ES2641471T3

ES2641471T3 - Compuestos de quinolina como inhibidores de la angiogénesis, metionina aminopeptidasa humana, y SirT1, y procedimientos de tratamiento de trastornos

Info

Publication number: ES2641471T3
Application number: ES09819542.3T
Authority: ES
Inventors: Jun O. Liu; Joong Sup Shim; Curtis R. Chong; Shridhar Bhat
Original assignee: Johns Hopkins University
Current assignee: Johns Hopkins University
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2009-10-06
Publication date: 2017-11-10
Anticipated expiration: 2029-10-06
Also published as: US8729097B2; CN102239149B; WO2010042163A2; US20110301163A1; EP2350012A4; EP2350012B1; WO2010042163A3; CN102239149A; HK1163685A1; EP2350012A2

Description

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DESCRIPCION

Compuestos de quinolina como inhibidores de la angiogenesis, metionina aminopeptidasa humana, y SirTI, y procedimientos de tratamiento de trastornos

Solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica las ventajas de la Solicitud Provisional de Estados Unidos n.° de Serie 61/102.919, presentada el 6 de octubre de 2008.

Antecedentes de la invencion

La smtesis de protemas se inicia con un residuo de metionina en celulas eucariotas, o una metionina formilada en procariotas, mitocondrias y cloroplastos. Para un gran subconjunto de protemas, el iniciador metionina se elimina cotraduccionalmente antes de la modificacion adicional posterior a la traduccion. La eliminacion proteolftica de la metionina N-terminal es catalizada por una familia de enzimas conocidas como metionina aminopeptidasas (MetAP). Las funciones de estas enzimas estan evolutivamente conservadas y son esenciales, como lo demuestra el fenotipo letal del mutante nulo map en las bacterias. Aunque solo un gen MetAP esta presente en el genoma de la mayona, pero no de todos, los procariontes, al menos dos tipos de MetAP, tipo I y tipo II, se conocen en las celulas eucariotas. En la levadura en germinacion Saccharomyces cerevisiae, la delecion de ScMetAPI o ScMetAP2 dio como resultado un fenotipo de crecimiento lento en comparacion con la cepa de tipo silvestre, mientras que el doble mutante es no viable, indicando las funciones redundantes pero esenciales de ambos tipos de MetAP (Chang, Y. H., y col. (1992) J. Biol. Chem. 267, 8007-8011; Li, X. & Chang, Y. H. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 92, 1235712361). En los organismos multicelulares, se ha demostrado que MetAP2 es esencial para la proliferacion y desarrollo de tejidos espedficos (Boxem, M., y col. (2004) FEBS Lett. 576, 245-250; Cutforth, T. & Gaul, U. (1999) Mech. Dev. 82, 23-28).

El MetAP2 humano ha sido identificado como el objetivo primario de la familia de productos naturales de fumagilina que inhiben potentemente la angiogenesis (Griffith, E. C., y col. (1997) Chem. Biol. 4, 461-471; Sin, N., y col. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 94, 6099-6103). Un analogo sintetico de fumagilina, TNP-470 con mayor potencia y menor toxicidad, ha entrado en ensayos clmicos para una diversidad de canceres (Ingber, D., y col. (1990) Nature 348, 555-557; Satchi-Fainaro, R., y col. (2005) Cancer Cell 7, 251-261). Actualmente existen muchas pruebas que apoyan la nocion de que HsMetAP2 desempena un papel importante en la proliferacion de celulas endoteliales y es probable que medie la inhibicion de las celulas endoteliales por fumagilina y analogos relacionados (Griffith, E. C., y col. (1997) Chem. Biol. 4, 461-471; Sin, N., y col. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 94, 6099-6103; Yeh, J. R., y col. (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 103, 10379-10384).

La angiogenesis puede definirse como el desarrollo de un suministro de sangre a una zona dada de tejido. El desarrollo de un suministro de sangre puede ser parte del desarrollo embrionario normal, representar la revascularizacion de un lecho de herida, o implicar la estimulacion del crecimiento del vaso por celulas inflamatorias o neoplasicas. A veces la angiogenesis se define como la proliferacion de nuevos capilares de los vasos sangumeos preexistentes. El nuevo crecimiento de tejido blando requiere una nueva vascularizacion, y el concepto de angiogenesis es un componente clave del crecimiento tisular y, en particular, un punto clave de intervencion en el crecimiento de tejido patologico.

La angiogenesis es un proceso fundamental necesario para el desarrollo embrionario, el crecimiento posterior y la reparacion tisular. La angiogenesis es un requisito previo para el desarrollo y diferenciacion del arbol vascular, asf como para una amplia diversidad de procesos fisiologicos fundamentales incluyendo la embriogenesis, el crecimiento somatico, la reparacion y regeneracion de tejidos y organos, el crecimiento dclico del cuerpo luteo y el endometrio y el desarrollo y la diferenciacion del sistema nervioso. En el sistema reproductor femenino, la angiogenesis se produce en el folmulo durante su desarrollo, en el cuerpo luteo despues de la ovulacion y en la placenta para establecer y mantener el embarazo. La angiogenesis se produce adicionalmente como parte de los procesos de reparacion del cuerpo, por ejemplo, en la cicatrizacion de heridas y fracturas.

Se piensa que tanto la angiogenesis controlada como la no controlada avanzan de una manera similar. Las celulas endoteliales y los pericitos, rodeados por una membrana basal, forman vasos capilares. La angiogenesis comienza con la erosion de la membrana basal por las enzimas liberadas por las celulas endoteliales y los leucocitos. Las celulas endoteliales, que recubren el lumen de los vasos sangumeos, luego sobresalen a traves de la membrana basal. Los estimulantes angiogenicos inducen a las celulas endoteliales a migrar a traves de la membrana basal erosionada. Las celulas migratorias forman un "brote" del vaso sangumeo parental, donde las celulas endoteliales sufren mitosis y proliferan. Los brotes endoteliales se fusionan entre sf para formar bucles capilares, creando nuevos vasos sangumeos. La creacion del nuevo sistema microvascular puede iniciar o exacerbar enfermedades.

La ciencia medica ha reconocido que la angiogenesis es un factor importante en la iniciacion y/o proliferacion de un gran numero de diversas enfermedades. Bajo condiciones fisiologicas normales, los seres humanos y otros animales solo sufren angiogenesis en situaciones muy espedficas y restringidas. Por ejemplo, la angiogenesis se observa normalmente en la cicatrizacion de heridas, el desarrollo fetal y embrionario, y en la formacion del cuerpo luteo, el endometrio y la placenta. Se ha encontrado que el proceso de angiogenesis esta alterado en una serie de patologfas

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y, en muchos casos, el dano patologico asociado con la enfermedad esta relacionado con la angiogenesis no controlada. Desde que se presento por primera vez hace mas de treinta anos, la hipotesis de que la angiogenesis es necesaria para el crecimiento tumoral y la metastasis ha obtenido un amplio soporte experimental (Folkman, J. (1971) N. Engl. J. Med. 285, 1182-1186, Hanahan, D. & Folkman, J. (1996) Cell 86, 353-364). Por ejemplo, la angiogenesis es un factor en el crecimiento tumoral, ya que un tumor debe estimular continuamente el crecimiento de nuevos vasos sangumeos capilares para crecer. La angiogenesis es una parte esencial del crecimiento del cancer solido humano, y la angiogenesis anormal esta asociada con otras enfermedades tales como artritis reumatoide, la psoriasis, y la retinopatfa diabetica (Folkman, J. y Klagsbrun, M., Science 235:442-447,(1987)). Ademas del crecimiento tumoral y la metastasis, la angiogenesis tambien ha estado implicada en artritis reumatoide, retinopatfa diabetica y degeneracion macular, lo que sugiere que la inhibicion de la angiogenesis puede ser util para el tratamiento de estos trastornos (Carmeliet, P. (2003) Nat. Med. 9, 653-660).

La angiogenesis, la formacion de nuevos vasos sangumeos, ha estado implicada en la patogenesis de varias enfermedades humanas importantes, incluyendo cancer, retinopatfa diabetica y degeneracion macular relacionada con la edad. La inhibicion de la angiogenesis esta emergiendo como una nueva estrategia eficaz para el tratamiento de enfermedades dependientes de la angiogenesis. Una de las clases mas potentes de inhibidores de moleculas pequenas es de la familia de las fumagilinas. Se ha demostrado que la fumagilina, su analogo sintetico TNP-470, y la ovalicina se unen espedficamente a metionina aminopeptidasa de tipo 2 (MetAP2). En un mecanismo que queda por dilucidarse completamente, la inhibicion de MetAP2 por estos pequenos inhibidores de moleculas condujo a la activacion transcripcional de p53, que a su vez activa la expresion de p21 que inhibe la ciclina E ■ Cdk2, lo que explica el bloqueo del ciclo celular por estos inhibidores. Desde la identificacion de MetAP2 como la diana para la fumagilina y la ovalicina, se han hecho varios intentos para encontrar inhibidores nuevos y reversibles de esta enzima a traves de la modificacion estructural de la fumagilina o el cribado de alto rendimiento.

Claramente, el desarrollo y el progreso de muchas enfermedades pueden controlarse controlando el proceso de angiogenesis, y en particular, a traves de la inhibicion de MetAP. Existe una necesidad de procedimientos y materiales capaces de controlar e inhibir la angiogenesis de una manera fiable. Por lo tanto, un objeto de la invencion es proporcionar compuestos y composiciones farmaceuticas que muestren actividad como inhibidores de la angiogenesis.

Sumario de la Invencion

En un aspecto, la invencion proporciona nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga.

En una cierta realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma. para su uso como se ha mencionado anteriormente, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de metionina aminopeptidasa de tipo 2.

En otra realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso como se ha mencionado anteriormente, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de SirT1.

En otra realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa, SirT1, angiogenesis o neoplasia en un sujeto, que comprende ademas un agente terapeutico adicional.

En otra realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa, SirT1, angiogenesis o neoplasia en un sujeto como se ha mencionado anteriormente, en la que el agente terapeutico es un compuesto inhibidor de metionina aminopeptidasa. En una realizacion adicional, dicho agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de SirT1. En otra realizacion, dicho agente terapeutico adicional es un compuesto anticanceroso.

En otra realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha

enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de

cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga como se ha mencionado anteriormente, para administracion oral, topica, parental, intravenosa o intramuscular.

cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga como se ha mencionado anteriormente, en la que el sujeto es un ser humano.

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En otra realizacion, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga como se ha mencionado anteriormente, en la que dicha neoplasia es cancer de mama. En una realizacion adicional dicha neoplasia es cancer de prostata. En otra realizacion mas, dicha neoplasia es cancer de vejiga. En otra realizacion mas dicha neoplasia es cancer de rinon.

En una realizacion adicional, la invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga como se ha mencionado anteriormente, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de la angiogenesis.

Breve descripcion de los dibujos

Figura 1. Efectos de nitroxolina en las actividades de la enzima MetAP y la proliferacion celular.

Figura 2. Efectos de la nitroxolina sobre la funcion in vivo de MetAP-2. A, inhibicion selectiva de la funcion de MetAP-2 por nitroxolina en levaduras. Las levaduras de tipo silvestre (WT) y mutantes se trataron con nitroxolina o IV-43 a las concentraciones de 0, 0,2, y 2 nmol en cada disco de papel durante 24 h. TNP-470 se trato en las concentraciones de 0, 0,1, 1 nmol durante 24 h. B, Inhibicion del procesamiento de metionina N-terminal de 14-3- 3y en HUVEC por nitroxolina, MetAP2-siRNA, o TNP-470. Las HUVEC se trataron con nitroxolina o TNP-470 durante 24 h y se detecto 14-3-3y metionilado N-terminal usando un anticuerpo espedfico. Para el experimento de desactivacion de MetAP2, las HUVEC se transfectaron con diferentes concentraciones de MetAP2-siRNA durante 48 h y se cosecharon para transferencia de western.

Figura 3. Comparacion del efecto entre nitroxolina y TNP470 sobre la ruta p53 en HUVEC. A, las HUVEC se trataron con inhibidor de MetAP2 para los puntos de tiempo indicados y se realizo la transferencia de Western usando anticuerpos espedficos contra cada protema de interes. Rb (12 %) y Rb (8 %) representan transferencias de Western de Rb despues de la realizacion con el 12 % y el 8 % de SDS-PAGE, respectivamente. B, Las HUVEC se trataron con control de vehmulo (C), nitroxolina 5 pM (N) o TNP-470 10 nM (T) para los puntos de tiempo indicados. Las celulas se analizaron a continuacion por transferencia de Western de p53 y p21. Se uso GAPDH como control interno. C, Las HUVEC se trataron con control de vehmulo (C), nitroxolina 5 pM (N) o TNP- 470 10 nM (T) para los puntos de tiempo indicados. El ARN total se aislo de las celulas y se analizo por RT-PCR de p53, p21 y GAPDH usando pares de cebadores espedficos.

Figura 4. Induccion de senescencia prematura de HUVEC por nitroxolina. A, Actividad de p-galactosidasa asociada a la senescencia (SA-p-gal) en HUVEC. Las celulas se trataron con cada farmaco durante 5 dfas y se midio la actividad SA-p-gal. Para los ensayos de reversibilidad (denominados nitroxolina-R y acido valproico-R), las celulas se trataron con cada farmaco durante 3 dfas, se lavaron con PBS tres veces y se incubaron con medio recien preparado durante 2 dfas adicionales. Las imagenes se tomaron como escenas representativas de tres experimentos independientes. B, Se cuantifico la induccion de la senescencia de HUVEc contando las celulas tenidas con SA-p-gal frente a las celulas totales despues de haber sido fotografiadas bajo el microscopio. Los datos representan la media ± DE de tres experimentos independientes.

Figura 5. La nitroxolina inhibe las actividades de la sirtuina. A, Induccion de la acetilacion de p53 en la lisina 382 por nitroxolina. Las HUVEC se trataron con nitroxolina (NIT) y otros compuestos durante 6 h o 20 h, y se analizo el estado de acetilacion de p53 (K382), a-tubulina e histona-H3 usando anticuerpos espedficos. B, Efecto de la nitroxolina en las actividades de la sirtuina. Se utilizaron sirtuinas humanas recombinantes y sus sustratos peptfdicos fluorogenicos preferidos para el ensayo enzimatico como se describe en Materiales y procedimientos. Los valores estimados de CI50 de SirT1, SirT2 y SirT3 fueron 8,5, 35 y >50 pM, respectivamente. C, Induccion bifasica, dependiente de la dosis, de la acetilacion de p53 por nitroxolina. Las HUVEC se trataron con diversas concentraciones de nitroxolina durante 20 horas y el estado de acetilacion de sustratos de sirtuina endogenos se analizo mediante transferencias de Western. D, El nivel de acetilacion y la protema p53 total en cada carril se normalizo por el nivel de a-tubulina. La intensidad de cada banda proteica se cuantifico usando el software ImageJ.

Figura 6. El efecto de la nitroxolina imita la inhibicion concurrente de MetAP2 y SirT1 en HUVEC. A, Efectos de la nitroxolina sobre el estado de acetilacion de diversos sustratos de sirtuina en presencia o ausencia de inhibidor de la histona desacetilasa de clase I. Las HUVEC se trataron con 0, 1, 5 y 20 pM de nitroxolina con o sin TSA (200 nM) durante 24 h. B, Las HUVEC se trataron con 0, 5 y 15 pM de EX527 con o sin TSA (200 nM) durante 24 h. C, La desactivacion de SirT1 y MetAP2 imita los efectos de la nitroxolina en la acetilacion de p53. Se introdujeron dos oligos de ARNsi diferentes contra el ARNm de SirT1 (ARNsi n.° 1 y n.° 3) en HUVEC usando el reactivo HiperFect y el estado de acetilacion de p53 (K382) y la a-tubulina se analizo mediante transferencia de Western. Las HUVEc se transfectaron con oligos de ARNsi designados durante 24 h y se trataron con vehmulo o compuestos durante 24 h mas. Las celulas se cosecharon entonces para el analisis por transferencia de Western. D, La inhibicion farmacologica de SirT1 y MetAP2 imita los efectos de la nitroxolina sobre la acetilacion de p53. Las HUVEC se trataron con 0, 0,2 y 2 pM de EX527 en presencia o ausencia de TNP470 (10 nM) o TSA (200 nM) durante 20 h. El estado de acetilacion de p53 (K382) y a-tubulina se analizo mediante transferencia de Western.

