ES2476902T3 - Compuestos activadores de TRP-P8 y métodos de tratamiento terapéuticos - Google Patents

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Abstract

Uso de un compuesto para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer o para provocar apoptosis en células cancerosas, en el que el compuesto es un compuesto de fórmula (II). en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o arilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Compuestos activadores de TRP-P8 y métodos de tratamiento terapéuticos
5 Antecedentes
Los compuestos que producen una sensación fisiológica de frío cuando se aplican a la piel son conocidos, véase, por ejemplo, “New Compounds with the Menthol Cooling Effect”, H.R. Watson, et al., J. Soc. Cosmet. Chem., 1978, 29, 185-200.
10 Wei, E.T., et al., J. Pharm. Pharmacol., 1983, 35 (2), 110-112, describe un compuesto llamado “icilina” por sus propiedades de sensación de frío que produce, (también conocida como AG-3-5) o 3-(2-hidroxi-fenil)-6-(3-nitro-fenil) -3,4-dihidro-1H-pirimidin-2-ona, de la fórmula:
15 Recientemente también se han descrito otros compuestos que tienen acción refrescante, ver H. Ottinger, et al., J. Agric. Food Chem., 2001, 49, 5383-5390. 20 La patente US-4.150.052 divulga compuestos mentano carboxamida, por ejemplo, de la fórmula IIa3-1:
que supuestamente tienen una acción fisiológica refrescante en la piel.
25 La patente US-4.070.496, divulga determinados compuestos óxido de fosfina (R1R2R3P=O) y composiciones que supuestamente tienen una acción fisiológica refrescante en la piel.
La patente US-3.821.221, divulga determinados compuestos tetrahidropirimidina-2-ona que supuestamente tienen 30 actividad en el sistema nervioso central como depresores o estimulantes.
Recientemente, se ha demostrado que ciertos receptores TRP tienen un papel en la termosensaci�n, véase D.D. McKemy et al, “Identification of a Cold Receptor Reveals a General Role for TRP Channels in Thermosensation”, Nature, 2002, 7 de marzo; 416 (6876):52-8. Para una revisión reciente de “La familia del canal iónico TRP”, véase
35 D.E. Clapham, et al., Nature Reviews, Neuroscience, 2001, 2, 387-396 <www.nature.com/reviews/neuro>. Okazawa et al Neuroscience letters (8 de abril de 2004), 359 (1-2):33-6; Nealen et al Journal of neurophysiology (julio de 2003), 90(1):515-20; Thut et al., Neuroscience (2003), 119(4):1071-83.
El gen Trp-p8 fue descubierto mediante el cribado de una biblioteca de ADNc extraído específico de la pr�stata. La
40 proteína predicha tiene homología significativa con la familia Trp (receptor de potencial transitorio) de las proteínas del canal de Ca2+. El análisis de transferencia Northern indica que la expresión de Trp-p8 dentro de los tejidos humanos normales est� principalmente limitada a las células epiteliales de la pr�stata. El análisis de hibridación in situ muestra que la expresión del ARNm de Trp-p8 estaba en niveles moderados en el tejido normal de pr�stata y aparentemente elevado en el cáncer de pr�stata. El ARNm de Trp-p8 también se expresaba en una serie de
45 tumores primarios no prost�ticos de mama, colon, pulmón y piel, mientras que los transcritos que codifican Trp-p8 apenas se detectaban o incluso no se detectaban en los correspondientes tejidos humanos normales (Tsavaler, et al Cancer Research (2001), 61(9):3760-3769).
La inmunoterapia del carcinoma de pr�stata (CaP) depende en gran medida de la identificación de los ant�genos diana adecuados que est�n presentes en un alto porcentaje de los tumores de pr�stata. La supuesta proteína del canal de calcio, Trp-p8, est� asociada con la pérdida de expresión del ARNm de Trp-p8 y con un tiempo significativamente más corto hasta la supervivencia libre de recaída del PSA. La identificación de Trp-p8 se asocia con el resultado del cáncer de pr�stata y sugiere un papel integral para este receptor en la carcinog�nesis prost�tica. Se han descrito p�ptidos inmunog�nicos derivados del receptor de potencial transitorio de la proteína específica de la pr�stata-p8 (Trp-p8) que es reconocido por los linfocitos T citot�xicos de pacientes con CaP (Kiessling, et al (2003) Prostate 56(4):270-279; Henshall, et al Cancer Research (2003), 63(14):4196-4203; Fuessel, et al International Journal of Oncology (2003), 23(1):221-228; US 2003108963 A1). La identificación de agentes terapéuticos eficaces en el tratamiento de enfermedades o trastornos neopl�sicos, hiperpl�sicos y similares sigue siendo el objeto de esfuerzos de investigación significativos. Trabajos recientes indican que ciertos agentes terapéuticos en combinación con ciertas preparaciones de anticuerpos pueden ser eficaces en el tratamiento de trastornos relacionados con la angiog�nesis y enfermedades o trastornos similares, véase, por ejemplo, patente US
6.582.959.
Actualmente hay una necesidad de agentes terapéuticos y métodos que sean útiles para tratar enfermedades y trastornos que est�n asociados con la regulaci�n del receptor Trp-p8. También hay una necesidad de agentes terapéuticos y métodos de tratamiento, que sean específicos y selectivos de las células cancerosas y que tengan baja citotoxicidad para las células sanas. También hay una necesidad de agentes terapéuticos en combinación con agentes quimioterap�uticos adicionales, incluyendo, por ejemplo, preparaciones de anticuerpos y métodos de tratamiento terapéutico de combinación de los mismos, que sean útiles para tratar enfermedades y trastornos que est�n asociados con la regulaci�n del receptor de Trp-p8.
Resumen
Ahora se ha descubierto que ciertos compuestos, incluyendo algunos conocidos por producir una sensación fisiológica de frío (“frío-g�nicos”), tales como los anteriormente mencionados tetrahidropirimidin-2-onas, óxidos de fosfina, compuestos mentano carboxamida, compuestos de alquilamida sustituida con alquilo y alfa-ceto enaminas, presentan una actividad biológica útil, tal como una actividad anti-tumoral.
Por consiguiente, la presente solicitud describe compuestos que activan el receptor Trp-p8. En realizaciones la presente divulgación proporciona compuestos y medicamentos para métodos de tratamiento, que provocan un aumento del flujo de iones de calcio en las células cancerosas (es decir, compuestos “activadores del flujo” o “promotores del flujo”). En realizaciones, la presente divulgación proporciona compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos para métodos de tratamiento, que inhiben o destruyen las células cancerosas, por ejemplo, al provocar apoptosis.
En realizaciones, la presente divulgación también proporciona:
una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones y un excipiente farmac�uticamente aceptable (la composición comprende preferiblemente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o sal); una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de tumores, que comprende un compuesto de la divulgación y combinaciones del mismo, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmac�uticamente aceptable; un compuesto de la divulgación para su uso en el tratamiento del cáncer o para provocar apoptosis en las células cancerosas; uso de un compuesto de la presente divulgación para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, por ejemplo, tumores, o para provocar apoptosis en las células cancerosas; y un método ex vivo o in vitro para desencadenar la apoptosis en las células cancerosas, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación.
Los inventores también han descubierto que ciertos compuestos de la divulgación, por ejemplo, aquellos compuestos conocidos por producir una sensación fisiológica de frío (“frio-g�nicos”) y los compuestos estructuralmente relacionados, tales como los anteriormente mencionados tetrahidropirimidin-2-onas, óxidos de fosfina, compuestos mentano carboxamida, compuestos de alquilamida sustituida con alquilo y alfa-ceto enaminas y compuestos similares, cuando se usan en combinación con agentes quimioterap�uticos adicionales, incluyendo, por ejemplo, anticuerpos, son capaces de ejercer una actividad biológica útil, tal como la actividad anti-tumoral.
Por consiguiente, la presente solicitud se refiere además a combinaciones terapéuticas de un compuesto de la divulgación (que puede activar el receptor Trp-p8) y agentes quimioterap�uticos adicionales, incluyendo, por ejemplo, un anticuerpo. En realizaciones, tales combinaciones terapéuticas pueden ser eficaces en el tratamiento de las células cancerosas. En realizaciones, tales combinaciones terapéuticas pueden ser eficaces en la inhibición o destrucción de las células cancerosas, por ejemplo, al provocar apoptosis, inhibir la angiog�nesis, o ambas.
En realizaciones, la presente divulgación también proporciona:
una composición farmacéutica que comprende combinaciones terapéuticas de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones y un anticuerpo, y un excipiente farmac�uticamente aceptable (la composición comprende
5 preferiblemente una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o sal y una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un agente quimioterap�utico adicional, por ejemplo, un anticuerpo anti-angiog�nico); una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de tumores, que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, en combinación con una cantidad antitumoral eficaz de al menos un agente quimioterap�utico adicional, por ejemplo, un anticuerpo anti
10 angiog�nico y un vehículo farmac�uticamente aceptable; uso de un compuesto de la presente divulgación para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, por ejemplo, tumores, o para provocar apoptosis, comprendiendo el tratamiento administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento, una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación en combinación con una cantidad eficaz de al menos un agente quimioterap�utico adicional, por ejemplo, un
15 anticuerpo anti-angiog�nico; un compuesto de la divulgación para su uso en el tratamiento del cáncer o para provocar apoptosis en células cancerosas, comprendiendo el tratamiento administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento, una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación en combinación con una cantidad eficaz de al menos un agente quimioterap�utico adicional, por ejemplo, un anticuerpo anti-angiog�nico; y
20 un método ex vivo o in vitro para desencadenar la apoptosis en células cancerosas, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación en combinación con una cantidad eficaz de al menos un agente quimioterap�utico adicional, por ejemplo un anticuerpo anti-angiog�nico.
Tambi�n hemos descubierto que otros determinados compuestos, tales como ciertos compuestos de mentano 25 carboxamida descritos a continuación, se caracterizan por que también presentan actividad biológica útil, tal como actividad anti-tumoral destructora de las células.
Por consiguiente, la presente solicitud también describe compuestos de la fórmula IIa:
30 en la que R1 es H o alquilo (C1-C6); 35 R2 es fenilo o un fenilo sustituido de la fórmula (-PhR3R4R5R6R7)
donde 40
R3, R4, R6 y R7 son cada uno independientemente -H, alquilo (C1-C6), alcoxilo (C1-C6) o halo;
R5 es halo, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C12), alcoxilo (C1-C6), -C(=O)alquilo (C1-C6) o alcano�lo (C1-C7);
o R5 es -NR8R9, donde R8 y R9 son cada uno independientemente -H, alquilo (C1-C6), o R8 y R9 junto con el
nitr�geno al que est�n unidos forman un anillo morfolino, pirrolidino, piperidino, piperzino, indolino, 45 benzimidazolino, azetidino, aziridino, azepino, 1,4-oxazino o tiomorfolino;
o R4 yR5 junto con el fenilo al que est�n unidos, forman un anillo que tiene de 4 a 7 átomos y el anillo tiene de 1 a 3 insaturaciones; y formas estereoisom�ricas, mezclas de formas estereoisom�ricas;
o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo,
a condición de que cuando R3, R4, R6 y R7 de -PhR3R4R5R6R7 sean H, R5 sea distinto de -CH3, -OCH3, -OH, -F o50 NO2; y
a condición de que R2 sea distinto de 3-hidroxi-4-metil-fenilo; y además a condición de que R2 sea distinto de 2-hidroxi-naftilo o piridilo.
