ES2440390A1

ES2440390A1 - Composiciones para el tratamiento del sobrepeso y de la obesidad

Info

Publication number: ES2440390A1
Application number: ES201231198A
Authority: ES
Inventors: Josep Escaich Ferrer; Mª Luisa BONET PIÑA; Daniel MARTÍNEZ PUIG; Nuria GRANADOS BORBOLLA; Bàrbara REYNÉS MIRALLES; Carles Chetrit Russi; Andreu Palou Oliver
Original assignee: Bioiberica SA
Current assignee: Bioiberica SA
Priority date: 2012-07-25
Filing date: 2012-07-25
Publication date: 2014-01-28
Anticipated expiration: 2032-07-25
Also published as: CA2879645C; US20150182597A1; EP2884956B1; EP2884956A1; WO2014016233A1; ES2673099T3; ES2440390B1; CA2879645A1

Abstract

La presente invención se refiere a una composición que comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano para su uso en el tratamiento o prevención de al menos una de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico en un mamífero, seleccionada del grupo formado por sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso o dislipidemia. Además la composición puede contener hidrolizado de colágeno. La composición está en forma de composición farmacéutica.

Description

Composiciones para el tratamiento del sobrepeso y de la obesidad

Sector técnico de la invención

La presente invención se refiere a composiciones para su uso en el tratamiento, prevención o reducción del sobrepeso o de la obesidad, así como de enfermedades, afecciones o alteraciones metabólicas relacionadas con el sobrepeso o la obesidad y junto con las cuales conforman el síndrome metabólico, tales como la resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso o dislipidemia, estando las composiciones en forma de composiciones farmacéuticas.

Estado de la técnica anterior

La obesidad, definida como un exceso de peso corporal en forma de grasa, es un importante factor de riesgo de desórdenes clínicos graves, entre ellos la diabetes tipo 2 y la enfermedad cardiovascular, y es un problema de incidencia creciente y difícil tratamiento que acarrea un importante gasto socio-sanitario (véase http://www.iaso.org/iotf/obesity/). Es conocido que muchas personas con sobrepeso u obesidad desarrollan resistencia a la insulina e hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, dislipidemia, e hipertensión, características que, en conjunto, conforman el llamado síndrome metabólico.

Una de las complicaciones metabólicas más frecuentes en la obesidad es la resistencia a la insulina (A. Astrup &

N. Finer, Obes. Rev. 1, 57-59 (2000)). La conexión entre ambas condiciones ha sido ampliamente estudiada y parece deberse a que, en los individuos obesos, el tejido adiposo libera cantidades incrementadas o anormales de ácidos grasos no esterificados, hormonas (adipoquinas) y citoquinas pro-inflamatorias, entre otros factores, que favorecen la pérdida de sensibilidad a la insulina en diferentes tejidos (S.E. Kahn et al., Nature 444, 840-846 (2006)). La resistina, en particular, es una proteína secretada por adipocitos y/o macrófagos infiltrados en el tejido adiposo obeso que actúa como un factor pro-inflamatorio y de resistencia a la insulina, y cuyos niveles circulantes están elevados en individuos obesos (D.R. Schwartz & M.A. Lazar, Trends Endocrinol. Metab. 22, 259-265 (2011)). La reducción de la resistina se correlaciona con incrementos de la sensibilidad a la insulina

(C.M. Steppan et al., Nature 409, 307-312 (2001); F. Felipe et al., Diabetes 53, 882-889 (2004)).

La resistencia a la insulina es clínicamente relevante porque está estrechamente asociada a la diabetes de tipo 2 y otros problemas como hipertensión, dislipidemia, y defectos en la coagulación sanguínea y la fibrinolisis, todos los cuales se relacionan a su vez con la enfermedad cardiovascular (G. Boden, Curr. Opin. Endocrinol. Diabetes Obes. 18, 139-143 (2011)). En general, se acepta que el defecto primario en el desarrollo de diabetes de tipo 2 es el deterioro de la sensibilidad a la insulina, al que sigue una hiperinsulinemia compensatoria, e hiperglucemia cuando los mecanismos de compensación fallan. Por tanto, la mejora de la homeostasis de la glucosa-insulina es un objetivo de salud de interés específico en sí mismo.

Las estrategias para la reducción de peso basadas únicamente en la restricción calórica y el aumento de la actividad física son difíciles de seguir, y se han mostrado ineficaces frente a la actual pandemia de obesidad. Paralelamente, hay evidencia de que nutrientes específicos y otros ingredientes alimentarios influencian procesos bioquímicos que impactan sobre el balance energético y la acumulación de grasa de manera tal que pueden favorecer un fenotipo más magro (K. H. Kim & Y. Park, Annu. Rev. Food Sci. Technol. 2, 237-257 (2011);

C. Pico et al., Rev. Esp. Obes. 4, 156-174 (2006); E. M. Kovacs & D. J. Mela, Obes. Rev. 7, 59-78 (2006)). Esta evidencia es la base para el desarrollo de complementos alimenticios o alimentos funcionales para el control de la obesidad.

Se han definido las siguientes estrategias principales en alimentación funcional para el control de la obesidad: (i) reducción de la ingesta, vía modulación de las sensaciones de hambre y/o saciedad, o limitando la biodisponibilidad de nutrientes; (ii) reducción de la densidad calórica en alimentos light; (iii) estimulación del gasto energético mediante activación de la termogénesis adaptativa; y (iv) redireccionamiento de nutrientes hacia tejidos y vías metabólicas que los consumen, desfavoreciendo así la deposición de grasa (C. Pico et al., Rev. Esp. Obes. 4, 156-174 (2006)). Se considera de especial interés el uso de nutrientes o combinaciones de nutrientes capaces de afectar simultáneamente a varios de estos procesos (C Pico et al., Rev. Esp. Obes. 4, 156-174 (2006)).

La inhibición de la adipogénesis es otra posible estrategia anti-obesidad (K. H. Kim & Y. Park, Annu. Rev. Food Sci. Technol. 2, 237-257 (2011)). La adipogénesis es el proceso de diferenciación de los adipocitos a partir de células precursoras, y ha sido muy estudiada principalmente en modelos celulares (B. Feve, Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. 19, 483-499B (2005)). En humanos, un porcentaje considerable de los adipocitos, en torno al 10%, es renovado anualmente durante toda la vida adulta mediante la coordinación de adipogénesis de novo y muerte de adipocitos preexistentes (K. L. Spalding et al., Nature 453, 783-787 (2008)). Muchos individuos obesos presentan un número excesivo de adipocitos (hiperplasia) en sus depósitos adiposos, y estos individuos son especialmente refractarios a la pérdida de peso a largo plazo y propensos al conocido efecto yo-yo. El control farmacológico o nutricional de la adipogénesis emerge en este contexto como una nueva diana terapéutica en el control de la obesidad, como coadyuvante en estrategias convencionales de control del balance energético: la inhibición de la adipogénesis puede ayudar a normalizar (reducir) el número de adipocitos, y con ello al mantenimiento del peso tras la pérdida de peso (P. Arner & K. L. Spalding, Biochem. Biophys. Res. Commun. 396, 101-104 (2010)).

