JP6155395B2

JP6155395B2 - 新規ｄｇａｔ２阻害剤

Info

Publication number: JP6155395B2
Application number: JP2016532611A
Authority: JP
Inventors: ポールキャンプ，ニコラス; ナイク，マニシャ
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2013-11-25
Filing date: 2014-11-19
Publication date: 2017-06-28
Anticipated expiration: 2034-11-19
Also published as: JP2016539115A; AR098394A1; WO2015077299A1; CN105764889A; IL245245A0; DOP2016000120A; PH12016500963A1; ES2695302T3; CL2016001172A1; AP2016009230A0; MA39048A1; NZ719444A; CA2928468A1; HK1223367A1; AU2014353109A1; TW201609668A; CR20160216A; EP3074381A1; PE20161099A1; US9073901B2

Description

本発明は、高いトリグリセリドレベルならびに脂質異常症およびアテローム性動脈硬化症を含む心血管疾患を治療するために有用な治療法を提供し得る、ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）を阻害するのに有用な新規化合物に関する。本発明はまた、この新規化合物を調製する方法に関する。

人々、特に西半球の人口における、平均トリグリセリドレベルは、ここ３０年間に大変な率で上昇してきた。トリグリセリドレベルの上昇、すなわち高コレステロール血症は、脂質異常症およびアテローム性動脈硬化症などの心血管疾患の高いリスクを含む、いくつかの疾患リスクと関連付けられている。トリグリセリドレベルの上昇はまた、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂肪肝および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の劇的な上昇とも同時に起こっている。高いトリグリセリドレベルは、種々の疾患および状態に関連づけられるので、トリグリセリドの産生および／またはレベルのいずれかを管理することは、代謝性疾患のための実行可能な治療を提供し得る。

ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）は多くの組織において発現している；しかしながら、ＤＧＡＴ２は主に肝臓および白色脂肪組織において発現している。ＤＧＡＴ２は、ＤＧＡＴ１とともに、トリグリセリド合成の最後の工程に関与している。トリグリセリドレベルの低下を導くＤＧＡＴ２活性の阻害は、ＡｐｏＢ分泌を介する産生またはそれら粒子の沈着のいずれかを管理することによって、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃ）を抑制するであろう。両方の機構は、ヒトにおいて薬理学的に確証されている。アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）粒子の分泌を制限することは、ＬＤＬ−ｃ産生を減少させる。それゆえＤＧＡＴ２活性の減弱は、循環中のトリグリセリドレベル、ＬＤＬ−ｃ、ＡｐｏＢ、およびトリグリセリドリッチリポタンパク質濃度ならびに肝臓における脂質生合成に対して好ましい影響を有する。

国際公開第２０１３／１５０４１６号は、ＤＧＡＴ２阻害剤としての、プリン、ピリミジン、およびピラジン化合物の特定の誘導体、ならびにＤＧＡＴ２活性に関連する疾患を治療することにおけるそれらの使用を開示している。

高コレステロール血症ならびに脂質異常症およびアテローム性動脈硬化症などの心血管疾患の治療のためのさらなる薬物についての要求が存在する。食事、生活習慣の変更、および／またはスタチン療法を含む現在の治療方法は、心血管疾患のリスクがあるすべての患者のために十分にＬＤＬ−ｃレベルを低下させるものではない可能性がある。さらに、スタチン療法に対して不耐性であるか、または不耐性となる患者の部分集合が存在する。本発明は、心血管疾患の治療に好適で有り得る、代替の化合物および治療方法を提供することにより、これら要求の一つまたは複数に取り組むものである。

本発明は、式Ｉ：

［式中、Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ_３である］
による化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

一つの形態において、本発明は、ＲがＨである式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

別の形態において、本発明は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明は、心血管疾患の治療を必要とする患者を治療するための方法を提供する。かかる方法は、式Ｉによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与する工程を含む。一実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

別の形態において、本発明は、脂質異常症の治療を必要とする患者を治療するための方法を提供する。かかる方法は、式Ｉによる本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与する工程を含む。一実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、投与される化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

さらに別の形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症の治療を必要とする患者を治療するための方法を提供する。かかる方法は、式Ｉによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与する工程を含む。一実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

一つの形態において、本発明は、高トリグリセリド血症の治療を必要とする患者を治療するための方法を提供する。かかる方法は、式Ｉによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を、患者に投与する工程を含む。一実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、投与される化合物、またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式１の化合物である。

本発明は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤の少なくとも一つを含む、医薬組成物を提供する。

かかる医薬組成物および組成物を調製する方法は、当該技術分野において公知である。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ；ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｅｄｉｔｏｒ，２１^ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６を参照されたい）。

本発明は、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、または高トリグリセリド血症の治療を必要とする患者を治療するための方法を提供する。かかる方法は、式Ｉによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を、患者に投与する工程を含む。

一実施形態において、投与される医薬組成物は、ＲがＨである式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。別の実施形態において、投与される化合物または医薬組成物は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。

本発明は、療法における使用のための本発明の化合物を提供する。一実施形態において、化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

一実施形態において、療法は、心血管疾患の治療のための本発明の化合物の使用を含む。化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。あるいは、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

一実施形態において、療法は、脂質異常症の治療のための本発明の化合物の使用を含む。化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。あるいは、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

別の実施形態において、療法は、アテローム性動脈硬化症の治療のための本発明の化合物の使用を含む。化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。あるいは、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

別の実施形態において、療法は、高トリグリセリド血症の治療のための本発明の化合物の使用を含む。化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。あるいは、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

本発明はまた、高トリグリセリド血症、心血管疾患、脂質異常症、およびアテローム性動脈硬化症の一つまたは複数を治療するための医薬の製造における式Ｉによる化合物の使用を含む。一実施形態において、化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＲがＨである式Ｉの化合物である。別の実施形態において、化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｒが−ＣＨ_３である式Ｉの化合物である。

本発明は、下記式２：

［式中、Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ_３であり、Ｒ１は、保護基である］
の化合物の調製方法を提供する。かかる方法は、式３：