La solicitud también describe un compuesto de la fórmula anteriormente mencionada IIa, que se caracteriza por que 5 el compuesto es eficaz en destruir las células que expresan TRP-p8, pero donde el flujo de iones de calcio de la célula que expresa no necesita ser sustancialmente cambiado por la presencia del compuesto .
En realizaciones, la presente divulgación también proporciona:
10 el uso de un compuesto de fórmula IIa en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer o para provocar apoptosis en las células cancerosas; un compuesto de fórmula IIa para su uso en el tratamiento del cáncer o para provocar apoptosis en células cancerosas; una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula IIa o una sal farmac�uticamente
15 aceptable del mismo y un excipiente farmac�uticamente aceptable; un método ex vivo o in vitro para desencadenar la apoptosis en células cancerosas que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula IIa; y cualquiera de los métodos o usos anteriores que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la divulgación de la fórmula IIa en combinación con otro compuesto de la divulgación, un
20 anticuerpo anti-angiog�nico o mezclas de los mismos.
Estas y otras realizaciones se ilustran en la presente memoria.
Breve divulgación de las Figuras
25 La FIG. 1A-D ilustra la eficacia de los compuestos frío-g�nicos seleccionados de la presente divulgación en destruir las células humanas que expresan Trp-p8 en comparación con la insensibilidad relativa de las células humanas que no expresan Trp-p8. La FIG. 2 ilustra las tasas relativas de crecimiento para líneas celulares cancerosas clonadas (PC3/Trp-p8) que
30 expresan Trp-p8 en comparación con una línea celular de control (PC3-neo) que no expresa Trp-p8.
Descripci�n detallada
La presente divulgación proporciona las composiciones farmacéuticas anteriormente mencionadas y medicamentos
35 para métodos de tratamiento. La presente divulgación también proporciona composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de la divulgación de la fórmula IIa y medicamentos para métodos de tratamiento con los mismos y donde los compuestos y composiciones farmacéuticas, son citot�xicos para las células que expresan Trpp8.
40 Ejemplos de compuestos frío-g�nicos son, por ejemplo, un compuesto de la fórmula II
en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo, o arilo, o como se describe, por ejemplo, en la 45 patente US-4.150.052 y J. Soc. Cosmet. Chem., 1978, 29, 185-200;
o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo.
Se usan las siguientes definiciones, a menos que se describa lo contrario: halo es fluoro, cloro, bromo, o yodo. Alquilo, alcoxi, etc. indican tanto grupos lineales como ramificados; pero la referencia a un radical individual, como 50 “propilo” abarca sólo el radical de cadena lineal, refiriéndose específicamente a un isómero de cadena ramificada tal como “isopropilo”.
“Alquilo” es un hidrocarburo C1-C18 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos. Ejemplos son metilo (Me, -CH3), etilo (Et, -CH2CH3), 1-propilo (n-Pr, n-propilo, -CH2CH2CH3), 2-propilo (i-Pr, i-propilo, 55 -CH(CH3)2), 1-butilo (n-Bu, n-butilo, -CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propilo (i-Bu, i-butilo, -CH2CH(CH3)2), 2-butilo (s-Bu, s-butilo, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo, -C(CH3)3), 1-pentilo (n-pentilo, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2pentilo (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentilo (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butilo (-C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butilo (-CH (CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butilo (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexilo (
CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexilo (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexilo (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2pentilo (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH (CH3)2), 3-metil-3-pentilo (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentilo (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butilo (-C (CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butilo (-CH(CH3)C(CH3)3.
“Arilo” indica un radical fenilo o un radical carboc�clico bic�clico condensado en orto que tiene aproximadamente de nueve a veinte átomos, donde al menos un anillo es aromático. Arilo (Ar) puede incluir arilos sustituidos, tales como un radical fenilo que tiene de 1 a 5 sustituyentes, por ejemplo, alquilo, alcoxi y sustituyentes similares y cuyos sustituyentes son coherentes con los compuestos e incluyen los sustituyentes divulgados en las patentes o publicaciones anteriormente mencionadas para los compuestos de las fórmulas II.
El término “anticuerpo” en la presente memoria se utiliza en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespec�ficos (por ejemplo, anticuerpos biespec�ficos) formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos y fragmentos de anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada. Un anticuerpo es una proteína generada por el sistema inmunitario que es capaz de reconocer y unirse a un ant�geno específico. Descrito en términos de su estructura, un anticuerpo es una proteína en forma de Y que consiste en cuatro cadenas de amino�cidos, dos pesadas y dos ligeras. En un modelo simplificado suficiente para esta solicitud, cada anticuerpo tiene principalmente dos regiones: una región variable y una región constante. La región variable, situada en los extremos de los brazos de la Y, se une e interact�a con el ant�geno diana. Esta región variable incluye una región determinante de la complementariedad (CDR) que reconoce y se une a un sitio de unión específico en un ant�geno particular. La región constante, que se encuentra en la cola de la Y, es reconocida por e interact�a con el sistema inmunitario (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5� ed., Garland Publishing, Nueva York). Un ant�geno objetivo generalmente tiene numerosos sitios de unión, también llamados ep�topos, reconocidos por las CDR en anticuerpos múltiples. Cada anticuerpo que se une específicamente a un ep�topo diferente tiene una estructura diferente. Por lo tanto, un ant�geno puede tener más de un anticuerpo correspondiente.
El término “anticuerpo monoclonal” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antig�nico. Además, en contraposición con las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (ep�topos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante en el ant�geno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales presentan ventajas en el sentido de que pueden sintetizarse sin contaminación por otros anticuerpos. El modificador “monoclonal” indica el carácter del anticuerpo, es decir, como el obtenido de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos y no debe interpretarse como que se requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier procedimiento en particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a ser utilizados de acuerdo con la presente invención se pueden obtener mediante el procedimiento del hibridoma descrito por primera por Kohler et al (1975) Nature 256:495, o se pueden obtener por métodos de ADN recombinantes (ver, US-816567). Los “anticuerpos monoclonales” también pueden aislarse a partir de bibliotecas de anticuerpos de fagos utilizando, por ejemplo, las técnicas descritas en Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628 y Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597.
Los anticuerpos monoclonales de la presente memoria incluyen específicamente anticuerpos “quiméricos” en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a las secuencias correspondientes de anticuerpos derivados de una especie particular o perteneciente a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la cadena(s) es idéntica u homóloga a las secuencias correspondientes de anticuerpos derivados de otras especies o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, as� como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que presenten la actividad biológica deseada (US 4816567; y Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Science. EE.UU., 81:6851-6855). Los anticuerpos quiméricos de interés en la presente memoria incluyen anticuerpos “primatizados” que comprenden secuencias de unión a ant�geno de dominio variable derivadas de un primate no humano (por ej., monos del Viejo Mundo, simios, etc.) y las secuencias de la región constante humana.
Un “agente quimioterap�utico” es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer. Ejemplos de agentes quimioterap�uticos incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa y CYTOXAN� ciclofosfamida; sulfonatos de alquilo tales como busulf�n, improsulf�n y piposulf�n; aziridinas tales como benzodopa, carbocuona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluyendo altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); delta-9tetrahidrocannabinol (dronabinol, MARINOL�); beta-lapachona; lapacol; colchicinas; ácido betul�nico; una camptotecina (incluyendo el análogo sintético topotec�n (HYCAMTIN�), CPT-11 (irinotec�n, CAMPTOSAR�), acetilcamptotecina, escopolectina y 9-aminocamptotecina); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluyendo sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); podofilotoxina; ácido podofil�nico; tenip�sido; criptoficinas (particularmentea criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluyendo los análogos sintéticos, KW2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de
mecloretamina, melfal�n, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibióticos tales como los antibióticos de enedina (por ejemplo,. caliqueamicina, especialmente caliqueamicina gamma lI y caliqueamicina omega II (véase, por ejemplo, Angew. Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183-186 (1994)); dinemicina, incluyendo dinemicina A; una esperamicina, as� como un crom�foro neocarzinostatina y crom�foros antibióticos de cromoprote�na enediina relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina , ADRIAMYCIN� doxorubicina (incluyendo morfolino doxorrubicina, cianomorfolino doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina y desoxidoxorrubicina), epirubicina, esorrubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofen�lico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos del ácido fálico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de la purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andr�genos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenales tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; rellenador de ácido fálico tales como ácido frol�nico; aceglatona; gluc�sido aldofosfamida; ácido aminolevul�nico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etogl�cido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentin�n; ionidainina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK� complejo polisac�rido (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofir�n; espirogermanio; ácido tenuaz�nico; triaziquona; 2,2',2''triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente la toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina (ELDISINE�, FILDESIN�); dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabin�sido (“Ara-C”); tiotepa; taxoides, por ej., TAXOL� paclitaxel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE™, Formulación de nanopart�culas diseñadas con albúmina de paclitaxel (sin crom�foros) (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) y TAXOTERE� doxetaxel (Rh�ne-Poulenc Rorer, Antony, Francia); cloranbucilo; gemcitabina (GEMZAR�); 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina (VELBAN�); platino; etop�sido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina (ONCOVIN�); oxaliplatino; leucovovin; vinorelbina (NAVELBINE�); novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; ibandronato; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; capecitabina (Xeloda�); sales, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores farmac�uticamente aceptables; as� como combinaciones de dos o más de los anteriores, tales como CHOP, una abreviatura de una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina y prednisolona y FOLFOX, una abreviatura de un régimen de tratamiento con oxaliplatino (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovovina.