Los glicosaminoglicanos (GAGs) son biomoléculas poliméricas de elevado peso molecular formados por repeticiones de una unidad disacarídica. Se encuentran fundamentalmente en los organismos vivos, donde desarrollan diferentes funciones fisiológicas.

El ácido hialurónico es un glicosaminoglicano no sulfatado, con una estructura polimérica caracterizada por un disacárido que se repite, constituido por los monosacáridos N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico. Es uno de los principales componentes del cartílago, de la membrana sinovial y del líquido sinovial. En particular, es importante su uso en el tratamiento de disfunciones articulares como la artrosis, generalmente por vía intraarticular. También se ha descrito su uso en oftalmología, en la cicatrización de heridas, así como en cosmética.

El sulfato de dermatano es un glicosaminoglicano sulfatado con una estructura polimérica constituida mayoritariamente por disacáridos de N-acetil-D-galactosamina sulfatada en posición 4 y ácido L-idurónico, a menudo sulfatado en posición 2. Se ha descrito que participa en la reparación de heridas y en la regulación de la coagulación de la sangre. Esta sustancia se usa en gran medida en cosmética.

El hidrolizado de colágeno está constituido por una mezcla de aminoácidos y péptidos de peso molecular bajo. Se obtiene por hidrólisis enzimática controlada de la proteína colagenosa contenida en la piel y en otros tejidos conjuntivos. Se utiliza mayoritariamente en cosmética.

La solicitud de patente US 2005084518 describe un alimento para la salud (health food) que contiene ácido hialurónico y sulfato de dermatano. Dicho alimento es útil para el embellecimiento de la piel.

En la patente US 7,763,594 se describe el uso de una composición de ácido hialurónico y sulfato de dermatano para tratar la artrosis.

A la vista de lo anterior, el proporcionar composiciones para el tratamiento, prevención o control del sobrepeso y/o de la obesidad, así como de algunas de sus complicaciones metabólicas, es un tema de enorme interés en el campo terapéutico.

Explicación de la invención

Los presentes inventores han encontrado que las composiciones de la presente invención, definidas más abajo, ejercen un efecto sinérgico anti-adipogénico, incluso en presencia de un cóctel hormonal pro-adipogénico; inhiben la expresión de resistina (adipoquina relacionada con la resistencia a la insulina); reducen la ganancia de peso y la ingesta energética acumulada en ratones alimentados ad libitum; reducen la insulinemia y la trigliceridemia en ratones; y provocan la pérdida de peso y de grasa, así como ganancia de masa grasa, en ratones obesos. Por ello, las referidas composiciones pueden ser utilizadas en el tratamiento o prevención del sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso o dislipidemia.

La presente invención se refiere al uso de una composición que comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de al menos una de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico en un mamífero, seleccionada del grupo formado por sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso y dislipidemia.

Preferentemente, el uso de la citada composición es para la preparación de un medicamento para el tratamiento

o prevención del sobrepeso asociado al síndrome metabólico en un mamífero. Igual de preferente es el uso de la citada composición para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la obesidad asociada al síndrome metabólico en un mamífero. Igual de preferente es el uso de la citada composición para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la resistencia a la insulina asociada al síndrome metabólico en un mamífero. Igual de preferente es el uso de la citada composición para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la diabetes tipo 2 asociada al síndrome metabólico en un mamífero. Igual de preferente es el uso de la citada composición para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención del hígado graso asociado al síndrome metabólico en un mamífero. Igual de preferente es el uso de la citada composición para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la dislipidemia asociada al síndrome metabólico en un mamífero, y particularmente el caso en el que la dislipidemia es hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia o ambas a la vez, es decir, hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia.

En una realización preferida, la resistencia a la insulina está asociada al sobrepeso o a la obesidad, la diabetes tipo 2 está asociada al sobrepeso o a la obesidad, el hígado graso está asociado al sobrepeso o a la obesidad o la dislipidemia está asociada al sobrepeso o a la obesidad, estando dicho sobrepeso u obesidad asociado al síndrome metabólico en un mamífero.

En otra realización preferida, el ácido hialurónico y el sulfato de dermatano están presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano comprendida entre 1:0,05 y 1:0,75, preferentemente entre 1:0,10 y 1:0,50. La relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano especialmente preferida es 1:0,25.

En otra realización igualmente preferida la composición además comprende hidrolizado de colágeno. Preferentemente, el ácido hialurónico, el sulfato de dermatano y el hidrolizado de colágeno están presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano a hidrolizado de colágeno comprendida entre 1:0,06:0,03 y 1:0,80:0,40, preferentemente entre 1:0,10:0,05 y 1:0,40:0,20. La relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano a hidrolizado de colágeno especialmente preferida es 1:0,20:0,10.

En otra realización igualmente preferida el mamífero es un humano.

Preferentemente, la composición o el medicamento se adapta para la administración oral o parenteral. La más preferida es la administración oral.

En la presente invención, el término “comprende” debe interpretarse de forma que también incluye el caso de “consiste únicamente en” y el de “consiste esencialmente en”.

En la presente invención, cuando se habla de ácido hialurónico y de sulfato de dermatano se incluye cualquier sal de los mismos, por ejemplo la sal de sodio, de potasio o de calcio.

Preferentemente, el ácido hialurónico y el sulfato de dermatano de las composiciones de la presente invención están en forma de sal de sodio.

En la presente invención, los pesos moleculares medios de ácido hialurónico, sulfato de dermatano y sulfato de condroitina se han determinado por cromatografía de permeación de gel (GPC).

En la presente invención, la abreviatura HA significa ácido hialurónico (Hyaluronic Acid), la abreviatura DS significa sulfato de dermatano (Dermatan Sulphate), la abreviatura CH significa hidrolizado de colágeno (Collagen Hydrolysate) y la abreviatura CS significa sulfato de condroitina (Chondroitin Sulphate).

En la presente invención los siguientes términos tienen el significado indicado:

“Síndrome metabólico” se refiere a cuando se asocian en una misma persona con sobrepeso u obesidad varios de entre un conjunto de diversos factores de riesgo, tales como la resistencia a la insulina e hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, dislipidemia, e hipertensión.

“Inducir la sensación de saciedad” se refiere a inducir a que el cuerpo (el individuo) se sienta satisfecho y no tenga hambre, entendida como necesidad de ingesta inmediata de alimentos.

