056448A1; KR20070083507A; US20100266679A1; KR20130066700A; JP2008521764A; AU2005308977A1; DE102004057195A1; US8492385B2; CN1989118B; US20080058346A1; CA2581959A1; JP5054538B2; EP1833810A1; CN1989118A; HUE037259T2; BRPI0514823A

Abstract

Modificación cristalina de sulfato de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4- etoxicarbonilpiperazida, caracterizado por que presenta esencialmente los siguientes picos (reflejos 2 Theta) según un análisis por difractograma de rayos X (CuK-α >= 1,54178Å): 3,7 10,3 12,1 13,8 16,4 19,2 22,2.

Description

imagen1

DESCRIPCIÓN

Modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonil

piperazida y/o sales de la misma

Descripción

5 La presente invención se refiere a nuevas modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y/o sales de sulfato de la misma, que son empleables como agente farmacéutico, así como a composiciones farmacéuticas que contienen estas nuevas modificaciones cristalinas, y a empleos farmacéuticos

Las nuevas modificaciones cristalinas de la presente invención, que parten de un compuesto, que es conocido bajo

10 el nombre químico N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida, son inhibidores eficaces de la serina proteasa uroquinasa, y por lo tanto son especialmente apropiados para el tratamiento de enfermedades asociadas a uroquinasa, como por ejemplo tumores y metastatización, en especial para empleo oral. La forma de bases libre se denomina WX-671.

El activador de plasminógeno de tipo uroquinasa (uPA) juega un papel decisivo en la invasión tumoral y en la

15 formación de metastatización (Schmitt et al., J. Obst, Gyn. 21 (1995), 151-165). uPA se exprime en los más diversos tipos de células tumorales (Kwaan, Cancer Metastasis Rev. 11 (1992), 291-311), y se une al receptor de uPA (uPAR) asociado al tumor, donde tiene lugar la activación de plasminógeno para dar plasmina. Plasmina es apta para degradar diferentes componentes de la matriz extracelular (ECM), como fibronectina, laminina y colágeno tipo IV. Este activa también otros enzimas que degradan ECM, en especial metaloproteinasas de

20 matriz. Cantidades elevadas de uPA asociado al tumor se correlacionan con un riesgo de metastatización más elevado para pacientes con cáncer (Harbeck et al. Cancer Research 62 (2002), 4617-4622). Por lo tanto, una inhibición de la actividad proteolítica de uPA es un buen punto de partida para una terapia anti-metastática.

Se describen ya algunos inhibidores de uroquinasa activos y selectivos. De este modo, se dan a conocer inhibidores de uPA de tipo benzamidina en el documento EP 1 098 651, inhibidores de uPA de tipo arilguanidina

25 en los documentos WO 01/96286 y WO 02/14349. Una característica común de estos inhibidores sintéticos es un resto básico constituido por un grupo amidino y/o guanidino.

La solicitud de patente internacional WO 03/072559 da a conocer WX-671 como producto intermedio en la síntesis del inhibidor de uroquinasa N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-amidino-(L)-fenilalanina-4-etoxicarbonilpiperazida. El documento WO 03/072559 da a conocer también un procedimiento para la producción del compuesto WX-671 como

30 base libre o en forma de sus sales formadas con ácidos. No se mencionan sales especiales, en especial la forma de hidrogenosulfato y de sulfato. Tampoco se describen procedimientos para la cristalización. En los procedimientos descritos, la base libre WX-671 se obtiene como producto amorfo, que presenta ligera inestabilidad térmica y es higroscópico, y que presenta propiedades de filtración y secado inapropiadas. Por este motivo, éste no es apropiado para la producción a gran escala, y se debe proteger sobre todo del calor y la humedad.

35 El documento WO 2004/011449 da a conocer igualmente procedimientos para la producción de derivados de fenilalanina, que se pueden presentar también como sales, por ejemplo como sales de ácidos minerales o como sales de ácidos orgánicos. Alguno de los compuestos producidos es WX-671. Tampoco en este caso se indica que los compuestos dados a conocer se pueden obtener también en una forma estable cristalina.

El documento PCT/EP2004/005682 da a conocer compuestos de hidroxiamina e hidroxiguanidina como inhibidores

40 de uroquinasa. Los medicamentos dados a conocer comprenden como producto activo, entre otros, WX-671, y los productos activos se pueden presentar como sales, por ejemplo como hidrocloruro o hidrogenosulfato, o como sales de ácidos orgánicos. Para los medicamentos aquí reivindicados se hizo valer una mejor biodisponibilidad en el caso de administración oral. No obstante, tampoco esta publicación da a conocer ningún compuesto de sal de sulfato de los citados inhibidores de uroquinasa.

45 La tarea de la presente invención era la puesta a disposición de modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y/o sales de sulfato de la misma, que presentaran propiedades ventajosas frente a los compuestos del estado de la técnica.

La presente invención pone a disposición modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3

hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y/o sales de sulfato de las mismas.

