ES2644574T3 - MicroARN para la regeneración cardíaca mediante la inducción de proliferación de miocitos cardíacos - Google Patents

MicroARN para la regeneración cardíaca mediante la inducción de proliferación de miocitos cardíacos Download PDF

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ES2644574T3 ES12823043.0T ES12823043T ES2644574T3 ES 2644574 T3 ES2644574 T3 ES 2644574T3 ES 12823043 T ES12823043 T ES 12823043T ES 2644574 T3 ES2644574 T3 ES 2644574T3
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Miguel Luis CUNHA MANO
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Description

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(continuación)
SEQ ID
Nombre N.º Acceso miRBase Secuencia
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hsa-miR-302c MIMAT0000717 UAAGUGCUUCCAUGUUUCAGUGG
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hsa-miR-302c* MIMAT0000716 UUUAACAUGGGGGUACCUGCUG
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hsa-miR-302d MIMAT0000718 UAAGUGCUUCCAUGUUUGAGUGU
21
hsa-miR-302e MIMAT0005931 UAAGUGCUUCCAUGCUU
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hsa-miR-335* MIMAT0004703 UUUUUCAUUAUUGCUCCUGACC
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hsa-miR-372 MIMAT0000724 AAAGUGCUGCGACAUUUGAGCGU
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hsa-miR-455-5p MIMAT0003150 UAUGUGCCUUUGGACUACAUCG
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hsa-miR-511 MIMAT0002808 GUGUCUUUUGCUCUGCAGUCA
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hsa-miR-520a-3p MIMAT0002834 AAAGUGCUUCCCUUUGGACUGU
27
hsa-miR-520b MIMAT0002843 AAAGUGCUUCCUUUUAGAGGG
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hsa-miR-520c-3p MIMAT0002846 AAAGUGCUUCCUUUUAGAGGGU
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hsa-miR-875-5p MIMAT0004922 UAUACCUCAGUUUUAUCAGGUG
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hsa-miR-885-5p MIMAT0004947 UCCAUUACACUACCCUGCCUCU
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hsa-miR-1244 MIMAT0005896 AAGUAGUUGGUUUGUAUGAGAUGGUU
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hsa-miR-1281 MIMAT0005939 UCGCCUCCUCCUCUCCC
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hsa-miR-2052 MIMAT0009977 UGUUUUGAUAACAGUAAUGU
Es otro objeto de la presente invención uno de los microARN de la Tabla 1, o una combinación de los mismos, para su uso en la promoción de la proliferación de cardiomiocitos in vivo, en el tratamiento de patologías cardíacas
5 asociadas con la pérdida de miocitos cardíacos (incluyendo pero no limitándose a las consecuencias de un infarto de miocardio, una miocardiopatía isquémica y no isquémica, una miocarditis y una insuficiencia cardíaca) a través de la inducción de la regeneración cardíaca.
Un objeto adicional de la presente invención es uno de los microARN de la Tabla 1, o una combinación de los mismos, para su uso in vitro o ex vivo en la promoción de la proliferación de cardiomiocitos y en la expansión de
10 cardiomiocitos derivados de células madre embrionarias (ES), células pluripotentes inducidas (iPS) o células madre obtenidas por otros procedimientos, o de cardiomiocitos adultos.
También se desvela un procedimiento para la selección de alto rendimiento de compuestos biológicos y terapéuticamente activos para su capacidad para aumentar la proliferación de cardiomiocitos. Dicho procedimiento se utiliza para la selección de los microARN que son objeto de la presente invención.
15 Un objeto adicional de la presente invención es una extensión de ARN que comprende una o una combinación de los microARN de la Tabla 1 descritos anteriormente. Dicha extensión de ARN se obtiene in vitro mediante procedimientos de transcripción sin células, se produce sintéticamente o se expresa en las células tras la transferencia de la secuencia codificadora de ADN relativa, o se introduce o expresa en las células mediante la administración de un plásmido, un vector viral o de otro tipo, con la condición de que no sea un ARN que se produce
20 naturalmente.
La presente invención proporciona dicha extensión de ARN para su uso como un medicamento para estimular la regeneración del corazón a través de la proliferación de miocitos cardíacos.
La presente invención también proporciona uno de los microARN de la Tabla 1, o su combinación, para su uso como un medicamento.
25 Otro objeto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende uno de los microARN de la Tabla 1, o su combinación, como ingredientes activos para el tratamiento de patologías cardíacas asociadas con la pérdida de miocitos cardíacos (incluyendo, pero sin limitarse a, las consecuencias de un infarto de miocardio, una miocardiopatía, una miocarditis y una insuficiencia cardíaca).
Estos y otros objetos de la invención se desvelarán en detalle en la especificación anterior también por medio de 30 ejemplos y figuras.
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sujeto humano;
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cultivar dicho tercer cardiomiocito transfectado,
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probar la capacidad de proliferación de dicho tercer cardiomiocito transfectado;
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seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho tercer cardiomiocito transfectado de la etapa I).
Preferiblemente, en dicha etapa de selección e), i) o m) se selecciona al menos un microARN capaz de aumentar significativamente la proliferación de cardiomiocitos al menos en 2 veces.
Las bibliotecas útiles para la presente invención están disponibles a través de proveedores comerciales, por ejemplo Thermo Scientific, Sigma, Ambion.
Como se describe con más detalle en el Ejemplo 1, se trataron células cardiomiocitos de rata primarios con cada uno de los microARN en la biblioteca, se tiñeron con un colorante nuclear convencional, por ejemplo Hoechst 33432, anticuerpos contra la alfa-actinina sarcomérica marcadora de cardiomiocitos y el antígeno de proliferación Ki-67 y con EdU, un análogo de uridina que se incorpora en ADN recién sintetizado.
Con este procedimiento, se identifican 208 microARN, lo que puede aumentar significativamente la proliferación de cardiomiocitos.
Se utilizan animales de laboratorio, por ejemplo ratas, para aislar miocitos cardíacos. Preferiblemente, los miocitos se aíslan a partir de animales neonatales según procedimientos bien conocidos. Se utilizan preferentemente los miocitos de los ventrículos.
Los microARN individuales de la biblioteca se transfieren a placas de micropocillos, cada una en un pocillo individual. Posteriormente, cada uno de estos microARN se transfecta a cardiomiocitos animales. El orden preferido de magnitud de las células sembradas es 1x104 células por pocillo. Se puede usar un protocolo estándar de transfección inversa, a una concentración final adecuada de microARN, por ejemplo de 25 nM. La selección se repite varias veces para una experimentación precisa, por ejemplo por duplicado.
Después de la transfección y siembra de células, por ejemplo veinticuatro horas, el medio de cultivo puede ser reemplazado por medio fresco. A continuación, como 28 h después, es decir, 52 h después de la siembra, el medio de cultivo se reemplaza con un medio apropiado para ensayar la vitalidad celular, se utilizan al menos dos marcadores de proliferación, por ejemplo EdU y Ki-67, durante un tiempo adecuado 20 h). Las células son fijadas, generalmente aproximadamente 72 h después de la siembra, y procesadas para la inmunofluorescencia como se conoce en la técnica. Las células se tiñen después, preferiblemente durante la noche a la temperatura habitual (por ejemplo 4 °C) con anticuerpos primarios diluidos en solución de bloqueo. Ejemplos de anticuerpos primarios son anticuerpos monoclonales de ratón contra la alfa-actinina sarcomérica, anticuerpo de conejo contra Ki-67. Se pueden usar otros anticuerpos. Las células se lavan a continuación con un medio, por ejemplo solución salina tamponada con fosfato y se incuban durante un tiempo suficiente (tal como 2 h) con los respectivos anticuerpos secundarios conjugados con un marcador detectable. Las células se procesan adicionalmente para revelar la incorporación de EdU y se tiñen como se conoce en la técnica.