“Mantener los niveles normales de colesterol en sangre” se refiere a mantener los niveles de colesterol total por debajo de 200 mg/dL, mantener los niveles de colesterol LDL por debajo de 100 mg/dL y mantener los niveles de colesterol HDL por encima de 40 mg/dL.

“Colesterol LDL” se refiere al colesterol ligado a las lipoproteínas de baja densidad (Low Density Lipoproteins), conocido también como “colesterol malo”.

“Colesterol HDL” se refiere al colesterol ligado a las lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoproteins), conocido también como “colesterol bueno”.

“Hipercolesterolemia” se refiere a cuando los niveles de colesterol total y/o colesterol LDL en sangre son elevados.

“Mantener los niveles normales de triglicéridos en sangre” se refiere a mantener los niveles de triglicéridos por debajo de 150 mg/dL.

“Vía parenteral” se refiere a cuando los medicamentos o los nutrientes son introducidos en el cuerpo sin ser absorbidos por el tracto gastro-intestinal. Las vías parentelares de uso más frecuente son la intravenosa, subcutánea e intramuscular.

El ácido hialurónico y el sulfato de dermatano de las composiciones de la presente invención se pueden obtener por procedimientos extractivos a partir de tejidos de aves o de mamíferos o bien por biotecnología.

Los pesos moleculares medios del ácido hialurónico y del sulfato de dermatano de las composiciones de la presente invención pueden variar dependiendo del procedimiento de obtención. Preferentemente, el peso molecular medio del ácido hialurónico está comprendido entre 300.000 y 2.000.000 daltons, más preferentemente entre 800.000 y 1.000.000 daltons y el del sulfato de dermatano está comprendido entre 10.000 y 50.000 daltons.

El ácido hialurónico de las composiciones de la presente invención se puede obtener, mediante extracción, a partir de tejidos de aves o de mamíferos, por ejemplo a partir de humor vítreo, piel de mamífero, cordón umbilical

o crestas de aves o bien por fermentación de microorganismos (por ejemplo Streptococcus), siguiendo procedimientos descritos en la literatura (D.A. Swann, Biochim. Biophys. Acta 156, 17-30 (1968); patente US 4,780,414).

Preferentemente, el ácido hialurónico de las composiciones de la presente invención es un producto comercial disponible en www.bioiberica.com. Se obtiene a partir de crestas de gallo, las cuales una vez picadas se digieren con un enzima proteolítico. Posteriormente se desactiva el enzima mediante calentamiento, se filtra, se elimina el sulfato de dermatano y se precipita el ácido hialurónico, el cual se anhidrifica, se seca y se moltura. Dicho ácido hialurónico en forma de sal de sodio presenta una riqueza mínima del 90%, determinada por contenido en ácido glucurónico, y un peso molecular medio comprendido entre 800.000 y 1.000.000 daltons.

El sulfato de dermatano de las composiciones de la presente invención se puede obtener a partir de tejidos de aves o de mamíferos, por ejemplo a partir de mucosa porcina o bovina, crestas de aves o piel de mamífero, siguiendo procedimientos descritos en la literatura ( N. Volpi, Anal. Biochem. 218, 382-391 (1994); patente EP 238994).

Preferentemente, el sulfato de dermatano de las composiciones de la presente invención se obtiene a partir de crestas de gallo, en el procedimiento de obtención del ácido hialurónico. Una vez separado el sulfato de dermatano en forma de complejo, se rompe el complejo mediante fuerza iónica, se precipita, se anhidrifica, se seca y se moltura. También se puede emplear el sulfato de dermatano de mucosa porcina comercializado por la empresa Sigma-Aldrich Química (Referencia: C3788). El sulfato de dermatano en forma de sal de sodio que proviene de crestas de gallo presenta una riqueza mínima del 90%, determinada por valoración fotométrica, y un peso molecular medio comprendido entre 10.000 y 50.000 daltons.

El hidrolizado de colágeno de las composiciones de la presente invención se puede obtener de piel de mamífero

o de crestas de gallo, siguiendo procedimientos descritos en la literatura (“Final Report on the Safety Assessment of Hydrolyzed Collagen”, Journal of the American College of Toxicology 4, nº5, 199-221, Mary Ann Liebert, Inc., Publishers, (1985)).

Las composiciones de la presente invención se pueden preparar mezclando sus componentes en las proporciones deseadas. Así, se pueden preparar composiciones que contengan ácido hialurónico y sulfato de dermatano, o bien ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno (aminoácidos y péptidos de bajo peso molecular).

Las composiciones de la presente invención también se pueden obtener directamente a partir de tejidos de aves

o de mamíferos mediante un procedimiento extractivo. Así, por ejemplo, se puede partir de crestas de gallo congeladas, las cuales una vez picadas se digieren con un enzima proteolítico. Posteriormente se desactiva el enzima mediante calentamiento, se filtra y se precipita con solventes. A continuación se filtra, se lava y se seca. Finalmente se puede proceder al molturado. El producto obtenido comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno (en forma de aminoácidos y péptidos de bajo peso molecular). Modificando ligeramente éste procedimiento se pueden obtener composiciones que comprendan ácido hialurónico y sulfato de dermatano, pero no hidrolizado de colágeno. La presencia de los tres componentes (HA, DS y CH) o de sólo dos (HA y DS) y la proporción entre ellos dependerá del procedimiento de obtención (tipo de enzima, temperatura, tiempo de reacción y proceso de purificación).

La composición de la invención que comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno más preferida es la que comprende 65% de ácido hialurónico (HA), 13,40% de sulfato de dermatano (DS) y 6,56% de hidrolizado de colágeno (CH) (relación en peso HA:DS:CH 1:0,20:0,10).

En la presente invención, el glicosaminoglicano sulfato de condroitina se ha empleado únicamente con fines comparativos. El sulfato de condroitina presenta una estructura polimérica caracterizada por un disacárido que se repite, constituido por N-acetil-D-galactosamina y ácido D-glucurónico. La mayoría de los residuos de N-acetil-Dgalactosamina están sulfatados. Se puede obtener mediante digestión enzimática proteolítica de tejidos cartilaginosos de animales, por ejemplo tráqueas de ganado bovino o porcino o esqueletos cartilaginosos de peces. El sulfato de condroitina que procede del tejido cartilaginoso se encuentra principalmente en dos formas isoméricas, el 4-sulfato de condroitina y el 6-sulfato de condroitina. El peso molecular medio del sulfato de condroitina puede variar dependiendo de su origen y/o del procedimiento de obtención empleado. Generalmente, tiene un peso molecular medio comprendido entre 10.000 y 70.000 daltons.