50 Según la presente invención se encontraron nuevas modificaciones cristalinas del inhibidor de uroquinasa citado anteriormente, que presentan ventajas decisivas frente a la forma amorfa de este compuesto. Las modificaciones cristalinas según la invención poseen ventajas significativas en el manejo, el almacenaje y la formulación. 2

imagen2

Sorprendentemente, el compuesto N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida y/o las sales de sulfato del mismo, se pueden cristalizar, lo que no era posible hasta el momento, y por lo tanto es superior en sus propiedades a los compuestos amorfos del estado de la técnica. De este modo, las modificaciones cristalinas según la invención se distinguen por una higroscopia muy reducida. Además

5 son muy estables frente a descomposición y, por lo tanto, son apropiadas para un almacenaje más largo. Además, las modificaciones cristalijnas según la invención presentan propiedades de filtración y secado mejoradas. Además, las modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida y sus sales de sulfato son ideales para la formulación en composiciones farmacológicas.

Como se emplea en este caso, WX-671 significa la base libre de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino

10 (L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida. WX-671.1 designa el hidrogenosulfato del citado compuesto, y WX-671.2 designa el sulfato del citado compuesto.

Como ya se ha indicado inicialmente, las modificaciones de WX-671 según la invención y las sales de sulfato de las mismas son sensiblemente cristalinas. Hasta el momento no era posible producir tales compuestos de hidroxiamidina en forma cristalina. Tampoco eran cristalizables los compuestos dados a conocer ya en el estado de

15 la técnica.

Las modificaciones cristalinas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida según la invención y sus sales comprenden la sal de sulfato (WX-671.2), así como la base libre (WX-671). Además se describe la sal de hidrogenosulfato (WX-671.1).

Las modificaciones cristalinas según la invención pueden comprender mezclas de base libre y de sal de sulfato. La

20 modificación cristalina según la invención comprende la base libre, o bien la sal de sulfato como modificación cristalina. La modificación cristalina según la invención comprende de modo especialmente preferente monocristales de la respectiva modificación cristalina.

Las modificaciones cristalinas según la invención se investigan mediante difractometría de rayos X, y presentan preferentemente los picos representados en la tabla 3.1 (para la sal de sulfato WX-671.2), y la tabla 11.1 (para la

25 base libre). La modificación cristalina de la sal de hidrogenosulfato presenta además los picos representados en la tabla 7.1 (para la sal de hidrogenosulfato WX-671.1).

Las modificaciones cristalinas según la invención presentan esencialmente los picos representados en las figuras 5 (para la sal de sulfato WX-671.2), y 19 (para la base libre). La modificación cristalina de la sal de hidrogenosulfato presenta esencialmente los picos representados en la figura 13 (para la sal de hidrogenosulfato WX-671.1).

30 Como se describe a continuación en los ejemplos, adicionalmente a los análisis por difractometría de rayos X se llevaron a cabo también investigaciones termoanalíticas (Differential Scanning Calorimetry, DSC und Thermogravimetrie, TGA). En este caso se mostró que el compuesto cristalino de la sal de hidrogenosulfato WX

671.1 se descompone a una temperatura de aproximadamente 175 °C-195 °C, más exáctamente en el intervalo a partir de aproximadamente 185 °C (a una tasa de calefacción de 2 Kmin-1).

35 La modificación cristalina de WX-671.2 según la invención presenta preferentemente N-α-(2,4,6triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y aniones sulfato en una proporción molar de aproximadamente 2 : 1, pudiendo variar esta proporción en un intervalo de 1,5 a 2,5 : 1. Es preferente una proporción de aproximadamente 1,25 a 2,25:1, más preferente 1,1 a 2,1:1, y del modo más preferente en proporción de aproximadamente 2:1.

40 La modificación cristalina de WX-671.2 presenta preferentemente unidades constituidas respectivamente por 2 moléculas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y un anión sulfato, pudiéndose presentar en cada una de estas unidades las 2 moléculas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida en la misma conformación, o se pueden presentar preferentemente también en diversas conformaciones.

45 Adicionalmente, la modificación cristalina de WX-671.2 se presenta de modo preferente como hidrato, en especial como trihidrato, es decir, por mol de sal están presentes aproximadamente 3 moles de agua. También esta proporción puede estar sometida naturalmente a ligeras oscilaciones, es decir, por mol de sal pueden estar presentes en promedio entre 2,5 y 3,5 moles de agua, preferentemente entre 2,25 y 3,25, de modo más preferente entre 2,2 y 3,2, y del modo más preferente entre 2,1 y 3,1.

50 La sal de sulfato de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida, independientemente de la cristalinidad, se ha mostrado como compuesto estable termodinámicamente. Por lo tanto, la presente invención pone a disposición también el nuevo compuesto de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida-sal de sulfato. También la sal de sulfato no cristalina WX671.2 es apropiada para la producción de medicamentos como se describe a continuación para las modificaciones cristalinas.

imagen3

En la modificación cristalina de WX-671.1 están presentes N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y aniones hidrogenosulfato en una proporción molar de 0,5 a 1,5:1, de 0,8 a 5 1,2:1, de 0,9 a 1,1:1, o de aproximadamente 1:1.

Una modificación cristalina de WX-671.1 se puede presentar también como hidrato.

