CN103040815B - 一类2，4，6-三异丙基苯类化合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种通式I结构的取代的2，4，6-三异丙基苯类化合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途：其中R₁选自R₂选自-OH，-NH₂，或者X选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃或者-NH₂；Y选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃；Z选自-H，-CH₃。

Description

一类2,4,6-三异丙基苯类化合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，更具体而言，本发明涉及具有通式I结构的化合物在制备治疗糖尿病的新的药物中的用途。该类化合物经体外生物活性测试表明对糖尿病靶标脂肪酸结合蛋白4(FABP4)，以及对分化3T3-L1前脂肪细胞脂解均具有明显的抑制活性，体内测试表明该化合物对db/db糖尿病小鼠具有明显降糖、降脂以及提高胰岛素敏感性的作用。因此，该类化合物可作为一类研制新的预防或治疗糖尿病的先导化合物，也可用于制备治疗临床常见多发的糖尿病的药物。

背景技术

随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率与日俱增，严重影响了人们的生活质量。据统计，2010年全世界已经有超过2亿8千万的糖尿病患者，其中绝大多数为2型糖尿病(type 2diabetes，T2DM)。据WHO预测，到2030年，糖尿病患者的数量将增加到3亿6千多万。而在中国，糖尿病患者的数量已超过9千万，同时还有1亿5千多万人处于糖尿病临床前状态，并且2型糖尿病发病率正在飞速增长。目前针对某一特定靶标的抗糖尿病药物种类很多，但针对2型糖尿病仍没有安全、持久和特别有效的药物。且这些药物都存在不同程度的副作用和局限性：磺脲类和胰岛素会增加体重，并增加低血糖风险，并且胰岛素不能口服给药，给患者带来不便，二甲双胍和α糖苷酶抑制剂有消化道反应，噻唑烷二酮类因其可引起水肿、体重增加并有可能增加糖尿病患者心血管疾病和骨折风险而被限制使用。鉴于目前糖尿病严峻形势及发展趋势，迫切需要开发防治糖尿病的新型药物。

脂肪酸结合蛋白4(adipocyte fatty-acid binding protein，A-FABP/aP2/FABP4)属于FABPs家族，该家族是一类结合长链脂肪酸的低分子量(约为14-15kDa)胞质蛋白。它们可以与游离脂肪酸以及其它一些配体，如胆固醇、花生四烯酸及视磺酸等可逆地结合，并将这些配体转运到各个靶部位。FABPs在哺乳动物细胞中广泛表达且具有组织特异性，目前已发现9种FABPs。根据在组织中的分布对它们进行命名，其中，FABP4，即脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白主要表达在脂肪细胞和巨噬细胞，是脂肪酸结合蛋白家族中被研究最多的一员，近年来被证明与2型糖尿病、胰岛素抵抗、高血脂和动脉粥样硬化密切相关。

在遗传或者饮食诱导的肥胖小鼠中，FABP4敲除可以减轻高胰岛素血症和胰岛素抵抗，以及降低血清甘油三酯和胆固醇水平，而在巨噬细胞中特异性地敲除FABP4可以抵制ApoE敲除引起的动脉粥样硬化，这些结果表明FABP4在与脂肪细胞以及巨噬细胞有关的代谢性疾病中发挥着重要的功能。因此对FABP4的抑制可能可以用于治疗2型糖尿病以及动脉粥样硬化等代谢性疾病。目前关于FABP4的抑制剂已经有不少报道，其中小分子抑制剂BMS309403在饮食以及遗传引起的肥胖、糖尿病小鼠模型中能够有效的改善脂肪肝，提高胰岛素耐量和葡萄糖耐量，同时它还能减缓巨噬细胞形成泡沫细胞的过程，增加胆固醇的流出并减少与胰岛素敏感性密切相关的炎症因子(MCP-1、IL-1beta、IL6、TNF-α)的产生，可见FABP4抑制剂在治疗糖尿病以及动脉粥样硬化方面都有着极大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供通式I化合物的医药用途，具体涉及这些化合物对靶标FABP4的抑制，对分化的3T3-L1前脂肪细胞脂解的抑制以及在db/db小鼠模型上的降糖及提高胰岛素敏感性的作用。