El sulfato de condroitina en forma de sal de sodio utilizado con fines comparativos en el Ejemplo 1 de la presente invención es un producto comercial disponible en www.bioiberica.com con una riqueza mínima del 98%, determinada por valoración fotométrica, y un peso molecular medio comprendido entre 14.000 y 18.000 daltons. Se obtiene a partir de cartílago de origen bovino.

Para utilizar las composiciones de la presente invención en el tratamiento o prevención del sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso o dislipidemia en un mamífero, se formulan en composiciones farmacéuticas adecuadas, recurriendo a técnicas y excipientes o vehículos convencionales, como los descritos en Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2000, edited by Lippincott Williams and Wilkins, 20th edition, Philadelphia. Las composiciones farmacéuticas comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la presente invención y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable para la administración al paciente. Dichas composiciones farmacéuticas pueden administrarse al paciente en dosis requeridas. La administración de las composiciones farmacéuticas puede efectuarse por diferentes vías, por ejemplo, oral, intravenosa, subcutánea, intramuscular, sublingual, intradérmica, nasal o tópica. Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la presente invención, dependiendo dicha cantidad de muchos factores, como por ejemplo, el estado físico del paciente, edad, sexo, vía de administración, frecuencia de administración o gravedad de la enfermedad. Además, se entenderá que dicha dosificación de la composición de la invención puede administrarse en unidades de dosis única o múltiple para proporcionar los efectos terapéuticos deseados.

Las composiciones farmacéuticas de la invención generalmente estarán en forma sólida, líquida o como gel. Entre las preparaciones farmacéuticas en forma sólida que pueden prepararse de acuerdo con la presente invención se incluyen polvos, minigránulos (pellets), comprimidos, gránulos dispersables, cápsulas, sellos, tabletas, liofilizados y supositorios. Entre las preparaciones en forma líquida se incluyen soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires, viales bebibles y tisanas. Se contemplan también las preparaciones de formas sólidas que se desean convertir, inmediatamente antes de ser utilizadas, en preparaciones en forma líquida. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones.

Breve descripción de las Figuras

La Figura 1 muestra las imágenes, al microscopio de contraste de fase, de fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) cultivados durante 8 días en medio de crecimiento conteniendo: vehículo (agua, Control); ácido hialurónico (HA) a concentración final (c.f.) 80 !g/mL; sulfato de dermatano (DS) a c.f. 20 !g/mL; o composición de la invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL. Se aprecian gotas de grasa intracelulares refringentes al microscopio de contraste de fase en todos los cultivos, excepto el tratado con HA80+DS20. (Magnificación x200).

La Figura 2 muestra los niveles de expresión de los ARN mensajeros (mRNA) para los factores de transcripción adipogénicos PPARgamma (A) y C/EBPalfa (B) y para la proteína lipogénica ácido graso sintasa (FAS) (C) en MEFs cultivados durante 8 días en medio de crecimiento suplementado con: vehículo (agua); HA a c.f. 80 !g/mL; DS a c.f. 20 !g/mL; CS a c.f. 20 !g/mL o composición de la invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL. Los niveles de mRNA para beta-actina se emplearon como control interno. Los resultados se expresan en tanto por uno del nivel de expresión en las células control tratadas con vehículo, y son la media ± SEM de al menos seis muestras para cada condición ensayada, distribuidas en dos experimentos independientes. ***; P= 0,001 vs vehículo, ttest.

La Figura 3 muestra los niveles de expresión de los ARN mensajeros (mRNA) para los factores de transcripción adipogénicos PPARgamma (A) y C/EBPalfa (B) y para la proteína lipogénica FAS (C) en MEFs tras 8 días de diferenciación en medio conteniendo un cóctel hormonal adipogénico suplementado con: vehículo (agua); HA a

c.f. 80 !g/mL; DS a c.f. 20 !g/mL; o composición de la invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL. Los niveles de mRNA para beta-actina se emplearon como control interno. Los resultados se expresan en tanto por uno del nivel de expresión en las células control tratadas con vehículo, y son la media ± SEM de triplicados para cada tratamiento. *; P<0,05 vs vehículo, t-test.

La Figura 4 muestra los niveles de expresión de resistina en MEFs tras 8 días de diferenciación en medio adipogénico en presencia de diferentes concentraciones finales de HA+DS en una relación en peso HA a DS de 1:0,25. Los niveles de mRNA para la beta-actina se emplearon como control interno. Los resultados se expresan en tanto por uno del nivel de expresión en las células control tratadas con vehículo, y son la media ± SEM de cuatro experimentos realizados en triplicados. Las letras diferentes (a, b) implican cambios significativos según ANOVA de un factor (P<0,05).

La Figura 5 muestra la ingesta acumulada tras 143 días de suplementación por vía oral con vehículo (agua, grupo Control), o con una composición de la invención, a dosis 0,45 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). Los datos representados corresponden a la media ± SEM de 8 animales por grupo, distribuidos en 2 jaulas de 4 animales cada una. **; P<0,01 HA+DS+CH vs Control, t-test.

La Figura 6 muestra los niveles circulantes de glucosa (A), niveles circulantes de insulina (B) e índice HOMA-IR

(C) en ratones tratados por vía oral con vehículo (agua, grupo Control) o con una composición de la invención, a dosis 0,45 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). Los análisis se efectuaron tras 88 días de tratamiento, después de sometidos los animales a un ayuno de 6 h. Los datos corresponden a la media ± SEM de 7-8 animales por grupo. *; P<0,05 HA+DS+CH vs Control, t-test.

La Figura 7 muestra los niveles circulantes de triacilgliceroles en el estado alimentado en ratones tras 143 días de tratamiento con vehículo (grupo Control) o con una composición de la invención, a dosis 0,45 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). Los datos corresponden a la media ± SEM de 7-8 animales por grupo. *; P<0,05 HA+DS+CH vs Control, t-test.

La Figura 8 muestra la evolución de la pérdida de masa grasa (A) y la ganancia relativa de masa magra (B) en ratones con obesidad dietética en fase de adelgazamiento, tratados diariamente por vía oral con vehículo (grupo Control) o con una composición de la invención, a dosis 3 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). Los resultados son la media ± SEM de 7-8 animales por grupo. *; P<0,05 HA+DS+CH vs Control a tiempo respectivo, t-test.

La Figura 9 muestra el peso de los depósitos de tejido adiposo blanco inguinal (TABi), retroperitoneal (TABr) y epididimal (TABe), e índice de adiposidad corporal en ratones expuestos durante 32 días a condiciones de adelgazamiento y tratados con vehículo (grupo Control) o con una composición de la invención, a dosis 3 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). El índice de adiposidad se definió, para cada animal, como la suma del peso de sus depósitos de TAB expresada como porcentaje del peso corporal. Los resultados son la media ± SEM de 7 animales por grupo. *; P<0,05 HA+DS+CH vs Control, t-test.