La modificación cristalina de WX-671 (base libre) no se presenta como hidrato preferentemente. No obstante, es posible una forma de hidrato.

Las modificaciones cristalinas según la invención se pueden emplear, en caso dado, con productos auxiliares y/o

10 aditivos farmacéuticos apropiados para la producción de medicamentos. En este caso es posible una administración en combinación con otros productos activos, por ejemplo otros inhibidores de uroquinasa, como por ejemplo anticuerpos y/o péptidos, pero también con productos activos citostáticos y citotóxicos.

Por consiguiente, las modificaciones cristalinas según la invención se pueden elaborar en una formulación farmacológica apropiada, a modo de ejemplo como comprimidos, grageas, pastillas, polvo, sirope, suspensión,

15 disolución o similares. En especial es preferente un preparado farmacológico para la administración oral.

Las modificaciones cristalinas según la invención son apropiadas para el combate de enfermedades, que están asociadas a una sobreexpresión patológica de uPA y/o del receptor de activador de plasminógeno de tipo uroquinasa (uPAR). A modo de ejemplo, son aptos para inhibir con eficacia elevada el crecimiento y/o la propagación de tumores malignos, así como la metastatización de tumores. Son ejemplos a tal efecto

20 enfermedades tumorales, por ejemplo cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de vejiga, cáncer de estómago, cáncer de cérvix, cáncer de ovarios, cáncer de riñón, cáncer de próstata y sarcoma de tejidos blandos, en especial tumores asociados con una alta tasa de metastatización.

Las modificaciones según la invención se pueden emplear por separado o en combinación con otras substancias eficaces desde el punto de vista fisiológico, por ejemplo con radioterapéuticos o con agentes

25 citotóxicos o/y citostáticos, por ejemplo quimioterapéuticos, como por ejemplo cis-platino, doxirubicina, 5fluoracilo, derivados de taxol, o/y otros agentes quimioterapéuticos, a modo de ejemplo seleccionados a partir del grupo de agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos, epidofilotoxinas y alcaloides de vinca. Es igualmente posible una combinación con radioterapia y/o intervenciones quirúrgicas.

Además, los compuestos según la invención son también eficaces para otras enfermedades asociadas a uPA

30 y/o uPAR. Son ejemplos de tales enfermedades, eventualmente, alta presión sanguínea pulmonar y/o afecciones cardíacas (por ejemplo WO 02/00248), enfermedades gástricas e intestinales, como por ejemplo afección intestinal inflamatoria, adenoma de colon premaligno, enfermedades inflamatorias, como por ejemplo artritis séptica, u otras enfermedades, como osteoporosis, colesteatoma, enfermedades dérmicas y oculares, como por ejemplo degeneración de mácula debida a la edad (AMD), así como infecciones virales o bacterianas,

35 haciéndose referencia expresamente a las enfermedades citadas en los documentos EP-A-0 691 350, EP-A-1 182 207 y la patente US 5 712 291.

Otro objeto de la presente invención es un medicamento que comprende una modificación cristalina según la invención como producto activo. Tal medicamento puede comprender adicionalmente, en caso dado, soportes y/o agentes auxiliares compatibles desde el punto de vista farmacéutico. Los medicamentos se pueden 40 administrar en el hombre o en animales por vía tópica, oral, rectal o parenteral, por ejemplo intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, o también sublingual, nasal y/o inhalativa. Formas de administración apropiadas son, por ejemplo, comprimidos, grageas, cápsulas, pastillas, pellets, polvos, supositorios, disoluciones, sirope, emulsiones, suspensiones, liposomas, sprays de inhalación o sistemas transdérmicos, como por ejemplo apósitos. Una composición farmacológica especialmente preferente es apropiada para una

45 administración oral, por ejemplo también como formulación de liberación lenta/retardada.

Por lo demás, la presente invención constituye un empleo de las modificaciones cristalinas según la invención para la producción de una composición farmacéutica para el combate de enfermedades, que están asociadas con una sobreexpresión patológica de uroquinasa y/o del receptor de uroquinasa. Tal medicamento con el producto activo según la invención es especialmente apropiado para el tratamiento y/o la prevención de

50 tumores, y en especial también para el tratamiento o la prevención de la formación de metástasis, para el tratamiento de tumores primarios y tumores secundarios.

Mediante la presente invención se pone a disposición una posibilidad de inhibición de uroquinasa en seres vivos, en especial en el hombre, mediante administración de una cantidad eficaz de la modificación según la invención. La dosis a administrar depende del tipo y la gravedad de las enfermedades a tratar. A modo de ejemplo, la dosis diaria se sitúa en el intervalo 0,01-100 mg/kg de substancia activa por peso corporal, de modo más preferente 0,1-50 mg/kg, de modo más preferente 0,5-40 mg/kg, de modo más preferente 1-30 mg/kg, de modo más preferente 5-25 mg/kg.

imagen4

5 Otro objeto de la presente invención es un procedimiento para la producción de una modificación sensiblemente cristalina de una sal de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida, que comprende los pasos:

(a) puesta a disposición del compuesto N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida o de una de sus sales,

10 (b) disolución y/o suspensión del compuesto o de la sal del mismo a partir del paso (a) en un disolvente apropiado para la modificación cristalina,

(c) separación de la modificación cristalina.