根据本发明的一个目的，本发明提供具有如下通式I结构的取代的2，4，6-三异丙基苯类化合物在制备治疗糖尿病的药物中的用途：

其中R₁选自

R₂选自-OH，-NH₂，或者

X选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃，-NH₂；

Y选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃；

Z选自-H，-CH₃。

优选地，R₂选自-OH或者其中

X选自-H，-NH₂或卤素，

Y选自-H或卤素，

Z选自-H或-CH₃。

进一步优选地，上述通式I化合物具体为：

优选地，所述糖尿病为2型糖尿病。

根据本发明的另一个目的，本发明提供了一种药物组合物，包括具有上述结构的取代的2，4，6-三异丙基苯类化合物和药学上可接受的载体。

在本发明中，发明人通过虚拟筛选发现化合物m1对FABP4有抑制活性，IC₅₀值为16.8μM。为了进一步探索构效关系，发明人合成了一系列m1类似物，即通式I结构化合物。体外活性实验结果表明，该类化合物对FABP4有不同程度的抑制作用，对分化的3T3L1前脂肪细胞的活性实验数据进行分析后发现，该类化合物可以明显地抑制细胞脂解；体内活性实验发现该类化合物在db/db小鼠模型上有明显的降糖以及改善胰岛素敏感性的作用。上述结果表明2，4，6-三异丙基苯类化合物可作为研制新的预防或治疗糖尿病的先导化合物，也可用于制备预防或治疗糖尿病的药物。

附图说明

图1为化合物筛选流程图；

图2为化合物I-10在3T3L1细胞上对脂解的抑制作用；

图3为小鼠的体重随时间变化的图；

图4为小鼠的血糖水平随时间变化的图；

图5为小鼠的口服葡萄糖耐量实验结果图；

图6为小鼠的胰岛素耐量实验结果图。

具体实施方式

下面将参考附图描述本发明示范性的实施方式，以帮助理解本发明。以下实施方式只以举例的方式描述本发明。很明显，本领域普通技术人员可在本发明的范围和实质内，对本发明进行各种变通和修改。需要了解的是，本发明意欲涵盖在所附权利要求书中包括的变通和修改。

实施例

第一部分化学合成实施例

化学合成所用实验材料及仪器：

所用的溶剂均为国产分析纯，其中CH₂Cl₂、THF经CaH₂回流重蒸处理，MeOH经分子筛处理后重蒸。薄层色谱(TLC)硅胶板型号为gel 60F₂₅₄(Merck)；柱层析硅胶为200-300目(青岛海洋化工厂)；¹H NMR、¹³C NMR由Varian/Mercury Plus 400Hz型核磁共振波谱仪测定；四甲基硅烷(TMS)为内标；质谱由Agilent 1100LC/MSD质谱仪测定，旋光由JASCO P-1020自动比旋光仪测定。

实施例1：2-甲基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(I-2a)

将2-甲基苯并咪唑(65.6mg，0.50mmol)溶于10mL干燥的THF中，加入三乙胺(72.3μL，0.50mmol)，室温搅拌0.5h，将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(151.5mg，0.50mmol)溶于干燥的THF溶液中，逐滴加入到上述溶液中，过夜回流反应.TLC检测反应完毕后，抽滤，蒸干滤液，柱层析(乙酸乙酯∶石油醚，1∶20)得到白色固体I-2a(68.7mg，35％)；R_f＝0.6(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 104-105℃；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ7.62-7.59(m，1H，ArH)，7.56-7.54(m，1H，ArH)，7.32(s，2H，ArH)，7.30-7.28(m，2H，ArH)，3.90-3.83(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.94-2.91(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.28(s，3H，CH ₃)，1.15(d，6H，J＝6.7Hz，2×CH ₃)，0.93(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ155.5，151.6，151.1，141.4，134.2，132.2，124.7，124.5，119.8，113.3，34.5，29.7，24.4；ESI-MS m/z：400.0([M+H]⁺).

实施例2：6-溴-2-甲基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(I-3a)

将4-溴-1，2-苯二胺(200mg，1.07mmol)、原乙酸三乙酯(235.2μL，1.28mmol)、ZrCl4(25.7mg，0.11mmol)溶于10mL的甲醇溶液中，室温下搅拌3h。TLC检测反应完毕后，蒸干溶剂，柱层析(CH₂Cl₂∶CH₃OH，：20∶1→10∶1)得到浅灰色固体6-溴-2-甲基-苯并咪唑(196mg，87％)；R_f＝0.1(乙酸乙酯∶石油醚，1∶1)；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.67(s，1H，ArH)，7.39(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.32(d，1H，J＝8.2Hz，ArH)，2.62(s，3H，CH ₃).

