ES2631457T3

ES2631457T3 - Inhibición de la lipasa pancreática

Info

Publication number: ES2631457T3
Application number: ES10799116.8T
Authority: ES
Inventors: Johnathan Craig Richardson; Peter William Dettmar; Matthew David Wilcox; Lain Andrew Brownlee; Jeffrey Peter Pearson
Original assignee: University of Newcastle, The; Newcastle University of Upon Tyne; RD BIOMED Ltd
Current assignee: University of Newcastle, The; Newcastle University of Upon Tyne; RD BIOMED Ltd
Priority date: 2009-11-25
Filing date: 2010-11-25
Publication date: 2017-08-31
Anticipated expiration: 2030-11-25
Also published as: EP3238729A1; US9999632B2; US20120302521A1; WO2011064547A1; GB0920633D0; NZ600835A; DK2504016T3; CA2781746A1; CA2781746C; EP2504016A1; US9402858B2; AU2010322840A1; PL2504016T3; US20170014447A1; PT2504016T; AU2010322840B2; AU2010322840A8; EP2504016B1

Abstract

Una cantidad eficaz de un alginato para su uso en un método de inhibición de la lipasa pancreática en donde la fracción de los residuos de guluronato en el alginato es de al menos 0,5.

Description

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DESCRIPCION

Inhibition de la lipasa pancreatica Campo de la invention

Esta invention se refiere a la inhibition de la lipasa pancreatica e incluye compuestos, composiciones y procesos para lograrlo.

Antecedentes de la Invention

El alginato es un polisacarido no ramificado que contiene dos eplmeros del acido uronico [1]. El acido manuronico (M) y su eplmero C-5, el acido guluronico (G), estan unidos mediante enlaces glicosldicos a y p (1 ^ 4) [2]. La composition de un alginato puede calcularse mediante la frecuencia de la diada de vecinos cercanos mediante el uso de espectroscopla de resonancia magnetica nuclear (RMN) de 13C [3]. El alga marina parda es la principal fuente comercial de alginato, donde se encuentra como un componente estructural de la pared celular. La distribution de los residuos acidos es de gran importancia ya que ellos confieren caracterlsticas especlficas. Niveles mas altos de residuos M proporcionan un aumento en la flexibilidad de esa section del alga marina. Por ejemplo, el nivel mas alto de residuos M en la Laminaria hyperboria se halla en el tejido foliar, mientras que el estipe es mas bajo en residuos M, con niveles aun mas bajos en la corteza externa [4]. Los alginatos no solo se producen por las algas, sino ademas por las bacterias. En la bacteria del suelo, Azotobacter vinlandii, los alginatos son los constituyentes principales de la capsula vegetativa y de las paredes rlgidas y resistentes a la desecacion de los quistes metabolicamente latentes [5]. Los alginatos producidos por muchas bacterias, por ejemplo Pseudomonas spp., parecen tener multiples funciones en la protection del medio ambiente, mientras que tanto los alginatos bacterianos como de algas marinas pueden estimular el sistema inmunitario humano [5].

Se han aislado y purificado enzimas que poseen la capacidad de epimerizar los residuos M a residuos G a partir de cepas bacterianas que utilizan alginatos. Se ha purificado una familia de siete enzimas epimerasas (AlgE1 - 7) a partir de A. vinlandii, y su describio su actividad. Es probable que cada enzima produzca un patron de distribution de monomeros distinto, por ejemplo AlgE1 es la unica enzima epimerasica doble que crea dos residuos G consecutivos, mientras que las otras enzimas epimerasas solo pueden afectar un residuo a la vez. Los alginatos bacterianos pueden crearse como pollmeros de residuos M homopolimericos y despues pueden procesarse mediante las enzimas a sus caracterlsticas deseadas. Se han desarrollado cepas negativas para epimerasa de Pseudomonas fluorescens, lo que permite cosechar alginatos de residuos M puros cuando las bacterias se cultivan en un medio que contiene una alta concentration de D-fructosa-6-fosfato [6].