Sorprendentemente se ha mostrado que las modificaciones cristalinas de WX-671, WX-671.1 y WX-671.2 se pueden producir de manera sencilla en forma cristalina. Como material de partida se emplea preferentemente una sal de N

15 α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida, por ejemplo la sal de hidrogenosulfato.

No obstante, también entran en consideración otros compuestos salinos como compuestos de partida para la formación de modificaciones cristalinas, a modo de ejemplo la sal de besilato, la sal de hidrocloruro, la sal de mesilato, la sal de tartrato y otras.

20 Como disolvente para el paso (b) se pueden emplear preferentemente diversos disolventes orgánicos. A modo de ejemplo son apropiados agua y diversos alcoholes, por ejemplo metanol, etanol, propanol, butanol y sus formas isómeras, como por ejemplo isopropanol, isobutanol, etc., así como, además, glicoles, éteres, glicoléteres, acetona y similares. Otros disolventes apropiados son tetrahidrofurano (THF) y acetonitrilo. Como disolvente son preferentes en especial acetona y acetonitrilo.

25 No obstante, también se puede emplear agua como disolvente. En especial, para la recristalización (véase paso (d)) se emplea preferentemente agua.

Si para la producción de una modificación cristalina de una sal de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida se emplea como material de partida la base libre, adicionalmente en el paso (b) se añaden sales o ácidos apropiados para obtener la respectiva sal de N-α-(2,4,6

30 triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida deseada.

El procedimiento según la invención puede comprender también un paso ulterior (d) de recristalización del compuesto cristalino del paso (c).

Esto es válido en especial para la producción de WX-671.2 a partir de WX-671.1. En este caso, la modificación cristalina producida en el paso (c) se recristaliza a su vez en un disolvente apropiado o en una mezcla de

35 disolventes. También en este caso se pueden emplear como disolventes los citados anteriormente. En especial es preferente agua, o bien se recristaliza preferentemente con un contenido en agua suficiente para la formación de la modificación cristalina deseada. En especial es preferente agua si, como por ejemplo en el caso de WX-671.2, se forma un hidrato (en el caso de WX-671.2 un trihidrato).

La invención se debe explicar más detalladamente mediante las siguientes figuras y los ejemplos.

40 Descripción de las figuras

La figura 1 muestra un Ortep-Plot (50 %) con esquema de modificación para molécula A (WX-671.2).

La figura 2 muestra un Ortep-Plot (50 %) con esquema de modificación para molécula B (WX-671.2).

imagen5

La figura 3 muestra moléculas independientes dentro de una célula elemental de una unidad de dos moléculas WX

671.2 e ion sulfato. La figura 4 muestra un difractograma de rayos X simulado bajo empleo de datos de monocristales de WX-671.2. La figura 5 muestra un difractograma de rayos X experimental de WX-671.2. La figura 6a muestra la superposición de la muestra de difracción de rayos X simulada y la muestra de difracción de

rayos X experimental según las figuras 4 y 5 para WX-671.2. La figura 6b muestra el termograma DSC y TGA de WX-671.2 tras agitación en agua. La figura 7 enumera los datos de cristal y el refinamiento estructural para WX-671.2. La figura 8 muestra las longitudes de enlace [A] y los ángulos [°] para WX-671.2. La figura 9 muestra el ángulo de torsión [°] para WX-671.2. La figura 10 muestra el termograma DSC y TGA de WX-671.1 (modificación A). La figura 11 muestra el termograma DSC y TGA de una muestra (mesofase B) de WX-671.1. La figura 12 muestra el termograma DSC y TGA de la mesofase C de WX-671.1. La figura 13 muestra el difractograma de rayos X de la modificación A de WX-671.1. La figura 14 muestra el difractograma de rayos X de la mesofase B de WX-671.1. La figura 15 muestra el difractograma de rayos X de la mesofase C de WX-671.1. La figura 16 muestra el termograma DSC y TGA de la substancia de partida amorfa de la base libre WX-671. La figura 17 muestra el termograma DSC y TGA de una muestra cristalizada a partir de acetonitrilo en el congelador

de la base libre WX-671.

La figura 18 muestra una absorción microscópica de la base libre WX-671 tras cristalización a partir de acetonitrilo en el congelador. La figura 19 muestra el difractograma de rayos X de la base libre WX-671 tras cristalización a partir de acetonitrilo en

el congelador. La figura 20 muestra la isoterma de sorción de vapor de agua en la base libre WX-671a 22 °C. Ejemplos Ejemplo 1 Producción de diversas sales de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4

etoxicarbonilpiperazida Las sales se prepararon mediante disolución de 6,0 g de WX-671 en 50 ml de acetona. Los ácidos empleados se añadieron sin dilución en exceso del 25 por ciento, y se agitaron durante dos horas a

temperatura ambiente. Condiciones de cristalización

imagen6

Tabla 1.1

Ácido: Equivalente Condiciones de cristalización Secado

HCl: 1.25 mol eq. Disolución clara Alto vacío

H2SO4: 1.25 mol eq. Cristalizado a partir de disolución de acetona Alto vacío

MsOH: 1.25 mol eq. Cristalizado a partir de disolución de acetona Alto vacío

BsOH: 1.25 mol eq. Disolución clara Alto vacío

Ácido tartárico: 1.25 mol eq. Disolución clara Alto vacío

MsOH: ácido metanosulfónico; BsOH: ácido bencenosulfónico

En un segundo paso se suspendieron las sales durante 7 días en un disolvente apropiado, se filtraron y se secaron a temperatura ambiente. Investigación de la cristalinidad Procedimiento: difractometría de rayos X (XRD); microscopía Tabla 1.2