6-溴-2-甲基-苯并咪唑

将6-溴-2-甲基-苯并咪唑(96mg，0.455mmol)溶于10mL干燥的THF中，加入三乙胺(65.7μL，0.455mmol)，室温搅拌0.5h，将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(138mg，0.455mmol)溶于干燥的THF溶液中，逐滴加入到上述溶液中，过夜回流反应。TLC检测反应完毕后，抽滤，蒸干滤液，柱层析得到白色固体I-3a(28.7mg，13％)，R_f＝0.6(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 130-132℃；¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.88(d，1H，J＝1.6Hz，ArH)，7.51(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.42(dd，1H，J＝1.6，8.6Hz，ArH)，7.21(s，2H，ArH)，4.03-3.97(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.95-2.92(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.41(s，3H，＝CCH₃)，1.23(d，6H，J＝7.1Hz，2×CH ₃)，1.06(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ155.7，151.4，140.2，134.6，131.4，127.3，124.4，120.7，117.7，116.1，34.3，29.5，24.2，23.4，16.0；ESI-MS m/z：477.9([M+H]⁺).

实施例3：6-溴-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(I-3b)

将4-溴-1，2-苯二胺(200mg，1.07mmol)、原甲酸三乙酯(213.5μL，1.28mmol)、ZrCl₄(25.7mg，0.11mmol)溶于10mL的甲醇溶液中，室温下搅拌3h。TLC检测反应完毕后，蒸干溶剂，柱层析(CH₂Cl₂∶CH₃OH，20∶1→10∶1)得到棕色固体6-溴-苯并咪唑(238.1mg，95％)；R_f＝0.1(乙酸乙酯∶石油醚，1∶1)；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.10(s，1H，CH-N)，7.87(s，1H，ArH)，7.52(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.46(d，1H，J＝8.2Hz，ArH).

6-溴-苯并咪唑

将6-溴-苯并咪唑(232.2mg，1.18mmol)溶于10mL干燥的THF中，加入三乙胺(170μL，1.18mmol)，室温搅拌0.5h，将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(357mg，1.18mmol)溶于干燥的THF溶液中，逐滴加入到上述溶液中，过夜回流反应。TLC检测反应完毕后，抽滤，蒸干滤液，柱层析得到白色固体I-3b(70.2mg，13％)，R_f＝0.5(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 168-169℃；¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.32(s，1H，CH-N)，7.64(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.44(s，1H，ArH)，7.42(dd，1H，J＝2.0，8.2Hz，ArH)，7.24(s，2H，ArH)，4.19-4.12(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.95-2.91(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.26(d，6H，J＝7.1Hz，2×CH ₃)，1.15(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ156.1，151.9，141.0，129.5，127.7，124.7，122.2，118.6，115.0，34.3，29.6，24.4；ESI-MS m/z：463.9([M+H]⁺).

实施例4：5-氯-2-甲基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(I-4d)

将4-氯-1，2-苯二胺(60mg，0.42mmol)、原乙酸三乙酯(92.5μL，0.50mmol)、ZrCl₄(9.8mg，0.04mmol)溶于5mL的甲醇溶液中，室温下搅拌3h.TLC检测反应完毕后，蒸干溶剂，柱层析(CH₂Cl₂∶CH₃OH，20∶1)得到白色固体5-氯-2-甲基-苯并咪唑(71.4mg，100％)；R_f＝0.3(CH₂Cl₂∶CH₃OH，20∶1)；¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.53(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，7.44(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.20(dd，1H，J＝2.0，8.2Hz，ArH)，2.64(s，3H，CCH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ152.0，128.0，122.9，115.2，114.5，109.7，15.0.