Tambi�n se incluyen en esta definición los agentes anti-hormonales que actúan para regular, reducir, bloquear o inhibir los efectos de hormonas que pueden promover el crecimiento del cáncer y que a menudo est�n en la forma de tratamiento sist�mico o de todo el cuerpo. Pueden ser las propias hormonas. Los ejemplos incluyen antiestr�genos y los moduladores selectivos del receptor de estr�geno (SERM), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo NOLVADEX� tamoxifeno), EVISTA� raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y FARESTON� toremifeno; antiprogesteronas; reguladores a la baja del receptor de estr�genos (ERD); agentes que actúan inhibiendo o reduciendo la función ovárica, por ejemplo, la hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH), tales como LUPRON� y ELIGARD� acetato de leuprolida, acetato de goserelina, acetato de buserelina y tripterelina; otros anti-andr�genos tales como flutamida, nilutamida y bicalutamida e inhibidores de la aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, la cual regula la producción de estr�genos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE� acetato de megestrol, AROMASIN� exemestano, formestania, fadrozol, RIVISOR� vorozol, FEMARA� letrozol y ARIMIDEX� anastrozol. Además, dicha definición de los agentes quimioter�picos incluye bisfosfonatos como clodronato (por ejemplo, BONEFOS� u OSTAC�), DIDROCAL� etidronato, NE-58095, ZOMETA� ácido zoledr�nico/zoledronato, FOSAMAX� alendronato, AREDIA� pamidronato, SKELID� tiludronato o ACTONEL� risedronato; as� como troxacitabina (un análogo del nucle�sido citosina 1,3-dioxolano); oligonucle�tidos antisentido, particularmente aquellos que inhiben la expresión de genes en las vías de se�alizaci�n implicadas en la proliferaci�n celular aberrante, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Raf, H-Ras y el receptor del factor de crecimiento epid�rmico (EGF-R); vacunas tales como la THERATOPE� vacuna y vacunas para terapia g�nica, por ejemplo, ALLOVECTIN� vacuna, LEUVECTIN� vacuna y VAXID� vacuna; LURTOTEC�N� inhibidor de la topoisomerasa 1; ABARELIX� rmRH; ditosilato de lapatinib (un inhibidor doble de tipo molécula pequeña de la tirosina quinasa ErbB-2 y EGFR también conocido como GW572016); anticuerpos que tienen una acción anti-cáncer, particularmente aquellos que se unen a VEGF-1, VEGF-2, VEGF-3, EGF-R, HER-2, CD20 y similares, y sales, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores farmac�uticamente aceptables.
“Het” es un anillo heteroc�clico saturado o insaturado de cuatro (4), cinco (5), seis (6) o siete (7) miembros que tiene 1, 2, 3, o 4 hetero�tomos seleccionados del grupo que consiste en oxi, tio, sulfinilo, sulfonilo y nitrógeno, cuyo anillo est� opcionalmente condensado con un anillo de benceno. Het incluye “heteroarilo”, que abarca un radical unido mediante un carbono del anillo de un anillo aromático monoc�clico que contiene cinco o seis átomos en el anillo que consisten en carbono y 1, 2, 3, o 4 hetero�tomos, cada uno de ellos seleccionado de entre el grupo que consiste en oxi no peróxido, tio, y N(X) en la que X est� ausente o es H, O, alquilo C1-4, fenilo o bencilo, as� como un radical de un heterociclo bic�clico condensado en orto de aproximadamente ocho a diez átomos en el anillo derivados del mismo, particularmente un derivado benzo o un derivado por condensación de un dirradical propileno, trimetileno, tetrametileno al mismo.
5 “Tratar”, “tratamiento”, “para tratar” y términos similares se refieren, en realizaciones, a disminuir, eliminar, inhibir, mejorar, alterar, o prevenir una enfermedad o trastorno, por ejemplo, mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto de la presente divulgación, o mediante la administración de una cantidad eficaz de un compuesto de la divulgación en combinación con una cantidad eficaz de un agente quimioterap�utico adicional, un anticuerpo anti-angiog�nico y se puede referir a terapia curativa, terapia profiláctica, y terapia preventiva.
“Modular”, “modulación”, “modulando”, “modulador” y términos similares se refieren a, en realizaciones, la capacidad de una cantidad eficaz de un compuesto de la presente divulgación para, selectivamente y a niveles de dosis relativamente bajas, ajustar o alterar la permeabilidad al ion multivalente (tales como los iones de calcio) de las
15 células cancerosas, tales como las células que expresan Trp-p8, y en contraste con la insensibilidad relativa de otras células, por ejemplo, las células sanas o no cancerosas y las células que no expresan Trp-p8.
“Tratamiento del cáncer”, “tratar el cáncer” y términos similares, para los propósitos de esta divulgación se refieren, en realizaciones, a un método de tratamiento del cáncer, que incluye poner en contacto las células cancerosas con un compuesto de la divulgación con el fin de conseguir la inhibición del crecimiento de las células cancerosas, la destrucción de las células cancerosas, aumentar el tiempo de supervivencia del paciente, o una combinación de los mismos, o poner en contacto células cancerosas con un compuesto de la divulgación en combinación con un anticuerpo anti-angiog�nico con el fin de conseguir la inhibición del crecimiento de las células cancerosas, la destrucción de las células cancerosas, aumentar el tiempo de supervivencia del paciente, un efecto anti-angiog�nico
25 o una combinación de los mismos. El tratamiento del cáncer, mediante el método de la divulgación, también incluye poner en contacto las células con un compuesto de la divulgación para activar los receptores Trp-p8 en las células cancerosas, tales como tumores, para inducir niveles de flujo elevados de iones multivalente en las células con el fin de provocar la estasis celular o la muerte celular. El cáncer puede incluir enfermedades en las que células anormales se dividen sin control. Las células cancerosas también pueden invadir los tejidos cercanos y pueden diseminarse a través del torrente sanguíneo y el sistema linfático a otras partes del cuerpo. Las principales categorías de los c�nceres son carcinomas, sarcomas, leucemias y linfomas. Dentro de estas categorías principales existen numerosos subgrupos que generalmente describen el órgano en el cual se origina el cáncer, tales como adenocarcinoma del estómago o carcinoma de pulmón microc�tico.
35 “Tumor” se refiere a, por ejemplo, una masa de tejido anormal benigna o maligna que puede no ser inflamatoria, que surge a partir de células de tejido pre-existente y que puede no poseer ninguna función fisiológica. Los tumores benignos, incluyen, por ejemplo, quistes, verrugas, lunares y pólipos y, en general, no se diseminan a otras partes del cuerpo. Los tumores malignos est�n generalmente compuestos de células que crecen rápidamente, tienen otras propiedades anormales que los distinguen de las células normales y con frecuencia invaden otros tejidos normales.
“Factor de crecimiento vascular endotelial” o “VEGF”, se refiere a un factor de crecimiento de mamífero tal como se define, por ejemplo, en la patente US-5.332.671. La actividad biológica del VEGF nativo es compartida por cualquier análogo o variante del mismo que promueve el crecimiento selectivo de las células endoteliales vasculares pero no de células endoteliales corneales bovinas, células epiteliales del cristalino, células de la corteza suprarrenal,
45 fibroblastos BHK-21 o queratinocitos.
“Trastorno angiog�nico” o “defecto angiog�nico” se refiere a un trastorno anormal que requiere tratamiento con un agente que inhibe la angiog�nesis, por ejemplo, un compuesto o composición angiost�tica tal como una combinación de un compuesto de la divulgación y un anticuerpo anti-angiog�nico. Tales trastornos incluyen, por ejemplo, tipos de cáncer tales como tumores vasculares, por ejemplo, hemangioma (capilar y cavernoso), tumores gl�micos, telangiectasia, angiomatosis bacilar, hemangioendotelioma, angiosarcoma, hemangiopericitoma, sarcoma de Kaposi, linfangioma y linfangiosarcoma y angiog�nesis tumoral.
Administraci�n “en combinación con” uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración 55 simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden.
Los compuestos de fórmula II son adecuados para su uso en mamíferos. Como se usa en la presente memoria, “mamíferos”, significa toda clase de vertebrados superiores que alimentan a sus crías con leche secretada por las glándulas mamarias, que incluyen, por ejemplo, seres humanos, caballos, vacas, cerdos, ovejas, perros, conejos y monos.
“Muerte celular apopt�tica”, “muerte celular programada”, “apoptosis” y términos similares se refieren a cualquier muerte celular que puede ser el resultado de la compleja cascada de acontecimientos celulares que ocurren en etapas específicas de la diferenciación celular y en respuesta a estímulos específicos. La muerte celular apopt�tica 65 se puede caracterizar por la condensación del citoplasma y el núcleo de las células que mueren. La apoptosis es un proceso activo que requiere nueva síntesis de proteínas. Generalmente, el proceso requiere ATP, implica nueva
s�ntesis de ARN y proteínas y culmina en la activación de endonucleasas end�genas que degradan el ADN de la célula, destruyendo as� el molde genético requerido para la homeostasis celular. La apoptosis se observa en la eliminación controlada de células durante la metamorfosis, la diferenciación y la renovación de las células en general y normalmente parece estar regulada por los acontecimientos asociados a receptores. Por estas razones, la apoptosis se ha llamado “muerte celular programada” o “suicidio celular”. Aunque probablemente cada célula tiene un programa genético para suicidarse, este est� por lo general inhibido. En circunstancias normales, sólo las células que ya no son requeridas por el organismo activan este programa de auto-destrucción.
“Cantidad terapéuticamente eficaz” significa, en realizaciones, una dosis de un compuesto de la divulgación, o una dosis de una combinación de un compuesto de la divulgación y otro agente quimioterap�utico, con o sin un excipiente, que inhibe, reduce o elimina el crecimiento del tumor, in vivo, in vitro, o ambos, por ejemplo, activando Trp-p8, estimulando la apoptosis o ambos. La dosis exacta depender� de la finalidad del tratamiento y ser� determinable por un experto en la técnica usando técnicas conocidas.
En una realización de la presente divulgación, los compuestos de la divulgación se utilizan en terapia de combinación, por ejemplo, con otros agentes terapéuticos de tipo anticuerpo. En una realización, los compuestos de la presente divulgación se utilizan en combinación con anticuerpos para el tratamiento del cáncer. Véase, en general, por ejemplo: PCT/US02/19592; PCT/US01/20118; PCT/US01/25464; PCT/US01/26626; PCT/US02/28859; PCT/US02/41798; PCT/US02/12206; PCT/US03/11148; PCT/US02/12619 y PCT/US02/33050. En otra realización, los compuestos de la divulgación se utilizan en combinación con un anticuerpo anti-VEGF y como anticuerpos que incluyen formas quiméricas humanas, no humanas, murinas, híbridas y quiméricas. Véase, por ejemplo, la patente US-6.582.959 y la solicitud de Patente US-2002/0122797 A1.
En realizaciones de la presente divulgación, los compuestos de la divulgación pueden usarse en combinación con otros agentes terapéuticos, tales como los anticuerpos mencionados anteriormente, para tratar enfermedades o trastornos inmunol�gicos, que afectan, por ejemplo, a células de la respuesta inmunitaria tales como células B (linfocitos B ), células T (linfocitos T), células accesorias (macr�fagos y otras células presentadoras de ant�geno), células asesinas (NK y células K), mastocitos y células similares.
En una realización preferida, los compuestos útiles en la presente divulgación incluyen un compuesto no marcado radiactivamente para el tratamiento de células o enfermedades del sistema nervioso no central. En realizaciones, los compuestos de la presente divulgación no contienen marcaje radiactivo y no son radioactivos. Los compuestos no marcados de la presente divulgación se pueden utilizar para destruir las células cancerosas como se ilustra en la presente memoria, por ejemplo, células que expresan Trp-p8, tales como células cancerosas de pr�stata y células cancerosas de hígado.
Un “sujeto” para los fines de la presente divulgación incluye a los seres humanos y a otros animales, particularmente mamíferos. Por lo tanto, los métodos son aplicables tanto a la terapia humana como a aplicaciones veterinarias. En una realización preferida, el sujeto es un mamífero y en la realización más preferida el sujeto es humano.