Especies XRD Microscopía

Base libre Predominantemente cristalina Partículas reducidas

Besilato Predominantemente amorfo Aglomerados

Hidrocloruro Completamente amorfo Partículas reducidas

Mesilato Fluidocristalino Aglomerados

Hidrogenosulfato Fluidocristalino Aglomerados

Tartrato Completamente amorfo Vidrio

Investigación de la higroscopicidad 10 Procedimiento: almacenaje 1 semana/85 % de humedad relativa; análisis termogravimétrico (TGA) Tabla 1.3

Especies TGA

Base libre 1,5 % (semihidrato) 5

10

15

20

25

Especies TGA

Mesilato 10,1 % (adsortivo)

Hidrocloruro 7,5 % (adsortivo)

Mesilato 7,8 % (adsortivo)

Hidrogenosulfato 0,8 % (adsortivo)

Tartrato 10,5 % (adsortivo)

Ejemplo 2

Cristalización y análisis estructural por rayos X de monocristal de WX-671.2

(Sal de sulfato)

La nueva forma de sulfato de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida se obtiene mediante suspensión de la sal de hidrogenosulfato (WX-671.1) del compuesto WX-671 en agua y mediante separación del compuesto que se forma.

Se obtuvo WX-671.2 cristalino de dos maneras diferentes:

a) aproximadamente 50 mg de WX-671.1 se suspendieron en aproximadamente 0,5 ml de agua. La suspensión se dejó reposar a temperatura ambiente. Tras 6 días se filtró la suspensión y se secó el residuo a temperatura ambiente al aire.

b) aproximadamente 0,2 g de WX-671.1 se suspendieron en aproximadamente 2 ml de agua. La suspensión se agitó a 25ºC. Después de 3 días se separó el residuo por filtración, y los cristales de WX-671.2 se secaron al aire a temperatura ambiente.

A partir del material cristalino producido en este caso (WX-671.2) se determinó la estructura de rayos X. En este caso se obtuvieron también monocristales.

La determinación de la estructura de cristal se llevó a cabo bajo empleo de un difractómetro de Bruker-Nonius equipado con un detector de área Proteum-CCD, un anódo rotatorio FR591 con radiación de CuKα, espejo Montel como monocromador y un aparato de baja temperatura Kryoflex (T=90K). Determinación de datos de esfera maciza y phi Scans. Programas empleados: recogida de datos Proteum V.1.37 (Bruker-Nonius 2002), reducción de datos Saint+Version 6.22 (Bruker-Nonius 2001) y corrección de absorción SADABS V.2.03 (2002). La resolución de estructura de cristal se consiguió por medio de métodos directos, como se visualiza en SHELXTL versión 6.10 (Sheldrick, Universidad de Göttingen), se implementó y se visualizó por medio del programa XP.

Mediante síntesis de Fourier diferencial se localizan átomos ausentes y se añade la lista de átomos. Se efectuaron "refinamientos de cuadrados mínimos" en F2 sobre todas las intensidades medidas con el programa SHELXTL versión 6.10 (Sheldrick, Universität Göttingen, 2000). Todos los átomos diferentes a hidrógeno se “refinaron“ bajo inclusión del “parámetro de desplazamiento anisotrópico“.

Tabla 2.1

Control de quiralidad*: Estructura correcta Estructura invertida

Parámetro Flack (desviación estándar): 0.0298 (0.0282) 0.9694 (0.0307)

imagen7

Control de quiralidad*: Estructura correcta Estructura invertida

Twin Basf (desviación estándar): 0.03 (3) 0.97 (3)

Valor wR2 (mit parámetro Flack): 0.2016 0.2219

quiralidad: S(C9) R(C9)

* H. D. Flack, Acta Cryst., 1983, A39, 876-881 H. D. Flack, G. Bernardinelli, Acta Cryst., 1999, A55, 908-915 H. D. Flack, G. Bernardinelli, J. Appl. Cryst., 2000, 33, 1143-1148

Los resultados del análisis estructural por rayos X se representan en las figuras 1 a 3 y 7 a 9. Ejemplo 3 Difractometría de rayos X de WX-671.2 (sal de sulfato) Se obtuvieron difractogramas de rayos X bajo empleo de un difractómetro Debye-Scherrer STOE STADI-P, equipado

con un detector sensible a posición (PSD, 5 °), un monocromador primario de germanio [1 1 1 ] y un tubo de rayos X

cerámico de CuKα 1,6 kW (1,5406 Å). Programa empleado: Stoe WinXpow, Version 2.03 (2003).