5-氯-2甲基-苯并咪唑

将5-氯-2-甲基-苯并咪唑(68mg，0.408mmol)溶于5mL干燥的THF中，加入三乙胺(59μL，0.408mmol)，室温搅拌0.5h，将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(124mg，0.408mmol)溶于干燥的THF溶液中，逐滴加入到上述溶液中，过夜回流反应.TLC检测反应完毕后，抽滤，蒸干滤液，柱层析得到浅黄色固体I-4d(27.1mg，15％)，R_f＝0.5(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 111-112℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.76(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，7.56(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.29(dd，1H，J＝2.0，8.2Hz，ArH)，7.21(s，2H，ArH)，4.04-3.97(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.95-2.92(m，1H，CH(CH₃)₂)，2.40(s，3H，＝CCH ₃)，1.26(d，6H，J＝7.1Hz，2×CH ₃)，1.06(d，12H，J＝7.1Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ155.7，151.6，151.4，124.6，124.4，120.3，113.3，34.3，29.5，24.2，16.0；ESI-MS m/z：433.9([M+H]⁺).

实施例5：1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑-5胺(I-7)

将5-硝基苯并咪唑(100mg，0.613mmol)溶于10mL干燥的THF中，加入三乙胺(88.6μL，0.613mmol)，室温搅拌0.5h，将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(185.7mg，0.613mmol)溶于干燥的THF溶液中，逐滴加入到上述溶液中，过夜回流反应.TLC检测反应完毕后，抽滤，蒸干滤液，柱层析得到黄色固体5-硝基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(111.7mg，42％)，R_f＝0.7(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 158-160℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.70(s，1H，CH-N)，8.44(s，1H，ArH)，8.23(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，7.45(d，1H，J＝9.2Hz，ArH)，7.25(s，2H，ArH)，4.12-4.05(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.97-2.91(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.25(d，6H，J＝7.0Hz，2×CH ₃)，1.13(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ156.5，151.9，145.0，143.6，143.2，135.2，129.4，124.8，120.7，117.5，112.0，34.3，29.8，24.4；ESI-MSm/z：430.9([M+H]⁺)；黄色固体6-硝基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(121.8mg，46％)，R_f＝0.6(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 178-179℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.60(s，1H，CH-N)，8.25(dd，1H，J＝2.1，8.9Hz，ArH)，8.13(d，1H，J＝1.8Hz，ArH)，7.89(d，1H，J＝8.9Hz，ArH)，7.27(s，2H，ArH)，4.20-4.13(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.97-2.90(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.25(d，6H，J＝7.0Hz，2×CH ₃)，1.17(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ156.7，152.0，147.7，145.2，144.7，130.6，129.0，125.0，121.3，120.0，108.4，34.3，29.8，24.4；ESI-MS m/z：430.9([M+H]⁺).

5-硝基-1-(2，4，6-三异丙基   6-硝基1-(2，4，6-三异丙基苯

苯基磺酰)-苯并咪唑           基磺酰)-苯并咪唑

6-硝基-1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-苯并咪唑(97mg，0.23mmol)溶于2mL甲醇，18mL二氯甲烷混合溶液中，加入10％Pd/C催化量(50mg)，H2条件下，室温反应2h，TLC检测反应完毕后，硅藻土助滤，滤液蒸干，柱层析得黄色固体I-7(64.3mg，71％)，R_f＝0.4(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp152-153℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.06(s，1H，CH-N)，7.53(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.26(s，2H，ArH)，6.69(s，1H，ArH)，6.66(s，1H，ArH)，4.18-4.14(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，3.72(s，2H，NH ₂)，2.94-2.90(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.26(d，6H，J＝6.7Hz，2×CH ₃)，1.14(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ155.4，151.6，144.6，138.5，136.6，132.5，126.0，124.5，121.4，113.5，97.1，34.2，29.5，24.5；ESI-MS m/z：400.9([M+H]⁺).

实施例6：2，4，6-三异丙基苯磺酰胺(I-8)

将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(50mg，0.165mmol)溶于2mL的THF中，搅拌下滴加25％的氨水(0.127mL)，室温搅拌0.5h，TLC检测反应完毕后，加入甲苯，减压蒸干，柱层析(乙酸乙酯∶石油醚，1∶5)得到白色固体I-8(48.3，98％)，R_f＝0.3(乙酸乙酯∶石油醚，1∶4)；mp 121-122℃(lit¹⁴ mp 119-119.6℃)；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ7.16(s，2H，ArH)，4.83(s，2H，NH ₂)，4.14-4.07(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.94-2.87(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.29-1.24(m，18H，6×CH ₃)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ152.8，149.1，123.7，34.2，29.8，24.7；ESI-MS m/z：282.3([M-H]^-).