の化合物と、下記式４：

の化合物とを、反応させることを含む。

調製は、式２の保護基であるＲ１を除去して、式Ｉの化合物を得ることをさらに含むことができる。

様々なアミノ保護官能基の例としては、以下が挙げられる：Ｃ_１〜５アルキルカルバメート、Ｃ_３〜６シクロアルキルカルバメート、好ましくは、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）またはベンジルカルバメート（ＣＢＺ）などのカルバメート；Ｃ_１〜３アルキルアミド、Ｃ_１〜３ハロアルキルアミド、ホルムアミドまたはアセトアミド、クロロアセトアミド、トリフルオリドアセトアミド（ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ）などのアミド；およびベンジルアミン。アミノ保護官能基のさらなる例、保護アミノ置換基を調製する方法、およびアミノ置換基を脱保護する方法は、“ＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，３ｒｄＥｄ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｅｄｓ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９９においてみることができる。保護アミノ置換基に加えて、アミノ基へと容易に変換することができるその他の官能基を用いることができるということは、当業者によって認識されるであろう。かかる官能基、これらの基の調製、および変換は、“ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：ＡＧｕｉｄｅｔｏＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｒｏｕｐＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ” ｂｙＬａｒｏｃｋ．Ｒ．Ｃ，ＷｉｌｅｙＶＣＨ，１９９９および“Ｍａｒｃｈ’ｓＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ”Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄＭａｒｃｈ，Ｊ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，６ｔｈＥｄ．２００７においてみることができる。

本明細書において用いられる、「薬学的に許容される塩」という用語は、臨床および／または獣医学用途に許容できると考えられる本発明の化合物の塩をいう。薬学的に許容される塩およびかかる塩を調製する一般的方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔａｌ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔａｌ．，”ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ，”ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ１９７７を参照されたい。

本明細書において用いられる、「有効量」の式Ｉの化合物という用語は、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、または高トリグリセリド血症などの障害を治療することにおいて有効な量、即ち用量をいう。主治診断医であれば、当業者として、通常の技術の使用により、および類似の状況下で得られた結果を観察することにより、容易に有効量を決定することができる。式Ｉの化合物の有効量または用量を決定する際、限定されないが、式Ｉの化合物のうちどの化合物が投与されるか；使用される場合、その他の薬剤の同時投与；哺乳類の種；哺乳類の大きさ、年齢、および一般的健康状態；障害の合併症の程度もしくは重症度；個々の患者の応答；投与様式；投与される調製物の生物学的利用率特性；選択される投与計画；その他の併用薬物療法の使用；ならびにその他の関連する状況を含む、いくつかの因子が考慮される。

本明細書において用いられる、「治療する工程」、「治療すること」、または「治療」という用語は、現存している症状、障害、状態、または疾患の、進行または重症度を、抑制すること、遅くすること、止めること、減らすこと、または逆戻りさせることを含む。

本明細書において用いられる、「患者」という用語は、哺乳類、好ましくは、ヒトまたはイヌもしくはネコなどの伴侶哺乳類をいう。

一般化学
本明細書において用いられる、以下の用語は、示される意味を有する：「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンをいう；「Ｅｔ_２Ｏ」は、ジエチルエーテルをいう；「ＤＭＦ」は、ジメチルホルムアミドをいう；「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドをいう；「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルをいう；「ＥｔＯＨ」は、エタノールをいう；「ｈｒ」は、時間をいう；「ｍ」は、分間をいう；「ＭｅＯＨ」は、メタノールをいう；「ＭＳ」は、質量分析をいう；「ＲＴ」は、室温をいう；「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランをいう。

別段の記載がない限り、本明細書において例証する化合物は、ＡｃｃｅｌｒｙｓＤｒａｗ４．０．を用いて命名し、番号付けする。

スキーム１は、式Ｉおよび２の化合物の一般的合成を説明する。

一般に、スルホンアミドである化合物１は、亜硝酸ナトリウムおよび硫酸を用いて、フェノール誘導体である化合物２へと変換することができる。化合物２と４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジンである化合物３との反応により、エーテル化合物４が得られる。

方法Ａにしたがって、化合物４のクロリド置換基は、シアン化亜鉛およびパラジウム触媒を用いて、化合物５についてのシアノ基へと変換することができる。化合物５上のシアノ基は、パラジウム触媒および水素ガスを用いて、化合物６上のアミノ基へと還元することができる。アミン化合物６と２，５−ジクロロピリミジンである化合物７との反応により、ＲがＨまたはメチル基のいずれであってもよい式Ｉの化合物が得られる。

あるいは、方法Ｂにしたがって、化合物４のスルホンアミド窒素を、公知の窒素保護基で保護することにより、化合物８を得ることができる。化合物８のクロリド置換基は、シアン化亜鉛およびパラジウム触媒を用いて、化合物９上のシアノ基へと変換することができる。化合物９上のシアノ基は、パラジウム触媒および水素ガスを用いて、化合物１０上のアミノ基へと還元することができる。アミン化合物１０と２，５−ジクロロピリミジンである化合物７との反応および同時の（または後の）窒素の脱保護により、ＲがＨまたはメチル基のいずれであってもよい式Ｉの化合物が得られる。

実施例１
１−［４−［６−［［（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ］メチル］−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

実施例１の化合物は、以下に述べるように方法Ａまたは方法Ｂのいずれかによって作ることができる。

方法Ａ
調製例１
１−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

硫酸（２．５ｍＬ、４４．９ｍｍｏｌ）を水（５６．２ｍＬ）中の１−（４−アミノフェニル）−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（７．５ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、反応混合物を０℃に冷却する。ゆっくりと、水（３７．５ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（２．８ｇ；４１．２ｍｍｏｌ）の溶液をこのスラリーに滴下する。結果として生じる混合物を０℃で２０ｍ撹拌し、次いで氷浴を除去し、反応を１００℃で加熱する。混合物を室温に冷却する。反応を過剰の水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出する。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、抽出物を塩水で洗浄する；ＭｇＳＯ_４で乾燥させる；濾過する；そして濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物を橙色固体（６．２ｇ、６６％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１９（Ｍ＋Ｈ_２Ｏ）。