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Figura 7. La inhibicion concurrente de MetAP2 y SirTI actua sinergicamente sobre la proliferacion y la senescencia de HUVEC. A, Induccion sinergica de la acetilacion de p53 por inhibicion concurrente de MetAP2 y SirTI. Las HUVEC se trataron con diversas concentraciones de EX527 con o sin TNP470 10 nM durante 24 h. El nivel de protema p53 total (B) y acetilacion (C) en cada carril se normalizo por el nivel de a-tubulina. La intensidad de cada banda proteica se cuantifico usando el software ImageJ. D, Efectos de TNP470 y EX527 sobre la senescencia de HUVEC. Las HUVE se trataron con cada compuesto o combinacion de farmacos durante 5 dfas y se realizo la tincion con SA-p-gal como se ha descrito anteriormente. E, Inhibicion sinergica de la proliferacion de HUVEC por TNP470 y EX527. La sinergia entre dos farmacos se calculo matematicamente basandose en la ecuacion del fndice de Combinacion (CI) de Chou-Talalay (CI = 1, efecto aditivo; <1, sinergia, >1, antagonismo). Los valores de CI para la combinacion de farmacos se obtuvieron utilizando el software CompuSyn. Fa representa el valor del efecto (1 = 100 % de inhibicion). Cada punto de datos indica 1/8 de CI50, 1/4 de CI50, 1/2 de CI50 y valores de CI50 de dos combinaciones de farmacos. Los datos representan la media ± DE de tres experimentos independientes.

Figura 8. Efectos de la nitroxolina sobre la angiogenesis in vitro e in vivo. A, Inhibicion de la formacion de tubos de HUVEC por nitroxolina o combinacion de farmacos de MetAP2 e inhibidores de SirT1 in vitro. Las HUVEC se pusieron sobre Matrigel pre-solidificado en presencia o ausencia de cada compuesto y se incubaron durante 24 h. Las estructuras tubulares se tineron con calcema-AM y se observaron bajo un microscopio fluorescente. B, Se cuantifico la longitud total del tubo utilizando el software de analisis de imagenes AngioQuant. C, Se realizo ensayo de tapon de Matrigel in vivo utilizando ratones sin pelo atfmicos hembra. Los ratones (n = 5/grupo) se trataron con vehfculo o nitroxolina (60 mg/kg/dfa) durante 10 dfas a traves de inyeccion i.p. Los tapones de matrigel se extrajeron a continuacion de los ratones y se tineron con MAS-Tricromo. Los tapones de Matrigel representativos se mostraron macroscopicamente (C) y microscopicamente (D). Las puntas de flecha indican vasos sangumeos llenos de eritrocitos. E, Los vasos sangumeos de los tapones de Matrigel se contaron y se cuantificaron bajo un microscopio de contraste de fase. *P < 0,001 frente a control de vehmulo.

Figura 9. Efectos de la nitroxolina sobre el crecimiento tumoral del xenoinjerto y la angiogenesis. A, Las celulas de cancer de mama humano HCC1954 se trasplantaron en ratones sin pelo atfmicos hembras. Despues de que los tumores se hicieran palpables, los ratones se trataron con vehmulo o nitroxolina (60 mg/kg) a traves de inyeccion i.p. cada dos dfas. El volumen tumoral se midio cada tres dfas como se describe en los Procedimientos. *P = 0,034 y #P = 0,012 frente a control de vehmulo. B, Se mostraron los pesos medios de los tumores de ratones tratados con vehmulo y con nitroxolina. *P = 0,036 frente a control de vehmulo. C, El nivel de p53 total y el estado de acetilacion de p53 (K382) en muestras de tumor procedentes de grupos de control de vehmulo y tratados con nitroxolina se muestran mediante transferencia de Western. D, Se mostro la tincion inmunohistoqmmica (IHC) de CD31 en las secciones de tejido tumoral. MOCK representa la IHC sin anticuerpo primario (CD31). E, Se cuantifico el numero total de vasos sangumeos presentes en los datos de IHC contando el numero de vasos tenidos por campo. *P = 0,04 frente a control de vehmulo.

Descripcion detallada de la invencion

I. Definiciones

A continuacion se enumeran las definiciones de diversos terminos usados para describir la presente invencion. Estas definiciones se aplican a los terminos tal como se usan a lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones, a menos que se limiten en casos espedficos, individualmente o como parte de un grupo mas grande.

El termino "alquilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a radicales hidrocarbonados saturados de cadena lineal o ramificada que contienen, en ciertas realizaciones, entre uno y seis, o uno y ocho atomos de carbono, respectivamente. Los ejemplos de radicales alquilo incluyen, pero sin limitacion, radicales metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo, neopentilo, n-hexil heptilo, octilo.

El termino "alquenilo”, como se usa en el presente documento, representan un grupo monovalente derivado de un resto de hidrocarburo que contiene, en ciertas realizaciones, de dos a seis, o de dos a ocho atomos de carbono que

tienen al menos un doble enlace carbono-carbono. El doble enlace puede o no ser el punto de union a otro grupo.

Los grupos alquenilo incluyen, pero sin limitacion, por ejemplo, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-2-buten-1-ilo, heptenilo, octenilo y similares.

El termino "alquinilo”, como se usa en el presente documento, representan un grupo monovalente derivado de un

resto de hidrocarburo que contiene, en ciertas realizaciones, de dos a seis, o de dos a ocho atomos de carbono que

tienen al menos un triple enlace carbono-carbono. El grupo alquinilo puede o no ser el punto de union a otro grupo. Los grupos alquinilo representativos incluyen, pero sin limitacion, por ejemplo, etinilo, 1 -propinilo, 1 -butinilo, heptinilo, octinilo y similares.

El termino "cicloalquilo" o "carbodclico" se usan indistintamente, y como se usa en el presente documento, representa un grupo monovalente derivado de un compuesto de anillo carbodclico saturado monodclico o polidclico. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo y ciclooctilo; biciclo [2.2.1]heptilo, y biciclo [2.2.2]octilo. Tambien se contemplan un grupo monovalente derivado de un compuesto de anillo carbodclico monodclico o polidclico que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono mediante la eliminacion de un unico atomo de hidrogeno. Los ejemplos de tales grupos incluyen, pero sin limitacion,

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ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo, ciclooctenilo, y similares.

El termino "arilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un sistema anular carbodclico mono o polidclico que tiene uno o mas anillos aromaticos, condensados o no condensados, incluyendo, pero sin limitacion, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, idenilo y similares.

El termino "aralquilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un residuo alquilo unido a un anillo de arilo. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion, bencilo, fenetilo y similares.

El termino "heteroarilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical o sistema anular mono o polidclico (por ejemplo, bi o tridclico o mas) condensado o no condensado, que tiene al menos un anillo aromatico, que tiene de cinco a diez atomos en el anillo de los cuales un atomo en el anillo se selecciona entre S, O y N; cero, uno o dos atomos en el anillo son heteroatomos adicionales seleccionados independientemente entre S, O y N; y el resto de atomos en el anillo son carbono. Heteroarilo incluye, pero sin limitacion, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isooxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzoimidazolilo, benzooxazolilo, quinoxalinilo, y similares.

El termino "heteroaralquilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un residuo alquilo unido a un anillo heteroarilo. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion, piridinilmetilo, pirimidiniletilo y similares.

El termino "heterocicloalquilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un anillo no aromatico de 3, 4, 5, 6 o 7 miembros o un sistema condensado de un grupo bi o tridclico, donde (i) cada anillo contiene entre uno y tres heteroatomos seleccionados independientemente entre oxfgeno, azufre y nitrogeno, (ii) cada anillo de 5 miembros tiene de 0 a 1 dobles enlaces y cada anillo de 6 miembros tiene de 0 a 2 dobles enlaces, (iii) los heteroatomos de nitrogeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados, (iv) el heteroatomo de nitrogeno puede estar opcionalmente cuaternizado, y (iv) cualquiera de los anillos anteriores puede estar condensado a un anillo de benceno. Los grupos heterocicloalquilo representativos incluyen, pero sin limitacion, [1,3]dioxolano, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, y tetrahidrofurilo.

Como se describe en el presente documento, los compuestos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o mas sustituyentes, tal como se ilustran en general anteriormente, o como se ilustran por clases, subclases, y especies particulares de la invencion. Se apreciara que la expresion "opcionalmente sustituido" se usa de forma intercambiable con la expresion "sustituido o sin sustituir". En general, el termino "sustituido", ya este precedido o no por el termino "opcionalmente", se refiere al reemplazo de radicales hidrogeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente especificado. A menos que se indique otra cosa, un grupo opcionalmente sustituido puede tener un sustituyente en cada posicion sustituible del grupo, y cuando puede sustituirse mas de una posicion en cualquier estructura dada con mas de un sustituyente seleccionado entre un grupo especificado, el sustituyente puede ser el mismo o diferente en cada posicion. Las expresiones "opcionalmente sustituido", "alquilo opcionalmente sustituido", "opcionalmente sustituido "alquenilo opcionalmente sustituido", "alquinilo opcionalmente sustituido", "cicloalquilo opcionalmente sustituido", "cicloalquenilo opcionalmente sustituido", "arilo opcionalmente sustituido”, "heteroarilo opcionalmente sustituido" "aralquilo opcionalmente sustituido”, "heteroaralquilo opcionalmente sustituido", "heterocicloalquilo opcionalmente sustituido" y cualquier otro grupo opcionalmente sustituido como se usa en el presente documento, se refieren a grupos que estan sustituidos o sin sustituir por reemplazos independientes de uno, dos, o tres o mas de los atomos de hidrogeno en los mismos con sustituyentes que incluyen, pero sin limitacion:

-F, -Cl, -Br, -I,

-OH, hidroxi protegido,

-NO2, -CN,

-NH2, amino protegido, -NH -alquilo C1-C12, -NH -alquenilo C2-C12, -NH -alquenilo C2-C12, -NH -cicloalquilo C3-C12, -NH -arilo, -NH -heteroarilo, -NH - heterocicloalquilo, -dialquilamino, -diarilamino, -diheteroarilamino,

-O-alquilo C1-C12, -O-alquenilo C2-C12, -O-alquenilo C2-C12, -O-cicloalquilo C3-C12, -O-arilo, -O-heteroarilo, -O- heterocicloalquilo,

-C(O)- alquilo C1-C12, -C(O)- alquenilo C2-C12, -C(O)- alquenilo C2-C12, -C(O)-cicloalquilo C3-C12, -C(O)-arilo, - C(O)-heteroarilo, -C(O)-heterocicloalquilo,

-CONH2, -CONH- alquilo C1-C12, -CONH- alquenilo C2-C12, -CONH- alquenilo C2-C12, -CONH-cicloalquilo C3-C12, -CONH-arilo, -CONH-heteroarilo, -CONH-heterocicloalquilo,

-OCO2- alquilo C1-C12, -OCO2- alquenilo C2-C12, -OCO2- alquenilo C2-C12, -OCO2-cicloalquilo C3-C12, -OCO2-arilo, -OCO2-heteroarilo, -OCO2-heterocicloalquilo,-OCONH2, -OCONH- alquilo C1-C12, -OcOnH- alquenilo C2-C12, - OCONH- alquenilo C2-C12, -OCONH- cicloalquilo C3-C12, -OCONH- arilo, -OCONH- heteroarilo, - OCONH- heterocicloalquilo,

-NHC(O)- alquilo C1-C12, -NHC(O)-alquenilo C2-C12, -NHC(O)-alquenilo C2-C12, -NHC(O)-cicloalquilo C3-C12, - NHC(O)-arilo, -NHC(O)-heteroarilo, -NHC(O)-heterocicloalquilo, -NHCO2- alquilo C1-C12, -NHCO2- alquenilo C2- C12, -NHCO2- alquenilo C2-C12, -NHCO2- cicloalquilo C3-C12, -NHCO2- arilo, -NHCO2- heteroarilo, -NHCO2- heterocicloalquilo, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NH- alquilo C1-C12, -NHC(O)NH-alquenilo C2-C12, -NHC(O)NH-alquenilo C2-C12, -NHC(O)NH- cicloalquilo C3-C12, -NHC(O)NH-arilo, -NHC(O)NH-heteroarilo, -NHC(O)NH-

heterocicloalquilo, NHC(S)NH2, -NHC(S)NH- alquilo C1-C12, -NHC(S)NH-alquenilo C2-C12, -NHC(S)NH-alquenilo

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C2-C12, -NHC(S)NH- cicloalquilo C3-C12, -NHC(S)NH-arilo, -NHC(S)NH-heteroarilo, -NHC(S)NH-

heterocicloalquilo, -NHC(NH)NH2, -NHC(NH)NH- alquilo C1-C12, -NHC(NH)NH-alquenilo C2-C12, -NHC(NH)NH- alquenilo C2-C12, -NHC(NH)NH-cicloalquilo C3-C12, -NHC(NH)NH-arilo, -NHC(NH)NH-heteroarilo, -NHC(NH)NH- heterocicloalquilo, -NHC(NH)-alquilo C1-C12, -NHC(NH)-alquenilo C2-C12, -NHC(NH)-alquenilo C2-C12, -NHC(NH)- cicloalquilo C3-C12, -NHC(NH)-arilo, -NHC(NH)-heteroarilo, -NHC(NH)-heterocicloalquilo,

-C(NH)NH-alquilo C1-C12, -C(NH)NH-alquenilo C2-C12, -C(NH)NH-alquenilo C2-C12, -C(NH)NH-cicloalquilo C3-C12, -c(NH)NH-arilo, -C(NH)NH-heteroarilo, -C(NH)NH-heterocicloalquilo,

-S(O)-alquilo C1-C12, - S(O)-alquenilo C2-C12, - S(O)-alquenilo C2-C12, - S(O)-cicloalquilo C3-C12, - S(O)-arilo, - S(O)-heteroarilo, - S(O)-heterocicloalquilo -SO2NH2, -sO2NH-alquilo C1-C12, -SO2NH-alquenilo C2-C12, -SO2NH- alquenilo C2-C12, -SO2NH-cicloalquilo C3-C12, -SO2NH- arilo, -SO2NH- heteroarilo, -SO2NH- heterocicloalquilo, -NHSO2-alquilo C1-C12, -NHSO2-alquenilo C2-C12, - NHSO2-alquenilo C2-C12, -NHSO2-cicloalquilo C3-C12, - NHSO2-arilo, -NHSO2-heteroarilo, -NHSO2-heterocicloalquilo,

-CH2NH2, -CH2SO2CH3, -arilo, -arilalquilo, -heteroarilo, -heteroarilalquilo, -heterocicloalquilo, -cicloalquilo C3-C12, poli-alcoxialquilo, polialcoxi, -metoximatoxi, -metoxietoxi, -SH, -S-alquilo C1-C12, -S-alquenilo C2-C12, -S-alquenilo C2-C12, -S-cicloalquilo C3-C12, -S-arilo, -S-heteroarilo, -S-heterocicloalquilo, o metiltiometilo.

Se entiende que los arilos, heteroarilos, alquilos, y similares pueden estar sustituidos adicionalmente. De acuerdo con la invencion, cualquiera de los arilos, arilos sustituidos, heteroarilo y heteroarilos sustituidos descritos en el presente documento, pueden ser cualquier grupo aromatico. Los grupos aromaticos pueden estar sustituidos o sin sustituir.

Los terminos "hal", "halo" y "halogeno", se usan de forma intercambiable, y como se usa en el presente documento, se refieren a un atomo seleccionado entre fluor, cloro, bromo y yodo.

El termino "sujeto", como se usa en el presente documento, se refiere a un mairnfero. Por lo tanto, un sujeto se refiere a, por ejemplo, perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, cobayas, y similares. Preferentemente, el sujeto es un ser humano. Cuando el sujeto es un ser humano, el sujeto puede denominarse en el presente documento como un paciente.

Como se usa en el presente documento, la expresion "sal farmaceuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales de los compuestos formados por el procedimiento de la presente invencion que son, dentro del ambito del buen criterio medico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de humanos y animales inferiores sin toxicidad indebida, irritacion, respuesta alergica y similares, y estan acorde con una relacion beneficio/riesgo razonable. Las sales farmaceuticamente aceptables se conocen bien en la tecnica. Por ejemplo, S. M. Berge, y col. describe sales farmaceuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977). Las sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificacion finales de los compuestos de la invencion, o por separado haciendo reaccionar la funcion de base libre con un acido organico adecuado. Los ejemplos de sales de adicion de acidos no toxicas farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitacion, sales de un grupo amino formado con acidos inorganicos, tales como acido clorhidrico, acido bromhudrico, acido fosforico, acido sulfurico y acido perclorico o con acidos organicos, tales como acido acetico, acido maleico, acido tartarico, acido cftrico, acido succrnico o acido malonico o usando otros procedimientos usados en la tecnica tales como intercambio ionico. Otras sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitacion, sales adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato, y similares. Las sales de metales alcalinos o alcalinoterreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y similares. Las sales farmaceuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea apropiado, amonio no toxico, amonio cuaternario, y cationes de amina formados usando contraiones tales como haluro, hidroxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, alquilo que tiene de 1 a 6 atomos de carbono, sulfonato y sulfonato de arilo.