La adquisición de imágenes se realiza a continuación con un equipo comercial, como microscopio de fluorescencia de selección de alto contenido y se realiza el análisis de la imagen. Las células se califican como proliferantes solo si son positivas para ambos de los al menos dos marcadores de proliferación; los cardiomiocitos se distinguen de otras células presentes en los cultivos primarios (por ejemplo, fibroblastos y células endoteliales) por su positividad para la alfa-actinina sarcomérica.
La selección de microARN que inducen la proliferación de cardiomiocitos también se repite en células cardiomiocitos adultas. Estas se obtienen preferiblemente, pero no exclusivamente, del ventrículo izquierdo del corazón usando un procedimiento estándar para el aislamiento de cardiomiocitos adultos diferenciados. Estos se tratan a continuación con dichos microARN; después del tratamiento, la proliferación de cardiomiocitos adultos se verifica evaluando la positividad para diferentes marcadores de proliferación, tales como EdU y Ki-67, tal como se describe para los cardiomiocitos neonatales.
La selección de microARN se repite en un animal de laboratorio diferente del animal utilizado en la primera selección con el fin de examinar los microARN que actúan dirigiéndose a un conjunto conservado de dianas.
La selección de microARN para aumentar la proliferación de cardiomiocitos en seres humanos se realiza a continuación transfectando los microARN resultantes de la segunda selección en cardiomiocitos humanos derivados de células madre embrionarias, que están comercializadas (por ejemplo por cardiomiocitos Cytiva de GE Healthcare). Estas células comprenden subtipos ventriculares, auriculares y nodales, la mayoría son miocitos ventriculares, y se caracterizan por su morfología, electrofisiología y expresión de marcadores cardíacos, constituyendo así una alternativa biológicamente relevante a las células primarias, las cuales son difíciles de obtener
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de humanos donantes para pruebas predictivas.
Colectivamente, los resultados descritos en el presente documento identifican un subconjunto de microARN capaces de aumentar la proliferación de miocitos cardíacos de diferentes especies, incluyendo células humanas, que se derivan de células embrionarias, de individuos neonatales o de individuos adultos. Hay que señalar que estos microARN son la base para el desarrollo de nuevos enfoques terapéuticos contra enfermedades cardíacas en seres humanos, con el propósito específico de inducir la regeneración de tejido cardíaco adulto promoviendo la proliferación de cardiomiocitos.
Las modificaciones de los procedimientos descritos anteriormente que no modifican esencialmente los resultados obtenidos están dentro de los límites de la presente invención.
En el presente documento se presentan otras realizaciones.
También se desvela un método de selección de microARN, preferiblemente de origen humano, comprendiendo dicha selección: a) transfectar cada microARN en un cardiomiocito aislado de un primer sujeto animal, b) cultivar dicho cardiomiocito transfectado c) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado; d) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado.
También se desvela un método de selección de microARN, preferiblemente de origen humano, comprendiendo dicha selección: a) transfectar cada microARN en un cardiomiocito aislado de un primer sujeto animal, b) cultivar dicho cardiomiocito transfectado c) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado; d) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado; e) transfectar cada microARN seleccionado de la etapa d) en un cardiomiocito aislado de un segundo sujeto animal diferente de dicho primer animal, f) cultivar dicho cardiomiocito transfectado, g) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado; h) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado de la etapa g).
También se desvela un método de selección de microARN, preferiblemente de origen humano, comprendiendo dicha selección: a) transfectar cada microARN en un cardiomiocito aislado de un primer sujeto animal, b) cultivar dicho cardiomiocito transfectado c) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado; d) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado; e) transfectar cada microARN seleccionado de la etapa d) en un cardiomiocito aislado de un segundo sujeto animal diferente de dicho primer animal, f) cultivar dicho cardiomiocito transfectado, g) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado; h) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado de la etapa g), i) transfectar cada microARN seleccionado de la etapa h) en un cardiomiocito aislado derivado de una célula madre humana, j) cultivar dicho cardiomiocito transfectado, k) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado, l) seleccionar microARN capaces de inducir proliferación en dicho cardiomiocito transfectado de la etapa k).
Las etapas de prueba y selección en los procedimientos anteriores se realizan preferiblemente con procedimientos de selección de alto rendimiento, en particular basados en análisis de imágenes de alto contenido. El procedimiento preferido es la selección de alto rendimiento basado en la microscopía de fluorescencia.
Los microARN obtenidos a partir del procedimiento anterior son capaces de inducir proliferación en cardiomiocitos, in vitro e in vivo, en particular son capaces de inducir proliferación de cardiomiocitos de un sujeto animal, más en particular en diferentes sujetos animales, incluso más en particular en seres humanos.
La presente invención también comprende transcritos primarios, precursores e imitadores de los microARN desvelados en el presente documento. Los conceptos de transcrito primario de miARN, precursor e imitador son bien conocidos en la técnica.
También se proporcionan en la presente invención modificaciones de la cadena principal de microARN o ácidos nucleicos sintéticos que imitan de alguna manera la función del microARN natural. Estas modificaciones pueden realizarse de acuerdo con técnicas bien conocidas, con la condición de que dichas modificaciones no alteren la función de los microARN de la presente invención. Tales modificaciones incluyen, pero no se limitan a, sustitución de átomos de oxígeno no unidos en el grupo fosfato, introducción de un grupo alquilo en la molécula de azúcar de nucleótidos, inclusión de enlaces adicionales que conectan átomos de carbono u oxígeno en los azúcares de nucleótidos por ejemplo, la tecnología LNA) y similares. Estas modificaciones son bien conocidas en la técnica y no necesitan revelación adicional específica.
Los microARN de la presente invención son capaces de aumentar la mitosis de miocitos cardíacos, la división celular (citocinesis) y el número de células in vitro e in vivo, como se demuestra en los Ejemplos siguientes.
En las realizaciones de la presente invención que relacionan los microARN como medicamentos, en particular para el tratamiento de enfermedades cardíacas asociadas con una pérdida de cardiomiocitos (como consecuencia de un infarto de miocardio, una miocardiopatía de origen isquémico y no isquémico, una miocarditis y una insuficiencia cardíaca), pueden ser administrados a un sujeto que padece dicha enfermedad por procedimientos convencionales
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con el objetivo específico de inducir la regeneración cardíaca estimulando la proliferación de cardiomiocitos.
Convenientemente, dicho medicamento está en forma de una preparación para administración parenteral, intracoronaria, intravenosa o intracardíaca, pero otras formas son igualmente adecuadas para llevar a cabo la presente invención. El experto en la materia decidirá el tiempo efectivo de administración, dependiendo de las condiciones del paciente, el grado de gravedad de la enfermedad, la respuesta del paciente y cualquier otro parámetro clínico dentro del conocimiento general de esta materia.
