ES2617604T3 - Anticuerpos capaces de unirse específicamente a oligómeros de beta amiloides, y su utilización - Google Patents

Anticuerpos capaces de unirse específicamente a oligómeros de beta amiloides, y su utilización Download PDF

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Abstract

Un anticuerpo que se une a un oligómero de Aß pero no a un monómero de Aß, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal y se selecciona del grupo que consiste en: (1) un anticuerpo que comprende una cadena H que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 89 como CDR1, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 91 como CDR2, y la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 93 como CDR3 y una cadena L que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 95 como CDR1, la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 97 como CDR2, y la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 99 como CDR3; (2) un anticuerpo que comprende una cadena H que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 85 como VH y una cadena L que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 87 como VL; y (3) un anticuerpo que comprende una cadena H que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 81 y una cadena L que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 83.

Description

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y Fritz HJ (1987) Methods Enzymol., 154, 350-367, Kunkel, TA (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 82, 488-492, Kunkel (1988) Methods Enzymol., 85, 2763-2766 ) y otros. Las mutaciones de aminoácidos también pueden ocurrir de forma natural. Los anticuerpos de la presente invención también incluyen un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos con una o más mutaciones de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de la presente invención y que tiene una actividad equivalente a la del anticuerpo de la presente invención. El número de aminoácidos mutados en tales mutantes puede ser generalmente de 50 aminoácidos o menos, preferiblemente 30 aminoácidos o menos, y más preferiblemente diez aminoácidos o menos (por ejemplo, cinco aminoácidos o menos).
Los residuos de aminoácidos se mutan preferiblemente en otros aminoácidos que conservan las propiedades de las cadenas laterales de aminoácidos. Por ejemplo, los aminoácidos se clasifican como sigue dependiendo de las propiedades de la cadena lateral: aminoácidos hidrófobos (A, I, L, M, F, P, W, Y y V), aminoácidos hidrofílicos (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S y T), aminoácidos con cadenas laterales alifáticas (G, A, V, L, I y P), aminoácidos con cadenas laterales que contienen grupos hidroxilo (S, T y Y), aminoácidos con cadenas laterales que contienen átomos de azufre (C y M), aminoácidos con cadenas laterales que contienen ácido carboxílico y amida (D, N, E y Q), aminoácidos con cadenas laterales básicas (R, K y H), y aminoácidos con cadenas laterales que contienen anillos aromáticos (H, F, Y y W) (los aminoácidos están representados por códigos de una letra entre paréntesis).
Se sabe que un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos, en la que uno o más residuos de aminoácidos están modificados (suprimidos, añadidos y/o sustituidos con otros aminoácidos) en una cierta secuencia de aminoácidos, conserva su actividad biológica original (función).
Además de las modificaciones mencionadas anteriormente, los anticuerpos de la presente invención pueden conjugarse con otras sustancias, siempre que se mantenga la actividad. Ejemplos de las sustancias incluyen péptidos, lípidos, azúcares y cadenas de azúcar, grupos acetilo y polímeros naturales y sintéticos. Estas modificaciones pueden realizarse para conferir funciones adicionales a los anticuerpos, o para estabilizar los anticuerpos.
Los anticuerpos en los que se han añadido varios residuos de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de la presente invención incluyen proteínas de fusión que contienen el anticuerpo. En las proteínas de fusión, el anticuerpo se fusiona con otro péptido o proteína. Los métodos para producir una proteína de fusión pueden llevarse a cabo ligando un polinucleótido que codifica un anticuerpo de la presente invención en marco con un polinucleótido que codifica otro péptido o polipéptido e insertándolo en un vector de expresión y expresando el constructo de fusión en un huésped. Para este fin se pueden utilizar técnicas conocidas por los expertos en la técnica. Los péptidos o polipéptidos fusionados con un anticuerpo de la presente invención incluyen, por ejemplo, péptidos conocidos tales como FLAG (Hopp, TP y colaboradores, BioTechnology (1988) 6, 1204-1210), 6x His consistente en seis residuos de histidina (His), 10x His, hemaglutinina de influenza (HA), fragmentos de c-myc humanos, fragmentos de VSV-GP, fragmentos de p18HIV, etiqueta de T7, etiqueta de HSV, etiqueta E, fragmentos de antígeno SV40T, etiqueta lck, fragmentos de α-tubulina, etiqueta B, y fragmentos de Proteína C; glutationa-S transferasa (GST); regiones constantes de inmunoglobulina; β-galactosidasa; y la proteína de unión a la maltosa (MBP), etc. Los polinucleótidos comercialmente disponibles que codifican estos péptidos o polipéptidos pueden fusionarse con polinucleótidos que codifican los anticuerpos de la presente invención y los polipéptidos de fusión pueden producirse expresando los polinucleótidos de fusión así preparados.
Los anticuerpos de la presente invención pueden diferir en la secuencia de aminoácidos, peso molecular, presencia
o ausencia de cadenas de azúcar, estructura y similares, dependiendo de la célula o huésped que produce los anticuerpos o del método de purificación.
Los anticuerpos que se unen a un epítopo al que se une un anticuerpo de cualquiera de los (1) a (36) anteriores pueden obtenerse por métodos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden obtener (i) determinando el epítopo unido por el anticuerpo de cualquiera de (1) a (36) usando un método convencional, y produciendo los anticuerpos usando un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos incluida en el epítopo como un inmunógeno; o (ii) determinar los epítopos de anticuerpos producidos por un método convencional, y seleccionar anticuerpos cuyo epítopo es el mismo que el del anticuerpo de uno cualquiera de (1) a (36).
Los anticuerpos mencionados anteriormente de (1) a (38) también incluyen cualquier tipo de anticuerpos tales como los minicuerpos anteriormente descritos, anticuerpos con secuencias de aminoácidos modificadas tales como anticuerpos humanizados y anticuerpos quiméricos, anticuerpos animales no humanos, anticuerpos humanos, anticuerpos modificados conjugados con otras moléculas (por ejemplo, polímeros tales como polietilenglicol) y anticuerpos modificados en la cadena de azúcar.
En una realización preferida, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos modificados tales como anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados. Ejemplos de anticuerpos preferidos incluyen (i) un anticuerpo quimérico cuya región variable se deriva del anticuerpo 6E4 y cuya región constante se deriva de una inmunoglobulina humana; y (ii) un anticuerpo humanizado cuya CDR se deriva del anticuerpo 6E4, y cuyo FR se
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