La expresion "cantidad eficaz" se usa a lo largo de la memoria descriptiva para describir concentraciones o cantidades de compuestos de acuerdo con la presente invencion que pueden usarse para producir un cambio favorable en la enfermedad o afeccion tratada, ya sea el cambio una remision, un descenso del crecimiento o tamano del cancer, tumor u otro crecimiento, un resultado fisiologico favorable, incluyendo el aclaramiento de la piel o del tejido, o similares, dependiendo de la enfermedad o afeccion tratada.

Como se usa en el presente documento, los terminos "prevenir", "que previene", "prevencion" y similares se refieren a reducir la probabilidad de desarrollar un trastorno o afeccion en un sujeto que no tiene, pero que esta en riesgo o es susceptible de desarrollar un trastorno o afeccion.

Como se usa en el presente documento, los terminos "tratar", "que trata", "tratamiento" y similares se refieren a reducir o mejorar un trastorno y/o smtomas asociados con el mismo. Se apreciara que, aunque no se excluye, tratar un trastorno o afeccion no requiere que el trastorno, la afeccion o los smtomas asociados con los mismos sean eliminados completamente.

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Como se usa en el presente documento, las expresiones "compuesto anti-angiogenico" y "compuesto inhibidor de la angiogenesis" pueden usarse indistintamente. La angiogenesis se usa a lo largo de la memoria descriptiva para describir los procesos biologicos que dan como resultado el desarrollo de vasos sangumeos o el aumento de la vascularidad del tejido en un organismo. La angiogenesis persistente y no regulada se produce en una multiplicidad de patologfas, metastasis tumoral y crecimiento anormal de las celulas endoteliales y soporta el dano patologico visto en estas afecciones. Las diversas patologfas creadas debido a la angiogenesis no regulada se han agrupado como enfermedades angiogenicas dependientes o angiogenicas asociadas. Las terapias dirigidas al control de los procesos angiogenicos podnan conducir a la abrogacion o mitigacion de estas enfermedades.

El termino "tumor" se usa para describir un crecimiento anormal en tejido que se produce cuando la proliferacion celular es mas rapida que el tejido normal y continua creciendo despues de que cesen los estfmulos que inician el nuevo crecimiento. Los tumores generalmente presentan una falta parcial o total de organizacion estructural y coordinacion funcional con el tejido normal, y generalmente forman una masa distinta de tejido que puede ser benigno (tumor benigno) o maligno (carcinoma). Los tumores tienden a estar altamente vascularizados.

El termino "cancer" se usa como un termino general en el presente documento para describir tumores malignos o carcinoma. Estos tumores malignos pueden invadir tejidos circundantes, pueden metastatizar a varios sitios y es probable que se repitan despues de intento de extraccion y causar la muerte del paciente a menos que se traten adecuadamente. Como se usa en el presente documento, los terminos carcinoma y cancer estan incluidos bajo el termino tumor. Los procedimientos de tratamiento de tumores y/o cancer de acuerdo con la presente invencion comprenden administrar a un paciente que lo necesite una cantidad eficaz de uno o compuestos de acuerdo con la presente invencion.

II. Compuestos de la invencion

En un aspecto un compuesto de formula I se describe:

imagen1

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R1 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo

opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, o SO3RA;

R2 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo

opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, SO3RA, o SRa;

R4 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo

R3 es H, C(0)Rb, C(0)ORb, C(0)NHRb, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido; cada Ra es independientemente H o un alquilo opcionalmente sustituido; y

cada Rb es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, o un arilo opcionalmente sustituido.

Se describe ademas un compuesto de formula II:

imagen2

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

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en la que,

cada Ra es independientemente H o un alquilo opcionalmente sustituido; y

cada Rb es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, o un arilo opcionalmente sustituido. Ademas, R1 se describe como H, nitro, Cl, Br, o SO3H.

Ademas, R2 se describe como H o un alquilo opcionalmente sustituido.

Tambien se desvela que R2 es metilo que esta opcionalmente sustituido con uno o mas de fenilo, naftilo, antracenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo; piridilo, 1 -oxo-piridilo, furanilo, benzo[1,3]dioxolilo, benzo[1,4]dioxinilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, imidazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, quinolinilo, pirazolilo, isotiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, triazolilo, tiadiazolilo, isoquinolinilo, indazolilo, benzoxazolilo, benzofurilo, indolizinilo, imidazopiridilo, tetrazolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzoxadiazolilo, indolilo, tetrahidroindolilo, azaindolilo, indazolilo, imidazopiridilo, quinazolinilo, purinilo, pirrolo[2,3]pirimidinilo, pirazolo[3,4] pirimidinilo, benzo(b)tienilo; ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, aziridinilo, oxiranilo, azetidinilo, oxetanilo; piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxo pirrolidinilo, 4-piperidonilo, tetrahidropiranilo, oxazolidinilo, 2- oxo-oxazolidinilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidrotiopiranil sulfona, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiomorfolinil sulfoxido, tiomorfolinil sulfona, 1,3-dioxolano, tetrahidrofuranoflo, o tetrahidrotienilo; cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido. Ademas, R2 se describe como metilo que esta opcionalmente sustituido con uno o mas de alquilo, alquenilo, hidroxi, o NRaRa.

Tambien se describe un compuesto de formula III:

imagen3

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R3 es C(0)Rb, C(0)ORb, C(0)NHRb, un alquilo opcionalmente sustituido, o un alquenilo opcionalmente

sustituido;

cada Ra es independientemente H o un alquilo opcionalmente sustituido; y

Ademas, R1 se describe como H, nitro, Cl, Br, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, o SO3RA.

Ademas, R1 se describe como un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido. Ademas, R1 se describe como

opcionalmente sustituido con uno o mas de fenilo, naftilo, antracenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo; piridilo, 1-oxo- piridilo, furanilo, benzo[1,3]dioxolilo, benzo[1,4]dioxinilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, imidazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, quinolinilo, pirazolilo, isotiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, triazolilo, tiadiazolilo, isoquinolinilo, indazolilo, benzoxazolilo, benzofurilo, indolizinilo, imidazopiridilo, tetrazolilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzoxadiazolilo, indolilo, tetrahidroindolilo, azaindolilo, indazolilo, imidazopiridilo, quinazolinilo, purinilo, pirrolo[2,3]pirimidinilo, pirazolo[3,4] pirimidinilo, benzo(b)tienilo; ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, aziridinilo, oxiranilo, azetidinilo, oxetanilo; piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-

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oxopiperidinilo, 2-oxo pirrolidinilo, 4-piperidonilo, tetrahidropiranilo, oxazolidinilo, 2-oxo-oxazolidinilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidrotiopiranil sulfona, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiomorfolinil sulfoxido, tiomorfolinil sulfona, 1,3-dioxolano, tetrahidrofuranoMo, o tetrahidrotienilo; cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido.

Adicionalmente, R2 se describe como H, nitro, Cl, o Br.

Ademas, R3 se describe como C(0)Rb, C(0)ORb, C(0)NHRb, un alquilo opcionalmente sustituido o un alquenilo opcionalmente sustituido. En una realizacion mas, R3 es un etilo opcionalmente sustituido, alilo, o C(0)NHRb, en la que Rb es un fenilo opcionalmente sustituido o alquilo opcionalmente sustituido.

Ademas se describe un compuesto de formula IV:

imagen4

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R2 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, o SO3RA;

R4 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRARA, o SO3RA;

R3 es H, C(0)Rb, C(0)ORb, C(0)NHRb, un alquilo opcionalmente sustituido, o un alquenilo opcionalmente sustituido;

cada Ra es independientemente H, o un alquilo opcionalmente sustituido; y

cada Rb es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, o un arilo opcionalmente sustituido. Ademas, R2 se describe como H o nitro.

Ademas, R4 se describe como H o un alquilo opcionalmente sustituido.

Ademas, R3 se describe como H, C(0)Rb, C(0)ORb, o un alquilo opcionalmente sustituido.

Ciertos compuestos como se describen en el presente documento pueden existir en una geometna particular, formas isomericas o estereoisomericas. Se describen compuestos que incluyen isomeros cis y trans, enantiomeros R y S, racematos y mezclas racemicas, enantiomeros individuales, diastereomeros individuales, mezclas diastereomericas, diastereomeros, isomeros (D), isomeros (L), las mezclas racemicas de los mismos, y otras mezclas de los mismos, como dentro del ambito de la invencion. Los compuestos que se describen en el presente documento tambien pueden representarse en multiples formas tautomericas (por ejemplo, la alquilacion de un sistema de anillo puede dar lugar a alquilacion en multiples sitios). Pueden estar presentes atomos de carbono asimetricos adicionales en un sustituyente tal como un grupo alquilo. Todos estos isomeros enriquecidos, asf como sus mezclas racemicas, se describen en el presente documento. Se describen ademas todas las formas cristalinas de los compuestos descritos en el presente documento.

Los compuestos descritos anteriormente se pueden preparar por procedimientos bien conocidos en la tecnica, asf como por las vfas sinteticas desveladas en los ejemplos siguientes.

Los productos qmmicos utilizados en la ruta de smtesis descrita anteriormente pueden incluir, por ejemplo, disolventes, reactivos, catalizadores y grupos protectores y reactivos del grupo desprotector. Los procedimientos descritos anteriormente tambien pueden incluir adicionalmente etapas, antes o despues de las etapas descritas espedficamente en el presente documento, para anadir o eliminar grupos protectores adecuados con el fin de permitir finalmente la smtesis de los compuestos heterodclicos. Ademas, las diversas etapas sinteticas pueden realizarse en una secuencia u orden alternativo para dar los compuestos deseados. Las transformaciones qmmicas sinteticas y las metodologfas de grupos protectores (proteccion y desproteccion) utiles en la smtesis de compuestos heterodclicos aplicables se conocen en la tecnica e incluyen, por ejemplo, las descritas en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); y L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,

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John Wiley and Sons (1995) y ediciones posteriores de los mismos.

Por consiguiente, los compuestos descritos en el presente documento pueden fabricarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la tecnica, incluyendo los de los tratados mencionados anteriormente. Se reconoce por un experto en la tecnica que las condiciones de reaccion (por ejemplo, temperatura, tiempo de reaccion, etc.) pueden ajustarse, lo cual es rutinario para un experto en la tecnica.

Como puede apreciarse por el experto en la tecnica, los procedimientos adicionales de sintetizacion de los compuestos de las formulas en el presente documento seran evidentes para los expertos en la tecnica. Ademas, las diversas etapas sinteticas pueden realizarse en una secuencia u orden alternativo para dar los compuestos deseados. Las transformaciones qmmicas sinteticas y las metodologfas de grupos protectores (proteccion y desproteccion) utiles en la smtesis de los compuestos descritos en el presente documento se conocen en la tecnica e incluyen, por ejemplo, tales como las descritas en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2a Ed., Wiley-VcH Publishers (1999); T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1999); y L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley y Sons (1995), y ediciones posteriores de los mismos.

Los acidos y bases utiles en los procedimientos del presente documento son conocidos en la tecnica. Los catalizadores acidos son cualquier producto qmmico acido, que puede ser inorganico (por ejemplo, acido clortudrico, sulfurico, nftrico, tricloruro de aluminio) u organico (por ejemplo, acido canforsulfonico, acido p-toluenosulfonico, acido acetico, triflato de iterbio) en la naturaleza. Los acidos son utiles en cantidades catalfticas o estequiometricas para facilitar las reacciones qmmicas. Las bases son cualquier sustancia qmmica basica, que puede ser inorganica (por ejemplo, bicarbonato de sodio, hidroxido potasico) u organica (por ejemplo, trietilamina, piridina) en la naturaleza. Las bases son utiles en cantidades catalfticas o estequiometricas para facilitar las reacciones qmmicas. El proceso de conversion se refiere a una o mas transformaciones qmmicas, que pueden realizarse in situ, o con aislamiento de compuestos intermedios. Las transformaciones pueden incluir hacer reaccionar los compuestos de partida o intermedios con reactivos adicionales usando tecnicas y protocolos conocidos en la tecnica, incluyendo los de las referencias citadas en el presente documento. Los intermedios se pueden usar con o sin purificacion (por ejemplo, filtracion, destilacion, cristalizacion, cromatograffa). Otras realizaciones se refieren a los compuestos intermedios delineados en el presente documento, y su uso en los procedimientos (por ejemplo, tratamiento, smtesis) delineados en el presente documento.

III. Procedimientos de tratamiento

En ciertos aspectos, se describe un procedimiento para tratar una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa o SirT1 en un sujeto, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R1 es H, hidroxi, ciano, nitro, azido, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R2 es H, hidroxi, ciano, nitro, azido, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R4 es H, hidroxi, ciano, nitro, azido, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R3 es H, C(O)Rb, C(O)ORb, C(O)NHRb, C(O)NRbRb, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido;

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cada Ra es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un

aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente

sustituido; y

cada Rb es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un

sustituido.

En un aspecto la presente invencion se refiere a nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga.

En una realizacion la presente invencion proporciona Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de metionina aminopeptidasa de tipo 2.

En otro aspecto, se describe un procedimiento para tratar una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa en un sujeto, en el que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de metionina aminopeptidasa de tipo 2, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

Ri es H, hidroxi, ciano, nitro, azido, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R3 es H, C(O)Rb, C(O)ORb, C(O)NHRb, C(O)NRbRb, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido; cada Ra es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido; y

cada RB es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido.

En una realizacion mas la presente invencion proporciona Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama, y cancer de vejiga, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de SirTI.

Aun en otro aspecto, se describe un procedimiento para tratar una enfermedad o trastorno asociado con SirTI en un sujeto, en el que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de SirTI, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

En otros aspectos, se describe un procedimiento para tratar una enfermedad o trastorno asociado con la angiogenesis en un sujeto, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R1 es H, hidroxi, ciano, nitro, azido, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

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cada Ra es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido; y

En ciertas realizaciones, la enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa, SirTI, o la angiogenesis se selecciona entre: crecimiento tumoral o de cancer (neoplasia).

En ciertas realizaciones, la enfermedad o trastorno asociado con la angiogenesis es crecimiento tumoral o de cancer (neoplasia). En una realizacion mas, la enfermedad o trastorno es cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama y cancer de vejiga, y cancer renal, ,.

En otro aspecto, se describe un procedimiento para inhibir o reducir la metionina aminopeptidasa o SirTI en un sujeto, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

cada RB es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido; en el que dicho compuesto se identifica en un ensayo de cribado.

El ensayo de cribado se describe para seleccionarse a partir de un ensayo de enzima MetAP, sincronizacion de timidina doble, analisis de ciclo celular y transfeccion de ARNsi, ensayo de incorporacion de 3H-timidina, y ensayo de enzima sirtuina. Ademas, se describe que el ensayo de cribado para seleccionarse de un ensayo de enzima MetAP, ensayo de incorporacion de 3H-timidina, y ensayo de enzima sirtuina.

Tambien se describe que el inhibidor tiene una CI50 para inhibir la metionina aminopeptidasa de tipo 2 menos de aproximadamente 5 micromolar.

En otros aspectos, se describe un procedimiento para inhibir o reducir la angiogenesis en un sujeto, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

Aun en otros aspectos, se describe un procedimiento para tratar el crecimiento tumoral, de cancer, o neoplasia en un sujeto, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

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cada Ra es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido;

y

En una realizacion, el compuesto nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo inhibe la metionina aminopeptidasa de tipo 2 para tratar asf el crecimiento tumoral, del cancer, o neoplasia.

En otra realizacion, el compuesto nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo inhibe SirTI para tratar asf el crecimiento tumoral, del cancer, o neoplasia.

Se describe ademas un compuesto de formula II:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

Ri es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R2 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa; y

cada Ra es independientemente H, un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterodclico opcionalmente sustituido.