Las composiciones farmacéuticas contendrán al menos uno de los siguientes: ARN sintético correspondiente al microARN de la presente invención o su transcrito o precursor primario, ADN que codifica dicho microARN, ADN que codifica un transcrito primario o precursor de dicho ARN tal como el microARN que se produce dentro de las células que contienen este ADN. La administración de uno de los microARN (o transcrito primario o precursor) de la presente invención o de los correspondientes ADN codificantes puede administrarse junto con moléculas lipídicas tales como lípidos catiónicos, o péptidos, o en el contexto de andamios poliméricos, que pueden facilitar su administración, según la técnica. Otro procedimiento para administrar tales microARN o sus correspondientes ADN es por medio de un vector adecuado conocido para la administración de ARN o ADN. Un vector más preferido es el vector adenoasociado (AAV) de cualquier serotipo de la cápside, ya sea natural (tal como, pero sin limitarse a, AAV1, AAV2, AAV8, AAV9) o artificial, un vector viral bien conocido para la administración de ADN in vivo (Mingozzi y col., 2011). Todos estos procedimientos y formulación para administrar el ARN sintético anterior correspondiente al microARN de la presente invención, el ADN que codifica para dicho microARN, el ADN que codifica un transcrito primario o precursor para dicho ARN tal como el microARN que se produce dentro de las células que contienen este ADN, son convencionales y bien conocidos en la técnica y no necesitan explicación adicional.
La inyección es una vía de administración preferida. Sin embargo, el experto en la materia puede decidir administrar microARN por medio de cualquier composición farmacéutica convencional. Se puede hacer referencia a Remington's Pharmaceutical Sciences, última edición.
El régimen de administración, la dosificación y la posología serán determinados por el médico según su experiencia, la enfermedad a tratar y las condiciones del paciente.
De acuerdo con la vía de administración elegida, las composiciones estarán en forma sólida o líquida, adecuadas para administración oral, parenteral, intravenosa o intraarterial. La terapia génica es también otra realización. Las composiciones de acuerdo con la presente invención contienen, junto con el principio activo, al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Estos pueden ser coadyuvantes de formulación particularmente útiles, por ej., agentes solubilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión y agentes emulsionantes.
Los agentes activos para su uso en la presente invención se pueden administrar como un medicamento, es decir, una composición farmacéutica. La composición contiene al menos un agente activo de la presente invención con un vehículo adecuado. Se pueden utilizar una variedad de vías y técnicas de administración, entre ellas técnicas parenterales tales como inyecciones intravenosas, intracardíacas e intraarteriales, cateterizaciones y similares. Las cantidades medias del agente activo pueden variar y en particular deben basarse en las recomendaciones y la prescripción de un médico cualificado.
Un procedimiento para la selección de compuestos biológicos y terapéuticamente activos por su capacidad para aumentar la proliferación de cardiomiocitos, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de: a) proporcionar un cardiomiocito transfectado con cualquiera de los microARN anteriores, b) obtener un candidato para un compuesto terapéuticamente activo en contacto con dicho cardiomiocito, c) probar la capacidad de proliferación de dicho cardiomiocito transfectado, d) seleccionar compuestos capaces de inducir la proliferación de dicho cardiomiocito transfectado.
Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente la invención.
Ejemplo 1
La selección funcional identifica microARN que controlan la proliferación de cardiomiocitos neonatales de rata in vitro
Dada la participación de los microARN en la regulación de varios procesos biológicos, incluida la proliferación celular, queríamos investigar si los microARN podrían controlar la proliferación de los miocitos cardíacos primarios ex vivo e identificar los microARN más eficaces en el aumento de la capacidad proliferativa de estas células.
Para abordar este problema, se realizó una selección de alto rendimiento basada en microscopía de fluorescencia en cardiomiocitos neonatales de rata utilizando una biblioteca comercial de 988 imitadores de microARN (miRIDIAN microRNA mimics, Dharmacon, Thermo Scientific) correspondiente a todos los microARN humanos registrados (de acuerdo con miRBase publicación 13.0, 2009). Las células se tiñeron con el colorante nuclear Hoechst 33432, anticuerpos contra el marcador de cardiomiocitos alfa-actinina sarcomérica y el antígeno de proliferación Ki-67 y con EdU, un análogo de la uridina que se incorpora en el ADN recién sintetizado. Se utilizaron dos marcadores de proliferación (Ki-67 y EdU incorporación) para aumentar la fiabilidad en la identificación de células en proliferación; el
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análisis automatizado de la imagen se realizó en aproximadamente 3.000 células por condición experimental.
Utilizando este enfoque, identificamos 208 microARN capaces de aumentar significativamente la proliferación de cardiomiocitos neonatales de ratas en más de dos veces (de 12,5 % de proliferación basal hasta más del 40 %).
La Figura 1 muestra los resultados de la selección para la inducción de la proliferación de cardiomiocitos por microARN. Cada punto indica el efecto sobre la proliferación de cardiomiocitos por los microARN individuales en dos experimentos idénticos. Los microARN de control están en el cuadro inferior (líneas punteadas); los 36 microARN que son objeto de esta invención, están en la caja superior (número de cardiomiocitos proliferantes EdU+, Ki-67+> 35 % hasta 55 %).
La Figura 2 muestra ejemplos de microARN que aumentan la proliferación de cardiomiocitos in vitro, evaluada por la positividad para EdU y Ki-67.
PROCEDIMIENTOS
El cuidado y los tratamientos de los animales se llevaron a cabo de conformidad con las directrices institucionales, de conformidad con las leyes y políticas nacionales e internacionales (Directiva 86/609/CEE del Consejo, DO L 358, de 12 de diciembre de 1987).
Las ratas Wistar se adquirieron a Charles River Laboratories Italia Srl. Los miocitos cardíacos de ratas neonatales se aislaron como se describió anteriormente (Collesi y col., 2008), con modificaciones menores. En resumen, se separaron los ventrículos de las ratas neonatales (día 0) de las aurículas, se cortaron en trozos y luego se disociaron en calcio y Hanks sin bicarbonato con tampón HEPES (CBFHH) que contenía 1,75 mg/ml de tripsina (BD Difco) y 10 microgramos/ml de ADNasa II (Sigma) bajo agitación constante. La digestión se realizó a temperatura ambiente en etapas de ocho a diez minutos, recogiendo el sobrenadante en suero bovino fetal (FBS, Invitrogen) después de cada etapa. El sobrenadante se centrifugó para aislar células que se resuspendieron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 4,5 g/l de glucosa (Invitrogen) suplementado con FBS al 5 % y vitamina B12 (Sigma) 20 μg/ml. Las células recogidas se pasaron a través de un filtro de células (40 µm, BD Falcon) y luego se sembraron en placas de plástico de 100 mm sin revestir durante 2 horas a 37 °C en CO2 al 5 % y atmósfera humidificada. A continuación se recogió el sobrenadante, compuesto principalmente de cardiomiocitos, se contaron las células y se sembraron; los cultivos de cardiomiocitos ventriculares neonatales de rata se prepararon usando este procedimiento que tiene una pureza >90 %.
La biblioteca de microARN correspondiente a todos los microARN maduros humanos (miRIDIAN microRNA mimics), se obtuvo de Dharmacon, Thermo Scientific. Los microARN individuales se transfirieron robóticamente a placas Primaria de 96 pocillos (BD-Falcon) dejando las columnas 1 y 12 vacías para la adición de microARN de control (celmiR-67, hsa-miR-1). Los microARN fueron transfectados a cardiomiocitos neonatales de rata (se sembraron 1,0x104 células por pocillo), a una concentración final de 25 nM, mediante un protocolo estándar de transfección inversa utilizando reactivo de transfección Lipofectamine RNAimax (Invitrogen); la selección se realizó por duplicado.