“Resultado terapéutico mejorado” o “disminución en el número de células tumorales” o “disminución del tamaño del tumor” significa una disminución del 50 %, preferiblemente una disminución del 80 %, más preferiblemente una disminución de 90 % y aún más preferiblemente un 100 % de disminución en el tamaño o volumen del tumor, una disminución en el número de células cancerosas circulantes detectables en la sangre, tejido afectado u órgano tal como se determina mediante el examen de un paciente, muestras tomadas de un paciente antes y después del tratamiento, o ambos.
“Compuesto”, “molécula”, “polip�ptido” y términos similares incluyen compuestos preparados sintéticamente, compuestos obtenidos por ingeniería genética (por ejemplo, proteínas expresadas de ADN recombinante), compuestos de origen natural y los producidos in vivo después de la administración de un compuesto diferente. Los efectos in vivo de los compuestos administrados descritos en la presente memoria pueden no ser ejercidos por aquellos compuestos como tal, sino por uno o más productos de degradación, tales como un metabolito, conjugado, clatrato, complejo iónico, quelato, hidrato, solvato, o como transformaciones o combinaciones biológicas del compuesto(s) o molécula(s) administrados. “Sales farmac�uticamente aceptables” también pueden incluir, además de las ilustradas en la presente memoria, una subclase de sales presentes o formadas in vivo.
La presente divulgación proporciona compuestos que se unen a ciertos receptores de la familia de canales iónicos TRP (receptor de potencial transitorio). Más particularmente, la presente divulgación proporciona compuestos que se unen específicamente al subgrupo de canales de TRP grande (o de TRPM) y más particularmente a compuestos que se unen específicamente al canal TRP llamado “Trp-p8” (o TRP-M8). Los receptores Trp-p8 est�n generalmente presentes en niveles elevados en c�nceres, como el cáncer de pr�stata. Los compuestos de la divulgación est�n dotados de actividad de activación del receptor Trp-p8. La activación del receptor Trp-p8 produce un aumento del flujo de iones de calcio en las células cancerosas y en última instancia la muerte celular. Los compuestos de la presente divulgación son útiles para, pero sin limitarse, al tratamiento de enfermedades o trastornos de la proliferaci�n celular y la estimulaci�n de la apoptosis. También es bien conocido en la técnica y como se ilustra en la presente memoria cómo determinar la actividad del receptor Trp-p8, por ejemplo, usando los ensayos
convencionales descritos en la presente memoria o usando otros ensayos similares.
Los expertos en la técnica apreciarán que los compuestos de la divulgación que tienen un centro quiral pueden existir y aislarse en formas �pticamente activas y rac�micas. Algunos compuestos pueden presentar polimorfismo. Hay que entender que la presente divulgación abarca cualquier forma rac�mica, �pticamente activa, polim�rfica, taut�mera o estereois�mera o mezcla de las mismas de un compuesto de la divulgación, que posee las propiedades útiles descritas en la presente memoria y ser� bien conocido en la técnica cómo preparar formas �pticamente activas (por ejemplo, por resolución de la forma rac�mica por técnicas de recristalizaci�n, por síntesis de materiales de partida �pticamente activos, por síntesis quiral o por separación cromatogr�fica usando una fase estacionaria quiral). En particular, se entiende que los compuestos de la divulgación pueden contener centros quirales. También se entiende que los compuestos de la divulgación pueden existir en la forma “enol” o en la correspondiente forma taut�mera “ceto” y que dichos taut�meros est�n incluidos como compuestos dentro del alcance de la presente divulgación.
El contenido de átomos de carbono de los diversos restos de hidrocarburo se indica por un prefijo que designa un número inferior y superior de los átomos de carbono en el resto, es decir, el prefijo Ci-j indica un resto de número entero “i” a número entero “j” de átomos de carbono, inclusive. Por lo tanto, por ejemplo, alquilo C1-6 o alquilo (C1-C6) se refiere a alquilo de uno a seis átomos de carbono, inclusive.
Los compuestos de la presente divulgación se designan generalmente de acuerdo con el sistema de nomenclatura IUPAC. Se pueden usar las abreviaturas que son bien conocidas para un experto en la técnica (por ej., “Fe” por fenilo, “Me” para metilo, “Et”, para etilo, “h” para hora o horas y “ta” temperatura ambiente).
Los valores especificados y preferidos citados más abajo para los radicales, sustituyentes e intervalos son sólo con fines ilustrativos; estos no excluyen otros valores definidos u otros valores dentro de intervalos definidos para los radicales y los sustituyentes. Los compuestos de la divulgación incluyen compuestos de fórmula II que tienen cualquier combinación de los valores, valores específicos, más valores específicos y valores preferidos descritos en la presente memoria.
Espec�ficamente, arilo puede ser fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrenilo, fluorofenilo, tetrahidronaftilo o indanilo.
Espec�ficamente, alquilo tal como (C1-6) puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, iso-butilo, sec-butilo, tercbutilo, pentilo, 3-pentilo, hexilo o heptilo; alquilo (C2-C6), puede ser etilo, propilo, isopropilo, butilo, iso-butilo, secbutilo, terc-butilo, pentilo, 3-pentilo o hexilo; cicloalquilo (C3-C12) puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, sustituyentes bic�clicos o multic�clicos, tales como los de las fórmulas
Alcoxi C1-6 puede ser metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, pentoxi, 3-pentoxi o hexiloxi; C(=O)alquilo o alcano�lo (C2C7) puede ser acetilo, propano�lo, butano�lo, pentano�lo, 4-metilpentano�lo, hexano�lo o heptano�lo; arilo puede ser fenilo, indenilo o naftilo; Het puede ser pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo o heteroarilo y heteroarilo puede ser furilo, imidazolilo, triazolilo, triazinilo, oxazo�lo, isoxazo�lo, tiazolilo, isotiazo�lo, pirazolilo, pirrolilo, pirazinilo, tetrazolilo, piridilo (o su N-óxido), tienilo, pirimidinilo (o su N-óxido), indolilo, isoquinolilo (o su N-óxido) o quinolilo (o su N-óxido).
Un valor específico para Het es un anillo saturado o insaturado de cinco (5), seis (6) o siete (7) miembros que contiene 1, 2, 3 o 4 hetero�tomos, por ejemplo, oxi no peróxido, tio, sulfinilo, sulfonilo y nitrógeno; as� como un radical heterociclo bic�clico condensado en orto de aproximadamente ocho a doce átomos en el anillo derivados del mismo, particularmente un derivado benzo o un derivado por fusión de un propileno, trimetileno, tetrametileno u otro dirradical Het monoc�clico al mismo.
Un compuesto específico de fórmula (II) es un compuesto de la Fórmula (B)
Otro compuesto específico de fórmula (II) es un compuesto de la Fórmula (C) que muestra estereoqu�mica preferida:
Otro compuesto específico de formula (II) es un compuesto de la Fórmula (D):
Se entiende que los compuestos específicos anteriormente mencionados y el resto de los compuestos de la 10 divulgación, pueden ser o incluir una sal farmac�uticamente aceptable de los mismos.
Un compuesto específico es 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico (4-metoxi-fenil)-amida o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo.
15 Un compuesto específico de formula IIa es un compuesto de la formula IIa1:
o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo; en la que R1, R3, R4, R5, R6 yR7 son como se ha definido en la 20 presente memoria.
Otros compuestos específicos de formula IIa son compuestos individuales de las fórmulas IIa2-IIa12 o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo; en el que los sustituyentes R son como se ha definido en la presente memoria:
y
10 Los compuestos específicos de fórmula IIa incluyen
(4-morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo;
15 (3-cloro-4-metoxi-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo; (4-sec-butil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo; indan-5-ilamida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del
20 mismo; (4-terc-butil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo; (4-propil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo y
25 (4-isopropil-3-metil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico,
o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo.
Los procedimientos preparativos, caracterización, propiedades frío-g�nicas, propiedades olorosas, relaciones
30 estructura-actividad frío-g�nica, reglas de diseño y formación similar para los compuestos de las fórmulas II y para los compuestos específicos anteriormente mencionados se describen en las correspondientes publicaciones o patentes anteriormente mencionadas.
Los compuestos de la divulgación, tales como los compuestos de fórmulas B, C o D se pueden preparar como se 35 ilustra, por ejemplo, en el esquema siguiente, mediante procedimientos análogos a estos, mediante procedimientos en las publicaciones o patentes anteriormente mencionadas o mediante procedimientos que se conocen o serían evidentes para un experto con conocimientos comunes en la técnica. Todas las variables usadas en los esquemas son como se define a continuación o en cualquier otro lugar de la presente memoria. El Esquema 1 ilustra la preparación de compuestos representativos de la divulgación, tal como el compuesto amida 3 (IIa4-1). El compuesto de cloro 1 se carboxil� mediante un intermedio de Grignard para dar el ácido carbox�lico 2 y el ácido 2 se convirtió en la amida 3 y como se describe en el Ejemplo 1 de la presente memoria.
10 Un procedimiento preparativo alternativo para preparar el compuesto 3 (IIa4-1) y compuestos amida relacionados usa el correspondiente cloruro de ácido del compuesto ácido carbox�lico 2 anteriormente mencionado. El cloruro ácido del compuesto ácido carbox�lico 2 (fácilmente preparado por reacción con SOCl2 y reactivos similares) se puede hacer reaccionar con diversos compuestos de amina primaria o secundaria para formar las correspondientes amidas análogas a la amida 3. Otros compuestos relacionados con la amida 3 o fórmula II, se prepararon de forma
15 similar y como se ilustra y se describe en la presente memoria.
Para un procedimiento sintético para la preparación del compuesto ácido mentanocarbox�lico 2 (un material de partida para IIa4-1), véase D.G. Rowsell, Wilkinson Sword Ltd., Patente del RU (1975) en la lista mencionada más abajo. Para otro procedimiento sintético para la preparación del ácido mentanocarbox�lico, véase D. Cunningham, et.
20 al., J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 2002, 2692-2698.
Para detalles preparativos adicionales para preparar compuestos frío-g�nicos mencionados en J. Soc. Cosmet. Chem., 1978, 29, 185-200, véase la página 199, referencia 1, lista de 17 patentes del RU.
25 Otras condiciones adecuadas para la formación de los compuestos de la divulgación de varios intermedios como se ilustran en la presente memoria son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, véase Feiser and Feiser, “Reagents for Organic Synthesis,” Vol. 1, 1967; March, J. “Advanced Organic Chemistry,” 4� ed., John Wiley & Sons, 1992; House, H. O., “Modern Synthetic Reactions”, 2� ed., W. A. Benjamin, New York, 1972 y Larock, R.C., “Comprehensive Organic Transformations,” 2� ed., Wiley-VCH Publishers, New York, 1999.
30 Los materiales de partida empleados en los métodos sintéticos descritos en la presente memoria est�n comercializados, se han descrito en la literatura científica o se pueden preparar a partir de materiales de partida ya disponibles usando procedimientos conocidos en el campo. Podría ser deseable usar opcionalmente un grupo protector durante todas o partes de los procedimientos descritos anteriormente o sintéticos alternativos. Dichos
35 grupos protectores y métodos para su introducción y eliminación son bien conocidos en la técnica. Véase Greene, T.W.; Wutz, P.G.M. “Protecting Groups In Organic Synthesis” 2� ed., New York, John Wiley & Sons, Inc., 1991.