La Figura 10 muestra los niveles circulantes en el estado alimentado de glucosa (A) e insulina (B) en ratones expuestos durante 32 días a condiciones de adelgazamiento y tratados con vehículo (grupo Control) o con una composición de la invención, a dosis 3 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH). Los resultados son la media ± SEM de 6-7 animales por grupo. *; P<0,05 HA+DS+CH vs Control, t-test.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas:

Los siguientes ejemplos son a título ilustrativo, y no representan una limitación del alcance de la presente invención.

Ejemplo 1: Estudio de eficacia de una composición de la presente invención en la inhibición de la adipogénesis espontánea de fibroblastos embrionarios de ratón, en comparación con ácido hialurónico, sulfato de dermatano y sulfato de condroitina

La adipogénesis es el proceso de formación de células almacenadoras de grasa (adipocitos) a partir de células precursoras. La obesidad se correlaciona a menudo con la presencia de un exceso de adipocitos en los depósitos grasos. El objetivo del estudio fue comparar el potencial de una combinación de ácido hialurónico y sulfato de dermatano, en una relación en peso HA a DS de 1:0,25 (HA80+DS20), y de sus componentes individuales de inhibir la acumulación intracelular de lípidos y la expresión de genes marcadores de adipocitos en cultivos de fibroblastos primarios embrionarios de ratón (MEFs) mantenidos en medio de crecimiento. También se llevó a cabo una comparación con el glicosaminoglicano sulfato de condroitina. Los MEFs son células multipotentes, cultivables, capaces de diferenciarse en diferentes tipos celulares mesenquimales (adipocitos, condrocitos, osteoblastos) dependiendo de la estimulación hormonal que reciban. Algunos estudios han reportado que el suero del medio de cultivo puede inducir la adipogénesis espontánea en células mesenquimales multipotentes como los MEFs (L. Wu et al., J. Cell Mol. Med. 14, 922-932 (2010)).

Materiales y métodos

MEFs obtenidos a partir de embriones de 13 días de edad gestacional fueron cultivados en monocapa hasta llegar a la confluencia, en medio de crecimiento consistente en medio basal AmnioMAXTM-C100 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) suplementado con suplemento AmnioMAXTM-C100 (7,5%), suero bovino fetal (7,5%) y antibióticos, en placas de cultivo de 12 pocillos de 1 mL de capacidad/pocillo, siguiendo un protocolo previamente descrito (J.B. Hansen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 4112-4117 (2004)). Dos días después de alcanzada la confluencia, que se considera el día 0 de cultivo, las células fueron expuestas a: vehículo (agua); ácido hialurónico (HA) a concentración final (c.f.) 80 !g/mL; sulfato de dermatano (DS) a c.f. 20 !g/mL; sulfato de condroitina (CS) a c.f. 20 !g/mL; o composición de la presente invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL, que contenía por mL 80 !g de HA y 20 !g de DS. El medio de cultivo en contacto con las células se cambió cada dos días (días 2, 4 y 6 de cultivo) por medio fresco, siempre con los suplementos arriba indicados. Las células fueron recogidas a día 8 de cultivo, tras ser examinadas y fotografiadas al microscopio de contraste de fase para visualizar su forma y la eventual acumulación de lípidos. Los niveles de mRNAs de los genes relacionados con la diferenciación adipocitaria PPARgamma, C/EBPalfa y ácido graso sintasa (FAS) se determinaron por PCR a tiempo real, a partir de RNA total extraído de las células con reactivo Trizol y retrotranscrito con transcriptasa inversa, y utilizando el mRNA de beta-actina como control interno. Las parejas de primers específicas de cada gen se determinaron usando el software Primer 3 (Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA, USA), y su especificidad se contrastó mediante las bases de datos ENTREZ y BLAST (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD, USA). Los primers fueron producidos por Sigma (Madrid, Spain). La significancia estadística de diferencias respecto del tratamiento con vehiculo fue analizada mediante t de Student. El umbral de significancia se estableció en P<0,05.

Resultados

La observación de las células a día 8 de cultivo reveló la presencia de numerosas islas de células diferenciadas espontáneamente en adipocitos llenos de gotas de grasa, refringentes al microscopio de contraste de fase, en los cultivos tratados con vehículo, HA80 y DS20, pero no en los tratados con la composición de la invención HA80+DS20 (Figura 1).

De acuerdo con lo anterior, al nivel molecular, la expresión de los genes marcadores adipocitarios PPARy, C/EBPa y FAS resultó drástica y significativamente reducida en las células tratadas con la composición de la invención HA80+DS20, pero no en las tratadas con los componentes de la composición por separado o con CS (Figura 2).

Estos resultados indican que la combinación de ácido hialurónico y sulfato de dermatano inhibe la adipogénesis espontánea en MEFs en cultivo en un efecto sinérgico, que excede a la suma de los efectos de los componentes individuales de la combinación por separado. Por lo tanto, la composición de la invención puede ser de gran utilidad en el tratamiento o prevención del sobrepeso y de la obesidad, así como en reducir la formación de grasa.

Ejemplo 2: Estudio de eficacia de una composición de la presente invención en la inhibición de la expresión de marcadores adipocitarios durante la adipogénesis de fibroblastos embrionarios de ratón inducida hormonalmente, en comparación con ácido hialurónico y sulfato de dermatano

El objetivo del estudio era comparar el potencial de una combinación de ácido hialurónico y sulfato de dermatano, en una relación en peso HA a DS de 1:0,25 (HA80+DS20), y de sus componentes individuales de afectar la adipogénesis en cultivos de fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) estimulados hormonalmente a diferenciarse en adipocitos.

Materiales y métodos

MEFs obtenidos a partir de embriones de 13 días de edad gestacional fueron cultivados en monocapa hasta llegar a la confluencia en placas de cultivo de 12 pocillos de 1 mL de capacidad/pocillo, tal y como se ha descrito para el Ejemplo 1. Dos días después de alcanzada la confluencia (día 0), las células fueron estimuladas exponiéndolas durante 48 horas a un cóctel hormonal adipogénico estándar conteniendo dexametasona, metilisobutilxantina, insulina y rosiglitazona. Subsecuentemente, las células recibieron cada dos días (días 2, 4 y 6) medio de crecimiento fresco suplementado con insulina y rosiglitazona. El proceso de diferenciación se llevó a cabo en células expuestas desde día 0 a: vehículo (agua); HA a concentración final (c.f.) 80 !g/mL; DS a c.f. 20 !g/mL; o composición de la presente invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL, que contenía por mL 80 !g de HA y 20 !g de DS. Las células fueron recogidas a día 8 de cultivo. Los niveles de mRNAs de genes seleccionados se determinaron por PCR a tiempo real, como se ha descrito para el Ejemplo 1.