Veinticuatro horas después de la transfección y siembra de células, el medio de cultivo se reemplazó por medio nuevo; 28 h después, es decir, 52 h después de la siembra, el medio de cultivo se reemplazó con medio que contenía 5 μM de EdU durante 20 h. Las células se fijaron a 72 h después de la siembra y se procesaron para inmunofluorescencia. En resumen, las células se fijaron con paraformaldehído al 4 % durante 15 minutos, se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,5 % en solución salina tamponada con fosfato (PBS) durante 10 minutos, seguido de bloqueo durante 30 minutos en albúmina de suero bovino (BSA) al 1 %. Las células se tiñeron después durante la noche a 4 °C con los siguientes anticuerpos primarios diluidos en solución de bloqueo: anticuerpo monoclonal de ratón contra alfa-actinina sarcomérica (Abcam) y anticuerpo de conejo contra Ki-67 (Monosan). Las células se lavaron con PBS y se incubaron durante 2 h con los respectivos anticuerpos secundarios conjugados con Alexa Fluor 488 o 647 (Invitrogen). Las células se procesaron adicionalmente usando el kit Click-IT EdU555 Imaging (Invitrogen) para revelar la incorporación de EdU, de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se tiñeron con Hoechst 33432 (Invitrogen).
La adquisición de imágenes se realizó utilizando un microscopio automatizado de fluorescencia de selección de alto contenido ImageXpress Micro (Molecular Devices) con un aumento de 10x; se adquirió un total de 16 imágenes por longitud de onda, pocillo y replicado, lo que corresponde a aproximadamente 3.000 células analizadas por condición. El análisis de imágenes se realizó utilizando el módulo de aplicación “Multi-Wavelenght Cell Scoring” implementado en el software MetaXpress (Molecular Devices). Las células se clasificaron como en proliferación solo si eran positivas para ambos marcadores de proliferación (Ki-67 y EdU); los cardiomiocitos se distinguieron de otras células presentes en los cultivos primarios (por ejemplo, fibroblastos y células endoteliales) por su positividad para la alfaactinina sarcomérica.
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Ejemplo 2
Un subconjunto de microARN controlan la proliferación in vitro de cardiomiocitos de diferentes organismos (rata, ratón y ser humano)
Durante el desarrollo, los cardiomiocitos en el corazón del ratón dejan de dividirse antes que sus homólogos en el corazón de la rata (poco después del nacimiento y 3 a 4 días después del nacimiento, respectivamente). Como consecuencia de esto, los cardiomiocitos aislados de ratones recién nacidos tienen una capacidad proliferativa significativamente inferior a los aislados de ratas de la misma edad; mientras que la proliferación de los cardiomiocitos aislados de ratas neonatales (día 0 postnatal) es de aproximadamente 12,5 %, la de los cardiomiocitos de ratones es aproximadamente 5 %.
Por lo tanto, se repitieron los experimentos basados en fluorescencia de alto rendimiento descritos en el Ejemplo 1 en cardiomiocitos neonatales de ratón, utilizando los 208 microARN seleccionados que se demostró que aumentan la proliferación de cardiomiocitos de rata. Los resultados de estos experimentos mostraron que de los 208 microARN probados, 36 microARN también aumentaban la proliferación de cardiomiocitos de ratón, lo que sugiere que estos pueden actuar dirigiéndose a un conjunto conservado de dianas.
Para evaluar el potencial de la aplicación de microARN para aumentar la proliferación de cardiomiocitos en humanos, se transfectaron los 36 microARN seleccionados de los experimentos realizados en cardiomiocitos primarios de rata y ratón en cardiomiocitos humanos derivados de células madre embrionarias (ESC), comercializados (cardiomiocitos Cytiva, GE Healthcare). Estas células comprenden subtipos ventriculares, auriculares y nodales, en su mayoría miocitos ventriculares y se han caracterizado extensamente en términos de morfología, electrofisiología y expresión de marcadores cardíacos, constituyendo así una alternativa biológicamente relevante a las células primarias, las cuales son difíciles de obtener de donantes humanos para pruebas predictivas. Los resultados de estos experimentos demostraron que el tratamiento de cardiomiocitos humanos derivados de células troncales embrionarias con los microARN seleccionados condujo a un aumento muy significativo de la proliferación de cardiomiocitos (de aproximadamente 3 % hasta aproximadamente 30 %); ejemplos de microARN que incrementan la proliferación de cardiomiocitos humanos derivados de ESC se muestran en la Figura 3.
Colectivamente, los resultados descritos en el presente documento identifican un subconjunto de 6 microARN capaces de aumentar la proliferación de miocitos cardíacos de diferentes especies, incluyendo células humanas. Estos microARN son la base para el desarrollo de nuevos enfoques terapéuticos contra enfermedades cardíacas en seres humanos, específicamente dirigidos a inducir la regeneración del tejido cardíaco mediante la estimulación de la proliferación in vivo de cardiomiocitos.
PROCEDIMIENTOS
Los ratones CD1 se adquirieron en Charles River Laboratories Italia Srl. Se aislaron cardiomiocitos de ratón de ratones recién nacidos (día 0 postnatal), como se describe en el Ejemplo 1 para cardiomiocitos de rata.
Se obtuvieron cardiomiocitos derivados de células madre embrionarias humanas (hESCs) (cardiomiocitos Cytiva) de GE Healthcare. Estas células se han caracterizado extensamente y constituyen por lo tanto una alternativa relevante a las células primarias. Las células se descongelaron según las instrucciones del proveedor.
Los microARN individuales seleccionados se transfirieron de forma robótica a partir de placas madre de bibliotecas de microARN y se dispusieron nuevamente en placas de 96 pocillos de fondo transparente recubiertas de colágeno (Perkin-Elmer). La transfección de los microARN seleccionados en células de ratón y humanas se realizó como se describe en los Procedimientos del Ejemplo 1, excepto que el número de células sembradas por pocillo fue de 1,5x104 y 1x104 para ratón y células humanas, respectivamente, y la concentración final de microARN fue 50 nM y 25 nM para células de ratón y humanas, respectivamente.
Otros reactivos y procedimientos, incluyendo la adquisición y análisis automatizado de imágenes, son los mismos que se describen en los Procedimientos del Ejemplo 1.
Ejemplo 3
Los microARN aumentan la mitosis de los miocitos cardíacos, la división celular (citocinesis) y el número de células in vitro
Para demostrar que el aumento de la proliferación de cardiomiocitos, evaluada mediante tinción con marcador de la proliferación Ki-67 y la incorporación de EdU durante la síntesis de ADN, se correlaciona con un aumento de los eventos de división celular de los cardiomiocitos (citocinesis), se trataron cardiomiocitos con microARN individuales y se evaluaron marcadores adicionales, concretamente i) tinción de la histona H3 fosforilada en la serina 10 (P-S10-H3), que detecta células en G2 tardía/mitosis; ii) tinción para la AuroraB quinasa, un componente de los cuerpos medios, una estructura transitoria que aparece cerca del final de la citocinesis justo antes de, y que se mantiene durante un breve período después de, la separación completa de las células en división; y iii) número de cardiomiocitos a los 6 días después de la transfección de microARN.
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En los experimentos utilizando vectores AAV, se inyectaron ratones CD1 neonatales (día post-natal 1) por vía intraperitoneal, utilizando una jeringuilla de insulina con aguja de calibre 30 incorporada (Roche), con AAV-LacZ, AAV-hsa-miR-199a o AAV-hsa-miR-590 a una dosis de 1x1011 vg por animal.