实施例7：2，4，6-三异丙基苯磺酰酸(I-9).

将2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(50mg，0.165mmol)溶于10mL水中，有固体悬浮，加入1，4-二氧六环5mL将其溶解，100℃下回流24h。TLC检测反应完毕后，加入甲苯，减压蒸干溶剂，柱层析(CH₂Cl₂∶CH₃OH，10∶1)得到白色固体I-9(41.6mg，89％)；mp 109-110℃；R_f＝0.2(CH₂Cl₂∶CH₃OH，20∶1)；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ6.93(s，2H，ArH)，4.59-4.54(m，2H，2×CH(CH3)2)，2.80-2.76(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.22(d，6H，J＝7.0Hz，2×CH ₃)，1.09(d，12H，J＝6.7Hz，4×CH ₃)；¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)：δ147.2，146.8，141.8，121.4，33.3，28.0，24.8；ESI-MS m/z：283.1([M-H]^-).

实施例8：2，4，6-三异丙基苯甲酸(I-10).

将2，4，6-三异丙基苯甲酰氯(100mg，0.375mmol)溶于20mL丙酮中，加入Et₃N(54.2μL，0.375mmol)，H₂O(3.4μL，0.188mmol)，回流反应18h。TLC检测反应完毕后，减压蒸干溶剂，加入甲苯，再次减压蒸干溶剂，柱层析(乙酸乙酯∶石油醚，10∶1→5∶1)得到白色固体I-10(92mg，99％)；R_f＝0.8(乙酸乙酯∶石油醚，1∶5)；mp 186-187℃；¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ7.04(s，2H，ArH)，3.07-3.03(m，2H，2×CH(CH₃)₂)，2.92-2.89(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.30-1.25(m，18H，6×CH ₃)；¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)：δ171.4，149.0，143.3，132.0，120.4，33.6，30.8，23.8；ESI-MS m/z：247.3([M-H]^-)

第二部分计算模拟和生物活性测试实施例

实验实施例1：虚拟筛选以及分子对接

[方法与结果]

虚拟筛选所采用的结构是结合了小分子BMS309403的人源FABP4(PDB号：2NNQ)，结构下载自Protein Data Bank(http://www.rcsb.org/pdb)，得到晶体结构后去掉分子内部的水分子和SO₄ ^2-缓冲液以及其他离子。发明人筛选了20万个化合物的Specs数据库以及8万个化合物的Maybridge数据库，最后分别在两个数据库中购买了199个和52个化合物，具体筛选流程如图1所示。

实验实施例2：化合物对FABP4的抑制活性

[方法与结果]

pET-28-Fabp4原核表达质粒转化至Rosseta表达菌株，37℃条件下1mMIPTG诱导表达，收集菌体超声破碎，在15000rpm离心30min后，取上清上Ni-NTA层析柱，经含10mM、20mM咪唑的PBS洗柱后，以含80mM咪唑的PBS洗脱目的蛋白质，获得的FABP4蛋白的纯度大于95％。在96孔板200μL/孔的筛药体系中，1，8-ANS(8-苯胺-1-萘磺酸)底物的浓度为10μM，FABP4蛋白的终浓度为10μM，加入不同浓度的待测化合物共孵育3min后，在激发波长(EX)370nm/发射波长(EM)470nm检测荧光信号。根据体系的荧光吸收值计算受试样品对FABP4的抑制率(％)，并将酶活性抑制率(％)达到50％时抑制剂的浓度定为IC₅₀值。抑制率(％)可以根据下式进行：

抑制率(％)＝[1-(Fx-F背景)/(F0％-F背景)]*100％

上式中，

Fx表示在化合物x存在下，测定的体系的荧光值(fluorescence，F)，

F背景表示荧光底物ANS的荧光值，

F0％表示抑制率为0％时，即不加化合物时体系的荧光值。

经过生物学活性检测显示购买的200多个化合物进行活性测试中有6个化合物对FABP4有不同程度的抑制活性，其中化合物m1(1-(2，4，6-三异丙基苯基磺酰)-咪唑)的活性较好，对FABP4的抑制活性的IC₅₀值为16.8μM，为了进一步提高化合物对FABP4的抑制活性，如上文实施例中所述，我们改造并合成了一系列m1类似物。