En casos en los que los compuestos son suficientemente básicos o ácidos para formar sales de ácido o base no tóxicas estables, podría ser apropiado la administración del compuesto de la divulgación como una sal. Ejemplos de sales farmac�uticamente aceptables son sales de adición de ácido orgánicas formadas con ácidos, las cuales forman un ani�n fisiológicamente aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, acetato, citrato, malonato,
5 tartrato, succinato, benzoato, ascorbato, !-cetoglutarato y !-glicerofosfato. También se pueden formar sales inorgánicas adecuadas, incluyendo sales clorhidrato, bromhidrato, sulfato, nitrato, bicarbonato y carbonato.
Las sales farmac�uticamente aceptables se pueden obtener usando procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto suficientemente básico, tal como una amina con un ácido adecuado dando un ani�n fisiológicamente aceptable. También se pueden preparar sales de metales alcalinos, por ejemplo, sales de sodio, potasio o litio o sales de metales alcalinot�rreos, por ejemplo, calcio, de ácidos carbox�licos.
Los compuestos de la presente divulgación se pueden administrar convenientemente en una composición
15 farmacéutica que contiene el compuesto en combinación con un excipiente adecuado, siendo la composición útil en el tratamiento de tumores. Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto apropiado para uso antitumoral se preparan por métodos y contienen excipientes bien conocidos en la técnica. Un compendio generalmente reconocido de tales métodos e componentes es Remington’s Pharmaceutical Sciences por EW Martin (MarK Publ. Co., ed. 15, 1975). Los compuestos y composiciones de la presente divulgación pueden administrarse por vía parenteral, por ejemplo, por vía intravenosa, intraperitoneal o intramuscular, por vía oral, o por vía rectal, dependiendo de, por ejemplo, la disposición o la diseminaci�n de las células tumorales.
En realizaciones, los anticuerpos incluidos dentro del alcance de la divulgación incluyen anticuerpos híbridos y recombinantes (por ejemplo, anticuerpos “humanizados” y “humanos”) independientemente de la especie de origen
25 o de la denominación de la clase o subclase de inmunoglobulina, as� como fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, Fab, F(ab')2 y Fv). Ver Patente US-4.816.567; Mage y Lamoyi, en Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, 79-97, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, (1987).
Por lo tanto, el modificador “monoclonal” indica el carácter del anticuerpo como obtenido como tal de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos y no debe interpretarse que se requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales de la divulgación se pueden producir utilizando el método del hibridoma descrito por primera vez por Kohler y Milstein, Nature, 256:495 (1975) o se pueden producir mediante métodos de ADN recombinante. Ver Patente US-4.816.567. Otros métodos conocidos de producción de anticuerpos se describen, por ejemplo, en Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,
35 59-103, Academic Press (1986); Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984). Brodeur, et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, 51-63, Marcel Dekker, Inc., Nueva York (1987).
Para producir anticuerpos monoclonales (Acm) se han utilizado diversos métodos. La tecnología de hibridoma, que se refiere a una línea celular clonada que produce un único tipo de anticuerpo, utiliza las células de varias especies, incluyendo ratones (murinos), h�msters, ratas y seres humanos. Otro método para preparar ACm utiliza la ingeniería genética incluyendo técnicas de ADN recombinante. Los anticuerpos monoclonales producidos mediante estas técnicas incluyen, entre otros, anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados. Un anticuerpo quimérico combina las regiones de codificación de ADN de más de un tipo de especie. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede derivar de la región variable de un ratón y la región constante de un ser humano. Un anticuerpo humanizado procede
45 predominantemente de un ser humano, aunque contiene porciones no humanas. Al igual que un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado puede contener una región constante completamente humana. Pero a diferencia de un anticuerpo quimérico, la región variable puede derivar parcialmente de un ser humano. Las porciones no humanas, sintéticas de un anticuerpo humanizado a menudo provienen de las CDR de anticuerpos murinos. En cualquier caso, estas regiones son cruciales para permitir que el anticuerpo reconozca y se una a un ant�geno específico.
Como se ha señalado, los anticuerpos murinos juegan un papel importante en estas tecnologías. Si bien son útiles para el diagnóstico y los tratamientos a corto plazo, los anticuerpos murinos no pueden ser administrados a personas a largo plazo sin aumentar el riesgo de una respuesta inmunog�nica perjudicial. Esta respuesta, llamada
55 anticuerpo humano anti-ratón (HAMA), se produce cuando el sistema inmunitario humano reconoce el anticuerpo murino como extraño y lo ataca. Una respuesta HAMA puede causar un choque tóxico o incluso la muerte.
Los anticuerpos quiméricos y humanizados reducen la probabilidad de una respuesta HAMA, reduciendo al mínimo las porciones no humanas de los anticuerpos administrados. Además, los anticuerpos quiméricos y humanizados tienen la ventaja adicional de activar respuestas inmunitarias humanas secundarias, tales como la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo.
Los “Fragmentos de anticuerpos” comprenden una porción de un anticuerpo intacto, que comprende preferiblemente la región de unión al ant�geno o región del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen Fab, Fab',
65 F(ab')2 y fragmentos Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de cadena única y anticuerpos multiespec�ficos formados a partir de fragmento(s) de anticuerpo.
Un anticuerpo “intacto” es aquel que comprende una región variable de unión al ant�geno, as� como un dominio constante de cadena ligera (CL) y dominios constantes de cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o variantes de secuencias de amino�cidos de los mismos.
El anticuerpo intacto puede tener una o más “funciones efectoras” que se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o una región Fc con una secuencia de amino�cidos variante) de un anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras de anticuerpo incluyen la unión a Clq; citotoxicidad dependiente de complemento; unión al receptor Fc; citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulaci�n a la baja de los receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de células B; BCR), etc.
Dependiendo de la secuencia de amino�cidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos intactos pueden asignarse a diferentes “clases”. “Existen cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas pueden dividirse a su vez en “subclases” (isotipos), por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan !, ∀, #, ∃ y %, respectivamente. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas.
Cuando se usan in vivo para el tratamiento de combinación, los anticuerpos se pueden administrar al paciente en cantidades terapéuticamente eficaces (es decir cantidades que eliminan o reducen la carga tumoral del paciente). La combinación de un compuesto de la divulgación y los anticuerpos se puede administrar al mismo tiempo o secuencialmente. Por lo general se administran por vía parenteral, cuando sea posible, en el lugar de la célula diana,
o por vía intravenosa. La dosis y la posolog�a depender� de, por ejemplo, la naturaleza del cáncer (primario o metast�sico), su población, el sitio al que se dirigen los anticuerpos, las características de la inmunotoxina en particular (cuando se usa), por ejemplo, su índice terapéutico, el paciente y los antecedentes del paciente. La cantidad de anticuerpo administrado normalmente estar� en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg de peso del paciente. La cantidad de un compuesto de la divulgación administrado en combinación con un anticuerpo puede estar generalmente, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 5 a 1000 mg, o aproximadamente de 0,1 a 300 mg/kg de peso corporal del paciente, y puede depender de muchos de los factores y consideraciones anteriormente mencionados.
La presente divulgación también contempla el uso de combinaciones de un compuesto de la divulgación con un anticuerpo anti-TRP-P8 en aplicaciones diagnósticas. Para las aplicaciones diagnósticas, los anticuerpos de la divulgación generalmente estarán marcados con un resto detectable. El resto detectable puede ser cualquiera capaz de producir, directa o indirectamente, una señal detectable. Por ejemplo, el resto detectable puede ser un radiois�topo, tal como 3H, 14C, 32P, 35S, o 125I, un compuesto fluorescente o quimioluminiscente, tal como isotiocianato de fluoresce�na, rodamina o luciferina; o una enzima, tal como fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa o peroxidasa de rábano picante.
Puede emplearse cualquier método conocido en la técnica para conjugar separadamente el anticuerpo a la fracción detectable, incluyendo aquellos métodos descritos por Hunter, et al., Nature, 144:945 (1962); David, et al., Biochemistry, 13:1014 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth, 40:219 (1981); y Nygren, J. Histochem. and Cytochem,
30:407 (1982).
Para aplicaciones terapéuticas, los anticuerpos se pueden administrar a un mamífero, preferiblemente un ser humano, en una forma de administración farmac�uticamente aceptable, incluyendo las que se pueden administrar a un ser humano por vía intravenosa como un bolo o mediante infusión continua durante un período de tiempo, por vía intramuscular, subcutánea , intra-articular o por inhalaci�n. Un anticuerpo también se administra adecuadamente por vía intratumoral, peritumoral, intralesional o perilesional, para ejercer efectos terapéuticos locales, as� como sist�micos.
Tales formas farmacéuticas abarcan portadores o vehículos farmac�uticamente aceptables conocidos que son inherentemente no tóxicos y no terapéuticos. Por lo general, un anticuerpo se formular� en tales vehículos a una concentración de aproximadamente 0,1 mg/ml a 100 mg/ml.
Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosis apropiada de una combinación de un compuesto de la divulgación depender� del tipo de enfermedad a tratar, como se ha definido anteriormente, la gravedad y la evolución de la enfermedad, independientemente de si el compuesto se administra para el tratamiento preventivo o con fines terapéuticos, el tratamiento anterior, la historia clónica del paciente y la respuesta al compuesto y a discreción del m�dico responsable del paciente. El compuesto se administra convenientemente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos.
Dependiendo del tipo y gravedad de la enfermedad, aproximadamente 0,015 a 15 mg/kg del compuesto es una dosis candidata inicial para la administración al paciente, sea, por ejemplo, mediante una o más administraciones separadas o mediante infusión continua. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo
del trastorno, el tratamiento se repite hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, pueden ser útiles otros regímenes de administración.
Para la administración terapéutica oral, el compuesto activo de la divulgación se puede combinar con uno o más excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Tales composiciones y preparaciones contienen generalmente al menos 0,1 % de compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones puede, por supuesto, variarse y puede estar convenientemente entre 2 a 60 % del peso de una forma farmacéutica unitaria dada. La cantidad de compuesto activo en tales composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendr� un nivel de dosificación eficaz.
Los comprimidos, trociscos, píldoras, cápsulas y similares también pueden contener lo siguiente: aglutinantes tales como goma tragacanto, goma de acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato dic�lcico; un agente disgregante tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido alg�nico y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio y se puede añadir un agente edulcorante tal como sacarosa, fructosa, lactosa o aspartamo o un agente aromatizante tal como menta, aceite de gaulteria o aroma de cereza. Cuando la forma farmacéutica unitaria es una cápsula, esta puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Pueden estar presentes otros materiales como recubrimientos o para modificar de otro modo la forma física de la forma farmacéutica unitaria sólida. Por ejemplo, los comprimidos, píldoras o cápsulas pueden recubrirse con gelatina, cera, goma laca o azúcar y similares. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa o fructosa como agente edulcorante, metil y propil parabenos como conservantes, un colorante y un aromatizante tal como aroma de cereza o de naranja. Por supuesto, cualquier material utilizado en la preparación de cualquier forma farmacéutica unitaria debe ser farmac�uticamente aceptable y sustancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, el compuesto activo puede incorporarse en preparaciones y dispositivos de liberación sostenida.