Los corazones de las ratas y ratones inyectados se recogieron 4 y 12 días después de la inyección, respectivamente, y se lavaron brevemente en PBS para eliminar la sangre residual de los ventrículos. Los corazones se fijaron en formol al 10 % a temperatura ambiente y se procesaron rutinariamente para su inclusión en parafina. La tinción con hematoxilina/eosina y la tinción tricrómica de Masson se realizaron de acuerdo con procedimientos estándar y se analizaron en cuanto a la morfología regular y la magnitud de la fibrosis. Para la tinción por inmunofluorescencia, los cortes de muestra se desparafinaron y se rehidrataron y se procesaron como se describe en el Ejemplo 1. Se usaron los siguientes anticuerpos primarios: anticuerpo monoclonal de ratón contra la alfaactinina sarcomérica (Abcam) y anticuerpo de conejo contra la Histona H3 fosforilada en la serina 10 (Millipore), seguido de tinción de anticuerpos secundarios con anticuerpos secundarios anti-ratón y anti-conejo conjugados con Alexa Fluor 488 o 555 (Invitrogen). Se identificaron los núcleos mediante cortes contra tinción con TOTO-3 (Invitrogen). Los portas se montaron en Vectashield con DAPI (Vector Labs) y las imágenes se adquirieron utilizando un microscopio automatizado de fluorescencia de selección de alto contenido ImageXpress Micro (Molecular Devices) o un microscopio 510 META confocal de láser (Carl Zeiss MicroImaging).
La cuantificación de las células EdU o P-S10-H3 positivo en los diferentes cortes de corazón se realizó mediante análisis automático de imágenes, como se describe en los Ejemplos 1 y 3.
Ejemplo 6
Los microARN preservan la función cardíaca después del infarto de miocardio
Teniendo en cuenta el aumento observado en la proliferación de cardiomiocitos tras el tratamiento con microARN seleccionados in vitro e in vivo, se evaluó el efecto de los microARN sobre la función cardíaca después del infarto de miocardio en ratones.
Para este propósito, los ratones se sometieron a una ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior, seguida inmediatamente por inyección en el área peri-infartada del ventrículo izquierdo de los vectores de AAV que expresan los microARN seleccionados o el vector de control. Como se evaluó por ecocardiografía a los 12 días y 1 mes después del infarto de miocardio, la fracción de eyección ventricular izquierda (LVEF) y el acortamiento fraccional del ventrículo izquierdo (LVFS) se conservaron significativamente en ratones infartados inyectados con AAV-hsa-miR-199a o AAV-hsa-miR-590, en comparación con los animales tratados con AAV control (a 1 mes: LVEF 42 %, 53 %, 54 %, LVFS 20 %, 27 %, 26 % en animales control, hsa-miR-199a y hsa-miR-590 respectivamente; P < 0,05). El espesamiento sistólico final de la pared del VI de los corazones infartados inyectados con los vectores AAV que expresan los microARN seleccionados también había mejorado notablemente en comparación con el grupo control (de 0,77 mm en animales inyectados con AAV control a 0,98 y 0,97 mm en animales inyectados con AAV-hsa-miR-199a y AAV-hsa-miR-590, respectivamente).
Para determinar si la mejora de la función cardíaca inducida por los microARN seleccionados se correlaciona con una disminución en el tamaño del infarto, se sacrificó un subgrupo de los animales (n = 6) a los 12 días después del infarto de miocardio y se examinaron los corazones después de la fibrosis post-infarto. El análisis de los cortes transversales del corazón teñidos con tinción tricrómica mostró que los ratones tratados con AAV-hsa-miR-199a y AAV-hsa-miR-590 tuvieron una reducción significativa del tamaño del infarto en comparación con los ratones control infartados (del 28 % del área del ventrículo izquierdo en animales inyectados con AAV de control al 14 % y 13 % en animales inyectados con AAV-hsa-miR-199a y AAV-hsa-miR-590, respectivamente).
En conjunto, estos datos indican que la expresión de hsa-miR-199a y hsa-miR-590 en un modelo animal de infarto de miocardio puede reducir el tamaño del infarto y mejorar significativamente la función cardíaca.
La Figura 7 muestra los efectos de los microARN hsa-miR-590-3p y microARN hsa-miR-199a-3p tras la administración, utilizando un vector AAV, en el corazón de ratones infartados.
PROCEDIMIENTOS
El infarto de miocardio se produjo en ratones CD1 hembras (8-12 semanas de edad), por ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior (LAD). En resumen, los ratones se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de ketamina y xilazina, se intubaron endotraquealmente y se colocaron en un ventilador de roedores. La temperatura corporal se mantuvo a 37 °C con una almohadilla calentadora. Se accedió al corazón latente mediante una toracotomía izquierda. Después de retirar el pericardio, se visualizó una rama descendente de la arteria coronaria LAD con un estereomicroscopio (Leica) y se ocluyó con una sutura de nylon. La ligadura se confirmó mediante el blanqueamiento de una región ventricular izquierda inmediatamente después de la ligadura. Los vectores recombinantes de AAV a una dosis de 1 x 1011 vg por animal, producidos como se describe en el Ejemplo 5, se inyectaron inmediatamente después de la ligadura de LAD en el miocardio que bordeaba la zona del infarto (inyección única), utilizando una jeringa de insulina con una aguja de calibre 30 incorporada (Roche). Se estudiaron tres grupos de animales (n = 12/grupo), que recibieron AAV-LacZ, AAV-hsa-miR-199a, o AAV-hsa-miR
590. El tórax se cerró y los animales se movieron a una posición prona hasta la aparición de respiración espontánea.
Para evaluar la función y las dimensiones del ventrículo izquierdo, se realizó una ecocardiografía transtorácica bidimensional 12 días y 1 mes después del infarto de miocardio, en ratones sedados con isoflurano al 5 %, utilizando un equipo Visual Sonics Vevo 770 Ultrasound (Visual Sonics) equipado con una serie de transductores en línea a 30 MHz. Se utilizaron trazados de modo M para medir el espesor de la pared anterior y posterior del ventrículo izquierdo y el diámetro interno en la sístole final y en la diástole final, el acortamiento fraccional y la fracción de eyección.
Al final del estudio ecocardiográfico (12 días o 1 mes después del infarto), se recogieron corazones y se procesaron para histología e inmunofluorescencia, como se describe en el Ejemplo 5. El tamaño del infarto se midió como el área fibrótica como porcentaje del área ventricular total.
REFERENCIAS CITADAS
Ahuja, P., Sdek, P., and MacLellan, W.R. (2007). Cardiac myocyte cell cycle control in development, disease, and regeneration. Physiological reviews 87, 521-544.
Bartel, D.P. (2009). MicroARN: target recognition and regulatory functions. Cell 136, 215-233.
Bergmann, O., Bhardwaj, R.D., Bernard, S., Zdunek, S., Barnabe-Heider, F., Walsh, S., Zupicich, J., Alkass, K., Buchholz, B.A., Druid, H., et al. (2009). Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, NY 324, 98-102.
Bueno, M.J., Perez de Castro, I., and Malumbres, M. (2008). Control of cell proliferation pathways by microARN. Cell cycle (Georgetown, Tex 7, 3143-3148.
Callis, T.E., Pandya, K., Seok, H.Y., Tang, R.H., Tatsuguchi, M., Huang, Z.P., Chen, J.F., Deng, Z., Gunn, B., Shumate, J., et al. (2009). MicroARN-208a is a regulator of cardiac hypertrophy and conduction in mice. The Journal of clinicalinvestigation 119, 2772-2786.
Care, A., Catalucci, D., Felicetti, F., Bonci, D., Addario, A., Gallo, P., Bang, M.L., Segnalini, P., Gu, Y., Dalton, N.D., et al. (2007). MicroARN-133 controlscardiachypertrophy. Nature medicine 13, 613-618.
Chen, J.F., Murchison, E.P., Tang, R., Callis, T.E., Tatsuguchi, M., Deng, Z., Rojas, M., Hammond, S.M., Schneider, M.D., Selzman, C.H., et al.(2008). Targeted deletion of Dicer in the heart leads to dilated cardiomyopathy and heart failure. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 105, 2111-2116.