Resultados

La expresión de los genes marcadores adipocitarios PPARgamma, C/EBPalfa y FAS se vio reducida en las células expuestas a la composición de la invención HA80+DS20 durante el proceso adipogénico, pero no en las expuestas a los componentes individuales de la composición, HA o DS, por separado (Figura 3).

Estos resultados indican que la combinación de HA y DS ejerce un efecto sinérgico anti-adipogénico incluso bajo condiciones ambientales (presencia de un cóctel hormonal pro-adipogénico) que promueven este proceso. En consecuencia, la composición de la invención puede ser útil en el tratamiento o prevención del sobrepeso y de la obesidad, así como en reducir la formación de grasa.

Ejemplo 3: Estudio de eficacia de una composición de la presente invención en la inhibición de la expresión de resistina, una adipoquina relacionada con la resistencia a la insulina, en adipocitos derivados de MEFs

El objetivo era estudiar el efecto de una combinación de ácido hialurónico y sulfato de dermatano, a diferentes concentraciones, en una relación en peso HA a DS de 1:0,25 (HA+DS), sobre la expresión de proteínas de secreción de los adipocitos que han sido previamente implicadas como factores que potencian la resistencia a la insulina, en particular la resistina, en células adiposas en cultivo. En el mismo estudio también se determinó el efecto del ácido hialurónico y del sulfato de dermatano por separado.

Materiales y métodos

MEFs obtenidos a partir de embriones de 13 días de edad gestacional fueron cultivados en monocapa hasta llegar a la confluencia y expuestos a un cóctel hormonal adipogénico estándar tal y como se ha descrito para el Ejemplo 2, en presencia de: vehículo (agua); HA a c.f. 80 !g/mL; DS a c.f. 20 !g/mL; composición de la invención HA16+DS4 a c.f. 20 !g/mL, que contenía por mL 16 !g de HA y 4 !g de DS; composición de la invención HA80+DS20 a c.f. 100 !g/mL, que contenía por mL 80 !g de HA y 20 !g de DS; o composición de la invención HA160+DS40 a c.f. 200 !g/mL, que contenía por mL 160 !g de HA y 40 !g de DS. Las células fueron recogidas a día 8 de cultivo. Los niveles de expresión del gen de la resistina se determinaron por PCR a tiempo real, como se ha descrito para el Ejemplo 1.

Resultados

La exposición a las composiciones de la invención HA16+DS4 a concentración final 20 !g/mL, HA80+DS20 a concentración final 100 !g/mL ó HA160+DS40 a concentración final 200 !g/mL, redujo la expresión de resistina tras 8 días de diferenciación adipocitaria de MEFs, de manera dosis-dependiente (Figura 4). El efecto de las composiciones de la invención sobre la expresión génica de resistina no fue reproducido por los componentes individuales HA80 y DS20 cuando fueron ensayados por separado. En consecuencia, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de la resistencia a la insulina y de la diabetes tipo 2, así como en aumentar la sensibilidad a la insulina.

Ejemplo 4: Efecto de la suplementación con una composición de la presente invención sobre la redución de la ganancia de peso y de la ingesta energética en ratones

El objetivo era estudiar el efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención (HA+DS+CH) sobre la evolución de parámetros biométricos in vivo, en ratones.

Se empleó una composición que contenía 65% de ácido hialurónico (HA), 13,40% de sulfato de dermatano (DS) y 6,56% de hidrolizado de colágeno (CH) (relación en peso HA:DS:CH 1:0,20:0,10).

Materiales y métodos

Ratones C57BL6/J machos (Charles River Laboratories, Barcelona, Spain) de 6 semanas de edad al inicio del experimento fueron estabulados a 22ºC con un periodo de luz/oscuridad de 12 horas, bajo condiciones de alimentación ad libitum con una dieta estándar definida (fabricada por Research Diets, Inc, New Brunswick, NJ, USA) que contenía 3,85 Kcal/g de dieta. Al inicio del experimento se establecieron dos grupos experimentales (n=8 animales por grupo), que recibieron diariamente por vía oral, durante 143 días, vehículo (agua, grupo Control), o una composición de la presente invención (HA+DS+CH), a dosis 0,45 mg/ratón/día (grupo HA+DS+CH; relación en peso HA:DS:CH 1:0,20:0,10). Se hizo un seguimiento del peso corporal y la ingesta de los animales durante los 143 días de tratamiento. La significancia estadística de los efectos observados fue analizada mediante test de la t de Student. El umbral de significancia se estableció a P<0,05.

Resultados

Los animales tratados con la composición de la invención HA+DS+CH tendieron a ganar menos peso y, al final del experimento, su peso corporal fue un 5% menor que el de los controles (media±SEM: pesos iniciales: grupo Control, 22,5±0,8 g; grupo HA+DS+CH, 22,5±0,7 g; pesos finales: grupo Control, 29,0±1.0 g; grupo HA+DS+CH, 27,5±1.0 g).

La ingesta acumulada durante los 143 días del experimento fue un 11% menor en los animales tratados con HA+DS+CH que en los animales del grupo Control a los que se administró el vehículo (P<0,05) (Figura 5).

Los resultados in vivo obtenidos permiten afirmar que las composiciones de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención del sobrepeso y de la obesidad, en reducir el peso corporal, la ganancia de peso, la ingesta de alimento y el apetito, en prevenir el aumento de peso y en inducir la sensación de saciedad.

Ejemplo 5: Efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención sobre parámetros relacionados con la sensibilidad a la insulina en ratones

El objetivo era estudiar el efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención (HA+DS+CH) sobre la sensibilidad a la insulina in vivo, en ratones.

Materiales y métodos

Se utilizaron los mismos grupos experimentales del Ejemplo 4. Tras 88 días de tratamiento, los animales de ambos grupos, Control y HA+DS+CH, fueron sometidos a un ayuno de 6 h tras el cual se les extrajo sangre, para la determinación de los niveles circulantes de glucosa (por sistema Accu-Check, de Roche) e insulina (mediante un kit de ELISA, distribuido por DGR Instruments GnbH). Para cada animal se calculó el índice HOMA-IR (homeostatic model assessment for insulin resistance), que es un índice bien aceptado indicativo de la sensibilidad relativa a la insulina, utilizando la fórmula de Matthews et al. (D.R. Matthews et al., Diabetologia 28, 412-419 (1985)): HOMA-IR= glucosa en ayunas (mM) x insulina en ayunas (mU/L)/22,5. Cuanto menor el índice HOMA-IR, menor es la resistencia a la insulina y por tanto mayor la sensibilidad a esta hormona. Este índice se ha validado en humanos y ratones (S. Lee et al. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 294, E261-70 (2008)).