Tambien se desvela un compuesto de formula III:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R1 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R2 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R3 es C(O)Rb, C(O)ORb, C(O)NHRb, C(O)NRbRb, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido;

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Ademas se desvela un compuesto de formula IV:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que,

R4 es H, nitro, halo, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, NRaRa, NHRa, ORa, SORa, SO2RA, SO3RA, o SRa;

R3 es H, C(O)Rb, C(O)ORb, C(O)NHRb, C(O)NRbRb, un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un aralquilo opcionalmente sustituido, un heteroarilo opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido;

En otras realizaciones, la invencion proporciona nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa, SirTI, o la angiogenesis en un sujeto y que comprende ademas un agente terapeutico adicional. En una realizacion mas, el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de la angiogenesis. En ciertas realizaciones, el agente terapeutico es un compuesto inhibidor de metionina aminopeptidasa. En otras realizaciones, el agente terapeutico es un compuesto inhibidor de SirTI. En otras realizaciones, el agente terapeutico adicional es un compuesto contra el cancer.

En ciertas realizaciones, la invencion proporciona nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma para su uso como se ha descrito anteriormente en la que la etapa de administrar el compuesto comprende administrar el compuesto por via oral, topica, parenteral, intravenosa o intramuscular.

En una realizacion mas, la etapa de administrar el compuesto comprende administrar el compuesto en una dosificacion de entre aproximadamente 0,1 y 120 mg/kgMa. En ciertas realizaciones, la etapa de administrar el compuesto comprende administrar el compuesto en una dosificacion de menos de aproximadamente 500 mg/dfa.

En diversas realizaciones de la invencion, el sujeto es un ser humano.

En otros aspectos, la invencion proporciona el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para inhibir la metionina aminopeptidasa de tipo 2 en un paciente, en el que el compuesto es nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

En otro aspecto, la invencion proporciona el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para inhibir SirTI en un paciente, en el que el compuesto es nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

En ciertos aspectos, la invencion proporciona el uso de un compuesto en la fabricacion de un medicamento para inhibir la angiogenesis en un paciente, en el que el compuesto es nitroxolina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma.

En ciertos aspectos, la invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica para su uso como se ha definido anteriormente que comprende nitroxolina y un excipiente farmaceuticamente adecuado.

En otros aspectos, se describe un kit que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de formula I en forma de dosis unitaria, junto con instrucciones para administrar el compuesto a un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad relacionada con aminopeptidasa de metionina, relacionada con SirTI o relacionada con la angiogenesis.

Las enfermedades o trastornos tratados, mejorados o evitados por la presente invencion incluyen los siguientes:

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neoplasia, neoplasias internas tales como cancer de ojo u ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama y cancer de vejiga, tumores benignos y malignos, incluyendo diversos canceres, tal como renal prostatico, y cancer de rinon.

La inhibicion de la angiogenesis en el tratamiento o la inversion de la patologfa o afeccion es un aspecto importante de la presente invencion. Mas particularmente, la presente invencion se refiere a compuestos para su uso en la inhibicion del crecimiento de neoplasia, incluyendo un tumor o cancer maligno que comprende exponer la neoplasia a una cantidad o concentracion inhibidora o terapeuticamente eficaz de al menos uno de los compuestos desvelados. Este enfoque puede usarse terapeuticamente, en el tratamiento de neoplasias, incluyendo cancer o en ensayos de comparacion tales como ensayos para determinar las actividades de analogos relacionados, asf como para determinar la susceptibilidad de un paciente de cancer a uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion. El tratamiento de neoplasias internas tales como cancer de ojo u ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama y cancer de vejiga, entre otros muchos, y neoplasias orales tambien se contemplan en la presente invencion.

Los compuestos inhibidores de la angiogenesis de la presente invencion se usan para tratar, mejorar o prevenir tumores benignos y malignos, incluyendo diversos canceres tales como, cervical, colon, vejiga, rectal, mama, renal prostatico, ocular. La angiogenesis es prominente en la formacion de tumores solidos y metastasis. Se han encontrado factores angiogenicos asociados con varios tumores solidos tales como rabdomiosarcomas, retinoblastoma, sarcoma de Ewing, neuroblastoma, y osteosarcoma. Un tumor no puede expandirse sin un suministro de sangre para proporcionar nutrientes y eliminar los desechos celulares. Los tumores en los que la angiogenesis es importante incluyen tumores solidos y tumores benignos tales como neuroma acustico, neurofibroma, tracoma y granulomas piogenos. La prevencion de la angiogenesis podna detener el crecimiento de estos tumores y el dano resultante al animal debido a la presencia del tumor.

Cabe senalar que la angiogenesis se ha asociado con tumores de origen sangumeo tales como leucemias, cualquiera de diversas enfermedades neoplasicas agudas o cronicas de la medula osea en las que se produce la proliferacion desenfrenada de los globulos blancos, generalmente acompanada de anemia, coagulacion de la sangre deteriorada y agrandamiento de los ganglios linfaticos, hugado, y bazo. Se cree que la angiogenesis desempena un papel en las anomalfas en la medula osea que dan lugar a tumores similares a la leucemia.

La angiogenesis es importante en dos fases de la metastasis tumoral. La primera fase en la que la estimulacion de la angiogenesis es importante es en la vascularizacion del tumor, que permite que las celulas tumorales entren en el torrente sangumeo y circulen por todo el cuerpo. Despues de que las celulas tumorales han dejado el sitio primario y se han instalado en el sitio de metastasis secundario, la angiogenesis debe ocurrir antes de que el nuevo tumor pueda crecer y expandirse. Por lo tanto, la prevencion o el control de la angiogenesis podna conducir a la prevencion de metastasis de tumores y posiblemente contener el crecimiento neoplasico en el sitio primario.

El conocimiento del papel de la angiogenesis en el mantenimiento y la metastasis de tumores ha conducido a un indicador pronostico del cancer de mama. La cantidad de neovascularizacion encontrada en el tumor primario se determino contando la densidad de microvasos en el area de la neovascularizacion mas intensa en carcinoma invasor de mama. Se encontro un alto nivel de densidad de microvasos correlacionada con la recidiva tumoral. El control de la angiogenesis por medios terapeuticos puede conducir al cese de la recurrencia de los tumores.

Una de las enfermedades angiogenicas mas frecuentes de la infancia es el hemangioma. En la mayona de los casos, los tumores son benignos y regresan sin intervencion. En los casos mas graves, los tumores avanzan a grandes formas cavernosas e infiltrativas y crean complicaciones clmicas. Las formas sistemicas de hemangiomas, las hemangiomatosis, tienen una alta tasa de mortalidad. Existen hemangiomas resistentes a la terapia que no pueden ser tratados con terapeuticos actualmente en uso.

Los presentes compuestos se pueden usar para tratar sujetos incluyendo animales, y en particular, mairnferos, incluyendo seres humanos, como pacientes. Por lo tanto, los seres humanos y otros animales, y en particular, los mamfferos, que padecen enfermedades o trastornos relacionados con hMetAP y/o la angiogenesis, se pueden tratar, mejorar o prevenir mediante la administracion al paciente de una cantidad eficaz de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion o su derivado o una sal de los mismos opcionalmente en un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable, ya sea solo, o junto con otros agentes farmaceuticos conocidos (dependiendo de la enfermedad a tratar). El tratamiento de acuerdo con la presente invencion tambien se puede administrar junto con otras terapias convencionales, por ejemplo, terapia contra el cancer, tal como tratamiento de radiacion o cirugfa.

Los compuestos de la invencion pueden utilizarse junto con al menos un agente terapeutico conocido, o una sal farmaceuticamente aceptable de dicho agente. Los ejemplos de agentes terapeuticos conocidos que pueden utilizarse para la terapia de combinacion incluyen, pero sin limitacion, corticosteroides (por ejemplo, cortisona, prednisona, dexametasona), farmacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) (por ejemplo, ibuprofeno, celecoxib, aspirina, indometicina, naproxeno), agentes alquilantes tales como busulfan, cis-platino, mitomicina C y carboplatino; agentes antimitoticos tales como colchicina, vinblastina, paclitaxel, y docetaxel; inhibidores de topo I tales como camptotecina y topotecan; inhibidores de topo II tales como doxorrubicina y etoposido; antimetabolitos de ARN/ADN

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tales como 5 - azacitidina, 5-fluorouracilo y metotrexato; antimetabolitos de ADN tales como 5-fluoro-2'-desoxi- uridina, ara-C, hidroxiurea y tioguanina; anticuerpos tales como Herceptin® y Rituxan®. Otros agentes anticancerosos conocidos que se pueden utilizar para la terapia de combinacion incluyen melfalan, clorambucilo, ciclofosamida, ifosfamida, vincristina, mitoguazona, epirrubicina, aclarrubicina, bleomicina, mitoxantrona, eliptinio, fludarabina, octreotida, acido retinoico, tamoxifeno y alanosina.

IV. Mecanismo de accion

La nitroxolina se identified como un exito comun de tres cribados independientes de farmacos antiangiogenicos y anticanceroso

Para descubrir farmacos antiangiogenicos y anticancerosos clmicamente factibles, se realizaron tres cribados independientes de farmacos, incluyendo inhibidores de la metionina aminopeptidasa de tipo 2 (MetAP-2) de una biblioteca de ~170.000 productos qmmicos comerciales, inhibidores del crecimiento de celulas endoteliales de una biblioteca de ~4.500 farmacos clmicos, y farmacos contra el cancer de mama de una biblioteca de ~2.300 farmacos aprobados por la FDA. El cribado de MetAP-2 se realizo usando los sistemas de cribado automatico de alto rendimiento. Los cribados de inhibidores del crecimiento celular se realizaron a traves del procedimiento basado en el ensayo de incorporacion de 3H-timidina. Se aislo un gran numero de aciertos de cada cribado; es decir, aciertos del cribado de inhibidores endoteliales (Curtis, R. C. y col (2007) ACS Chem. Biol. 2, 263-270), 212 aciertos de cribado de farmacos contra el cancer de mama, y aciertos de cribado de inhibidor de MetAP-2 (publicados en otro sitio). Curiosamente, un farmaco antibacteriano, la nitroxolina se descubrio como un acierto comun de esos tres cribados independientes.

La nitroxolina inhibe la actividad de MetAP-2 y la proliferacidn de tanto las celulas endoteliales como de cancer de mama

Se examino el efecto de la nitroxolina sobre la actividad de MetAP en presencia de dos cofactores fisiologicos diferentes. La nitroxolina inhibio espedficamente la actividad de MetAP-2 en presencia de Mn2+ con un valor de CI50 de 460 nM (figura 1, Tabla 1, panel izquierdo). La nitroxolina tambien inhibio la actividad de MetAP-2 en presencia de Co2+, pero la potencia fue 25 veces menor que en el caso de Mn2+. La actividad de MetAP-1, sin embargo, no se inhibio en absoluto por la nitroxolina independientemente de la presencia de iones metalicos. Se usaron IV-43 y TNP-470 como compuestos de control positivo para los inhibidores de MetAP-1 y MetAP-2, respectivamente.

El ensayo de proliferacion celular se realizo utilizando varios tipos diferentes de celulas de cancer de mama, asf como celulas endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC). La nitroxolina inhibio la proliferacion de todos los tipos celulares con intervalos de CI50 de 2 a 5 |jM. Teniendo en cuenta el hecho de que TNP-470 tiene una selectividad endotelial de aproximadamente 1.000 veces sobre otros tipos de lmeas celulares de cancer, la nitroxolina no tiene selectividad celular (figura 1, Tabla 1, panel derecho).

La Nitroxolina inhibe la actividad de MetAP-2 in vivo

Para verificar el efecto de la nitroxolina sobre MetAP-2 en el entorno fisiologico, se llevaron a cabo ensayos de crecimiento de celulas de levadura mutante. Dado que dos MetAP eucariotas son funcionalmente complementarios entre sf, la levadura puede sobrevivir bajo la deficiencia genetica de uno de los isotipos de MetAP. El tratamiento de la levadura de tipo silvestre con nitroxolina o TNP-470 no inhibio el crecimiento de la levadura. El crecimiento del mutante de delecion de MetAP-1 (map1A), sin embargo, se inhibio de forma significativa por nitroxolina o TNP-470. El tratamiento con nitroxolina o TNP-470 no afecto al crecimiento del mutante de delecion de MetAP-2 que no tiene su diana analoga, lo que sugiere que MetAP-2 es una diana fisiologica tanto de nitroxolina como de TNP-470 (figura 2A).

Se conoce 14-3-3y como un sustrato de MetAP eucariotas y se ha informado que la inhibicion de cualquiera de los isotipos de MetAP aumenta la forma metionil N-terminal de la protema. Como es de esperar, el tratamiento de HUVEC con nitroxolina aumento de forma dependiente de la dosis el 14-3-3y metioninilado N-terminal, que se detecto por el anticuerpo espedfico de N-metionil 14-3-3y (figura 2). Para estimar cuanta porcion del total de 14-3-3y no es procesada por la nitroxolina, se desactivo la expresion de hMetAP2 endogeno usando un ARNsi espedfico y se analizo el procesamiento de 14-3-3y en HUVEC. Una cantidad tan baja como 5 nM de tratamiento con ARNsi de hMetAP2 durante 48 h indujo mas del 90 % de desactivacion de hMetAP2 como se muestra por la transferencia de Western (figura 2). La forma no procesada de 14-3-3y se aumento significativamente despues de la desactivacion de hMetAP2. En comparacion con ARNsi de hMetAP2, 5 jM de nitroxolina inhibieron el procesamiento de 14-3-3y en ~80 %. TNP-470 bloqueo completamente el procesamiento de 14-3-3y por hMetAP2 a 10 nM (figura 2). Estos resultados demuestran que la nitroxolina inhibe la actividad de hMetAP2 in vivo. Como la CI50 de nitroxolina para la inhibicion de hMetAP1 es superior a 50 jM, la inhibicion de esta enzima no puede explicar la retencion de la metionina N-terminal en 14-3-3y.

La nitroxolina activa las rutas de p53 y Rb en HUVEC

Se ha demostrado previamente que el efecto del ciclo celular de TNP-470 esta mediado a traves de la activacion de la ruta de p53, la cual esta acompanada por un aumento de p21 y la inhibicion de la hiperfosforilacion de Rb por el

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complejo ciclina E/Cdk2 cinasa (Zhang, Y. y col (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 97, 6427-6432; Yeh, J. R. y col (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12782-12787). Similar al TNP-470, el tratamiento con nitroxolina tambien condujo a un aumento del nivel de protema p53 (figura 3A). En contraste con TNP-470, sin embargo, la nitroxolina no tuvo efecto sobre la expresion de p21 dentro de las 24 h del tratamiento. Ademas, tanto la nitroxolina como el TNP-470 aumentaron la cantidad total de protema Rb (mostrada en el 12 % de SDS-PAGE) e inhibieron su hiperfosforilacion, dando lugar a la acumulacion de Rb hipofosforilado con el tiempo (mostrado en un 8 % de SDS- pAgE). De forma interesante, la exposicion prolongada (hasta 72 h) de HUVEC a la nitroxolina indujo un aumento sostenido en el nivel de protema p53. De forma analoga, el nivel de protema de p21 se aumento tras mas tiempo de incubacion de las celulas endoteliales con nitroxolina (figura 3). A nivel de ARNm, sin embargo, p53 disminuyo, mientras que p21 se aumento tras el tratamiento con nitroxolina de una manera dependiente del tiempo (figura 3). Estos datos indican que aunque la nitroxolina redujo la transcripcion de p53 tras un tratamiento prolongado, aumento la estabilidad de la protema y la actividad transcripcional de p53 en HUVEC.

La nitroxolina induce la senescencia prematura en las celulas endoteliales.

Las HUVEC que se trataron con nitroxolina, pero no con TNP-470, sufrieron cambios morfologicos similares a los de un pase extendido en cultivo. Se sabe que el cultivo de celulas endoteliales primarias se convierte en senescente tras pases repetidos en cultivo, un proceso denominado senescencia replicativa. La senescencia tambien puede ocurrir en respuesta a tensiones agudas, tales como irradiacion UV o tratamiento con farmacos quimioterapeuticos, que se conoce como senectud prematura inducida por estres. A continuacion, el cambio morfologico causado por la nitroxolina, que se acompano de senescencia prematura utilizando un sustrato de p-galactosidasa asociado a senescencia permeable a las celulas (SA-p-gal) se determino. El tratamiento de HUVEC con acido valproico 0,1 mM, un inhibidor conocido de histona desacetilasa usado como control positivo, durante 72 h indujo una senescencia prematura en HUVEC (figura 4A). Similar a acido valproico, la nitroxolina tambien indujo la senescencia prematura en HUVEC. A 20 nM, una concentracion que es suficiente para inhibir la proliferacion de HUVEC, sin embargo, TNP- 470 no indujo senescencia prematura. A continuacion se probo si la senescencia inducida por la nitroxolina es reversible. Las HUVEC se trataron con nitroxolina durante 72 h y el medio de cultivo que contema nitroxolina se reemplazo con medio nuevo seguido de incubacion durante 48 h adicionales. A juzgar por tincion con SA-p-gal, las HUVEC tratadas con nitroxolina (nitroxolina-R) permanecieron senescentes mientras que las tratadas con acido valproico (acido valproico-R) invirtieron su estado de senescencia (figura 4A y B). Estos resultados demuestran que, a diferencia del TNP-470, la nitroxolina indujo senescencia prematura sostenida en HUVEC. Dado que la nitroxolina es citostatica en lugar de citotoxica para las celulas endoteliales, es probable que la activacion de p53, p21 e inhibicion de la ruta de Rb este implicada en la induccion de senescencia prematura en las celulas endoteliales.