Tabla 3.1

Lista de picos de difractometría de rayos X para WX-671.2

WX 671.2

Reflejos 2 Theta
Reflejos 2 Theta

3,7 4,2 7,1 7,4 10,3 10,8 11,1 11,6 12,1 12,6: 26,8 27,2 27,5 27,8 28,1 29,1 29,7 30,2 30,6 31,1

imagen8

Lista de picos de difractometría de rayos X para WX-671.2

WX 671.2

Reflejos 2 Theta
Reflejos 2 Theta

13,3: 31,4

13,8: 31,9

14,2: 32,1

14,8: 33,2

15,1: 33,8

15,7: 34,2

16,4: 36,3

16,8: 37,3

17,3

17,8

18,0

18,6

19,2

19,8

20,1

20,4

20,8

21,0

21,2

21,8

22,2

22,9

Lista de picos de difractometría de rayos X para WX-671.2

WX 671.2

Reflejos 2 Theta
Reflejos 2 Theta

23,4 23,9 24,6 25,0 25,5 26,2 26,3 26,5

Ejemplo comparativo 4

Recristalizaciones de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato)

Se disolvió WX-671.1 en disolventes (isopropanol, etanol, metanol) de polaridad diferente. Las disoluciones se 5 filtraron, se dividieron en cuatro partes y los disolventes se eliminaron con diferente velocidad.

WX-671.1 existe en su forma cristalina (modificación A) y dos mesofases B y C. Éste se descompone a partir de aproximadamente 185ºC (modificación A y mesofase B), o bien 156ºC (mesofase C). Para la identificación de la cristalinidad de la modificación A se lleva a cabo una determinación estructural por rayos X. La modificación A es la forma estable termodinámicamente a temperatura ambiente.

10 Ejemplo comparativo 5

Calorimetría de escáner diferencial (DSC) y termogravimetría (TGA) de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato)

En este ejemplo se elaboraron termogramas mediante calorimetría de escáner diferencial (DSC) y termogravimetría (TGA). La figura 10 muestra el termograma DSC y TGA de WX-671.1 (modificación A) agitado una semana a 25ºC en isopropanol. Éste se descompone a partir de aproximadamente 180ºC (pico exotérmico en el termograma DSC,

15 pérdida de masa en el termograma TGA en el correspondiente intervalo de temperaturas). Las temperaturas de descomposición son fuertemente dependientes de las tasas de calefacción y se determinaron en el calorímetro DSC a una tasa de calefacción de 2 Kmin-1. Las medidas esquemáticas de DSC representadas se tomaron con una tasa de calefacción de 2 Kmin-1. La descomposición se registra correspondientemente a temperaturas más elevadas.

A 150ºC no se registra una pérdida de masa significativa. El efecto endotérmico ligeramente marcado antes del pico 20 de descomposición se pudo ocasionar mediante fusión parcial o transformación parcial.

La figura 11 muestra el termograma DSC de una muestra de WX-671.1 (mesofase B) empleada para este rastreo. La modificación A y la mesofase B son idénticas desde el punto de vista termoanalítico. La mesofase A se obtuvo a partir de isopropanol (temperatura ambiente/nevera) y etanol (temperatura ambiente).

imagen9

La figura 12 muestra el termograma DSC y TGA del producto activo tras un ensayo de cristalización a partir de metanol a temperatura ambiente (mesofase C). Éste se descompone a partir de aproximadamente 156ºC (tasa de calefacción 2 Kmin-1). Hasta a 175 °C se registra una pérdida de masa de un 4,5 %. En el termograma DSC falta el efecto endotérmico del pico de descomposición. Esta forma se presenta en un estado menos ordenado que la

5 modificación A y la mesofase B. Ésta se produce tras ensayos de cristalización a partir de metanol (temperatura ambiente, nevera) y etanol (nevera). En las muestras se registraron pérdidas d emasa de un 4,5 y un 4,8 % en peso. El valor estequiométrico para la pérdida de masa de 2 moléculas de agua por molécula de producto activo asciende a un 4,7 %. No obstante, en el caso de esta forma no se trata de un hidrato.

Ejemplo comparativo 6

10 Termomicroscopía de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato)

Se realizaron tomas termomicroscópicas de una muestra de WX-671.1 (no representadas). Se observaron aglomerados que no mostraban un hábito específico. El producto activo se descompone bajo formación de burbujas a partir de aproximadamente 197ºC. Se producen diferencias respecto a la temperatura de descomposición observada en el calorímetro DSC debido a las diferentes tasas de calefacción. A partir de disolventes se obtiene

15 WX-671.1 en forma inespecífica. El producto activo muestra parcialmente birrefringencia, como es característico de las substancias cristalinas y mesomórficas.

Ejemplo comparativo 7

Difractometría de rayos X de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato)

El difractograma de rayos X de la modificación A (figura 13) muestra la muestra de numerosos picos agudos,

20 característica para fases cristalinas, a ángulos 2-Theta más elevados. Para la confirmación de la existencia de una fase cristalina se llevan a cabo otras investigaciones, por ejemplo un análisis estructural por rayos X.