Resultados

Los animales suplementados con HA+DS+CH a igual glucemia presentaron una menor insulinemia que los animales controles, y por tanto un índice HOMA-IR también menor (Figura 6). Estos resultados indican que la sensibilidad a la insulina es mayor en el grupo suplementado con la composición de la invención que comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno (HA+DS+CH) que en el grupo control. El deterioro de la sensibilidad a la insulina es considerado uno de los principales detonantes del desarrollo de diabetes de tipo 2, junto con la disfunción de las células beta pancreáticas (D. LeRoith, Am. J. Med. 113 (Suppl 6A), 3S-11S (2002)).

Los resultados in vivo obtenidos en el presente estudio permiten afirmar que las composiciones de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de la diabetes tipo 2 y de la resistencia a la insulina y en aumentar la sensibilidad a la insulina.

Ejemplo 6: Efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención sobre los niveles de triacilgliceroles en ratones

El objetivo era estudiar el efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención (HA+DS+CH) sobre los niveles circulantes de triacilgliceroles in vivo, en ratones.

Materiales y métodos

Se utilizaron los mismos grupos experimentales del Ejemplo 4. Tras 143 días de tratamiento, los animales de ambos grupos, Control y HA+DS+CH, fueron sacrificados por decapitación. Se determinaron los niveles de triglicéridos circulantes en suero preparado a partir de sangre del cuello, mediante un ensayo enzimático colorimétrico comercial (Sigma).

Resultados

Tras 143 días de suplementación, los animales suplementados con la composición de la invención que comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno (HA+DS+CH) presentaron menor trigliceridemia que los controles a los que se había administrado el vehículo (Figura 7). En consecuencia, las composiciones de la presente invención pueden ser de gran utilidad en el tratamiento o prevención de la dislipidemia y en reducir los triglicéridos en sangre.

Ejemplo 7: Efecto de la suplementación por vía oral con una composición de la presente invención sobre la reversión de la obesidad en ratones

El objetivo era estudiar la pérdida de peso y de grasa en ratones obesos al ser tratados por vía oral con una composición de la presente invención (HA+DS+CH).

Materiales y métodos

Se emplearon ratones C57BL6/J machos de 25 semanas de edad a los que previamente se les había inducido obesidad dietética por alimentación con dieta hiperlipídica desde las 6 semanas de vida. Los ratones presentaban, en el momento del inicio del experimento, un 22% de exceso de peso respecto de animales de la misma edad mantenidos bajo dieta estándar. Al inicio del experimento, los ratones obesos pasaron a ser alimentados con una dieta normolipídica, y fueron distribuidos en dos grupos, que recibieron diariamente, por vía oral, vehículo (agua, 60 !l, grupo Control) o una composición de la presente invención (HA+DS+CH), a una dosis de 3 mg/ratón/día (n=7-8 animales/grupo) (grupo HA+DS+CH; relación en peso HA:DS:CH 1:0,20:0,10). En ambos grupos, Control y HA+DS+CH, se monitorizó regularmente el peso corporal, así como la composición corporal mediante un sistema no invasivo de resonancia magnética (ECHO-MRI). Los animales fueron sacrificados por decapitación, 32 días después del inicio de la reversión a dieta estándar, procediéndose a la recogida de sangre y tejidos, y al peso de los tejidos adiposos. La significancia estadística de los efectos observados fue analizada mediante el test de la t de Student. El umbral de significancia se estableció a P<0,05.

Resultados

Los animales tratados con HA+DS+CH tendieron a perder más porcentaje de peso y más rápidamente que los del grupo Control; esta tendencia alcanzó significación estadística tras 11 días de reversión a la dieta normolipídica, punto en que los animales del grupo Control habían perdido un 9,5% de su peso corporal inicial, y los animales tratados con HA+DS+CH, un 12,8%. Además, los animales tratados con HA+DS+CH presentaron una mayor y más rápida pérdida porcentual de masa grasa que los animales del grupo Control (Figura 8A), lo que se correlacionó con un mayor incremento relativo de su masa magra (Figura 8B).

A punto final del experimento, la adiposidad corporal (suma de los pesos de los depósitos de tejido adiposo como porcentaje del peso corporal) de los animales tratados con HA+DS+CH fue un 30% menor que la de los animales del grupo Control (Figura 9B). Todos los depósitos adiposos diseccionados (inguinal (TABi), retroperitoneal (TABr) y epididimal (TABe)) fueron significativamente más pequeños en los animales tratados con HA+DS+CH (Figura 9A).

A punto final del experimento, los animales tratados con HA+DS+CH, pese a no presentar variaciones en la glucemia, presentaron una menor insulinemia que los animales Control, indicativo de una mayor sensibilidad a la insulina (Figura 10).

Estos resultados in vivo obtenidos permiten afirmar que las composiciones de la presente invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención del sobrepeso, obesidad, diabetes tipo 2, hígado graso y resistencia a la insulina, y en reducir la grasa corporal, la formación de grasa y el peso corporal.

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Uso de una composición que comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de al menos una de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico en un mamífero, seleccionada del grupo formado por sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso y dislipidemia.
2.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención del sobrepeso asociado al síndrome metabólico en un mamífero.
3.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la obesidad asociada al síndrome metabólico en un mamífero.
4.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la resistencia a la insulina asociada al síndrome metabólico en un mamífero.
5.- Uso según la reivindicación 4, en el que la resistencia a la insulina está asociada al sobrepeso o a la obesidad.
6.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la diabetes tipo 2 asociada al síndrome metabólico en un mamífero.
7.- Uso según la reivindicación 5, en el que la diabetes tipo 2 está asociada al sobrepeso o a la obesidad.
8.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención del hígado graso asociado al síndrome metabólico en un mamífero.
9.- Uso según la reivindicación 8, en el que el hígado graso está asociado al sobrepeso o a la obesidad.
10.- Uso según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la dislipidemia asociada al síndrome metabólico en un mamífero.
11.- Uso según la reivindicación 10, en el que la dislipidemia está asociada al sobrepeso o a la obesidad.
12.- Uso según la reivindicación 10 ó 11, en el que la dislipidemia es hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia.
13.- Uso según la reivindicación 10 ó 11, en el que la dislipidemia es hipercolesterolemia.
14.- Uso según la reivindicación 10 ó 11, en el que la dislipidemia es hipertrigliceridemia.
15.- Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la composición comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano comprendida entre 1:0,05 y 1:0,75, preferentemente entre 1:0,10 y 1:0,50.
16.- Uso según la reivindicación 15, en el que la composición comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano de 1:0,25.
17.- Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que la composición además comprende hidrolizado de colágeno.
18.- Uso según la reivindicación 17, en el que la composición comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano a hidrolizado de colágeno comprendida entre 1:0,06:0,03 y 1:0,80:0,40, preferentemente entre 1:0,10:0,05 y 1:0,40:0,20.
19.- Uso según la reivindicación 18, en el que la composición comprende ácido hialurónico, sulfato de dermatano e hidrolizado de colágeno presentes en una relación en peso ácido hialurónico a sulfato de dermatano a hidrolizado de colágeno de 1:0,20:0,10.
20.- Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, donde el mamífero es un humano.
21.- Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, donde el medicamento se adapta para la administración oral.