La nitroxolina induce la acetilacion de p53 a K382 e inhibe la actividad de SirTI.

La familia de sirtuina humana consiste en 7 isoformas (SirT1 a 7) cuyo dominio catalttico es homologo a la levadura Sir2. Se sabe que cada isoforma de sirtuina humana tiene diferente especificidad de sustrato. Por ejemplo, se sabe que SirT1 desacetila p53 espedficamente en la posicion K382, mientras que SirT2 se describe como una tubulina desacetilasa. Para ver si la nitroxolina o los compuestos de la invencion inducen hiperacetilacion de estos sustratos de sirtuina, se trataron HUVEC con diversos compuestos durante un tiempo corto (6 h) o largo (20 h) y se analizo el estado de acetilacion de diversos sustratos de sirtuina. En primer lugar, la nitroxolina no cambio el estado de acetilacion ni de la tubulina ni de la histona-H3, mientras que el sirtinol (inhibidor de la sirtuina vegetal) y TSA (inhibidor de HDAC de las clases I y II) indujeron hiperacetilacion de los sustratos (figura 5A). La nitroxolina, sin embargo, aumento la acetilacion de p53-K382 en HUVEC tratadas durante 20 h. TSA aumento la acetilacion de p53 en un punto de tiempo temprano. A continuacion, se realizaron ensayos de sirtuina in vitro basados en la desacetilacion de sustratos fluorogenicos por enzimas de sirtuina recombinantes purificadas. La nitroxolina inhibio la actividad SirT1 con un valor CI50 de 8 pM (figura 5B). La inhibicion de SirT1 por nitroxolina fue relativamente selectiva sobre SirT2 y SirT3 cuyos los valores de CI50 son 43 y >50 pM, respectivamente. Como se muestra en la figura 6A, la alta concentracion de nitroxolina (20 pM) no aumento la acetilacion de p53. A continuacion se examino el efecto de diversas concentraciones de nitroxolina sobre la acetilacion de p53 en HUVEC. De manera interesante, la nitroxolina mostro una induccion bifasica de p53 acetilacion con un pico a 4~5 pM (figura 5C y D). El nivel del propio p53 tambien se aumento por la nitroxolina, pero la tasa de aumento fue mucho menor que la de la acetilacion.

El efecto de la nitroxolina imita la inhibicion concurrente de MetAP2 y SirTI en HUVEC.

Se sabe que SirT2 es una tubulina desacetilasa (North, B. J. y col (2003) Mol. Cell, 11, 437-444). La inhibicion farmacologica de SirT2 aumenta la acetilacion de tubulina e histona en presencia de TSA (Lain, S. y col (2008) Cancer Cell, 13, 454-463). Como se muestra en la figura 6A, la nitroxolina en solitario no indujo la acetilacion de tubulina o histona-H3 en HUVEC. En presencia de TSA, sin embargo, la nitroxolina a 20 pM aumento significativamente la acetilacion tanto de la tubulina como de la histona-H3, demostrando que la nitroxolina inhibe la actividad de SirT2 a alta concentracion. EX527 como un inhibidor espedfico conocido de SirT1 indujo levemente la acetilacion de p53-K382 en HUVEC. Sin embargo, no aumento la acetilacion de tubulina o histona-H3 incluso en presencia de TSA (figura 6B), lo que confirma que EX527 no inhibe SirT2 a la concentracion utilizada en este estudio. El efecto de la inhibicion concurrente de MetAP2 y SirT1 sobre la acetilacion de p53 en HUVEC se examino utilizando inhibidores espedficos de moleculas pequenas y ARNsi. Ambos ARNsi contra SirT1 o MetAP2 disminuyo con exito la expresion de cada protema como se confirmo por transferencia de Western. En comparacion con el

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control, SirTI-siRNA aumento ligeramente la acetilacion de p53 (figura 6C). La induccion de la acetilacion de p53 por SirTI-siRNA se aumento incluso en presencia de TNP470 o MetAP2-siRNA en HUVEC. TSA no aumento la acetilacion de p53 inducida por SirTl-siRNA. Se obtuvieron resultados similares con inhibidores de moleculas pequenas de SirTI y MetAP2. EX527 en solitario indujo ligeramente la acetilacion de p53 mientras que el co- tratamiento con TNP470 aumento significativamente la acetilacion de p53 en HUVEC (figura 6D). El nivel de protema de p53 tambien se aumento cooperativamente por EX527 y TNP470.

La inhibicidn concurrente de MetAP2 y SirTI actua sinergicamente sobre la proliferacion y la senescencia de HUVEC.

La velocidad de induccion de la acetilacion de p53 por la nitroxolina fue mucho mayor que la de EX527, aunque EX527 es un inhibidor altamente potente de SirTI (CI50 = 38 nM). Esto se debe probablemente a la inhibicion simultanea de SirTI y MetAP2 por la nitroxolina, ya que la inhibicion simultanea de SirTI y MetAP2 aumento cooperativamente el nivel de acetilacion de p53. Se llevo a cabo un experimento para determinar si la inhibicion concurrente de MetAP2 y SirTI actua sinergicamente sobre la proliferacion y la senescencia de HUVEC. En primer lugar, HUVEC se trataron con diversas concentraciones de EX527 en presencia o ausencia de TNP470 y la acetilacion de p53 se midio por transferencia de Western. Como era de esperar, EX527 y TNP470 indujeron sinergicamente la acetilacion de p53 en HUVEC (figura 7A-C). Al igual que la nitroxolina, la induccion de la acetilacion de p53 por EX527 en solitario o EX527 mas TNP470 fue dependiente de la dosis, patron bifasico. Se sabe que la inhibicion de SirTI induce un fenotipo parecido de tipo senescencia prematuro en HUVEC (Ota, H. y col (2007) J Mol Cell Cardiol., 43, 571-579). En este estudio, EX527 en solitario indujo la senescencia prematura en HUVEC, mientras que TNP470 no (figura 7D). El co-tratamiento de HUVEC con EX527 y tNp470 indujo sinergicamente senescencia prematura en HUVEC segun se determino por tincion con SA-p-Gal. La inhibicion concurrente de SirTI y MetAP2 tambien mostro una sinergia en la inhibicion de la proliferacion de HUVEC segun se confirmo por el grafico del fndice de Combinacion (CI) (figura 7E). Estos resultados explican por que la nitroxolina mostro una potencia mucho mayor en la induccion de la acetilacion de p53 y la inhibicion de la proliferacion de HUVEC que EX527 aunque EX527 es un inhibidor mucho mas potente de SirTI.

Nitroxolina inhibe la angiogenesis in vitro e in vivo.

Para determinar si la nitroxolina es eficaz para bloquear la angiogenesis, se empleo utilizo por primera vez un ensayo de formacion de tubos in vitro. Cuando se cultivan en un matrigel tridimensional, las HUVEC forman estructuras tubulares que recuerdan a los vasos. La formacion de tubos de HUVEC se inhibio por la nitroxolina de una manera dependiente de la dosis (figura 8A). Anteriormente, se sabe que la inhibicion de SirTI puede suprimir suficientemente la angiogenesis in vitro e in vivo (Potente, M. y col (2007) Genes Dev., 21, 2644-2658). No es de extranar que EX527 (1 jM) inhibio la formacion de tubos (figura 8A). TNP470, sin embargo, no inhibio la formacion de tubos a una concentracion de 10 nM a la que el compuesto puede inhibir suficientemente la proliferacion de HUVEC. TNP470 parece actuar sobre la progresion del ciclo celular G1 en las celulas endoteliales, inhibiendo asf la proliferacion celular. Dado que la formacion de tubos requiere la diferenciacion de celulas endoteliales pero no la proliferacion, es probable que TNP470 no tenga ningun efecto sobre la formacion de celulas endoteliales. Sin embargo, el tratamiento combinado de HUVEC con EX527 y TNP470 inhibio sinergicamente la formacion de tubos de HUVEC (figura 8A y B). Despues, se determino la eficacia de la nitroxolina en el bloqueo de la angiogenesis en un modelo de Matrigel in vivo. Matrigel que contema FGF y VEGF basicos se inyecto por via subcutanea en ratones, los cuales fueron pretratados con control de vehmulo o nitroxolina. Diez dfas despues de la inyeccion inicial, los tapones de Matrigel se retiraron y los vasos sangumeos recien invadidos se visualizaron microscopicamente (figura 8C). En comparacion con los animales tratados con vehmulo, los que se trataron con nitroxolina a 60 mg/kg tuvieron una reduccion dramatica en la densidad de nuevos vasos sangumeos (figura 8D y E).

Inhibicion del xenoinjerto de cancer de mama por nitroxolina in vivo.

Habiendo observado un efecto inhibidor claro de la nitroxolina sobre la angiogenesis tanto in vitro como in vivo, se examino su efecto sobre el crecimiento de cancer de mama en un modelo de xenoinjerto de raton. Las celulas de cancer de mama HCC 1954 se trasplantaron por via subcutanea en ratones sin pelo y los animales se trataron con vehmulo o nitroxolina todos los dfas a traves de inyeccion i.p. durante un total de 30 dfas. La nitroxolina bloqueo significativamente el crecimiento de xenoinjertos HCC1954 comenzando el dfa 15 con una inhibicion del 55 % el dfa 30 (figura 9A y B). Para ver si la nitroxolina afecta a la actividad de SirT1 in vivo, se analizo el nivel de protema y el estado de acetilacion de p53 en los tejidos tumorales. Como se muestra en la figura 9C, la nitroxolina indujo significativamente la acetilacion de p53 en todos los tejidos tumorales representativos. El nivel de protema p53 tambien se aumento con nitroxolina, lo que sugiere que la nitroxolina inhibio la actividad de SirT1 y MetAP2 in vivo. Para evaluar si la inhibicion del crecimiento tumoral esta acompanada por la inhibicion de la angiogenesis, se realizo la tincion inmunohistoqmmica de los tejidos tumorales utilizando anticuerpos anti-CD31, un marcador para nuevos vasos sangumeos. La nitroxolina inhibe fuertemente la angiogenesis asociada al tumor, lo que indica que es capaz de bloquear la angiogenesis inducida por tumores in vivo (figura 9D y E).

V. Composiciones farmaceuticas/procedimientos de administracion

En un aspecto, la invencion proporciona una composicion para su uso que comprende un compuesto de la invencion

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y un agente terapeutico adicional. En una realizacion, el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de metionina aminopeptidasa. En una realizacion, el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de la angiogenesis. En otra realizacion, el agente terapeutico adicional es un compuesto contra el cancer.

En otro aspecto, la invencion proporciona una composicion farmaceutica para su uso que comprende un compuesto de la invencion y un excipiente farmaceuticamente adecuado.

La presente invencion se refiere tambien a composiciones farmaceuticas para su uso que comprenden una cantidad eficaz de uno o mas compuestos de acuerdo con la presente invencion (incluyendo una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos), opcionalmente junto con un vehnculo, excipiente o aditivo farmaceuticamente aceptable.

Un "derivado o profarmaco farmaceuticamente aceptable" significa cualquier sal farmaceuticamente aceptable, ester, sal de un ester, u otro derivado de un compuesto de la presente invencion que, tras la administracion a un receptor, sea capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de la presente invencion.

Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar por via oral, parenteral, por pulverizacion por inhalacion, rectal, vaginal, o topica en formulaciones de unidades de dosificacion que contienen portadores, adyuvantes, y vehnculos farmaceuticamente aceptables convencionales. El termino parenteral, como se usa en el presente documento, incluye subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, tecnicas de infusion, intraperitoneal, en ojo u ocular, intrabucal, transdermica, intranasal, en el cerebro, incluyendo intracraneal e intradural, en las articulaciones, incluyendo tobillos, rodillas, caderas, hombros, codos, munecas, directamente en tumores, y similares, y en forma de supositorio.

Los compuestos farmaceuticamente activos de la presente invencion pueden procesarse de acuerdo con procedimientos convencionales de farmacia para producir agentes medicinales para administracion a pacientes, incluyendo seres humanos y otros mairnferos.

Las modificaciones del compuesto activo pueden afectar a la solubilidad, biodisponibilidad y velocidad de metabolismo de la especie activa, proporcionando asf control sobre el suministro de la especie activa. Ademas, las modificaciones pueden afectar a la actividad antiangiogenesis del compuesto, en algunos casos aumentando la actividad sobre el compuesto original. Esto se puede evaluar facilmente preparando el derivado y ensayando su actividad de acuerdo con procedimientos conocidos y dentro de la capacidad del experto en la tecnica.

Las composiciones farmaceuticas basadas en estos compuestos qmmicos comprenden los compuestos descritos anteriormente en una cantidad terapeuticamente eficaz para tratar enfermedades y afecciones que se han descrito en el presente documento, opcionalmente junto con un aditivo, vehnculo y/o excipiente farmaceuticamente aceptable. Un experto en la tecnica reconocera que una cantidad terapeuticamente eficaz de uno o mas compuestos de acuerdo con la presente invencion variara con la infeccion o afeccion a tratar, su gravedad, el regimen de tratamiento a emplear, la farmacocinetica del agente utilizado, asf como el paciente (animal o humano) tratado.

Para preparar las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion, una cantidad terapeuticamente eficaz de uno o mas de los compuestos de acuerdo con la presente invencion se mezcla preferentemente mtimamente con un vehnculo farmaceuticamente aceptable de acuerdo con las tecnicas de combinacion farmaceuticas convencionales para producir una dosis. Un vehnculo puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion, por ejemplo, oral, topica o parenteral, incluyendo geles, cremas, unguentos, lociones y preparaciones implantables liberadas en el tiempo, entre muchos otros. En la preparacion de composiciones farmaceuticas en forma de dosificacion oral, puede usarse cualquiera de los medios farmaceuticos habituales.

El compuesto activo se incluye en el vehnculo o diluyente farmaceuticamente aceptable en una cantidad suficiente para administrar a un paciente una cantidad terapeuticamente eficaz para la indicacion deseada, sin causar efectos toxicos graves en el paciente tratado.

Las composiciones orales incluiran generalmente un diluyente inerte o un vehnculo comestible. Pueden encerrarse en capsulas de gelatina o comprimirse en comprimidos. Con el fin de la administracion terapeutica oral, el compuesto activo o su derivado de profarmaco puede incorporarse con excipientes y utilizarse en forma de comprimidos, trociscos, o capsulas. Pueden incluirse como parte de la composicion agentes de union farmaceuticamente compatibles, y/o materiales adyuvantes.

Los comprimidos, pfldoras, capsulas, trociscos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidon o lactosa, un agente dispersante tal como acido algmico o almidon de mafz; un lubricante tal como estearato de magnesio; un emoliente tal como dioxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saponfero tal como menta, salicilato de metilo o aroma de naranja. Cuando la forma unitaria de dosificacion es una capsula, puede contener, ademas del material del tipo anterior, un vehnculo lfquido tal como un aceite graso. Ademas, Ademas, las formas unitarias de dosificacion pueden contener diversos materiales diferentes que modifican la forma ffsica de la unidad de dosificacion, por ejemplo, recubrimientos de azucar, goma laca o agentes entericos.

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Las formulaciones de la presente invencion adecuadas para administracion oral pueden presentarse como unidades discretas como capsulas, obleas o comprimidos conteniendo cada una una cantidad predeterminada del principio activo; como polvo o granulos; como una solucion o una suspension en un lfquido acuoso o un lfquido no acuoso; o en forma de una emulsion lfquida de aceite en agua o una emulsion de agua en aceite y como un bolo, etc.

Un comprimido puede prepararse por compresion o moldeado, de manera opcional con uno o mas ingredientes accesorios. Los comprimidos de compresion pueden prepararse prensando en una maquina adecuada el principio activo en forma fluida como polvo o granulos, mezclado opcionalmente con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, agente de superficie activa o dispersante. Los comprimidos moldeables pueden hacerse moldeando en una maquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente lfquido inerte. Los comprimidos opcionalmente pueden recubrirse o ranurarse y pueden formularse para proporcionar una liberacion lenta o controlada del principio activo de los mismos.