調製例２
１−［４−（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

窒素雰囲気下で炭酸カリウム（２６．４ｇ、１９０．８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１９２．０ｍＬ）中の１−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（１９．２ｇ、９５．４ｍｍｏｌ）、および４，６−ジクロロ−２−メチルピリミジン（１５．６ｇ、９５．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。結果として生じる混合物を室温で２時間撹拌する。混合物を４００ｍＬの氷／水（１：１ｖ／ｖ）に注ぎ、沈殿を誘導する。結果として生じる懸濁液を３０分間撹拌する。固体を収集する；水で洗浄する；そして一晩減圧下で乾燥させ、標題化合物を薄褐色固体（２７．７ｇ、８９％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２８（Ｍ＋１）。

調製例３
１−［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

窒素ガスをＤＭＦ（２６６．０ｍＬ）中の１−［４−（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（２６．６、８１．１ｍｍｏｌ）の溶液に１５分間通気する。その後、シアン化亜鉛（１４．５９ｇ、１２１．２ｍｍｏｌ）および（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（６．７６ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を添加する。懸濁液を窒素雰囲気下に維持しつつ、１５０℃に６ｈｒ加熱する。混合物を室温に冷却する。混合物を水（６００ｍＬ）で希釈し、混合物をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出する。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせる。引き続き、合わせた抽出物を水（５００ｍＬ）、次いで塩水（５００ｍＬ）で洗浄する；硫酸ナトリウムで乾燥させる；濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて標題化合物を単離し、標題化合物（１８ｇ、７０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１９（Ｍ＋１）。

代替調製例３
炭酸カリウム（３２５メッシュ、４６．５ｇ、３２９．９ミリモル）を、アセトン（４００．０ｍＬ）中の１−（４−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（４０．０ｇ、１６５．０ミリモル）および６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−カルボニトリル（２６．６ｇ、１７３．２ミリモル）の混合物に少しずつ添加する。混合物を２２℃で３ｈ撹拌する。結果として生じる懸濁液を濾過し、固体をアセトンですすぐ。濾液および洗液を合わせる（固体を捨てる）。濾液を濃縮し、褐色固体を得る。固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１２０ｍＬ）中でスラリーとし、濾過する。固体を収集し、それをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（８０ｍＬ）を用いてスラリーとし、次いで濾過する。固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（８０ｍＬ）ですすぎ、淡褐色固体を得る。真空オーブン中で４０℃、５０ｍｂａｒで８ｈ乾燥させ、標題化合物を淡褐色固体として、５２．４ｇ、９７％収率にて得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１９（Ｍ＋１）。

調製例４
１−［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

ＰＡＲＲリアクター中において、パラジウム（３．６ｇ、チャコール上１０％）、１−［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（１８ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（２７０ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（２７０ｍＬ）、およびトリエチルアミン（３１．５ｍＬ）を合わせる。ＰＡＲＲリアクターを密封し、ＰＡＲＲリアクターに水素（４００ｐｓｉ）を充填する；次いでリアクターを室温で一晩振盪する。リアクターを開け、内容物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過する；ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）パッドをＥｔＯＨ（１０００ｍＬ）で洗浄する；濾液を収集する；そして溶媒を蒸発させて、標題化合物を褐色固体（１１．１ｇ、４３％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３（Ｍ＋１）。

代替調製例４
パラジウム（１８．５４ｇ、チャコール上１０％）、１−［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（４６．３４ｇ、１４１．１９ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（２７８ｍＬ）、ＥｔＯＨ（１８５ｍＬ）、およびトリエチルアミン（７８．７ｍＬ）をＰＡＲＲリアクター中で合わせる。ＰＡＲＲリアクターを密封し、ＰＡＲＲリアクターに水素（４００ｐｓｉ）を充填する。リアクターを室温で４．５ｈ振盪する。リアクターを開け、内容物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過する。濾液を収集し、蒸発させて、標題化合物を黄色固体（２３．８ｇ、４８％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３（Ｍ＋１）。ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）パッドを１，４−ジオキサン／ＭｅＯＨの混合物（６×５００ｍＬ）で洗浄する；濾液を収集する；そして溶媒を蒸発させて、第二生成（ｓｅｃｏｎｄｃｒｏｐ）の標題化合物を黄色固体（桃色がかった固体、４８％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２３（Ｍ＋１）。

実施例１
１−［４−［６−［［（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ］メチル］−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

フッ化カリウム（１．８２ｇ、３１．３３ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１１１ｍＬ）中の１−［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（１１．１ｇ、２４．１０ｍｍｏｌ）および２，５−ジクロロピリミジン（４．３１ｇ、２８．９２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を１２０℃で２時間加熱する。その後、混合物を室温に冷却する；水（２００ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出する。有機抽出物を合わせる；引き続き、有機抽出物を水（３００ｍＬ）、次いで塩水（３００ｍＬ）で洗浄する；硫酸ナトリウムで乾燥させる；濾過する；そして濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を粗物質として得る。標題化合物を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）〜ＥｔＯＡｃ（１００％）のグラジエントで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製する。標題化合物を含有する適切な画分を収集し、画分を濃縮する。結果として生じる物質をＴＨＦ（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に溶解し、次いで、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）Ｔｈｉｏｌ（９．２ｇ）を添加して微量のパラジウムを除去する。混合物を５５℃で２ｈｒ撹拌する。混合物を５５℃で濾過する；濾液を収集する；そして、溶媒を蒸発させて固体を得る。固体を冷ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で粉砕する；固体を濾過により収集する；そして、固体を減圧下で乾燥させて、標題化合物を白色固体（８ｇ、７５％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋１）。

実施例１の代替調製例
ＤＭＳＯ（２３６ｍＬ）中で１−［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（２３．６ｇ、６７．３ｍｍｏｌ）および２，５−ジクロロピリミジン（１０．０３ｇ、６７．３ｍｍｏｌ）を合わせる。混合物を２２℃で１ｈ撹拌する。フッ化カリウム（５．１４ｇ、８７．５ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１２０℃に２時間加熱する。その後、混合物を室温に冷却し、混合物を水／氷（２５０ｍＬ）に注ぐ。さらなる水（５０ｍＬ）を添加し、混合物を超音波浴に３０分間入れる。結果として生じる固体物質を収集する。固体を水（１００ｍＬ）を用いてスラリーとし、固体を収集して、標題化合物を黄色固体として、２５．７ｇ、８２％収率にて得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋１）。