X200

FIGURA 1

A)

1,25

1,00

PPAR mRNA/ /-actina mRNA

0,50 0,75

0,25

0,00

vehículo HA DS CS HA80+DS20

B)

1,25

1,00

C/EBPa mRNA/ /-actina mRNA

0,50 0,75

0,25

0,00

vehículo HA DS CS HA80+DS20

C)

1,50

1,25

FAS mRNA/ /-actina mRNA

0,50 0,75 1,00

0,25

0,00

vehículo HA DS CS HA80+DS20

FIGURA 2

A)

1,40 1,20 1,00

PPARy mRNA/ 0,80 /-actina mRNA

0,60 0,40 0,20 0,00

B) 1,20 1,00 0,80

C/EBPa mRNA/ 0,60 /-actina mRNA

0,40

0,20

0,00

C) 1,75 1,50 1,25 1,00

FAS mRNA/

/-actina mRNA 0,75 0,50 0,25 0,00

vehículo HA DS HA80+DS20

FIGURA 3

resistina mRNA/ -actina mRNA

1 1,2

0 0,2 0,4 0,6 0,8 0

25 50 75 100 125 150 175 200 225

Concentración final (!g/mL) de HA+DS (relación en peso 1:0,25)

ingesta acumulada (Kcal/animal) FIGURA 4

1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 Control HA+DS+CH

FIGURA 5

A) 8

7 6 glucosa5 circulante

4 (mM)

3 2 1 0

B) 1,2 1,0 0,8

insulina circulante 0,6 (!g/L)

0,4

0,2

0,0

C) 8,0 7,0 6,0 5,0

HOMA-IR 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0

Control HA+DS+CH

Control HA+DS+CH

Control HA+DS+CH FIGURA 6

triacilglicerolescirculantes (mg/mL)

15,0 12,5 10,0 7,5 5,0 2,5 0,0

Control HA+DS+CH FIGURA 7 A) B) tiempo (días)

Pérdida de masa grasa (%)

P=0,132

12 10

4 2 0 -10

tiempo (días)

FIGURA 8

A)

TABi TABr TABe

B)

9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0

Control HA+DS+CH

FIGURA 9

Adiposidad (%)

A)

B)

insulina circulante (!g/L) glucosa circulante (mM)

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Control

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0 Control

FIGURA 10 HA+DS+CH

HA+DS+CH RESUMEN

La presente invención se refiere a una composición que comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano para su uso en el tratamiento o prevención de al menos una de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico en un mamífero, seleccionada del grupo formado por sobrepeso, obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hígado graso o dislipidemia. Además la composición puede contener hidrolizado de colágeno. La composición está en forma de composición farmacéutica.

A)

TABi TABr TABe

B)

Adiposidad (%)

9,0 8,0 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0

Control HA+DS+CH

FIGURA 9

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

N.º solicitud: 201231198

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 25.07.2012

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría

56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas

A

JP 2008150326 A (GLOBE COMPANY INC ) 03.07.2008, (resumen) Derwent Publications Ltd., AN 2008-J12845. 1-21

A

WO 2011130261 A1 (RUFF KEVIN) 20.10.2011, todo el documento. 1-21

A

WO 2007059874 A2 (BIOIBERICA S.A.) 31.05.2007, todo el documento. 1-21

A

US 2005084518 A1 (ARAI) 21.04.2005, todo el documento. 1-21

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud

El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:

Fecha de realización del informe 18.12.2013

Examinador M. Cumbreño Galindo Página 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud: 201231198

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD A61K31/728 (2006.01)

A61K31/737 (2006.01) A61P3/00 (2006.01) Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

A61K, A61P

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, MEDLINE, NPL, EMBASE, BIOSIS XPESP, XPESP2, XPOAC

Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201231198

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 18.12.2013

Declaración

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-21 SI NO

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)

Reivindicaciones Reivindicaciones 1-21 SI NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).

Base de la Opinión.-

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201231198

1. Documentos considerados.-

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

Documento

Número Publicación o Identificación Fecha Publicación

D01

JP 2008150326 A 03.07.2008

D02

WO 2011130261 A1 20.10.2011

D03

WO 2007059874 A2 31.05.2007

D04

US 2005084518 A1 21.04.2005
2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración

La presente invención tiene por objeto el uso de una composición que comprende ácido hialurónico y sulfato de dermatano para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de al menos una de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico en un mamífero (reivindicaciones 1 a 21).

D01 anticipa una bebida que contienen ácido hialurónico, sulfato de dermatano, vitaminas, colágeno marino y otros compuestos, así como su uso en la prevención de enfermedades como la diabetes, la hipercolesterolemia o la trigliceridemia.

D02 divulga un método para tratar una enfermedad relacionada con el metabolismo anormal de la glucosa, como es el síndrome metabólico, que consiste en administrar por vía oral material derivado de cáscara de huevo. Dicho material está constituido por hexosamina, glicosaminoglicanos como el sulfato de dermatano, ácido hialurónico o colágeno, entre otros ingredientes.

D03 divulga el uso de composiciones que comprenden ácido hialurónico y sulfato de dermatano para la preparación de medicamentos orales para el tratamiento de la artrosis. Las composiciones pueden contener, además, hidrolizado de colágeno y ácidos nucleicos y pueden emplearse también en la elaboración de alimentos o suplementos nutricionales.

D04 anticipa alimentos que contienen ácido hialurónico y sulfato de dermatano y su uso para mejorar la apariencia de la piel y reducir la caída del cabello.

NOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVA

Los documentos citados divulgan otros usos de composiciones que comprenden ácido hialurónico y sulfato de dermatano, o bien el uso de dichas composiciones para el tratamiento de enfermedades asociadas al metabolismo anormal de la glucosa, como es el síndrome metabólico, que incluye diabetes o dislipemias. En dichas composiciones el ácido hialurónico y el sulfato de dermatano están mezclados con otros ingredientes sin que quede claro el papel de ambos compuestos el relación con el tratamiento mencionado, o bien son posibles constituyentes de la composición, aunque parece haber indicios de su empleo en formulaciones destinadas al tratamiento de las enfermedades que conforman el síndrome metabólico. Por tanto, las reivindicaciones 1 a 21 se pueden considerar nuevas a la vista del estado de la técnica y presentan actividad inventiva.

Informe del Estado de la Técnica Página 4/4