Los compuestos o composiciones de la divulgación también se pueden administrar por vía intravenosa o intraperitoneal por infusión o inyección. Las soluciones del compuesto activo o sus sales pueden prepararse en agua, opcionalmente mezclada con un tensioactivo no tóxico. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos, triacetina y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.
Formas farmacéuticas adecuadas para inyección o infusión pueden incluir soluciones o dispersiones acuosas estériles o polvos estériles que comprenden el principio activo, las cuales est�n adaptadas para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables o infusibles estériles, opcionalmente encapsuladas en liposomas o semillas o gránulos implantables. En todos los casos, la forma farmacéutica final debe ser estéril, fluida y estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento. El portador o vehículo líquido puede ser un disolvente
o medio de dispersi�n líquido que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos y similares), aceites vegetales, ésteres de glicerilo no tóxicos y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante la formación de liposomas, mediante el mantenimiento del tamaño de las partículas requerido en el caso de dispersiones o mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede conseguirse mediante diversos agentes antibacterianos y antif�ngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido s�rbico, timerosal y similares. En muchos casos, ser� preferible incluir agentes isot�nicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede conseguir mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros componentes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización por filtración. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son las técnicas de secado al vacío y secado por congelación, las cuales producen un polvo del principio activo más cualquier componente adicional deseado presente en las soluciones previamente esterilizadas por filtración.
Los vehículos sólidos útiles incluyen sólidos finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa microcristalina, sílice, al�mina y similares. Los vehículos líquidos útiles incluyen agua, alcoholes o glicoles o mezclas de aguaalcohol/glicol, en los que los presentes compuestos se pueden disolver o dispersar a niveles eficaces, opcionalmente con la ayuda de tensioactivos no tóxicos. Se pueden añadir adyuvantes tales como fragancias y agentes antimicrobianos adicionales para optimizar las propiedades para un uso dado. Las dosis útiles de los compuestos de la divulgación pueden determinarse mediante la comparación de su actividad in vitro y actividad in vivo en modelos animales. Los métodos para la extrapolación de las dosis eficaces en ratones, y otros animales, a los seres humanos son conocidos en la técnica; por ejemplo, véase la patente US-4.938.949.
El compuesto se administra convenientemente en una forma farmacéutica unitaria; por ejemplo, conteniendo de 5 a 1000 mg, convenientemente de 10 a 750 mg, lo más convenientemente, de 50 a 500 mg de principio activo por
forma farmacéutica unitaria. La dosis deseada puede presentarse convenientemente en una dosis única o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o más sub-dosis por día. La propia subdosis puede dividirse adicionalmente, por ejemplo, en un número de administraciones discretas libremente espaciadas; tales como inhalaciones múltiples de un insuflador.
Para la administración interna, las composiciones se pueden administrar por vía oral o parenteral a niveles de dosis, calculados como la base libre, de 0,1 a 300 mg/kg, preferiblemente de 1,0 a 30 mg/kg de peso corporal del mamífero y se pueden usar en el hombre en una forma farmacéutica unitaria, administrada de una a cuatro veces al día en la cantidad de 1 a 1000 mg por dosis unitaria.
Para la administración parenteral o para la administración en forma de gotas, como para tratamientos oculares, los compuestos se presentan en solución acuosa en una concentración de 0,1 a 10 %, más preferiblemente de 0,1 a 7 %. La solución puede contener otros componentes, tales como emulsionantes, antioxidantes o tampones.
En general, la concentración del compuesto(s) de fórmula (I a XIII) en una composición líquida, tal como una IV (intravenosa), ser� de 0,1 a 25, preferiblemente de 0,5 a 10, por ciento en peso. La concentración en una composición semis�lida o sólida tal como un gel o un polvo ser� de 0,1 a 5 por ciento en peso, preferiblemente de 0,5 a 2,5 por ciento en peso.
El régimen exacto para la administración de los compuestos y composiciones divulgadas en la presente memoria depender� necesariamente de las necesidades del sujeto individual que est� siendo tratado, del tipo de tratamiento y, por supuesto, ser� a juicio del m�dico responsable del paciente.
La actividad de unión y la selectividad de la unión de los compuestos de la presente divulgación son excelentes predictores de la actividad anti-tumoral de los compuestos de la divulgación. La actividad de unión y la selectividad de la unión se puede determinar utilizando modelos farmacol�gicos bien conocidos en la técnica, o usando los ensayos descritos a continuación. En la Tabla 1 siguiente se resumen resultados ilustrativos de ensayos biológicos.
Evaluaci�n de la actividad biológica
Los métodos generales y los materiales divulgados en R. Skyryma, et al., J. Physiology, 2000, 527.1, 71-83 para evaluar y medir el flujo de iones de calcio o la captación celular y la inducción de la apoptosis se han adaptado para su uso en la presente divulgación y como se ilustra en la presente memoria. Otros métodos de ensayo y procedimientos tales como los descritos a continuación, incluyendo el cultivo de la línea celular, la transfecci�n y la inhibición del crecimiento del tumor in vivo e in vitro, son fácilmente evidentes para un experto normal en la técnica tras la comprensión de la divulgación.
Ensayos de actividad
Para el cáncer se pueden usar varios modelos animales bien conocidos para comprender mejor el papel de los genes en el desarrollo y patog�nesis de los tumores y para probar la eficacia de los agentes terapéuticos candidatos, incluyendo combinaciones de compuestos de la divulgación y anticuerpos angiog�nicos. La naturaleza in vivo de tales modelos los hace particularmente predictivos de las respuestas en pacientes humanos. Los modelos animales de tumores y c�nceres (por ejemplo, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pr�stata, cáncer de pulmón, etc.) incluyen animales tanto no recombinantes como recombinantes (transg�nicos). Los modelos animales no recombinantes incluyen, por ejemplo, roedores, por ejemplo, modelos murinos. Tales modelos se pueden generar introduciendo células tumorales en ratones sing�nicos usando técnicas convencionales, por ejemplo, inyección subcutánea, inyección en la vena de la cola, implantación en el bazo, implantación intraperitoneal, implantación bajo la cápsula renal o la implantación de ortopina, por ejemplo, células cancerosas de colon implantadas en tejido col�nico. Véase, por ejemplo, la publicación de patente PCT WO 97/33551, publicada el 18 de septiembre de 1997.
Probablemente la especie animal utilizada más frecuentemente en estudios oncológicos son los ratones inmunodeficientes y en particular los ratones desnudos. La observación de que el ratón desnudo con hipoaplasia del timo podía actuar con éxito como huésped de xenoinjertos de tumor humano ha llevado a su utilización generalizada para este fin. El gen nu recesivo autos�mico ha sido introducido en un gran número de cepas cong�nicas diferentes de ratones desnudos, incluyendo por ejemplo ASW, A/He, AKR, BALB/c, B10.LP, C17, C3H, C57BL, C57, CBA, DBA, DDD, I/st, NC, NFR, NFS NFS/N, NZB, NZC, NZW, P, R III, y SJL. Además, se han criado y utilizado como receptores de xenoinjertos tumorales una amplia diversidad de otros animales con defectos inmunol�gicos heredados que no son el ratón desnudo. Para detalles adicionales ver, por ejemplo, The Nude Mouse in Oncology Resarch, E. Boven y B. Winograd, editores (CRC Press, Inc., 1991).
Las células introducidas en dichos animales pueden derivarse de líneas celulares conocidas de tumor/cáncer, tales como cualquiera de las líneas celulares tumorales anteriormente indicadas y, por ejemplo, la línea celular B104-1-1 (línea celular NIH-3T3 estable transfectada con el protooncog�n neu) ; células NIH-3T3 transfectadas con ras; Caco2 (ATCC n� HTB-37) o una línea celular de adenocarcinoma de colon humano de grado II bien diferenciada, HT-29 (ATCC n� HTB-38) o de tumores y c�nceres. Pueden obtenerse muestras de células tumorales o de cáncer de
pacientes sometidos a cirugía, utilizando condiciones convencionales que implican la congelación y el almacenamiento en nitrógeno líquido (Karmali et al., Br. J. Cancer 48:689-696, 1983). Las células tumorales pueden introducirse en animales tales como ratones desnudos mediante diversos procedimientos. El espacio subcutáneo (S.C.) en ratones resulta muy adecuado para la implantación de tumores. Los tumores pueden transplantarse s.c. en forma de bloques sólidos, de biopsias de aguja mediante la utilización de un tr�car, o en forma de suspensiones celulares. Para la implantación en bloque sólido o mediante tr�car, se introducen en el espacio s.c. fragmentos de tejido tumoral de tamaño adecuado. Las suspensiones celulares se preparan frescas a partir de tumores primarios o de líneas celulares tumorales estables y se inyectan subcut�neamente. Las células tumorales también pueden inyectarse en forma de implantes subd�rmicos. En esta localización, el in�culo se deposita entre la parte inferior del tejido conectivo d�rmico y el tejido s.c.
Pueden generarse modelos animales de cáncer de mama, por ejemplo, mediante la implantación de células de neuroblastoma de rata (a partir del que se aisl� inicialmente el oncog�n neu) o células NIH-3T3 transformadas por neu en ratones desnudos, esencialmente tal como describen Drebin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:91299133, 1986).
De manera similar, los modelos animales de cáncer de colon pueden generarse mediante pasaje de células de cáncer de colon en animales, por ejemplo ratones desnudos, conduciendo a la aparición de tumores en estos animales. Se ha descrito un modelo de transplante ortot�pico de cáncer de colon humano en ratones desnudos por ejemplo en Wang et al., Cancer Research 54:4726-4728 (1994), y en Too et al., Cancer Research 55:681-684 (1995). Este modelo se basa en el denominado “METAMOUSE”TM comercializado por AntiCancer Inc. (San Diego, California).
Los tumores que aparecen en animales pueden extraerse y cultivarse in vitro. Las células de los cultivos in vitro seguidamente pueden subcultivarse en animales. Estos tumores pueden servir como dianas para el ensayo posterior
o para el cribado de fármacos. Alternativamente, los tumores resultantes del pase pueden aislarse y el ARN de células antes del pase y células aisladas después de una o más rondas del pase se analizan para la expresión diferencial de los genes de interés. Estas técnicas de pase pueden llevarse a cabo con cualquier tumor o con cualquier línea celular de cáncer conocida. Los siguientes ejemplos sirven para describir más completamente la manera de utilizar la divulgación anteriormente descrita, as� como para exponer los mejores modos contemplados para llevar a cabo diversos aspectos de la divulgación.