化合物をフラッシュクロマトグラフィー（１５００ｇＳｉＯ_２カラム；溶出液：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ５０：５０〜２５：７５；１Ｌ画分、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ３０：１、６００ｍＬ中に充填）により精製する。適切な画分を収集し、濃縮する。結果として生じる固体を真空オーブン中、４５℃、５ｍｂａｒで１８ｈ乾燥させ、標題化合物を白色固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋１）。

方法Ｂ
調製例５
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート

１−［４−（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（２．４１ｇ、４．６ｍｍｏｌ）（調製例２を参照されたい）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−ピリジンアミン（５６．６ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を添加する。溶液を０℃に冷却する；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルｔｅｒｔ−ブチルカーボネート（１．５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を添加する；そして、１時間撹拌する。反応を過剰の０．５ＮＨＣｌでクエンチする。混合物をＤＣＭで抽出する。ＤＣＭ抽出物を合わせる；抽出物を塩水で洗浄する；硫酸マグネシウムで乾燥させる；濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を橙色油状物（３．０３ｇ、９９．４％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２８（Ｍ＋１）。

調製例６
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート

窒素雰囲気下で、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−（６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート（２．２４ｇ、３．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２ｍＬ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．９ｇ、１．７ｍｍｏｌ）、およびシアン化亜鉛（２．０ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を合わせる。混合物を９０℃に加熱し、３時間撹拌する。反応を水および水酸化ナトリウムを用いてクエンチする。混合物をＥｔＯＡｃで抽出する；ＥｔＯＡｃ抽出物（複数の場合あり）を塩水で洗浄する；硫酸マグネシウムで乾燥させる；濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得る。標題化合物を、８０ｇのシリカゲルを用い、ヘキサン中０〜５５％のＥｔＯＡｃのグラジエントで溶出する、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製する。適切な画分を蒸発させて、標題化合物を黄色油状物（１．２ｇ、８０．９％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１９（Ｍ＋１）。

調製例７
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート

ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート（４００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２９０ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を、ＰＡＲＲリアクター中で合わせる。５％パラジウム炭素（２０３ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）を添加する。ＰＡＲＲリアクターを密封し、ＰＡＲＲリアクターを水素（３４５ｋＰａ）で加圧する。リアクターを外界温度で１７時間振盪する。減圧し、リアクターを開ける。さらなる量の５％パラジウム炭素（２００ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を添加する；リアクターを水素（４１４ｋＰａ）で再加圧し、リアクターを外界温度で維持しつつ、さらに１７時間振盪する。減圧し、リアクターを開ける。内容物を珪藻土で濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得る。精製するために、トルエンを添加し、減圧下で濃縮して、橙赤色残渣を得る。トルエンの添加および除去を３回繰り返し、標題化合物を桃色固体（０．５７ｇ、９８．８％、７０％純粋）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２３（Ｍ＋１）。

実施例１
１−［４−［６−［［（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ］メチル］−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド

フッ化カリウム（５３．９ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］メチルスルホニル］−Ｎ−メチル−カルバメート（２８０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および２，５−ジクロロピリミジン（６９．１ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。混合物を１２０℃に加熱し、混合物を１２０℃の温度で１７時間撹拌する。混合物を外界温度に冷却し、反応を水でクエンチする。結果として生じる混合物をＥｔＯＡｃで抽出する；抽出物（複数の場合あり）を合わせる；抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させる；濾過する；そして、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得る。標題化合物を、ヘキサン中ＥｔＯＡｃのグラジエント（０〜１００％）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製する。さらに標題化合物を、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨのグラジエントで溶出する第二のシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製する。適切な画分を減圧下で濃縮し、標題化合物をガラス状黄色固体（９０ｍｇ、４４．６％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋１）。

実施例２
１−｛４−［（６−｛［（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ］メチル｝−２−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］フェニル｝メタンスルホンアミド

実施例２の化合物は、以下に述べる方法によって作ることができる。

調製例８
（４−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド

調製例８は、本質的に調製例１、方法Ａによって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０５（Ｍ＋Ｈ_２Ｏ）。

調製例９
エチル２−メチル−６−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−カルボキシラート

アセトアミド塩酸塩（１３．９ｇ、１４７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）中のジエチルｂｕｔ−２−インジオエート（２５ｇ、１４７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する；次いでゆっくりと、トリエチルアミン（２２．５ｍＬ、１６２ｍｍｏｌ）を混合物に滴下する。混合物を８０℃に加熱し、１２時間撹拌する。混合物を外界温度に冷却し、混合物をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で希釈する。標題化合物を、ＤＣＭ中のＭｅＯＨのグラジエント（０〜１０％）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製する。適切な画分を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、標題化合物を褐色固体（７．４ｇ、２７．５％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８３（Ｍ＋１）。

調製例１０
２−メチル−６−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−カルボキサミド

エチル２−メチル−６−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−カルボキシラート（７．２６ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中のアンモニアの溶液（７０ｍＬ、７Ｎ）に溶解し、混合物を１７時間外界温度で撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、標題化合物を黒色固体（５．７ｇ、９３．４％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５４（Ｍ＋１）。

調製例１１
６−クロロ−２−メチル−ピリミジン−４−カルボニトリル

２−メチル−６−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−カルボキサミド（４６ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を塩化ホスホリル（３２．５ｍＬ、３４９ｍｍｏｌ）と合わせる；混合物を１００℃に加熱する；そして１７ｈｒ撹拌する。過剰の塩化ホスホリルを減圧下で除去し、黒色スラリーを得る。ゆっくりとスラリーを水（７００ｍＬ）に添加し、混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過する。濾液をＥｔ_２Ｏで抽出する。抽出物を合わせる；硫酸マグネシウムで乾燥させる；揮発性溶媒を濾液から減圧下で除去し、黒色固体を得る。標題化合物を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭのグラジエント（０〜１０％）で溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて精製する。適切な画分を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、標題化合物を黄色固体（２．５ｇ、１２％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５４（Ｍ＋１）。