Un rango variable de lipasas se producen dentro del cuerpo humano as! como por las bacterias, todas las cuales son responsables de la catalisis de la hidrolisis de enlaces ester en los triacilgliceroles. Con la exception de la lipasa pancreatica, todas las lipasas son enzimas de un solo dominio. La lipasa pancreatica requiere otra protelna (colipasa) para su actividad en presencia de sales biliares o detergentes [7]. La colipasa (11 000 Da) esta implicada en la actividad de la enzima, la prevention de la desnaturalizacion en la interfase agua-llpido e invierte el efecto inhibitorio de las sales biliares en la misma interfase. Hay dos conformaciones de la lipasa pancreatica, la forma abierta (activa) y la forma cerrada (inactiva) [8]. La conformation se cambia a traves del movimiento de dos bucles de aminoacidos que descubren el sitio activo hidrofobico. La union de la colipasa no inicia la actividad de la enzima ni inicia el movimiento de los bucles pero, cuando la colipasa se une a la interfase llpido-agua, los bucles hacen multiples contactos con la colipasa cuando estan en la conformation abierta [8]. Existe un pliegue comun a traves de todas las lipasas denominado pliegue a/p hidrolasa debido a la orientation de las helices a y la distribution de las cadenas p. El sitio activo de la lipasa pancreatica esta compuesto por una trlada catalltica serina-histidina-aspartato y esta trlada esta bien conservada a traves de la familia lipasa [8]. Es probable que el sustrato lipldico penetre en el sitio activo en una orientation de "horquilla" [9] con una cadena de acilo (una punta) en el sitio activo y la segunda cadena de acilo (segunda punta) extendida a lo largo del exterior de la molecula de lipasa en un canal creado por dos residuos de fenilalanina [10].

Algunos tratamientos farmacologicos de la obesidad, por ejemplo Orlistat (Marca Registrada), funcionan mediante la inhibition especlfica e irreversible de las lipasas gastrointestinales, de las cuales la lipasa pancreatica es la mas biologicamente activa e importante en humanos saludables [11]. Se reportan comunmente una serie de efectos informados para el Orlistat, que incluyen esteatorrea, hinchazon, manchas oleosas, urgencia fecal e incontinencia fecal que pueden afectar hasta el 40% de los pacientes [12]. Esto conduce a altas tasas de desgaste y problemas de tolerabilidad. Un producto que mantenga el nivel de inhibition de la lipasa, pero que reduzca o elimine los efectos adversos del tratamiento actual, serla de considerable beneficio para los pacientes.

El documento num. US2005/170059 describe composiciones que comprenden un alginato y una fuente de iones metalicos divalentes no solubilizados. Las composiciones pueden destinarse para usarse como parte de un plan de perdida de peso o de control de peso.

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El documento num. US5324526 describe un alimento o bebida que contiene algina. No hay descripcion de la fraccion de residuos de guluronato en la algina.

La base de datos WPI Week 199719 Thomson Scientific, y las patentes AN 1997-204068 y CN1097307 se refieren a un alimento de algas marinas para perder peso, que comprende alginato de potasio oligomerico. No hay descripcion de la fraccion de residuos de guluronato en el alginato de potasio oligomerico para utilizarla en la composicion.

El artlculo cientlfico "Daily ingestion of alginate reduces energy intake in free-living subjects" (Paxman JR y otros, APPETITE, vol. 51, num. 3, 1 de noviembre de 2008, paginas 713 a 719) exploro los efectos del uso de alginato de sodio en la moderacion del apetito. El alginato de sodio se administro en forma de una composicion que inclula ademas carbonato de calcio.

El artlculo cientlfico "Pancreatic lipase inhibitors from natural sources: unexplored potential" (Birari y otros, Drug Delivery Today, vol. 12, num. 19-20, 11 de octubre de 2007, paginas 879-889) revisa los extractos y metabolitos secundarios de fuentes naturales para identificar alguno que pueda enfocarse para programas de desarrollo de farmacos.

El documento num. US6432400 explora los inhibidores especlficos de la lipasa pancreatica y sus aplicaciones en el tratamiento y prevencion de las enfermedades cardiovasculares, de la liperlipemia y de la obesidad, as! como los reactivos de diagnostico y como agente regulador en un proceso de lipolisis controlada de trigliceridos.