En el difractograma de rayos X de la mesofase B (figura 14) se observó un pico agudo a un ángulo 2-Theta de aproximadamente 5º y otros reflejos con menor intensidad entre aproximadamente 8º y 25º. Posición y número de picos se asemejan a los de la modificación A. El pico presente a un ángulo Theta reducido indica la presencia de

25 una ordenación a distancia de las moléculas, los picos con menor intensidad demuestran la presencia de una disposición próxima. De esto se puede deducir que la mesofase B no se presenta en forma cristalina ni amorfa, sino presumiblemente como mesofase.

El difractograma de rayos X de la mesofase C (figura 15) muestra igualmente una muestra característica para compuestos mesomórficos: un pico intensivo a un ángulo 2-Theta reducido. El difractograma de rayos X demuestra

30 que a la mesofase C no es una fase cristalina y, debido a la disposición a distancia presente, no se puede atribuir a la fase amorfa. Una comparación con el difractograma de rayos X de la mesofase B muestra que la mesofase C forma presumiblemente una fase con un grado de ordenación menor. Una idicio de ello son los reflejos entre los ángulos 2-Theta de aproximadamente 8º y aproximadamente 25º, más marcados e intensos en la mesofase B.

Mediante agitación de una semana en isopropanol a temperatura ambiente, la mesofase B se transforma en la

35 modificación A. Mediante agitación en agua : etanol (1:1), ésta no se modifica. Mediante estrés mecánico (molturación, prensado con 9 kbar), éste tampoco se transforma.

Tabla 7.1

Lista de picos de difractometría de rayos X para la modificación cristalina de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato)

WX 671.1 Reflejos 2 Theta 4,3

8,6

Lista de picos de difractometría de rayos X para la modificación cristalina de WX-671.1 (sal de hidrogenosulfato) WX 671.1 10,1 10,3 10,6 11,0 11,2 11,3 11,6 12,0 12,3 13,8 14,8 15,9 17,5 17,7 19,3 19,7 20,2 21,0 21,4 21,7 21,9 22,6 23,3 24,0

imagen10

Ejemplo 8

Recristalizaciones de WX-671 (base libre)

El producto activo se investiga respecto a polimorfia mediante termoanálisis (DSC, TGA), mediante difractometría de 5 rayos X, así como mediante cristalizaciones a partir de disolventes orgánicos. WX-671 cristaliza en una modificación (modificación A). El producto activo muestra una tendencia a la cristalización muy reducida.

La modificación A es la forma estable termodinámicamente a temperatura ambiente. Solo tras la puesta en práctica de un estudio morfológico es posible una valoración concluyente de la polimorfia y pseudopolimorfia de WX-671.

Se disolvió WX-671.1 en disolventes (tetrahidrofurano, acetonitrlo, metanol) de polaridad diferente. Las disoluciones 10 se filtraron, se dividieron en cuatro partes y el producto activo cristalizó con diferente velocidad. Tras secado a temperatura ambiente se registraron los termogramas (DSC, TGA) y los difractogramas de rayos X.

La substancia de partida empleada para la investigación de polimorfia se pudo producir en forma predominantemente cristalina. La cristalización se obtuvo a partir de acetonitrilo en el congelador a aproximadamente -18ºC.

15 Ejemplo 9

Calorimetría de escáner diferencial (DSC) y termogravimetría (TGA) de WX-671 (base libre)

La figura 16 muestra el termograma DSC y TGA de la substancia de partida amorfa. Al igual que los termogramas DSC/TGA de la mayor parte del resto de muestras investigadas, se muestra un efecto térmico en el intervalo entre 45ºC y 85ºC. En el ámbito de la investigación de polimorfia no se pudo asignar este efecto térmico. En este caso se 20 podía tratar de una transformación vítrea. De ello se puede concluir sobre una forma cristalina con un punto de fusión de aproximadamente 190ºC. La substancia se descompone en función de la tasa de calefacción a partir de aproximadamente 155ºC. Por este motivo, no se puede determinar el punto de fusión de la muestra cristalina (GBA

imagen11

190903-8c). Por lo tanto, los termogramas de la substancia amorfa y cristalina son sensiblemente idénticos (figuras 16 y 17). Ejemplo 10 Microscopía de WX-671 (base libre)

5 A partir de acetonitrilo cristaliza WX-671 en el congelador en forma de prismas (figura 18). A partir de otros disolventes, el producto activo no cristaliza o lo hace solo en fracción muy reducida, éste no cristaliza a partir de la fusión.

Ejemplo 11 Difractometría de rayos X de WX-671 (base libre) 10 La figura 19 muestra el difractograma de rayos X del producto activo tras cristalización a partir de acetonitrilo en el congelador (modificación A). Tabla 11.1

Lista de picos de difractometría de rayos X para WX-671 (base libre)

Se cristalizó la muestra a partir de acetonitrilo en el congelador.

WX 671

Reflejos 2 Theta

3,2 5,5 6,4 8,5 9,7 10,2 10,7 11,2 11,5 11,7 12,1 13,4 13,8

Lista de picos de difractometría de rayos X para WX-671 (base libre)

Se cristalizó la muestra a partir de acetonitrilo en el congelador.