EJEMPLO 1
Preparaci�n del Compuesto IIa4-1 a partir de (-)cloruro de mentilo. Se añadieron 1,39 gramos de Mg met�lico (57 mmoles) a un matraz de 100 ml y se añadieron 4 ml de THF seco para cubrir el Mg met�lico. Se a�adi� un cristal de yodo a la mezcla de metal-THF y se agit� durante varios minutos, seguido por la adición de una porción de aproximadamente 1/3 de 10 gramos (57 mmoles) de (-)cloruro de mentilo (Aldrich). La mezcla se calentó para inducir la formación de Grignard y se a�adi� el cloruro de mentilo restante (porción de 2/3) en 50 ml de THF seco y se agit� hasta que la reacción se complet�. La solución de Grignard se canul� a continuación en atmósfera de nitrógeno en un recipiente que contenía el exceso de hielo seco. Esta mezcla de hielo seco inactivada se movió con movimientos circulares y se vertió sobre 300 ml de hielo que contenían 2 ml de HCl concentrado. Se a�adi� éter diet�lico y la mezcla se separ�. Las capas orgánicas separadas se combinaron y se lavaron con agua y después se extrajo con una solución acuosa de NaOH. La solución acuosa (y el aceite) se acidific� con HCl hasta que se form� un sólido, se a�adi� éter diet�lico y el ácido se extrajo en la fase orgánica, se lav� con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentr� para dar 4,18 gramos (40 %) en forma de agujas blancas.
El ácido (0,57 gramos, 3,1 mmoles) se disolvió en 1,5 ml de dimetilacetamida (DMA). Se a�adi� PyBOP (2,1 gramos, 4,0 mmoles), p-anisidina (0,58 gramos, 4,7 mmoles, Aldrich) y DiPEA (2,7 ml, 15,5 mmol). Se añadieron otros 0,25 gramos de p-anisidina después de 2 horas y de nuevo después de 5 horas. La reacción se diluyó con acetato de etilo (EtOAc) después de 7 horas, se lav� dos veces con HCl 1 N, dos veces con bicarbonato de sodio acuoso y después con salmuera. Las capas orgánicas separadas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron para dar un sólido de color marrón. Este sólido se pas� a través de un tapón de gel de sílice con 30 % de EtOAc/hexanos para eliminar el color. El producto comenzó a cristalizar tras la concentración, por lo que se dej� cristalizar, el disolvente se elimin� mediante una pipeta y las agujas de color blanco se lavaron con EtOAc frío y se secaron en vacío para dar 0,365 gramos (1,26 mmoles, rendimiento del 40 %) de una primera cosecha. La recristalizaci�n de las aguas madre dio otros 0,346 gramos más (1,2 mmol, rendimiento 39 %) en forma de agujas blancas.
La CLEM mostr� que el producto tenía un peso molecular de 289, correspondiente al peso molecular deseado y los espectros de RMN mostraron que tenía la estructura deseada.
EJEMPLO 2
Demostraci�n de la actividad de un canal iónico en respuesta a compuestos frío-g�nicos seleccionados – Evaluación de la captación del ion calcio. Los experimentos de captación de iones de calcio se llevaron a cabo de
la siguiente manera. La absorción de calcio se midió para las células que expresan el ant�geno tumoral Trp-p8 y para las células que no expresan ant�geno tumoral Trp-p8 después de poner cada línea celular en contacto con compuestos frío-g�nicos de la presente divulgación. Los resultados mostraron que las células que expresan el ant�geno tumoral Trp-p8 habían aumentado progresivamente la captación de calcio a medida que se aumentaba gradualmente la concentración del compuesto frío-g�nico hasta más de aproximadamente cinco veces la concentración de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 10 microM. El compuesto (IIa4-1) tuvo inesperadamente una captación particularmente alta de calcio en todas las concentraciones de compuestos fr�og�nicos. Las células que no expresan el ant�geno tumoral no tenían esencialmente ninguna absorción de calcio observable en la totalidad de las concentraciones del compuesto frío-g�nico. Se us� sulf�xido de dimetilo (DMSO), un compuesto no frío-g�nico como compuesto de control tanto en líneas celulares que expresan como en las que no expresan y las células expuestas a DMSO no mostraban captación de calcio apreciable en ninguna concentración. Las líneas celulares incluían líneas que no expresan: 293, PC3 y PC3/neo y líneas que expresan el ant�geno tumoral: 293, PC3 y PC3/neo.
EJEMPLO 3
Destrucci�n de células humanas in vitro por compuestos que activan Trp-p8. Haciendo referencia a las figuras, en la FIG. 1 se evalu� la eficacia de los compuestos frío-g�nicos seleccionados en la destrucción de células humanas. El orden y la potencia de los compuestos frío-g�nicos se compararon en dos líneas celulares humanas relacionadas, una era de 293 células que expresan Trp-p8 y una segunda constituida por 293 células emparejadas que no tienen (que no expresan) Trp-p8 que se utilizó como control. Había alrededor de 50.000 células por pocillo en la placa. Los compuestos frío-g�nicos se añadieron a la placa. Las células fueron tratadas por exposición de las células a los compuestos individuales en diferentes concentraciones durante aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1000 microM durante 72 horas. El eje x muestra incrementos de concentración y el eje y muestra el número (en unidades arbitrarias) de las células viables restantes al final de 72 horas. Las Figs.1A y 1C muestran la respuesta de las células que expresan Trp-p8 y tratadas con los compuestos frío-g�nicos numerados o nombrados indicados. La Fig. 1B y 1D muestran la respuesta de las células sin (que no expresan) Trp-p8 y también tratadas con los compuestos frío-g�nicos indicados. Los resultados en las Figs.1A y 1C muestran que las células con Trp-p8 tenían un intervalo de respuestas o potencias de destrucción con respecto a los compuestos frío-g�nicos. El compuesto IIa4-1 tenía la mejor actividad destructora (CI50 < 1 microM) para las células que expresan Trp-p8. Los resultados comparativos de las Figs.1B y 1D muestran que las células sin Trp-p8 tenían una respuesta menor o esencialmente no destructora a los mismos compuestos frío-g�nicos, particularmente en las concentraciones más bajas de los compuestos frío-g�nicos, por ejemplo, por debajo de 100 micromolar.
EJEMPLO 4
Procedimiento para la inhibición del crecimiento del tumor in vivo por compuestos que activan Trp-p8. Los métodos para preparar las células cancerosas transfectadas, tales como las que expresan Trp-p8, son fácilmente evidentes para un experto normal en la técnica, véase, por ejemplo J. M. Schallhorn, et al, Nucleic Acids Res., 1996, Feb 15;24(4):596-601. Haciendo referencia a la FIG. 2, se ilustra el crecimiento de células del clon PC3 transfectadas para expresar ant�geno tumoral, (PC3/Trp-p8.c8 y .c9) y células del clon PC3 que no expresan el ant�geno tumoral (PC3-Neo) en ratones desnudos atómicos (5 millones células/ratón). La línea celular de cáncer de pr�stata humano formadora de tumores que no expresan Trp-p8, PC3-Neo 200 (-�-) muestra tasas de crecimiento de células tumorales exponencial esperadas. Por el contrario, las líneas c�lulares de cáncer de pr�stata humano formadoras de tumores que expresan (es decir, “sobreexpresan” Trp-p8), PC3/Trp-p8: .c8 (clon 8) 220 (-�-) y .c9 (clon 9) 230 (-�-) mostraron un crecimiento sustancialmente más lento y tasas de crecimiento est�ticas, respectivamente.
Se inoculan ratones atómicos (8 por grupo) en el flanco con aproximadamente 5 x 106 células del clon PC3 que expresan establemente Trp-p8 (cl.8) o una línea celular control vector (PC3-neo). Los tumores se establecen para un tamaño de aproximadamente 200 mg de cada uno en el que los compuestos frío-g�nicos se administran una vez o dos veces al día IV o P.O. en dosis que varían de aproximadamente 1-30 mg/kg de peso corporal. Los volúmenes tumorales se miden con calibrador cada tercer día y se calculan los volúmenes promedio.
La puesta en contacto, in vivo, de las células cancerosas que expresan Trp-p8, tales como las ilustradas anteriormente, con ciertos compuestos frío-g�nicos de potencia moderada a alta de la presente divulgación y como se ilustra en la presente memoria, se espera que tenga como resultado un alto grado de destrucción de células para las células cancerosas que expresan Trp-p8 y ninguna destrucción celular o un grado bajo de destrucción celular para las células sanas o para las células que no expresan Trp-p8. Esta expectativa coincide con los resultados de destrucción de células humanas in vitro presentados anteriormente en el EJEMPLO 3.
La Tabla 1 resume de forma ilustrativa la actividad del canal de iones y la respuesta de destrucción celular a compuestos frío-g�nicos seleccionados, mencionados anteriormente o ilustrados a continuación y proporciona una clasificación de la actividad comparativa o relativa para estos compuestos.
Tabla 1. Actividad del canal iónico y destrucción celular en respuesta a compuestos frio-g�nicos seleccionados
Puntuaci�n de la actividad
N� ID Compuesto Pico (FLIPR)1 Destrucción de células 293/Trp-p8 Destrucción de células PC3/Trp-p8
1
IIa4-1 31.000 S� S�
2
IV-1 31.000 S�
3
XIII-1 29.000 S� S�
4
IV-2 29.000
5
IIb-2 25.100 S� S�
6
IIb-3 25.100 S� S�
7
IIb-4 25.100 S�
8
IIb-1 25.000
9
XIII-2 25.000
10
IIb-5 23.300
11
IV-3 22.000
12
Icilina 20.000
13
V-4 17.500
14
V-2 17.000
15
V-1 9.600
16
III-1 5.000
17
DMSO control 1.400
1. Pico (FLIPR) es una medida del flujo de iones de calcio máximo a 10 microM. FLIPR se refiere a lector de placa de imagen fluorom�trica, comercializado, por ejemplo, por Molecular Devices Corp.
EJEMPLO 5
5 Preparación de otros compuestos seleccionados de Fórmula IIa. El ejemplo I se repitió en general para cada uno de los siguientes ejemplos de compuestos de preparación con la excepción de que el correactante amina (panisidina) del Ejemplo 1 se sustituyó con la correspondiente amina para producir un compuesto que tiene la estructura indicada como el principal producto tras la purificación. El principal producto para cada uno de los siguientes ejemplos se caracterizó, por ejemplo, por unos espectros de masas que tienen un pico original a
10 aproximadamente el peso molecular indicado.
La Tabla 2 resume los resultados de CI50 para los compuestos mentano carboxamida indicados en 293/Trp-p8.clon 18 y 293/Trp-p8.clon 10.
Tabla 2. Datos CI50 para las mentano carboxamidas en el 293/Trp-p8.clon 18 y 293/Trp-p8.clon 10.