Collesi, C., Zentilin, L., Sinagra, G., and Giacca, M. (2008). Notch1 signaling stimulates proliferation of immature cardiomyocytes. The Journal of cell biology 183, 117-128.
Croce, C.M. (2009). Causes and consequences of microARN dysregulation in cancer. Nature reviews 10, 704
714.
Elmen, J., Lindow, M., Schutz, S., Lawrence, M., Petri, A., Obad, S., Lindholm, M., Hedtjarn, M., Hansen, H.F., Berger, U., et al. (2008). LNA-mediated microARN silencing in non-human primates. Nature 452, 896-899.
Eulalio, A., Huntzinger, E., and Izaurralde, E. (2008). Getting to the root of miRNA-mediated gene silencing. Cell 132, 9-14.
Filipowicz, W., Bhattacharyya, S.N., and Sonenberg, N. (2008). Mechanisms of post-transcriptional regulation by microARN: are the answers in sight? Nature reviews 9, 102-114.
Gao, G., Vandenberghe, L.H., Alvira, M.R., Lu, Y., Calcedo, R., Zhou, X., and Wilson, J.M. (2004). Clades of Adeno-associated viruses are widely disseminated in human tissues. Journal of virology 78, 6381-6388.
Ghildiyal, M., and Zamore, P.D. (2009). Small silencing RNAs: an expanding universe. Nature reviews 10, 94
108.
Hu, S., Huang, M., Li, Z., Jia, F., Ghosh, Z., Lijkwan, M., Fasanaro, P., Sun, S., Wang, X., Martelli, F., Robbins, R.C., Wu, J., MicroARN-210 as a Novel Therapy for Treatment of Ischemic Heart Disease, Circulation 2010 September 14; 122(11 Suppl.): S124-S131.
Huang, Z.P., Neppl, R.L., and Wang, D.Z. (2010). MicroARN in cardiac remodeling and disease. Journal of cardiovascular translational research 3, 212-218.
Ikeda, S., Kong, S.W., Lu, J., Bisping, E., Zhang, H., Allen, P.D., Golub, T.R., Pieske, B., and Pu, W.T. (2007). Altered microARN expression in human heart disease. Physiological genomics 31, 367-373.
Inagaki, K., Fuess, S., Storm, T.A., Gibson, G.A., McTiernan, C.F., Kay, M.A., and Nakai, H. (2006). Robust
10
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20
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30
35
40
45
50
systemic transduction with AAV9 vectors in mice: efficient global cardiac gene transfer superior to that of AAV8. Mol Ther 14, 45-53.
Kedde, M., and Agami, R. (2008). Interplay between microARN and RNA-binding proteins determines developmental processes. Cell cycle (Georgetown, Tex 7, 899-903.
Lanford, R.E., Hildebrandt-Eriksen, E.S., Petri, A., Persson, R., Lindow, M., Munk, M.E., Kauppinen, S., and Orum, H. (2010). Therapeutic silencing of microARN-122 in primates with chronic hepatitis C virus infection. Science (New York, NY 327, 198-201.
Latronico, M.V., and Condorelli, G. (2009). MicroARN and cardiac pathology. Nat Rev Cardiol 6, 419-429.
Lin, Z., Murtaza, I., Wang, K., Jiao, J., Gao, J., and Li, P.F. (2009). miR-23a functions downstream of NFATc3 to regulate cardiac hypertrophy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106, 12103-12108.
Liu, N., Williams, A.H., Kim, Y., McAnally, J., Bezprozvannaya, S., Sutherland, L.B., Richardson, J.A., Bassel-Duby, R., and Olson, E.N. (2007). An intragenic MEF2-dependent enhancer directs muscle-specific expression of microARN 1 and 133. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 104, 20844-20849.
Matkovich, S.J., Van Booven, D.J., Youker, K.A., Torre-Amione, G., Diwan, A., Eschenbacher, W.H., Dorn, L.E., Watson, M.A., Margulies, K.B., and Dorn, G.W., 2nd (2009). Reciprocal regulation of myocardial microARN and messenger RNA in human cardiomyopathy and reversal of the microARN signature by biomechanical support. Circulation 119, 1263-1271.
Mingozzi F, High KA. Therapeutic in vivo gene transfer for genetic disease using AAV: progress and challenges. Nat Rev Genet 2011; 12: 341-355.
Najafi-Shoushtari, S.H., Kristo, F., Li, Y., Shioda, T., Cohen, D.E., Gerszten, R.E., and Naar, A.M. (2010). MicroARN-33 and the SREBP host genes cooperate to control cholesterol homeostasis. Science (New York, NY 328, 1566-1569.
O'Connell, R.M., Rao, D.S., Chaudhuri, A.A., and Baltimore, D. (2010). Physiological and pathological roles for microARN in the immune system. Nat Rev Immunol 10, 111-122.
Porrello, E.R., Johnson, B.A., Aurora, A.B., Simpson, E., Nam, Y.J., Matkovich, S.J., Dorn, G.W., 2nd, van Rooij, E., and Olson, E.N. (2011). MiR-15 family regulates postnatal mitotic arrest of cardiomyocytes. Circulation research 109, 670-679.
Rao, P.K., Toyama, Y., Chiang, H.R., Gupta, S., Bauer, M., Medvid, R., Reinhardt, F., Liao, R., Krieger, M., Jaenisch, R., et al. (2009). Loss of cardiac microARN-mediated regulation leads to dilated cardiomyopathy and heart failure. Circulation research 105, 585-594.
Senyo, S.E., Steinhauser, M.L., Pizzimenti, C.L., Yang, V.K., Cai, L., Wang, M., Wu, T.D., Guerquin-Kern, J.L., Lechene, C.P., Lee, R.T. 2012. Mammalian heart renewal by pre-existing cardiomyocytes. Nature, in press
Small, E.M., Frost, R.J., and Olson, E.N. (2010). MicroARN add a new dimension to cardiovascular disease. Circulation 121, 1022-1032.
Small, E.M., and Olson, E.N. Pervasive roles of microARN in cardiovascular biology. Nature 469, 336-342.
Thum, T., Galuppo, P., Wolf, C., Fiedler, J., Kneitz, S., van Laake, L.W., Doevendans, P.A., Mummery, C.L., Borlak, J., Haverich, A., et al. (2007). MicroARN in the human heart: a clue to fetal gene reprogramming in heart failure. Circulation 116, 258-267.
Thum, T., Gross, C., Fiedler, J., Fischer, T., Kissler, S., Bussen, M., Galuppo, P., Just, S., Rottbauer, W., Frantz, S., et al. (2008). MicroARN-21 contributes to myocardial disease by stimulating MAP kinase signalling in fibroblasts. Nature 456, 980-984.