調製例１２
［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メタンスルホンアミド

６−クロロ−２−メチルピリミジン−４−カルボニトリル（６２８ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）にＲＴで窒素雰囲気下で溶解する。（４−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（８５９ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．１３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を溶液に添加する。外界温度で３時間撹拌する。混合物を塩水溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出する。抽出物を合わせる；硫酸マグネシウムで乾燥させる；濾過する；そして濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物（８０％純粋、１．５ｇ、９６．４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０５（Ｍ＋１）。

代替調製例１２
（４−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（５５ｇ、２６９．１ｍｍｏｌ）および６−クロロ−２−メチルピリミジン−４−カルボニトリル（４５．５ｇ、２９６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（６０５ｍＬ）中で２２℃で合わせる。混合物を超音波浴に５分間入れ、２２℃で１０分間撹拌する。炭酸カリウム（３２５メッシュ）（７５．９ｇ、５３８．２ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、２２℃で４時間撹拌する。混合物を濾過し、固体をアセトニトリル（３×１５０ｍＬ）ですすぐ。濾液を濃縮して褐色固体を得る。固体をメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）中でスラリーとし、固体を収集する。固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルおよび水（２×２００ｍＬ）ですすぐ。固体を収集し、湿った固体を真空オーブン中、１５ｍｂａｒ、４５℃で乾燥させ、標題化合物を固体として、６７．２１ｇ、７９％収率にて得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０５（Ｍ＋１）。

調製例１３
［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］メタンスルホンアミド

調製例１３は、本質的に調製例７（または４）の方法によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０９（Ｍ＋１）。

トリエチルアミン（１１７．８３ｍＬ）およびチャコール上１０％パラジウム（２０．１０ｇ）を、１，４−ジオキサン（４６９ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０１ｍＬ；１５９．０５ｇ）の混合物中の［４−（６−シアノ−２−メチル−ピリミジン−４−イル）オキシフェニル］メタンスルホンアミド（６７ｇ、２１１．３５ミリモル）の溶液とＰＡＲＲリアクター中で合わせる。混合物を２２℃で維持する。リアクターを密封し、リアクターを水素（４００ＰＳＩ）で加圧する。リアクターを２２℃に維持しつつ１８ｈ振盪する。その後、リアクターを開け、固体を濾別する。固体残渣をＭｅＯＨ（１Ｌ）、ジオキサン／ＭｅＯＨ１：１の混合物（１Ｌ）、およびＭｅＯＨ（３×１Ｌ）ですすぐ。濾液を収集し、濃縮して固体を得る。固体を収集し、真空オーブン（４５℃、１５ｍｂａｒ）中で乾燥させ、標題化合物を黄色固体として、６２．４１ｇ、７７％収率にて得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０９（Ｍ＋１）。

実施例２
１−｛４−［（６−｛［（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ］メチル｝−２−メチルピリミジン−４−イル）オキシ］フェニル｝メタンスルホンアミド

実施例２は、本質的に、上記実施例１についての方法Ａにおける最終工程によって調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２１（Ｍ＋１）。

実施例２の代替調製例
２，５−ジクロロピリミジン（２４．７６ｇ、１６２．９ミリモル）をジメチルスルホキシド（６２０ｍＬ）中の［４−［６−（アミノメチル）−２−メチル−ピリミジン−４−イル］オキシフェニル］メタンスルホンアミド（６２ｇ、１６２．９ミリモル；６２．００ｇ）の溶液に２２℃で添加する。混合物を５分間撹拌し、フッ化カリウム（１０．５１ｇ、１７９．１ミリモル）を添加する。混合物を１２０℃に２ｈ加熱する；次いで、混合物を２２℃に冷却する。混合物を水−氷（１．２Ｌ）に注ぎ、懸濁液を濾過する。固体を収集し、固体を水（１００ｍＬ）中でスラリーとし、次いで固体を収集する。この固体をフラッシュクロマトグラフィー（１５００ｇカラム；溶出液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１００：０〜９５：５；１Ｌ画分、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ８０：２０（５００ｍＬ）中に充填）によって精製する。適切な画分を収集し、濃縮して、固体を得る。固体をイソプロピルアルコール（２５０ｍＬ）中でスラリーとし、結果として生じる懸濁液を超音波浴に５分間入れる。固体を収集し、固体をイソプロピルアルコールですすぎ、淡黄色固体を得る。再度、固体をイソプロピルアルコール（６００ｍＬ）に懸濁し、懸濁液を超音波浴に５分間入れる。アルコール懸濁液をロータリーエバポレーターで８０℃で濃縮する。固体を収集し、真空下で（０．５ｍｂａｒ、２２℃）１ｈ乾燥させる。固体をＥｔＯＨ（６００ｍＬ）に添加し、混合物を超音波浴に５分間入れる。混合物をロータリーエバポレーターで６０℃で濃縮する。黄色固体を収集し、０．５ｍｂａｒの真空下で、２２℃で１ｈ乾燥させる。

固体をＥｔＯＨ（６８０．２ｍＬ）に懸濁する。結果として生じる懸濁液を９５℃に温め、ジメチルスルホキシド（３３１．１ｍＬ）を添加して、鮮明な黄色の溶液を得る。窒素雰囲気下でディーン・スターク／還流冷却器を用いて溶媒を蒸留することによってＥｔＯＨ（６８０ｍＬ）を用いて水を除去する。残存する水を共沸除去するためにさらなるＥｔＯＨ（６８０ｍＬ）を添加してもよい。その後、水（４２１．８ｍＬ）を添加し、混合物を３０分間９５℃で撹拌する。混合物を２２℃に冷却し、混合物を１８ｈ撹拌する。懸濁液を濾過する。固体を収集し、水（２×１００ｍＬ）ですすぐ。固体を真空下で乾燥させ（１０ｍｂａｒ、４０℃、１８ｈ）、標題化合物を黄色固体として、４１．３ｇ、６１％収率にて得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２１（Ｍ＋１）。