表1：化合物对FAPB4抑制活性

^a此为三复孔数据，其SD＜10％。

生物测试结果表明该类化合物对FABP4有不同程度的抑制作用，部分化合物抑制活性测试结果如表1所示。其中，化合物I-10，I-9，I-3b，I-4d活性高于m1，且均强于阳性化合物LA(亚油酸)。

实验实施例3：化合物I-10对分化3T3L1前脂肪细胞的脂解抑制活性

将3T3L1前脂肪细胞接种至48孔板，用10％NCS的H-DMEM培养基培养48小时，汇合率达到约100％后，换含有10％FBS的H-DMEM培养基培养，并加入终浓度为1μM的地塞米松，2μg/ml的胰岛素以及0.5mM的IBMX诱导分化。每两天换一次液，共换培养液3-4次。待3T3L1前脂肪细胞分化成有很多脂滴的成熟脂肪细胞时，加入相应浓度的化合物孵育24h，用KRH缓冲液洗涤细胞两遍，然后加入或者不加50μM的FSK与终浓度为50μM的化合物I-10孵育1h后取上清100μl，用甘油检测试剂盒检测甘油的量。

如图2所示，实验结果表明化合物I-10在50μM时能够明显地降低FSK(forskolin)刺激下的胞外甘油的浓度。

实验实施例4：化合物I-9，I-10改善自发2型糖尿病db/db小鼠2型糖尿病症状

自发2型糖尿病db/db小鼠引自美国Jackson实验室，在本实验室SPF饲养场所饲养繁殖；自发2型糖尿病db/db小鼠是一种瘦素受体缺乏小鼠，具有自发肥胖，胰岛素抵抗，高血糖，高胰岛素血症等2型糖尿病症状。实验选用6周龄雄性db/db小鼠，每组8只，常规灌胃给予I-9，I-10，设立溶媒对照组，观察体重、饮食和检测血糖、胰岛素敏感性等2型糖尿病指标。

化合物I-9，I-10以羧甲基纤维素钠溶解，口服灌胃给药，对照组给予同剂量羧甲基纤维素钠，持续4周。实验期间定期监测体重、血糖指标。检测小鼠葡萄糖耐量、胰岛素耐量评价小鼠胰岛素敏感性。口服葡萄糖耐量实验方法：禁食12小时，灌胃给予1g/kg体重葡萄糖，灌胃后在0，15，30，60，120分钟检测小鼠血糖；胰岛素耐量实验方法：禁食6小时，腹腔注射1U/kg胰岛素，注射后在0，15，30，60，90，120分钟检测小鼠血糖。

如图3所示，实验结果表明化合物I-9，I-10对小鼠体重无明显影响；图4显示出了给药4周后，化合物I-9，I-10显著降低了小鼠血糖水平；同时，如图5中的口服葡萄糖耐量实验显示，化合物I-9，I-10显著提高了葡萄糖耐受；图6中的胰岛素耐量实验显示，化合物I-9，I-10显著增加了胰岛素敏感性。

因此，本发明的发明人借助于虚拟筛选和分子对接的手段找到了探针分子，根据探针分子合成了一系列对FABP4有抑制活性的的2，4，6-三异丙基苯类化合物，这些化合物在细胞水平能够抑制分化3T3L1脂肪细胞的脂解，同时，动物体内实验数据表明，该类化合物能够显著的降低糖尿病小鼠的血糖和增加胰岛素敏感性。这些结果表明2，4，6-三异丙基苯类化合物可作为研制新的预防或治疗糖尿病先导化合物，也可用于制备预防或治疗糖尿病的药物。

Claims (3)

1.一种具有如下通式I结构的取代的2，4，6-三异丙基苯类化合物在制备治疗2型糖尿病的药物中的用途：

其中R₁选自或

R₂选自-OH，-NH₂，或者

X选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃，-NH₂；

Y选自-H，-CH₃，卤素，硝基，-OCH₃；

Z选自-H，-CH₃。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，在所述的通式I结构的化合物中，

R₂选自-OH，或者

X选自-H，-NH₂或卤素，

Y选自-H或卤素，

Z选自-H或-CH₃。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述的通式I结构的化合物具体为