Los procedimientos de formulacion de tales composiciones de liberacion lenta o controlada de principios farmaceuticamente activos, se conocen en la tecnica y se describen en varias patentes de Estados Unidos expedidas, algunas de las cuales incluyen, pero sin limitacion, las Patentes de Estados Unidos n.° 3.870.790; 4.226.859; 4.369.172; 4.842.866 y 5.705.l9o. Los revestimientos pueden usarse para la administracion de compuestos al intestino (veanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos n.° 6.638.534, 5.541.171, 5.217.720, y 6.569.457, y referencias citadas en las mismas).

El compuesto activo o la sal farmaceuticamente aceptable del mismo tambien se puede administrar como un componente de un elixir, suspension, jarabe, oblea, goma de mascar o similar. Un jarabe puede contener, ademas de los principios activos, sacarosa o fructosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y aromas.

Las soluciones o suspensiones utilizadas para la aplicacion parenteral, intradermica, subcutanea o topica pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente esteril tal como agua para inyeccion, solucion salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sinteticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bendlico o metilparabenos; antioxidantes tales como acido ascorbico o bisulfito sodico; agentes quelantes tales como acido etilendiaminotetraacetico; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sodico o dextrosa.

En una realizacion, los compuestos activos se preparan con vehnculos que protegeran el compuesto contra la eliminacion rapida del cuerpo, tal como una formulacion de liberacion controlada, incluyendo implantes y sistemas de administracion microencapsulados. Pueden usarse polfmeros biodegradables, biocompatibles, tales como etileno- acetato de vinilo, polianhndridos, acido poliglicolico, colageno, poliortoesteres, y acido polilactico. Los procedimientos para la preparacion de dichas formulaciones seran evidentes para los expertos en la tecnica.

Un experto en la tecnica reconocera que ademas de los comprimidos, se pueden formular otras formas de dosificacion para proporcionar una liberacion lenta o controlada del principio activo. Tales formas de dosificacion incluyen, pero sin limitacion, capsulas, granulaciones y capsulas de gel.

Las suspensiones liposomicas tambien pueden ser vehnculos farmaceuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos por los expertos en la tecnica. Por ejemplo, las formulaciones liposomicas pueden prepararse disolviendo lfpidos apropiados en un disolvente inorganico que luego se evapora, dejando detras una fina pelfcula de lfpido seco sobre la superficie del recipiente. Despues se introduce una solucion acuosa del compuesto activo en el recipiente. El recipiente se hace girar luego a mano para liberar el material lipfdico de los lados del recipiente y para dispersar los agregados lipfdicos, formando de este modo la suspension liposomica. Otros procedimientos de preparacion ya conocidos por los expertos en la materia pueden usarse tambien en este aspecto de la presente invencion.

Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse mediante tecnicas farmaceuticas convencionales. Tales tecnicas incluyen la etapa de poner en asociacion el principio activo y el (los) vehnculo(s) o excipiente(s) farmaceutico(s). En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociacion de manera uniforme e mtima al principio activo con los vehnculos lfquidos o vehnculos solidos finamente divididos o ambos, y, despues, si es necesario, dando forma al producto.

Las formulaciones y composiciones adecuadas para administracion topica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden los ingredientes en una base aromatizada, generalmente sacarosa y goma arabiga o tragacanto; pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente a administrar en un vehfculo lfquido adecuado.

Las formulaciones adecuadas para administracion topica a la piel pueden presentarse como unguentos, cremas, geles y pastas que comprenden el ingrediente a administrar en un vehnculo farmaceuticamente aceptable. Un sistema de administracion topico preferido es un parche transdermico que contiene el ingrediente a administrar.

Las formulaciones para administracion rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

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Las formulaciones adecuadas para la administracion nasal, en las que el vetnculo es un solido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamano de partfcula, por ejemplo, en el intervalo de 20 a 500 micrometros que se administra de la manera en que se administra el rape, es dedr, por inhalacion rapida a traves de las fosas nasales a partir de un envase con el polvo sujetado cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas, en las que el veldculo es un lfquido, para su administracion, como por ejemplo, un pulverizador nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo.

Las formulaciones adecuadas para administracion vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverizacion que contienen ademas del principio activo, vehnculos tales como se conocen en la tecnica como apropiados.

La preparacion parenteral se puede encerrar en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis multiple hechos de vidrio o plastico. Si se administran por via intravenosa, los vehnculos preferidos incluyen, por ejemplo, solucion salina fisiologica o solucion salina tamponada con fosfato (PBS).

Para las formulaciones parenterales, el vehnculo usualmente comprendera agua esteril o solucion acuosa de cloruro sodico, aunque pueden incluirse otros ingredientes incluyendo los que ayudan a la dispersion. Por supuesto, cuando se va a usar y mantener el agua esteril como esteril, las composiciones y los vehnculos tambien deben esterilizarse. Tambien pueden prepararse suspensiones inyectables, en cuyo caso pueden emplearse vehnculos lfquidos apropiados, agentes de suspension y similares.

Las formulaciones que son adecuadas para administracion parenteral incluyen soluciones esteriles acuosas y no acuosas para inyeccion que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que hagan que la formulacion sea isotonica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones acuosas y no acuosas esteriles que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en contenedores monodosis o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en estado liofilizado requiriendo unicamente la adicion del vehnculo lfquido esteril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea pueden prepararse a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos del tipo descrito anteriormente.

La administracion del compuesto activo puede variar desde continua (goteo intravenoso) a varias administraciones orales al dfa (por ejemplo, Q.I.D.) y puede incluir administracion oral, topica, en ojo u ocular, parenteral, intramuscular, intravenosa, subcutanea, transdermica (que puede incluir un agente potenciador de la penetracion), bucal y supositorios, entre otras vfas de administracion, incluso a traves de una via ocular.

La aplicacion de los agentes terapeuticos en cuestion puede ser local, de manera que se administre en el sitio de interes. Pueden usarse diversas tecnicas para proporcionar las composiciones en cuestion en el sitio de interes, tales como inyeccion, uso de cateteres, trocares, proyectiles, gel pluronico, endoprotesis vasculares, polfmeros de liberacion de farmaco sostenida u otro dispositivo que proporcione acceso interno. Cuando un organo o tejido es accesible debido a la retirada del paciente, dicho organo o tejido puede banarse en un medio que contiene las composiciones en cuestion, las composiciones en cuestion pueden pintarse sobre el organo o pueden aplicarse de cualquier manera conveniente.

El compuesto se puede administrar a traves de un dispositivo adecuado para la liberacion controlada y sostenida de una composicion eficaz para obtener un efecto fisiologico o farmacologico local o sistemico deseado. El procedimiento incluye posicionar el sistema de suministro de farmaco liberado de forma sostenida en un area en la que se desea la liberacion del agente y permitir que el agente pase a traves del dispositivo hasta el area de tratamiento deseada.

Debe entenderse que ademas de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones de la presente invencion pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica que tengan relacion con el tipo de formulacion en cuestion, por ejemplo, los adecuados para administracion oral pueden contener agentes saponferos.

En deltas formas de dosificacion farmaceuticas, la forma pro-farmaco de los compuestos puede ser preferida. Un experto en la tecnica reconocera como modificar facilmente los presentes compuestos en formas pro-farmaco para facilitar el suministro de compuestos activos a un sitio dirigido dentro del organismo huesped o paciente. El experto tambien aprovechara los parametros farmacocineticos favorables de las formas pro-farmaco, cuando sea aplicable, en la administracion de los presentes compuestos a un sitio diana dentro del organismo huesped o paciente para maximizar el efecto deseado del compuesto.

Los profarmacos preferidos incluyen derivados en los que un grupo que mejora la solubilidad acuosa o el transporte activo a traves de la membrana intestinal se anade a la estructura de las formulas descritas en el presente documento. Veanse, por ejemplo, Alexander, J. y col. Journal of Medicinal Chemistry 1988, 31.318-322; Bundgaard, H. Design of Prodrugs; Elsevier: Amsterdam, 1985; pags. 1-92; Bundgaard, H.; Nielsen, N. M. Journal of Medicinal Chemistry 1987, 30, 451-454; Bundgaard, H. A Textbook of Drug Design and Development; Harwood Academic Publ.: Suiza 1991; pags. 113-191; Digenis, G. A. y col. Handbook of Experimental Pharmacology 1975, 28, 86-112; Friis, G. J.; Bundgaard, H. A Textbook of Drug Design and Development; 2 ed.; Overseas Publ.: Amsterdam, 1996; pags. 351-385; Pitman, I. H. Medicinal Research Reviews 1981, 1, 189-214. Las formas de profarmaco pueden ser

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ellas mismas activas, o pueden ser aquellas que, cuando se metabolizan despues de la administracion, proporcionan el agente terapeutico activo in vivo.

Las formas de sal farmaceuticamente aceptables pueden ser la forma qmmica preferida de los compuestos de acuerdo con la presente invencion para su inclusion en composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion.

Algunos de los compuestos, en forma de dosificacion farmaceutica, se pueden usar como agentes para evitar que una enfermedad o afeccion se manifieste. En ciertas formas de dosificacion farmaceuticas, puede preferirse la forma pro-farmaco de los compuestos de acuerdo con la presente invencion. En particular, las formas de profarmaco que se basan en grupos ester de Ci a C20 o grupos amida (preferentemente un hidroxilo, amina libre o grupo de nitrogeno sustituido) que pueden transformarse, por ejemplo, en una amida u otro grupo pueden ser particularmente utiles en este contexto.

Los presentes compuestos o sus derivados, incluyendo las formas de profarmacos de estos agentes, pueden proporcionarse en forma de sales farmaceuticamente aceptables. Como se usa en el presente documento, la expresion sales o complejos farmaceuticamente aceptables se refiere a sales o complejos apropiados de los compuestos activos de acuerdo con la presente invencion que retienen la actividad biologica deseada del compuesto parental y muestran efectos toxicologicos limitados a celulas normales. Los ejemplos no limitantes de dichas sales son (a) sales de adicion de acidos formadas con acidos inorganicos (por ejemplo, acido clorhndrico, acido bromhfdrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido mtrico, y similares), y sales formadas con acidos organicos tales como acido acetico, acido oxalico, acido oxalico, acido tartarico, acido succmico, acido malico, acido ascorbico, acido benzoico, acido tanico, acido pamoico, acido algmico y acido poliglutamico, entre otros; (b) sales de adicion de bases formadas con cationes metalicos tales como cinc, calcio, sodio, potasio y similares, entre muchos otros.

Las formulaciones de dosificacion unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis o unidad diaria, sub-dosis diaria, segun se ha indicado anteriormente en el presente documento, o una fraccion adecuada de las mismas, del ingrediente administrado.

El regimen de dosificacion para tratar un trastorno o una enfermedad con los compuestos inhibidores de hMetAP o compuestos inhibidores de la angiogenesis de la presente invencion y/o composiciones de la presente invencion se basa en una diversidad de factores, incluyendo el tipo de enfermedad, la edad, el peso, el sexo, la afeccion medica del paciente, la gravedad de la afeccion, la via de administracion y el compuesto particular empleado. Por lo tanto, el regimen de dosificacion puede variar ampliamente, pero puede determinarse rutinariamente usando procedimientos estandar.

Las cantidades y los regfmenes de dosificacion administrados a un sujeto dependeran de una serie de factores, tales como el modo de administracion, la naturaleza de la afeccion que se esta tratando, el peso corporal del sujeto que se esta tratando y el criterio del medico tratante.

La cantidad de compuesto incluido en formulaciones terapeuticamente activas de acuerdo con la presente invencion es una cantidad eficaz para tratar la infeccion o afeccion. En general, una cantidad terapeuticamente eficaz del presente compuesto preferido en forma de dosificacion generalmente vana entre ligeramente menos de aproximadamente 0,025 mg/kg/dfa a aproximadamente 2,5 g/kg/dfa, preferentemente de aproximadamente 0,1 mg/kg/dfa a aproximadamente 100 mg/kg/dfa del paciente o considerablemente mas, dependiendo del compuesto utilizado, de la afeccion o infeccion tratada y de la via de administracion, aunque pueden contemplarse excepciones a este intervalo de dosis en la presente invencion. En su forma mas preferida, los compuestos de acuerdo con la presente invencion se administran en cantidades que vanan de aproximadamente 1 mg/kg/dfa a aproximadamente 100 mg/kg/dfa. La dosificacion del compuesto dependera de la afeccion a tratar, del compuesto particular y de otros factores clmicos tales como el peso y la condicion del paciente y la via de administracion del compuesto. Debe apreciarse que la presente invencion tiene aplicacion tanto para uso humano como veterinario.

El compuesto se administra convenientemente en cualquier forma de dosificacion unitaria adecuada, incluyendo, pero sin limitacion, una que contiene de 1 a 3000 mg, preferentemente de 5 a 500 mg de principio activo por forma de dosificacion unitaria. Una dosificacion oral de 10-250 mg es generalmente conveniente.

La concentracion de compuesto activo en la composicion del farmaco dependera de las tasas de absorcion, distribucion, inactivacion y excrecion del farmaco, asf como otros factores conocidos por los expertos en la tecnica. Debe observarse que los valores de dosificacion tambien variaran con la gravedad de la afeccion a aliviar. Debe entenderse ademas que para cualquier sujeto particular, los regfmenes de dosificacion espedficos deben ser ajustados en el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administracion de las composiciones y que los intervalos de concentracion expuestos en el presente documento son solo a modo de ejemplo y no pretenden limitar el ambito o la practica de la composicion reivindicada. El principio activo se puede administrar de una vez, o puede dividirse en varias dosis mas pequenas que se van a administrar a intervalos de tiempo variables.

En ciertas realizaciones, el compuesto se administra una vez al dfa; en otras realizaciones, el compuesto se administra dos veces al dfa; aun en otras realizaciones, el compuesto se administra una vez cada dos dfas, una vez

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cada tres dfas, una vez cada cuatro d^as, una vez cada cinco d^as, una vez cada seis d^as, una vez cada siete d^as, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, una vez cada cuatro semanas, una vez cada dos meses, una vez cada seis meses, o una vez al ano. El intervalo de dosificacion se puede ajustar de acuerdo a las necesidades de cada paciente. Para intervalos mas largos de administracion, se pueden usar formulaciones de liberacion prolongada o de deposito.

Los compuestos de la invencion se pueden usar para tratar enfermedades y afecciones que sean agudas, y tambien pueden usarse para el tratamiento de afecciones cronicas. En ciertas realizaciones, los compuestos de la invencion se administran durante penodos de tiempo que exceden de dos semanas, tres semanas, un mes, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses, un ano, dos anos, tres anos, cuatro anos, o cinco anos, diez anos o quince anos; o, por ejemplo, cualquier intervalo de tiempo en dfas, meses o anos en los que el extremo bajo del intervalo sea cualquier penodo de tiempo entre 14 dfas y 15 anos y el extremo superior del intervalo sea entre 15 dfas y 20 anos (por ejemplo, 4 semanas y 15 anos, 6 meses y 20 anos). En algunos casos, puede ser ventajoso que los compuestos de la invencion se administren durante el resto de la vida del paciente. En realizaciones preferidas, el paciente se controla para verificar el avance de la enfermedad o trastorno, y la dosis se ajusta en consecuencia. En realizaciones preferidas, el tratamiento de acuerdo con la invencion es eficaz durante al menos dos semanas, tres semanas, un mes, dos meses, tres meses, cuatro meses, cinco meses, seis meses, un ano, dos anos, tres anos, cuatro anos, o cinco anos, diez anos, quince anos, veinte anos, o para el resto de la vida del sujeto.

En un aspecto, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula I y un excipiente farmaceuticamente adecuado.

Aun otros objetos, caractensticas, y ventajas concomitantes de la presente invencion resultaran evidentes para los expertos en la tecnica a partir de una lectura de la descripcion detallada anterior de realizaciones construidas de acuerdo con la misma, tomada conjuntamente con cualquier dibujo adjunto.

La invencion se describira adicionalmente en los siguientes ejemplos. Debe entenderse que estos ejemplos son solo con fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitativos de la presente invencion de ninguna manera.