Compuesto IIa2 donde R1=H y R2= -PhR3R4R5R6R7 es
N� ID del compuesto 293/Trp-p8.c18 293/Trp-p8.c10
4-MeO-Ph
IIa4-1 0,58/0,45 0,42
Ph
IIa4-2 3,38 3,21
4-HO-Ph
IIa4-3 1,05 1,23
3-MeO-Ph
IIa10-1 3,69 3,80
4-iPr-Ph
IIa4-4 0,98 0,76
2-MeO-Ph
IIa8-1 17,57 16,74
4-Cl-Ph
IIa4-5 17,57 1,99
4-F-Ph
IIa4-6 3,78 3,58
3-F,4-MeO-Ph
IIa6-1 0,60 0,79
4-Me-Ph
IIa4-7 1,14 1,21
4-Et-Ph
IIa4-8 0,68 0,73
2-Me, 4-MeO-Ph
IIa12-1 0,93 1,14
3-F-Ph
IIa10-2 2,91 6,31
4-morfolino-Ph
IIa4-9 1,45 1,28
3-Cl, 4-Me-Ph
IIa6-2 2,57 3,10
4-secBu-Ph
IIa4-10 1,08 3,59
3,4-propileneil-Ph-(esto es, indanilo)
IIa6-3 1,71 1,35
4-tBuPh
IIa4-11 1,41 1,23
4-nPrPh
IIa4-12 4,93 5,65
3-Me, 4-iPrPh
IIa6-4 4,37 5,05
Icilina (referencia)
- - 79,24
5 EJEMPLO 6
La Tabla 3 resume los resultados duplicados de la CI50 para los compuestos mentano carboxamida indicados en 293/Trp-p8.clon 21.
10 Tabla 3. Datos CI50 para las mentano carboxamidas en PCR/Trp-p8.clon 21 (por duplicado)
Compuesto IIa4 donde R5-es
N� ID del Compuesto CI50
4-MeO-Ph
IIa4-1 1,642
4-HO-Ph
IIa4-3 4,2696
4-iPr-Ph
IIa4-4 3,2082
4-secBu-Ph
IIa4-10 8,4937
4-nPr-Ph
IIa4-12 12,857
Compuesto IIa4 donde R5 es
N� ID del Compuesto CI50
4-MeO-Ph
IIa4-1 1,5938
4-HO-Ph
IIa4-3 3,7606
4-iPr-Ph
IIa4-4 3,1039
4-secBu-Ph
IIa4-10 48,613
4-nPr-Ph
IIa4-12 16,473
EJEMPLO 7
15 Artículos vehículo, tales como semillas o gránulos implantables comercializados o fabricados a medida, se pueden formular e impregnar con uno o más compuestos de la presente divulgación, solos o en combinación, con otro agente quimioterap�utico u otros medicamentos o excipientes. Una formulación preferida puede tener, por ejemplo, características de liberación controladas en el tiempo seleccionables para el compuesto frío-g�nico u otros componentes, por ejemplo, para su uso en el tratamiento del cáncer de pr�stata. Para un ejemplo de implantes de liberación sostenida no radiactivos en el tratamiento terapéutico del cáncer, como el cáncer de pr�stata, véase la patente US-5.633.274.
5 EJEMPLO 8
Lo siguiente ilustra formas farmacéuticas representativas ilustrativas que contienen un compuesto de la divulgación
('Compuesto x'), tal como un compuesto de Fórmula I o II, para uso terapéutico o profiláctico en seres humanos.
(i) Comprimido 1 mg/comprimido 'Compuesto x' 100,00 Lactosa 77,5 Povidona 15,0 Croscarmelosa sádica 12,0 Celulosa microcristalina 92,5 Estearato de magnesio 3,0
300,0 10
(ii) Comprimido 2 mg/comprimido 'Compuesto x' 20,0 Celulosa microcristalina 410,0 Almidón 50,0 Almidón glicolato sádico 15,0 Estearato de magnesio 5,0
500,0
(iii) C�pspula mg/cápsula 'Compuesto x' 10,0 Di�xido de silicio coloidal 1,5 Lactosa 465,5 Almidón pregelatinizado 120,0 Estearato de magnesio 3,0
600,0
(iv)
Inyecci�n 1 (1 mg/ml) mg/ml 'Compuesto x' 1,0 Fosfato sádico dib�sico 12,0 Fosfato sádico monob�sico 0,7 Cloruro sádico 4,5 Solución de hidróxido sádico 1,0 N (ajuste del pH hasta c.s. 7,0-7,5) Agua para inyectables c.s. para 1 ml
(v)
Inyecci�n 2 (10 mg/ml) mg/ml 'Compuesto x' 10,0 Fosfato sádico monob�sico 0,3 Fosfato sádico dib�sico 1,1 Polietilenglicol 400 200,0 Solución de hidróxido sádico 1,0 N (ajuste del pH hasta c.s. 7,0-7,5) Agua para inyectables c.s. para 1 ml
(vi)
Aerosol mg/envase 'Compuesto x' 20,0�cido oleico 10,0 Tricloromonofluorometano 5.000,0 Dicloromonofluorometano 10.000,0 Diclorotetrafluoroetano 5.000,0
15 Las formulaciones anteriores se pueden obtener mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica.
EJEMPLO 9
20 Coadministraci�n de la terapia de combinación. Lo siguiente ilustra formas farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de la divulgación en combinación directa (mezclado) con un anticuerpo (colectivamente 'Composición y') para el uso terapéutico o profiláctico en seres humanos. Por lo tanto, por ejemplo, un compuesto de la divulgación, tal como un compuesto de fórmula II, se combina con un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-VEGF. La combinación resultante 'Composición y' est� sustituida en lugar del 'Compuesto x' en una o más de las formulaciones para inyección anteriormente mencionadas del EJEMPLO 8. Las formulaciones anteriores se pueden obtener mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica.
5 EJEMPLO 10
Administraci�n en serie del tratamiento de combinación. Lo siguiente ilustra formas farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de la divulgación ('Compuesto x') en combinación en serie con un 10 anticuerpo ('anticuerpo z'), para el uso terapéutico o profiláctico en seres humanos. Por lo tanto, un compuesto de la divulgación, tal como un compuesto de fórmula II, se administra en serie con un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-VEGF. Por ejemplo, la combinación administrada en serie puede incluir primero la administración de un compuesto de la divulgación ('Compuesto x') en cualquiera de las formulaciones anteriormente mencionadas del EJEMPLO 7 o 8 seguido de una segunda administración mediante inyección de un anticuerpo ('anticuerpo z'). En
15 otra alternativa, el 'anticuerpo z' se administra mediante la administración de un 'Compuesto x'. Las formulaciones anteriores se pueden obtener mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica.
EJEMPLO 11
20 En la patente US-6.582.959 se describen métodos, ejemplos y bibliografía adicional para la preparación de anticuerpos y la caracterización de anticuerpos, incluyendo especificidad de ant�genos, cartografía de ep�topos, isotipado y afinidad de la unión.

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Uso de un compuesto para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer o para provocar apoptosis en células cancerosas, en el que el compuesto es un compuesto de fórmula (II).
    en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o arilo, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo.
  2. 2. Un compuesto de fórmula II
    15 en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o arilo,
    o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer o como un medicamento que provoca apoptosis en células cancerosas.
  3. 3. El uso de la reivindicación 1 o el compuesto para su uso de la reivindicación 2, en el que el cáncer implica células 20 prost�ticas humanas formadoras de tumor que expresan ant�geno tumoral.
  4. 4. El uso de la reivindicación 1 o el compuesto para su uso de la reivindicación 2, en el que el compuesto se emplea en combinación con un anticuerpo, donde el anticuerpo provoca apoptosis, inhibe la angiog�nesis, o ambas cosas.
    25 5. El uso o el compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para estimular la captación de calcio mediada por el receptor Trp-p-8 en las células cancerosas.
  5. 6. El uso o el compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto
    es para uso en combinación con una cantidad efectiva de al menos un agente quimioterap�utico adicional. 30
  6. 7. El uso o el compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto est� en combinación con una cantidad efectiva de al menos un agente quimioterap�utico adicional.
  7. 8. El uso o el compuesto para su uso de la reivindicación 6 o de la reivindicación 7, en el que el agente 35 quimioterap�utico es un anticuerpo anti-VEGF.
  8. 9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula II en la que
    R1 es H o alquilo (C1-C6); R2 es un fenilo sustituido de fórmula (-PhR3R4R5R6R7)
    donde
    R3, R4, R6 y R7 son cada uno independientemente -H, alquilo (C1-C6), alcoxilo (C1-C6) o halo;
    10 R5 es halo, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C12), alcoxilo (C1-C6), -C(=O)alquilo (C1-C6) o alcano�lo (C1-C7); oR5 es -NR8R9, donde R8 y R9 son cada uno independientemente -H, alquilo (C1-C6), o R8 y R9 junto con el nitrógeno al que est�n unidos forman un anillo morfolino, pirrolidino, piperidino, piperzino, indolino, benzimidazolino, azetidino, aziridino, azepino, 1,4-oxazino o tiomorfolino;
    o R4 y R5 junto con el fenilo al que est�n unidos, forman un anillo que tiene de 4 a 7 átomos y el anillo tiene de 1
    15 a 3 insaturaciones; y formas estereoisom�ricas, mezclas de formas estereoisom�ricas; a condición de que cuando R3, R4, R6 y R7 de -PhR3R4R5R6R7 sean -H, R5 sea distinto de -CH3, -OCH3, -OH, -F o-NO2; y a condición de que R2 sea distinto de 3-hidroxi-4-metil-fenilo; y además
    20 a condición de que R2 sea distinto de 2-hidroxi-naftilo o piridilo
    o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo y un excipiente farmac�uticamente aceptable.
  9. 10. Un método ex vivo o in vitro para desencadenar la apoptosis en células cancerosas, que comprende administrar 25 una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula II
    en la que R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo o arilo, 30 o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo para provocar apoptosis en las células.
  10. 11. El uso, compuesto para su uso, o composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicación 1 a 9 o método de la reivindicación 10, en el que el compuesto de fórmula II se selecciona de:
    35 a) (4-metoxi-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico; b) (4-morfolin-4-il-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico; c) (3-cloro-4-metoxifenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico; d) (4-sec-butil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico; e) indan-5-ilamida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico;
    40 f) (4-terc-butil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico; g) (4-propil-fenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico y h) (4-isopropil-3-metilfenil)-amida del ácido 2-isopropil-5-metil-ciclohexanocarbox�lico,
    o una sal farmac�uticamente aceptable de cualquiera de a-h. 45
  11. 12. El uso, el compuesto para su uso, o la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9,
    o el método de la reivindicación 10, en el que el compuesto de fórmula II se selecciona entre el grupo que consiste en en la que R5 es halo o R5 es -NR8R9, donde R8 y R9 junto con el nitrógeno al que est�n unidos forman un anillo morfolino;
    en la que R5 es halo o R5 es -NR8R9, donde R8 y R9 junto con el nitrógeno al que est�n unidos forman un anillo morfolino;
    en la que R4 es halo y R5 es alcoxilo (C1-C6);
    en la que R4 es halo y R5 es alcoxilo (C1-C6);
    en la que R3 es alcoxilo (C1-C6);
    en la que R3 es alcoxilo (C1-C6);
    en la que R4 es halo;
    en la que R4 es halo;
    15 en la que R3 es alquilo (C1-C6) y R5 es alcoxilo (C1-C6) y
    en la que R3 es alquilo (C1-C6) y R5 es alcoxilo (C1-C6).
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