一般生物学
アテローム硬化性血管疾患は、いまだに工業化社会における死亡および疾病の主因の一つである。アテローム硬化性血管疾患のよく理解されている危険因子の一つは、循環中の高濃度の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールである。主要な治療薬クラスであるスタチンを含む、ＬＤＬコレステロールを低下させる多数のクラスの治療薬が入手可能であるにもかかわらず、大心血管イベントの発生率は、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）の患者において依然として高い。さらに、もっとも有効な治療であるスタチンに対して不耐性である患者の部分集合が存在する（Ｇｏｔｔｏ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄＭｏｏｎ，Ｊ．Ｅ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，（２０１３）１０：５６０−５７０）。このクラスの化合物は、主にＬＤＬ受容体の発現上昇、および引き続くＬＤＬの肝臓への再取り込みによって、ＬＤＬコレステロールを低下させる。代替の、かつ潜在的に同等に有効である可能性がある方法は、最終的に循環中ＬＤＬに変換される、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の分泌を低下させることであろう。ともにＶＬＤＬの分泌を減少させる二つの新しいクラスの治療薬である、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）の阻害剤であるロミタピド、およびＡｐｏＢ合成阻害剤であるミポメルセンは、ＬＤＬコレステロールを減少させることが示された。しかしながら、これらの薬剤はいずれも、それら薬剤の有用性を制限する有害イベントを伴う。特に、ロミタピドによる治療は、肝臓脂肪含有量の８倍の上昇を伴う。対照的に、ＤＧＡＴ２の阻害は、肝臓におけるトリグリセリドの産生を減少させ、次いでＶＬＤＬ分泌の低下および引き続くＬＤＬコレステロールの低下を導くであろう。さらに、米国心臓協会からの科学的声明は、残余心血管系疾患発症リスクを減少させる手段として、高いトリグリセリドの治療標的化を支持している（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．ｅｔａｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２０１１）１２３：２２９２−２３３３）。ＤＧＡＴ２の阻害は、循環しているトリグリセリドを低下させ、したがって心血管イベントからのさらなる保護を提供するであろう。

ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）生化学的アッセイ
化合物のヒトＤＧＡＴ２に対するインビトロ阻害活性をこのアッセイにおいて評価する。アッセイでは、遺伝子改変昆虫ＳＦ９細胞において発現させ、アフィニティークロマトグラフィーによって精製した、アミノ末端にＦＬＡＧタグを有する組換えヒトＤＧＡＴ２を使用する。

ＤＧＡＴ２は、アシル補酵素Ａからジアシルグリセロールへのアシル部分の転移を触媒し、トリアシルグリセロールを形成させる。アッセイのこの特定の実施形態において、オレイン酸エステルを、転移されるアシル部分として使用する。すべての脂質成分の混和性を高めるために、アッセイに用いるすべての脂質はオレイル部分を唯一のアシル基として含有するものとする。

アッセイを開始する前に、ジオレオイルグリセロール（ＤＯＧ）およびジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）の３：７モル比の混合物を調製する。ホウケイ酸ガラス試験管中でクロロホルムに溶解した適切な量のＤＯＰＣおよびＤＯＧを混合する。アルゴン流下で溶媒を蒸発させ、脂質の薄膜を形成させる。その後、試験管を真空下に（＜１Ｔｏｒｒ）２ｈｒ置いて、残余の溶媒を除去する。適切な量の、ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．５、１５０ｍＭ）、およびスクロース（２５０ｍＭ）を含有するバッファーを添加して、２０ｍＭの総脂質濃度を達成する。勢いよくボルテックスすることによって、脂質薄膜の完全な懸濁を保証する。水浴超音波処理器中、定常波条件下で、懸濁液が濁った状態から半透明に変わるまで、試験管の内容物を超音波処理し、リポソームの小型単ラメラ小胞（ＳＵＶ）への変換を保証する。

被験化合物を、ＤＭＳＯに溶解し、ＤＭＳＯ中半対数増加率（ｈａｌｆ−ｌｏｇｉｎｃｒｅｍｅｎｔｓ）で段階希釈することによって、調製する。各濃度について、ＤＭＳＯ中の化合物溶液の、ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．５、１５０ｍＭ）、およびスクロース（２５０ｍＭ）を含有するバッファーへの１０倍段階希釈（ｓｔｅｐｄｉｌｕｔｉｏｎ）を行う。

ＳＵＶ懸濁液および化合物溶液とその他のアッセイ成分を混合し、以下の個々の成分の濃度を達成し：ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．５、１５０ｍＭ）、スクロース（２５０ｍＭ）、ＭｇＣｌ_２（５ｍＭ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）（０．５ｍＭ）、オレオイル補酵素Ａ（オレオイル−ＣｏＡ）（１２μＭ）、１−^１４Ｃオレオイル補酵素Ａ（オレイル−ＣｏＡ−^１４Ｃ）（８μＭ）、ジオレオイルグリセロール（ＤＯＧ）（０．６ｍＭ）、およびジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）（１．４ｍＭ）、ＤＧＡＴ２タンパク質（０．５ｎＭ）、ＤＭＳＯ（１％、ｖ／ｖ）、そして、３０μｌ総容積中、被験化合物濃度は１ｎＭから１００μＭの範囲とする。反応をＲＴ（およそ２１℃）で１ｈｒ、３８４−ウェルプレートの個々のウェル中でインキュベートする。１ｈｒ後、イソプロパノール：ＥｔＯＨ：ヘプタン：脱イオン水：１ＮＮａＯＨ（容積で、５９：１２．５：１５：１１：２．５）の混合物を含有する２３μｌの停止溶液を添加することによって、反応を停止させる。４２μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔＥを添加し、次いで混合物を一晩インキュベートして、トリグリセリドを、シンチラントを含有する有機溶媒層へと抽出する。Ｐｅｒｋｉｎ−ＥｌｍｅｒＴｏｐＣｏｕｎｔ装置を用いて放射能を測定する。反応についてのバックグラウンド測定値を、反応混合物中に酵素も被験化合物も含まない以外は上記と同じ手順を繰り返すことによって、確立する。ＤＧＡＴ２の阻害の程度を、各化合物について１０種類の異なる濃度にて放射能を測定することによって算出する。４パラメータロジスティック曲線の当てはめを用いて各化合物についてＩＣ_５０を決定する。実施例１および２についての算出したＩＣ_５０値の幾何平均を表１に列挙する。表１に列挙したデータは、実施例１および２の両方が、インビトロバッファーアッセイにおいてヒトＤＧＡＴ２を阻害することを実証する。

ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）細胞ベースアッセイ
細胞環境における、ヒトＤＧＡＴ２に対する化合物の阻害活性をこのアッセイで評価する。このアッセイでは、ヒト肝細胞癌細胞株であるＨｅｐＧ２を、アシルトランスフェラーゼ活性の源として使用する。

ＨｅｐＧ２細胞株は、インビボでヒト肝細胞において起こる代謝反応について一般的に使用されているモデルである。この細胞株におけるトリグリセリドの合成の後に、同位体標識したオレイン酸エステルのトリオレイン（３つのオレオイル部分を有するトリグリセリド）への取り込みの測定を行う。

ポリ−Ｄ−リジンによってあらかじめ被覆しておいた９６−ウェルマイクロプレートに、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む１００μＬの最小必須培地（ＭＥＭ）中５０，０００細胞／ウェルの量にてＨｅｐＧ２細胞を分注する。細胞を３７℃で１６ｈｒインキュベートする。細胞培地を２％ウシ血清アルブミンを含有するＭＥＭと交換する。被験化合物を０．５％ＤＭＳＯに溶解し、半対数増加率にて段階希釈を調製する。段階希釈した被験化合物を別々のウェルに添加する。３７℃で０．５ｈｒインキュベートする。その後、細胞培地を、５０μＭの^１３Ｃ_１８−オレイン酸エステルおよび３００μＭのヒドロプロピル（ｈｙｄｒｏｐｒｏｐｙｌ）−β−シクロデキストリンを含む以外は同じ組成である培地と交換する。３７℃でさらに４ｈｒインキュベートする。細胞培地をマイクロプレートをひっくり返すことにより捨て、それによってウェルをからにし、次いで残余の培地をウェルからペーパータオルを用いて吸い取る。マイクロプレートを外界温度で（約２１℃）１０分間乾燥させる。１２５μＬの溶媒のアリコート（９０：１０：２．５：２．５ｖ／ｖの比の、イソプロピルアルコール：テトラヒドロフラン：メタノール：クロロホルム）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）についての内部標準、およびトリアシルグリセロール（ＴＧ）についての内部標準を各ウェルに添加する。プレートを密封し、外界温度で３０分間振盪する。各ウェルの上部相の１００μＬのアリコートを、ディープウェルプレート（１ウェル当たり２ｍＬ）のウェルに移す。質量分析を用いてウェルの内容物を分析する。単一の^１３Ｃ_１８−オレイン酸エステル部分を有するトリオレインおよびＰＯＰＣの両方を、液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）を用いて測定する。１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）の濃度に対して標準化した、単一の^１３Ｃ_１８−オレイン酸エステル部分のトリオレインへの取り込みの程度をＤＧＡＴ２活性の測定値として使用する。

各化合物についてのＩＣ_５０を、４パラメータロジスティック曲線の当てはめを用いて決定する。実施例１および２についての算出したＩＣ_５０値の幾何平均を以下の表２に列挙する。表２に列挙するデータは、実施例１および２の両方が、細胞ベースアッセイにおいてヒトＤＧＡＴ２を阻害することを実証する。

インビボ薬力学アッセイ
このアッセイでは、媒体溶液のみで処理した対照動物と比較して、被験化合物で処理したマウスにおける血漿トリグリセリドの低下を測定することによって、化合物の効力を測定する。雄性Ｃ５７ＢＬ６マウス（１０〜１１週齢、それぞれおよそ体重２２ｇ）をこのアッセイに使用する。

肝臓で合成されたトリグリセリドは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の成分として循環中へと分泌される。リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）による循環中のトリグリセリドの分解を防ぐために、このアッセイでは、ＬＰＬの活性を阻害する界面活性剤であるチロキサポールのＩＶ注射を使用する。もう一つの酵素であるＤＧＡＴ１は、肝臓トリグリセリドの合成に関与するために、飽和用量のＤＧＡＴ１阻害剤（ナトリウム｛トランス−４−［４−（４−アミノ−７，７−ジメチル−７Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］［１，４］オキサジン−６−イル）フェニル］シクロヘキシル｝アセテート、ＩＵＰＡＣＡＣＤＬＡＢＳ命名規則、Ｄｏｗｅｔａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，（２０１１）２１（２０），６１２２−６１２８を参照されたい）もこのアッセイにおいて使用する。

好適な媒体中に、ＤＧＡＴ１阻害剤と混合した被験化合物（ＤＧＡＴ２阻害剤）の懸濁液を調製し、１０ｍＬ／ｋｇの化合物懸濁液および３ｍｇ／ｋｇ用量のＤＧＡＴ１阻害剤の投薬を保証する。この実験のセットにおいて、媒体は精製水中の１％ヒドロキシエチルセルロース、０．２５％ポリソルベート８０、および０．０５％アンチフォームである。処理の前にマウスを４時間絶食させる。被験マウスに、経管栄養によって、被験化合物（ＤＧＡＴ２阻害剤）の懸濁液を０．１から１０ｍｇ／ｋｇの範囲の５種類の用量で、３ｍｇ／ｋｇ用量のＤＧＡＴ１阻害剤とともに投与する。同様に、対照マウスのセットには媒体のみ（１０ｍＬ／ｇ）を投与する。３０分後に、各マウスに、後眼窩注射によって、４００ｍｇ／ｋｇ用量のチロキサポールを投与する。さらに３０分後に、マウスをＣＯ_２により安楽死させる。