El artlculo cientlfico "Basic studies on the development of diet for the treatment of obesity. The inhibitory effect of alginic- acid as a dietary fiber on obesity" (Choi JH y otros, Journal of the Korean Fisheries Society, vol. 19, num. 4, 1986, paginas 303 a 311) explora el efecto de cambiar la dieta de las ratas, y en particular, si tales cambios pueden ser utiles en el tratamiento de la obesidad.

El documento num. WO 2008/098579 describe un producto dietetico que comprende un alginato.

El documento num. US2003/176394 se refiere a composiciones que incluyen alginatos y su uso en la inhibicion de pepsina y jugo gastrico.

Declaraciones de la Invencion

De acuerdo con la presente invencion, se proporciona una cantidad eficaz de un alginato para su uso en un metodo de inhibicion de la lipasa pancreatica en donde la fraccion de los residuos de guluronato en el alginato es de al menos 0,5. El alginato puede derivarse de cualquier fuente adecuada, que incluye las algas marinas. Puede ser un alginato bacteriano, en particular, un alginato que no ha sido epimerizado (es decir, alginato 1:PAG). Puede ser alternativamente un alginato sintetico.

Preferentemente, la fraccion de los dlmeros de guluronato en el alginato es de al menos 0,3.

Preferentemente, la fraccion de trlmeros de guluronato en el alginato es de al menos 0,25.

Preferentemente, la fraccion de bloques MGM en el alginato es menor de 0,2.

La inhibicion de la lipasa pancreatica puede dirigirse, total o parcialmente, a controlar el peso en animales, que incluye los seres humanos.

Preferentemente, la cantidad de alginato administrado es a partir de 0,1 hasta 10 g como una dosis diaria, con mayor preferencia de 0,5 hasta 10 g como una dosis diaria y con la maxima preferencia de 0,5 g hasta 8 g como una dosis diaria.

Descripcion detallada de la Invencion

La invencion se describira ahora, solo a manera de ejemplos:

Ejemplo 1

Seccion Experimental Materiales

Todas las muestras de alginato fueron amablemente proporcionadas por Technostics (Hull, UK y FMC BioPolymer, Noruega). La tris(hidroximetil)-metilamina y el cloruro de calcio se adquirieron de BDH (Poole, UK). Los acidos biliares (sal sodica del acido desoxicolico y sal sodica del acido taurodesoxicolico) se adquirieron de Fluka (Buchs, Suiza),

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mientras que el 1,2 Di-o-lauril-rac-glicero-3-(acido glutarico-(6-metil-resorufina)-ester) (DGGR), el acetato de sodio, la colipasa, la lipasa y el Orlistat (tetrahidrolipstatina) se adquirieron todos de Sigma-Aldrich (Poole, UK).

Equipos

La absorbancia se midio a 580 nm mediante el uso de un espectrofotometro ATI Unicam 8625 UV/VIS con cubetas semimicro (paso luz 10 mm) (Fisher, UK FB55147) o un espectrofotometro de microplacas de 96 pocillos mediante el uso de un filtro de 575 nm (EL808 BioTek, Bedfordshire UK).

Preparacion

El ensayo de actividad de lipasa es una version modificada del metodo desarrollado por Panteghini y otros [13]. El ensayo requiere tres soluciones, Solucion 1, Solucion 2 y la Solucion lipasa. La solucion 1 contiene 1 mg/l de colipasa y 1,8 mmol/l de sal sodica de acido desoxicolico en tampon Tris (50 mmol/l, pH 8,4 a 25 °C). La solucion 2 contiene 72 mmol/l de sal sodica de acido taurodesoxicolico, 0,1 mmol/l de cloruro de calcio y 0,24 mmol/l de DGGR en tampon acetato (18 mmol/l, pH 4,0 a 25 °C). La solucion 2 se mezclo en un agitador magnetico a 500 rpm y 4 °C toda la noche. La solucion lipasa contiene 1 g/l de lipasa pancreatica porcina en agua desionizada, donde 1 mg contiene 60 U de actividad lipasa.