Umbach, J.L., and Cullen, B.R. (2009). The role of RNAi and microARN in animal virus replication and antiviral immunity. Genes & development 23, 1151-1164.
van Amerongen, M.J., and Engel, F.B. (2008). Features of cardiomyocyte proliferation and its potential for cardiac regeneration. Journal of cellular and molecular medicine 12, 2233-2244.
van Rooij, E., and Olson, E.N. (2007). MicroARN: powerful new regulators of heart disease and provocative therapeutic targets. The Journal of clinical investigation 117, 2369-2376.
van Rooij, E., Sutherland, L.B., Liu, N., Williams, A.H., McAnally, J., Gerard, R.D., Richardson, J.A., and Olson,

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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ITRM20110685A1 (it) 2011-12-23 2013-06-24 Internat Ct For Genetic En Gineering And Microrna per la rigenerazione cardiaca attraverso l induzione della proliferazione dei miociti cardiaci
HRP20231077T1 (hr) * 2014-03-21 2023-12-22 Genzyme Corporation Genska terapija za pigmentni retinitis
ES2769030T3 (es) * 2014-05-16 2020-06-24 Univ Pennsylvania Inducción por microARN de la regeneración cardíaca
DE102015216782B3 (de) * 2015-09-02 2017-01-26 Ikdt Institut Kardiale Diagnostik Und Therapie Gmbh Verwendung von im Blutserum oder Blutplasma zirkulierenden microRNAs zur Identifikation biopsiepflichtiger Patienten und als Marker zur Differentialdiagnose einzelner nicht-ischämischer Kardiomyopathien oder Speichererkrankungen des Herzens
TWI685500B (zh) * 2015-10-13 2020-02-21 長庚大學 以微核酸-５２０ｂ（ｍｉＲ-５２０ｂ）序列作爲抑制頭頸癌腫瘤生長、侵犯與轉移及其醫藥組成物之用途
US20170364785A1 (en) * 2016-06-17 2017-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Ionic liquid carbon nanotube composites for wireless chemical sensing
EP3375458A1 (en) 2017-03-14 2018-09-19 I.C.G.E.B. International Centre for Genetic Engineering and Biotechnology Microrna hsa-mir-665 in cardiac hypertrophy
GB201906052D0 (en) 2019-04-30 2019-06-12 Int Centre For Genetic Engineering And Biotechnology Proteins with cardioprotective activity
EP3936616A1 (en) 2020-07-10 2022-01-12 Charité - Universitätsmedizin Berlin Microrna-targeted therapy for cardiac repair
CN112680509A (zh) * 2021-01-20 2021-04-20 河南省中医院（河南中医药大学第二附属医院） 一种评估冠心病预后分子标志物miR-302e及其逆转录引物、扩增引物和应用
CN114958849B (zh) * 2022-05-26 2023-10-27 华南农业大学 lncRNACACF吸附miR-520b-3p在调控人脐静脉内皮细胞周期中的应用

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7380126B2 (en) 2001-06-01 2008-05-27 Logan James D Methods and apparatus for controlling the transmission and receipt of email messages
EP2386637B1 (en) * 2001-09-28 2018-05-16 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Microrna molecules
WO2005078096A2 (en) 2004-02-09 2005-08-25 University Of Massachusetts Dual functional oligonucleotides for use in repressing mutant gene expression
AU2005243410B2 (en) 2004-05-14 2010-04-22 Rosetta Genomics Ltd. Micronas and uses thereof
EP2471924A1 (en) 2004-05-28 2012-07-04 Asuragen, INC. Methods and compositions involving microRNA
WO2007148235A2 (en) * 2006-05-04 2007-12-27 Rosetta Genomics Ltd Cancer-related nucleic acids
EP2302055B1 (en) 2004-11-12 2014-08-27 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving miRNA and miRNA inhibitor molecules
US9550990B2 (en) 2004-12-10 2017-01-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Regulation of epigenetic control of gene expression
US20060185027A1 (en) 2004-12-23 2006-08-17 David Bartel Systems and methods for identifying miRNA targets and for altering miRNA and target expression
US8592384B2 (en) 2005-04-04 2013-11-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Micro-RNA's that regulate muscle cells
WO2006128245A1 (en) 2005-06-03 2006-12-07 Southern Adelaide Health Service-Flinders Medical Centre Targeting cells with altered microrna expression
CN103866018B (zh) 2005-08-01 2016-05-25 俄亥俄州立大学研究基金会 用于乳腺癌的诊断、预后和治疗的基于MicroRNA的方法和组合物
CA2633674A1 (en) * 2006-01-05 2007-07-19 The Ohio State University Research Foundation Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer
EP2056880A4 (en) * 2006-08-16 2010-10-13 Protiva Biotherapeutics Inc NUCLEIC ACID MODULATION OF IMMUNE STIMULATION FACILITATED BY A RECIPTOR SIMILAR TO THE TOLL RECEIVER
US20090306181A1 (en) 2006-09-29 2009-12-10 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for evaluating and treating heart failure
EP2476762B1 (de) 2006-10-09 2014-01-08 Julius-Maximilians-Universität Würzburg MicroRNA (miRNA) zur Diagnose und Therapie von Herzerkrankungen
US20100305195A1 (en) 2006-11-10 2010-12-02 The Uab Research Foundation microrna mediator of cardiomyopathy and heart failure
US20100216868A1 (en) 2007-03-07 2010-08-26 Yissum Research Development Company Of The Hebrew Agents, compositions and methods for treating pathologies in which regulating an ache-associated biological pathway is beneficial
WO2009012263A2 (en) * 2007-07-18 2009-01-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tissue-specific micrornas and compositions and uses thereof
AU2008275877B2 (en) 2007-07-18 2015-01-22 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Differential expression of microRNAs in nonfailing versus failing human hearts
WO2009099465A2 (en) * 2007-08-14 2009-08-13 Yale University Methods of using mir-199a as a marker and sequences of mir-199a as a therapeutic for cancer
CN101861399B (zh) 2007-08-22 2015-11-25 特罗瓦基因公司 使用miRNA检测体内细胞死亡情况的方法
WO2009058818A2 (en) 2007-10-29 2009-05-07 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions comprising a micro-rna and methods of their use in regulating cardiac remodeling
JP5626619B2 (ja) 2008-12-08 2014-11-19 国立大学法人京都大学 効率的な核初期化方法
US9006191B2 (en) 2007-12-27 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
JP2011510623A (ja) 2008-01-27 2011-04-07 ロゼッタ ゲノミックス エルティーディー． 妊娠の合併症を診断するための方法及び組成物
EP4219762A1 (en) 2008-02-01 2023-08-02 The General Hospital Corporation Use of microvesicles in diagnosis and prognosis of medical diseases and conditions
AU2009212216B2 (en) 2008-02-08 2015-04-09 Brigham And Women's Hospital, Inc. Disease markers and uses thereof
CN102083980A (zh) 2008-02-21 2011-06-01 得克萨斯系统大学董事会 调节平滑肌增殖和分化的微小rna及其用途
KR101640381B1 (ko) 2008-02-22 2016-07-18 에이전시 포 사이언스, 테크놀로지 앤드 리서치 중간엽 줄기세포 입자
WO2009114681A2 (en) 2008-03-13 2009-09-17 Dharmacon, Inc. Identification of mirna profiles that are diagnostic of hypertrophic cardiomyopathy
US8258111B2 (en) * 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
US20110160290A1 (en) 2008-05-21 2011-06-30 Muneesh Tewari Use of extracellular rna to measure disease
WO2009151600A2 (en) 2008-06-10 2009-12-17 Tufts University Smad proteins control drosha-mediated mirna maturation
CA2728069C (en) 2008-06-16 2018-01-02 Biomedbooster B.V. Means and methods for counteracting, delaying and/or preventing heart disease
US20100003674A1 (en) 2008-07-03 2010-01-07 Cope Frederick O Adult stem cells, molecular signatures, and applications in the evaluation, diagnosis, and therapy of mammalian conditions
WO2010033871A2 (en) 2008-09-18 2010-03-25 The Johns Hopkins University Compositions and methods targeting glutaminase
RU2015130665A (ru) * 2008-11-19 2018-12-24 Антродженезис Корпорейшн Амниотические адгезивные клетки
EP2208785A1 (en) * 2009-01-15 2010-07-21 Newbiotechnic, S.A. Methods and kits to generate miRNA- and smallRNA-expressing vectors, and its application to develop lentiviral expression libraries