血液を、心臓穿刺によって抗凝固薬であるＥＤＴＡを含有するチューブに収集する。血液の３，０００ｇで１０分間の遠心分離の後に、血漿を収集する。血漿サンプルを分析するまで、血漿サンプルをドライアイス上で凍結させる。サンプルをウェットアイスを用いて解凍する。血漿中のトリグリセリドの濃度を、自動臨床化学分析機器を用いて決定する。対照マウスにおけるトリグリセリド濃度に対する被験マウスにおける総トリグリセリドの低下を算出する。実施例１および２についての結果を以下の表３に列挙する。表３のデータは、実施例１および２が血漿トリグリセリドの濃度を減少させることを実証する。

インビボ有効性モデル
このアッセイでは、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃ）、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ−ｃ）、およびトリグリセリド（ＴＧ）の低下を測定することによって、化合物の効力を測定する。雄性ＬＤＬ受容体−欠損マウス（２９週齢、それぞれおよそ体重３０ｇ）をこのアッセイにおいて使用する。

測定されるあらゆるＬＤＬコレステロール低下が、ＬＤＬの肝臓へのＬＤＬ−受容体に媒介される取り込みとは独立に達成されることを実証するために、このアッセイのためにＬＤＬ受容体欠損マウスを選択する。

投薬前２週間、マウスに標準マウス固形飼料を与える。アラビアゴムに０．３、１、および３ｍｇ／ｍＬにて化合物を懸濁することにより、経口経管栄養のための被験溶液を調製する。マウスを試験群および対照群に分ける。その後、３週間の第１日目に試験群におけるマウスに被験溶液を１４日間、１日２回投与する。同様に、対照群におけるマウスにはいずれの被験化合物も与えずに媒体のみを投与する。最後の投与の４時間後に、マウスをＣＯ_２で安楽死させた。直ちに血液を心臓穿刺により収集する。血清を単離し、個々のリポタンパク質画分における血清トリグリセリドおよびコレステロールを測定する。リポタンパク質画分を公知のＨＰＬＣ法によって分離する。各リポタンパク質画分に付随するコレステロール濃度を、比色定量法（ＲｏｃｈｅＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ／ＨＰＲｅａｇｅｎｔ１１８７５５４０）によって、既知のコレステロール濃度を有する単離したリポタンパク質画分を標準として用いて決定する。最高用量である、３０ｍｇ／ｋｇ、１日２回にて得られた結果を、対照群におけるマウスの血清濃度と比較した試験群のマウスのＬＤＬ−ｃ、ＶＬＤＬ−ｃおよびＴＧ血清濃度の変化のパーセンテージとして表す。実施例１についての結果を表４に列挙する。結果は、実施例１が、ＬＤＬ−ｃ、ＶＬＤＬ−ｃおよびＴＧ血清濃度を減少させることを実証する。

表５に列挙する結果は、実施例２もまた、ＬＤＬ−ｃ、ＶＬＤＬ−ｃおよびＴＧ血清濃度を減少させることを実証する。実施例２の３０ｍｇ／ｋｇ用量での吸収を可能とするために、実施例２の化合物を、アラビアゴム媒体への添加の前に、ヒドロキシプロピルメチルセルロースとの１：１（ｗ／ｗ）の乾燥混合物として調製する。

治療医またはその他の医療従事者は、必要とする人の治療のための化合物の有効量を決定することができるであろう。好ましい医薬組成物は、経口投与のための錠剤またはカプセル剤として処方することができる。錠剤またはカプセル剤は、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、または高トリグリセリド血症の治療を必要とする患者を治療するために有効な量にて本発明の化合物を含むことができる。

本発明の例証した化合物は、単独で、または一つもしくは複数のさらなる治療薬と組み合わせて使用することができる。

例証した化合物は、以下のものなどの心血管疾患を治療するために使用されるさらなる治療薬と組み合わせることができる：ナイアシン、アスピリン、スタチン、ＣＥＴＰ阻害剤、およびフィブラート。スタチンの例としては、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチンが挙げられる。フィブラートの例としては、ベザフィブラート、シプロフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジル、およびフェノフィブラートが挙げられる。

例証した化合物およびさらなる治療薬（複数の場合あり）は、単一の丸剤、カプセル剤もしくは錠剤などの同じ送達経路およびデバイスを介して一緒に投与することができ；または、別々の送達デバイスにて同時にもしくは逐次に別々に投与することができる。

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］下記式の化合物、またはその薬学的に許容される塩：

［式中、Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ _３である］。
［２］ＲがＨである、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［３］Ｒが−ＣＨ _３である、［１］に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
［４］［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤の少なくとも一つを含む、医薬組成物。
［５］式：

［式中、
Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ _３であり、
Ｒ１は、Ｈまたは窒素保護基である］
の化合物の調製方法であって、該方法が、
式３：

の化合物と、下記式４：

の化合物とを反応させることを含む、方法。
［６］Ｒ１が保護基であり、前記方法が前記保護基を除去することをさらに含む、［５］に記載の方法。
［７］療法における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［８］前記療法が心血管疾患の治療である、［７］に記載の化合物。
［９］前記療法が脂質異常症の治療である、［７］に記載の化合物。
［１０］前記療法がアテローム性動脈硬化症の治療である、［７］に記載の化合物。
［１１］前記療法が高トリグリセリド血症の治療である、［７］に記載の化合物。
［１２］高トリグリセリド血症、心血管疾患、脂質異常症、またはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬の製造における、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物の使用。

Claims

下記式の化合物、またはその薬学的に許容される塩：

［式中、Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ_３である］。
ＲがＨである、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｒが−ＣＨ_３である、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤の少なくとも一つを含む、医薬組成物。
式：

［式中、
Ｒは、Ｈまたは−ＣＨ_３であり、
Ｒ１は、Ｈまたは窒素保護基である］
の化合物の調製方法であって、該方法が、
式３：

の化合物と、下記式４：

の化合物とを反応させることを含む、方法。
療法における使用のための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
前記療法が、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症または高トリグリセリド血症の治療である、請求項６に記載の化合物。
高トリグリセリド血症、心血管疾患、脂質異常症、またはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の使用。