Para todas las muestras de pollmero de alginato, se preparo una solucion madre que contiene 4 g/l de pollmero, mediante la adicion lenta de polvo de pollmero seco a una mezcla en agitacion de la solucion 1. Despues, la solucion madre se diluyo con tampon para producir muestras de ensayo de pollmero que contienen 0,25, 1 y 4 g/l de pollmero. Cuando las tres muestras de ensayo de pollmero se anadieron a la mezcla de reaccion, la concentracion de alginato en la mezcla de reaccion fue de 0,21, 0,86 y 3,43 g/l, respectivamente. Como control positivo, se anadio Orlistat a 0,025 g/l a la solucion 1. Todas las soluciones se almacenaron a 4 °C hasta su uso.

Procedimiento

Ensayo de actividad lipasa

Se evaluo la actividad de la lipasa bajo tres condiciones. En primer lugar, se determino la actividad lipasa bajo condiciones optimas de ensayo en las que puede lograrse un 100% de actividad. Estas condiciones se denominan condiciones de Control de Lipasa.

Se mezclo 1,5 ml de Solucion 1 con 100 pl de Solucion Lipasa y se incubo a 37 °C durante 60 minutos. Paralelamente, se incubo ademas 150 pl de Solucion 2 a 37 °C durante 60 minutos antes de combinarse con la mezcla Solucion 1: Solucion Lipasa, y despues se incubo durante 35 minutos adicionales. Una vez que se anadio la Solucion 2 a la mezcla enzimatica, se observo una fase de retardo de dos minutos y despues se leyo la absorbancia a intervalos de cinco minutos durante 35 minutos a 575 nm para el ensayo en placa, o a 580 nm para el ensayo en cubetas. Se prepararon ademas blancos reactivos para eliminar el efecto que tienen los productos qulmicos adicionales sobre la absorbancia. Para lograr esto, 100 pl de agua desionizada sustituyeron los 100 pl de solucion lipasa anadidos a las condiciones de prueba. Los blancos reactivos respectivos se restaron de su condition de control o de prueba.

La segunda condicion bajo la cual se evaluo la actividad lipasa fue en presencia de un inhibidor covalente conocido, la tetrahidrolipstatina (Orlistat). Bajo estas condiciones, se anadio 0,025 g/l de Orlistat a la Solucion 1 antes de la incubation y se siguio la metodologla de ensayo anterior. El Orlistat inhibe completamente la lipasa y fue usado como un control positivo para la inhibition. Estas condiciones se denominan condiciones de Control de Inhibition.

La condicion final en la cual se evaluo la actividad lipasa fue en presencia de un pollmero de alginato. Se anadieron pollmeros a la Solucion 1 (0,25 - 4 g/l) antes de la incubacion y se siguio la metodologla de ensayo anterior. Estas condiciones se denominan como Condiciones de Prueba.

Para calcular el porcentaje de inhibicion de la lipasa mediante alginatos, se usaron los valores de absorbancia bajo Condiciones de Prueba, condiciones de Control de Inhibicion y condiciones de Control de Lipasa, y se aplico la siguiente formula.

Condition de prueba - Control de inhibicion

Porcentaje de Inhibicion de Lipasa = 1 - ---------------------------------------------------------------- * 100

Control de Lipasa - Control de inhibicidn

Los valores de absorbancia usados para el calculo de la inhibicion enzimatica fueron mediciones tomadas despues que las Soluciones 1, 2 y la solucion de lipasa se incubo durante 12 minutos. En esta etapa, la reaccion estaba aun en su fase lineal.

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Todos los ensayos de actividad lipasa fueron repetidos seis veces.

La lipasa escindira el sustrato DGGR para formar 1,2 Di-o-lauril-rac-glicerol y un compuesto acido glutarico-(6-metil- resorufina)-ester. Despues el ester se hidroliza espontaneamente en condiciones alcalinas a acido glutarico y produce un cromoforo purpura (metil resorufina). El aumento de la absorbancia a 575 - 580 nm es una medida de la actividad lipasa. El ensayo en cubetas fue adaptado para un ensayo de microplaca de 96 pocillos. El permanecieron iguales, sin embargo se aplico una reduccion de diez veces en volumen para cupieran en una placa.

Analisis Estadlstico

Todos los analisis estadlsticos y el dibujo de los graficos se realizaron mediante el uso de software de analisis Prism version 4 (GraphPad, San Diego, EE.UU.).