Ejemplos

PROCEDIMIENTOS GENERALES La cromatograffa de capa fina se realizo con placas de gel de sflice 60 F-254 recubiertas previamente Merck y se visualizaron usando luz UV a 254 nm, o mediante tincion con yodo, tincion de molibdato de amonio cerico. Se uso gel de Sflice (malla de 200-400, Merck) para cromatograffa con chorro de aire. Los reactivos se adquirieron en las compamas Aldrich, Acros, o Lancaster. Los puntos de fusion se registraron en un aparato Mel-Temp II y no se corrigieron. Los datos de RMN se recogieron en una maquina Varian Unity-400 (400 MHz 1H, 100,6 MHz 13C) en el Department of Pharmacology and Molecular Sciences, The Johns Hopkins University. Los espectros de 1H RMN se obtuvieron en deuteriocloroformo (CDCh) con tetrametilsilano (TMS, 8 = 0,00 para 1H) o cloroformo (8 = 7,26 para 1H), o acetona-d6 con TMS o acetona (8 = 2,05 para 1H) como una referencia interna. Los espectros de 13C RMN se desacoplaron en protones y estaban en CDCh con TMS (8 = 0,0 para 13C) o cloroformo (8 = 77,0 para 13C), o acetona-d6 con TMS o acetona (8 = 0,0 para 13C) como una referencia interna. Los desplazamientos qmmicos se informan en ppm (8); las multiplicidades estan indicadas por s (singlete), d (doblete), t (triplete), c (cuadruplete), m (multiplete), dd (doblete de doblete), dt (doblete de triplete), a (ancho), ap. (aparente) e int. (intercambiable); constantes de acoplamiento, J, se indican en Hertzios (Hz); se proporciona integracion; las asignaciones de resonancias individuales se soportan en la mayona de los casos por los siguientes experimentos de RMN: APT/DEPT, COSY, o HMBC y HMqC. Los datos se presentan en la forma: desplazamiento qmmico (multiplicidad, constantes de acoplamiento, integracion y asignaciones cuando sea relevante). Los espectros de masas de baja resolucion se obtuvieron en un instrumento Voyager DE-STR, MALDI-TOF en la instalacion de Espectrometna de Masas/Proteomica de AB en la Universidad Johns Hopkins. Las muestras de MALDI se prepararon mezclando gotitas de las soluciones de muestra en cloroformo o metanol y solucion de acido 2,5- dihidroxibenzoico en acetona, donde esta ultima sirvio de matriz. Los datos se presentan en la forma m/z (intensidad relativa a base = 100). Los disolventes utilizados en las reacciones fueron de grado reactivo. Los disolventes utilizados para la extraccion y la cromatograffa fueron de grado tecnico. El quinolinol 1e y el carbamato 4a se adquirieron de ASDI Inc., Delaware. Todas las reacciones no acuosas se realizaron en cristalena secada al horno.

Ejemplo de referencia 1. Procedimiento general para la smtesis de 7-(2-aminometil)-8-hidroxi-quinolinas

Las bases de Mannich 2a a 2g se prepararon modificando un procedimiento conocido.

imagen15

A una solucion de 8-hidroxiquinolina (1 mmol) en etanol absoluto (15 ml); se le anadieron trietilamina (1,2 mmol) y

paraformaldel'ndo (1,2 mmol, 36,2 mg) y la mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 12 h y se enfrio a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro. La recristalizacion del residuo de 1:1 de EtOH-H2O fue el modo de purificacion a menos que se indique otra cosa.

5-Cloro-7-(W,W-bis(2-hidroxietil)ammometil)-8-hidroxi-qumolma (2a)

5 El producto en bruto obtenido despues de la evaporacion del disolvente de la mezcla de reaccion se sometio a cromatograffa en columna ultrarrapida sobre gel de sflice mientras se eluyo con diclorometano y, por lo tanto, se produjo 2a puro como un jarabe de color ambar (213 mg, 72 %).

Datos analiticos para 2a:

Fr 0,12 (7:3 de hexanos-EtOAc)

1H RMN (400 MHz, CDCla) 8: 8,84 (dd, J = 4,4, 1,3 Hz, 1H, H-2), 8,62 (dd, J = 5,5, 1,3 Hz, 1H, H-4), 8,12 (dd J:

5.5, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,54 (d, J: 5,8 Hz, 1H.H-7), 7,18 (d, J = 5,8 Hz, 1H, H-6), 4,02 (t a, J = 6,7 Hz, 4H, -CH2-OH), 3,86 (s, 2H, -CH2-7), 3,12 (int. s a, 3H, -CH2-OH, 8-OH), 3,05 (t a, J = 6,8 Hz, 4H, -N-CH2-)

MS (MALDI-TOF) m/z: 296 (100)

5-Cloro-7-((N-piperidmo)metil)-8-hidroxi-qumolma (2b)

10 Rendimiento: 265 mg, 96 %

Datos analiticos para 2b:

Fr 0,35 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 92 °C

1H RMN (400 MHz, CDCla) 8: 8,98 (dd, J = 4,4, 1,0 Hz, 1H, H-2), 8,51 (dd, J = 5,6, 1,1 Hz, 1H, H-4), 7,55 (dd, J =

5.6, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,28 (s, 1H, H-6), 3,82 (s, 2H, CH2-7), 2,63 (s a, 5H, 2',6'-piperidina, OH) 1,72 (m, 4H, 3',5'-piperidina), 1,44 (s a, 2H, 4'-piperidina)

MS (MALDI-TOF) m/z: 277 (100)

7-((W-morfolmo)metil)-8-hidroxi-qumolma (2c)

Rendimiento: 230 mg, 94%

Datos analiticos para 2c:

Fr 0,30 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 66 °C

1H RMN (400 MHz, CDCh) 8: 8,94 (dd, J = 3,3, 1,1 Hz, 1H, H-2), 8,59 (dd, J = 4,6, 1,1 Hz, 1H, H-4), 8,12 (dd, J = 4,6 1,2 Hz, 1H, H-5), 7,41 (m, 2H, H-3, H-6), 3,82 (s, 2H, CH2-7), 3,78 (m, 4H, 2,6-morfolina), 2,62 (s a, 4H, 3,5-morfolina), 1,31 (int. s a, 1H, OH)

MS (MALDI-TOF) m/z: 245

15 5-Cloro-7-((W-morfolmo)metil)-8-hidroxi-qumolma (2d)

Rendimiento: 253 mg, 91%

Datos analiticos para 2d:

Fr 0,32 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 128°C

1H RMN (400 MHz, CDCh) 8: 8,93 (dd, J = 3,4, 1,1 Hz, 1H, H-2), 8,52 (dd, J = 4,5, 1,1 Hz, 1H, H-4), 7,57 (dd, J = 4,5, 3,4 Hz, 1H, H-3), 7,41 (s, 1H, H-6), 3,84 (s, 2H, CH2-7), 3,79 (m, 4H, 2,6-morfolina), 2,63 (s a, 4H,

3,5-morfolina), 1,30 (int. s a, 1H, OH)

MS (MALDI-TOF) m/z: 279

5-Cloro-7-(1-(4-metilpiperazino)metil)-8-hidroxi-quinolina (2e)

Rendimiento: 244 mg, 83%

Datos analiticos para 2e:

Fr 0,18 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf. 134 °C

1H RMN (400 MHz, acetona-d6) 5: 8,90 (dd, J = 4,0, 1,2 Hz, 1H, H-2), 8,52 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H, H-4), 7,68 (dd, J = 8,6, 4,2 Hz, 1H, H-3), 7,64 (s, 1H, H-6), 3,81 (s, 2H, CH2-7), 2,84 (int. s a, OH), 2,57 (s a, 4H, piperazina), 2,41 (s a, 4H, piperazina), 2,21 (s, 3H, N-CH3)

MS (MALDI-TOF) m/z: 292

Ejemplo de referencia 2. Procedimiento general para la slntesis de 7-(2-amino-2-arilmetN)-8-hidroxi- quinolinas

imagen16

5 A una solution de 5-cloro-8-hidroxiquinolina (1 mmol, 180 mg) en etanol absoluto (15 ml); se le anadieron trietilamina (1 mmol) y aldehido aromatico (1 mmol) y la mezcla de reaction se agito a temperatura ambiente durante 2 d^as. La mezcla de reaccion se concentro y el residuo se recristalizo en 1:1 de EtOH-H2O.

5-Cloro-7-(1 -fenil-1 -(W-morfoMno)-metM)-8-hidroxi-quinoMna (2f)

Rendimiento: 315 mg, 89% 10 Datos analiticos para 2f:

Fr

pf.

1H RMN

13C RMN

0,35 (7:3 de hexanos-EtOAc)

89 °C

(400 MHz, acetona-d6) 5: 8,91 (par de dds, J = 3,4, 1,2 Hz, 1H, H-2), 8,53 (par de dds, J = 6,5, 1,4 Hz, 1H, H-4), 7,71 (par de dds, J = 6,5, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,61 (par de ds, J = 8,0 Hz, 2H, 2,6-Ph), 7,27 (par de ts, J = 8,0 Hz, 2H, 3,5-Ph), 7,15 (d, 1H, 4-Ph), 3,71 (t a, J = 4,8 Hz, 2H, 2,6-morfolina), 2,88 (s a, 3H,

2,6-morfolina, OH), 2,85 (s a, 1H, -N-CH(Ph)-), 2,47 (s a, 4H, 3,5-morfolina)

(100 MHz, acetona-d6) 5: 153,35, 150,43, 149,97, 149,87, 142,38, 139,99, 133,73, 133,54 (C-4), 129,56 y 128,97 (3,5-Ph), 128,54 y 128,20 (2,6-Ph), 127,26 (4-Ph), 125,92, 125,42, 124,00 (C-3), 123,69 (C-2), 120,86, 111,28, 69,09 y 67,55 (2,6-morfolina), 53,51 (3,5-morfolina) 355 (95)

5-Cloro-7-(1 -(2-furil)-1 -(2-tiazolilamino)-metil)-8-hidroxi-quinolina (2g)

Rendimiento: 258 mg, 72%

Datos analiticos para 2g:

Fr 0,32 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf. 126 °C

1H RMN (400 MHz, CDCls) 5: 8,85 (dd, J = 4,0, 1,6 Hz, 1H, H-2), 8,51 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H, H-4), 7,69 (s, 1H, H-6), 7,57 (dd, J = 8,4, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,41 (dd, J = 2,8, 0,8 Hz, 1H, furil-H5), 7,15 (d, J = 3,6 Hz, 1H, tiazol-H5), 6,55 (d, J = 3,6 Hz, 1H, tiazol-H4), 6,40 (int. s, 1H, -OH), 6,34 (dd, J = 3,2, 2,0 Hz, 1H furil- H3), 6,27 (dd, J = 2,8, 0,8 Hz, 1H, furil-H4), 1,62 (s a, 1H, -NH-)

13C RMN (100 MHz, CDCls) 5: 168,93, 152,62, 149,11, 148,72, 142,47, 138,84, 138,60, 133,13, 126,32, 125,85

122,53, 121,55, 120,61, 110,42, 107,74, 107,11,52,02

MS (MALDI-TOF) m/z: 358 (98)

Ejemplo de referencia 3. Slntesis de 8-Aliloxi-5-cloroquinolina (3a):

imagen17

Una solucion de 5-cloro-8-hidroxiquinolina (1 mmol, 180 mg) en NaOH acuoso (0,25 M, 8 ml; 2 mmol) que contema bromuro de tetrabutilamonio como el catalizador de transferencia de fase (0,1 mmol, 33 mg) se agito durante 30 min, y se anadieron bromuro de alilo (1 mmol, 85 ^l) y benceno (8 ml) y la mezcla de reaccion se agito vigorosamente a 5 50 °C durante 14 h. La mezcla de reaccion se repartio entre agua (15 ml) y EtOAc (15 ml) despues del enfriamiento

a temperatura ambiente y la extraccion se repitio dos veces. Las fases organicas se combinaron y se lavaron con una solucion 1 M de NaOH (15 ml) y se concentraron. El producto en bruto se purifico por cromatografia en columna ultrarrapida sobre gel de sflice usando 1:2 de hexanos-eter como eluyente, proporcionando quinolina 3a en forma de un solido de color pardo claro (170 mg, 64%).

10 Datos analiticos para 3a:

Ft 0,55 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 49 °C

1H RMN (400 MHz, CDCls) 5: 9,04 (dd, J = 4,4, 1,3 Hz, 1H, H-2), 8,58 (dd, J = 5,5, 1,3 Hz, 1H, H-4), 7,56 (dd, J: 5,5, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,54 (d, J: 5,8 Hz, 1H, H-7), 6,99 (d, J = 5,8 Hz, 1H, H-6), 6,31-6,18 (m, 1H, H-2'), 5,48 (dt, J = 15,2, 3,4 Hz, 1H, H-3') 5,37 (dt, J = 9,4, 3,4 Hz, 1H, H-3"), 4,88 (m, 2H, H-1')

13C RMN (100 MHz, CDCls) 5: 149,79, 143,67, 132,92, 132,68, 131,23, 126,27, 125,87, 122,30, 121,98, 118,64

109,07, 69,94 (C-1')

MS (MALDI-TOF) m/z: 220

Smtesis de 8-(2-hidroxietil)5-cloroquinolina (3b):

imagen18

Una mezcla de 5-cloro-8-hidroxiquinolina (1 mmol, 180 mg), carbonato de etileno (2 mmol, 180 mg) y Cs2CO3 (0,6 mmol, 195 mg) en DMF seca (10 ml) se agito vigorosamente a 120 °C durante 3 h. Se evaporo DMF a alto vacm y el 15 residuo se disolvio en agua (15 ml), se extrajo dos veces con diclorometano (15 ml), y el residuo que quedo despues de la evaporacion de diclorometano se sometio a cromatografia sobre gel de sflice (eluyente: 4:1 de hexanos- EtOAc). Se obtuvo un solido de color beige (174 mg, 78%).

Datos analiticos para 3b:

Fr 0,32 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 72 °C

1H RMN (400 MHz, acetona-d6) 5: 8,97 (dd, J = 3,4, 1,6 Hz, 1H, H-2), 8,58 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 1H, H-4), 7,73

(dd, J = 8,8, 4,4 Hz, 1H, H-3), 7,66 (d, J = 8,4 Hz, 1 H, H-7), 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-6), 4,96 (s a, int. 1H, OH), 4,28 (t, J = 4,8 Hz, 2H, H-1'), 3,99 (s a, 2H, H-2')

MS (MALDI-TOF) m/z: 224

Ejemplo de referencia 4. Procedimiento general para la smtesis de carbamato de 8-quinolilo

20 Se anadio trietilamina (3 gotas) a una suspension de 8-hidroxiquinolina (1 mmol) y un isocianato (1 mmol) en eter dietflico (15 ml). La mezcla de reaccion se agito durante 2 dias a temperatura ambiente y el disolvente se retiro usando un evaporador rotatorio y el residuo se sometio a cromatografia en columna ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente:hexanos o EtOAc al 5 % en hexanos), proporcionando el carbamato de quinolilo respectivo.

