ES2641922T3 - Hidrolizado de colágeno usado para mejorar la salud de la piel, pelo y/o uñas humanos - Google Patents

Abstract

Utilización no terapéutica de hidrolizado de colágeno para estimular la biosíntesis de proteínas de matriz extracelular por células de la piel, con el fin de aumentar la tonicidad de la piel, de reducir la formación de arrugas y/o de aumentar el contenido en humedad de la piel, caracterizada por que el hidrolizado de colágeno está preparado mediante la acción sucesiva de dos endoproteasas con una especificidad diferente, a una temperatura de 50 a 60 °C, durante 120 a 180 min, utilizándose como primera enzima una endoproteasa de Bacillus subtilis o de Bacillus amyloliquefaciens y como segunda enzima una endoproteasa de Bacillus licheniformis, por que al menos un 45% en peso del hidrolizado de colágeno presenta un peso molecular de menos de 1.500 Da, y por que el hidrolizado de colágeno comprende al menos cuatro péptidos característicos con un peso molecular entre 600 y 1.200 Da que, en una distribución de pesos moleculares determinada mediante espectroscopia de masas MALDI, presentan una intensidad al menos doble en comparación con su entorno, habiéndose determinado el espectro de masas utilizando un espectrómetro de masas TOF/TOF con una muestra del hidrolizado de colágeno que, ajustada en ácido trifluoroacético al 0,1% a una concentración final de 10 μg/μl, se ha depurado utilizando material μC18 y se ha preparado con una matriz HCCA en una diana MALDI.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

5

10

15

20

25

30

35

40

hidrolizados de colágeno comercialmente disponibles con un peso molecular medio de aproximadamente 2.100 Da (en lo que sigue hidrolizado B) y aproximadamente 2.900 Da (en lo que sigue hidrolizado C).

Las distribuciones de pesos moleculares exactas de estos tres hidrolizados se analizaron mediante espectroscopia de masas MALDI (EM MALDI). Para ello, las muestras se ajustaron en ácido trifluoroacético al 0,1% a una concentración final de 10 µg/µl y a continuación se depuraron utilizando material µC18. Las muestras se prepararon con una matriz HCCA en una diana MALDI y los espectros de masa se determinaron utilizando un espectrómetro de masas Ultraflex-III-TOF/TOF (fabricante: Bruker Daltonics).

Las Figuras 4A a 4C muestran los espectros de masas o las distribuciones de pesos moleculares correspondientes de los hidrolizados de colágeno A, B o C, habiéndose llevado sobre la ordenada el peso molecular o el número másico y sobre la abscisa la intensidad. Una comparación de los tres espectros muestra que el hidrolizado A según la invención comprende los siguientes péptidos característicos según la Tabla 2, presentando los picos correspondientes una intensidad desde doble hasta cuádruple en comparación con su entorno:

Tabla 2

aprox. 656 Da

aprox. 825 Da

aprox. 1.014 Da

aprox. 1.211 Da

aprox. 1.927 Da

aprox. 2.410 Da

aprox. 3.433 Da

En particular los cuatro péptidos entre 600 y 1.500 Da no tienen equivalentes en los dos hidrolizados comerciales B y C y, por lo tanto, son especialmente característicos del hidrolizado A.

7. Estimulación de la síntesis de proteínas de matriz extracelular

La estimulación de la síntesis de colágeno (tipo I) y de los proteoglucanos decorina y versicano se investigó in vitro en fibroblastos dérmicos humanos (células de la piel). Para ello, las células se incubaron durante 24 horas con, en cada caso, 0,5 mg/ml de los hidrolizados A, B o C y, a continuación, la expresión de ARN de colágeno, ARN de decorina y ARN de versicano se determinó mediante PCR en tiempo real y se evaluó de manera semicuantitativa. La decorina desempeña un importante papel en la formación de las fibras de colágeno en la piel.

Los resultados están representados en forma de diagramas de barras para el hidrolizado B en la Figura 5A y para el hidrolizado C en la Figura 5B, habiéndose llevado sobre la abscisa en cada caso la expresión de ARN en los hidrolizados B o C comerciales en relación con la expresión de ARN en el hidrolizado A según la invención (=1). La columna izquierda representa en cada caso colágeno de tipo I, la columna central representa decorina y la columna derecha representa versicano. En cada caso está representado el promedio de al menos 7 mediciones y el error estándar.

De un modo interesante, los datos muestran que en las tres proteínas de matriz se realiza, en comparación con el hidrolizado A, una estimulación de la síntesis de ARN claramente menor mediante los dos hidrolizados B y C, cuyo peso molecular medio es sólo ligeramente mayor. Así pues, parece que los péptidos característicos del hidrolizado A desempeñan un papel decisivo para su efecto ventajoso.

Recetas ejemplares de productos (complementarios) alimenticios y cosméticos

A continuación se indican a modo de ejemplo algunas recetas para la utilización del hidrolizado de colágeno según la invención, que por supuesto pueden modificarse de muchas maneras:

Cápsulas (complemento alimenticio)

glicerina

53,67% en peso

hidrolizado de colágeno

21,95% en peso

gelatina

10,08% en peso

harina de semillas de guar

6,00% en peso

7

imagen6

Claims (1)

1. imagen1

   imagen2