Ejemplo 2

Alginato XP3663

Metodo

El ensayo de actividad lipasa es una version modificada del metodo desarrollado por Panteghini y otros [13]. El ensayo comprende tres soluciones, Solucion 1, Solucion 2 y la Solucion Lipasa. La Solucion 1 contiene, por litro de tampon Tris (50 mmol/l, pH 8,4 a 23 °C), 1 mg de colipasa y 1,8 mmol de sal sodica de acido desoxicolico. La Solucion 2 contiene, por litro de tampon acetato (18 mmol/l, pH 4,0 a 23 °C), 72 mmol de sal sodica de acido taurodesoxicolico, 0,1 mmol de cloruro de calcio y 0,24 mmol de DGGR. La Solucion 2 se mezclo con un agitador magnetico a 500 rpm y 4 °C toda la noche. La solucion lipasa contiene 1 g/l de lipasa pancreatica porcina en agua desionizada, donde 1 mg contiene 60 U de actividad lipasa.

El pollmero de alginato (ya sea XP3663 o LFR5/60) se anadio lentamente a una solucion 1 en agitacion, lo que alcanzo una concentracion de 4 g/l, la cual a su vez se diluyo a 1 g/l y 0,25 g/l. Este alcanzo una concentracion de 3,43 g/l, 0,86 g/l y 0,21 g/l, respectivamente, en la mezcla de reaccion. Para alcanzar una inhibicion del 100% en el sistema de ensayo, se anadio Orlistat a 0,025 g/l a la solucion 1. Todas las soluciones se almacenaron a 4 °C hasta su uso.

Se anadieron 12 pl de solucion lipasa a 180 pl de solucion 1, a 180 pl del pollmero de ensayo en solucion 1 o a 180 pl de Orlistat en solucion 1. El pollmero de ensayo en la solucion 1 (ya sea XP3663 o LFR5/60) estaba presente en las siguientes concentraciones (4, 1, o 0,25 g/l). Una vez incubado durante una hora a 37 °C, se anadieron 160 pl de las soluciones anteriores a la solucion sustrato (15 pl de solucion 2), lo que inicia de esta manera la reaccion. Como blanco, se repitio el procedimiento anterior mediante el uso de 12 pl de agua desionizada en lugar de 12 pl de solucion lipasa. La absorbancia de la reaccion se midio a 575 nm cada cinco minutos durante 35 minutos, despues de una fase de retardo inicial de dos minutos. Para calcular el porcentaje de inhibicion de la lipasa, los blancos reactivos se restaron de los controles o muestras correspondientes y se aplico la siguiente ecuacion:

Muestra de pollmero - Control de inhiblcidn

Porcentaje de Inhibicidn de Lipasa = 1 - --------------------------------------------------------------x 100

Control de Lipasa - Control de inhibicidn

Como un ejemplo, si el biopolimero x alcanzo una medida de absorbancia de 0,6 unidades de absorbancia, y su respectivo blanco que contiene el biopolimero y ninguna enzima alcanzo 0,19 unidades de absorbancia, entonces el valor total usado en la ecuacion anterior seria de 0,41 unidades de absorbancia. Si el control de inhibicion alcanzo una lectura de 0,3 unidades de absorbancia, y su blanco alcanzo 0,25 unidades de absorbancia, entonces el valor usado en la ecuacion anterior seria 0,05 unidades de absorbancia. El valor que se usarla para el control de lipasa seria 0,85 unidades de absorbancia, despues de que se hubiese restado el blanco de 0,12, si la reaccion alcanzara una lectura de absorbancia de 0,97 unidades de absorbancia. Por lo tanto, la ecuacion se leerla;

0.41-0.05

Porcentaje de Inhibid6n de Lipasa = 1- ---------------------

0.S5-0.05

Por tanto, el biopolimero x habria inhibido la lipasa pancreatica en un 55%

En este sistema de ensayo se probaron dos biopolimeros, los alginatos XP3663 y LFR5/60. Los dos alginatos se ensayaron al mismo tiempo en la misma placa mediante el uso de las mismas soluciones. Los dos alginatos se ensayaron seis veces mediante el uso de soluciones frescas cada vez.