US20120021982A1 (en) 2009-01-23 2012-01-26 Jean-Claude Tardif Pharmaceutical compositions for the treatment of left ventricular diastolic dysfunction
WO2010088668A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Cepheid Methods of detecting sepsis
US20110086348A1 (en) 2009-02-19 2011-04-14 The Cleveland Clinic Foundation Method for assessing heart disease
JP5735927B2 (ja) 2009-02-24 2015-06-17 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート タンパク質生産の増強のためのｍＲＮＡの一次構造の再操作
EP2228444A1 (en) 2009-03-09 2010-09-15 Julius-Maximilians-Universität Würzburg microRNA for diagnostic and therapeutic purposes in cardiovascular diseases
WO2010108126A2 (en) 2009-03-19 2010-09-23 Fate Therapeutics, Inc. Reprogramming compositions and methods of using the same
WO2010117860A2 (en) 2009-04-06 2010-10-14 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Microrna signature to predict prognosis in heart failure
US20120093936A1 (en) * 2009-04-07 2012-04-19 Velin-Pharma A/S Method and device for treatment of conditions associated with inflammation or undesirable activation of the immune system
WO2010120969A1 (en) * 2009-04-15 2010-10-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Targeting of the mir-30 family and let-7 family as a treatment for heart disease
CN104087662A (zh) 2009-04-29 2014-10-08 阿姆斯特丹大学学术医学中心 对抗、预防和/或测定心力衰竭或心力衰竭的风险的工具和方法
WO2010126355A1 (en) * 2009-04-29 2010-11-04 Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam Means and methods for counteracting, preventing and/or determining heart failure, or a risk of heart failure
US9012225B2 (en) 2009-05-05 2015-04-21 Miragen Therapeutics Lipophilic polynucleotide conjugates
WO2010129950A1 (en) 2009-05-08 2010-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Micro-rna that regulates cardiac remodeling
WO2010135570A1 (en) 2009-05-20 2010-11-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Identification of micro-rnas involved in post-myocardial infarction remodeling and heart failure
US8734809B2 (en) 2009-05-28 2014-05-27 University Of Massachusetts AAV's and uses thereof
US8486909B2 (en) * 2009-06-24 2013-07-16 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory disorders and fibrotic disease
EP2604691B1 (en) 2009-08-06 2014-12-03 Universiteit Maastricht Means and methods for counteracting, delaying and/or preventing adverse energy metabolism switches in heart disease
CN101643791A (zh) 2009-09-04 2010-02-10 哈尔滨医科大学 microRNA-328及其反义核苷酸在诊断、防治心脏疾病中的用途
WO2011029903A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Flemming Velin Method for the preparation of micro-rna and its therapeutic application
EP2305810A1 (en) 2009-10-02 2011-04-06 Technische Universität München miRNAs in the treatment of fibrosis
AR078584A1 (es) 2009-10-09 2011-11-16 Baylor Res Inst Identificacion de microarn (miarn) en muestras fecales como biomarcador de canceres gastroenterologicos
JP5892939B2 (ja) 2009-11-02 2016-03-23 エージェンシー フォー サイエンス，テクノロジー アンド リサーチ 細胞状態をモニタリングするための方法及び間葉系幹細胞を不死化するための方法
CN102762743A (zh) 2009-12-09 2012-10-31 阿维埃尔公司 用于心血管疾病的诊断和分类的生物标记物检验
EP2341145A1 (en) * 2009-12-30 2011-07-06 febit holding GmbH miRNA fingerprint in the diagnosis of diseases
DE102010004722B4 (de) * 2010-01-15 2013-05-08 Maschinenfabrik Köppern Gmbh & Co. Kg Verschleißbeständiger, warmfester Werkstoff, sowie dessen Verwendung
EP3210611B1 (en) 2010-03-12 2019-08-21 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods of treating vascular inflammatory disorders
EP2842577A1 (en) 2010-03-12 2015-03-04 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for proliferating cardiomyocytes using micro-RNA
AU2011237669B2 (en) 2010-04-06 2016-09-08 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Circulating biomarkers for disease
WO2011133288A1 (en) 2010-04-19 2011-10-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Microrna induction of pluripotential stem cells and uses thereof
SG184821A1 (en) 2010-04-21 2012-11-29 Amc Amsterdam Means and methods for determining risk of cardiovascular disease
US20130150256A1 (en) * 2010-06-11 2013-06-13 Jane Synnergren Novel micrornas for the detection and isolation of human embryonic stem cell-derived cardiac cell types
WO2011157294A1 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Universita' Degli Studi Di Padova Compositions for use in treating or preventing cancer, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer, metastasis, heart failure, cardiac remodelling, dilated cardiomyopathy, autoimmune diseases, or diseases or disorders related thereto
GB201012272D0 (en) 2010-07-21 2010-09-08 Univ Coventry Assays for screening drug safety
AU2011288262A1 (en) 2010-08-13 2013-04-04 The University Court Of The University Of Glasgow Therapeutic uses of microvesicles and related microRNAs
WO2012027704A1 (en) 2010-08-27 2012-03-01 New York University Mir-33 inhibitors and uses thereof
EP2625293A4 (en) 2010-10-08 2014-03-19 Baylor Res Inst MICROARN (MIARN) AS BIOMARKERS FOR THE IDENTIFICATION OF FAMILY AND NON-FAMILY COLORECTAL CANCER
US20120093885A1 (en) 2010-10-18 2012-04-19 Northwestern University Therapeutic vesicles
WO2012052953A1 (en) 2010-10-20 2012-04-26 Fondazione Centro San Raffaele Del Monte Tabor MiRNA
EP2446929A1 (en) * 2010-10-27 2012-05-02 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Microvesicles derived from atheroprotective endothelial cells for the treatment and prevention of atherosclerotic diseases
EP2635681B8 (en) 2010-11-05 2017-10-04 Miragen Therapeutics, Inc. Base modified oligonucleotides
WO2012072685A1 (en) 2010-12-02 2012-06-07 Katholieke Universiteit Leuven, K.U.Leuven R&D Irak-related interventions and diagnosis
CA2818174A1 (en) 2010-12-15 2012-06-21 Miragen Therapeutics Blood-borne mirnas as surrogate markers of drug efficacy for cardiac conditions
WO2012094366A1 (en) 2011-01-06 2012-07-12 Cardiodx, Inc. Circulating mirnas as biomarkers for coronary artery disease
WO2012115885A1 (en) 2011-02-22 2012-08-30 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers
CN103476947A (zh) 2011-03-02 2013-12-25 格路福生物制药公司 寡聚体的增强的生物分布
WO2012122447A1 (en) 2011-03-09 2012-09-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods of using microrna-26a to promote angiogenesis
WO2012149557A1 (en) 2011-04-28 2012-11-01 New York University miR-33 INHIBITORS AND USES THEREOF TO DECREASE INFLAMMATION
EP2714934B1 (en) 2011-05-24 2018-09-19 Rosetta Genomics Ltd Methods and compositions for determining heart failure or a risk of heart failure
ITRM20110685A1 (it) 2011-12-23 2013-06-24 Internat Ct For Genetic En Gineering And Microrna per la rigenerazione cardiaca attraverso l induzione della proliferazione dei miociti cardiaci

Also Published As

Publication number Publication date
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Alam et al. Inhibition of senescence‐associated genes Rb1 and Meis2 in adult cardiomyocytes results in cell cycle reentry and cardiac repair post–myocardial infarction
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WO2012020308A2 (en) Cellular and molecular therapies
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Cassano et al. CT-0507 Accepted 10/21/2011 for publication in “Cell Transplantation”