5.7- Dicloro-8-qumolil-W-(3,5-diclorofeml)-carbamato (4b)

Rendimiento: 233 mg, 58%

Datos analiticos para 4b:

Fr 0,64 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf. 148 °C

1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8: 10,56 (s a, 1H, NH); 8,68 (dd, J = 4,4, 1,6 Hz, 1H, H-2); 8,52 (dd, J = 8,8, 1,5 Hz, 1H, H-4); 7,62 (s, 1H, H-6); 7,59 (dd, J = 8,8, 4,4 Hz, 1H, H-3); 7,12 (t ap., J = 2,0 Hz, 2H, 2,6-aniIina); 7,18 (d, J = 2,0 Hz, 1H, 4-aniIina)

13C RMN (100 MHz, CDCI3) 8: 154,62, 152,44, 149,81, 140,74, 136,15, 135,53, 132,78, 131,33, 128,56, 126,27,

122,30, 121,98, 121,87, 118,52

MS (MALDI-TOF) m/z: 403

5-Cloro-8-qumolil-W-(3,5-diclorofeml)-carbamato (4c)

5 Rendimiento: 300 mg, 82%

Datos analiticos para 4c:

Fr 0,61 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 159 °C

1H RMN (400 MHz, Acetona-d6) 8: 9,88 (s a, 1H, NH), 8,99 (dd, J = 4,4, 1,6 Hz, 1H, H-2), 8,65 (dd, J = 8,6, 1,4

Hz, 1H, H-4), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-7), 7,75 (dd, J = 8,6, 3,8 Hz, 1H, H-3), 7,70 (t ap., J = 2,0 Hz,

2H, H-2,6-aniIina), 7,65 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-6), 7,20 (t ap., J = 2,0 Hz, H-4-aniIina)

13C RMN (100 MHz, Acetona-d6) 8: 152,13, 143,35, 142,40, 135,91, 133,61, 128,96, 127,88, 127,34, 124,02,

123,46, 122,85, 117,63

MS (MALDI-TOF) m/z: 367

5.7- Dicloro-8-qumolil-N-femlcarbamato (4d)

Rendimiento: 253 mg, 76%

Datos anaIiticos para 4d:

Fr 0,66 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 136 °C

1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8: 8,98 (dd, J = 4,3, 1,2 Hz, 1H, H-2), 8,59 (dd, J = 5,8, 1,2 Hz, 1H, H-4), 7,73 (s, 1H

H-6), 7,58 (dd, J = 5,5, 3,4 Hz, 1H, H-3), 7,51 (d ap., J = 6,1 Hz, 2H, H-2,6-aniIina), 7,44 (s a, 1H, NH)

7,37 (t, J = 6,2 Hz, 2H, H-3,5-aniIina), 7,16 (t, J = 6,2 Hz, 1H, H-4-aniIina)

MS (MALDI-TOF) m/z: 333

10 5-Cloro-8-qumolil-N-femlcarbamato (4e)

Rendimiento: 257 mg, 86%

Datos anaIiticos para 4e:

Fr 0,65 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf 129 °C

1H RMN (400 MHz, CDCI3) 8: 9,01 (dd, J = 4,3, 1,2 Hz, 1H, H-2), 8,59 (dd, J = 5,8, 1,2 Hz, 1H, H-4), 7,76 (s a, 1H, NH), 7,63 (d, J = 5,9 Hz, 1H, H-7), 7,58 (m, 2H, H-2,6-aniIina), 7,54 (d, J = 5,9 Hz, 1H, H-6), 7,26 (t, J = 6,2 Hz, 1H, H-3,5-aniIina), 7,13 (t, J = 6,2 Hz, 1H, H-4-aniIina)

MS (MALDI-TOF) m/z: 299

5.7- Dicloro-8-qumolil-W-(4-fluorofeml)-carbamato (4f)

5

Rendimiento:: 312 mg, 89%

Datos anaIfticos para 4f:

Fr: 0,68 (7:3 de hexanos-EtOAc)

&!: 148 °C

1H RMN: (400 MHz, CDCI3) 5: 8,85 (s a, 1H, NH), 7,71 (dd, J = 5,1, 3,3 Hz, 1H, H-2), 7,53 (dd, J = 5,7, 3,5 Hz, 1H, H-4), 7,43 (dd, J = 8,8, 4,8 Hz, 1H, H-3), 7,35 (s, 1H, H-6), 7,28 (t, J = 8,3 Hz, 2H, H-2,6-aniIina), 7,01 (t, J = 8,8, 2H, H-3,5-aniIina)

13C RMN: (100 MHz, CDCI3) 5: 161,14 (d), 149,05, 133,93, 131,99, 131,90, 131,16, 118,03, 117,98, 116,12, 115,90 129,07, 122,90, 122,82,

MS: (MALDI-TOF) m/z: 351

5-Cloro-8-qumolil-N-(3,5-difluorofeml)-carbamato (4 g)

Rendimiento:: OO OO 3 (Q cn O) sp 0s

Datos analfticos para 4g:

Fr: 0,67 (7:3 de hexanos-EtOAc)

&!: 152 °C

1H RMN: (400 MHz, CDCI3) 5: 8,98 (dd, J = 4,4, 1,3 Hz, 1H, H-2); 8,56 (dd, J = 5,5, 1 1H, NH); 7,59 (dd, J = 5,5, 4,4 Hz, 1H, H-3); 7,53 (d, J = 5,8 Hz, 1H, H-7); aniIina); 7,01 (d, J = 5,8 Hz, 1H, H-6); 6,42 (d, J = 6,3 Hz, 1H, 4-aniIina) ,3 Hz, 1H 7,41 (d, , H-4); 8,32 (s a, J = 6,3 Hz, 2,6-

13C RMN: (100 MHz, CDCI3) 5: 165,01 (d), 153,11, 151,23, 150,89, 140,31, 139,46, 122,30, 121,98, 112,47, 109,07 y 108,78 (par de ds), 103,02 (t) 132,92, 128,45, 126,27,

MS: (MALDI-TOF) m/z: 335

5-Cloro-8-qumolil-N-(2-cloroetM)-carbamato (4h)

Rendimiento:: K) 4^ OO 3 (Q OO sp 0s

Datos anaIfticos para 4h:

Fr: 0,54 (7:3 de hexanos-EtOAc)

pf.: 138 °C

1H RMN: (400 MHz, acetona-d6) 5: 8,92 (d, J = 2,8 Hz, 1H, H-2), 8,62 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-4), 7,77-7,69 (m, 2H, H-6,7), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-3), 7,37 (s a, 1H, NH), 3,76 (t, J = 6,4 Hz, 2H, H-2'), 3,59 (c aparente, J = 6 Hz, 2H, H-1')

13C RMN: (100 MHz, acetona-d6) 5: 155,02, 151,75, 151,72, 143,61, 128,20, 127,99, 122,69, 44,08, 43,82 133,50, 127,28, 123,79,

MS: (MALDI-TOF) m/z: 285

5,7-Dicloro-8-qumoMl-W-(2-cloroetil)-carbamato (4i)

Rendimiento:: 233 mg, 73%

Datos anaIfticos para 4i:

Fr: 0,65 (7:3 de hexanos-EtOAc)

&!: 112 °C

1H RMN (400 MHz, acetona-da) 5: 9,00 (dd, J = 4,0, 1,2 Hz, 1H, H-2), 8,60 (dd, J = 8,4, 1,1 Hz, 1H, H-4), 7,88 (s 1H, H-6), 7,75 (dd, J = 8,4, 4,0 Hz, 1H, H-3), 7,54 (s a, 1H, NH), 3,76 (t, J = 6 Hz, 2H, H-2'), 3,61 (c ap., J = 6 Hz, 2H, H-1')

13C RMN (100 MHz, acetona-da) 5: 154,29, 152,90, 150,87, 139,78, 133,98, 133,61, 129,00, 127,97, 126,62,

124,08, 44,16, 43,72

MS (MALDI-TOF) m/z: 319

Ejemplo de referencia 5. 2-Metil-5,7-dinitro-8-hidroxi-quinolina (5b)

Se anadio lentamente quinaldina (6,3 mmol, 1 g) en pequenas porciones a una mezcla de HNO3 concentrado/H2SO4 (10 ml) en un bano de hielo, y despues de 2 h, la mezcla se vertio en hielo picado. Se filtro un polvo de color amarillo, se lavo con EtOH caliente, y se cristalizo en nitrobenceno.

5 Rendimiento: 1,1 g, 69%

pf. 260 °C (descomposicion)

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,03 (s, 1H, OH), 9,66 (d, J3,4 = 8,8 Hz, 1H, H-4), 9,21 (s, 1H, H-6), 8,15 (d, J34 = 8,8 Hz, 1H, H-3), 2,94 (s, 3H, Me).

MS (MALDI-TOF) m/z: 242, 249 (M+)

5-Nitro-8-terc-butoxicarboniloxiquinolina (5c)

Se anadieron DMAP (122 mg, 1,0 mmol) y DIPEA (2 ml, 12 mmol) a temperature ambiente a una suspension agitada de nitroxolina (1,9 g, 10 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (2,2 g, 10 mmol) en una mezcla 1:2 de hexanos-DCM (80 ml). La mezcla se agito durante 14 horas a temperatura ambiente, se filtro usando filtro de papel y el filtrado se 10 concentro al vacfo, proporcionando un producto en bruto en forma de un aceite de color amarillento. El producto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida sobre gel de sflice (eluyente: Hexanos/DCM = 7:3).

Rendimiento: 2,7 g, 92%

Fr 0,65 (2:3 de EtOAc/hexanos)

1H RMN (400 MHz, CDCla) 5: 8,89 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-4), 8,91 (d, J = 3,6 Hz, 1H, H-2), 8,35 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-6), 7,57 (dd, J = 8,8 Hz y 3,6 Hz, 1H, H-3), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-7), 1,52 (s, 9H, t-Bu).

13C RMN (100 MHz, CDCla) 5: 153,7, 152,1, 151,4, 142,9, 141,12, 132,4, 125,5, 124,6, 122,8, 119,9, 84,1, 27,6

MS (MALDI-TOF) m/z: 296 (M-16+23), 291 (MH+), 266, 249, 233 (M-Bu-t)

1-(5-Nitro-quinolin-8-iloxi)-acetato de etilo (5d)

Se calento nitroxolina (1 g, 5,3 mmol) a 60 °C con bromoacetato de etilo (0,6 ml, 5,3 mmol) y carbonato potasico (1 15 g, 7,3 mmol) en DMSO durante 18 h, se enfrio a ta, se diluyo con agua (30 ml) y se extrajo con una mezcla de 2:3 de EtOAc/Et2O. El disolvente se evaporo y el producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna sobre gel de sflice (eluyente: 1:3 de EtOAc/DCM).

Rendimiento: 980 mg, 67%

Fr 0,38 (2:3 de EtOAc/hexanos)

1H RMN (400 MHz, CDCh) 5: 9,15 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-4), 9,01 (d, J = 3,5 Hz, 1H, H-2), 8,42 (d, J = 8,8 Hz, 1H,

H-6), 7,67 (dd, J = 8,8 Hz y 3,5 Hz, 1H, H-3), 6,93 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-7), 5,03 (s, 2H, O- CH2-CO),

4,25 (c, J = 7,5 Hz, 2H, Et), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H, Et).

MS (MALDI-TOF) m/z: 277 (MH+), 299 (M+Na+)

1-(5-Nitro-quinolin-8-iloxi)-acetamida (5e)

20 La acetamida 5e tambien se preparo de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente para fabricar el acetato 5d, excepto que la reaccion se realizo en una escala de 1 mmol, y el carbonato potasico se suplanto con carbonato de cesio.

Rendimiento: 193 mg, 78 % Datos analiticos para 5e Fr 0,31 (2:3 de EtOAc/hexanos)

1H RMN (400 MHz, CDCh) 5: 9,4 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-4), 8,81 (d, J = 3,5 Hz, 1H, H-2), 8,55 (d, J = 8,8 Hz, 1H H-6), 7,68 (dd, J = 8,8 Hz y 3,5 Hz, 1H, H-3), 7,51 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-7), 6,8 (s a, 2H, NH2), 4,2 (s, 2H, O-CH2-CO).

MS (MALDI-TOF) m/z: 248 (MH+), 270 (M+Na+)

Smtesis de pivaolato de 5-nitro-quinolin-8-ilo (5f)

Se anadio cloruro de pivaloMo (250 pl, 2 mmol) a una mezcla de nitroxolina (380 mg, 2 mmol), DMAP (98 mg, 0,8 mmol), y Et3N (1,1 ml, 8 mmol) en DCM (20 ml) a ta, y la mezcla se agito vigorosamente durante 14 h. La mezcla de reaccion se lavo con NaHCO3 acuoso al 10 % y la capa de DCM se concentro. El residuo en bruto se sometio a 5 cromatograffa en columna ultrarrapida (eluyente: Hexanos/DCM = 7:3), proporcionando pivolato 5 g en forma de un

solido de color amarillo.

Rendimiento: 465 mg, 85%

Fr 0,67 (2:3 de EtOAc/hexanos)

1H RMN (400 MHz, CDCla) 8: 8,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-4), 8,93 (d, J = 3,6 Hz, 1H, H-2), 8,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H,

H-6), 7,59 (dd, J = 8,8 Hz y 3,6 Hz, 1H, H-3), 7,46 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-7), 1,49 (s, 9H, t-Bu).

13C RMN (100 MHz, CDCla) 8: 176,99, 153,69, 151,44, 142,92, 141,22, 132,39, 125,54, 124,62, 122,82, 119,95 39,71, 27,58.

MS (MALDI-TOF) m/z: 295 (M+Na+), 249.

Los compuestos de la invencion y los datos biologicos relevantes se encuentran en las siguientes tablas.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

REIVINDICACIONES

1. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en la inhibicion de angiogenesis o neoplasia en una enfermedad o trastorno de un sujeto, en la que dicha enfermedad o trastorno se selecciona de cancer de rinon, cancer ocular, cancer rectal, cancer de colon, cancer de cuello de utero, cancer de prostata, cancer de mama y cancer de vejiga.
2. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de metionina aminopeptidasa de tipo 2.
3. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de SirTI.
4. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con metionina aminopeptidasa, SirTI, angiogenesis o neoplasia en un sujeto, de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende ademas un agente terapeutico adicional.
5. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en la que el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de la angiogenesis.
6. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en la que el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de metionina aminopeptidasa.
7. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en la que el agente terapeutico adicional es un compuesto inhibidor de SirTI.
8. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en la que el agente terapeutico adicional es un compuesto anticanceroso.
9. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, para administracion oral, topica, parental, intravenosa o intramuscular.
10. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el sujeto es un ser humano.
11. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que dicha neoplasia es cancer de mama.
12. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que dicha neoplasia es cancer de prostata.
13. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que dicha neoplasia es cancer de vejiga.
14. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que dicha neoplasia es cancer de rinon.
15. Nitroxolina, o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma, para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que el sujeto se identifica como en necesidad de un inhibidor de la angiogenesis.

FIG. 1

Tabla 1. Efectos de nitroxolina sobre la actividad enzimatica de MetAP y la proliferacion celular

Actividad de MetAp

Proliferacion celular

Farmaco

Isotipo Ion metalico CI50 (pM) Farmaco Lfnea celular (pM) Accion

Nitroxolina

MetAP-1 Co2+ >50 Nitroxolina HUVECs 1,98 Citostatica

Mn2+ >50 HCC1599 2,85 Citostatica

MetAP-2 Co2+ 11,20 HCC1937 4,50 Citostatica

Mn2+ 0,46 HCC1954 2,96 Citostatica

HCC2218 4,23 Citostatica

IV-43

MetAP-1 Co2+ 1,50 MCF-10A 2,15 Citostatica

Mn2+ >50

IV-43 HUVEC 0,65 Citostatica

TNP-470

MetAP-2 Co2+ 0,002

Mn2+ 0,002 TNP-470 HUVEC 8,5x104 Citostatica

imagen1

imagen2

Recuentos Recuentos

FIG. 3B

r

imagen3

Contenido de ADN

400

§ 300

§ 200

o CD

* 100 0

0 200 400 600 800 1000

Contenido de ADN

400 300 200 100 0

0 200 400 600 800 1000

Contenido de ADN

G ,1

NIT(2,M) ||S| 1

J

L

imagen4

400 300 200 100 0

0 200 400 600 800 1000

imagen5

imagen6

^ i-------t.—2_

Control NIT (2 jxM) NIT (5 jaM) TNP470

QG,

□ s

□ g2/m

FIG. 4A

NIT (2 nM) NIT(5nM)

imagen7

FIG. 4C

Vehiculo

Nitroxolina

FIG. 4B

NIT (10 ^M)

imagen8

imagen9

FIG. 4D

Vehiculo Nitroxolina

imagen10

imagen11

imagen12

FIG. 5C

Nitroxolina (\xM)

0 0.5 1 2 4 6 8 10 15 20

Ac-p53 (K382)

am

Tubulina

Ac-tubulina

Ac-H3

FIG. 5D

Nitroxolina (pJVI)

□ Ac-p53 (K382)

0 p53

FIG. 6A

imagen13

Ac-p53 (K382) p53

Ac-tubulina

Tubulina

Ac-H3

H3

FIG. 6B

EX527

TSA

imagen14

imagen15

Ac-p53 (K382) p53

Ac-tubulina

Tubulina

Ac-H3

H3

imagen16

EX527

TNP470

TSA

Ac-p53 (K382)

FIG. 6C

siRNA#1 (nM) siRNA#3 %

SirT

MetAP2

Ac-p53 (K382)

Ac-tubu hna

F G. 6D

“ ■ ■ ''

MetAP2

Ac-tubuhna

imagen17

FIG. 7 A

EX527 iiM

EX527 (nM)

TNP470

SirT 1

Ac-p53

Tubu hna

FIG. 7B

2,5 n

□ Ac-p53 (K382)

Sp53

EX527 uM

FIG. 7C

□ Ac-p53 (K382)

Sp53

EX527 uM + TNP470

o

"o

<o

o

o

CJ1

o

Vo

-Pv

CD

imagen18

JO

“03

o

O 1,0

FIG. 7E

rvo

'o

imagen19

Longitud de tubo total (%)

K) A O) 03 O M

o o o o o o o

Control - Nitroxolina (5}iM)- Nitroxolina(IOjiM)- EX527 (1nM)- TNP470(10nM)-

j____L

H

H

J____L

H

EX527 + TNP470-

imagen20

imagen21

imagen22

imagen23