Resultados

procedimiento y el metodo permitir que los volumenes

las funciones estandar del

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La Figura 1 ilustra como la actividad lipasa (mostrada como un aumento de la absorbancia en el tiempo) vario bajo las tres condiciones descritas anteriormente. En las condiciones de Control de Lipasa (actividad lipasa al 100%) la absorbancia aumento linealmente hasta 12 minutos antes de estabilizarse en un valor maximo. La Figura 1 muestra ademas que el Orlistat (0,025 mg/ml), un inhibidor eficaz de la lipasa, proporciono un control positivo para la inhibicion en el ensayo. El control positivo Orlistat no mostro inhibicion y produjo la velocidad maxima de la reaccion (Figura 1: Control de inhibicion). Finalmente, la Figura 1 destaca como un pollmero (alginato SF200) puede inhibir la lipasa, como se muestra por una reduccion en el nivel de absorbancia en el tiempo en comparacion con las condiciones de Control de Lipasa.

La Figura 2 muestra el porcentaje de inhibicion de la lipasa alcanzado por ocho alginatos de algas marinas pardas (cuatro extraldos de Laminaria y cuatro extraldos de Lessonia). Todos los alginatos redujeron la actividad de la lipasa; sin embargo, hubo una diferencia significativa en el nivel de inhibicion dependiente del alga marina fuente del alginato. Los alginatos extraldos a partir de algas marinas Laminaria inhibieron la lipasa pancreatica en un grado significativamente mayor (p > 0,001) que los alginatos extraldos a partir de Lessonia.

La Figura 3 ilustra que la inhibicion de la lipasa mediante alginatos fue dependiente de la concentration. Aunque la Figura 3 solo muestra alginatos de Laminaria, para todos los alginatos ensayados, el aumento de la dosis de alginato logro un nivel mayor de inhibicion de la lipasa pancreatica.

Las Figuras 2 y 3 muestran que no todos los alginatos inhiben la lipasa en la misma magnitud, incluso aquellos del mismo genero. Una posible explication es que hay variaciones en la composition qulmica de los alginatos. Mas especlficamente, existen diferencias distintivas en el contenido y la distribution de los bloques de acido guluronico y manuronico constituyentes.

Las caracterlsticas estructurales de los alginatos ensayados en este estudio se muestran en la Tabla 1. El pollmero 1, como se muestra en la tabla, es un alginato homopolimerico de manuronato de una fuente bacteriana, los pollmeros 2 -

15 son de fuente bacteriana o de algas marinas y su estructura inicial fue alterada mediante el uso de una o una combination de enzimas epimerasas. Por ejemplo, el alginato bacteriano PAB fue alterado enzimaticamente a partir de un alginato homopolimerico de bloques M (PAG), mediante la incubation con una enzima epimerasa alternante hasta su termination, lo que crea un pollmero de principalmente bloques MG alternantes. El alginato PAT se trato solo con la misma enzima epimerasa durante 2 horas, por lo tanto, solo aumento el contenido de MG de 0 a 17 %. Los pollmeros

16 - 19 son de algas marinas Laminaria, mientras que los pollmeros finales listados (20 - 23) son de algas marinas Lessonia.

Claims

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Reivindicaciones

1. Una cantidad eficaz de un alginato para su uso en un metodo de inhibicion de la lipasa pancreatica en donde la fraccion de los residuos de guluronato en el alginato es de al menos 0,5.

2. El alginato para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el alginato se deriva de algas marinas.

3. El alginato para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde el alginato es un alginato bacteriano.

4. El alginato para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la fraccion de

dlmeros de guluronato en el alginato es de al menos 0,3.

5. El alginato para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la fraccion de trlmeros de guluronato en el alginato es de al menos 0,25.

6. El alginato para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la fraccion de bloques MGM en el alginato es menor de 0,2.

7. El alginato para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el uso se dirige al control del peso en animales, que incluye los seres humanos.

8. El alginato para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el alginato se administra de 0,1 a 10 g como una dosificacion diaria.

imagen1

Tiempo (min)

Figure 1

El cambio de la absorbancia en el tiempo como meduda de la actividad

Control de Lipasa (lipasa mas sustrato), V- alginato SF200 a 3,43 mg/ml

lipasa.