WX 671

14,1 14,6 14,8 15,5 16,5 18,1 19,1 19,7 20,5 20,7 21,3 22,4 22,7 23,6

Ejemplo 12

Sorción en húmedo de WX-671 (base libre)

La figura 20 muestra la isoterma de sorción de vapor de agua en WX-671 a 22ºC. El producto activo amorfo absorbe continuamente agua de un 0 % de humedad relativa a un 95 % de humedad relativa. En el secado se desprende de

5 nuevo este agua. En la mayor parte de los puntos de la isoterma no se alcanzó un estado de equilibrio dentro del respectivo tiempo de retención. El peso de muestra aumenta, o bien desciende ulteriormente. En este ensayo no había ninguna referencia a la formación de hidrato.

Ejemplo 13

Estabilidad de WX-671 (base libre)

10 Mediante pesada de una semana en diisopropiléter y etanol/agua (1:1) a temperatura ambiente, el producto activo no cristaliza, o bien lo hace en una fracción muy reducida en la modificación A. No se transforma en ninguna forma polimorfa. Mediante estrés mecánico (molturación, prensado con 9 kbar), éste tampoco se transforma, únicamente desciende la cristalinidad de modo adicional.

Claims

imagen1

REIVINDICACIONES

1.-Modificación cristalina de sulfato de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida, caracterizado por que presenta esencialmente los siguientes picos (reflejos 2 Theta) según un análisis por difractograma de rayos X (CuKα = 1,54178Å):

5 3,7 10,3 12,1 13,8 16,4

10 19,2 22,2. 2.-Modificación cristalina según la reivindicación 1, caracterizado por que comprende sulfato de N-α-(2,4,6

triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida en el monocristal. 3.-Modificación cristalina de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4

15 etoxicarbonilpiperazida como base libre, caracterizada por que presenta esencialmente los siguientes picos (reflejos 2 Theta) según un análisis por difractometría de rayos X (CuKα = 1,54178Å): 3,2 6,4 10,2

20 19,7. 4.-Modificación cristalina según la reivindicación 3, caracterizada por que comprende una modificación cristalina de

N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida como base libre en el monocristal. 5.-Modificación cristalina según una de las reivindicaciones 1-2, caracterizada por que presenta N-α-(2,4,6

25 triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y aniones sulfato en una proporción

molar de 1,5-2,5:1. 6.-Modificación cristalina según la reivindicación 5, caracterizada por que presenta N-α-(2,4,6triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida y aniones sulfato en una proporción molar de 2:1.

30 7.-Modificación cristalina según una de las reivindicaciones 1-2, caracterizada por que comprende unidades de aproximadamente dos moléculas de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida y un anión sulfato en cada caso.
8.-Modificación cristalina según la reivindicación 7, caracterizada por que las dos moléculas de N-α-(2,4,6triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida se presentan en una unidad en

35 diversas conformaciones. 9.-Modificación cristalina según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada por que presenta por mol de sal aproximadamente tres moles de agua.

18

imagen2
10.-Procedimiento para la producción de una modificación sensiblemente cristalina de una sal de N-α-(2,4,6triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4-etoxicarbonilpiperazida según una de las reivindicaciones 19, que comprende los pasos

(a) puesta a disposición del compuesto N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-45 etoxicarbonilpiperazida o de una de sus sales,

(b)

disolución y/o suspensión del compuesto o de la sal del mismo a partir del paso (a) en un disolvente apropiado para la modificación cristalina,

(c)

separación de la modificación cristalina. 11.-Procedimiento según la reivindicación 10, que comprende el paso adicional

10 (d) recristalización de la modificación cristalina del paso (c) a partir de un disolvente apropiado o de una mezcla de disolventes. 12.-Medicamento que contiene como producto activo una modificación cristalina según una de las reivindicaciones

1 a 9, en caso dado junto con un soporte y/o producto auxiliar compatible desde el punto de vista farmacéutico. 13.-Medicamento según la reivindicación 12, caracterizado por que es un agente administrable por vía oral, nasal, 15 inhalatoria, rectal y/o parenteral. 14.-Empleo de una modificación cristalina de N-α-(2,4,6-triisopropilfenilsulfonil)-3-hidroxiamidino-(L)-fenilalanin-4etoxicarbonilpiperazida según una de las reivindicaciones 1-9 para la producción de una composición farmacéutica para el combate de enfermedades, que están asociadas a una sobreexpresión patológica de uroquinasa y/o del receptor de uroquinasa.

20 15.-Empleo según la reivindicación 14 para el tratamiento y/o la prevención de tumores. 16.-Empleo según la reivindicación 15 para el tratamiento o la prevención de la formación de metástasis. 17.-Empleo según la reivindicación 15 para el tratamiento de tumores primarios. 18.-Empleo según una de las reivindicaciones 14 a 17, produciéndose una composición administrable por vía oral. 19.-Empleo según la reivindicación 18, produciéndose la composición en forma de comprimidos, grageas,

25 cápsulas, pellets, polvos, supositorios, disoluciones, sirope, emulsiones, liposomas y/o suspensiones.

19