{como un ejemplo] y A - Control de inhibition Orlistat 0,025 mg/ml. Las barras de

error muestran el error estandar de la media (n = 6).

imagen2

Laminaria Lessonia

Fuente de Alginato

Figura 2 Comparacion entre alginatos a partir de algas marinas Laminaria y Lessonia. Cuatro alginatos de peso molecular creciente (de izquierda a derecha) se muestran para Laminaria y Lessonia como sus respectivas fuentes. La inhibicion de la lipasa mostrada en esta figura es caused a por 3,43 mg/ml de alginato. Los alginatos a partir de la especie Laminaria son LFR5/60, SF120, SF/LF y los alginatos de algas marinas Lessonia son LF10L, LF120L, SFGO y H120L. Las barras de error mostradas son el error estandar delamedia(n = 6)-

imagen3

Porcentajede inhibition

imagen4

Figure 4 El porcentaje de inhibition de la lipasa a los 12 minutes mediante el uso de 3,43 mg/ml de alginato contra la fraction de residuos de guluronato (F[G]J en el polimero de alginato. Las barras de error muestran el error estandar de la media (n = 6).

imagen5

1.00

0.25

0.75

F[M]

El porcentaje de inhibition de la lipasa a los 12 minutos irvecflante el uso

Figura S

de 3,43 mn,ml de alginato graficado contra la fraccion de residues de manuronato

(F[M]J en los polimeros de alginato. Las barras de error mostradas son el error

estandar de la media (n = 6)

imagen6

0.25

0.50

075

1.00

F[GG]

El porcentaje de inhibition de la lipasa a los 12 minutos mediants el uso

Flgura 6

de 3,43 mg/ml de alginato contra la fraction de dimeros de guluronato (F[GG]J en los

polimeros de alginato. Las barras de error mostradas son el error estandar de la

media (n = 6).

imagen7

0

25

50

0.75

F[GGG]

25J

El porcentaje de inhibicion de la lipasa a los 12 minutes mediante el uso

Fig Lira 7

de 3.43 mg/ml de alginate graficado contra la fraction de trimeros de guluronato

{F[GGG]J en los pohmeros de alginato. Las barras de error muestran el error estandar

de la media (n *= 6}

imagen8

25

T3

N(G>1)

-25

El percentaje de inhibition de la lipasa a las 12 minutos mediants el uso

Figura 3

de 3.43 mg/ml de alginate contra la longitud promedio de los blloques de guluronato

(N[G>11) en Ids polimeros de alginate. Las barras de error muestran el error estandar

de la media (n = 6).

imagen9

F[MG]

25

Fioura 9

El porcentaje de mhibicion de la lipasa a los 12 minutes mediante el uso

de 3,43 mg/ml de alginato graficado contra la fraccion de bloques MG o GM (F[NIG]} on

los pohmeros de alginato. Las barras de error mostradas son el error estandar de la

media {n = 61.

Porcentajede inhibition

imagen10

Figura 10 El porcantaje da inhibition da la llpasa a los 12 minutos mediante al uso da 3,43 mg/ml da alginato graficado contra la fraction da bloques MGM {F[MGM]) an los poll mar os da alglnato. Las barras da arror muastran al error astandar da la media (n = 6).

imagen11

1Q0n

75

50

0.25

0.50

0.75

1.00

F[MM]

El porcentaje de inhibicion de la lipasa a los 12 minutos mediante el uso

Figura 11

de 3,43 mg.'ml de alginato contra la fraccion de bloques MM {F[MM]) en los pohmeros

de alginato. Las b arras de error muestran el error estandar de la media (n = 6).

imagen12

0.125

0.025

0.050

0.075

0.100

F[MGG]

El porcentaje de inhibicion de la lipasa a los 12 minutes mediant* el uso

Figure 12

de 3.43 mg/ml de alginato graficado contra la Iraccion de bloques MGG o GGM

(F[MGG]) en los polimeros de alginato. Las barras de error muestran el error estandar

de la media (n ■ 6).

imagen13

XP 3663 LFR5/60

Alginato

Figura 13 El nivel de inhibition de la lipasa alcanzado por los alginates LFR5/60 y XP3GG3 a tres concentraciories, □ -0,21 mgSml, 0 - 0,86 mg/ml y ■ - 3,43 mgAnl. Las barras de error son el error estandar de la media (n = G).